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DE PROBLEMAS EN
CROMATOGRAFA
LQUIDA
COMUNQUESE CON PHENOMENEX SI NECESITA:
n Columnas para HPLC (desde capilares hasta preparativas)
n Columnas de exclusin por tamao (SEC): acuosa (GFC) o no
acuosa (GPC)
n Anlisis de aminocidos
n Columnas especializadas para el anlisis de:
de GFC/SEC
n Polmeros sintticos
n Alimentos y bebidas
n Muestras ambientales
n Jeringas y viales
n Tubos y conectores
n Desgasificadores de solventes
n Selectores de columnas
n Procesadores de fluidos
n Columnas para gases
n Tubos de SPE (extraccin por fase slida), Platos de 96 pocillos
n Soporte para aplicaciones, desarrollo y validacin
n Servicio Tcnico fuera de serie
NDICE
I. Introduccin...................................................................................... 1
III. Fugas................................................................................................ 4
SecurityGuard Sistema de Cartuchos de Proteccin Universal
para HPLC.......................................................................................19
Este manual no puede ser copiado ni reproducido total o parcialmente sin la autorizacin por escrito de
Phenomenex, Inc. USA.
PREVENCIN
Muchos problemas en cromatografa lquida pueden evitarse con el mantenimiento
preventivo rutinario, por ejemplo el reemplazo de los sellos (juntas) de la bomba a
intervalos regulares, puede eliminar las fallas asociadas a esas juntas (sellos). La
seccin VII lista las reas de problemas ms comunes para cada mdulo y las prc-
ticas de mantenimiento preventivo que reducen su frecuencia. Estas sugerencias
pueden ser modificadas para ajustarse al modelo de su cromatgrafo y para ser
implementadas como una rutina en su laboratorio.
1
II. PRESIN ANORMAL
Un cambio en la presin de operacin es un signo de que puede haber un pro-
blema. Seleccione abajo cual categora se parece ms a los sntomas que presenta
su instrumento de HPLC. Entonces siga las sugerencias para corregir el problema.
A. No hay flujo ni lectura de presin
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. Est apagado 1. Encindalo
2. Fusible quemado 2. Reemplace el fusible
3. Fallas o ajuste del controlador 3. a. Verifique que la programacin es
la correcta
b. Repare o cambie el controlador
4. Pistn roto 4. Cambie el pistn
5. Aire atrapado en el cabezal de 5. Desgasifique los solventes, elimine el
la bomba aire de la bomba principal
6. Fase mvil insuficiente 6. a. Rellene el recipiente de la fase
mvil
b. Limpie el frit de entrada si
est tapado
7. Vlvula check fallando 7. Cambie la vlvula check
8. Fuga mayor 8. Apriete o cambie los conectores
B. No hay lectura de presin y el flujo es normal
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. Medidor fallando 1. Cambie el medidor
2. Transductor de presin fallando 2. Cambie el transductor
C. La presin se mantiene alta
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. El ajuste del flujo es demasiado alto 1. Ajstelo adecuadamente
2. Frit de la columna tapado 2. a. Monte la columna al revs y pase flujo
b. Reemplace frit*
c. Reemplace la columna
3. Fase mvil incorrecta, precipitacin 3. a. Use la fase mvil correcta
de la solucin reguladora (bfer) b. Lave la columna
4. Columna incorrecta 4. Use la columna adecuada
5. Inyector tapado 5. Limpie o cambie el inyector
6. Temperatura de la columna 6. Aumente la temperatura
demasiado baja
7. Mal funcionamiento del controlador 7. Repare o cambie el controlador
8. Guarda columna (pre-columna) tapada 8. Cambie el guarda columna
9. Filtro en lnea bloqueado 9. Remueva o cambie el filtro en lnea
* Remover los conectores podria anular la garanta de la columna, verifique con el fabricante antes de hacerlo.
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II. PRESIN ANORMAL (contina)
E. Presin en aumento
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
1. Vea la seccin C 1. Vea la seccin C
3
III. FUGAS
Las fugas se resuelven casi siempre apretando o cambiando un conector. De
cualquier forma debe tomar en cuenta que apretando de ms los conectores de
metal pueden daarse y causar fuga. As mismo los conectores de plstico pueden
desgastarse apretndolos demasiado. Cuando un conector sigue con fuga despus
de apretarlo un poco ms, es mejor quitarlo y examinario para comprobar que no
esta daado debido a un ferrul deformado o a partculas de los sellos (juntas). Los
conectores que presenten algn dao deben desecharse.
B. Fugas en la bomba
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
* Use conectores de apretar con los dedos (fingertight) para evitar problemas de sellado y/o el uso de herramientas
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III. FUGAS (contina)
C. Fugas en el inyector
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
D. Fuga en la columna
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
E. Fugas en el detector
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
2 - 4 m 0.5 m
5 - 20 m 2 m
5
IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA
Muchos de los problemas en el sistema de LC producen cambios en el cromato-
grama. Algunos de esos problemas pueden solucionarse haciendo ajustes en el
equipo, mientras otros pueden requerir modificacin en los procedimientos de
ensayo. La seleccin correcta del tipo de columna y de fase mvil son la clave para
una buena cromatografa.
A. Pico con coleo (Tailing)
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)
C. Picos divididos
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)
I. Picos extra
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)
2. Fase mvil no homognea. (Se eleva 2. Use solventes grado HPLC, sales y
generalmente a absorbancias altas, aditivos de alta pureza. Desgasifique
ms que con fluctuaciones la fase mvil antes de usarla, haga
cclicas de temperatura.) burbujear helio durante su uso.
3. Contaminacin o burbuja de 3. Lave la celda con metanol, u otro
aire en la celda del detector solvente fuerte. De ser necesario
limpie la celda con HNO3 1N
(jams use HCl).
4. Salida de lnea tapada despus del 4. Desconecte o cambie la lnea. Vea el
detector. (La alta presin fractura manual del detector para
la ventana de la celda produciendo cambiar la ventana.
una lnea base con ruido.)
5. Problema en el mezclado de la fase 5. Corregir la composicin y/o el flujo.
mvil o cambio en la velocidad flujo Para evitar esto, observe
rutinariamente la composicin
y el flujo.
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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)
11
IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)
Normal Problema
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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (contina)
P. Prdida de resolucin
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
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V. PROBLEMAS CON EL INYECTOR
Estos problemas se detectan generalmente cuando se usan vlvulas de inyec-
cin. Las fugas en las vlvulas de inyeccin se discuten en la Seccin III (Fugas).
C. El autoinyector no funciona
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
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VI. PROBLEMAS DETECTADOS POR MEDIO DEL
OLFATO, EL ODO O LA VISTA
Para identificar los problemas de LC se necesita hacer uso de todos los senti-
dos. Seria una buena idea dedicar unos minutos cada da para usar todos los
sentidos (a excepcin del gusto), para determinar las condiciones del equipo
de LC y asegurarse que esta funcionado correctamente. Esta prctica le puede
ayudar muchas veces a localizar rpidamente algn problema ya que en mu-
chas ocasiones se puede percibir el olor de una fuga antes de encontrar donde
se encuentra. La mayora de los problemas se identifican con la vista, y muchos
de ellos se incluyen en la seccin anterior.
A. Olor a solvente
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
B. Olor a sobrecalentamiento
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
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VI. PROBLEMAS DETECTADOS POR MEDIO DEL
OLFATO, EL ODO O LA VISTA (contina)
F. Chillidos y chirridos
CAUSA PROBABLE SOLUCIN
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VII. PROBLEMAS CLAVE Y MANTENIMIENTO
PREVENTIVO
La tabla de abajo presenta los problemas ms comunes que ocurren en cualquier
equipo de HPLC. En la columna de la derecha estn las prcticas de manteni-
miento preventivo que pueden evitar a la incidencia de fallas. Entre parntesis se
presenta la frecuencia sugerida para el mantenimiento. Los manuales de servicio
y del operador de su equipo pueden tener sugerencias adicionales para el mejor
mantenimiento preventivo de su modelo de LC.
Deposito (tanque)
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Frit de entrada tapado 1. a. Lave la columna montndola al
revs
b. Filtre la fase mvil con filtro
de 0.5 m
2. Burbujas de gas 2. Desgasifique la fase mvil
Bomba
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Burbujas de aire 1. Desgasifique la fase mvil
2. Falla en el sello de la bomba 2. Cmbielo cada 3 meses
3. Falla en la vlvula check 3. Filtre la fase mvil, use un frit en la
entrada de la lnea. Tenga una
vlvula de repuesto.
Inyector
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Sello del rotor desgastado 1. a. No apriete de ms
b. Filtre las muestras
Columna
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Frit tapado 1. a. Filtre la fase mvil
b. Filtre las muestras
c. Use un filtro en lnea y/o
guarda columnas
2. Vaco en la cabeza de la columna 2. a. Evite fase mvil con pH > 8
(para la mayora de columnas a
base de slica)
b. Use guarda columna
c. Use pre-columna (columna
de saturacin)
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VII. PROBLEMAS CLAVE Y MANTENIMIENTO
PREVENTIVO (contina)
Detector
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Fallas en la lmpara, respuesta del 1. Cambie cada 6 meses.
dectector disminuida, aumento Tenga uno de repuesto.
en el ruido del detector
2. Burbujas en la celda 2. a. Mantenga limpia la celda
b. Use restrictor despus
de la celda
c. Desgasifique la fase mvil
General
PROBLEMA MANTENIMIENTO PREVENTIVO
1. Dao corrosivo/abrasivo 1. Elimine los residuos de sales en el
sistema y lmpielo cuando no lo use
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AVISO: LOS CONTAMINANTES PUEDEN CAUSAR
ALTA PRESIN
PICOS DIVIDIDOS
PICOS DEMASIADO ANCHOS
RUIDO EN LA LNEA BASE
ELEVACIN DE LA LNEA BASE
PERDIDA DE RESOLUCIN
DAO IRREVERSIBLE EN LA COLUMNA
Dao al sistema
PROTEJA SU COLUMNA DE HPLC Y SUS RESULTADOS
Del inyector
contaminantes
compuestos de inters
Guarda Cartucho Columna de HPLC
(Holder)
AJUSTE UNIVERSAL*:
Con su diseo patentado SecurityGuard
se ajusta a todos los conectores sean macho
o hembra, prcticamente de cualquier
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no aplica a los guarda cartuchos SemiPrep o PREP
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RC NY
Regenerated Cellulose (Nylon)
PTFE Teflon CA
(Polytetrafluoroethylene) (Cellulose Acetate)
PES GF
(Polyethersulfone) (Glass Fiber)
Marcas comerciales
SecurityGuard y Phenex son marcas comerciales de Phenomenex. PTFE y Teflon son marcas
comerciales registradas de E.I. du Pont de Nemours and Co.
Alemania Italia
t: 06021-58830-0 t: 0 51 6327511
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