UNIVERSIDAD INDUSTRIAL DE SANTANDER

ESCUELA DE MICROBIOLOGA

PROGRAMA DE MICROBIOLOGIA Y
BIOANALISIS

Gua de laboratorio N 6 Objetivos:

1 PARTE: Recuento de Esporas
de Clostridium Sulfito reductores
Siembra en Profundidad utilizando
Tubos de ensayo
2da PARTE: Lectura y aplicacin
de Normas de Recuento.
-Conocer la metodologa de recuento del indicador
ms importante de bacterias anoxignicas formadoras
de esporas.
-Identificar Clostridium dentro de las bacterias sulfito
reductoras presentes en muestras de alimentos
-.Verificar la ausencia de esporas termorresistentes en
alimentos tratados termicamente..

INTRODUCCION
Clostridium se define como un grupo de microorganismos muy heterogneo, en el que la
caracterstica de patogenicidad por va alimentaria est unida a su capacidad para sintetizar
protenas biolgicamente activas.
Los microorganismos del gnero Clostridium definen un amplio grupo de bacterias
esporuladas que pueden encontrarse en todo tipo de alimentos, incluso en cantidades
considerables. Por definicin pueden tolerar durante prolongados periodos de tiempo
condiciones medioambientales adversas. Al ser organismos anoxignicos, mantienen su
capacidad para multiplicarse en alimentos a los que se les ha modificado su atmsfera
gaseosa con una total o parcial sustitucin del oxgeno.
El principal riesgo en la actualidad se centra en la elaboracin de conservas caseras. Ello
es debido a que Clostridium, responsable de desencadenar la enfermedad, es resistente a
los tratamientos habitualmente insuficientes de esterilizacin o conservacin empleados en
este tipo de productos. En el mbito domstico donde el control es inferior al industrial,
pueden sobrevivir estos microorganismos con el consiguiente riesgo que ello implica. No
obstante, se ha sealado riesgo en algunos productos alimenticios salados con
concentraciones de sal inferiores al 10%. En consecuencia las salazones de pescado. Y
sobre todo las semiconservas de anchoas en aceite ,pueden ser un producto de riesgo si
bien no se ha descrito ningn caso asociado al consumo de dichas semiconservas con
concentraciones de sal entre 12 y 14%.
Para disminuir el riesgo habra que asegurar una concentracin de sal superior al 10% y
mantener el producto refrigerado. Las medidas ms eficaces son la refrigeracin y los
recuentos inferiores a 100 ufc/g. La concentracin de sal es difcil de asegurar,ya que se
tuiende a rebajar las concentraciones para conseguir un mayor grado de aceptacin en un
consumidor que, para cuidar su salud, muestra preferencia por alimentos con bajos
contenidos de sal. .

METODOLOGIA

PRINCIPIO: Este anlisis es considerado como el recuento indicador ms importante de

las bacterias anoxignicas esporoformadoras.
Varias especies del gnero Clostridium tienen la propiedad de reducir el in sulfato a
sulfuro, que en presencia de citrato frrico o de otra sal de metales pesados se manifesta
dando origen a colonias de color negro.

Aplicacin :Alimentos crudos y tratados trmicamente.

PROCEDIMIENTO DE ENSAYO :

a. Marcar todo el material de vidrio con el nombre de la muestra, el anlisis y la dilucin

e informacin adicional si es necesario.
b. Homogenizar la muestra.
c. Tomar 10ml de la muestra lquida o 10 gramos de la muestra slida homogeneizada
y agregarlos al Erlenmeyer que contiene 90ml de agua peptonada al 0.1% estril
d. (Dilucin 10-1 ).
e. Agitar vigorosamente.
f. Transferir 1mL de la dilucin anterior a un tubo que contenga 9 ml de agua
peptonada al 0.1% estril y mezclar en vortex, continuar las diluciones que se
requieran se sugiere hasta 10-4
g. Tomar 1mL de cada una de las diluciones en tubos estriles.
h. Calentar los tubos con cada una de las diluciones a 800C por 10 minutos. Enfriar
rpidamente en bao de hielo.
i. Adicionar 10 a 12 mL de agar SPS fundido a una temperatura entre 40-450
j. Dejar solidificar
k. Aadir una segunda capa de medio. Dejar solidificar
l. Incubar a 35 + 20C por 72 horas en cmara de anaerobiosis
m. Realizar controles adicionando medio a un tubo estril.

LECTURAS:

Observar diariamente los tubos debido a la produccin de color negro que puede invadir
el tubo haciendo difcil la lectura y por consiguiente el recuento.
Realizar la lectura con base en los tubos que presenten entre 5 y 50 colonias de color
negro.
Calcular el nmero total de UFC teniendo en cuenta el factor de dilucin.

Cuestionario

1. Qu significado tiene un recuento alto de Esporas de Clostridium sulfito reductores

2. Cal es el medio utilizado para realizar la bsqueda de Esporas de Clostridium sulfito
reductores. Porque se utiliza este medio?
3. Cal es la finalidad de llevar a calentamiento las diluciones antes de aadir el medio de
cultivo correspondiente?

Bibliografa
INVIMA, MINISTERIO DE SALUD Manual de tcnicas para control de calidad
microbiolgico de alimentos para consumo humano. Divisin Laboratorio de Alimentos y
Bebidas Alcohlicas. Bogot 1998.
Rojas, A. (2003). Guas para el laboratorio de microbiologa de alimentos. Universidad de
Pamplona.
Vanegas, C., Rojas, J. Y Molina, J. (2004). Guas para el laboratorio de microbiologa de
alimentos. Universidad de los Andes.
www.who.int/entity/water_sanitation_health/dwq/iwachap13.pdf