08/09/2016

Materiais biolgicos
Sangue
Urina
Fezes
Lquido cefalorraquiano (Lquor)
Coleta, conservao e transporte de
Escarro
material biolgico.
PAULA ROCHA CHELLINI

Consideraes gerais Coleta de fezes

Estgios evolutivos usuais de diagnstico:
ovos e larvas de helmintos;
trofozotos, cistos e oocistos de protozorios.

Uma identificao segura e correta de um parasito depende de critrios

morfolgicos, os quais esto sujeitos a uma coleta bem feita e a uma boa
preservao das amostras fecais.

Coleta de fezes Coleta de fezes

Fezes emitidas espontaneamente a deteco e a identificao dos Informaes:
parasitos intestinais esto em relao direta com a qualidade da Nome do paciente
amostra entregue ao laboratrio. Nmero de identificao
Nome do mdico
Data e horrio da coleta
Fatores importantes na coleta:
Consistncias das fezes
Tipo de recipiente
Volume
Idade da amostra Requisio mdica procedimento laboratorial a ser seguido
Uso de medicamentos
Compostos qumicos

(HENRY, 2008; SBPC/ML, 2014) (HENRY, 2008; SBPC/ML, 2014)

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Coleta de fezes Amostras mltiplas

Material contaminado com urina destruio de trofozotos.
Material contaminado com solo ou gua presena de organismos de
vida livre.
O frasco de coleta deve estar livre de antisspticos, agentes germicidas,
gotas de leo e de urina para evitar a destruio de formas vegetativas.
possibilidade de encontrar organismos
Intermitncia de passagem de certos parasitos
Distribuio no uniforme dos ovos dos helmintos
Estgios dos protozorios

Calor = destruio dos parasitos. Limitaes das tcnicas de diagnstico

Frascos de boca larga com capacidade de 50 mL, limpos e vedados.

Amostras em trs dias separados
Trs amostras em dez dias
Seis amostras em dias alternados em 14 dias

(DE CARLI, 2008; HENRY, 2008; NEVES, 2011)

Amostras mltiplas Fezes emitidas com o uso de laxantes

Diagnstico de amebase, giardase e estrongiloidase
Fezes emitidas espontaneamente apresentam uma probabilidade maior Requer solicitao do mdico
de conter cistos.
Indicado no caso de uma srie de exames negativos

Aps tratamento trs amostras

leos minerais, bismuto e magnsio no so indicados
Protozorios 4 semanas aps o tratamento
Laxantes salinos fosfato de sdio e sulfato de sdio tamponado
Helmintos 2 semanas aps o tratamento
Taenia sp. 5 a 6 semanas
Fezes induzidas devem ser totalmente colhidas e levadas imediatamente
ao laboratrio.

(DE CARLI, 2008; NEVES, 2011) (DE CARLI, 2008; NEVES, 2011)

Estabilidade das amostras Preservao da amostra fecal

O tempo de colheita das amostras fecais influi de maneira direta na
identificao dos parasitos.
Amostras sem conservantes refrigerao temporria ( 3 C a 5 C)

Tempo de exame recomendado:

amostras lquidas = 30 minutos Conservante Formas conservadas
amostras pastosas = 1 hora Formol 10% Cistos, oocistos, ovos e larvas
MIF Cistos, ovos e larvas
amostras slidas = 24 horas*
SAF Trofozotos, cistos, oocistos e ovos
* amostras devem ser preservadas e/ou refrigeradas

(DE CARLI, 2008; NEVES, 2011) (DE CARLI, 2008; NEVES, 2011)

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Soluo de formaldedo Soluo de formaldedo

Preparo das solues
5% ou 10% 1. Formaldedo a 10% (v/v)
- Formaldedo (37% a 40%) 100 mL
5% cistos de protozorios; ovos de A. lumbricoides e T. trichiura - gua deionizada 900 mL
continuam o seu desenvolvimento

2. Soluo salina de formaldedo a 10% (v/v)

10% oocistos de coccdios, ovos e larvas de helmintos; ovos de
Hemynolepis e lavas de S. stercoralis podem ser distorcidas - Formaldedo (37% a 40%) 100 mL
- Soluo salina a 0,85% 900 mL

(DE CARLI, 2008; NEVES, 2011) (DE CARLI, 2008)

Fixador Mertiolato-Iodo-Formaldedo
Soluo de formaldedo (MIF)
Preparo das solues Preparo das solues
Soluo I (Soluo estoque MF)
3. Soluo tamponada de formaldedo a 10% (v/v)
- Glicerina 2 mL
- Na2HPO4 . 7H2O 6,10 g - Foalmaldedo (37% a 40%) 10 mL
- NaH2PO4 . H2O 0,15 g - Tintura de mertiolato (1:1000) 80 mL

- Formaldedo (37% a 40%) 800 mL - gua deionizada 100 mL

- gua deionizada 7.200 mL

Soluo II (Soluo de Iodo)
- Iodo, cristais 5g Misturar 9,4 mL da soluo I
- Iodeto de potssio 10 g com 0,6 mL da soluo II,
imediatamente antes do
- gua deionizada 100 mL
uso.

(DE CARLI, 2008) (DE CARLI, 2008)

Fixador Acetato de sdio-cido

actico-formaldedo (SAF) Colorao com Lugol
Preparo da soluo Preparo da soluo:
- Acetato de sdio triidratado 1,5 g - Iodo, cristais 2g
- cido actico glacial 2 mL - Iodeto de potssio 4g
- Formaldedo 37% a 40% 4 mL - gua destilada 100 mL
- gua deionizada 92 mL
Dissolver o iodeto de potssio em gua, adicionar
lentamente os cristais de iodo e agitar at a completa
dissoluo. Filtrar e estocar em frasco mbar e ao abrigo
da luz.

(DE CARLI, 2008) (CDC, 2016; DE CARLI, 2008; NEVES, 2011)

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Coleta de sangue Coleta de sangue

Polpa digital do anular esquerdo ou lbulo da orelha pele fina
e boa irrigao sangunea.
Com algodo molhado em lcool iodado ou lcool puro, limpa-se
a superfcie . Com um alfinete ou agulha de estilete, previamente
esterilizada, faz-se uma pequena picada na pele.
Por compresso, sai pequena gota de sangue, a qual poder ser
examinada tanto pelo mtodo do esfregao em camada delgada
quanto pelo mtodo da gota espessa.
Os mtodos adotados para evidenciao do parasito devem ser
executados imediatamente aps a colheita do sangue.
Caso isso no possa ser feito, h possibilidade de colher o sangue em
tubos com anticoagulantes.
Neves, 2011 = heparina ou citrato
De Carli, 2008 = EDTA

(DE CARLI, 2008; NEVES, 2011) (DE CARLI, 2008; NEVES, 2011)

Colorao de Giemsa Colorao de Giemsa

Soluo Estoque de Giemsa: Soluo tampo pH 7,2:

Azur II eosina 0,30 g Soluo estoque A: fosfato de sdio dibsico = dissolver 11,866 g em 1L
de gua destilada.
Azur II 0,08 g
Soluo estoque B: fosfato de potssio monobsico = dissolver 9,037 g
Glicerina 12,50 g em 1L de gua destilada.
Metanol 37,50 g Manter em geladeira.
Na hora de usar, misturar 72,5 mL da soluo A com 27,4 mL da soluo
Trs gotas de soluo estoque para cada 2 mL de soluo tampo pH 7,2. B.

Colorao de Leishman Transporte

Esfregao delgado. Fezes Amostras de fezes devem ser transportadas de acordo com as
recomendaes do teste a ser realizado; alguns exigem conservante da
Mistura comercial (p) de azul de metileno e eosina. amostra e outros requerem apenas refrigerao, sem conservante.

0,15 g do p em 100 mL de metanol agitar frequentemente, pelo

espao de trs dias, quando estar pronta para o uso.

O material biolgico humano a ser transportado deve ser acondicionado de

forma a preservar a sua integridade e estabilidade, bem como a segurana
do pessoal envolvido, durante o processo de transporte.

(NEVES, 2011) (ANVISA, 2015; BRASIL, 2014)

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Transporte
Para a Categoria Espcime Humana de Risco Mnimo, devem ser
aplicados os seguintes requisitos:
I - embalagem primria, dotada de dispositivo que garanta vedao
prova de vazamento e impermevel para amostras lquidas, e no caso
de amostras slidas ou semi-slidas, recipiente resistente dotado de
mecanismo de fechamento que impea o extravasamento do material.
II - embalagem terciria rgida, resistente, de tamanho adequado ao
material biolgico transportado, e dotada de dispositivo de fechamento,
observando-se que materiais lavveis e resistentes a desinfetantes
podem ser reutilizveis.
III - embalagem secundria de material resistente de forma a conter a
embalagem primria, prova de vazamento.

(BRASIL, 2014) (ANVISA, 2015)

Referncias
ANVISA, Manual de Vigilncia Sanitria sobre o transporte de material biolgico
humano para fins de Diagnstico Clnico, 2015.
BRASIL, Resoluo RDC N 20, de 10 de abril de 2014. Dispe sobre regulamento
sanitrio para o transporte de material biolgico humano. DOU, 12 de abril de 2014,
Braslia.
CDC Center for Disease Control and Prevention. Disponvel em:
http://www.cdc.gov/dpdx/az.html. Acessado em: 05 de maio de 2016.
DE CARLI, G.A. Parasitologia Clnica. Seleo de Mtodos e Tcnicas de Laboratrios
para o Diagnstico das Parasitoses Humanas 2 ed. Atheneu, 2008.
HENRY, J.B. Diagnsticos clnicos e tratamento por mtodos laboratoriais. 20 ed.
Barueri: Manole, 2008.
NEVES, D. P., MELO, A. L., LINARDI, P. M., ALMEIDA, R. W. Parasitologia Humana. 12
ed. So Paulo: Atheneu, 2011.
SBPC/ML. Recomendaes da Sociedade Brasileira de Patologia Clnica/ Medicina
Laboratorial: coleta e preparo da amostra biolgica. 1 ed. Barueri: Manole, 2014.