SEPARACIN DE COLORANTES POR CROMATOGRAFA EN CAPA FINA Y EN

COLUMNA Y CUANTIFICACIN POR ESPECTROFOTOMETRA

RESUMEN

Introduccin: La cromatografa es una tcnica de separacin en la cual, los componentes

de la muestra, se distribuyen entre dos fases de diferente naturaleza como consecuencia de
la variacin de velocidad que se establece al ser arrastrados por una fase mvil, lquida o
gaseosa, a travs de una fase estacionaria, slida o lquida.
Objetivos:
separar los componentes de una mezcla de colorantes usando cromatografa en columna.
reconocer el efecto del cambio de polaridad de la fase mvil en la separacin de una
mezcla.
cuantificar por espectrofotometra el primer colorante que salga de la columna.
evaluar la pureza del compuesto mediante en cromatografa en capa delgada.

Materiales y mtodos: los procesos de cromatografa se llevaron a cabo por columna y por
capa fina, adems se hizo una cuantificacin de un colorante en la mezcla por curve de
calibracin
Resultados: En cromatografa en capa fina se encontr un RF de la muestra problema
igual al RF de la m nitroanilina de 0.8 para acetato, 0.85 para etanol y para acetato
etanol 0.87
Conclusiones: Se cumplieron los objetivos propuesta para los diferentes tipos de
cromatografa
Palabras Clave: Cromatografa, factor de retardo, patrn, fase mvil, fase estacionara

La cromatografa es una tcnica de fases de diferente naturaleza, como

separacin en la cual, los componentes consecuencia de la variacin de velocidad
de la muestra, se distribuyen entre dos que se establece al ser arrastrados por
 una fase mvil, lquida o gaseosa, a
travs de una fase estacionaria, slida o
lquida.
La fase mvil es aquella que fluye a
travs de una fase estacionaria,
arrastrando con ella a los compuestos de
la mezcla. La fase estacionaria es aquella
en la cual estn retenidos los
componentes de la muestra, y a travs de
la cual fluye la fase mvil arrastrando a
los mismos. (1)
En la cromatografa en capa fina (TLC), la
fase estacionaria es una capa de
partculas de unos milmetros de espesor,
fijadas sobre un soporte slido
generalmente de aluminio, plstico o
vidrio. Despus de aplicar una mezcla
cerca de la parte inferior de la placa seca,
el disolvente empieza a producir la
separacin.
La ventaja principal de la TLC es que se
analizan simultneamente la muestra y el
patrn, mientras que en la cromatografa
en columna las muestras se analizan
individualmente. Adems, las muestras
que son difciles de separar, se pueden
resolver utilizando dos disolventes
diferentes por desarrollo de la placa en
direcciones perpendiculares. (2)
La mancha en una placa de TLC se
caracteriza por la distancia que recorre
con relacin a la distancia recorrida por la
fase mvil. El grado de retencin en
cromatografa plana de superficie se
expresa como el factor de retardacin, o
ndice de retencin Rf:
RF= dR / dM
Donde dR es la distancia recorrida por la
sustancia y dM es la distancia recorrida por
la fase mvil. (3)
METODOLOGA
Montaje cromatografa en columna
Se debe tener un tubo de ensayo
previamente instalado y con una cantidad
mnima de algodn en la llave de la
columna.
En este experimento, la columna ya se
encontraba con su fase estacionaria
compactada por la combinacin de la
suspensin (slica gel y Etanol 7:3) y de la
fase mvil (Etanol 7:3). Es de suma
importancia nunca dejar que la columna
se seque.
Posteriormente, se agrega
aproximadamente 1 ml de la mezcla a la
columna. Se abra la llave de la columna
para poder dejar entrar la muestra, y con
un poco de la fase mvil se limpia las
paredes de la columna cerrando y
abriendo la llave para la entrada de la
totalidad de la mezcla.
Por ltimo, se pasa a la fase en dnde se
extraer la elucin por fracciones, es
decir, con la llave cerrada se agrega
suavemente la fase mvil (Etanol). Se
abre la llave y cuando se vea que la
primera sustancia est por salir, recogerla
en un vaso precipitado limpio y mida el
volumen. Este valor debe ser registrado.
Debe tener l cuenta que la columna no
debe secarse nunca.
Montaje cromatografa en placa fina
En la superficie de la fase estacionaria se
marc con un lpiz los puntos donde se
aplic la muestra y los patrones m-
nitroanilina y rojo Congo. Utilizando un
capilar de vidrio se tom parte de la
mezcla inicial y patrones y se acercaron Se evidencia como la muestra problema y
suavemente a la placa o fase los patrones avanzaron de manera
estacionaria, esto se hizo unas 3 veces vertical en el frente de la placa debido a la
para asegurar la fijacin de las reaccin con las fases mviles (figura.2)
sustancias. Una vez realizado el paso
anterior se llevaron las placas a las fases
ACETATO ETANOL
mviles que fueron acetato de etilo y
etanol.

RESULTADOS

Seccin I. Separacin por CC

Imagen N 2. Montaje Separacin por

Cromatografa capa fina

RF EN ACETATO
M.P N.A R.C
RF 0.8 0.8 0

RF EN ETANOL
M.P N.A R.C
RF 0.85 0.85 0.9

RF EN ETANOL ACETATO

M.P N.A R.C

Imagen N 1. Montaje Separacin por CC RF 0.87 0.87 0.15

Volumen de fraccin obtenida: 8.3ml Dnde:

Color de fraccin: Amarillo claro
M.P= Muestra problema
N.A= M - nitroanilina
R.C= Rojo Congo

Seccin II Seccin III

Imagen N Tabla de datos
Concentracin (mg/L) Absorbancia
200 1,803
100 0,903
88,5 0,802
50 0,480
25 0,211
Ecuacin para obtener la
concentracin de anilina
.Imagen N3 Curva de calibracin de
concentracin vs absorbancia
Clculos
ANLISIS DE RESULTADOS
I). En primera instancia, cabe aclarar que
muestra columna y su fase estacionaria
ya se encontraban contaminadas con otra
muestra lo cual todo primero limpiarla con
el solvente y evidentemente nos generar
errores al momento de obtener el volumen
de la fraccin obtenida y de paso su
absorbancia y con ellos, su concentracin.
Sin embargo, al momento de recolectar la
fraccin obtenida era evidente la
separacin de los componentes de la
mezcla que pasaban por la columna
II). En los resultados se puede observar
que el comportamiento de la muestra
problema en las diferentes fases mviles,
fue igual al comportamiento de la
m nitroanilina lo que puede significar
que la muestra problema debe tener
compuestos similares al patrn
mencionado
El valor de Rf va de 0 a 1, siendo 0,5 un
valor medio
A menor Rf la sustancia queda ms
retenida en la fase estacionaria
A mayor Rf la sustancia no est unida con
fuerza a la fase estacionaria y es
arrastrada por la Fase mvil
III).
En la imagen se observa los resultados de
absorbancia de una concentracin de
nitro anilina en una disolucin que se
determinaron por medio de transferencia
de rayos de luz donde estos miden
mediante la cantidad de luz emitida - la
luz que pasa nos da la cantidad de luz
retenida con lo cual esto puede
determinar la absorbancia de luz de la
muestra.
CONCLUSIONES
A pesar de las inferencia
obtenidos, el objetivo fue logrado,
ya que por medio del mtodo de la
cromatografa en columna, se
pudo ver la separacin de lo
componentes de una mezcla. Esas
separaciones se definan de
manera visual, en este caso el
color obtenido de la fraccin era
de un color amarillo muy claro.
Por medio de la
espectrofotometra y su curvas de
calibracin , se pudo obtener el
valor de la concentracin que se
obtuvo del primer colorante
extrado de la columna(valor
obtenido)
Se evalu la pureza del
compuesto mediante en
cromatografa en capa delgada.
REFERENCIAS
 (1)http://www2.ulpgc.es/hege/alma
cen/download/39/39360/separacio
nes_por_cromatografia_1.pdf

(2)http://blog.utp.edu.co/docenciae
dwin/files/2014/09/TIPOS-
CROMATOGRAF%C3%8DA.pdf

(3)https://www.uam.es/docencia/jp
pid/documentos/practicas/actuales
/guion-p6.pdf