Sei sulla pagina 1di 63

Universidad Nacional

FEDERICO VILLARREAL

LABORATORIO DE BIOQUIMICA I

Lima, 2013
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

CONTENIDO

ITEM LABORATORIOS Pgina

01 Reconocimiento del Laboratorio de Bioqumica


02 Preparacin de soluciones cidos y bases, medicin de Ph. 06

03 Propiedades fsico qumicas del agua 13

04 Preparacin de soluciones isotnicas, hipotnicas e hipertnicas. 16

05 Reconocimiento de protenas
06 Extraccin de la casena y determinacin del punto isoelctrico
07 Reconocimiento de la protena en la clara de huevo

08 Reconocimiento de carbohidratos

09 Reconocimiento e hidrlisis del almidn

10 Reconocimiento de lpidos

11 Extraccin de ADN

12 Reconocimiento del ARN en el huevo

13 Verificacin de vitaminas en algunos alimentos.

14 Rutas metablicas

15 Fermentacin anaerbica

16 Fermentacin aerbica

17 Reaccin de mauller

18 Oxidacin redox

Pgina
2
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

OBJETIVO GENERAL DEL CURSO

Al trmino de las prcticas de este manual, el alumno estar capacitado para identificar las
diferentes actividades realizadas en la qumica general, as como algunos conceptos de la
qumica orgnica, como requisito al estudio de la bioqumica.

ADVERTENCIAS SOBRE EXPERIMENTOS AL ALUMNO

1. El laboratorio es un lugar donde se desarrollan prcticas elegidas por el profesor para


confirmar y reafirmar los conocimientos tericos impartidos en el saln de clase.
2. Al realizar cada prctica deben seguirse las instrucciones, observar y registrar lo que
sucede.
3. No deber cambiar los reactivos de mesa, ya que los equipos de soluciones que son
necesarios para cada uno de los anlisis sern puestos completos en la mesa de
trabajo.
4. Se asesorar y resolvern las preguntas durante el anlisis de cada grupo.
5. Es importante sealar la necesidad de seguir todos los pasos indicados en cada
prctica para obtener los resultados correctos de cada experimento. En todas las
prcticas debern anotarse las observaciones, los resultados y las conclusiones.
6. En el caso de que el experimento no resultara como est planeado, el alumno deber
investigar, consultar y agotar todas las posibilidades para lograr un desarrollo correcto.
Si no se lograra el objetivo de la prctica, debe preguntar al docente, l le explicara en
donde est la falla y la manera de corregirla.

MEDIDAS DE SEGURIDAD EN UN LABORATORIO.

1. No deben efectuarse experimentos no autorizados, a menos que estn supervisados


por el docente.
2. Cualquier accidente debe ser notificado de inmediato al docente o al responsable del
laboratorio
3. Uso indispensable de bata como medida de proteccin.
4. No pipete los cidos, puede llegar a ingerirlos

Pgina
3
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

5. Lea cuidadosamente la etiqueta del frasco hasta estar seguro de que es el reactivo que
necesita, no utilice reactivos que estn en frascos sin etiqueta.
6. Despus de que utilice un reactivo tenga la precaucin de cerrar buen el frasco.
7. Los tubos y varillas de vidrio y objetos calientes deben colocarse sobre tela de asbesto
y en un lugar no muy accesible de la mesa de trabajo, para evitar quemaduras as
mismo o a un compaero.
8. Los tubos de ensaye calientes, con lquido o no, deben colocarse en una gradilla de
alambre o dentro de un vaso de precipitados.
9. Cuando se calientan sustancias contenidas en un tubo de ensaye, no se debe apuntar
la boca del tubo al compaero o a s mismo, ya que pueden presentarse proyecciones
del liquido caliente
10. La dilucin de cidos concentrados debe hacerse de la siguiente manera:
Utilizar recipientes de pared delgada.
Aadir lentamente el cido al agua resbalndolo por las paredes del recipiente, al
mismo tiempo que se agita suavemente. NUNCA AADIR AGUA AL CIDO, ya que
puede formarse vapor con violencia explosiva.
Si el recipiente en el que se hace la dilucin se calentara demasiado, interrumpir de
inmediato y continuar la operacin en bao de agua o hielo.
11. No se debe probar ninguna sustancia. Si algn reactivo se ingiere por accidente, se
notificar de inmediato al docente.
12. No manejar cristalera u otros objetos con las manos desnudas, si no se tiene la certeza
de que estn fros.
13. No se debe oler directamente una sustancia, sino que sus vapores deben abanicarse
con la mano hacia la nariz.
14. No tirar o arrojar sustancias qumicas, sobre nadantes del experimento o no, al
desage. En cada prctica deber preguntar al profesor sobre los productos que
pueden arrojar al desage para evitar la contaminacin de ros y lagunas.
15. Cuando en una reaccin se desprendan gases txicos o se evaporen cido, la
operacin deber hacerse bajo una campana de extraccin.
16. Los frascos que contengan los reactivos a emplear en la prctica deben mantenerse
tapados mientras no se usen.
17. No trasladar varios objetos de vidrio al mismo tiempo.
18. No ingerir alimentos ni fumar dentro del laboratorio.
19. Se deber mantener una adecuada disciplina durante la estancia en el

Pgina
4
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

laboratorio.
20. Estar atento a las instrucciones del docente.

SUSTANCIAS QUE DEBEN USARSE CON PRECAUCIN

Todas las que se utilizan en las operaciones y reacciones en el laboratorio son


potencialmente peligrosas por los que, para evitar accidentes, debern trabajarse con
cautela y normar el comportamiento en el laboratorio por las exigencias de la
seguridad personal y del grupo que se encuentre realizando una prctica.
Nmerosas sustancias orgnicas e inorgnicas son corrosivas o se absorben fcilmente
por la piel, produciendo intoxicaciones o dermatitis, por lo que se ha de evitar su contacto
directo; si este ocurriera, deber lavarse inmediatamente con abundante agua la parte
afectada.

RECOMENDACIONES PARA EL MANEJO DE ALGUNAS SUSTANCIAS ESPECFICAS.

cido Fluorhdrico (HF):


Causa quemaduras de accin retardada en la piel, en contacto con las uas causa fuertes
dolores, y slo si se atiende a tiempo se puede evitar la destruccin de los tejidos incluso el
seo.

cido Ntrico (HNO3):


Este cido daa permanentemente los ojos en unos cuantos segundos y es sumamente
corrosivo en contacto con la piel, produciendo quemaduras, mancha las manos de amarillo
por accin sobre las protenas.

cidos Sulfrico (H2SO4), Fosfrico (H3PO4) y Clorhdrico (HCl)


Las soluciones concentradas de estos cidos lesionan rpidamente la piel y los tejidos
internos. Sus quemaduras tardan en sanar y pueden dejar cicatrices. Los accidentes ms
frecuentes se producen por salpicaduras y quemaduras al pipetearlos directamente con la
boca.

QU HACER EN CASO DE ACCIDENTE?

Pgina
5
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

En caso de accidente en el laboratorio, hay que comunicarlo inmediatamente al docente.

Salpicaduras por cidos y lcalis:


Lavarse inmediatamente y con abundante agua la parte afectada. Si la quemadura fuera en
lo ojos, despus de lavado, acudir al servicio medico.
Si la salpicadura fuera extensa, llevar al lesionado al chorro de la regadera inmediatamente
y acudir despus al servicio medico.

Quemaduras por objetos, lquidos o vapores calientes:


Aplicar pomada para quemaduras o pasta dental en la parte afectada. Es caso necesario,
proteger la piel con gasa y acudir al servicio medico.

Pgina
6
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

LABORATORIO N 01

PREPARACION DE SOLUCIONES ACIDOS Y BASES, MEDICION DE


Ph

1. OBJETIVO:

Identificar e evaluar las condiciones de disociacin y asociacin de las diferentes


soluciones utilizadas en los laboratorios.
Conocer y expresar las diferentes escalas de medicin de cidos bases en las
sustancias.
Reconocer los diferentes mtodos de medicin, del potencial hidrogeno.

2. MARCO TEORICO

EL pH se define como el logaritmo negativo de la concentracin de iones hidronio (H+)


pH = -log [H+]
+
El pH es exclusivo de soluciones acuosas, que contienen tantos iones hidronios H 3O
como iones oxidrios OH-.
El ph es una expresin de equilibrio que ha sido calculada a 25 C a base del valor de
Ki= 1x10-14 (Ki constante o producto de ionizacin del agua pura). Por lo cual el valor de
este vara por la temperatura.
Ionizacion del agua:
Es la disociacin inica de las molculas en un electrolito es una reaccin reversible.

H2O + H2O H3O+ + OH -

H2O [H+] + [OH-]

Ki= [H+] + [OH-]


H2O
La disociacin del agua pura cambia muy poco por ello es indiferente (55.5 gr. / litro).

Ki= [H+] + [OH-]

Pgina
7
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

[H+] = [H3O+] = [OH-] = 10-7 mol7lt.

pH = -log [H+] = -log [H3O+]

Potencial hidrogeno= -log [H+]

Potencial Hidroxido = -log [OH-]


pH + pOH = 14

Relacin de concentraciones H+ , pH , pOH

OH-
H+ Moles / litro pH pOH
moles / litro
100 1 10-14 0 14
10-1 0.1 10-13 1 12
10-3 0.001 10-11 3 11
10-5 0.00001 10-9 5 9
10-7 0.0000001 10-7 7 7
10-9 0.000000001 10-9 9 5
10-11 0.00000000001 10-11 11 3
10-13 0.0000000000001 10-13 13 1
10-14 0.00000000000001 10-14 14 0

Ejemplo calcular el pH de HCL

HCL H+ + CL-

1 mol de HCL se disocia formando 1 mol de iones H+ = H3O+

[H+] = 1 mol / lt.

pH = -log [H+]

pH = -log [1] = 0

pOH = 14

Ejemplo calcular el pH de NaOH

Pgina
8
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

NaOH Na+ + OH-

1 mol de NaOH se disocia formando 1 mol de iones OH-

[OH+] = 1 mol / lt.


pOH = -log [H+]
pOH = -log [1] = 0

pH = 14

De forma general

AH A+ + H-

Acido1 + Base2 Acido2 + Base1

Base 1 que resulta del Acido 1 se dice que es la base conjugada del acido
Acido2 que resulta de la base 2 es el acido conjugado a la base 2

Neutralizacin; se dice cuando se ha llegado a un punto neutral entre una acido y una
base, donde carecen de propiedades salvo lo referido a la conductividad elctrica.
Hay neutralizacin si el total de la base, reacciona estequiometricamente con un
numero igual de molculas del acido. Las soluciones de acido y base que han
reaccionado, son inica y la solucin resultante continua siendo inica De all que la
reacciones tienen mas sentido y mayor proximidad a la realidad se les expresa en
forma inica.

La reaccin de neutralizacin es el encuentro entre ambos iones, entonces la


neutralizacin acido-base la definimos como la reaccin de igual numero de moles de
iones [H+] + [OH-]

TITULACION (acidez):

Anlisis volumtrico que consiste en determinar el volumen de una solucin de


concentracin desconocido que es qumicamente equivalente a un volumen dado de

Pgina
9
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

una solucin de concentracin conocida llamada Standard primario, se adiciona la


disolucin Standard desde una bureta graduada hasta que se ha aadido la cantidad
de reactivo equivalente (punto equivalente) a la sustancia que se determina. El punto
de equivalente o punto final terico se observa con un reactivo indicador.
Al completar la reaccin entre la solucin Standard y la sustancia valorada, el indicador
cambia o vira de color o forma un precipitado. El punto en que esto ocurre se llama
punto final de la titilacin y no necesariamente coincide con el punto final terico,
aunque esta muy cercano.
La acidez de un producto natural se considera como su contenido en sustancias cidas.
Habitualmente se determina mediante tcnicas de valoracin o titulacin cido-base y
se puede expresar como la cantidad equivalente de un cido caracterstico de ese
producto natural.
ndice de acidez: Expresa el nmero de miligramos de base necesarios para
neutralizar 1 gramo de sustancia problema.

% de acidez = Gx N x meq. De acido x 100


g. muestra

G= gasto de la solucin de NaOH


N = normalidad de la solucin NaOH
Meq. Del acido= mili equivalente del acido en que se expresa la acidez (acido
predominante)
g. muestra= peso de la muestra a analizar.

INDICADORES

Son cidos orgnicos o bases orgnicas dbiles que presentan distinto color segn se
encuentren en su forma disociada o no disociada, lo cual depender del pH de la
solucin en que se encuentren, dado que el grupo disociable de estos puede ser acido
o base.

CAMBIO DE COLOR INTERVALO DE


INDICADOR
acido Base pH
Azul de timol rojo Amarillo 1.2 2.8
Azul de bromofenol amarillo Azu 3.0 4.6
Anaranjado de metilo rojo Amarillo 3.1 4.4

Pgina
10
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

CAMBIO DE COLOR INTERVALO DE


INDICADOR
acido Base pH
Verde de bromocresol amarillo Azul 3.8 5.4
Rojo de metilo rojo Amarillo 4.2 6.2
Tornasol rojo Azul 4.5 8.3
Azul de bromotimol amarillo Azul 6.0 7.6
Rojo de fenol amarillo Rojo 6.8 8.4
Fenoltaleina Incoloro Rojo 8.3 10.0
Amarillo de alizarina Amarillo violeta 10.1 12.0
1,3,5 trinitro benceno incoloro anaranjado 12.0 14.0

POTENCIOMETRIA
Es la tcnica as conveniente y confiable APRA medir el pH de las soluciones y fluidos
biolgico, este mtodo utiliza el Potencimetro (pHmetro) como instrumento para medir
el pH de las soluciones
Estas tcnicas potencio mtricas son importante ya que nos pueden proporcionar
medidas de actividad, concentracin y coeficientes de actividad de muchas soluciones.
La potenciometria esta basada en la medida de la diferencia de potencial (voltaje) entre
dos electrodos sumergidos en una solucin, bajo condiciones de equilibrio corriente
cero. Se opera en un rango de concentraciones de 10 -8 a 10-3 moles/lt. Y las medidas
son hechas en volmenes muy pequeos de muestra.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


pHmetro NaOH 0.1 N
Bureta HCL 0.1 N
Soporte universal KOH 0.1 N
Balanza analitica Fenoltaleina
Vagetas Anaranjado de metilo
Papel pHmetro Mezcla 1:1 de etanol y eter dietlico
Papel de tonasol neutralizada exactamente con KOH 0,1N
Pipeta de 10 ml. Agua destilada

Vasos precipitados 250 ml. Aceite

Vasos precipitados de 100 ml. Leche

Matraz de 100 ml vinagre

Pgina
11
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Fiolas 100 ml.

4. METODOLOGIA
El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica
as como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

5. DESCRIPCION DE LA PRACTICA
Neutralizacin de un acido:
Titular 10 ml. HCL a 0.1 N con NaOH a 0.1 N (tomar como indicador fenoltaleina),
anotar las observaciones

Neutralizacin de una base:


Titular 10 ml. NaOH a 0.1 N con HCL a 0.1 N (tomar como indicador Anaranjado de
metilo), anotar las observaciones

Medir la acidez pH de

1.- Aceite:
-Pesar con una aproximacin de 0,01 g entre 10 g de aceite en un erlenmeyer,
previamente tarado.
-Aadir 50 ml de la mezcla disolvente (alcohol-ter etlico) previamente neutralizada
con KOH 0,01 y agitar.
-Aadir 5 ml de indicador fenolftalena.
-Cargar la bureta con la disolucin de KOH 0,5 N 0,1N, segn se indique. Enrasar y
comenzar la valoracin, agitando continuamente, hasta viraje del indicador.
Anotar los ml de KOH gastados.

2.- Leche:
-Tomar 10 ml de leche exactamente medidos con una pipeta aforada y verterlos en un
matraz erlenmeyer.
-Aadir con una probeta unos 25 ml de agua destilada

Pgina
12
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

-Aadir unas gotas de la disolucin de fenolftalena.


-Valorar NaOH 0.1N segn el mismo procedimiento usado en la valoracin del aceite
hasta viraje del indicador (coloracin rosa persistente durante unos 20 segundos).

3.- Vinagre:
-Medir exactamente 2 ml de vinagre, con una pipeta aforada de 2 mL o con una
graduada de 5 ml. y verterlos en un erlenmeyer.
-Diluir con unos 25 ml de agua destilada medidos en una probeta.
-Aadir 2 o 3 gotas de la disolucin de fenolftalena.
-Valorar con NaOH 0,1N hasta el punto final indicado por el viraje del indicador.

Medir el pH de aceite, leche, vinagre.

6. RESULTADOS Y DISCUSION
Presentar lo reportes de las diferentes practicas de la siguiente manera.

TITULACION DE UN ACIDO TITULACION DE UNA BASE


Gasto de base Gasto de acido
pH de la solucin pH de la solucin

Productos pH Acidez
Aceite
Leche
Vinagre

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

El pH de todo sustancia es identificado en funcin a su estado acido o base de los


mismos, de la practica se concluye que el estado de alcalinidad o acides de toda
sustancia depender de su composicin y para su medicin exacta se requiere de un
equipo exclusivo, as mismo la acidez en un indicativo indirecto para el calculo del pH.

8. BIBLIOGRAFIA
Qumica General: Frederick R, Longo
Traductor; Orlando Guerrero; Libros McGraw-Hill

Pgina
13
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

9. CUESTIONARIO

1. Existe alguna correlacin entre el pH de los alimentos y la cantidad de


carbohidratos, lpidos, protenas en el mismo. Explicar?
2. Medir el pH del siguiente problema:
3. Se disolvieron 20 ml. De acido actico (CH3COOC) 0.5 N hasta 100 ml. Y la
solucin resultante se titulo con NaOH 0.2 N calcular el pH
a.- Antes de aadir la base
b.- Despus de aadir 8 ml. De NaOH
c.- en el punto de equivalencia despus de aadir 20ml de NaOH
d.- Cuando se aadi un total de 30 ml. De NAOH
e.- Trazar la curva correspondiente (pH-titilacin)

Pgina
14
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

LABORATORIO N 02

PROPIEDADES FISICO QUIMICAS DEL AGUA

1. OBJETIVO

Comprender la relacin existente entre las propiedades fsicas y qumicas del agua con
las fuerzas de interaccin intermolecular.
Observar el comportamiento de dos grasas distintas en diferentes medios acuosos para
identificar las propiedades fisicoqumicas del agua.

2. MARCO TEORICO

Cuando un compuesto soluble en agua es colocado en sta, desaparece rpidamente


en el lquido. Por el contrario, si no es soluble, entonces permanece donde se le coloca.
Si posee una solubilidad intermedia, entonces se puede dispersar sobre la superficie
del agua hasta que se vuelve invisiblemente delgada.
Lo que determina el comportamiento de un compuesto en una solucin son las
complejas interacciones de tipo elctrico en las superficies de las molculas.
Por ejemplo, la solubilidad de un compuesto qumico en agua depende de la magnitud
de las interacciones de unin entre sus molculas y las del agua. El grado de
solubilidad resulta de una competencia entre los enlaces que mantienen a cada
molcula unida y las oportunidades alternas de unirse con la otra sustancia.
Los compuestos orgnicos varan grandemente en su solubilidad en agua. La vida en la
Tierra no existira sin esta variabilidad. Los compuestos orgnicos insolubles tienen
grupos componentes de tomos que forman pocas uniones (ninguna en algunos casos)
con molculas de agua.

Se dice que tales grupos son hidrofbicos, al igual que la molcula que tenga tales
grupos. Este trmino es confuso ya que implica una repulsin entre la molcula (o el
grupo) y el agua. El efecto no surge de la repulsin sino del hecho de que la unin es
tan dbil que la cohesin del agua mantiene afuera al compuesto hidrofbico.

Pgina
15
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Sin embargo, muchas molculas orgnicas son parcialmente solubles en agua debido a
que por lo menos algunos de sus grupos atmicos se unen al agua. Mientras ms de
estos grupos tenga el compuesto, ser ms soluble.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


Balanza Acetona.
Piceta cido clorhdrico concentrado.
Placas petri Aceite de oliva. (cido oleico).
Esptula Agua destilada.
Manguera de hule Bicarbonato de sodio.
Matraces volumtricos Hidrxido de amonio.
Mechero Hidrxido de sodio.
Pipetas Petrolato lquido. (Mezcla de
Micropipeta hidrocarburos del petrleo).
Vasos de precipitado de 50 ml Sudn III.
Vaso de precipitado de 100 ml

4. METODOLOGIA

El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta prctica
as como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

5. DESCRIPCION DE LA PRACTICA

Antes de la prctica se debe preparar las siguientes soluciones:


Preparacin de soluciones:
1.- Prepare 100 ml de bicarbonato de sodio 20 % en agua.
2.- Prepare 25 ml de hidrxido de sodio 0.1 N en agua.
3.- Prepare 25 ml de cido clorhdrico 0.1 N en agua.
4.- Prepare 25 ml de hidroxido de amonio 0.1 N en agua.

Pgina
16
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Comportamiento del aceite mineral.


Vierta en una placa petri como se describe a continuacin:
1.- Vierta 10 ml de agua
2.- Vierta 10 ml de solucin de HCl .
3.- Vierta 10 ml de solucin de NaOH
A cada placa agregue una gota de aceite mineral con una pipeta. Observe.
Aada unas gotas ms y observe.
Mantenga las muestras en observacin durante 30 minutos.

Comportamiento del cido oleico (aceite de oliva).


1.- Vierta 10 ml de agua
2.- Vierta 10 ml de solucin de HCl .
3.- Vierta 10 ml de solucin de NaOH
4.- Vierta 10 ml de solucin de hidroxido de amonio
A cada placa agregue una gota de aceite de oliva coloreado con SUDAN III con una
pipeta Pasteur. Observe.
Aada unas gotas ms y observe.
Mantenga las muestras en observacin durante 30 minutos.

Lave y caliente al rojo la punta de un clip o pinza, posteriormente colocarlo en una


placa con agua adicionar una pequea gota de cido oleico. Observe.
Coloque una segunda gota sobre la superficie. Observe.

Nota: para la eliminacin de las sustancias, neutralizar los residuos cidos con
bicarbonato de sodio, y los residuos alcalinos con bicarbonato de sodio.

6. RESULTADOS Y DISCUSION
Revise las estructuras qumicas de los compuestos utilizados en el experimento.
Identifique las propiedades fsicas y qumicas de los grupos funcionales de los
compuestos utilizados.
Explique las variaciones en trminos de las fuerzas que actan entre el aceite de oliva,
el aceite mineral y las diferentes soluciones.

Pgina
17
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

8. BIBLIOGRAFIA
Miller D.D. 2001. Qumica de Alimentos, Manual de Laboratorio. Limusa Wiley, Mxico

Pgina
18
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

LABORATORIO N 03

PREPARACIN DE SOLUCIONES ISOTNICAS, HIPOTNICAS E


HIPERTNICAS.

1. OBJETIVO

Comparar los procesos fsicos de difusin, osmosis y dilisis con el proceso fisiolgico
mediante el cual las molculas se transportan a travs de las membranas celulares.
Visualizar y diferenciar los fenmenos de osmosis y dilisis en clulas y modelos
celulares.
Demostrar la importancia que tienen las concentraciones de distintas soluciones en el
mantenimiento de la integridad de las clulas vegetales y animales.

2. MARCO TEORICO

La existencia de la membrana plasmtica que rodea las clulas, funciona como una
especie de "muro comunicante" que separa dos compartimentos, el extracelular y el
intracelular. Esta separacin trae como consecuencia que las diferentes molculas e
iones se distribuyan de manera asimtrica estableciendo diferenciales de concentracin
y cargas elctricas que promueven el intercambio entre ambos compartimentos. Estas
molculas e iones, pueden atravesar las membranas biolgicas mediante diferentes
mecanismos, dependiendo de la naturaleza polar, el tamao de ellas y la diferencia de
concentracin. Dentro del grupo de molculas que pueden atravesar las membranas, el
paso de agua es muy importante para las clulas, porque utiliza un mecanismo
particular que puede contribuir a disminuir diferencias extremas en las concentraciones
de las sustancias disueltas entre los compartimentos, permitir la adaptacin celular al
medio ambiente o causar la destruccin de la misma. Este flujo de agua y/o de
diferentes sustancias puede traer como consecuencia cambios en la morfologa de
clula que pueden ser apreciables al microscopio.

El agua se mueve fcilmente cruzando las membranas celulares, a travs de canales


especiales revestidos de protena. Si el total de la concentracin de todos los solutos
disueltos no es igual en ambos lados, habr un movimiento neto de molculas de agua

Pgina
19
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

hacia dentro o fuera de la clula. Para donde es el movimiento del agua, depende si el
medio donde se encuentra la clula es isotnico, hipotnico o hipertnico.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


Microscopios Solucin de almidn
Porta y cubre objetos Solucin de lugol
Tubo de ensayo Soluciones hipo, iso e hipertnicas de
Gradilla para tubos de ensayos cloruro de sodio

Papel milimetrado Solucin de permanganato de potasio.

Lancetas estriles Hojas de planta acuatica.

Cuchillas Hojas de lirio

Vaso de precipitado de 250mL


Papel celofn
Goteros
Algodn

4. METODOLOGIA
El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta prctica
as como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

5. DESCRIPCION DE LA PRACTICA

Difusin:
Coloque en tres tubos de ensayo 5 ml de agua destilada, a igual temperatura y
numrelos.
Agregue en cada tubo un nmero de gotas de permanganato de potasio en la siguiente
forma:
Tubo No. 1 = 1 gota
Tubo No. 2 = 3 gotas
Tubo No. 3 = 5 gotas

Pgina
20
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Mida el tiempo de difusin en cada caso, para ello anote el tiempo inicial cuando se
agreg el colorante y el tiempo final en que se difundi totalmente.
La diferencia entre ambos es el tiempo de difusin. Haga una grfica en papel
milimetrado de concentracin (# de gotas) vs. tiempo de difusin.

Osmosis:
1.- Deposite una hojita de planta acutica en un porta objeto, adicinele tres gotas de
solucin hipotnica, pngale el cubreobjeto y observe con menor y mayor aumento.
Dibuje. Observa algn movimiento en los cloroplastos? Que nombre recibe este
fenmeno? Segn el concepto de osmosis en qu sentido se debe difundir el agua?

2.- Deposite una hojita de planta acutica en un porta objeto y agrguele tres gotas de
una solucin hipertnica de cloruro de sodio, pngale el cubre objeto y observe con
menor y mayor aumento. Haga un esquema de lo observado. Que cambios se
presentan en el citoplasma de las clulas que usted observa? Que nombre recibe este
fenmeno?

Plasmolisis:
Extraiga con una cuchilla un pedacito de epidermis del envs de una hoja de lirio, trate
que quede libre de clorofila. Cuidando que no se arrugue depostela en el porta objeto y
adicinele tres gotas de solucin hipotnica. Ponga el cubre objeto y observe. Dibuje

Haga un nuevo montaje de epidermis de hoja de lirio, pero con una solucin
hipertnica. Observe y dibuje.

En cual de las dos muestras, planta acutica y epidermis de hoja de lirio, se observa
mejor el fenmeno de plasmlisis? Explique Por qu?
Dilisis:

Usando papel celofn, elabore una bolsa (tubo de dilisis) y coloque en ella una
solucin de almidn.
Amarre fuertemente el otro extremo de la bolsa y suspndala en un beaker o tubo de
ensayo con agua destilada.
Luego aada solucin de yodo (lugol) al agua de dicho beaker o tubo de ensayo. Tome
nota de la coloracin caracterstica.

Pgina
21
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

6. RESULTADOS Y DISCUSION

1S se vara la temperatura del agua en los tubos del numeral de la practica de difusin:
a) Qu efecto tiene la temperatura sobre la velocidad de difusin?
b) Cul es el efecto de la concentracin sobre la velocidad de difusin?
c) Investigue la ley de difusin de Graham y la primera ley de Fick.
1
2Qu diferencia observ entre las clulas de plantas acuacticas y la epidermis de
lirio?
3Como se llaman las estructuras respiratorias que hacen parte del tejido de epidermis
de lirio?
4Defina que son soluciones iso, hipo, e hipertnicas?
5Como se podra desplasmolizar una clula?
6Por que no estalla una clula vegetal cuando se encuentra en un medio hipotnico?
7Qu es permeabilidad diferencial?
8Qu es presin osmtica?
9Qu es presin de turgencia?
10A que se le llama transporte pasivo?
11En que consiste el transporte activo y el facilitado?
12Cual es la diferencia entre smosis y dilisis?

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

8. BIBLIOGRAFIA

Pgina
22
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Miller D.D. 2001. Qumica de Alimentos, Manual de Laboratorio. Limusa Wiley, Mxico
LABORATORIO N 04

RECONOCIMIENTO DE LAS PROTEINAS

1. OBJETIVO

Identificar a travs de pruebas bioqumicas las protenas existentes en soluciones


problemas

2. MARCO TEORICO

Coagulacin de Protenas; Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas,


forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con
formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 C o al ser
tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc.
La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su
desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la
desordenan por la destruccin de su estructura terciaria y cuaternaria

Reaccin Xantoproteica: Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado


de color amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado. La
prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de
grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la
prueba se neutraliza con un lcali vira a un color anaranjado oscuro.

Pgina
23
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Reaccin de Biuret: La producen los pptidos y las protenas, pero no los


aminocidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -)que se
destruye al liberarse los aminocidos.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una
sustancia compleja denominada Biuret, de frmula:

que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta
caracterstica.

Reaccin de los aminocidos azufrados: Se pone de manifiesto por la formacin de


un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin
mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una
solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


Tubos de ensayo Clara de huevo
Gradilla Acido nitrico concentrado
Varillas de vidrio Hidroxido de sodio a 40 %
Mechero Hidroxido de sodio al 20 %
Vasos de precipitados Sulfato cuprico al 1 %
Pipetas Acetato de plomo al 5 %
Bageta

4. METODOLOGIA

Pgina
24
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica
as como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

5. DESCRIPCION DE LA PRACTICA

REACCIN XANTOPROTEICA:
1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de solucin problema (clara de huevo).
2. Aadir 1 cc. de HNO3 concentrado.
3. Calentar al bao mara a 100: C..
4. Enfriar en agua fra
5. Aadir gota a gota una disolucin de sosa al 40%.

REACCIN DE BIURET:
1. Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. de albmina de huevo.
2. Aadir 2cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%.
3. A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%. Debe
aparecer una coloracin violeta-roscea caracterstica.

REACCIN DE LOS AMINOCIDOS AZUFRADOS


1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albmina de huevo (clara de huevo).
2. Aadir 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%.
3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%.
4. Calentar el tubo hasta ebullicin.
5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro
de plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar
protenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.

6. RESULTADOS Y DISCUSION
Describir lo encontrado en la experiencia realizada.

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
El reconocimiento de las protenas es importante para tener como base la composicin
de los alimentos para su posterior reformulacin en los diferentes productos a realizar.

Pgina
25
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

8. BIBLIOGRAFIA
Bioqumica de Lehninger; Ediciones Omega SA.

9. CUESTIONARIO
1. Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo?
2. Cul de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalizacin?
3. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una protena?
4. Qu coloracin da la reaccin del Biuret?
5. Una protena coagulada podra dar la reaccin del Biuret?
6. Si se realiza la reaccin del Biuret sobre un aminocido como la Glicina es positiva
o negativa? Por qu?

Pgina
26
LABORATORIO N 05

EXTRACCIN DE LA CASEINA Y DETERMINACIN DEL


PUNTO ISOELECTRICO

2. OBJETIVO
La determinacin del punto isoelctrico de la casena una vez extrada, mediante
procedimiento qumico de la leche entera liquida.

3. MARCO TEORICO
La leche contiene vitaminas (principalmente tiamina, riboflavina, cido pantotico y
vitaminas A, D y K), minerales (calcio, potasio, sodio, fsforo y metales en pequeas
cantidades), protenas (incluyendo todos los aminocidos esenciales), carbohidratos
(lactosa) y lpidos. Los nicos elementos importantes de los que carece la leche son el
hierro y la vitamina C.

La casena es una protena conjugada de la leche del tipo fosfoprotena que se separa de la
leche por acidificacin y forma una masa blanca. Las fosfoproteinas son un grupo de
protenas que estn qumicamente unidas a una sustancia que contiene cido fosfrico. En
la casena la mayora de los grupos fosfato estn unidos por los grupos hidroxilo de los
aminocidos serina y treonina. La casena en la leche se encuentra en forma de sal clcica
(caseinato clcico). La casena representa cerca del 77% al 82% de las protenas presentes
en la leche y el 2,7% en composicin de la leche lquida.
La casena est formada por alpha(s1), alpha(s2)-casena, -casena, y kappa-casena
formando una micela o unidad soluble. Ni la alfa ni la beta casena son solubles en la leche,
solas o combinadas. Si se aade la kappa casena a las dos anteriores o a cada una de
ellas por separado se forma un complejo de casena que es solubilizado en forma de
micela. Esta micela est estabilizada por la kappa casena mientras que las alfa y beta son
fosfoprotenas que precipitan en presencia de iones calcio.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

La kappa casena, sin embargo, tiene pocos grupos fosfato y un alto contenido de
carbohidratos unidos a ella. Tambin tiene todos sus residuos de serina y treonina con sus
correspondientes grupos hidroxilo, as como los carbohidratos dispuestos en una sola cara
de su superficie por lo que esta parte exterior es fcilmente soluble en agua gracias a los
grupos polares que posee. La otra parte de su superficie se une fcilmente a las alfa y beta
casena insolubles, lo que da lugar a la formacin de la micela.

La propiedad caracterstica de la casena es su baja solubilidad a pH 4,6. El pH de la leche


es 6,6 aproximadamente, estando a ese pH la casena cargada negativamente y
solubilizada como sal clcica. Si se aade cido a la leche, la carga negativa de la
superficie de la micela se neutraliza (los grupos fosfato se protonan) y la protena neutra
precipita Ca2+ Caseinato + 2HCl Casena + CaCl2 La conformacin de la casena es
similar a las protenas desnaturalizadas globulares.

El alto numero de residuos de prolina en la casena causa un especial plegamiento en la


cadena de protena e inhibe la formacin de una fuerte y ordenada estructura secundaria.
La casena no contiene puentes di sulfuro. De igual manera la falta de estructura
secundaria es importante para la estabilidad de la casena frente a la desnaturalizacin por
calor.
La carencia de estructura terciaria facilita la situacin al exterior de los residuos hidrofbicos
lo que
facilita la unin entre unidades proteicas y la convierte en prcticamente insoluble en agua.
En cambio es fcilmente dispersable en lcalis diluidas y en soluciones salinas tales como
oxalato sdico y acetato sdico.

La funcin biolgica de las micelas de caseina es transportar grandes cantidades de


Ca y P altamente insoluble en forma liquida a los lactantes y formar un coagulo en el
estomago para favorecer una nutricin eficiente. Adems de casena, Ca y P la micela
formada tambin contiene citrato, iones, lipasa, enzimas plasmticos y suero. Estas micelas
ocupan del 6-12% del volumen total de la leche.

Las protenas que aparecern en el sobrenadante cuando precipitemos la casena en


medio cido son protenas globulares, hidrofilicas y fcilmente solubles en agua as como
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

susceptibles de desnaturalizacin por calor. Las principales son -lacto globulina,


alphalactalbumina, bovine serum albumin (BSA), y inmunoglobulinas (Ig).

La casena se emplea en la industria para la fabricacin de pinturas especiales y en el


apresto de tejidos, la clarificacin de vinos, la elaboracin de preparados farmacuticos y la
fabricacin de plsticos. La pintura de casena ha sido usada desde la antigedad por los
egipcios.

PUNTO ISOELECTRICO: Todas las macromolculas de la naturaleza adquieren una carga


cuando se dispersan en agua. Una caracterstica de las protenas y otros biopolmeros es
que la carga total que adquieren depende del pH del medio.
As, todas las protenas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en el que se
encuentren y de los aminocidos que la componen, as como de las cargas de cualquier
ligando que se encuentre unido a la protena de forma covalente (irreversible). Debido a la
composicin en aminocidos de la protena, los radicales libres pueden existir en tres
formas dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros y aninicos. Cualquier protena
tendra una carga neta positiva si se encuentra en un medio lo suficientemente cido debido
a que los grupos COOH de los aminocidos asprtico y glutmico estaran en su forma
neutra pero los grupos amino de Arginina y lysina estaran protonados (-NH3 +).
De igual forma si la protena se encuentra en un medio con un pH muy alto estara cargada
negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo estaran desprotonados (COO-) y
los grupos amino estaran en su forma neutra (NH2). De lo anterior se deduce que las
protenas tienen un pH caracterstico al cual su carga neta es cero. A este pH se le
denomina punto isoelctrico (pI).
En el punto isoelctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas
por lo que la protena presenta su mxima posibilidad para ser precipitada al disminuir su
solubilidad y facilitar su agregacin.

Si suponemos una protena formada nicamente por aminocidos sin grupos laterales
ionizables la carga neta de la protena dependera exclusivamente de la protonacin /
desprotonacin de los grupos amino y carboxilo terminal. En la realidad las protenas estn
formadas por multitud de aminocidos unidos mediante enlaces peptdicos y la carga va a
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

depender de los grupos ionizables que poseen los aminocidos que la componen (anexo I)
y del pH del medio.

4. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


Dos vasos de precipitados de 50ml Agua destilada
Un vaso de precipitado de 250ml Acetato sdico 0,1 N
Probeta de 50ml cido actico 0,01 N
Matraz aforado de 50 ml cido actico 0,1 N
pipeta graduada de 5,0 ml cido actico 1,0 N
pipeta graduada de 1,0 ml NaOH 1N
pipeta graduada de 10,0 ml ter etlico
Embudo de vidrio mediano Etanol al 70%
Papel de filtro Soluciones buffer pH 4,0 y 7,0 para
Termmetro calibrar el potencimetro

Potencimetro (pH-metro)
Leche entera corriente ( 1 litro)
5. METODOLOGIA

El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica as
como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

6. DESCRIPCION DE LA PRACTICA

AISLAMIENTO DE LA CASENA:
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

1. Caliente en un vaso de precipitado 150ml de agua destilada a 38C, aada 50ml de


leche y luego gota a gota y con agitacin, adicione cido actico 1M hasta que observe
que se forma un precipitado (la leche se corta).
2. Deje sedimentar y filtre sobre papel de filtro usando un embudo de cristal.
3. Lave el precipitado con 20ml de etanol en el mismo filtro.
4. Seque el precipitado colocando varios pliegues de papel de filtro.
5. Coloque el precipitado en un vaso de precipitado pequeo previamente pesado, vuelva
a pesar el vaso con el precipitado y luego adicione 5ml/g de ter etlico.
6. Filtre nuevamente.
7. Deseche el lquido quedando un precipitado blanco de fcil manipulacin que es la
8. casena.

PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE CASENA:


1. Coloque aproximadamente 250 mg de casena en un vaso de 50ml.
2. Agregue 20ml de agua destilada y 5 ml de NaOH 1N; agite hasta lograr una solucin
total de la casena.
3. Una vez disuelta la casena, se vierte en un matraz aforado de 50 ml, adicione 5 ml de
cido actico 1N y diluya con agua destilada hasta 50ml y mezcle bien.
4. La solucin debe ser clara y limpia y si no es as, debe volver a filtrar.

DETERMINACIN DEL PI DE LA CASENA:


1. En diez vasos de 25 ml limpios y secos adicione exactamente los volmenes de los
reactivos segn la siguiente tabla:
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

2. Medir experimentalmente el pH de todos los vasos, que debe cubrir un rango


aproximado semejante al terico (3 a 6,5).
3. Anotar los valores reales en la Tabla, que deben ser semejantes a los expresados y en
todo caso crecientes.
4. Aadir 1 ml de disolucin de casena a cada tubo.
5. Agitar suavemente cada uno y esperar aproximadamente 3 minutos.
6. Medir la absorbancia de cada muestra a 640 nm con las cubetas de colorimetra de 1
cm de paso ptico, teniendo la precaucin de agitar bien el contenido de cada tubo para
obtener una solucin / suspensin homognea antes de verter una parte en la cubeta.
7. Anotar resultados, representar la absorbancia frente al pH, y determinar el pI
aproximado de la casena.

7. RESULTADOS Y DISCUSION
Anotar los resultados obtenidos en la practica
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
El aislamiento de la casena en la leche se realiza para la determinacin de la existencia de
dicha protena en la misma as como el reconocimiento de su estado bsico o lcali, como
modelo para el aislamiento de otras protenas.

9. BIBLIOGRAFIA
Miller D.D. 2001. Qumica de Alimentos, Manual de Laboratorio. Limusa Wiley, Mxico

10. CUESTIONARIO

1. Cul es el punto isoelctrico de la casena?


2. Por qu las protenas tienen solubilidad mnima en el pI?
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

LABORATORIO N 06

RECONOCIMIENTO DE LA PROTEINA EN LA CLARA DE HUEVO.

2. OBJETIVO
El objetivo de esta prctica consiste en reconocer la presencia de protenas en la clara de
huevo. Para ello utilizaremos la prueba Xantoproteica.

3. MARCO TEORICO
En el caso de haber protenas en la clara de huevo, al aadir HNO3 y calentarlo, sta
debe tomar un color amarillo suave, y al aadir NH3 deber tomar un tono anaranjado.
Experimentacin
Tenemos clara de huevo en un vaso de precipitado. Tomamos una muestra con una
jeringuilla y la vertemos en un tubo de ensayo. Aadimos el HNO3 y calentamos:
Resultados
Dado que los resultados de la prueba Xantoproteica dan positivos, queda demostrada la
presencia de protenas en la clara de huevo. El hecho de que la clara solidifique en
contacto con el HNO3 es debido a que al cambiar el pH de la disolucin, las protenas
que en ella hay se denaturalizan y se vuelven insolubles.

4. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


Dos vasos de precipitados de 50ml Agua destilada
Un vaso de precipitado de 250ml Acetato sdico 0,1 N
Probeta de 50ml cido actico 0,01 N
Matraz aforado de 50 ml cido actico 0,1 N
pipeta graduada de 5,0 ml cido actico 1,0 N
pipeta graduada de 1,0 ml
pipeta graduada de 10,0 ml
Tubo de ensayo
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

5. METODOLOGIA

El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica as
como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

6. DESCRIPCION DE LA PRACTICA
1. Colocar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo.
2. Aadir 5 gotas de cido actico y calentar el tubo a la llama del mechero.
3. Observar al experiencia

7. RESULTADOS Y DISCUSION

8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

9. BIBLIOGRAFIA
Miller D.D. 2001. Qumica de Alimentos, Manual de Laboratorio. Limusa Wiley, Mxico
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

LABORATORIO N 07

RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

1. OBJETIVO:

Que el alumno reconozca la presencia de un monosacrido, as como su fundamente


terico establecido.

2. MARCO TEORICO:

Los glcidos son compuestos orgnicos constituidos por carbono, hidrgeno y oxgeno; en
algunos casos pueden tener adems otros elementos qumicos como nitrgeno o azufre.
Se les ha llamado hidratos de carbono porque algunos responden a la frmula general
Cn(H2O)m y azcares por su sabor dulce, aunque slo los de baja masa molecular lo
tienen.
Qumicamente son polihidroxialdehdos, polihidroxicetonas, sus derivados o sus polmeros.
Algunos son molculas de relativamente baja masa molecular; la glucosa tiene una
Mm=180 da. Otros, como el almidn, tienen masas moleculares de ms de 100000 da y
son grandes molculas, macromolculas.
Sus propiedades fsicas y qumicas son muy variadas. Y en cuanto a sus funciones
biolgicas:
La glucosa, sacarosa, glucgeno y almidn son sustancias energticas. Los
seres vivos obtienen energa de ellas o las usan para almacenar energa. Esta energa est
contenida en determinados enlaces que unen los tomos de estas molculas.
Celulosa y quitina son estructurales. Forman parte de las paredes de las clulas
vegetales (celulosa) o de las cubiertas de ciertos animales (quitina).
Ribosa y desoxirribosa forman parte de los cidos nucleicos.
Estos son slo algunos ejemplos que nos pueden ilustrar sobre las funciones que cumplen
los glcidos.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

CLASIFICACIN DE LOS GLCIDOS


Atendiendo a su complejidad se clasifican en:
A) Monosacridos u osas: Son los ms sencillos. No son hidrolizables; esto es,
no se pueden descomponer por hidrlisis en otros glcidos ms simples. Qumicamente
son polihidroxialdehdos, polihidroxicetonas o sus derivados.

Un polihidroxialdehdo es un compuesto orgnico que tiene una funcin aldehdo en


el primer carbono y en los restantes carbonos una funcin alcohol. Las polihidroxicetonas
en lugar de una funcin aldehdo tienen una funcin cetona, normalmente en el carbono 2.
Los monosacridos que tienen funcin aldehdo se llaman aldosas y cetosas los que tienen
una funcin cetona. Los monosacridos responden a la frmula emprica Cn(H2O)n, de
aqu proviene el nombre de hidratos de carbono. El valor de n normalmente est
comprendido entre 3 y 7.
Segn el nmero de tomos de carbono se clasifican en :
Triosas........n=3
Tetrosas.......n=4
Pentosas.......n=5
Hexosas........n=6
Heptosas.......n=7
As, un monosacrido con 6 tomos de carbono y con la funcin aldehdo ser una
aldohexosa; si tiene cuatro tomos de carbono y una funcin cetona, ser una cetotetrosa,
y as sucesivamente.

Constituyen los monmeros a partir de los cuales se forman los dems glcidos.
Fsicamente los monosacridos son slidos, cristalinos, incoloros o blancos, de sabor dulce.
Como los grupos hidroxilo son polares, los monosacridos son muy solubles en agua, pues
se establecen enlaces polares con las molculas de agua.
Qumicamente el grupo carbonilo reduce fcilmente los compuestos de cobre (licor Fehling)
y de plata oxidndose y pasando a grupo cido. Esta propiedad es caracterstica de estas
sustancias y permite reconocer su presencia, pues la reduccin de las sales cpricas del
licor de Fehling a cuprosas hace virar el reactivo del azul al rojo ladrillo.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Cu+ +-----------------Cu+
Azul rojo
B) sidos: Formados por la unin de varios monosacridos mediante enlaces "O-
glicosdicos",pudiendo poseer en su molcula otros compuestos diferentes de los glcidos.
Son hidrolizables, descomponindose en los monosacridos y dems compuestos que los
constituyen. Se dividen en:

Holsidos: Son aquellos que estn constituidos por carbono, hidrgeno y oxgeno,
exclusivamente. A su vez se subclasifican en:

Oligosacridos, formados por entre 2 y 10 monosacridos unidos.


Polisacridos, formados por un gran nmero de monosacridos.

Hetersidos. Formados por osas y otros compuestos que no son glcidos. Por lo tanto,
adems de carbono, hidrgeno y oxgeno, contienen otros elementos qumicos.

ESQUEMA DE IDENTIFICACIN

(-) No azcar
Benedict (-) no reductor: Sacarosa (hidrlisis y selivanoff)

Baraun Barfoed (-) disacrido lactosa (hidrlisis y barfoed)

(+) Azcar (+) Reductor


Molisch
Fehling Espejo de (+) fructuosa
plata (+) mono- Selivanolf (+)galactosa
dacarido (-) tollens
(-) glucosa

I. REACCIN DE MOLISCH: Esta reaccin sirve para el reconocimiento de todo tipo de


azcares. Los azcares, en medio cido fuerte se deshidratan formando furfurales. Estos
furfurales al reaccionar con el a-naftol originan complejos de intenso color.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

II. REACCIN DE FEHLING: Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de azcares


reductores. El poder reductor que pueden presentar los azcares proviene de su grupo
carbonilo, que puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el
grupo carbonilo se encuentra combinado no puede presentar este poder reductor.
Los azcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el in Cu2+ de color
azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azcar se oxida a grupo carboxilo.
En medio fuertemente bsico como en nuestro caso el NaOH el in Cu2+ formara Cu
(OH)2 insoluble por eso aadimos tartrato sdico potsico que acta como estabilizador al
formar un complejo con el Cu2+.

III. REACCIN DE BENEDICT: Esta prueba sirve para el reconocimiento de azcares


reductores. Se basa en la reduccin de Cu2+ a Cu+ en medio bsico dbil. Aunque es
similar a la reaccin de Fehling, el medio bsico dbil (HNaCO3) y el estabilizante (citrato
sdico) usados hacen que este test sea ms sensible y estable.

IV. REACCIN DE BRAUN: Esta reaccin sirve para el reconocimiento de azcares


reductores. Los azcares reductores en medio alcalino pueden reducir el picrato, de color
amarillo, a picramato, de color rojo en medio alcalino (Na2CO3).

V. PRUEBA DE BARFOED: Esta prueba sirve para el reconocimiento de monosacridos.


En medio cido, tan slo los monosacridos son capaces de reducir el Cu2+ a Cu+. El Cu+
as producido reduce al cido fosfomolbdico a un complejo de intenso color azul oscuro.

VI. PRUEBA DEL ESPEJO DE PLATA: Esta prueba sirve para el reconocimiento de
monosacridos. Los monosacridos son capaces de reducir, en medio amoniacal, el in
Ag+ a Ago (plata metlica), que se deposita en las paredes del tubo.

VII. PRUEBA DE SELIVANOFF: Esta prueba es especfica para las cetosas. Las cetosas
se deshidratan ms rpidamente que las aldosas, dando furfurales. Estos se condensan
con el resorcinol produciendo un complejo coloreado. Si el tiempo de ebullicin se prolonga,
puede dar tambin positivo para otros azcares.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

VIII. PRUEBA DE TOLLENS: Esta prueba es anloga a la de Selivanoff, pero para el


reconocimiento de galactosa y sus derivados. La galactosa, algunas pentosas y el cido
glucurnico dan un color rojo con el HCl y floroglucina. La glucosa da tambin un color rojo
con la floroglucina, pero muy opaco, en contraste con el color rojo transparente de la
galactosa.

IX. HIDRLISIS CIDA DE UN DISACRIDO: En el caso de que la disolucin problema de


azcar fuese sacarosa o lactosa se hace una comprobacin. En primer lugar se hidroliza el
disacrido en sus componentes (sus dos monosacridos) mediante una hidrlisis cida

X. PRUEBA DEL AZUL DE METILENO: A una solucin de glucosa en medio bsica (20 g
de glucosa y 25 g de KOH en 1 l) se le agregan unas gotas de azul de metileno al 1%.
Agitar, observar su coloracin y dejar reposar unos minutos. Observar el cambio de color y
agitar nuevamente. Repetir el proceso numerosas veces.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


Balanza analtica Glucosa
Vagetas Sacarosa
Tubos de ensayo Fructosa
Gradilla Lactosa
Mechero bunsen Galactosa
Pipeta de 10 ml. -naftol al 1%
Vasos precipitados 250 ml. Acido sulfurico concentrado
Vasos precipitados de 100 ml. Fehling A
Matraz de 100 ml Fehling B
Fiolas 100 ml. Reactivo benedict
Acido picrico saturado
Carbonato de sodio
Disolucin acida de cobre
Nitrato de plata
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Amoniaco al 30%
Reactivo Saliwanoff
Acido clohidrico concentrado
Dloroglucina
Acido clohidrico al 0.1 N
Azul de metileno al 1 %

4. METODOLOGIA

El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica as
como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

5. DESCIPCION DE LA PRACTICA

Laboratorio 03-01:
REACCIN DE MOLISCH
Precaucin: el cido sulfrico concentrado puede causar quemaduras graves en la
piel. Manejarlo con mucho cuidado.

1. Pipetear en un tubo de ensayo 2 ml de disolucin de azcar problema


2. Aadir 2 gotas de -naftol al 1% y se mezclar bien.
3. Con una pipeta se dejan resbalar por la pared del tubo de ensayo 2 ml de cido sulfrico
concentrado con mucho cuidado procurando que no se mezcle para que forme una capa
bajo la disolucin de azcar.
En la superficie de separacin de ambas capas se producir la deshidratacin del azcar y
su reaccin con el a-naftol formndose un anillo de color oscuro en dicha interfase.

Molisch positivo: anillo oscuro.

REACCIN DE FEHLING
1. Mezclar en un tubo de ensayo:
Fehling A (CuSO4) 2 ml
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Fehling B (Tartrato/NaOH) 2 ml
2. Agitar y calentar a ebullicin (aproximadamente 1 min).
3. Aadir 1 ml de la disolucin de azcar y hervir durante un minuto. Si se reduce el cobre
se forma un precipitado de Cu2O de color rojizo.
Fehling positivo: color rojizo.

REACCIN DE BENEDICT
1. Pipetear en un tubo de ensayo 5 ml de reactivo de Benedict
2. Calentar a ebullicin.
3. Aadir 1 ml de la solucin de azcar, mezclar bien y se volver a calentar a ebullicin. Si
la reaccin es positiva aparece un precipitado rojizo, aunque si la cantidad de azcar es
pequea puede dar color anaranjado o verdoso

REACCIN DE BRAUN
1. Aadir en un tubo de ensayo:
- Disolucin de azcar 4 ml
- cido pcrico saturado 2 ml (OJO, MUY VENENOSO)
- Na2CO3 1M 2 ml
2. Calentar a ebullicin.
Si el test es positivo, el color amarillo pasa a rojo.

PRUEBA DE BARFOED
1. Pipetear en un tubo de ensayo:
- Disolucin de azcar 1 ml
- Disolucin cida de cobre 1 ml
2. Calentar a ebullicin durante 3 minutos.
3. Enfriar en agua durante 2 min
4. Aadir 1 ml del reactivo de fosfomolibdato.
Si la prueba es positiva aparece un color azul oscuro muy intenso.

PRUEBA DEL ESPEJO DE PLATA


1. Aadir en un tubo de ensayo:
- AgNO3 1% 1 ml
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

- NH3 30% 1 ml
- Disolucin de azcar 1 ml
2. Mezclar bien y se calentar durante 2 minutos.
3. Sacar y dejar reposar.

Si el ensayo es positivo la plata metlica, que precipita, se va depositando en la pared


deltubo formando un espejo (espejo de plata).

PRUEBA DE SELIVANOFF
1. En un tubo de ensayo pyrex se aadir:
- Reac. Selivanoff (resorcinol/HCl) 1 ml
- Disolucin de azcar 1 ml
2. Hervir durante 1 minuto en el bao a ebullicin.
La aparicin de un color rojo o un precipitado rojo es indicativa de la presencia de
cetosas.

PRUEBA DE TOLLENS
1. Aadir en un tubo:
- Disolucin de azcar 2 ml
- HCl (concentrado) 2 ml
- Floroglucina (Tollens) 0,1 ml
2. Calentar a ebullicin. El color puede aparecer hasta 5 minutos despus de calentar.

HIDRLISIS CIDA DE UN DISACRIDO


1. En un tubo de ensayo limpio aadir:
- Disolucin problema 1 ml
- HCl 0,1N 1 ml
2. Hervir durante 1 minuto.
3. Realizar la prueba de Selivanoff si se trata de sacarosa o la reaccin de Barfoed si se
trata de lactosa.

PRUEBA DEL AZUL DE METILENO


A una solucin de glucosa en medio bsico (20 g de glucosa y 25 g de KOH en 1 l)
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

se le agregan unas gotas de azul de metileno al 1%. Agitar, observar su coloracin y


dejar reposar unos minutos. Observar el cambio de color y agitar nuevamente. Repetir el
proceso numerosas veces.

6. RESULTADOS Y DISCUSION

GLUCOSA SACAROSA FRUCTOSA LACTOSA GALACTOSA


MOLISCH
FEHLING
BENEDICT
BRAUN
BARFOED
ESP. PLATA
SELIVANOFF
TOLLENS

7. CONCLUSION Y RECOMENDACIONES
La prctica realizada indicara el reconocimiento cualitativo de los glusidos, basado en
reacciones con sustancias y permitiendo el reconocimiento.
Realizar la practica con gafas previniendo cualquier accidente.

8. BIBLIOGRAFIA
Bioqumica de Lehninger; Ediciones Omega SA.

9. CUESTIONARIO
1. Explicar brevemente qu funcin tienen los siguientes compuestos:
- Citrato sdico.
- Cu2+
- H2SO4
- cido pcrico
- Ag+
- Tartrato sdico potsico
2. Cmo se explica el experimento del azul de metileno?
LABORATORIO N 08

RECONOCIMIENTO E HIDRLISIS DEL ALMIDON


CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

1. OBJETIVO

Que el alumno reconozca un polisacrido y su hidrlisis.

2. MARCO TEORICO

Es un polisacarido de reserva vegetales. Para reconocerlo se utiliza la solucin de Lugol.


(yodo y yoduro potasico en medio acido). Al aadir tal solucin el almidn adquiere una
coloracin oscura, azul-violeta. Esta coloracin no es debida a ninguna reaccin qumica
sino a que el lugol se adsorbe a la superficie del almidn, de forma que si lo calentamos se
separan y la coloracin desaparece.
El almidn cuando se hidroliza libera amilasa y amilo pectina, si la hidrlisis prosigue se van
liberando oligosacardos de glucosa y finalmente glucosas.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


Tubos de ensayo Solucin de almidn.
Cuentagotas Solucin de lugol
Pipeta Reactivos de Fehling A y B
Luna de reloj Papa
Porta y cubre objetos
Microscopio
Vaso de precipitado
Tripo con rejilla
Mechero de ron
vidrio
Mechero
Vasos de precipitados
Pipetas
Cuchillo
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

4. METODOLOGIA
El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica as
como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.
5. DESCRIPCION DE LA PRACTICA

HIDRLISIS DEL ALIMIDON


1. Colora en un tubo de ensayo 2 ml. De solucin de almidn, y aadir 2 o 3 gotas de
lugol.
2. Observar y anotar la coloracin.

HIDRLISIS DEL ALIMIDON DE LA PAPA


1. Colorar el liquido re raspado de la papa en un portaobjetos, aadir un poco de lugol y
observar en un microscopio la forma de los granos de almidn.
2. Se puede hacer una observacin antes de la aplicacin del lugol.
3. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%..
4. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.
5. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que
contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia
semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado.

PODER REDUCTOR DEL ALMIDON


1. Colocar en un tubo 2 ml. De almidn mas 1 ml. De fehling A mas 1 ml. De fehling B
2. Calentar al bao mara y observar lo que ocurre.
3. Colocar en un tubo 2 ml de almidn mas saliva, para que la hidrlisis se favorezca
calentamos el tubo en bao mara y dejamos transcurrir 10 minutos.
4. Aadir 1 ml. De reactivo Fehling a y 1 ml. De fehling B calentamos y observamos lo
ocurrido.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

6. RESULTADOS Y DISCUSION
Colocar sus apreciaciones

Laboratorio 04-01 Laboratorio 04-02 Laboratorio 04-03

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Realizar la practica con gafas previniendo cualquier accidente.

8. BIBLIOGRAFIA
Bioqumica de Lehninger; Ediciones Omega SA.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

LABORATORIO N 09

RECONOCIMIENTO DE LOS LIPIDOS

1. OBJETIVO

Identificar a travs de pruebas bioqumicas los lpidos en las muestras problemas.


Brindar al alumno los reconocimientos bsicos para desarrollar anlisis en grasas y aceites.

2. MARCO TEORICO

SAPONIFICACIN:

Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico descomponindose en


los dos elementos que las integran: glicerina y cidos grasos. stos se combinan con los
iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales
sdicas o potsicas de los cidos grasos. En los seres vivos, la hidrlisis de los triglicridos
se realiza mediante la accin de enzimas especficos (lipasas) que dan lugar a la formacin
de cidos grasos y glicerina.

TINCIN:

Los lpidos se colorean selectivamente de rojo -anaranjado con el colorante Sudn III.

SOLUBILIDAD:
Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en
pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso, que es transitoria, pues
desaparece en reposo por reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que, por su
menor densidad, se sita sobre el agua. Por el contrario, las grasas son solubles en
disolventes orgnicos, como el ter, cloroformo, acetona, benceno, etc.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


Tubos de ensayo Solucin de NaOH al 20%
Gradilla Solucin de Sudn III
Varillas de vidrio Tinta china roja
Mechero Eter, cloroformo o acetona
Vasos de precipitados Aceite de oliva
Pipetas

4. METODOLOGIA
El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica as
como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

5. DESCRIPCION DE LA PRACTICA

SAPONIFICACION
1. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.
2. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.
3. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que
contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia
semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado.

TINCIN:
1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite.
2. Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III.
3. Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja.
4. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
5. Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene que aparecer
teido, mientras que en el tubo con tinta, sta se ir al fondo y el aceite no estar
teido.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

SOLUBILIDAD:
1. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.
2. Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro disolvente orgnico,
3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.
4. Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter y, en cambio
no lo hace en el agua y el aceite subir debido a su menor densidad.

6. RESULTADOS Y DISCUSION
Colocar sus apreciaciones

Laboratorio 04-01 Laboratorio 04-02 Laboratorio 04-03

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Realizar la practica con gafas previniendo cualquier accidente.

8. BIBLIOGRAFIA
Bioqumica de Lehninger; Ediciones Omega SA.

9. CUESTIONARIO

1. Qu son los jabones?


2. Cmo se pueden obtener los jabones?
3. Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa?
4. Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas?
5. Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudn III y aceite-tinta y explica a qu se debe
la diferencia entre ambos resultados.
6. Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo?
Y con la de benceno y aceite?A qu se deben las diferencias observadas entre ambas
emulsiones?
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

LABORATORIO N 10

EXTRACCION DE ADN

10. OBJETIVO
Realizar una extraccin casera de la presencia de ADN en vegetales.

11. MARCO TEORICO


La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos
son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior
extraccin de la clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas mediante un detergente,
vacindose su contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN.
En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN,
carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas
al ADN, de gran longitud, se habrn fraccionado en cadenas ms pequeas y separadas de
l por accin del detergente. Slo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de
tampn y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamlico, probablemente el nico
reactivo de esta prctica que no suele haber en una cocina.

12. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


Muestra vegetal Agua (destilada o mineral)
Batidora Sal de mesa
Nevera Bicarbonato sdico
Colador o centrfuga Detergente lquido o champ
Vaso precipitados Alcohol isoamlico a 0C
Tubo de ensayo
Varilla fina
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

13. METODOLOGIA
El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta prctica as
como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

14. DESCRIPCION DE LA PRACTICA

1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un


bao de hielo triturado: 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar
agua del grifo. 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. 5 g de bicarbonato sdico. 5
ml de detergente lquido o champ.
2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber
(cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.
3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a
impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn
4. expuestas a la accin del detergente.
5. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro y
agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales
ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible.
Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y despus pipetear el sobrenadante.
6. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml
7. de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la
cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el
tampn.
8. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el
alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se
irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la
varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su
estremo con el aspecto de un copo de algodn mojado.

15. RESULTADOS Y DISCUSION


CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

16. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

17. BIBLIOGRAFIA
Miller D.D. 2001. Qumica de Alimentos, Manual de Laboratorio. Limusa Wiley, Mxico
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

LABORATORIO N 11

RUTAS METABOLICAS

1. OBJETIVO
Reconocer la degradacin de la glucosa, dando por consiguiente el proceso de la gluclisis
y respiracin (ciclo de Kreb).

2. MARCO TEORICO
La degradacin de la glucosa es realizada por el proceso de gluclisis en el citoplasma por
la accin del ADP obteniendo acido piruvico, De acuerdo a las circunstancias puede
realizarse dos procesos:
1.- Sin oxigeno obtenemos el proceso de fermentacin con la obtencin de etanol o acido
lactico.
2.- con oxigeno pasando al ciclo de Kreb obteniendo diferentes sustancia, la cual se realiza
en el mitocondrias.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

LA GLUCLISIS:

Comienza con una molcula de glucosa. En este proceso, primero se invierte energa por
transferencia de un grupo fosfato desde una molcula de ATP, una por cada paso, a la
molcula de azcar. La molcula de 6 carbonos luegos se escinde y, de all en adelante, la
secuencia produce energa. En cierto momento se reduce una molcula de NAD+ a NADH y
H+ almacenandose parte de la energa producida por la oxidacin del gliceraldehdo fosfato. En
los pasos finales las molculas de ADP toman energa del sistema, fosforilndose a ATP.

Glucosa+2ATP+4ADP+2Pi+2NAD=>2cido pirvico+2ADP+4ATP+2NADH+2H+2H2O

De esta forma, una molcula de glucosa se convierte en dos molculas de cido pirvico. La
ganancia neta, la energa recuperada, es dos molculas de ATP y dos molculas de NADH por
molcula de glucosa. Las dos molculas de cido pirvico contienen todava una gran parte de
la energa que se encontraba almacenada en la molcula de glucosa original. La serie de
reacciones que constituyen la gluclisis se lleva a cabo virtualmente en todas las clulas vivas,
desde las clulas procariticas hasta las clulas eucariticas de nuestros propios cuerpos.

LAS VIAS AEROBICAS - RESPIRACIN:

En el curso de la respiracin, las molculas de tres carbonos de cido pirvico producido por la
gluclisis son degradadas a grupos acetilo de dos carbonos, que luego entran al ciclo de Krebs.
En una serie de reacciones en el ciclo de Krebs, el grupo acetilo de dos carbonos es oxidado
completamente a dixido de carbono. En el curso de la oxidacin de cada grupo acetilo se
reducen cuatro aceptores de electrones (tres NAD+ y un FAD) y se forma otra molcula de ATP.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

El ciclo de Krebs.

En el ciclo de Krebs. los carbonos donados por el grupo acetilo se oxidan a dixido de carbono
y los electrones pasan a los transportadores de electrones. Lo mismo que en la gluclisis, en
cada paso interviene una enzima especfica. La coenzima A es el nexo entre la oxidacin del
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

cido pirvico y el ciclo de Krebs. A modo de resumen: en el ciclo de Krebs se producen una
molcula de ATP, tres molculas de NADH y una molcula de FADH2 que representan la
produccin de energa de este ciclo. Se necesitan dos vueltas del ciclo para completar la
oxidacin de una molcula de glucosa. As, el rendimiento energtico total del ciclo de Krebs
para una molcula de glucosa es dos molculas de ATP, seis molculas de NADH y dos
molculas de FADH. La etapa final de la respiracin es el transporte terminal de electrones, que
involucra a una cadena de transportadores de electrones y enzimas embutidas en la membrana
interna de la mitocondria. A lo largo de esta serie de transportadores de electrones, los
electrones de alta energa transportados por el NADH de la gluclisis y por el NADH y el
FADH2 del ciclo de Krebs van "cuesta abajo" hasta el oxgeno. En tres puntos de su pasaje a lo
largo de toda la cadena de transporte de electrones, se desprenden grandes cantidades de
energa libre que impulsan el bombeo de protones (iones H+) hacia el exterior de la matriz
mitocondrial. Esto crea un gradiente electroqumico a travs de la membrana interna de la
mitocondria. Cuando los protones pasan a travs del complejo de ATP sintetasa, a medida que
vuelven a fluir a favor del gradiente electroqumico al interior de la matriz, la energa liberada se
utiliza para formar molculas de ATP a partir de ADP y fosfato inorgnico. Este mecanismo, en
virtud del cual se lleva a cabo la fosforilacin oxidativa, se conoce como acoplamiento
quimiosmtico.

En esta representacin de la cadena respiratoria, las molculas que se indican: flavina


mononucletido (FMN), coenzima Q (CoQ) y los citocromos b, c, a y a3, son los principales
transportadores de electrones de la cadena. Al menos otras nueve molculas transportadoras
funcionan como intermediarias adems de las que se muestran aqu. Los electrones
transportados por la NADH entran en la cadena cuando son transferidos a la FMN, que
entonces se reduce (azul). Casi instantneamente, el FMN cede los electrones al CoQ. El FMN
vuelve as a su forma oxidada (naranja), listo para recibir otro par de electrones, y la CoQ se
reduce. CoQ entonces pasa los electrones al siguiente aceptor, y vuelve a su forma oxidada. El
proceso se repite en sentido descendente. Los electrones, al pasar por la cadena respiratoria,
van saltando a niveles energticos sucesivamente inferiores. Los electrones que son
transportados por el FADH2 se encuentran en un nivel energtico ligeramente inferior que los
del NADH. En consecuencia, entran en la cadena de transporte ms abajo, a la altura de la
CoQ. Los electrones finalmente son aceptados por el oxgeno, que se combina con protones
(iones hidrgeno) en solucin, y forman agua.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Los electrones que son transportados por el FADH2 se encuentran en un nivel energtico
ligeramente inferior que los del NADH. En consecuencia, entran en la cadena de transporte
ms abajo, a la altura de la CoQ. Los electrones finalmente son aceptados por el oxgeno, que
se combina con protones (iones hidrgeno) en solucin, para formar agua.

LAS VAS ANAEROBIAS: En ausencia de oxgeno, el cido pirvico puede seguir una de
varias vas llamadas anaerbicas. Veremos brevemente dos de las vas anaerbicas ms
interesantes. El cido pirvico puede convertirse en etanol (alcohol etlico) o en uno de varios
cidos orgnicos diferentes, de los cuales el cido lctico es el ms comn.

En el primer paso de la gluclisis se desprende dixido de carbono. En el segundo, se oxida el


NADH y se reduce el acetaldehdo. La mayor parte de la energa qumica de la glucosa
permanece en el alcohol, que es el producto final de la secuencia. Sin embargo, regenerando
NAD+, estos pasos permiten que la gluclisis contine, con su pequeo, pero en algunos casos
vitalmente necesario, rendimiento de ATP.

Pasos por los cuales el cido pirvico, formado en la gluclisis, se convierte anaerbicamente
en etanol.

El cido lctico se forma a partir del cido pirvico, por accin de una variedad de
microorganismos y tambin por algunas clulas animales cuando el O2 es escaso o est
ausente.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Reaccin enzimtica que produce cido lctico anaerbicamente a partir de cido pirvico en
las clulas musculares.

En el curso de esta reaccin, el NADH se oxida y el cido pirvico se reduce. Las molculas de
NAD+ producidas en esta reaccin se reciclan en la secuencia glucoltica. Sin este reciclado, la
gluclisis no puede seguir adelante. La acumulacin de cido lctico da como resultado dolor y
fatiga muscular.

OTRAS VAS CATABLICAS Y ANABLICAS:

La mayora de los organismos no se alimentan directamente de glucosa. Otros alimentos son


degradados y convertidos a molculas que pueden entrar en esta va central.Dado que muchas
de estas sustancias, como las protenas y los lpidos, pueden degradarse y entrar en la va
central, se puede suponer que es posible el proceso inverso, o sea, que los distintos
intermediarios de la gluclisis y del ciclo de Krebs pueden servir como precursores para la
biosntesis. Y as es. Sin embargo, las vas biosintticas, aunque son semejantes a las
catablicas, se diferencian de ellas. Hay enzimas diferentes que controlan los pasos y hay
varios pasos crticos del anabolismo que difieren de los de los procesos catablicos.
Para que ocurran las reacciones de las vas catablica y anablica debe haber un suministro
constante de molculas orgnicas que puedan ser degradadas para producir energa y deben
estar presentes molculas que sern los ladrillos de construccin. Sin el suministro de estas
molculas, las vas metablicas dejan de funcionar y la vida del organismo finaliza. Las clulas
hetertrofas (incluyendo a las clulas hetertrofas de los vegetales, tales como las clulas de
las races) dependen de fuentes externas, especficamente de clulas auttrofas, para obtener
las molculas orgnicas que son esenciales para la vida. Las clulas auttrofas, por el
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

contrario, son capaces de sintetizar monosacridos a partir de molculas inorgnicas simples y


de una fuente externa de energa. Luego, estos monosacridos se utilizan no slo para
suministrar energa, sino tambin como sillares de construccin para la variedad de molculas
orgnicas que se sintetizan en las vas anablicas. Las clulas auttrofas ms importantes, sin
lugar a dudas, son las clulas fotosintticas de las algas y las plantas que capturan la energa
de la luz solar y la utilizan para sintetizar las molculas de monosacridos de las cuales
depende la vida en este planeta.
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Vas principales del catabolismo y el anabolismo en la clula.

3. MATERIALES Y EQUIPOS

Equipos materiales Reactivos


Matraz Agua destilada
Tapon de jebe con dos agujeros. Hidroxido de sodio
Vasos precipitados Levadura
pHmetro Enzimas
Bureta
Bageta
Matraz aforado de 50 ml
pipeta graduada de 5,0 ml
pipeta graduada de 1,0 ml
Tubo de ensayo
Termmetros

4. METODOLOGIA
El alumno tendr que aplicar el mtodo experimental para el desarrollo de esta practica as
como el mtodo analtico para obtener los resultados citados.

5. DESCRIPCION DE LA PRACTICA
Laboratorio 09-01
1. Armar los instrumentos como el diseo:
Preparacin de un fermento sin aire. Preparacin de un fermento con aire
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

2. Aplicar en cada envase un caldo de cultivo conformado por:


Azcar 200 g.
Agua 500 ml.
Levadura 50 gr.
3. Controlar los parmetros de pH, temperatura, acidez.
4. Por espacio de 6 dias
5. Apreciar los resultados y analizar.
6. RESULTADOS Y DISCUSION

Horas de % Apariencia
Dia/ fecha pH Acidez T Observaciones
monitoreo azucar del caldo
Inicial: Hora:
24
24
12
12
12
12
12
12
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8

7. CONCLUSIONES Y RECOMENDACUONES
CURSO DE BIOQUIMICA
Ing.. Marleni Bautista Espinoza

Colocar sus apreciaciones asi mismo como va cambiando segn el crecimiento de las
levaduras a travez del experimento.

8. BIBLIOGRAFIA
Miller D.D. 2001. Qumica de Alimentos, Manual de Laboratorio. Limusa Wiley, Mxico

9. CUESTIONARIO
1. Por qu el cido pirvico se convierte en cido lctico slo para volver a convertirse en
cido pirvico?
2. Cmo extraen energa de las grasas o de las protenas?