La funcin biolgica del ADN comenz a dilucidarse en 1928, con una serie

bsica de experimentos de la gentica moderna realizados por Frederick

Griffith, quien estaba trabajando con cepas "lisas" (S) o "rugosas" (R) de la
bacteria Pneumococcus (causante de la neumona), segn la presencia (S) o no
(R) de una cpsula azucarada, que es la que confiere virulencia (vase tambin
experimento de Griffith). La inyeccin de neumococos S vivos en ratones
produce la muerte de stos, y Griffith observ que, si inyectaba ratones con
neumococos R vivos o con neumococos S muertos por calor, los ratones no
moran. Sin embargo, si inyectaba a la vez neumococos R vivos y neumococos
S muertos, los ratones moran, y en su sangre se podan aislar neumococos S
vivos. Como las bacterias muertas no pudieron haberse multiplicado dentro del
ratn, Griffith razon que deba producirse algn tipo de cambio o
transformacin de un tipo bacteriano a otro por medio de una transferencia de
alguna sustancia activa, que denomin principio transformante. Esta sustancia
proporcionaba la capacidad a los neumococos R de producir una cpsula
azucarada y transformarse as en virulentas. En los siguientes 15 aos, estos
experimentos iniciales se replicaron mezclando distintos tipos de cepas
bacterianas muertas por el calor con otras vivas, tanto en ratones (in vivo)
como en tubos de ensayo (in vitro) La bsqueda del factor transformante
que era capaz de hacer virulentas a cepas que inicialmente no lo eran continu
hasta 1944, ao en el cual Oswald Avery, Colin McLeod y Maclyn McCarty
realizaron un experimento hoy clsico. Estos investigadores extrajeron la
fraccin activa (el factor transformante) y, mediante anlisis qumicos,
enzimticos y serolgicos, observaron que no contena protenas, ni lpidos no
ligados, ni polisacridos activos, sino que estaba constituido principalmente por
"una forma viscosa de cido desoxirribonucleico altamente polimerizado", es
decir, ADN. El ADN extrado de las cepas bacterianas S muertas por el calor lo
mezclaron "in vitro" con cepas R vivas: el resultado fue que se formaron
colonias bacterianas S, por lo que se concluy inequvocamente que el factor o
principio transformante era el ADN.

Fuente: http://biologiavi-rubi.blogspot.cl/2012/02/marco-teorico-la-funcion-
biologica-del.html.

Puntos ms importantes:

Se consideraron tres modelos de cmo los organismos podran replicar su ADN:

semiconservativo, conservativo y dispersivo.

El modelo semiconservativo, en el que cada cadena de ADN sirve como molde

para hacer una nueva cadena complementaria, pareca el ms probable
tomando en cuenta la estructura del ADN.
Meselson y Stahl probaron los modelos al marcar el ADN de las bacterias con
istopos de nitrgeno a lo largo de varias gneraciones.

A partir de los patrones de ADN marcado que vieron, Meselson y Stahl

confirmaron que el ADN se replica de forma semiconservativa.

El modo de replicacin del ADN

Imagnate en 1953, justo despus de que se descubri la estructura de doble

hlice del ADN^1

start superscript, 1, end superscript. Qu preguntas podras estar ponderando

t y otros otros cientficos?

Una gran pregunta era sobre la replicacin del ADN. La estructura de doble
hlice del ADN proporcion una tentadora pista sobre cmo ocurre el
copiado^{1,2}

1,2

start superscript, 1, comma, 2, end superscript. Pareca probable que las dos
cadenas complementarias de la hlice se separaran durante la replicacin, y
cada una sirviera como un molde para la construccin de una nueva cadena
complementaria.

Pero realmente fue ese el caso? Tal vez te arruinemos el final, pero la
respuesta es s! En este artculo, veremos un famoso experimento, a veces
llamado "el experimento ms hermoso de la biologa", que estableci que el
mecanismo bsico de replicacin del ADN es semiconservativo, es decir, que
produce molculas de ADN que contienen una cadena nueva y una vieja^3

start superscript, 3, end superscript.

Los tres modelos de replicacin del ADN

La comunidad cientfica haba propuesto tres modelos bsicos sobre la

replicacin del ADN despus del descubrimiento de la estructura del ADN.
Estos modelos se ilustran en el siguiente diagrama:

Representacin esquemtica de los modelos de replicacin del ADN

Conservativa. La replicacin produce una hlice hecha completamente de ADN

viejo y una hlice hecha completamente de ADN nuevo.
Semiconservativa. La replicacin produce dos hlices que contienen una
cadena de las cadenas originales del ADN y una cadena nueva.

Dispersiva. La replicacin produce dos hlices cuyas cadenas individuales son

una mezcla del ADN viejo y nuevo.

Imagen modificada de "Introduccin a la replicacin del ADN: Figura 1", de

OpenStax College, Biologa (CC BY 3.0).

Replicacin semiconservativa. En este modelo, las dos cadenas de ADN se

desenrollan y cada una sirve como molde para la sntesis de una nueva cadena
complementaria. Esto resulta en dos molculas de ADN, cada una con una
cadena original y una nueva.

Replicacin conservativa. En este modelo, la replicacin del ADN resulta en una

molcula compuesta por las dos cadenas de ADN originales (idntica a la
molcula original de ADN) y otra molcula compuesta por dos cadenas nuevas
(con exactamente la misma secuencia que la molcula original).

Replicacin dispersiva. En el modelo dispersivo, la replicacin del ADN resulta

en dos molculas de ADN que son mezclas, o "hbridos", del ADN original y las
molculas hijas. En este modelo, cada cadena individual es un mosaico de ADN
original y nuevo.

La mayora de los bilogos en ese tiempo probablemente habran apostado por

el modelo semi-conservativo. Este modelo tena mucho sentido dada la
estructura de doble hlice del ADN, en la que las dos cadenas de ADN son
perfecta y predeciblemente complementarias entre s (donde una tiene una T,
la otra tiene una A; cuando una tiene una G, la otra tiene una C; etc.)^{2,4}

2,4

start superscript, 2, comma, 4, end superscript. Esta relacin facilitaba

imaginar a cada cadena sirviendo como un molde para la sntesis de una nueva
pareja.

Sin embargo, la biologa tambin est llena de ejemplos en los que la solucin
"obvia" resulta no ser la correcta. (Las protenas son el material gentico... lo
recuerdas?). Por lo tanto, era clave determinar experimentalmente cul modelo
realmente utilizaban las clulas cuando replicaban su ADN.

Meselson y Stahl resolvieron el acertijo

Matt Meselson y Franklin Stahl originalmente se conocieron en el verano de

1954, un ao despus de que Watson y Crick publicaran su artculo sobre la
estructura del ADN. Aunque los dos investigadores tenan intereses diferentes,
ambos estaban intrigados por la interrogante sobre la replicacin del ADN y
decidieron formar equipo y tratar de resolver cul era el mecanismo de
replicacin^5

start superscript, 5, end superscript.

El experimento de Meselson-Stahl

Meselson y Stahl realizaron sus famosos experimentos sobre la replicacin de

ADN utilizando bacterias E. coli como sistema modelo.

Comenzaron cultivando E. coli en medio, o caldo nutritivo, que contena un

istopo "pesado" de nitrgeno, ^{15}\text N

15

Nstart superscript, 15, end superscript, N. (Un istopo solo es una versin de
un elemento que difiere de otras versiones por el nmero de neutrones en su
ncleo). Cuando se cultivan bacterias en medio que contiene ^{15}\text N

15

Nstart superscript, 15, end superscript, N pesado, estas toman el nitrgeno y

lo utilizan para sintetizar nuevas molculas biolgicas, incluyendo ADN.

Despus de que muchas generaciones crecieron en medio con ^{15}\text N

15

Nstart superscript, 15, end superscript, N, todas las bases nitrogenadas del
ADN de las bacterias quedaron marcadas con ^{15}\text N

15

Nstart superscript, 15, end superscript, N pesado. Luego, a las bacterias las
cambiaron al medio con el istopo ligero ^{14}\text N

14

Nstart superscript, 14, end superscript, N y se les permiti crecer durante

varias generaciones. El ADN que se produjera despus del cambio tendra que
estar formado por ^{14}\text N

14

Nstart superscript, 14, end superscript, N, ya que este habra sido el nico
nitrgeno disponible para la sntesis de ADN.
Meselson y Stahl conocan la frecuencia con la que las clulas de E. coli se
dividan, por lo que pudieron recolectar pequeas muestras de cada
generacin para extraer y purificar su ADN. Luego, midieron la densidad del
ADN (e, indirectamente, su contenido de ^{15}\text N

15

Nstart superscript, 15, end superscript, N y ^{14}\text N

14

Nstart superscript, 14, end superscript, N) mediante centrifugacin en

gradiente de densidad.

Este mtodo separa molculas como el ADN en bandas al hacerlas girar a gran
velocidad en presencia de otra molcula, como el cloruro de cesio, que forma
un gradiente de densidad de la parte superior a la parte inferior del tubo que
gira. La centrifugacin en gradiente de densidad permite detectar diferencias
muy pequeas, como las que hay entre el ADN marcado con ^{15}\text N

15

Nstart superscript, 15, end superscript, N y ^{14}\text N

14

Nstart superscript, 14, end superscript, N.

Diagrama de un tubo de ensayo que contiene CsCl, ADN marcado con

nitrgeno-14 y nitrgeno-15 despus de centrifugacin a alta velocidad. La
densidad del medio en el tubo de ensayo es mayor en el fondo y menor en la
superficie, gracias a la formacin del gradiente de CsCl. El ADN marcado con
nitrgeno-14 forma una banda relativamente cerca de la superficie del tubo de
ensayo, mientras que el ADN marcado con nitrgeno-15 forma una banda ms
cercana al fondo del tubo. Las posiciones de las bandas reflejan sus densidades
relativas.

Imagen modificada de "Diagrama del experimento de Meselson-Stahl", por

Mariana Ruiz Villarreal (dominio pblico).

Resultados del experimento

Cuando el ADN de las primeras cuatro generaciones de E. coli se analiz, se

obtuvo el patrn de bandas que se muestra en la siguiente figura:
Imagen modificada de "Introduccin a la replicacin del ADN: Figura 2", de
OpenStax College, Biologa (CC BY 3.0). Arte original de "Diagrama del
experimento de Meselson-Stahl", por Mariana Ruiz Villarreal (dominio pblico).

Qu les indic a Meselson y Stahl este resultado? Vamos a revisar las primeras
generaciones, las cuales proporcionan la informacin clave.

Generacin 0

El ADN aislado de clulas al inicio del experimento ("generacin 0" justo antes
del cambio al medio con ^{14}\text N

14

Nstart superscript, 14, end superscript, N) produce una nica banda despus
de la centrifugacin. Este resultado tena sentido porque el ADN solo debera
contener ^{15}\text N

15

Nstart superscript, 15, end superscript, N pesado en ese momento.

Generacin 1

El ADN aislado despus de una generacin (una ronda de replicacin del ADN)
tambin produce una nica banda al centrifugarse. Sin embargo, esta banda
estaba ms alto, tena una densidad intermedia entre el ADN pesado con
^{15}\text N

15

Nstart superscript, 15, end superscript, N y el ADN ligero con ^{14}\text N

14

Nstart superscript, 14, end superscript, N.

La banda intermedia indic a Meselson y Stahl que las molculas de ADN

producidas en la primera ronda de replicacin eran un hbrido de ADN ligero y
pesado. Este resultado encajaba con los modelos dispersivo y
semiconservativo, pero no con el modelo conservativo.

El modelo conservativo habra predicho dos bandas diferentes en esta

generacin (una banda de la molcula pesada original y una banda de la
molcula ligera recin hecha).

Generacin 2
La informacin de la segunda generacin le permiti a Meselson y Stahl
determinar cul de los modelos restantes (semiconservativo o dispersivo) era
realmente el correcto.

Cuando centrifugaron el ADN de la segunda generacin, se produjeron dos

bandas. Una estaba en la misma posicin que la banda intermedia de la
primera generacin, mientras que la segunda estaba ms alto (pareca estar
marcada solamente con ^{14}\text N

14

Nstart superscript, 14, end superscript, N).

Este resultado permiti a Meselson y Stahl saber que el ADN se replicaba

semiconservativamente. El patrn de dos bandas distintas una en la posicin
de una molcula hbrida y una en la posicin de una molcula ligera es justo
lo que se esperara de la replicacin semiconservativa (como se ilustra en el
siguiente diagrama). En cambio, en la replicacin dispersiva, todas las
molculas deberan tener fragmentos del ADN viejo y del nuevo, lo que hara
imposible obtener una molcula "puramente ligera".

Diagrama del experimento de Meselson-Stahl. Todo el ADN est marcado

inicialmente con nitrgeno-15. Se toma una muestra de ADN antes de aadir
las bacterias al medio con nitrgeno-14 y al centrifugarlo en un gradiente de
CsCl, el ADN forma una nica banda baja en el tubo (que indica que el ADN
est marcado con nitrgeno-15). Esto se etiqueta como "generacin 0".

Luego, las bacterias se agregan al medio con nitrgeno-14 y crecen durante

cuatro generaciones. En cada generacin (que tarda unos 20 minutos en
crecer), se toma una muestra de ADN y se analiza por centrifugacin en un
gradiente de CsCl.

Generacin 0 (ver arriba). 100% del ADN en la banda de nitrgeno-15.

Generacin 1. 100% del ADN en una banda con posicin intermedia entre las
bandas de nitrgeno-14 y nitrgeno-15.

Generacin 2. 50% del ADN en una banda con posicin intermedia entre las
bandas de nitrgeno-14 y nitrgeno-15. 50% del ADN en la banda de
nitrgeno-14.

Generacin 3. 25% del ADN en una banda con posicin intermedia entre las
bandas de nitrgeno-14 y nitrgeno-15. 75% del ADN en la banda de
nitrgeno-14.
Generacin 4. 12% del ADN en una banda con posicin intermedia entre las
bandas de nitrgeno-14 y nitrgeno-15. 88% del ADN en la banda de
nitrgeno-14.

El panel de la derecha de la figura es una ilustracin que muestra cmo estos

resultados pueden explicarse con el modelo semiconservativo. La doble hlice
inicial se marca totalmente con nitrgeno-15 (generacin 0). La replicacin de
esta hlice produce dos hlices, cada una de las cuales contiene una cadena
con nitrgeno-15 (viejo) y una cadena con nitrgeno-14 (nuevo) (generacin 1).
La replicacin de estas dos hlices produce cuatro hlices, dos que tambin
son hbridas de nitrgeno-15/nitrgeno-14 y dos que estn hechas solo de
nitrgeno-14 (generacin 2). La replicacin de las hlices de la generacin 2
produce ocho hlices, dos de los cuales son hbridas de nitrgeno-15/nitrgeno-
14 y seis que estn hechas solo de nitrgeno-14 (generacin 3). La replicacin
de las hlices de la generacin 3 produce diecisis hlices, dos de los cuales
son hbridas de nitrgeno-15/nitrgeno-14 y 14 que estn hechas solo de
nitrgeno-14 (generacin 4).

Imagen modificada de "Introduccin a la replicacin del ADN: Figura 2", de

OpenStax College, Biologa (CC BY 3.0). Arte original de "Diagrama del
experimento de Meselson-Stahl", por Mariana Ruiz Villarreal (dominio pblico).

Generaciones 3 y 4

En el modelo semiconservativo, se esperara que cada molcula de ADN hbrido

en la segunda generacin diera lugar a una molcula hbrida y una molcula
ligera en la tercera generacin, mientras que cada molcula de ADN ligero solo
producira ms molculas ligeras.

As, en la tercera y cuarta generacin, esperaramos que la banda hbrida fuera

progresivamente ms dbil (porque representara una fraccin ms pequea
del ADN total) y que la banda ligera fuera progresivamente ms fuerte (porque
representara una fraccin ms grande).

Como podemos ver en la figura, Meselson y Stahl vieron justo este patrn en
sus resultados, lo que confirm un modelo de replicacin semiconservativa.

[Y si el modelo dispersivo hubiera sido el correcto?]

^{14}\text N

start superscript, 14, end superscript, N

[Y si el modelo conservativo hubiera sido el correcto?]

^{15}\text N

start superscript, 15, end superscript, N

Conclusin

El experimento de Meselson y Stahl demostr que el ADN se replicaba de forma

semiconservativa, lo que significa que cada cadena de una molcula de ADN
sirve como molde para la sntesis de una nueva cadena complementaria.

Aunque Meselson y Stahl hicieron sus experimentos en la bacteria E. coli, hoy

en da sabemos que la replicacin semi-conservativa del ADN es un mecanismo
universal que comparten todos los organismos del planeta Tierra. Algunas de
tus clulas estn replicando su ADN semi-conservativamente justo ahora!

https://es.khanacademy.org/science/biology/dna-as-the-genetic-material/dna-
replication/a/mode-of-dna-replication-meselson-stahl-experiment.

Meselson y Stahl En (1958) demostraron que el DNA de E. coli se

replica de forma semiconservativa, tal como haban propuesto Watson y Crick
(1953) al elaborar el modelo molecular del DNA y tal como poda deducirse de los
experimentos realizados previamente por Taylor (1957) sobre la sntesis de DNA
en eucariotas. El experimento de Meselson y Stahl est basado en la variacin de
la densidad de flotacin del DNA derivada de la utilizacin del istopo pesado del
nitrgeno (N15) y el anlisis de dicha variacin mediante la tcnica de
Ultracentrifugacin en gradiente de Cloruro de Cesio.

El experimento de Meselson-Stahl fue un experimento realizado en 1957 por

Matthew Meselson y Franklin Stahl en el que se demostr que la replicacin de
ADN era semiconservadora. Una replicacin semiconservadora es aquella en que
la cadena de dos filamentos en hlice del ADN se replica de forma tal que cada
una de las dos cadenas de ADN formadas consiste en un filamento proveniente de
la hlice original y un filamento nuevo sintetizado.
Hicieron crecer cultivos de E. Coli, en un medio con nitrgeno radiactivo N15;
despus de lavar, se dej que continuara el crecimiento en un medio normal con
N14. El momento adecuado, se aadi el ADN aislado a una solucin densa de
CsCl.
Meselson y Stahl trabajaron con E. coli y demostraron que su ADN se replicaba
por el mecanismo semiconservador propuesto por Watson y Crick:

1) Cultivaron E. coli (varias generaciones) en un medio cuya nica fuente de N era

NH4Cl marcado con el istopo pesado N15.

2) Continuaron el cultivo de esas E. coli marcadas con N15 en un medio con N14-
NH4Cl normal como nica fuente de N (varias generaciones).

3) Extrajeron ADN de las muestras y determinaron la densidad de flotacin por

centrifugacin en gradientes de densidad de CsCl.
El tubo se coloc en una centrifuga, hacindola funcionar a velocidades
suficientemente altas como para producir la sedimentacin parcial del CsCl,
formndose un gradiente de densidad ms denso en el fondo y menos denso
arriba. En este gradiente, el ADN forma bandas en el nivel donde tiene la misma
densidad que la solucin salina. Despus de una generacin de crecimiento en el
medio normal el ADN aislado forma una banda que se encuentra a mitad de
camino entre el punto de igual densidad para el ADN totalmente marcado con N15
y la posicin esperada para el ADN liviano normal (N14).

despus de una generacin de crecimiento, entonces, cada molcula de ADN

tena una mitad vieja y una mitad nueva. Calentando el ADN para separar las
cadenas y luego recentrifugandolas, se hizo evidente que las molculas hibridas
tenan una cadena de polinucletidos parental (enteramente con N15) y otra recin
sintetizada (completamente con N14). En otras palabras, el ADN se replica en
forma semiconservativa.

http://elgabino-detodounpoco.blogspot.cl/2012/03/tarea-experimento-de-
meselson-y-stahl.html.
EXPERIMENTO DE GRIFFITH.
En su experimento, Griffith utiliz la bacteria Streptococcus pneumoniae, causante de un tipo
de neumona. En los laboratorios, las bacterias son separadas en cepas, las que poseen
caractersticas particulares que las hacen distintas entre s, siendo representantes de la
misma especie. En ese sentido Griffith tom una cepa S de S. pneumoniae, la que se
caracteriza por formar colonias de aspecto liso a la observacin en lupa, sus clulas estaban
rodeadas de cpsulas externas y eran altamente letales al producir un fuerte cuadro de
neumona en ratones de laboratorio, y us adems una cepa R de S. pneumoniae, la que se
caracteriza por formar colonias de aspecto rugoso a la observacin en lupa, sus clulas
carecan de cpsulas externas y no provocaban neumona en ratones de laboratorio (eran
inocuas). El procedimiento experimental de Griffith fue:
Inocular bacterias de la cepa S en ratones de laboratorio sanos, los cuales
contraen neumona y, de acuerdo a lo previsto por Griffith, mueren.
Inocular bacterias de la cepa R en ratones de laboratorio sanos, los cuales no
contraen neumona y, de acuerdo a lo previsto por Griffith, viven.
Hervir un cultivo de bacterias de la cepa S, matndolas por calor y luego inocular
el fluido resultante en ratones de laboratorio, los cuales viven.
Mezclar bacterias de la cepa S muertas por calor con bacterias vivas de la cepa R,
luego inyectar la mezcla en ratones de laboratorio. Estos contraen neumona y
mueren.
Griffith not que al mezclar la cepa R, inocua, con el precipitado de la cepa S muerta por
calor, algo transforma a la cepa R en cepa S, provocando la muerte del ratn y proliferacin
de cepa S en los tejidos del animal. Griffith no pudo explicar que era el algo que volva a la
cepa R en cepa S, y llam al fenmeno observado transformacin bacteriana. Hubo que
esperar hasta 1944, cuando Oswald Avery y su equipo de trabajo se propusieron identificar el
algo que transform a las bacterias de Griffith en 1929.

http://www.escolares.net/biologia/material-genetico-experimentos-de-griffith-y-avery/.

Introduccin:

La replicacin empieza en puntos denominados orgenes de replicacin. Las protenas

iniciadoras reconocen secuencias de nucletidos especficas en esos puntos y facilitan la
fijacin de otras protenas que permitirn la separacin de las dos hebras de ADN
formndose una horquilla de replicacin. Un gran nmero de enzimas y protenas intervienen
en el mecanismo molecular de la replicacin, formando el llamado complejo de replicacin o
replisoma.

La sntesis de la nueva cadena de ADN es llevada a cabo por ADN polimerasas, que
emparejan losdesoxirribonucletidos trifosfato (dNTP) con los desoxirribonucletidos
complementarios correspondientes del ADN molde. Los dNTP que se usan en la replicacin
del ADN contienen tres fosfatos unidos al grupo hidroxilo 5 de la desoxirribosa y
dependiendo de la base nitrogenada sern dATP, dTTP, dCTP o dGTP. La reaccin
fundamental es una transferencia de un grupo fosfatoen la que el grupo 3-OH acta como
nuclefilo en el extremo 3 de la cadena que est en crecimiento. El ataque nucleoflico se
produce sobre el fosfato (el ms prximo a la desoxirribosa) del desoxirribonuclesido 5
trifosfato que entra, liberndose pirofosfato inorgnico y alargndose el ADN.

Como es lgico la rapidez con que se suceden las innovaciones de toda ndole
tanto cientficas como humansticas resulta difcil adaptarse a los avances
alcanzados, en los momentos actuales, que se dan a nivel mundial, que coloca
esta ciencia entre las primeras con ms descubrimientos y logros..
AL hacer este estudio, se ha tenido en cuenta los progresos de la Biologa y de
la Gentica con un tema tan interesante como lo es la estructura del ADN y
ARN.
Esperamos que este estudio no sea un tema complicado ms sin embargo que
nos sea fcil de entender y discutir con gran facilidad.

Leer
ms: http://www.monografias.com/trabajos11/adna/adna.shtml#ixzz4epTuZZQ
N

Introduccin

Griffith trabaj sobre la transferencia de virulencia en la bacteria patgena

Streptococcus pneumoniae en 1928.
Este demostr con sus experimentos que el DNA era necesario para adquirir la
virulencia. Su experimento consisti en calentar bacterias virulentas que luego
eran inyectadas en ratones. Los ratones no experimentaban enfermedad alguna y
no era posible recuperar las cepas de bacterias inyectadas. Cuando inyect una
combinacin de bacterias virulentas muertas y bacterias vivas no virulentas, los
ratones moran.Griffith denomin transformacin a esta conversin de bacterias
no virulentas a bacterias virulentas.

http://elguerrerodetamacuaro.blogspot.cl/2012/06/introduccion-griffith-trabajo-sobre-
la.html.