Fluorescencia

UV

Nombres: Romina Saavedra Nez

Cristian Herrera Valds
Juan Neipan Paian
Helmut Albrecht Villarroel

Asignatura: Laboratorio de Higiene Industrial

Profesor: Juan Vega Briceo
Fecha: 7 de abril de 2017
ndice

Introduccin.........................................................................................................................3
Fluorescencia.......................................................................................................................4
Aplicaciones de los mtodos de fluorescencia....................................................................4
Equipo de medidas de Fluorescencia UV...........................................................................5
Especificaciones de los componentes.................................................................................6
a) Tipos de Fuentes de excitacin:................................................................................6
b) Selector de longitud de onda.....................................................................................8
c) Filtros.........................................................................................................................8
d) Recipientes para la muestra....................................................................................10
e) Detectores................................................................................................................11
f) Procesador de seal y sistema de lectura...............................................................11
g) Calibracin...............................................................................................................12
Conclusin.........................................................................................................................13
Bibliografa.........................................................................................................................14
Introduccin

Ciertos materiales son capaces de transformar la luz UV en una radiacin visible de

onda ms larga, produciendo con esto una fluorescencia visible inducida por efecto de la
radiacin UV. Cuando la radiacin es absorbida por el material, los electrones son
puestos de forma temporal en un mayor estado de energa, luego esa energa es
liberada volviendo los electrones a su estado normal. Es esta energa radiante liberada,
o fluorescencia, la que se logra apreciar en el espectro visible dependiendo del material
irradiado.

A partir del descubrimiento de la espectroscopia, se ha avanzado en infinidad de

aplicaciones para las radiaciones en sus diferentes longitudes de onda; medicina,
industria, seguridad, etc. Para el caso de la salud, los sistemas de deteccin de algunos
sntomas o enfermedades han requerido de sofisticados sistemas de deteccin o, en su
defecto, de pruebas y ensayos clnicos largos y, muchas veces, costosos. La
espectroscopia es el uso de mtodos pticos que se basan en la interaccin de la luz
con la materia. El trmino espectroscopia significa la observacin y el estudio del
espectro, o registro que se tiene de una especie tal como una molcula, un ion o un
tomo, cuando estas especies son excitadas por alguna fuente de energa que sea
apropiada para el caso. Se relaciona con las unidades de refractometra, fluorescencia,
fosforescencia, turbidimetra y nefelometra polarimtrica en que son mtodos pticos
que se basan en la interaccin de la energa radiante (ondas electromagnticas) con la
materia. Esta interaccin es tan especfica que permite identificar qu tipo de muestra
interacta y qu cantidad de materia interactu; es decir, los mtodos espectroscpicos
permiten realizar anlisis cualitativos y cuantitativos de muchsimas muestras tanto
orgnicas como inorgnicas y es el fundamento ms utilizado para los laboratorios del
rea de la salud.
Fluorescencia

La fluorescencia es un proceso de fotoluminiscencia en el que los tomos y molculas

se excitan con la absorcin de la radiacin electromagntica. Despus la especie
excitada se relaja al estado fundamental y emite su exceso de energa como fotones. La
caracterstica ms atractiva de la fluorescencia molecular es su sensibilidad inherente,
habitualmente de uno a tres rdenes de magnitud mayor que con la espectroscopia de
absorcin. De hecho, con este mtodo se ha detectado una sola molcula de especies
seleccionadas y en condiciones controladas. Otra ventaja de los mtodos de
fluorescencia es su amplio intervalo de concentracin lineal, significativamente mayor
que en la espectroscopia de absorcin. Sin embargo, los mtodos de fluorescencia
tienen menos aplicaciones que los mtodos de absorcin, dado el nmero relativamente
limitado de sistemas qumicos que presentan fluorescencia apreciable. Adems, est
ltima se ve sujeta a muchos ms efectos de interferencia ambiental que los mtodos de
absorcin. Aqu, se consideran algunos de los aspectos ms importantes de los mtodos
de fluorescencia molecular.

Aplicaciones de los mtodos de fluorescencia

La espectroscopia de fluorescencia no se considera una herramienta de anlisis

cualitativo o estructural importante, ya que es frecuente que molculas con pequeas
diferencias estructurales tengan espectros fluorescentes similares. Adems, las bandas
de fluorescencia en solucin son relativamente amplias a la temperatura ambiental. Sin
embargo, la fluorescencia ha resultado valiosa en la identificacin de derrames
petroleros. La fuente de los hidrocarburos vertidos se puede conocer comparando el
espectro de emisin de fluorescencia de la muestra derramada con el de la presunta
fuente. La estructura de vibracin de los hidrocarburos policclicos del petrleo posibilita
tal identificacin.
Los mtodos de fluorescencia se utilizan para el estudio de los equilibrios qumicos y de
su cintica, al igual que la espectrofotometra de absorcin, siendo posible la evaluacin
de reacciones qumicas en concentraciones ms bajas, dada la mayor sensibilidad de
los mtodos de fluorescencia. En muchos casos, en los que por lo general no es viable
el estudio con la emisin de fluorescencia, pueden enlazarse sondas o marcadores
fluorescentes de manera covalente en posiciones especficas de las molculas, como las
protenas, lo que hace que se puedan detectar por fluorescencia. Estos marcadores
pueden emplearse para obtener informacin relativa a los procesos de transferencia de
energa, polaridad de la protena y distancias entre posiciones reactivas

Equipo de medidas de Fluorescencia UV

Configuracin bsica

Imagen N 1. Configuracin de los componentes para la medicin de Fluorescencia uv.

Componentes:
1. Fuente
2. Selector de longitud de onda
3. Muestra
4. Detector
5. Procesador de seal y sistema de lectura
Especificaciones de los componentes

a) Tipos de Fuentes de excitacin:

Es la luz que ilumina la muestra qumica, para que pueda cumplir con la funcin, debe
cumplir con ciertas condiciones: estabilidad, direccionalidad y distribucin de la energa
espectral contina y larga vida.

FUENTES USADAS EN ESPECTROSCOPA

Regin de
TIPO DE
FUENTE longitud de
ESPECTROSCOPIA
onda (nm)
Fluorescencia molecular
Lmpara de Xenn 250-600
y Raman
Lmpara de
160-380 Absorcin molecular (UV)
CONTINUA Hidrogeno/Deuterio
S Absorcin molecular
Lmpara de Wolframio 350-2200
(Visible/IR cercano)
Lmpara de Absorcin molecular
240-2500
Wolframio/Halgeno (UV/Visible/IR cercano)
Lmpara de Ctodo Absorcin y fluorescencia
UV-Visible
hueco atmica
Lmpara de descarga Absorcin y fluorescencia
UV-Visible
sin electrodos atmica
Absorcin atmica,
DE LINEAS Lmpara de vapor
UV-Visible Fluorescencia molecular
metlico
y Raman
Absorcin molecular ,
Lmpara LASER UV-Visible-IR Fluorescencia molecular
y Raman

Fuente: Mara Soledad Pat. (1997). Fundamentos de la Qumica analtica. BARCELONA: REVERTE S.A.
Lmpara de Xenn
Estas lmparas producen una radiacin intensa como consecuencia del paso de
corriente a travs de una atmsfera de xenn. El espectro es continuo en un intervalo
comprendido entre aproximadamente 200 y 1000 nm, con el mximo de intensidad a
aproximadamente 500nm. En algunos instrumentos, la lmpara funciona de forma
intermitente mediante descargas regulares que proceden de un condensador; se
obtienen altas intensidades.

Imagen N 2, Lmpara de xenn.

 1

2 5
5
3
6
6
4
7

Partes:
1. Electrodo
2. Arco voltaje
3. Ampolla de vidrio con carga de gas
4. Presin en la cmara aprox.100 bares
5. Reactancia
6. Servomotor
7. Conector

b) Selector de longitud de onda

Los selectores de ondas se clasificarn en filtros y monocremadores para aislar banda

estrecha. Estos selectores de longitud de onda, recogen las longitudes de excitacin y
las de emisin. Estos miden la radiacin emitida por la fuente seleccionada que incide en
la muestra. En ngulo recto para as evitar la dispersin.
 c) Filtros

La finalidad de los filtros es la de absorber la radiacin de la fuente excepto una banda,

que se caracteriza en la longitud de banda mxima y su ancho efectivo se reduzca hasta
la mitad.

Tipos de filtro

De absorcin: Son los que absorben ciertas regiones del espectro limitando la radiacin
produciendo anchos de banda entre 30 a 250 mm.

Imagen N3, filtros de absorcin.

De interferencia: estos interfieren pticamente para producir banda estrecha.

Imagen N4, filtros de interferencia o tambin llamado fabry-perot.

Monocromadores

Son los que varan la longitud de onda lineal de la radiacin a un intervalo ms amplio.
 Imagen N5, monocromador.

Imagen N6, elementos pticos de un monocromador.

Partes pticas
1. Rendija de entrada
2. Lente de colimacin
3. Prisma
4. Lente de enfoque
5. Rendija de salida

d) Recipientes para la muestra

En estos recipientes se coloca la muestra los que tienen que ser de un material
transparente para el paso de la radiacin que se interese analizar. Estos estn
constituidos de diversos materiales que se enlistan a continuacin:
 Plstico o vidrio (para la regin Visible).
Slice fundida (cuarzo) (para la regin Visible y UV por debajo de 350 nm e IR
hasta 3000 nm).
Vidrio de silicato para medidas entre 375 y 2000 nm (V e IR).
NaCl para la regin del IR.

Imagen N7. Recipientes para muestra

e) Detectores

Los detectores transforman una propiedad fsica en una seal de medida cuantificable,
en que la seal elctrica se amplifica, manipula y finalmente se transforma en nmeros
los que representa la magnitud de la seal.
Tipos de detectores:
detectores para espectroscopia
tipo regin de
onda
de fototubos 150-1000
fotones
tubos 150-1000
fotomultiplicadores
fotodiodos de silicio 350-11000
fotoconductores 750-3000
clulas fotovoltaicas 370-780
trmico termopares 600-20000
s
bolmetros 600-20000
celdas neumaticas 600-40000
celdas piroelctricas 1000-20000

f) Procesador de seal y sistema de lectura

Es un dispositivo que procesa la seal elctrica desde el detector o traductor, cambia la

fase de la seal para filtrarla para eliminar componentes no deseados. En que el
procesador de seales ejecuta la operacin matemtica de la seal en derivaciones,
integracin o conversin a logaritmo, existen diferentes tipos como:

g) Calibracin

Debido a las variaciones de la intensidad de la fuente, la sensibilidad del transductor y

otras variables instrumentales, es imposible obtener exactamente las mismas lecturas
con un uormetro o con un espectrofotmetro para una solucin o un conjunto de
soluciones de da en da. Por esta razn, es una prctica habitual calibrar el instrumento
y ajustarlo a un nivel de sensibilidad reproducible. La calibracin se efecta casi siempre
con una solucin patrn de un uorforo estable. El reactivo ms comn para este
cometido es una disolucin patrn de sulfato de quinina cuya concentracin sea casi 105
M. Por lo general se excita con una radiacin de 350 nm y emite radiacin a 450 nm. Se
ha descrito el uso de otros compuestos para otras regiones de longitudes de onda.

Conclusin

El mtodo de anlisis, si bien es cierto es una excelente herramienta para el estudio de

equilibrios qumicos y de su cintica para que entre otros usos sirve para el desarrollo
de programas de vigilancias. Al momento de utilizar la tcnica a veces se hace difcil la
interpretacin ya que se trabaja con analitos complejos en algunos casos que presentan
residuos y distintos elementos que van a tener patrones de fluorescencia distinta.
Bibliografa

D. A. Skoog, F. J. Holler, S. R. Crouch, Principios de anlisis instrumental, 6ta edicin,

Cengage
Learning, Mxico, 2008.

Fundamentos de Qumica Analtica, Skoog-West- Hooler- Crouch, 8va Edicin

Mara Soledad Pat. (1997). Fundamentos de la Qumica analtica. BARCELONA:
REVERTE S.A.