CROMATOGRAFA DE CAPA FINA Y DE COLUMNA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE

INGENIERA

Facultad de Ingeniera Qumica y Textil

Prctica N 4
Tcnicas de separacin e identificacin por cromatografa

Grupo de trabajo: N 12

Fernando Trigoso Villalovos 20092123A

Sheyla Salcedo Saboya 20081352D

Melvin Vilca Montes 20090284H

Profesores:

Emilia Hermoza Guerra

Cristina Viza Llenque

Fecha de DD MM AA presentacin:
03 05 11

LIMA PER 2011-I

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NDICE

1. OBJETIVOS....
..pg.3

2. FUNDAMENTO TERICO..
.......pg.3

3. DATOS Y RESULTADOS:
..pg.5

Tabla 1: Datos de distancias recorridas para clculo de RF.

Tabla 2: Resultados de RF . En las diferentes fases mviles.

4. DIAGRAMAS DE FLUJO DEL PROCESO.

..................pg.9
5. OBSERVACIONES.
.pg.11
6.
CONCLUSIONES
...pg.12
7. APNDICE:
7.1.
CLCULOS
.pg.12
7.2. APLICACIONES
INDUSTRIALES....pg.13
Cromatografa en: Drogas y Frmacos y anlisis de plasma

8.
BIBLIOGRAFA
.pg.16

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Cromatografa de capa fina y de columna.

1. OBJETIVOS:

Entrenar en tcnicas de separacin e identificacin de pigmentos naturales por

cromatografa de capa fina y de columna.

Conocer los fundamentos fsico-qumicos implicados en los procesos de

separacin por cromatografa.

2. FUNDAMENTO TERICO:

Cromatografa

La cromatografa es un mtodo que consiste en la separacin de una mezcla de dos o

ms compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, y
la otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la
naturaleza de las dos fases involucradas.

Todas las tcnicas cromatografcas dependen de la distribucin de los componentes

de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que
transporta las sustancias que se separan y que progresa en relacin con la otra,
denominada fase estacionaria.

Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder de absorber en mayor o

menor grado otras sustancias sobre su superficie; y similarmente todas las sustancias
pueden ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno de adsorcin
selectiva es el principio fundamental de la cromatografa.

En general, las fuerzas atractivas en la superficie del slido (adsorbente) difieren para
las diferentes especies en disolucin. Las sustancian que el slido absorbe ms
fuertemente se mueven a travs de la fase estacionaria ms lentamente que aquellas
que no son tan fuertemente adsorbidas. Esto significa que aunque los diferentes
componentes de la disolucin salgan juntos, pronto se separan al contacto con la fase
estacionaria, es decir, los componentes se separan debido a las diferencias entre las
fuerzas intermoleculares entre ellos.

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Cromatografa en Columna

En la cromatografa en columna la separacin se

consigue haciendo fluir la mezcla a travs de una
columna de adsorbente. Los compuestos emergen
de la columna a tiempos diferentes, y pueden ser
recogidos en fracciones separadas.

Comnmente se suele usar como adsorbente

almina o slice. Las fases mviles se usan en
funcin de la polaridad de los compuestos a
separar.

Cromatografa de Capa Fina

En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un
pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por
capilaridad, por la placa y arrastrara los componentes a lo largo de esta, produciendo
la separacin de estos.

Se emplea una placa de vidrio o una lamina metlica, que se cubre con una pelcula
de un adsorbente, y a continuacin el lado donde se encuentra la disolucin de las
sustancias que se van a separar se sita en el extremo inferior. Esta separacin se
lleva a cabo un vaso que contiene un agente eluyente.

Existen placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la

identificacin de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son
coloridos se requerirn tcnicas de revelado.

Los factores que influyen en una separacin por cromatografa de capa fina son:

Temperatura (a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase

estacionaria), limpieza de las placas, pureza de los disolventes, etc.

Relacin de Frentes o Factor de Retencin

El Rf es la distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin respecto a la

distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.
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Distancia recorrida por un compuesto

RF =
Distancia recorrida por el solvente .

El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra: tipo de

adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturacin, entre otros.

3. DATOS Y RESULTADOS:

Tabla 1: Datos de distancias recorridas para clculo de RF.

Distancia recorrida por: ( cm)

Fase mvil: Frente del solvente caroteno Clorofila
n-hexano 5.5 5.0 0
n-hexano + Acetona 5.0 5.0 2.1
Acetona 5.0 1.3 1.3

Tabla 2: Resultados de RF . En las diferentes fases mviles.

RF
Fase mvil: caroteno Clorofila
n-hexano 0.9 0
n-hexano + Acetona 1 0.42
Acetona 0.26 0.26

Hojas de peligrosidad de las sustancias implicadas en el experimento.

Ficha tcnica de la acetona

Dimetil-cetona
Formula C3H6O
Peso molecular 58.08 g/mol
Nombre comn Acetona
Liquido incoloro. P.F.: 75C. Soluble
Propiedades en agua. Reacciona con agentes
oxidantes fuertes.

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Proteccin personal

INFLAMABLE (F+)
Baja toxicidad, pero de
Peligrosidad riesgo ambiental.
Irritante.

Ficha tcnica del n-hexano

Identificacin
Nombre qumico: n-Hexano
Frmula: C6H14
Propiedades fsico-qumicas
Aspecto y color: Lquido incoloro.
Olor: Suave olor a gasolina
Presin de vapor: 16 KPa a 20C
Densidad relativa de vapor (aire=1): 3.0
Solubilidad en agua: Ninguna
Punto de ebullicin: 69C
Peso molecular: 86.2g/mol

Identificacin de los peligros

Equipos de proteccin personal.

Proteccin respiratoria: Si
Proteccin de manos: Si
Proteccin de ojos: Si
Proteccin del cuerpo: No

Informacin toxicolgica:
Efectos agudos Efectos crnicos
Contacto con la piel Piel seca enrojecimiento causar dermatitis
Contacto con los Enrojecimiento, dolor.
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ojos
Inhalacin Vertigo, somnolencia, dolor de Poli neuropatas
cabeza, dificultad respiratoria,
nuseas, debilidad, prdida del
conocimiento.
Ingestin Dolor abdominal.

Medidas a tomar en caso de contacto con el producto - Primeros Auxilios

Contacto con la piel: Quitar las ropas contaminadas, aclarar y lavar la piel
con agua y jabn y proporcionar asistencia mdica.
Contacto con los Enjuagar con agua abundante durante varios
ojos: minutos. y proporcionar asistencia mdica.
Inhalacin: Aire limpio, reposo y proporcionar asistencia mdica.
Ingestin: Enjuagar la boca, No provocar el vmito, reposo y
proporcionar asistencia mdica.

Ficha tcnica del etanol.

Identificacin
Nombre qumico: Alcohol etlico
Frmula: C2H5OH
Propiedades fsico-qumicas
Apariencia: Lquido incoloro voltil de olor caracterstico y agradable.
Gravedad Especfica (Agua=1): 0.7893 / 20C
Punto de Ebullicin (C): 78 - 79
Densidad Relativa del Vapor (Aire=1): 1.60
Punto de Fusin (C): -114
Viscosidad (cp): N.R.
pH: N.A.
Presin de Vapor (mm Hg): 44.0 / 20C

Identificacin de los peligros

Equipos de proteccin personal.

Uso Normal: Guantes largos, monogafas. Si es muy concentrado se
puede usar mscara con filtro para vapores, botas y overol.
Controles de Ingeniera: Ventilacin local y general, para asegurar que la
concentracin no exceda los lmites de exposicin ocupacional. Debe
disponerse de duchas y estaciones lavaojos.
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Medidas a tomar en caso de contacto con el producto - Primeros Auxilios

Contacto con la piel: Lavar la piel con abundante agua. Retirar la ropa
contaminada y lvela con abundante agua y jabn.
Contacto con los Lavar con abundante agua, mnimo durante 15
ojos: minutos. Levantar y separar los prpados para
asegurar la remocin del qumico. Si la irritacin
persiste repetir el lavado. Buscar atencin mdica.
Inhalacin: Trasladar al aire fresco. Si no respira administrar
respiracin artificial. Si respira con dificultad
suministrar oxgeno. Mantener la vctima abrigada y
en reposo. Buscar atencin mdica inmediatamente.
Ingestin: Lavar la boca con agua. Inducir al vmito. No
administrar emticos, carbn animal ni leche. Buscar
atencin mdica inmediatamente (puede tratarse de
alcohol desnaturalizado).

Ficha tcnica de la silicagel

Silicagel
Formula SiO2nH2O
Grnulos de color blanco o azul,
inodoro. P.F.: 1710C. Insoluble en
Propiedades
agua. Alta absorcin. Dbilmente
acido.

Proteccin personal

Nocivo
T R: 22-42-49
Nocivo por inhalacin.
Peligrosidad

Ficha tcnica de la almina

Trixido de aluminio
Formula Al2O3
Peso molecular 102 g/mol
Nombre comn Almina
Propiedades Polvo blanco P.F.: 2072C. Insoluble
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en agua. Adsorbente ligeramente

bsico, y de carcter polar.

Proteccin personal

Enrojecimiento de los ojos.

Peligrosidad
Evitar la dispersin del polvo.

4. DIAGRAMAS DE FLUJO (pginas siguientes)

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5. OBSERVACIONES:

Cromatografa de capa fina.

Al utilizar la acetona como fase mvil en la experiencia de cromatografa de capa

fina, se observo que la separacin entre los compuestos era mnima, esto debido a
que el caroteno es una sustancia apolar y por tanto hidrofbica, y puesto que la
acetona es una sustancia polar no se produjo fuerzas intermoleculares capaces de
arrastrar el caroteno junto con el eluyente.

La cromatografa de capa fina debe llevarse a cabo en un lugar sin corriente de

aire, es por eso que se sugiere tapar el vasito con la luna reloj.

Hay que tener presente que cuanto mayor sea la longitud de la placa mejor ser la
separacin, esto se debe a que las fuerzas que actan en la separacin tendrn
ms oportunidad para actuar sobre cada componente.

A la silica gel se le incorpora un agente aglomerante, yeso (sulfato de clcico

semihidratado), para proporcionar firmeza al adsorbente.

La activacin de la placa se refiere a retirar el agua que se uso para formar la

papilla de silica gel, ya que la polaridad del agua interferira en la apolaridad del
n-hexano y no permitira la separacin del caroteno.
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Cromatografa de columna.

Para la experiencia de cromatografa en columna, se aada porciones de eluyente

constantemente para asegurarse de que la mezcla de colorantes sea absorbida en
el interior de la columna de almina, y de que el adsorbente empaquetado en la
columna nunca se quede seco, ya que esto creara canales o burbujas de aire en el
lecho, provocando as una pobre separacin de los compuestos.

Esta separacin es necesario realizar usando la lnea de vaco conectado al

kitasato, ya que el flujo de descenso de la fase mvil es muy lenta.

Se pudo observar que el descenso del caroteno (amarillo) al agregar n-hexano, era
ms lento que el descenso de la clorofila (verde) al agregar un poco de acetona.

La almina es la que hace el papel de adsorbente, mientras que la arena y el

algodn solo se usan como soporte.

En la cromatografa de columna, se pudo obtener dos soluciones coloreadas una

amarilla y otra verde que indicaban la presencia de los pigmentos, en cambio en la
cromatografa de capa fina solo se identifica por las pequeas manchas que se
observa en las placas.

6. CONCLUSIONES:

Cromatografa de capa fina.

Se concluye que la clorofila es ms polar que el caroteno, ya que la clorofila fue

mayormente atrada por el adsorbente polar (silica gel), siendo el caroteno quien
recorri una mayor distancia.

Luego de realizar la cromatografa de capa fina con dos tipos de eluyentes (una
apolar y otra polar) como el hexano y la acetona, se puede decir que el hexano es
un mejor eluyente para este tipo de experiencias, debido a que permite una mayor
separacin entre los compuestos.

Mediante se puede averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos

sobre la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados
se calculan los RF y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se
trataba del mismo compuesto. Por el contrario si los RF son iguales los compuestos
pueden ser iguales o no serlo.

Cromatografa de columna.

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Se pude decir que la eleccin del eluyente depender lgicamente del componente
que se va a separar y del material en que la separacin se lleva a cabo.

7. APNDICE

7.1 CLCULOS

Calculo del factor de retencin RF.

Usado la siguiente expresin y con los datos de la tabla 1, se tiene:

Distancia recorrida por un compuesto

RF =
Distancia recorrida por el solvente .

En fase mvil: n-Hexano.

5
RF caroteno= =0.9
5.5

0
RF clorofila= =0
5.5

En fase mvil: n-Hexano- acetona.

5
RF caroteno= =1
5

2.1
RF clorofila= =0.42
5

En fase mvil: Acetona

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1.3
RF carot eno= =0.26
5

1.3
RF clorofila= =0.26
5

7.2 APLICACIONES INDUSTRIALES.

Drogas y Frmacos y anlisis de plasma

En drogas, la naturaleza qumica heterognea de las drogas lo hace algo

problemtico su tratamiento integral por cromatografa.

Si bien existe una clara tendencia hacia el dominio de alto rendimiento de la

cromatografa lquida (HPLC) en la separacin y el anlisis de drogas, otras tcnicas,
como el de capa fina (o plano) (TLC) y el gas / lquido (GLC) sugieren tener muchas
aplicaciones en la separacin y el anlisis de drogas. Otras tcnicas que se
consideraron una vez para mostrar el resultado de una gran promesa, como la
cromatografa de fluidos supercrticos, tienen en realidad poco impacto y todava se
limita a una pocas aplicaciones de nicho.

Hay muchos campos de aplicacin para el anlisis de drogas y sus metabolitos en

fluidos biolgicos, incluido el anlisis forense de abuso de drogas o intoxicacin, las
distintas fases de descubrimiento de frmacos y el desarrollo (incluidos los estudios de
metabolismo de los frmacos), y teraputicos seguimientos de las drogas.

Columnas Monolticas

A diferencia de las columnas convencionales, que estn llenas de partculas de la fase

estacionaria, las columnas monolticas se forman como una unidad nica porosa.
Recientemente, como columnas monolticas se han comercializado. Estas columnas
muestran una mayor permeabilidad y por lo tanto puede ser utilizado a altas tasas de
flujo, brindando la posibilidad de un anlisis ms rpido. Aunque el uso de columnas
monolticas para las separaciones de drogas se encuentra todava en sus primeras
etapas, algunas aplicaciones de la cromatografa de las drogas estn empezando a
ser visto. Cuando se compararon los resultados con mtodos ms convencionales,
como HPLC, el monolito proporciono un rendimiento superior. Otros estudios de
diferentes laboratorios han demostrado que las columnas monolticas se puede utilizar
para el anlisis rpido de los frmacos y sus metabolitos en el plasma. En un ejemplo
reciente, estas columnas se utilizaron para el anlisis de algunos inhibidores de la
COX-II en el plasma humano con tiempos de anlisis cromatogrficos de menos de un
minuto ( Ver Figura1 ). Esto representa una reduccin de hasta cinco veces en el
tiempo de anlisis. Tambin los rayos UV y deteccin por fluorescencia se han
utilizado con estas columnas para investigar el metabolismo de una variedad de
frmacos utilizados como puntas de prueba, por ejemplo, fenacetina, la cumarina, y

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paclitaxel, por una serie de citocromo P450. El uso de columnas monolticas ha

proporcionado los tiempos mximos de anlisis del ciclo de ca. 4,5 min para este tipo
de ensayo.

Otra aplicacin reciente es el de la utilizacin de cuatro columnas monolticas,

conectado en paralelo con un espectrmetro de masas en tndem, para el anlisis de
oxazepam en los extractos de fase slida del plasma. Este arreglo permiti el anlisis
paralelo de muestras con un tiempo de anlisis global de tan slo 30 segundos por
muestra.

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8. BIBLIOGRAFA

H.Dupont Durst, W. George W. Gokel. Qumica orgnica experimental. Editorial

Revert. Pag. 180.

Panreac Didactic, Reactivos y productos qumicos para didctica (Catlogo)

pag.57

Heftmann E. (2004) Chromatography, fundamentalsand applicationsof

chromatography and related differential migration methods. United kingdom:
ELSEVIER Ltd. Pag. 945, 955, 956.

Cortes, G. F. Cromatografa en Capa Fina. [Fecha de consulta: 30/04/2011].

Disponible en:
http://depa.pquim.unam.mx/~fercor/dqo/manuales/1311/p7.pdf

Jorrin, N. J. Separacin de aminocidos por cromatografa en capa fina y

deteccin mediante reaccin con ninhidrina. [Fecha de consulta: 30/04/2011].
Disponible en:
http://www.uco.es/CROMATOGRAFADECAPFINADEAAs.pdf

Separacin de Ferroceno y Trimetilazuleno por Cromatografa en columna.

[Fecha de consulta: 30/04/2011]. Disponible en:
http://sites.google.com/site/grupodepolimeros/cromatografia-en-columna

www.uacj.mx/IIT/CICTA/Documents/Quimicos/acetona.pdf

www.ctr.com.mx/pdfcert/Eter%20de%20Petroleo.pdf
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