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ESPECTROFOTOMETRA EN LA REGIN
ULTRAVIOLETA
FUNDAMENTO
El intervalo de longitud de onda de la radiacin ultravioleta se extiende desde 200 - 400 nm (lmite
azul de la luz visible). Muchos iones y molculas que tienen dobles ligaduras y que pueden
representarse como hbridos de resonancia de distintas estructuras, absorben radiaciones ultravioletas
en la regin de 200 a 400 nm. La aplicacin ms importante de la absorcin en la regin ultravioleta
reside en la determinacin cuantitativa de compuestos orgnicos que contienen grupos funcionales.
Adems, varias especies inorgnicas, particularmente entre los metales de las tierras raras, estos
absorben radiacin ultravioleta, siendo, as pues susceptibles tambin al anlisis por este mtodo.
La radiacin UV es la banda de radiacin ptica que presenta las longitudes de onda ms corta, o
bien las frecuencias ms altas (superiores a las del espectro visible). Desde el punto de vista
energtico, es la zona del espectro con energa inmediatamente superior a la del espectro visible.
Ms all del UV estn los rayos X, de mayor frecuencia y energa.
El trmino ultravioleta deriva etimolgicamente de MAS ALL DEL VIOLETA, razn por la que esta
radiacin no es visible para el ojo humano
Subtipos
Segn su longitud de onda, se distinguen varios subtipos de rayos ultravioleta:
USOS
La luz ultravioleta tiene diversas aplicaciones:
Una de las aplicaciones de los rayos ultravioleta es como forma de esterilizacin, junto con
los rayos infrarrojos (pueden eliminar toda clase de bacterias y virus sin dejar residuos, a
diferencia de los productos qumicos).
Est en estudio la esterilizacin UV de la leche como alternativa a la pasteurizacin.
En anlisis cuantitativo de sustancias
Los electrones de los enlaces dobles y triples se excitan con mayor facilidad hasta la orbital pi ms
elevada. Cuando un electrn pi que est en un orbital de enlace pi se eleva a un orbital de anti enlace
pi, se designa a la transicin como *. Por lo general, la absorcin de energa en este caso es ms
dbil que las transiciones * .En las molculas conjugadas, es decir, en aquellas que contienen
una serie de dobles enlaces alternados, la absorcin se traslada hacia longitudes de onda ms largas.
En tercer lugar, muchas molculas orgnicas contienen electrones que no forman enlaces, estos
electrones no compartidos se representan con el smbolo n. Los compuestos orgnicos con tomos
de nitrgeno, oxgeno, azufre o halgenos, tienen, todos electrones no enlazantes. Como estos
electrones " n " son excitados por radiacin UV, todo compuesto que los posea absorber dicha
radiacin. Si una molcula contiene un tomo como el cloro que tiene pares electrnicos sin
compartir, uno de estos electrones se puede excitar a un nivel de energa ms elevado. Ya que los
electrones sin compartir no estn unidos tan fuertemente como los electrones en enlaces sigma, la
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absorcin tiene lugar a longitudes de onda ms largas. El CH 3Cl la transicin ocurre en los 173 nm y
que las transiciones del CH3Br y del CH3I suceden en longitudes de onda an ms largas; esto se
debe a que los electrones estn unidos con menor fuerza en el bromo y en el yodo, a la transicin que
acabamos de describir se le llama n- * para indicar que un electrn no compartido se elev a un
orbital sigma antienlace.
Un ejemplo en el que se apreciar los tres tipos de electrones lo constituye una molcula
(formaldehido):
Los compuestos aromticos pueden absorber radiacin UV; los grupos funcionales que absorben
radiacin en la regin UV se llaman CROMOFOROS. Un cromforo es el grupo funcional de una
molcula que le imparte su color, el trmino se aplica a un grupo funcional que absorbe en la regin
UV y visible.
Los compuestos parafnicos que slo contienen enlaces no absorben radiacin en la regin visible
ni ultravioleta, para detectarlos es necesario operar en la regin UV vaco que se extiende desde 200
nm hasta la zona de rayos X (100 A o). En este intervalo de longitudes de onda, el nitrgeno y el
oxgeno de la atmsfera absorben radiacin, y en consecuencia, los trabajos se realizan con haces
de radiacin en ausencia de aire, es decir, a vaco.
Aunque algunas sustancias inorgnicas absorben radiaciones ultravioleta, la principal aplicacin de la
espectroscopia del ultravioleta es para determinar ciertos tipos de compuestos orgnicos. Su
principal aplicacin es la determinacin de compuestos aromticos (compuestos que tienen un
benceno u otro anillo aromtico) y de compuestos que tienen dobles ligaduras conjugadas. Los
grupos funcionales que absorben radiacin en la regin U.V, se llaman cromforos.
La mayora de los iones de los metales de transicin absorben en la regin ultravioleta o visible del
espectro. En la serie de los lantnidos ( cerio, lantano, erbio) y los actnidos (actinio, torio, uranio),
este proceso se debe a las transiciones electrnicas de los electrones 4f y 5 f; en el caso de los
elementos de la primera y la segunda series de metales de transicin, el fenmeno se debe a los
electrones 3 d y 4d.
Algunos aniones inorgnicos presentan picos de absorcin ultravioleta que son consecuencia de las
transiciones n--- *, como ejemplos, se incluyen los iones nitrato (313 nm), carbonato (217 nm),
nitrito (360 y 280 nm), azida (230 nm) y tritiocarbonato (500 nm)
ESPECTROS DE ABSORCIN
Los espectros del ultravioleta, al igual que los del visible suelen ser muy sencillos. Con frecuencia, un
espectro del ultravioleta tendr solamente uno o dos picos de absorcin anchos, en la regin de 200
a 400 nm. Otros, como el espectro ultravioleta del benceno tienen varios picos de absorcin
pronunciados. Los espectros del UV a menudo son de utilidad para la caracterizacin cualitativa de
sustancias, particularmente de determinados tipos de compuestos orgnicos.
Los espectros de compuestos en fase condensada, puros, o en disolucin presentan generalmente
fajas de absorcin anchas y poco numerosas. Sin embargo, los espectros obtenidos a partir de
muestras en estado gaseoso y a baja presin presentan una estructura fina. Como se ha mencionado
muchos elementos lantnidos y actnidos absorben en las regiones UV y visible. En claro contraste
con el comportamiento de muchas especies absorbentes inorgnicas y orgnicas, sus espectros
constan de estrechos picos de absorcin bien definidos y caractersticos que son pocos afectados por
el tipo de ligante asociado con el ion metlico. En la deteccin de grupos funcionales, aunque esta
tcnica no puede proporcionar la identificacin inequvoca de un compuesto orgnico, el espectro de
absorcin en las regiones del ultravioleta y visible es, sin embargo, til para detectar la presencia de
ciertos grupos funcionales que actan como cromforos. Por ejemplo, una banda de absorcin dbil
en la regin de 280 a 290 nm, que se desplaza hacia longitudes de onda ms cortas cuando aumenta
la polaridad de los disolventes, indica firmemente la presencia de un grupo carbonilo.
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DISOLVENTES
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Agua 190
Etanol 210
n- hexano 195
Ciclohexano 210
Benceno 280
Dietil ter 210
Acetona 330
1,4 Dioxano 220
SENSIBILIDAD
Los anlisis de absorcin ultravioleta son bastantes sensibles y es posible detectar sustancias a
concentraciones tan bajas como 1 ppm. La sensibilidad de una tcnica analtica se define como la
menor concentracin que puede determinarse cuantitativamente por dicho mtodo, los lmites de
deteccin de 10 -4. a 10 5 M, con frecuencia este intervalo puede ampliarse de 10 -6 a 10 -7 M con
ciertas modificaciones, adems, estos mtodos presentan selectividad de moderada a elevada,
facilidad y comodidad en el trabajo, precisin buena, se encuentran incertidumbres relativas de 1 a 3
por ciento, aunque, con precauciones especiales, los errores, se pueden reducir a algunas dcimas
por ciento. La selectividad que presenta es de moderada a alta.
APLICACIONES
Los compuestos capaces de absorber radiacin ultravioleta son aquellos que poseen electrones no
enlazantes (electrones n) o dobles enlaces conjugados (electrones pi), tales como los aromticos.
Estos compuestos absorben en rangos de longitudes de onda similares, por lo que sus espectros de
absorcin se solapan considerablemente; la curva de absorcin se encuentra influenciada, no slo
por el grupo que contiene los electrones que absorben, sino tambin, por el resto de la molcula. En
consecuencia, la absorcin U.V, ofrece menos posibilidades para la identificacin de grupos
funcionales que otros mtodos espectroscpicos, como el infrarrojo o la RMN. En cambio es muy til
para detectar compuestos aromticos y olefinas conjugadas.
Las aplicaciones cualitativas son limitadas porque el espectro de la mayora de los compuestos en
solucin consiste de uno o, cuando mucho, unos pocos picos amplios sin estructura fina que podran
ser requeridos para su identificacin precisa. En contraste, el mtodo es uno de los ms poderosos y
ms utilizados para el anlisis cuantitativo en sistemas orgnicos, inorgnicos y bioqumicos.
Algunas aplicaciones caractersticas de la espectroscopia UV son las determinaciones de los
siguientes compuestos:
Compuestos aromticos poli nucleares de carcter cancergeno
Productos naturales, como esteroides o clorofila
Sustancias colorantes
Vitaminas ( vitamina A )
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN
INFRARROJA
La regin del infrarrojo del espectro electromagntico se extiende desde el extremo del rojo del
espectro visible hasta la regin de las microondas. La regin del Infrarrojo (IR) desde el punto de
vista analtico, reagrupa una variedad de mtodos no destructivos de identificacin y determinacin
basados en la absorcin o reflexin, por parte de la muestra.
Las espectroscopia IR es la rama de la espectroscopia que trata con la parte infrarroja del espectro
electromagntico. Esta cubre un conjunto de tcnicas, siendo la ms comn una forma de
espectroscopia de absorcin.
La regin infrarroja abarca las regiones del espectro comprendidas entre los nmeros de onda de
12800 a 10 cm -1 aproximadamente, lo que corresponde a las longitudes de onda de 0.78 a 1000 m
(micrmetros). La espectrometra de infrarrojo involucra el examen de los modos vibracionales y
rotacionales de torsin y flexin de los tomos en una molcula. En la interaccin con la radiacin
infrarroja, parte de la radiacin incidente es absorbida a longitudes de onda especficas; la
multiplicidad de vibraciones que ocurren simultneamente produce un espectro de absorcin muy
complejo que es caracterstico solamente de los grupos funcionales que estn presentes en la
molcula y de la configuracin global de la molcula.
Aunque la regin del IR cercano es pobre en absorciones especficas, ha despertado un gran inters
en los laboratorios de control como medio de anlisis cuantitativo. Sin embargo, el IR medio es ms
rico en informacin acerca de la estructura de los compuestos examinados. De hecho, se utiliza para
la identificacin de molculas orgnicas, ya que permite registrar una especie de " huella digital"
En m onda cm 1 en nm
Cercano 0.78 a 2.5 12800 a 4000 780 a 2500
Medio 2.5 a 50 4000 a 200 2500 a 50000
Lejano 50.0 a 1000 200 a 10 50000 a 1000000
Ms utilizado 2.5 a 15 4000 a 670 2500 a 15000
ABSORCION EN EL INFRARROJO
La mayora de las transiciones electrnicas requieren energa de las regiones ultravioleta o visible; la
absorcin de radiacin infrarroja se limita as en gran parte a especies moleculares para los cuales
existen pequeas diferencias de energa entre los distintos estados vibratorios y rotatorios.
Por lo general, la radiacin infrarroja no es suficientemente energtica como para producir
transiciones electrnicas, pero s puede inducir transiciones en los estados vibracionales y
rotacionales asociados con el estado electrnico basal de la molcula. Para absorber radiacin
infrarroja, una molcula debe experimentar un cambio neto en el momento dipolar como
consecuencia de su movimiento vibratorio o rotatorio
ESPECTROS DE ABSORCIN
En una representacin grfica de los espectros en el eje de la ordenada se ubica la transmitancia,
esto indica que la ordenada es proporcional a la transmitancia (%), en el eje de las abscisa est
graduada en unidades de centmetros recprocos. En algunas graficas contienen una escala de
longitud de onda y otra de nmero de onda; pero, slo una de ellas puede ser lineal.
La preferencia que existe por la escala lineal en nmero de onda se basa en la existencia de una
proporcionalidad directa entre esta magnitud y la energa as tambin como la frecuencia; la
frecuencia de la radiacin absorbida es a su vez la frecuencia de la vibracin molecular que produce
realmente el proceso de absorcin.
Una consecuencia practica del hecho de que la mayora de las molculas estn sujetas a tantos
estados vibracionales diferentes es que los espectros IR son muy complejos, en general mucho ms
de lo que son los espectros de absorcin electrnica observados en muestras lquidas y slidas con
energa radiante visible y ultravioleta.
Cada espectro IR es una mezcla compuesta de las absorciones vibracionales procedentes de todos
los enlaces qumicos en las molculas absorbentes. El aspecto general de un espectro es
completamente diferente del de los espectros visibles y ultravioleta. Incluso, los compuestos
relativamente simples presentan en estos espectros una serie complicada de picos agudos y de
mnimos; esta multiplicidad de picos convierte el espectro en especfico. A menudo se llama al
espectro IR la HUELLA DIGITAL del compuesto.
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En la regin IR de longitudes de onda ms corta (por debajo de 7.5 micrmetros) se encuentran picos
de absorcin tiles para la identificacin de determinados grupos funcionales.
En muchos casos, la identificacin de los grupos funcionales de una molcula no es suficiente para
permitir la identificacin positiva del compuesto, por lo cual hay que proceder a la comparacin del
espectro completo con el de compuestos conocidos.
APLICACIONES CUALITATIVAS
La espectroscopia de absorcin infrarroja es una de las herramientas ms poderosas e importantes
de las que se dispone para la identificacin y determinacin de la estructura de especies orgnicas,
inorgnicas y bioqumicas.
El aspecto general de un espectro de absorcin infrarrojo es completamente diferente del de los
espectros ultravioletas o visibles. Incluso los compuestos relativamente simples presentan en estos
espectros una serie complicada de picos agudos y de mnimos. Ahora bien, es precisamente esta
multiplicidad de picos lo que convierte el espectro en especfico; en efecto, no existen dos
compuestos que den espectrogramas idnticos. As la identidad del espectro de una sustancia
problema con el de una sustancia patrn se acepta como prueba de su identidad de composicin.
En la regin infrarroja de longitudes de onda ms corta (por debajo de unos 7.5 micrmetros) se
encuentran picos de absorcin tiles para la identificacin de determinados grupos funcionales, pues
las posiciones de los mximos correspondientes slo son muy ligeramente afectadas por el esqueleto
carbonado al cual dichos grupos se hallan unidos. As pues, la investigacin de esta porcin del
espectro proporciona una cantidad considerable de informacin relativa a la constitucin de la
molcula en estudio.
El uso generalizado del IR para la identificacin de compuestos orgnicos a partir de un espectro es
un proceso que consta de dos etapas:
La primera etapa implica la determinacin de los grupos funcionales que parece ms probable que
estn presentes, examinando la regin de frecuencias de grupo.
La segunda etapa consiste en una comparacin detallada del espectro del compuesto desconocido
con los espectros de compuestos puros que contienen todos los grupos funcionales encontrados en la
primera etapa. En este caso es particularmente til la regin de la huella dactilar. Como
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consecuencia, un gran parecido en la regin de la huella dactilar de los espectros de dos compuestos
constituye casi una evidencia de su identidad.
Para la identificacin de los espectros se emplean las tablas de correlacin que sirven como gua,
estas tablas pocas veces son suficientes para la identificacin positiva de un compuesto orgnico a
partir de su espectro IR. Sin embargo, existen diversos catlogos de espectros de IR que ayudan en
la identificacin cualitativa permitiendo la comparacin de los espectros con los de un gran nmero
de compuestos puros. La bsqueda manual en grandes catlogos de espectros es lenta y tediosa.
Por este motivo, en los ltimos aos se han empezado a utilizar extensamente los sistemas de
bsqueda por ordenador que permita la identificacin de los compuestos a partir de los datos
espectarles de IR almacenados. La posicin y la magnitud relativa de los picos en el espectro del
analito se determinan y almacenan en la memoria para dar un perfil de picos, que luego se compara
con los perfiles de los compuestos puros almacenados en discos magnticos; a continuacin, el
ordenador compara los perfiles e imprime una lista de compuestos que tienen espectros similares a
los del analito. Por lo general, el espectro del analito y el del compuesto probable se muestran
simultneamente en la pantalla del ordenador para su comparacin. Los bancos de memoria de
estos instrumentos son capaces de almacenar perfiles para cientos de miles de compuestos puros.
ANLISIS CUANTITATIVO
Las aplicaciones cuantitativas de la espectroscopia infrarroja son mucho ms limitadas que las
aplicaciones de radiacin ultravioleta / visible debido a las absortividades molares bajas y lo angosto
de los picos infrarrojos y las dificultades instrumentales en la medicin de transmitancia con
exactitud.
Casi todas las especies moleculares orgnicas e inorgnicas absorben en la regin infrarroja. As, la
Espectrofotometra infrarroja; ofrece la posibilidad de determinar un nmero extraordinariamente
grande de sustancias. Adems, la singularidad de los espectros infrarrojos conduce a un grado de
especificidad que es igualado o excedido por relativamente pocos otros mtodos analticos. Esta
especificidad ha hallado particular aplicacin al anlisis de mezclas de compuestos orgnicos
estrechamente relacionados.
Estos mtodos se aplican en el anlisis de una mezcla de hidrocarburos aromticos.
Se aplica en anlisis de contaminantes atmosfricos, es decir, se determina monxido de carbono,
cloroformo, alcohol metlico, bixido de azufre, disulfuro de carbono, etc. Algunos anlisis tpicos son
la deteccin o determinacin de parafinas, compuestos aromticos, olefinas, acetilenos, alcoholes,
aldehdos, cetonas, cidos carboxlicos, teres, aminas, compuestos de azufre o haluros.
A partir del espectro infrarrojo, es posible determinar los componentes responsables del olor y sabor
de los alimentos. Otra aplicacin interesante es el examen de materiales y pinturas antiguas, as por
ejemplo, a partir de la identificacin del barniz utilizado en un cuadro, as como de las telas y
pigmentos de las pinturas, se pueden descubrir falsificaciones de obras de arte.
A) Deben producir un haz de poder de radiacin suficiente para que su deteccin y su medicin
sean fciles.
B) La radiacin producida debe ser continua, esto es, el espectro debe contener todas las longitudes
de onda comprendidas en la regin espectral que vaya a utilizarse
C) Finalmente, el foco debe ser estable, para cumplir esta condicin, la intensidad del haz de
radiacin debe permanecer constante durante un tiempo suficiente para proceder a la medicin
de la radiacin incidente y saliente.
Para la regin visible se usan lmparas de proyectores, por ejemplo, lmpara de tungsteno muy
parecida a las bombillas normales y que consta de un filamento de tungsteno que se calienta al rojo
blanco en una atmsfera controlada.
Una lmpara de filamento de tungsteno es una fuente de radiacin en el intervalo visible y del
infrarrojo cercano. Un filamento de tungsteno tpico funciona a una temperatura cercana a los 3000 o
K y produce radiacin til en el intervalo de 320 a 2500 nm; esto comprende toda la regin visible y
parte de las regiones de ultravioleta y de infrarrojo.
Las lmparas de tungsteno- halgeno, tambin llamadas lmparas de cuarzo halgeno, contienen
una pequea cantidad de yodo dentro de la cubierta de cuarzo que asla el filamento, opera a una
temperatura de 3500 o K, con lo cual se producen intensidades mayores y aumenta el intervalo de la
lmpara hasta la regin UV, y su intervalo de longitud de onda es de 240 2500 nm, dura el doble de
una lmpara comn de tungsteno.
de xidos de circonio e itrio (tierras raras) calentado por una resistencia interior que se calienta
elctricamente a unos 1500 o C, produce radiacin en la regin entre 0.4 y 20 micrmetros.
FILTROS
Actan absorbiendo grandes porciones del espectro y transmitiendo solamente regiones
relativamente limitadas alrededor de una longitud de onda; estos se utilizan principalmente en
la regin visible. Para poder comparar la efectividad de los filtros resulta til expresar el
intervalo de longitudes de onda a lo ancho del cual la transmitancia de aqullos disminuye a
una mitad de su valor mximo; este intervalo recibe el nombre de anchura efectiva de banda.
Se emplean dos tipos de filtros para la seleccin de la longitud de onda, los filtros de
interferencia y los filtros de absorcin.
FILTROS DE ABSORCION
Son en general ms baratos, se utilizan mucho para la seleccin de bandas en la regin
visible. Estos filtros funcionan absorbiendo ciertas zonas del espectro, los filtros de vidrio son
lminas de vidrio coloreada mediante un pigmento disuelto o disperso en la masa vtrea, son
los dispositivos ms sencillos para la dispersin de la energa radiante transmite una banda de
longitud de onda bastante ancha, equivalente a 35 nm o 50 nm o ms. Son usados en
instrumentos llamados foto colormetros o fotmetro de filtros, trabajan en la regin del visible.
FILTROS DE INTERFERENCIA
Los filtros que se utilizan para las mediciones de absorcin comnmente son filtros de
interferencia. Estos filtros transmiten radiacin en un ancho de banda de 5 a 20 nm. Los filtros
tienen como ventajas que son sencillos, resistentes y de bajo costo. Sin embargo, un filtro slo
puede aislar una banda de longitudes de onda, para cada banda se debe utilizar un filtro
diferente. Estos filtros operan en la regin ultravioleta, visible y buena parte del infrarrojo
Los filtros de interferencia consisten en dos pelculas metlicas semitransparentes,
extremadamente delgadas, separadas por una capa transparente muy fina. Cuando un haz
luminoso incide casi perpendicularmente sobre este dispositivo, una cierta porcin de aquel
atraviesa la primera capa metlica mientras que otra porcin es reflejada. La porcin que ha
penetrado sufre anlogamente una reflexin parcial al incidir sobre la segunda capa. Si la
porcin reflejada en esta segunda capa es de longitud de onda adecuada, ser reflejada
parcialmente en la cara interior de la primera, en fase con luz de la misma longitud de onda
incidente inicial. El resultado es que la luz de esta longitud de onda se refuerza, mientras que
la de todas las otras, que no estn en fase, sufre interferencia y se destruye.
Los filtros de interferencia proporcionan un grado de pureza espectral que raras veces es
alcanzado por los filtros de vidrio, alcanzando anchuras efectivas de banda del orden de 10
nm, adems transmiten una cantidad mayor de luz de la longitud de onda que se desea. Para
poder comparar la efectividad de los filtros resulta til expresar el intervalo de longitudes de
onda a lo ancho del cual la transmitancia de aquellos disminuye a una mitad de su valor
mximo; este intervalo recibe el nombre de anchura de banda.
MONOCROMADORES
Un monocromador es un dispositivo que descompone la radiacin procedente de la fuente de
radiacin en sus longitudes de onda componentes y proporciona el modo de aislar stas en bandas
muy estrechas. La luz que ingresa por una rendija, es colimada por una lente o un espejo sobre un
prisma o una red de difraccin, que la dispersan. Otra lente o espejo permite enfocar cualquier
porcin del espectro resultante sobre una rendija de salida. La mayora de los monocromadores
tienen ventanas de entrada y de salida que se colocan para proteger los componentes del polvo y los
vapores corrosivos del laboratorio
La anchura efectiva de banda de la radiacin que emerge de un monocromador depende de varios
rasgos estructurales del aparato, y de la longitud de onda. En las regiones ultravioleta y visible se
suelen obtener anchuras de bandas que van, segn los casos, desde unas dcimas nm hasta quizs
unos 10 nm.
Monocromador de Prisma
La dispersin en un prisma tiene lugar a causa del fenmeno de la refraccin. Al depender la
velocidad de la luz del medio que atraviesa, sta sufre refraccin al pasar de un medio a otro. La
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magnitud de este efecto depende del ngulo que forma el rayo incidente con la interfase, de la
longitud de onda de la radiacin, y de los ndices de refraccin de ambos medios.
El fenmeno de la dispersin se produce a causa de que el ndice de refraccin de la sustancia que
constituye el prisma depende de la longitud de onda. Esta variacin del ndice de refraccin es ms
pronunciada a longitudes de onda ms cortas, por lo cual, al atravesar un prisma, un haz de luz
policromtica se descompone en sus componentes, siendo las longitudes de onda ms cortas
dispersadas en mayor grado que las ms largas.
El material de que estn constituidos los prismas depende de la porcin de espectro que se tenga
que estudiar. Para la regin entre 350 y 2000 nm se suele emplear el vidrio, pero el cuarzo tiene un
campo de utilidad ms extenso, que va de unas 180 a unas 4000 nm.
VENTAJAS DE USAR PRISMAS
Las principales ventajas de usar prismas son:
Cubre un amplio rango de longitudes de onda desde 185 hasta los 2500 nm
No se requieren filtros de corte como en los monocromadores de rejilla de difraccin
Asegura una alta dispersin con una alta resolucin en el rango ultravioleta (desde los 185 hasta
los 300 nm)
DESVENTAJAS
Se requiere un complicado sistema para obtener una escala lineal de longitud de onda. Esto se debe
a que la dispersin del prisma vara con la longitud de onda
No puede obtenerse una resolucin uniforme a un determinado ancho de banda fija. Esto se
debe a que la dispersin del prisma no es lineal
Redes de Difraccin
La luz policromtica se puede dispersar tambin por medio de redes de difraccin. Son muy
empleadas en espectrofotometra, una rejilla de difraccin para la regin ultravioleta y visible tiene
una superficie extremadamente pulida sobre la cual se hallan grabados un gran nmero de surcos
equidistantes paralelos, las redes de difraccin suelen tener entre 2000 y 6000 lneas por milmetro.
Una rejilla para el infrarrojo requiere una cantidad de lneas considerablemente menor, es decir, que
en la regin del IR lejano con 20 A 30 lneas por milmetro. Cuando la red es iluminada descompone
a la radiacin en tantos haces como lneas, cada una de stas, en efecto, se comporta como si fuera
un minsculo foco luminoso, emitiendo radiacin en todas direcciones. ste es precisamente el
efecto que explica los fenmenos de difraccin de la luz al incidir sta sobre una arista aguda o al
pasar por una rendija estrecha.
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Montaje de monocromadores
Los monocromadores proporcionan reduccin de gran fuerza espectral, la longitud puede elegirse a
voluntad del operador, es decir, permite la variacin continua en la longitud de la radiacin con un
ancho de banda muy estrecha.
Los componentes bsicos de un monocromador son:
a. Rendija de entrada
Llamadas tambin ranuras son espacios muy finos y discretos que permiten el paso de un haz
de radiacin monocromtica. Estas entradas de entrada no solo permiten el paso de radiacin
monocromtica de valores discretos, sino que tambin impiden el paso de radiacin de
diferentes longitudes de onda que no se deseen para el anlisis.
b. Lente o espejo colimador
Por lo general estos lentes estn hechos de un material plstico recubiertos por un bao de
plata o de cualquier otra superficie altamente reflectante. Los lentes son biconvexos y por lo
general se encuentran por pares, ubicados a la entrada y salida de radiacin (antes de la
muestra y despus de ella). La principal funcin de los lentes es la de enfocar la radiacin
hacia diferentes partes del instrumento (celda de muestra, monocromador, detector).
c) Elemento dispersor
Es la parte del monocromador que separa la radiacin polcromtica en sus componentes ms
simples en ranos de longitud de onda estrechas y pueden ser:}
Filtros
Prismas
Rejillas de difraccin
Montaje Ebert
Tiene un gran espejo cncavo (colimador) que cumple doble funcin, orienta el haz policromtico
hacia la rejilla o prisma dispersor, la otra funcin consiste en interceptar el haz dispersado por el
prisma o rejilla orientado hacia la rendija de salida.
4.- DETECTORES
Es la parte del instrumento que recibe la intensidad de radiacin monocromtica de la muestra, y la
transforma a un valor de seal elctrica. Esta seal elctrica es medida y comparada con respecto a
un valor de referencia (blanco de control), para presentar un valor numrico que el operador pueda
comprender
Los detectores ms usados en fotometra de absorcin con el visible y ultravioleta son las celdas
capa barrera, fototubos y fotomultiplicadores. Estos dispositivos tienen la funcin de Convertir la
energa radiante en energa elctrica, respondiendo rpidamente a la energa radiante de amplia
banda de longitud de onda an de mnima potencia. Es decir son de alta sensibilidad, y que se mide
despus con aparatos normales de medida.
Fotocelda
La celda fotovoltaica se usa principalmente para detectar y medir radiacin de la regin visible.
Su zona de trabajo es la regin visible trabaja ms o menos entre 260nm - 780nm, esto
abarca aproximadamente el intervalo en el cual es sensible el ojo humano, ordinariamente, la
corriente producida por una celda fotovoltaica es bastante grande para poder medirse con un
galvanmetro lo que no requiere amplificacin.
La longitud de onda donde tiene mxima sensibilidad es a 500 nm. Se usan ampliamente en
los instrumentos simples y porttiles en los cuales la resistencia y el bajo costo son los factores
ms importantes. Este tipo de instrumentos proporciona datos analticos confiables para los
trabajos de rutina.
Tienen como inconveniente de carecer de sensibilidad a bajos niveles y de presentar baja
iluminacin de su corriente de salida, es decir, manifiesta fatiga
Fototubo
Debido a la facilidad con que se puede amplificar su respuesta, son detectores de radiacin
potencialmente mucho ms sensible que las clulas de capa o fotovoltaica y que responden a
la
Radiacin no solo visible sino tambin a la radiacin ultravioleta. Zona de trabajo es de 180 -
1000 nm
Fotomultiplicador
Es el tipo de detector mas usado, este detector utiliza el fenmeno de la " foto emisin" para
generar un pequeo flujo de corriente, el cual es amplificado y medido en forma proporcional a
la cantidad de radiacin incidente sobre el detector. Para la medicin de baja potencia radiante
este detector ofrece ventajas si se compara con los anteriores detectores. Es un tipo de
fototubo en la que la seal primaria resultante de la fotoemisin es amplificada internamente
con un factor de amplificacin que puede alcanzar valores de hasta 10 8. Opera en la regin
visible y ultravioleta en el intervalo de 180 - 1100 nm. Dentro de las ventajas que presenta se
puede mencionar, alta sensibilidad en todo rango, repetitibilidad de la seal, y bajo nivel de
ruido
DETECTORES DE FOTONES
Fototubos 150 -- 1000 UV - V e IR cercano
Tubos fotomultiplicadores 150 - 1000 UV - V e IR cercano
Celdas fotoconductoras 1000 - 50000 Absorcin IR
5 .- UNIDAD DE LECTURA
Es la parte del instrumento que permite ver los diferentes datos que pueden conseguirse con el
espectrofotmetro. La forma de presentacin de datos incluyen accesorios tales como: Leds (diodos
emisores de luz), pantallas de cristal lquido (LCD), tubos de rayos catdicos (CRTs), medidores
anlogos, etc.
Por lo general todos los equipos modernos presentan una pantalla grfica que permite ver tanto el
barrido espectral, como los datos cuantificados. La computadora personal se ha vuelto parte
indispensable de todo equipo moderno. La PC aumenta las capacidades de trabajo y las funciones
del instrumento, permitindole realizar, trabajos automatizados, procesamiento y clculos
matemticos veloces y una inmejorable presentacin de los mismos.
ANALISIS QUMICO 2 Ingeniera Biotecnolgica 76
Un perifrico de datos se refiere a las diferentes formas en las cuales los datos se dan a conocer. El
perifrico ms usado para la salida de datos es la impresora, otras formas de salida de datos es por
medio de dispositivos magneto pticos (disquetes o tarjetas de memoria)
INSTRUMENTOS TIPICOS
Existen en el comercio una variedad de instrumentos para realizar medidas de absorbancia en las
regiones ultravioletas y visibles del espectro. Los ms simples de estos aparatos son los
colormetros, en los que el ojo humano funciona como transductor o detector. Los ms complejos son
los espectrofotmetros registradores de doble haz, que cubren toda la gama del espectro, desde
aproximadamente 185 nm hasta 3 000 nm, pero los ms comunes oscilan entre 200 a 1100 nm.
Fotocolormetros
El fotmetro proporciona un instrumento sencillo y relativamente econmico para realizar anlisis de
absorcin. Comodidad, facilidad de mantenimiento y resistencia de mantenimiento y resistencia son
propiedades de un fotmetro de filtro. Existen en el mercado fotmetros de un solo y de doble haz.
Diagramas esquemticos de un fotmetro de un solo haz y un fotmetro de doble haz
Desventajas:
- Lmpara tiene un periodo de vida media de 1 000 horas.
- La fotocelda con el tiempo pierde sensibilidad, la razn es que muchas veces
encendemos el aparato sin filtro o simplemente experimenta un fenmeno de fatiga.
- Es conveniente utilizar estabilizadores a parte del que ya tiene incluido el aparato.
- Operan solamente en la regin visible
Ventajas:
Dispersin de Prisma de cuarzo; red de Prisma de vidrio, red Prisma de NaCl, KBr, Li, F,
longitudes de difraccin. de difraccin, filtros. CaF2, segn la longitud de
onda. onda
Lentes, clulas Lentes de cuarzo clulas, Lentes de vidrio, Ventanas de las clulas
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FUNDAMENTO
El fundamento de estas tcnicas es la dispersin de la luz por partculas no transparentes
suspendidas en un lquido, por ejemplo, precipitados y suspensiones coloidales. La teora de la
dispersin de la luz es complicada por otros parmetros de la muestra tales como la forma de la
partcula, la absorcin molecular, la concentracin de la muestra y la distribucin de tamao de los
dispersores.
Hay dos mtodos para medir la turbidez de una muestra, la turbidimetra y la nefelometra. Un
turbidmetro mide la cantidad de radiacin que pasa a travs de una muestra en la direccin de
avance, en forma anloga a la espectrofotometra de absorcin, es decir, por turbidimetra se
determina la cantidad de luz no dispersada. En estos mtodos se puede llevar a cabo a cualquier
longitud de onda de la luz, los procedimientos de los mtodos estndar para la determinacin de
sulfatos por anlisis turbidimtricos recomiendan una longitud de onda de 420 nm, esto produce un
anlisis ms sensible, debido a que la luz de esta longitud de onda se dispersa ms que la luz roja,
que tiene longitudes de onda mayores.
En nefelometra se mide la cantidad de radiacin dispersada por las partculas, es decir, en una
muestra turbia. Estas mediciones se hacen a un ngulo medido respecto de la direccin del haz de
radiacin que atraviesa la muestra, usualmente 45 o 90 o.
Se seala tambin que la nefelometra es un mtodo para medir la intensidad de una radiacin
dispersa en un ngulo de 90 o con respecto a la fuente. Este procedimiento analtico se basa en la
dispersin de la radiacin que atraviesan las partculas de materia, cuando la luz atraviesa un medio
transparente en el que existe una suspensin de partculas slidas, se dispersa en todas direcciones
y como consecuencia se observa turbia.
INSTRUMENTACIN
Es un instrumento para medir partculas suspendidas en un lquido. Para medir muy pequeas
cantidades de turbidez (transmitancias de muestra mayores que 90 o), como el anlisis de aguas
potables y aguas negras, el mtodo nefelomtrico es el ms adecuado.
Un instrumento tpico de flujo directo, se hace empleando una fotocelda colocada en un ngulo de 90
o
con respecto a una fuente luminosa. Este ngulo es el ms sensible a las variaciones en el tamao
de partcula, tambin exhibe un sistema ptico simple que est relativamente exento de radiacin
parsita.
La densidad de partculas es entonces una funcin de la luz reflejada por las partculas a la fotocelda,
cuanta ms luz se refleje en una determinada densidad de partculas depende de las propiedades de
las partculas como su forma, color y reflectividad.
En otros casos se utiliza un instrumento de dispersin superficial. Cuando un rayo de luz muy
estrecho alcanza la superficie de la muestra con un ngulo muy pequeo, parte del rayo se refleja en
la superficie y escapa hacia una trampa de luz. La porcin remanente pasa al interior de la muestra
con un ngulo de 45 o aproximadamente. Si hay partculas de turbidez presentes se produce
dispersin de radiacin y parte de la radiacin dispersada alcanza el detector, localizado ligeramente
arriba de la muestra.
En Turbidimetra se puede emplea un fotmetro de filtro, la cantidad de luz que no se absorbe se
mide en unidades de absorbancia.
Estos instrumentos pueden medir con precisin trazas de turbidez en unidades de NTU
(nephelometric turbidity unit)
Son dos campos analticos estrechamente relacionados con La espectroscopia del visible, tanto en el
aspecto terico como experimental. Se llama turbidez a la propiedad ptica de una muestra que
hace que la radiacin sea dispersada y absorbida ms que transmitida en lnea recta a travs de la
muestra, la turbidez es ocasionada por la presencia de materia suspendida en un lquido.
En la turbidimetra se mide la cantidad de luz que pasa a travs de una solucin, a mayor turbiedad
es menor la cantidad de luz transmitida.
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APLICACIONES
Generalmente la nefelometra y la turbidimetra se utilizan en el anlisis de la calidad qumica del
agua, para determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento.
Las aplicaciones de la nefelometra y de la turbidimetra son muy diversas. Algunas determinaciones
involucran sistemas que son turbios aun antes de entrar en el laboratorio analtico, tales como en la
determinacin de material suspendido en aguas. Mediciones de la claridad de bebidas y frmacos
son tpicas de este tipo de determinacin nefelomtrica simple.
Por nefelometra se puede determinar, por ejemplo, calcio o bario precipitndolos como fosfato o
sulfato. De la cantidad e intensidad de radiacin dispersada por los metales precipitados se obtiene,
respectivamente, la cantidad y concentracin de estos metales en la muestra.
Cuando se utilizan estas tcnicas con fines cuantitativos se suelen construir curvas de calibrado con
muestras de concentraciones conocidas. Estas muestras (precipitados o suspensiones) deben
prepararse bajo condiciones rigurosamente controladas, ya que la cantidad de luz dispersada
depende no slo de la concentracin sino tambin del tamao y nmero de partculas implicadas.
Para que la luz dispersada pueda utilizarse comparativamente, es necesario que tanto el nmero de
partculas como su tamao sean del mismo orden. Adems la longitud de onda de luz que es
dispersada ms eficazmente depende tambin del tamao de las partculas.
Bajo ciertas condiciones controladas, se puede lograr que el tamao de la partcula en la suspensin
sea reproductible y, en consecuencia, que esta tcnica sea de aplicacin analtica.
A = M b C M + N b C N (a )
A = M b C M + N b C N (a )
Las cuatro absortividades molares pueden calcularse a partir de disoluciones estndar individuales
de M y de N. o mejor a partir de las pendientes de sus representaciones grficas de la ley de Beer.
Las absorbancias de la mezcla A y A, se pueden medir experimentalmente, al igual que b, el
espesor de la cubeta. As, a partir de estas dos ecuaciones, se pueden calcular fcilmente las
concentraciones de los constituyentes individuales, CM y C N.
Estas relaciones son vlidas slo si se cumple la ley de Beer y si dos componentes se comportan de
manera independiente el uno del otro. La mayor exactitud en un anlisis de este tipo se alcanza
cuando se seleccionan longitudes de onda en las que las diferencias entre las absortividades molares
sean grandes.
S = k VsCs + k VxCx
Vt Vt
Este mtodo puede utilizarse cuando no se dispone de tiempo para preparar la curva de calibrado, o
ahorrar muestra, o bien cuando se carece de informacin acerca del disolvente de la muestra, o
tambin cuando es imposible suprimir interferencias fsicas o qumicas en la matriz de la muestra.
El mtodo supone la adicin de uno ms volmenes iguales de disolucin estndar a alcuotas de
la muestra del mismo tamao. Despus cada disolucin se diluye hasta un volumen fijo antes de
medir su absorbancia.
En el mtodo de adiciones mltiples se aaden cantidades de la disolucin estndar del analito a
varias porciones de la muestra y se obtiene una curva de calibracin para las varias adiciones.