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Microbiologia

FFI0751

Profa. Dra. Ilana L. B. C. Camargo


Laboratrio de Epidemiologia e Microbiologia Molecular (LEMiMo)
Grupo de Cristalografia

Profa. Dra. Nelma Regina Seginini Bossolan


Grupo de Biofsica Molecular Sergio Mascarenhas
Microbiologia
FFI0751

Profa. Dra. Ilana L. B. C. Camargo


LEMiMo Campus II Piso 1, sala 106
Ramal: 738654
ilanacamargo@ifsc.usp.br

http://biologia.ifsc.usp.br/
Microbiologia

Microbiologia como cincia;


Impactos sobre o homem;
Tipos de organismos estudados;

Aula Parte I
Clulas procariticas e eucariticas;

Aula Parte II
Microscopia de microrganismos
Microbiologia
a cincia que estuda os microrganismos um grande e diverso grupo de
organismos microscpicos- que podem ser encontrados como clulas
nicas ou grupamentos celulares.

Diferente dos organismos macroscpicos, os microrganismos so em geral


capazes de realizar seus processos vitais de crescimento, gerao de
energia e reproduo, sem depender de outras clulas.

http://www.ufrgs.br/alimentus/pao/fermentacao/fer_crescimento01.htm
Microbiologia como cincia
O que estuda?

Como cincia biolgica bsica: microrganismos


como modelos para estudo de funes celulares
de organismos superiores; as bases fsicas e
qumicas que permitiram o surgimento da vida
provm de estudos com microrganismos.

Como cincia biolgica aplicada: trata de


questes prticas importantes da medicina,
agricultura e indstria.
Microbiologia como cincia

Meta dos
microbiologistas

Compreender Otimizar
seus efeitos
como os benficos
microrganismos
atuam Minimizar
atividades
danosas
Impactos sobre o Homem

2004 Pearson Education, Inc.


Impactos sobre o Homem
Bactrias so usadas para recuperar
metais valiosos de sucata de
eletrnicos e rejeitos de minas
Projeto FAPESP
Coordenador Jorge Soares Tenrio / USP
2010/51009-0
Recuperao de ouro de placas de circuitos impresso de computadores
obsoletos atravs de processo bio-hidrometalrgico

Dez 2013
Impactos sobre o Homem
Tipos de organismos estudados

Bactrias

Anabaena sp, 600X, MEV

Listeria monocytogenes (3000X,


MEV)
Halobacterium sp, 1600X, MEV
Fungos

Aspergillus ustus, 600X, MEV

Saccharomyces cerevisiae,
800X, MEV
Mucor sp, 400X, MEV
Algas

Volvox - Detalhe

Volvox aureus, 40X, MO

Spirogyra sp, 100X, MO


Protozorios

Ameba - pinocitose

Paramecium
multimicronucleatum, 200X,
Trypanosoma sp, 1000X, MEV
MEV
Vrus
Seres microscpios de natureza acelular

Retrovirus HIV, 14.500X, TEM

Vrus da hepatite B, 50.000X,


MEV

Vrus do mosaico do tabaco, 27.300X,


MEV
Clulas Procariticas e
Eucariticas

Aula 1 - Parte I
Microbiologia FFI0751

Profa. Dra. Ilana L. B. C. Camargo


Procariotos x Eucariotos

ribossomos Nucleide citoplasma


Membrana nuclear
Membrana citoplasmtica
... Complexo de
.. Golgi
Mitocndria

Peroxissomo
Lisossomo
Membrana citoplasmtica
Parede celular

Espao periplasmtico
Membrana externa
Retculo Vescula
endoplasmtico secretria
rugoso

Organelas estruturas delimitadas por membrana


Procariotos x Eucariotos

Mitocndrias
Cloroplastos
Procariotos

Tamanho: 0,2 a 2 m
Eucariotos
Eucariotos

Organelas delimitadas por membrana

Tamanho: 10 a 100 m
Eucariotos
Clula eucariotas (algas, fungos e plantas) parede celular: composta pelo
polissacardeo quitina alm de glicana e manana (fungos), ou celulose (plantas).

Protozorios no tem PC,


mas tem pelcula

Animais contm o
glicoclice
(carboidratos adesivos)
Eucariotos
Comparao entre os tamanhos
Procariotos x Eucariotos

http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/immuno-port-chapter1.htm http://www.fortunecity.com/greenfield/eco/813/mod2aula4.html

Trypanosoma em esfregao sanguneo. A


membrana ondulante e o ncleo so
visveis.

Rickettsia ricketsi dentro de clulas


do sangue (bactria).
http://anhembi.br/publique/cgi/cgilua.exe/sys/start.htm?infoid=1758&sid=203
Procariotos x Eucariotos
Clulas da mucosa vaginal
Clula superficial, cujo citoplasma
avermelhado e cujo ncleo picntico,
entre duas clulas intermedirias. H
grande quantidade de bacilos de
Dederlein.
http://www.pathology.com.br/papanicolaou/papanicolaou.html

Clula da mucosa bucal


http://clubeaprendiz.googlepages.com/observa%C3%A7%C3%B5esmicrosc%C3%B3picas
Microscopia de microrganismos
Aula 1 - Parte II
Microbiologia FFI0751

Profa. Dra. Ilana L. B. C. Camargo


Microscopia de microrganismos

Tabela 1. Unidades de medidas comuns

0,01 m
0,001 m
0,000001
0,000000001 m
0,0000000001m

27
O primeiro microscpico da histria

Ampliao de 300x e resoluo de 1 m


28
Tipos de microscpios

-Microscpio ptico ou de Luz

-Microscpio confocal

-Microscpio eletrnico

-Microscpio de tunelamento

-Microscpio de fora atmica

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Relaes entre os tamanhos

- Microscpio ptico ou de Luz

-Microscpio Eletrnico

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Tortora, 6 ed, 2000
Microscpio ptico composto
MO

-com vrias lentes


-Utiliza a luz visvel como fonte de iluminao

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33
Rota de Luz no microscpio de baixo para cima

Oculares
Ampliao

Prisma

Ampliao
Objetivas

Amostra

Condensador

Iluminador

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Laboratrio
Objetivas

Cdigo de
aumento

Tipo de
aberrao
corrigida
Correo de curvatura de campo
Abertura numrica
Aumento

Comprimento do tubo/ Distncia de


espessura da lamnula trabalho
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Objetivas

So classificadas como:

Acromticas: Ajustadas para duas cores, geralmente o vermelho e o verde


(ou seja, permite que apenas algumas cores sejam observadas, selecionando a
frequncia de luz visvel de interesse por meio de seu ndice de refrao
durante a fase de fabricao da lente).
Apocromticas: Ajustadas para trs cores, normalmente o vermelho, o verde
e o violeta.
No-acromtica: No ajustada para cor alguma. Possui a caracterstica de
formar halos coloridos ao redor da imagem.
Lente objetiva

Lente ocular
Ampliao total da amostra

Ampliao total =

potncia de ampliao de lentes objetivas x da ocular

Objetivas:

10X (baixa potncia) 100X


40X (alta potncia) 400X
100X (imerso em leo) 1000X

Ocular:
Amplia a amostra por um fator de 10

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Amplificao e resoluo
Resoluo ou Potncia de resoluo

Capacidade das lentes de diferenciar detalhes finos e estruturas

Capacidade de individualizar dois pontos adjacentes

Diferenciar entre dois pontos com uma distncia especfica entre os mesmos

Ex: Microscpio com resoluo de 0,4 nm pode distinguir 2 pontos se eles esto no
mnimo a 0,4 nm de distncia um do outro.

Quanto menor o comprimento de onda luminosa usado no instrumento, maior a


resoluo.
MO Luz branca com comprimento de onda longo e no pode oferecer resoluo a
estruturas menores que 0,2 m

Limitao da ampliao a cerca de 2000 X.

Microscpio eletrnico resoluo de cerca de 1000 vezes superior!


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Limite de resoluo

D = 0,61
NA

D = limite de resoluo (dimetro do menor objeto que pode ser distinguido)


= comprimento de onda da luz visvel (em geral 0,5m)
NA = Abertura numrica (medida da capacidade de concentrar a luz)

NA = sen

- metade do ngulo dos raios de luz extremos que ainda


penetram a objetiva (> valor = 90)

- ndice de refrao do meio intercalante (espao entre


amostra e objetiva)

Ar = 1 Luz azul com menor


leo = 1,4 comprimento de onda
Melhor resoluo = filtro azul!
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Limite de resoluo

Abertura numrica > Largura angular e abertura numrica


(medida da capacidade de concentrar a luz) Melhor resoluo
< distncia de trabalho

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ndice de refrao

Obteno de imagem clara e detalhada em MO


amostra com alto contraste com seu meio

Diferenciar o ndice de refrao das amostras


daquele do seu meio

Velocidade relativa com que a Luz


passa atravs de um material

Altera a direo dos raios de luz


sofrendo refrao e aumenta o Colorao
contraste

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Objetiva de imerso

Ampliao alta (100X) com boa resoluo, a lente deve ser pequena

Embora necessitemos que a luz percorra a amostra e o meio para ser refratada de modo
diferente, no desejamos perder os raios de luz aps eles terem passado atravs da
amostra corada leo de imerso e a lente de imerso

Mesmo ndice de refrao que o vidro


e torna-se parte da ptica do vidro do
microscpio.

Para estes raios refratados sejam capturados


a lente objetiva deve ter um dimetro maior

Sem leo de imerso nessa lente, a amostra


torna-se borrada
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Objetivas

Tabela 2. As propriedades das objetivas do microscpio

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Amplificao e resoluo

Produto do aumento obtido com as lentes objetivas e ocular

Aumento

100 X, 400X, ou 1000X

10 X

10 X, 40X, ou 100X

Microscpio ptico
Limite de resoluo de ~0,2 m
Aumento limite de ~1500x
Como limpar o MO

Soluo de limpeza e algodo

Soluo de limpeza:
Soluo de limpeza (50% ter sulfrico PA, 50% clorofrmio PA);

Cotonete caseiro ou palito isento de ferpas, com ponta envolvido com


algodo;

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Como carregar o seu microscpio

50
Como colocar a lmina no seu microscpio

Charriot

Platina

51
Como utilizar o seu microscpio

52
Como utilizar o seu microscpio

Ajuste as oculares quanto distncia


entre seus olhos, afim de observar
um s campo!!

53
Tabela 3.

54
Campo
escuro

Contraste
de fase

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Microscopia de Fluorescncia

Para visualizar compostos que fluorescem


(emitem luz de uma cor quando
iluminados com luz de outra cor)

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Microscopia de Fluorescncia

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Tipo de
Caractersticas Utilizao
microscpio

Observar espcimes corados


Campo brilhante Utiliza luz visvel mortos ou organismos vivos
com cor natural

Usa luz visvel com um condensador Observar organismos vivos


especial com um disco opaco que bloqueia invisveis no MO que no
Campo escuro
a luz direta e impede-a de entrar na podem ser corados ou que so
objetiva diretamente distorcidos pela colorao

Usa luz visvel com um condensador


especial com um diafragma anular que
Microscpios pticos

permite que luz direta passe atravs do


condensador, focalizando a luz na amostra e
Contraste de em uma placa de difrao na lente objetiva. Observar estruturas internas
fase Os raios de luz direta e refletida ou das amostras vivas
difratada so reunidos para produzir a
imagem. No preciso colorao

Para tcnicas de fluorescncia


Usa luz ultravioleta para estimular com anticorpos para identificar
Fluorescncia molculas fluorescentes de microrganismos ou detectar rapidamente os
para real-los microrganismos em tecidos ou
amostras clnicas
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Microscopia Eletrnica de Transmisso

Para estudo
detalhado de
estruturas celulares
internas

Eltrons so
utilizados ao invs de
raios luminosos

Eletromagnetos
atuam como lentes

Sistema em vcuo

60
Microscopia Eletrnica de Transmisso

Limite de resoluo = 0,2 m Limite de resoluo = 0,2 nm

Micrografia eletrnica

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Microscopia Eletrnica de Transmisso

Feixes de eletrns tem baixa penetrabilidade

A clula muito
Espessa e por isso,
So necessrios
Cortes finos (20-60nm)
Nas amostras
Microscopia Eletrnica de Transmisso

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Microscopia Eletrnica de Transmisso

64
Microscopia Eletrnica de Transmisso

Ilana Camargo
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Microscopia Eletrnica de Transmisso
Staphylococcus aureus

Microscpio ptico

Microscpio eletrnico de transmisso

Ilana Camargo
66
Microscopia Eletrnica de varredura

Caractersticas
externas de um
organismo

Cobrir com metal


pesado (ouro)

Aumentos de 15x a 100.000x

SEM

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Microscopia Eletrnica de varredura

68
Imagens tridimensionais

Microscopia de contraste por interferncia

Microscopia de fora atmica

Laser de varredura confocal


Microscopia Confocal

Raio laser acoplado ao


microscpio ptico

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Microscopia Confocal

Laser ajustado para que somente uma determinada camada do espcime torne-se visvel

71
Microscopia Confocal

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Microscopia de Tunelamento

A pea bsica do STM uma finssima ponta metlica


que varre a superfcie a ser analisada, mas no a toca.
Fica a uma distncia muito pequena, inferior a um
nanmetro. O equipamento v a estrutura da O microscpio de tunelamento,
superfcie por causa do efeito tnel da a origem do conhecido pela sigla inglesa STM,
seu nome. Assim, voando baixo sobre a superfcie, a valeu aos seus inventores o
agulha vai registrando as rugosidades em escala Prmio Nobel de Fsica de 1986
atmica.

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http://www.funpar.ufpr.br:8080/funpar/boletim/novo2/externo/boletim.php?noticia=1811&boletim=71
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Bibliografia:

- Madigan, M.T. et al. Microbiologia de Brock. So Paulo:


Prentice-Hall, 12 ed., 2010.

- Tortora, G.J. et al. Microbiologia. Porto Alegre: ArtMed, 8


ed., 2005.