PREPARACION DE MONTAJE:

PRESERVACIN DE MATERIAL VEGETAL: La preservacin permite conservar

las estructuras externas e internas. Los mtodos ms comnmente
utilizados son: la preservacin en hielo, la preservacin de las muestras
envueltas en papel hmedo y colocadas en bolsas plsticas, y el secado. De
esta manera se pueden transportar las muestras hasta el laboratorio. Por
secado se pueden mantener: maderas, semillas, frutos secos, material para
herbario, hongos y algas macroscpicos.
TRATAMIENTO DE MATERIAL PARA MICROSCOPIO COMPUESTO:
1.- FIJACIN: La fijacin tiene como objeto matar las clulas lo ms
rpidamente posible para producir el mnimo de alteraciones en las
estructura. Para la fijacin del material a fijar, dependiendo de su tamao,
de los estudios que se quieran realizar y del fijador, se coloca completo o
cortado en fragmentos dentro del fijador, guardando una relacin de 10:1,
fijador: material. Existen diferente tipos de fijadores, de los cuales los ms
comnmente utilizados para las plantas superiores son el alcohol 70% y el
FAA, que es una mezcla de 90 ml de alcohol 70%, 5 ml de cido actico y 5
ml de formol al 4%. Para las algas se utiliza como fijador una mezcla de
agua de mar y formol al 5 %; para los hongos se utiliza una solucin acuosa
de glicerina al 10% a la que se le aaden unas gotas de fenol. El tiempo de
fijacin depende del material y del fijador, aunque, por lo general, se
recomienda un mnimo de 24 horas. El uso de material de herbario para
estudios anatmicos amerita su rehidratacin, para que recupere su forma y
turgidez. La rehidratacin puede lograrse calentando el material en agua o
utilizando una serie de alcoholes en concentraciones descendentes, esto es,
desde alcohol 100% hasta agua.
2.- CORTES: Los cortes de material fresco o fijado pueden ser hechos a
mano o con la ayuda de un instrumento especial denominado micrtomo. Si
se usa material fijado hay que lavarlo previamente para eliminar el fijador y
pasarlo a alcohol al 50% donde debe ser mantenido. Si el material fijado no
tiene suficiente consistencia, debe ser incluido dentro de algn material
auxiliar rgido que facilite hacer los cortes. Este material auxiliar puede ser:
anime, parafina o resinas epxicas, dependiendo del mtodo y los objetivos
del estudio realizar. Las inclusiones en parafina o resinas requieren de
procesos laboriosos. Cuando se necesitan cortes rpidos, a mano o con
micrtomo, de materiales fijados o sin fijar, el anime resulta un material de
inclusin o soporte muy til. Debido a las caractersticas del material
vegetal, si se quiere estudiar solamente los tipos de tejidos, se pueden
preparar los denominados cortes esquelticos, en los que se preservan
solamente las estructuras de las paredes y se destruyen los contenidos
celulares. Para ello, una vez realizados los cortes, se transfieren a una
solucin de cloro comercial o leja durante 10-15 minutos y posteriormente
se lavan para eliminar el cloro.
3.- MACERADOS: Para estudiar las clulas completas se recurre a los
mtodos de maceracin que disuelven las lminas que mantiene unidad las
clulas y las dejan ms o menos libres. Para ello se utilizan soluciones de
enzimas degradativas o cidos minerales fuertes en solucin.
4.- COLORACIN: Para la buena observacin del material se requiere teirlo
o colorearlo. Los colorantes utilizados son muy variados y pueden ser
preparados en solucin acuosa o alcohlica, y empleados como colorantes
simples o como mezclas de colorantes. La coloracin obtenida puede ser
monocromtica, cuando se tie todo de un solo color, o metacromtica,
cuando empleado un solo colorante, los tejidos se tien de diferentes
colores, dependiendo de la reaccin de cada tejido con el colorante. Los
colorantes pueden ser: generales, cuando tien todos los tejidos sin
distincin, o especficos, cuando tien un determinado tejido dependiendo
de la reaccin qumica que ocurre entre el colorante y el tejido. 5.-
MONTAJE: Una vez teido el material se debe colocar en una lmina
portaobjetos y protegerlo con un cubreobjetos, para poder ser observado
con el microscopio. El montaje puede ser permanente, obtenindose
lminas que tienen una duracin indefinida o, semipermanente, cuando se
preparan lminas de corta duracin. Una lmina terminada debe ser
debidamente identificada, para ello se coloca una etiqueta en la cual se
indica: el nombre de la planta, el rgano, el tipo de corte, la coloracin
empleada, el nombre de quien la realiz y la fecha.
TCNICA PARA CORTAR A MANO SECCIONES TRANSVERSALES (C.T.)
Y LONGITUDINALES (C.L.) DE MATERIAL FRESCO Y FIJADO:
1. Prepare una hojilla de afeitar, partindola por la mitad y limpindole toda
la grasa. Tome una cpsula de petri con un poco de agua. Tenga a mano sus
pinzas o agujas de diseccin y las lminas (portaobjetos y cubreobjetos) que
va a necesitar.
2. Seleccione el material a cortar, seprelo y mantngalo hmedo.
3. Si se trata de hojas o material laminar, puede ser doblado para darle
consistencia. Si se trata de tallos puede ser cortado completo o en
secciones.
4. Si el material es blando o sin consistencia, proceda de la siguiente
manera:
a. corte dos tiras (1x3 cm) de una lmina de anime de
aproximadamente 3 mm de espesor.
b. coloque el material a cortar orientado adecuadamente entre los
dos pedazos de anime y humedzcalo con agua.
c. agarre firmemente el material con una mano y entre los dedos
ndice y pulgar, y con la otra mano tome la hojilla (sus manos funcionarn
como un micrtomo). Realice los cortes deslizando la hojilla sobre el
material en forma horizontal.
d. coloque los cortes en un recipiente con agua, y con la ayuda de un
pincel, pinza o palitos de bamb o de naranja, elimine los pedazos de
anime. Si los cortes no son utilizados de inmediato transfiralos a un frasco
con alcohol de 70%.
TCNICAS DE TINCION Y MONTAJE SEMIPERMANENTE:
COLORANTES: Azul de toluidina o azul de metileno al 1% en solucin
acuosa.
MEDIO DE MONTAJE: Glicerina al 30% en solucin acuosa.
Mtodo:
1. En un vidrio de reloj, una piedra de toque o directamente sobre la lmina
portaobjetos, coloque una gota de colorante.
2. Con la ayuda de un pincel o un palito coloque los cortes en el colorante y
djelos durante un minuto. 3.
Lave los cortes para eliminar el exceso de colorante.
4. En la lmina limpia, coloque una gota de glicerina fenolada y encima los
cortes cuidando que no se doblen.
5. Cubra con una lmina cubreobjetos, teniendo cuidado que no entre aire.
6. Elimine con la ayuda de un papel secante el exceso de glicerina.
7. Selle los bordes con pintura de uas transparente.
8. Identifique la lmina.
COLORACIN Y MONTAJE PERMANENTE: (punto informativo)
COLORANTES: Azul de toluidina y azul de metileno al 1% en solucin
alcohlica al 70%.
MEDIOS DE MONTAJE: Blsamo de Canad, Permount, Merckoglass o
cualquiera de las resinas que se utilizan para este fin. Estas resinas no son
miscibles con el agua, ni con el alcohol, slo en solventes como el xilol.
Mtodo: Para realizar montajes permanentes los cortes deben estar
completamente deshidratados utilizando para ello una serie o batera de
alcohol ascendente, posteriormente ser clarificados en xilol.
1. Una vez realizados los cortes y limpios de los restos del material de
soporte, transfiralos a una solucin de alcohol 70%.
2. En una piedra de toque o vidrio de reloj, ponga unas gotas de colorante.
3. Coloque los cortes en el colorante durante unos dos minutos.
4. Deshidrate los cortes, pasndolos sucesivamente por alcohol de 80, 90,
95 y 100%, realizando 3 cambio para el alcohol de 100%.
5. Transfiera luego los cortes a una mezcla de alcohol-xilol, 1:1, y
seguidamente realice tres cambios con xilol puro.
6. Sobre un portaobjetos limpio y seco coloque una gota de xilol, y ponga los
cortes en ella.
7. Ponga una gota del medio del montaje sobre el corte. No permita en
ningn momento que el corte se seque.
8. Coloque la laminilla cubreobjetos sobre la preparacin sin que entre aire.
9. Presione la laminilla y deje secar la preparacin.
10. Limpie la preparacin utilizando xilol e identifquela.

Clula Vegetal
Una clula vegetal es un tipo de clula eucariota de la que se componen
muchos tejidos de los vegetales. A menudo, es descrita con los rasgos de
una clula del parnquima asimilador de una planta vascular. Pero sus
caractersticas no pueden generalizarse al resto de las clulas de una
planta, meristemticas o adultas, y menos an a las de los muy diversos
organismos imprecisamente llamados vegetales.
Las clulas adultas de las plantas terrestres presentan rasgos comunes,
convergentes con las de otros organismos ssiles, fijos al sustrato, o
pasivos, propios del plancton, de alimentacin osmtrofa, por absorcin,
como es el caso de los hongos, pseudohongos y de muchas algas. Esos
rasgos comunes se han desarrollado independientemente a partir de
protistas unicelulares fagtrofos desnudos (sin pared celular). Todos los
eucariontes osmtrofos tienden a basar su solidez, sobre todo cuando
alcanzan la pluricelularidad, en la turgencia, que logran gracias al desarrollo
de paredes celulares resistentes a la tensin, en combinacin con la presin
osmtica del protoplasma, la clula viva. As, las paredes celulares son
comunes a los hongos y protistas de modo de vida equivalente, que se
alimentan por absorcin osmtica de sustancias orgnicas, y a las plantas y
algas, que toman disueltas sales minerales del medio y realizan la
fotosntesis. Y tambin cabe agregar que no tienen centriolos en su interior.

ORGANIZACIN ESTRUCTURAL CELULA VEGETAL:

Las clulas adultas de las plantas se distinguen por algunos rasgos de otras
clulas eucariotas, como las clulas tpicas de los animales o las de los
hongos, por lo que son descritas a menudo de manera especfica. Suele
describirse con los rasgos de una clula del parnquima asimilador de una
planta vascular; pero sus caractersticas no pueden generalizarse sin ms al
resto de las clulas, meristemticas o adultas, de una planta, y menos an a
las de los muy diversos organismos llamados imprecisamente vegetales. La
clula vegetal es aquella que se muestra en las plantas y que las ayuda a
vivir.
ORGANELOS DE LA CELULA VEGETAL Y SU FUNCION:
La clula vegetal posee 17 tipos de orgnulos diferentes con funciones
especializadas:
La Membrana plasmtica, la mitocondria, el retculo endoplasmtico rugoso
(RER), el retculo endoplasmtico liso (REL), la envoltura nuclear, el
nucleolo, el ncleo, el complejo de Golgi, el citoesqueleto, el glioxisoma, la
pared celular, los plasmodesmos, la vacuola, los tilacoides, los grnulos de
almidn, los ribosomas y los cloroplastos
FUNCION DE CADA UNO DE LOS ORGANELOS:
1.Membrana plasmtica: Separa la clula de su entorno; regula el
movimiento de materiales hacia dentro y fuera de la clula.
2.Mitocondria: Oxida combustible para oxidar ATP.
3.Retculo endoplasmtico rugoso (RER): Sntesis de protenas
4.Retculo endoplasmtico liso (REL): Sntesis de lpidos; metabolismo de
frmacos.
5.Envoltura nuclear: Segrega la cromatina (ADN + Protena) del citoplasma.
6.Nucleolo: Sntesis de ARN ribosmico.
7.Ncleo: Contiene los genes (la cromatina).
8.Complejo de Golgi: Procesa, empaqueta y distribuye protenas a otros
orgnulos para su exportacin.
9.Pared celular: Confiere forma y rigidez; protege a la clula del
hinchamiento osmtico.
10.Citoesqueleto: Soporte estructural de las clulas; facilita el movimiento
de los orgnulos.
11.Glioxisoma: Contiene los enzimas del ciclo del glioxilato.
12.Ribosomas: Sntesis de protenas.
13.Plasmodesmos: Permiten el paso entre dos clulas vegetales.
14.Vacuola: Degrada y recicla macromolculas y almacena metabolitos.
15.Tilacoides: Sintetizan el ATP con aprovechamiento de la energa lumnica.
16.Grnulos de almidn: Almacn temporal de glcidos, productor de la
fotosntesis.
17.Cloroplasto: Almacena la energa solar, produce ATP y glcidos..