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REAO DE PRECIPITAO
Campo Grande - MS
2017
1. INTRODUO
Durante a aula, para realizar todas as solues, foi necessrio a utilizao de alguns
reagentes e algumas protenas, tais como:
Clara de ovo;
Leite;
cido sulfossaliclico;
Acetato de chumbo;
gua destilada;
Cloreto de sdio;
Sulfato de amnio;
As reaes, com o intuito de analisar a ocorrncia de precipitaes, foram realizadas
da seguinte forma:
4. DISCUSSO E RESULTADOS
Como j exposto anteriormente, o objetivo deste trabalho foi realizar a precipitao de
protenas com quatro mtodos qualitativos diferentes. Houve uma reao diferente em cada,
em vista da tcnica utilizada. Assim, foram observados diferentes resultados.
Houve tubos que a reao se resultou em uma coagulao e outras em floculao. E
esse resultado se propagou em mais de um mtodo, entretanto, foram utilizados reagentes
diferentes em cada caso.
A primeira tcnica utilizada foi a precipitao pelo calor, que tem por objetivo
verificar o efeito da desnaturao na estrutura tridimensional da protena. Para realizar essa
tcnica foi utilizada uma quantidade de 2mL de clara de ovo, a qual composta de protenas.
Ao ser aquecida durante aproximadamente 2 minutos at que cozinhasse, ocorreu a
aglutinao e a precipitao da albumina, que a protena presente em maior quantidade na
clara do ovo, por isso que ela se torna branca, como ilustra a Figura 1. Segundo o livro
Princpios de Bioqumica de Lehninger, uma grande parte das protenas podem ser
desnaturadas pelo calor, que interferem nas ligaes fracas. Ao aumentar a temperatura da
protena, ocorre uma grande mudana em sua estrutura e, consequentemente na funo. No
experimento, quando a clara do ovo foi aquecida, houve uma desnaturao contribuindo para
a ocorrncia de uma precipitao da protena.
Fonte - Autores
A segunda e terceira tcnica tem fundamentos similares, pois em ambos os
experimentos houve o resultado por conta das diferenas de cargas das protenas e dos
reagentes utilizados nas reaes. Os experimentos esto ilustrados nas Figura 2 e Figura 3,
respectivamente.
Na segunda tcnica, o experimento foi de precipitao por reagente para alcalides.
Para a realizao foram utilizadas duas protenas diferentes, a protena da clara do ovo e a
protena presente no leite, o reagente utilizado foi o cido sulfossaliclico.
Foi acrescido esta soluo o cido, que possui pH menor que o ponto isoeltrico da
protena, fazendo com que a carga lquida positiva dessa protena tenha interao com a carga
negativa gerada pela ionizao do cido. Pela interao dos nions do cido com os ctions
presentes no lquido das protenas, ocorre a precipitao, pois a desnaturam, conforme dito
por Donald Voet no livro de Bioqumica (2013, p. 134).
Fonte - Autores
A terceira tcnica utilizada, foi de precipitao por sais de metais pesados. O reagente
foi o acetato de chumbo, que um sal orgnico. Na reao, a precipitao das protenas
ocorreu, desta vez, por conta da interao dos ctions, formados atravs da ionizao do
metal pesado, com as cargas negativas presentes nas cadeias laterais dos aminocidos que
formam as protenas utilizadas. A adio dos ctions do metal pesado fizeram com que a
carga lquida da protena passasse a ser negativa, devido ao fato do pH do sal estar acima do
pI (ponto isoeltrico) da protena. Logo, houve a atrao dos ctions do sal com os nions do
lquido das protenas, conforme dito por Donald Voet no livro de Bioqumica.
Fonte - Autores
A quarta e ltima tcnica, foi realizada por reaes de precipitao sem desnaturao.
Essa reao foi dividida em duas partes. A primeira parte foi denominada como solubilizao
salting-in, que segundo o livro Bioqumica de Donald Voet, isso ocorreria quando houvesse o
aumento de sal na protena, sendo assim quanto mais sal possuir na soluo, mais solvel a
protena. Isso ocorre porque os ons de carga oposta do sal adicionado soluo protegem as
cargas da molcula de protena de maneira mais eficaz.
Nessa etapa foi utilizada clara de ovo e, aps adicion-la em um tubo de ensaio,
houve uma diluio com gua destilada (H2O), ocorrendo uma precipitao na parte inferior
do tubo. Deu-se isto pois, a protena insolvel e quando a gua foi adicionada formou um
precipitado, devido a interao protena-gua ser pequena. Aps ter sido observada a
formao do precipitado, foi acrescido cloreto de sdio (NaCl), momento em que o
precipitado formado anteriormente se dissolveu, pois a interao protena-gua aumentou, em
vista do NaCl ser um sal que possui uma grande solubilizao com a gua.
A segunda etapa, que foi denominada por precipitao salting-out. Ao contrrio do
salting-in, segundo o livro de Bioqumica de Donald Voet, o salting-out o efeito resultante,
principalmente, da competio entre os ons de sal com outros solutos pelas molculas de
dissoluo. Em grandes quantidades de sal, a concentrao tamanha que a quantidade
solvente torna-se insuficiente para dissolver outros solutos. Na termodinmica, isto dito
como a diminuio da atividade do solvente, sendo assim, as interaes soluto-soluto
possuem maior fora sobre as interaes soluto-solvente, fazendo com o que o soluto
precipite.
Aps concluir a primeira parte, foi utilizada a mesma reao para o segundo
experimento. Foram pipetados 2mL da reao anterior em um segundo tubo de ensaio. Feito
isso, foi acrescido sulfato de amnio ((NH)SO), causando uma nova precipitao, pois a
saturao deste sal aumentou a interao protena-protena, j que a quantidade de gua
anteriormente adicionada no foi suficiente para dissolver essa soluo. Aps a ltima
precipitao, acrescentou-se mais gua, fazendo com que a interao protena-gua
aumentasse e dissolvesse o precipitado novamente. Podem ser observados os resultados na
Figura 2.
Figura 4 - Salting in e Salting out
Fonte - Autores
5. REFERNCIAS
VIEIRA, C. E.; GAZZINELLI, G.; GUIA, M.M. Bioqumica Celular e Biologia Molecular.
Ed. Atheneu. Belo Horizonte, 1996.
VOET, D.; VOET J.G. Bioqumica. 4. Ed. Porto Alegre: Artmed, 2013.
NELSON, D.L; COX, M.M. Princpios de Bioqumica de Lehninger, 6. Ed. Porto Alegre:
Artmed, 2014.