ATLAS de HISTOLOGA VEGETAL y ANIMAL

Tcnicas histolgicas

FIJACIN

Manuel Megas, Pilar Molist, Manuel A. Pombal

Departamento de Biologa Funcional y Ciencias de la Salud.
Facultad de Biologa. Universidad de Vigo.
(Versin: Diciembre 2015)
 Este documento es una edicin en pdf del sitio
http://mmegias.webs2.uvigo.es/mmegias/inicio.html
y
ha sido creado con el programa Scribus
(http://www.scribus.net/)

Todo el contenido de este documento se distribuye bajo la licencia Creative

Commons del tipo BY-NC-SA (Esta licencia permite modificar, ampliar,
distribuir y usar sin restriccin siempre que no se use para fines comerciales,
que el resultado tenga la misma licencia y que se nombre a los autores).
NDICE

Introduccin ................................. 4
El proceso hisolgico .................... 5
Fjiacin ......................................... 7
Mtodos de fijacin ...................... 8
Tipos de fijadores ......................... 10

Introduccin
En estas pginas dedicadas a las tcnicas
histolgicas vamos a describir los procesos
experimentales necesarios para obtener secciones
teidas y listas para observar al microscopio
partiendo de tejidos vivos extrados de un animal
o de una planta. Por tanto, dedicaremos espacios
a la obtencin, fijacin, inclusin, corte y tincin
de los tejidos. Todos estos apartados seguirn el
mismo esquema que los captulos dedicados a los
tejidos o a la clula, partir de un esquema bsico
y ampliar la informacin sucesivamente en
pginas adicionales. No dedicaremos demasiado
espacio a los instrumentos, desde el punto de
vista operativo, pero s a la conveniencia de su
uso y a sus capacidades.
La mayora de las tcnicas histolgicas van
encaminadas a preparar el tejido para su
observacin con el microscopio, bien sea ste
ptico o electrnico. Ello es debido a que la
estructura de los tejidos est basada en la
organizacin de los tipos de clulas que los
componen y, salvo contadas ocasiones, las
Atlas de histologa vegetal y animal. Universidad de Vigo.
Tcnicas histolgicas. Introduccin. 4
caractersticas morfolgicas de las clulas slo se
pueden observar con estos aparatos.
Existen procedimientos rpidos y simples para
la observacin de tejidos y clulas vivas que
reciben el nombre de vitales. Por ejemplo, la
observacin del flujo sanguneo en capilares del
sistema circulatorio. Otra forma de observar
clulas o tejidos vivos es mediante las tcnicas
histolgicas supravitales, en los que las clulas y
los tejidos se mantienen o se hacen crecer fuera
del organismo, como es el caso de los cultivos de
clulas y de tejidos.
Las tcnicas histolgicas postvitales son
aquellas en las que las clulas mueren durante el
proceso, pero las caractersticas morfolgicas y
moleculares que posean en estado vivo se
conservan mejor o peor dependiendo del tipo de
tcnica. Estas pginas estarn dedicadas a este
tipo de tcnicas, puesto que son las ms
comnmente usadas en los laboratorios de
histologa.

El proceso histolgico
Denominamos proceso histolgico a una serie
de mtodos y tcnicas utilizados para poder
estudiar las caractersticas morfolgicas y
moleculares de los tejidos. Hay diversos caminos
para estudiar los tejidos, es decir, series de
tcnicas que se utilizarn dependiendo de qu
caracterstica deseemos observar. En el siguiente
esquema se muestran los mtodos y tcnicas
comnmente empleados para el procesamiento
de los tejidos para su observacin con los
microscopios ptico o electrnico. Sin embargo,
hay que tener en cuenta que existen muchas
variantes a estos "caminos" y su eleccin
depender del resultado final que queramos
obtener.
Esquema del proceso histolgico.
Atlas de histologa vegetal y animal. Universidad de Vigo.
Tcnicas histolgicas. Proceso histolgico. 5
El proceso histolgico comienza con la
obtencin del tejido objeto de estudio. En el caso
de los tejidos vegetales directamente se toman
muestras de los distintos rganos que componen
el cuerpo de la planta, mientras que para los
tejidos animales podemos optar por dos opciones:
coger una porcin del tejido u rgano y
procesarla o procesar primero el animal completo
y luego extraer la muestra que nos interese. En
cualquier caso las muestras son habitualmente
fijadas con unos soluciones lquidas denominadas
fijadores, las cuales se usan para mantener las
estructuras celulares y moleculares inalterables
durante el procesamiento posterior y con una
organizacin lo ms parecida posible a como se

encontraban en la muestra viva. Tambin
podemos fijar las molculas de los tejidos por
congelacin rpida. Fijar un tejido es como hacer
una fotografa de dicho tejido, su estructura se
mantendr hasta su observacin. La fijacin por
congelacin se emplea cuando la fijacin qumica
o los procesos histolgicos posteriores alteran las
caractersticas de la muestra que queremos
estudiar, por ejemplo una molcula sensible a
dichos tratamientos.
Normalmente, tras la fijacin se procede a
incluir el tejido para posteriormente obtener
secciones. Cuanto ms delgada queramos que sea
nuestra seccin ms tenemos que endurecer
nuestra muestra. Esto se consigue embebiendo el
tejido con sustancias lquidas que posteriormente
polimerizarn (resinas) o se volvern consistentes
(ceras). Tambin se puede conseguir el mismo
efecto mediante congelacin rpida. Cortes ms
gruesos de 40 Cm se pueden cortar sin necesidad
de inclusin usando el vibratomo. Los medios de
inclusin no son normalmente hidrosolubles por
lo que tendremos que sustituir el agua de los
tejidos por solventes orgnicos liposolubles y
posteriormente sustituirlos por el medio de
inclusin.
Tras la inclusin o la congelacin se procede a
cortar los tejidos, es decir, obtener secciones.
Existen diferentes aparatos de corte que permiten
conseguir secciones ultrafinas (del orden de
nanometros), semifinas (de 0.5 a 2 Cm), finas
(entre unas 3 y 10 Cm) y gruesos (mayores a 10
Cm). Habitualmente las secciones se procesan
Atlas de histologa vegetal y animal. Universidad de Vigo.
Tcnicas histolgicas. Proceso histolgico. 6
para poder observarlas y estudiarlas, aunque
ciertos tipos de microscopa, por ejemplo con
contraste de fase, permiten observar secciones de
tejidos sin procesar. Normalmente las secciones
se tien con colorantes que son hidrosolubles, por
lo que hay que eliminar el medio de inclusin
para que los colorantes pueden unirse al tejido.
Las secciones ultrafinas (observadas con el
microscopio electrnico) o semifinas (observadas
con el microscopio ptico) se pueden contrastar
con metales pesados o con colorantes,
respectivamente, sin necesidad de eliminar el
medio de inclusin.
Los tejidos procesados se observan con los
microscopios. Existen dos tipos bsicos de
microscopios: ptico y electrnico. Los primeros
ofrecen una gran versatilidad en cuanto a modos
de observar los tejidos: campo claro,
fluorescencia, contraste de fase, polarizacin o
contraste de interferencia diferencial, mientras
que los segundos permiten un gran poder de
resolucin, pudindose observar caractersticas
ultraestructurales.
Como dijimos al comienzo existen mltiples
variaciones sobre este esquema general de
procesamiento histolgico. Por ejemplo, se
pueden observar tejidos con el microscopio
electrnico de barrido sin necesidad de incluir ni
cortar, pero slo observaremos superficies. En las
siguientes pginas veremos con cierto detalle
algunas de las tcnicas ms empleadas para la
observacin de los tejidos.

Fijacin
Todos los tejidos, bien cuando se extraen de
un organismo o bien cuando el organismo en el
que estn muere, sufren dos tipos de procesos
degradativos: autolisis por accin de enzimas
intracelulares, es decir, autodigestin, y
putrefaccin por accin bacteriana. Adems, el
procesamiento histolgico posterior del tejido
para poner de manifiesto y observar
determinadas estructuras supone una metodologa
que puede degradar las estructuras tisulares. Fijar
un tejido es preservar sus caractersticas
morfolgicas y moleculares lo ms parecidas
posibles a las que posea en su estado vivo. Es
como hacer una fotografa del tejido vivo y poder
observarla, tras cierto tratamiento, con el
microscopio. As, los fijadores deben evitar la
autolisis, proteger frente a ataques bacterianos,
insolubilizar elementos solubles que se quieren
estudiar, evitar distorsiones y retracciones
tisulares, penetrar y preparar el tejido para poder
llevar a cabo tinciones especficas posteriores, si
es necesario, etctera.
No existe un fijador universal, ni un mtodo de
fijacin nico. Incluso podemos usar varios
fijadores secuencialmente segn nuestras
necesidades. La eleccin depende de las
caractersticas fijadoras que necesitemos. Por
ejemplo, si queremos estudiar actividades
enzimticas debemos usar un fijador que no nos
altere el centro activo de las enzimas en las que
estamos interesados, y quiz para ello tengamos
que sacrificar en cierta medida la morfologa
tisular. Si queremos estudiar la ultraestructura
celular debemos usar fijadores que la preserven y
que protejan a las membranas celulares durante el
procesamiento de inclusin en resinas, y quiz
esto altere su apetencia por los colorantes
generales. Si queremos teir un determinado
componente celular difcilmente teible quiz
debamos usar un fijador que lo modifique para
que sea reconocido ms fcilmente por los
colorantes. En cualquier caso hay caractersticas
de los fijadores que tenemos que tener en cuenta
antes de su uso:
Velocidad de penetracin. El proceso de
fijacin ha de ser rpido y la velocidad de
difusin de la sustancia fijadora en los tejidos es
Atlas de histologa vegetal y animal. Universidad de Vigo.
Tcnicas histolgicas. Fijacin 7
un factor determinante. Este parmetro
condiciona el tamao de la pieza que queramos
fijar, ms pequea cuanto menor sea la velocidad
de difusin del fijador empleado, y tambin
determina el tiempo de fijacin, mayor cuanto
menor tiempo de difusin.
Velocidad de fijacin. Esta caracterstica no
dependen de la velocidad de difusin sino de las
propiedades qumicas del fijador y condiciona el
tiempo que debe permanecer el tejido en
contacto con el fijador.
Endurecimiento. Los fijadores generalmente
endurecen los tejidos, lo cual depende del tipo de
fijador y del tiempo que el tejido haya estado
expuesto a l.
smosis y pH. Es indispensable evitar cambios
de volumen en la clulas producidos por una
osmolaridad del fijador diferente a la del tejido.
Por tanto, hay que equilibrar la osmolaridad de
las soluciones fijadoras y la de los tejidos a fijar.
No es necesario aadir sustancias complejas. Por
ejemplo, para los tejidos de animales terrestres
basta con aadir 0.9 % de cloruro sdico. Son
sales que no afectan a la capacidad del fijador.
Normalmente se suelen usar soluciones
tamponadoras a un pH semejante al del tejido e
isoosmticas con dicho tejido.
Efecto mordiente. Algunas estructuras tisulares
son difciles de teir puesto que tienen poca
apetencia por los colorantes. Esta apetencia
puede ser incrementada con un tratamiento
previo. Algunos fijadores, adems de fijar,
modifican qumicamente a ciertas estructuras
celulares para que posteriormente puedan unirse
a ellas los colorantes. Este este tipo de
modificacin qumica se le denomina efecto
mordiente.
Artefactos. Los procesos de fijacin pueden
acarrear alteraciones tisulares como variaciones
morfolgicas, cristalizacin de compuestos,
desplazamiento de sustancias, etctera. Estos
cambios pueden producirse por las caractersticas
del fijador o por un mal uso de ste. En cualquier
caso deben tenerse en cuenta para no describir
como caractersticas tisulares lo que es un
artefacto introducido durante la fijacin.

Mtodos de fijacin
Existen diferentes formas de fijar los tejidos
dependiendo del tipo de fijador, de la estructura a
fijar y de lo queramos observar. Los mtodos de
fijacin se pueden clasificar en dos tipos: fsicos
y qumicos.
Los fijadores fsicos se basan o bien en una
congelacin muy rpida del tejido o bien en la
aplicacin de calor elevado. Se utilizan cuando
cuando los fijadores qumicos alteran la
estructuras que queremos observar, cuando
necesitamos una fijacin muy rpida, o cuando el
tipo de tejio y la tnica que usaremos lo requiera.
La congelacin rpida es un buen mtodo de
preservacin de las caratersticas moleculares y es
conveniente que sea rpida puesto que as se
impide la formacin de grandes cristales de hielo
que nos destrozaran la estructura del tejido.
Existen variantes de esta tcnica como son la
criodesecacin o liofilizacin y la criosustitucin.
La criodesecacin parte de tejido previamente
congelado al que posteriormente se le sublima el
hielo, es decir, el agua pasa de estado slido a
gaseoso sin pasar por estado lquido. Al eliminar
el agua se impide que se den reacciones
qumicas, por lo que, adems de la fijacin, este
mtodo preserva el tejido en el tiempo. La
criosustitucin tambin parte de tejido congelado
pero en este caso se produce una sustitucin lenta
del hielo por una solucin fijadora. Con ello se
posibilita una fijacin qumica sobre un material
que no ha sufrido deterioro puesto que est
congelado. Los mtodos de fijacin por calor no
son frecuentemente usados, excepto para el
estudio microorganismos.
Los mtodos qumicos utilizan soluciones
acuosas compuestas por molculas fijadoras que
establecen puentes entre las molculas del tejido,
mantenindolas en sus lugares originales e
impidiendo su degradacin. Hay dos mtodos
bsicos de fijacin con fijadores lquidos:
inmersin y perfusin. En cualquier caso el
fijador debe llegar a todas las partes el tejido lo
ms rpidamente posible.
Inmersin. En el mtodo de inmersin las
piezas de tejido se sumergen en la solucin
Atlas de histologa vegetal y animal. Universidad de Vigo.
Tcnicas histolgicas. Mtodos de fijacin 8
fijadora. Hay que tener en cuenta algunas
precauciones.
1) Las piezas de tejido no deberan superar los
0.5 cm de espesor para que el fijador alcance el
interior de la pieza antes de que sta comience a
deteriorarse. Esto depende de la velocidad de
penetracin del fijador y de las caractersticas del
tejido. Por ejemplo, si tiene cavidades por donde
penetre la solucin fijadora el volumen podra ser
mayor.
2) El volumen recomendado de fijador es 20
veces superior al volumen de la pieza.
3) La osmolaridad del tejido y de la solucin
fijadora deben estar equilibradas.
4) El pH del fijador debe ser prximo al
fisiolgico.
5) El tiempo de fijacin depende de cada tipo
de fijador. Una agitacin suave durante la fijacin
ayuda a la penetracin del fijador y disminuye el
tiempo.
Fijacin por inmersin
Perfusin. Por este procedimiento la solucin
fijadora se introduce a travs del sistema
circulatorio por el cual accede a todas las clulas
del tejido gracias a la red de capilares. Mediante
este mtodo se puede fijar un animal completo
introduciendo la solucin fijadora a travs del
ventrculo izquierdo del corazn. El fijador
llegar a todas las clulas irriegadas por la sangre
bombeada por dicho ventrculo (circuito
corporal). Si se quieren fijar los pulmones habra
que introducir el fijador por el ventrculo
 Tcnicas histolgicas. Mtodos de fijacin 9

derecho. Tambin podemos fijar un nico

rgano en el caso de que podamos introducir
la solucin fijadora en la arteria principal que
irriga dicho rgano. La perfusin no siempre
es posible en algunos casos como en muchas
biopsias o en los tejidos vegetale.
El mtodo de fijacin por perfusin es
mucho ms efectivo que el de inmersin ya
que la solucin fijadora llega rpidamente a
escasa distancia de todas las clulas de la Fijacin por perfusin de un rgano. Mediante perfusin
estructura perfundida. Por tanto, la velocidad se consigue que la solucin fijadora llegue a todas las
de penetracin del fijador no es una clulas del rgano a travs del sistema sanguneo.
condicin limitante. Mediante una bomba peristltica se introduce la solucin
Antes de introducir el fijador en el sistema fijadora a travs de la arteria que irriga el rgano. Se
de vasos sanguneos hay que eliminar obturan todos aquellos vasos arteriales que no conducen
previamente la sangre con una solucin de al rgano.
lavado oxigenada, de otra manera su interaccin debe ser similar a la que posee la presin
con el fijador produce trombos que impediran la sangunea normal en estado vivo. La presin que
fijacin de determinadas zonas del animal o del ejercer la solucin fijadora se puede regular
rgano. Respecto a las precauciones mencionadas mediante bombas peristlticas (ver figura) o por
anteriormente en el mtodo de inmersin gravedad, es decir, variando la altura a la cual se
debemos cuidar aqu tambin la osmolaridad, el coloca la solucin fijadora respecto a la del
pH y el tiempo de fijacin. animal. Esto es importante porque una presin
muy baja prodra impedir que la solucin fijadora
Este mtodo de fijacin por perfusin requiere alcanzara todas las partes de la estructura y un
conocer la presin a la que se va a introducir la presin muy alta podra provocar roturas de los
solucin fijadora en el animal o estructura, la cual vasos sanguneos y de la propia estructura tisular.

Fijacin por perfusin de un organismo completo. Mediante este tipo de perfusin se introduce la solucin
fijadora en el sistema sanguneo. La bomba peristltica aporta la presin suficiente para permitir al fijador entrar
a travs del ventrculo izquierdo (Vi) y pasar a la aorta, desde la cual se distribuye por todo el cuerpo (excepto
por el circuito pulmonar). Tras pasar por la red capilar la solucin fijadora pasa a los vasos venosos que terminan
por verter su contenido en la aurcula derecha (Ad). A esta cavidad hay que hacerle una abertura para que la
solucin fijadora, una vez realizada su funcin, salga del circuito. Ai: aurcula izquierda Vd: ventrculo derecho.
Atlas de histologa vegetal y animal. Universidad de Vigo.
 Tcnicas histolgicas. Ftipos de fijadores. 10
Tipos de fijadores
cido actico. Su proceso de fijacin consiste
en cambiar el estado coloidal de las protenas. Se
Existen multitud de fijadores en los manuales utiliza a una concentracin que vara entre el 1 y
de tcnicas histolgicas. Aqu slo trataremos el 5 %. Es el fijador ideal para cidos nucleicos y
aquellos que consideramos de uso ms comn nucleoprotenas. Como inconvenientes cabe
para la observacin de tejidos al microscopio, es destacar la destruccin de las mitocondrias y
decir, aquellos que mejor preserven la estructura mala fijacin de membranas y citoplasma. Se
celular. Los fijadores qumicos son los ms suele usar en combinacin con otros fijadores.
frecuentemente empleados, bien compuestos por Ejemplos: BOUIN, FFA
un solo tipo de sustancia fijadora o con mezclas
de varias de ellas.
Los fijadores se pueden clasificar en dos cido actico: CH3COOH
grandes grupos segn su accin sobre el tejido:
los desnaturalizantes y los que establecen enlaces
cruzados. Los primeros, al extraer agua de los
tejidos producen desnaturalizacin de las
protenas produciendo coagulacin proteica,
mientras que los segundos establecen enlaces
qumicos entre molculas del tejido. Los fijadores
que tienen como base al alcohol son cido pcrico. La fijacin la produce porque
desnaturalizantes, tales como el Bouin o el las sales del tipo picrato coagulan las protenas de
Carnoy, mientras que el formaldehdo o el los tejidos. Se suele usar del 2 al 15 % de una
glutaraldehdo establecen enlaces. solucin saturada de cido pcrico. Preserva bien
la estructura celular, no produce retracciones
Atencin! La mayora de las sustancias cuando el tiempo de fijacin es ptimo, preserva
fijadoras son txicas por inhalacin o por bien glucgeno y lpidos. Es un buen fijador para
contacto, algunas de ellas cancergenas. Hay que tinciones generales puesto que tiene efecto
seguir las indicaciones de seguridad para su mordiente y favorece la unin de los colorantes.
manejo y utilizacin. Hay que eliminarlo completamente antes de
Fijadores simples proceder a la inclusin en ceras como la parafina
puesto que dificulta la penetracin de la parafina.
Alcohol etlico. Fija por deshidratacin y se usa Se suele usar combinado con otros fijadores.
entre el 70 y 90 %. Es un buen fijador para Ejemplos: BOUIN
preservar protenas, como enzimas, glucgeno,
pigmentos y es til para fijar las extensiones
citolgicas. Debido a que deshidrata, a la vez que
fija, se puede usar tambin como un conservante
de las muestras. Tiene algunos inconvenientes
como producir endurecimiento y la retraccin de
los tejidos. Carece de efecto mordiente.

Etanol: CH3CH2OH
cido pcrico: C6H2OH(NO2)3

Atlas de histologa vegetal y animal. Universidad de Vigo.


Formaldehdo. Acta mediante la formacin
de puentes entre las molculas tisulares. Se utiliza
a concentraciones prximas al 4 %. Es un fijador
ampliamente usado por la buena preservacin del
tejido, acta como conservante, produce poca
retraccin tisular, es un buen fijador para lpidos,
es compatible con la mayora de las tinciones
histolgicas, incluidas las de inmunocitoqumica
e hibridacin de cidos ribonucleicos.
Normalmente se usa en solucin tamponada e
isotnica. Actualmente se prepara a partir de
paraformaldehdo, sustancia slida. Ejemplos:
BOUIN, FFA , PLP.
Formaldehdo: CH2=O.
Glutaraldehdo. Forma puentes entre las
molculas de los tejidos. Se usa a una proporcin
de entre el 0,5 y el 3 %. Tiene una alta capacidad
para preservar la estructura celular, por lo que es
el fijador de referencia para observacin de
ultraestructuras celulares con el microscopio
electrnico. Pero hay que tener cuidado con su
baja penetracin tisular y puede producir
retracciones. Se usa en soluciones tamponadas
isotnicas.
Glutaraldehdo.
Atlas de histologa vegetal y animal. Universidad de Vigo.
Tcnicas histolgicas. Ftipos de fijadores. 11
Tetrxido de osmio. Forma puentes entre
molculas. Se emplea al 1 % en soluciones
tamponadas. Es buen fijador de la ultraestructura
de la clula por lo que se emplea habitualmente
para las observaciones con el microscopio
electrnico. Es un buen fijador para grasas y
membranas celulares. Por su fuerte carcter
oxidante no se usa para tinciones convencionales,
excepto para las impregnaciones argnticas como
el mtodo de Golgi.
Tetrxido de osmio. OsO4.
Mezclas fijadoras
La mayor parte de los procesos de fijacin usan
varias sustancias fijadoras, bien mezcladas en la
solucin acuosa inicial o utilizadas sucesivamente
en el tiempo. Con ello se aprovechan las ventajas
de cada una de ellas y se pueden contrarrestar sus
desventajas. Hay multitud de formas de usar los
diferentes fijadores, tanto en sus componentes
como en las proporciones de stos, dependiendo
de las necesidades posteriores, es decir, qu tipo
de tejido queremos fijar y qu queremos ver de
dicho tejido. A continuacin vamos a mencionar
algunas combinaciones usadas frecuentemente
porque tienen unas propiedades de fijacin que
las hace apropiadas para las observacin de una
gran variedad de tejidos y para el uso diversas de
tcnicas de tincin.
Lquido de Bouin. Est formado por cido
pcrico, formaldehdo y cido actico glacial. Es
una solucin muy utilizada para el procesamiento
de tejidos que se incluirn en parafina (ver
captulo de inclusin) y a cuyas secciones se le
pueden aplicar un amplio espectro de tinciones.

Es muy til para tejidos blandos y embriones, y
preserva bien el ncleo y el glucgeno. Hay que
tener cuidado con el tiempo de fijacin, que no
debe exceder de 48 h en el caso de fijaciones por
inmersin. Tras la fijacin las muestras de tejido
se pueden conservar en alcohol de 70. No est
recomendado para el rin ni para el estudio de
mitocondrias. Antes de la inclusin en parafina es
conveniente eliminar el cido pcrico mediante
lavados en alcohol de 70 porque impedir una
buena inclusin o que las tinciones no sean
adecuadas.
Carnoy. Es un buen fijador para el glucgeno,
para los hidratos de carbono simples y para las
protenas fibrosas. Es bueno para visualizar los
cidos nucleicos, aunque no la morfologa
nuclear, y para los grumos de Nissl del sistema
nervioso. Puede producir retracciones tisulares.
Est formado por etanol absoluto 60 %,
cloroformo 30 % y cido actico glacial 10 %.
Mezclas con formaldehdo. El formaldehdo es
quiz el fijador ms usado hoy en da, tanto para
tcnicas histolgicas rutinarias como para otras
como la inmunocitoqumica o la hibridacin de
cidos nucleicos. Lo ms frecuente es utilizarlo
en solucin al 4 % junto con otros fijadores. Se
suele disolver en soluciones tamponadas que
tienen una osmolaridad similar a la del tejido que
Atlas de histologa vegetal y animal. Universidad de Vigo.
Tcnicas histolgicas. Ftipos de fijadores. 12
se pretende fijar. Para fijaciones de tejidos
destinados a microscopa electrnica se suelen
utilizar soluciones fijadoras que contienen
formaldehdo y glutaraldehdo. La funcin del
formaldehdo es iniciar una fijacin rpida, por
su mayo capacidad de penetracin, mientras que
el glutaraldehdo realizar una fijacin ms
poderosa, pero ms lenta que no afectar a la
estructura tisular puesto que el formaldehdo ya
ha realizado una fijacin previa.
Glutaraldehdo-tetrxido de osmio. Los
fijadores en combinacin no tienen
necesariamente que usarse al mismo tiempo. Es
habitual que los tejidos destinados a microscopa
electrnica sean inicialmente fijados en
glutaraldehdo (1 al 3 %) y paraformaldehdo (2
al 4 %), para posteriormente ser postfijados en
tetrxido de osmio al 1 % en solucin
tamponada. Este ltimo es un buen preservador
de la ultraestructura celular, sobre todo
membranas, en cooperacin con los aldhedos.
Esto es importante porque el proceso para
microscopa electrnica supone incubar el tejido
en solventes orgnicos y polimerizacin de
resinas a 60 C, durante las cuales el tejido debe
ser preservado.