UNIVERSIDAD NACIONAL

FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMTICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE QUMICA

ALUMNOS:
Carcasi Ramos, Joel
Maihuiri Vargas, Hugo
Pinedo Deza, Dennis
Ovalle ( ), Andrea

PRTICA 1
AISLAMIENTO Y DETERMINACION DE
CAFEINA POR HPLC
CURSO:
LABORATORIO DE ORGNICA III
PROFESOR:
CANDY RUIZ
Contenido
Objetivo........................................................................................................................................2
Introduccin.................................................................................................................................3
Fundamento.................................................................................................................................3
Parte experimental.......................................................................................................................4
Material y equipo.....................................................................................................................4
Reactivos..................................................................................................................................4
Cromatograma de muestras de cafena....................................................................................7
Clculos y resultados....................................................................................................................8
Determinacin de la concentracin de una muestra de caf...................................................8
Ecuacin de la curva de calibrado..........................................................................................10
Discusiones.................................................................................................................................12
Conclusiones..............................................................................................................................13
Bibliografa.................................................................................................................................13
Anexo.........................................................................................................................................14
Ficha de seguridad del cloroformo.........................................................................................15
Ficha de seguridad de la cafena............................................................................................16

Objetivo
Introduccin

Fundamento
Parte experimental

Tabla 1 Materiales y reactivos utilizados

Material y equipo Reactivos

1fiola de 50ml
Sep-pack C18 Vaso de precipitado de 100ml
Equipo de reflujo Pipetas
1 embudo Propipetas
Estufa Agua destilada 40ml
High performace liquid Cloroformo
chromatografy (HPLC)

Ilustracin 1 Molcula de la cafena

1) Se pes 0.39 g de caf molido, se aadi 40ml de H 2 O(l) . Luego se le llev a
reflujar durante 30 minutos.

2) Se filtr la muestra llevndolo a una fiola de 50ml.

3) Se acondicion el Sep pak C18 con 5ml de H 2 O(l) y se le coloc 2ml de la

muestra filtrada.
4) Se eluy la muestra con 10ml de Cloroformo en un frasco de 20 ml, llevndolo a un
calentador hasta secar la muestra.

5) Se aadi 5ml de H 2 O (l) ultra pura. Se filtr 1ml llevando en un filtro de 0.045m,
para as eliminar impurezas.
 6) Se llev las 5 muestras de los diferentes grupos al HPLC.

Cromatograma de muestras de cafena

Tabla 2 cromatogramas determinados por el HPLC

Cromatograma de cafena del estndar de 25 ppm Cromatograma de cafena del estndar de 50 ppm
Cromatograma de cafena del estndar de 100 ppm ESPECTRO UV DE LA CAFENA

Clculos y resultados

Determinacin de la concentracin de una muestra de caf

- Hallamos la curva de calibrado obtenida con el HPLC

Tabla 3 rea de estndar de cafena.

Concentracin de estndar de cafena (ppm) rea de estndar de cafena

25 461968
50 957137
100 1930473
 Curva de calibrado de la cafeina
2500000

2000000
f(x) = 19563.87x - 24700
R = 1
1500000
area estandar

Li near ()
1000000

500000

0
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110

concentracion de la cafeina(ppm)

Ilustracin 2Curva de calibrado obtenida con el HPLC

- Demostracin por mnimos cuadrados:

Y =m . X +b
Donde:

Y=rea estndar de cafena.

m=Pendiente de la curva de calibrado.

X=Concentracin de cafena de las muestras inyectadas (ppm).

b= Ordenada en el origen de la curva de calibrado

Ecuacin 1 mtodo de mnimos cuadrados

N X i Y i X i Y i X 2i Y i X i X i Y i
m= 2
, b= 2
N X 21( X i ) N X 2i ( X i)
Tabla 4 mnimos cuadrados

X Y XY X2
25 461968 11549200 625
50 957137 47856850 2500
100 1930473 193047300 10000
suma 175 3349578 252453350 13125
 3 252453350175 3349578
m= =19563.87
3 13125(175)2
13125 3349578175 252453350
b= 2
=24700
3 13125(175)

Ecuacin de la curva de calibrado

Y =m . X +b Y =19564 X24700
Donde:

Y=rea estndar de cafena.

m=Pendiente de la curva de calibrado.

X=Concentracin de cafena de las muestras inyectadas (ppm).

b= Ordenada en el origen de la curva de calibrado

En la muestra.

Se interpolo el rea obtenida por el HPLC de la muestra de caf en la curva de calibrado y se

obtuvo la concentracin de la muestra inyectada

Interpolacion
2500000

2000000
Area estandar

1500000

1000000

500000

0
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
Concentracion de la cafeina(ppm)

Ilustracin 3Interpolacin de la muestra de caf en la curva de calibrado

 - Para hallar la concentracin usamos la ecuacin de la regresin lineal obtenida de la
curva:

Y =19564 X24700

- rea de la muestra la muestra de caf =656278

656278=19564 X24700 X =34.807 ppm

- Calculamos el peso de la cafena en la muestra de caf con el volumen de agua ultra

pura usada para disolver la cafena obtenida, para su lectura en el HPLC.

Volumen de agua=2ml

34.807 mg 1000 ml
Peso de la cafeina2 ml

34.807 mg 2ml
Peso de la cafeina= Peso de la cafeina=0.0696 mg
1000 ml

- Porcentaje de la cafena en el caf instantneo (Nescafe):

peso de la cafeina
cafeina= 100
peso de lamuestra de cafe

0.0696 103 gr
%cafeina= 100
0.4 gr
%cafeina=0.0174
Discusiones

1) Cul es la utilidad de usar cloroformo en el aislamiento y extraccin de cafena?

La cafena es una base dbil, y como tal es soluble cloroformo por la polaridad que posee. As
mismo, como la reaccin se da en medio bsico y debido a que los taninos y flavonoides son de
carcter cido, son stos los que pasan a la fase acuosa ya separados, y la cafena junto con el
cloroformo pasa a la fase orgnica y por la gran solubilidad y por su bajo punto de ebullicin
(62C). Ahora cuando ms polar sea el compuesto de la muestra, este firmemente se unir a la
fase estacionaria e inversamente cuando sea ms polar sea la fase solida ms fuertemente se
unir a un compuesto de la fase mvil.
Por consiguiente cuanto mayor sea la polaridad del disolvente, mayor ser su capacidad para
desalojar y desplazar un compuesto polar de la fase estacionaria 1

2) Cul es el espectro IR de la cafena?

Ilustracin 4 sobre su espectro IR de la cafena2

3) Qu otros alcaloides se encuentran aparte de la cafena?

1 Qumica organica experimental-H DUPONT DURST-editorial reverte-1985-pag 83

2 Qumica organica experimental-H DUPONT DURST-editorial reverte-1985-pag 402
La cafena (1, 3, 7-trimetilxantina), alcaloides metilxantnicos, como la teobromina (3, 7-
dimetilxantina) y la teofilina (1, 3-dimetilxantina), son derivados del grupo de las xantinas, que
a su vez se derivan de las purinas. Tambin es conocida por el nombre tena, guaranna o
matena.[ CITATION Eva17 \l 10250 ]3

Ilustracin 5alcaloides cafena (41), teofilina (42) y teobromina (43) 4.

Conclusiones

Bibliografa

Anexo
Sep-Pak C18 1 cc Vac Cartridge, 50 mg Sorbent per Cartridge, 55-105 m
Particle Size, 100/pk [WAT054955]
Cartuchos Sep-Pak C18 Vac contienen una fase inversa, fase unida hidrofbico, a base de slice
que se utiliza para adsorber analitos de hidrofobicidad incluso dbil a partir de soluciones

3http://s3.amazonaws.com/academia.edu.documents/40171191/determinacion_analitica_de_la_cafein
a.pdf?AWSAccessKeyId=AKIAIWOWYYGZ2Y53UL3A&Expires=1495747893&Signature=7szJRaNMAG
%2BzCV4xsIcfNG969B0%3D&response-content-disposition=inline%3B%20filename
%3DDeterminacion_analitica_de_la_cafeina.pdf
4 Fundamentos de qumica heterocclica-paquette-editorial limusa-1987-pag 373
acuosas. El sorbente Sep-Pak C18 se hace usando la tecnologa de unin ms reproducible
disponibles, utilizando la qumica de silano monofuncional. Este sorbente ofrece una
selectividad nica y excelente recuperacin de analitos, y se recomienda como una fase SPE
propsito general para ambos analitos polares y no polares. Las aplicaciones tpicas incluyen la
extraccin de las drogas y sus metabolitos en suero, plasma u orina, la desalinizacin de
pptidos, el aislamiento de los compuestos orgnicos traza en muestras ambientales de agua y
cidos orgnicos en bebidas. Estos cartuchos de tipo cilindro de la jeringa estn diseados para
su uso con distribuidores de vaco e instrumentos SPE automatizados. 5

Ilustracin 6 sep - pak C18

5 http://www.waters.com/waters/partDetail.htm?locale=103&partNumber=WAT054955
Ficha de seguridad del cloroformo6

6http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/FISQ/Ficheros/0a100/nspn
0027.pdf
Ficha de seguridad de la cafena7

7
http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/FichasTecnicas/FISQ/Ficheros/401a500/nsp
n0405.pdf