Practico 17

DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA HUMANA
MATERIA QUMICA BIOLGICA - CICLO LECTIVO 2016
TRABAJO PRCTICO 17
Laboratorio de Bioqumica Clnica

Sangre Orina
ELISA
LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICA
La bioqumica clnica es la rama del laboratorio en la que se usan mtodos

qumicos y bioqumicos para el estudio de las enfermedades. En la prctica, est
usualmente dedicada, aunque no exclusivamente, a los estudios de la sangre, orina,
materia fecal y otros fluidos biolgicos debido a la relativa facilidad de obtencin de este
tipo de muestras. Las investigaciones bioqumicas estn involucradas, en grados
variables, en todas las reas de la medicina clnica.
Cada ensayo bioqumico debera proveer respuesta a una pregunta generada en el
mdico sobre el paciente. Los resultados de los tests bioqumicos pueden ser de uso para
el diagnstico, screening y prognosis de una enfermedad as como para el seguimiento de
su tratamiento. Adems, el laboratorio bioqumico puede estar vinculado con la
investigacin de las bases bioqumicas de las enfermedades y con los ensayos clnicos de
nuevas drogas.
Existen una amplia variedad de especialidades dentro de la bioqumica clnica y no
todos los laboratorios estn equipados para llevar a cabo todas las posibles solicitudes.
Los resultados de los tests de laboratorio usualmente se comparan con un rango
de referencia que representa el estado saludable normal. Sin embargo, este rango de
referencia slo debe ser tomado como una gua y es importante tener en cuenta que un
resultado anormal no siempre indica la presencia de una enfermedad, ni que un resultado
normal la ausencia de ella. La discriminacin entre resultados normales y anormales est
afectada por varios factores fisiolgicos que deben ser considerados al interpretar
cualquier resultado. Por ejemplo sexo, edad, dieta, stress, ansiedad, ejercicio, historia
mdica del paciente, hora de extraccin de la muestra, etc. son factores que el mdico
debe evaluar al interpretar un resultado.
SANGRE
Se puede considerar que la sangre es un tejido conectivo fluido, porque est
compuesto por clulas y una sustancia intercelular lquida: el plasma sanguneo.
La cantidad total de sangre en un individuo adulto es de aproximadamente 5-6
litros, representando as el 7-8% del peso corporal. El plasma corresponde al 54% del
volumen sanguneo, mientras que la porcin celular, representa el 46% restante.
La sangre circula por el organismo a travs de los vasos sanguneos y tiene la
funcin de transportar:
nutrientes orgnicos
desechos orgnicos resultantes del metabolismo celular y el exceso de iones
minerales hacia los riones para su excrecin
gases (O2 y CO2) desde los pulmones hacia los tejidos y viceversa
vitaminas, hormonas, etc.
Otras funciones de la sangre incluyen:
mantener el equilibrio cido-bsico del cuerpo
regular el balance hdrico
participar en la regulacin de la temperatura corporal
mediar en los mecanismos de defensa del organismo (puesto que la sangre
contiene, entre otros, leucocitos y anticuerpos)
La sangre es el lquido ms frecuentemente utilizado con finalidades analticas. Los
tres procedimientos generales para la obtencin de sangre de un individuo son:
1) puncin arterial
2) puncin venosa
3) puncin cutnea
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La tcnica de eleccin para la obtencin de muestras de sangre depender de los
parmetros que se deseen analizar. La puncin venosa es tcnicamente ms fcil y es la
usualmente utilizada para la mayora de las determinaciones de rutina, pero proporciona
valores incorrectos de saturacin de O2 y pCO2, parmetros que deben medirse a partir
de una puncin arterial. Estas determinaciones de los gases en sangre son crticas para
valorar los problemas de oxigenacin que se encuentran en enfermedades tales como el
asma, neumonas, embolia pulmonar. Los pacientes con oxgenoterapia prolongada o
ventilacin mecnica son monitoreados para lograr el nivel de oxigenacin adecuado.
La sangre obtenida por puncin de la piel (a veces denominada incorrectamente
sangre capilar) es una mezcla de sangre procedente de arteriolas, vnulas y capilares, y
contiene tambin lquido intersticial e intracelular. Por lo tanto, est compuesta por una
fraccin arterial y una fraccin venosa. La mayor presin en las arteriolas hace que la
muestra sea ms rica en sangre arterial.
En los tres casos, si inmediatamente de extrada la sangre se mezcla en un tubo
con un anticoagulante, se tiene lo que se llama sangre entera, y se mantiene en ese
estado por un tiempo prolongado.
Si luego el tubo se centrifuga a baja velocidad, se obtienen dos fracciones
claramente definidas:
a) un precipitado de clulas, compuesto por eritrocitos comprimidos
(aproximadamente 45% del volumen total) por encima de los cuales existe un volumen de
glbulos blancos y plaquetas (aprox. 1%)
b) un sobrenadante fluido que corresponde al plasma y representa el 54%
restante.
Si no se agrega anticoagulantes a la sangre, y se deja reposar el tubo durante unos

minutos, se produce la coagulacin de esa muestra, obtenindose tambin dos
fracciones:
a) el cogulo, constituido principalmente por las clulas y
b) el lquido excluido del cogulo denominado suero.
En resumen, el suero se diferencia del plasma en que carece de factores de la
coagulacin consumidos durante dicho proceso (como por ejemplo fibringeno, que ha
sido convertido en la fibrina del cogulo, protrombina entre otros), y por contener adems,
en baja concentracin, sustancias de importancia fisiolgica liberadas por las plaquetas
durante la coagulacin, por ejemplo, el factor de crecimiento derivado de las plaquetas
(PDGF). El plasma de un individuo en ayuno es lmpido y de color amarillo claro, debido a
las pequeas cantidades del pigmento bilirrubina.
El plasma y el suero tienen aproximadamente la siguiente composicin qumica:

Agua (90%)
Sustancias orgnicas (9%)
Sustancias inorgnicas (1%)
Es decir, son soluciones acuosas de protenas, electrolitos y pequeas molculas
orgnicas. El plasma contiene alrededor de:
2
7 g% de protenas,
900 mg% de electrolitos (especialmente iones sodio (Na +), cloruro (Cl-),
bicarbonato (HCO3-), potasio (K+), calcio (Ca2+), magnesio (Mg2+) y fosfatos.
Bajas concentraciones de pequeas molculas orgnicas que comprenden
aproximadamente: 100 mg% de glucosa, 25 mg% de productos de desechos
nitrogenados no proteicos (el principal es la urea), lpidos (triglicridos, fosfolpidos,
colesterol).
DETERMINACIONES EN SANGRE
Las determinaciones sanguneas ms importantes pueden clasificarse en los
siguientes grupos:
1) Hematologa.
a. Hemograma y exmenes hematolgicos.
2) Coagulacin y hemostasia.
3) Anlisis de gases en sangre y saturacin de oxgeno.
4) Determinaciones fsico-qumicas:
a. Caractersticas fsicas: osmolaridad plasmtica, viscosidad de la
sangre, velocidad de sedimentacin globular (eritrosedimentacin).
b. Concentracin de electrolitos: Na+, K+, Mg2+, Ca2+, Cl-, H2PO4-
c. Concentracin de compuestos orgnicos: glucosa, urea, cido rico,
lpidos, bilirrubina, protenas, etc.
5) Determinacin de actividades enzimas: lactato deshidrogenasa (LDH),
creatinfosfoquinasa (CPK), transaminasa glutmico-oxaloactica (TGO), transaminasa
glutmico-pirvica (TGP), amilasa, colinesterasa, fosfatasa cida y alcalina, etc.
6) Serologa y diagnstico inmunobiolgico: determinacin de antgenos y/o
anticuerpos marcadores de enfermedades (SIDA, carcinomas, hepatitis, etc.),
determinacin de complemento, anticuerpos antinucleares, anticitoplasmticos,
antieritrocitarios, antifosfolpidos, inmunocomplejos, etc.
7) Otros: determinacin de marcadores oncolgicos, txicos y frmacos.
Los rangos de referencia son guas valiosas para el mdico pero como se dijo
anteriormente, no deben tomarse como indicadores absolutos de salud o enfermedad.
Adems, los valores entre laboratorios pueden variar significativamente por diferencias en
la metodologa y la forma de estandarizacin. Por lo tanto, los valores de referencia en
una determinada institucin pueden variar con respecto a los listados en esta gua.
HEMATOLOGA
El estudio hematolgico ms frecuente es el Hemograma.
El Hemograma completo consiste en determinar:
1. Cantidad de cada tipo de clula presente en la sangre:
a. Recuento de glbulos blancos o leucocitos
b. Recuento de glbulos rojos llamados tambin hemates o eritrocitos
c. Recuento de plaquetas.
2. Hematocrito
3. Concentracin de hemoglobina
4. ndices hematimtricos:
a. Volumen corpuscular medio (VCM)
b. Hemoglobina corpuscular media (HCM)
c. Concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM)
5. Frmula leucocitaria
6. Evaluacin morfolgica de las clulas
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Todas estas determinaciones se realizan con sangre entera venosa.

Los recuentos celulares pueden hacerse manualmente contando los elementos
en una cmara de Neubauer vista bajo el microscopio. Este mtodo consiste en colocar
una pequea cantidad de sangre entre dos vidrios, uno de los cules tiene grabada una
retcula de tamao conocido sobre la que se cuentan las clulas. La muestra debe ser
procesada antes de acuerdo con el tipo de clula a contar. Dado que el tamao de la grilla
y el volumen de la cmara son conocidos, es posible establecer el nmero de clulas por
volumen de sangre.
El hematocrito informa el volumen que ocupan los glbulos rojos como porcentaje
del total de la sangre y se mide centrifugando un pequeo volumen de sangre en un tubo
cilndrico y midiendo la relacin entre la altura de la columna de hemates con respecto a
altura total de la columna.
El nmero de eritrocitos y el hematocrito pueden variar fisiolgicamente por el

ejercicio, la altura sobre el nivel del mar, el embarazo, sexo (los andrgenos estimulan la
eritropoyetina), etc.
La concentracin de hemoglobina se mide segn la absorbancia de la muestra a
una determinada longitud de onda, caracterstica de esta protena. Puede variar
fisiolgicamente por las mismas razones que vara en nmero de eritrocitos. La altitud
sobre el nivel del mar produce cierto grado de hipoxia que, dependiendo de la duracin y
la continuidad, puede elevar la concentracin de hemoglobina.
Los ndices hematimtricos son parmetros calculados que relacionan el nmero
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total de eritrocitos, el hematocrito y la concentracin de hemoglobina. Son tiles para
clasificar los diferentes tipos de anemias.
el volumen corpuscular medio (VCM) = hematocrito/n hemates. Evala el
volumen medio de los glbulos rojos. Pueden presentarse alteraciones hematolgicas con
eritrocitos de menor volumen (microcticas) o de mayor volumen (macrocticas).
la hemoglobina corpuscular media (HCM) = concentracin de hemoglobina/n
hemates. Evala la hemoglobina contenida en cada glbulo rojo
la concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM) = concentracin de
hemoglobina/hematocrito. Evala la hemoglobina contenida en todos los eritrocitos.
Pueden presentarse alteraciones donde los eritrocitos tienen menor concentracin
de hemoglobina (hipocrmicas) o mayor concentracin (hipercrmicas).
Por ejemplo, las anemias ferropnicas (por deficiencia de hierro) presentan valores
disminuidos de HCM (microcticas) y de CHCM (hipocrmicas).
Hoy en da es muy frecuente que los laboratorios cuenten con contadores
hematolgicos, equipos preparados para contar los distintos tipos de clulas. En este
caso el mismo contador prepara la muestra y est calibrado para contar las partculas de
cada tipo, segn el tamao de cada tipo de clulas. Tambin mide la concentracin de
hemoglobina y a partir de estos parmetros, el equipo calcula los ndices hematimtricos.
La frmula leucocitaria expresa la cantidad de cada tipo de leucocito. Puede ser
absoluta (expresada por volumen de sangre) o porcentual.
En diversas patologas (infecciones, intoxicaciones, reacciones alrgicas,
leucemias, etc.) puede alterarse el nmero total de leucocitos y/o las cantidades relativas
de cada tipo leucocitario.
La frmula leucocitaria y la evaluacin morfolgica (color, tamao y forma) de las
clulas se determinan por observacin microscpica de una gota de sangre fresca
extendida sobre un portaobjetos de vidrio, preparado que se denomina frotis. Este frotis
se tie con colorantes que permiten diferenciar todos los tipos celulares.
Los glbulos rojos normales se ven como pequeos discos teidos con menor
intensidad en el centro. Algunas de las anomalas morfolgicas de la serie roja son
eliptocitosis (forma oval, pareja), anisocitosis (diferentes formas). La hipercroma,
hipocroma y anisocroma, que indican cantidades anormales de hemoglobina, se pueden
evidenciar de acuerdo a la intensidad con que se tien los eritrocitos.
Valores de referencia Hemograma

Los siguientes son los valores de referencia considerando personas adultas
sanas:
Recuento de hemates: Mujeres: 4,6 x 106 0,6 x 106/ mm3
Hombres: 5,3 x 106 0,7 x 106/ mm3
Hematocrito : Mujeres: 42 5 %
Hombres: 47 5 %
Recin Nacidos: 46 - 62 %
Concentracin de Hemoglobina: Mujeres: 12 - 15 g%
Hombres: 13 - 17 g%
Recin Nacidos: 13 - 20 g%
ndices hematimtricos: VCM: 82 95 fl (femtolitro)
HCM: 27 31
CHCM: 320 360 g/l
Recuento de leucocitos: Adultos: 4000 - 11000 / mm3
Recin nacidos: 10000 25000 / mm3
Frmula Leucocitaria relativa: Cayados: 0 - 1 %
Neutrfilos: 55 - 70 %
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Eosinfilos: 1 - 4 %
Basfilos: 0 - 1 %
Linfocitos: 20 - 30 %
Monocitos: 4 - 8 %
Recuento de plaquetas: 150000 - 400000 / mm3
ANLISIS DE GASES EN SANGRE Y SATURACIN DE OXGENO

Se utilizan para evaluar el estado cido base (EAB) o el estado de oxigenacin
respiratoria del individuo.
La muestra de eleccin en este caso es sangre entera obtenida por puncin
arterial, colectada anaerbicamente.
Los parmetros medidos son pH, pCO2 y pO2, y se pueden incluir los parmetros
calculados de concentracin de bicarbonato, de CO2, el exceso de base y la saturacin de
O2 de la hemoglobina.
Las determinaciones de pH, pCO2 y pO2 se realizan con un equipo constituido por
tres electrodos, cada uno especfico para cada uno de los parmetros a medir y se los
denomina electrodo de pH, electrodo de CO2 y electrodo de O2. En cada electrodo, los H+,
el CO2 o el O2 presentes en la muestra generan una diferencia de potencial proporcional a
su concentracin. La corriente producida es medida por un voltmetro y convertida en
unidades de pH o mmHg (unidad en que se expresan la pCO2 y pO2).
Recordar que la concentracin de bicarbonato se calcula con los resultados
obtenidos en las mediciones de pH y pCO2, utilizando la ecuacin de Henderson-
Hasselbach, que relaciona el pH de la solucin con la relacin [HCO3-]/[H2CO3]:
pH = pKa + log [HCO3-]/[H2CO3]
Siendo la [H2CO3] muy baja, debido a la presencia de la anhidrasa carbnica, para
calcularla se utiliza la [CO2]:
[CO2] (mM) = 0,03 x pCO2 (mmHg)
[HCO3-] [HCO3-]
pH = pKa + log ------------ = pKa + log --------------------
[CO2] 0,03 x pCO2
Medidos el pH y la pCO2 y conocido el pKa del sistema (6,1), se calcula la [HCO3-].
Valores de referencia Estado cido-Base

Parmetro Rango de referencia
pH arterial 7,35 - 7,45
pCO2 arterial 32 - 48 mmHg
pO2 arterial 83 - 108 mmHg
CO2 total arterial 23 - 29 mEq/l
HCO3- arterial 20-28 mEq/l
Exceso de base Entre 2 y +3 mEq/l
arterialSaturacin de O2 95 - 98 %
arterial
La saturacin de oxgeno, otro de los parmetros calculados por el equipo de
gases, indica el porcentaje de la hemoglobina total que ha fijado oxgeno y es calculado a
partir de la pO2 y pH medidos utilizando la ecuacin de Hill, que describe la funcin
sigmoidea que sigue la saturacin de oxgeno graficada en funcin de la pO 2, para un pH
dado.
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IONOGRAMA
Es la determinacin de las concentraciones circulantes de iones en plasma o suero,
en particular de Na+ y K+.
La concentracin de Na+ vara entre 135 y 145 mEq/l en los individuos sanos. La
hiponatremia y la hipernatremia son importantes trastornos electrolticos que requieren
una medicin exacta del laboratorio para diagnstico y para el control de su correccin.
Normalmente, la prdida urinaria diaria de este in es equilibrada por la ingestin y el
estado de hidratacin, entre otros factores.
El rango fisiolgico de concentracin srica de K+ es de 3,5 a 5,5 mEq/l. Una
concentracin del in potasio circulante elevado o deprimido (hipercalemia o hipocalemia,
respectivamente) puede tener profundos efectos adversos sobre el miocardio, lo que hace
de la concentracin de potasio uno de los objetos de anlisis clnico ms importante.
Dado que el potasio es el principal catin intracelular, debe tenerse en cuenta que la
hemlisis de la muestra (post-extraccin) eleva espuriamente el resultado.
Valores de referencia Ionograma

Parmetro Rango de referencia
Osmolaridad 275 - 295 mOsm
Na+ Sangre 135 - 155 mEq/l
Orina 30 - 280 mEq/da
K+ Sangre 3,5 5,5 mEq/l
Orina 25 - 125 mEq/da
Cl- 98 - 107 mEq/l
Ca2+ 8,1 - 10,4 mg%
Mg2+ 1,7 - 2,4 mEq/l
Fsforo 2,7 - 4,5 mg%
ERITROSEDIMENTACIN
Esta determinacin consiste en medir la velocidad de sedimentacin globular. Para
ello se utiliza sangre entera anticoagulada con la que se llena un fino tubo graduado
(contiene un volumen estandarizado de muestra) y se lo deja reposar. Habitualmente se
realizan lecturas luego de 1 y 2 hs, tiempo durante el cual en la columna se separan dos
fases, las clulas en la parte inferior y una fase superior de plasma. Cada lectura implica
medir la altura de la columna lquida superior. Normalmente, en la primera hora la
eritrosedimentacin es menor que 12 mm para el hombre y menor que 15 mm para la
mujer. Este parmetro aumenta por variadas razones fisiolgicas (embarazo) y
patolgicas (procesos inflamatorios agudos y crnicos, infecciosos, anemias,
disproteinemias, etc.), resultando en un dato altamente inespecfico para diagnsticos. Un
resultado de eritrosedimentacin acelerada es de escaso valor cuando se lo considera
aisladamente; en cambio, en conjunto con otros datos clnicos y de laboratorio, es un
elemento valioso en el diagnstico y seguimiento.
QUMICA CLNICA
El trmino Qumica Clnica comprende un alto nmero de determinaciones de
concentraciones circulantes de compuestos orgnicos y enzimas implicados en una
amplia variedad de procesos metablicos. Esta gua de estudio no pretende incluir a
todas, slo se tendrn en cuenta las que tienen significancia en el contexto del curso de
Bioqumica Humana. El alumno deber poder vincular un determinado test con los
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diferentes temas bioqumicos relacionados, situaciones metablicas normales y/o
especiales, patologas, etc.
Algunas de las determinaciones listadas en la tabla que sigue suelen agruparse
segn el aspecto que evalan. As, se denomina hepatograma al conjunto de tests que
evalan la funcin heptica: bilirrubina total y directa, transaminasas (TGO y TGP),
fosfatasa alcalina, colesterol, protenas totales y albmina. La colestasis se refleja en los
valores de -glutamiltranspeptidasa (-GT) y 5-nucleotidasa. La funcin renal se evala
determinando las concentraciones de urea y creatinina, junto con el ionograma plasmtico
y urinario. Las enzimas CPK, LDH y GPT suelen agruparse para evaluar dao cardaco.
Adems de metabolitos, se pueden determinar concentraciones circulantes de
marcadores tumorales, frmacos y txicos.
IMPORTANTE: Observaciones:
- Los valores de referencia indicados son estimativos. Dependen de la
metodologa utilizada, por lo que los valores de referencia en una determinada institucin
pueden variar con respecto a los listados en esta gua. Adems, en algunas
determinaciones los rangos de referencia pueden variar con la edad y sexo, entre otros
factores.
- Prestar atencin a las unidades, y evaluar comparativamente las
concentraciones de los distintos elementos.
METABOLITOS
Glucosa 70 - 110 mg% Metabolismo de glcidos - accin
de insulina y glucagon - curva de
tolerancia oral
Urea 15 - 45 mg% Metabolismo de aminocidos
Nutricin - Funcin heptica -
Funcin renal
Creatinina 0,6 - 1,4 mg% Metabolismo de fosfocreatina
cido rico < 8 mg% varones Metabolismo de purinas - gota
< 7 mg% mujeres
Triglicridos 40 - 180 mg% Metabolismo de lpidos y
Colesterol total 140 - 200 mg% lipoprotenas Dislipoproteinemias
Funcin heptica
Colesterol de HDL Varones > 35 mg% Mujeres >
29 mg%
Colesterol de LDL < 130 mg%
Bilirrubina total 0,8 - 1 mg% Metabolismo del hemo Funcin

(conjugada + heptica
no conjugada)
Bilirrubina directa < 0,2 mg%
(conjugada)
Protenas totales 6,1 - 7,9 g% Osmolaridad plasmtica -
Funcin heptica -
Albmina 3,5 - 4,8 g% Proteinograma - buffers
biolgicos
Hierro 60 - 170 g% Metabolismo del hierro
Transferrina
Ferritina
IgG 710 - 1520 mg% Respuesta inmune
IgA 90 - 310 mg% Infecciones
IgM 40 - 250 mg%
IgD 0 - 9 mg%
IgE 0 - 100 UI/ml Alergias Infecciones parasitarias
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NH3 19 - 82 g% Funcin heptica - Errores
congnitos del ciclo de la urea
cido lctico 4,5 - 17 mg% Metabolismo en msculo-

Alteraciones del metabolismo del
glucgeno- hipoxia
Hemoglobina 4 - 7% de la hemoglobina total Metabolismo de glcidos

glicosilada (diferentes mtodos pueden Regulacin de la glucemia
medir diferentes valores)
Fructosamina 1 - 2% de las protenas totales
Cuerpos cetnicos Negativo Metabolismo de lpidos y glcidos

Diabetes
ENZIMAS
TGO o ASAT 15 - 30 U/l Funcin cardaca y heptica
Hepatitis
TGP o ALAT 8 - 20 U/l Enfermedad heptica obstructiva
Infarto de miocardio
Fosfatasa alcalina (FAL) 80 - 280 U/l Metabolismo seo - funcin
heptica- Isoenzimas
Fosfatasa cida total Hombres 3 - 12 UI/l
Mujeres 0,4 - 9 UI/l
CPK < 170 U/l Funcin cardaca, muscular y
cerebro- infarto de miocardio-
trauma-miopatas Isoenzimas
LDH 230 - 460 U/l Funcin cardaca y eritrocitaria-
infarto de miocardio- anemias -
Isoenzimas
5nucleotidasa < 15 U/l Funcin heptica- enfermedad
hepatobiliar obstructiva intra o
extra heptica
-glutamiltranspeptidasa Hombres 22 12 U/l Funcin heptica- enfermedad
Mujeres 15 6 U/l obstructiva heptica y post-
heptica
Amilasa < 220 U/l Funcin pancretica y partidas-
pancreatitis- parotiditis
Lipasa 0 - 200 Funcin pancretica- pancreatitis
HORMONAS
T3 1,5 - 3,4 mg% Glucagon 30 - 210 pg/ml
T4 total 5 - 12 g% PTH 10 45 pg/ml
T4 libre 0,8 2,4 ng% Calcitonina 3 - 19 pg/ml
TSH 0,35 5,0 mU/l Subunidad -hCG Mujeres no
(5 - 60 ng/ml) embarazadas < 5
mUI/ml
ACTH A las 8 hs, 0 - 54 Estradiol
pg/ml
LH Varones 2 - 12 U/l Estriol Variable segn
Mujeres variable edad y ciclo
segn ciclo menstrual
menstrual
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FSH Varones 1 - 7 U/l Progesterona
Mujeres variable
segn ciclo
menstrual Mujeres
postmenopusicas >
30 U/l
GH < 10 mU/l Testosterona Variable segn
edad
Prolactina Mujeres 60 - 500 mU/l Cortisol 8 hs: 5 - 25 g%
Varones 60 - 360 mU/l 16 hs 3 15 g%
20 hs: < 50%
valor de las 8hs
Insulina < 30 U/l Aldosterona 3-10 mg%
MARCADORES TUMORALES TUMOR

-fetoprotena < 10 Clulas germinales y Hepatoma
CA125 ng/ml
< 35 U/ml Ovario
CA15-3 < 28 U/ml Carcinoma mamario
CA19-9 < 37 U/ml Pncreas y gastrointestinal
CEA (antgeno carcionoembrionario) < 2,5 Colorrectal
PSA (antgeno prosttico especfico) ng/ml
< 2 ng/ml Prstata
Fosfatasa cida prosttica <2-4 Prstata
hCG g/l Clulas germinales y coriocarcinoma
Paraprotenas Mieloma
ORINA
La orina es el producto de excrecin del rin y el lquido orgnico por el que se
excretan la mayora de los metabolitos hidrosolubles del organismo.
El proceso de formacin de orina comienza con la ultrafiltracin de la sangre a nivel
del glomrulo renal, contina en el sistema tubular renal donde se realizan procesos de
secrecin y reabsorcin de agua y solutos y culmina con la excrecin. A travs de este
proceso, los riones conservan en equilibrio el volumen, composicin y estado cido-base
de los lquidos corporales, que adems estn sujetos al ingreso diettico de solutos
(incluyendo frmacos y txicos) y agua y a la velocidad y tipo de transformacin
metablica de glcidos, lpidos, aminocidos y cidos nucleicos tanto endgenos como
exgenos.
La obtencin de una orina dentro de parmetros normales implica un correcto
funcionamiento del rin y una relacin equilibrada entre este rgano y los distintos
rganos de la economa.
La orina normal est compuesta por:
agua (90%)
compuestos inorgnicos:
o cationes inorgnicos: Na+, K+, Ca2+, Mg2+, NH4+, trazas de Fe, Zn, Cu.
o aniones inorgnicos: Cl-, fosfatos, sulfatos, trazas de nitratos, bicarbonato, etc.
compuestos orgnicos:
o Nitrogenados: los principales son urea, creatinina, cido rico, creatina,
aminocidos y pptidos.
o No nitrogenados: estn en mucha menor cantidad e incluyen trazas de cido
glucurnico, cido ctrico, oxalatos, metabolitos de hormonas esteroideas. En muy
pequea concentracin hay tambin glucosa, colesterol y cuerpos cetnicos.
Es importante remarcar que mediante el anlisis de orina pueden obtenerse datos
referentes a la funcin renal, a lesiones del parnquima y vas urinarias y, adems, se
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podr rescatar informacin sobre el funcionamiento de vas metablicas variadas y la
capacidad funcional de varios rganos, mediante la determinacin de distintos metabolitos
urinarios. El examen urinario de rutina aporta datos que deben asociarse al contexto
clnico del paciente para que brinde una apreciacin diagnstica.
ANLISIS DE ORINA COMPLETO

El anlisis completo de orina es una tcnica simple cuyo objeto es demostrar la
presencia de algunos componentes de importancia diagnstica. La prctica mdica diaria
dispone as de una estrategia diagnstica de extrema utilidad. Adems, fuera de los
procedimientos de rutina, existen determinaciones ms complejas para analizar la
presencia y concentracin de variados tipos de compuestos.
La recoleccin de la muestra es muy importante, determina la fidelidad de los
resultados y su correcta interpretacin. Se debe realizar en un recipiente limpio (de vidrio
o plstico), que no contenga restos de detergentes, grasas o agua oxigenada. No es
necesario que sea estril. Es recomendable una exhaustiva higiene y enjuague de las
manos y genitales. Se debe desechar los primeros mililitros de orina y recoger el chorro
medio de la miccin. Habitualmente, el anlisis de orina completo se efecta sobre la
primera orina de la maana (de 3 hs. de retencin mnima). Algunos anlisis especficos
requieren la recoleccin durante 24 hs (orina de 24 hs.). En este caso, es importante
recomendar que una vez obtenida la muestra, se la debe conservar en lugar fresco y al
abrigo de la luz solar. Si se debe realizar un cultivo bacteriano de esa muestra
(urocultivo), el frasco debe estar estril.
El examen de rutina incluye 3 partes
1. examen fsico
2. examen qumico
3. examen microscpico
1) El examen FISICO: comprende la descripcin del color, aspecto y olor, as
como la determinacin de volumen, densidad y pH.
Aspecto, color y olor: se realiza por observacin directa de la orina en un
tubo limpio de vidrio transparente. Normalmente, la orina posee:
Aspecto: lmpido
Color: amarillo mbar
Olor: sui generis
Espuma: blanca, no persistente Pueden presentarse anomalas:
Aspecto turbio: debido a proteinuria, bacteriuria, precipitacin de sales
(fosfatos amnicos en orinas alcalinas o uratos en orinas cidas.
Color: rojizo: por hematuria, hemoglobinuria, mioglobinuria, ingesta de
remolacha, presencia de cristales de uratos amorfos (no patolgico)
amarillo intenso, verde oscuro hasta amarronado: bilirrubina
caoba: pigmentos biliares o porfirias
pardo oscuro, negruzco: alcaptonuria
anaranjado: estado febril, tratamiento con rifampicina
Aspecto opalescente y color blanco amarillento: pus, infeccin urinaria
Olor: dulce, a frutas o cetnico: cuerpos cetnicos, glucosuria
fecaloide: procesos infecciosos
Espuma persistente: proteinuria, resto de detergente en el frasco de muestra
o el tubo
Volumen: se determina midindolo en una probeta graduada, e indicando el
perodo de tiempo en que se recolect la muestra. La diuresis normal es de 1500 ml/24 h.
Debido a que la cantidad de lquido que maneja el rin es normalmente muy variable,
dicha cifra puede variar en ms o en menos.
El volumen urinario est influenciado por la ingesta hdrica, prdidas por
11
transpiracin, vmitos o diarrea, emocin, fro/calor, hormonas (aldosterona, antidiurtica),
iones (sodio principalmente), ingesta de metilxantinas (cafena, teobromina), alcohol,
diurticos, estados patolgicos como diabetes, etc.
Si el volumen urinario diario es menor de 400 ml/24 h se define el estado de
oliguria, llegando a anuria cuando se anula la diuresis (pensar en situacin obstructiva). El
aumento del volumen de 24 h se define como poliuria, establecindose el lmite en 3 litros,
siendo este un valor arbitrario ya que es ms difcil establecer un valor de cota de este
estado.
El aumento de frecuencia de las micciones (polaquiuria) suele asociarse con
trastornos de la vejiga urinaria.
En la nicturia, la mayor cantidad de orina se excreta durante la noche.
Densidad: en condiciones normales, la densidad urinaria tiene un valor entre
1015 y 1025 g/l. Este parmetro hoy en da forma parte de las determinaciones realizadas
utilizando las tirillas reactivas (ver ms abajo).
La densidad urinaria aporta informacin sobre la funcin renal de concentracin-
dilucin de la orina. Como resultado se pueden obtener orinas de tonicidad (concentracin
de solutos) variada, con el objetivo de conservar el equilibrio del agua corporal.
Orinas muy concentradas (hipertnicas con respecto al plasma) aparecen cuando
el rin tiende a conservar agua por disminucin del aporte hdrico, estados febriles,
prdidas gastrointestinales, diabetes sacarina.
El uso de diurticos, disminucin, ausencia o falta de accin de la hormona
antidiurtica, mala nutricin proteica y diabetes inspida son factores que resultan en la
formacin de orinas diluidas (hipotnicas con respecto al plasma).
pH: el rin es uno de los rganos que junto con el pulmn interviene en la
regulacin de la concentracin de H+ en el lquido extracelular y lo hace
fundamentalmente regulando la concentracin de HCO -3 plasmtico. Esta funcin se
ejerce a travs de la recuperacin del bicarbonato filtrado, produccin de nuevo
bicarbonato, excrecin de NH4+, H2PO4-. En condiciones patolgicas adquiere importancia
la excrecin de cuerpos cetnicos y otros cidos orgnicos.
La excrecin normal de H+ le da caractersticas cidas, por lo que el rango normal
de pH urinario oscila entre 5 y 6. El pH es una de las determinaciones realizables
utilizando las tirillas reactivas (ver ms abajo). Dietas enriquecidas en el consumo de
frutas y verduras dan orinas ligeramente alcalinas.
La ingesta abundante de carnes da lugar a orinas cidas. En casos patolgicos, se
pueden detectar aumentos o disminuciones del pH. La reaccin cida es causada por
fiebre, acidosis metablica o cetoacidosis diabtica. El aumento del pH urinario suele
asociarse con dietas alcalinas, estado post-prandial, vmitos, infeccin urinaria, alcalosis
metablica.
2) el Examen QUMICO: rutinariamente se analiza la presencia de protenas,

hemoglobina, glucosa, cuerpos cetnicos, sales biliares y bilirrubina. Todas estas pruebas
estn incluidas en las tirillas reactivas y normalmente la reaccin debe ser negativa. En
caso de observarse reaccin positiva, se informa con una a cuatro cruces (+ a ++++),
segn la intensidad del color desarrollado. Cabe destacar que esta tcnica aporta
resultados semicuantitativos, debindose procesar la muestra por mtodos de tipo
cuantitativo si se desea establecer la concentracin exacta de tales sustancias.
Tirillas reactivas
En el laboratorio de anlisis clnicos es corriente el uso de tiras reactivas para
investigar la presencia de varios elementos qumicos en la orina.
Las tiras reactivas de orina consisten en unas pequeas cintas de plstico rgido a
las que van pegados unos cuadraditos impregnados de reactivos, que son diferentes
12
dependiendo de lo que se quiera analizar. Si el compuesto que se quiere analizar se
encuentra en la muestra, se pone en contacto con los reactivos presentes en el
cuadradito, produciendo una reaccin de color fcilmente observable. Adems de ser
positivo (cambio de color) o negativo (sin cambio), las diferentes intensidades de color
darn idea de la cantidad de compuesto analizado presente en la muestra, permitiendo
una semicuantificacin de dicho compuesto. La semicuantificacin se logra por
comparacin del color desarrollado por la muestra con una curva de calibracin que
provee el fabricante como 5-6 recuadros con tonalidades relacionadas con la
concentracin correspondiente a cada metabolito que se quiere analizar. Si el anlisis de
un metabolito da positivo con las tirillas reactivas, su cuantificacin exacta deber
realizarse con otro mtodo qumico, ms especfico y sensible.
De esta manera se puede determinar: densidad, pH, leucocitos, nitritos, protenas,
glucosa, cuerpos cetnicos, urobilingenos, bilirrubina, hemoglobina y sangre.
La ventaja de este mtodo es que es muy rpido y muy especfico ya que cada tira
tiene diversos segmentos en los cules est el reactivo apropiado para cada
determinacin.
Descripcin de las determinaciones incluidas en las tirillas reactivas

pH: la tirilla contiene una mezcla de indicadores de pH que en contacto con
la orina dan una ntida graduacin de colores, desde el naranja (pH 5) al azul (pH 9).
Resultado normal: 5 - 6 en orina fresca.
Leucocitos: los granulocitos (un tipo de leucocitos) poseen la enzima
esterasa, que reacciona con los reactivos de la tirilla dando un producto de color violeta.
Resultado normal: negativo (no existe lmite definido entre la excrecin fisiolgica y
patolgicamente elevada de leucocitos. Mayormente se indica 10 a 20 leucocitos/l como
sntoma sospechoso y ms de 20 como hallazgo patolgico).
Nitritos: se utiliza una amina que en medio cido reacciona con los nitritos
dando una sal de diazonio, que reacciona con un cromgeno para formar color rosado.
Resultado normal: negativo.
Protenas: la tirilla contiene un indicador que en presencia de protenas vira
del amarillo al verde. Resultado normal: negativo (hasta 30 mg% en orina matinal, la tirilla
no detecta esta cantidad).
La excrecin de protenas por orina debe ser menor a 150 mg/da. Este valor da
una reaccin negativa con los mtodos usuales de determinacin cualitativa. Si la
reaccin da positiva, se debe determinar la concentracin en una muestra de orina de 24
hs con un mtodo qumico.
La proteinuria suele deberse a las siguientes causas:
- Aumento de protenas plasmticas normales y anormales.
- Aumento de permeabilidad glomerular
- Disminucin de la reabsorcin de polipptidos y protenas de bajo PM que
normalmente filtran por el glomrulo.
- Alteraciones hemodinmicas, entre las que cabe destacar el ejercicio, cambios
de posicin de decbito a erecta, fiebre, etc.
La proteinuria no siempre se acompaa de lesiones en el parnquima renal. Sin
embargo la proteinuria persistente que supera los 750 mg/24 hs es un indicador de lesin
en el parnquima renal.
La llamada proteinuria de Bence-Jones es un ejemplo tpico de proteinuria por
rebasamiento. La misma resulta de altas concentraciones plasmticas de cadenas
livianas de IgA, IgG e IgD observadas en mielomas (neoplasia de los plasmocitos) y
linfomas.
- Glucosa: La glucosa, por la glucosa oxidasa presente en la tira, se oxida a
gluconolactona y perxido de hidrgeno. El agua oxigenada, en presencia de la
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peroxidasa tambin presente en la tirilla, oxida a su vez un indicador. La cantidad de
producto formado da una gama de color entre amarillo al verde.
Resultado normal: negativo (glucosuria fisiolgica hasta 15 mg% en orina matinal,
la tirilla no la detecta).
La glucosa filtrada en el glomrulo se reabsorbe casi completamente en el tbulo
contorneado proximal. Este proceso es realizado por un transportador de membrana que
se satura con concentraciones de glucosa superiores a 180 mg%; en estas circunstancias
la glucosa no reabsorbida permanece en lquido luminal y se excreta por orina. La causa
ms comn de glucosuria es la diabetes mellitus no controlada.
Dado que la glucemia normal est comprendida entre 70 y 110 mg%, la presencia
de glucosuria es indicativa de hiperglucemia en caso de indemnidad tubular. Existen un
nmero de entidades caracterizadas por anomalas a nivel tubular que presentan intensa
glucosuria sin la coexistencia de hiperglucemia.
- Cuerpos cetnicos: slo el acetoacetato y la acetona reaccionan con
nitroprusiato de sodio y glicina en medio alcalino dando un complejo de color violeta. El -
hidroxibutirato no reacciona. Resultado normal: negativo (hasta 5 mg% en orina matinal,
la tirilla no los detecta).
Los cuerpos cetnicos se forman cuando el aporte de cidos grasos al hgado
supera su capacidad de utilizacin del acetil-CoA. Se vierten entonces a sangre desde
donde son captados por rganos aerbicos para su oxidacin y obtencin de energa. La
acetona se elimina por el aliento, mientras que el acetoacetato y el -hidroxibutirato lo
hacen por orina. Su eliminacin slo ocurre en cantidades apreciables cuando su sntesis
es desmedida, como ocurre en la diabetes mellitus descompensada, en el ayuno
prolongado y procesos febriles. En estos casos se detecta cetonemia (presencia en
sangre en cantidades elevadas) y cetonuria (presencia en orina).
- Urobilingeno: el urobilingeno reacciona en medio cido con una sal de
diazonio, dando un compuesto rojo. Resultado normal: hasta 1 mg%.
- Bilirrubina: la bilirrubina reacciona con una sal de diazonio en medio cido,
dando un compuesto rosa violceo. Resultado normal: negativo.
La bilirrubina presente en orina es de tipo conjugada, forma hidrosoluble que se
filtra en el glomrulo renal, al que llega luego de pasar por la circulacin enteroheptica.
Est aumentada en casos de hepatitis, ictericia obstructiva o neoplasias de cabeza de
pncreas. La bilirrubina libre o no conjugada est ausente en la orina dado que es
hidrofbica, circula unida a la albmina y no filtra por el glomrulo renal.
- Sangre: la hemoglobina tiene actividad seudo-peroxidsica, por eso es capaz de
liberar O2 a partir del H2O2. En las tirillas reactivas se acopla esta produccin de oxgeno a
la oxidacin del indicador bencidina (forma oxidada azul verdoso). Resultado normal:
negativo (hasta 5 eritrocitos/l).
En situaciones especficas y obedeciendo a patologas diagnosticadas o

presuntivas puede determinarse la concentracin de ciertos componentes urinarios, como
o Electrolitos (Ionograma urinario): Na+, K+, Cl-, Ca2+, NH4+, HCO3- y HPO42-.
o no electrolitos: urea, creatinina, cido rico, hormonas y sus metabolitos,
enzimas, frmacos y sus metabolitos, txicos y sus metabolitos, etc.
- Urea: es la principal forma de excrecin del grupo amino de los aminocidos. La
misma se filtra libremente por el glomrulo y es parcialmente secretada y reabsorbida a
nivel de los tbulos. Su excrecin urinaria depende de las protenas de la dieta, por tal
motivo el aclaramiento renal de la misma no es una expresin fidedigna del
funcionamiento renal. Por ello, el clearance de urea no se usa para evaluar el
funcionamiento renal. Cabe acotar que la concentracin plasmtica de urea se elevar
recin cuando el deterioro renal afecte a ms del 50% del parnquima.
14
- Creatinina: resultado de la transformacin espontnea de la fosfocreatina
muscular. Este compuesto filtra libremente en glomrulo y prcticamente no es secretada
o reabsorbida a nivel de los tbulos. A diferencia de la urea, la excrecin de creatinina no
depende de la protena dietaria, encontrndose sujeta nicamente a la masa muscular.
Estas circunstancias hacen que el aclaramiento renal de creatinina (clearance) sea un
recurso clnico para el diagnstico y control evolutivo de la insuficiencia renal. Sumado a
esta caracterstica se asocia la buena relacin entre la disminucin del clearance de
creatinina y la elevacin de su concentracin en plasma.
- Acido rico: producto final del catabolismo de las bases pricas, excretado por
orina. Debido a que el pKa del N9 del cido rico es 5,5 y el del N1 es 10,3, a pH
plasmtico fisiolgico se encuentra en forma de urato monosdico. En orina, el estado
inico depender del pH: si el pH urinario es menor que 5,75, se encontrar
predominantemente como cido rico y si es mayor en forma de urato. El cido es soluble
hasta concentraciones de 6-7 mg%, precipitando en concentraciones mayores. En esa
situacin se puede precipitar en el parnquima renal o en las vas urinarias, llevando a
cambios histolgicos que conducen a nefropatas o a urolitiasis, respectivamente.
En ciertas alteraciones metablicas se incrementa la excrecin de productos

intermedios o alternativos de los metabolismos.
Ejemplos: - cido homogentsico urinario incrementado en la alcaptonuria (la orina
es marrn oscura debido a que este compuesto se oxida en presencia del oxgeno del
aire y se convierte en un pigmento de ese color)
- por disminucin de la actividad de las enzimas del ciclo de la urea se incrementa
la excrecin de los intermediarios o productos derivados (argininosuccinato, citrulina,
ornitina, cido ortico, etc.)
La concentracin de hormonas, sus metabolitos y determinadas enzimas

pueden ser investigados en orina para evaluar la actividad de los rganos y tejidos de
sntesis. Como ejemplo se pueden citar a la aldosterona, cortisol, adrenalina,
noradrenalina, estrgenos totales, metabolitos como la tetrahidroaldosterona,
tetrahidrocortisol, 17-cetosteroides, 17-OH-esteroides, cido vainilln mandlico o enzimas
como la amilasa, fosfatasa alcalina y LDH, entre otras. Situaciones patolgicas como
algunas enfermedades glandulares, y no patolgicas como por ejemplo el embarazo,
provocarn modificaciones con respecto a los valores normales.
3) Examen MICROSCPICO (Sedimento urinario)

El examen del sedimento presente en una orina recin emitida o conservada
cuidadosamente puede constituirse en lo ms importante del anlisis de orina ya que
puede proveer datos precisos sobre la existencia de una enfermedad renal y sobre la
naturaleza y extensin de la lesin.
Para el anlisis del sedimento urinario, la orina previamente homogeneizada en
forma suave se pasa a un tubo cnico y se la centrifuga a baja velocidad, para evitar la
deformacin exagerada de los elementos a investigar. Luego se elimina el sobrenadante
por inversin del tubo, y se resuspende el precipitado en la pequea cantidad de orina
que queda en el tubo. Esta muestra se coloca entre porta y cubreobjetos limpios,
observando al microscopio. La observacin del sedimento debe ser hecha en lo posible
sobre la orina fresca, con no ms de 6 hs de emitida, con preferencia sobre la orina de la
maana que es ms concentrada. Es recomendable guardar la muestra en heladera si el
examen no se realiza en forma inmediata.
En el sedimento urinario podemos distinguir cualitativamente:
Componentes inorgnicos: cristales inorgnicos de diferentes tipos.
Componentes orgnicos: distintos tipos de clulas y cilindros, cristales
15
orgnicos y microorganismos.
SEDIMENTO URINARIO NORMAL

Elementos inorgnicos: el estudio detallado y minucioso de estos
elementos carece de valor. Excepto en circunstancias especiales, el hallazgo de cristales
en la orina tiene un valor clnico relativamente pequeo. Se trata de elementos que se
encuentran normalmente en solucin y que han precipitado ya sea por hallarse en gran
cantidad o ms frecuentemente por modificaciones de la reaccin y/o concentracin de la
orina, que pueden ser puramente fisiolgicos y dependientes de modificaciones de la
dieta.
nicamente tendr cierto valor cuando se observen en orinas recin emitidas de
enfermos calculosos.
Se describen brevemente los ms comunes, clasificndolos esquemticamente de
acuerdo a la reaccin de la orina en que con mayor frecuencia se encuentran.
Orinas cidas:
Cristales de cido rico: formas de huso y piedra de afilar, cuando se agrupan
estn como rosetas o estrellas. Son amarillos a pardo rojizos.
Se encuentran fisiolgicamente y estn aumentados en gota, estados febriles,
nefritis crnica, litiasis rica y procesos de intensa destruccin leucocitaria, por ejemplo
leucemia.
Cristales de oxalato de calcio: tambin se encuentran en orinas alcalinas. Forma de
sobres de carta. Son incoloros y brillantes.
Se encuentran fisiolgicamente y abundan en sujetos con litiasis clcicas renales y
en los vegetarianos, pues los tomates, espinacas y esprragos son ricos en cido oxlico.
Uratos amorfos: mezcla de urato de calcio, magnesio y potasio, que forman un
sedimento visible llamado polvo de ladrillo.
Son propios de los estados febriles, leucemia y cirrosis heptica.
Orinas alcalinas
Fosfatos amorfos: pueden precipitar formando un sedimento blanco visible.
Se encuentran fisiolgicamente y abundan en trastornos del metabolismo
fosfoclcico, como ocurre en osteopatas, hiperparatiroidismo y estado de alcalosis.
Fosfato de calcio: forma de estrellas o prismas largos, finos, agujas.
Fosfato amnico-magnsico (fosfato triple): Son incoloros y con forma de tapa de
atad. Se encuentran en grandes cantidades en cistitis crnicas, hipertrofia prosttica,
pielitis crnica y retencin vesical.
Elementos orgnicos: en general, en un sedimento normal lo nico que

aparece son clulas epiteliales, leucocitos y eritrocitos. Ocasionalmente, puede aparecer
algn cristal de sustancia orgnica, algn cilindro hialino, cilindroides de mucus o alguna
contaminacin (partculas de talco, gotas de grasa, fibras vegetales o levaduras y
bacterias por el estacionamiento de la orina).
Clulas epiteliales: son planas, grandes, con citoplasma transparente y con
ncleo bien definido. Las que provienen del epitelio de la pelvis renal, urter, vejiga o
vagina carecen de valor diagnstico.
Clulas renales: son algo ms grandes que un leucocito, frecuentemente
transformadas, de forma cbica, redondeada o cnica y con un ncleo vesiculoso y de
tamao relativamente grande. Abundan en las nefritis agudas o crnicas.
Leucocitos: su morfologa es muy variada. Es normal hallarlos hasta 3-5/campo de
observacin al microscopio. Se define como piocito a un conjunto de leucocitos formando
glbulos de membranas fusionadas. La leucocituria con piuria es indicador de infeccin
urinaria y es necesario efectuar un estudio bacteriolgico anterior al tratamiento con
16
antibiticos.
Hemates: es significativo si se encuentran hemates deformados, incluidos en
cilindros hemticos o en cantidad mayor de 5-6/campo.
Cilindros: representan un acmulo de sustancias proteicas, material aglutinado
que se expulsa a la orina y tiene el contorno de la luz de los tbulos renales. Los cilindros
se constituyen en las partes distales del nefrn (tbulo distal y los vasos colectores). Esta
localizacin se favorece por la reabsorcin de agua y la acidificacin de la orina en el
tbulo contorneado distal. Luego, son arrastrados hacia la va urinaria baja.
Hay diferentes tipos de cilindros, que son slo modificaciones de los hialinos, a los
que se agregan otros elementos. Slo la presencia de cilindros hialinos (hasta 1 por cada
10 campos) es fisiolgica.
Cilindros hialinos: son formaciones incoloras, homogneas, transparentes,
refringentes de lados paralelos, de extremidad redondeada (como dedo de guante) y de
tamao variable. Estn constituidos por protenas nicamente.
Pueden aparecer en baja cantidad por causas fisiolgicas como ejercicios
violentos. Pueden aparecer por causas patolgicas como cuadros febriles prolongados,
glomerulonefritis y nefritis crnica.
Cilindros granulosos: son de significacin patolgica, apareciendo generalmente en
las nefritis agudas y crnicas. Poseen las mismas caractersticas del cilindro hialino pero
estn impregnados de granulaciones finas o gruesas de material albuminosos proveniente
de la destruccin de clulas tubulares.
Cilindros creos: constituyen una etapa posterior a los cilindros granulosos, tiene el
aspecto caracterstico de la cera y un brillo mate como la parafina. Son siempre un signo
de lesin renal grave, caractersticos de la amiloidosis renal y glomerulonefritis crnica.
Cilindros celulares: poseen elementos celulares incluidos en el estroma proteico.
Estos son fciles de identificar puesto que pueden contener clulas epiteliales, hemates,
leucocitos, que les confiere su identidad. Abundan en la nefritis y pielonefritis.
Cristales orgnicos: su presencia es siempre patolgica.
Cristales de cistina: son incoloros, brillantes, de forma hexagonal, gruesos. La
cistina es un producto intermediario del metabolismo proteico. Aparece en el sedimento
en los casos de cistinuria. Los trastornos del metabolismo proteico pueden dar origen a la
formacin de clculos renales, debido a la poca solubilidad de la cistina.
Cristales de leucina y tirosina: Los cristales de leucina se presentan como masas
esfricas de aspecto oleoso, como rueda de carro. La tirosina cristaliza en agujas finas
agrupadas en manojos. En general indican procesos graves de destruccin celular como
la cirrosis heptica, intoxicacin por fsforo, fiebre tifoidea y leucemia.
Microorganismos: frecuentemente aparecen por contaminaciones exteriores. Son
de importancia diagnstica en procesos infecciosos como cistitis. Para diagnosticar una
infeccin urinaria se debe hacer un examen bacteriolgico de la orina (urocultivo), que
consiste en recoger orina en un frasco estril y luego se siembra una alcuota en medios
de cultivo apropiados.
En el sedimento urinario se pueden encontrar hongos del gnero Cndida,
principalmente en mujeres. Son de origen vaginal, es difcil distinguirlos de los hemates y
para ello se hacen pruebas diferenciales.
Tambin se pueden encontrar parsitos como Trichomonas, de origen uretral o
vaginal, frecuentemente en orina de mujeres. Se distingue por el movimiento de los
flagelos que los caracteriza.
17
18
ELISA
El enzimoinmunoanlisis es una de las tcnicas inmunoqumicas ms importantes

desarrollada en los ltimos aos. Los inmunoensayos sirven para detectar y cuantificar
antgenos o anticuerpos y para estudiar la estructura de los antgenos. Si el ensayo es
adecuado son rpidos y fciles rindiendo informacin que sera difcil obtener utilizando
otras tcnicas.
El enzimoinmunoanlisis es un mtodo objetivo y automatizable; a diferencia del
RIA est exento de legislacin restrictiva y los reactivos usados se conservan durante un
tiempo relativamente prolongado. Estas consideraciones unidas al hecho de que slo se
necesita un equipo sencillo y econmico, han llevado al desarrollo reciente de numerosos
enzimoinmunoanlisis, muchos de los cuales son especialmente adecuados para su
utilizacin en laboratorios pequeos y en pases en desarrollo.
Nos ocuparemos ahora de un tipo de enzimoinmunoanlisis conocido como
anlisis por enzimas fijadas a inmunoadsorbentes (ELISA). Esta tcnica presenta
como requisito que los anticuerpos o los antgenos se puedan ligar a una enzima y que
este complejo retenga tanto la actividad inmunolgica como la enzimtica.
En estos ensayos, el antgeno o el anticuerpo se unen usualmente a un soporte de
fase slida para facilitar la separacin de los reactivos libres y combinados. Se ha hallado
que antgenos y anticuerpos se pueden unir covalentemente al material particulado, como
celulosa, poliacrilamida, y que tambin se puede obtener una adsorcin pasiva
satisfactoria a tubos, perlas, discos o microplacas de nylon, poliestireno, polivinilo o
polipropileno. Como ya se ha mencionado una parte esencial del ELISA es la conjugacin
del anticuerpo (o antgeno) con una enzima. Es necesario que la enzima tenga actividad
elevada, sea econmica, fcil de obtener en forma pura, y que posea una reaccin con el
sustrato fcilmente medible. Las enzimas consideradas hasta ahora ms satisfactorias
son la peroxidasa del rbano picante, la glucosa oxidasa, la -galactosidasa y la fosfatasa
alcalina. Estas son fijadas generalmente a anticuerpos o antgenos por medio de
glutaraldehdo o periodato. Los conjugados as obtenidos han demostrado ser estables
durante muchos meses, incluso aos.
La eleccin del sustrato es crtica en el ELISA. Los sustratos deben ser estables y
solubles antes y despus de la reaccin enzimtica. Los sustratos cromognicos deben
ser incoloros inicialmente y fuertemente coloreados despus de la degradacin. Los
sustratos fluorognicos, que producen un compuesto fluorescente, pueden ser ventajosos
para anlisis de alta sensibilidad.
ELISA INDIRECTO
Si bien existen muchas formas de llevar a cabo un ELISA y se los puede clasificar
segn varios criterios diferentes, describiremos el mtodo ms comnmente utilizado,
denominado Elisa Indirecto. Este mtodo es ampliamente utilizado para la determinacin
de anticuerpos (Ac). La tcnica es la siguiente:
1) El antgeno (Ag) correspondiente se adsorbe a las placas de poliestireno, y luego
se lavan.
2) Las muestras a ensayar se incuban en las concavidades y las placas se lavan
nuevamente; el anticuerpo presente reacciona con el antgeno inmovilizado en la
superficie de las concavidades.
3) El conjugado de antiinmunoglobulinas humana marcado con enzima se incuba
en las concavidades; ste reacciona con cualquier anticuerpo "capturado en el paso
anterior. El exceso de reactivo se lava.
4) Se agrega el sustrato enzimtico y las placas se incuban; la velocidad de la
degradacin se indica por el cambio de color, que es proporcional a la concentracin de
anticuerpo de las muestras del paso (2).
19
5) Se detiene la reaccin y la intensidad del color se estima visualmente o se mide
en un espectrofotmetro.
20

Practico 17

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DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA HUMANA

MATERIA QUMICA BIOLGICA - CICLO LECTIVO 2016

Laboratorio de Bioqumica Clnica

La bioqumica clnica es la rama del laboratorio en la que se usan mtodos

Si no se agrega anticoagulantes a la sangre, y se deja reposar el tubo durante unos

El plasma y el suero tienen aproximadamente la siguiente composicin qumica:

Todas estas determinaciones se realizan con sangre entera venosa.

El nmero de eritrocitos y el hematocrito pueden variar fisiolgicamente por el

Valores de referencia Hemograma

ANLISIS DE GASES EN SANGRE Y SATURACIN DE OXGENO

Valores de referencia Estado cido-Base

Valores de referencia Ionograma

Bilirrubina total 0,8 - 1 mg% Metabolismo del hemo Funcin

cido lctico 4,5 - 17 mg% Metabolismo en msculo-

Hemoglobina 4 - 7% de la hemoglobina total Metabolismo de glcidos

Cuerpos cetnicos Negativo Metabolismo de lpidos y glcidos

Lipasa 0 - 200 Funcin pancretica- pancreatitis

Insulina < 30 U/l Aldosterona 3-10 mg%

MARCADORES TUMORALES TUMOR

ANLISIS DE ORINA COMPLETO

2) el Examen QUMICO: rutinariamente se analiza la presencia de protenas,

Descripcin de las determinaciones incluidas en las tirillas reactivas

En situaciones especficas y obedeciendo a patologas diagnosticadas o

En ciertas alteraciones metablicas se incrementa la excrecin de productos

La concentracin de hormonas, sus metabolitos y determinadas enzimas

3) Examen MICROSCPICO (Sedimento urinario)

SEDIMENTO URINARIO NORMAL

Elementos orgnicos: en general, en un sedimento normal lo nico que

El enzimoinmunoanlisis es una de las tcnicas inmunoqumicas ms importantes

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