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de Mayo de 2017
UNIVERCIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
FACULTAD DE INGENIERIA
INDICE
I. RESUMEN......................................................................................3
I. ABSTRACT.....................................................................................3
II. INTRODUCCIN..............................................................................3
III. OBJETIVOS.....................................................................................4
A. OBJETIVO GENERAL:..........................................................................................4
B. OBJETIVOS ESPECFICOS:....................................................................................4
IV. MARCO TERICO.........................................................................4
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL....................................................6
B. METODOLOGA.............................................................................................7
VII. CONCLUSIONES...........................................................................8
VIII. RECOMENDACIONES....................................................................9
IX. FUENTES DE INFORMACIN............................................................9
BIBLIOGRAFA.....................................................................................9
X. ANEXOS.......................................................................................10
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sample in which we used a proceed to their respective bacterial count
series of solutions in correct measurements Feasible and to analyze whether it is fit for
and under sterile conditions where we can human consumption
determine the presence of colonies and
II. Introduccin
Para considerar si la muestra de carne de pescado es apta para el consumo humano se
procede a realizar un anlisis microbiolgico que nos permitir determinar el nmero de
bacterias en la muestra y analizar si es apta para el consumo humano.
El recuento total de bacteria en placa es til para obtener una idea del grado de frescura,
dependiendo de la cantidad de bacterias presentes. En el caso de los mesfilos aerbicos se
incluyen todas las bacterias mohos y levaduras capaces de desarrollarse en temperaturas
determinadas.
III. Objetivos
a. Objetivo General:
Determinar la carga microbiana asociada a la muestra de pescado para evaluar
su calidad higinica sanitaria.
b. Objetivos Especficos:
Determinar si el producto alimenticio est en condiciones aptas para el
consumo humano.
Aplicar en la prctica las tcnicas de preparacin y dilucin de muestras para
conseguir un adecuado recuento de microorganismos aerobios mesfilos.
Familiarizarse con mtodos directos para la obtencin de microorganismos
utilizando el mtodo de recuento de colonias en placa.
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La cuantificacin de este grupo microbiano permite estimar de forma general
la carga microbiana presente en una muestra, si bien no aporta datos concretos sobre el tipo de
especies predominantes. No obstante, su conocimiento siempre es interesante, ya que su valor es
reflejo de la calidad sanitaria y, adicionalmente, suele proporcionar informacin con respecto a la
existencia de prcticas incorrectas, tales como vertidos o manipulacin inadecuada. Sin embargo,
los datos derivados del recuento de la microbiota aerobia mesfila no deben ser considerados
como parmetros absolutos en cuanto a su valor indicador, ya que un resultado elevado no ha de
ir necesariamente unido a la presencia de microorganismos patgenos o toxinas ni, por el
contrario, un bajo recuento en el nmero de colonias de estas caractersticas se relaciona siempre
con la ausencia de microbiota patgena.
Por tanto, y considerando las reservas anteriormente comentadas, es necesario siempre
determinar la cantidad de microorganismos aerobios mesfilos y extraer las conclusiones
adecuadas de dicha informacin, sin que ello signifique obviar otros anlisis de mayor
especificidad y vala.
TCNICAS DE RECUENTO BACTERIANO
Para el recuento de microorganismos presentes en una muestra de alimento, suelo, agua, aire,
cultivos, entre otros, existen diferentes mtodos o tcnicas. Algunas de estas tcnicas son directas
y permiten un recuento de todas las clulas, tanto vivas como muertas. Las medidas directas
incluyen los recuentos directos al microscopio, recuento en placa, o el nmero ms probable
(NMP).
Otras son las indirectas y miden una propiedad de la masa de las clulas como son la turbidez,
peso seco o una actividad metablica.
FASES DEL CRECIMIENTO DE UN CULTIVO
Se pueden distinguir cuatro fases en el cultivo:
1. La fase lag en la que el microorganismo se adapta a las nuevas condiciones y pone en
marcha su maquinaria metablica para poder crecer activamente.
2. La fase exponencial.
TURBIDEZ
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Se basa en la medida de la turbidez de los medios de cultivo en los que crecen
microorganismos unicelulares. La turbidez es proporcional a la masa de las clulas en suspensin
y su medida nos permite estimarla. Para ello se utiliza un espectrofotmetro que mide la cantidad
de luz que transmite una solucin o un cultivo lquido de clulas microbianas. A mayor masa de
clulas en un cultivo, mayor ser su turbidez, y menor la cantidad de luz que se transmitir de
manera que la lectura en el espectrofotmetro ser mayor. Se utiliza en cultivos densos.
Consiste en aadir medio de cultivo fundido y enfriado a 35C sobre placa de Petri que contiene
una cantidad determinada de la muestra diluida. Se tapa la placa y se rota para mezclar la
muestra en el agar. Cuando el agar solidifica se incuban las placas. Las colonias se desarrollan
tanto dentro del agar como en la superficie. Es un mtodo generalmente utilizado para el recuento
de microorganismos anaerobios facultativos o microaerfilos.
a. METODOLOGA
b.1. Recuento Estndar en Placa o Pour Plate o Recuento en Placa por Siembra de
Profundidad
MTODO 1
1.1. Dilucin
Procedimientos:
1. Pesar 10gr. de muestra en condiciones de asepsia.
2. Homogenizar con 90ml. de solucin diluyente (AP) en licuadora.
3. Realizar disoluciones decimales empleando tubos con 9.0 ml. de solucin diluyente.
4. Depositar 1.0ml.de cada disolucin en cajas de Petri estriles.
1.2. Siembra:
Procedimientos:
1. Adicionar de 15 a 20 ml de agar (APC) triptona extracto de levadura fundido y enfriado a
45C en placas de Petri estriles conteniendo inculo de 1ml por dilucin.
2. Incubar las cajas en posicin invertida a 35C por 48 horas.
3. Homogenizar la muestra y el agar mediante rotacin y vaivn.
4. Adicionar control de esterilidad:
- Ms 1ml de AP estril y APC (15-20ml)
- Ms APC (15-20ml)
5. Contar aquellas placas que tengan entre 30 a 300 colonias y reportar con ufc/gr.
MTODO 2
Dilucin:
Procedimientos:
1. Pesar 10gr de muestra en condiciones de asepsia.
2. Homogenizar con 90ml de solucin diluyente (AP) en licuadora.
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3. Realizar disoluciones decimales empleando tubos con 9.0ml de solucin
diluyente.
4. Adicionar previamente de 15 a 20ml de agar (APC) triptona extracto de levadura fundido y
enfriado a 45C en placas Petri estriles y dejar solidificar el APC.
5. Depositar 0,1 ml de cada disolucin en cajas Petri estriles.
Siembra:
Procedimientos:
1. Para la siembra por diseminacin emplear la esptula de Drigalsky.
2. Dejar secar superficie de placa por 10min.
3. Incubar las cajas en posicin invertida a 35 C por 72h.
4. Adicionar control de esterilidad:
- Ms 1ml de AP estril y APC (15-20ml)
- Ms APC (15-20ml)
5. Contar aquellas placas que tengan entre 30 a 300 colonias y reportar con ufc/gr.
VI. RESULTADOS
VII. CONCLUSIONES
Existen diversos mtodos para contar colonias, el que se utiliza ms es el Pour Plate; sirve para
hacer el anlisis cuantitativo como el cualitativo.
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VIII. RECOMENDACIONES
Bibliografa
X. ANEXOS
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X.APENDICE
DIAGRAMA DE FLUJO
MTODO 1
1. DILUCION
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Homogenizar con 90
ml de solucin
diluyente AP en la 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5
licuadora
2. SIEMBRA
Homogenizar la muestra
AP mediante rotacin
MTODO 2
1 DILUCION
Homogenizar con 90
ml de solucin
diluyente AP en la
10
licuadora
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2. SIEMBRA
Homogenizar la muestra
mediante rotacin Y
AP haciendo uso del Asa de
Digrasky
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