Resumenes de investigacion
Desarrollo y validacion de un metodo analitico
para la cuantificacion de tizoxanida en plasma
RafaeD Castil
Introduccion: la nitazoxanida es un farmaco tipo
nitroinmidazolico con amplia actividad cestocida. Se
metaboliza completamente a tizoxanida (TZO) que es
un metabolito activo y al combinarse con albendazol
se incrementa su actividad antiparasitaria. Este farmaco
ha demostrado alta efectividad contra protozoarios
{cryptosporidium parvum, Isospora belli, cyciospora
cayaetanensis, giardia iambia y entemoaba histolitica
entre otros) y bacterias Gram positivas y negativas.
Estudios previos realizados en el laboratorio empleando
modelos in vitro, han demostrado que posee actividad
contra taenia soiium y f. crassiceps por lo que se con-
sidera de interes el continuar con la investigacion
farmacocinetica de este farmaco, para lo cual, es
necesario desarrollar un metodo analitico para su cuan-
tificacion en fluidos biologicos.
Objetivo: desarrollar y validar un metodo ana-
litico por cromatografia de liquidos de alta resolucion
fase reversa para la cuantificacion de tizoxanida en
plasma.
Metodoiogia: la cuantificacion de TZO se realizo
utilizando cromatografia de liquidos de alta resolucion
en fase reversa con deteccion UV. El metodo fue el
siguiente: 1 ml de plasma se acidifico con 2 ml de
disolucion amortiguadora de fosfato monobasico de
potasio a una concentracion de 0.01 m. Se extrajo con
Evaluacion de la actividad cestocida de
nitazoxanida en combinacion con albendazol.
Estudios in vitro-in vivo
FramieBsea
Introduccion: el albendazol (ALB) es un farmaco que
ha mostrado alta eficacia cestocida, particularmen-
te en cisticercos de taenia, por lo que es el farmaco de
eleccion en el tratamiento de la neurocisticercosis. La
nitazoxanida (NTZ) es un farmaco relativamente nuevo
que ha mostrado actividad contra diferentes especies
Suplennento 2005
al Jyroqi C<i
7 ml de acetato de etilo. Las muestras se agitaron de
manera horizontal y se centrifugaron, la fase organica
se separo y se evaporo a sequedad con Ng. La mues-
tra se reconstituyo en 120 ml de metanol y se inyectaron
80/ul al cromatografo. Como estandar interno se utilizo
el compuesto 4-(2,3-Diclorofenoxi)-1,2-nitroanilina, el
cual posee propiedades fisicoqufmicas semejantes. La
separacion cromatografica se realizo en una columna
C^g de silica (250 x 4.6 mm), con un gradiente de eiucion
que presentaba como fase movil una disolucion amor-
tiguadora defosfatos 0.01 M(pH=2.5):acetonitrilo (50:50
a 10:90 v/v), con una velocidad de flujo de 1.5 ml/min
y deteccion UV a 350 nm.
Resultados: la curva de calibracion para TZO
fue lineal en un rango de concentracion de 0.078-10
mg/ml. El promedio de recobro es de 90%. El metodo
desarrollado es especifico y sensitivo, el limite de cuan-
tificacion es de 0.078 mg/ml y el limite de deteccion
de 0.039 mg/mL para TZO.
Conclusiones: el metodo desarrollado es con-
fiable y puede ser utilizado para cuantificar tizoxanida
en plasma en estudios farmacocineticos y de monitoreo
terapeutico.
'Instituto Nacional de Neurologia y Neurocirugia, ^Universidad
Nacional Autonoma de Mexico.
de nematodos y particularmente cestodos; sin embar-
go, a la fecha, no existen estudios donde se demuestre
su actividad sobre cisticercos de taenia (parasitosis de
alta incidencia en Mexico), por lo que el objetivo del
presente trabajo fue determinar la eficacia in vitro e in
vivo de la NTZ sola y en combinacion con ALB,
Sinv 33
 Suplemento 2005
utilizando como modelo cisticercos de taenia crassi-
ceps.
Metodoiogia: estudio in vitro. Se utilizaron cisti-
cercos de taenia crassiceps cepa ORF, los cuales se
obtuvieron del peritoneo de ratones hembras Balb/c
previamente infestados. Como farmacos de prueba se
utilizaron tizoxanida (TZD) y sulfoxido de albendazol
(SOALB), ya que son los metabolitos activos de NTZ y
ALB respectivamente. Primero se determino la
concentracion efectiva 50 (CEg^) deTZD y SOALB. Para
ello, se prepararon soluciones en medio de cultivo en
el rango de concentracion de 0.003 - 0.055/jg/mL para
TZD y de 0.002 - 0.035)ug/mL para SOALB. Los parasitos
se expusieron a los metabolitos y se incubaron a 37C
bajo una atmosfera de 5% de CO^ durante 11 dias. Se
evaluo la mortalidad cada 72 horas, con ayuda de
microscopio de luz invertida. Los criterios de mortalidad
fueron: inmovilidad del parasito y su membrana
y perdida de fluido quistico. Para determinar la CEg;, se
construyeron curvas concentracion-respuesta y
se aplico regresion logit. Con estos resultados se calcu-
laron las concentraciones a estudiar de la combinacion
de TZD y SOALB, las cuales fueron: 0.003+0.002,
0.07-1-0.004, 0.014-1-0.009, 0.027-1-0.018 y 0.055 -I-
0.035 /ig/ml. Las condiciones de incubacion y los
criterios de mortalidad fueron similares a los descritos
anteriormente. Los cisticercos vivos fueron fijados en
Glutaral-dehido al 2.5 % en PBS incluidos en resina
EPON y tefiidos para su observacion microscopica.
Estudio in vivo. Se emplearon ratones Balb/c de 4
semanas de edad infectados experimentalmente con
cisticercos de T. crassiceps cepa W. Un mes pos-
infeccion, los ratones se separaron en 4 grupos de
ensayo: control, NTZ, ABZ y combinacion NTZ -i- ALB.
Se prepararon suspensiones en cremofor al 2% a
concentraciones de: 60 mg/mL para NTZ, 30 mg/mL
Determinacion y validacion del metodo analitico
para determinar clozapina y su metabolito n-
desmetilclozapina en plasma por clar
Antecedentes: la clozapina(CLZ) es un antipsicotico
atipico ampliamente utilizado para el tratamiento de la
esquizofrenia ya que no induce efectos extrapiramidales
como ocurre frecuentemente con los neurolepticos con-
vencionales. El uso de la clozapina se ha limitado
34 Sinv
Resumenes de investigacion
de ALB y 30 mg de NTZ -I- 15 mg de ALB /mL. A cada
raton se le administraron 100 )UL de suspension via
intragastrica, dos veces al dia durante 5 semanas
consecutivas. Al grupo control se le administro una
solucion de cremofor al 2%. Concluido los tratamientos,
los ratones se sacrificaron y se extrajeron los parasitos
de la cavidad peritoneal para su conteo. Con la
finalidad de detectar diferencias entre tratamientos se
llevo a cabo una prueba de comparaciones multiples
de Tukey.
Resultados: los estudios in vitro mostraron que
la eficacia de TZD en cisticercos de T. crassiceps, fue
semejante a la del SOALB. La CEgg de TZD fue de 0.011
)ug/ml, mientras que la del ALB fue de 0.007/jg/mL. Al
evaluar la combinacion TZD -i- ABZSO se encontro
un efecto aditivo sobre la mortalidad de los cisticercos.
La observacion microscopica mostro que la com-
binacion produjo solo dano parcial en el tejido y este
fue menor que el observado con SOALB. A diferencia
del estudio in vitro, la evaluacion in vivo mostro que la
NTZ posee baja eficacia (29.5%) en relacion con ALB
(85.7%), sin embargo al evaluar la combinacion, se
encontro un incremento significativo ( P< 0.05) en
la eficacia (98.2%) con respecto al tratamiento con
albendazol.
Conclusiones: los resultados del presente estudio
tanto in vitro como in vivo, indican que la combinacion
de NTZ con ALB, mejora la efectividad cisticida de este
ultimo. Estos hallazgos podrian representar una
alternativa para mejorar la eficacia de el ALB en aquellos
pacientes que no responden adecuadamente al
tratamiento y da la pauta para realizar un estudio clinico
controlado para evaluar la utilidad de esta combinacion.
'Lab. de Neuropsicofarmacologia. ^Lab. de Neuroinmunologia, 'Lab.
de Patologia INNN 4. Facultad de Quimica , UNAM.
debido al riesgo de inducir agranulocitosis del (1 a
2% de los pacientes), la cual es reversible al suspender
el tratamiento. La clozapina es extensamente
metabolizada en higado y su principal metabolito,
N-desmetilclozapina (DMCZ) tambien es farmacolo-