1 Los Medios de Cultivo en Microbiología

1 Los medios de cultivo en
microbiologa
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias
artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es
el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir
una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno
adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en

composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios
de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros
ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo.

Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de
las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya

que bastantes bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de

enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis,
etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales:
para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre
completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la
formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el
Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La
Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las
bacterias Gram-positivas).
2 Esterilizacin (microbiologa)
Se denomina esterilizacin al proceso por el cual se obtiene un producto libre de

microorganismos viables. El proceso de esterilizacin debe ser diseado, validado y
llevado a cabo para asegurar que es capaz de eliminar la carga microbiana del producto o
un microorganismo ms resistente.
Dado que la esterilidad no puede demostrarse de manera absoluta sin causar la

destruccin completa de todas las unidades del lote de producto terminado, se define la
esterilidad en trminos probabilsticos, en donde la probabilidad de que una unidad de
producto est contaminada es aceptablemente remota. Se considera que un producto
crtico es estril cuando la probabilidad de que un microorganismo est presente en forma
activa o latente es igual o menor de 1 en 1.000.000 (coeficiente de seguridad de esterilidad
10^-6).
Los agentes que matan microbios son denominados microbicidas (cida= matar) o ms
comnmente denominados germicidas. Si el agente especficamente destruye bacterias,
es llamado bactericida; si mata hongos es denominado fungicida. Tras una exposicin del
objeto esterilizado al aire o a sus alrededores, ste se habr contaminado de nuevo con
microorganismos.
Los mtodos trmicos de esterilizacin son comnmente los ms utilizados para eliminar
los microorganismos, incluyendo las formas ms resistentes como lo son las endoesporas.
Terminologa referente al control del crecimiento

microbiano[editar]
Terminologa
Definicin Comentarios
En caso de tratarse de un alimento de

Tratamiento de calor con el pH superior a 4,5 y en condicin de
objetivo de eliminar anaerobiosis, se puede referir a un
microorganismos patgenos tratamiento de calor para matar
capaces de reproducirse en un endoesporas de Clostridium
Esterilizacin
cierto alimento. El tiempo y la botulinum en comida enlatada. Las
comercial
temperatura depender del endoesporas ms resistentes de las
microorganismo capaz de bacterias termoflicas pueden
reproducirse en el alimento en sobrevivir, pero no van a crecer ni
cuestin. germinar bajo las condiciones
normales de almacenamiento
Destruccin de patgenos Puede hacerse por mtodos fsicos o
Desinfeccin
vegetativos qumicos
Destruccin de patgenos El tratamiento regularmente es con

Antisepsia
vegetativos en tejidos vivos mtodos qumicos antimicrobiales
Remover los microbios de un

Por lo general se hace
Eliminacin rea limitada, como la piel
mecnicamente removiendo con
de grmenes alrededor de un sitio para
alcohol
inyectar
Tratamiento para disminuir la

cuenta microbiana y as Se puede hacer con un bao a altas
Sanitizacin mantener los niveles de salud temperaturas o introduciendolo en un
pblica. Esto solo se puede desinfectante qumico
hacer sobre objetos inanimados
Calor seco: Comprende a su vez varias fases: el calor directo, el flameado y la

esterilizacin al horno.
Calor hmedo: Comprende varias modalidades, ebullicin, pasteurizacin y empleo

del autoclave.
Tasa de muerte microbiana[editar]
Cuando una poblacin bacteriana es tratada con qumicos o con calor, usualmente stas
mueren a una tasa constante. Por ejemplo, si suponemos que tenemos una poblacin de 2
millones de microorganismos que han sido tratados por un minuto, y 90 % de la poblacin
ha muerto. Ahora nos quedan con 200,000 microorganismos. Si la poblacin es tratada por
otro minuto, 90 % del remanente de la poblacin ser exterminada, resultando en 20,000
mocroorganismos. Si la curva de mortandad es trazada logartmicamente, la tasa de
muerte es constante.
Factores que influyen en la efectividad de los tratamientos

antimicrobianos[editar]
El nmero de microorganismos: A mayor nmero de microorganismos que se tengan al

inicio, mayor tiempo para eliminar la poblacin entera.
Influencias ambientales: La presencia de materia orgnica regularmente inhibe la accin

de antimicrobianos qumicos. Microorganismos localizados en biopelculas, son difciles de
matar por biocidas, porque la actividad de ste es dependiente de la temperatura de la
reaccin qumica; los desinfectantes funcionan un poco mejor bajo temperaturas altas.
Tiempo de exposicin: Los qumicos antimicrobianos suelen requerir un mayor tiempo de

exposicin para microorganismos ms resistentes o endoesporas, esto con el fin de que
sea efectivo.
Caractersticas microbianas: Dependiendo las caractersticas del microorganismo se van
a tener que usar diferentes mtodos para poder eliminarlo.
Acciones de los agentes antimicrobianos[editar]
Alteracin de la permeabilidad de la membrana: La membrana plasmtica de los

microorganismos, localizada en la pared celular, es el objetivo de muchos agentes
antimicrobianos. Esta membrana regula activamente el paso de nutrientes a la clula y la
eliminacin de desechos de la misma. El dao a los lpidos o protenas de la membrana
plasmtica por agentes antimicrobianos causa que el contenido celular salga al medio y
esto interfiere con el crecimiento de la clula.
Dao a las protenas y cidos nucleicos: Para que una protena sea funcional se
necesita que se encuentre en su estructura terciaria por lo menos, sta se encuentra
constituida por puentes de hidrgeno los cuales son susceptibles a romperse con calor o
ciertos qumicos; la rotura de estos puentes nos da como resultado la desnaturalizacin de
la protena. Del mismo los enlaces covalente aunque son ms resistentes tambin son
objetivos de agentes antimicrobianos.
Los cidos nucleicos ADN y ARN son los que llevan la informacin gentica de la clula. El
dao a estos por calor, radiacin, o qumicos es frecuentemente letal para la clula. La
clula no se puede replicar y tampoco puede tener sus funciones metablicas normales
como la sntesis de enzimas. Las altas temperaturas a las que funcionan los autoclaves
eliminan todo tipo de microbios y bacterias, incluyendo las esporas.
Mtodos de esterilizacin[editar]
Existen varios mtodos de esterilizacin, detallados a continuacin. 1 2
Mtodos fsicos
Calor hmedo (en autoclave de vapor)
Calor seco (en horno de esterilizacin)
Flama directa
Incineracin
Aire caliente
Pasteurizacin
Ebullicin
Vapor
Tindalizacin
Radiacin
Radiacin ionizante
Radiacin no ionizante: (p. ej:Radiacin infrarroja y Radiacin

ultravioleta)
Mtodos qumicos
Alcoholes
Etanol
Alcohol isoproplico
Aldehdos
Formol
Glutaraldehdo
Fenoles
Fenol (cido carblico)
Xilenol
xido de etileno
Perxido de hidrgeno
Mtodos qumicos[editar]
Los mtodos qumicos de esterilizacin son aquellos que involucran el empleo de
sustancias letales para los microorganismos, tales como el xido de etileno y el perxido
de hidrgeno. El uso de este mtodo es muy limitado para la Industria Alimentaria pero
muy utilizado en otras industrias como la farmacutica.
Mtodos fsicos[editar]
Los mtodos fsicos son aquellos que no involucran el empleo de sustancias letales para
los microorganismos, sino procedimientos fsicos como la radiacin ionizante, el calor o
la filtracin de soluciones con membranas que impiden el paso de microorganismos,
incluyendo virus. El mtodo ms usado en esta categora es el calor que mata
microorganismos por la desnaturalizacin de las enzimas; el cambio resultante en la forma
tridimensional de las protenas las inactiva. La resistencia al calor vara entre los diferentes
microorganismos; esta diferencia puede ser expresada como el punto trmico de muerte
(PTM) el cual se define como la temperatura ms baja a la cual todos los microorganismos
en una suspensin lquida sern eliminados en 10 minutos.
Otro factor que debe ser considerado en una esterilizacin es el tiempo requerido. Este
puede expresarse como el tiempo de muerte trmica (TMT), el cual es el tiempo mnimo
para que toda bacteria en un cultivo lquido en particular sea exterminada a una
temperatura determinada.
Ambos PTM y TMT son guas tiles que indican la severidad del tratamiento requerido
para matar a una poblacin de bacterias dada. El tiempo de reduccin decimal (TRD, o
valor D) es el tercer concepto relacionado con la resistencia bacteriana al calor. TRD es el
tiempo, en minutos, en el cual el 90 % de una poblacin bacteriana a cierta temperatura
ser eliminada los tratamientos, trmicos en resumen,son mtodos para conservar los
alimentos.
Esterilizacin por calor seco
Temperatura (C) Tiempo (minutos)
121 360
140 180
150 150
160 120
170 60
180 30
Mtodos trmicos[editar]
Los mtodos trmicos suelen englobar todos los procedimientos que tienen entre sus fines
la destruccin de los microorganismos por el calor. Los mtodos son tanto la
pasteurizacin como la esterilizacin, cuya finalidad principal es la destruccin microbiana,
como al escaldado y a la coccin, procesos en los que tambin se consigue una cierta
reduccin de la flora microbiana, pero que sus objetivos principales son la variacin de las
propiedades fsicas.
Calor hmedo[editar]
Las condiciones de temperatura y presin de un proceso de esterilizacin por vapor de

agua en un autoclave van de 121 C a 134 C y 40-50 psi. Para el tratamiento de residuos
hospitalarios se emplean tiempos de operacin entre 20 y 30 minutos. El mtodo de
esterilizacin por autoclave utiliza pruebas microbiolgicas, las cuales se ingresan dentro
del ciclo de operacin y posteriormente por medio de una incubadora se busca detectar si
hay crecimiento de microorganismos. Uno de los microorganismos utilizados en estas
pruebas es el Bacillus stearothermophilus.
Calor seco[editar]
Artculo principal: Calor seco
Las temperaturas de esterilizacin van desde 121 C a 180 C, teniendo en cuenta los
tiempos de esterilizacin para cada caso.3
Aplicaciones[editar]
En investigacin de laboratorios cientficos es empleado principalmente para eliminar

microorganismos de los elementos de trabajo, evitando as la contaminacin de la
muestra, recipientes y material de trabajo.
En la industria alimentaria se emplea para aumentar la vida til de los alimentos. Los
alimentos esterilizados ms comunes son los enlatados.
Se usa tambin para la conservacin y alargamiento de la vida de libros, muebles, obras

de arte y otros bienes.
En los hospitales es empleado principalmente para eliminar agentes patgenos de los

instrumentos quirrgicos reutilizables.
Los fabricantes de productos sanitarios esterilizan los productos para poder utilizarlo con
asepsia en un procedimiento quirrgico o de laboratorio por los profesionales sanitarios.
En el tratamiento de residuos peligrosos hospitalarios, se utiliza la esterilizacin de alta

eficiencia, con el fin de eliminar todos los microorganismos patgenos y as disminuir los
riesgos de infeccin asociados.
Esterilizacin > Generalidades

Esterilizacin: eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto o sustancia, y que
encuentran acondicionados de tal forma que no pueden contaminarse nuevamente.
Sanitizante: agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es seguro para la salud de la p
Slo es aplicable sobre objetos inanimados.
Desinfectante: agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas tales como habitacion
Antisptico: agente que controla y reduce la presencia de microorganismos potencialmente patgenos sobre
mucosas (slo pueden aplicarse externamente sobre seres vivos).
Agentes antibacterianos esterilizantes y/o desinfectantes

1. Provocan prdida de la viabilidad en los microorganismos
Fsicos (calor, radiaciones)
Qumicos (xido de etileno, formaldehdo, agentes oxidantes, soluciones antispticas.)
2. Provocan una separacin de los microorganismos de la sustancia lquida
Filtracin (se eliminan los microorganismos presentes en un fluido).

Esterilizacin > Agentes fsicos
Calor
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturali
protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos.
La efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de:
Temperatura
Tiempo de exposicin
Calor Hmedo
El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos raz
El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (DNA, RNA, protenas, etc) son
producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto, reacciones inversas podran daar a la clula a cau
produccin de productos txicos. Adems, las estructuras secundarias y terciarias de las protenas se estabiliza
mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos por el agua a a
temperaturas.
El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Por lo que, los
materiales hmedos conducen el calor mucho ms rpidamente que los materiales secos debido a la energa li
durante la condensacin.
El autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que n
emulsiones con el agua y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C. Una temperatura de 121
atmsfera de sobrepresin) con un tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos form
esporas.
Temperatura
[C]
Descarga completa del Descarga de 2/3 del Descarga de 1/2 del Sin descarga del
aire aire aire aire
1/3 109 100 90 72
2/3 115 109 100 90
1 121 115 109 100
4/3 126 121 115 109
5/3 130 126 121 115
2 133 130 126 121
Influencia de la descarga incompleta de aire en la temperatura del autoclave
Ventajas
Rpido calentamiento y penetracin
Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo
No deja residuos txicos
Hay un bajo deterioro del material expuesto
Econmico
Desventajas
No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua

Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos
Calor Seco
El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativo
de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que
contacto con stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra ms lentamente que el vapor de
materiales porosos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el ma
seco o la actividad de agua del medio es baja. Esto se debe a que las protenas se estabilizan mediante uniones
hidrgeno intramoleculares que son ms difciles de romper por el calor seco.
La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requie
temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distinto
de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras que a 160C se requieren al meno
de exposicin.
Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no pueden ser esterilizados a ms de 160C.
Ventajas
No es corrosivo para metales e instrumentos.

Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.
Desventajas
Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.
Existen otras formas de eliminar microorganismos por calor seco. La incineracin se utiliza para destruir material d
contaminado. La accin directa de la llama elimina a los microorganismos cuando se lleva al rojo el material de m
ansas, lancetas, agujas de diseccin.
Radiaciones
Su accin depende de:
Tipo de radiacin
Tiempo de exposicin
Dosis
Ionizantes
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y com
esenciales para la viabilidad de los microorganismos.
Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas des
sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos.
No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componentes.
Ultravioletas
Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que forman dmeros de pirimidinas adyacentes qu
errores en la duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas.
Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.
Esterilizacin > Agentes qumicos

Dentro de los compuestos qumicos podemos encontrar agentes esterilizantes, desinfectantes y antispticos.
La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan.
Concentracin: vara con el tipo de agente y de microorganismo, pues una misma concentracin del agente p
producir un efecto diferente en distintos microorganismos.
Tiempo: los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no todos los
microorganismos mueren al mismo tiempo.
pH: afecta tanto a los microorganismos como a los agentes qumicos. El aumento de pH por encima de 7 incre
carga negativa de los microorganismos afectando la concentracin del agente sobre la clula. El pH determina
de disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a menor disociacin mayor permeabilidad y mayor efec
Alcoholes
Iodo
Agentes catinicos, aninicos y anfteros
Organo Mercuriales
Colorantes
Cloro y Compuestos clorados
Aldehdos
Oxido de Etileno
Compuestos Fenlicos
Acidos y Alcalis
Antispticos
Alcoholes
Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan protenas celulares. Desorganizan la
fosfolipdica.
No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo may
de cadena larga.
Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.
Iodo
Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos nucleicos. Inactiva protenas y en
oxidacin de los grupos -SH a S-S, pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles, etc.
Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol),
irritante.
Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre.
Agentes inicos y anfteros

Son sustancias que lesionan la membrana celular debido a que desordenan la disposicin de las protenas y de los fo
por lo que se liberan metabolitos desde la clula, se interfiere con el metabolismo energtico y el transporte activo.
No son esporicidas ni tubercolicidas an en altas concentraciones. Sus principales ventajas se hallan en que son in
tien, no son corrosivos de metales, estables, no txicos y baratos.
Catinicos: Sales de amonio cuaternarias. Tienen mayor actividad a pH alcalino y los Gram + son ms suscep
Aninicos: Jabones y cidos grasos. Tienen mayor actividad a pH cido y son eficaces contra Gram +.
Anfteros: Actan como catinicos o aninicos segn el pH.
Organo Mercuriales
Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas. Dentro de los m
orgnicos se encuentran el metafen y el mertiolate.
Perxido de Hidrgeno
Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres.
Actualmente, el perxido de hidrgeno gaseoso se est utilizando como desinfectante de superficies o descontam
gabinetes biolgicos debido a que no posee las propiedades txicas y cancerigenas del xido de etileno y formaldehdo.
Colorantes
Interfieren en la sntesis de cidos nucleicos y protenas (acridina) o interfieren en la sntesis de la pared celular (der
trifenilmetano). La acridina se inserta entre dos bases sucesivas del DNA separndolas fsicamente. Esto provoca er
duplicacin del DNA. Los derivados del trifenilmetano (violeta de genciana, verde de malaquita y verde brillante) b
conversin del cido UDP-acetilmurmico en UDP-acetilmuramil-pptido.
R = HSO4- Verde Brillante

R = Cl- Verde de Malaquita
Violeta de Genciana
Desinfectantes y/o Esterilizantes

Cloro
El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actan sobre protenas y cidos nucleic
microorganismos. Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina.
El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio (agua lavandina), que es activo sobre
bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas.
La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl 2 que se forman cuando el
es diluido en agua. La actividad germicida del ion hipocloroso es muy reducida debido a que por su carga no pued
fcilmente en la clula a travs de la membrana citoplamtica. En cambio, el cido hipocloroso es neutro y penetra fc
la clula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.
El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro activo), a pH alcalino y e
oscuros que favorecen su estabilidad, pero es inactivo como desinfectante. A causa de sto, es que deben utilizarse
diluidas en agua corriente (que tiene un pH ligeramente cido), con el objeto de obtener cido hipocloroso. Genera
utilizan soluciones con una concentracin del 0.1-0.5% de Cloro activo.
Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber en el medio sustancias capaces de
con los compuestos clorados que disminuyan la concentracin efectiva de stos.
Aldehdos
Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, lo que provoca modificacin irreversible de enzimas e inhib
actividad enzimtica (Adicin nucleoflica de grupos -NH2 y -SH). Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes.
esporas.
El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo en fro. El formaldehdo como gas se utiliza para descontamina
ambientes, etc. El formaldehdo gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehdo (OH (CH2O)n-H), lo que p
despolimerizacin de este compuesto y la liberacin de formaldehdo.
El formaldehdo tiene la desventaja de ser muy irritante y perder actividad en ambientes refrigerados.
Compuestos Fenlicos
Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmtica porque desordenan la disposicin de las p
fosfolpidos. Esto causa filtracin de compuestos celulares, inactivacin de enzimas y lisis.
El fenol no es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable, por ser muy irritante y por el residuo
luego de tratar las superficies.
Los derivados del fenol ms utilizados son el hexaclorofeno (compuesto difenlico) y los cresoles (alquil fenoles). Esto
efectivos a bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias. No son efectivos contra esporas.
Oxido de Etileno
Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxil
sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Sirve para esterilizar material term
como el descartable y plstico, equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, etc. Es muy peligroso por ser
inflamable y explosivo, y adems cancerigeno.
3Esterilizacin > Filtracin
Se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro depender del uso al qu
someter la muestra. Hay que tener en cuenta que los filtros que se utilizan generalmente en los laboratorios no retiene
micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice.
Existen tres tipos bsicos de filtros:
Filtros profundos o Filtros de profundidad: consisten de un material fibroso o granular prensado, ple
activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas se pr
una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz.
Membranas filtrantes: tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao
partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriz del filtro debido a efe
electrostticos.
Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): son pelculas muy delgadas de policarbonato que son p
por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares qu
atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un
mayor al del poro.
La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, algunos
pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos c
soluciones de antibiticos y vitaminas.
Esterilizacin > Controles en esterilizacin
Controles fisico-qumicos
Controles de Esterilizacin Monitorean el proceso de es
Controles biolgicos
Transferencia a medios de cultivo
Test de promocin del crecimiento

Controles de
Monitorean el material est
Esterilidad
Test de bacteriostsis
Filtracin por membranas
Controles de Esterilizacin
Son controles que se realizan sobre el mtodo de esterilizacin. Monitorean o controlan si el proceso de esteriliza
correctamente.
Controles Biolgicos
Utiliza indicadores biolgicos como controles del proceso de esterilizacin. Estos indicadores son preparaciones estanda
microorganismos relativamente resistentes al mtodo de esterilizacin que se emplea. Los indicadores se procesan en f
conjunta con el material a esterilizar y el nmero de microorganismos presentes en el indicador es mayor que el que se
en el material.
Una vez concluido el proceso de esterilizacin los indicadores son inoculados en medios de cultivo adecuados e incub
un determinado perodo de tiempo. Si el proceso de esterilizacin fue correctamente empleado y funciona bien no deb
desarrollo del indicador incubado.
Controles fisicoqumicos
Termocuplas: son mtodos directos que registran la temperatura a la que se desarrolla la esterilizacin.
Sustancias de punto de fusin conocido: se utilizan en autoclaves generalmente, son sustancias con un pu
similar al de la temperatura de esterilizacin del proceso. Estas sustancias estn mezcladas con un colorante y
indican si se alcanz la temperatura ptima de esterilizacin y el tiempo que se mantuvo.
Controles de Esterilidad
Permite controlar en forma probabilstica si el material qued completamente esterilizado pues se testea u
representativo de todo el material.
Transferencia Directa a Medios de Cultivo

Se transfiere una parte de la muestra a medios de cultivos apropiados que permitan el crecimiento de cualquier contam
Tioglicolato para anaerobios y aerobios (37C)

Tripticasa-Soja para aerobios (25C)
Las muestras representativas se incuban en estos medios durante un perodo de 14 das, al cabo del cual no se d
ningn tipo de crecimiento.
Puede ocurrir que la muestra no se encuentre estril pero que no se produzca crecimiento durante la incubacin por
5 Autoclave
Una autoclave es un recipiente de presin metlico de paredes gruesas con un cierre
hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una reaccin industrial, una
coccin o una esterilizacin con vapor de agua. Su construccin debe ser tal que resista la
presin y temperatura desarrollada en su interior. La presin elevada permite que el agua
alcance temperaturas superiores a los 100 C. La accin conjunta de la temperatura y el
vapor produce la coagulacin de las protenas de los microorganismos, entre ellas las
esenciales para la vida y la reproduccin de stos, hecho que lleva a su destruccin.
En el mbito industrial, equipos que funcionan por el mismo principio tienen otros usos,
aunque varios se relacionan con la destruccin de los microorganismos con fines
de conservacin de alimentos, medicamentos, y otros productos.
La palabra autoclave no se limita a los equipos que funcionan con vapor de agua ya que
los equipos utilizados para esterilizar con xido de etileno se denominan de la misma
forma.
ndice
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1Funcionamiento
2Usos
o 2.1Autoclave de laboratorio
o 2.2Autoclave de uso mdico
o 2.3Autoclave industrial
o 2.4Autoclave de materiales compuestos
3Vase tambin
4Referencias
5Enlaces externos
Funcionamiento[editar]
Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua pero
restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 103 kPa por encima de la
presin atmosfrica, lo cual provoca que el vapor alcance una temperatura de 120 grados
Celsius. Un tiempo tpico de esterilizacin a esta temperatura y presin es de 15-20
minutos. Las autoclaves ms modernas permiten realizar procesos a mayores
temperaturas y presiones, con ciclos estndar a 134 C a 200 kPa durante 5 min para
esterilizar material metlico; incluso llegan a realizar ciclos de vaco para acelerar el
secado del material esterilizado.
El hecho de contener fluido a alta presin implica que las autoclaves deben ser de
manufactura slida, usualmente en metal, y que se procure construirlas totalmente
hermticas.
Las autoclaves son ampliamente utilizadas en laboratorios, como una medida elemental de
esterilizacin de material. Aunque cabe notar que, debido a que el proceso involucra vapor
de agua a alta temperatura, ciertos materiales no pueden ser esterilizados en autoclave,
como el papel y muchos plsticos (a excepcin del polipropileno). si se puede esterilizar
papel en bolsas de nylon, eso se hace en odontologia para esterilizar los conos de papel
absorbente utilizados en endodoncia.
Debido a que el material a esterilizar es muy probablemente de uso grabable, se requiere

de mtodos de testificacin de la calidad de dicha esterilizacin, esto quiere decir que la
presin y temperatura aplicadas sern distintas para cada uno de los productos
autoclavados.
Las autoclaves suelen estar provistas de manmetros y termmetros, que permiten

verificar el funcionamiento del aparato. Aunque en el mercado existen mtodos testigo
anexos, por ejemplo, testigos qumicos que cambian de color cuando cierta temperatura es
alcanzada, o bien testigos mecnicos que se deforman ante las altas temperaturas. Por
este medio es posible esterilizar todo tipo de materiales a excepcin de materiales
voltiles, por lo que se debe tener gran precaucin.
Usos[editar]
Autoclave de uso mdico usada para esterilizar instrumental y otro producto
sanitario.
Autoclave de laboratorio usada para esterilizar material de laboratorio.
Autoclave industrial como las que se usan por ejemplo para el tratamiento de la
madera expuesta a la intemperie, laminacin de vidrio o tratamiento de composites.
Autoclave de materiales compuestos usada para curar y conformar laminados de

materiales compuestos polimricos.
Autoclave de laboratorio[editar]
Autoclave de laboratorio.
Una autoclave de laboratorio es un dispositivo que sirve para esterilizar material de

laboratorio.
Las autoclaves son ampliamente utilizadas en laboratorios, como una medida elemental de
esterilizacin de material. Aunque cabe notar que, debido a que el proceso involucra vapor
de agua a alta temperatura, ciertos materiales no pueden ser esterilizados en autoclave,
como el papel y muchos plsticos (a excepcin del polipropileno).
Este producto es de uso general en laboratorio y no es un producto sanitario por tanto no

lleva marcado CE segn la directiva 93/42/EEC ni le es de aplicacin esta legislacin.
Cuando la autoclave est destinada a la esterilizacin de productos sanitarios tiene unos
requisitos especiales.
Autoclave de uso mdico[editar]
Autoclave de uso mdico.
Una autoclave de uso mdico es un accesorio de los productos sanitarios que permite
su esterilizacin utilizando para ello vapor de agua a alta presin y temperatura. Como
accesorio de un producto sanitario es considerado por la directiva 93/42/EEC como
regulado tambin por la directiva y clasificado independientemente. As las autoclaves o
esterillizadores de uso mdico son productos sanitarios de la clase IIa por regla 15 de
anexo IX de la directiva 93/42/EEC.1 Esta clasificacin cambiar al entrar en vigor la
modificacin de la directiva por la directiva 2007/47/EC pasando a clase IIb por regla 15
modificada.2
Las autoclaves son ampliamente utilizadas por los fabricantes de productos

sanitarios estriles y en las centrales de esterilizacin hospitalarias, como una medida
elemental de esterilizacin de los productos.
Objetivo
Se encarga de eliminar toda la vida microbiana incluidas esporas en materiales,

equipos quirrgicos, textiles y de vidrio excepto de plstico.
Brindarle seguridad al paciente.
Inexistencia de residuo txico en material y equipo esterilizado.
Para la eficacia de la esterilizacin de vapor (Autoclave) debe de contar con tres

parmetros que son:
Temperatura.
Presin.
Tiempo.
Para que la esterilizacin sea efectiva debe alcanzar una temperatura de 121 a 134C con
una presin de 20-32 libras/pulgadas(psi) esto se modificara dependiendo el nivel del mar
donde se encuentre el equipo. Por ejemplo: En la Ciudad de Mxico se requiere a 20
libras.3
Autoclave industrial[editar]
En el contexto industrial la palabra autoclave se utiliza para referirse a una olla a

presin de gran talla, utilizada para cocimiento en procesos industriales.
Algunos usos destacados de las autoclaves industriales son:
En la industria alimentaria: se utilizan para la esterilizacin de conservas y

alimentos enlatados cuyas caractersticas requieren un tratamiento por encima de los
100 grados centgrados (mtodo Nicols Appert )
En la industria maderera: se utiliza para tratar la madera para construcciones en

exterior (prgolas, porches, etc.) y as protegerla de parsitos.
En la industria textil se denominan autoclaves ciertas mquinas utilizadas para el

teido de telas.
En la industria de los neumticos, se utilizan para realizar el vulcanizado.
En el tratamiento de residuos hospitalarios, se utiliza para eliminar los

microorganismos patgenos existentes.
Autoclave de materiales compuestos[editar]
Una autoclave de materiales compuestos es un recipiente o vasija (normalmente en

forma cilndrica) con un sistema de temperatura y presurizacin, utilizado para curar y
consolidar materiales compuestos.4 5
El tamao y el diseo de la autoclave depende de la aplicacin o, lo que es lo mismo, del

tipo de piezas a procesar. Uno de los sectores que ms utiliza esta tcnica es
el aeronutico, por lo que en ocasiones estos sistemas tienen dimensiones muy grandes.
Los componentes principales de una autoclave de materiales compuestos son:
Cmara presurizada: Es la vasija propiamente dicha, en la que se introducen los

componentes a curar.
Dispositivos de calentamiento: Son los encargados de conseguir las distintas

temperaturas de curado para cada tipo de material introducido.
Sistema de aplicacin de vaco: Es uno de los componentes ms importantes en

este tipo de autoclaves, ya que es una parte fundamental para el proceso de
fabricacin de un laminado de material compuesto. Se encarga de la primera
compactacin del laminado, elimina componentes voltiles de la resina y permite que
se aplique presin sobre la pieza a conformar sin que sta permanezca en contacto
con la atmsfera de la autoclave. Consiste en una membrana delgada plstica, no
reutilizable, y una serie de elementos que eliminan la cantidad de resina sobrante y
consiguen buenos acabados superficiales de la pieza.
Sistema de control de los parmetros de curado: Asegura en todo momento,

mediante sistemas monitorizados, que las condiciones de presin y temperaturas son
las adecuadas para el proceso.
Soporte de los moldes para su introduccin en la cmara.
Vase tambin[editar]
Olla a presin
Electromedicina
Sangre Agar Base
Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos.
Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y
anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observacin
de reacciones de hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate.
Fundamento
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el
crecimiento de una gran variedad de microorganismos, an de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro
de sodio mantiene el balance osmtico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %, aporta nutrientes para el
crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis.
Frmula (en gramos por litro)
Infusin de msculo de corazn 375.0

Peptona 10.0
Cloruro de sodio 5.0
Agar 15.0
pH final: 7.3 0.2
Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar perfectamente
hasta obtener una suspensin homognea. Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar 20
minutos a 121C. Enfriar a 45-50C agregar sangre desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas.
Preparacin de la placa de Agar Sangre: aadir en forma asptica un 5% de sangre estril desfibrinada a
temperatura ambiente, el agar debe estar a 45C.
Preparacin de Agar Chocolate: despus de aadir la sangre y agitando frecuentemente se mantiene el medio
de cultivo a 80C por 10 minutos hasta que adquiera un color pardo chocolatado.
Siembra
Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.
Incubacin
El tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del microorganismo que se quiera aislar.
Resultados
Microorganismos Crecimiento Hemlisis
E. coli ATCC 25922 Abundante --
S. aureus ATCC 25923 Abundante Beta
S. pyogenes ATCC 19615 Abundante Beta
S. pneumoniae ATCC 6305 Abundante Alfa
S. pneumoniae ATCC 49619 Abundante Alfa
Limitaciones
-Las reacciones hemolticas de muchos microorganismos son diferentes al usar sangre de caballo respecto a
la sangre de carnero, tal es el caso de algunas cepas de estreptococos grupo D, que producen beta hemlisis
en el agar suplementado con sangre de caballo pero no en agar suplementado con sangre de carnero, y son
mal clasificados como Estreptococos Grupo A al usar sangre de caballo.
Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar.
Medio preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-149-05 x 500g :Cdigo: B02-149-06 6 x 50 ml: B04-149-84
Agar chocolate
Agar chocolate con colonias visibles de Francisella
Comparacin de dos medios de cultivo utilizados para el crecimiento de Neisseria gonorrhoeae.
Ntese que el agar chocolate (izquierda) presenta un crecimiento excesivo al ser no selectivo, dada
su composicin permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos adems de N.
gonorrhoeae, mientras que el medio de Tayer Martin al ser selectivo, contiene antibiticos que
inhiben el crecimiento de otros microorganismos y en l solo crece la cepa de Neisseria
gonorrhoeae. Para ver las colonias de ample la imagen.
Alfa hemolisis en agar chocolate
Agar Chocolate (CHOC) es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo. Es una

variante del agar sangre. Contiene glbulos rojos, que han sido lisados por el suave
calentamiento a 56 C. Este agar se usa para el delicado y exigente crecimiento de
bacterias respiratorias, como por ejemplo Haemophilus influenzae.
Estas bacterias necesitan factores de crecimiento, como el NAD y hematina, componentes

que podemos encontrar dentro de los glbulos rojos; por lo tanto, un prerrequisito lgico
para el crecimiento es la lisis de los glbulos rojos. El agar se llama as debido a su
parecido con el chocolate, pero no contiene nada de este.
Debido a que este medio soporta muchos tipos de bacterias, no es muy til
para coprocultivos.
Vase tambin[editar]
Agar CLED
Agar sangre
TCBS Medio
Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus y otras especies de
Vibrio a partir de heces, agua y alimentos contaminados.
Tambin es conocido como Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa, o como Agar Selectivo para Vibrios.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la triptena aportan nutrientes para el
desarrollo bacteriano. Es este, el medio selectivo ms adecuado para el aislamiento de las especies de Vibrio,
e inhibidor para la mayora de las enterobacterias. Esta inhibicin se basa en las altas concentraciones de
tiosulfato y citrato, la presencia de bilis y un pH fuertemente alcalino. La degradacin de la sacarosa es
variable entre las especies de Vibrio y las colonias son verdes para las cepas que no la utilizan y amarillas
para aquellas que producen cido a partir de este azcar. Esto es debido al viraje del color de los indicadores
de pH azul de timol y azul de bromotimol, del color azul al amarillo en medio cido. Es importante tener en
cuenta, que la proporcin de sacarosa en el medio est equilibrada de forma tal que no inhiba el crecimiento
bacteriano por exceso de cido.
El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El tiosulfato de sodio aporta azufre y junto
con el citrato frrico permiten la deteccin de produccin de cido sulfhdrico.
Aumentando la concentracin de cloruro de sodio y disminuyendo la temperatura de incubacin, pueden
aislarse especies marinas sin importancia sanitaria.

Instrucciones
Extracto de levadura 5.0 Suspender 89 g del polvo en un litro de agua

destilada. Calentar hasta ebullicin y hervir de 1 a 2
minutos. NO AUTOCLAVAR. Distribuir en placas de
Peptona de carne 5.0 Petri estriles.
Triptena 5.0
Citrato de sodio 10.0
Tiosulfato de sodio 10.0
Bilis de buey 8.0
Sacarosa 20.0
Citrato frrico 1.0
Azul de bromotimol 0.04
Azul de timol 0.04
Agar 15.0
pH final: 8.6 0.2
Siembra
1-Materiales clnicos:
a-materia fecal: suspender 1 gramo de heces o el contenido del hisopo en 10 ml de Agua Peptonada Alcalina
(B02-159-05, B02-159-06) e incubar de 6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
b-materiales provenientes de infecciones extraintestinales: no es necesario realizar enriquecimiento previo en
Agua Peptonada Alcalina.
2-Agua: Filtrar de 1 a 10 litros (el volumen deseado) de agua con membrana de 0.22.Colocar la membrana
en un recipiente conteniendo Agua Peptonada Alcalina e incubar de 6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
3-Alimentos: Licuar 25 g de la muestra con 225 ml de Agua Peptonada Alcalina (B02-159-05, B02-159-06)
e incubar de de 6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
En todos los casos sembrar una alcuota del caldo de enriquecimiento en la superficie de una placa
de TCBS, por estriado, para el aislamiento de colonias.
Incubacin
En aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37C.
Resultados
Microorganismo Crecimiento Caractersticas de las colonias
Amarillas de 2-3 mm de dimetro, de

Vibrio cholerae Bueno
borde traslcido
V. parahaemolyticus Bueno Centro verde azulado, borde traslcido
V. alginolyticus Bueno Amarillas grandes
Aeromonas spp. Inhibido --
E. coli Inhibido --

Medio preparado: verde azulado.
Almacenamiento
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-167-05 x 500g :Cdigo: B02-167-06

Mac Conkey Agar.
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios
facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y
alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes
selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del
indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Instrucciones
Peptona 17.0
Pluripeptona 3.0
Lactosa 10.0
Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada.

Mezcla de sales biliares 1.5
Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar.
Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta
disolver. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15
minutos.
Agar 13.5
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
pH final: 7.1 0.2
Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15 ml de medio
de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.
Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica
Resultados
Microorganismos Colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas

Medio preparado: rojo prpura
Almacenamiento:
Presentacin
Baird Parker Medio Base.

Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y diferencial para el aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa
positiva en alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento
En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto de carne constituyen la fuente de carbono y
nitrgeno, el extracto de levadura aporta vitaminas del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de
los estafilococos.
Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro de litio, los cuales inhiben el
desarrollo de la flora acompaante. La yema de huevo permite demostrar la actividad lecitinsica.
Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de color grisceo-negro, y dan
reaccin sobre la yema de huevo produciendo alrededor de la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona
clara mas externa.
Se pueden encontrar cepas no lipolticas, que presentan igual caractersticas de colonias pero sin la zona opaca y clara.
Se debe confirmar la presencia de S. aureus mediante pruebas bioqumicas.

Instrucciones
Peptona de casena 10.0
Extracto de carne 5.0
Suspender 60 g del medio deshidratado en 940ml de

Extracto de levadura 1.0 agua destilada. Dejar en reposo 5 a 10 minutos.
Calentar agitando frecuentemente y hervir durante 1
minuto. Distribuir y esterilizar en autoclave a 121C
Cloruro de litio 5.0
(15 libras) durante 15 minutos. Enfriar a 45-50C y
agregar 50 ml de la emulsin de yema de huevo y
Agar 17.0 10ml de la solucin de telurito (Cdigo B03-601-61).
Homogeneizar y distribuir en cajas de Petri.
Glicina 12.0
Piruvato de sodio 10.0
pH final: 6.8 0.2
Siembra
Dejar secar la superficie de la placa preparada y extender 0.1 ml de la dilucin de la muestra a analizar.
Incubacin
24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos Crecimiento Apariencia
E. coli ATCC 25922 Inhibido ---
P. mirabilis ATCC 43071 Bueno Colonias marrones sin zona clara u opaca alrededor
Colonias negras con borde incoloro, convexas, rodeadas de una

S. aureus ATCC 25923 Bueno a excelente
zona opaca, con una zona clara externa.
Colonias negras, de tamao irregular. Zona opaca alrededor de la

S. epidermidis ATCC 14990 Escaso o bueno
colonia (no hay zona clara).
Caractersticas del medio:

Medio preparado: mbar claro opalescente (sin el agregado de yema de huevo).
Almacenamiento:
Presentacin
Manitol Salado Agar.

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de muestras clnicas, alimentos, productos
cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria.
Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de Vibrio, si no se dispone de medios
apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva
hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los
estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas,
se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y
minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin)
es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que
se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona
del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color
o prpura.

Instrucciones
Extracto de carne 1.0 Suspender 111 g de polvo por litro de agua

destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a
ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir y
Pluripeptona 10.0 esterilizar en autoclave a 118-121C durante 15
minutos.
d-Manitol 10.0

Agar 15.0
Rojo de fenol 0.025
pH final: 7.4 0.2
Siembra
Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra.
Incubacin
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3 das a 32 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos Crecimiento Caractersticas de las colonias
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla
Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Bueno Roja
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Inhibido Inhibido

Medio preparado: rojo
Almacenamiento:
Presentacin
TSI Agar
Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa,
lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo
bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato
necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+ , los cuales se
combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y
el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al
color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal
de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.

Instrucciones
Extracto de carne 3.0 Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua
destilada. Mezclar bien y calentar con agitacin
frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolucin
Pluripeptona 20.0
Lactosa 10.0
Sacarosa 10.0
Glucosa 1.0
total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de
ensayo. Esterilizar a 121C por 15 minutos. Enfriar
Sulfato de hierro y amonio 0.2 en pico de flauta profundo.
Tiosulfato de sodio 0.2
Rojo de fenol 0.025
Agar 13.0
pH final: 7.3 0.2
Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico.
Microorganismo Pico/Fondo Produccin de gas Produccin decido

sulfhdrico
E. coli ATCC 25922 A/A + -
K. pneumoniae ATCC 700603 A/A + -
P. mirabilis ATCC 43071 K/A + +
S. typhimurium ATCC 14028 K/A - +
S. enteritidis ATCC 13076 K/A + +
S. flexneri ATCC 12022 K/A - -
P. aeruginosa ATCC 27853 K/K - -
A: cido
K: alcalino

Medio preparado: rojo
Almacenamiento
Presentacin
Lowenstein-Jensen Medio Base.

Es esta una base para la preparacin de varios medios destinados al aislamiento, cultivo y diferenciacin de
micobacterias.
Fundamento
Los nutrientes de este medio basal, ms los aportados por el agregado de la mezcla de huevos, constituyen un rico
soporte para el crecimiento de una gran variedad de micobacterias. El verde de malaquita inhibe a gran parte de la flora
acompaante. Con el agregado de glicerina se estimula el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis, aunque gran
parte de M. bovis es inhibido. Agregando un 5% de NaCl, se pueden seleccionar micobacterias tolerantes a la sal, como
es el caso de M. smegmatis.

Instrucciones
Fosfato monopotsico 2.5
Sulfato de magnesio 0.24 Suspender 37,3 g del polvo en 600 ml de agua destilada
y agregar 12 ml de glicerina. Calentar agitando
continuamente y hervir un minuto. Esterilizar en
Citrato de magnesio 0.6 autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar a 50C
aproximadamente. Mezclar aspticamente un litro de
huevo ntegro, evitando la formacin de burbujas de aire
Asparragina 3.6 y agregar al medio base. Mezclar el huevo y la base hasta
uniformar. Distribuir en recipientes estriles adecuados y
tapar hermticamente. Colocar los mismos en posicin
Harina de papa 30.0
inclinada y coagular a 85-90C durante 45 minutos.
Verde de malaquita 0.4
pH final:4.8 0.1
Siembra
Se recomienda, en procedimientos de rutina, inocular la muestra previamente decontaminada, sobre la superficie del
medio de cultivo.
Incubacin
A 35-37C. A los 7 das de incubacin, se observa por primera vez si hubo crecimiento. Luego, observar cada semana,
hasta un total de 8 semanas.
Resultados
Observar las caractersticas morfolgicas y la presencia o ausencia de pigmento en las colonias.
Microorganismos Crecimiento Caractersticas de las colonias
Mycobacterium tuberculosis Excelente Grandes, secas, amarillentas, granulares
Mycobacterium avium Excelente Lisas, sin pigmentos
Mycobacterium gordonae Excelente Lisas
Mycobacterium bovis --- ---

Medio preparado: verde plido, opaco.
Almacenamiento
Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-156-05 x 500g :Cdigo: B02-156-06 Por 3 tubos: B05-156-21
Simmons Citrato Agar

Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de
carbono y energa.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente
de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema
buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es
el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los
microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de
nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido
tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un
medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.

Instrucciones
Citrato de sodio 2.0
Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro

Fosfato dipotsico 1.0 de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y
mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2
minutos. Distribuir en tubos y esterilizar en
Fosfato monoamnico 1.0 autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar en
posicin inclinada.
Sulfato de magnesio 0.2
Azul de bromotimol 0.08
Agar 15.0
pH final: 6.9 0.2
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inculo ligero , usando una ansa sin arrastrar el
agar.
Incubacin
A 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 das de incubacin.
Resultados
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.

-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.
Microorganismo Citrato permeasa Color del medio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Positivo Azul

S. typhimurium ATCC 14028 Positivo Azul
E. coli ATCC 25922 Negativo Verde
S. flexneri ATCC 12022 Negativo Verde
Limitaciones
-Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarillo-
amarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualizacin azul de un resultado
positivo.
-Inculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.
-Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la aguja de
inoculacin antes de inocular la prueba del citrato o sino inocularla primero. Cualquier arrastre de materia orgnica
puede originar resultados falsos positivos.

Medio preparado: verde.
Almacenamiento
Presentacin
Cerebro Corazn Infusin Agar.

Es un medio slido muy apropiado para el cultivo de bacterias y hongos, incluyendo los de difcil desarrollo.
Fundamento
Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano. La infusin de cerebro de
ternera, la infusin de corazn vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y vitaminas. La glucosa es el
hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato disdico otorga capacidad
buffer. El agar es el agente solidificante.
El agar cerebro corazn mantiene los mismos principios que el caldo para el cultivo de estreptococos y otras bacterias
exigentes. Con el agregado de 10% de sangre de caballo desfibrinada, fue utilizado para el crecimiento de Histoplasma
capsulatum y de hongos patgenos. Por tratarse de un medio que contiene glucosa, no es un agar sangre apropiado
para la observacin de reacciones de hemlisis.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 40 g/ml de estreptomicina, se utiliza este medio para el aislamiento de
hongos patgenos.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Infusin de cerebro de ternera 200.0 Disolver 52 g de polvo en un litro de agua destilada.

Calentar a ebullicin hasta su disolucin total.
Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121C.
Infusin corazn vacuno 250.0
Peptona 10.0
Glucosa 2.0
Fosfato disdico 2.5
Agar 15.0
pH final: 7.4 0.2
Siembra
De acuerdo a los fines de empleo.
Incubacin
El tiempo, la temperatura y la atmsfera de incubacin, sern las ptimas y dependern del microorganismo que se
est investigando.
Resultados
Microorganismos Crecimiento
Aspergillus niger Bueno
Neisseria meningitidis Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 Bueno

Medio preparado: mbar claro.
Almacenamiento
Presentacin
HEMOCULTIVO BIFASICO (RUIZ

CASTAEDA) ADULTO
Se encuentra usted aqu
Inicio / HEMOCULTIVO BIFASICO (RUIZ CASTAEDA) ADULTO
Esta compuesto por dos fases, un medio slido (agar tripticasa

soya) en un plano inclinado en
la cual veremos en la superficie si hay o no crecimiento de colonias, y

una liquida (caldo
tripticasa soya con anticoagulante SPS) en la cual se detecta turbidez,

hemlisis, signos de
produccin de gas por un periodo de 21 das a 37C.
Empaque:
Envase inmediato: Frasco de vidrio

1 Los Medios de Cultivo en Microbiología

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Fenol (cido carblico)

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Esterilizacin > Generalidades

Agentes antibacterianos esterilizantes y/o desinfectantes

Fsicos (calor, radiaciones)

Qumicos (xido de etileno, formaldehdo, agentes oxidantes, soluciones antispticas.)

2. Provocan una separacin de los microorganismos de la sustancia lquida

Filtracin (se eliminan los microorganismos presentes en un fluido).

La efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de:

1/3 109 100 90 72

2/3 115 109 100 90

1 121 115 109 100

4/3 126 121 115 109

5/3 130 126 121 115

2 133 130 126 121

Influencia de la descarga incompleta de aire en la temperatura del autoclave

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua

No es corrosivo para metales e instrumentos.

Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.

Esterilizacin > Agentes qumicos

Agentes catinicos, aninicos y anfteros

Cloro y Compuestos clorados

Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.

Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre.

Agentes inicos y anfteros

R = HSO4- Verde Brillante

Desinfectantes y/o Esterilizantes

Existen tres tipos bsicos de filtros:

Transferencia a medios de cultivo

Test de promocin del crecimiento

Filtracin por membranas

Transferencia Directa a Medios de Cultivo