Laboratorio de Biotecnologa

Facultad Ingenieria - Ingenieria qumica

Universidad de La Sabana

Observacin de clulas al microscopio

Daniel Fernando Cabana, Lina Vanessa Beltrn Franco estudiantes de Ingeniera qumica
Universidad de La Sabana. Facultad de ingeniera. Campus del puente del comn, km. 7, Autopista
norte de Bogot. Cha, Cundinamarca Colombia. Febrero 17 de 2017.

Abstract:

Because microorganisms are not visible to the human eye, methods have been created in
which, with the aid of the microscope and different solutions, the cells and morphological
parts of the cell become visible for later identification. Being able to differentiate bacteria,
fungi and cells has had a great impact on clinical microbiology and research, and what is it
where these skills and knowledge have been used to prevent diseases caused by bacteria
and find the cure. The decomposition of food with Fungi, for which the industry has sought
ways to mitigate these effects with chemicals that give a longer product life. Nowadays the
knowledge of the cells and their parts is complete due to the morphological study carried out
on the microorganisms. This document shows the morphological analysis and the
characterization of several types of microorganisms put in staining tests.

Keyword: Bacteria, fungi, plant cells, staining, organs, Gram-positive and Gram-negative,
environment and habitat.

Resumen:

Debido a qu los microorganismos no son visibles al ojo humano se crearon mtodos, en

los cuales con ayuda del microscopio y diferentes soluciones qu se agregan, las clulas y
la partes morfolgicas de la clula se vuelve visible para su posterior identificacin. Poder
diferenciar las bacterias, hongos y clulas ha tenido un gran impacto en la microbiologa
clnica y en la investigacin, ya qu es all donde se han usado estas habilidades y
conocimientos para prevenir enfermedades ocasionadas por bacterias y encontrar la
cura.La descomposicin de alimentos con hongos, para lo qu la industria ha buscado la
forma de mitigar estos efectos con qumicos qu den una mayor vida til a los productos.
Hoy en da el conocimiento de las clulas y sus partes es completo debido al estudio
morfolgico realizado en los microorganismos. En este documento se muestra el anlisis
morfolgico y la caracterizacin de varios tipos de microorganismos puestos en pruebas de
tincin.

Palabras Claves: Bacterias, hongos, clulas vegetales, tincin, rganos, Grampositivas y

Gramnegativas, ambiente y hbitat.
Introduccin
En este documento se realiza el anlisis
y clasificacin de diferentes tipos de
microorganismos, ya que el tamao de
estos es mnimo, se necesita del
microscopio para su identificacin. En la
mayora de microorganismos procariotas,
la observacin microscpica se limita a
determinar la forma, el modo de
agrupamiento, el movimiento y la
presencia de algunos elementos
extracelulares, tales como las cpsulas.
En el caso de microorganismos
eucariticos, la informacin que se
obtiene de la observacin microscpica es
mucho mayor porque tambin lo es su
diversidad morfolgica y anatmica.
(Universidad Navarra, 2008)
Se estudiaron en este laboratorio
especies que previamente fueron fijadas
al portaobjetos, es decir, se precipitaron y
desecaron las muestras, usualmente esto
se realiza por calor. Al tenerla fijada en el
portaobjetos la muestra de cada especie
se someti a procesos de tincin con el
objetivo de identificar la morfologa de los
microorganismos y algunas de sus
caractersticas estructurales. Entre los
microorganismos visualizados estn del
dominio de las bacterias Escherichia
Coli, Staphylococcus sp. y Bacillus
sp. Por parte del reino fungi se analiz la
morfologa de Aspergillus sp.,
Penicillium sp. y Saccharomyces
cerevisiae. Adems de la epidermis de
la papa y la cebolla.
De acuerdo a lo realizado en est
prctica de visualizacin de clulas en el
microscopio, es importante recalcar que la
importancia qu tiene este tipo de
estudios basados en los conceptos de
microbiologa, en donde se estudian
bacterias, hongos, parsitos y virus, los
cuales tienen tamaos imperceptible para
el ojo humano, es por ello qu se requiere
del microscopio, como se mencion
anteriormente. El rea de la microbiologia
da la importancia qu requiere este tipo
de estudios, ya qu estos
microorganismos pueden ocasionar
enfermedades y plagas, las cuales
afectan a los seres vivos (seres humanos,
animales y vegetales) ocasionando
prdidas econmicas en los sectores
donde un microorganismo afecte la
produccin o causando enfermedades,
por lo cual estos conocimientos se utilizan
para diagnstico clnico. (Granados Prez &
Villaverde Peris, 1997)
Materiales y mtodos
Como se explic en el tem anterior, los
microorganismos se pusieron en pruebas
de tincin para distinguir la estructura
caracterstica de cada una. Las tinciones
realizadas fueron:
Tincin de Gram:
Este tincin es hoy la ms
desarrollada y utilizada en
laboratorios de bacteriologa y
permite segn la estructura y grosor
de la pared bacteriana, agrupar las
bacterias en Gram positivas y en
Gram negativas. Las Gram positivas
tiene una pared gruesa de
peptidoglicn (entre un 40 e 90%) y
les falta la membrana externa, en
cuanto la las Gram negativas tienen
una capa ms delgada de
peptidoglicn y tienen membrana
externa.
Algunas bacterias se han clasificado
como Gram variables ya que
presentan tincin Gram positiva y
negativa, aunque estructuralmente
estn en el grupo de Gram positivas.
En este documento no se van a
analizar este grupo de bacterias. Los
 pasos para realizar la tincin Gram hongos que producen micotoxinas en
son los siguientes: cultivos de granos y harinas, y el ltimo es
utilizado para la produccin de etanol en
1. Tincin inicial: Las bebidas alcohlicas o en industria de
clulas se tien con cristal violeta, el alcoholes (Dr Martnez E. 1988). Lo que
cual tie de morado. se logr observar fue:
2. Mordente: Se
adiciona yoduro o solucin de lugol
que reacciona con el colorante y
forma un complejo cristal violeta-
yoduro. El color permanece morado.
3. Decoloracin: Se
adiciona un solvente no polar el cual
lava el complejo antes formado, de
las clulas Gram negativas. De est
Foto 1. Penicillium sp
forma, las bacterias Gram positivas
continan moradas y las Gram
negativas quedan incoloras.
4. Contratincin: Se
ti con safranina o fucsina, para que
las bacterias Gram negativas se tien
de rosado. (Rodrguez Cavallini,
Gamboa Coronado, Hernndez Chavarra,
& Garca Hidalgo, 2005)

Tincin simple : Foto 2. Aspergillus sp

Permite observar la forma, tamao y
agrupamiento de las bacterias
usando un nico colorante
usualmente bsico. En el caso de
est prctica se utiliz azul de
metileno o azul de lactofenol.

Resultados:

Hongos: Es importante saber identificar Foto 3. Saccharomyces cerevisiae

cuando un alimento o lugar se encuentra
contaminado por un cultivo de hongos, ya
En las fotos 1, 2 y 3, se observan los
que estos pueden generar micotoxinas
diferentes cultivos de los tres hongos que
que pueden ser perjudiciales para los
se analizaron en este informe (ver seccin
animales y los seres humanos al
de Anlisis de resultados). Las anteriores
momento de consumir algunos alimentos.
imgenes fueron tomadas despus de
En est experimentacin se observ a
hacer el respectivo procedimiento, se
travs de un microscopio los hongos
tomaron con la ayuda de un microscopio
conocidos como Aspergillus sp, asistido por computador.
Penicillium sp y Saccharomyces
cerevisiae, donde los primeros dos son
Bacterias: Aunque existen diferentes
formas de clasificar las bacterias, para
este informe es pertinente clasificarlas
como bacterias Gramnegativas y
bacterias Grampositivas. Las bacterias
Gramnegativas son aquellas permiten
tener un espacio vaco entre la membrana
externa y la plasmtica, haciendo que
estas tengan un espacio vaco llamado
Foto 6. Salmonella spp
espacio periplasmtico. Mientras que en
Epidermis de la cebolla y la papa: En
las bacterias Grampositivas, la membrana
est seccin se busc observar las
plasmtica se sita por debajo de la pared
clulas vegetales presentes en una
bacteriana, haciendo que el espacio
cebolla y un tubrculo, como lo es la
periplasmtico sea extremadamente
papa, aqu se busca observar algunas
pequeo, casi inexistente (Montoya H.
partes (rganos) esenciales de las clulas
2008).Las bacterias que se observaron en
eucariotas, estas partes con ayuda del
el laboratorio despus de realizar el
azul de metileno o el lugol se tien y es
respectivo proceso son Escherichia
posible identificarlas al observar las partes
coli, Bacillus sp y Salmonella spp, vegetales a travs de un microscopio
estas se les tom una foto por medio de (Gonzlez M. 2003).
un microscopio asistido por computador, Las fotos obtenidas en el laboratorio de
obteniendo as: las clulas son:

Foto 4. Escherichia coli

Foto 7. Epidermis de la cebolla

Foto 5. Bacillus sp
 Foto 8. Papa observada en el
microscopio
Anlisis de resultados
Bacterias: Las principales caractersticas
de las bacterias son: el tamao, la forma o
estructura y el tipo de agrupacin. En
cuanto a la forma las bacterias pueden
ser esfricas, en forma de bastn o en
espiral, en otras palabras se les denomina
coco, bacilos y espirales, la forma es
propia de cada especie y les proporciona
rapidez y elasticidad (Montoya H. 2008).
Estas al encontrarse agrupadas, se juntan
segn la especie de diferente forma, estas
pueden formar cadenas, pares, racimos y
filamentos (Montoya H. 2008).
Normalmente las bacterias tienen un
tamao de 0,2 a 2,0 micrmetros de
ancho y de largo, aproximadamente entre
1 a 10 micrmetro, aunque se cree que
hay bacterias mucho ms pequeas,
llamadas nanobacterias, estas no se han
podido comprobar, as como otras son un
poco ms grandes, pero estas son pocas
(Montoya H. 2008).
Bacillus sp:
Este gnero corresponde a bacilos,
es decir que su forma es alargada, en
este caso en la Foto 9. se pueden ver
las formas de la bacteria largas y sus
extremos de de forma redonda, al
pertenecer al grupo de los bacilos, no
tienden a un ordenamiento especfico
por su gentica sino que est se
ordena al azar, es por esto que no se
puede determinar un ordenamiento
en comn en la imagen, simplemente
estn esparcidas por toda la zona del
cultivo, sin embargo algunos autores
afirman que es posible encontrarla
por pares, aunque no es fcil de ver,
muchas de ellas en la Foto 9. se
observa que van en parejas, en
algunos puntos ms fcil de observar
qu otras (Montoya H. 2008). Por otro
lado, tambin se observan cocos en
cadenas, en algunos casos las
bacterias se pueden mantener unidas
despus de la divisin celular pero
siempre conservando la
independencia de cada especie, al
ser el plano de divisin nico se
encuentran diplococos o cocos en
cadena, cmo es el caso de la Foto
9(Prez & Mota). En cuanto al tamao
estas se encuentran entre 1 y 7
micras de longitud, es una bacteria
Gram positiva, por lo tanto despus
de realizar el proceso de tincin, toma
un color violeta o azul claro.
Al ser una bacteria Gram positiva,
est contiene una gruesa estructura
en su pared celular, un bajo contenido
de lpidos (1% a 4%), son ms
susceptibles a la penicilina, sufre
retardos cuando hay presencia de
colorantes bsicos, mucho ms fuerte
que el retardo de una bacteria Gram
negativa y por ltimo los
requerimientos nutricionales son
complejos, y es por esto que su
hbitat es ms complejo, por lo tanto
est bacteria crece en seres vivos
qu le aporta altos contenidos de
nutrientes (Montoya H. 2008).

Foto9.Caractersticas y
agrupamiento de Bacillus sp.
Foto 10. Caractersticas y agrupacin de
Escherichia
coli: Es tambin una bacteria en
forma de bacilos, en este caso tienen
forma cilndrica y con extremos
redondeados, es decir parecidas a
una pldora, al ser bacilos, tampoco
tiene un ordenamiento definido
genticamente, sino que est se
ordena de manera al azar y en pares,
similar a la bacteria Bacillus sp
aunque en est bacteria no se puede
observar con exactitud los pares, s
es posible ver que no tienen un
ordenamiento, simplemente ocupan
todo el espacio (Montoya H. 2008).
Es una bacteria Gram negativa, es
por eso que no poseen un color
violeta, sino rojizo.
Al ser una bacteria Gram negativa,
est contiene una delgada estructura
en su pared celular, un alto contenido
de lpidos (11% a 22%), son menos
susceptibles a la penicilina, sufre
retardos cuando hay presencia de
colorantes bsicos, sin embargo, el
retardo es menor a una bacteria
Gram positiva y por ltimo los
requerimientos nutricionales son
sencillos, y es por esto que su hbitat
es ms simple, por lo tanto tiene la
capacidad de crecer en cuerpos con
aporte nutricional bajo (Montoya H.
2008).
Escherichia coli.
Salmonella
spp: Tambin se trata de un bacilo,
pero est se diferencia de las otras
debido a que su forma es difcil de
diferenciar entre una bacteria de
forma coco, pues parecen tener
forma esfrica, sin embargo no es
as, por lo tanto se le denomina
cocobacilo, est bacteria es Gram
negativa, por lo tanto su color al
realizar la tincin de Gram es rojizo
(Montoya H. 2008). Estas bacterias
tampoco poseen un ordenamiento
particular, forman pequeos cultivos
sin ninguna forma en particular como
se puede observar en la Foto 6.
Al ser una bacteria Gram negativa,
est contiene una delgada estructura
en su pared celular, un alto contenido
de lpidos (11% a 22%), son menos
susceptibles a la penicilina, sufre
retardos cuando hay presencia de
colorantes bsicos, sin embargo, el
retardo es menor a una bacteria
Gram positiva y por ltimo los
requerimientos nutricionales son
sencillos, y es por esto que su hbitat
es ms simple, por lo tanto tiene la
capacidad de crecer en cuerpos con
 aporte nutricional bajo (Montoya H.
2008).
Foto 6. Ampliacin de la foto
anteriormente mostrada.
Hongos: Los hongos son hoy la principal
causa de la descomposicin de los
alimentos, en este informe de laboratorio
se analizaron 3 diferentes hongos, estos
se tratan de Aspergillus sp,
Penicillium sp y Saccharomyces
cerevisiae, donde se busca identificar
las diferentes partes de cada hongo, ya
que esto es importante para determinar la
edad del hongo, s est a punto de morir o
s este se encuentra en etapa de
desarrollo o reproduccin (Martnez E.
1988).En un cultivo de hongos se pueden
observar filamentos, estos filamentos son
una especie de hilo o una especie de
ramas, cuando estos filamentos se
encuentran en un conjunto se le conoce
como micelio. Un trozo de un filamento se
le conoce como hifa, las cuales pueden
tener o no septos que indican la funcin
de la hifa. S el hongo es una clula y no
presenta micelios (unicelular) se conoce
como levaduras, como es el caso de la
Saccharomyces cerevisiae
(Martnez E. 1988).
Aspergillus
sp: En la Foto 11 se puede observar
un filamento bien definido, que no
presenta septos, sin embargo, est
posee una vescula bien definida en
forma redonda, con filides qu son
las encargadas de producir las
esporas. Esto ltimo quiere decir que
este hongo se trata de un hongo
anamrfico, lo que significa que tiene
una multiplicacin asexuada. Por lo
anterior se puede afirmar que las
partculas que se observan al rededor
con forma redonda se trata de las
esporas que est produciendo este
hongo (Martnez E. 1988)(Carrillo L.
2003).
Aunque la imagen tomada en el
laboratorio se trata de una hifa en
proceso de reproduccin, tambin
existen hifa que se encuentran
viejas o que ya cumplieron con su
etapa reproductora, estas presentan
septos que indican qu son hifas que
se encargan de almacenamiento de
alimento (Martnez E. 1988)(Carrillo
L. 2003).
Foto 11. Caracterizacin del hongo
Aspergillus sp.
Penicillium
sp: Este hongo tiene una sola
diferencia en cuanto al anterior
explicado, se trata de las mtulas
(forma de banana o champin), qu
son las que sostienen los filides que
producen esporas. En lo dems este
hongo es similar al anterior, tiene las
mismas partes y tambin se trata de
un anamrfico (Carrillo L. 2003).

Foto 12. Caracterizacin del hongo
Penicillium sp
Saccharomyces
cerevisiae: Se trata de una
levadura muy usada para la
fermentacin de azcares y formar
as etanol, est es ms usada en la
industria cervecera, se trata de una
levadura debido que el hongo es una
sola clula, tiene una forma circular y
su cultivo tiene ms de un hongo
(Carrillo L. 2003).
Foto 13. Hongo Unicelular (Levadura)
Epidermis de la cebolla y tejido la
papa: La clula vegetal es aquella qu
compone la los miembros del reino
plantae, es una clula eucariota, las
cules tiene diferenciado el ncleo, la
membrana y el citoplasma, a pesar de
qu est clula tiene varias similitudes
con la clula animal tambin tiene
diferencias importantes, como procesos
nicos del reino plantae, por ejemplo la
fotosntesis, un proceso de alta
importancia ya qu es el qu genera la
tonalidad verde de las plantas y la
transformacin de materia inorgnica a
orgnica a partir de la energa solar.
Como resultado del proceso mencionado,
se desprende oxgeno.(BioEnciclopedia,
2015)
El tamao de las clulas vegetales es
diferente en cada caso, el valor promedio
oscila entre 0,002 y 0,005 mm. Las
clulas con tejido prosenquimtico, es
decir, clulas muy alargadas pueden
alcanzar un gran tamao y por ello son
utilizadas en diferentes procesos, existen
clulas qu componen el esclernquima
del ramio qu logran longitudes de 25 cm
con un dimetro de 0,5 mm e en algas
hay clulas unicelulares qu miden hasta
5 cm de largo.(Mller , 2000)
Epidermis de la
cebolla: Tambin conocida por el
nombre cientfico de Allium cepa, en
la Foto 14 se puede visualizar la
imagen del microscopio en donde se
distinguen; una pared celular muy
delgada qu separa las diferentes
clulas, las cuales son grandes y
transparentes relativamente. El
citoplasma, el cual es incoloro, en
donde se puede observarse grnulos
en ocasiones, esto como resultado de
la coagulacin, en la epidermis
analizada en este documento no se
distingue este tipo particulas. El
ncleo siempre est rodeado de
citoplasma y dentro del ncleo se
define el nucleolo, en ocasiones
pueden presentarse hasta tres
nucleolos debido la la refrigeracin,
por ltimo existen unos orgnulos
celulares llamados plastidios muy
caractersticos de plantas y algas,
estos participan en la sntesis y
almacenamiento de sustancias como
lpidos, protenas y carbohidratos
pero debido a el tamao pequeo y la
transparencia es difcil de observar en
 el lente de microscopio, sin embargo transparencia de la imagen se puede
al poderse observar se distingue por visualizar mejor.
tener una coloracin amarillenta-ocre,
es por lo cul se caracterizan esos Conclusiones
puntos en la Foto 14.(Mller , 2000) Se domin la tcnica de
tincin de las bacterias por Tincin de
Gram, a partir del resultado las
bacterias pueden dividirse en Gram
positivas y Gram negativas por el
color final qu adquieren estos
microorganismos. En el estudio
realizado se comprob qu la
bacteria Bacillus sp. hace parte del
grupo Gram positivas lo cual hace
qu tenga una capa gruesa de
peptidoglucano y la su vez mantiene
un tono violeta durante la
Foto 14. Epidermis de Allium cepa
observacin. Por el contrario las
caracterizada.
bacterias E. coli y Staphylococcus
sp. son bacterias Gram negativas, por
Tejido de la papa:
lo cual tiene una pared celular
Es un tubrculo perteneciente al reino
rodeada de una capa delgada de
Plantae, cuyo nombre cientfico es
peptidoglucano a la cual se une la
Solanum tuberosum. El tejido de este
membrana externa qu al romperse
tubrculo representa un tejido tpico.
por el alcohol la bacteria toma tonos
Las clulas son casi isodiamtricas
rojos o fucsias.
las cules tienen paredes delgadas.
Las clulas del parnquima suelen
llenar todos los espacios y adems
estn repletas de granos de almidn,
es la reserva almacenada.(Mller ,
2000) En la Foto 15 a) se muestra la
imagen capturada del microscopio en
donde la apreciacin del tejido
vegetal (parnquima) es complicado
por los puntos oscuros sobrelapados
entre s, qu podran dar la nocin de
ser los grnulos de almidn por lo
cual se compara con un bosquejo del Foto 15 a)Tejido de papa en el
tejido reservante de la S. tuberosum microscopio
en la Foto 15 b), se permite ver qu el
tejido tiene granos de todos los
tamaos, desde grandes, excntricos
y pequeos o concntricos. Se
describe cmo alm: grano de
almidn y prd: pared celular. En
est imagen tambin se encuentran
apretados e sobrelapados pero por la

Foto 15 b) Tejido reservante de
S. tuberosum. Seccin
transversal del parnquima del
tubrculo. Tomada de (Mller ,
2000, pg.35)
Se pudo reconocer qu los
mecanismos de tincin permiten qu
la morfologa de clulas , bacterias y
hongos permite la percepcin ms
fcilmente al ojo humano con la
ayuda del microscopio y as identificar
algunos rganos visibles en los
microorganismos estudiados.
La Tincin simple en
hongos posibilita la observacin
morfolgica de las clulas, en este
documento se estableci qu los
microorganismos Aspergillus sp. y
Penicillium sp. son hongos
anamrficos, por lo cual tienen una
multiplicacin asexuada. El
Penicillium sp. tiene una diferencia,
posee metulas que son las
encargadas de sostener los filides
qu producen las esporas.
La S. cerevisiae es una
levadura del reino fungi, igual a
Aspergillus sp. y Penicillium sp. pero
no se considera hongo debido a qu
el hongo es una sola clula circular.
Se pudo realizar una
observacin completa de una clula
eucariota en la epidermis de la
cebolla, distinguiendo el ncleo y
nucleolo, la membrana, el citoplasma
y plastidios muy caractersticos de
las plantas por la funcin qu realiza.
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