Escola de engenharia industrial metalrgica de Volta Redonda

Universidade Federal Fluminense

Relatrio de Microbiologia: Colorao de Gram

Alunos: Christiane Constantino de Oliveira e Douglas Reis

Professor: Carlos Eduardo

26 de Abril de 2017, Volta Redonda-RJ.

Objetivos:

Diferenciar as bactrias entre Gram positiva e Gram negativa, pelo mtodo de

colorao. Onde ns aprendemos a preparar esfregao de bactrias, realizar a tcnica de
Colorao de Gram e seus fundamentos, de modo que possamos fazer a comparao de
sua cor e estrutura depois (no microscpio).

Introduo:

O mecanismo da colorao de Gram se refere composio da parede celular,

sendo que as Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicano e cido
teicico, e as Gram-negativas, uma fina camada de peptideoglicano, sobre a qual se
encontra uma camada composta por lipoprotenas, fosfolipdeos, protenas e
lipopolissacardeos. Durante o processo de colorao, o tratamento com lcool-acetona
extrai os lipdeos, da resultando uma porosidade ou permeabilidade aumentada da
parede celular das bactrias Gram-negativas.
Assim, o complexo cristal violeta-iodo (CVI) pode ser retirado e as bactrias Gram-
negativas so descoradas. A parede celular das bactrias gram-positivas, em virtude de
sua composio diferente, torna-se desidratada durante o tratamento com lcool-
acetona, a porosidade diminui, a permeabilidade reduzida e o complexo CVI no pode
ser extrado.
Outra explicao baseia-se tambm em diferenas de permeabilidade entre os dois
grupos de bactrias. Nas Gram-positivas, o complexo CVI retido na parede aps
tratamento pelo lcool-acetona, o que causa, provavelmente, uma diminuio do
dimetro dos poros da camada de glicopeptdeo ou peptideoglicano da parede celular. A
parede das bactrias Gram-negativas permanece com porosidade suficientemente
grande, mesmo depois do tratamento com lcool acetona, possibilitando a extrao do
complexo CV-l.

Materiais:

Lminas
Lamnulas*
leo de imerso
Bico de Bunsen- lamparina
Ala de platina
Soluo de cristal violeta
Lugol
 lcool acetona
Fucsina de Gram
gua
3 Bactrias
Microscpio
Papel de secagem
Conta gotas
Cronometro

Mtodos:

Primeiramente precisamos preparar esfregaos para cada uma das 3 bactrias

(R,E,RE),logo aps essas bactrias so transferidas para lminas e aquecidas(com o bico
) para que sequem.

Em seguida, aplicamos a soluo de cristal violeta na lamina e esperamos 30s.

Sucessivamente aplicamos o lugol e aguardamos mais 30s.

Aps dado o tempo, inclina-se as lminas para que escorresse o excesso para pia e
goteja-se lcool acetona at no haver mais corante sobre as mesmas, depois deve-se
lavar com agua.

Quando feito, se deve aplicar a Fucsina de Gram e aguardar mais 30s, lavamos
novamente e em seguida secamos as lminas com toques suaves com o papel de
secagem.

Quando terminado todo o procedimento descrito, deve-se levar as lminas para o

microscpio e fazer a observao de cada uma delas nas lentes de 4x, 10x,40x e a de
100x(que aps aplicado o leo de imerso foi observada, porm no deu certo).

Feita essa observao, deve ser feito o desenho de cada uma. Neste momento j
podemos observar tanto o formato, quanto a colorao de cada bactria.

As bastrias gram positivas tem colorao roxa, e as gram negativas tem colorao
vermelha/rosa

Resultados e Discusso:

(((((Desenhos)))))
Bactria E: Gram negativa (possivelmente a Escherichia coli), pois era vermelha.

Bactria R: Gram positiva (possivelmente a Staphylococcus aureus), pois era roxa.

Bactria RE: Gram positiva (possivelmente a Serratia marcescens), pois era roxa.

Bibliografia:

-Microbiologia Prtica- Roteiro e manual (Bactrias e Fungos), Mariangela

Cagnoni Ribeiro; Maria Magali S.R. Soares; Editora Atheneu

-http://www.infoescola.com/bioquimica/coloracao-de-gram/

-
http://www.abc.med.br/p/587007/bacterias+gram+positivas+e+gram+neg
ativas+o+que+sao+como+e+a+tecnica+de+gram+quais+as+vantagens
+de+diferenciar+as+bacterias+gram+negativas+e+gram+positivas.htm

-http://www.medicinageriatrica.com.br/2008/07/06/bacterias-gram-positivas-
e-gram-negativas/