UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL

SIMON RODRIGUEZ
NUCLEO CANOABO
INGENIERIA DE ALIMENTOS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS

Aislamiento e identificacin de
salmonella

Facilitador: Participantes:
Ing: Molina Tender Sarah Rodrguez
Preparadora: CI: 20179739
Greyse ojeda Naybeth Alvarado
CI:22214723
Domilgre Guzmn
CI: 20193001

Octubre, 2015
 INTRODUCCION

Existe un gran nmero de bacilos gram negativo que causan enfermedades. Se

puede presuponer que todas las especies y cepas de salmonella son patgenas para el
hombre, y que los sndromes de la enfermedad las dividen en varios tipos clnicos
distintos.

La intoxicacin alimenticia por salmonella se produce por la ingestin de

alimentos que contienen un nmero significativo de cepas activas.

A la vista de la reciente disposicin federal prohibiendo la presencia de

salmonella spp en los alimentos, la investigacin de estos organismos se hace muy
importante y necesaria. Siendo esto a la vez un problema difcil para los microbilogos
y cientficos de alimentos.

El problema es aun ms difcil por el hecho de que los alimentos contienen gran
nmero de microorganismos diferentes de la salmonella, los cuales pueden crecer en
algunos de los medios empleados para la investigacin de salmonella.

Los tipos de alimentos cuyo consumo ha dado lugar a la produccin de

enfermedades son: pollos, pavos, leche, queso, huevo, etc.

El manejo en gran escala de alimentos como se realizan en muchas instituciones

tiende a aumentar la diseminacin del trastorno, y las maquinas expendedoras de
alimentos aumentan el riesgo, lo que ocurre tambin con los alimentos precosidos.

Entre las bacterias que producen intoxicaciones alimenticias, las salmonella son
menos resistentes que Staphilococus Aureus, son cocos gram positivaos, son catalasa
positivas.

La toxiinfeccin alimentara Staphilococica esta producida por ciertas cepas de

staphilococos aureus, que adems producen coagulasa.

Todos los sntomas de toxiinfeccin alimenticia staphilococica estn causadas

por una sustancia extracelular denomina enter toxina.

Las dos procedencias ms importantes de organismo que contaminan los

alimentos son los portadores nasales y los individuos con manos brazos infectados.
Un gran numero de alimentos se han relacionados con los brotes toxiinfecciosos
por staphilococus, y su denominador comn mas frecuente radica en que los alimentos
han sido manipulados y refrigerados inadecuadamente despus de su preparacin. Entre
estos se tiene carne, productos de panadera, pavo, leche y quesos, etc.

De aqu la importancia del estudio e identificacin del microorganismo

staphilococus en los alimentos y personas.

En cuanto a los objetivos que se persiguen en el aislamiento de salmonella son:

 Uso de procedimiento estadares para la deteccin de salmonella en alimentos.

Observar reacciones tpicas de salmonella en varios medios selectivos que nos

permitan describir caractersticas microscpicas y diferenciar cepas de salmonella a
travs de las pruebas bioqumicas.

Aislamiento e identificacin del microorganismo patgeno S. Aureus.

Familiarizarse con las pruebas bioqumicas bsicas en la identificacin del

microorganismo.
 HOJA DE REGISTRO

Alimento: carne molida.

Naturaleza del producto: slido.

Lugar de procedencia: carnicera canoabo

Peso: 10 gramos.

Fecha de vencimiento: no tiene.

Anlisis microbiolgico: aislamiento de salmonella.

 MATERIALES Y METODOS

MATERIALES

Mechero
Fsforo
Trpode
Tubos de ensayos
Placas de petri
Asa de platino
Gradilla
Estufa
Jarras de metal
Rejillas metlica
Guantes
Pipetas
Frasco
Pinzas
Agua peptonada
Cuenta colonias
Agar bilis verde brillante
Caldo selenito-cistina
Agar salmonella-shigella
Agar baird packer

METODOS

Los anlisis se harn de acuerdo a lo establecido en cuadro#1

Anlisis Norma Covenin Ao

Salmonella 1291 79

Staphilococus 1292 79
Aureus
 CUADROS DE RESULTADOS

Cuadro 1. Resultados observados en la fase de enriquecimiento para Salmonella

Muestra Caldo Caractersticas
Analizada Empleado Observadas
Rappapor
Vassiliadis Turbidez
Carne Molida
Selenito- No hubo reaccion
Cistna

Cuadro 2. Datos obtenidos en el aislamiento selectivo de Salmonella

Medio de Caractersticas
cultivo de las colonias
Agar
salmonella Colonias entre
shigella incoloras y negras

Agar bilis Colonias de color

verde rosa
brillante

Cuadro 3. Resultados obtenidos durante la confirmacin de Salmonella

Medio de
cultivo Caractersticas de las colonias

Crecimiento aislado en
Agar nutritivo
el medio
Cuadro 4: Datos obtenidos en la identificacin y confirmacin de Salmonella

Observaciones
Prueba
Resultados Caractersticas

Presento un anillo
rojo en la
Caldo urea (+)
superficie del
medio

Degradacin del
Hierro medio formo
(+)
lycine coloracin
amarillo

No presento
viraje de color
presencio
Agar simon (-)
coloracin azul y
verde

(+)= positivo (-)=negativo

 DISCUSION DE RESULTADOS

La muestra utilizada en la prctica fue carne molida, la cual segn ICMSF

(1996), en contadas ocasiones la salmonella se puede hallar presentes en las carnes de
los animales que padecen septicemia inducida por salmonella, pero mas corrientemente
llegan a la superficie de la carne desde el contenido intestinal y desde las heces que se
adhieren en el pelo, en la piel y las patas de los animales cuando llegan al sacrificio. En
los brotes de salmonelosis, la carne de vacuno y la carne de cerdo son identificadas
corrientemente coco vehculos de salmonella.

El mtodo operatorio llevado a cabo en la experiencia se refleja en el anexo 1, lo

cual coincide con lo planteado por ICMSF (1996), que la deteccin rutinaria de las
salmonellas supone una secuencia de pre-enriquecimiento, enriquecimiento, siembra en
placas de medios selectivos, aislamiento e identificacin.
A la muestra analizada se le realizo una fase de pre-enriquecimiento, con lo
cual se pretenda reducir cualquier efecto que el propio alimento pudiera ejercer sobre la
selectividad de los otros medios de cultivo, y el enriquecimiento selectivo tenia por
finalidad inhibir el crecimiento de otros microorganismos a la vez y permitir que la
salmonellas se desarrolle (cuadro 1).

Luego de las dos fases anteriormente descritas, se realizo un aislamiento en

placas con medios selectivos, los cuales fueron, el bilis verde brillante y el agar
salmonella-shigella (cuadro 2), donde los resultados obtenidos permiten presumir la
presencia de la Salmonella pues, son tericamente respaldados con lo expuesto por
Caffer y cols (2001) en cuanto a la descripcin del aspecto de las colonias de
salmonella en los medios de agar selectivo, siendo las caractersticas en el bilis verde
brillante de un color intermedio entre en rosa y el fucsia y en el agar salmonella-
shigella, las colonias tpicas de salmonella son entre incoloras y un rosa y negras no se
presenci colonias aisladas en el agar bilis verde brillante por lo cual solo se utilizo el
agar salmonella-shigella,
En el cuadro 3, se reflejan los resultados obtenidos en la fase de confirmacin,
la cual segn COVENIN (1988) se realiza para la determinacin de las
caractersticas bioqumicas de las colonias presuntivas de salmonellas, se realizo una
siembra en agar nutritivo, para aislar dicha bacteria.

Sin embargo los resultados del test bioqumico o del paso de identificacin,
sealado en el cuadro 4, presentaron algunas variaciones con respecto coloracin ya
que de estas pruebas realizadas solo 2 de ellas dieron resultados positivos las cuales
fueron: caldo urea presentando un anillo color rojo en la superficie del medio y hierro
licyne el cual dio una coloracin amarilla esperada. Con respecto al agar simon su
coloracin fue un azul y verde en el fondo siendo negativo este resultado
.
 CONCLUSIONES

Los resultados obtenidos en la experiencia permiten concluir que:

La muestra analizada tena una alta carga microbiana

Presunta presencia de salmonella
 RECOMENDACIONES

Realizar todos los pasos y pruebas establecidas por COVENIN 1291-88.

Realizar las pruebas bioqumicas correspondientes al microorganismo en estudio
para obtener lo resultados deseados.
Realizar adecuadamente la homogenizacin de la muestra.
 ANEXOS

CALDO RAPPAPORT Y SELENITA CISTEINA

COLONIAS TIPICAS DE PRESUNTA SALMONELLA EN AGAR BILLI VERDE

BRILLANTE Y SALMONELLA shigella,
PRUEBAS BIOQUIMICAS
CALDO UREA

HIERRO LICYNE
AGAR SIMONS