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Puntos ms importantes:

La replicacin del ADN es semiconservativa. Cada


cadena de la doble hlice funciona como molde para la
sntesis de una nueva cadena complementaria.

Enzimas llamadas ADN polimerasas producen el


ADN nuevo, estas requieren de un molde y de
un cebador (iniciador), y sintetizan ADN en direccin 5' a
3'.

Durante la replicacin del ADN, una de las cadenas


nuevas (la cadena lder) se produce como un fragmento
continuo. La otra (la cadena rezagada) se hace en
pequeos fragmentos.

La replicacin requiere de otras enzimas adems de


ADN polimerasa, como la ADN primasa, la ADN
helicasa, la ADN ligasa y la topoisomerasa.

Introduccin
La replicacin del ADN, o copiado del ADN de la clula,
no es una tarea sencilla! Hay alrededor de 6.56.56,
point, 5 \text{miles}milesm, i, l, e, s \text{de}ded,
e \text{millones}millonesm, i, l, l, o, n, e, s de pares
de bases en el ADN de tu genoma, todos los cuales deben
ser copiados con exactitud cuando cualquiera de tus
billones de clulas se divide^11start superscript, 1, end
superscript.
Los mecanismos bsicos de la replicacin del ADN son
similares entre los organismos. En este artculo, nos
centraremos en cmo ocurre la replicacin del ADN en la
bacteria E. coli, pero los mecanismos de replicacin son
similares en los seres humanos y otros eucariontes.

Revisemos las protenas y enzimas que realizan la


replicacin y veamos cmo trabajan en conjunto para
asegurar la replicacin correcta y completa del ADN.

La idea bsica
La replicacin del ADN es semiconservativa, lo que
significa que cada cadena de la doble hlice del ADN
funciona como molde para la sntesis de una nueva
cadena complementaria.

Este proceso nos lleva de una molcula de inicio a dos


molculas "hijas", en las que cada nueva doble hlice
contiene una cadena nueva y una vieja.
En parte, eso es todo lo que sucede en la replicacin de
ADN! Pero en realidad, lo ms interesante de este proceso
es cmo lo realiza una clula.

Las clulas necesitan copiar su ADN muy rpidamente y


con muy pocos errores (o se arriesgan a problemas como
el cncer). Para ello, utilizan una variedad de enzimas y
protenas que trabajan en conjunto para asegurar que la
replicacin del ADN se lleva a cabo sin incidentes y con
precisin.

La ADN polimerasa
Una de las molculas claves en la replicacin del ADN es
la enzima ADN polimerasa. Las ADN polimerasas son
responsables de la sntesis de ADN: aaden nucletidos
uno por uno a la cadena creciente de ADN, incorporando
solo aquellos que sean complementarios al molde.
Estas son algunas caractersticas clave de las ADN
polimerasas:

Siempre necesitan un molde.

Solo pueden agregar nucletidos al extremo 3' de la


cadena de ADN.

No pueden comenzar una cadena de ADN desde


cero, sino que requieren de una cadena preexistente o
segmento corto de nucletidos llamado cebador.

Pueden corregir, o revisar su trabajo, eliminando la


gran mayora de nucletidos "equivocados" que se
agregan accidentalmente a la cadena.

La adicin de nucletidos requiere energa. Esta energa


proviene de los nucletidos mismos, que tienen tres
fosfatos unidos a ellos (muy similar a la molcula
portadora de energa ATP). Cuando se rompe el enlace
entre los fosfatos, la energa liberada se utiliza para
formar un enlace entre el nucletido entrante y la cadena
creciente.
[Ver la reaccin de polimerizacin]
DNA polymerization reaction

The diagram shows a template DNA strand paired up with


a new DNA strand that is currently being synthesized. The
bases of the new strand and the template form
complementary pairs held together by hydrogen bonds.
The two strands are antiparallel. Their sequences are:

New strand: 5' ACTG... 3' Template strand: 3' TGACAT 5'

At the end of the new strand, a 3' hydroxyl group is


exposed on the final nucleotide of the strand. This
hydroxyl group will undergo a chemical reaction with a
phosphate group in an incoming nucleotide, resulting in
the formation of a new bond (and the addition of the
nucleotide to the end of the chain). Specifically, the next
nucleotide exposed on the template is an A. The
nucleotide complementary to an A is a T, so when a T
pairs with the A on the template strand, it will undergo a
reaction with the 3' hydroxyl at the end of the chain and
be added on.

The nucleotide consists of a sugar with a chain of three


phosphates, a base, and a hydroxyl attached. The 3'
hydroxyl exposed at the end of the growing strand will
form a bond to the innermost phosphate in the chain of
the new nucleotide, a reaction that release a two-
phosphate unit called pyrophosphate. The pyrophosphate
will be further cleaved into two individual phosphate ions.
The result of the reaction is the addition of the T
nucleotide to the growing strand of DNA. The 3' hydroxyl
of the T nucleotide is now exposed at the end of the chain.
This hydroxyl can participate in a new reaction with the
phosphate of the next nucleotide to be added to the
chain.

En procariontes como E. coli, participan principalmente


dos ADN polimerasas en la replicacin del ADN: ADN pol
III (la principal fabricante de ADN) y ADN pol I, que
desempea un crucial papel auxiliar que analizaremos
ms adelante.

El comienzo de la replicacin de
ADN
Cmo saben las ADN polimerasas y otros factores dnde
comenzar la replicacin? La replicacin siempre comienza
en lugares especficos del ADN, que se llaman orgenes
de replicacin y se reconocen por su secuencia.

E. coli, como la mayora de las bacterias, tiene solo un


origen de replicacin en su cromosoma. El origen es de
aproximadamente 245245245 pares de bases de largo y
tiene en su mayora pares A/T (que se mantienen unidos
por menos puentes de hidrgeno que los pares de bases
G/C), por lo que es ms fcil separar las cadenas de ADN.

Protenas especializadas reconocen el origen, se unen a


este sitio y abren el ADN. Conforme se abre el ADN, se
forman dos estructuras en forma de Y
llamadas horquillas de replicacin, en conjunto
conforman lo que se llama burbuja de replicacin. Las
horquillas de replicacin se mueven en direcciones
opuestas a medida que avanza la replicacin.

Cmo es que avanza realmente la replicacin en las


horquillas? La helicasa es la primera enzima de la
replicacin que se carga en el origen de replicacin^33
start superscript, 3, end superscript. El trabajo de la
helicasa es permitir el avance de las horquillas de
replicacin "desenrollando" el ADN (rompiendo los
puentes de hidrgeno entre los pares de bases
nitrogenadas).

Protenas llamadas protenas de unin a cadenas


sencillas cubren las cadenas de ADN separadas cerca de
la horquilla de replicacin, impidindoles volver a unirse
en una doble hlice.

Los cebadores y la primasa


Las ADN polimerasas solo pueden agregar nucletidos en
el extremo 3' de una cadena de ADN existente, ya que
utilizan el grupo -OH libre en el extremo 3' como un
"gancho" y aaden un nucletido a este grupo en la
reaccin de polimerizacin. Entonces, cmo es que la
ADN polimerasa aade el primer nucletido en una
horquilla de replicacin nueva?

Por s sola, no puede! El problema se soluciona con la


ayuda de una enzima llamada primasa. La primasa hace
un cebador de ARN, un corto segmento de cido nucleico
complementario al molde, que proporciona un extremo 3'
con el que la ADN polimerasa puede trabajar. Un cebador
tpico es de cinco a diez nucletidos de largo. El
cebador ceba la ADN polimerasa, es decir, le proporciona
lo que necesita para funcionar.

Una vez que el cebador de ARN est en su sitio, la ADN


polimerasa lo "extiende", aadiendo nucletidos uno a
uno para hacer una cadena nueva de ADN
complementaria a la cadena molde.

Cadena lder y cadena rezagada


En E. coli, la ADN polimerasa que se encarga de la mayor
parte de la sntesis es la ADN polimerasa III. Hay dos
molculas de ADN polimerasa III en una horquilla de
replicacin, cada una de las cuales trabaja duro en una de
las dos nuevas cadenas de ADN.

Las ADN polimerasas solo pueden hacer ADN en direccin


5' a 3', esto plantea un problema durante la replicacin.
Una doble hlice de ADN siempre es antiparalela; en otras
palabras, una cadena corre en direccin 5' a 3', mientras
que la otra corre de 3' a 5'. Esto hace necesario que las
dos cadenas nuevas, que tambin son antiparalelas a sus
moldes, se produzcan de formas ligeramente diferentes.

Una cadena nueva, que corre de 5' a 3' hacia la horquilla


de replicacin, es fcil. Esta cadena se produce
continuamente porque la ADN polimerasa se mueve en la
misma direccin que la horquilla de replicacin. Esta
cadena sintetizada continuamente se llama cadena
lder.
La otra cadena nueva, que corre de 5' a 3' alejndose de
la horquilla, es ms difcil. Esta cadena se produce en
fragmentos porque, conforme avanza la horquilla, la ADN
polimerasa (que se aleja de la horquilla) debe separarse y
volver a unirse al ADN recin expuesto. Esta cadena ms
difcil, que se produce en fragmentos, se llama cadena
rezagada.

Los pequeos fragmentos se llaman fragmentos de


Okazaki, en honor al cientfico japons que los descubri.
La cadena lder puede extenderse a partir de un solo
cebador, mientras que la cadena rezagada necesita un
cebador nuevo para cada uno de los fragmentos cortos de
Okazaki.

El equipo de mantenimiento y
limpieza
Adems de las principales protenas mencionadas
anteriormente, se necesitan algunas otras protenas y
enzimas para mantener la replicacin del ADN
funcionando sin problemas. Una es una protena
llamada pinza deslizante, que mantiene a las molculas
de ADN polimerasa III en su lugar al sintetizar ADN. La
pinza deslizante es una protena en forma de anillo e
impide que la ADN polimerasa de la cadena rezagada se
vaya flotando cuando vuelve a comenzar en un nuevo
fragmento Okazaki^44start superscript, 4, end
superscript.

La topoisomerasa tambin juega un papel importante


de mantenimiento durante la replicacin del ADN. Esta
enzima impide que la doble hlice de ADN que est por
delante de la horquilla de replicacin se enrolle
demasiado cuando se abre el ADN. Acta haciendo mellas
temporales en la hlice para liberar la tensin, las cuales
vuelve a sellar para evitar daos permanentes.

Por ltimo, se debe hacer un poco de trabajo de limpieza


si queremos que el ADN no contenga ARN ni brechas.
La ADN polimerasa I, la otra polimerasa que participa
en la replicacin, elimina los cebadores de ARN y los
sustituye por ADN. La enzima ADN ligasa sella las
brechas que permanecen despus de reemplazar los
cebadores.

Resumen de la replicacin del


ADN en E. coli
Veamos el panorama para conocer cmo las enzimas y
protenas que participan en la replicacin trabajan juntas
para sintetizar ADN nuevo.

La helicasa abre el ADN en la horquilla de


replicacin.

Las protenas de unin a cadenas


sencillas cubren el ADN alrededor de la horquilla de
replicacin para evitar que el ADN se vuelva a enrollar.

La topoisomerasa trabaja por delante de la


horquilla de replicacin para evitar el superenrollamiento.

La primasa sintetiza cebadores de ARN


complementarios a la cadena de ADN.
La ADN polimerasa III extiende los cebadores,
agregando sobre el extremo 3', para hacer la mayor parte
del ADN nuevo.

Los cebadores de ARN se eliminan y la ADN


polimerasa I los sustituyen por ADN.

La ADN ligasa sella las brechas entre fragmentos de


ADN.

La replicacin del ADN en


eucariontes
Los fundamentos de la replicacin del ADN son similares
entre bacterias y eucariontes, como los seres humanos,
pero tambin hay algunas diferencias:

Los eucariontes tienen varios cromosomas lineales,


cada uno con mltiples orgenes de replicacin. Los seres
humanos pueden tener
hasta100100100 000000000 orgenes de
replicacin^55start superscript, 5, end superscript!

La mayora de las enzimas de E. coli tienen


contrapartes en la replicacin eucarionte del ADN, pero
una nica enzima de E. coli puede ser representada por
varias enzimas en eucariontes. Por ejemplo, hay cinco
ADN polimerasas humanas con papeles importantes en la
replicacin^55start superscript, 5, end superscript.
La mayoras de los cromosomas eucariontes son
lineales. Debido a la forma en que se hace la cadena
rezagada, en cada ronda de replicacin se pierde un poco
de ADN en los extremos de los cromosomas lineales
(los telmeros).