Universidad de la Amazonia

Facultad de Ciencias Bsicas

Programa de Qumica
Laboratorio de Qumica de P. Naturales

PRCTICA No. ___

Anlisis preliminar de esteroides y/o triterpenoides libres

1. OBJETIVOS

1.1 OBJETIVO GENERAL

Identificar mediante reacciones qumicas de reconocimiento preliminar, la

presencia de compuesto de tipo esteroidal.

1.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Llevar a cabo las reacciones de Liebermann-Burchard, Reaccin de dienos

homoanulares 1-3, Reaccin de Salkowski, reaccin de Zlatkis y la reaccin de
Tortelli-Jaffe para la identificacin de compuestos de tipo esteroidal

2. FUNDAMENTO TERICO

La prueba ms utilizada en el anlisis de esteroides es la reaccin de Liebermann-

Burchard. Aunque es empleada desde hace mucho tiempo, no se conoce de ella ni el
mecanismo ni los requerimientos estructurales para que una sustancia d positiva la
prueba. Sustancias como los esteroles, metil-esteroles, glucsidos cardiotnicos,
saponinas esteroidales, esteroalcaloides, di y triterpenos dan positiva esta prueba por
contener detalles estructurales comunes o anlogos. Aunado a la prueba de Lieberman-
Burchard, existen otro tipo de pruebas para esteroides en general como son: Prueba de
fiesser, reaccin con tetra-nitro metano, Reaccin de dienos homoanulares 1-3, Reaccin
de Salkowski, Reaccin de Zlatkis y la reaccin de Tortelli-Jaffe.

3.0 TRABAJO PREVIO

3.1 Verificacin de la lectura de la gua por parte de los alumnos previo a la realizacin
de la prctica.

3.2 Refuerzo magistral por parte del docente sobre la realizacin de la prctica

4.0 ELEMENTOS NECESARIOS PARA LA PRCTICA

4.1 Materiales y equipos x grupo

1 Placa escavada
5 Tubos de ensayo de 5 ml
4 Goteros
1 pinza para tubo de ensayo
1 embudo de separacin pequeo
1 Beaker de 50 ml
1 pipeta graduada de 10 ml
1 termmetro
1 bao mara

4.2 Reactivos x grupo

Reactivo Cantidad Descripcin

Colesterol 1,0 gr
ter de petrleo 10 ml
Cloroformo 1 ml
Anhdrido actico 0,5 ml
cido sulfrico concentrado 1,0 ml
s/n de acido fosfomolbdico al 10 % en etanol 0, 5 ml
cido actico glacial 0,5 ml
Cloruro frrico al 10 % 0, 5 ml
cido tricloroactico al 40 % en metanol absoluto 0,5 ml

5.0 Desarrollo experimental:

5.1 Prueba de Liebermann Burchard: El Residuo I se extrae con 20 ml de ter de

petrleo, se filtra y el filtrado se lleva a sequedad. Posteriormente se redisuelve
adicionando gotas de anhdrido actico en cloroformo y cido sulfrico concentrado. Las
gotas de cido deben agregarse por el borde de la cavidad, muy lentamente para apreciar
los cambios de color, de lo contrario la mezcla reaccionante se quema y solo se observa
color caf. El colesterol y otros 5 esteroles dan un color azul verdoso que alcanza su
intensidad mxima despus de 30 minutos. Los -7 y 5,7 esteroles dan color similar al
minuto y medio. Los esteroles dan menor coloracin o ninguna. Los esteroles se
precipitan con digitonina y la reaccin de Liebermann Burchard con estos digitnidos
ofrece resultados diferenciables.

Ensayo: Tomar 0,5 ml de solucin clorofrmica anhidra en un tubo de ensayo limpio y

seco. Aadir 0,5 ml de anhdrido actico. Aadir cuidadosamente por la pared del tubo,
una gota de cido sulfrico concentrado. Observar y anotar los cambios de coloracin. Se
considera positiva la prueba cuando aparecen coloraciones violeta, verde y azul.

Precaucin: Use pinzas para tubo de ensayo y lleve a cabo la reaccin en campana de
extraccin. Nunca dirija la boca del tubo hacia usted o su compaero.

5.2 Prueba de cido fosfomolbdico: En un tubo de ensayo limpio y seco se toma 1 ml

del filtrado orgnico y se agregan por la pared del tubo de 2 a 3 gotas de solucin
etanlica al 10% de cido fosfomolbdico. El cambio de coloracin a verde, azul, rojo o
violeta es prueba positiva (+) para esteroides y/o triterpenoides en la muestra.

5.3 Reaccin de Salkowski: En placa escavada agregue a la muestra cido actico

glacial, cloruro frrico y una gota de cido sulfrico concentrado. El colesterol da color
rojo.

5.4 Reaccin de dienos homoanulares 1-3: Si hay dienos nucleares reales o

potenciales en el sistema anular esteroidal, esa parte de la molcula reacciona con una
solucin de cido tricloroactico al 40 % en metanol absoluto. La reaccin requiere
calentamiento a 90 o C y puede hacerse en tubo de ensayo o en papel de filtro. Si la
prueba es positiva, aparece un color azul-verdoso que luego se vuelve prpura.

5.5 Reaccin de Tortelli-Jaffe: En un tubo de ensayo pequeo coloque una porcin del
extracto con cido actico y agregue gotas de solucin de bromo en cloroformo al 2 % v/v.
La aparicin de un color verde en la interface es especfico de dobles enlaces. Los 5,7-
dienos tambin dan positiva esta reaccin.

6.0 CUESTIONARIO

Establezca las posibles reacciones que pudieran estar ocurriendo entre la molcula de
esteroide y cada reactivo.

REFERENCIAS

Martnez, M., et. al. Manual de prcticas de laboratorio de farmacognosia y fitoqumica.

Universidad de Antioquia, Medelln, 2008.

Bilbao, R., M, Anlisis fitoqumico preliminar. Universidad del Quindo, Armenia. 1997.

Sanabria, G. A. Anlisis fitoqumico preliminar, metodologa y su aplicacin en la

evaluacin de 40 plantas de la familia compositae. Universidad Nnal de Colombia,
Bogot, 1983.