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Biofisica y

Neurociencia PUC:
Canales de iones y excitabilidad

Dr. Daniel Basilio


Laboratorio de Fisiologa Celular
Departamento de Biologa,
Facultad de Ciencias
Universidad de Chile

Martes, Abril 17, 2017

daniel.basilio@uchile.cl
H+
K+ Na+ Ca2+ Cl- 1

- + -
+ - + - + + -

pump

- - + - - +
+ - + +
Batera Vital: agua, sal y un toque de aceite
Bateria Vital: Impulso nervioso
Los canales responsables del
potencial de accin en el axn
gigante de jibia tienen dos
C GNa GK atributos importantes.
Selectividad. Conducen Na+
V- VNa - VK o K+ en forma excluyente.
+ +
Excitabilidad. Capacidad de
cambiar conductancia en
Vr
funcin del voltaje.
Difusin Simple
Perfil de concetracin en una dimensin
Ecuacin de Difusin
Ley de Fick (Coeficiente de Difusin)
Iones en Solucin
Li+
F-

Na+ Mg2+

Cl-
Ca2+
K+

Sr2+
Br-
Rb+

Ba2+

Cs+
I-
1
Coeficiente de Difusin de electrolitos
Rb+
Potencial de Difusin
Solucin de HCl
Conceptos importantes
anlisis termodinmico

anlisis estadstico mecnico

La ecuacin de NernstPlanck

Ver captulo de Finkelstein y Mauro


Potencial de Difusin
Potencial de Difusin

Ver captulo de Sten-Knudsen


Para el ion Na+, a = 114 pm. En agua, e = 80, Eagua es 7.5 kJ/mol, en una bicapa de lpidos, e = 2,
Ebicapa= 299 kJ/mol.

Segn la distribucin de Boltzmann, la probabilidad de encontrar un ion Na+ en cada una fase.

- Eagua / RT - Ebicapa / RT Z es la funcin de


e e particin tal que la
pagua = pbicapa = suma de las
Z Z probabilidades sea 1.0

Las concentraciones en cada fase son proporcionales a su probabilidad.

pbicapa c -( Ebicapa - Eagua ) / RT


= =e =b b = e -( 299-8) / 2.5 7 10 -54
pagua c
La concentracin c= cb y la corriente es ahora.

V
I = Abcuz F 2 2

d
La bicapa no conduce corriente. Esto demuestra la necesidad de los canales de iones para que el
paso de los iones a travs de las membrana biolgicas.

http://en.wikipedia.org/wiki/Ionic_radius
Potencial de Nerst

Walther Nernst

VER http://nerve.bsd.uchicago.edu/membrane.htm
V

c2 cl

Si c2 > c1 los iones K+ atravesarn la membrana moviendo cargas positivas desde el lado 2 hacia el
lado 1.

Este transporte de cargas trae como consecuencia la aparicin de una diferencia de potencial
elctrico dado por la carga transportada y la capacidad elctrica de la membrana.
Q
V=
C
El potencial elctrico del compartimiento 2 se har negativo con respecto al lado 1.
La diferencia de potencial elctrico que se va generando en el lado 2 se opone al transporte.
En el equilibrio, cuando ya no hay ms transporte :
La probabilidad de encontrar un ion en cada una de las compartimentos, segn la distribucin de
Boltzmann:

- E K , 2 / RT - E K ,1 / RT
e e
pK , 2 = pK ,1 = Z es la funcin de
Z Z particin tal que la
suma de las
probabilidades sea 1.0
V

c2 cl

La diferencia de energa se debe a la diferencia de potencial elctrico:

e - zFV2 / RT e - zFV1 / RT
pk , 2 = pK ,1 =
Z Z
p K , 2 c2 c2 zF (V2 - V1 )
= = e - zF (V2 -V1 ) / RT ln = -
pK ,1 c1 c1 RT
RT c2 R = 8.3 J K-1 mol-1
V2 - V1 = - ln T = 298 K
zF c1 F = 96500 C mol-1
RT/F 25 mV @ 25oC
La ecuacin de Nernst
La ecuacin de Nernst nos dice la diferencia de potencial esperada para el
equilibrio.
RT c2
VNernst =- ln
zF c1
A

V2 Vl

RT c2
VNernst =- ln I = G(V - VNernst )
zF c1
Los canales responsables del potencial de accin tienen dos
atributos importantes.
Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente.
Excitabilidad. Capacidad de cambiar conductancia en funcin
del voltaje.
Los canales responsables del potencial de accin tienen dos
atributos importantes.
Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente.
Excitabilidad. Capacidad de cambiar conductancia en funcin
del voltaje.
J = c movilidad fuerza
Para estudiar la selectividad de los canales
compararemos los flujos de los iones medidos al
aplicar la misma fuerza a todos.
Los factores que gobiernan la selectividad son
entonces la concentracin y la movilidad.
J = concentracin movilidad fuerza
Movilidades relativas a la del K en el agua
H+ 4.76
Li+ 0.53
Na+ 0.68 En un poro acuoso
K+ 1.00 las diferencias de
Rb+ 1.06 movilidades entre
Cs+ 1.05 Na y K son pequeas

F- 0.75 Examinemos
Cl- 1.04 entonces las
Br- 1.06 concentraciones
I- 1.04
R. A. Robinson and R. H. Stokes. Electrolyte solutions. 2ndedition Butterworths, London 1959.
Energa Libre de Hidratacin Standard
Coeficiente de particin
kCal/mol Absoluto Relativo Radio
Li -114.6 1.12E-83 1.78E-30 0.60
Na -89.7 1.18E-65 1.88E-12 0.95
K -73.5 6.29E-54 1.00E+00 1.33
Rb -67.5 1.39E-49 2.20E+04 1.48
Cs -60.8 9.81E-45 1.56E+09 1.69
Los radios de los iones
estn en angstrom

D 0 Grandes diferencias de
-
b =e
coeficiente de particin
RT
entre fase acuosa y
gaseosa.

Robinson and Stokes Electrolyte Solutions Butterworths,London 1959.


Energa de Hidratacin Standard
Coeficiente de particin
kCal/mol Absoluto Relativo Radio
Li -114.6 1.12E-83 1.78E-30 0.60
Na -89.7 1.18E-65 1.88E-12 0.95
K -73.5 6.29E-54 1.00E+00 1.33
Rb -67.5 1.39E-49 2.20E+04 1.48
Cs -60.8 9.81E-45 1.56E+09 1.69

Grandes diferencias de coeficiente de particin entre fase acuosa


y gaseosa, implican grandes diferencias de coeficiente de
particin entre fase acuosa y una membrana que no interacte
con los iones.

J = csolucion b movilidad fuerza


Pregunta: Cual ser la selectividad de una membrana que
interacta por igual con todos los iones?
Energa de Hidratacin Standard
Coeficiente de particin
kCal/mol Absoluto Relativo Radio
Li -114.6 1.12E-83 1.78E-30 0.60
Na -89.7 1.18E-65 1.88E-12 0.95
K -73.5 6.29E-54 1.00E+00 1.33
Rb -67.5 1.39E-49 2.20E+04 1.48
Cs -60.8 9.81E-45 1.56E+09 1.69

Por la energa de hidratacin: la selectividad es Cs > Rb > K > Na > Li

Cul ser el ion preferido si se excluye el Cs y el Rb por tamao?.


El potasio
Cul ser el ion preferido si se excluye el Cs, Rb y K por tamao?.
El sodio
Esta es una teora elemental de la selectividad.
Ver material complementario en u-cursos: Selectividad de canales de potasio.
Interacciones de los iones en agua y en un sitio en de un canal hipottico
hecho de grupos carbonilo.

En la solucin las
molculas de agua se
acomodan al tamao del
ion. Las interacciones
son ms fuertes para los
iones ms pequeos

La posicin de mnima
energa para el ion en el
canal es la equidistante
de los grupos C=O.
La energa de interaccin
en la membrana es igual
para todos los iones
Rod Mackinnon Nobel Prize in Chemistry 2003

"for structural and mechanistic studies of ion channels"


KCsA de Streptomyces lividans

Pymol

Tema de seminario
Doyle et al 1998 Science 280:69-77
4 nm

N
C
Doyle et al 1998 Science 280:69-77
Permeacin en fila india
Gating

A A
Los canales responsables del potencial de accin tienen dos
atributos importantes.
Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente.
Excitabilidad. Capacidad de cambiar conductancia en funcin
del voltaje.
Potencial de accin de membrana axn de jibia

GNaVNa + GKVK
Vm =
GNa + GK
VNa

VK

http://nerve.bsd.uchicago.edu/nervejs/MAP.html
Dos canales de iones con diferentes
Extracelular.
potenciales de inversin de la corriente.

GNaVNa + GKVK
Vm =
GNa + GK
Si GK >> GNa Vm VK.
C GNa GK Si GNa >> GK Vm VNa.

El potencial de accin se explica con


un modelo en que las conductancias
- VNa - VK de Na+ y K+ son dependientes del
voltaje y del tiempo. (Hodgkin and
+ + Huxley 1952)

Vm
Intracelular.

Hodgkin AL, and Huxley AF. A quantitative description of membrane current and its
application to conduction and excitation in nerve. J Physiol 117: 500-544, 1952.
Estructura de los canales de K dependientes de voltaje.

Extracelular

Bicapa

Intracelular S6
S1

S3a

Doyle et al 1998 Science 280:69-77. Jiang et al 2003 Nature 423:33-41. (Temas de


seminario)
Estructura de los canales de K dependientes de voltaje, Kv.

Dominio sensor Dominio poro


de potencial S1-S4 S5-S6 3
2
4 6
+ 1
+
5
+
+

N Intracelular C

Ms detalles estructurales en Long et al 2007 Nature 450:376-383

Existen muchas clases de canales de potasio.


http://en.wikipedia.org/wiki/Potassium_channel
Topologa de un canal de sodio membrana

Inactivation
Gate

Los canales de sodio son monmeros con cuatro repeticiones cada una de ellas
con un dominio sensor de potencial (S1 a S4) y un dominio del poro (S5-S6)

http://nerve.bsd.uchicago.edu/TheNerveImpulse05.pdf
Estructura de Kv de Long et al Nature 450: 376-382 (VER mmc2.avi Y mmc3.avi)
Enlace
S4-S5

S4 S4
PD. Pore Domain.
Dominio del poro S5-S6 VSD. Voltage Sensing Domain.
Dominio sensor de voltaje. S1-S4

S4

Enlace
S4
S4-S5

3 nm

El canal de potasio visto desde el medio intracelular, en estado abierto y con los sensores de
voltaje activados, hacia el lado extracelular. Jensen, et al Science 336: 229-233, 2012.
Simulaciones de Dinmica Molecular generadas en Anton un
super computador diseado solo para estos clculos.

Jensen, M. ., V. Jogini, D.W. Borhani,. A. E. Leffler, R. O. Dror, D. E. Shaw. (2012)


Mechanism of Voltage Gating in Potassium Channels. Science 336: 229-233.

D. E. Shaw Research, New York, NY 10036, USA.


Center for Computational Biology and Bioinformatics, Columbia University,
New York, NY 10032, USA.

http://en.wikipedia.org/wiki/Molecular_dynamics
http://en.wikipedia.org/wiki/Anton_%28computer%29
El canal de potasio activado por voltaje visto desde el medio extracelular, partiendo en
estado abierto con los sensores de voltaje activados, hacia el lado extracelular.
Termina con el poro cerrado y los sensores de voltaje hacia el lado intracelular.
Extracelular

4 nm

Intracelular

Dos subunidades del canal de potasio activado por voltaje en vista lateral, partiendo en
estado abierto con los sensores de voltaje activados, hacia el lado extracelular (arriba)
Termina con el poro cerrado y los sensores de voltaje hacia el lado intracelular (abajo)
VSD de una subunidad del canal de potasio activado por voltaje en vista lateral, desde
el medio extracelular, partiendo con los sensores de voltaje activados, hacia el lado
extracelular (arriba), y el potencial negativo intracelular ( rojo ). Despus se
despolariza la membrana (azul) ca. 250 us.
Posible movimiento del segmento S4 impulsado por las
diferencias de potencial elctrico.
Filtro de selectividad ( Na+, K+, Ca2+ )

Vext = 0 Vext = 0

+ +
+ +

Despolarizar
Vm = 0 mV Vm = -60 mV
Hiperpolarizar

Compuerta abierta Compuerta cerrada

Papers para seminarios sobre este punto:


Aggarwal y MacKinnon. (1996) Neuron 16, 11691177.
Larsson, et al 1996. (1996) Neuron, 16, 387397.
Ahern, C. A y R. Horn. J. Gen. Physiol. 123: 205216, 2004
El modelo de dos estados, equilibrio
En un sistema que tiene muchos estados, la probabilidad de cada estado es funcin de su
energa. A ms energa menos probable es el estado.
Z es la funcin de particin
1 - Ei / RT tal que la suma de las
Distribucin de Boltzmann: pi = e probabilidades sea 1.0
Z
Para un sistema de slo dos estados: abierto y cerrado, las probabilidades son:

1 - Ea / RT 1 - Ec / RT
pabierto = e pcerrado = e
Z Z
La probabilidad del estado abierto se encuentra considerando que la suma de las dos
probabilidades debe ser 1.

1 - Ea / RT
e
Z 1
pabierto = pabierto =
1 - Ea / RT 1 - Ec / RT
e + e 1 + e -( Ec - Ea )/ RT
Z Z
Funcin de Boltzmann
Probabilidad del estado abierto en estado estacionario
1
pabierto =
1 + e -( Ec - Ea )/ RT
Funcin de Boltzmann

1.00

p 0.75

0.50

0.25

0.00
-4 -2 0 2 4
Ec-Ea, RT/F
1
Energas de los dos estados pabierto =
1 + e -( Ec - Ea )/ RT
12
Ea 4.60 RT/F
10 Ec 7.00 RT/F
Ec = Ec 0 Ec-Ea 2.40 RT/F
8 pa 0.92
Ea = Ea 0
F/ 6 Cerrado
T4
R
, Abierto
a 2
gr
e0 V = 0mV
n
E -2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
f
fa fC
-4
El eje horizontal corre desde el borde extracelular al borde
-6 intracelular de la membrana. Los nmeros indican la fraccin del
-8 potencial intracelular se registra en cada punto.
Extracelular Intracelular
El segmento S4 se desplaza a travs de la membrana, como tiene una carga, zF, la energa del
sistema depende del potencial elctrico, V, del lugar en que se encuentre el segmento S4.
La energa del estado abierto tiene un componente conformacional, Eao, ms un componente
elctrico, zfaFV. Lo mismo para el estado cerrado.

Ea = Ea 0 + f a zFV Ec = Ec 0 + f c zFV
1
Energas de los dos estados pabierto = -( Ec - Ea ) / RT
Ec = Ec + f c zFV
0 1 + e
12
Ea 5.40 RT/F
10 Ec 10.20 RT/F
Ea = Ea 0 + f a zFV Ec-Ea 4.80 RT/F
8 pa 0.99

F/ 6
T4 V = +50mV
R
,
a 2
gr
e0
n
E -2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
f
fa fC
-4
-6
-8
Extracelular Intracelular

Ec - Ea = Ec 0 - Ea 0 + ( f c - f a )zFV 1
pabierto =
1 + e -(Ec )
0
- Ea 0 + zdFV / RT
Ec - Ea = Ec - Ea + dzFV
0 0

La probabilidad del canal abierto


depende del potencial elctrico
1
Energas de los dos estados pabierto =
1 + e -( Ec - Ea )/ RT
12
Ea 3.80 RT/F
10 Ec 3.80 RT/F
Ec-Ea 0.00 RT/F
8 pa 0.50

F/ 6
T4
R
,
a 2 Ea = Ea 0 + f a zFV Ec = Ec 0 + f c zFV
gr
e0
n
E -2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
f
fa fC
-4 V = -50mV
-6
-8
Extracelular Intracelular

Ec - Ea = Ec 0 - Ea 0 + ( f c - f a )zFV 1
pabierto =
Ec - Ea = Ec - Ea + dzFV
0 0 1+ e ( )
- Ec 0 - Ea 0 + zdFV / RT
1
Energas de los dos estados pabierto =
1 + e -( Ec - Ea )/ RT
12
Ea 3.00 RT/F
10 Ec 0.60 RT/F
Ec-Ea -2.40 RT/F
8 pa 0.08

F/ 6
T4 Ec = Ec 0 + f c zFV
R
,
a 2 Ea = Ea 0 + f a zFV
gr
e0
n
E -2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
f
fa fC
-4
-6
-8 V = -100mV
Extracelular Intracelular

Ec - Ea = Ec 0 - Ea 0 + ( f c - f a )zFV 1
pabierto =
Ec - Ea = Ec - Ea + dzFV
0 0 1+ e ( )
- Ec 0 - Ea 0 + zdFV / RT
1
Energas de los dos estados pabierto =
1 + e -( Ec - Ea )/ RT
12
Ea 3.80 RT/F
10 Ec 3.80 RT/F
Ec-Ea 0.00 RT/F
8 pa 0.50

F/ 6
T4
R
,
a 2 Ea = Ea 0 + f a zFV Ec = Ec 0 + f c zFV
gr
e0
n
E -2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
f
fa fC
-4 -50mV
Cuando se igualan las energas, la
-6
probabilidad del estado abierto es 0.5.
-8 Esto se cumple para el potencial Vo.
Extracelular Intracelular
1 1
0.5 = pabierto =
1+ e ( )
- Ec 0 - Ea 0 + zdFVo / RT
1+ e ( )
- Ec 0 - Ea 0 + zdFV / RT

Ec 0 - Ea 0 + zdFVo = 0 1
Ec 0 - Ea 0 = - zdFVo pabierto =
1 + e - zdF (V -Vo )/ RT
1
pabierto =
1 + e - zdF (V -Vo )/ RT
1.00 1.00

p 0.75 p 0.75

0.50 0.50
2z 4z
0 Vo 0 Vo
0.25 0.25
0.6 delta 0.6 delta

0.00 0.00
-100 -50 0 50 100 -100 -50 0 50 100
V, mV V, mV

1.00 1.00

p 0.75 p 0.75

0.50 0.50
4z
-50 Vo 4z
0.25 0.6 delta
0.25 50 Vo
0.6 delta
0.00 0.00
-100 -50 0 50 100 -100 -50 0 50 100
V, mV V, mV
120 100
I = G (V - Vi ) 100 I = G (V - Vi )50
80
0
60 -100 -50 0 50 100
-50
40 V, mV
-100
20
-150
0
-100 -50 0 50 100
-20 -200
V, mV

p p
1.00
1 1.00

0.75 p= - zdF (V -Vo ) / RT


0.75

0.50 1+ e 0.50

0.25 zd = 4, Vo = -40 mV 0.25

0.00 0.00
-100 -50 0 50 100 -100 -50 0 50 100
V, mV 60 V, mV
I = pG (V - Vi ) 120
I = pG (V - Vi ) 40
100 20

80 0
-100 -50 0 50 100
60 -20

40 -40 V, mV
20 -60

0 -80
-100 -50 0 50 100
-20
V, mV
Modelo de membrana con una resistencia no lineal

1
pabierto =
1 + e - zdF (V -Vo )/ RT
GNa = Ngp 1.00

p 0.75

C GNa GK 0.50

- VNa - VK 0.25

+ + 0.00
-100 -50 0 50 100
V, mV

Vr VNa + (GK / GNa )VK


V=
1 + GK / GNa
Sistema biestable.
30
I, A
20
I2 I1 + I 2 I1
10

0
-100 -50 0 50 100
-10
V, mV
-20

V2 -30 V3 V1
I1 = pG1 (V - V1 ) -40
1 Vumbral V, mV
p=
1 + e - zdF (V -Vo )/ RT Este sistema tiene dos estados estables:
V2 para G1< G2 y V3 para G1 > G2.
I 2 = G2 (V - V2 ) Inyectando corriente se puede cambiar V
V1 = 51mV, G1= 1.0 mS a un valor Vx.
dV zd = 1.8, Vo = 0 mV Al dejar de inyectar corriente V cambia
-C = I1 + I 2 V2 = -60 mV, G2 = 0.6 mS hasta V2 si Vx < Vumbral.
dt Al dejar de inyectar corriente V cambia
hasta V3 si Vx > Vumbral.
Modelo de membrana con una resistencia no lineal

Sistema biestable

Mientras inyecto corriente


dV
I =C + I1 + I 2
dt
dV
-C = - I + I1 + I 2
dt
Despus de cortar la corriente

dV
-C = I1 + I 2
dt

MAPGOMA.XLSX