CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO

Industrial y de Servicios NO. 93

Mdulo III
Submodulo III: Cuantifica microorganismos con base
a normas

Reporte de practica NO. 1

Cultivo de exudado farngeo

Reporta: Bryan Gabriel Peralta Vidal

Grado: 4 Grupo: A Laboratorista Qumico T/V

H. Crdenas, Tab. A .
Introduccin
La esterilizacin es un mtodo de eliminacin total de todo tipo de organismo que
asegura la ausencia absoluta de cualquier forma viviente. Una esterilizacin
deficiente o manipulacin incorrecta de materiales y medios de cultivo conlleva a
contaminaciones, resultados errneos o prdida del material biolgico. Por ello, se
requieren buenas prcticas de laboratorio para su adecuado manejo.
La esterilizacin por calor seco o hmedo son los mtodos que se utilizan con
mayor frecuencia en el Laboratorio de Microbiologa. El calor seco destruye a los
microorganismos por oxidacin, por ejemplo, al exponerlos directamente a la flama
de un mechero o en horno a 150-180C durante 2 horas. Estos mtodos se
aplican en la esterilizacin de asas de inoculacin y para todo tipo de material de
vidrio y quirrgico.
Los procesos con calor hmedo afectan la estabilidad de estructuras celulares y
protenas; se aplican para esterilizar medios de cultivo, soluciones termoestables,
materiales de vidrio y cultivos bacterianos que se desechan.
El equipo de uso comn es la autoclave, que utiliza vapor de agua a presin (15
lb/in); con esta presin el material alcanza una temperatura de 121 C y si se
mantiene durante 15 minutos se asegurar la inactivacin de endosporas, que son
las estructuras bacterianas ms resistentes al calor. (De Vos, P., Garrity, G.,
Jones, D., 2009)

El cultivo de microorganismos es una actividad que requiere del conocimiento de

tcnicas de siembra o inoculacin y de aislamiento para transferirlos de un medio
a otro, o mantener su crecimiento y actividad. Es indispensable para realizar
diversos estudios morfolgicos, de identificacin, bioqumicos, de patogenicidad y
ecolgicos, entre otros.
Existen diferentes tcnicas de siembra: por suspensin de la muestra en medios
lquidos; extensin de diluciones de un cultivo en superficie de medios en caja de
Petri; por estra en caja de Petri y tubos con medios solidificados en forma
inclinada; por piquete o picadura en tubos con medios slidos o semislidos. Con
la aplicacin de cada tcnica se obtiene informacin de importancia para el estudio
bsico o aplicado de los microorganismos de inters. En la naturaleza, los
microorganismos generalmente se encuentran en poblaciones, formando parte de
comunidades de gran complejidad, por lo que uno de los objetivos de estudio ms
importantes en microbiologa es aislarlos. El aislamiento de bacterias a partir de
muestras naturales se realiza, en la mayora de los casos, mediante la tcnica de
estra cruzada para producir colonias aisladas en cultivos slidos y as, obtener un
cultivo puro o axnico, tambin conocido como cepa, que contiene un solo tipo de
microorganismo con la misma composicin gentica.
Cuando la tcnica por estra se aplica para aislar un microorganismo de inters a
partir de mezclas donde se encuentra en pequeas cantidades, generalmente se
obtendrn las bacterias dominantes. En este caso, se utilizan medios selectivos o
de enriquecimiento, los que contienen nutrientes especiales, antibiticos, altas
concentraciones de sales y/o condiciones de pH, luz o temperatura que
incrementarn la poblacin del microorganismo de inters y se facilitar su
aislamiento. Si se agregan a los medios de cultivo otros componentes como:
sangre, colorantes, indicadores, es posible distinguir entre especies bacterianas
por la forma en que metabolizan los sustratos y que se manifiesta por cambios en
la apariencia del pH del medio de cultivo. Estos medios se conocen como medios
diferenciales y son de gran utilidad para la caracterizacin e identificacin de
especies bacterianas. (Brooks, G.F., Jawetz, E., Butel, J.S., 1991)

Los microorganismos vivos o activos son por lo general incoloros (excepto algas y
cianobacterias), por los que no se observarn con facilidad en un microscopio
ptico de campo claro por la falta de contraste entre las clulas y el medio
circundante, por lo que es necesario fijarlos y teirlos en un frotis.
Un frotis se prepara distribuyendo una pequea suspensin de los
microorganismos sobre una superficie transparente que, posteriormente, se fija a
la superficie con calor o solventes orgnicos; lo que causar la inactivacin o
muerte celular y algunas modificaciones de sus caractersticas.
Existen diferentes tipos de tinciones: simple, diferencial y selectiva, de acuerdo
con el nmero y tipo de colorantes utilizados y de los objetivos de estudio. La
tincin que hace uso de un solo colorante es la simple.
Las tinciones diferenciales permiten diferenciar microorganismos con
caractersticas superficiales distintas, por lo que requieren ms de un colorante. La
ms utilizada en bacteriologa es la propuesta por el mdico dans Christian Gram
en 1884, que clasifica los cultivos bacterianos de menos de 24 horas en Gram
positivas y Gram negativas.
Las tinciones selectivas permiten observar estructuras especializadas que son
tiles para la clasificacin taxonmica de bacterias. Por ejemplo, la tincin de
endosporas permite identificar bacterias de tipo Bacillus y Clostridium. (Pelczar,
M.J., Reid, R.D. y Chan, E.C.S. 2000)
Procedimiento

Preparacin del material de vidrio y medios de cultivo

1. Lavar en forma respectiva el material de vidrio y enjuagar con abundante

agua corriente.
2. Escurrir el exceso de agua y enjuagar el material con agua destilada. Dejar
escurrir el material sobre papel de envolver.
3. Preparar 180 mL de Mac conkey en un matraz Erlenmeyer de 250 mL
4. Preparar 180 mL de agar nutritivo en un matraz Erlenmeyer de 250 mL
5. Preparar 180 mL de Sal y manitol en un matraz Erlenmeyer de 250 mL
6. Preparar 45 mL de Stuart en un matraz Erlenmeyer de 250 mL
7. Calentar los medios en un mechero con agitacin constante hasta
ebullicin (cuidar que no se proyecte)
8. Vaciar 5 mililitros de Stuart en 9 tubos y tapar con algodn

Esterilizacin de materiales y medios de cultivo

1. Preparar hisopos, una vez envueltos con papel estraza se colocarn en la

hoya de presin junto con los medios de cultivos.
2. Los medios de cultivo se esterilizarn en hoya de presin de acuerdo con
las siguientes instrucciones:

2.1. Revisar que la hoya de presin este limpia

2.2. Colocarle agua corriente
2.3. Dejar que caliente hasta que llegue a una temperatura de 121 o 15
lbs/in2 de presin y mantener esas condiciones por 20 minutos
2.4. Apagar los mecheros de la hoya de presin y dejar que la presin
disminuya

Vertido de los medios en cajas Petri y solidificacin.

1. Enfriar los medios de cultivo de los matraces hasta que coincide con la
posibilidad de sostener el matraz en la palma de la mano sin quemarse.
2. Limpiar la mesa con cloro y agua, encender mecheros y colocarlos a una
distancia de 50 cm. Verter entre 20 y 25 mL de cada uno de los medios en
nueve cajas Petri en esta zona asptica.
3. Dejar que los medios solidifiquen.