UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

I. TTULO

EFECTO NORMOGLICEMIANTE DEL EXTRACTO HIDROALCOHLICO DE

HOJAS DE Geranium ruizii Hieron EN RATAS INDUCIDAS CON ALOXANO

II. ANTECEDENTES

La diabetes es una enfermedad metablica crnica que aparece debido a que el pncreas no
fabrica la cantidad de insulina que el cuerpo humano necesita, o bien la fbrica de una
calidad inferior. La insulina, una hormona producida por el pncreas, es la principal
sustancia responsable del mantenimiento de los valores adecuados de azcar en sangre.
Permite que la glucosa sea transportada al interior de las clulas, de modo que stas
produzcan energa o almacenen la glucosa hasta que su utilizacin sea necesaria. Cuando
falla, origina un aumento excesivo del azcar que contiene la sangre (hiperglucemia).1

Diabetes Mellitus se considera como una de las enfermedades crnicas ms complicadas de

tratar. La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) ha estimado que para el 2030 el nmero
de diabticos ser de 32.9 millones de personas en el mundo. El Per representa el 0.11%
del mercado farmacutico mundial. Hay que tener en cuenta que ms del 50% de los
peruanos se ubican en el nivel de pobreza y ms del 20% en extrema pobreza sin
posibilidades de acceso a medicamentos convencionales. Por lo tanto, se hace indispensable
la bsqueda de medicamentos eficaces y de bajo costo.2

IMPORTANCIA DE LA REGULACIN DE LA GLICEMIA

La glucosa es el carbohidrato ms importante en los mamferos, por ser su principal fuente

de energa y, la nica en el feto y los tejidos glucodependientes (retina, eritrocitos y el
epitelio germinativo de las gonadas). Adems de esta vital funcin tiene otra de gran
importancia, por ejemplo: puede almacenarse como glucgeno, se puede transformar en
lpidos, origina la ribosa para los cidos nucleicos y puede formar complejos con protenas
como en el glucoclix.3
En una persona normal, la concentracin de glucosa en la sangre, est regulada en limites
muy estrechos, habitualmente entre 70-110mg/dl en una persona en ayunas (8hs. aprox.).

Esta concentracin se eleva a 140mg/dl, una hora despus de la ingesta, pero un sistema
hormonal devuelve estos valores a los normales, cerca de las dos horas despus. A la
inversa, en momentos prolongados de inanicin, el hgado se encarga de mantener la
glucemia mediante la glucogenlisis y la gluconeognesis, principalmente. Como es de
suponer este fino balance es llevado a cabo por un preciso mecanismo hormonal.

Un valor elevado de glicemia promueve los siguientes efectos sobre el organismo:

La glucosa puede ejercer presin osmtica intensa en el lquido extracelular, y si

aumenta provocara una deshidratacin celular exagerada.
Diuresis osmtica renal que disminuye los lquidos y electrolitos orgnicos.
El incremento a largo plazo de la glicemia puede daar muchos tejidos, sobre todo,
los vasos sanguneos. Las lesiones vasculares, junto con una Diabetes Mellitus no
controlada, aumentan el riesgo de ataques al corazn, accidente cerebro vascular,
enfermedad renal terminal y ceguera.4

Existen dos principales mtodos para la determinacin de la glucosa: el mtodo PTGO y

por el mtodo de la glucosa oxidasa.5

a) DETERMINACION DE GLUCOSA POR EL METODO PTGO

Se puede realizar pero el mtodo PTGO (Prueba de tolerancia de la glucosa oral) en el cual
primero se toma una muestra de sangre para observar el nivel de glucosa en sangre, luego
se le proporciona un lquido que contiene una cierta cantidad de glucosa, despus de 30 a
60 minutos se realiza la toma de muestra de sangre para observar la variacin de los niveles
de glucosa.

b) DETERMINACIN DE GLUCOSA POR EL MTODO DE GLUCOSA OXIDASA

La reaccin de la glucosa oxidasa junto con una reaccin auxiliar se ha utilizado

ampliamente para la determinacin de la glucosa en los fluidos biolgicos. Se han
desarrollado multitud de reacciones auxiliares distintas a fi n de mejorar la especificidad
global del sistema de reaccin o para retener la especificidad inherente de la glucosa
oxidasa. El mtodo utilizado en este reactivo se basa en la reaccin indicadora de perxido
de hidrgeno que une 4aminoantipirina a un compuesto fenlico.

Figura 1: Reaccin de la glucosa oxidasa

EL CIDO URICO PLASMTICO

Se relaciona con factores de riesgo cardiovascular, especialmente con la hipertensin y la

Diabetes Mellitus. En el sndrome metablico, la hiperinsulinemia activa el sistema
reninaangiotensina-aldosterona y la angiotensina II acta como un inductor potente de
actividad de NADPH que aumenta las especies reactivas de oxgeno (EROX) y O2 en la
intima-media arterial. El estrs xido-reductivo agota los antioxidantes locales como la
superxido dismutasa (SOD), la glutatin peroxidasa y la catalasa; en estas condiciones, el
cido rico desarrolla su cambio de actividad antioxidante a prooxidante cuando penetra en
la placa aterosclertica, contribuyendo en ese medio a oxidar las lipoprotenas, en pacientes
con sndrome metablico y Diabetes Mellitus tipo 2.6

LAS TRANSAMINASAS

Las transaminasas GOT/AST y GPT/ALT son enzimas ampliamente difundidas en el

organismo con elevada concentracin en corazn, hgado, msculo esqueltico, rin y
eritrocitos. La actividad srica en condiciones normales es baja o nula. Un dao o
enfermedad en cualquiera de estos tejidos conduce a un aumento en los niveles sricos. As,
luego de un infarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad
de GOT (abundante en msculo cardaco).

En hepatitis virales y otras formas de enfermedad heptica que involucren necrosis tisular,
predominar la actividad srica de GPT (abundante en tejido heptico). Una elevada
actividad de transaminasas puede detectarse tambin en traumas accidentales o quirrgicos
y en distrofias musculares o miositis.
Fundamento del mtodo

Figura 2: Las reacciones de GOT

El piruvato formado (el oxalacetato es inestable y se transforma en piruvato), reacciona con

la 2,4-dinitrofenilhidracina producindose, en medio alcalino, un compuesto coloreado que
se mide a 505 nm.7

MECANISMOS HIPOGLICEMIANTES DE LAS PLANTAS

De acuerdo con Negri (2005), los mecanismos implicados en la accin de las plantas como
hipoglicemiante estn relacionados con los siguientes factores:

Aumento de la liberacin de insulina a travs de la estimulacin de las clulas

pancreticas.

Resistencia a las hormonas que aumentan la cantidad de glucosa en sangre.

Aumento del nmero y de la sensibilidad de los sitios receptores de insulina

Disminucin de la prdida de glucgeno

Aumento del consumo de glucosa en rganos y tejidos

Eliminacin de radicales libres

Resistencia a la peroxidacin de los lpidos

Correccin de los trastornos metablicos causados en lpidos y protenas.

Estimulacin del aumento de la microcirculacin de la sangre en el cuerpo.8

Estudios In vitro

Los estudios in vitro, sirven como herramienta complementaria para explorar hallazgos
obtenidos con modelos in vivo y avanzar en el mecanismo de accin de un producto
natural. Los agentes antidiabticos convencionales pueden afectar diferentes vas del
metabolismo de la glucosa, como la secrecin de insulina, la captacin de glucosa por los
rganos diana, y la absorcin de nutrientes. Existen estudios in vitro, en los cuales se evala
la secrecin de insulina (con lneas celulares aisladas de los islotes pancreticos o, con
lneas celulares secretoras de insulina), o la captacin de glucosa. Otro de los enfoques
teraputicos en este tipo de estudios, es disminuir la hiperglicemia postprandial al retardar
la absorcin de la glucosa mediante la inhibicin de enzimas como la -amilasa y la -
glucosidasa. Estudios clnicos han demostrado que la ingesta de inhibidores de la -
glucosidasa interfiere con la degradacin de hidratos de carbono, reduciendo su tasa de
absorcin y por tanto, disminuyendo los niveles de glucosa postprandiales; previniendo de
esta manera la aparicin de diabetes y sus complicaciones.9

Se han realizado diversos estudios con plantas de efecto hipoglucemiante, pero solo hay
hiptesis de los posibles mecanismos de accin los cuales se presentan a continuacin:

El efecto hipoglucemiante observado es por la presencia de la enzima isomerasa

glucosa 6 fosfato, encontrada previamente en la Opuntia ficus-indica,5,6 pero no
en la Opuntia streptacantha.

Aislamiento e identificacin de compuestos tipo polisacridos en O. ficus-indica y

O. streptacantha con actividad hipoglucemiante proponen que los efectos
observados con el nopal, se deben a su contenido en fibra. Se sabe que la fibra es
una mezcla de lignina, celulosa, hemicelulosa, pectina, muclago y gomas, capaz de
disminuir la absorcin gastrointestinal de varios nutrientes; y en consecuencia los
niveles sanguneos de colesterol, triglicridos y glucosa disminuyen por falta de
absorcin.

Para explicar el efecto de disminucin de insulina sangunea, se menciona una

posible accin inhibitoria de la fibra sobre el pptido gstrico, sustancia que
normalmente incrementa la sensibilidad del receptor de insulina e induce la
liberacin de esta hormona en los islotes de Langerhans. Los autores proponen un
mecanismo sensibilizante del receptor a la insulina. El argumento que apoya esta
hiptesis es el haber obtenido bajos niveles de insulina e importante efecto
hipoglucmico.

Si consideramos que el modelo de produccin de hiperglicemia, utilizado por

nosotros, es el de diabetes qumica por aloxano, sustancia que destruye las clulas
beta del pncreas, encargadas de producir insulina, a priori, podramos inferir que
estas plantas protegen al pncreas de la accin txica del aloxano; sin embargo, en
estudios anteriores realizados, por nosotros, con Cuti Cuti, encontramos que esta
 planta previene la hiperglicemia aloxnica y recupera, hasta lmites normales, la
glicemia incrementada por accin del aloxano, cuando suponemos que las clulas
beta ya fueron destruidas, como sera el caso del presente trabajo. Lo expuesto, nos
hace plantear la hiptesis de que estas plantas favoreceran la utilizacin de la
glucosa por parte de las clulas del organismo, con un efecto parecido a la
insulina. Los alcaloides constituyen los principios activos responsables del efecto
hipoglicemiante de las 4 plantas estudiadas.10

Las plantas medicinales con capacidad antidiabtica son una fuente de nuevos compuestos
en el tratamiento de la diabetes. La Pasuchaca (Geranium lechleri knuth ) es una de ellas,
oriunda del Per utilizada desde hace mucho tiempo para controlar los niveles de glucosa.
Esta planta se cultiva en la sierra del Per, a ms de 3500 metros sobre el nivel del mar, se
puede encontrar en los departamentos de Cajamarca, La Libertad, Cerro de Pasco y
Ancash.11

Descripcin botnica

La planta es inherente, acaule, silvestre que crece en forma espontnea.

La raz es pivotante.
Las hojas son basales pubescentes, sostenidas por peciolos (21 mm de largo),
alternas, palmatipartidas en 7, dentibuladas. Los lbulos ampliamente cuneados -
abovados.
Inflorescencia en umbela, pednculo, floral de 10 mm de largo.
Su flor es periantica, diclamidea, heteroclamidea, hermafrodita, actinomorfa.
Presenta en su base 5 verticilos de brcteas conolenas.
Su fruto es un esquizocrpico de tipo regma que procede de un gineceo pluricarpelar
con muchos estilos soldados entre s, pero al madurar el fruto se separa cada uno
con el correspondiente carpelo.12
 Figura N 3: Pasuchaca
La pasuchaca en su composicin qumica presenta glucsidos (cianogenticos
antraquinnicos, anticinicos, saponnicos) gomas, muclagos, taninos, saponinas,
clorofila, grasas, esencias ceras, resinas, Flavonoides y Carotenoides que brindan un efecto
antioxidante, azucares reductoras.13

Las principales propiedades medicinales atribuidas a la Pasuchaca son: antidiabtico,

hipoglucemiante y depurador de la sangre; as mismo, se le considera un fuerte astringente,
se suele emplear para combatir diarreas crnicas, clera infantil, hemorragias,
inflamaciones de la garganta y lceras bucales.

En la medicina homeoptica se recomienda, adems de los casos ya mencionados, en las

blenorragias, diabetes, hemoptisis, menorragias, lceras de las mamas y atonas del
estmago y laringitis.14

Efecto hipoglucemiante: Segn varios estudios realizados sobre esta planta, se ha

podido verificar que la Pasuchaca es la especie vegetal que se le atribuye como
inhibidor de la -glucosidasa, la protena que degrada el glucgeno en la sntesis de
la glucosa.
Propiedades antidiabticas: Estimula la secrecin de la insulina por el pncreas con
el fin de eliminar el nivel de azcar en sangre. Otro beneficio importante mediante
el consumo de la Pasuchaca es que inhibe la gluconeognesis que es aumentada en
los diabticos o aumenta la captacin de insulina por sus receptores. Por lo tanto
teniendo en cuenta estas dos propiedades mencionadas anteriormente, esta planta
est recomendada para el tratamiento de ciertos tipos de diabetes (diabetes tipo I y
II).
 Poderoso astringente: Por lo que se utiliza para combatir la diarrea crnica,
hemorragias, inflamaciones de la garganta, clera infantil.
lceras bucales: De igual manera la Pasuchaca tambin se aplica como depurador
de la sangre.

Se utiliza desde hace muchos aos por el ser humano sin que se produzcan efectos
colaterales, se supone que su ingesta no implica riesgo para la salud.15

Se han llevado estudios en el Instituto Nacional de Salud, en cuanto a medir el efecto

hipoglicemiantes de la pasuchaca en conejos con diabetes experimental tratados con
extracto acuoso de Geranium delsianum Knuth, administrando una hora antes de cada
determinacin de glucosa (dosis de 10 g/kg p.c); observndose que la baja de glicemia
empieza a la primera hora, acentundose a la cuarta hora y mantenindose a la sptima.

Estos estudios revelaron que el extracto acuoso produjo un efecto hipoglicmico al ser
administrado por va oral a conejos diabticos (por accin del aloxano). Este efecto fue
corto y un poco menor a dosis nica de 5 g/kg p.c. que a dosis de 10 g/kg p.c. con la que
lleg a alcanzar el mximo efecto hipoglicemiante cuatro horas despus de la
administracin del extracto.16

Al administrar la droga cada dos horas (una antes de cada determinacin de la glicemia), se
verific que la hipoglicemia persiste hasta la sptima hora, siendo ms significativa con la
dosis de 10 g/kg p.c.

Se han efectuado estudios de toxicidad aguda, administrando extracto acuoso por va oral
mediante sonda metlica a ratones con ayuno de 14 horas; primero se busc por tanteo la
dosis aproximada (20, 30 y 100 g/kg p.c) que determina el efecto de un pequeo nmero de
animales, luego se procedi a hacer un ensayo de animales (10 ratones por grupo)
observndose la mortalidad en cada dosis empleada por un perodo de 7 das, sobre cuyos
resultados se practicaron los clculos estadsticos a fin de determinar la DL50 exacta.17

La dosis de 20 g/kg p.c. administrada al primer grupo no produjo muertes, en el segundo

con la dosis de 30 g/kg p.c. se produjo el 10% de muertes. El porcentaje de mortalidad
aumenta con el incremento de la dosis de 50 g/kg p.c. La DL50 corresponde a 35 g/kg p.c.

Despus de cada administracin de la droga y especialmente con las mayores dosis se

observ primero la fase de excitacin con aumento de la frecuencia respiratoria, por
aproximadamente 20 minutos, luego viene una fase de depresin disminuyendo la actividad
espontnea y la reaccin de alarma, y aumento de la pasividad; posteriormente algunos
experimentaron convulsiones seguidos de una muerte lenta. En la diseccin de los ratones
se observ distensin intestinal.18
III. PROBLEMA

El extracto hidroalcohlico de Geranium ruizii Hieron (Pasuchaca) tendr actividad

normoglicemiante sobre ratas hiperglicmicas inducidas con aloxano?

IV. HIPTESIS

El extracto hidroalcohlico de hojas de Geranium ruizii Hieron (pasuchaca) presenta

actividad normoglicemiante sobre una poblacin de ratas hiperglicmicas inducidas con
aloxano.

V. JUSTIFICACIN

En la actualidad, la diabetes se considera uno de los principales problemas de salud pblica

en el Per, debido a su elevada prevalencia, as como a la grave y variada morbilidad que
acompaa a esta enfermedad. Aunque no se conoce el nmero exacto de personas afectadas
por esta enfermedad se calcula que el 8% de la poblacin peruana (aproximadamente 2 400
000 personas) la padece.19 Es necesario buscar tratamientos alternativos como la herbolaria,
sin embargo debido a la poca informacin cientfica existente respecto a la eficacia,
seguridad y utilizacin de plantas como por ejemplo Geranium ruizii Hieron es necesario
generar el conocimiento que proporcione las bases necesarias en cuanto a la forma de
utilizacin, dosis y posibles efectos que estas plantas puedan producir, y as ofrecer una
alternativa para el mejor aprovechamiento de los recursos naturales.

VI. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL:

Determinar el efecto normoglicemiante del extracto hidroalcohlico de Geranium

ruizii Hieron (pasuchaca) en ratones macho con hiperglicemia inducida con aloxano

OBJETIVOS ESPECFICOS:

Elaborar el extracto hidroalcohlico de Geranium ruizii Hieron (pasuchaca)

Determinar los componentes qumicos del extracto hidroalcohlico de pasuchaca
Determinar los niveles de Glucemia en ratas
 Determinar los niveles de cido rico y transaminasas en suero de ratas luego de la
administracin del extracto
Determinacin del posible mecanismo de accin hipoglicemiante

VII. MATERIAL Y EQUIPOS

MATERIALES

25 Papel Kraft
1 Tamiz N 16
5 bolsas de polietileno
3 frascos ambar de 2 L Embudo de Buchner
1 pliego de papel filtro
1 recipiente de vidrio
Beakers
Tubos de ensayo
Probeta de 50 mL
Pipetas de 1 mL
Pipetas de 5 mL
Cromatofolios
Cuba cromatogrfica
Viales
Alcohol 96
Agua destilada
Metanol
Diclorometano
Cloroformo
n-Hexano
Benceno
Aloxano 5%

Reactivos

cido
rico

in de
transaminasas

terminacin de alfa
glucosidasa
Reactivos de Precipitacin

Molish
Antrona
Fehling
Tricloruro de hierro
Gelatina
Shinoda
Ninhidrina
Dragendorff
Mayer
Bertrand
Sonnenschein
Borntrager
Leberman-Buchard
Hidrxido de amonio
Equipos

Estufa
Molino de cuchillas
Bomba de vaco o mquina de presin negativa DIVAC 0.6 L
Equipo de Bao Mara
Lmpara UV-infrarroja 365 nm-254nm Marca IVA Serial N M02 0955
Espectrofotmetro UV-visible
Glucosmetro

MATERIAL BIOLGICO

Se trabajar con cinco kilos de Pasuchaca (Geranium ruizii Hieron) obtenidas de los
alrededores del mercado mayorista La Parada, ubicado entre las avenidas Humboldt y
Aviacin.

ANIMALES DE EXPERIMENTACIN

Los animales que sern sometidos a este ensayo sern ratas albinas machos de la cepa
Holtzman con un peso promedio de 180g provenientes del Instituto Nacional de Salud.

VIII. METODOLOGA:

1. ETAPA FARMACOGNSTICA:
 I. ELABORACIN DEL EXTRACTO

CONSERVACIN DE LA DROGA

Recoleccin de la muestra aproximadamente 5 kilos.

Identificacin de la muestra en el Museo de Historia Natural de la UNMSM, es este
caso se trata de Geranium ruizii Hieron Pasuchaca.
Seleccin de muestras en buen estado (se utiliz toda la planta).
Lavado y secado a temperatura ambiente de las plantas de Geranium ruizii Hieron
Pasuchaca.
Secado artificial en estufa (45C) de las plantas de Geranium ruizii Hieron
Pasuchaca.
Reduccin de tamao del material vegetal en molino de cuchillas.
Tamizado de la muestra (1 kilo en total) en mallas N10, N30, N40, N50 y N80
de los trozos de Geranium ruizii Hieron Pasuchaca.
Guardar en bolsas de polietileno el polvo de Geranium ruizii Hieron Pasuchaca.

Recoleccin Seleccin

Reduccion de tamao Tamizado Almacenamiento

Figura 4: Proceso de elaboracin de extracto

ELABORACION DEL EXTRACTO

 Maceracin hidroalcohlica (Agua: Alcohol 96) 50:50.
Los componentes solidos se colocan en un recipiente con el solvente y se deja
reposar durante un periodo de 2 semanas, agitndolo con frecuencia hasta la
disolucin de material soluble.
Filtracin al vaco (Embudo de Buchner, bomba de vaco).
Concentracin (Estufa de aire circulante, bandeja de vidrio).
Temperatura: 40C, Tiempo: 2 das.
Almacenamiento a temperatura ambiente.

Macerado Filtrado

Secado Extracto seco

Figura 5: Proceso de elaboracin de extracto seco

II. COMPOSICIN QUMICA DE PASUCHACA (Geranium ruizii Hieron)

Pasuchaca revela la presencia de las sustancias tpicas para el gnero Geranium:

principalmente flavonoides, Alcaloides, taninos y tambin contiene glucsidos de
antocianinas, glucsidos de antraquinona, saponinas, gomas y muclagos de plantas, as
como los carotenoides, grasas (incluyendo cera), resinas y aceite etreo. Las cumarinas,
esteroides y triterpenos.1

II.1 METABOLISMO Y TAMIZAJE FITOQUMICO

El tamizaje fitoqumico consiste en un conjunto de reacciones que se realizan para tener una
nocin de los posibles componentes qumicos de la planta en estudio.

II.2 COMPONENTES QUMICOS POR TAMIZAJE FITOQUMICO

Dentro de la gran variedad de componentes qumicos, tericamente la Tabebuia ochracea
presenta los siguientes componentes qumicos:

FLAVONOIDES

De todos los compuestos fenlicos, el grupo de los flavonoides es el ms extendido en la

naturaleza y dentro de ellos, los flavonoles son los que poseen una mayor actividad
antioxidante. Estudios epidemiolgicos han demostrado que una ingestin rica en
flavonoides se correlaciona con un menor riesgo de enfermedad cardiovascular y se ha
observado que actan a diferentes niveles (tabla 2). Por un lado, disminuyen las tasas de
colesterol y de LDL oxidada debido a sus propiedades antioxidantes como fuertes quelantes
de metales y como donadores de hidrgeno (a travs de los grupos hidroxilo). As, en
general, el grado de actividad antioxidante se correlaciona con el nmero de grupos
hidroxilo. Por ello, los ortodifenoles son buenos antioxidantes, mientras que compuestos
monofenol, como el tirosol, no lo son tanto. 2

Segn un estudio de cuti cuti existen algunos principios activos aislados de las plantas
como: Los flavonoides y alcaloides que se encuentran en gran proporcin en esta y otras
plantas con efecto hipoglucemiante, entre los cuales tenemos a los flavonoides: rutina y
quercetina que cuentan con investigaciones probadas de su efecto hipoglucemiante; la
quercetina ejerce un efecto hipoglucemiante, inhibiendo a la enzima aldosa reductasa, la
cual est relacionada con la produccin de polioles, responsables de los efectos crnicos en
la diabetes y, por sus propiedades antioxidantes, reduce la incidencia de enfermedades
cardiovasculares, incluyendo las trombosis vasculares.3, 4

En otro estudio relacionan el extracto etanlico, observaron mayor efecto hipoglicemiante

(p es menor que 0.05) y mejor proteccin del pncreas, hgado y rin del dao causado por
aloxano segn el estudio histopatolgico. Los hallazgos posiblemente justifican porque los
alcaloides podran inducir secrecin de insulina; los flavonoides libres actuaran como
barredores de especies reactivas de oxgeno, y los compuestos fenlicos que estaran
ligados a receptores proliferadores de peroxisomas.5
 II.3 RELACIN DE LOS COMPUESTOS QUIMICOS CON LA ACTIVIDAD
NORMOGLUCEMIANTE.

Grupos de compuestos qumicos relacionados con la actividad hipoglucemiante de plantas

son, de mayor a menor importancia: polisacridos, alcaloides, glucopptidos, terpenos,
pptidos, aminas, estero ides, flavonoides, lpidos, cumarinas, compuestos azufrados, iones
inorgnicos y otros.

1. Drogas ricas en cromo.

La importancia del cromo en el metabolismo de los glcidos se debe a que, junto con el
cido nicotnico y aminocidos, forma parte del factor de tolerancia a la glucosa (GTF,
Glucose Toleran - ce Factor), protena cuya funcin es facilitar la unin de la insulina a los
receptores celulares de insulina y por tanto aumentar la capacidad de esta hormona para
transportar aminocidos y glucosa al interior de la clula, ayudando a normalizar el nivel de
glucosa en sangre.
2. Especies vegetales ricas en polisacridos
CASO GOMA GUAR (Cyamopsis tetragonolobus L.): El efecto hipoglucemiante se debe
principalmente a la viscosidad que alcanza el muclago en contacto con el agua, capaz de

disminuir la velocidad de absorcin de los hidratos de carbono y de retrasar el vaciado

gstrico, lo que conlleva una mejor utilizacin de la insulina endgena, disminuyendo la
hiperglucemia y la insulinemia posprandial. Asimismo, tambin contribuye a disminuir la
colesterolemia, principalmente el cLDL, es un regulador intestinal, por lo que se puede
utilizar en algunos casos de diarreas. Adems, produce sensacin de saciedad, por lo que
tambin se utiliza en dietas de adelgazamiento.

3 . Plantas con otros componentes qumicos

Hallazgo de Saponinas, pptidos y alcaloides

La actividad hipoglucemiante parece deberse a las saponinas esterodicas, a los pptidos

(similares a la insulina) y a los alcaloides, pero se desconoce si la actividad se debe
principalmente a uno de los grupos o al conjunto. Respecto al mecanismo de accin del
frmaco, todava no se conoce demasiado bien; algunos autores indican que la planta
momrdica incrementa el nmero de clulas beta en el pncreas, mientras que otros han
demostrado una actividad semejante a la insulina o de incremento de su liberacin.

Hallazgo de Aminoacidos

Causantes de la actividad hipoglucemiante parece tener un papel importante el aminocido

aislado como mayoritario, 4-hidroxi-isoleucina.cste parece ejercer un efecto directo sobre
islotes de Langerhans, incrementando la liberacin de insulina inducida por glucosa.
Hallazgo de Heterosido Cianogeneticos

Los extractos de diversas plantas pueden llegar a disminuir el nivel de glucosa como a la
alholva (se le ha llegado a llamar popularmente insulina vegetal). Algunos autores
atribuyen esta actividad a los hetersidos cianogenticos.

Hallazgo de Heterosido, Alcaloides, Peptidos

La actividad hipoglucemiante: Heterosidos de fitosteroles, pptidos bioactivos entre los que

destaca el polipptido P (pptido con 166 residuos, insulinomimtico) y alcaloides como la
momordicina. No se sabe cul de los tres grupos de principios es ms efectivo como
hipoglucemiante o si actan conjuntamente.
En un estudio realizado con animales, se ha demostrado que el jugo de los frutos aumenta el
nmero de clulas beta en el pncreas de ratas diabticas

Hallazgo de Peptidoglicanos

Los principales componentes con actividad hipoglucemiante son los panaxanos. Se ha

demostrado que los panaxanos A y B estimulan el uso heptico de la glucosa al aumentar la
actividad de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, la fosforilasa A y la fosfofructoquinasa.
El panaxano A no afecta a los niveles plasmticos de insulina ni a la sensibilidad a la misma
mientras que el panaxano B incrementa los niveles sanguneos de insulina al aumentar la
produccin de la misma desde los islotes pancreticos y aumenta la sensibilidad a la
insulina al aumentar el nmero de receptores para la misma

II.4 FUNDAMENTOS DE LAS REACCIONES QUMICAS DE LA

IDENTIFICACIN DE COMPONENTES QUMICOS

1.-Reconocimiento de carbohidratos: Entre las tcnicas de reconocimiento de

carbohidratos tenemos:

PRUEBA DE MOLISH: Al haberse depositado en el fondo del recipiente el cido sulfrico

este acta sobre la glucosa arrancndole una molcula de agua y volviendo la molcula de
glucosa un derivado del furfurral en este caso el hidroximetilenfurufural. Luego de esa
reaccin se mezcla con el alfa-naftol en presencia de cido sulfrico atacando la zona del
doble enlace del grupo carbonilo unindose en un compuesto mixto pues presenta
sustituyentes cidos y fenolicos que toma una coloracin rojiza violeta en un anillo del tubo
de ensayo.

PRUEBA DE FEHLING: Coloracin rojiza en el fondo del recipiente demostrando que la sal
cprica se redujo a una sal cuprosa en este caso el xido cuproso, volvindose a regenerar
el tartrato de sodio, formndose el gluconato de sodio y el hidrxido de sodio.

2.-Reconocimiento de compuestos fenlicos:

Reaccin coloreada con el cloruro frrico:El fenol, as como otros compuestos que
poseen estructura enlica, da con el cloruro frrico color rojo o purpura. La reaccin es
compleja y no puede representarse por una ecuacin qumica simple; se cree que es debido
a la formacin de un complejo del hierro con ndice de coordinacin seis acompaada de
una oxidacin del fenol y reduccin por parte del frrico a ferroso. Reaccin muy sensible.

3.-Reconocimiento de taninos con gelatina: Los taninos precipitan las protenas en

solucin. Originan desde opalescencia blanca hasta precipitado. Tambin pueden hacer
precipitar alcaloides.

4.-Reaccin de Shinoda (Zn / HCl cc): El zinc en polvo reacciona con HClcc. El
hidrgeno generado produce por reduccin el in flavilio de color rojo escarlata (vara
desde el rosa muydbil hasta rojo escarlata). Todos los flavonoides, excepto chalconas,
auronas, e isoflavonas, dan positiva esta reaccin.

5.-Reaccin de Rosenheim: En la reaccin de Rosenheim, el cido clorhdrico produce una

deshidratacin del grupo hidroxilo de la posicin 3 de la leucoantocianidina y catequina,
que es favorecida por la temperatura (100C), adems se produce la ruptura del anillo
heterocclico. La deslocalizacin de 12 e y 2 e n, por todo el metabolito, produce la
coloracin roja de la leucoantocianidina y marrn de la catequina.

6.-Reaccin de Ninhidrina para aminocidos: La ninhidrina descarboxila y desamina al

aminocido gracias a su gran poder oxidante. La ninhidrina reducida reacciona con una
molcula de ninhidrina no reducida y con el amoniaco resultante de loa reaccin para
formar un compuesto complejo que presenta coloracin violeta.

7. Reconocimiento de Alcaloides: Las tcnicas de reconocimiento son basadas en la

capacidad que tienen los alcaloides en estado de sal (extractos cidos), de combinarse con
el yodo y metales pesados como bismuto, mercurio, tugsteno formando precipitados; estos
ensayos preliminares se pueden realizar en el laboratorio o en el campo.

Se utilizan reactivos generales para detectar alcaloides como: la solucin de yodo-yoduro

de potasio (Reactivo de Wagner), mercurio tetrayoduro de potasio (reactivo de Mayer),
tetrayodo bismuto de potasio (reactivo de Dragendorff) la presencia de alcaloides se detecta
por la formacin de un precipitado naranja rojizo cuando se le adiciona esta reactivo a una
solucin cida de alcaloides. De los precipitados lavados se puede recuperar los alcaloides
con una solucin saturada de carbonato de sodio.Algunas sustancias oxigenadas con alta
densidad electrnica como es el caso de las cumarinas, chalconas, maltol, acetogeninas, etc.
pueden dar falsos alcaloides con el reactivo de Dragendorff.,cido slico tngtico (reactivo
de Bertrand).6

8.- Reaccin de Borntrager: Pesamos unos gramos de droga en polvo, agregamos ml de

hidrxido de sodio diluido, decoccin 15 min, decantacin, mezclamos con HCl diluido,
adicionamos ter de petrleo, decantamos, fase no polar agregar hidrxido de amonio.
Observamos Coloracin rosada perteneciente a la genina y una coloracin amarillo
perteneciente al hetersido antroquinnico.7

9.- Reaccin de Lieberman-Burchard: En un tubo de ensayo colocar 2 ml de solucin

clorofrmica de colesterol, aadir 10 gotas de anhdrido actico, y luego 3 gotas de cido
sulfrico concentrado.8

10.- ndice afrosimtrico: Son sustancias que por disminucin de la tensin superficial
forman espuma (poder afrgeno) y forman emulsiones (emulgentes) Es la principal
propiedad fsica de las saponinas.9

11.- Reaccin de Baljet: Las sesquiterpenlactonas producen coloraciones naranja cuando

se tratan con picrato de sodio o potasio.10
12.- Ensayo de Legal: Las sesquiterpenlactonas con anillos g-lactona a,b-insaturados
producen coloracin rosa cuando se disuelven en piridina, se aade nitroprusiato de sodio y
un lcali. La prueba tambin la dan positiva las lactonas b,g-insaturadas cuando no se
controla el pH, ya que se isomerizan en medio alcalino. La prueba tambin la dan positiva
las metilncetonas.11, 12

III. TAMIZAJE FITOQUMICO

Tabla N1: Tamizaje fitoqumico de pasuchaca

METABOLITO REACCIN PROCEDIMIENTO REACCIN
POSITIVA
CARBOHIDRAT Molish X gotas de MP + III gotas Anillo violeta
OS de
Molish agitar +III gotas de
H2SO4CC
Antrona X gotas de MP + III gotas Coloracion verde
de Antrona

Fehling X gotas de MP + III gotas Precipitado rojo

de Fehling A + III gotas de ladrillo
Fehling B + calentar en
B.M.
COMPUESTOS FeCl3 X gotas de MP + III gotas Taninos
FENLICOS de FeCl3 10% hidrolizables:
azul negruzco
Taninos
condensados
(glicos y/o
catquicos),
flavonoides: verde
TANINOS Gelatina en suero X gotas de MP + III gotas Precipitado denso
fisiolgico de gelatina blanco
FLAVONOIDES Shinoda X gotas de MP + 1-2 virutas Chalconas,
de magnesio metlico + III auronas,
gotas de isoflavanonas: No
HClcc hay coloracin.
Isoflavanonas:
amarillo rojizo.
Flavonolones: rojo a
magenta.
ANTOCIANINAS Rosenheim X gotas de MP + III gotas Coloracin rojo
Y (sol. Yodo de oscuro
FLAVONOIDES Yodurada) Rosenheim
CATQUICOS
AMINOCIDOS Ninhidrina X gotas de MP + III gotas Coloracin violcea
LIBRES Y (0,1%en etanol) de Ninhidrina + calentar en
GRUPOS B.M. 10 minutos.
AMINO
METABOLITO REACCIN PROCEDIMIENTO REACCIN
POSITIVA
ALCALOIDES Dragendorff X gotas de MP + evaporar Precipitado naranja
el solvente B.M + V gotas
de HCl 10% +III gotas de
Dragendorff
Mayer X gotas de MP + evaporar Precipitado blanco
el solvente B.M + V gotas
de HCl 10% + III gotas de
Mayer
Bertrand X gotas de MP + evaporar Precipitado blanco
el solvente B.M + V gotas
de HCl 10% + III gotas de
Bertrand
Sonnenschein X gotas de MP + evaporar Precipitado
el solvente B.M + V gotas amarilloverdoso
de HCl 10% + III gotas de
Sonnenschein
NAFTAQUINON Borntrager X gotas de MP + III gotas Coloracin roja
AS, de Borntrager
ANTRAQUINON
AS Y
ANTRONAS
TRITERPENOID Lieberman- X gotas de MP + llevar a Esteroides: Verde
ES Y Burchard sequedad en B.M + X gotas azul Triterpenoides:
ESTEROIDES de cloroformo + III gotas de Rojonaranja
anhdrdo actico + H2 SO4CC
en zona sin agitar
 SAPONINANS Formacin de 1mL de MP + 5mL de agua Formacin de 0.5 a
espuma destilada + agitar 1cm de espuma
fuertemente por 1min. estable por 15min.
GLICSIDAS Baljet X gotas de MP + V gotas de Coloracin
cido anaranjada
pcrico 1% + V gotas de
NaOH al 5%
Vainilln X gotas de MP + V gotas de Coloracin rojiza
Clorhdrico Vainilln clorhdrico
LACTONAS Legal X gotas de MP + V gotas de Coloracin rojo
nitroprusiato de sodio 0.5% oscuro
+ V gotas de KOH 2N
CUMARINAS NH4 OHcc X gotas de MP + papel Fluorescencia
humedecido con NH4 OHcc celeste
en boca de tubo + calentar
por 5min

IV. ENSAYO DE SOLUBILIDAD

En tubos de ensayo: mg del extracto seco en 1 mL de solvente.

Solvente

1.Agua

2.Metanol

3.Etanol

4.n-Butanol

5.Acetona

6.Acetato de etilo

7.Diclorometano

8.Cloroformo

IIV. Cromatografa

1. Cromatografa en capa fina

Preparacin de muestra: pesar 0,2 g de extracto seco y solubilizar en 1 ml de agua
destilada.
 Fase estacionaria: cromatofolios de silicagel G 60F 254 Fase mvil: sistema de

solventes diclorometano: metanol (1:1).

Deteccin: luz UV 254 nm y 365 nm.

Revelador: AlCl3.

2. Cromatografa preparativa
Preparacin de muestra: pesar 0,2 g de extracto seco y solubilizar en 1 ml de agua
destilada.

Fase estacionaria: cromatofolios de silicagel G 60F 254 Fase mvil: sistema de

solventes diclorometano: metanol (1:1).

Deteccin: luz UV 254 nm y 365 nm.

2. ETAPA FARMACOLOGICA:

I. FASE FARMACOLGICA

Los animales de experimentacin fueron ratas Rattus norvegicus" cepa "Holtzman 180g a
220g y de dos meses de edad obtenidas del Centro Nacional de Produccin de Biolgicos
del Instituto Nacional de Salud. Las ratas fueron colocadas en jaulas con agua y alimento.
La alimentacin de estos animales fue con productos elaborados por la planta de alimentos
del Departamento de Nutricin de la Facultad de Zootecnia de la Universidad Nacional
Agraria La Molina.

II.1 INDUCCIN DE LA HIPERGLICEMIA EXPERIMENTAL

Se realiz con aloxano, producindose la necrosis de las clulas del pncreas. Se procedi
a seleccionar a las ratas en dosis 130 mg/kg de peso, va intraperitonial.
 II.2 PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO FARMACOLGICO

Las ratas fueron agrupadas en cuatro grupos: el primero para recibir el tratamiento con el
extracto hidroalcohlico de la planta Geranium ruizii Hieron. El segundo grupo para ser
tratadas con glibenclamida, el tercer grupo no recibir tratamiento y el cuarto grupo sera el
grupo control.

Se midi a las ratas la glucemia basal con ayuda del glucmetro ACCU- CHEK,
posteriormente a los tres primeros grupos se les administr aloxano 130 mg/kg de peso va
intraperitonial, el cuarto grupo no se le administr aloxano, al ser control.

El primer grupo de ratas aloxanadas se le administr por va oral un tratamiento diario con
el extracto hidroalcohlico de la planta Geranium ruizii Hieron tres dosis diferentes a un
subgrupo 125 mg/kg, a otro subgrupo 150 mg/kg y al ltimo 175mg/kg de peso.

El segundo grupo se le administr por va oral diariamente el frmaco glibenclamida que es

usado como hipoglicemiante a una dosis de 5mg/kg de peso.

Al tercer grupo de ratas aloxanadas no recibi ningn tratamiento, para poder comparar el
efecto hipoglucemiente del extracto en estudio y del frmaco glibeclamida.
El cuarto grupo de ratas no aloxanadas no recibi ningn tratamiento.

TABLA N 2 : Distribucin de los grupos de tratamiento.

GRUPO TRATAMIENTO

1 DIABTICAS + EXTRACTO DE PASUCHACA

125 mg/kg 150 mg/kg 175 mg/kg

2 DIABTICAS + GLIBENCLAMIDA

3 DIABTICAS

4 SANAS
 II. 3. DETERMINACIN DE LOS NIVELES DE GLUCOSA

A las ratas se les hizo tomas de sangre los das 1, 2, 3, 4, 10, 13 da, para determinar los
niveles de glicemia. La sangre de las ratas se obtuvo mediante el corte de cola y midindole
en el glucmetro ACCU-CHEK.

II.4 REACCIONES BIOQUMICAS

Al terminar el tratamiento con el extracto y el frmaco se realiz los ensayos de

transaminasas (GOT y GPT), ureasa y creatinina directa. Se utiliz el plasma de las ratas el
cual se obtuvo al sacrificar al animal.

Se utiliz el kit de transaminasas 200 Wiener lab, creatinina directa Wiener lab para
determinar el dao ocasionado al hgado y al corazn al analizar estas enzimas.

II. DETERMINACIN DEL EFECTO NORMOGLICEMIANTE DEL EXTRACTO

Se utilizar el extracto a una concentracin de 250mg/kg (dosis adecuada para evaluar el

efecto hipoglucemiante segn el Instituto de Investigacin de la facultad de Medicina
USMP).

Los animales de experimentacin sern sometidos a las pruebas 48 horas despus de la

administracin del aloxano, momento en el cual se les tomar una prueba basal de glicemia
para evaluar si el nivel de glucosa est por encima de 300mg/dL (valor mnimo para
considerar diabetes qumica)20 y todos los animales que cumplan este requisito se les
administrar la sustancia en estudio, por va oral, mediante sonda rgida.

Los controles sucesivos se efectuarn a la hora, dos, cuatro y 24 horas posteriores.

La determinacin los niveles de glucosa se realizar por medio de tiras reactivas

ACCUCHEK y ledas mediante el glucmetro respectivo ROCHE. La sangre se obtendr
de un corte en la cola, que comprometer una vena marginal evitando la hemorragia.

III. DETERMINACIN DEL CIDO RICO EN SUERO

Se llevar a cabo mediante el mtodo cintico colorimtrico, utilizando kits Uricostat de

Laboratorios Wiener, considerando como valor normal en ratas machos concentraciones
sricas de 1.28 hasta 3.71 mg/dL.
IV. DETERMINACIN DE TRANSAMINASAS

Las enzimas AST y ALT sern valoradas utilizando un equipo de espectrofotometra,

modelo Konelab, se utilizar el kit comercial (Biosigma C.A). Se realizar el ensayo
cintico basado en las recomendaciones dictadas por la International Federation for Clinical
Chemistry (IFCC) para la determinacin de cada enzima, considerando como valor normal
en ratas machos concentraciones sricas de 61.4 hasta 276.2UI/L para AST y 41 hasta
83.1UI/L.21

V. DETERMINACIN DEL MECANISMO DE ACCIN

De acuerdo con varias investigaciones sobre Geranium ruizii Hieron, esta planta
posiblemente aumenta la utilizacin perifrica de la glucosa o incrementa la captacin de la
misma por el msculo e inhibira la gluconeognesis heptica aumentada en los diabticos o
aumenta la recepcin de la insulina a sus receptores, considerando que la insulina no ejerce
efecto, para el transporte de la glucosa sobre ciertas clulas. La enzima en estudio para este
proyecto de investigacin ser la alfa glucosidasa.

IX. RESULTADOS
1. RESULTADOS FARMACOGNOSTICOS:
I. CONSERVACIN DE LA DROGA
TAMIZADO: Se realizaron 10 tamizados en las que se obtuvo como peso total
874,1902 gramos de la muestra.

Primera tamizada.
N de malla Pesos
Malla N10 0.7147g
Malla N30 44.8811g
Malla N40 21.3503g
Malla N50 10.0483g
Malla N80 9.1603g

Segunda tamizada.
N de malla Pesos
Malla N10 0.8102g
Malla N30 45.8177g
Malla N40 21.2354g
Malla N50 10.1422g
Malla N80 9.3545g

Tercera tamizada.
N de malla Pesos
Malla N10 0.6452g
Malla N30 45.1288g
Malla N40 21.1242g
Malla N50 10.1324g
Malla N80 9.0755g

Cuarta tamizada.
N de malla Pesos
Malla N10 0.8047g
Malla N30 46.4741g
Malla N40 22.1312g
Malla N50 10.0483g
Malla N80 10.0602g
Quinta tamizada.
N de malla Pesos
Malla N10 0.8466g
Malla N30 42.4622g
Malla N40 21.4566g
Malla N50 11.3214g
Malla N80 9.0032g
Sexta tamizada.
N de malla Pesos
Malla N10 0.6741g
Malla N30 44.1782g
Malla N40 22.2543g
Malla N50 10.9854g
Malla N80 9.7462g

Sptima tamizada.
N de malla Pesos
Malla N10 0.9120g
Malla N30 46.4041g
Malla N40 21.1012g
Malla N50 10.9351g
Malla N80 9.4003g

Octava tamizada.
N de malla Pesos
Malla N10 0.7147g
Malla N30 45.1701g
Malla N40 21.3503g
Malla N50 10.0483g
Malla N80 9.1603g
 Novena tamizada.
N de malla Pesos
Malla N10 0.8902g
Malla N30 44.1145g
Malla N40 20.3541g
Malla N50 11.3687g
Malla N80 10.4589g
Decima tamizada.
N de malla Pesos
Malla N10 0.8450g
Malla N30 44.7101g
Malla N40 21.7481g
Malla N50 11.7140g
Malla N80 10.7033g

II. ELABORACION DEL EXTRACTO

Con la cantidad obtenida en el proceso de tamizado, se procedi al macerado usndose

2 frascos con 437.0951 gramos de muestra cada una, en un medio (Agua: Alcohol 96)
(50:50). Posteriormente se filtr y luego se concentr (Estufa de aire circulante, bandeja
de vidrio) a temperatura de 40C por el tiempo de 2 das obtenindose un extracto seco
de 46.47 gramos.

III. TAMIZAJE FITOQUIMICO

DROGA: TODA LA PLANTA

Tabla N : Resultados de las pruebas cualitativas

RESULTADOS
METABOLITO REACCIN OBSERVACIN
AGU ALCOH
A OL
Formacin de un anillo
Molish violeta ++ ++
(abajo)
CARBOHIDRATOS benedict Precipitado marrn +++ +++
Precipitado rojo ladrillo
Fehling muy fino, se suspende +++ ++
rpido
 Precipitado verde
COMPUESTOS oscuro/coloracin verde
FeCl3 +++ +
FENLICOS con
poco pp
Gelatina Precipitado blanquecino +++ +
TANINOS Agua de
Precipitado rosado +++ -
Bromo
TRITERPENOIDES LiebermanBurc
hard Anillo rojizo en base ++ ++
Y ESTEROIDES

Coloracin rosado +++ ++

FLAVONOIDES Shinoda
naranja
GLICSIDAS Baljet Coloracin anaranjada ++ -
NAFTAQUINONAS,
ANTRAQUINONAS Borntrager Coloracin rojiza +++ +++
Y ANTRONAS
AMINOCIDOS
LIBRES Y GRUPOS Ninhidrina No se observ nada - -
AMINO
Popoff No se observ nada - -
Precipitado rojizo(casi
ALCALOIDES Dragendorff ++ -
rosado)/solo coloracin

Mayer Turbidez/nada ++ -

Bertrand Precipitado blanco ++ -

Precipitado verde
Sonnenschein oscuro/solucin mostaza +++ -
con verde al fondo
SAPONINAS saponinas Espuma (1,5 cm) que
No se
perdura por ms de 10 ++
hace
minutos
LEYENDA: (-) Negativo, (+)Trazas, (++)Moderado, (++
+)Abundante
 Figura N5 Reconocimiento cualitativo de alcaloides

IV. Ensayo de solubilidad

Solvente Resultado

1.Agua +++
2.Metanol ++
3.Etanol +++
4.n-Butanol -
5.Acetona -
6.Acetato de etilo -
7.Diclorometano -
8. Cloroformo -
V. Cromatografa

Cromatografa en capa fina

Fase mvil: diclorometano: metanol (1:1).

Deteccin: luz UV 254 nm y 365 nm.

Revelador: FeCl3.

Placa cromatogrfica sembrada

Revelado con luz UV 254 nm Revelado con luz UV 365 nm
5

1
Revelado con tricloruro frrico (FeCl3)

Cromatografa preparativa
Fase mvil: diclorometano: metanol (1:1).

Deteccin: luz UV 254 nm y 365 nm.

Placa cromatografica sembrada

Revelado con luz UV 254 nm Revelado con luz UV 365 nm

2. RESULTADOS FARMACOLGICOS:

Tabla 1: Concentracin inicial de g lucosa en sangre para cada grupo tratado,

su Media y Desviacin Estndar respectivamente, y la prueba de normalidad.

Grupos Media Desv . Est . Prueba de Normalidad p

Blanco 108,7 11,02 0,463

Aloxano 130 mg/Kg 468,3 63,01 0,204

Glibenclamida 5 mg/Kg 475,2 51,45 0,246

Pasuchaca 125 mg/Kg 411,0 140,0

0.150
Pasuchaca 150 mg/Kg 527,0 37,48

Pasuchaca 175 mg /Kg 542,0 31,11

Figura 6: Grafica de probabilidad o curva de normalidad del grupo blanco
con un p 0,05
Figura 7: Grafica de probabilidad o curva de norm alidad del grupo Aloxano
con un p 0,05
Figura 9: Grafica de probabilidad o curva de normalidad del grupo
Pasuchaca 125 mg/Kg con un p 0,05.

Figura 10: Grafica de probabilidad o curva de normalidad del grupo

Pasuchaca 150 mg/Kg

con un p 0,05.
Figura 11: Grafica de probabilidad o curva de normalidad del grupo
Pasuchaca 175 mg/Kg con un p 0,05.
 Tabla 3: Comparacin de las concentraciones de glucosa antes y despus de cada
tratamiento utilizando la prueba estadstica T de Student con 0,05.
Grupos Pre Tratamiento Post Tratamiento (Da p
(Induccin) 18)
Blanco 108,7 11,02 100,67 2,31 0,055

Aloxano 130 mg/Kg 468,3 63,01 600,00,0 0,000

Glibenclamida 5 mg/Kg 475,2 51,45 166,240,0 0,000

Pasuchaca 125 mg/Kg 411,0 140,0 350,0135,8 0,702

Pasuchaca 150 mg/Kg 527,0 37,48 416,534,6 0,091

Pasuchaca 175 mg /Kg 542,0 31,11 299,032,5 0,017

Tabla 4: Porcentaje de eficacia en el efecto hipoglicemiante de cada grupo tratado
Grupos Eficacia %

Blanco +7,38 %

Aloxano 130 mg/Kg -28,12 %

Glibenclamida 5 mg/Kg +65,03 %

Pasuchaca 125 mg/Kg +14,84 %

Pasuchaca 150 mg/Kg +20,97 %

Pasuchaca 175 mg /Kg +44,83 %

Figura 13: Grafica comparativa de eficacia en el efecto hipoglicemiante.
Tabla 5: Pruebas Bioqumicas de Transaminasas, Creatinina y
BUN.
Figura 14: Grfica comparativa en barras de las transaminasas GPT

Figura 15: Grfica comparativa en barras de las transaminasas GOT

Figura 16: Grfica comparativa en barras de Creatinina
X. DISCUSION:

DISCUSION FARMACOGNOSTICA:

El proceso de conservacin de la droga es de suma

importancia ya que depende mucho de ello para obtener un resultado
confiable en cualquier investigacin. Por ejemplo la
identificacin me evita las
adulteraciones y sustituciones de la muestra y se debe realizar en centros de referencia
como herbarios nacionales. En cuanto a la seleccin y lavado de la droga, me permite
trabajar con muestras en buen estado y retirar tierra adherida respectivamente. En cuanto al
secado, este proceso es importante ya que interrumpe los procesos de degradacin
enzimtica y fermentacin, impide el desarrollo de microorganismos y las reacciones de
oxidacin e hidrolisis. En lo que respecta a la reduccin del tamao de partculas, las
drogas reducidas poseen membranas celulares parcialmente reducidas que facilitan la
disolucin de los constituyentes celulares en el lquido externo. El tamizado es necesario
para evitar reducir el rendimiento de la extraccin debido a la compactacin de los polvos
que dificultan el paso del solvente en el proceso de maceracin. Y finalmente el
almacenamiento de la droga que me permitir realizar posteriormente el macerado.1
En proceso de elaboracin del extracto, la maceracin me permitir la extraccin de los
principios activos de la planta y para esto debemos tener en cuenta al momento de elegir el
solvente la cantidad de metabolitos a extraer, la velocidad de extraccin, diversidad de
metabolitos en la droga y no debe ser toxico ni interferir con el bioensayo.2
Algunas sustancias oxigenadas con alta densidad electrnica como es el caso de las
cumarinas, chalconas, maltol, acetogeninas, etc. pueden dar falsos alcaloides con el
reactivo de Dragendorff.
En trabajos anteriores el pool de alcaloides puede ser perjudicial para la salud debido a su
toxicidad, sin embargo la asociacin de este y flavonoides puede es buena debido a que
contrarresta la toxicidad.
La planta poseen gran cantidad de saponinas, alcaloides y flavonoides uno de estos
compuestos puede dar la actividad normoglicemiante o la actividad puede deberse en
conjunto. Para determinar si una molcula posee actividad ser necesario que se encuentre
su mecanismo, entre estos mecanismos sobre la normoglucemia destacan:
Antagonismo directo competitivo con la insulina, estimulacin de la secrecin de insulina,
estimulacin de la glucognesis y gluclisis heptica, adrenomimeticismo, bloqueo de los
canales de potasio de las clulas beta pancreticas, estimulacin del AMPc (segundo
mensajero) y modulacin de la absorcin de glucosa desde el intestino, entre otros.
El proceso de conservacin de la droga es de suma importancia ya que depende mucho de
ello para obtener un resultado confiable en cualquier investigacin. Por ejemplo la
identificacin me evita las adulteraciones y sustituciones de la muestra y se debe realizar en
centros de referencia como herbarios nacionales. En cuanto a la seleccin y lavado de la
droga, me permite trabajar con muestras en buen estado y retirar tierra adherida
respectivamente. En cuanto al secado, este proceso es importante ya que interrumpe los
procesos de degradacin enzimtica y fermentacin, impide el desarrollo de
microorganismos y las reacciones de oxidacin e hidrolisis. En lo que respecta a la
reduccin del tamao de partculas, las drogas reducidas poseen membranas celulares
parcialmente reducidas que facilitan la disolucin de los constituyentes celulares en el
lquido externo. El tamizado es necesario para evitar reducir el rendimiento de la extraccin
debido a la compactacin de los polvos que dificultan el paso del solvente en el proceso de
maceracin. Y finalmente el almacenamiento de la droga que me permitir realizar
posteriormente el macerado.1
En proceso de elaboracin del extracto, la maceracin me permitir la extraccin de los
principios activos de la planta y para esto debemos tener en cuenta al momento de elegir el
solvente la cantidad de metabolitos a extraer, la velocidad de extraccin, diversidad de
metabolitos en la droga y no debe ser toxico ni interferir con el bioensayo.2

DISCUSION FARMACOLOGICA:
En la presente investigacin se ha determinado la actividad hipoglicemiante empleando el
extracto hidroalcohlico de (planta) en ratas aloxanadas.
La diabetes experimental fue inducida con aloxano (130mg/Kg) el cual produce la
toxicidad selectiva de las clulas pancreticas, gran parte de estas clulas estn daadas
pero no el 100% de ellas, quedando una pequea cantidad no necrosada, producindose una
diabetes tipo 2. El mecanismo del dao pancretico por el aloxano se justifica debido a su
similitud molecular con la estructura de la glucosa, por ello el aloxano debe ser recaptado
por la clula, va transportador de glucosa GLUT-2 de baja afinidad en la membrana
plasmtica. El aloxano pude generar especies reactivas de oxgeno (ROS), produciendo el
cido dialrico, por lo tando se asume que la accin txica del aloxano producida en las
clulas es iniciada por la formacin intracelular de radicales libres.
Los estudios realizados de la accin normoglicemiante de la pasuchaca tenemos al
realizado por Lara (2000)1, en su estudio determin el Efecto Hipoglucemiante y DL 50 del
extracto acuoso de hojas y flores de Geranium sessiliflorum Cav. "Pasuchaca" en animales
de experimentacin, no se encontr mortalidad en la dosis de 200,300 y 400 mg/Kg p.c. de
los extractos acuosos de dicha droga en estudio en las ratones; la dosis mnima efectiva del
extracto acuoso fue de 6.25 mg/Kg p.c en ratas normoglucmicas.
Chvez y Espinoza (1998)2, investigaron la Actividad biolgica de Geranium lechleri
Knuth (Pasuchaca) sobre la glucemia en animales de experimentacin cuyo extracto fue
acuoso atomizado de hojas; donde se hall la dosis media letal que es mayor a 12,5 g/kg de
peso corporal en ratas.
En este trabajo de investigacin se estudi la especie Geranium ruizii Hieron a dosis de 125
mg/kg, 150mg/kg y 175 mg/kg.
Antes de realizar el tratamiento se hizo la prueba de normalidad Tabla 1, con ello se
verific que los grupos tratados poseen una distribucin normal. Se puede observar en la
figura 1,2,3,4,5,6 que los datos para cada grupo tratado ( Blanco, Aloxano, Pasuchaca,
Glibenclamida) presenta una curva casi lineal lo que nos indica que los datos no estn muy
dispersos y por lo tanto cumple con una distribucin normal. Una vez con ello se procedi
al anlisis de verificacin de hiptesis, la cual fue que el extracto hidroalcoholico de
Geranium ruizii Hieron tiene efecto hipoglicemiante en Rattus norvegicus de cepa
Holtzman con
Diabetes Mellitus Tipo 2, para ello se utiliz la prueba estadstica T- Student con = 0,05,
se compar el estado inicial de las concentraciones de glucosa de las ratas diabticas con el
estado final despus de todo el tratamiento que fue por dieciocho das. En la Tabla 3 se
observa que el grupo tratado con pasuchaca a 125 mg/Kg su p es mayor que 0,05 lo cual
quiere decir que no hay una diferencia significatica, rechazando la hiptesis de su efecto
hipoglicemiante, lo mismo ocurre en el grupo tratado con pasuchaca a 150 mg/Kg. Sin
embargo, el grupo tratado con pasuchaca a 175 mg/Kg su p fue menor que 0,05, lo que
quiere decir que hay una diferencia significativa , aceptndose la hiptesis del efecto
hipoglicemiante de Geranium ruizii Hieron a esa concentracin. Paralelamente se realiz
esta prueba en un grupo tratado con un medicamento antihiperglicemiante Glibenclamida
que tambin mostr una diferencia significativa entre el estado inicial y final. En la Figura
7 se ve claramente las comparaciones del efecto hipoglicemiante en cada grupo, el grupo
Blanco que no fue inducido a la diabetes sus valores se mantienen constantes dentro del
rango normal, el grupo de ratas aloxanadas que no tuvieron algn tipo de tratamiento su
glucosa se elev al mximo HI, el grupo con Glibenclamida tuvo un buen efecto como era
de esperar por ser un medicamento seleccionado para esta enfermedad, el grupo con
Pasuchaca mostr su efecto a una concentracin de 175 mg/Kg .Una vez comprobado
esto ,se realiz una comparacin de eficacia entre el grupo tratado con Glibenclamida a 5
mg/Kg y la Pasuchaca a 175 mg/Kg, y se observ Tabla 4 que la Glibenclamida es eficaz en
un 65,03 % y la Pasuchaca a 175 mg/Kg en un 44,83 % . Este resultado puede cambiar si se
realiza estudios complementarios trabajando con una mayor concentracin del extracto de
pasuchaca, sin embargo, a pesar de ello la planta presenta un efecto hipoglicemiante.
La dosis con mayor eficacia fue entonces de 175 mg/kg con 44,83 % de eficacia la dosis
ms alta presenta un mayor descenso de los niveles de glucosa.
El frmaco glibenclamida presenta mayor eficacia 65,03 % como en el estudio de Solgorr
(2005)4 sobre el efecto del extracto hidroalcohlico de hojas y flores de Otholobium
pubescens culn la efecicaica de la glibenclamida es 74.44% y la planta 42.64%.
Cataeda (2011) demuestra que el extracto atomizado de Calophyllum brasiliense present
un buen efecto hipoglicemiante las tres dosis utilizadas de los extractos de Lagarto caspi
mostraron efecto hipoglicemiante, y fue mayor el efecto a la dosis de 1000 mg/kg de peso,
que super al efecto de la glibenclamida.
Es importante recalcar que nuestra biodiversidad es una importante fuente de productos
naturales para el mundo, es de vital importancia la identificacin de los principios activos
naturales, teniendo en cuenta que es necesario efectuar su caracterizacin completa y, se
hace imprescindible conseguir el establecimiento completo y correcto de su estructura. Sin
conocer la estructura correcta del compuesto no se puede progresar en la propuesta ni en la
realizacin de transformaciones que puedan servir para corregir algn efecto indeseable del
producto o para disminuir su toxicidad o para mejorar sus cualidades frmaco-teraputicas.
Teniendo en cuenta las limitaciones y los resultados obtenidos se recomienda realizar
estudios de mayor duracin por ser la diabetes mellitus una patologa crnica, as como
separar los metabolitos secundarios para verificar los posibles responsables de la actividad
farmacolgica, profundizar los estudios de seguridad con la finalidad de proyectar ensayos
clnicos controlados.
Las pruebas bioqumicas fueron realizadas para determinar si la enfermedad o el resultado
del tratamiento influyen en el equilibrio normal del buen funcionamiento de nuestro
organismo. En la Tabla 5 se observa los niveles de Creatinina, BUN, Transaminasas GOT y
GPT.

Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente difundidas en el organismo con
elevada concentracin en corazn, hgado, msculo esqueltico, rin y eritrocitos. La
actividad srica en condiciones normales es baja o nula. Un dao o enfermedad en
cualquiera de estos tejidos conduce a un aumento en los niveles sricos. As, luego de un
infarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad de GOT
(abundante en msculo cardaco). En hepatitis virales y otras formas de enfermedad
heptica que involucren necrosis tisular, predominar la actividad srica de GPT
(abundante en tejido heptico). 26
En la Figura 9 se observa que el grupo tratado con Pasuchaca 175 mg/Kg y Glibenclamida
presenta mayor concentracin de GTP lo cual se sigue evidenciando problemas en el
hgado, en figura 10 las ratas diabticas del grupo aloxanado presenta mayor concentracin
de GOT lo que quiere decir que al no ser tratadas presentan problemas en el corazn, sin
embargo, las que presentan menor concentracin de estas son las que han sido tratadas con
Glibenclamida y Pasuchaca 175 mg/Kg.
La Creatinina producida diariamente est relacionada con la masa muscular. La creatinina
filtra libremente por el glomrulo (pequeas cantidades son reabsorbidas y tambin
secretadas por los tbulos renales).
La medicin de creatinina tiene utilidad casi exclusivamente para la evaluacin de la
funcin renal (perfusin renal alterada, prdida de la funcin de las nefronas) y en la
monitorizacin de la dilisis renal 3,5.
En la Figura 10 se observa que el grupo tratado con Pasuchaca a concentraciones menores
de 125 mg/Kg presenta concentraciones elevadas de creatinina, presentando este grupo
problemas renales, esto puede deberse a la concentracin insuficiente del extracto lo cual
no ayuda a contrarrestar esta patologa. El grupo tratado con Glibenclamida y Pasuchaca
175 mg/Kg presentan menores niveles de creatinina, favoreciendo el tratamiento.27

BUN corresponde a nitrgeno ureico en la sangre. El nitrgeno ureico es lo que se forma

cuando la protena se descompone. Los niveles superiores a lo normal pueden deberse a:
Insuficiencia cardaca congestiva, Niveles excesivos de protenas en el tubo digestivo,
Sangrado gastrointestinal, Hipovolemia (deshidratacin), Ataque cardaco, Enfermedad
renal, incluso glomerulonefritis, pielonefritis y necrosis tubular aguda, Insuficiencia renal.
Los niveles inferiores a lo normal pueden deberse a: Insuficiencia heptica, Dieta baja en
protena, Desnutricin, Sobrehidratacin. En la Figura 11 se observa que el grupo tratado
con Pasuchaca 150 mg/Kg presenta una mayor concentracin de UN, lo que significa que
hay problemas a nivel heptico, pancretico y renal, sin embargo, los que han sido tratados
con Glibenclamida y Pasuchaca 175 mg/Kg presentan niveles cercanos a lo normal, no se
analiz el grupo de ratas diabticas por la ausencia de datos. 28
XI. CONCLUSINES:
El extracto de pasuchaca presento actividad hipoglucemiante a dosis dadas, sin embargo se
podria extrapolar que a una mayor dosis la glicemia se normalizaria.

En cromatografia en capa fina y en preparativa con sistema de solventes

diclorometano:metanol (1:1) se obtuvo 5 manchas diferentes que se detecto con luz UV 254
nm y 365 nm.

En cromatografia en capa fina con el revelador tricloruro ferrico (FeCl3) se detecto

compuestos fenolicos en la 3 primeras manchas.

El extracto hidroalcohlicos de Geranium ruizii Hieron posee actividad hipoglicemiante,

pero no se lleg a demostrar que logre llegar a ndices normales de glucosa en sangre
(Normoglicemiante).
Se elabor el extracto estandarizado sin dificultades.
-Se determin constituyentes qumicos importantes como saponinas, alcaloides y
flavonoides los cuales podran dar el efecto hipoglicemiante.
-La accin del frmaco a dosis de 175mg/Kg es menos eficaz que la accin de la
glibenclamida, sin embargo esto podra variar si se aumenta la dosis de la planta.
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