PRCTICA Nro.

6
INFLUENCIA DE LAS HORMONAS REPRODUCTIVAS SOBRE LA MORFOLOGA
CELULAR EN ENDOMETRIO (CITOLOGA VAGINAL EXFOLIATIVA EN CANINOS)

1. Objetivo

-Identificar mediante microscopia ptica los diversos tipos celulares presentes a lo largo
del ciclo estral de la perra, a fin correlacionar la morfologa de las clulas con la influencia
hormonal propia de cada etapa del ciclo.

2. Materiales
-Hembras caninas en diferentes estadios del ciclo.
-Material lubricante.
-Guantes estriles.
-Hisopos.
-Material para la fijacin y tincin de los extendidos.
-Microscopios pticos
-Elementos de limpieza
-Tincin Diff-Quick, Giemsa o Wright
-Alcohol al 95%

3. Marco Terico

La perra es monostrica estacional con escasa o nula estacionalidad (Hafez, 2002).

Luego de la ocurrencia del ciclo estral se produce un perodo de anestro de duracin
variable, lo que da como resultado un intervalo entre los ciclos que puede oscilar entre 5 y
12 meses. El periodo de proestro y comportamiento de estro es variable, de 3 a 20 das.
La hembra canina, a diferencia de otras especies, ovula ovocitos primarios que tardan 2 o
3 das en 3 madurar en el oviducto, momento en el cual podrn ser fecundados, es decir,
aproximadamente 4 das despus del pico preovulatorio de LH. El ciclo reproductivo de la
perra incluye 4 estadios: proestro, estro, diestro y anestro. La duracin del intervalo
interastral es variable, pudiendo oscilar entre 4 a 10 meses con un promedio de 7 meses,
(Intervet, 2006).
Para la determinacin de la etapa del ciclo estral en la perra se dispone de algunas
herramientas de diagnstico, entre ellas la determinacin del perfil hormonal en sangre y
la citologa vaginal. Esta ltima, es una tcnica mediante la cual se puede establecer con
relativa cercana la etapa del ciclo estral en la cual se encuentra el animal, a travs de la
interpretacin de los cambios morfolgicos de las clulas endometriales (ver figura 8) y la
presencia o ausencia de bacterias y de otros tipos de clulas sanguneas (neutrfilos y
eritrocitos). Su principal limitante es que no determina ovulacin y preez, adems de no
ser exacta, por lo que precisa de seguimiento del comportamiento del animal y la
realizacin de frotis seriados.

Fundamento de la citologa vaginal

El principio de la citologa vaginal exfoliativa se basa en determinar el tipo y cantidad de
clulas de las diferentes etapas del ciclo estral, ya que los cambios hormonales que sufre
la mucosa vaginal durante el ciclo estral se reflejan en la morfologa de sus clulas
epiteliales. Al inicio del ciclo, la clula epitelial est en contacto con la irrigacin
sangunea. Conforme los niveles de estrgenos se incrementan, el epitelio vaginal se va
engrosando ocasionando que la clula epitelial se vaya separando del aporte sanguneo
dando como resultado una transformacin celular que va de clula parabasal a clula
anucleadas o escama.

Figura 8. Tipos celulares epiteliales a reconocer en el hisopado vaginal.

Fuente:http://www.fcv.unl.edu.ar/archivos/grado/catedras/teriogenologia/informacion/11041
1/PDFs%20

Ciclo estral de la perra

Proestro
En esta etapa el animal se encuentra bajo la influencia hormonal de los estrgenos, por
tanto, manifiesta comportamiento de celo, pero no es receptiva a la monta. Esta etapa se
caracteriza por el enrojecimiento de la vulva, sangrado vaginal e intranquilidad. Estos
cambios fisiolgicos estn a cargo de los estrgenos, pues estos generan vasodilatacin
de los capilares endometriales, con ruptura de los mismos por la mayor llegada de sangre
a esta zona; adems de influir en centros superiores cerebrales como el sistema lmbico
condicionando as la conducta del animal. La duracin de esta etapa es variable, siendo
en promedio de 9 das. El pico de estrogenemia se produce 24 a 48 horas antes de que
ocurra la aceptacin del macho y comience la declinacin de las concentraciones de esta
hormona. Las concentraciones de progesterona son bajas durante todo el proestro, salvo
en las ultimas 12 a 48 horas. El final del proestro y el comienzo del estro estn
caracterizados por progesteronemias. Este incremento de la progesterona srica est
relacionado con la luteinizacin preovulatoria de los folculos. Las concentraciones de
FSH disminuyen durante el proestro, probablemente en relacin a la retroalimentacin
negativa producida por Inhibina.
(http://www.fcv.unl.edu.ar/archivos/grado/catedras/teriogenologia/informacion/110411/PDF
s%20word/TP12.pdf).

En esta etapa del ciclo estral, lo ms caracterstico que se puede observar al microscopio
(ver figura 9) es:
- nmero variable de eritrocitos y escasas clulas parabasales.
-numerosas clulas intermedias y escasas clulas intermedias superficiales.
-neutrfilos en bajo nmero y bacterias en pequeas o grandes cantidades

Nota: Los neutrfilos no deberan ser observados nuevamente hasta el diestro. El nmero
de clulas parabasales e intermedias pequeas disminuye y son reemplazadas por
clulas intermedias grandes e intermedias superficiales. Los eritrocitos pueden o no estar
presentes y el fondo es sucio o claro. En el proestro tardo, ms del 80% de las clulas
vaginales son superficiales con ncleos picnticos o son superficiales anucleadas.
Figura 9. Abundantes clulas intermedias y parabasales, bordes citoplasmticos
redondeados, ncleo grande redondo a ovalado no picnticos, y acompaadas por
neutrfilos no degenerados. Objetivo de 40x.
Fuente: Fernndez (2010).

Estro
Esta etapa se caracteriza por la aceptacin del macho por parte de la hembra
(receptibilidad sexual). El sangrado ha disminuido hasta desaparecer, de igual forma los
estrgenos han descendido y aumentado los niveles de progesterona, hacindose
inminente el pico de LH (hormona luteinizante) que antecede a la ovulacin, la cual se da
ocurre alrededor de los 2 o 3 das despus del pico de LH.
La duracin promedio del celo es de 9 das (rango 4 a 24 das).

En esta etapa del ciclo estral, lo ms caracterstico que se puede observar al microscopio
(ver figura 10) es:
-clulas superficiales nucleadas y anucleadas (queratinizadas) o con ncleo picnticos
(ms del 80% - 100% de las clulas observadas).
- ausencia de neutrfilos.
-eritrocitos pueden o no estar presentes y el fondo es limpio.
Figura 10. Presencia de numerosas clulas queratinizadas que presentan un citoplasma
con bordes plegados, angulosos y romos, ncleo pequeo, picnticos y basfilo con
ausencia de neutrfilos. Objetivo de 40x.
Fuente: Fernndez (2010).

Diestro
En esta etapa, cuya duracin es de 56-58 das, la hembra rechaza la monta. Dado que
sucedi la ovulacin, se han formado cuerpos lteos que producen progesterona, para
mantener una posible preez. Los niveles de esta hormona se mantendrn altos si el
animal esta gestante, y finalmente declinar durante los meses posteriores (5 -6 meses).
Las perras normales no gestantes que han pasado el celo poseen cuerpos lteos
funcionales a pesar de la ausencia de gestacin, el cuerpo lteo de las perras no
gestantes posee un perodo funcional mayor que el de las gestantes. La fase ltea finaliza
abruptamente en la perra gestante con el parto, mientras que en la no gestante cae
lentamente durante un lapso adicional de 10 a 20 das. Es decir, la duracin del diestro
ser de 2 a 3 meses en ausencia de preez, Fernndez (2010).

En esta etapa del ciclo estral, lo ms caracterstico que se puede observar al microscopio
(ver figura 11) es:
-clulas superficiales disminuye.
-clulas parabasales e intermedias se incrementan marcadamente.
-neutrfilos en nmero variable (a los 10 das del diestro).

Nota: dado que los glbulos rojos pueden presentarse al principio del diestro, es imposible
diferenciar el proestro del diestro basndose exclusivamente en la citologa vaginal. Luego
de los primeros das del diestro, la citologa vaginal es similar a la del anestro con
leucocitos y eritrocitos en cantidades escasas y las clulas epiteliales corresponden a
intermedias y parabasales.

Figura 11. Clulas epiteliales parabasales e intermedias con bordes redondeados y ncleo
visible.Fuente:http://www.fcv.unl.edu.ar/archivos/grado/catedras/teriogenologia/informacio
n/110411/PDFs%20word/TP12.pdf

Anestro
En esta etapa que dura en promedio 4 meses y medio, el animal de encuentra en cese en
cuanto a su actividad reproductiva, dado que no atrae al macho, no manifiesta
comportamientos sexuales ni secreciones o cambios a nivel genital. Las concentraciones
de progesterona srica alcanzan niveles basales. Al final del anestro, se activa
nuevamente el eje hipotalmico-hipofisiario-gonadal, para permitir un nuevo proestro.

En esta etapa del ciclo estral, lo ms caracterstico que se puede observar al microscopio
es:
-predominan clulas parabasales y de clulas intermedias pequeas.
-algunos neutrfilos, en menor cuanta que al principio del diestro.
-ocasionalmente se pueden observar bacterias.

4. Procedimiento
1- Tome el animal y pngalo de pie sobre la mesa del laboratorio.
2- Pida a sus compaeros que sujeten en animal, mientras introduce un hisopo estril
por la comisura dorsal de los labios vulvares.
3- Frotar suavemente hasta atravesar el cingulum hasta llegar a la porcin caudal de la
vagina, mediante movimientos circulares del hisopo, se colectar el material celular.
4- Retira el hisopo y haga un frotis por rodamiento en un portaobjetos.
5- Fije el extendido con alcohol al 95 % durante 5 a 10 minutos.
6- Tia el extendido con tincin Diff-Quick, Giemsa o Wright.
7- Observe al microscopio (10x y 40x) e identifique las clulas.

5. Cuestionario
1. Por qu cambia la morfologa celular endometrial por la influencia estrognica?
Argumente coherentemente su respuesta.
2. Cules son los alcances y limitaciones de la citologa vaginal en caninos?
3. Qu otras tcnicas o herramientas de diagnstico se usan para la determinacin de la
etapa del ciclo estral en caninos?
4. Dibuje las clulas endometriales, indicando los cambios registrados en su morfologa
con el avance del ciclo estral.
5. Diagrame el ciclo estral de la perra, indicando el comportamiento hormonal en cada
etapa.

6. Bibliografa
- Compendium of animal reproduction. Intervet, 2006.
-Fernndez A; C. (2010). Casos clnicos de citologa en el perro y el gato ISBN: 978-84-
92569-37-3

-Fras; Ortega, M. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, UNAM Departamento de

fisiologa y farmacologa. Manual de prcticas de fisiologa Veterinaria septiembre 2013.

-Hafez, B. H. (2002). Reproduccin e inseminacin artificial en animales (No. V390 HAFr

7a. ed).

-Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias, ctedra de

Teriogenologia. Trabajo prctico n 12. Tema: citologa vaginal. Disponible en
http://www.fcv.unl.edu.ar/archivos/grado/catedras/teriogenologia/informacion/110411/PDF
s%20word/TP12.pdf