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Santarm, Par
Novembro, 2016
FERNANDA DE FIGUEREDO PINHEIRO
Santarm, Par
Novembro, 2016
ii
FOLHA DE APROVAO
iii
AGRADECIMENTOS
iv
EPGRAFE
Clarice Lispector
v
RESUMO
vi
ABSTRACT
The fishing industry has considerably grown in recent decades worldwide. In Brazil, both
aquaculture and pisciculture have contributed to the increased availability of fish in the
market. So, fish-farming has been significantly developed in Brazil, once it has the ideal
conditions of fish production and it is a wide consumer market. Attempting to supply
constant demand, fish-farming has invested in hybridization to create fish which better
adapts to climate and environmental specificities. Those hybrids are produced from
Colossoma macropomum, Piaractus mesopotamicus e Piaractus brachypomus. This
work aimed to genetically identify pure species and hybrids cultivated at Tucuru
Hydroelectric Plant lake. Meantime, this work also discusses the importance of proper
genetic identification of species bred in captivity. In this study, using the PCR Multiplex
gene -tropomiosina, the identification has shown that the analyzed species were pure.
The proper identification of pure and hybrid species is very important to fish industry for
hybrids are produced to fit some market requirements. Furthermore, one must bear in
mind the risks of dealing with hybrids individuals to local biodiversity.
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LISTA DE FIGURAS
Figura 1: Vista lateral de um exemplar adulto de Colossooma macropomum. Fonte: Aguiar (2012). .......18
Figura 2: Vista lateral de um indivduo juvenil de Piaractus brachypomus. Fonte: Aguiar (2012). ............19
Figura 3: Vista lateral de um indivduo adulto de Piaractus Mesopotamicus. Fonte: Aguiar (2012). .........21
Figura 4: Vista lateral de tambacu e de pacu. Fonte: Dairiki et al. s/d........................................................24
Figura 5: Vista lateral de um exemplar de tambatinga. Fonte: Paula (2009). ............................................24
Figura 6: Local de coleta das amostras de tambaquis. Fonte: Google Maps (2016). ................................31
Figura 7: Gel de Agarose (2%) corado com GelRed, mostrando o resultado da PCR Multiplex do gene -
Tropomiosina. ...............................................................................................................................................34
viii
LISTA DE TABELAS
Tabela 1: Principais espcies de peixes produzidas no Brasil em tonelada nos anos de 2007 e 2009. ....16
Tabela 2: Produo de pescado (t) da aquicultura continental brasileira por espcie entre 2008 e 2010.
Fonte: MPA, 2010. .......................................................................................................................................16
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LISTA DE ANEXOS
x
SUMRIO
1. INTRODUO ........................................................................................................... 12
1.1. Reviso Bibliogrfica ............................................................................................ 14
1.1.1. A piscicultura no Brasil................................................................................... 14
1.1.2. Aspectos biolgicos de cultivo de peixes redondos (tambaqui, pirapitinga e
pacu) ........................................................................................................................ 17
1.1.3. Hibridizao entre o tambaqui, pirapitinga e pacu ......................................... 21
1.1.4. A problemtica da hibridizao de espcies .................................................. 25
1.1.5. Gentica e a identificao de espcies comercializadas ............................... 27
2. OBJETIVOS ............................................................................................................... 30
2.1. Objetivo geral ....................................................................................................... 30
2.2. Objetivos especficos ........................................................................................... 30
3. MATERIAIS E MTODOS.......................................................................................... 31
3.1. Amostras .............................................................................................................. 31
3.2. Extrao de DNA ................................................................................................. 32
3.3. PCR Multiplex ...................................................................................................... 32
4. RESULTADOS ........................................................................................................... 34
4.1. PCR Multiplex ...................................................................................................... 34
5. DISCUSSES ............................................................................................................ 35
REFERNCIAS .............................................................................................................. 37
ANEXOS ........................................................................................................................ 44
ANEXO A Placa de Agarose .................................................................................... 44
xi
1. INTRODUO
12
que pode aprimorar as condies econmicas, sociais e ambientais de uma determinada
regio (OLIVEIRA, et al., 2012). Por ser um setor crescente, o consumo de peixes um
dos que mais cresce no Brasil, requerendo assim novos investimentos para suprir a
demanda do mercado (OSTRENSKY et al., 2008).
Na Regio Norte do Brasil, onde est situada a maior bacia hidrogrfica de todo
o mundo (JUNK, 1983; SIOLI, 1985), observa-se uma grande quantidade de espcies de
peixes. De cerca de 4500 espcies que ocorrem na regio Neotropical, 2000 espcies
so endmicas da Regio Norte segundo estudos feitos por Vari e Malabarba (1998) e
Reis et al. (2003). Nesse sentido, a pesca se configura como uma das mais importantes
atividades humanas na Regio Amaznica e com grande potencial para a piscicultura em
da riqueza hdrica (KUBITZA, 2015). Segundo o SUFRAMA (2003), a pesca na Amaznia
se configura como uma atividade extrativista, que sujeita seca e s cheias,
aumentando assim o preo do pescado. Na tentativa de minimizar esses efeitos, tem-se
investido significativamente na criao de peixe em cativeiro para melhor equilibrar a
oferta e a demanda no mercado.
O SUFRAMA (2003) ainda relata que na Regio Norte do Brasil o peixe a
principal fonte de abastecimento alimentar, por ser abundante a disponibilidade desse
produto. Entretanto, de acordo com esse rgo, nos anos recentes tem havido uma
rigidez maior em relao a quantidade ofertada, que tem elevado de sobremaneira o valor
do pescado na regio. Portanto, a piscicultura se apresenta como uma soluo positiva
para o abastecimento dessa importante fonte alimentar na regio (SUFRAMA, 2003).
Em linhas gerais, pode-se dizer que a piscicultura tem avanado em todo o
territrio brasileiro, na regio norte tambm no diferente (OSTRENSKY et al., 2008).
Essa expanso se deve questo da rentabilidade, que conseguida mediante o uso de
sistemas que fazem uso de raes balanceadas e de qualidade superior, causando
menor impacto ambiental. O visvel crescimento resulta do interesse de pequenos e
mdios produtores que querem que seu produto seja bem aceito no mercado. Na regio
Norte, o tambaqui (Colossoma macropomum), o pacu (Piaractus mesopotamicus) e seu
hbrido tambacu tem sido amplamente cultivado (PAULA, 2009).
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1.1. Reviso Bibliogrfica
14
aquicultura continental, segundo o Plano Estratgico da Embrapa. Quando se olha para
a porcentagem por regio geogrfica do Brasil, observa-se que as regies Sul (153.674t)
e Nordeste (134.292t) ocupam a primeira e segunda posio no ranking de produo,
respectivamente, e a regio Norte responsvel por cerca de 94.578 toneladas,
permanecendo assim no terceiro lugar da produo de aquicultura no Brasil.
Na Amaznia em geral, o consumo de peixe tende a ser muito maior do que a
mdia nacional, embora essa taxa seja tambm varivel a depender da Regio
Amaznica (IZEL et al., 2013). De um lado, segundo o Plano Estratgico da Embrapa
(2013), no Brasil, no ano de 2010, o consumo per capita de pescado foi de 9,75
quilogramas (kg). De outro, na Amaznia esse nmero de cerca de 135 kg, chegando
a 292 kg, por exemplo, no Alto do Solimes (IZEL et al., 2013).
Para satisfazer essa demanda, a indstria de pescado lana mo de diversas
espcies de peixes. As diferentes variedades de peixes cultivadas no Brasil variam
consideravelmente. A Tilpia (Oreochronis sp.) e o Tambaqui (Colossoma macropomum)
representa cerca de 67% de toda produo da piscicultura do pas, representando cerca
de 253.824 e 111.084 toneladas, respectivamente (IZEL et al., 2013). Entretanto, outras
espcies tambm participam com uma quantidade expressiva como o Pacu (Piaractus
mesopotamicus) e a Pirapitinga (Piaractus brachypomus), Matrinx (Brycon amazonicus),
Pirarucu (Arapaima gigas), Curimat (Prochilodus scrofa) e Tucunar (Cichla spp).
Adicionalmente, ainda h uma grande variedade de espcies hbridas, como o Tambacu,
obtidas a partir do cruzamento entre as diferentes espcies (uma fmea da espcie
Colossoma macropomum com o macho da Piaractus mesopotamicus) (IZEL et al., 2013).
Quando se olha para a piscicultura continental, observa-se que a produo de
tilpias ocorre principalmente nas regies Nordeste, Sul e Sudeste, enquanto a produo
de carpas est concentrada mais nas regies Sul e Sudeste. A produo de peixes
redondos, como o tambaqui e tambacu e o pacu se concentra mais nas regies Norte e
Nordeste (OSTRENSKY, et al. 2008).
Conforme a tabela 1 do Boletim Estatstico de Pesca e Aquicultura 2008-2009
(MPA, 2010), a produo de tilpia tem uma parcela significativa na produo pesqueira
do Brasil, seguida pela produo de carpa (Cyprinus carpio). A tabela mostra ainda a
tendncia brasileira concernente produo, que vem crescendo no decorrer dos anos.
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Tabela 1: Principais espcies de peixes produzidas no Brasil em tonelada nos anos de 2007 e 2009.
Fonte: MPA, 2010
Tabela 2: Produo de pescado (t) da aquicultura continental brasileira por espcie entre 2008 e
2010. Fonte: MPA, 2010.
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Sendo assim, pode-se observar que a tilpia, a carpa, o tambaqui, o tambacu e o pacu
so espcies ainda bastante presentes na produo brasileira de aquicultura e estes
dados se assemelham com os da piscicultura continental, j que as mesmas espcies
esto nas duas tabelas com valores muito prximos. Entretanto, chama-se a ateno
para outras espcies cultivadas, como Piau (Leporinus sp.), Tambatinga (espcie hbrida
a partir do cruzamento da fmea da espcie Colossoma macropomum e o macho da
espcie Piaractus brachypomus) e a Truta (Oncorhynchus mykis).
Embora o boletim do MPA (2010) traz uma grande variedade de peixes, Aguiar
(2012), tomando como base o relatrio da FAO (2009), argumenta que a explorao
pesqueira, especialmente na Amaznia, tende a se concentrar em poucas espcies, tais
como o tambaqui, o Surubim (Pseudoplatystoma sp.) e o Jaraqui (Semaprochilodus sp.),
colocando essas espcies em risco de sobreexplorao. De maneira geral, pode-se
observar que h um aumento da produo na aquicultura nacional devido ao cultivo das
espcies mais comuns mostradas na Tabela 1. Adicionalmente, h o cultivo de espcies
hbridas, principalmente o Tambacu, o Paqui e a Patinga, uma vez que so bem aceitos
no mercado (cf. AGUIAR, 2012).
17
O peixe Colossooma macropomum (Figura 1), comumente conhecido como
tambaqui, nativo da bacia dos rios Amazonas, Orinoco e afluentes. Essa espcie pode
alcanar at 100 cm de comprimento e ter peso acima de 30kg. Segundo Arajo-Lima e
Goulding (1998), na natureza o tambaqui atinge sua maturidade sexual por volta do
quarto ou quinto ano de vida. Entretanto, quando criado em cativeiro, esse peixe atinge
sua maturidade sexual por volta do terceiro ano de vida.
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Em relao ao cultivo de tambaqui, segundo dados do IBAMA (2005, 2007),
excetuando os trs estados da Regio Sul, o cultivo dessa espcie de peixes ocorre em
praticamente em todos os outros estados do pas. A vantagem de criao do tambaqui
se d por causa do seu excelente potencial para a produo intensiva, isto, pelo bom
potencial de crescimento, alta produtividade, resistncias a baixos nveis de oxignio
dissolvido e pela utilizao de alimentos, conforme dados dos estudos de Arajo-Lima e
Gouldin (1998).
A produo brasileira de tambaqui apresenta um contnuo crescimento,
passando de 8 mil toneladas em 1994 e atingindo a cifra de 46 mil toneladas em 2009.
Atualmente, cerca de 20% da piscicultura continental oriunda da criao de tambaqui.
Sua produo realizada em viveiros escavados ou semiescavados, com fundo de argila.
Segundo Marinho-Pereira et al. (2009), esse mtodo permite muito mais vantagens do
que o mtodo de barragem, por ter uma maior produo de biomassa por unidade de
volume, riscos baixos de patologias, melhor controle da gua, entre outros.
J a pirapitinga, Piaractus brachypomus (Figura 2), outra espcie de peixe que
tambm tem seu habitat nas bacias Amaznica e Araguaia-Tocantins, podendo atingir
at 80 cm e pesar cerca de 20 kg. Sobrinho et al. (1984) afirma que esta a nica espcie
do gnero que encontra na Bacia Amaznica.
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Kubitza (2004) descreve a Pirapitinga como o terceiro maior peixe de escama da
Amaznia, ficando atrs apenas do Pirarucu (Arapaima gigas) e o tambaqui. Fernandes
et al (2004) destaca que a pirapitinga uma espcie onvora, se alimentando tanto de
nutrientes vindas de fonte animal quanto vegetal, como pequenos peixes, frutas e
sementes. Essa espcie tem crescimento rpido e resiste a elevadas temperaturas, ao
manuseio, a enfermidades e, assim como o tambaqui, a baixos nveis de oxignio diludo
na gua. Caracteristicamente, o Pirapitinga possui corpo romboidal, que alto e
comprido, tem colorao cinza arroxeado uniforme nos adultos e cinza claro nos jovens;
estes ainda podem apresentar manchas amareladas. Geralmente, os peixes dessa
espcie entram em ciclo reprodutivo por volta do terceiro ou quarto ano de vida, cuja
desova acontece entre os meses de novembro e fevereiro.
Do ponto de vista da produo em cativeiro, a pirapitinga tem vantagens
interessantes como se adaptar aos mais diversos tipos de rao industrializada, por ter
altas taxas de eficincia alimentar, crescer uniforme e aceleradamente e essa espcie
bem aceita no mercado (SILVA et al. 1986; VSQUEZ-TORRES, 2005).
Outra espcie de peixe redondo, bem aceita no mercado o Pacu. Como mostra
Petrere (1989), o Piaractus mesopotamicus (Figura 3), uma espcie nativa encontrada
nas bacias do Rio Paran, Paraguai e Uruguai e tem sua presena mais marcante nos
rios da regio Centro-Oeste, especialmente no Pantanal Mato-Grossense. Por se adaptar
alimentao artificial, seu cultivo pode ser observado tambm na regio Sudeste do
Brasil (BICUDO, 2008). De acordo com Urbinati e Gonalves (2005), essa espcie
extremamente importante para a piscicultura porque apresenta um elevado crescimento,
rstico quanto ao manejo e tambm bastante aceito no mercado consumidor.
20
Figura 3: Vista lateral de um indivduo adulto de Piaractus Mesopotamicus. Fonte: Aguiar
(2012).
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e volta-se, principalmente, quelas espcies que so essenciais para a aquicultura
(PAULA, 2009; ALVES et al., 2014).
Assim, a hibridizao tem sido utilizada em piscicultura em diversas espcies de
peixes com o objetivo de conseguir indivduos com caractersticas superiores quelas
dos parentais. Com esse processo, tem-se conseguido peixes que tem alta taxa de
crescimento, com qualidade superior da carne, que so resistentes a doenas e com
diversas caractersticas que os tornem mais proveitosos para o cultivo. Segundo o IBAMA
(2008), no ano de 2006, o Brasil produziu quase 14 mil toneladas de pescado hbrido,
cujos representantes mais fortes so a Tambatinga e o Tambacu. O cultivo desses peixes
se d em razo de eles terem crescimento rpido em cativeiro, hbito alimentar
diversificado, rusticidade e carne de boa qualidade (KUBITZA et al., 2007).
Considerando que o Tambaqui, o Pacu e o Pirapitinga no se reproduzem
naturalmente em cativeiro, os estudos de Crepaldi et al. (2006) e Zaniboni e Weingartner
(2007) mostram que necessrio induzir a desova por meio da aplicao de hormnios
naturais presentes na hipfise de peixes maduros. Esse procedimento tem utilizado,
principalmente, o extrato da hipfise de carpa. Em relao s fmeas, o procedimento de
hipofisao acontece em duas etapas com intervalos de 8 a 12 horas, sendo que na
primeira aplicao a concentrao do extrato de hipfise de 0,5 mg por kg e segunda
entre 4,5 e 5 mg/kg. Para os machos, a aplicao feita apenas uma vez. Geralmente,
levando em considerao a temperatura da gua, a desova acontece entre 8 e 10 horas
depois da aplicao da segunda dose (KUBITZA et al., 2004).
Assim, na piscicultura brasileira, o tambaqui, o pacu e a pirapitinga, juntamente
com seus hbridos, tambacu, tambatinga e patinga, so espcies mais cultivadas por uma
srie de fatores que as tornam mais produtivas e de fcil manuseio; alm da converso
alimentar, alta produtividade, resistncia a patologias, entre outros (BORGES, 2013).
O tambacu (Figura 4) um peixe de espcie hbrida, que resulta do cruzamento
de uma fmea do Colossoma macropomum com um macho da espcie Piaractus
mesopotamicus (BALDISSEROTTO; GOMES, 2005). No geral, o tambacu mistura
caractersticas, tais como a resistncia ao frio e a rusticidade do pacu e a maior taxa de
crescimento do tambaqui. uma espcie que tem grande importncia para a piscicultura
23
brasileira, pois apreciado como peixe para pesca esportiva e tambm pelo fato de
ganhar peso e crescer rapidamente (BORGES, 2013; DAIRIKI et al., S/D).
24
Silva-Acua e Guevara (2002) mostraram que a tambatinga tem facilidade para
ganhar peso comercial em relativo espao de tempo, mesmo que a quantidade de
protena da dieta tenha nveis bem baixos. Dessa forma, esse hbrido se mostra
interessante para a aquicultura j que h uma economia na quantidade de rao
necessria para a criao. Alm disso, apesar dos estudos serem poucos a respeito
dessa temtica, os piscicultores da regio Norte preferem a tambatinga porque apresenta
desempenhos produtivos mais altos do que as outras espcies.
25
espcies exticas, isto , no pertencem naturalmente quela determinada rea e
geralmente so introduzidos intencional ou acidentalmente. Essa introduo objetiva-se,
muitas vezes, o aumento da produo local, sem nenhuma reflexo acerca do uso dessas
espcies fora de seu habitat natural (SHAFLAND; LEWIS, 1984; ALVES et al., 2014).
Geralmente, no h os cuidados necessrios para prevenir riscos futuros. Seguindo a
lgica do mercado consumidor que aumenta cada vez mais a demanda, as espcies
hbridas so introduzidas visando apenas o aumento dessa produo (SHELTON;
ROTHBARD, 2010).
Como se tem notado, apesar da introduo de espcies hbridas visando o
aumento da produo de pescado, a sua sustentabilidade pode ficar comprometida. De
um lado, a domesticao de espcies nativas algo relativamente novo e, por isso, a
maior parte da produo resulta de espcies silvestres. De outro, a produo sem
controle de hbridos tem pontencializado a contaminao gentica dos planteis que
formam os reprodutores. Alm disso, Alves et al. (2014) mostram que os reprodutores
hibridizados, com o passar do tempo, no conseguem mais garantir a heterose desejada
das espcies parentais. Por no haver uma correta identificao da hibridizao, a
produo legtima de espcies puras fica limitada. A domesticao de espcies nativas
s pode acontecer mediante o sucessivo cruzamento entre a mesma espcie objetivando
conseguir as caractersticas desejadas para a piscicultura. Nesse sentido, a maior
dificuldade apresentada a domesticao das espcies nativas, j que a produo em
aquicultura fica dependente das espcies exticas e hbridas, que podem trazer danos
ao meio ambiente e at mesmo as matrizes do plantel.
Segundo Chevassus (1983), hbridos de peixes podem ser completamente
estreis ou possuir gnadas sexuais, que maturam normalmente em ambos os sexos.
No caso de hbridos frteis, pode haver contaminao gentica do ambiente natural ou a
competio de espao e alimento com as espcies parentais (BARTLEY et al. 2001).
Desse modo, Epifanio e Nielsen (2001) argumentam que pode acontecer a extino local
dos estoques naturais. Adicionalmente, a hibridizao ainda coloca outro problema que
a utilizao errnea dos reprodutores, que produzem hbridos de segunda gerao e
tambm o retrocruzamento com as espcies parentais, que pode contaminar as matrizes
e diminuir a qualidade da produo.
26
Outro problema que pode surgir o escape de indivduos hbridos e este um
dos principais meios que dispersam espcies exticas. Toledo-Filho et al. (1992)
mostram que a hibridizao tem um risco e, por essa razo, as estaes de criao
devem ter um controle rigoroso e os autores pontuam que as espcies hbridas no
devem ser distribudas para as pisciculturas particulares onde existem populaes
naturais de parentais, por haver poucos estudos sobre a hibridizao das espcies
nativas brasileiras.
Considerando a gentica, Aguiar (2012) enfoca que as populaes de cativeiros
podem ser diferentes das populaes selvagens em razo das presses seletivas. Nesse
sentido, quando h interao entre os hbridos e as espcies nativas, pode haver um
impacto negativo nas populaes selvagens, aumentando a competitividade e reduzindo
as populaes nativas. Logo, deve-se evitar as formas de escape ou liberaes
intencionais de espcies hbridas de maneira que no interferira de modo irreversvel nas
populaes nativas ou silvestres.
Assim, com o intuito de aumentar a produo, h o uso recorrente da hibridizao
artificial interespecfica. Entretanto, tal hibridizao oferece srios riscos tanto para as
populaes naturais quando para as cultivadas, pois os indivduos resultantes desse
processo podem ser estreis ou apresentar um grau de esterilidade muito baixo, que
ocasiona a reduo demogrfica. Adiciona-se a isso que pode haver tambm as perdas
das caractersticas adquiridas entre uma gerao e outra e at mesmo a extino dessas
espcies. Apesar do uso da hibridizao ser frequente no Brasil, h uma grande
preocupao de que ocorra perda de variabilidade gentica nas populaes naturais e
nas cultivadas.
27
tambaqui, pois identificar geneticamente e conhecer a variabilidade gentica dos
estoques da aquicultura so de grande relevncia para o correto manuseio das espcies.
Liu e Cordes (2004) argumentam que h uma variedade muito grande de marcadores
moleculares, tais como Aloenzinas, DNA mitocondrial, RFLP, RAPD, AFLP,
microssatlites, SNP e marcadores EST.
Consegue-se identificar os hbridos interespecficos, que so geralmente
morfologicamente indistinguveis das espcies parentais, atravs de marcadores
genticos nucleares e tambm mitocondriais (SCRIBNER et al., 2001; HASHIMOTO,
2008; PUIGCERVER et al., 2007). Para que a identificao de hbridos e puros seja
devidamente feita de modo correto, utiliza-se os marcadores nucleares ou marcadores
mendelianos, pois, segundo Anderson e Thompson (2002), eles so de origem biparental
e que a primeira gerao heterozigota para todos os loci com alelos em populao
especfica, por isso eles so indispensveis para a correta identificao dos indivduos
hbridos. Para complementar a identificao, pode-se lanar mo do teste que utiliza o
DNA mitocondrial, que de origem materna e serve para indicar qual a direo a
hibridizao est seguindo (RHYMER; SIMBERLOFF, 1996).
Nos anos recentes, tem-se utilizado uma variante da PCR tradicional, que a
PCR Multiplex. Segundo Hashimoto et al (2009), esta tcnica foi desenvolvida na UNESP
Bauru e, primeiramente, tinha o objetivo de identificar os hbridos entre as espcies
Leporinus macrocephalus e L. elongatus. A PCR Multiplex funciona utilizando primes
espcie-especfica para gene -tropomiosina do DNA nuclear. Aguiar (2012) pontua que
a PCR Multiplex permite que duas ou mais sequencias podem ser amplificadas com mais
de um par de primes e desde que foi descrita em 1988 tem sido utilizada para diversos
fins por ser de execuo rpida (MARKOULATOS, et al., 2002).
Markoulatos et al. (2002) que o sucesso dessa tcnica depende de uma srie de
fatores, tais como a concentrao relativa dos primes, concentrao do tampo da PCR,
o balano entre o cloreto de magnsio e a concentrao de desoxinucleotdeos,
temperatura dos ciclos, quantidade de DNA molde e da Taq polimerase. Segundo Aguiar
(2012), se esses fatores estiverem devidamente equilibrados, pode-se conseguir que a
reao tenha uma otimizao adequada, j que o equilbrio parece ser a principal
dificuldade do sucesso dessa tcnica. Para o tambaqui, a PCR Multiplex teve de ser
28
adaptada. O estudo empreendido por Cunha (2010) para a identificao de indivduos de
tambaqui puros e hbridos mostrou excelente sucesso, mesmo quando a identificao
realizada pelos piscicultores era discordante.
Para a anlise da variabilidade gentica, o DNA mitocondrial tem sido altamente
utilizado para verificar o grau de divergncia gentica, estudar a estrutura gentica, a
biogeografia, entre outros. No caso dos vertebrados, as sequncias do DNA mitocondrial
possuem geralmente somente uma regio controle, no codificante, que responsvel
por iniciar a replicao, 13 regies codificantes de polipeptdeos, 22 RNAs
transportadores e dois RNAs ribossmicos.
Para Aguiar (2012), de um lado, a maioria dos estudos para a identificao de
Colossoma macropomum na Bacia Amaznica tem mostrado que h uma grande
diversidade halotpica, mas baixa diversidade nucleotdica nas sequncias da regio D-
loop do DNA mitocondrial. De outro, com o uso de DNA mitocondrial, a diversidade
gentica baixa. Esses estudos tambm apontam para comportamento dessa espcie,
como sendo uma espcie panmtica e migratria. Na natureza, o estudo feito por Santos
(2010) mostra que os tambaquis apresentam grande variabilidade gentica. Em relao
queles criados em cativeiro, Calcagnotto e Toledo-Filho (2000) e Castro (2008)
chegaram a concluses que a variabilidade gentica desses indivduos baixa.
Portanto, h as tcnicas que permitem a correta identificao dos indivduos
puros e os hbridos. Esses estudos so importantes porque, uma vez sabendo quais so
as espcies, os produtores podem melhor manusear, visando o aumento da produo,
bem como evitando formas de contaminao tanto dentro da rea da piscicultura quanto
na natureza.
29
2. OBJETIVOS
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3. MATERIAIS E MTODOS
3.1. Amostras
Figura 6: Local de coleta das amostras de tambaquis. Fonte: Google Maps (2016).
31
3.2. Extrao de DNA
32
As condies da reao foram otimizadas em desnaturao inicial 95 C por 5
minutos, seguido de 35 ciclos de desnaturao inicial a 95 C por 30 segundos,
anelamento a 59 por 30 segundos e extenso a 72 por 5 segundos (PCR) e extenso
final por 5 minutos (Ps PCR).
Os fragmentos de DNA gerados pela PCR multiplex, juntamente com ladder para
a determinao do tamanho dos fragmentos, foram aplicados em gel de agarose a 2%
corado com GelRed 10.000X diludo conforme recomendaes do fabricante, sendo
submetido eletroforese de 100 Volts durante 50 minutos e visualizado no
transiluminador de luz ultravioleta, e documentado por meio de cmera fotogrfica
CANON T3i.
33
4. RESULTADOS
Figura 7: Gel de Agarose (2%) corado com GelRed, mostrando o resultado da PCR Multiplex do gene -
Tropomiosina.
34
5. DISCUSSES
35
as populaes de peixes e, logo, so importantes para a compreenso da prpria
biodiversidade natural e das tcnicas de cultivo.
Aguiar (2012) argumenta que a tcnica de PCR Multiplex tem sido descrita como
uma ferramenta bem vantajosa, porque rpida, utiliza uma pequena parte de tecido de
animal vivo, seu baixo custo, etc. (HASHIMOTO et al., 2010; MAGNUSSEN et al., 2007).
Para este trabalho, a tcnica de PCR Multiplex foi altamente adequada para a
identificao das amostras coletadas no lago da Usina Hidreltrica de Tucuru, na Bacia
do Tocantins-Araguaia. Todas as amostras analisadas so de indivduos puros, no
sendo detectado nenhum indivduo hbrido entre os trinta espcimes coletados e
analisados para esta pesquisa. Os resultados obtidos mostram que nos tanques-rede
desta mesma regio parece no haver problemas graves em relao hibridizao, j
que no ocorreram espcies hbridas, embora talvez a utilizao de um nmero maior de
espcimes possa trazer concluses diferentes acerca das espcies da regio onde as
amostras foram coletadas.
Em suma, o cultivo de hbridos tem despertado interesses dos cientistas. Sabe-
se que os indivduos hbridos podem escapar do cativeiro e contaminar as espcies
nativas da Regio Amaznica. Esta tem sido a principal razo de diversos estudos do
processo de hibridizao bem como das espcies puras e hbridas e de seu potencial de
ameaa biodiversidade natural, uma vez que no processo de hibridizao tem se
utilizado espcies nativas.
guisa de concluso, a correta identificao dos indivduos puros e hbridos
utilizados na aquicultura importante para poder se conhecer os riscos. Alm disso, os
estudos mostram as implicaes comerciais e econmicas dessas espcies cultivadas.
Por isso, a necessidade da identificao das espcies comercializadas. Embora os
procedimentos genticos para identificao sejam caros, a tcnica de PCR Multiplex,
como afirma Hashimoto et al. (2010), uma alternativa mais barata e simples, que pode
ser rotineiramente utilizada para identificar as espcies tanto em cativeiro quanto na
natureza. Enfim, precisa-se tambm de uma legislao ambiental mais eficiente em se
tratando da criao e cultivo de peixes hbridos, esclarecendo toda a problemtica
envolvendo essa questo.
36
REFERNCIAS
ARNOLD, M.; HODGES, S. Are natural hybrids fit or unfit relative to their parents?
Trends in Ecology and Evolution, v 10, n 2, 1995.
37
BOTERO, M.; FRESNEDA, A.; MONTOYA, A. F.; NGEL, M. O. Descripcin del
desarrollo embrionrio de zigotos hbridos obtenidos por el cruce de machos de
Cachama Blanca (Piaractus mesopotamicus) e hembras de Cachama Negra
(Colossoma macropomum). Revista Colombiana Cincia Pecuria. v. 17. Medelln,
2004.
CREPALDI, D.V.; FARIA, P. M. C.; TEIXEIRA, E. A.; RIBEIRO, L. P.; COSTA, A. A. P.;
MELO, D. C.; CINRTA, A. P. R.; PRADO, S. A.; COSTA, F. A. A.; DRUMOND, M. L.;
LOPES, V. E.; MORAES, V. E. Utilizao de hormnios na reproduo induzida do
surubim (Pseudoplatystoma spp). Revista Brasileira de Reproduo Animal. v. 30, 2006.
DAIRIKI, J. K.; BALDESSIN JUNIOR, I.; PENA, S. V.; CYRINO, J. E. P. Manual tcnico
de extenso (2) pacu e tambacu. Departamento de Zootecnia. Universidade de So
Paulo. So Paulo. S/D.
EPIFANIO, J.; NIELSEN, J. The role of hybridization in the distribution, conservation and
management of aquatic species. Reviews in Fish Biology and Fisheries. v. 10, 2001.
FAO. The state of World Fisheries and Aquaculture 2008. Food and Agriculture
Organization of the United Nations. Roma: FAO Fisheries and Aquaculture Department,
2009.
FARIAS, I. P.; TORRICO, J. P.; GARCA-DVILA, C.; SANTOS, M. C. F.; HRBEK, T.;
RENNO, J. F. Are rapids a barrier for floodplain fishes of the Amazon basin? A
38
demographic study of the keystone floodplain species Colossoma macropomum
(Teleostei: Characiformes). Molecular Phylogenetics and Evolution, v. 56, 2010.
GOMES, F.; SCHNEIDER, H.; BARROS, C.; SAMPAIO, D.; HASHIMOTO, D.;
FORESTI, F.; SAMPAIO, I. Innovative molecular approach to the identification of the
tambaqui (Colossoma macropomum) and its hybrids. Anais da Academia Brasileira de
Cincias, v. 82, 2012.
39
INSTITUTO BRASILEIRO DO MEIO AMBIENTE E DOS RECURSOS NATURAIS
RENOVVEIS IBAMA. Estatstica da pesca 2006 Brasil: grandes regies e unidades
da federao. Braslia: SEAP, 2007.
40
MPA MINISTRIO DA PESCA E AQUICULTURA. Boletim estatstico da pesca e
aquicultura 2008-2009. Braslia, 2010.
panmixia of the tambaqui Colossoma macropomum (Cuvier, 1816) in the main channel
of the Amazon River. Journal of Fish Biology. v. 71, 2007.
SANTOS, M. C. F.; RUFFINO, M. L.; FARIAS, I. P. High levels of genetic variability and
41
SAPKOTA, A.; SAPKOTA, A. R; KUCHARSKI, M.; BURKE, J.; MCKENZIE, S.;
WALKER, P.; LAWRENCE, R. Aquaculture practices and potential human health risks:
current knowledge and future priorities. Environment International. v. 34, 2008.
SILVA, P. C.; PDUA, D. M. C.; FRANA, A. F. S.; PDUA, J. T.; SOUZA, V. L. Milheto
(Pennisetum americanum) como substituto do milho (Zea mays) em raes para
alevinos de tambacu (hbrido Colossoma macropomum fmea X Piaractus
mesopotamicus macho). ARS Veterinria. v. 16, n 2, 2000.
42
TOLEDO-FILHO, S; ALMEIDA-TOLEDO, L. Programas genticos de seleo,
hibridizao e endocruzamento aplicados piscicultura. Cadernos de Ictiogentica.
1992.
WANG, J.; XIA, D. Studies on fish heterosis with DNA fingerprinting. Aquaculture
Research. v. 33, n 1, 2002.
43
ANEXOS
Anexo A 1: Espcime 22
Anexo A 2: Espcime 26
44
Anexo A 4: Espcime 27
Anexo A 3: Espcime 28
45
Anexo A 6: Espcime 29
Anexo A 5: Espcime 30
46