USP 38

NF- 33
2015
VOLUME 4
USP 38-NF 33 Contenido iii

Contenido
VOLUMEN 1 Artculos Nuevos que Aparecen en USP 38 Ausentes
en USP 37 y sus Suplementos ............. xi

Artculos Incluidos en USP 3 7 Ausentes

en USP 38 ............................ xli
Misin y Prefacio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . vii
Lista Detallada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xlii

Integrantes del Ciclo de Revisin

2010-2015 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xv Advertencias
Funcionarios ............................ xv Advertencias y Requisitos Generales . . . . . . . . . . 1

Junta Directiva .......................... xv

Captulos Generales
Consejo de Expertos ...................... xv
Ver pgina 52 para detalles del contenido
Comits de Expertos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xvi
Pruebas y Valoraciones Generales ........... 57
Grupos Asesores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxiv
Requisitos Generales para Pruebas y
In Memriam ......................... xxiv Valoraciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 7
Miembros y Delegados de la Conven- Equipos para Pruebas y Valoraciones . . . . . . . . 104
cin de la Farmacopea de los
Estados Unidos de Amrica, a partir Pruebas Microbiolgicas . . . . . . . . . . . . . . . . . 109
del 31 de mayo de 2014 ........... xxv Pruebas y Valoraciones Biolgicas . . . . . . . . . . 144
Reconocimiento para los Donantes de Pruebas y Valoraciones Qumicas. . . . . . . . . . . 233
Materiales de Referencia y de
Monografas en 2013 ............ xxxii Pruebas y Determinaciones Fsicas . . . . . . . . . . 416

Informacin General . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 752

Acta Constitutiva . . . . . . . . . . . . . . . . . xxxiv Suplementos Dietticos . . . . . . . . . . . . . . . . . 191 7
Gobierno de la USP ................ xxxv
Estatutos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxxv Reactivos, Indicadores y
Normas y Procedimientos ................ xxxv Soluciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1979

Polticas de la USP ...................... xxxv Especificaciones de Reactivos . . . . . . . . . . . . . 1984

Indicadores y Papeles Indicadores de

Prueba . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2056
Incorporaciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxxix Soluciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2058
Artculos Incorporados a USP 38 mediante Soluciones Amortiguadoras . . . . . . . . . . . . 2058
Suplementos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxxix
iv Contenido USP 38-NF 33

Soluciones Colorimtricls . . . . . . . . . . . . . 2060

Soluciones Reactivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2060 ndice

Soluciones Volumtricas . . . . . . . . . . . . . . . 2069 ndice Combinado de USP 38 y NF 33 . . . . . . . 1-1
Columnas Cromatogrficas . . . . . . . . . . . . . . 2078

Tablas de Referencia VOLUMEN 3

Envases para Dispensar Cpsulas y Tabletas. . 2083

Descripcin y Solubilidad Relativa de Artculos Gua para los Captulos Generales. . . . vii
de la USP y del NF. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2093

Solubilidades Aproximadas de Artculos de la Advertencias

USP y del NF . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2157
Pesos Atmicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2166 Advertencias y Requisitos Generales .......... xi

Masas Atmicas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2169

Tabla Alcoholimtrica . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21 71

Tabla de Viscosidad Intrnseca . . . . . . . . . . . . 21 73

USP 38
Equivalencias de Temperatura . . . . . . . . . . . . 21 75

Monografas
ndice Monografas Oficiales de USP 38, 1-Z . . . . . . 4207
ndice Combinado de USP 38 y NF 33 . . . . . . . 1-1

ndice
ndice Combinado de USP 38 y NF 33 . . . . . . . 1-1

VOLUMEN 2
VOLUMEN 4
Gua para los Captulos Generales. . . . vii
Gua para los Captulos Generales. . . . vii

Advertencias
Advertencias y Requisitos Generales .......... xi Advertencias
Advertencias y Requisitos Generales .......... xi

USP 38
Suplementos Dietticos
Monografas Oficiales . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6289
Monografas
Monografas Oficiales de USP 38, A-H. . . . . . 21 77
USP 38-NF 33 Contenido v

NF 33
Excipientes
Excipientes USP y NF, Agrupados por
Incorporaciones Categora . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6957

Artculos Incorporados a NF 33 mediante

Suplementos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6954 Monografas
Artculos Nuevos que Aparecen en NF 33 Monografas Oficiales de NF 33. . . . . . . . . . . 6967
Ausentes en NF 32 y sus Suplementos . . . . 6954

Artculos Incluidos en NF 32 Ausentes ndice

en NF 33 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6954
ndice Combinado de USP 38 y NF 33 ....... 1-1
Lista Detallada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6955
USP 38
Gua para los Captulos
Generales
(Para obtener la lista alfabtica completa de los captulos generales de esta Farmacopea, consulte "Captulos Generales" en el
PRUEBAS Y VALORACIONES GENERALES
Requisitos Generales para
Pruebas y Valoraciones
(1) Inyectables ............................. 57
(2) Medicamentos Orales-Pruebas de Calidad de
Productos ............................. 71
(3) Medicamentos Tpicos y Transdrmicos-Pruebas de
Calidad del Producto ..................... 76
(4) Medicamentos para Mucosas-Pruebas de Calidad ..
....................................... 82
(5) Medicamentos Nasales y para Inhalacin-
Informacin General y Pruebas de Calidad del
Producto ............................. 86
(7) Etiquetado ............................. 95
(11) Estndares de Referencia USP .............. 101
Equipos para Pruebas y Valoraciones
(1 7) Etiquetado de Envases de Medicamentos de Venta
Bajo Receta .......................... 104
(21) Termmetros ......................... 107
(31) Aparatos Volumtricos ................... 107
(41) Balanzas ............................. 108
Pruebas Microbiolgicas
(51) Pruebas de Eficacia Antimicrobiana .......... 109
(55) Indicadores Biolgicos-Pruebas de Resistencia ... .
...................................... 112
(61) Examen Microbiolgico de Productos No Estriles:
Pruebas de Recuento Microbiano .......... 115
(62) Examen Microbiolgico de Productos No Estriles:
Pruebas de Microorganismos Especficos ..... 122
(63) Pruebas para Micoplasmas ................ 1 30
(71) Pruebas de Esterilidad ................... 1 36
Pruebas y Valoraciones Biolgicas
(81) Antibiticos-Valoraciones Microbiolgicas .... 144
(85) Prueba de Endotoxinas Bacterianas .......... 163
(87) Pruebas de Reactividad Biolgica, In Vitro ..... 169
(88) Pruebas de Reactividad Biolgica, In Vivo ..... 1 71
(89) Enzimas Usadas como Materiales Auxiliares en
la Fabricacin de Productos Farmacuticos .... 1 77
(90) Suero Fetal Bovino-Atributos de Calidad y
Pruebas de Funcionalidad ................ 180
(91) Valoracin de Pantotenato de Calcio ......... 184
(92) Factores de Crecimiento y Citokinas Usados en la
Fabricacin de Productos de Terapia Celular ... 186
Cwa para los C..ap1tulos Generales vii
ndice.)
(111) Diseo y Anlisis de Valoraciones Biolgicas ... 190
(115) Valoracin de Dexpantenol ............... 207
(121) Valoracin de Insulina .................. 208
(121 .1) Procedimientos Analticos Fisicoqumicos
para Insulinas ....................... 211
(123) Pruebas de Identidad Biolgica de Glucagn .. 213
(124) Valoraciones Biolgicas de Eritropoyetina ..... 216
(126) Pruebas de Identidad Biolgica de Soma-
tropina ............................ 218
(1 30) Atributos de Calidad de la Protena A ....... 220
(151) Prueba de Pirgenos ................... 228
(161) Equipos para Transfusin e Infusin y
Dispositivos Mdicos Similares ........... 229
(1 71) Valoracin de Actividad de Vitamina B11 ..... 230
Pruebas y Valoraciones Qumicas
Pruebas de Identificacin
(181) Identificacin-Bases Orgnicas Nitroge-
nadas ............................. 233
(191) Identificacin-Pruebas Generales .......... 233
(193) ldentificacin-Tetraciclinas .............. 237
(197) Pruebas de Identificacin Espectrofoto-
mtrica ............................ 237
(201) Prueba de Identificacin por Cromatografa en
Capa Delgada ....................... 239
Pruebas de Lmite
(206) Aluminio ............................ 240
(207) Prueba para el Derivado 1,6-Anhidro de
Enoxaparina Sdica .................... 241
(208) Valoracin de Actividad Anti-Factor Xa y Anti-Factor
lla para Heparinas No Fraccionadas y de Bajo
Peso Molecular ...................... 246
(209) Determinaciones de Peso Molecular de
Heparinas de Bajo Peso Molecular ......... 250
(211) Arsnico ............................ 252
(221) Cloruros y Sulfatos .................... 254
(223) Dimetilanilina ........................ 255
(226) 4-Epianhidrotetraciclina ................. 255
(227) 4-Aminofenol en Medicamentos que Contienen
Acetaminofeno ...................... 256
(228) xido de Etileno y Dioxano .............. 257
(231) Metales Pesados ...................... 260
(232) Impurezas Elementales-Lmites ........... 262
(233) Impurezas Elementales Procedimientos ..... 265
(241) Hierro .............................. 269
(251) Plomo ............................. 270
(261) Mercurio ............................ 271
(267) Porosimetra por Intrusin de Mercurio ...... 274
viii Gua para los Capitulas Generales
(268) Porosidad Mediante Adsorcin-Desorcin
de Nitrgeno .......................
(271) Prueba para Sustancias Fcilmente Carbo-
niLables ...........................
(281) Re,iduo de Incineracin .................
(291) Selenio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Otras Pruebas y Valoraciones
(301) Capacidad Neutralizante de cido ......... 282
(311) Valoracin de Alginatos ................. 284
(341) Agentes Antimlcrobianos-Contenido ....... 285
(345) Valoracin de Acido Ctrico/Citrato y Fosfato .. 288
(351) Valoracin de Esteroides ................. 289
(361) Valoracin de Barbitricos ............... 289
(371) Valoracin de Cobalamina con Marcador
Radioactivo ......................... 290
(381) Tapones Elastomricos para Inyectables ...... 291
(391) Valoracin de Epinefrina ................. 297
(401) Grasas y Aceite,s Fijos ................... 298
(411) Valoracin de Acido Flico ............... 313
(41 3) Anlisis de Impurezas en Gases Medicinales ... 31 3
(415) Valoracin de Gases Medicinales ........... 314
(425) Antibiticos-Valoracin Yodomtrica ....... 317
(429) Medicin del Tamao de Partcula por Difraccin
de Luz . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 318
(431) Determinacin de Grupos Metoxilo ........ 323
(441) Valoracin de Niacina o Niacinamida ....... 325
(451) Volumetra con Nitrito .................. 330
(461) Determinacin de Nitrgeno ............. 330
(466) Impurezas Comunes ................... 331
(467) Disolventes Residuales .................. 333
(469) Etilenglicol, Dietilenglicol y Trietilenglicol
en Sustancias Etoxiladas ................ 348
(471) Combustin en Matraz con Oxgeno ....... 350
(481) Valoracin de Riboflavina ................ 350
(501) ~a les de Bases Orgnicas Nitrogenadas ...... 351
(503) Acido Actico en Pptidos ............... 352
(511) Valoracin de un Esteroide Aislado ......... 352
(525) Dixido de Azufre ..................... 353
(531) Valoracin de Tiamina .................. 358
(541) Volumetra . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 359
(551) Valoracin de Vitamina E ................ 362
(561) Artculos de Origen Botnico ............. 370
(563) Identificacin de Artculos de Origen
Botnico ........................... 384
(565) Extractos Botnicos .................... 397
(5 71) Valoracin de Vitamina A ................ 400
(581) Valoracin de Vitamina D ................ 405
(591) Determinacin de Cinc ................. 415
Pruebas y Determinaciones Fsicas
(601) Medicamentos Nasales y para Inhalacin:
Pruebas de Calidad de Desempeo
de Aerosoles, Atomizadores y Polvos .......
(602) Propelentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
(603) Aerosoles Tpicos .....................
(604) Velocidad de Fuga .....................
(61 O) Mtodos de Muestreo Microbiolgico
Alternativos para Productos Nasales
e Inhaladores No Estriles ...............
(611) Determinacin de Alcohol . . . . . . ........
(616) Densidad Aparente y Densidad por Asenta-
miento de los Polvos ..................
(621) Cromatografa ........................
(631) Color y Acromatismo ...................
(641) Totalidad de la Disolucin ...............
(643) Carbono Orgnico Total .................
(645) Conductividad del Agua .................
(651) Temperatura de Solidificacin .............
(659) Requisitos de Envasado y Almacenamiento ...
(660) Envases-Vidrio .......................
(661) Envases-Plsticos .....................
USP 38
(670) Envase,-Componenles Auxiliares .......... 494
277 (671) Envases--Pruebas de Desempeo .......... 497
(691) Alqodn . . . . . . . . . . . . . . . . . . 505
281 (695) Crlstalinidad ......................... 507
281 (696) Caracteriza~in de Slidos, Cristalmos p~r Micro-
282 calorimetria y Calonmetna de D1soluc1on .... 507
(697) Contenido en Envases para Inyectables ...... 51 O
(698) Volumen de Entrega ................... 511
(699) Densidad de Slidos ................... 514
(701) Desintegracin ....................... 516
(705) Atributos de Calidad para Tabletas Cuyo
Etiquetado Indica Ranurado Funcional ...... 519
(711) Disolucin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 520
(721) Intervalo de Destilacin ................. 531
(724) Liberacin de Frmacos ................. 532
(729) Distribucin del Tamao de Glbulos en Emul-
siones Inyectables de Lpidos ............ 538
(730) Espectroqumica de Plasma .............. 541
(731) Prdida por Secado .................... 549
(733) Prdida por Incineracin ................ 549
(735) Espectrometra de Fluorescencia de Rayos X .. 550
(736) Espectrometra de Masas ................ 555
(741) Intervalo o Temperatura de Fusin ......... 561
(751) Partculas Metlicas en Ungentos
Oftlmicos ......................... 564
(755) Llenado Mnimo ...................... 564
(761) Espectroscopa de Resonancia Magntica
Nuclear . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 565
(771) Ungentos Oftlmicos .................. 575
(776) Microscopja Optica .................... 575
(781) Rotacin Optica ...................... 578
(785) Osmolalidad y Osmolaridad .............. 579
(786) Estimacin de la Distribucin del Tamao de
Partcula por Tamizado Analtico .......... 582
(787) Partculas Subvisibles en Inyectables de
Protenas Teraputicas ................. 586
(788) Partculas en Inyectables ................ 589
(789) Partculas en Soluciones Oftlmicas ......... 593
(790) Partculas Visibles en Inyectables ........... 594
(791) pH ................................ 595
(795) Preparacin Magistral-Preparaciones No
Estriles . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 599
(797) Preparacin Magistral-Preparaciones
Estriles . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 608
(801) Polarografa ......................... 657
(811) Finura de Polvos ...................... 661
(821) Radioactividad ........................ 662
(823) Frmacos para Tomografa de Emisin de Posi-
trones para Uso en Preparaciones Ma_gistrales,
, Investigacin Clnica y Estudios Cient1ficos ... 674
(831) Indice de Refraccin ................... 684
(841) ~eso Especfico ....................... 685
(846) Area Superficial Especfica ................ 686
(851) Espectrofotometra y Dispersin de Luz ...... 690
(852) Espectroscopa de Absorcin Atmica ....... 698
(853) Espectroscopa de Fluorescencia ........... 702
416 (854) Espectroscopa en el Infrarrojo Medio ....... 709
442 (857) Espectroscopa Ultravioleta-Visible .......... 713
444 (861) Suturas-Dimetro .................... 720
445 (871) Suturas-Sujecin de Agujas .............. 721
(881) Resistencia a la Tensin ................. 722
(891 >Anlisis Trmico ...................... 723
445 (905) Uniformidad de Unidades de Dosificacin .... 727
447 (911) Viscosidad--Mtodos Capilares ............ 731
(912) Viscosidad-Mtodos Rotatorios ........... 733
449 (91 3) Viscosidad-Mtodo de Bola Rodante ....... 738
453 (921) Determinacin de Agua ................. 740
464 (941) Caracterizacin de Slidos Cristalinos
465 y Parcialmente Cristalinos por Difraccin
466 de Rayos X sobre Polvo (DRXP). . . 744
467
471
472 INFORMACIN GENERAL
481
487 (1005) Emisin Acstica ..................... 752
USP 38
(101 O) Datos Analticos-Interpretacin y Trata-
miento ........................... 756
(1015) Aparatos Automatizados de Sntesis
Radioqufmica . . . . . . . . . . . . . . . . 772
(1024) Suero Bovino................. . . 774
(1 027) Citometra de Flujo ................... 788
(1 030) Captulos de Valoraciones Biolgicas-Infor-
macin GeneralJ Glosario ............. 806
(1031) Biocompatibilida de los Materiales Usados en
Envases de Medicamentos, Dispositivos
Mdicos e Implantes ................. 818
(1 032) Diseo y Desarrollo de Valoraciones Biol-
gicas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 829
(1033) Validacin de Valoraciones Biolgicas ...... 849
(1034) Anlisis de Valoraciones Biolgicas ......... 866
(1 035) Indicadores Biolgicos para Esterilizacin .... 880
(1041) Productos Biolgicos .................. 885
(1043) Materiales Auxiliares para Productos Celulares,
Gnicos y de Ingeniera Tisular .......... 886
(1044) Crioconservacin de Clulas ............. 895
(1045) Artculos Obtenidos por Biotecnologa ...... 909
(1046) Productos Derivados de Clulas y Tejidos .... 925
(1047) Productos de Terapia Gnica ............ 958
(1048) Calidad de Productos Biotecnolgicos: Anlisis de
la Construccin Expresable en Clulas Usadas
para la Produccin de Productos Protenicos
Obtenidos con ADN Recombinante ....... 990
(1 049) Calidad de Productos Biotecnolgicos: Pruebas
de Estabilidad de Productos Biotecnolgicos
o Biolgicos ........................ 993
(1 050) Evaluacion de la Seguridad Viral en Productos
Biotecnolgicos Obtenidos de Lneas
Celulares de Origen Humano o Animal .... 998
(1051) Limpieza de Material de Vidrio .......... 1012
(1 052) Artculos Obtenidos por Biotecnologa-
Anlisis de Aminocidos .............. 1012
(1053) Electroforesis Capilar ................. 1026
(1054) Artculos Obtenidos por Biotecnologa-
lsoelectroenfoque ................... 1034
(1 055) Artculos Obtenidos por Biotecnologa-
Mapeo de Pptidos ................. 1037
(1 056) Artculos Obtenidos por Biotecnologa-
Electroforesis en Gel de Poliacrilamida .... 1043
(105 7) Artculos Obtenidos por Biotecnologa-
Valoracin de Protenas Totales ......... 1050
(1058) Calificacin de Instrumentos Analticos .... 1055
(1059) Desempeo de Excipientes ............. 1061
(1061) Color-Medicin Instrumental .......... 1083
(1 065) Cromatografa lnica ................. 1086
(1066) Ambientes Fsicos que Promueven el Uso Seguro
de los Medicamentos ................ 1089
(1072) Desinfectantes y Antispticos ........... 1 097
(1074) Guas para la Evaluacin de la Seguridad
Biolgica de los Excipientes ............ 1103
(1078) Buenas Prcticas de Fabricacin para Excipientes
Farmacuticos a Granel ............... 1107
(1079) Buenas Prcticas de Almacenamiento y
Distribucin para Medicamentos ....... 1125
(1080) Excipientes Farmacuticos a Granel-
Certificado de Anlisis ................ 11 36
(1084) Anlisis de Glicoprotenas y Glicanos-
Consideraciones Generales ............ 1144
(1086) lmpurez~s en Frmacos y Productos
Farmaceut1cos ..................... 1155
(1087) Disolucin Intrnseca Aparente-Procedi-
mientos de Pruebas de Disolucin para
Disco Rotatorio y Disco Estacionario ..... 1158
(1 088) Evaluacin In Vivo e In Vitro de Formas
Farmacuticas ..................... 1163
(1 090) Evaluacin de Desempeo del Producto Farma-
cutico-Biodisponibilidad, Bioequivalencia
y Disolucin ...................... 11 75
(1 091) Etiquetado de Ingredientes Inactivos ...... 11 84
(1092) Procedimiento de Disolucin: Desarrollo
y Validacin ....................... 1184
Gua para los Captulos Generales x
(1094) Cpsulas-Pruebas de Disolucin y
Atributos de Calidad Relacionados ....... 1193
(1097) Procedimientos para el Muestreo de Polvos
<l Gr<lnel ..... , . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1202
(11 02) Mtodos de Pruebas Inmunolgicas-
Consideraciones Generales ............ 121 6
(11 03) Mtodos de Pruebas Inmunolgicas-
Ensayo por lnmunoadsorcin Ligado a
Enzimas (ELISA) .................... 1225
(1104) Mtodos de Pruebas Inmunolgicas-
Anlisis por lnmunotransferencia ........ 1236
(11 05) Mtodos de Pruebas Inmunolgicas-
Resonancia de Plasmn Superficial ....... 1249
(1106) Ensayos de lnmunogenicidad-Diseo y
Validacin de lnmunoensayos para Detectar
Anticuerpos Antifrmacos ............. 1 266
(1111) Examen Microbiolgico de Productos No
Estriles: Criterios de Aceptacin para
Preparaciones Farmacuticas y Sustancias
de Uso Farmacutico ................ 1284
(1112) Determinacin de Actividad de Agua en
Productos Farmacuticos No Esteriles ..... 1 285
(1113) Caracterizacin, Identificacin y
Tipificacin de Cepas Microbianas ....... 1288
(1115) Control de Biocarga de Frmacos y Medi-
camentos No Estriles ................ 1293
(1116) Control Microbiolgico y Monitoreo de
,Ambientes de Procesamiento Asptico .... 1 300
(111 7) Optimas Prcticas de Laboratorio Microbiol-
gico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1314
(1118) Dispositivos de Monitoreo-Tiempo, Tempe-
ratura y Humedad .................. 1321
(1119) Espectroscopa en el Infrarrojo Cercano .... 1 328
(1120) Espectroscopa Raman ................ 1335
(1121) Nomenclatura ..... , ................ 1343
(1125) Tcnicas Basadas en Acidos Nucleicos-
Generalidades .... , ................ 1 346
(1126) Tcnicas Basadas en Acidos Nucleicos-
Extraccin, Deteccin, y Secuenciacin ..... 1 352
(1127) Tcnicas Basadas en Acidos Nucleicos-
Amplificacin ..... ,. ................ 1 362
(1128) Tcnicas Basadas en Acidos Nucleicos-
Micromatrices .... , ................. 1373
(1129) Tcnicas Basadas en Acidos Nucleicos-
Genotipificacin ... ,. ................ 1 380
(1130) Tcnicas Basadas en Acidos Nucleic9s-
Enfoques para Detectar Trazas de Acidos
Nucleicos (Anlisis de ADN Residual) ..... 1 385
(11 36) Envasado y Reenvasado-Envases
Unitarios ......................... 1388
(1151) Formas Farmacuticas ................ 1398
(1152) Medicamentos Veterinarios Usados en
Alimentos para Animales .............. 1424
(11 60) Clculos Farmacuticos en la Preparacin
Magistral de Prescripciones ............ 1426
(1163) Garanta de Calidad en la Preparacin
Magistral ......................... 1441
(1171) Anlisis por Solubilidad de Fases ......... 1447
(1174) Fluidez de Polvos .................... 1450
(11 76) Balanzas y Aparatos Volumtricos para Prescrip-
ciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1454
(11 77) Buenas Prcticas de Envasado ........... 1456
(11 78) Buenas Prcticas de Reenvasado ......... 1459
(1180) Plasma Humano .................... 1462
(1181) Microscopia l::lectrn1ca de Barrido ....... 1487
(1184) Pruebas de Sensibilizacin ............ 1497
(1191) Consideraciones sobre Estabilidad en la Prctica
de Dispensacin .................... 1509
(1195) Gua sobre Cambios Significativos en Excipientes
Farmacuticos a Granel ............... 1514
\1197) Buenas Prcticas de Distribucin para Exci-
pientes Farmacuticos a Granel ......... 1526
(1207) Envasado de Productos Estriles-Evaluacin
de Integridad ...................... 1551
x Gua para los Captulos Generales
(1208) Pruebas de Esterilidad-Validacin de Sistemas
Aisladores ........................ 1553
(1209) Esterilizacin-Indicadores e Integradores
Qumicos y Fi~irnrurnicos ............ 1558
(1211) Esterilizacin y Garanta de Esterilidad de
Artculos Farmacopeicos .............. 1561
(1216) Friabilidad de las Tabletas .............. 1566
(121 7) Fuerza de Ruptura de las Tabletas ........ 1567
(1222) Productos Farmacuticos con Esterilizacin
Terminal-Liberacin Paramtrica ....... 1571
(1223) Validacin de Mtodos Microbiolgicos
Alternativos ....................... 1575
(1224) Transferencia de Procedimientos Analticos .. 1579
(1225) Validacin de Procedimientos Farma-
copeicos ......................... 1581
(1226) Verificacin de Procedimientos Farma-
copeicos ......................... 1587
(1227) Validacin de Recuperacin Microbiana en
Artculos Farmacopeicos .............. 1588
(1229) Esterilizacin de Artculos Farmacopeicos ... 1593
(1229.1) Esterilizacin con Vapor de Agua por
Contacto Directo ................. 1598
(1229.2) Esterilizacin con Calor Hmedo de
Lquidos Acuosos ................. 1602
(1229.3) Monitoreo de la Biocarga ............ 1607
(1229 .4) Esterilizacin de Lquidos por Filtracin ... 1 61 O
(1229.6) Esterilizacin en Fase Lquida .......... 1618
(1229.7) Esterilizacin por Gases .............. 1621
(1229.8) Esterilizacin por Calor Seco .......... 1624
(1229 .10) Esterilizacin por Radiacin .......... 1626
(1230) Agua para Uso en Hemodilisis .......... 1631
(1231) Agua para Uso Farmacutico ........... 1632
(1234) Vacunas para Uso Humano-Vacunas
de Polisacridos y Glicoconjugados ...... 1662
(1235) Vacunas para Uso Humano-Consideraciones
Generales ........................ 1680
(1237) Mtodos de Pruebas Virolgicas ......... 1698
(1238) Vacunas para Uso Humano-Vacunas Bac-
terianas .......................... 1 720
(1240) Anlisis de Virus en Plasma Humano para
Fabricacin Posterior ................ 1 734
(1241) Interacciones Agua-Slido en Sistemas
Farmacuticos ..................... 1745
(1251) Pesada en una Balanza Analtica ......... 1750
(1265) Informacin Escrita de los Medicamentos
Recetados-Guas ................... 1755
(1285) Preparacin de Muestras Biolgicas para
Anlisis Histolgico e lnmunohisto-
qumico .......................... 1757
(1285.1) Tincin con Hematoxilina y Eosina de Cortes
de Tejidos para Examen Microscpico .. 1762
USP 38
(1601) Productos para Nebulizacin-Pruebas de
Caracterizacin .................... 1765
(1644) Teora y Prctica de Mediciones de
Conductividad Elctrica de Solu1..iu11e~ .... 1 768
<1660) Envases de Vidrio-Evaluacin de la
Durabilidad de la Superficie Interna ...... 1 776
(1724) Medicamentos Semislidos-Pruebas de
Desempeo ....................... 1 781
(1 736) Aplicaciones de la Espectrometra de
Masas ........................... 1795
(1761) Aplicaciones de la Espectroscopa de
Resonancia Magntica Nuclear ......... 1818
(1787) Medicin de Partculas Subvisibles en
Inyectables de Protenas Teraputicas ..... 1840
(1 788) Metodos para la Determinacion de Partculas
en Inyectables y Soluciones Oftlmicas .... 1855
(1852) Espectroscopa de Absorcin Atmica-Teora
y Prctica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18 70
(1853) Espectroscopa de Fluorescencia-Teora
y Prctica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1880
(1854) Espectroscopa en el Infrarrojo Medio-Teora
y Prctica ........................ 1890
(1857) Espectroscopa Ultravioleta-Visible-Teora
y Prctica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1900
(1911) Reometra ......................... 191 O
SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2021) Pruebas de Recuento Microbiano-Suplementos
Nutricionales y Dietticos ............. 191 7
(2022) Procedimientos Microbiolgicos para Comprobar
la Ausencia de Microorganismos Especficos-
Suplementos Nutricionales y Dietticos ... 1922
(2023) Atributos Microbiolgicos de los Suplementos
Nutricionales y Dietticos No Estriles .... 1929
(2030) Informacin Complementaria para Artculos de
Origen Botnico .................... 1932
(2040) Desintegracin y Disolucin de Suplementos
Dietticos ........................ 1942
(2091) Variacin de Peso de Suplementos
Dietticos ........................ 1950
(2232) Contaminantes Elementales en Suplementos
Dietticos ........................ 1951
(2250) Deteccin de Suplementos Dietticos
Irradiados ........................ 1955
(2750) Prcticas de Fabricacin para Suplementos
Dietticos ........................ 1958
USP 38
Advertencias y Requisitos
Aplicables a las Normas, Pruebas,
Valoraciones y Otras Especificaciones
de la Farmacopea de los Estados Unidos
1. Ttulo y Revisin ...................... xiii
2. Estado Oficial y Reconocimiento
Legal .................................. xiii
2. lO. Texto Oficial .......................... xiii
2.20. Artculos Oficiales ...................... xiii
2.30. Reconocimiento Legal ................... xiii
3. Cumplimiento de las Normas .......... xiv
3.1 O. Aplicabilidad de las Normas ............... xiv
3.20. Indicacin de Cumplimiento ............... xiv
4. Monografas y Captulos Generales .... xv
4.1 O. Monografas .......................... xv
4.20. Captulos Generales ..................... xv
5. Componentes de las Monografas ..... xv
5.1 O. Frmulas Moleculares .................... xv
5.20. Sustancias Agregadas .................... xv
5.30. Descripcin y Solubilidad ................. xvi
5.40. Identidad ............................ xvi
5.50. Valoracin ............................ xvi
5.60. Impurezas y Sustancias Extraas ............ xvi
5.70. Pruebas de Desempeo ................. xvii
5.80. Estndares de Referencia USP ............. xvii
6. Prcticas y Procedimientos de
Prueba . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.1 O. Prcticas Seguras de Laboratorio . . . . . . . . . . .
6.20. Procedimientos Automatizados ............
6.30. Mtodos y Procedimientos Alternativos y
Armonizados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.40. Con Respecto a la Sustancia Seca, Anhidra,
Incinerada o Exenta de Disolventes ............
6.50. Preparacin de Soluciones ...............
6.60. Unidades Necesarias para Completar una
Prueba ................................
Advertencias Generales xi
Generales
6.70. Reactivos ............................ xviii
6.80. Equipo ............................. xviii
7. Resultados de Pruebas ................ xix
7.1 O. Interpretacin de los Requisitos ............. xix
7.20. Reglas para Redondeo ................... xix
8. Trminos y Definiciones ............... xix
8.1 O. Abreviaturas .......................... xix
8.20. Aproximadamente ..................... xx
8.30. Contenido de Alcohol ................... xx
8.40. Pesos Atmicos ....................... xx
8.50. Determinaciones con Blancos ............. xx
8.60. Concomitantemente .................... xx
8.70. Desecador ........................... xx
8.80. Logaritmos ........................... xx
8.90. Cepas Microbianas ..................... xx
8.1 OO. Inapreciable .......................... xx
8.11 O. No menos de (NLT) y No ms de (NMT) ..... xx
8.120. Olor ............................... xx
8.1 30. Por ciento ........................... xx
8.140. Concentraciones Porcentuales ............. xx
8.150. Presin ............................. xx
8.160. Tiempo de Reaccin .................... xx
8.1 70. Peso Especfico ....................... xx
8.180. Temperaturas ........................ xx
8.190. Tiempo ............................. xx
8.200. Transferir ............................ xx
8.21 O. Vaco .............................. xx
xvii 8.220. Desecador al Vaco ..................... xx
xvii 8.230. Agua .............................. xx
xvii 8.240. Pesos y Medidas . . . . . . .... xxi
xvii 9. Prescripcin y Dispensacin .......... xxii
9 .1 O. Uso de Unidades Mtricas ............... xxii
xvii 9.20. Cambios en Volumen ................... xxii
xviii
xviii
xii Advertencias Generales USP 38

1 O. Conservacin, Envasado, Almacena- 1O.1 O. Envasado y Almacenamiento . . . . . . . . . . . . . xxii

10.40. Etiquetado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxii
miento y Etiquetado . . . . . . . . . . . . . . . . . . xxii
USP 38
ADVERTENCIAS Y
REQUISITOS GENERALES
La seccin de Advertencias y Requisitos Generales (en lo
sucesivo, Advertencias Generales) presenta las suposiciones
bsicas, definiciones y condiciones que se usan por defecto
para la interpretacin y aplicacin de la Farmacopea de los
Estados Unidos de America ( USP, por sus siglas en ingls) y
del Formulario Nacional (NF, por sus siglas en ingls).
Los requisitos establecidos en estas Advertencias Generales
se aplican a todos los artculos reconocidos en la USP y en el
NF (en lo sucesivo, los "compendios") y a todos los captu-
los generales, a menos que se especifique algo diferente.
Cuando los requisitos de una monografa individual sean di-
ferentes a los de las Advertencias Generales o de un captulo
general, los requisitos de la monografa se aplicarn y reem-
plazarn a los requisitos de las Advertencias Generales o del
captulo general, aunque la monografa no haga mencin
expresa de las diferencias.
1. TTULO Y REVISIN
El ttulo completo de esta publicacin (que consiste en
cuatro volmenes e incluye sus Suplementos) es: Farmacopea
de los Estados Unidos de Amrica, Trigsima Octava Revisin
y Formulario Nacional, Trigsima Tercera Edicin. Estos ttulos
pueden abreviarse a USP 38, a NF 33, y a USP 38-NF 33. La
Farmacopea de los Estados Unidos, Trigesima Octava Revisin,
y el Formulario Nacional, Trigsima Tercera Edicin, reempla-
zan a todas las revisiones anteriores. Cuando se emplean las
siglas "USP", "NF" o "USP-NF" sin ningn otro calificativo,
las mismas se refieren nicamente a USP 38, NF 33, y a sus
Suplementos, durante el tiempo que estos compendios estn
vigentes. Los mismos ttulos, sin ninguna distincin, se apli-
can tanto a la presentacin impresa como a la electrnica
de este contenido. Aunque la USP y el NF se publican en
forma conjunta y comparten estas Advertencias Generales,
cada uno de ellos constituye por s mismo un compendio
separado.
Esta revisin es oficial a partir del 1 de mayo de 2015, a
menos que se indique algo diferente mediante un texto
especfico.
Los Suplementos de la USP y el NF se publican
peridicamente.
Los lnterim Revision Announcements (Anuncios de Revisin
Intermedia) son revisiones de la USP y del NF que se publi-
can en el sitio Web de la USP. Los lnterim Revision Announce-
ments contienen revisiones oficiales y sus fechas de entrada
en vigencia. Asimismo, el sitio Web de la USP, en el apar-
tado "New Official Text" (Nuevo Texto Oficial) incluye
anuncios de disponibilidad de nuevos Estndares de Referen-
cia USP y anuncios de pruebas o procedimientos que se
mantienen en suspenso por falta de los Estndares de Refe-
rencia USP requeridos.
Los Revision Bul/etins (Boletines de Revisin) son revisiones
del texto oficial o aplazamientos que requieren de publica-
cin expedita. Se publican en el sitio Web de la USP y, por
lo general, se oficializan inmediatamente, a menos que se
indique algo distinto en el Boletn de Revisin.
La Errata (Fe de Erratas) comprende las correcciones a ar-
tculos publicados errneamente que no han sido aprobados
por el Consejo de Expertos y que no reflejan los requisitos
oficiales.
2. ESTADO OFICIAL Y RECONOCIMIENTO LEGAL
2.10. Texto Oficial
El Texto Oficial es el texto contenido en la USP y el NF,
incluidas las monografas, los captulos generales y estas Ad-
Advertencias Generales xiii
vertencias Generales. Las revisiones al texto oficial se presen-
tan en los Suplementos, lnterim Revision Announcements y Re-
vision Bul/etins. Los captulos generales con numeracin del
1000 al 1 999 se consideran explicativos y estn destinados a
definir, describir o informar sobre un tema en particular. No
contienen requisitos obligatorios aplicables a ningn artculo
oficial a menos que sean referidos por las Advertencias Gene-
rales, una monografa o un captulo general con numeracin
inferior a 1000. Los captulos generales con numeracin su-
perior a 2000 aplican nicamente a artculos destinados
para su uso como ingredientes dietticos y suplementos
dietticos.
2.20. Artculos Oficiales
Un artculo oficial es un artculo reconocido en la USP o el
NF. Se considera que un artculo est reconocido e incluido
en un compendio cuando se publica su monografa en el
compendio y se le asigna una fecha oficial a la misma en
forma especfica o general.
El ttulo especificado en una monografa es el ttulo oficial
para ese artculo. Los nombres que se consideren sinnimos
de ttulos oficiales no pueden ser utilizados para sustituir a
los nombres oficiales.
Los artculos oficiales incluyen tanto sustancias oficiales
como productos oficiales. Una sustancia oficial es un frmaco,
excipiente, ingrediente diettico u otro ingrediente, o un
componente de un dispositivo terminado para el cual el t-
tulo de la monografa no incluye indicacin alguna sobre la
naturaleza de la forma terminada.
Un producto oficial es un producto farmacutico, suple-
mento diettico, preparacin magistral, o dispositivo termi-
nado para el cual se provee una monografa.
2.30. Reconocimiento Legal
Los compendios USP y NF estn reconocidos por las legis-
laciones y reglamentaciones de muchos pases del mundo.
Las autoridades reguladoras pueden hacer cumplir las nor-
mas presentadas en la USP y el NF; no obstante, debido a
que el reconocimiento de los compendios USP y NF puede
variar de pas a pas, se recomienda que los usuarios conoz-
can las legislaciones y reglamentaciones f licables. En los
Estados Unidos, de acuerdo con la Federa Food, Orug, and
Cosmetic Act (Ley Federal de Alimentos, Medicamentos y
Cosmticos o FOCA), tanto la USP como el NF estn recono-
cidos como compendios oficiales. Un medicamento con un
nombre reconocido en USP-NF debe cumplir con las normas
farmacopeicas de identidad o se le considerar adulterado,
rotulado incorrectamente (misbranded) o ambos. Ver, p.ej.,
la FOCA 501 (b) y 502(e)(3)(b); ver tambin las reglamen-
taciones de la FOA, el Ttulo 21 del CFR 299.5(a&b). Para
evitar que se les considere adulterados, los medicamentos
deben cumplir adems con las normas farmacopeicas de
contenido, calidad y pureza, a menos que se declaren en el
etiquetado todos los aspectos en los que el medicamento
difiere. Ver, p.ej., FOCA 501 (b) y Ttulo 21 del CFR
299.5(c). Asimismo, para evitar que se les considere rotula-
dos incorrectamente, los medicamentos reconocidos en los
compendios USP-NF deben tambin envasarse y etiquetarse
de conformidad con las normas farmacopeicas. Ver la FOCA
502(g).
Un suplemento diettico que declara cumplir con las es-
pecificaciones de USP se considerar como un alimento in-
correctamente rotulado (misbranded food) si incumpliera
con las mismas. Ver la FOCA 403(s)(2)(0).
xiv Advertencias Generales
La ejecucin de las normas USP es responsabilidad de la
FDA y dems autoridades gubernamentales en los EE.UU. y
dems pases. La USP no desemper1a ningn papel en la
ejecurion de las normas
3. CUMPLIMIENTO DE LAS NORMAS
3.1 O. Aplicabilidad de las Normas
Las normas para un artculo reconocido en los compen-
dios ( USP-NF) se expresan en la monografa del artculo, en
los captulos generales aplicables y en las Advertencias Gene-
rales. La identidad, contenido, calidad y pureza de un art-
culo se determinan mediante pruebas, procedimientos y cri-
terios de aceptacin oficiales, incluidos ya sea en su
monografa, en las Advertencias Generales o en los captulos
generales aplicables, a menos que se excepte en alguna
otra parte de los compendios. Est permitida la adopcin
temprana de las normas revisadas. Cuando las normas revi-
sadas para un artculo existente hayan sido publicadas como
"texto oficial" aprobado (conforme a lo aprobado en la sec-
cin 2.1 O) pero an no sean oficiales (seis meses despus de
su publicacin, a menos que se especifique algo distinto; ver
"fecha oficial," seccin 2.20), el cumplimiento con la norma
revisada no excluir una determinacin o indicacin de
cumplimiento con las normas farmacopeicas, a menos que
la USP especifique algo distinto prohibiendo la adopcin
temprana en una norma en particular.
Las normas en la monografa, captulo(s) general(es) y Ad-
vertencias Generales rertinentes son aplicables en todo mo-
mento de la vida de artculo, desde su produccin hasta su
caducidad. Las especificaciones del fabricante y las buenas
prcticas de fabricacin (incluyendo, p.ej., iniciativas de Cali-
dad por Diseo), por lo general, se desarrollan y siguen para
asegurar que el artculo cumplir con las normas farmaco-
peicas hasta su fecha de caducidad, siempre que se alma-
cene de acuerdo con las instrucciones dadas al respecto. Por
consiguiente, se espera que todo artculo oficial cumpla con
las normas farmacopeicas en caso de analizarse, y todo art-
culo oficial analizado segn se indica en la monografa perti-
nente debe cumplir con tales normas para demostrar el
cumplimiento.
En ocasiones, las normas farmacopeicas toman el carcter
de procedimientos estadsticos cuando implican unidades
mltiples y, posiblemente, un diseo de procedimiento se-
cuencial que permite al usuario determinar que el artculo
analizado cumple o no con la norma. La similitud con pro-
cedimientos estadsticos podra sugerir un intento de infe-
rencia para algn grupo de unidades ms grande, pero en
todos los casos, las declaraciones sobre si se ha cumplido
con la norma farmacopeica slo aplica a las unidades anali-
zadas. Los compendios no indican ni prohben las repeticio-
nes, las mediciones mltiples, el rechazo estadstico de valo-
res aberrantes o las extrapolaciones de los resultados a
poblaciones ms grandes, ni tampoco la necesidad y fre-
cuencia adecuada del anlisis de las partidas. La frecuencia
del anlisis y el muestreo se deja libre a las preferencias o
instrucciones de aqullos que llevan a cabo los anlisis para
determinar el cumplimiento con las normas y a los dems
usuarios de USP-NF, incluidos fabricantes, compradores o
autoridades regluladoras.
Los productos oficiales se preparan de acuerdo con los
principios reconocidos de buenas prcticas de fabricacin y
a partir de ingredientes que cumplan con las normas de USP
o NF, siempre que existan normas para dichos ingredientes
(para suplementos dietticos, ver la seccin 3.1 0.20).
Las sustancias oficiales se elaboran segn principios reco-
nocidos de buenas prcticas de fabricacin con ingredientes
que cumplen con las especificaciones establecidas para ase-
gurar que las sustancias resultantes cumplan con los requisi-
tos de las monografas oficiales.
3.10.1 O. Aplicabilidad de las Normas a Productos
Farmacuticos, Frmacos y Excipientes
Las normas correspondientes de los compendios USP o NF
se aplican a cualquier artculo comercializado en los Estados
Unidos que (1) se reconozca en el compendio y (2) que se
destine o etiquete para su uso como medicamento o como
USP 38
ingrediente de un medicamento. Dichos artculos (productos
farmcuticos, frmacos y excipientes) incluyen medicamen-
tos para humanos (ya sea dispensados con receta, "de venta
!ibrc" o de oto tipo), asi corno n-1edicarnentos pa,-a a11ir11d-
les. las normas correspondientes se aplican a dichos artcu-
los, independientemente de que se agregue o no la deno-
minacin "USP" o "NF". Las normas se aplican por igual a
los artculos con ttulos oficiales o nombres derivados por
transposiciones de las palabras que componen los ttulos ofi-
ciales, o por transposicin en el orden de los nombres de
dos o mas ingredientes activos en los ttulos oficiales, o
cuando se usen sinnimos con la intencin o efecto de su-
gerir un grado significativo de identidad con el ttulo o
nombre oficial.
3.10.20. Aplicabilidad de las Normas a Dispositivos
Mdicos, Suplementos Dietticos y a sus Componentes e
Ingredientes
Un artculo reconocido en la USP o el NF debe cumplir
con las normas farmacopeicas si el artculo es un dispositivo
mdico, componente destinado para un dispositivo mdico,
suplemento diettico, ingrediente diettico, u otro ingre-
diente destinado para su incorporacin en un suplemento
diettico, y si declara en su etiquetado el cumplimiento con
los compendios USP o NF.
En general, los suplementos dietticos se elaboran con in-
gredientes que cumplen con las normas de los compendios
USP, NF, o Food Chemicals Codex. Cuando no existen tales
normas, las sustancias pueden usarse en suplementos diet-
ticos siempre que hayan mostrado ser de grado alimenticio
de calidad aceptable utilizando otros procedimientos
adecuados.
3.20. Indicacin de Cumplimiento
Un producto farmacutico, frmaco o excipiente puede
usar la denominacin "USP" o "NF" junto a su ttulo oficial
o en otra parte de la etiqueta nicamente cuando: (1) existe
una monografa en el compendio especificado y (2) el art-
culo cumple con la identidad estipulada en el compendio
correspondiente.
Cuando se determina que un producto farmacutico, fr-
maco o excipiente difiere de las normas USP o NF pertinen-
tes de contenido, calidad, o pureza al aplicar las pruebas,
procedimientos y criterios de aceptacin establecidos en el
compendio correspondiente, estas diferencias deben indi-
carse de forma clara en la etiqueta.
Cuando un producto farmacutico, frmaco o excipiente
no cumple con la identidad estipulada en los compendios
USP o NF o se le ha agregado una sustancia que interfiere
con las pruebas y procedimientos establecidos, se le debe
asignar un nombre diferente y totalmente distinto de cual-
quier otro nombre reconocido en los compendios USP o NF.
Un dispositivo mdico, suplemento diettico o ingrediente
o componente de un dispositivo mdico o suplemento die-
ttico puede usar la denominacin "USP" o "NF" junto a su
ttulo oficial o en otra parte de la etiqueta, nicamente
cuando: (1) existe una monografa en el compendio especi-
ficado y (2) el artculo cumple con las normas de la mono-
grafa y dems normas aplicables en el compendio
correspondiente.
La denominacin "USP" o "NF" en la etiqueta de un art-
culo no debe ni puede interpretarse como un aval por parte
de la USP ni tampoco debe interpretarse como una confir-
macin por parte de la USP de que tal artculo cumple con
las normas ertinentes de la USP. La USP puede iniciar una
accin lega si se declara o presenta un artculo como un
artculo oficial en uno de los compendios de la USP y sta
determina que tal aseveracin no fue hecha de buena fe.
La denominacin "USP-NF" puede usarse en la etiqueta
de un artculo, siempre que dicha etiqueta tambin lleve
una frase tal como "Cumple con las normas NF publicadas
por la USP", indicando el compendio particular que corres-
ponde aplicar.
Cuando se usan las siglas "USP," "NF," o "USP-NF" en la
etiqueta de un artculo para indicar que el artculo cumple
con las normas farmacopeicas, las siglas deben aparecer
LJSP 38
junto al ttulo oficial del artculo. Las siglas no debern apa-
recer dentro de smbolos, como por ejemplo crculos, cua-
drados etc., y debern estar en letras maysculas.
Si un supiemenlo diellico 110 curnie con Lodus los re-
quisitos farmacopeicos aplicables, pero contiene uno o ms
ingredientes dietticos u otros ingredientes reconocidos en
los compendios USP o NF, se puede indicar que tales ingre-
dientes individuales cumplen con las normas USP o NF o
que son de calidad USP o NF siempre y cuando la denomi-
nacin se limite a los ingredientes individuales y no se insi-
ne que el suplemento diettico cumple con las normas en
USP.
4. MONOGRAFAS Y CAPTULOS GENERALES
4.1 O. Monografas
Las monografas establecen el nombre, definicin, especi-
ficaciones y dems requisitos relacionados con el envasado,
almacenamiento y etiquetado del artculo. Las especificacio-
nes consisten en pruebas, procedimientos y criterios de
aceptacin que ayudan a asegurar la identidad, contenido,
calidad y pureza del artculo. Para los requisitos generales
relacionados con secciones especficas de la monografa, ver
la seccin 5, Componentes de las Monografas.
Debido a que, en ocasiones, las monografas no propor-
cionan normas para todas las caractersticas relevantes, algu-
nas sustancias oficiales pueden ajustarse a las normas USP o
NF, pero diferir en lo que respecta a propiedades no norma-
lizadas que son relevantes para su uso en preparaciones es-
pecficas. Para asegurar la intercambiabilidad en esos casos,
se recomienda a los usuarios comprobar la equivalencia fun-
cional o determinar tales caractensticas antes de su uso.
4.10.1 O. Aplicabilidad de los Procedimientos de Prueba
Una sola monografa puede incluir distintas pruebas, pro-
cedimientos y/o criterios de aceptacin que reflejen atribu-
tos de diversos artculos del fabricante. Tales alternativas
pueden presentarse para distintos casos de formas polimrfi-
cas, impurezas, hidratos y disoluciones. Las monografas in-
dican las pruebas, procedimientos y/o criterios de acepta-
cin que se deben usar, as como el etiquetado requerido.
Una prueba en una monografa puede contener y requerir
procedimientos mltiples. Sin embargo, se pueden incluir
mltiples procedimientos en monografas particulares espec-
ficamente con el objetivo de asegurar la disponibilidad de
un procedimiento adecuado para un producto en particular.
En dichos casos, se incluir en la monografa una declara-
cin de etiquetado que indique la aplicacin adecuada de
los procedimientos. No se requiere una declaracin en el
etiquetado si se usa la Prueba 1.
4.10.11. Pruebas de Disolucin, Desintegracin y
Liberacin de Frmacos
La monografa puede incluir mltiples pruebas de Disolu-
cin, Desintegracin o Liberacin de Frmacos. El orden en
el que se presentan estas pruebas en la monografa se basa
en el orden en el que fueran aprobadas por el Comit de
Expertos pertinente para su inclusin en la monografa. La
Prueba 1 no es necesariamente la prueba para el producto
innovador o para el producto de referencia. El cumplimiento
con alguna de las pruebas no garantiza la bioequivalencia ni
la biodisponibilidad.
4.10.20. Criterios de Aceptacin
Los criterios de aceptacin consideran errores analticos y
variaciones inevitables durante la fabricacin y preparacin
magistral, as como el deterioro hasta un grado considerado
aceptable en condiciones prcticas. La existencia de criterios
de aceptacin farmacopeicos no constituye razn para ase-
verar que una sustancia oficial cuya pureza se aproxima al
100 por ciento "excede" la calidad farmacopeica. De igual
manera, el hecho de que un artculo se haya preparado
usando criterios ms estrictos que los especificados en la
monografa no constituye una razn vlida para aseverar
que el artculo "excede" los requisitos farmacopeicos.
Un producto oficial debe formularse con la intencin de
suministrar el 1 00 por ciento de la cantidad de cada ingre-
diente declarado en la etiqueta. Cuando debido a requisitos
legales aplicables, se requiera que la cantidad mnima de
Advertencias GPnPmiP'> xv
una sustancia presente en un suplemento diettico sea ma-
yor que el criterio de aceptacin inferior permitido por la
monografa, el criterio de aceptacin superior de la mono-
grafa puede incrcmcnt..ir5c en unJ cantidad
correspondiente.
Los criterios de aceptacin especificados en las monogra-
fas individuales y en los captulos generales para preparacio-
nes magistrales se basan en los atributos de calidad que se
espera podran caracterizar un artculo preparado magistral-
mente a partir de frmacos e ingredientes a granel de
acuerdo con los procedimientos establecidos o con los prin-
cipios reconocidos de buenas prcticas de preparacin ma-
gistral descritos en estos compendios.
4.20. Captulos Generales
A cada captulo general se le asigna un nmero que apa-
rece entre parntesis angulares junto al ttulo (p.ej.: Croma-
tografa (621 >). Los captulos generales pueden contener lo
siguiente:
Descripciones de pruebas y procedimientos para su apli-
cacin en monografas individuales,
C?escripciones y e_specifica_ciones de condiciones y prc-
ticas de preparac1on magistral,
Informacin general para la interpretacin de requisitos
farmacopeicos,
Descripciones de prcticas generales de almacena-
miento farmacutico, dispensacin y envasado, o
Guas generales para fabricantes de sustancias oficiales o
productos oficiales.
Cuando una monografa hace referencia a un captulo ge-
neral, los criterios de aceptacin pueden presentarse des-
pus de dos puntos.
Algunos captulos pueden servir como descripciones gene-
rales introductorias de una prueba o tcnicas analticas. Ade-
ms, pueden hacer referencia a otros captulos generales
que contengan tcnicas, detalles de los procedimientos y,
en ocasiones, criterios de aceptacin.
5. COMPONENTES DE LAS MONOGRAFAS
5.1 O. Frmulas Moleculares
Las frmulas moleculares de los ingredientes activos que
se usan en la definicin del contenido requerido de un art-
culo farmacopeico tienen por objeto designar las entidades
qumicas, tal como aparecen en el nombre qumico com-
pleto del artculo, con una pureza absoluta (100 por ciento).
5.20. Sustancias Agregadas
Las sustancias agregadas se presumen inadecuadas para
su inclusin en un artculo oficial y por lo tanto quedan
prohibidas siempre que: (1) excedan la cantidad mnima re-
querida para lograr el efecto deseado; (2) su presencia
afecte la biodisponibilidad, la eficacia teraputica o la seguri-
dad del artculo oficial; o (3) interfieran con las pruebas o
valoraciones prescritas para determinar el cumplimiento de
las normas farmacopeicas.
El aire contenido en el envase de un artculo oficial puede
extraerse o reemplazarse por dixido de carbono, helio, ar-
gn o nitrgeno, o una mezcla de estos gases, siempre que
sea apropiado. No es necesario declarar en el etiquetado el
uso de alguno de dichos gases.
5.20.10. Sustancias Agregadas, Excipientes e Ingredientes
en Sustancias Oficiales
Las sustancias oficiales pueden contener nicamente las
sustancias agregadas especficas permitidas por la monogra-
fa individual. Si se permite tal adicin, la etiqueta debe indi-
car los nombres y las cantidades de las sustancias
agregadas.
5.20.20. Sustancias Agregadas, Excipientes e Ingredientes
en Productos Oficiales
A menos que se especifique algo diferente en la monogra-
fa individual, pueden agregarse sustancias y excipientes
adecuados tales como agentes antimicrobianos, bases far-
macuticas, transportadores, recubrimientos, saborizantes,
conservantes, estabilizantes y vehculos a un producto oficial
para mejorar su estabilidad, utilidad o apariencia, o para fa-
cilitar su preparacin.
xvi Advertencias Generales
Se pueden emplear excipientes y sustancias agregadas ex-
clusivamente para impartir color a los productos of1e1ales,
excepto para aqu.l los destinados a la administracin paren-
teral u oftlmic-il, siempre que cumplan con !Js rcgl<imcnta-
ciones de la FDA para el uso de colorantes y que sean ade-
cuadas en todos los otros aspectos. (Ver tambin Sustancias
Agregadas en Inyectables (1 )). . .
En la preparacin de ungentos y supositorios, se pueden
variar las proporciones de las sustancias que constituyen la
base para mantener la consistencia adecuada ~n diferentes
condiciones climticas, siempre que no se vane la concen-
tracin de los ingredientes. activos y gue no se afe~te la
biodisponibilidad, la eficacia terapeut1ca o la segundad de la
preparacin.
5.20.20.1. En Preparaciones Magistrales . Prcticamente insoluble o
Las preparaciones magistrales para las que ,se proporciona
una composicin completa deben contener un1camente los
ingredientes indicados en las frmulas, a menos que se ex-
cepte especficamente en este documento. o _en la mono-
grafa individual. Se pueden prese~tar desv1ae1ones er:i,los
procesos especificados o en los metodos de p~eparac!on ma-
gistral, pero no en sus ingredientes o proporciones, ~1empre
que la preparacin final cumpla con las _n_ormas pertinentes
y se prepare siguiendo el proceso espec1f1~?do. . .
Cuando la monografa de una preparac1on magistral exige
una cantidad de un ingrediente expresada con respecto a la
sustancia seca, no es necesario secar el ingrediente antes de
utilizarlo, siempre que se tome debida cuent? del ag~a u
otras sustancias voltiles presentes en la cantidad utilizada.
Existen formulaciones de alcohol especialmente desnatura-
lizado que se usan de acuerdo con los estatut_os y reglamen-
taciones federales de la Interna! Revenue Serv1ce, (IRS, por
sus siglas en ingls, Oficina de Recaudacin de lmp~estos
del Gobierno de los Estados Unidos). Una formulae1on apro-
piada de alcohol especia_lme_n_te desnaturaliz~do puede susti-
tuir al Alcohol en la fabncac1on de preparaciones farmaco-
peicas destinadas para us<? interno o pa;~ uso tpico,
siempre que el desnatural1zante sea vol~til y no q~ede en el
producto terminado. Un producto terminado destinado a
aplicacin tpica sobre la piel puede contener alcoh~I espe-
cialmente desnaturalizado, siempre que e~ ,desnatural1zante.
sea un ingrediente normal en la preparac1on o una. sustancia
agregada permitida; en ambos casos, el desn_a,tura!1z~nte se
debe identificar en la etiqueta de la preparac10~ ~op1_c?.
Cuando se indique un proceso en la monograf1a ind1v1dual,
toda preparacin elaborada magistralmente cc;>n alcoh~I des-
naturalizado debe ser idntica a la que se obtiene mediante
el proceso indicado.
5.20.20.2. En Suplementos Dietticos
Pueden agregarse ingredi0ntes adicionales. los productos
de suplementos dietticos siempre que tales 1ngr~d1entes:
(1) cumplan con los requisitos reglamentarios aplicables y.
(2) no interfieran con las valoraciones y las pruebas presen-
tas para determinar el cumplimiento de las normas
farmacopeicas.
5.30. Descripcin y. Solubilidad . . . ,
Una prueba cuantitativa de solubilidad se considerara
como una prueba de pureza, nicamente cyando se des-
cribe y designa como tal en una monograf1a. . Las pruebas para determinar la prese!lc!a de sustanc.1as ex-
Una monografa puede incluir informacin relacionada
con la descripcin del artculo .. La informaci~n de "des~;ip
cin y solubilidad" correspondiente a un articulo tam.b1en
aparece en la tabla de referencia Descripcin y Solub1l1dad .
Relativa de Artculos de la USP y del NF. La tabla de referencia
indica slo las propiedades de los artculos que cu_mple~ con
las normas de la monografa. La tabla de referene1a esta
destinada principalmente para aqullos que usan, elaborar:i y
dispensan frmacos y/o artculos relaciona<;Jos. Aur:ique la in-
formacin proporcionada en las monograf1as y ! informa-
cin en la tabla de referencia puede ayudar 1nd1.rectamen~e
a la evaluacin preliminar de un artculo, dicha 1nformac1on
no constituye en s misma una norma o prueba de pureza.
USP 38
La solubilidad aproximada de. una sustan_cia farmacopeica
se indica mediante uno de los s1gu1entes terminas
descriptivos:
1
Partes de Disolvente
1
Requeridas para
Trmino Descrlotlvo 1 Parte de Soluto
Menos de 1
Muv soluble
Fcilmente soluble De 1 a 10
Soluble De 1O a 30
Moderadamente soluble De 30 a 100
Poco soluble De 100 a 1000
Muv ooco soluble De 1000 a 1O 000
Mayor que o igual a
Insoluble 10 000
5.40. Identidad
La prueba farmacopeica bajo el ttulo ldentida~. o Identifi-
cacin se proporciona como u,na ay_ud~ para "'.enf1car la .
identidad de los artculos segun se indica, p.ej., en la eti-
queta de sus envases y para establecer si se trata del art-
culo nombrado en USP-NF. La prueba de Identidad o Identi-
ficacin para un artculo en particular puede comprender
uno o ms procedimientos. Cuando se lle~a a ~,abo una
prueba farmacopeica de Identidad o ldent1f1caC10'}, ~e deben
cumplir todos los requisitos de tod_o_s los proced1m1entos. es-
pecificados para satisfacer los requ1s1tos d~ _la prueba. El in-
cumplimiento de un artculo con los reqws1tos de una
prueba de Identidad o Identificacin prescrita (es ~ec_ir, que
no cumpla con los requisitos d~ todos los p~oc~d1m1entos
especificados que componen dicha prueba) indica que el
artculo est rotulado incorrectamente y/o adulterado.
5.50. Valoracin
Las pruebas de valoracin para preparaciones m?9istrales
no han sido concebidas para evaluar una preparac1on ~-a
gistral antes de su dispensacin, sino como pr~ebas of1c1ales
para casos en los que exista duda o controversia acerca de
la conformidad de la preparacin con las normas oficiales.
5.50. 1O. Unidades de Potencia (Biolgica)
Para las sustancias que no pueden ser caracterizadas com-
pletamente por m_e9ios qumi~os y fsicos, pued_e s~r n_e~esa
rio expresar la act1v1<;Jad en unidades 9e po~ene1a b1olog1ca,
definidas por un estandar de referencia designado como pa-
trn oficial.
Las unidades de potencia biolgica defi_nidas po; la Orga-
nizacin Mundial de la Salud (OMS) mediante Estandares
Biolgicos Internacionales y Preparaciones ~iolgicas lnter:
nacionales de Referencia se denominan Unidades Internacio-
nales (UI). Las monografas se refierer:i a las unidad,~s d_efini-
das mediante Estndares de Referencia USP como Unidades
USP". Para los productos biolgicos, existan o no ~n.idades
Internacionales o Unidades USP (ver Productos 81olog1cos
(1 041)), las unidades de potencia se definen mediante los
correspondientes Estndares de los Estados Unidos (U.S.
Standards) establecidos por la FDA.
5.60. Impurezas y Sustancias Extraas . .
traas e impurezas se establecen para l1m1tarlas a cantidades
que no sean objetables en las cond1c1ones no~males de em-
pleo del artculo (ver tambin Impurezas en Farmacos y Pro-
ductos Farmacuticos (1086)). , . . .
Adems de las pruebas prescritas en la_ mc;>nograf1a 1nd1v1-
dual, se deben aplicar otras pruebas y entenas de acepta-
cin adecuados para detectar y controlar impurezas que pu-
dieran resultar de cambios en los mtodos de
procesamiento o que provengan de fuentes externas,, .
cuando su presencia no concu~r~e con las b,uer:ias practicas
de fabricacin o las buenas practicas farmaceut1cas
aplicables.
USP 38
5.60.10. Otra~ Impurezas en los Artculos de la USP y el
NF
Cuando una monografa de los compendios USP o NF in-
Lluye ui1a valu1aci11 v 1-1rueLci de impurezas Og5r.iGJS C-
matogrfica, diferente de una prueba de disolventes resi-
duales, y el procedimiento de la monografa no detecta una
impureza presente en la sustancia, se deben expresar la can-
tidad e identidad de la impureza, si fueran ambas conoci-
das, bajo el encabezado Otra(s) lmpureza(s) en el etiquetado
(certificado de anlisis) de la sustancia oficial.
La presencia en una sustancia oficial de cualquier impu-
reza no declarada en el etiquetado constituye una desvia-
cin de la norma si el contenido es de O, 1% o mayor. La
suma de las Otras Impurezas combinada con las impurezas
detectadas por los mtodos de la monografa no puede ex-
ceder del 2,0% (ver Impurezas Comunes (466)), a menos
que en la monografa se indique algo diferente.
Las siguientes categoras de frmacos quedan excluidos de
los requisitos de Otras Impurezas:
productos de fermentacin y derivados semisintticos
obtenidos a partir de ellos,
radiofrmacos,
productos biolgicos,
productos obtenidos por biotecnologa,
pptidos,
productos botnicos y
productos crudos de origen animal o vegetal.
No debe incluirse ninguna sustancia conocida como t-
xica en Otras Impurezas.
5.60.20. Disolventes Residuales en los Artculos de la USP
y el NF
Todos los artculos de los compendios USP y NF estn su-
jetos al control pertinente de disolventes residuales, incluso
cuando la prueba no est indicada en la monografa indivi-
dual. Los disolventes que se empleen durante los procesos
de fabricacin deben ser de calidad adecuada. Asimismo, se
debe tomar en consideracin la toxicidad y el nivel residual
de cada disolvente y limitar los disolventes conforme a los
principios definidos y los requisitos especificados en Disol-
ventes Residuales (467), segn los mtodos generales indica-
dos en dicho captulo u otros mtodos adecuados.
5.60.30 Impurezas Elementales en Medicamentos y
Suplementos Dietticos USP
LNOTA-EI captulo general (232) se public el 1 de junio
de 2012 en el Segundo Suplemento de USP 35-NF 30 y se
oficializ el 1 de febrero de 2013. El captulo general
(2232) se public el 1 de febrero de 201 3 en el Primer
Suplemento de USP 36-NF 31 y se oficializ el 1 de agosto
de 201 3. No obstante, su fecha de aplicabilidad a los artcu-
los reconocidos en los compendios USP-NF es el 1 de di-
ciembre de 2015, fecha de oficializacin de esta disposicin
de las Advertencias Generales.]
Las impurezas elementales se controlan en los medica-
mentos oficiales de acuerdo con los principios y requisitos
especificados en el captulo Impurezas Elementales-Lmites
(232). Ver tambin el captulo (232) para informacin rela-
cionada con frmacos y excipientes. Los contaminantes ele-
mentales se controlan en los suplementos dietticos oficiales
de acuerdo con los principios y requisitos especificados en
Contaminantes Elementales en Suplementos Dietticos (2232).
(Oficial a partir del 1 de diciembre de 2015)
5.70. Pruebas de Desempeo
Cuando las determinaciones de uniformidad de contenido
se hayan efectuado usando la misma metodologa analtica
especificada en la Valoracin, tomando debida cuenta de las
diferencias en la preparacin de la muestra, el promedio de
todas las determinaciones individuales de uniformidad de
contenido puede usarse como el resultado de la Valoracin.
5.80. Estndares de Referencia USP
Los Estndares de Referencia USP son materiales autnti-
cos que han sido aprobados como adecuados para su uso
como estndares de comparacin en las pruebas y valora-
ciones de la USP o el NF. (Ver Estndares de Referencia USP
(11 )). Cuando una prueba o valoracin de los compendios
4clvertenrias Genemlt>s xvii
USP o NF indique el uso de un Estndar de Referencia USP,
slo se considerarn concluyentes los resultados obtenidos
usando el Estndar de Referencia USP especificado. Cuando
Ul ro(cdirncnto cxijJ e! u~o de un artfculo oficia! y no de
un Estndar de Referencia lJSP rnmo material de referencia,
se debe utilizar una sustancia que satisfaga todos los reque-
rimientos indicados para dicho artculo en la monografa ofi-
cial. Si alguna norma nueva de la USP o del NF requiere el
uso de un Estndar de Referencia USP nuevo que an no
est disponible, dicha parte de la norma que contiene el
requisito no ser oficial hasta que el material de referencia
USP especificado est disponible.
Salvo que la etiqueta del estndar de referencia indique
una potencia o contenido especficos, se asume que el es-
tndar de referencia tiene una pureza del 100,0% para la
aplicacin oficial. A menos que se indique algo diferente en
el procedimiento de la monografa individual o en un cap-
tulo general, los Estndares de Referencia USP deben usarse
de acuerdo con las instrucciones de sus etiquetas.
Cambio en la redaccin:
6. PRCTICAS Y PROCEDIMIENTOS DE PRUEBA
6.10. Prcticas Seguras de Laboratorio
Al realizar procedimientos farmacopeicos, se deben seguir
prcticas seguras de laboratorio, las cuales incluyen medidas
precautorias, equipo de proteccin y prcticas de trabajo
acordes a las sustancias qumicas y procedimientos usados.
Antes de realizar cualquier procedimiento descrito en los
compendios, el analista debera conocer los peligros asocia-
dos con las sustancias qumicas y las tcnicas y medios de
proteccin contra dichos riesgos. Estos compendios no tie-
nen como objetivo describir tales peligros o medidas de
proteccin.
6.20. Procedimientos Automatizados
Los procedimientos automatizados y manuales que em-
plean los mismos fundamentos qumicos se consideran equi-
valentes.
6.30. Mtodos y Procedimientos Alternativos y
Armonizados
Se pueden usar mtodos y/o procedimientos alternativos
que proporcionen alguna ventaja en cuanto a exactitud,
sensibilidad, precisin, selectividad o adaptabilidad a la au-
tomatizacin o a la reduccin de datos computarizados o en
otras circunstancias especiales. Dichos mtodos y procedi-
mientos alternativos se deben validar segn se describe en
el captulo general Validacin de Procedimientos Farmacopei-
cos (1225) y se debe demostrar que proporcionan resultados
equivalentes o mejores. Solamente aquellos resultados obte-
nidos por los mtodos y procedimientos suministrados en
los compendios sern concluyentes.
Se recomienda remitir a la USP los procedimientos alter-
nativos para su evaluacin como reemplazos potenciales o
para agregarlos a las normas (ver la seccin 4.1 O.
Monografws).
En ciertos captulos generales se indica que el texto en
cuestin est armonizado con el texto correspondiente de la
Farmacopea Europea y/o la Farmacopea japonesa y que estos
textos son intercambiables. Por ello, si el cumplimiento de
un requisito de una sustancia o preparacin fuera determi-
nado usando un mtodo intercambiable de una de estas
farmacopeas, tambin debera cumplir los requisitos de la
USP. Sin embargo, si apareciera una diferencia, o en el caso
de controversia, slo el resultado obtenido mediante el pro-
cedimiento y/o metodo dado en la USP sera concluyente.
6.40. Con Respecto a la Sustancia Seca, Anhidra,
Incinerada o Exenta de Disolventes
A menos que se especifique algo diferente, todos los cl-
culos se efectan con respecto a !a sustancia "tal como se
encuentra".
Se pueden realizar los procedimientos de las pruebas so-
bre la sustancia sin secar o sin incinerar y calcular los resul-
tados con respecto a la sustancia seca, anhidra o incinerada
xviii Advertencias CPnPrnlp\
siempre que la monografa indique una prueba para Prdida
por Secado, Determinacin de Agua o f'rdida por l11cineruci11,
respectivamente. Cuando la presencia de humedad u otro
mntPrinl vnl~ti! puede !nterferir con e! pru\_cdi11icnto, la iY10-
noqrafa individual especifica que es necesario secar la sus-
tancia con anterioridad, paso que es obligatorio.
La expresin "exenta de disolventes" significa que se de-
ben corregir los clculos por la presencia de disolventes co-
nocidos, segn se determinan usando los mtodos descritos
en Disolventes Residuales (467), a menos que la monografa
proporcione una prueba de lmite de disolventes residuales.
La expresin "previamente secada(o)" sin otro calificativo
significa que la sustancia se debe secar segn se indica en
Perdida por Secado (731) o Determinacin de Agua (921) (de-
terminacin gravimtrica).
Cuando se indique secar al vaco sobre un desecante, se
debe utilizar un desecador al vaco, una pistola para secado
al vaco u otro instrumento apropiado para secado al vaco.
6.40.1 O. Incinerar hasta Peso Constante
"Incinerar hasta peso constante" significa que deber con-
tinuarse la incineracin a 800 25, a menos que se indique
algo diferente, hasta que dos pesadas consecutivas, la se-
gunda de las cuales se realiza despus de un periodo adicio-
nal acorde con la naturaleza y cantidad del residuo, no difie-
ran en ms de 0,50 mg por g de sustancia tomada.
6.40.20. Secado hasta Peso Constante
"Secado hasta peso constante" significa que deber conti-
nuarse el secado hasta que dos pesadas consecutivas, la se-
gunda de las cuales se realiza despus de un periodo adicio-
nal de secado acorde con la naturaleza y cantidad del
residuo, no difieran en ms de 0,50 mg por g de sustancia
tomada.
6.50. Preparacin de Soluciones
6.50. l O. Filtracin
Cuando en un procedimiento se indica "filtrar" sin otro
calificativo, el lquido se debe pasar a travs de un papel de
filtro adecuado o dispositivo equivalente hasta que el fil-
trado sea transparente. Dados los posibles efectos del filtro,
se pueden desechar los volmenes iniciales del filtrado.
6.50.20. Soluciones
A menos que se especifique de otro modo, todas las solu-
ciones deben prepararse con Agua Purificada. Las soluciones
para mediciones cuantitativas deben prepararse us.a_ndo ana-
litos medidos o pesados con exactitud (ver la secc1on 8.20.
Aproximadamente).
Una expresin tal como "(l en 1 O)" significa que 1 parte
en volumen de un lquido debe diluirse con, o que 1 parte
en peso de un slido debe disolverse en,. rnR co1-ago-2014) una
cantidad suficiente de diluyente o disolvente para que el
volumen de la solucin final sea de 1 O partes medidas en
volumen. Expresiones similares a "(20:5:2)" significan que los
nmeros respectivos de partes, medidas en volumen, .de. los
lquidos sealados deben mezclarse, a menos que se 1nd1que
algo diferente.
6.50.20.1. Ajuste de Soluciones
Cuando un procedimiento exige una concentracin espe-
cfica, se puede usar una solucin con otra normalidad. o
molaridad, siempre que se tenga en cuenta la d1ferenc1a en
la concentracin y no se aumente el error de la medicin.
En las pruebas y valoraciones se pueden tomar cantidades
proporcionalmente mayores o menores que los espec1f1cados
de las sustancias a analizar y los correspondientes Estndares
de Referencia, siempre y cuando las mediciones resulten con
una exactitud equivalente o mejor. . o tipos siempre que sean adecuados para el uso pretendido.
A menos que se indique algo diferente, las concentracio-
nes de analitos deben prepararse de modo que queden den-
tro del diez por ciento (10%) del valor indicado. En el caso
particular de que un procedimiento se adapte al intervalo
de trabajo de un instrumento, las concentraciones de las
soluciones pueden diferir del valor mdicado en ms de diez
por ciento (1 0%), realizando los cambios apropiados en los
clculos asociados. Todo cambio realizado debe quedar den-
tro del intervalo validado del instrumento.
USP 38
uancio se indica el ajuste del pH mediante un cido o
base y no se indica la concentrac1on, se pueden usar con-
centraciones apropiadas de dicho acido o base.
6.50.20.2. Soluciones Reactivo
La ir1furniacin acerca de las Soluciones Reactivo (SR) se
encuentra en el apartado Soluciones Reactivo en la. seccin
Reactivos, Indicadores y Soluciones de los compendios
USP-NF. El uso de una Solucin Reactivo alternativa o cam-
bios en la Solucin Reactivo utilizada puede requerir de
validacin.
6.50.20.3. Soluciones Indicadoras
Cuando se especifica el uso de una SR indicadora en un
procedimiento, se deben agregar aproximadamente 0,2 mL
3 gotas de dicha solucin, a menos que se indique algo
diferente.
6.60. Unidades Necesarias para Completar una Prueba
A menos que se especifique algo diferente, se debe tomar
un nmero suficiente de unidades para asegurar un resul-
tado analtico adecuado.
6.60.1 O. Tabletas
Cuando en el procedimiento de una monografa de Table-
tas se indica pesar y reducir a polvo fino no menos de un
cierto nmero de Tabletas, se entiende que se debe pesar y
reducir a polvo un nmero contado de Tabletas. La porcin
tomada de Tab.letas reducidas a polvo debe ~er representa-
tiva del total de Tabletas y pesada con exactitud.
6.60.20. Cpsulas
Cuando en el procedimiento de una monografa de Cp-
sulas se indique vaciar, tan completamente como sea posi-
ble, el contenido de no menos de cierto nmero de Cpsu-
las, se entiende que se debe abrir cuidadosamente un
nmero contado de Cpsulas y se debe retirar cuantitativa-
mente, combinar, mezclar y pesar con exactitud el. conte-
nido de las mismas. La porcin tomada del contenido de las
Cpsulas debe ser representativo del contenido total de las
Cpsulas y pesado con exactitud.
6.70. Reactivos
La ejecucin adecuada de las pruebas y valoraciones far-
macopeicas y la confiabilidad de los resultados dependen,
en parte, de la calidad de los reactivos .ublizados en. estos
procedimientos. A menos que se espeofrque algo d1f~rente,
se deben usar reactivos que cumplan con lo establecido en
las especificaciones de la edicin vigente de Reagent Chemi-
cals publicada por la American Chemical Society (ACS). .
Cuando tales especificaciones no existan o cuando por dis-
tintas razones la pureza requerida de un reactivo fuera dife-
rente se suministran especificaciones farmacopeicas de reac-
1
tivos de calidad aceptable (ver la seccin Reactivos,
Indicadores y Soluciones en USP-NF). Los reactivos no trata-
dos por ninguna de estas especificaciones deben ser de
grado adecuado para la realizacin del mtodo de valora-
cin o prueba en cuestin. . . .
La inclusin en los compendios de estos reactivos, 1nd1ca-
dores y soluciones empleadas como reactivos, no implica
que tales sustancias tengan utilidad teraputica. Cua.lquier
referencia a la USP o el NF en sus etiquetados debe 1nclu1r
tambin el trmino "reactivo" o "grado reactivo". La USP
puede proveer reactivos en caso de que no se encuentren
comercialmente disponibles.
6.80. Equipo . . . ._
A menos que se indique algo diferente, la espec1f1cac1on
de un tamao o tipo definido de recipiente o de aparato es
slo una recomendacin. b po~ible usar otras dimensiof'.es
6.80.10. Aparatos de Medicin
Cuando se indique el uso de matraces volumtricos u
otros dispositivos para medir, pesar o clasificar en forma
exacta, se deben emplear estos equipos u otros que posean,
al menos, una exdctitud equivaienle.
6.80. 1O.1. Pipeta
Cuando se especifica el uso de una pipeta, sta se puede
sustituir por una bureta adecuada. Cuando se indica el uso
USP 38
rlP unil pipetil cillibrilda "para contener", sta se puede sus-
tituir por u11 111aliaL volumti-ico adecuado.
6.80.10.2. Proteccin contra la Luz
Luando se indique ci uso de reciienles cor1 roleLur 1
actnica o resistentPs a la lu1, 'iC' pueden utili1ar rC'cipientes
especialmente tratados para proteger el contenido contra la
luz, o recipientes transparentes que se hayan recubierto o
envuelto adecuadamente para volverlos opacos.
6.80.20. Instrumentos
Es posible sustituir el instrumento especificado por otro
instrumento siempre que el instrumento sustituto se base en
los mismos principios fundamentales de operacin y tenga
una sensibilidad y exactitud equivalente o mayor; tales ca-
ractersticas se deben calificar como apropiadas. Si se men-
cionara una marca o un proveedor de un material, un ins-
trumento o una pieza de equipo, o el nombre y la direccin
de un fabricante o distribuidor (por lo general pueden apa-
recer como notas al pie de pgina), esta informacin se
brinda slo por conveniencia y no implica aprobacin, aval
o certificacion.
6.80.20.1. Columnas y Tubos Cromatogrficos
El trmino "dimetro" se refiere al dimetro interno (DI).
6.80.20.2. Otros Tipos de Tubos y Tuberas
El trmino "dimetro" se refiere al dimetro externo (DE).
6.80.20.3. Bao de Vapor
Cuando se indique el uso de un bao de vapor, se usa
vapor vivo fluente u otra fuente de calor regulado a una
temperatura equivalente.
6.80.20.4. Bao de Agua
A menos que se especifique algo diferente, un bao de
agua requiere agua en ebullicin vigorosa.
6.80.30. Dispositivos de Medicin de Temperatura
Los dispositivos de medicin de temperatura adecuados
para las pruebas Farmacopeicas cumplen con especificacio-
nes que son rastreables a un estndar del NIST (Instituto
Nacional de Normas y Tecnologa de los EE.UU.) o equiva-
lente. Los dispositivos de medicin de temperatura pueden
ser del tipo lquido en vidrio o un tipo de indicador de
temperatura anlogo o digital, tal como un dispositivo de
temperatura con resistencia, termistor o termopar. La estan-
darizacin de termmetros se lleva a cabo en una frecuencia
de anlisis establecida con una temperatura estndar rastrea-
ble al NIST. Por ejemplo, se puede consultar la edicin vi-
gente de las normas El de la ASTM para termmetros de
lquido en vidrio.
7. RESULTADOS DE PRUEBAS
7.1 O. Interpretacin de los Requisitos
Los resultados analticos observados en el laboratorio (o
los calculados a travs de determinaciones experimentales)
se comparan con los criterios de aceptacin especificados
para determinar si el artculo cumple con los requisitos
farmacopeicos.
t-----------------------
Re uisito Farmaco eico
Limite de valoracin >98,0'l'o
--E-j-em~p~lo~s~d~e~R-e~d~o~n-d~e~o-d~e-V_a_l_o_re_s_N_u_m_=r~ic~o~s~~~-------- -_-Cu~:~ple ---~
para Comparacin con los Requisitos
Valor Sin Redondear
97,96%
Lmite de valoracion '. I 01,S'i'b
97,92%
97 95%
101,55%
101,46%
l~O~l~4=5~%~-----------~1~0~1~5~/c~--------~S~___ -~
Prueba de lmite <0,02% 0,025%
0,015%
o 027%
Prueba de lmite :.3 ppm 3,5 ppm
3,4 ppm
2,5 ppm
Advertencias Generales x1x
El valor de informe, que por lo general se obtiene combi-
nando valores de varias determinaciones individuales, se
compara con los criterios de aceptacin. El valor de informe
es el resu!tado fina! de un proced!rnient0 (omrlPtn rlP mPrli-
cin, segn se ha documentado.
Cuando los criterios de aceptacin se expresan de forma
numrica en estas Advertencias Generales mediante la espe-
cificacin de un lmite superior y/o inferior, los valores per-
mitidos incluyen a los valores especificados, pero no los va-
lores fuera del lmite o lmites. Los criterios de aceptacion se
consideran significativos hasta el ltimo dgito sealado.
7.10.5. Concentraciones Nominales en Ecuaciones
Cuando se especifica una "concentracin nominal", calcu-
lar la concentracin basndose en la cantidad declarada en
la etiqueta. En los procedimientos de valoracin, la correc-
cin por contenido de agua tpicamente se indica en la De-
finicin y en la etiqueta del Estndar de Referencia USP. Para
otros procedimientos, la correccin por contenido y/o po-
tencia valorados se realiza antes de usar la concentracion en
la ecuacin provista en la monografa.
7.10.10. Equivalencia en Procedimientos Volumtricos
Las instrucciones de los procedimientos volumtricos con-
cluyen con una declaracin de equivalencia entre el peso
del analito y cada mL de solucin volumtrica normalizada.
En tales equivalencias, se entender que el nmero de cifras
significativas en la concentracin de la solucin volumtrica
corresponde al del nmero de cifras significativas en el peso
del analito. Siempre que corresponda, se deben hacer co-
rrecciones en todas las valoraciones volumtricas basndose
en la determinacin con un blanco (ver Volumetra (541 )).
7.20. Reglas para Redondeo
Los valores observados o calculados deben redondearse al
mismo nmero de decimales que el expresado para el l-
mite. No deber efectuarse el redondeo antes de concluir
los clculos correspondientes para obtener el valor de in-
forme. Los clculos intermedios (p.ej., la pendiente de la
curva de linealidad) pueden redondearse para propsitos de
informe, pero si se requiere realizar clculos adicionales se
deben utilizar los valores originales sin redondear. Los crite-
rios de aceptacin son nmeros fijos y no se redondean.
Cuando se requiere redondear una cifra, se considera so-
lamente el dgito que se encuentra a la derecha del ltimo
lugar decimal en la expresin del lmite. Si este dgito es
menor de 5, se elimina sin cambiar el dgito que lo precede.
Si este dgito es igual o mayor a 5, se elimina y el dtgito
que lo precede se aumenta en 1.
8. TRMINOS Y DEFINICIONES
8.1 O. Abreviaturas
ER corresponde a un Estndar de Referencia USP.
SC corresponde a una Solucin Colorimtrica.
SR se refiere a una Solucin Reactivo.
SV corresponde a una Solucin Volumtrica estandari-
zada de conformidad con las instrucciones provistas en
Resultado Redondeado
98,0%
-- -
97,9%
98 0%
1 01,6%
S
No
1
101.5% S
0,03% No
0,02% Sr
o 03% No
4 ppm No
3 ppm ~1 __J
----- ---------------- _______ s_i__
3 ppm
xx AdVPrtmcias Generales
la monoqrafa individual o en la seccin Rmrtivos, Indi-
cadores y Soluciones de USP-NF.
8.20. Aproximadamente
[I trminu "dfJI uxillld<.idmente indrca una cantidad que
puede variar dentro del 10%.
Si se especifica una medicin como "medida con exacti-
tud" o "pesada con exactitud" se deben seguir las especifi-
caciones de los captulos generales Aparatos Volumtricos
(31) y Balanzas ( 41), respectivamente.
8.30. Contenido de Alcohol
Los porcentajes de alcohol, como los indicados en Conte-
nido de Alcohol, son porcentajes en volumen de C2HsOH a
15,56. Cuando se exige el uso de alcohol, alcohol etlico o
etanol en una frmula, prueba o valoracin, se debe usar el
artculo de la monografra Alcohol de la USP. Cuando se hace
referencia a "C2HsOH", significa etanol absoluto (100 por
ciento). Cuando un procedimiento exige alcohol deshidra-
tado, alcohol absoluto o alcohol anhidro, se debe usar el
artculo de la monografa Alcohol Deshidratado de la USP.
8.40. Pesos Atmicos
Los pesos atmicos usados para calcular pesos molecu-
lares y los factores en las valoraciones y en otras partes
donde stos aparezcan, son los establecidos por la Commis-
sion on Atomic Weights and lsotopic Abundances de la IU-
PAC (Comisin de Pesos Atmicos y Abundancias Isotpicas
de la Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada).
8.50. Determinaciones con Blancos
Cuando se indique realizar "cualquier correccin necesa-
ria" por medio de una determinacion con un blanco, tal
determinacin debe efectuarse usando las mismas cantida-
des de los mismos reactivos tratados de la misma manera
que la solucin o mezcla que contiene la porcin de sustan-
cia en anlisis, pero omitiendo dicha sustancia.
8.60. Concomitantemente
El trmino "concomitantemente" indica que las determi-
naciones o mediciones deben efectuarse en sucesin
inmediata.
8.70. Desecador
La instruccin "en un desecador" indica el uso de un reci-
piente cerrado hermticamente, de tamao y diseo ade-
cuados, que mantiene una atmsfera de bajo contenido de
humedad mediante un desecante adecuado, por ejemplo,
cloruro de calcio anhidro, perclorato de magnesio, pent-
xido de fsforo o gel de slice. Ver tambin la seccion 8.220.
Desecador al Vaco.
8.80. Logaritmos
Los logaritmos empleados son logaritmos en base 1 O.
8.90. Cepas Microbianas
Cuando se cita e identifica una cepa microbiana por el
nmero de catlogo ATCC, la cepa especfica debe em-
plearse directamente o, si se hacen cultivos sucesivos, no
deben usarse ms de cinco pasajes a partir de la cepa
original.
8.1 OO. Inapreciable
El trmino "inapreciable" indica una cantidad que no ex-
cede de 0,50 mg.
8.11 O. No menos de (NLT) y No ms de (NMT)
Las siglas en ingls "NLT" (not less than) significan y se
traducen como "no menos de". Las siglas en ingls "NMT"
(not more than) significan y se traducen como "no ms
de".
8.120. Olor
Los trminos "inodoro," "prcticamente inodoro," "con
un dbil olor caracterstico" y expresiones semejantes, indi-
can la evaluacin de una cantidad adecuada de material re-
cientemente abierto despus de la exposicin al aire durante
15 minutos. La asignacion de un olor es slo descriptiva y
no deber considerarse como una norma de pureza para un
lote particular de un artculo.
8.130. Por ciento
La expresin "por ciento" usada sin otros calificativos
significa:
USP 38
Porcentaje peso en peso, para mezclas de slidos y
semislidos;
Porcentaje peso en volumen, para soluciones o suspen-
siones de siidos en 1lqu1dos;
Porcentaje volumen en volumen, para ~oluciones de l-
quidos en lquidos; y
Porcentaje peso en volumen, para soluciones de gases
en lquidos.
Por ejemplo, una solucin al 1 por ciento se prepara disol-
viendo 1 g de un slido o semislido, o 1 mL de un lquido,
en disolvente suficiente para obtener 1 00 mL de solucin.
8.140. Concentraciones Porcentuales
Las concentraciones porcentuales se expresan segn se in-
dica a continuacin:
Porcentaje Peso en Peso (p/p) se define como el nmero
de g de un soluto en 100 g de solucin.
Porcentaje Peso en Volumen (p/v) se define como el n-
mero de g de un soluto en 100 mL de solucin.
Porcentaje Volumen en Volumen (v/v) se define como el
nmero de mL de un soluto en 100 mL de solucin.
8.150. Presin
La presin se determina usando un manmetro o bar-
metro adecuado, calibrado en trminos de la presin ejer-
cida por una columna de mercurio de la altura indicada.
8.160. Tiempo de Reaccin
El tiempo de reaccin es de 5 minutos a menos que se
especifique algo diferente.
8.170. Peso Especfico
El Peso especfico es el peso de una sustancia en aire a
25 dividido por el peso de un volumen igual de agua a la
misma temperatura.
8.180. Temperaturas
A menos que se indique algo diferente, las temperaturas
se expresan en grados centgrados (Celsius) y todas las me-
diciones se hacen a 25. Cuando se especifica calor mode-
rado, se indica toda temperatura no mayor de 45 (11 3 F).
8.190. Tiempo
A menos que se especifique algo diferente, las reglas para
redondeo, segn se describen en la seccin 7.20. Reglas
para Redondeo, se aplican a todos los tiempos especificados.
8.200. Transferir
El trmino "transferir" indica una manipulacin
cuantitativa.
8.21 O. Vaco
El trmino "al vaco" especifica la exposicin a una pre-
sin menor de 20 mm de mercurio (2,67 kPas), a menos
que se indique algo diferente.
8.220. Desecador al Vaco
Un "desecador al vaco" es un desecador que mantiene
una atmsfera de baja humedad a una presion reducida de
no ms de 20 mm de mercurio (2,67 kPas) o a la presin
indicada en la monografa individual.
8.230. Agua
8.230.1 O. Agua como Ingrediente de un Producto Oficial
Cuando aparece como un ingrediente en un producto ofi-
cial, el agua cumple con los requisitos de la monografa de
agua adecuada en la USP o el NF.
8.230.20. Agua en la Fabricacin de Sustancias Oficiales
En la fabricacin de sustancias oficiales, se puede usar
agua que cumpla con los requisitos para agua potable
(drinking water) establecidos en las reglamentaciones de la
U.S. Environmental Protection Agency (Agencia de Protec-
cin Ambiental de los Estados Unidos).
8.230.30. Agua en un Procedimiento Farmacopeico
Cuando se exige agua en un procedimiento farmaco-
peico, se entiende que debe emplearse el artculo Agua Puri-
ficada de la USP, a menos que se especifique algo diferente.
Lds definiciones de Agua de Alta Pureza y Agua Exenta de
Dixido de Carbono se encuentran en Envases-Vidrio (660).
Las definiciones de otros tipos de agua se encuentran en
Agua para Uso Farmacutico (1231 ).
USP 38 Advertencias Generales xx1

8.240. Pesos y Medidas - - - T Unidades Smbolo Comentarios

En general, )e emplea el Si)lerna lrllemacional Je Unida- _----- 1
deul1Lro
1
dl ____j__
~i~o (;l~fv~;:ge~~~ ~a ~~~1i~~:;1~,oeg'~1~~1e d~~ 11p~~d~s~~~111~-su- 1
1

1,
1 ml es-;~-;;; 1 c~1 ',
en ocasiones se deno-
res (Conferencia General de Pesos y Medidas). A los fines de mililitro ml 111lfla ce.
los compendios, el trmino "peso" se considera como sin-
nimo de "masa". r-------+--n_1_ic_r_ol_it_ro__--+------ _}JL ____________ _
La molalidad se representa por medio del smbolo m pre- Tempera-
cedido por un nmero que es el nmero de moles de soluto tura
contenidos en 1 kilogramo de disolvente. Celsius e
La molaridad se representa por medio del smbolo M pre- Cantidad
cedido por un nmero que es el nmero de moles de soluto de Sus-
contenidos en una cantidad de disolvente suficiente para tancia
preparar 1 litro de solucin. Histricamente referido
La normalidad se representa por medio del smbolo N como peso molecular
precedido por un nmero que es el nmero de equivalentes en gramos o peso
de soluto contenidos en una cantidad de disolvente sufi- f--------+~~-----1----
mol mol atmico en aramos
ciente para preparar 1 litro de solucin mili mol mmol
Listado de Smbolos y Prefijos comnmente usados para micromol u mol
unidades mtricas del SI y otras unidades:
femtomol fmol
Tambin referido como
Unidades Smbolo Comentarios
peso equivalente en
Lonaitud gramos. Se usa en el
metro m clculo de concentra-
centmetro cm cin de sustancia en
milmetro mm unidades de normali-
Anteriormente referido dad. Esta unidad ac-
micrmetro um como micrn tualmente ya no
representa la de uso
Anteriormente se usaba
preferido en qumica
el smbolo m (para
euuivalente Ea analtica o metroloaa.
nanmetro nm milimicrn)
mili-
nastriim laual a O 1 nm
equivalen-
Masa te mEq
kiloaramo ka Presin osmtica de
aramo a una solucin, relacio-
miliaramo ma nada con la concen-
El smbolo g se usa en tracin de una
la USP y el NF para re- os mol Osmol suslancia
presentar microgra- miliosmol mOsmol
mos, pero los Presin ____ _ - - - - - - - - - - - ____ __._ _ _ _ _ _ _ _ _ _

microgramos se pue- pascal Pa

den representar como
kilopascal kPa
"mcg" para propsi-
tos de etiquetado y libras por psi
prescripcin. El trmi- pulgada
no "gamma", simboli- cuadrada
~------+--"-=~~~-+------+-----------!

zado por la letra milmetro Igual a 133,322 Pa

griega y, se usa con de mer-
frecuencia para desig- curio mm Hu
nar al microgramo en Unidades
microgra- la literatura de bioqu- elctricas
mo 11n mica. amperio A
nanonramo nn voltio V
- -- - --
niconramo __Jlg___ ~
,. __________ _m_il_iv_o_lt_io_--+___m_V__________________________ _
Tambin referido como hercio Hz Unidad de frecuencia
la unidad de masa kilohercio
f------------ 1 - - - - - - - t - - - -kHz
- - - - r - - - - - _ _ _ _ _ _ _____,
atmica unificada y es
meqahercio MHz
l__-----+--'-"="-'-'-=-"=--+--~~~-t-----------------l
igual a 1/12 veces !a
1 1 electronvol-
1 ma'a de un tomo no
enlazado de carbono- tio eV
dalton Da 12. kiloelec-
[ lronvollio keV
kilodalton kDa
Tiemoo 1 megaelec-

'euundo s ~ ____ -+--"-lr-"o'--'n-'-v_o"'l""ti-"o--+---~M~e~V~-+----------------l

minuto m1n 1 Radiacin 1 ----- -------- -- ------ Unidad del SI p~-ra-1;
hora h 1
actividad de radionu-
Volumen
--n~--~,-
1 1 becquerel10 1 Bq cle1dos
es igual a 1000 kilobecque-
i1' (centmetros c-
L___ _ _ _ _______:_r~e~lio"------'---"k~Ba~--~-------------
lilro ______L _ _L_ cm).
xxii Advertenrim Genemles USP 38

[___=+
1
1 1
Unidades
n1eyduec-
+-~1111!0~ ;-~;;;~~~!_(!s-===J
I 1
que aoarezcan diren;imPntr rnbrr el envase primario de un
cirtculo, ~olne o dentro del empcique o envoltorio, secunda-
1 yuereliu 1 rvrng 1
rio, con excepcin de los embalajes externos destinados
para el uan~p01le. .:I l1111i11u "eliyueld" Jei<:Jlld ci parte dei
9'9""~ GB i
"f
. f
_ gtJ__Cr_c_l(l___
f
Cj____ 1 1 etiquetado que se encuentra sobre el envase primario.
----
-- -
Los embalajes para el transporte que contengan un solo
artculo se etiquetan por lo menos con la identificacin del
1 depoco
ad"'J lo "'""' 1
rad1onucle1dos
producto (excepto los artculos controlados), el nmero de
ue no forma parte
lote, la fecha de caducidad y las condiciones de almacena-
curio C1 del SI
miento y distribucin, salvo que dicho envase sea tambin
milicurio mCi el envase primario o la parte exterior del empaque desti-
microcurio uCi nado al consumidor.
nanocurio nCi Adems de los requisitos de etiquetado establecidos en
Otros estos compendios, los artculos estn sujetos al cumpli-
aceleracin miento de otras normas de etiquetado que puedan promul-
debida a Usada para expresar la gar entidades gubernamentales.
la grave- velocidad de centrifu- 10.40.10. Cantidad de Ingrediente por Unidad de Dosifi-
dad q,, oacin. cacin
revolucio- Usada ara expresar la El contenido de un producto farmacutico se expresa en
nes por velocidad de cenlrifu- la etiqueta del envase en trminos de porcentaje, microgra-
minuto mm aacin. mos, miligramos o gramos del frmaco, o de su parte tera-
puticamente activa, de acuerdo con la forma usada en el
ttulo del artculo, a menos que se indique algo diferente en
la monografa individual. En el etiquetado se indican los
Prefijos Seleccionados del SI
---- ------- ---- nombres y cantidades equivalentes tanto del frmaco como
Nombre Smbolo Factor de su parte activa.
qiqa G 10'' Los artculos oficiales en cpsulas, tabletas u otras unida-
mea a M 106 des de dosificacin debern etiquetarse de forma tal que
kilo k 10 3
expresen la cantidad de cada ingrediente activo o nutriente
reconocido contenido en cada unidad; excepto cuando se
deci d 10 1
trate de soluciones o suspensiones orales envasadas en dosis
centi e 10-2 nicas, ya sea que stas se suministren como preparaciones
mili m 1o l lquidas o preparaciones lquidas reconstituidas a partir de
micro u 1o 6 slidos, por la adicin de un volumen dado de un diluyente
nano n 1o 9 especfico, cuyas etiquetas indicarn la cantidad de cada in-
oico D 1o 12
grediente activo o nutriente reconocido extrable en las con-
diciones indicadas en Volumen de Entrega (698). Para los
femta f 10 1-'
productos farmacuticos oficiales que no se presentan en
unidades de dosificacin se debe expresar en el etiquetado
9. PRESCRIPCIN Y DISPENSACIN la cantidad de ingrediente activo por mililitro o por gramo,
9.10 Uso de Unidades Mtricas o el porcentaje de cada ingrediente (ver 8.140. Concentra-
Las prescripciones de artculos farmacopeicos se escribirn ciones Porcentuales), excepto en el caso de los lquidos ora-
usando unidades mtricas para indicar la cantidad y/o con- les, o los slidos que se reconstituyan para producir lquidos
tenido deseados, a menos que se indique algo diferente en orales, que se pueden etiquetar alternativamente en trmi-
la monografa individual (ver tambin la seccin 5.50.1 O. nos de la cantidad de ingrediente activo por 5 mL del l-
Unidades de Potencia [Biolgica]). Si la prescripcin de una quido o del preparado reconstituido. A menos que se espe-
cantidad se hace en otro sistema de medidas, se debe dis- cifique algo diferente en una monografa o en un captulo,
pensar slo una cantidad equivalente a la prescrita usando tales indicaciones de contenido o cantidad debern decla-
el sistema mtrico. No se deben usar unidades del sistema rarse slo en unidades mtricas. Ver tambin 5.50.1 O. Uni-
apotecario en el etiquetado. dades de Potencia (Biolgica).
9.20 Cambios en Volumen 10.40.20. Uso de Ceros al Comienzo y al Final de una
En la dispensacin de medicaciones prescritas, pueden ob- Cantidad
viarse los pequeos cambios de volumen que se producen Con el fin de minimizar la posibilidad de errores en la
debido a variaciones en la temperatura ambiente. dispensacin y administracin de medicamentos, cuando la
10. CONSERVACIN, ENVASADO, ALMACENAMIENTO Y cantidad de ingrediente activo se exprese en nmeros ente-
ETIQUETADO ros, se debe indicar sin coma decimal seguida de ceros (por
[NOTA-Se han omitido las disposiciones relacionadas con ejemplo, indicar 4 mg [no 4,0 mg]). La cantidad de ingre-
el almacenamiento y envasado previamente tratadas en las diente activo que sea un nmero decimal menor de 1 se
Advertencias Generales, excepto la breve disposicin pro- escribir con un cero antes de la coma decimal (por ejem-
puesta a continuacin en el apartado 10.1 O; para compo- plo: 0,2 mg [no ,2 mg]).
nentes de envasado y condiciones de almacenamiento, ver 10.40.30. Etiquetado de Sales de Frmacos
el nuevo captulo general (659). De manera similar, las dis- Es un principio establecido que los artculos oficiales de-
posiciones relacionadas con el etiquetado tambin estn ben tener un nico ttulo oficial. Con el objeto de ahorrar
siendo trasladadas a un nuevo captulo general (7) y se omi- espacio en las etiquetas, y dado que lm '>mbolm qumicos
tirn en un futuro.] de las sales inorgnicas ms comunes son ronocidos por los
10.10. Envasado y Almacenamiento profesionales de la salud como sinnimos de sus formas es-
Todos los artculos en los compendios USP o NF estn critas, se permiten las siguientes alternativas para el etique-
sujetos a los requisitos de envasado y almacenamiento espe- tado de artculos oficiales que son sales: HCI para clorhi-
cificados en el captulo general Requisitos de Envasado y Al- drato; HBr para bromhidrato; Na para sodio y K para
macenamiento (659), a menos f]Ue se provean requisitos dis- potasio. Los smbolos Na y K se usan para abreviar el nom<
tintos en una monografa especfica. bre de las sales de cidos orgnicos; sin embargo, estos sm-
10.40. Etiquetado bolos no deben usarse cuando se emplea la preposicin
El trmino "etiquetado" se refiere a todas las etiquetas o "de" en el ttulo oficial, es decir cuando se denominan ofi-
marbetes y dems materiales escritos, impresos o grficos cialmente "de sodio" o "de potasio" (con el metal al co-
USP 38
mien_zo d~ la denominacin oficial en ingls), (p.ej., Feno-
barb1tal Sod1co, que se denomina Phenobarbital Sodium en
ingles, se_ p_uede abreviar a fenobarb1tal Na, pero no se de-
b~_'rd ('JcnlJr .s{~hcddtG de ~Jd pdd ubr-cv'iJ SJ!ic.i!:ito de So
dio, el cual se rlenomina Sorlium Salicylate en ingls).
10.40.40. Etiquetado de los Productos con Vitaminas
La etiqueta de los productos farmacuticos oficiales debe
in~icar su contenido de vitaminas expresado en unidades
metncas por unidad de dosificacin. Los contenidos de vita-
mina A, D y E tambin se pueden expresar en Unidades
USP. Las cantidades de vitamina A expresadas en unidades
mtricas hacen referencia a las cantidades equivalentes de
retino! (alcohol de vitamina A). La etiqueta de los suplemen-
tos nutricionales debe incluir un nmero identificatorio de
lote, de control o de partida.
10.40.50. Etiquetado de los Productos Botnicos
La etiqueta de una hierba u otro producto botnico desti-
nado para uso como suplemento diettico contiene la le-
yenda "Si est embarazada o en perodo de lactancia, con-
sulte a un profesional de la salud antes de usar este
producto".
1~.~0.60. Etiquetado de Preparaciones Parenterales y
Top1cas
. La etiqueta de una preparacin para uso parenteral o t-
pico debe especificar el nombre de todas las sustancias
agregadas (ver 5.20. Sustancias Agregadas y ver Etiquetado
en Inyectables (1 )) y, en caso de preparaciones para uso pa-
renteral, tambin debe especificar sus cantidades o propor-
ciones, excepto en el caso de sustancias agregadas slo para
a1ustar el pH o para lograr isotonicidad, para las cuales
puede mencionarse simplemente su presencia y la razn por
la cual se agregan.
10.40.70. Etiquetado de Electrlitos
La concentracin y dosificacin de electrlitos para tera-
pias de reemplazo (p.ej., cloruro de sodio o cloruro de pota-
sio), debe especificarse en la etiqueta en miliequivalentes
(mEq). Asimismo, la etiqueta del producto debe indicar la
cantidad del ingrediente o ingredientes, expresada en trmi-
nos de peso o concentracin porcentual.
10.40.80. Etiquetado de Alcohol
El contenido de alcohol en una preparacin lquida debe
especificarse en la etiqueta como porcentaje (v/v) de
C2HsOH.
10.40.90. Cpsulas y Tabletas Especiales
La etiqueta de cualquier Cpsula o Tableta destinada para
una administracin que no sea la ingestin oral de la unidad
entera, debe llevar una indicacin bien visible sobre el modo
de uso.
10.40.100. Fecha de Caducidad y Fecha Lmite de Uso
(N. del T. Las expresiones "fecha de caducidad", "fecha
de expiracin" y "fecha de vencimiento" son equivalentes.)
La etiqueta de un producto farmacutico oficial, o de un
suplemento nutricional o diettico oficial, debe llevar una
fecha de caducidad. Todos los productos deben exhibir la
fecha de caducidad de manera tal que pueda ser leda por
una persona comn en las condiciones normales de compra
y ~so. La fecha de caducidad debe aparecer en forma pro-
minente, conlraslando claramente con el fondo, o grabada
en relieve con nitidez, y debe ser fcilmente comprendida
(p.ej., "EXP 6/08," "Exp. junio de 2008", o "Caduca el 6/
08"). [NOTA-Para obtener informacin adicional, consultar
los Voluntary Codes and Guidelines of the Self-Medication ln-
dustry de la Consumer Healthcare Products Association.]
. Las monografas para ciertas preparaciones especifican
como se debe determinar la fecha de caducidad que apa-
rece en la etiqueta. En ausencia de un requisito especfico
en la> monografas individuales de un producto farmacu-
tico o un suplemento nutricional, la etiqueta debe llevar una
fecha de caducidad asignada para dicha formulacin y em-
paque en particular del artculo, con la siguiente excepcin:
no es necesario exhibir la fecha de caducidad en el caso de
productos farmacuticos o suplementos nutricionales enva-
sados en envases destinados a la venta sin receta mdica, en
AdVPrtpnrim C.PnPralP\ xxiii
cuyo etiquetado no se establezcan limitaciones de dosifica-
cion y que se mantengan estables durante un perodo de no
menos de 3 aos, siempre que se almacenen en las condi-
ciones prcscrt3s.
En el caso de artculos oficiales que deban exhibir una
fecha de caducidad, tales art1culos deben dispensarse en un
envase, o a partir de un envase, etiguetado con fecha de
caducidad, y la fecha de dispensacion del producto debe ser
anterior a la fecha de caducidad declarada. La fecha de ca-
ducidad identifica el perodo durante el cual se estima que
el artculo cumple con los requisitos de la monografa oficial,
siempre que se conserve en las condiciones de almacena-
miento prescritas. La fecha de caducidad limita el tiempo
durante el cual un artculo puede ser dispensado o usado.
En los casos en que se indica slo el mes y el ao de caduci-
dad, se entiende que la fecha se refiere al ltimo da del
mes indicado. La fecha lmite de uso es la fecha despus de
la cual no se debe utilizar un artculo. Basndose en la infor-
macin provista por el fabricante y las Advertencias Genera-
les, el dispensador debe colocar una fecha lmite de uso
adecuada en la etiqueta del envase del artculo recetado
para limitar el uso del mismo por parte del paciente. La
fecha lmite de uso colocada en la etiqueta no debe ser
posterior a la fecha de caducidad del envase del fabricante .
Para los artculos que requieran ser reconstituidos antes de
su uso, se debe colocar en el etiquetado una fecha lmite de
uso apropiada para el producto reconstituido.
Para todas las otras formas farmacuticas en las que se
deba determinar el perodo posterior a la dispensacin du-
rante el cual es prudente que un paciente conserve un me-
dicamento prescrito, el dispensador debe tener en conside-
racin, adems de cualquier otro factor relevante: la
naturaleza del medicamento; el envase en el que fue enva-
sado por el fabricante y su fecha de caducidad; las caracte-
rsticas del envase para el paciente, si el artculo se reenvasa
para su dispensacin; las condiciones de almacenamiento
esperadas o inusuales a las que el artculo puede ser ex-
puesto y el perodo estimado para la duracin del trata-
miento. Considerando todo lo anterior, el dispensador debe
colocar en la etiqueta de un envase de unidades mltiples
una fecha lmite de uso adecuada, a fin de limitar la utiliza-
cin del artculo por parte del paciente. A menos que se
especifique algo diferente en la monografa individual, o en
ausencia de datos de estabilidad, esa fecha lmite de uso no
podr ser posterior a: (a) la fecha de caducidad indicada en
el envase del fabricante, o (b) un ao a partir del momento
en que se dispense el medicamento, lo que represente un
perodo menor. Para formas farmacuticas lquidas y slidas
no estriles que estn envasadas en envases unitarios y de
dosis nica, la fecha lmite de uso debe ser de 1 ao a partir
de la fecha de envasado del medicamento en envases unita-
rios o de dosis nica, o la fecha de caducidad indicada en el
envase del fabricante, lo que represente un perodo menor,
a menos que los datos de estabilidad o el etiquetado del
fabricante indiquen algo diferente.
El dispensador debe mantener las instalaciones donde se
envasan y almacenan las formas farmacuticas a una tempe-
ratura cintica media no mayor de 25. El material de pls-
tico usado para envasar debe brindar una mejor proteccin
que la que ofrece el cloruro de polivinilo, que no brinda una
adecuada proteccin contra la permeacin de la humedad.
Se deben guardar registros de la temperatura del lugar
donde se almacenan las formas farmacuticas y de los mate-
riales plsticos usados en el envasado.
10.40.100.1. Preparaciones Magistrales
La etiqueta del envase o empaque que contiene una pre-
paracin magistral oficial debe llevar una fecha lmite de
11so. La fecha lmite de uso es la fecha despus de la cual no
debe usarse la preparacin magistral. Debido a que las pre-
paraciones magistrales estn destinadas a administrarse in-
mediatamente o luego de un perodo de alniacenarniento
corto, las fechas lmite de uso pueden determinarse basn-
dose en criterios distintos a los utilizados para determinar las
xxiv Advertencias Gmerales
fechas de caducidad de los productos farmacuticos fabrica-
dos en forma industrial.
La monografa de una preparacin magistral oficial in-
rli1yP, rnr lo genera!, un requisito de lmite de u>o que es-
pecifica el perodo desde la fecha de preparacin durante el
cual, en condiciones de almacenamiento adecuadas, se
puede usar la preparacin. En caso de que no haya datos de
estabilidad aplicables a un frmaco y preparacin especfi-
USP 38
rns, se han desarrollado recomendaciones de fecha lmite de
u~o mxima para preparaciones magistrales no estriles en-
vasadas en envases impermeables y resistentes a la luz, al-
ir1ci<..enciJd) d lernperdlura ambiente controiada, a menos
que se especifique algo diferente (ver Criterios de Estabilidad
y Determinacin de la Fecha Lmite de Uso en Estabilidad de
Preparaciones Magistrales en el captulo de pruebas generales
Preparacin Magistral-Preparaciones No Estriles (795)).
USP 38 Suplementos Dietticos / N-Acetilglucosamina 6289

Suplementos Dietticos
Monografas Oficiales

[NOTA-Los tiempos de retencin relativos pa_ra N-acetil-

N-Acetilglucosamina glucosamina y glucosamina son 1,0 y aproximada-
mente 2,8, respectivamente.]
nH
Requisitos de aptitud .
Relacin seal-ruido: No menos de 1O para el pico

HO ~ \-OH
de glucosamina, Solucin de aptitud del sis.tema
Resolucin: No menos de 5,q entre lo~ picos de _N-
acetilglucosamina y glucosam1na, Soluc1on de aptitud
HO
del sistema
Factor de asimetra: No ms de 2,0, Solucin
estndar
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
CsH1sN06 221,21 cin estndar
2-(Acetylam ino )-2-deoxy-D-glucose; Anlisis
N-Acetil-o-glucosamina [7512-1 7-6]. Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de N-acetilglucosamina
DEFINICIN
(C 8 H1sN06) en la porcin de N-Acetilglucosamina
La N-Acetilglucosamina contiene no menos de 98,0% y no tomada:
ms de 102,0% de N-acetilglucosamina (CsH1sN06), cal-
culado con respecto a la sustancia seca. Resultado = (ru! r1) x ( Cs/ Cu) x 100
IDENTIFICACIN
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
A. ABSORCIN EN El INFRARROJO (197K) r5 = respuesta del pico de la Solucin estndar
B, Cumple con los reguisitos de la prueba de Rotacin C5 = concentracin de ER N-Acetilglucosamina USP
Optica, Rotacin Espeofica (781 S). en la Solucin estndar (mg/mL)
C. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu- Cu = concentracin de N-Acetilglucosamina en la
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se- Solucin muestra (mg/mL)
gn se obtienen en la Valoracin. Criterios de aceptacin: 98,0%-102,0% con respecto
VALORACIN
a la sustancia seca
PROCEDIMIENTO IMPUREZAS
Solucin amortiguadora: Transferir 3,5 g de fosfato di- RESIDUO DE INCINERACIN (281 ): No ms de O, 1%
bsico de potasio a un matraz volumtrico de 1 L y CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221 ): No ms de o, 1%
agregar suficiente agua para disolver. Agregar 0,25 mL IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
de hidrxido de amonio, diluir con agua a volumen y Criterios de aceptacin
mezclar. Ajustar con cido fosfrico a un pH de 7,5. Arsnico: No ms de 1 g/g
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora Plomo: No ms de 1O g/g
(75:25) COMPUESTOS RELACIONADOS
Diluyente: Acetonitrilo y agua (50:50) Solucin amortiguadora, Fase mvil, Diluyente, Solu-
Solucin de aptitud del sistema: 1,0 mg/mL de_ ER N- cin de aptitud del sistema, Sistema cromatogrfico
Acetilglucosamina USP y 0,6 mg/mL de ER Clorhidrato y Aptitud del sistema: Proceder segn se indica en la
de Glucosamina USP en Diluyente Valoracin.
Solucin estndar: 1,0 mg/mL de ER N-Acetilglucosa- Solucin muestra: 2,5 mg/mL de N-Acetilglucosamina
mina USP en Diluyente en Diluyente
Solucin muestra: 1,0 mg/mL de N-Acetilglucosamina Anlisis
en Diluyente Muestra: Solucin muestra
Sistema cromatogrfico Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcin
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.) de N-Acetilglucosamina tomada:
Modo: HPLC
Detector: UV 195 nm Resultado= (rulr1) x 100
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Temperatura de la columna: 35 ru = respuesta del pico de cada impureza de la
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min Solucin muestra
Volumen de inyeccin: 1 O L rr - suma de las respuestas de los picos de IJ
Aptitud del Sistema Solucin muestra
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin
estndar
6290 N-.1\cetilglucosamina / Suplementos Dieteticos
Criterios de aceptacin
Impureza individual: No ms de 0,5%
. Impurezas totales: No ms de 2,0%
LIMITE DE GLUCOSAMINA
Solucin amortiguadora, Fase mvil, Diluyente, Solu-
cin de aptitud del sistema, Sistema cromatogrfico
y Aptitud del sistema: Proceder segn se indica en la
Valoracin.
Solucin estndar: 0,6 mg/ml de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en Diluyente
Solucin muestra: 50 mg/ml de N-Acetilglucosamina
en Diluyente
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de glucosamina en la porcin de
N-Acetilglucosamina tomada:
Resultado= (ru/r,) x (C/Cu) x (M1/M2) x 100
ru = respuesta del pico de glucosamina de la
Solucin muestra
= respuesta del pico de glucosamina de la
Solucin estndar
= concentracin de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin de N-Acetilglucosamina en la
Solucin muestra (mg/ml)
= peso molecular de glucosamina, 179,17
= peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Criterios de aceptacin: No ms de 1,0%
PRUEBAS ESPECFICAS
ROTACIN PTICA, Rotacin Especfica (781 S)
Solucin muestra: 20 mg/ml en agua; realizar la medi-
cin 3 horas despus de la preparacin de la muestra.
P~r~~e;~)s de aceptacin: +39,0 a +43,0
Solucin muestra: 1 O mg/ml en agua
<;:riterios de aceptacin: 6,0-8,0
PERDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar una muestra a 105 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 0,5%
INTERVALO O TEMPERATURA DE FUSION (741): l 96-205
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 3 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 103 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple co~ los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
pe~meables y resistentes a la luz.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER N-Acetilglucosamina USP
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
N-Acetiltirosina
C11HllNQ4 223,2
fY-Acetyl-L -tyrosine;
Acido (2S)-2-(acetilamino )-3-( 4-hidroxifenil)propanoico
(537-55-3].
USP 38
DEFINICIN
La N-Acetiltirosina contiene no menos de 98,5% y no ms
df' 101.0% dP N-ilrPtiltirminil ((' .H.,NO.) rnmn l\/_:in>til_
L-tirosina, calculado con respecto a la sust~n~ia ~~c~. _.,_, ..
IDENTIFICACIN
A. ABSORCJN,EN EL INFRARROJO (l 97K)
B. ROTACION OPTICA, Rotacin Especfica (781 S)
Solucin muestra: 1 O mg/ml
Criterios de aceptacin: No menos de +46,0 y no
ms de +49,0, determinada a 20
C. El valor Rr de la mancha principal de la Solucin mues-
tra en la prueba de Impurezas Orgnicas corresponde al
de la Solucin estndar 1.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Solucin muestra: Disolver aproximadamente 180 mg
de N-Acetiltirosina, pesada, en 50 ml de agua exenta
de dixido de carbono.
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Hidrxido de sodio O, 1 N SV
Deteccin del punto final: Potenciomtrica
Equivalencia: Cada ml de hidrxido de sodio O, 1 N
SV equivale a 22,32 mg de N-acetiltirosina
(C,, H13N4).
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de 0,1%
CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221)
Muestra: 0,7 g
Estndar: 0,40 ml de cido clorhdrico 0,01 N
Criterios de aceptacin: No ms de 200 ppm
CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221)
Muestra: 1,2 g
Estndar: 0,25 ml de cido sulfrico 0,020 N
Criterios de aceptacin: No ms de 200 ppm
HIERRO (241 ): No ms de 20 ppm
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo 7 (231): No ms de
1 O ppme (Oficial oi-dic-2015)
IMPUREZAS 0RGANICAS
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
mato9rafa de 0,25 mm
Solucion madre del estndar 1: 8 mg/ml de ER N-
Acetil-L-tirosina USP en una mezcla de agua, cido ac-
tico glacial y alcohol (3:3:94)
Solucin estndar 1: Diluir Solucin madre del estndar
7 con alcohol hasta obtener una solucin con una con-
centracin conocida de aproximadamente 0,4 mg/ml .
Solucin estndar 2: 0,8 mg/ml de ER L-Tirosina USP
disuelta en una mezcla de cido actico glacial y agua
(1: 1 ), y diluida con alcohol
Solucin muestra: Transferir 0,8 g de N-Acetiltirosina a
un matraz volumtrico de 1 O ml, disolver en 6 ml de
una mezcla de cido actico glacial y agua (1 :1 ), y di-
luir con alcohol a volumen.
Volumen de aplicacin: 5 pl
Fase mvil: Una mezcla de amonaco y 2-propanol
(3:7)
Solucin reveladora: Disolver 0,2 g de ninhidrina en
100 ml de una mezcla de butano! y cido actico 2 N
(95:5).
Anlisis: Proceder segn se indica en Cromatografa
(621 ), Cromatografa en Capa Delgada. Despues de secar
la placa al aire, repetir e! proceso de desarrollo. Despus
de secar al aire por segunda vez, observar la placa bajo
luz UV de longitud de onda corta y registrar las man-
chas principales y secundarias. Rociar la placa con Solu-
cin reveladora y calentar a una temperatura entre 1 00'
y 1 05' durante aproximadamente 15 minutos. Observar
USP 38
la placa baio luz blanca v reqistrar las manchas princi-
pales y secundarias.
Criterios de aceptacin: Bajo luL UV de lonqitud de
onda corta, ninguna mancha secundaria observada de
la Solucin munlra es de mayor tamao o intensidad
que la mancha principal de la Solucin estndar 7. Des-
pus de aplicar la Solucin reveladora bajo luz blanca,
ninguna mancha secundaria en el sitio de tirosina de la
Solucin muestra es de mayor tama1o o intensidad que
la mancha principal de la Solucin estndar 2.
Impurezas individuales: No ms de 0,5%
Lmite de tirosina: No ms de 1,0%
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar una muestra a 105 durante 3 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de O, 1%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cer,rados. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER N-Acetil-L-tirosina USP
ER L-Tirosina USP
Disulfato Tosilato de S-Adenosil-L-
metionina
Ttulo anterior: Disulfato Tosilato de Ademetionina
1 11,\1)1
HO
C22Hi4N6016S4 766,80
S-(Adenosyl)-L-methionine disulfate tosylate;
Disulfato-metilbencenosulfonato de (3S)-5'-((3-amino-3-car-
boxipropil)metilsulfonio ]-5' -desoxiadenosina (9 7 540-22-2].
DEFINICIN
El Disulfato Tosilato de S-Adenosil-L-metionina es la sal mixta
de disulfato-tosilato de una mezcla de diastereoismeros
del in de S-adenosil-L-metionina. Contiene no menos de
95,0% y no ms de 1 05,0% de disulfato tosilato de S-
adenosil-L-metionina (C22H 34N6016S4) calculado con el
contenido de S-adenosil-L-metionina (C1sHnN60sS+) calcu-
lado con respecto a la sustancia anhidra.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197K)
B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al de S-adenosil-L-metionina en
la Solucin de aptitud del sistema, segn se obtienen en
Contenido de S-Adenosil-L-metionina.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE S-ADENOSIL-L-METIONINA
Solucin A: 1O ml de cido actico glacial en 500 ml
de agua. Agregar 2,06 g de 1-hexanosulfonato de sodio
y diluir con agua hasta 1000 ml.
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin A (15:85)
Solucin de aptitud del sistema: 400 pg/ml de ER Di-
sulfato Tosilato de S-Adenosil-L-metionina USP y de ER
S-Adenosil-L-homocistena USP
Solucin estndar A: 400 ~tg/ml de ER S-Adenosil-L-ho-
mocistena USP
Solucin estndar B: 200 pg/ml a partir de Solucin
estndar A
Solucin estndar C: 80 pg/ml a partir de Solucin es-
tndar A
~wpiementos U1etet1cos ! Adenosil 629 1
Solucin muestra: 20 rng de Disulfato Tosilato de S-
Adenosil-L-metionina en 40 ml de agua. Mezclar du-
rante 30 minutos, lueqo diluir rnn aqua hasta 50,0 ml.
Transferir 1,0 ml de la solucin a un -tubo de microcen-
trfuga de 1,5 mL y centrifugar durante 1 minuto. Usar
una porcin del sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 260 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3 pm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O ~tl
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin es-
tndar B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para S-ade-
nosil-L-homocistena y S-adenosil-L-metionina son apro-
ximadamente 0,68 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,5 entre S-adenosil-L-ho-
mocistena y S-adenosil-L-metionina
Factor de asimetra: No ms de 1,5, Solucin estn-
dar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
S-adenosil-L-homocistena, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
[NOTA-Registrar los cromatogramas y medir el rea
del pico de S-adenosil-L-homocistena en las tres Solu-
ciones estndar y el pico de S-adenosil-L-metionina en
la Solucin muestra.]
Graficar una curva de calibracin del rea del pico de
las Soluciones estndar en funcin de la concentracin
correspondiente de S-adenosil-L-homocistena, en
mg/ml, y trazar la recta que mejor se ajuste a los tres
puntos. A partir de la curva de calibracin y usando
el rea del pico de S-adenosil-L-metionina del croma-
tograma de la Solucin muestra, determinar la con-
centracin, C, en mg/ml, de S-adenosil-L-metionina
como S-adenosil-L-homocistena en la Solucin
muestra.
Calcular el porcentaje de C1sH23N60sS+ en la porcin
de S-Adenosil-L-metionina tomada:
Resultado = (C/Cu) x (M,i/M,2) x 100
C = concentracin de S-adenosil-L-metionina como
S-adenosil-L-homocistena obtenida a partir
de la lnea de regresin lineal (mg/ml)
Cu = concentracin de Disulfato Tosilato de 5-
Adenosil-L-metionina en la Solucin muestra
(mg/ml)
M 1 = peso molecular de 5-adenosil-L-metionina,
399,44
M = peso molecular de S-adenosil+homocistena,
384,41
Criterios de aceptacin: 49,5%-54,7% con respecto a
la sustancia anhidra, equivalente a 95,0%-105,0% de
disulfato tosilato de 5-adenosil-L-rnetionina con respecto
a la sustancia anhidra
CONTENIDO DE SULFATO
Fase mvil: Carbonato de sodio 8,0 mM y bicarbonato
de sodio 1,0 mM en agua
Solucin estndar: O, 18 mg/ml de sulfato de potasio
Solucin muestra: 0,5 mg/ml de Disulfato Tosilato de
S-Adenosil-L-metionina
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Detector inico con conductividad
suprimida
6292 Adenosil I '\11pl1?11wnt<)<, Dietliws USP 38

Columna: 4,0 mm ;< 25 cm; relleno L74 de 7 m i"" = rea) Je lo) pie.os c.orre)po11dientes al ismero
Temperatura de la columna: 30' S.S en la Solucin muestra
Velocidad de flujo: 1 ml/min r" = reas de los picos correspondientes al ismero
Volumen de inyeccion: l':J L R, S de la Slucin mues'tra
Aptitud del sistema Criterios de aceptacin: No menos de 60'fo y no me-
Muestra: Solucin estndar nos de la cantidad declarada del ismero S, S
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 8200 platos REQUISITOS ADICIONALES
tericos ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Factor de asimetra: No ms de 1,5 permeables y resistentes a la luz. Almacenar en un
Desviacin estndar relativa: No ms de 1,0% refrigerador.
Anlisis ETIQUETADO: Etiquetar indicando el contenido mnimo de
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra isr;nero S,S, como porcentaje.
[NOTA-Medir el rea del pico de sulfato.] ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
Calcular el porcentaje de sulfato (504) en la porcin de ER Disulfato Tosilato de S-Adenosil-L-metionina USP
Disulfato Tosilato de S-Adenosil-L-metionina tomada: ER S-Adenosil-L-homocistena USP

Resultado = (ru/rj) x (Cs/Cu) x 1 00

ru = respuesta del pico de sulfato de la Solucin
muestra Agnocasto
rs = respuesta del pico de sulfato de la Solucin
estndar DEFINICIN
Cs = concentracin de sulfato (504) en la Solucin El Agnocasto consiste en los frutos maduros y secos de Vitex
estndar (mg/ml) agnus-castus L. (Fam. Verbenaceae). Contiene no menos
Cu = concentracin de Disulfato Tosilato de S- de 0,05% de agnsido y no menos de 0,08% de casti-
Adenosil-l -metionina en la Solucin muestra cina, calculado con respecto a la materia seca.
(mg/ml)
Criterios de aceptacin: 23,5%-26,5% IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
IMPUREZAS DELGADA
Solucin estndar: 1 00 mg de ER Extracto en Polvo de
Eliminar lo siguiente: Agnocasto USP en 1 ml de metano!. Calentar en un
bao de agua a 60 durante 1 O minutos. Centrifugar y
METALES PESADOS, Mtodo I (231): No ms de usar el sobrenadante transparente .
20 ppme (Oficial Ol-dic-2015)
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1 g del
material vegetal en polvo a un tubo de centrfuga con
PRUEBAS ESPECFICAS tapa de rosca. Agregar 1 O ml de metano!, calentar en
PH (791 ): 11 0-2,0, en una solucin acuosa (1 en 20) un bao de agua a 60 durante 10-15 minutos, enfriar
DETERMINACION DE AGUA, Mtodo la (921): No ms de y filtrar .
3,0% Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
RELACIN ISOMRICA tamao promedio de part1cula de 1 0-15 m (placas
Solucin amortiguadora: Transferir 4,2 g de cido c- para TLC)
trico monohidrato y 2,03 g de fosfato dicido de sodio Volumen de aplicacin: 90 L, Solucin estndar;
dihidrato a un matraz volumtrico de 1 L, disolver, y 60 L, Solucin muestra; en bandas de 2 cm de longitud
diluir con agua a volumen. Fase mvil: Acetato de etilo, metano! y agua (77:15:8)
Fase mvil: 4,0 g de dodecil sulfato de sodio y 440 ml Solucin reveladora: 1 O mg/ml de p-dimetilaminoben-
de acetonitrilo. Diluir con Solucin amortiguadora hasta zaldehdo en cido clorhdrico 1 N
1 L. Anlisis
Solucin estndar: 1,0 mg/ml de ER Disulfato Tosilato Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
de S-Adenosil-L-metionina USP Desarrollar hasta una longitud de no menos de 12 cm
Solucin muestra: 1,0 mg/ml de Disulfato Tosilato de y secar la placa en una corriente de aire. Rociar la
S-Adenosil-L-metionina placa con Solucin reveladora y calentar durante 1 O
Sistema cromato9rfico minutos a 120''.
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.) Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
Modo: HPLC lo siguiente: una zona azul (a un valor RF de aproxima-
Detector: UV 254 nm damente 0,21) debida a la presencia de aucubina y que
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m corresponde en color y valor R1 a una zona similar de la
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min Solucin estndar; una zona azul (a un valor Rr de apro-
Volumen de inyeccin: 20 L ximadamente 0,44) como resultado de la presencia de
Aptitud del sistema agnsido que corresponde en color y valor R1 a una
Muestra: Solucin estndar zona similar de la Solucin estndar; y una zona ancha,
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para el is- color violeta en el medio, que est cerca del frente de
mero R,S e ismero S,S son aproximadamente 0,94 y la fase mvil y que corresponde en color y valor Rr a
1,0, respectivamente.] una zona similar de la Solucin estndar. Se pueden ob-
Requisitos de aptitud servar otras zonas de color de intensidades variables en
Resolucin: No menos de 1,0 entre el ismero S,S y la Solucin muestra.
el ismero R,S B. En la prueba de Contenido de Casticina, el cromato-
Anlisis grama de la Solucin muestra presenta un pico en el
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra tiempo de retencin correspondiente al del pico de casti-
Identificar los picos de los ismeros S,S y R,S en la cina en el cromatograma de la Solucin estndar.
Solucin muestra por comparacin con la Solucin es-
tndar, y calcular el porcentaje del ismero S,S:
Resultado = [rss/(rss + rRs)] x 1 00
USP 38 Suplementos Dietticos / Agnocasto 6293

COMPOSICIN ExtraPr rlos veces con 40 ml de metano!, usando un

CONTENIDO DE CASTICINA
Solucin estndar: Aproximadamente 0,05 mg/ml de
ER Caslicina USP e11 mela11oi, co11 ullraso11iuo. Pa;ar a
travs de un filtro de membrana de celulosa con un
tamao de poro de 0,45 ~tm o menor.
Solucin muestra: Colocar aproximadamente 1 000 mg
del material vegetal molido en un recipiente con tapn.
Extraer dos veces con 40 ml de metano!, usando un
homogeneizador manual a 19 000 rpm durante 2 mi-
nutos. Filtrar cada sobrenadante y transferir a un matraz
de fondo redondo de 250 ml. Enjuagar el residuo con
metanol y filtrar la solucin resultante en el matraz. Eva-
porar el extracto combinado hasta sequedad. Disolver
el residuo en metano!, transferir cuantitativamente a un
matraz volumtrico de 20 ml y diluir con metano! a
volumen. Pasar a travs de un filtro de membrana de
celulosa con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin A: Metano!
Solucin B: 5,88 g/L de cido fosfrico en agua
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
homoyeneizador manual a 19 000 rpm durante 2 mi-
nutos. Centrifugar y transferir cada sobrenadante a un
111al1aL Je fondo redondo de 250 mL. Enjuagar el resi-
duo con metano! y filtrar la solucin resultante en el
matraz. Evaporar el extracto combinado hasta sequedad
y disolver el residuo en 2 ml de Disolvente. Transferir
cuantitativamente la solucin a un cartucho de extrac-
cin de fase slida relleno con xido de aluminio neu-
tro acondicionado previamente con 5 ml de Disolvente.
Conectar el cartucho a una presin de vaco que no
exceda de 300 mbar y recoger el eluato. Enjuagar el
matraz de fondo redondo con 2 ml de Disolvente, pasar
esta solucin a travs del cartucho, aplicar el vaco y
recoger el eluato. Enjuagar el cartucho con 4 ml de Di-
solvente y recoger el eluato. Combinar los eluatos del
cartucho, transferir a un matraz volumtrico de 1 O ml y
diluir con Disolvente a volumen.
Solucin A: Acetonitrilo
Solucin B: 5,88 g/L de cido fosfrico en agua
Fase mvil: Ver la Tabla 2.

Tabla 1 Tabla 2
Tiempo Solucin A Solucin B Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%) Cmin) (%) (%)
o 50 50 o 7 93 -----
o 50 50 06 10 90
13 65 35 5 10 90
18 100 o 7 14 86
23 50 50 13 15 85
13 1 100 o
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.) 18 100 o
Modo: HPLC 18 1 7 93
Detector: UV 348 nm 23 7 93
Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 25 Sistema cromato9rfico
Velocidad de flujo: 1 ml/min (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Volumen de inyeccin: 1 O L Modo: HPLC
Aptitud del sistema Detector: UV 258 nm
Muestra: Solucin estndar Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 ~lm
Requisitos de aptitud Temperatura de la columna: 25~
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de Velocidad de flujo: 1,3 ml/min
casticina Volumen de inyeccin: 1 O L
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para Aptitud del sistema
el pico de casticina en inyecciones repetidas Muestra: Solucin estndar
Anlisis Requisitos de aptitud
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
Calcular el porcentaje de casticina en la porcin de agnsido
Agnocasto tomada: Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de agnsido en inyecciones repetidas
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
ru = respuesta del pico de casticina de la Solucin Calcular el porcentaje de agnsido en la porcin de
muestra Agnocasto tomada:
rs = respuesta del pico de casticina de la Solucin
estndar Resultado= (ru/rs) x (CdCu) x 100
C ~
concentracin de ER Casticina USP en la
Solucin estndar (mg/ml) ru = respuesta del pico de agnsido de la Solucin
Cu = concentracin de Agnocasto en la Solucin muestra
muestra (mg/ml) rs = respuesta del pico de agnsido de la Solucin
Criterios de aceptacion: No menos de 0,08% de casti- estndar
cina con respect9 a la materia seca Cs = concentracin de ER Agnsido USP en la
CONTENIDO DE AGNOSIDO Solucion estndar (mg/ml)
Disolvente: Metano! y agua (1: 19) C = concentracin de Agnocasto en la Solucin
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Agn- muestra (mg/ml)
sido USP en Disolvente, con ultrasonido. Diluir con me- Criterios de aceptacion: No menos de 0,05% de ag-
tano! hasta obtener una concentracin de aproximada- nsido con respecto a la materia seca
mente O, 125 mg/ml. Pasar a travs de un filtro de CONTAMINANTES
membrana de celulosa con un tamao de poro de 0,45 METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 ppm
m o menor. ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
Solucin muestra: Colocar aproximadamente 1000 mg lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
del material vegetal molido en un recipiente con tapn. requisitos.
6294 Agnocasto / 'luplPmPnto<; Diellilo'
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): E! recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 6 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levctdur d\ 110 exude de 1 " ufc;g, iei recuento de ente-
robJctcriJs no excede de 101 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Los frutos maduros del Agnocasto son
de forma esfrica a ovoide, con un dimetro de
2-4 mm, muy duros y generalmente con un pedicelo
corto. EJ fruto es de color marrn rojizo a negro, ligera-
mente aspero y cubierto de pelos glandulares. Presenta
cuatr() estras, ,perpendiculares entre s, y una ligera de-
pres1on en el apice que resulta ms evidente en los fru-
tos de mayor tamao. El interior del fruto es de color
amarillento .. La_ estructura interna del fruto incluye cua-
tro compart1m1entos, cada uno de ellos conteniendo
una semilla ob!S>nga de alto contenido graso. Los frutos
maduros tamb1en pueden estar acompaados de un
grupo de hasta seis frutos inmaduros, esponjosos y de
color tostado claro. A menudo el fruto est cubierto de
un cliz tubular, persistente, finamente tomentoso y de
color gris verdoso que posee cinco dientes.
Mi~roscpicas: El exocarpo es estrecho y de color ma-
rran; consta de clulas parenquimticas de paredes del-
gadas y clulas parcialmente lignificadas con numerosos
engrosamientos punteados en el interior. Visto desde la
sup_erficie, el exocarpo muestra una epidermis de clulas
poligonales con engrosamientos irregulares y pelos
glandulares, c51da uno de ellos con un pedicelo corto,
de una sola celula, y una cabeza de cuatro clulas que
contienen aceite esencial. El mesocarpo externo consta
de varias capas de clulas parenquimticas isodiamtri-
cas de color marrn. El mesocarpo interno posee clulas
esclerenquimticas finamente punteadas; algunas de
ellas de paredes moderadamente engrosadas y otras
formadas por clulas ptreas isodiamtricas con un pe-
queo lumen. El endocarpo est formado por una capa
de pequeas esclereidas de color marrn. Las semillas
son pequeas y presentan grandes cotiledones rodea-
dos por grandes clulas parenquimticas de paredes
d~l_gadas con, engrosamientos acostillados. El tejido nu-
tritivo y las celulas germinales contienen granos de
aleurona y glbulos de aceite. El almidn est ausente.
La epidermis externa del cliz est compuesta por clu-
las poligonales cubiertas por abundantes tricomas cur-
vados unicelulares o multicelulares. La epidermis interna
del cliz es glabra y est compuesta por clulas rectan-
gylares y alargadas con ,paredes ligeramente onduladas .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(?61/: No ms de 3,0%
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g a 1 05 durante 2
hor,as: pierde no ms de) 0,0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 8,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561/: No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta declara el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Agnsido USP
ER Casticina USP
ER Extracto en Polvo de Agnocasto USP
USP 38
Agnocasto en Polvo
DEFINICIN
El Agnocasto en Polvo es Agnocasto reducido a polvo o a
polvo muy fino. Contiene no menos de 0,05% de agn-
s1do y no menos de 0,08% de casticina, calculados con
respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 100 mg de ER Extracto en Polvo de
Agnocasto USP en 1 mL de metano/. Calentar en un
bao de agua a 60'' durante 1 O minutos. Centrifugar y
usar el sobrenadante transparente.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
Agnocasto en Polvo a un tubo de centrfuga con tapa
de rosca. Agregar 1 O mL de metano/, calentar en un
bao de agua a 60 durante 10-15 minutos enfriar y
filtrar. '
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 1 0-15 m (placas
para TLC)
Volumen de aplicacin: 90 L, Solucin estndar;
60 ~tL, Solucin muestra; en bandas de 2 cm de longitud
Fase mvil: Acetato de etilo, metano/ y agua (77:15:8)
Solucin reveladora: 1 O mg/mL de p-dimetilaminoben-
zaldehdo en cido clorhdrico 1 N
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar hasta una longitud de no menos de 12 cm
y secar la placa en una corriente de aire. Rociar la
placa con Solucin reveladora y calentar durante 1O
minutos a 120.
Criterio_s de aceptacin: La Solucin muestra presenta
lo s1gu1ente: una zona azul (a un valor Rr de aproxima-
damente 0,21) debida a la presencia de aucubina y que
corresponde en color y valor R1 a una zona similar de la
S?lucin estndar; una zona azul (a un valor R1 de apro-
ximadamente 0,44) como resultado de la presencia de
agnsido que corresponde en color y valor R1 a una
zona similar de la Solucin estndar; y una zona ancha,
de color violeta en el medio, que est cerca del frente
de la fase mvil y que corresponde en color y valor Rr a
una zona similar de la Solucin estndar. Se pueden ob-
servar otras zonas de color de intensidades variables en
la Solucin muestra.
B. En la prueba de Contenido de Casticina, el cromato-
grama de la Solucin muestra presenta un pico en el
tiempo de retencin correspondiente al pico de casticina
en el cromatograma de la Solucin estndar.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CASTICINA
Solucin_ estndar: Aproximadamente 0,05 mg/mL de
ER Cast1cina USP en metano/, sometiendo a ultrasonido .
Pasar a travs de un filtro de membrana de celulosa con
un tamao de poro de 0,45 m o menor .
Solucin muestra: Colocar aproximadamente 1000 mg
de Agnocasto en Polvo en un recipiente con tapn. Ex-
traer dos veces con 40 mL de metano/, usando un ho-
moge_neizador manual a 9 000 rpm durante 2 minu-
tos. Filtrar cada sobrenadante y transferir a un matraz
de fondo redondo de 250 ml. Enjuagar el residuo con
metano/ y filtrar la solucin resultante en el matraz. Eva-
porar los extractos combinados hasta sequedad. Disol-
ver el residuo en metano/, transferir cuantitativamente a
un matraz volumtrico de 20 mL y diluir con metano/ a
volumen P;i~ar ri trrivP~ de 11n filtro de membrana de
celulosa con un tamano de poro de 0,45 m o menor.
USP 38 Suplementos Dietticos / Agnocasto 6295

Solucin A: Metanol Solucin A: Acetonitrilo

Solucin B: 5,88 g/L de cido fosfricu en dlJUd Solucin B: 5,88 g/L de cido fmfrico en agua
Fase mvil: Ver la Tabla l. Fase mvil: Ver la Tabla 2.

Tabla 1 Tabla 2
1
Tiempo Solucin A Solucin B Tiempo Solucin A Solucin B
(min) {%) (%) Cmin) l/o) llo\
-----~-
o 50 50 o 7 93
o 50 50 06 10 90
13 65 35 ~
5 10 90
18 100 o 7 14 86
23 50 50 13 15 85
13 1 100 o
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.) _ _ _l_!L__ _ --- 100 o
Modo: HPLC 18 1 7 -
93
Detector: UV 348 nm 23 7 93
Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 25 Sistema cromato9rfico
Velocidad de flujo: 1 ml/min (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Volumen de inyeccin: 1 O L Modo: HPLC
Aptitud del sistema Detector: UV 258 nm
Muestra: Solucin estndar Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 m
Requisitos de aptitud . Temperatura de la columna: 25
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de Velocidad de flujo: 1, 3 ml/min
casticina Volumen de inyeccin: 1 O ~1L
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para Aptitud del sistema
el pico de casticina en inyecciones repetidas Muestra: Solucin estndar
Anlisis Requisitos de aptitud .
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
Calcular el porcentaje de casticina en la porcin de agnsido
Agnocasto en Polvo tomada: Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de agnsido en inyecciones repetidas
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x 100 Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
ru = respuesta del pico de casticina de la Solucin Calcular el porcentaje de agnsido en la porcin de
muestra Agnocasto en Polvo tomada:
rs = respuesta del pico de casticina de la Solucin
estndar Resultado= (ru!r1) x (C1/Cu) x 100
C = concentracin de ER Casticina USP en la
Solucin estndar (mg/ml) ru = respuesta del pico de agnsido de la Solucin
Cu = concentracin de Agnocasto en Polvo en la muestra
Solucin muestra (mg/ml) r1 = respuesta del pico de agnsido de la Solucin
Criterios de aceptacin: No menos de 0,08% de casti- estndar
cina con respect9 a la materia seca C = concentracin de ER Agnsido USP en la
CONTENIDO DE AGNOSIDO Solucin estndar (mg/ml)
Disolvente: Metanol y agua (1 :19) , Cu = concentracin de Agnocasto en Polvo en la
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Agno- Solucin muestra (mg/ml)
sido USP en Disolvente sometiendo a ultrasonido. Diluir Criterios de aceptacin: No menos de 0,05% de ag-
con metanol hasta obtener una concentr~cin de ~pro nsido con respecto a la materia seca
ximadamente O, 125 mg/ml. Pasar a traves de un filtro CONTAMINANTES
de membrana de celulosa con un tamao de poro de METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 ppm
0,45 ~1m o menor. ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
Solucin muestra: Colocar aproximadamente 1000 mg lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
de Agnocasto en Polvo en un recipiente con tapn. Ex- requisitos.
traer dos veces con 40 ml de metanol, usando un ho- PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
mogeneizador manual a 19 000 rpm durante 2 minu- tal de microorganismos aerobios no excede de 10 6 ufc/g;
tos. Centrifugar y transferir cada sobrenadante a un . el recuento total combinado de hongos filamentosos y
matraz de fondo redondo de 250 ml. Enuagar el resi- levaduras no excede de 1 0 4 ufc/g; y el recuento de ente-
duo con metano! y filtrar la solucin resultante en el robacterias no excede de 10 1 ufc/g.,
matraz. Evaporar los extractos combina.dos hasta seque- AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
dad y disolver el residuo en 2 ,ml de Disolvente. Transfe- ple con los requisitos de las pruebas _pa_ra de_terminar la
rir cuantitativamente la soluc1on a un cartucho de ex- ausencia de Salmont'llu >pp. y Eschenchw wl1.
traccin de fase slida relleno con xido de aluminio
neutro acondicionado previamente con 5 ml de Disol- PRUEBAS ESPECFICAS
vente. Conectar el cartucho a una presin de vaco que CARACTERSTICAS BOTNICAS: El Agnocasto en Polvo es
no exceda de 300 mbar y recoger el eluato. Enjuagar el marrn oscuro, con un olor levemente aromtico a moho
matraz de fondo redondo con 2 ml de Disolvente, pasar y un sabor similar al de la salvia., ~resen_ta las siguientes
esta solucin a travs del cartucho, aplicar el vaco y caractersticas: fragmentos del cal1z cubiertos con tnc9-
recoger el eluato. tnuagar el cartucho con 4 ml de Di- mas y tricomas glandulares sobre la cara externa, y celu-
solvente y recoger el eluato. Combinar Jos eluatos del las rectangulares y alargadas con paredes ligeramente
cartucho, transferir a un matraz volumetnco de 1 O ml y onduladas en la cara interna; fragmentos de exocarpo
diluir con Disolvente a volumen. con tricomas y clulas con grandes puntuaciones en la
6296 Agnoctisto / 5uplPmPntos DiPtf'ticos USP 38

rvirPrl Pxterna; c!u!as parenquimticas de pared delgada servar otras zonas de color de intensidades variables en
y glbulos de aceites fijos; clulas ptreas del mesocarpo la Soluuon muestra.
con puntuacione\ clulas de la testa lignificadas, ovoi- B. E.n la prueba de Contenido de Caslicina, el cromato-
de~, cu11 lia11ct\ de t'lllJl~a11licrllos reticuiJdus; y endos- grdma de id 5oiuc1on muestra presenta u11 pico en ei
P,erma y cotiledones con Jccitcs fijos. tiempo de retenrin rorrespondiente al de rasticina.
PERDIDA POR SECADO (731): Secar 1 g a 105 durante 2 C. En la prueba de Contenido de Agnsido, el cromato-
hor,as: pierde no ms de ) 0,0% de su peso. grama de la Solucin muestra presenta un pico en el
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561): tiempo de retencin correspondiente al de agnsido .
No ms de 8,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido COMPOSICIN
(561): No ms de 2,0% CONTENIDO DE CASTICINA
Solucin estndar: Aproximadamente 0,05 mg/mL de
REQUISITOS ADICIONALES ER Casticina USP en metano!, sometiendo a ultrasonido.
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien Pasar a travs de una membrana de celulosa con un
cerrados y almacenar a temperatura ambiente tamao de poro de 0,45 m o menor.
controlada. Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto,
ETIQUETADO: La etiqueta declara el nombre cientfico en equivalente a aproximadamente 2,5 mg del contenido
latn, y despus de la denominacin oficial, la parte de la declarado de casticina, a un matraz volumtrico de
pla,nta de donde se obtuvo en el artculo. 50 mL. Agregar 25 mL de metano! y someter a ultraso-
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) nido en un bao a 40 durante 1 O minutos, agitando
ER Agnsido USP para dispersar los slidos. Enfriar a temperatu~a am-
ER Casticina USP biente y diluir con metano! a volumen. Centrifugar o
ER Extracto en Polvo de Agnocasto USP pasar a travs de un filtro con un tamao de poro de
0,45 m o menor.
Solucin A: Metano!
Solucin B: 5,88 g/L de cido fosfrico en agua
Fase mvil: Ver la Tabla 1.
Extracto en Polvo de Agnocasto
Tabla 1
DEFINICIN
Tiempo Solucin A Solucin B
El Extracto en Polvo de Agnocasto se prepara a partir del lmin) (%) (O/o)
Agnocasto mediante extraccin con mezclas hidroalcoh-
licas u otros disolventes adecuados. Contiene no menos o 50 50
de 90,0% y no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada o 50 50
de casticina y agnsido, calculado con respecto a la ma- 13 65 35
teria seca. Puede contener sustancias agregadas 18 100 o
adecuadas. ~____ll__ ______ --~-_()---~-----L 50
IDENTIFICACIN Sistema cromato9rfico
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
DELGADA Modo: HPLC
Solucin estndar: 1 00 mg de ER Extracto en Polvo de Detector: UV 348 nm
Agnocasto USP en 1 mL de metano!. Calentar en un Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 m
bao de agua a 60 durante 1 O minutos. Centrifugar y Temperatura de la columna: 25"
usar el sobrenadante transparente. Velocidad de flujo: 1 mL/min
Solucin muestra: Agitar una cantidad de Extracto, Volumen de inyeccin: 1 O L
equivalente aproximadamente a 1 O mg de la cantidad Aptitud del sistema
declarada de agnsido, en 1 O mL de metano!. Calentar Muestra: Solucin estndar
en un bao de agua a 60. Centrifugar o filtrar antes de Requisitos de aptitud
usar. Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un casticina
tamao promedio de partrcula de 1 0-15 m (placas Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
para TLC) el pico de casticina en inyecciones repetidas
Volumen de aplicacin: 90 L, Solucin estndar; Anlisis
60 L, Solucin muestra; en bandas de 2 cm de longitud Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Fase mvil: Acetato de etilo, metano! y agua (77: 15:8) Calcular el porcentaje de casticina, Pe, en la porcin de
Solucin reveladora: 1 O mg/mL de p-dimetilaminoben- Extracto tomada:
zaldehdo en cido clorhdrico 1 N
Anlisis Pe = (ru! rs) x ( C/ C1) x 100
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar hasta una longitud de no menos de 12 cm r11 = respuesta del pico de casticina de la Solucin
y secar la placa en una corriente de aire. Rociar la muestra
placa con Solucin reveladora y calentar durante 1 O rs = respuesta del pico de casticina de la Solucin
minutos a 120. estndar
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta C concentracin de ER Casticina USP en la
=
lo siguiente: una zona azul (a un valor R1 de aproxima- Solucin estndar (mg/mL)
damente 0,21) debida a la presencia de aucubina y que Cu = concentracin de Extracto en la Solucin
corresponde en color y valor R, a una zona similar de la muestra (mg/mL)
Solucin estndar; una zona azul (a un valor Rr de apro- Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
ximadamente 0,44) como resultado de la presencia de casticina en la porcin de Extracto tomada:
agnsido que corresponde en color y valor Rr a una
zona similar de la Solucin estndar; y una zona ancha, Resultado = (Pe/ L) x 100
de color violeta en el medio, que est cerca del frente
de la fase mvil y que corresponde en color y valor Rr a Pe = contenido de casticina segn se calcul
una zona similar de la Solucin estandar. Se pueden ob- anteriormente (%)
USP 38 Sup!emmtos Dietticos /Ajo 6297

I = rJntirfaci ciecllrlcil cie rJsticina (%) Pa = contenido de agnsido calculado

Criterios de aceptacin: 90,0/ci- l l 0,0% con respecto anteriormente (%)
a la materia seca = cantidad declarada de agnsido (%)
CONTENIDO OE AGNSOO Criterios de aceptacin: 90,0%--110,0% con respello
Disolvente: Metano/ y agua (1: 19) a la materia seca
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Agn-
sido USP en Disolvente, sometiendo a ultrasonido. Diluir CONTAMINANTES
con metanol hasta obtener una concentracin de apro-
ximadamente O, 125 mg/ml. Filtrar a travs de una Eliminar lo siguiente:
membrana de celulosa con un tamao de poro de 0,45
m o menor. . METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto,
equivalente a aproximadamente 6,25 mg del contenido 20 ppme (Oficial 01.dic.2015)
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
declarado de agnsido, a un matraz volumtrico de tal bacteriano no excede de 1 0 4 ufc/g. El recuento total
50 mL. Agregar 25 mL de Disolvente y someter a ultra- combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
sonido en un bao a 40 durante 1 O minutos, agitando
cede de 1 0 3 ufc/g. ,
para dispersar los slidos. Enfriar a temperatura am- AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
biente y diluir con Disolvente a volumen. Centrifugar o ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
pasar a travs de un filtro con un tamao de poro de ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
0,45 m o menor. OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Solucin A: Acetonitrilo Botnicos (565), Disolventes Residuales y Residuos de
Solucin B: 5,88 g/L de cido fosfrico en agua Plaguicidas.
Fase mvil: Ver la Tabla 2.
PRUEBAS ESPECFICAS
Tabla 2 PRDIDA POR SECADO (731): No ms de 6,0%
- Tiem;;---T Solucin A Solucin B REQUISITOS ADICIONALES
lmin) (%) (%) ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
o 7 93 permeables y almacenar en un lugar fresco. Proteger de
06 10 90 la luz.
5 10 90 ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
7 14 86
latn, y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta a partir de la cual se prepar el artculo. La eti-
13 15 85 queta tambin indica el contenido de casticina y agn-
13 1 100 o sido, el disolvente de extraccin o mezcla de disolventes
18 100 o que se utiliz en la preparacin, la relacin entre el mate-
18 1 7 93 rial vegetal crudo inicial y el Extracto, el porcentaje de
23 7 93 extracto nativo y el nombre y la cantidad de todas las
sustancias agregadas. Cumple con los requisitos en Ex-
Sistema cromato9rfico trm;tos Botnicos (565), Etiquetado.
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
Modo: HPLC ER Agnsido USP
Detector: UV 258 nm ER Casticina USP
Columna: 3, 1 mm x 12,5 cm; relleno L1 de 5 m ER Extracto en Polvo de Agnocasto USP
Temperatura de la columna: 25
Velocidad de flujo: 1,3 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar Ajo
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de DEFINICIN
agnsido El Ajo consiste en los bulbos compuestos frescos o secos de
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para Allium sativum L. (Fam. Liliaceae). Contiene no menos de
el pico de agnsido en inyecciones repetidas 0,5% de alina y no menos de 0,2% de y-glutamil-(S)-alil-
Anlisis L-cistena, calculado con respecto a la materia seca.
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de agnsido, Pa, en la porcin IDENTIFICACIN
de Extracto tomada: A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Pa = (ru/r 1) x (C/Cu) x 100 Solucin estndar A: 0,5 mg/ml de ER L-Metionina
USP en una mezcla de metanol y agua (1: 1)
ru = respuesta del pico de agnsido de la Solucin Solucin estndar B: 0,5 mg/mL de ER Alina USP en
muestra una mezcla de metanol y agua (1: 1)
r1 = respuesta del pico de agnsido de la Solucin Solucin muestra: Cortar un bulbo de ajo liofilizado en
estndar trozos pequeos, transferir 1 g de los trozos cortados a
C = concentracin de ER Agnsido USP en la un extractor y extraer con dos porciones de 20 ml de
Solucin estndar (mg/ml) una mezcla de metanol y agua (1 :1 ), combinando los
e, = concentracin de Extracto en la Solucin extractos. Concentrar hasta un volumen pequeo (apro-
muestra (mg/mL) ximadamente 5 mL), usando un evaporador rotatorio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
agnsido en la porcin de Extracto tomada: de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Resultado = (Pal L) x 1 00 Volumen de aplicacin: 20 L, aplicados por separado
en bandas de 1 O mm
6298 Ajo / Suplementos Dietticos
Fase mvil: Alcohol butlico, alcohol n-proplico, cido
actico glacial y agua (3: 1: 1: 1)
Solucin reveladora: Solucin al 0,2% de ninhidrina en
un'-1 n1cLcla de Jkohol butlico y cido actico 2 ~'4
(19:1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa, en una cmara saturada. Retirar la
placa y dejar que la fase mvil se evapore. Rociar con
Solucin reveladora, calentar a 100-l 05 durante 1 O
minutos y observar la placa inmediatamente.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes zonas de color ana-
ranjado y violeta rosado: una zona violeta con un valor
R, de aproximadamente 0,89; una zona rosada con un
valor R, de aproximadamente 0,5 y que corresponde en
color y valor R, a la obtenida del cromatograma de la
Solucin estndar A; una zona rosada con un valor Rr de
aproximadamente 0,43; una zona anaranjada intensa
con un valor Rr de aproximadamente 0,38; una zona
violeta rosado con un valor Rr de aproximadamente 0,3
y que corresponde en color y valor Rr a la del cromato-
grama de la Solucin estndar B; y zonas adicionales de
color anaranjado rosado ubicadas muy cerca una de
otra justo por debajo de la zona atribuida a alina en el
cromatograma de la Solucin estndar B.
B.
Muestra: Aproximadamente 1 O g de bulbos de ajo cor-
tados en piezas pequeas
Anlisis: Transferir la Muestra a un matraz adecuado.
Agregar 1 O mL de hidrxido de sodio 1 N y 1 O mL de
agua, calentar el matraz en agua hirviendo durante 1 O
minutos, enfriar y filtrar. Agregar unas pocas gotas de
nitroferricianuro de sodio SR recientemente preparado a
2 mL del filtrado.
Criterios de aceptacin: La aparicin de un color rojo
o rojo anaranjado indica la presencia de compuestos
que contienen azufre en la Muestra.
C. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en la pn)eba de Contenido de,Alina.
D. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Columna de extraccin: De fase slida de 1 cm x
5 cm; contiene relleno de copolmero de estireno-divi-
nilbenceno con un dimetro tje 75 a 150 m y un ta-
mao de poro de 400 a 600 A. Acondicionar la co-
lumna antes de su uso lavando con 50 mL de metano!
y 50 mL de una mezcla de metano! y agua (3:7).
[NOTA--No dejar que la columna se seque.]
Solucin estndar: 0,2 mg/mL de ER ,B-Clorogenina
USP y de ER Agigenina USP en metano!
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1 O g de
diente de ajo recientemente pelado a un vaso de ho-
mogeneizacin de 37 ml y homogeneizar con 25 ml
de metano! a la velocidad ms alta durante 1 minuto.
Centrifugar la mezcla y decantar el sobrenadante en un
matraz. Agregar 70 mL de agua. Transferir a la Columna
de extraccin, dejar que escurra y desechar el eluato.
Lavar la columna con 50 mL de una mezcla de metano!
y agua (3: 7), dejar que la mezcla de disolventes escurra
y desechar el eluato. Por ltimo, eluir la fraccin de
saponina sin procesar en la columna con 20 ml de me-
tano! y recoger el eluato. Evaporar el disolvente hasta
sequedad. Disolver el residuo en 4 mL de una mezcla
de cido sulfrico al 8% y alcohol (1 :1 ), transferir la
solucin a un tubo de ensayo con tapa de rosca y ca-
lentar en u11 bao de agua hirviendo durante 5 horas.
USP 38
Fnfriar PI tuho rle ensayo, agregar 20 mL de agua y
tramferir la solucin a una Columna de extraccin re-
cientemente acondicionada, dejar que escurra y dese-
cl 1ci1 el elualu. Lavat la culu111r1ct LOll 30 r11L Je ur1ct
mezcla de metano! y agua (7:3), y desechar el eluato.
Por ltimo, eluir la columna con 50 mL de metano!. Re-
coger el eluato, evaporarlo hasta sequedad y disolver el
residuo en 0,5 mL de metano!.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 L, en bandas de 7 mm
Fase mvil: Cloruro de metileno y metano! (15:2)
Solucin reveladora: Disolver 0,5 mL de 4-metoxiben-
zaldehdo y 0,5 mL de cido sulfrico en alcohol sufi-
ciente para obtener 1 O mL.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y .SOiucin muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cmara saturada
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la placa. Retirar la
placa y dejar que la fase mvil se evapore. Rociar la
placa con Solucin reveladora, calentar la placa a
100-l 05 durante 5 minutos y observar la placa.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta, entre varias manchas de color
verde amarillento y grisceo, una mancha verde gris-
ceo a un valor R, de aproximadamente 0,4, que corres-
ponde a la mancha verde grisceo debida a -cloroge-
nina de la Solucin estndar. El cromatograma de la
Solucin muestra no presenta manchas a un valor Rr de
aproximadamente 0,2, que corresponde a agigenina de
la Solucin estndar.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ALINA
Solucin inhibidora de aliinasa: Disolver 109 mg de
hemiclorhidrato de carboximetoxilamina en 1 00,0 mL
de agua.
Solucin A: Fosfato monobsico de sodio 0,045 M en
agua, ajustado con hidrxido de sodio 0,2 M a un pH
de 7, 1.
Solucin amortiguadora: Fosfato monobsico de sodio
0,05 M en agua, ajustado con hidrxido de sodio 0,2
M a un pH de 9,5.
Reactivo de derivatizacin: Disolver 140 mg de o-ftal-
dialdehdo en 5 mL de metano!, agregar 1 00 L de t-
butiltiol y diluir con Solucin amortiguadora hasta
50 ml. [NOTA-Este reactivo puede tornarse ocasional-
mente opaco durante la preparacin. Almacenar a tem-
peratura ambiente y usar dentro de la primera semana.]
Fase mvil: Acetonitrilo, 1,4-dioxano, tetrahidrofurano
y Solucin A (25: 2,9: 2,2: 69,9)
Solucin estndar: 0,05 mg/ml de ER Alina USP en
una mezcla de metano! y agua (1 :1)
Solucin madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 10,0 g de dientes de ajo recientemente pelados,
pesados con exactitud, a un vaso de homogeneizacin
de 11 O mL. Agregar 70,0 mL de Solucin inhibidora de
aliinasa y mezclar a la velocidad ms alta durante 30
segundos. Centrifugar y decantar el sobrenadante en un
matraz volumtrico de 100 mL. Mezclar los slidos re-
manentes en el vaso con 20 mL de Solucin inhibidora
de aliinasa, centrifugar y agregar el sobrenadante al ma-
traz volumtrico. Diluir el contenido del matraz con So-
lucin inhibidora de aliinasa a volumen.
Solucin muestra: Diluir una porcin de la Solucin ma-
dre de la muestra 1 en 1 O con una mezcla de metano! y
agua (1 :1 ).
Sistema cromato9rfico
(Ver Cron1atografa \621 ), Aptitud de/ 5istena.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 3 3 7 nm
Columna: 4 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mUm1n
Volumen de inyeccin: 1O p L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
[NOTA-La alina presenta dos picos principales que re-
presentan sus diasteremeros.]
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
cada _uno de los picos principales, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Con una jeringa, transferir O, 1 mL de la Solucin estn-
dar o de la Solucin muestra a sendos viales con tapa
de septo y agregar 0,5 mL del Reactivo de derivatiza-
cin a cada vial. Permitir un tiempo de reaccin de no
menos de _2 minutos antes de inyectar en el cromat-
grafo. Registrar los cromatogramas y medir las reas
de los picos de diasteremeros de alina.
Calcular el porcentaje de alina en la porcin de Ajo
tomada:
Resultado = (ru/rs) x C5 x (V/W) x O x 100
ru = rea del pico de alina de la Solucin muestra
rs = reas de los picos de diasteremeros de alina
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Alina USP en la Solucin
estndar (mg/mL)
V = volumen de Solucin madre de la muestra (mL)
W = peso de Ajo usado para preparar la Solucin
madre de la muestra (mg)
O = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra a partir de la Solucin madre de la
muestra, 1 O
Criterios de acep_tacin: No menos de 0,5% con res-
pecto a la materia seca
CONTENIDO DE y-GLUTAMIL-(S)-ALIL-L-CISTENA
Soluci~'m A: Disolver 6,80 g de fosfato monobsico de
potasio en 900 mL de agua y ajustar con cido fosfrico
a un pH de 2,6. Diluir con agua hasta 1000,0 mL y
mezclar.
Fase mvil: Metano! y Solucin A (3:17).
Solucin estndar: 0,08 mg/mL de ER y-Glutamil-(S)-
alil-L-cistena USP en una mezcla de metanol y agua
(1 : 1)
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1 O g de
dient~s de ajo recientemente pelados, pesados con
exactitud, a un vaso de homogeneizacin de 11 O ml.
Agregar 80 n:L de una mezcla de ,metanol y agua (1 :1 ),
y homogeneizar a la velocidad mas alta durante 1 mi-
nuto. Centrifugar la mezcla y decantar el sobrenadante
en un matraz volumtrico de 250 mL. Mezclar los sli-
dos remanentes con dos porciones de 70 mL de una
mezcla de metano! y agua (1 :1 ), centrifugar y transferir
los sobrenadantes al matraz volumtrico. Diluir el conte-
nido del matraz con una mezcla de metanol y agua
(1 :1) a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,8 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O uL
Aptitud del sistema ' cerrados en un lugar fresco y seco. Proteger de la luz.
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desv!acin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de y-glutamil-(S)-alil-L-cistena en inyecciones
repetidas
\111/prrwuim Dit>lf>licc1\ /Ajo 6299
Anlisis
Muestras: Soluc1on estandar y Solucn muestra
Calcular el porcentaje de y-glutamil-(S)-alil-L-cistena en
la porc1on de Ao tomada:
Resultado= (ru/r,) x Cs x (V/W) x 100
ru = respuesta del pico de y-glutamil-(S)-alil-L-
cistena de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de y-glutamil-(S)-alil-L-
cistena de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER y-Glutamil-(S)-alil-L-
cistena USP en la Solucin estndar (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Ajo usado para preparar la Solucin
muestra (mg)
Criterios de aceptacion: No menos de 0,2% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Bulbos subglobulares compuestos de
3-5 cm de ancho, que consisten en 8-20 dientes 'ro-
deado en su totalidad por 2-5 capas de hojas esamo-
sas blancas unidas a una base circular aplanada los
dientes son ovoides con 3 a 4 lados, punta agu'da, es-
trechada en una porcin similar a un hilo de base fi-
brosa, truncada, cada diente cubierto con una hoja es-
camosa blanca y una epidermis de color blanco rosado
fcilmente_ separable de la porcin slida, que consiste '
en dos hoas escamosas y dos hojas conduplicadas de
color verde amarillento
Mi~roscpicas: La hoja, protectora in_cluye una epider-
mis que rodea un mesofilo sin clorofila. La epidermis
externa consta de esclereidas de clulas lignificadas, de
paredes gruesas con puntuaciones, alargadas, recubier-
tas con una cutcula fina, fibras largas de hasta 500 m
de longitud y 30 m de ancho.
Las clulas co.rticales tienen paredes gruesas, no lignifi-
cadas, que tienden a colapsarse en su madurez isodia-
mtricas y contienen pigmentos prpuras. Los haces
".s~~lares consiste~ en vasos espiralados y anillados
l1grnf1c~dos. ~as hoas de alr;iacenamiento presentan
una ep1derm1s ~xterna de celulas delicadas y delgadas
con formas variables, colocadas en filas algo irregula-
res, de 60 m de largo y 30 m de ancho. Se presen-
tan estomas en la epidermis externa nicamente en la
f
unta del extremo cerca de la base de las hojas.
E mes!ilo con_sta de clulas parenquimticas de alma-
~enam1ento hinchadas rellenas de material granular
fino de reserva; se presentan 20 conductos laticferos
esparcidos en la corteza, de 500-1 000 m de largo.
Lo~ haces .vas_culares consisten en vasos espiralados y
anillados l1grnf1cados estrechos que se distribuyen en
dos series en el mesfilo.
ARTCU~OS DE ORIGEN BOTNICO, Contenido de Acua (561):
No mas de 65,0% para bulbos frescos y no mas de 7,0%
para bulbos secos
ARTCU~OS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No mas de 5,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta contenida en el artculo.
6300 Ajo / Suplementos Dietticos
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Agigenina USP
ER Alina USP
CR J-Clu1uge11i11a USP
ER 1-Glutamil (S)-alil-L-cistcna USP
ER L-Metionina USP
Ajo en Polvo
DEFINICIN
El Ajo en Polvo se produce a partir de Ajo que ha sido
cortado, liofilizado o secado a una temperatura que no
exceda de 65 y reducido a polvo. Contiene no menos de
0,3% de alina y no menos de 0, 1 % de y-glutamil-(S)-alil-
L-cistena, calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER L-Metionina
USP en una mezcla de metano! y agua (1 :1)
Solucin estndar B: 0,5 mg/mL de ER Alina USP en
una mezcla de metano! y agua (1 :1)
Solucin muestra: Transferir 1 g de Ajo en Polvo a un
extractor y extraer con dos porciones de 20 mL de una
mezcla de metano! y agua (1 :1 ), combinando los ex-
tractos. Concentrar hasta un volumen pequeo (aproxi-
madamente 5 mL), usando un evaporador rotatorio.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 L, aplicados por separado
en bandas de 1 O mm
Fase mvil: Alcohol butlico, alcohol n-proplico, cido
actico glacial y agua (3:1 :1 :1)
Solucin reveladora: Solucin de ninhidrina 0,2 en
1 00 en una mezcla de alcohol butlico y cido actico
2 N (19:1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa, en una cmara saturada. Retirar la
placa y dejar que la fase mvil se evapore. Rociar con
Solucin reveladora, calentar a 100-l 05 durante 1 O
minutos y observar la placa inmediatamente.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes zonas de color ana-
ranjado y violeta rosado: una zona violeta con un valor
Rr de aproximadamente 0,89; una zona rosada con un
valor Rr de aproximadamente 0,5 y que corresponde en
color y valor Rr a la obtenida del cromatograma de la
Solucin estndar A; una zona rosada con un valor R1 de
aproximadamente 0,43; una zona anaranjada intensa
con un valor Rr de aproximadamente 0,38; una zona
violeta rosado con un valor Rr de aproximadamente 0,3
y que corresponde en color y valor Rr a la del cromato-
grama de la Solucin estndar B; y zonas adicionales de
color anaranjado rosado ubicadas muy cerca una de
otra justo por debajo de la zona atribuida a alina en el
cromatograma de la Solucin estndar B.
B.
Muestra: Aproximadamente 1 O g de Ajo en Polvo
Anlisis: Transferir la Muestra a un matraz adecuado.
Agregar 1 O mL de hidrxido de sodio 1 N y 1 O mL de
agua, calentar el matraz en agua hirviendo durante 1 O
minutos, enfriar y filtrar. Agregar unas pocas gotas de
nitroferricianuro de sodio SR recientemente preparado a
2 mL del filtrado.
USP 38
Criterios de aceptacin: La aparicin de un color rojo
o rojo anaranjado indica la presencia de compuestos
que contienen azufre en la Muestra.
(. Ei tiempo de retencin del pico principal de la ~o/u
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en la pryeba de Contenido de,Alina.
D. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Columna de extraccin: De fase slida de 1 cm x
5 cm; contiene relleno de copolmero de estireno-divi-
nilbenceno con un dimetro tje 75 a 150 m y un ta-
mao de poro de 400 a 600 A. Acondicionar la co-
lumna antes de su uso lavando con 50 mL de metano!
y 50 mL de una mezcla de metano! y agua (3:7).
[NOTA-No dejar que la columna se seque.]
Solucin estndar: 0,2 mg/mL de ER 3-Clorogenina
USP y de ER Agigenina USP en metano!
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1 O g de
Ajo en Polvo a un vaso de homogeneizacin de 37 mL
y homogeneizar con 25 mL de metano! a la velocidad
ms alta durante 1 minuto. Centrifugar la mezcla y de-
cantar el sobrenadante en un matraz. Agregar 70 mL de
agua. Transferir a la Columna de extraccin, dejar que
escurra y desechar el eluato. Lavar la columna con
50 mL de una mezcla de metano! y agua (3:7), dejar
que la mezcla de disolventes escurra y desechar el
eluato. Por ltimo, eluir la fraccin de saponina sin pro-
cesar en la columna con 20 mL de metano! y recoger el
eluato. Evaporar el disolvente hasta sequedad. Disolver
el residuo en 4 mL de una mezcla de cido sulfrico al
8% y alcohol (1 :1 ), transferir la solucin a un tubo de
ensayo con tapa de rosca y calentar en un bao de
agua hirviendo durante 5 horas. Enfriar el tubo de en-
sayo, agregar 20 mL de agua y transferir la solucin a
una Columna de extraccin recientemente acondicio-
nada, dejar que escurra y desechar el eluato. Lavar la
columna con 30 mL de una mezcla de metano! y agua
(7:3), y desechar el eluato. Por ltimo, eluir la columna
con 50 mL de metano!. Recoger el eluato, evaporarlo
hasta sequedad y disolver el residuo en 0,5 mL de
metano l.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 L, en bandas de 7 mm
Fase mvil: Cloruro de metileno y metano! (15:2)
Solucin reveladora: Disolver 0,5 mL de 4-metoxiben-
zaldehdo y 0,5 mL de cido sulfrico en alcohol sufi-
ciente para obtener 1 O mL.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cmara saturada
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la placa. Retirar la
placa y dejar que la fase mvil se evapore. Rociar la
placa con Solucin reveladora, calentar la placa a
100-l 05 durante 5 minutos y observar la placa.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta, entre varias manchas de color
verde amarillento y grisceo, una mancha verde gris-
ceo a un valor R, de aproximadamente 0,4, que corres-
ponde a la mancha verde grisceo debida a 3-cloroge-
nina de la Solucin estndar. El cromatograma de la
Solucin muestra no presenta manchas a un valor Rr de
aproximadamente 0,2, que corresponde a agigenina de
la Solucin estndar.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ALINA
Solucin inhibidora de aliinasa: Disolver 1 09 mg de
hemiclorhidrato de carboximetoxiiamina en 100,0 mL
de agua.
Solucin A: Fosfato monobsico de sodio 0,045 M en
agua. Ajustar con hidrxido de sodio 0,2 M a un pH de
7, l.
USP 38
Solucin amortiguadora: Fosfato monobsico de sodio
0,05 M en aqua. Ajustar con hidrxido de sodio 0,2 M
a un pH de 9,5.
Reactivo de derivatizacin: Disolver 140 mg de o-ftal-
dialdehdo en 5 mL de metdnol, agregar 100 pL de t-
butiltiol y diluir con Solucin amortiguadora hasta
50 ml. [NOTA-Este reactivo puede tornarse ocasional-
mente opaco durante la preparacin. Almacenar a tem-
peratura ambiente y usar dentro de Ja primera semana.]
Fase mvil: Acetonitrilo, 1,4-dioxano, tetrahidrofurano
y Solucin A (25: 2,9: 2,2: 69,9)
Solucin estndar: 0,05 mg/mL de ER Alina USP en
una mezcla de metano! y agua (1 :1)
Solucin madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 1,0 g de Ajo en Polvo, pesados con exactitud, a
un matraz. Agregar 30,0 mL de Solucin inhibidora de
aliinasa y agitar vigorosamente hasta que el polvo se
disperse por completo. Centrifugar hasta obtener una
solucin transparente.
Solucin muestra: Transferir 5,0 mL de Solucin madre
de la muestra a un matraz volumtrico de 1O mL y diluir
con Solucin inhibidora de aliinasa a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 337 nm
Columna: 4 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 1O pL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
[NOTA-La alina presenta dos picos principales que re-
presentan sus diasteremeros.]
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
cada uno de los picos principales, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Con una jeringa, transferir O, 1 mL de la Solucin estn-
dar o de la Solucin muestra a sendos viales con tapa
de septo, agregar 0,5 mL del Reactivo de derivatizacin
a cada vial y mezclar. Permitir un tiempo de reaccin
de no menos de 2 minutos antes de inyectar en el
cromatgrafo. Registrar los cromatogramas y medir las
reas de los picos de diasteremeros de alina.
Calcular el porcentaje de alina en la porcin de Ajo en
Polvo tomada:
Resultado = (ru!r1) X e X (V/V\/)
ru = rea del pico de alina de la Solucin muestra
r, =suma de las reas de los picos de
diasteremeros de alina de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Alina USP en la Solucin
estndar (mg/mL)
V = volumen de Solucin madre de la muestro (ml)
W = peso de Ajo en Polvo usado para preparar Ja
Solucin madre de la muestra (mg)
O = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra a partir de la Solucin madre de la
muestra, 2
Criterios de aceptacin: No menos de 0,3% con res-
pecto a la materia seca , ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
CONTENIDO DE y-GLUTAMIL-(S)-ALIL-L-CISTEINA
Solucin A: Disolver 6,80 g de fosfato monobsico de
potasio en 900 mL de agua y ajustar con cido fosfrico
a un pH de 2,6. Diluir con agua hasta 1000,0 mL y
mezclar.
Fase mvil: Metano! y ~oluoon A (3:i /).
Solucin estndar: 0,08 mg/mL de ER y-Glutamil-(S)-
alil-L-cistena USP en una mezcla de metano! y agua
( 1 :1)
Suplementos Dietticos /Ajo 6301
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ajo en Polvo, pesados con exactitud, a un matraz
volumtrico de 50 mL. Aqreqar 30 mL de metano! y
agua (1: 1) y agitar vigorosamente hasta que el polvo se
disperse por completo. Diluir el contenido del matraz
con una mezcla de metano! y agua (1 :1) a volumen.
Centrifugar hasta obtener una solucin transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografia (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,8 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O pL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de y-glutamil-(S)-alil-L-cistena en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de y-glutamil-(S)-alil-L-cistena en
la porcin de Ajo en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x C, x (V/V\/) x 100
ru = respuesta del pico de y-glutamil-(S)-alil-L-
cistena de la Solucin muestra
r1 = respuesta del pico de y-glutamil-(S)-alil-L-
cistena de la Solucin estndar
C5 = concentracin de ER y-Glutamil-(5)-alil-L-
cistena USP en la Solucin estndar (mg/ml)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Ajo en Polvo usado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 0, 1 % con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS, Mtodo, I (231 ): No ms de 1 o ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Caracterizacin del Ajo en
Polvo al microscopio: numerosos fragmentos de parn-
quima con clulas grandes que contienen cristales de
oxalato de calcio y pequeos espacios intercelulares,
triangulares o cuadrangulares, en las esquinas; vasos espi-
X oX 100 ralados acompaados de clulas subcuadrticas; clulas
epidrmicas alargadas con paredes gruesas y punteadas.
AUSENCIA DE ALMIDN: Una suspensin espesa acuosa de
Ajo en Polvo no presenta coloracin azul cuando se le
a_grega yodo SR.
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g del artculo a 1 05
dur,ante 2 horas: pierde }O ms de 7,0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No ms de 5,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados en un lugar fresco y seco. Proteger de la luz.
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de Ja
planta de donde se obtuvo el artculo.
6302 Ajo / Sup!PmPnto1 OiPti'ticm
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Agigenina USP
ER Alina USP
E:R 3-Clorogen1na USf,
ER y-Clutamil-(S)-alil-1-cistena USP
ER L-Metionina USP
Extracto en Polvo de Ajo
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Ajo se prepara a partir de bulbos
frescos de Ajo mediante extraccin con alcohol. La rela-
cin entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto en
Polvo es 9,5:1-13,5:1. Contiene no menos de 4,0% de
alina (C6H11 NO,S). Puede contener Ajo en Polvo u otras
sustancias adecuadas agregadas.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mq/mL de ER L-Metionina
USP en una mezcla de metanol y agua (1: 1)
Solucin estndar B: 0,5 mg/mL de ER Alina USP en
una mezcla de metanol y agua (1 : 1)
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto
en Polvo, equivalente a aproximadamente 5 mg de
alina, a un recipiente adecuado. Agregar 40 mL de una
mezcla de metanol y agua (1 :1 ), y agitar hasta que el
polvo se disperse por completo. Centrifugar y decantar
el sobrenadante en un matraz de fondo redondo. Con-
centrar hasta un volumen pequeo (aproximadamente
5 mL) usando un evaporador rotatorio.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 L, aplicados por separado
en bandas de 1 O mm
Fase mvil: Alcohol butlico, alcohol n-proplico, cido
actico glacial y agua (3:1 :1 :1)
Solucin reveladora: Solucin al 0,2% de ninhidrina en
una mezcla de alcohol butlico y cido actico 2 N
(19:1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cmara saturada
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la placa. Retirar la
placa y dejar que la fase mvil se evapore. Rociar con
Solucin reveladora, calentar a 100"-l 05 durante 1 O
minutos y observar la placa inmediatamente.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes zonas de color ana-
ranjado y violeta rosado: una zona violeta con un valor
R, de aproximadamente 0,89; una zona rosada con un
valor R, de aproximadamente 0,5 y que corresponde en
color y valor R, a la obtenida del cromatograma de la
Solucin estndar A; una zona rosada con un valor Rr de
aproximadamente 0,43; una zona anaranjada intensa
con un valor R, de aproximadamente 0,38; una zona
violeta rosado con un valor R, de aproximadamente 0,3
y quP corresponde en color y valor Rr a la del cromato-
grama de la Solucin estndar B; y zonas adicionales de
color anaranjado rosado ubicadas muy cerca una de
otra justo por debajo de la zona atribuida a alina en el
cromatograma de la Solucin estndar B.
B. El tiempo de retencin del pico de alina de la Solu-
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en la prueba de Contenido de Alina.
USP 38
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ALINA
Solucin inhibidora de aliinasa: 1,09 mq/mL de hemi-
clorhidrato de carboximetoxilamina
Solucin A: Fosfato monobsico de sodio 0,045 M en
agua, ajustado con hidrxido de sodio 0,2 M a un pH
de 7, 1.
Solucin amortiguadora: Fosfato monobsico de sodio
0,05 M en agua, ajustado con hidrxido de sodio 0,2
M a un pH de 9,5.
Reactivo de derivatizacin: Disolver 140 mg de o-ftal-
dialdehdo en 5 mL de metano!. Agregar 100 L de t-
butiltiol, diluir con Solucin amortiguadora hasta 50 mL
y mezclar. [NOTA-Este reactivo puede tornarse ocasio-
nalmente opaco durante la preparacin. Almacenar a
temperatura ambiente y usar dentro de la primera
semana.]
Fase mvil: Acetonitrilo, 1,4-dioxano, tetrahidrofurano
y Solucin A (25: 2,9: 2,2: 69,9)
Solucin estndar: 0,05 mg/mL de ER Alina USP en
una mezcla de metanol y agua (1 :1)
Solucin muestra: Transferir aproximadamente O, 1 O g
de Extracto en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
traz volumtrico de 50 mL. Agregar 30 mL de Solucin
inhibidora de aliinasa y agitar hasta que el Extracto en
Polvo se disperse por completo. Diluir con Solucin inhi-
bidora de aliinasa a volumen. Centrifugar, transferir
5 mL del sobrenadante transparente a un matraz volu-
mtrico de 1 O mL y diluir con Solucin inhibidora de alii-
nasa a volumen.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 337 nm
Columna: 4 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
[NOTA-La alina presenta dos picos principales que re-
presentan sus diasteremeros.]
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
cada uno de los picos principales
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Con una jeringa volumtrica, transferir O, 1 mL de la So-
lucin muestra o de la Solucin estndar a sendos viales
con tapa de septo y agregar 0,5 mL del Reactivo de
derivatizacin a cada vial. Permitir un tiempo de reac-
cin de no menos de 2 minutos antes de inyectar en
el cromatgrafo. Registrar los cromatogramas y medir
las reas de los picos de diasteremeros de ali1na.
Calcular el porcentaje de alina en la porcin de Ex-
tracto en Polvo tomada:
Resultado= (ru/r,) X e X (V/VV) >\ l 00
r1' = rea del pico de alina de la Solucin muestra
r1 = reas de los picos de diasteremeros de alina
de la Solucin estndar
C = concentracin de ER Alina USP en la Solucin
estndar (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Extracto en Polvo de Ajo usado para
preparar la Solucin muestra (rng)
Criterios de aceptacin: No menos de 4,0% con res-
pecto a la materia seca
USP 38
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo I (231): No ms de
1 O ppme (Oficial 01-dic-2015)
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _pa_ra de_terminar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Eschenchta colt.
PRUEBAS ESPECFICAS
ACTIVIDAD DE ALllNASA
Solucin inhibidora de aliinasa, Solucin A, Solucin
amortiguadora, Reactivo de derivatizacin1 _Fase m~
vil, Solucin estndar, Sistema cromatograf1co y Ana-
lisis: Proceder segn se indica en la prueba de Conte-
nido de Alina.
Solucin muestra: Incubar 200 mg de Extracto en
Polvo con 20 mL de agua a temperatura ,ambien~e du-
rante 5 minutos. Inmediatamente despues de la incuba-
cin, agregar 80,0 mL de Solucin inhibidora de aliinasa,
mezclar y centrifuga_r; , . .,
Criterios de aceptac1on: El area del Pl\O de al11n~ de la
Solucin muestra es no ms de 1 % del area del pico de
alina de la Solucin estndar.
DETERMINACIN DE ALCOHOL, Mtodo 11 (611): No ms de
0,5J'o , .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Contentdo de Agua (561):
No ms de 5,0%
OTROS REQUISITOS: Cumple con los req~isitos en ~xtractos
Botnicos (565), Envasado y Almacenamiento y Residuos de
Plaguicidas.
REQUISITOS ADICIONALES . Rr de aproximadamente 0,4 correspondiente al de la
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases Im-
permeables, en un lugar fresco. Proteger de_ la 1,u_z.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1ent1f1co en
latn y despus de la denominaci~ oficia~ la parte ~e la
planta a partir de la que se preparo el a~~1culo. La eti-
queta tambin indica el contenido .~e al11na, el disolvente
o mezcla de disolventes de extracc1on usados para la pre-
paracin y la relacin entre el material vegetal c~~do ini-
cial y el Extracto en Polvo. Cumple con los requ1s1tos en
Extractos Botnicos (565), Etiquetado.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alina USP
ER L-Metionina USP
Extracto Fluido de Ajo
DEFINICIN
El Extracto Fluido de Ajo se prepara segn se indica a. conti-
nuacin. Empapar 1000 g de Ajo, entero o en roda1as, en
un volumen de una mezcla de agua y alcohol (entre
80:20 y 50:50) suficiente para cubrir los dientes. Almace-
nar en un envase adecuado durante un periodo suficiente
para extraer los componentes, evitando _cualquier conta-
minacin, y luego filtrar. Conc,entrar el fdtrado, s1 fuera
necesario, a la temperatura mas ba1a posible y agregar
suficiente agua o alcohol para que el producto alcance
1 000 ml. [NOTA-Completar la extraccin puede tomar
30 das.]
~uplcmcntos D1ctet1cos ! Ao 6303
IDENTIFICACIN ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Columna de extraccin: Usar una columna de extrac-
con en tase slida que contenga ,bencenosulfonilpropil
unido a gel de slice en la forma ac1da con una relac1on
entre la masa del sorbente y el volumen de la columna
de 1 g por 6 mL o equivalente. Acondicionar la co-
lumna antes de usar lavando con 1 O mL de metano! y
1 O mL de agua. [NOTA-No dejar que la columna se
seque.] . . ,
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de ER S-Alil-L-mte1na
USP en una mezcla de metano! y agua (1 :1)
Solucin muestra: Mezclar 1 mL de Extracto Fluido y
5 mL de agua, y transferir a la Columna de extraccin.
Dejar que escurra y desechar el eluato. Lavar la co-
lumna con 1 O mL de agua y 1 O _n;L de me~an<;>I,_ dese-
chando los eluatos. Eluir la fracc1on de aminoac1do con
3 mL de solucin de hidrxido de amonio en metano!
(7 en 100) y recoger el eluato.,. ,
Adsorbente: Capa de gel de s1hce para cromatograf1a
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicacin: 5 L , .
Fase mvil: Acetato de etilo, metano!, acetona, ac1do
actico glacial y agua (10:4:3:1_:3)
Solucin reveladora: Yodoplat1nato SR
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cmara saturada
hasta que el frente de la fase mvil haya recor~ido
aproximadamente tres cuartos de la placa. Retirar la
placa y dejar que la fase mvil se evapore. Rociar con
Solucin reveladora y observar la placa.
Criterios de aceptacion: El croi:natograma de la ~olu
cin muestra presenta entre vanas manchas amarillas
sobre la placa prpur~, una mancha am_arilla a un valor
mancha amarilla obtenida en el cromatograma de la
Solucin estndar (presencia de S-alil-L-cistena).
COMPOSICIN ,
CONTENIDO DE S-ALIL-L-CISTEINA
Fase mvil: Transferir 15,8 g de citrato de sodio dihi-
drato a 250 mL de agua y agregar cuidadosamente .
1 O 5 mL de cido clorhdrico. Con ayuda de un medi-
do~ de pH, ajustar con hidrxido de sodio 6 N a un pH
de 4,0. Diluir con agua hasta 1 000 mL y mezclar.
Reactivo de derivatizacin: Disolver 0,8 g de o-ftalal-
dehdo en 2 mL de 2-mercaptoetanol. Agregar a una
solucin que contenga 24,70 g de cido brico y
22, 35 g de hidrxido de potasio en 1000 mL de agua, y
mezclar.
Solucin de reactivacin: Hidrxido de sodio 0,2 N.
Preparar disolviendo 0,8 g de hidrxido de sodio en
1 00 mL de agua. . . ,
Solucin estndar: 0,01 mg/mL de ER S-Alil-L-mteina
USP en agua
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Extracto Fluido, pesados con exactitud, a un matraz
volumtrico de 100 mL, diluir con solucin de cido tri-
cloroactico (5 en 1 00) a volumen y mezclar. Centrifu-
gar durante 5 minutos y filtrar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a \621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Fluoromtrico; longitud de onda de excita-
cin de 340 nm y longitud de onda de emisin de
455 nm
Columna: 4,6 mm x 12 cm; relleno L1 7
Temperatura de la columna: 40'"
Volumen de inye~cin: 1 O L_ _ . .,
[NOTA-La Fase movil y la Soluoon de react1vac1on se
bombean por separado, cada una a una velocidad de
0,4 ml/min, usando bombas conectadas a los brazos
6304 Ajo / Suplementos Dietet1cos
opuestos de una T. La saliua Je la T se conecta al
inyector y a la columna cromatogrfica. Conectar la ,
salida de la columna a una T, cuyo brarn opuesto esta
conectado a un tubo desde el cual se bombea cons-
tantemente el Reactivo de derivatizacin a travs del
sistema a una velocidad de 0,6 ml/min. Conectar la
salida de la Ta un espiral de reaccin de tefln post-
columna, de 0,5 mm x 2,0 m, mantenida a 40. Co-
nectar la salida del espiral de reaccin al detector. Pro-
gramar el sistema para que administre la Fase mvil
durante 1 O minutos, la Solucin de reactivacin durante
los siguientes 6 minutos y la Fase .m.vil durante 1.~s 24
minutos remanentes antes de la s1gu1ente inyecc1on.]
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de capacidad (k'): 2,5-4,5
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
S-alil-L-cistena
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de S-alil-L-cistena en inyecciones repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de S-alil-L-cistena (C6H11SN) en la
porcin de Extracto Fluido tomada:
Resultado= (ru/rs) x C1 x (V/11\1) x 100
ru = altura del pico de S-alil-L-cistena de la Solucin
muestra
r5 = altura del pico de S-alil-L-cistena de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER S-Alil-L-cistena USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
V = volumen de Solucin muestra (ml)
W = peso de Extracto Fluido usado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,05% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 11 {231): No ms de
1O ppm (Oficial Ol -dic-2015)
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de .10 3 ufc/
ml, y el recuento total combinado de hongos filamento-
sos y levaduras no excede de 10 2 ufs:/mL.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las prueba.s para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschenchw coll.
PRUEBAS ESPECFICAS
RESIDUO DE EVAPORACIN: Proceder segn se indica en
Extractos Botnicos (565): No menos de 20% de la por-
cin de Extracto Fluido tomada permanece como
residuo .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 3,0% , CONTENIDO DE ALINA
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561) No ms de 0,2%
PH (791): 4,5-6,5
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Extractos
Botnicos (565/, Requisitos Farmacopeicos Generales, sec-
ciones de Envasado y Almacenamiento, Etiquetado, Resi-
duos de Plaguicidas y Contenido de Alcohol para Extractos
Lquidos.
REQUISITOS ADICIONALES
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER S-Alil-L-cistena USP
USP 38
Ajo, Tabletas de Liberacin Retardada
DEFINICIN
Las Tabletas de Liberacin Retardada de Ajo se preparan a
partir de Ajo en Polvo o Extracto en, Polvo de Ajo y con-
tienen no menos de 90,0% y no mas de 140,0% de la
cantidad declarada de alina (C0H11NOiS) y no menos de
90,0% y no ms de 140,0% de la cantidad declarada de
alicina potencial (C6H100S2).
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER L-Metionina
USP
Solucin estndar B: 0,5 mg/ml de ER Alina USP, en
una mezcla de metano! y agua (1 :1)
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Tabletas
reducidas a polvo, equivalente a 30 mg de alina, a un
matraz volumtrico de 100 ml. Agregar 70 mL de una
mezcla de metanol y agua (1 :1 ), agitar y centrifugar.
Concentrar hasta un volumen pequeo (aproximada-
mente 5 ml) usando un evaporador rotatorio.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Volumen de aplicacin: 20 L, aplicados por separado
en bandas de 1O mm
Fase mvil: Alcohol butlico, alcohol n-proplico, cido
actico glacial y agua (3:1 :1 :1) . . .
Solucin reveladora: 2 mg/ml de ninh1dnna en una
mezcla de alcohol butlico y cido actico 2 N (19:1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Proceder segn se indica en el captulo. Rociar con
Solucin reveladora, calentar a 100-l 05 durante 1 O
minutos y observar la placa inmediatamente.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes zonas de color ana-
ranjado y violeta rosado: una zona violeta con un valor
Rf de 0,89; una zona rosada con un valor RF d~ 0,5 y
que corresponde en color y valor R1 a la obtenida del
cromatograma de la Solucin estndar A; una zona ro-
sada con un valor Rr de 0,43; una zona anaranjada in-
tensa con un valor RF de 0,38; una zona violeta rosada
con un valor RF de 0,3 y que corresponde en color y
valor Rf a la del cromatograma de la Solucin estndar
B; y zonas adicionales de color anaranjado rosado ubi-
cadas muy cerca una de otra justo por debajo de la
zona atribuida a alina en el cromatograma de la Solu-
cin estndar B.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Alina .
Criterios de aceptacin: La .solucin muestra pre.senta
un pico de alina_correspond1ente .~no d~ los picos del
par de diasteroisomeros de la SoluC1on estandar.
CONTENIDO
Solucin inhibidora de aliinasa: Disolver 1 09 mg de
hemiclorhidrato de carboximetoxilamina en 1 00,0 mL
de agua. , .
Solucin A: Disolver 1,24 g de fosfato monobas1co de
sodio en 1 00 ml de agua, ajustar con hidrxido de so-
dio 0,2 M a un pH de 7, 1 y diluir con agua hasta
200,0 ml.
Solucin amortiguadora: Disolver 1,38 g de fosfato
monobsico de sodio en 100 ml de agua, aiustar con
hidrxido de sodio 0,2 M a un pH de 9,5 y diluir con
agua hasta 200,0 ml.
Reactivo de derivatizacin: Disolver 140 mg de o-ftal-
dialdehdo en 5 ml de metanol, agregar 100 L de t-
USP 38
butiltiol y diluir con Solucin amortiguadora hasta
50 ml. [NOTA-Este reactivo puede tornarse ocasional-
mente opaco durante la preparacin. Almacenar a tem-
peratura ambiente y usar denlro de ia primera ~emana.]
Fase mvil: Acetonitrilo, 1,4-dioxJno, tetrJhidrofurano
y Solucin A (25: 2,9: 2.2: 69,9)
Solucin estndar: 0,05 mg/ml de ER Alina USP en
una mezcla de metano! y agua (1: 1) Con una jeringa,
transferir O, 1 ml de esta solucin a un vial con tapa de
septo y agregar 0,5 ml del Reactivo de derivatizacin.
Permitir un tiempo de reaccin de no menos de 2 mi-
nutos antes de inyectar en el cromatgrafo.
Solucin muestra: Pulverizar un nmero contado de
Tabletas, equivalente a 50 mg de alina, con un mortero
y mano de mortero. Transferir una cantidad de polvo,
equivalente a 5 mg de alina, a un matraz volumtrico
de 100 ml. Agregar 70 ml de Solucin inhibidora de alii-
nasa y agitar durante 1 minuto. Diluir con Solucin inhi-
bidora de aliinasa a volumen. Con una jeringa volum-
trica, transferir O, 1 ml de esta solucin a un vial con
tapa de septo y agregar 0,5 ml del Reactivo de derivati-
zacin. Permitir un tiempo de reaccin de no menos de
2 minutos antes de inyectar en el cromatgrafo.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 337 nm
Columna: 4 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
[NOTA-La alina presenta dos picos principales que re-
presentan sus diasteremeros.]
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
cada uno de los picos principales
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
[NOTA-Registrar los cromatogramas y medir las reas
de los picos de diasteremeros de alina.]
Calcular el porcentaje de alina en la porcin de Table-
tas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de alina de la Solucin muestra
rs = suma de las reas de los picos de
diasteremeros de alina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Alina USP en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de alina en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90%-140,0%
CONTENIDO DE ALICINA POTENCIAL
Solucin inhibidora de aliinasa: Disolver 1 09 mg de
hemiclorhidrato de carboximetoxilamina en 100,0 ml
de agua.
Solucin de aliinasa cruda: Homogeneizar 5 g de dien-
tes de ajo crudos con 25 ml de agua. Filtrar y extraer
tres veces con 50 ml de terc-butil metil ter. Desechar
la fase orgnica y retirar el disolvente residual de la fase
acuosa mediante evaporacin rotatoria al vaco durante
5 minutos. Filtrar y almacenar congelada en viales pe-
queos. [NOTA--Esta solucin es estable durante 6 me-
ses cuando se almacena segn se indica. Descongelar a
temperatura ambiente justo antes de su uso.]
Fase mvil: Metano! y agua (3:2)
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de ER Alina
USP
Solucin estndar: Transferir 1,0 ml de la Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 5 mL que
contenga 1 00 L de Solucin de aliinasa cruda y dejar
en reposo durante 5 minutos a temperatura ambiente.
Suplementos Dietticos /Ajo 6305
Diluir con agua a volumen y pasar a travs de un filtro
con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir el equivalente a 5 mg de
aiiuna polenciai, a par lir Je ai.Jiela~ reJuciJa~ a polvu
fino (no menos de 20), a un matraz volumtrico de
200 ml y agregar 25 ml de agua. Incubar a tempera-
tura ambiente durante exactamente 30 minutos. Dete-
ner la reaccin enzimtica diluyendo con Solucin inhibi-
dora de aliinasa a volumen. Centrifugar una porcin de
esta solucin, transferir 1,0 ml del sobrenadante a un
matraz volumtrico de 5 ml y diluir con agua a
volumen.
Solucin blanco: 1 00 L de Solucin de aliinasa cruda
diluida con agua hasta 1 ml.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 240 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Solu-
cin blanco
[NOTA-El pico de alicina se identifica comparando los
cromatogramas de la Solucin blanco y la Solucin
estndar.)
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 2,0 entre el pico de alicina
y el pico precedente a un tiempo de retencin rela-
tivo de 0,80 (tiosulfinatos de alil metilo), Solucin
muestra
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Solu-
cin blanco
Calcular el porcentaje de alicina potencial en la por-
cin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r,) x (Cs/(,) x (Mc1/M,2) x 100
ru = rea del pico de alicina de la Solucin muestra
corregida por la respuesta de la Solucin
blanco
r5 = rea del pico de alicina de la Solucin estndar
corregida por la respuesta de la Solucin
blanco
Cs = concentracin de ER Alina USP en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de alicina potencial en
la Solucin muestra (g/ml)
M,, = peso molecular de alicina, 162,26
M2 = dos veces el peso molecular de alina, 354,42
Criterios de aceptacin: 90,0%-140,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
LIBERACIN DE ALICINA: Proceder segn se indica en Diso-
lucin (711) para el Mtodo A en Aparato 1 y Aparato 2,
Formas Farmacuticas de Liberacin Retardada. Colocar un
nmero de Tabletas, equivalente a 5 mg de alicina poten-
cial, en cada vaso.
Aparato 2: 1 00 rpm
Tiempo: 60 minutos para la Etapa amortiguada
Solucin de aliinasa cruda, Fase mvil, Solucin
blanco y Sistema cromatogrfico: Proceder segn se
indica en la prueba de Contenido de Alicina Potencial.
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de ER Alina
USP
Solucin estndar: Transferir 1,0 ml de la Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 5 ml que
contenga 100 L de Solucin de a!iinasa cruda y dejar
en reposo durante 5 minutos a temperatura ambiente.
Diluir con agua a volumen y pasar a travs de un filtro
de membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
6306 Ajo / Suplementm Dietticos USP 38

Solucin muestra: TransfPrir 1,0 mi dP la 5olucin en ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)

anlisis a un tubo Je emayo que contenga 50 L de ER Alina USP
solucin de hemiclorhidrato de carboximeloxilamina ER L-Metionina USP
0,21 M.
[NOTA-La solucin debe transferirse inmediatamente
una vez retirada del vaso de disolucin para inhibir la
enzima aliinasa.]
Volumen de inyeccin: l 00 L L-Alanil-t-glutamina
Anlisis
[NOTA-No llevar a cabo la determinacin de alicina en
la Etapa cida.] 'J
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra OH

Calcular el porcentaje de alicina potencial liberada en o

la Etapa amortiguada:
NH,

Resultado= (ru/rs) x (C x O x V/L) x (Mc1/M2) x 100

ru = rea del pico de alicina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de alicina de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Alina USP en la Solucin
estndar (g/mL)
O = factor de dilucin de la Solucin muestra,
1,050 (1 mL de la Solucin muestra + 50 L
de solucin de hemiclorhidrato de
carboximetoxilamina 0,21 M)
V = volumen de medio final, 1000 mL
L = cantidad declarada de alicina potencial
(g/Tableta)
M,1 = peso molecular de alicina, 162,26
M,1 = dos veces el peso molecular de alina, 354,42
Tolerancias: Cumplen con los requisitos de la Tabla de
Aceptacin 4 en Disolucin (711 ). LNOTA-Q es el por-
centaje de la cantidad declarada de alicina potencial li-
berad51 nicamente en la Etapa amortiguada.]
VARIACION DE PESO (2091 ): Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
ACTIVIDAD DE ALllNASA
Solucin inhibidora de aliinasa, Solucin A, Solucin
amortiguadora, Reactivo de derivatizacin, Fase m-
vil, Solucin estndar y Sistema cromatogrfico:
Proceder segn se indica en la prueba de Contenido de
Alina.
Solucin muestra: Transferir el equivalente a 5 mg de
alina, a partir de Tabletas reducidas a polvo fino (no
menos de 20), a un matraz volumtrico de 100 mL y
agregar 25 mL de agua. Incubar a temperatura am-
biente durante exactamente 5 minutos. Detener la reac-
cin enzimtica diluyendo con Solucin inhibidora de
aliinasa a volumen. Centrifugar una porcin de esta so-
lucin y usar una jeringa volumtrica para transferir
O, 1 mL del sobrenadante a un vial con tapa de septo.
Agregar 0,5 mL del Reactivo de derivatizacin y permitir
un tiempo de reaccin de no menos de 2 minutos an-
tes de inyectar en el cromatgrafo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Proceder segn se indica en la prueba de Contenido de
Alina.
Criterios de aceptacin: El rea del pico de alina de la
Solucin muestra es no ms de 1% del rea del pico de
alina de la Solucin estndar.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases
impermeables.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del que se prepararon las Tabletas. Etiquetar indi-
cando la cantidad de alina total, en g/Tableta, y la can-
tidad de alicina potencial, en g/Tableta.
CsH1sN104 217,23
L-2-(1-0xo-2-amino-propylamino)-4-amino-4-oxobutanoic
acid
cido L-2-(l -oxo-2-am ino-propilamino )-4-am ino-4-oxobuta-
noico [39537-23-0).
DEFINICIN
La L-Alanil-L-glutamina contiene no menos de 98,0% y no
ms de 101,5% de L-alanil-L-glutamina (CsH1sNi04), cal-
culado con respecto a la sustancia anhidra y exenta de
disolventes, y excluyendo alanina y glutamina.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN El INFRARROJO (197A) ,
B. Cumple con los requisitos de Rotacin Optica, Rotacin
Especfica (781 S) en Pruebas Especficas.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Muestra: 300 mg
Blanco: Mezclar 5 mL de cido frmico con 50 mL de
cido actico glacial.
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Acido perclrico O, 1 N SV
Deteccin del punto final: Potenciomtrica
Anlisis: Disolver la Muestra en 5 mL de cido frmico,
agregar 50 mL de cido actico glacial y valorar con la
Solucin volumtrica. Realizar una determinacin con el
Blanco y hacer las correcciones necesarias.
Calcular el porcentaje de L-alanil-L-glutamina
(CsH1sN14) en la Muestra tomada:
Resultado1 = [(Vs - Vs) x N x (F/W)) x 100
Vs = volumen de la Solucin volumtrica consumida
por la Muestra (mL)
Vs = volumen de la Solucin volumtrica consumida
por el Blanco (mL)
N = normalidad real de la Solucin volumtrica
(mEq/mL)
F =factor de equivalencia, 217,2 mg/mEq
W "' peso de la Muestra (mg)
Calcular el porcentaje de L-alanil-L-glutamina
(CsH 11N i4) en la Muestra tomada, excluyendo alanina
y glutamina:
Resultado:= [(Resultado; - a - b)]/[(l 00 - Ala - Gin)] x
100

Ala = porcentaje de alanina a partir de la prueba de

Compuestos Relacionados
LJSP 38
Gin = porcentJjc de glutJmina J partir de la prueba
de eompt!PS(O\ Relacionados
M;1 = peso molecular de L-alanil-L-glutamina, 21 7,2
M/ = peso molecular de alanina, 89, 1
M; ~ peso molecular de glutamina, 146, 1
Criterios de aceptacin: 98,0%-101,5% con respecto
a la sustancia anhidra y exenta de disolventes, y exclu-
yendo alanina y glutamina
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281 ): No ms de o, 1%
CLORUROS V SULFATOS, Cloruros (221)
Muestra: 0,89 g
Solucin estndar: 0,50 mL de cido clorhdrico 0,01 O
N nina USP a un matraz volumtrico de 25 ml y diluir
Criterios de aceptacin: No ms de 200 g/g
CLORUROS V SULFATOS, Sulfatos (221)
Muestra: 0,98 g
Solucin estndar: 0,20 mL de cido sulfrico 0,01 O N
Criterios de aceptacin: No ms de 200 g/g
HIERRO (241): No ms de 1 o g/g
DISOLVENTES RESIDUALES (467)
Criterios de aceptacin
lsopropanol: No ms de 0,5%
[NOTA-Para los Criterios de aceptacin de cualquier otro
disolvente residual, ver Disolventes Residuales (467).]
LMITE DE AMONIO
Solucin madre del estndar: Disolver 1,486 g de clo-
ruro de amonio en 500,0 mL de agua.
Soluciones estndar de calibracin: Transferir 0,01;
O, 1; 1,0 y 10,0 mL de Solucin madre del estndar a
sendos matraces volumtricos de 100 mL y diluir con
agua a volumen. Las concentraciones finales son O, 1; 1;
1 O y 100 g/mL de iones amonio (NH4+),
respectivamente.
Solucin muestra: Transferir 1,0 g de L-Alanil-L-gluta-
mina a un vaso de precipitados de 150 mL que con-
tenga una barra mezcladora recubierta de plstico,
agregar 100,0 mL de agua y mezclar hasta disolver.
Sistema de electrodos: Usar un electrodo indicador,
detector de gases, especfico para amonaco con refe-
rencia interna conectado a un medidor de pH capaz de
medir los potenciales con una reproducibilidad mnima
de 0, 1 mV (ver pH (791 )). Acondicionar el electrodo
de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Anlisis
Lnea de respuesta del estndar: Transferir 100 mL
de agua a un vaso de precipitados de 150 mL que
contenga una barra mezcladora recubierta de plstico,
insertar el electrodo en el agua, mezclar y medir el
potencial. Agregar 1 mL de solucin de hidrxido de
sodio 1O N, mezclar y medir el potencial despus de la
estabilizacin (aproximadamente 3 minutos). La dife-
rencia de potencial debe ser inferior a 20 mV. Transfe-
rir 100,0 mL de cada una de las Soluciones de calibra-
cin estndar (O, 1; 1; 1O y 100 g/mL de iones
amonio) a sendos vasos de precipitados de 150 mL y
agregar 1 ml de hidrxido de sodio 1 O N. Insertar el
electrodo en cada solucin, mezclar y medir el poten-
cial despus de la estabilizacin (aproximadamente 3
minutos). Graficar una curva (cuatro puntos de calibra-
cin) del potencial (mV) en funcin de las concentra-
ciones de in amonio (g/ml).
Muestra: Solucin muestra
Enjuagar el electrodo, insertarlo en la Solucin muestra,
agregar 1 ml de hidrxido de sodio 1 O N y mezclar.
Verificar el pH, que debe ser superior a 11; si no fuera
as, ajustar con hidrxido de sodio 1 O N. Despus de
3 minutos, medir el potencial y determinar la conce-
tracin de in amonio correspondiente, a partir de la
curva de calibracin.
Calcular el contenido de amonio en la porcin de la
Muestra tomada:
Resultado= (V x C)/W
Suplt>t11t>11t<i\ Dit>tt'ticos / Alanil 6 30 7
V = volumen de la Solucin muestra (ml)
C = concentracin de iones amonio en la Soluc1on
muestra, determinada a partir de la Linea de
respuesta aei estandar tg;mL)
W = peso de 1-Alanil-1-glutamina tomada para
preparar la Solucin muestra (g)
Criterios de aceptacin: No ms de 200 g/g
COMPUESTOS RELACIONADOS
Solucin amortiguadora: Disolver 6,84 g de fosfato
monobsico de potasio en 1000 mL de agua.
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora
(650:350)
Solucin de aptitud del sistema: Transferir 25 mg de
ER L-Alanil-L-glutamina USP y 5 mg de ER L-Alanil-L-ala-
con agua a volumen. Transferir 1,0 ml de esta solucin
a un matraz volumtrico de 1 O ml y diluir con Fase
mvil a volumen.
Solucin estndar 1: 0,025 mg/ml de ER L-Alanina USP
en Fase mvil
Solucin estndar 2: O, 1 mg/ml de ER Glutamina USP
en Fase mvil
Solucin muestra: 2,5 mg/ml de L-Alanil-L-glutamina
en Fase mvil
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L8 de 5 m
Velocidad de flujo: 0,7 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para L-alanil-
L-alanina y L-alanil-L-glutamina son 0,86 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 8000 platos
tericos para el pico de L-alanil-L-glutamina
Resolucin: No menos de 2,0 entre L-alanil-L-gluta-
mina y L-alanil-L-alanina
Anlisis
Muestras: Solucin estndar 1, Solucin estndar 2 y
Solucin muestra
Calcular el porcentaje de alanina y glutamina en la por-
cin de la Muestra tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de alanina o glutamina de
la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de alanina de la Solucin
estndar 7 o glutamina de la Solucin
estndar 2
Cs = concentracin de ER L-Alanina USP en la
Solucin estndar 7 (mg/ml) o concentracin
de ER Glutamina USP en la Solucin estndar
2 (mg/ml)
Cu = concentracin de L-Alanil-L-glutamina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Calcular el porcentaje de cualquier otra impureza
especificada y no especificada en la porcin de la
Muestra tomada:
Resultado = (ru/rr) x 100
ru = respuesta del pico de cada impureza individual
rr = suma de las respuestas de todos los picos,
excluyendo las respuestas de los picos de
alanina y glutamina
Criterios de aceptacin: Ver la Tabla 7.
6308 Alanil /Suplementos Dietticos USP 38

Tabla 1 Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, cido fr-

Tiempo de Criterios de
mico y agua (15:1: 1)
Retencin Aceptacin
Distancia de desarrollo: 6 cm
Nombre Relativo No ms de too)
Reactivo de derivatizac1n A: ::io1uc1on de d1tenilbori-
nato de 2-aminoetilo de S mg/mL en acelalo de elilo
Ciclol dld-aln) o 27 02 Reactivo de derivatizacin B: Solucin de polietilen-
Alanina o 55 1o glicol 400 de 50 mg/mL en diclorometano
Glutamina o 59 05 Anlisis
Ala-dla-Clln 1 10 03 Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
Ala-ni u 2 20 02 Solucin muestra
Cualquier impureza no es-
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
necificada - o1 tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada y
secar al aire (ver Cromato9rafa (621 )). Desarrollar los
Impurezas no especificadas
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
totales - _fil_ placa de la cmara y secar al aire. Calentar la placa a
100 durante 3 minutos, derivatizar la placa mientras
PRUEBAS ESPECFICAS est tibia con Reactivo de derivatizacin A y secar al
ROTACIN PTICA, Rotacin Especfica (781 S) aire. Luego, derivatizar con Reactivo de derivatizacin 8,
Solucin muestra: 50 mg/mL en agua. Realizar la me- secar al aire y observar bajo luz UV a 366 nm.
dicin a 20. Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
Criterios de aceptacin: +9,0 a + 11,0 estndar 8 presenta, en el tercio superior, una banda de
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo la (921): No ms de color azul fluorescente que corresponde a la banda de-
1,0% bida a cido rosmarnico en el cromatograma de la So-
lucin estndar A, y una banda de color azul fluores-
REQUISITOS ADICIONALES cente menos intensa directamente sobre la banda
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- debida a cido rosmarnico, correspondiente a cido ca-
pe~meables, bien cerrados y resistentes a la luz. feico, y una banda de color rojo por encima de la
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) banda de cido cafeico. Las bandas debidas a cido ros-
ER L-Alanina USP marnico y cido cafeico estn claramente separadas. El
ER L-Alanil-L-alanina USP cromatograma de la Solucin estndar 8 tambin pre-
ER L-Alanil-L-glutamina USP senta la banda ms intensa, una banda de color na-
ER Glutamina USP ranja, en el tercio inferior del cromatograma; y dos ban-
das de color verdoso en el tercio medio del
cromatograma.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas correspon-
Alanina-ver Alanina en Monografas dientes a bandas similares en el cromatograma de la
Solucin estndar 8: una banda de color azul fluores-
Generales cente a un valor R1 correspondiente a la banda de cido
rosmarnico; una banda de color azul fluorescente me-
nos intensa a un valor R1 por encima del de la banda de
cido rosmarnico, correspondienLe a cido cafeico; una
Hojas de Albahaca Santa banda de color rojo por encima de la banda de cido
cafeico; una banda de color rojo en el frente de la fase
DEFINICIN mvil debida a clorofila; dos bandas de color verdoso
Las Hojas de Albahaca Santa consisten en las hojas secas de en el tercio medio del cromatograma; y la banda ms
Ocimum tenuiflorum L. (Fam. Lamiaceae). Contienen no intensa, una banda de color anaranjado, con una banda
menos de 0,5% de triterpenos, calculados como la suma de color azul justo por encima en el tercio inferior del
de cido oleanlico y cido urslico, con respecto a la cromatograma (a diferencia de hojas de salvia, hojas de
materia seca. tomillo, hojas de albahaca y hojas de organo, todas las
cuales presentan dos bandas de color anaranjado en el
IDENTIFICACIN tercio inferior del cromatograma; y las hojas de blsamo
A. Las Hojas de Albahaca Santa cumplen con los requisi- de melisa que carecen de esta banda). La Solucin
tos de Pruebas E,specficas, Caractersticas Botnicas. muestra no presenta bandas de color anaranjado amari-
B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA llento en la seccin media del cromatograma (a diferen-
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER cido Rosmar- cia de hojas d~ romero y hojas tomillo).
nico USP en metano! C. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA ,
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Acido Urslico
Polvo de Albahaca Santa USP en metano! USP en metano!
Solucin muestra: Someter a ultrasonido aproximada- Solucin estndar B: 1,0 mg/ml de eugenol en
mente 1 g de Hojas de Albahaca Santa, reducidas a metano!
polvo fino, en 1 O mL de metano! durante 1 O minutos, Solucin estndar C: 1,0 mg/ml de metileugenol en
centrifugar y usar el sobrenadante. [NOTA-Reservar una metano!
porcin del sobrenadante para la prueba de Identifica- Solucin estndar D: 1 O mgiml de ER Extracto en
cin C.] Polvo de Albahaca Santa USP en metano!
Sistema cromatogrfico Solucin muestra: Usar la solucin preparada en la
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra- prueba de Identificacin 8.
fa con un tamao promedio de part1cula de 5 m Sistema cromatogrfico
(placas para HPTLC) Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
Volumen de aplicacin: 2 L de Solucin estndar A, fa con un tamao promedio de partcula de 5 m
4 L de Solucin estndar 8 y 8 L de Solucin muestra, (placas para HPTLC)
en bandas de 8 mm Volumen de aplicacin: 2 L de Solucin estndar A,
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume- de Solucin estndar 8 y de Solucin estndar C, 4 L
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis- de Solucin estndar O y 8 L de ')olucion muestra en
positivo adecuado. bandas de 8 mm
LJSP 38
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
1-ase mvil: Una meLcid de toiue11u y dLelcu Jt etilo
(85:15)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 100 mL y enfriar en un
bao de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lenta y cuidadosamente 1 O mL de cido ac-
tico y 5 mL de cido sulfrico al metano! helado y
mezclar bien. De/ar que la mezcla se enfre a tempera-
tura ambiente y uego agregar 0,5 mL de p-
anisaldehdo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O y Solucin
muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada y
secar al aire (ver Cromatografa (621 )). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cmara, secar al aire, derivatizar la placa
con Reactivo de derivatizacin, calentar a 100 durante
3-5 minutos, dejar que se enfre y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presenta
una banda de color violeta. La Solucin estndar B y
Solucin estndar C presentan cada una una banda ver-
dosa. La Solucin estndar O presenta una banda de
color prpura por encima de la banda de color verde
correspondiente a eugenol o metileugenol en la Solu-
cin estndar o la Solucin estndar C.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta la banda ms intensa, una banda
de color violeta a un valor Rr correspondiente a la
banda de cido urslico en el cromatograma de la Solu-
cin estndar A y la Solucin estndar O, y una banda de
color verdoso a un valor Rr correspondiente a la banda
de eugenol o la banda de metileugenol en los cromato-
gramas de la Solucin estndar B o la Solucin estndar
C. [NOTA-Las Hojas de Albahaca Santa pueden presen-
tarse en dos quimiotipos, uno caracterizado por la pre-
sencia de eugenol y el otro por la presencia de
metileugenol.]
D. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Triterpenos.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta dos picos a los tiempos de reten-
cin correspondientes a los picos de cido urslico y
cido oleanlico de las Soluciones estndar.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE TRITERPENOS
Fase mvil: Una mezcla de acetonitrilo y una solucin
de acetato de amonio de 2,5 mg/mL en 51gua (67:33)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Acido Urslico
USP en metano!. Someter a ultrasonido, si fuera necesa-
rio, hasta disolver.
Solucin estndar B: 4,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!. Someter a
ultrasonido, si fuera necesario, hasta disolver. Antes de
la inyeccin, pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Hojas de Albahaca Santa, reducidos a polvo fino y
pesados con exactitud, a un matraz de fondo redondo
de 100 mL equipado con un condensador de reflujo.
Agregar 50 mL de metano!, someter a reflujo en un
bao de agua durante 20 rninutm, enfriar a tempera-
tura ambiente y decantar el sobrenadante. Repetir hasta
que el ltimo extracto sea incoloro. Combinar los ex-
tractos, filtrar, concentrar al vaco y ajustar con metano!
hasta un volumen de 100 mL. Antes de la inyeccin,
Suplementos Diettico~ /Albahaca \anta 6309
pasar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Artitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 2,5 m
Velocidad de flujo: O, 3 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP usado.
Resolucin: No menos de 1,3 entre los picos de
cido oleanlico y cido urslico, Solucion estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% para el
P.ico de cido urslico, Solucin estndar A
Analisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, la
Solucin estndar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Alba-
haca Santa USP usado, identificar el tiempo de reten-
cin de los picos correspondientes a cido oleanlico y
cido urslico en el cromatograma de la Solucin
muestra.
Calcular el porcentaje de triterpenos, cido oleanlico y
cido urslico en la porcin de Hojas de Albahaca
Santa tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = suma de las reas de los picos de cido
oleanlico y cido urslico de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de cido urslico de la Solucin
estndar A
C, = concentracin de cido urslico en la Solucin
estndar A (mg/mL)
V =volumen de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Hojas de Albahaca Santa tomadas
para preparar la Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,5%, con res-
pecto a la sustancia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumplen con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Las hojas son pecioladas; simples;
oblongo elpticas a elpticas; pice agudo u obtuso;
margen serrado u ocasionalmente entero; base aguda u
631 O Albahaca Santa / SuplPmentos Dit>tticos
obtusa; pubescente, ms tricomas en la superficie infe-
rior alrededor de su nervadura central venas reticula-
df!S, ver~as ms prominentes en la sup'erficie inferior; pe-
noln :i11nrlnc0, _ligeramente acanalado en !J superficie
superior, con tricomas. La superficie superior es de color
verde; la s~perficie inferio_r es de color verde plido;
olor aromat1co caractenst1co. El artculo farmacopeico
consi~te en hojas quebradizas, secas y de color verde
amarillento.
Microscpicas
Seccin transversal de la hoja: La lmina es dorsiven-
tral; la epidermis superior y !a epidermis inferior, cada
una con una so~a capa de celulas rectangulares cubier-
tas c~m una cut1cula delgada, presentan gran cantidad
de tr~coma~ de recubrimiento y glandulares, ms sobre
la ep1derm1s inferior; los tricomas de recubrimiento son
uniseriados, unicelulares a multicelulares a menudo
curvados, con clulas basales abultadas; '1os tricomas
gla[ldulares, s_on de varios tamaos y formas, en su ma-
yona son ses1les con una cabeza de 4 clulas unos
p~Kos con un pe~icelo unicelular, algunos c~n un pe-
dicelo de 1 a 2 celulas y una cabeza de 1 a 2 clulas
una c_apa de clula;; en emp?li~ada bajo la epidermis'
superior en la reg1on de la lamina; 2-4 hileras de clu-
las colenquimticas bajo cada epidermis en la regin
de la nervadura central; un arco de haces vasculares
colaterales conjuntos en eJ centro, y 2-4 parches de
haces de floema o pequenos haces vasculares rudi-
mentarios por enci_ma del arco; y clulas de parn-
quima esponoso neas en contenido de oleorresina
Seccin transversal del pecolo: Similar a la seccin
transversal. travs de la nervadura central de la hoja;
la ep1derm1s superior y la epidermis inferior, cada una
con una_ sola capa de clulas rectangulares cubiertas
con cut1cula delgad_a, presentan gran cantidad de tri-
cc;imas de recubrimiento y glandulares; 2-4 hileras de
celulas colenquimticas bajo cada epidermis; un arco
de ha~es vasculares ~olaterales conjuntos en el centro,
una hilera de pequenos haces vasculares rudimentarios
por encima d~I arco que da hacia la cara superior y un
haz vascul?r a1~lado en cada extremo del arco; y clu-
l9s de parenqu1ma esps:injoso.
ARTICULOS DE ~RIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No mas de 5% de tallos; no ms de 2,0% de
otra materia extraa
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Hojas de Albahaca Santa reducidas a
polvo fino
Anlisis: Secar a 1 05 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 1 0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 2 g de Hojas de Albahaca Santa reducidas a
polvo fino
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 1 8%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO Cenizas Insolubles en cido
(561 > ' c?lor a~ul fluorescen_te que corresponde a la banda de-
Muestra: 2-4 g de Hojas de Albahaca Santa reducidas a
polvo fino
Criterios de aceptacin: No ms de 3%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~xtracto en Polvo de Albahaca Santa USP
ER Acido Rosmarnico USP
ER Acido Urslico lJSP
USP 38
Hojas de Albahaca Santa En Polvo
DEFINICIN
Las Hojas de Albahaca Sant_a En Polvo consisten en las hojas
secas pulverizadas de Oc1mum tenudlorum L. (Fam. Lamia-
ceae). Contienen no meno;; de 0,5% ~~ triterpenos, cal-
culados como la suma de ac1do oleanolico y acido urs-
lico, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. Las ~~jas de Albahaca Santfl En Polvo cumplen con
los requ1s1tos de Pruebas Espeoficas, Caractersticas
Botnicas.
B. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER cido Rosmar-
nico USP en metano!
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!
Solucin muestra: Someter a ultrasonido aproximada-
mente 1 g de Hojas de Albahaca Santa En Polvo en
1 O mL de metano! durante 1 O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante. [NOTA-Reservar una porcin del
sobrenadante para la prueba de ldentificacion C.]
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de part1cula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 2 L de Solucin estndar A
4 L de Solucin estndar By 8 L de Solucin muesa
en bandas de 8 mm '
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo cido fr-
mico y agua (15:1 :1) '
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin A: Solucin de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo de 5 mg/mL en acetato de etilo
Re~ctivo de derivatizacin B: Solucin de polietilen-
gl1col 400 de 50 mg/mL en diclorometano
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar ,las Muestras en bandas a una placa para croma-
tograf1a en capa delgada de alta resolucin adecuada y
secar al aire (ver Cromato9rafa (621 )). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada retirar la
placa de la cmara, secar al aire, calenta'r a 100 du-
rante 3 minutos, derivatizar la placa mientras est tibia
con. Re?ctivo de deriv?tizacin ~, secar.?' aire, luego
denvat1zar con Reactivo de denvat1zaoon A, secar al aire
y observar bao luz UV a 366 nm.
Apti!ud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estandar B presenta, en el tercio superior, una banda de
bida a ac1do rosmannico en el cromatograma de la So-
lucin estndar A, y una banda de color azul fluores-
cente menos intensa directamente sobre la banda
d~bida a cido rosmarnico, correspondiente a cido ca-
fe1co, y una banda de color rojo por encima de la
banda de cido cafeico. Las bandas debidas a cido ros-
marnico y cido cafeico estn claramente separadas. El
cromatograma de la Solucin estndar B tambin pre-
senta la banda ms intensa, una banda de color na-
ranja, en el tercio inferior del cromatograma; y dos ban-
das de color verdoso en el tercio medio del
cromatograma.
Cri~erios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
oon muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes a bandas similares en el cromatograma de la
Solucin estndar B: una banda de color azul fluores-
cente a un valor Rr correspondiente a la banda de cido
rosmarnico; una banda de color azul fluorescente me-
USP 38
nos intensa a un valor R por encima del de la banda rle
ac1do rosmarnico, correspondiente a cido cafeico; una
banda de color rojo por encima de la banda de cido
cafeico; una banda de coior rojo e11 ei re11le de id d'e
mvil rlebida a clorofilJ; rlm bandJs rlc color verdoso
en el tercio medio del cromatograma; y la banda ms
intensa, una banda de color anaranjado, con una banda
de color awl justo por encima en el tercio inferior del
cromatograma (a diferencia de hojas de salvia, hojas de
tomrllo, hojas de albahaca y hojas de organo, todas las
cuales presentan dos bandas de color anaranjado en el
tercio inferior del cromatograma; y las hojas de blsamo
de melrsa que carecen de esta banda). La Solucin
muestra no presenta bandas de color anaranjado amari-
llento en la seccin media del cromatograma (a diferen-
cia de hojas d~ romero y hojas tomillo).
C. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER cido Urslico
USP en metano!
Solucin estndar B: 1,0 mg/mL de eugenol en
metano!
Solucin estndar C: 1,0 mg/mL de metileugenol en
metano!
Solucin estndar D: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!
Solucin muestra: Usar la solucin preparada en la
prueba de Identificacin B.
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de part1cula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 2 L de Solucin estndar A,
de Solucin estndar B y de Solucin estndar C, 4 L
de Solucin estndar O y 8 L de Solucin muestra en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de tolueno y acetato de etilo
(85:15)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 100 mL y enfriar en un
bao de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lenta y cuidadosamente 1 O mL de cido ac-
tico y 5 mL de cido sulfrico al metano! helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfre a tempera-
tura ambiente y luego agregar 0,5 mL de p-
anisaldehdo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O y Solucin
muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada y
secar al aire (ver Cromato9rafa <621 )). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cmara, secar al aire, derivatizar la placa
con Reactivo de derivatizacin, calentar a 1 00 durante
3-5 minutos, dejar que se enfre y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presenta
una banda de color violeta. La Solucin estndar By
Solucin estndar C presentan cada una una banda ver-
dosa. La Solucin estndar O presenta una banda de
color prpura por encima de la banda de color verde
correspondiente a eugenol o metileugenol en la Solu-
cin estndar o la Solucin estndar C
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta la banda ms intensa, una banda
de color violeta a un valor R1 correspondiente a la
banda de cido urslico en el cromatograma de la Solu-
cin estndar A y la Solucin estndar O, y una banda de
color verdoso a un valor Rr correspondiente a la banda
Suplementos Dietticos /Albahaca Santa 6 311
de eugenol o la banda de metileugenol en los cromato-
gr arnas de Id Solucin estndar B o la Solucin estndar
C. [NOTA~Las Hojas de Albahaca Santa pueden presen-
lci1 '.)e e(1 dos quimiotipo:), uno cuuctci.tudo pe:- !J pre
sencia de eugenol y el otro por la presencia de
metileugenol. J
D. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Triterpenos.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta dos picos a los tiempos de reten-
cin correspondientes a los picos de cido urslico y
cido oleanlico de las Soluciones estndar.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE TRITERPENOS
Fase mvil: Una mezcla de acetonitrilo y una solucin
de acetato de amonio de 2,5 mg/mL en 9gua (67:33)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Acido Urslico
USP en metano!. Someter a ultrasonido, si fuera necesa-
rio, hasta disolver.
Solucin estndar B: 4,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!. Someter a
ultrasonido, si fuera necesario, hasta disolver. Antes de
la inyeccin, pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Hojas de Albahaca Santa En Polvo, pesados con
exactitud, a un matraz de fondo redondo de 100 mL
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
50 mL de metano!, someter a reflujo en un bao de
agua durante 20 minutos, enfriar a temperatura am-
biente y decantar el sobrenadante. Repetir hasta que el
ltimo extracto sea incoloro. Combinar los extractos, fil-
trar, concentrar al vaco y ajustar el volumen hasta
1 00 mL con metano!. Antes de la inyeccin, pasar a
travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 ~tm o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a <621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 2,5 rn
Velocidad de flujo: 0,3 mL/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP usado.
Resolucin: No menos de 1, 3 entre los picos de
cido oleanlico y cido urslico, Solucion estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2%, deter-
minada a partir del pico de cido urslico en inyec-
ciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, SoluC1on estndar B y
Solucin muestra
Usando, los c~omatogramas de la Solucin estndar A, la
SoluC1on estandar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Alba-
haca Santa USP usado, identificar el tiempo de reten-
cin de los picos correspondientes a cido oleanlico y
cido urslico en el cromatograma de la Solucin
muestra.
Calcular el porcentae de triterpenos, cido oleanlico y
cido urslico en la porcin de Hojas de Albahaca
Santa En Polvo tomada:
Resultado= (r11/r1) X e, X (V/W) X 100
6) 12 Al ha haca Santa / Suplementos Dietticos
ru = suma de las reas de los picos de cido
oleanlico y cido urslico en el
cromatograma de la Solucion muestra
r, rea de! pico de .leido Usiico en el
cromatograma de la Solucin estndar A
Cs = concentracin de cido urslico en la Solucin DEFINICIN
estndar A (mg/ml)
V = volumen de la Solucin muestra (ml)
W = peso de Hojas de Albahaca Santa En Polvo
tomadas para preparar la Solucin muestra
(mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,5%, con res-
pecto a la sustancia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumplen con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
103 ufc/g. , Volumen de aplicacin: 2 L de Solucin estndar A,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Polvo de color verde amarillento; olor
aromtico caracterstico
Microscpicas: Presenta fra9mentos de paredes anticli-
nales rectas de clulas epidermicas en la superficie supe-
rior y ligeramente onduladas en la superficie inferior,
con estomas diacticos, con tricomas de recubrimiento y
glandulares; tricomas de recubrimiento, uniseriados,
unicelulares a multicelulares, a menudo curvados, con
clulas basales abultadas; tricomas glandulares con una
cabeza de 4 clulas y de 1 a 2 clulas; fibras; y tejido
vascular.
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Hojas de Albahaca Santa En Polvo
Anlisis: Secar a 1 05 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 10%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 2 g de Hojas de Albahaca Santa En Polvo
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 18% , y observar bajo luz UV a 366 nm .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 2-4 g de Hojas de Albahaca Santa En Polvo
Criterios de aceptacin: No ms de 3%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta de la que se obtuvo el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Albahaca Santa USP
ER cido Rosmarnico USP
ER cido Urslico USP
USP 38
Extracto en Polvo de Hojas de Albahaca
Santa
El Extracto en Polvo de Ho1as de Albahaca Santa se prepara
a partir de Hojas de Albahaca Santa mediante extraccin
con mezclas de alcohol-agua o metano! agua. Contiene
no menos de 90,0% y no ms de 11 0,0% de la cantidad
declarada de triterpenos, calculados como la suma de
cido oleanlico y cido urslico, con respecto a la ma-
teria seca. Puede contener sustancias agregadas adecua-
das como vehculos.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/ml de ER cido Rosmar-
nico USP en metano!
Solucin estndar B: 1 O mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!
Solucin muestra: 1 O mg/ml de Extracto en Polvo de
Hojas de Albahaca Santa en metano!. [NOTA-Reservar
una porcin para su uso en la prueba de Identificacin
B.]
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
4 L de Solucin estndar B y 8 L de Solucin muestra,
en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, cido fr-
mico y agua (15:1:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin A: Solucin de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo de 5 mg/ml en acetato de etilo
Reactivo de derivatizacin B: Solucin de polietilen-
glicol 400 de 50 mg/ml en diclorometano
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada y
secar al aire (ver Cromato9rafa (621 )). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cmara, secar al aire, calentar a 100 du-
rante 3 minutos, derivatizar la placa mientras est tibia
con Reactivo de derivatizacin A, secar al aire, luego
derivatizar con Reactivo de derivatizacin A, secar al aire
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar B presenta, en el tercio superior, una banda de
color azul fluorescente que corresponde a la banda de-
bida a cido rosmarnico en el cromatograma de la So-
lucin estndar A, y una banda de color azul fluores-
cente menos intensa directamente sobre la banda
debida a cido rosmarnico, correspondiente a cido ca-
feico, y una banda de color rojo por encima de la
banda de cido cafeico. Las bandas debidas a cido ros-
marnico y cido cafeico estn claramente separadas. El
cromatograma de la SoluC1on estandar B tambin pre-
senta la banda ms intensa, una banda de color na-
ranja, en el tercio inferior del cromatograma; y dos ban-
das color verdoso en el tercio medio del cromatograma.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes a banda, -,imiiai-b en el crnmatograrna de la
Solucin estndar B: una banda de color azul fluores-
cente a un valor R1 correspondiente a la banda de cido
rosmarnico; una banda de color azul fluorescente me-
nos intensa a un valor R1 por encima del de la banda de
USP 38
cido rosmarnirn, rnrrPsrnnrliente a cido cateico; una
banda de color rojo por e11ci111d de la banda de cido
cafeico; una banda de color rojo en el frente de la fase
rnvii cieiUd d ciu1 uild, Ju) Licti idas de colo \/Cdo~o
en el tercio medio del cromatograma; y la banda ms
intensa, una banda de color anaranjado, con una banda
de color azul justo por encima en el tercio inferior del
cromatograma (a diferencia de hojas de salvia, hojas de
tomillo, hojas de albahaca y hojas de organo, todas las
cuales presentan dos bandas de color anaranjado en el
tercio inferior del cromatograma; y las hojas de blsamo
de melisa que carecen de esta banda). La Solucin
muestra no presenta bandas de color anaranjado amari-
llento en la seccin media del cromatograma (a diferen-
cia de hojas d~ romero y hojas tomillo).
8. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER cido Urslico
USP en metano!
Solucin estndar B: 1,0 mg/mL de eugenol en
metanol
Solucin estndar C: 1,0 mg/mL de metileugenol en
metano!
Solucin estndar D: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!
Solucin muestra: Usar la solucin preparada en la
prueba de Identificacin A.
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partrcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 2 L de Solucin estndar A,
de Solucin estndar 8 y de Solucin estndar C, 4 L
de Solucin estndar O y 8 L de Solucin muestra en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de tolueno y acetato de etilo
(85:15)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 1 00 mL y enfriar en un
bao de agud rn11 hielo y sal o en un congelador.
Agregar lenta y cuidadosamente 1 O mL de cido ac-
tico y 5 mL de cido sulfrico al metano! helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfre a tempera-
tura ambiente y luego agregar 0,5 mL de p-
anisaldehdo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O y Solucin
muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para croma-
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada y
secar al aire (ver Cromato9rafa (621 )). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cmara, secar al aire, derivatizar la placa
con Reactivo de derivatizacin, calentar a 100 durante
3-5 minutos, dejar que se enfre y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presenta
una banda de color violeta. La Solucin estndar 8 y
Solucin estndar C presentan cada una una banda ver-
dosa. La Solucin estndar O presenta una banda de
color prpura por encima de la banda de color verde
correspondiente a eugenol o metileugenol en la Solu-
cin estndar o la Solucin estndar C.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta la banda ms intensa, una banda
de color violeta a un valor R, correspondiente a la
banda de acido urslico en el crornalogrdrna Je la Solu-
cin estndar A y la Solucin estndar O, y una banda de
color verdoso a un valor R, correspondiente a la banda
de eugenol o la banda de. rnetileugenol en los cromato-
gramas de la Solucin estndar 8 o la Solucin estndar
Sup!ementns nietPtirm .1 Albahaca Santa 631 3
C. [Nm A-Las Hojas de Albahaca Santa pueden presen-
tarse en dos quimiotipos, uno caracterizado por la pre-
sencia de eugenol y el otro por la presencia de
rncti!cugcnc!.]
C. HPLC
Anlisis: Proceder segun se indica en la prueba de Con-
tenido de Triterpenos.
Cri!erios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
c1~n muestra presenta dos picos a los tiempos de reten-
c1on correspondientes a los picos de cido urslico y
cido oleanlico de las Soluciones estndar.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE TRITERPENOS
Fase mvil: Una mezcla de acetonitrilo y una solucin
de acetato de amonio de 2,5 mg/mL en 9gua (67:33)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Acido Urslico
USP en metano!. Someter a ultrasonido, si fuera necesa-
rio, hasta disolver.
Solucin estndar B: 4,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP en metano!. Someter a
ultrasonido, si fuera necesario, hasta disolver. Antes de
la inyeccin, pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Una cantidad de Extracto en Polvo
de Hojas de Albahaca Santa, equivalente a 5 mg de tri-
terpenos, en 50 mL de metano!. Someter a ultrasonido,
si fuera nec~sario, hasta disolver. Antes de la inyeccin,
pasar a traves de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 2,5 m
Velocidad de flujo: 0,3 mL/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar 8
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar 8 es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Albahaca Santa USP usado.
Resolucin: No menos de 1, 3 entre los picos de
cido oieanlico y cido urslico, Sofucion estndar 8
Desviacin estndar relativa: No ms de 2%, deter-
minada a partir del pico de cido urslico en inyec-
ciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
Solucin muestra
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A la
Solucin estndar 8 y el cromatograma de referenci~
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Alba-
haca Santa USP usado, identificar el tiempo de reten-
Sin de lo,s picos correspondientes a cido oleanlico y
acrdo ursolrco en el cromatograma de la Solucin
muestra.
Calcular el porcentaje de triterpenos, cido oleanlico y
cido urslico en la porcin de Extracto en Polvo de
Hojas de Albahaca Santa tomada:
P = (r11/r1) x (C/Cu) x 100
ru = suma de las reas de los picos de cido
oleanlrco y cido urslico en el
cromatograma de la Solucin muestra
rs ~ rea del pico de cido urslico en el
cromatograma de la Solucin estndar A
= concentracin de cido urslico en la Solucin
estndar A (mgmL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de Hojas
de Albahaca Santa en la Solucin muestra
(mg/mL)
6 314 Albahaca Santa / Suplementos Diettico'>
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
triterpcnos, cido oleanlico y cido ur,iico en Id
porc1on de Extracto en Polvo de Hojas de Albahaca
Santa tomada:
Resultado = (P/ L) x l 00
p = c~ntenido 9~ triterp~nos, cido ole~nlico y
ac1do ursol1co, segun se determino
anteriormente (%)
L = cantidad declarada de triterpenos, cido
oleanlico y cido urslico (%)
Criterios de aceptacin: 90%-110% de la cantidad de-
clarada, con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
tv!ercurio: No ms de ,1,0 g/g
AR!ICULOS !?E ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
l1s1s cj~ Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requ1s1tos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10' ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 2,0 g de Extracto en Polvo de Hojas de Alba-
haca Santa
Anlisis: Secar a 1 05 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
plan~a. de la qu~ se obtuvo el artculo. Cumple con otros
requ1s1tos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER i;xtracto en Polvo de Albahaca Santa USP
ER ~cido Rosmarnico USP
ER Acido Urslico USP
Andrografis
DEFINICIN
La Andrografis consiste en los tallos y hojas secos de Andro-
graph1s pamculata (Burm. f.) Nees. Contiene no menos de
1,0% _de lactonas diterpnicas, calculado con respecto a la
mat~na seca como la suma de andrograflido, neoandro-
grafol1do, l 4~desoxi- l l, 12-dideshidroandrograflido y
andrograpanina.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin est_ndar 1: Usar la Solucin estndar A, pre-
parada segun se 1nd1ca en la prueba de Contenido de
Lactonas Dterpnicas.
Solucin estndar 2: Someter a ultrasonido una canti-
dad de ER Extracto en Polvo de Andrografis USP, equi-
valente aproximadamente a 15 mg de lactonas diterp-
USP 38
nicas, durante 1 0-1 5 minutos en 25 mL de metanol
centrifugar, y usar el 'obrenadante. '
Solucin muestra: Usar la Solucion madre de la muestra
f.1Ft'f.ldl dUd 'cgn se indica en ia prueba de Lonten/C10 d~
Lactonas Dtrrrrnirm
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un ta mano de partcula promedio de 1 0-15 -m
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L, en bandas de 5-1 O mm
Fase r:r!vil: Cloroformo, acetona y tolueno (2:2: 1)
Soluc1on reveladora: Mezcla de vainillina al 1 % en al-
cohol y cido sulfrico al 1 0% en alcohol (1: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar 7, Solucin estndar 2 y
Solucin muestra
Usar una cmara saturada. Desarrollar los cromatogra-
mas hasta gue el frente de la fase mvil haya reco-
rrido aproximadamente 90% de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cmara secar rociar con
Solucin reveladora, calentar durante 5-1 minutos a
100, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
tres zonas principales de color azul grisceo con valores
Rr de aprox.ir:i_adamente 0,4; 0,6 y 0,8 que correspon-
den en pos1C1on y color a las zonas en la Solucin estn-
dar 2. La Solucin estndar 7 presenta una zona de
color azul gris~eo correspondiente a andrograflido a
un RF de aproximadamente 0,4. La Solucin muestra
presenta una zona similar en color y valor Rr a la corres-
pondiente a andrograflido en la Solucin estndar 7.
B.,, El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
oon muestra obtenido en la prueba de Contenido de Lac-
tonas Diterpncas corresponde al de andrograflido en la
Solusi_n estndar A. ld~ntificar otros picos de lactonas di-
terpen_icas e_n la Soluc1on muestra por comparacin con la
Soluoon estandar By el cromatograma de referencia pro-
visto con el lote de ER Extracto en Polvo de Andrografis
USP. La Soluc1on muestra presenta picos adicionales co-
rrespondientes a neoandrograflido, l 4-desoxi-11 12-di-
deshidroandrograflido y andrograpanina. '
COMPOSICIN
CONTENIDO DE LACTONAS DITERPNICAS
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
s! en .9qo mL de agua, agregar 0,5 mL de cido fosf-
rico, diluir con agua hasta 1 000 mL, mezclar filtrar y
desgasificar. ' '
Soluc~<?n B: ,Usar aceton.itrilo filtrado y desgasificado.
Solucion estandar A: Disolver una cantidad pesada de
ER Andrograflido USP en metano! para obtener una
solucin con una concentracin conocida de aproxima-
damente 1,0 mg/mL. Transferir 5,0 mL de esta solucin
a un matraz volumtrico de 1 O mL, diluir con acetoni-
trilo a volumen, y mezclar.
Solucin estndar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Andrografis USP, equivalente aproxi-
madamente a 25 mg de lactonas diterpnicas, a un ma-
traz volumtrico de 50 ml, agregar 25 mL de metano!,
calentar suavemente durante 15-20 minutos diluir con
ac~tonitrilo a volu_men, y mezclar. Antes de I~ inyec-
c1on, pasar a traves de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 rn o menor, desechando los
primeros 5 mL del filtrado.
Solucin_ madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 2,0 g de Androgratis reducida a polvo tino a un
matraz de 250 mL provisto con un condensador de re-
flujo. \gregar 50 mL de metano.!, someter a reflujo en
un bano de agua durante 15 minutos, enfriar a tempe-
ratura amb1e~te, y decantar el sobrenadante. Repetir
hasta que el ultimo extracto se torne incoloro. Combi-
nar los extracl), fiilra1, LurJLer1lrar al vaco, y ajustar ei
volumen hasta 50,0 mL usando metanol.
Solucin muestra: Transferir 25,0 ml de Solucin madre
de la muestra a un matraz volumtrico de 50 mL diluir
con acetonitrilo a volumen, y mezclar. Antes de a in-
USP 38 Suplementos Oiettirm .1 Anrlrografis 6315

)IPrrinn, r(lqr i'l tri'lVP~ riP lln filtro de membrana con F = factorde conversin de cada analito
un tamao de poro Je 0,45 ~un u 11ie1101, desechando (1,00 para andrograflido, 3,90 para .
los primeros 5 mL del filtrado. neoandrograflido, 1,45 para l 4-desoxr-
fd~~ 111v: Ve1 ta laUla Je ~t"aJit:ntS siguiente. 11, 12 dideshidroandrog:af!!do y 2,65 para
andrograpanina)
Tiempo Solucin A
-r - - -- -----
Solucin B Criterios de aceptacin: No menos de 1,0%, con res-
1
(min) (%) l/o) pecto a la materia seca, c31lculado como la su,ma de los
o porcentajes de andrografolido, neoandrografolido,
- 95 5
l 4-desoxi-11, 12-dideshidroandrograflido y
18 55 45 andrograpanina
25 20 80
28 20 80 IMPUREZAS
35 55 45 lmpu~ezas Inorgnicas , . .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Aodo
40 95 5
(561): No ms de 3,0%
45 95 5 METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de 20 ppm
Sistema cromatogrfico
Impurezas Orgnicas, , .
PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Matena
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.) Orgnica Extrara (56) ): No ms de 2,0%, ,
Modo: HPLC
PROCEDIMIENTO 2: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Melado
Detector: UV 223 nm
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Cumple con los requisitos
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L PRUEBAS ESPECFICAS
Aptitud del sistema CARACTERSTICAS BOTNICAS
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B Macroscpicas: El tallo es de color verde oscuro, le-
Requisitos de aptitud oso de 2-6 mm de dimetro, con numerosas ramas,
El cromatograma de la Solucin estndar B es similar al pres~nta nodos ligeramente hinchados, la parte supe:ior
cromatograma de referencia provisto con el lote de es ntidamente cuadrangular con cuatro protuberancias
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP. en las cuatro esquinas y la parte inferior es algo redon-
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos deada; la textura es fragil y se rompe fcilmente; las
tericos, Solucin estndar A ramas son cuadrangulares y con frecuencia estrecha-
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de mente aladas en la parte superior. Las hojas son sim-
andrograflido, Solucin estndar A ples, opuestas, con pecolo corto o casi ssil; la lmina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de- es plegada y se rompe fcilmente, cuando est com-
terminada a partir del pico de andrograflido en in- pleta, lanceolada o lanceolada ovada, de 2-7 cm de
yecciones repetidas, Solucin estndar A largo, 1-3 cm de ancho, con un pice acuminado, ve-
Resolucin: No menos de 5 entre los picos de nacin reticulada y base decurrente cuneada, borde
neoandrograflido y l 4-desoxi-11, 12-dideshidroan- completo u ondulado; la superficie superior es de color
drograflido, Solucin estndar B verde; la superficie inferior es de col?r verde grisc~o;
Anlisis ambas superficies son glabras. El articulo farmacope1co
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By consiste en una mezcla seca de hojas quebradas verdes
Solucin muestra oscuras y tallos cuadrangulares; hojas quebradizas; tallos
Usando el cromatograma de la Solucin estndar~' So- de fractura corta y fibrosa.
lucin estndar By el cromatograma de referencia Histol~ga . , .
provisto con el lote de ER Extracto e.n Polvo de An- Seccion transversal de los tallos: La capa ep1derm1ca
drografis USP usado, identificar los t1empc:is de reten- presenta clulas que contienen depsitos de carbonato
cin de los picos correspondientes a las diferentes lac- de calcio redondos, elpticos largos o en forma de
tonas diterpnicas. Lo.s tiempos de reten~in ~el.ativos palos de bowling (cistolitos), pelos no glandulares de
aproximados de las diferentes lactonas d1terpen1cas se 1-4 clulas y pelos glandulares multicelulares en forma
proveen en la tabla siguiente. de disco; colnquima debajo de la epidermis y en las
protuberancias; endodermis distinguible; haces vascu-
Tiempo de lares que rodean el parnquima de la mdula central;
Analito ... Retencin Relativo cristales pequeos aciculares de oxalato de calcio pre-
~_graflido 1 00 sentes en la corteza y la mdula .
--------- . - -- --- -----
Neoandroaraflido 1 16
Seccin transversal de las hojas: Clulas epidrmicas
--------r-
superiores e inferiores subcuadradas o rectangulares;
14-Desoxi- l l 12-dideshidroandroaraflido 1 31 las clulas epidrmicas inferiores son relativamente ms
Androaraoanina -------- 1 50 pequeas; ambas capas epidrmicas presentan clulas
que contienen cistolitos, pelos no glandulares y pelos
Calcular por separado los porcentajes de andrograf- glandulares similares a los del tallo; mesfilo com-
lido, neoandrograflido, l 4-desoxi-11, 12-dideshi- puesto por 1-2 capas de parnquima en empalizada y
droandrogratlido y andrograpanina en la porcin de parnquima esponjoso; a travs <je la_ parte sup~nor de
Andrografis tomada: la nervadura central aparece parenqu1ma esponioso;
los haces vasculares de la nervadura central son colate-
Resultado = (Cs/W) x (ru/rs) x 1 OF rales y acanalados; las clulas que contienen cistolitos
C = concentracin de ER Andrograflido USP en la aparecen por encima del xilema.
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Andrografis
Solucin estndar A (mg/mL)
W = peso de Andrografis tomada para preparar la reducida a polvo fino a 105 durante 3 horas: pierde no
Solucin muestra (g) ms de 12,0% de su peso.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561 ):
ru = respuesta del picu Je cada laduna diterpnica
de la Solucin muestra No ms de 15%, determinado en 1,0 g de Andrografis
r, = respuesta del pico de andrograflido de la reducida a polvo fino
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
Solucin estndar A
cohol, Mtodo 2 (561 ): No menos de 8,0%
6316 Androqrafis / Suplementos Dietticos
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorgani~rnm cJerobim no excede de 10 5 ufcig;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
icv.JdurJ> ;o c;.;cede de 10' uk/~, y ei 1ecue11lo Je bcJc-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10' ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Andrograflido USP
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP
Andrografis en Polvo
DEFINICIN
La Andrografis en Polvo es Andrografis reducida a polvo fino
o a polvo muy fino.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar 1: Usar la Solucin estndar A, pre-
parada segn se indica en la prueba de Contenido de
Lactonas Diterpnicas.
Solucin estndar 2: Someter a ultrasonido una canti-
dad de ER Extracto en Polvo de Andrografis USP, equi-
valente aproximadamente a 15 mg de lactonas diterp-
nicas, durante 10-15 minutos en 25 mL de metanol,
centrifugar, y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Usar la Solucin madre de la muestra,
preparada segn se indica en la prueba de Contenido de
Lactonas Diterpnicas.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao de partcula promedio de 1 0-15 m
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O ~tL, en bandas de 5-1 O mm
Fase mvil: Cloroformo, acetona y tolueno (2:2:1)
Solucin reveladora: Mezcla de vainillina al 1 % en al-
cohol y cido sulfrico al 10% en alcohol (1: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar 7, Solucin estndar 2 y
Solucin muestra
Usar una cmara saturada. Desarrollar los cromatogra-
mas hasta que el frente de la fase mvil haya reco-
rrido aproximadamente 90% de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar, rociar con
Solucin reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
1 ooc, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: LCI Solucin muestra presenta
tres zonas principales de color azul grisceo con valores
Rf de aproximadamente 0,4; 0,6 y 0,8 que correspon-
den en posicin y color a las zonas principales de la
Solucin estndar 2. La Solucin estndar 7 presenta una
zona de color azul grisceo correspondiente a androgra-
flido a un Rf de aproximadamente 0,4. LCI Solucin
muestra presenta una zona similar en color y valor RF a
la correspondiente a andrograflido en la Solucin es-
tndar 7.
B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra obtenido en la prueba de Contenido de Lac-
tonas Diterpnicas corresponde al de andrograflido en la
Solucin estndar A. Identificar otros picos de lactonas di-
USP 38
terpnicas en la Solucin muestra por comparacin con la
Solucin estandar 8 y el cromatograma de referencia pro-
visto con el lote de ER Extracto en Polvo de Andrografis
USP. La Soiucin muestra presenta picos ad1c1onales co-
rrespondientes a neoandrograflido, l 4-desoxi-11, 12-di-
deshidroandrograflido y andrograpanina.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE LACTONAS DITERPNICAS
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de cido fosf-
rico, diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar, filtrar, y
desgasificar.
Solucin B: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Solucin estndar A: Disolver una cantidad pesada de
ER Andrograflido USP en metanol para obtener una
solucin con una concentracin conocida de aproxima-
damente 1,0 mg/mL. Transferir 5,0 mL de esta solucin
a un matraz volumtrico de 1 O mL, diluir con acetoni-
trilo a volumen, y mezclar.
Solucin estndar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Andrografis USP, equivalente aproxi-
madamente a 25 mg de lactonas diterpnicas, a un ma-
traz volumtrico de 50 mL, agregar 25 mL de metanol,
calentar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con
acetonitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la inyec-
cin, pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando los
primeros 5 mL del filtrado.
Solucin madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 2,0 g de Andrografis en Polvo a un matraz de
250 mL provisto con un condensador de reflujo. Agre-
gar 50 mL de metano!, someter a reflujo en un bao de
agua durante 15 minutos, enfriar a temperatura am-
biente, y decantar el sobrenadante. Repetir hasta que el
ltimo extracto se torne incoloro. Combinar los extrac-
tos, filtrar, concentrar al vaco, y ajustar el volumen
hasta 50,0 mL usando metano!.
Solucin muestra: Transferir 25,0 mL de Solucin madre
de la muestra a un matraz volumtrico de 50 mL, diluir
con acetonitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros 5 mL del filtrado.
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B
~-----{!!!!!L. _ _ ~. (%) (%)
o 95 5
18 55 45
25 20 80
28 20 80
35 -~-
55 45
40 95 5
45 95 5
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 223 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 ~tl
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estandar A y 5oluoon estandar B
Requisitos de aptitud
El cromatograma de la Solucin estndar B es similar al
cromatograma de referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Androqrafis USP.
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
tericos, Solucin estndar A
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
androgratlido, Solucin estndar A
usr 38
Desviacin estndar relativa: No mils de 2,0% de-
terminada a partir del pico de andrograflido en in-
yecciones repetidas, Solucion estndar A
Re~olud11: hJo 111e11os de S e11l1e ios fJILos de
neoandrograflido y 14 dcsoxi 11, 12 didcshidroan
drograflido, Solucin estndar 8
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar A, So-
lucin estndar 8 y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de An-
drografis USP usado, identificar los tiempos de reten-
cin de los picos correspondientes a las diferentes lac-
tonas diterpnicas. Los tiempos de retencin relativos
aproximados de las diferentes lactonas diterpnicas se
proveen en la tabla siguiente:
Tiempo de
Analito Retencin Relativo
Androqraflido 1 00
Neoandroqraflido 1 16
14-Desoxi-11 12-dideshidroandromaflido 1 31
Androqraoanina ------- 1 50
Calcular por separado los porcentajes de andrograf-
lido, neoandrograflido, l 4-desoxi-11, 12-dideshi-
droandrograflido y andrograpanina en la porcin de
Andrografis en Polvo tomada:
Resultado = (Cs/W) x (ru/rs) x 1 OF
Cs = concentracin de ER Andrograflido USP en la
Solucin estndar A (mg/mL)
W = peso de Andrografis en Polvo tomada para
preparar la Solucin muestra (g)
ru = respuesta del pico de cada lactona diterpnica
de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de andrograflido de la
Solucin estndar A
F factor de conversin de cada analito
=
(1,00 para andrograflido, 3,90 para
neoandrograflido, 1,45 para l 4-desoxi-
11, 12-dideshidroandrograflido y 2,65 para
andrograpanina)
Criterios de aceptacin: No menos de 1,0%, con res-
pecto a la materia seca, calculado como la suma de los
porcentajes de andrograflido, neoandrograflido,
l 4-desoxi-11, 12-dideshidroandrograflido y
andrograpanina
IMPUREZAS
lmpu!'ezas Inorgnicas , portadores.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 3,0%
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de 20 ppm
Impurezas Orgnica_s ,
PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo
General para Anlisis de Residum de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Es un polvo de color marrn grisceo.
Histologa
Examen microscpico: Presenta clulas de la epider-
mis superior e inferior de las hojas, algunas clulas
contienen cistolitos grandes, de hasta 36 m de di-
metro y 1 80 ~lm de largo, con una cicatriz en forma
de hilio en el extremo qrande; pelos no glandulares de
1-4 clulas; pelos glandulares en forma de disco, ca-
beza de 8 celulas y pednculo muy corto; estomas
diacticos en su mayora en la epidermis inferior; clu-
las epidrmicas del tallo, alguna clulas contienen cis-
Suplementos Dieteticos / Androgratis 631 7
tolitos, estomas, pelos no glandulares y pelos glandula-
res similares a los de las hoas; clulas parenquimticas
de paredes delgadas; clulas colenquimticas; fibras de
ioerna aciculares; traqueidas; vasm con engrosamien-
, tos cspirJlrs y cscalariformrs.
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Andrografis en
Polvo a 105 durante 3 horas: pierde no ms de 12,0%
de ,su peso. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 15%, determinado en 1,0 g de Andrografis
en Polvo
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561): No menos de 8,0%
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. ,
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la r,lanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Andrograflido USP
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP
Extracto en Polvo de Andrografis
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Andrografis se prepara a partir de
Andrografis mediante extraccin con metanol o alcohol.
La relacin entre el material vegetal y el extracto est en-
tre 15:1 a 10:1. Contiene no menos de 90,0% y no ms
de 110,0% de la cantidad declarada de lactonas diterp-
nicas, calculado con respecto al extracto seco, como la
suma de andrograflido, neoandrograflido, l 4-desoxi-
11, 12-dideshidroandrograflido y andrograpanina. El con-
tenido de l 4-desoxi-11, 12-dideshidroandrograflido es no
ms de 15% del total de lactonas diterpnicas. Puede
contener sustancias agregadas adecuadas como
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar 1: Usar la Solucin estndar A, pre-
parada segn se indica en la prueba de Contenido de
Lactonas Diterpnicas.
Solucin estndar 2: Someter a ultrasonido durante
1 0-15 minutos una cantidad de ER Extracto en Polvo
de Andrografis USP, equivalente aproximadamente a
15 mg de lactonas diterpnicas, en 25 mL de metano!.
Centrifugar y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Someter a ultrasonido durante
1 0-15 minutos una cantidad de Extracto en Polvo de
Andrografis, equivalente aproximadamente a 15 mg de
lactonas diterpnicas, en 25 mL de metano!. Centrifugar
y usar el sobrenadante.
Adsorbente: fv1eLcia de gel de slice para cromatografa
con un tamao de partcula promedio de 10-15 m
(placas para TLC)
6318 Andrografis /Suplementos Dietticos USP 38

Volumen de aplicacin: 10 !' 1, Pn hncfas de 5-1 O mm Tl_e_m-po-- --- Solucin A s~h;dn 81

Fase mvil: Clorofonnu, dcelond y lolueno (2:2:1)
Solucin reveladora: Mezda de vainillina al 1 % en al-
cohol y (cido sulf-ico al 1oq,u e11 dkuf1ul CL1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar 7, Solucin estndar 2 y
Solucin muestro
Usar una cmara saturada. Desarrollar hasta que el
frente de la fase mvil haya recorrido aproximada-
mente 90% de la placa. Retirar la placa de la cmara.
Secar y rociar con Solucin reveladora. Calentar du-
rante 5-1 O minutos a 100' y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestro presenta
tres zonas principales de color azul grisceo con valores
Rr de aproximadamente 0,4, 0,6 y 0,8 que correspon-
den en posicin y color a las zonas en la Solucin estn-
dar 2. La Solucin estndar 7 presenta una zona de
color azul grisceo correspondiente a andrograflido a
un R, de aproximadamente 0,4. La Solucin muestro
presenta una zona similar en color y valor Rr a la corres-
pondiente a andrograflido en la Solucin estndar 7.
B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra obtenido en la prueba de Contenido de Lac-
tonas Diterpnicas corresponde al de andrograflido en la
Solucin estndar A. Identificar otros picos de lactonas di-
terpnicas en la Solucin muestro por comparacin con la
Solucin estndar B y el cromatograma de referencia pro-
visto con el lote de ER Extracto en Polvo de Andrografis
USP. La Solucin muestro presenta picos adicionales co-
rrespondientes a neoandrograflido, l 4-desoxi-11, l 2-di-
deshidroandrograflido y andrograpanina.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE LACTONAS DITERPNICAS
Solucin A: Disolver 0, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de cido fosf-
rico, diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar, filtrar, y
desgasificar.
Solucin B: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Solucin estndar A: Disolver una cantidad pesada de
ER Andrograflido USP en metano! para obtener una
solucin con una concentracin conocida de aproxima-
damente 1,0 mg/ml. Transferir 5,0 mL de esta solucin
a un matraz volumtrico de 1 O mL, diluir con acetoni-
trilo a volumen, y mezclar.
Solucin estndar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Andrografis USP, equivalente aproxi-
madamente a 25 mg de lactonas diterpnicas, a un ma-
traz volumtrico de 50 mL, agregar 25 mL de metano!,
calentar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con
acetonitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la inyec-
cin, pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 ~tm o menor, desechando los
primeros 5 mL del filtrado.
Solucin muestra: Transferir una cantidad pesada de
Extracto en Polvo de Andrografis, equivalente aproxima-
damente a 25 mg de lactonas diterpnicas, a un matraz
volumtrico de 50 mL, agregar 25 mL de metano!, ca-
lentar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con
acetonitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la inyec-
cin, pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando los
primeros 5 mL del filtrado.
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A i Solucin B
min) (%) 1 (%)
o 95 5
18 55 45
2S 20 80
28 20 80
35 55 45
t- _(~J J--- _ e;;} ---+--- {~o} ---1
L __ _ _ 4~5_ _ _ __L__ _ ~9~5'---_ _ _ L ._ _ _ ~5_ ____J
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 223 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
El cromatograma de la Solucin estndar B es similar al
cromatograma de referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP.
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
tericos, Solucin estndar A
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
andrograflido, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de andrograflido en in-
yecciones repetidas, Solucin estndar A
Resolucin: No menos de 5 entre los picos de
neoandrograflido y 14-desoxi-11, 12-dideshidroan-
drograflido, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestro
Usando el cromatograma de la Solucin estndar A, So-
lucin estndar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de An-
drografis USP usado, identificar los tiempos de reten-
cin de los picos correspondientes a las diferentes lac-
tonas diterpnicas. Los tiempos de retencin relativos
aproximados de las diferentes lactonas diterpnicas se
proveen en la tabla siguiente:
Tiempo de
Ana lito Retencin Relativo
Andronraflido 1 00
Neoandronraflido 1 16
14-Desoxi l l 12-dideshidroandronraflido 1 31
Andronrananina 1 50
Calcular por separado los porcentajes de andrograf-
lido, neoandrograflido, l 4-desoxi-11, 12-dideshi-
droandrograflido y andrograpanina en la porcin de
Extracto en Polvo de Andrografis tomada:
Resultado = (ru/r,) x (C,/W) x 5F
ru = respuesta del pico de cada lactona diterpnica
de la Solucin muestra
r, = respuesta del pico de andrograflido de la
Solucin estndar A
C. = concentracin de ER Andrograflido USP en la
Solucin estndar A (mg/ml)
W = peso de Extracto en Polvo de Andrografis
tomada para preparar la Solucin muestra (g)
F = factor de conversin de cada analito
( 1,00 para andrograflido, 3,90 para
neoandrograflido, 1,45 para l 4-desoxi-
11, 12-dideshidroandrograflido y 2,65 para
andrograpanina)
Criterios de aceptacin: 90.0%-11 0,0%, con respecto
al extracto seco, de la cantidad declarada de lactonas
JitepniLd~ Llkuiddu Lomo la suma de los porcentajes
de andrograflido, neoandrograflido, 14-desoxi-11, 12-
dideshidroandrograflido y andrograpanina.
usr 38
IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
20 ppme (Oficial Ol-dic 2015)
Impurezas Orgnicas
PROCEDIMIENTO: ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con Jos requisitos
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731): Secar 2,0 g a 105 durante 3
horas: pierde no ms de 5,0% de su peso.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismo~ aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 101 ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE Ml_CROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los reqws1tos de las pruebas para determinar la au-
senoa de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
plan~a. de la qu~ se prepar el artculo. Cumple con otros
requ1s1tos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Andrograflido USP
ER Extracto en Polvo de Andrografis USP
Arndano, Preparacin Lquida
DEFINICIN
La Preparacin Lquida de Arndano es un jugo de color
ro10 brillante que se obtiene de los frutos de Vaccinium
macrocarpon Ait. o Vaccinium oxycoccos L. (Fam. Erica-
ceae). No contiene sustancias agregadas.
IDENTIFICACIN
A,-
HPLC: Los tiempos de retencin de Jos picos del
ac1do_ qunico, del acido mlico y del cido ctrico de la
Soluoon muestra corresponden a los de la Solucin estn-
dar, segn se obtienen en la prueba de Contenido de ci-
dos Orgnicos.
B. AUSENCIA DE ADULTERANTES
Solucin estndar: 1,0 mg/mL de cido tartrico y
O, 1 r;i_g/mL de cido fumrico
Soluc1on muestra: Usar la Preparacin Lquida.
Fase m_vil y Sistema cromatogrfico: proceder segn
se indica en la prueba de Contenido de Acidos Orgnicos.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Volumen de inyeccin: 20 L
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de
los picos del cido tartrico y del acido fumrico de la
Solucin estndar no corresponden a ninguno de los
tiempos de retencin de Jos picos observados de Ja So-
lucin muestra.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE DEXTROSA Y FRUCTOSA
Fase mvil: Agua
Solucin estndar: 6,0 mg/mL de ER Dextrosa USP y
2,0 r;i_g/mL de ER Fructosa USP en agua
Soluc1on mu~stra: Transfer: 1,0 g de resina de inter-
cambio cat1onico de carboxilato de sodio a un vaso de
Suplementos Dietticos / Ar<nd;.mo 6319
precipitados de 50 ml, agregar 5 mL de agua para for-
mar una suspensin espesa y transferir la suspensin es-
pesa auna pipeta automtica de polipropileno con un
equeno laor1 Je ia11a Je viJru ~ia11iLaJa. Tram[e1i1
cuantitativamente la suspensin espesa a un tubo cro-
matogrfico pequeo, enjuagar el vaso de precipitados
con agua y rellenar la columna de forma uniforme.
Mantener la columna hmeda hasta que est lista para
usar. Usando una pipeta volumtrica, transferir 1 O mL
de la Preparacin Lquida a la columna, recolect;r el
e_luato y desecharlo. Pipetear 4,0 mL de agua y transfe-
rir a la parte superior de la columna, recolectar el eluato
en un vial limpio y filtrar, si fuera necesario .
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: ndice de refraccin
Columnas
Guarda columna: Relleno L19
Columna analtica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L19
Temperatura de la columna: 85
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
para dextrosa y fructosa son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,8 entre los picos de dex-
trosa y fructosa
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0%
Anlisis '
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular los porcentajes de dextrosa y fructosa en el vo-
lumen de Preparacin Lquida tomado:
Resultado= (rulr1) x (C/V) x 0,5
ru = respuesta del pico del analito correspondiente
de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico del analito correspondiente
de la Solucin estndar
C = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/mL)
V = volumen de Preparacin Lquida tomado para
la Solucin muestra (mL)
Criterios de aceptacin: No menos de 2,4% de dex-
trosa y no m~nos de 0,7,% de fructosa
CONTENIDO DE ACIDOS 0RGANICOS
Fase mvil: Transferir 27,2 g ?e fosfato monobsico de
potasio a un matraz volumetnco de 1000 mL y disolver
en 950 mL de agua. Ajustar con cido fosfrico a un pH
de 2,4, y diluir con agua a volumen.
Solucin est~ndar: 1,0 mg/mL de ER cido Ctrico
USP, de ER Acido Mlico USP y de ER cido Qunico
USP
Solucin muestra: Usar la Preparacin Lquida filtrada.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 214 nm
Columnas
Guarda columna: Relleno L1 de 5 m
[NOTA-Antes de usar, acondicionar la columna con
metano!, luego con agua y finalmente con Fase mvil.]
Columna analtica: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-;-Los tier;ipos ~e. reten~in rel~ti_vos aproximados
para ac1do qu1n1co, ac1do mal1co y ac1do c1trico son
0,4; 0,5 y 1,0, respectivamente.]
6320 Arndano /Suplementos Dietticos
Requisitos de aptitud
Resolucin: No meno' Je 2,5 enlre cido qunico y
cido malico
Desviacin estndar relativa. 1-.Ju 111, Je 2,010
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir el rea de los picos. Calcular los porcentajes de
cido qunico, cido mlico y cido ctrico en el volu-
men de Preparacin Lquida tomado:
Resultado = (ru! rs) x Cs x O, 1
ru = rea del pico de cada analito correspondiente
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de cada analito correspondiente
de la Solucin estndar
C = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/mL)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,9% de cido
qunico y de cido ctrico; no menos de 0,7% de cido
mlico. El cociente entre cido qunico y cido mlico
es no menos de 1,0.
ADULTERANTES
LMITE DE SORBITOL Y SACAROSA
Fase mvil y Solucin muestra: Preparar segn se in-
dica en la prueba de Contenido de Dextrosa y Fructosa.
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de ER Sorbitol USP y de
ER Sacarosa USP
Sistema cromatogrfico: Proceder segn se indica en
la prueba de Contenido de Dextrosa y Fructosa.
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para sacarosa
y sorbitol son aproximadamente 0,4 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,8 entre los picos de sa-
carosa y sorbitol
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Volumen de inyeccin: 20 L
Calcular los porcentajes de sacarosa y sorbitol en el vo-
lumen de Preparacin Lquida tomado:
Resultado = (ru!rs) x (Cs/V) x 0,5
ru = respuesta del pico de cada analito
correspondiente de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de cada analito
correspondiente de la Solucin estndar
C = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/mL)
V = volumen de Preparacin Lquida tomado para
la Solucin muestra (mL)
Criterios de aceptacin: No ms de 0,05% de sorbitol
y de sacarosa
PRUEBAS ESPECFICAS
NDICE DE REFRACCIN (831): 1,3435-1,3445
PH (791): 2,5 O, 1
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y almacenar en un refrigerador.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta de donde se obtuvo el artculo. La etiqueta
tambin indica que se utiliza >lo con fine' de fabrica-
cin. Este artculo est exento de los requisitos de las
Advertencias Generales con respecto a la declaracin de
embarazo y lactancia (seccin 1 0.40.50. Etiquetado de
Productos Botnicos).
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER cido Ctrico USP
ER Dextrosa USP
ER Fructosa USP
ER cido Mlico USP
ER cido Qunico USP
ER Sorbitol USP
ER Sacarosa USP
Arginina-ver Arginina en Monografas
Generales
Arginina, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Arginina contienen no menos de 90,0% y
no ms de 110,0% de la cantidad declarada de arginina o
clorhidrato de arginina en una cantidad equivalente a ar-
ginina (C6H14N402).
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar: 1,5 mg/mL de ER L-Arginina USP o
ER Clorhidrato de Arginina USP en agua
Solucin muestra: Pesar el contenido de no menos de
20 Cpsulas, mezclar, y transferir una porcin del con-
tenido, equivalente a aproximadamente 150 mg de ar-
ginina, a un matraz volumtrico de 100 mL, agregar
80 mL de agua, someter a ultrasonido durante 15 mi-
nutos, diluir con agua a volumen, mezclar, y filtrar.
Volumen de aplicacin: 5 L
Fase mvil: Alcohol isoproplico e hidrxido de amonio
(7:3)
Solucin reveladora: 2 mg/mL de ninhidrina en una
mezcla de alcohol butlico y cido actico 2 N (95:5)
Anlisis: Proceder segn se indica en Cromatografa
(621), Cromatografa en Capa Delgada. Secar la placa a
100-105 hasta que el amonaco desaparezca por
completo. Rociar con la Solucin reveladora y calentar a
100-105 durante aproximadamente 15 minutos. Ob-
servar la placa bajo luz blanca.
Criterios de aceptacin: La mancha principal de la So-
lucin muestra corresponde en apariencia y valor RF a la
de la Solucin estndar.
B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en Contenido.
CONTENIDO
PROCEDIMIENTO
Solucin amortiguadora: 6, 9 g/L de fosfato monob-
sico de sodio en agua. Ajustar con cido fosfrico a un
pH de 3,5.
Solucin A: 0,5 mg/mL de sal sdica del cido 1-octa-
nosulfnico en Solucin amortiguadora
Fase mvil: Solucin A y acetonitrilo (95:5)
Solucin estndar: 1,5 mg/mL de ER L-Arginina USP o
ER Clorhidrato de Arginina USP en Solucin
amortiguadora
Solucin muestra: Pesar el contenido de no menos de
20 Cpsulas, mezclar, y transferir una porcin del con-
tenido, equivalente a aproximadamente 150 mg de ar-
ginina, a un matraz volumtrico de 1 00 mL, agregar
80 mL de Solucin amortiguadora, someter a ultrasonido
durante 15 minutos, diluir con Solucin amortiguadora a
volumen, mezclar, y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf!a (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Velocidad de flujo: 0,8 ml/min
Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1 500 platos
tericos
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% a
r.artir del pico de arginina, en inyecciones repetidas
Analisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de argi-
nina en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de la Solucin estndar
C = concentracin de la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de Arginina en la
Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de arginina (C6H 14N402)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN V DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): ~umplen con los requisitos de Disolucin
Medio: Acido clorhdrico O, 1 N; 900 mL
Aparato 2: 100 rpm
Tiempo: 60 min
Solucin estndar: Proceder segn se indica en el Pro-
cedimiento de Contenido.
Solucin muestra: Muestrear segn Desintegracin y Di-
solucin de Suplementos Dietticos (2040). Diluir con Me-
dio hasta una concentracin similar a la de la Solucin
estndar.
Anlisis: Determinar la cantidad de arginina disuelta en
el Procedimiento de Contenido, haciendo las modificacio-
nes necesarias.
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada ge arginina (C6H14N402). , Detector: UV 215 nm
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica la forma de arginina que
se ysa y la cantidad equivalente de arginina.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER L-Arginina USP
ER Clorhidrato de Arginina USP
Arginina, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Arginina contienen no menos de 90,0% y
no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de arginina o
clorhidrato de arginina en una cantidad equivalente a ar-
ginina (C6H14N42).
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar: 1,5 mg/ml de ER L-Arginina USP o
ER Clorhidrato de Arginina USP en agua
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas, mezclar, y transferir una porcin del
)uplementos U1etet1cos / Arginina 6321
fJolvo, equivalente a aproximadamente 150 mg de argi-
nina, a un matraz volumtrico de 100 ml, agregar
80 ml de aqua, someter a ultrasonido durante 15 mi-
nutos, diluir con agua a volumen, mezclar, y filtrar.
Volumen de aplicacin: 5 L
Fase mvil: Alcohol isoproplico e hidrxido de amonio
(7:3)
Solucin reveladora: 2 mg/mL de ninhidrina en una
mezcla de alcohol butlico y cido actico 2 N (95:5)
Anlisis: Proceder segn se indica en Cromatografa
(621 ), Cromatografa en Capa Delgada. Secar la placa a
100-l 05 hasta que el amonaco desaparezca por
completo. Rociar con la Solucin reveladora y calentar a
100-l 05 durante aproximadamente 15 minutos. Ob-
servar la placa bajo luz blanca.
Criterios de aceptacin: La mancha principal de la So-
lucin muestra corresponde en apariencia y valor Rr a la
de la Solucin estndar.
B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en Contenido.
CONTENIDO
PROCEDIMIENTO
Solucin amortiguadora: 6,9 g/L de fosfato monob-
sico de sodio en agua. Ajustar con cido fosfrico a un
pH de 3,5,
Solucin A: 0,5 mg/ml de sal sdica del cido 1-octa-
nosulfnico en Solucin amortiguadora
Fase mvil: Solucin A y acetonitrilo (95:5)
Solucin estndar: 1,5 mg/mL de ER L-Arginina USP o
ER Clorhidrato de Arginina USP en Solucin
amortiguadora
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas, mezclar, y transferir una porcin del
polvo, equivalente a aproximadamente 150 mg de argi-
nina, a un matraz volumtrico de 100 mL, agregar
80 mL de Solucin amortiguadora, someter a ultrasonido
durante 15 minutos, diluir con Solucin amortiguadora a
volumen, mezclar, y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Velocidad de flujo: 0,8 mL/min
Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1 500 platos
tericos
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% a
r.artir del pico de arginina, en inyecciones repetidas
Analisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de argi-
nina en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (C;/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
r1 = respuesta del pico de la Solucin estndar
Cs = concentracin de la Solucin estndar (mg/ml)
Cu concentracin nominal de Arginina en la
=
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de arginina (CAH14N402)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN V DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolucin
6322 Arginina /Suplementos Dieteticos
Medio: cido clorhdriLO O, l N; 900 mL
Aparato 2: l 00 rpm
Tiempo: 60 min
Solucin estndar: Proceder segn se indica en el Pro-
cedimiento de Contenido.
Solucin muestra: Muestrear segn Desintegracin y Di-
solucin de Suplementos Dietticos (2040). Diluir con Me-
dio hasta una concentracin similar a la de la Solucin
estndar.
Anlisis: Determinar la cantidad de arginina disuelta en
el Procedimiento de Contenido, haciendo las modificacio-
nes necesarias.
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada ge arginina (C6H14N402). , Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica la forma de arginina que
se ysa y la cantidad equivalente de arginina.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER L-Arginina USP
ER Clorhidrato de Arginina USP
Clorhidrato de Arginina-ver Clorhidrato
de Arginina en Monografas Generales
cido Ascrbico-ver cido Ascrbico en
Monografas Generales
cido Ascrbico, Solucin Oral-ver
Acido Ascrbico, Solucin Oral en Monografas
Generales
cido Ascrbico, Tabletas-ver cido
Ascrbico, Tabletas en Monografas Generales
cido Asprtico-ver cido Asprtico en
Monografas Generales
steres de Astaxantina
~staxanthin esters;
~steres de cidos grasos de astaxantina;
Esteres de cidos grasos de (3S,3'S)-3,3'-dihidroxi-f:l,fkaro-
teno-4,4'-diona.
DEFINICIN
Los steres de Astaxantina se obtienen mediante extraccin
con dixido de carbono supercrtico o acetona prove-
niente de cultivos de Haematococcus pluvialis. Consta prin-
cipalmente de este reo ismeros 3S, 3' S de astaxantina en
las formas monoster, dister y libre. La forma monoster
es la ms abundante, seguida por la forma dister. La
forma libre es un componente menor. Se pueden agregar
antioxidantes adecuados. Contiene no menos de 5% de
USP 38
aslaxantina total, calc1ilarlo como astaxantina lihrP con
respecto a la sustancia anhidra.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar: 1 O mg/mL de ER steres de Asta-
xantina a partir de Haematococcus pluvialis USP en
acetona
Solucin muestra: 1 O mg/mL de steres de Astaxantina
en acetona
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw ( 621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
matografa de 0,25 mm. Secar el adsorbente a 11 O
durante 1 hora antes de su uso.
Volumen de aplicacin: 5 ~tL
Fase mvil: Hexano y acetona (70:30)
Aptitud del sistema
Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solucin
estndar presenta tres zonas claramente separadas,
donde el dister de astaxantina tiene el valor R, ms
alto, seguido por el monoster de astaxantina (el ms
intenso) y astaxantina libre (el menos intenso).
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar el cromatograma en la Fase mvil hasta que
el frente de la fase mvil haya recorrido aproximada-
mente tres cuartos de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cmara y secar en una corriente de aire.
Observar las placas bajo luz blanca.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
tres zonas principales correspondientes en valor RF a las
obtenidas a partir de la Solucin estndar. La zona en la
parte media (monoster) es la ms intensa y la zona
con el valor R1 ms bajo es la menos intensa.
B. HPLC: La Solucin muestra presenta tres picos princi-
pales con tiempos de retencin correspondientes a los de
los picos de 1 3-cis-astaxantina, la forma todo trans de
astaxantina y 9-cis-astaxantina de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en la prueba de Contenido de Astaxan-
tina Total.
VALORACIN
CONTENIDO DE ASTAXANTINA TOTAL
[NOTA-La astaxantina determinada por este mtodo es
la astaxantina total, que incluye la astaxantina libre, el
monoster y el dister.]
Solucin amortiguadora: Disolver 6,06 g de tris(hidro-
ximetil)aminometano en 750 mL de agua, ajustar con
cido clorhdrico 1 N a un pH de 7,0 y diluir con agua
hasta 1 000 mL.
Solucin de colesterol esterasa: 4 Unidades/mL de co-
lesterol esterasa 1 en Solucin amortiguadora. Preparar en
el da de su uso.
Solucin A: Metano!
Solucin B: t-Butilmetilter
Solucin C: cido fosfrico, 1% acuoso
Fase mvil: Ver la Tabla 7
1 Usar Wako Pure Chemicals, N" de catlogo 037-11221, disponible en www.
wakousa.com; Sigma, N" de cat,logo C928 I, disponible en www.sigmaal-
drich.com; o equivole111e.
USP 38
Solucin de estndar interno: 37,5 pq/ml de [R Apo-
carotenal USP en acetona
S9lucin madre del estndar: Transferir 30 mq de ER
Esteres de Astaxantina a p~rf de HaPmatornccus pluvia-
l1s USP a un mJtrJz volumctnco de 100 ml. Disolver en
30 ml de Jcetona, agitar mecnicamente y diluir con
acetona a volumen.
Solucin estndar: Combinar 2,0 ml de Solucin madre
del estndar y 1,0 mL de Solucin de estndar interno en
un tubo de centrfuga de vidrio. Agregar 3,0 ml de So-
lucin de colesterol esterasa al tubo y mezclar suave-
mente por inversin. Colocar el tubo en un bloque de
calenta.miento ajustado a 37 y dejar que la reaccin
continue durante 45 minutos, invirtiendo el tubo de
manera suave y lenta cada 1 O minutos. Despus de 45
minutos: agregJr 1 g de sulfato de sodio y 2 mL de ter
de petroleo al tubo. Mezclar en un mezclador de vr-
tice durante 30 segundos, luego centrifugar a 3000
rpm durante 3 minutos. Transferir cuidadosamente la
capa de ter de petrleo a un tubo de centrfuga de
v1dno de 1 O mL que contenga 1 g de sulfato de sodio
anhidro. Procurar no pipetear la capa emulsiva inter-
media. Evaporar la capa de ter de petrleo usando va-
co o una corriente de gas inerte a temperatura am-
biente, agregar 3 ml de acetona, someter a ultrasonido
y filtrar la mezcla. La solucin filtrada es la Solucin
estndar.
Solucin madre de la muestra: Entibiar una cantidad
de la muestra en un bao de agua a 50-60 durante
30 minutos. Agitar bien la muestra en intervalos de 1 O
minutos. Despus de 30 minutos, transferir 30 mg de la
muestra a un matraz volumtrico de 100 ml. Disolver
en 30 ml de acetona, agitar mecnicamente y diluir
con acetona a volumen.
Solucin muestra: Combinar 2,0 mL de Solucin madre
de la muestra y 1,0 ml de Solucin de estndar interno
en un tubo de centrfuga de vidrio. Agregar 3,0 mL de
Solucin de colesterol esterasa al tubo y mezclar suave-
mente por inversin. Colocar el tubo en un bloque de
calentamiento ajustado a 37 y dejar que la reaccin
contine durante 45 minutos, invirtiendo el tubo de
manera suave y lenta cada 1 O minutos. Despus de 45
minutos, agregar 1 g de sulfato de sodio y 2 mL de ter
de petrleo al tubo. Mezclar en un mezclador de vr-
tice durante 30 segundos, luego centrifugar a 3000
rpm durante 3 minutos. Transferir cuidadosamente la
cap~ de ter de petrleo a un tubo de centrfuga de
v1dno de 1 O ml que contenga 1 g de sulfato de sodio
anhidro. Procurar no pipetear la capa emulsiva inter-
media. Evaporar la capa de ter de petrleo usando va-
co o una corriente de gas inerte a temperatura am-
biente, agregar 3 ml de acetona, someter a ultrasonido
y filtrar la mezcla. La solucin filtrada es la Solucin
muestra.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw <621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 474 nm
Columna: YMC Carotenoide, de 4,6 mm x 25 cm, re-
lleno L62 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
para l 3-cis-astaxantina, forma todo trans de astaxan-
tina, 9-cis-astaxantina y apocarotenal (trans-beta-apo-
8'-carotenal) se listan en la Tabla 2.]
Supementos Dietticos / Astaxantina 6323
Tabla 2
1
1
Nombre del
Tiempo de
Retencin
,l
I
Factor de
Respuesta
Compuesto Relativo ___ Relativa
r---
1 3-cis-Astaxantina --~ _______ _QJI____________ !-----____)_,]________
Todo tram de Astaxdn-
tina 1o 1 o
9-cis-Astaxanti11d 14 1 1
Apocarotenal (estndar
interno: 1 7 -
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar es similar 91 Cromatograma
de Referencia provisto con el ER Esteres de Astaxan-
tina a partir del Haematococcus pluvialis USP usado.
Resolucin: No menos de 2,0 entre 13-cis-astaxan-
tina y la forma todo trans de astaxantina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
para el pico de la forma todo trans de astaxantina
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de contenido de astaxantina total
en la porcin de muestra tomada:
Resultado~ (Ru/R1) x (Cs/Cu) x P
Ru = [(1, 3 x rea del pico de 1 3-cis-astaxantina +
rea del pico de la forma todo trans de
astaxantina + 1, 1 x el rea del pico de 9-cis-
astaxantina)/rea del pico del estndar
interno] de la Solucin muestra
Rs = [(l, 3 x rea del pico de 1 3-cis-astaxantina +
rea del pico de la forma todo trans de
astaxantina + 1, 1 x el rea del pico de 9-cis-
astaxantina)/rea del pico del estndar
interno] de la Soluciqn estndar
C = concentracin de ER Esteres de Astaxantina a
partir de Haematococcus pluviolis USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu ~ concentracin de la Solucin muestra (mg/ml)
P = cantidad declarada de astaxantina total como
astaxantina libre en el ER steres de
Astaxantina a partir de Hoemotococcus
pluvialis USP (%)
Criterios de aceptacin: No menos de 5% de astaxan-
tina total, calculado como astaxantina libre con res-
pecto a la sustancia anhidra
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS <233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 2,0 g/g
Cadmio: No ms de 1,0 g/g
Plomo: No ms de 1,0 ~tg/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 /: El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 03 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 2 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichio coli.
CONTENIDO DE FEOFORBIDA
Solucin A: 50 mg/ml de sulfato de sodio
Solucin B: Solucin saturada de sulfato de sodio
Solucin madre de la muestra: Transferir 1 00 mg de !a
muestra a un tubo de ensayo de 1 O ml, agregar 1 O ml
de acetona y disolver con ultrasonido. Transferir cuanti-
tativamente esta solucin a un embudo de separacin,
enjuagando el tubo de ensayo tres veces con porciones
de 1 O ml de acetona y agregando los enjuagues al em-
budo. Agregar 30 mL de ter etlico al embudo de se-
paracin, seguido por 50 ml de Solucin A. Mezclar el
6324 Astilxdnlin<l / Suplt'menlos Dietticos
contenido de! embudo de sepaacin agitando suave-
mente, luego retirar y desechar la capa inferior. Repetir
el lavado con So/ucion A tres veces. Deshidratar el ex-
tracto remanente con sulfato de sodio anhidro, luego
transferir el extracto a un matraL volumtrico de 50 mL
y diluir con ter etlico a volumen.
Solucin muestra: Transferir 20 mL de Solucin madre
de la muestra a un vaso de precipitados pequeo. Agre-
gar 20 mL de cido clorhdrico al 1 7% y mezclar la so-
lucin vigorosamente. Transferir la capa de cido clorh-
drico a un embudo de separacin y repetir la extraccin
con una segunda porcin de 1 O mL de cido clorhdrico
al 1 7%, agregando la capa de cido clorhdrico al em-
budo de separacin. Agregar 150 mL de Solucin By
20 mL de ter etlico, y mezclar el contenido del em-
budo de separacin agitando. Transferir la capa de ter
etlico a un matraz volumtrico de 20 mL y diluir con
ter etlico a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Longitud de onda analtica: 667 nm
Longitud ,de paso de la celda: 1 cm
Blanco: Eter etlico
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Calcular el porcentaje de feoforbida en la porcin de
muestra tomada:
Resultado = A/(C x F)
A = absorbancia de la Solucin muestra
C = concentracin de la Solucin muestra (g/mL)
F = coeficiente de extincin (E 1%) de feoforbida
pura en ter etlico (100 mL. g 1 . cm 1),
702
Criterios de aceptacin: No ms de 0,02%
PRUEBAS ESPECFICAS
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo I (921 ): No ms de
0,5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar Pn envases bien
cerrados.
EST~DARES DE REFERENCIA USP ( 11)
ER Esteres de Astaxantina a partir de Haematococcus plu-
vialis USP
ER Apocarotenal USP
trans-beta-Apo-8' -ca roten al.
CioH40
Aceite de Hgado de Bacalao-ver Aceite
de Hgado de Bacalao en Monografas
Generales
Aceite de Hgado de Bacalao, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Aceite de Hgado de Bacalao contienen no
menos de 95,0% y no ms de 105,0% de la cantidad
declarada de Aceite de Hgado de Bacalao, en donde el
Aceite de Hgado de Bacalao es el aceite fijo, parcialmente
destearinizado, que se obtiene de hgados frescos de Ga-
dus morrhua L. y otras especies de la Fam. Gadidae. El
Aceite de Hgado de Bacalao contiene, en cada g, no me-
nos de 180 g (600 Unidades USP) y no ms de 750 g
(2500 Unidades USP) de vitamina A y no menos de
1,5 g (60 USP Unidades) y no ms de 6,25 g (250 Uni-
dades USP) de vitamina D.
USP 38
El Aceite de Hgado de Bacalao se puede sabori7iir con la
adicin de no ms del 1 % de un saborizante o mezcla de
saborizantes adecuados. Se puede aareaar un antioxi-
dante adecuado. - -
IDENTIFICACIN
A. PRESENCIA DE VITAMINA A
Solucin muestra: 25 mg/mL de aceite contenido en
las Cpsulas, en cloroformo
Anlisis: Agregar 1 O mL de tricloruro de antimonio SR a
1 mL de la Solucin muestra.
Criterios de aceptacin: Se produce un color azul
inmediata ll)ente.
B. PERFIL DE ACIDOS GRASOS
Solucin antioxidante: 0,05 mg/mL de butil hidroxito-
lueno en hexanos
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
que contenga cantidades iguales de palmitato de me-
tilo, estearato de metilo, araquidato de metilo y behe-
nato de metilo en Solucin antioxidante.
Solucin madre del estndar: 45 m_g/mL de ER Aceite
de Hgado de Bacalao USP en Solucion antioxidante
Solucion estndar: Transferir 2,0 mL de Solucin madre
del estndar a un tubo de cuarzo y evaporar con una
corriente suave de nitrgeno. Agregar 1,5 mL de una
solucin al 2% de hidrxido de sodio en metanol. Tapar
hermticamente con una tapa con recubrimiento
interno de politetrafluoroetileno, mezclar y calentar en
un bao de agua durante 7 minutos. Enfriar y agregar
2 mL de una solucin de 120 mg/mL de tricloruro de
boro en metanol. Cubrir con nitrgeno, tapar hermti-
camente y mezclar. Calentar en un bao de agua du-
rante 30 minutos. Enfriar a 40-50. Agregar 1 mL de
isooctano, tapar y mezclar en un mezclador de vrtice
o agitar vigorosamente durante al menos 30 segundos.
Agregar inmediatamente 5 mL de solucin saturada de
cloruro de sodio. Cubrir con nitrgeno, tapar y mezclar
en un mezclador de vrtice o agitar minuciosamente
durante al menos 15 segundos. Dejar que la capa supe-
rior se torne transparente y transferir a otro tubo. Agitar
la capa metanlica una vez ms con 1 mL de isooctano
y combinar los extractos isooctnicos. Lavar los extrac-
tos combinados dos veces con 1 mL de agua y secar
sobre sulfato de sodio anhidro.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
estndar, excepto que se debe usar una cantidad pe-
sada del aceite contenido en las Cpsulas.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la Llama
Columna: Capilar de slice fundida, de 0,25 mm x 30
m recubierta con una pelcula de Gl 6 de 0,25 m.
Temperatura
Inyector: 250
Detector: 280
Columna: Ver la Tabla 7.
Tabla l
--~- Tiempo de
Espera (Hold
Time)
a la Tempe-
Temperatura 1 Rampa de 1 Temperatura ratura
Inicial Temperatura Final Final
/min min
170 . L.-~-_l_--~-~2=2=5~-~--~2=0_ ____,
Gas transportador: Helio
Relacin de particin de flujo: 1 :200
Volumen de inyeccin: 1 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud Je/ '>istema y Solucin
estandar
USP 38 Suplementos Dietticos / Bacalao 6325

Requisitos de aptitud CONTENIDO

Similitud de los cromatogramas: El cromatograma VITAMINA A
de la Solucin estndar es similar al Cromatograma de Muestra: 500 mg a 1 g del aceite contenido en las
Referencia provisto rnn e ER Aceile de Hgctdo de Cci~uict~
Bacalao USP. Identificar los tiempos de retencin de Anlisis: Proceder segn se indica en Valoracin de Vita-
los steres metlicos de los cidos grasos pertinentes mina A (571 ).
comparando el cromatograma de la Solucin estndar Criterios de aceptacin: 180 g (600 Unidades USP) a
con el Cromatograma de Referencia provisto con el 750 g (2500 Unidades USP) de vitamina A por g de
ER Aceite de Hgado de Bacalao USP. aceite contenido en las Cpsulas
Resolucin: No menos de 1, 3 entre oleato de metilo VITAMINA D
y cis-vaccinato de metilo, y aqul entre gadoleato de Solucin A: Alcohol n-amlico y hexano deshidratado
metilo y gondoato de metilo es suficiente para pro- (3:997)
psitos de identificacin y medicin del rea, Solucin Solucin B: Acetonitrilo, agua y cido fosfrico
estndar (96:3,8:0,2)
Porcentajes tericos de rea: 24,4 1 para palmi- Solucin de butil hidroxitolueno: 1O mg/mL de butil
tato de metilo, 24,8 1 para estearato de metilo, hidroxitolueno en hexano cromatogrfico
25,2 1 para araquidato de metilo y 25,6 1 para Solucin acuosa de hidrxido de potasio: 800 mg/mL
behenato de metilo, Solucin de aptitud del sistema de hidrxido de potasio en agua hervida recientemente.
Anlisis Mezclar y enfriar. [NOTA-Preparar esta solucin en el
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra da de su uso.]
Identificar los tiempos de retencin de los steres metli- Solucin alcohlica de hidrxido de potasio: Disolver
cos de los cidos grasos pertinentes en la Solucin 3 g de hidrxido de potasio en 50 mL de agua hervida
muestra comparando el cromato9rama de la Solucin recientemente. Agregar 1 O mL de alcohol y diluir con
muestra con el de la Solucin estandar. agua hervida recientemente hasta 100 ml. [NOTA-Pre-
Determinar el nmero de picos de steres metlicos de parar esta solucin en el da de su uso.]
cidos grasos en la Solucin muestra: El nmero de pi- Solucin de cido ascrbico: 100 mg/mL de cido as-
cos de steres metlicos de cidos grasos que exceden crbico en agua. [NOTA-Preparar esta solucin en el
de 0,05% del rea total de los steres metlicos de da de su uso.]
cidos grasos es, por lo menos, 24 y los 24 picos ms Solucin de estndar interno: 5 g/mL de ER Ergocal-
grandes de los steres metlicos representan ms del ciferol USP en alcohol
90% del rea total. (Estos corresponden a los siguien- Solucin madre del estndar: 5 g/mL de ER Colecal-
tes, en orden comn de elucin: 14:0, 15:0, 16:0, ciferol USP en alcohol
16:1 n-7, 16:4 n-1, 18:0, 18:1 n-9, 18:1 n-7, 18:2 Solucin estndar: Transferir 2,0 mL de Solucin madre
n-6, 18:3 n-3, 18:4 n-3, 20:1 n-11, 20:1 n-9, 20:1 del estndar y 2,0 mL de Solucin de estndar interno a
n-7, 20:2 n-6, 20:4 n-6, 20:3 n-3, 20:4 n-3, 20:5 n- un matraz de fondo redondo. Proceder segn se indica
3, 22:1 n-11, 22:1 n-9, 21 :5 n-3, 22:5 n-3 y 22:6 n- en Solucin muestra 7, comenzando donde dice "Agre-
3.) gar 5 mL de ... ".
Calcular el porcentaje de rea de cada ster metlico de Solucin muestra 1: Transferir una cantidad equiva-
cidos grasos en la porcin de Cpsulas tomada: lente a 4,00 g del aceite contenido en las Cpsulas a un
matraz de fondo redondo. Agregar 5 mL de Solucin de
Resultado = (rAI rB) x 100 cido ascrbico, 100 mL de alcohol y 1 O mL de Solucin
acuosa de hidrxido de potasio, y mezclar. Someter la
rA ~
rea del pico de cada cido graso individual mezcla a reflujo en un bao de vapor durante 30 minu-
rB rea total de todos los picos, excepto por el
= tos. Agregar 100 mL de una solucin de cloruro de so-
pico del disolvente y el butil hidroxitolueno dio de 1 O mg/ml. Enfriar rpidamente bajo agua co-
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra cumple rriente y transferir la mezcla saponificada a un
con los lmites descritos en la Tabla 2. separador de 500 mL, enjuagando el matraz de saponi-
ficacin con 75 mL de una solucin de cloruro de sodio
Tabla 2 de 1 O mg/mL y luego con 150 mL de una mezcla de
ter y hexano (1 :1 ). Agitar la mezcla saponificada y los
Lmite Lmite
enjuagues combinados vigorosamente durante 30 se-
Anotacin Inferior Superior
gundos y dejar en reposo hasta que las capas se tornen
cido Graso Abreviada (rea%) (rea%)
transparentes. Desechar la capa inferior. Lavar los ex-
cidos arasos saturados tractos de ter-hexano agitando vigorosamente con
cido mirstica 14:0 20 60 50 mL de Solucin alcohlica de hidrxido de potasio y,
cido palmtico 16:0 70 f-
14 o posteriormente, lavando con tres porciones de 50 mL
cido esterico 18:0 1o 40 de una solucin de cloruro de sodio de 1 O mg/mL. Pa-
cidos arasos monoinsaturados
sar la capa superior a travs de 5 g de sulfato de sodio
anhidro, colocados en un papel de filtrado rpido, en
cido palmitoleico 16:1 n-7 -- -- _4_,5 11 5 un matraz de 250 mL adecuado para un evaporador ro-
cido cis-vaccnico 18:1 n-7 20 7o tatorio. Lavar el filtro con 1 O mL de una mezcla de ter
cido oleico 18:1 n-9 12 o 21 o y hexano (1: 1 ), y combinar con el extracto. Evaporar el
cido oadoleico 20:1 n-11 1o 55 disolvente usando presin reducida a una temperatura
cido oondoico 20:1 n-9 50 17 o que no exceda de 30 y llenar con nitrgeno cuando se
cido ercico ~2:l__ri_-:-_'L __ _Q. 15
haya completado la evaporacin. Como alternativa,
-------~

evaporar el disolvente bajo una corriente suave de ni-

cido cetoleico 22:1 n-11 50 12 o trgeno a una temperatura que no exceda de 30. Di-
cidos_!l!asos poliinsatu_r1a_clos --- -------- -- ~olver el residuo en 1,5 mL de Solucin A. [NOTA-Puede
Acido linoleico 18:2 n-6 05 30 ser necesario calentar suavemente en un bao ultras-
cido <L:llriolnico ____ 18:3 n 3 o 20 nico. Una gran parte del residuo blanco es colesterol.]
cido morctico 18:4 n-3 05 45 Solucin muestra 2: Agregar 2,0 mL de Solucin de e:.-
cido eicosapentaenoico 20:5 n-3 70 16 o
tndar interno a 4,00 g del aceite contenido en las Cp-
sulas y proceder segn se indica en Solucin muestra 7
cido docosahexaenoico 22:6 n--3 60 18 o comerlLando donde dice "Agregar 5 mL de .. .
6326 Bacalao ! 'lufJIP11wnlm Dielf>tico~
Sistem_a cromatogrfico de limpieza
(Ver lromatogrofta ( 621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV Lb.'.> nm
Fase mvil: Solucin A
Columna: Acero inoxidable, de 25 mm x 4,6 cm; re-
lleno L1 O
Volumen de inyeccin: 350 L
Anlisis (limpieza)
Muestras: Solucin estndar Solucin muestra 7 y Solu-
cin muestra 2 ' DESINTEGRACION Y DISOLUCION DE SUPLEMENTOS DIETETICOS
Recoger por separado los eluatos de 2 minutos antes
hasta 2 _minutos despus del tiempo de retencin de
colecalc1ferol en un tubo de vidrio que contenga
1 mL de Soluci~n. de butil hidroxitolueno y provisto de
un cierre hermet1co. Evaporar cada tubo bajo una co-
rriente de nitrgeno a una temperatura que no ex-
ceda de 30. Disolver el residuo en 1,5 mL de
acetonitrilo.
Sistema cromato9rfico analtico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Fase mvil: Solucin B
Columna: Acero inoxidable, de 15 mm x 4,6 cm; re-
lleno Ll de 5 m
Volumen de inyeccin: 200 ~tL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar (despus de la limpieza)
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,4 entre colecalciferol y
ergocalciferol
Desv!acin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de colecalciferol en inyecciones repetidas
Anlisis
M~,estras: Solucin est?ndar, Solucin muestra 7 y Solu-
c1on muestra 2 (despues de la limpieza)
Calcu!~r el contenido de vitamina D, en g/g, en la
porc1on de aceite tomada:
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs/Cu)
Ru ~ respuesta de colecalciferol con respecto al
estndar interno corregido en la Solucin
muestra 2, segn se calcula a continuacin
= respuesta de colecalciferol con respecto al
estndar interno en la Solucin estndar
= concentracin de ER Colecalciferol USP en la
Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin de aceite en la Solucin muestra
2 (g/mL)
rw = respuesta del pico de colecalciferol de la
Solucin muestra 2
r11> = respuesta del pico del estndar interno de la
Solucin muestra 2
r111 respuesta del pico del estndar interno de la
=
Solucin muestra 7
ru1 = respuesta del pico de colecalciferol de la
Solucin muestra 7
Criterios de aceptacin: 1,5 g (60 Unidades USP) a
6,25 g (250 Unidades USP) de vitamina D por g de
aceite contenido en las ~psulas
CONTENIDO DE ACEITE DE HIGADO DE BACALAO
Anlisis: Pesar no menos de 1 O Cpsulas en un frasco
de pesada tarado. Mediante una cuchilla afilada u otros
medios apropiados, abrir cuidadosamente las Cpsulas,
sin perder material de la cubierta, y transferir el conte-
nido combimdo de las Cpsulas a un vaso de precipita-
dos de 100 mL. Retirar cualquier sustancia adherida a
las cubiertas de las Cpsulas vacas lavando con varias
porciones pequeas de isooctano. Desechar los lavados
y dejar que las cubiertas de las Cpsulas se sequen en
USP 38
una corriente de aire seco hasta que se haya evaporado
por completo el isooctano. f)esar las cubiertas de las
Cpsulas vacas en el frasco de pesada tarado oriqinal y
c~lcu!ar el pe)o net~ promedio por Cp~ula. , .
Criterios de aceptac1on: 95,0% l 05,0% de 1a cantidad
declarada de aceite de hgado de bacalao
PRUEBAS DE DESEMPEO
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091):
Cumplen co~ los requisito,s. ,
(2040): Cumplen con los requisitos de Prueba de Rup-
tura para Cpsulas Blandas
PRUEBAS ESPECFICAS
GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401): No
ms de 1,30%
GRASAS y ACEITES FIJOS, ndice de Acidez (401)
Solucin muestra: Mezclar 15 mL de alcohol con
15 mL ~e ter, agrega_r 5 gotas ~e fenolftalena SR y
neutralizar con h1drox1do de sodio O, l N. Disolver 2,0 g
del aceite contenido en las Cpsulas en la mezcla y ca-
lentar la solucin de aceite a ebullicin suave bajo un
condensador de reflujo durante 1 O minutos.
Anlisis: Enfriar y valorar la mezcla con hidrxido de
sodio O, 1 N SV hasta que se produzca un color rosado
que persista despus de agitar durante 30 segundos.
Criterios de aceptacin: Se requiere no ms de 1,0 mL
de hidrxido de sodio,O, l N.
GRASAS y ACEITES FIJOS, !Jldice de Yodo (401 ): 145-180
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Saponificacin (401 ):
180-192
[NOTA~Si se ha usado dixido de carbono como conser-
vante, exponer el aceite contenido en las Cpsulas en
una cpsula hueca en un desecador de vaco durante
24 horas antes de pesar la muestra para la determina-
cin del ndice de saponificacin.]
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables a temperatura ambiente. Proteger de la luz.
ETIQUETADO: La potencia de la vitamina A y de la vita-
mina D, cuando se indican en la etiqueta, se pueden
expre_s,ar en Unidades USP por g de aceite. La potencia
tamb1en se puede expresar en unidades mtricas, basn-
dose en que 1 Unidad USP de Vitamina A= 0,3 g de la
forma todo trans retino! y 40 Unidades USP de Vitamina
D = 1 g. Etiquetar las Cpsulas enfatizando la necesidad
de evitar la congelacin o la exposicin a la humedad
excesiva o a una temperatura superior a 40. Cuando se
c;Jedara _el contenido de cido docosahexaenoico y de
ac1do e1cosapentaeno1co, indicar en la etiqueta la canti-
da9 en mg por Cpsula.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP ( 11)
ER Colecalciferol USP
ER Aceite de Hgado de Bacalao LJSP
ER Ergocalciferol USP
ER Vitamina A USP
Bacopa
DEFINICIN
La Bacopa consta de los tallos y hojas secos de Bacopa mon-
men (L.) Pennell (Fam. Scrophulariaceae). Contiene no
menos de 2,5% de glicsidos triterpPnirn<;, calculado con
resp~cto a la materia seca como la suma de bacopsido 1,
bacos1do A3, bacopsido 11, el ismero JUjubogennico de
bacopa)aponina C y bacopasaponina C.
IDENTIFICACIN
A.,. La Bacopa c~mple cor; los requisitos de Pruebas Espe-
cificas, Caractemlicus Botamcas.
USP 38
8. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar: Trdmferir dproximaddmente 1 O rng
de tR Exlt ctclu e11 Pulvu Je BaLU!.Jd USP a u11 1t1ctl1 aL
volumtrico de 1 O mL y agregar aproximadamente
8 mL de metano!. Someter a ultrasonido y calentar sua-
vemente durante 1 5-20 minutos, diluir con metano! a
volumen, mezclar, centrifugar, y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Usar la Solucin muestra, preparada
segn se indica en la prueba de Contenido de Glicsidos
Triterpnicos.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 10-15 m
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 15 L, en bandas de 5-1 O mm
Fase mvil: Acetato de etilo, metano! y agua (7:2:1)
Solucin reveladora: Vainillina al 1 % en alcohol y
cido sulfrico al 1 0% en alcohol (1: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar, rociar con
Solucin reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
aproximadamente 70, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
una zona principal de color azul oscuro debida a una
mezcla de bacsido A3, bacopsido 11, el ismero juju-
bogennico de bacopasaponina e y bacopasaponina e a
un valor Rr de aproximadamente 0,6 y una mancha de
color rosado plido debida a bacopsido 1 a un valor Rr
de aproximadamente 0,4, las cuales corresponden en
posicin y color a las zonas en el cromatograma de la
Solucin estndar. Se observan otras zonas para la Solu-
cin muestra y la Solucin estndar.
c. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC: La Solucin mues-
tra de la prueba de Contenido de Glicsidos Triterpnicos
presenta un pico principal en el tiempo de retencin co-
rrespondiente al de bacsido A3 en el cromatograma de
Id SuluLin estndar A. ldentific.dr otros picos de glicsidos
triterpnicos en la Solucin muestra por comparacin con
el cromatograma de la Solucin estandar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Bacopa USP. La Solucin muestra presenta
picos adicionales correspondientes a bacopsido 1, baco-
psido 11, el ismero jujubogennico de bacopasaponina
e y bacopasaponina c.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS TRITERPNICOS
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de
cido fosfrico, diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar,
filtrar, y desgasificar.
Solucin B: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
---------r-----------------~-~------~
Tiempo Solucin A Solucin B
min lo lo
>-------~---
________ _lL____ 1-~
______f_6_-__ -----
____ _z_Q_______
-
60 j
30
40
--~~ ~-=-~i=~~-- -~==-=
Solucin estndar A: ~ometer a ultrasonido una canti-
dad pesada de ER Bacsido A, USP en metano! para
obtener una solucin con una concentracin de aproxi-
madamente 0,5 mg/mL.
Solucin estndar B: Transferir aproximadamente
1 O mg de ER Extracto en Polvo de Bacopa USP a un
matraz volumtrico de 1 O mL y agregar aproximada-
Suplementos Dietticos / Bacopa 6327
mente 8 mL de metano!. Someter a ultrasonido y calen-
tar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con me-
tano! a volumen, y mezclar. Antes de la inyeccin, pasar
d lr dv~ Je ur 1 illr v Je 111e11 d.J1 dlld c011 un ta1r1a1)0 de
poro de 0,45 pm o menor, desechando los primeros
5 mL del filtrado.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Bacopa, reducida a polvo fino, a un matraz de fondo
redondo de 1 00 mL equipado con un condensador de
reflujo. Agregar 25 mL de metano!, someter a reflujo en
un bao de agua durante 1 O minutos, enfriar a tempe-
ratura ambiente, y decantar el sobrenadante. Repetir
hasta que el ltimo extracto se torne incoloro. Combi-
nar los extractos, filtrar, concentrar al vaco, y ajustar el
volumen hasta 1 00 mL usando metano!. Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros 5 mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m desac-
tivado para bases con recubrimiento exhaustivo
(endcapped).
Temperatura de la columna: 27 1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Bacopa USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de ba-
copsido 11 y bacsido Ai, Solucin estndar B
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
bacsido A3, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% deter-
minada a partir del pico de bacsido A1 en inyeccio-
nes repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, la
Solucin estndar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Bacopa
USP, identificar los tiempos de retencin de los picos
correspondientes a los diferentes glicsidos triterpni-
cos. Los tiempos de retencin relativos aproximados
para los diferentes glicsidos triterpnicos se propor-
cionan en la siguiente tabla.
Tiempo de
Retencin
Analito Relativo
Bacoosido 1 o 73
Bacsido A1.... ------- 1 00
Bacoosido 11 --~--
1 04
El ismero iuiuboaenrnico de bacooasaoonina C 1 15
Bacooasaoon ina _~-- __
Calcular por separado los porcentajes de bacopsido 1,
bacsido A,, bacopsido 11, el ismero jujubogennico
1 22
de bacopasaponina e y bacopasaponina e en la por-
cin de Bacopa tomada:
Resultado = (r11/r,) X e, X (V /W) X F X 1 00
ru = respuesta del pico de cada glicsido
triterpnico de la Solucin muestra
r, = respuesta del pico de bacsido Ai de la
Solucin estndar A
6328 Barnra / )up!ementos Dietticos
Cs =concentracin de ER Bacsiclo A, lJ)P en la
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W peso de B.:icop,1 usado para fJ' efJdf di ict
Solucin muestra (mg)
F = factor de conversin para cada analito: ..
1,00 para bacsido A 3; 1,03 para bacopas1do
1; 0,81 para bacopsido 11; 0,99 para el .
ismero jujubogennico de bacopasaponina
c y 0,75 para bacopasaponina c .
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentaies de ba-
copsido 1, bacsido Ai, bacopsido 11, el ismero juju-
bogennico de bacopasaponina e y bacopasaponina C:
Se encuentra no menos de 2,5%, con respecto a la
materia seca.
IMPUREZAS
lmpu~ezas Inorgnicas , . .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Aodo
(561): No ms de 6,0%
METALES PESADOS, Mtodo /JI (231): No ms de 20 ppm
Impurezas Orgnicas, , .
PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Matena
Orgnica Extraa (56)): No ms de 2,0%, , muy fino. Contiene no menos de 2,5% de glicsidos tri-
PROCEDIMIENTO 2: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: El tallo es rastrero, suculento, glabro,
blando, obtuso-angular; con entrenudos largos, inser-
ciones de races en los nudos; sin hojas en direccin a
la base; con ramas ascendentes. Las hojas son simples,
ssiles o con pecolo corto, opuestas, suculentas, de
1-2 mm de espesor; oblongo-obovadas en forma de
esptula, borde completo o en raras ocasiones denta-
dos, pice redondeado, nervadura central poco mar-
cada, de 0,6-2,5 cm de largo y 3-8 mm de ar:ic.h~; la
superficie superior es de color verde, la ~uperf1c1e infe-
rior es de color verde y punteada. El articulo farmaco-
peico es de color amarillento; consta d!" mezclas. secas
de hojas y tallos partidos, en su mayoria con hojas des-
prendidas; olor suave similar al del heno y sabor muy
amargo.
Histologa . , .
Seccin transversal de los tallos: Capa ep1derm1ca;
corteza amplia compuesta de clulas parenquimticas
de paredes delgadas y grandes espacios .1nterce!ulares;
vasos de xilema dispuestos en forma radial, r_ad1os me-
dulares uniseriados; mdula compuesta de celulas re-
dondas o isodiamtricas de paredes delgadas con es-
pacios intercelulares definidos. Ausencia de canales de
resina y esclereidas pericclicas.
Seccin transversal de las hojas: Presentan una es-
tructura ms o menos isobilateral; epidermis con pelos
glandulares y estomas; la superficie superior t!ene ms
pelos y menos estomas que la superf1c1e inferior; me-
sfilo compuesto de tejido esponjoso, con unos pocos
prismas de oxalato de calcio y haces vasculares
presentes .
PRDIDA POR SECADO <731 ): Secar 1,0 g de Bacopa redu-
cida a polvo fino a 105 durante 3 horas: pierde no ms
de 12,0% de su peso .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561 ):
No ms de 18%, determinado en 1,0 g de Bacopa redu-
cida a polvo fino
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561 ): No menos de 6,0%
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g.
USP 38
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la a11-
senc1a de ">almonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES .
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente. . ,.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1ent1f1co en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la r;lanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bacsido Ai USP
ER Extracto en Polvo de Bacopa USP
Bacopa en Polvo
DEFINICIN
La Bacopa en Polvo es Bacopa reducida a polvo o a polvo
terpnicos, calculado con respecto a la materia seca como
la suma de bacopsido 1, bacsido A,, bacopsido 11, el
ismero jujubogennico de bacopasaponina c y bacopasa-
ponina C.
IDENTIFICACIN
A. La Bacopa en Polvo cumple con los requisitos de Prue-
bas Especficas, Caractersticas Botnicas. ,
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar: Transferir aproximadamente 1 O mg
de ER Extracto en Polvo de Bacopa USP a un matraz
volumtrico de 1 O mL y agregar aproximadamente
8 mL de metano!. Someter a ultrasonido y calentar sua-
vemente durante 15-20 minutos, diluir con metano! a
volumen, mezclar, centrifugar, y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Usar la Solucin muestra, preparada
segn se indica en la prueba de Contenido de Clicsidos
Trilerpnicos.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 10-15 m
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 15 L, en bandas de 5-1 O mm
Fase mvil: Acetato de etilo, metano! y agua (7:2: 1)
Solucin reveladora: Vainillina al 1 % en alcohol y
cido sulfrico al 10% en alcohol (1: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621)). Usar una cmara saturada. Desarrollar,
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mo-
vil haya recorrido aproximad~mente tres cuar~os de la
placa. Retirar la placa de la camara, secar, ro~1ar con
Solucin reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
aproximadamente 70', y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
una zona principal de color az~I oscuro debida a ~na
mezcla de bac.sido Ai, bacopas1do 11, el 1somero JUJU-
bogennico de bacopasaponina e y bacopasaponina c l
un valor R, de aproximadamente 0,6 y una mancha de
color rosado plido debida d bacopasido 1 a un valor RF
de aproximadamente 0,4, las cuales corresponden en
posicin y color a las zonas en el cromatograma de la
Solucin estndar. Se observan otras zonas para la Solu-
cin muestra y la Soluciqn estndar. .,
c. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: La Solue1on mues-
tra de la prueba de Contenido de .Clicsidos Triterpr;icos
presenta un pico principal en el tiempo de retenc1on co-
rrespondiente al de bac6s1do Ai en el cromatogram~ de
la Solucin estndar A. Identificar otros picos de gl1cos1dos
lJSP :rn
tritcrpnicos en !J Solucin rnucstra por comparacin con
el nomatograma de la .'iolunon estandar H y el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de l1acopa U'.:>!' usado. La Soiuc;on muestra pre-
senta picos adicionales correspondientes a harnrsido 1,
bacopsido 11, el ismero jujubogennico de bacopasapo-
nina c y bacopasaponina c.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS TRITERPNICOS
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 ml de agua, agregar 0,5 ml de
cido fosfrico, diluir con agua hasta 1 000 ml, mezclar,
filtrar, y desgasificar.
Solucin B: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A
(min) (O/o)
---------- r------70 . - -- ---- ----
25 60
26 70
30 70
Solucin estndar A: Someter a ultrasonido una canti-
dad pesada con exactitud de ER Bacsido A3 USP en
metanol para obtener una solucin con una concentra-
cin conocida de aproximadamente 0,5 mg/ml.
Solucin estndar B: Transferir aproximadamente
1 O mg de ER Extracto en Polvo de Bacopa USP a un
matraz volumtrico de 1 O ml y agregar aproximada-
mente 8 ml de metanol. Someter a ultrasonido y calen-
tar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con me-
tano! a volumen, y mezclar. Antes de la inyeccin, pasar
a travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
5 ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Bacopa en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
traz de fondo redondo de 100 ml equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 ml de metano!, so-
meter a reflujo en un bao de agua durante 1 O minu-
tos, enfriar a temperatura ambiente, y decantar el so-
brenadante. Repetir hasta que el ltimo extracto se
torne incoloro. Combinar los extractos, filtrar, concen-
trar al vaco, y ajustar el volumen hasta 1 00 ml usando
metanol. Antes de la inyeccin, pasar a travs de un
filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros 5 ml del
filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m desac-
tivado para bases con recubrimiento exhaustivo
(endcapped).
Temperatura de la columna: 27 t 1"
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Bacopa USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de ba-
copsido 11 y bacsido A,, Solucin estndar B
Factor de asimetra: ~~o ms de 1,5 para el pico de
bacsido Ai, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% deter-
minada a partir del pico de bacsido A, en inyeccio-
nes repetidas, Solucin estndar A
Suplt?menio<> Dieteticos / Bacopa 6329
Anlisis
Muestras: Solucin estandar A, Solucion estndar B y
Solucion muestro
u~amio im crornaLOgrarna~ de ia Suiuciun olnJw A,
la ~nfucinn i'\tndar R y f'I nomatograma de referen-
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Bacopa USP, identificar los tiempos de retencin de
los picos correspondientes a los diferentes glicsidos
triterpnicos. Los tiempos de retencin relativos apro-
ximados para los diferentes glicsidos triterpnicos se
proporcionan en la siguiente tabla.
---------------- - -----------
Tiempo de
Retencin
Analito Relativo
Bacoosido 1 o 73
-----------
_Bilc:cs.iQo A5_ 1 00
Solucin B ------ -
(O/o) Bacoosido 11 -- ~---_l,_()1__
Elismero iuiuboaennico de bacopasaponina C 1 15
30
Bacopasaoonina C 1 22
40
30 Calcular por separado los porcentajes de bacopsido 1,
30 bacsido Ai, bacopsido 11, el ismero jujubogennico
de bacopasaponina e y bacopasaponina c en la por-
cin de Bacopa en Polvo tomada:
Resultado = (r"/rs) x Cs x (V /W) x F x 100
ru = respuesta del pico de cada glicsido
triterpnico de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de bacsido A1 de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de ER Bacsido A1 USP en la
Solucin estndar A (mg/ml)
V = volumen final de la Solucin muestra (ml)
W =peso de Bacopa en Polvo usado para preparar
la Solucin rnuestra (mg)
F = factor de conversin para cada analito:
1,00 para bacsido A1; 1,03 para bacopsido
1; 0,81 para bacopsido 11; 0,99 para el
ismero jujubogennico de bacopasaponina
e y 0,75 para bacopasaponina e
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de ba-
copsido 1, bacsido Ai, bacopsido 11, el ismero juju-
bogennico de bacopasaponina c y bacopasaponina C:
Se encuentra no menos de 2,5% con respecto a la ma-
teria seca.
IMPUREZAS
lmpu!"ezas Inorgnicas ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 6,0%
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231 ): No ms de 20 ppm
Impurezas Orgnic~s , ,
PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Anlisis de Re;iduos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Color amarillento, olor suave
similar al del heno y sabor muy amargo. Bajo el micros-
copio puede observarse: fragmentos de clulas epidrmi-
cas dorsales y ventrales de las hojas en vista superficial,
con tricomas glandulares ssiles con 4-8 clulas y esto-
mas diacticos o anomocticos; la epidermis superior tiene
ms tricomas y menos estomas que la epidermis inferior;
clulas de la epidermis inferior con paredes anticlinales
:,inuu~a> y en algunos lugares, cutcula estriada; fragmen-
tos de celulas epidrmicas del tallo en vista superficial;
clulas parenquimticas que encierran cavidades, algunas
contienen cristales de oxalato de calcio con forma pris-
mtica y de roseta; fragmentos de vasos anillados y espi-
ralados cortados longitudinalmente; fragmentos de clu-
las corticales del tallo; y cristales de oxalato de calcio.
6330 Bctcopct /Suplementos DictCticos
PRDIDA POR SECADO 1731): ';prar 1,0 g de Rampa en
Polvo a 105 durd11le 3 l1ord>: pierde no ms de 12,0%
de ;u peso. , placa. Retirar la placa de la cmara, secar, rociar con
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, (11/Lm Tuiub (56lj:
No ms de 18%, determinado en 1,0 g de Bacopa en
Polvo
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561): No menos de 6,0%
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 oi ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 0 3 ufc/g. , Solucin estndar. Se observan otras zonas para la Solu-
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonel/a spp. y Fscherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la P,lanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bacsido A3 USP
ER Extracto en Polvo de Bacopa USP
Extracto en Polvo de Bacopa
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Bacopa se prepara a partir de Ba-
copa mediante extraccin con agua, alcohol, metanol o
una mezcla de estos disolventes. La relacin entre el ma-
terial vegetal y el extracto est entre 20:1 y 10:1. Con-
tiene no menos de 90,0% y no ms de 110,0% de la
cantidad declarada de glicosidos triterpnicos, calculado
con re>pecto a la materia seca como la suma de bacop-
sido 1, bacsido Ai, bacopsido 11, el ismero jujubogen-
nico de bacopasaponina C y bacopasaponina C. Puede
contener sustancias agregadas adecuadas como
portadores.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: Transferir aproximadamente 1 O mg
de ER Extracto en Polvo de Bacopa USP a un matraz
volumtrico de 1 O mL y agregar aproximadamente
8 mL de metanol. Someter a ultrasonido y calentar sua-
vemente durante 15--20 minutos, diluir con metanol a
volumen, mezclar, centrifugar, y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Someter a ultrasonido durante apro-
ximadamente 1 O minutos una cantidad de Extracto en
Polvo de Bacopa equivalente a aproximadamente
40 mg de glicsidos triterpnicos en 1 O mL de metanol,
centrifugar, y usar el sobrenadante.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 1 0-15 m
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 15 pL, en bandas de 5-1 O mm
Fase mvil: Acetato de etilo, metanol y agua (7:2:1)
Solucin reveladora: Vainillina al 1 % en alcohol y
cido sulfrico al 10% en alcohol (1 :1)
Anlisis
Muestras: Solucin s/11Ja1 y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621)). Usar una cmara saturada. Desarrollar
lJSP 38
!os cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
Suiuuun reveimiuru, caiemar durante 5- i minutos a
JproximadJmC'ntC' 70' y oh\ervJr bajo lu? visible.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
una zona principal de color azul oscuro debida a una
mezcla de bacsido Ai, bacopsido 11, el ismero juju-
bogennico de bacopasaponina c y bacopasaponina c a
un valor Rr de aproximadamente 0,6 y una mancha de
color rosado plido debida a bacopsido 1 a un valor Rr
de aproximadamente 0,4, las cuales corresponden en
posicin y color a las zonas en el cromatograma de la
cin muestro y la Soluciqn estndar.
8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: La Solucin mues-
tra de la prueba de Contenido de Glicsidos Triterpnicos
presenta un pico principal en el tiemFo de retencin co-
rrespondiente al de bacsido Ai en e cromatograma de
la Solucin estndar A. Identificar otros picos de glicsidos
triterpnicos en la Solucin muestra por comparacin con
el cromatograma de la Solucin estandar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Bacopa USP usado. La Solucin muestra pre-
senta picos adicionales correspondientes a bacopsido 1,
bacopsido 11, el ismero jujubogennico de bacopasapo-
nina c y bacopasaponina c.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS TRITERPNICOS
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de
cido fosfrico, diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar,
filtrar, y desgasificar.
Solucin B: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B
lmin) l/o) 1%)
o 70 30
25 60 40
26 70 30
30 70 30
Solucin estndar A: Someter a ultrasonido una canti-
dad pesada de ER Bacsido Ai USP en metanol para
obtener una solucin con una concentracin de aproxi-
madamente 0,5 mg/mL.
Solucin estndar B: Transferir aproximadamente
1 O mg de ER Extracto en Polvo de Bacopa USP a un
matraz volumtrico de 1 O mL y agregar aproximada-
mente 8 mL de metanol. Someter a ultrasonido y calen-
tar suavemente durante 15-20 minutos, diluir con me-
tano! a volumen, y mezclar. Antes de la inyeccin, pasar
a travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 ,um o menor, desechando los primeros
5 mL del filtrado.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto
en Polvo de Bacopa equivalente a aproximadamente
25 mg de glic'>idm triterpnicos a un matraz volum-
trico de 25 mL y agregar 15 mL de metanol. Someter a
ultrasonido y calentar suavemente durante 15-20 minu-
tos, diluir con metanol a volumen, y mezclar. Antes de
la inyeccin, pasar a travs de un iltro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 ,um o menor, dese-
chando los primeros 5 mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 pm desac-
tivado para bases con recubrimiento exhaustivo
(endcapped).
USP 38
Temperatura de la columna: 27 + 1"
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 pL
Aplilud del ~blemd
Muestras: Solucin estndar !\ y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Bacopa USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de ba-
copsido 11 y bacsido A 3, Solucin estndar B
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
bacsido A1, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% deter-
minada a partir del pico de bacsido A3 en inyeccio-
nes repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
la Solucin estndar B y el cromatograma de referen-
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Bacopa USP usado, identificar los tiempos de reten-
cin de los picos correspondientes a los diferentes gli-
csidos triterpnicos. Los tiempos de retencin relati-
vos aproximados para los diferentes glicsidos
triterpnicos se proporcionan en la siguiente tabla.
Tiempo de
Retencin
Ana lito
Bacoosido 1
Bacsido A3
Bacoosido 11
El ismero iuiuboqennico de bacooasaoonina C
Bacooasaoonina C
Calcu)a_r por separado los porcentajes de bacopsido 1,
bacos1do A1, bacopsido 11, el ismero jujubogennico
de bacopasaponina c y bacopasaponina c en la por-
cin de Extracto en Polvo de Bacopa tornada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 1 00
ru = respuesta del pico de cada glicsido
triterpnico de la Solucin muestra
r1 = respuesta del pico de bacsido A3 en la
Solucin estndar A
Cs =concentracin de ER Bacsido A1 USP en la
Solucin estndar A (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de Bacopa
en la Solucin muestra (mg/mL)
F = factor de conversin para cada analito:
1,00 para bacsido A3; 1,03 para bacopsido
1; 0,81 para bacopsido 11; 0,99 para el
ismero jujubogennico de bacopasaponina
c y 0,75 para bacopasaponina c
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de ba-
copsic;Jo 1, bacsido Ai, bacopsido 11, el ismero juju-
bogenin1co de bacopasapon1na C y bacopasaponina C:
Se encuentra no menos de 90,0%-no ms de 110,0%
de la cantidad declarada de glicsidos triterpnicos con
respecto a la materia seca.
IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo fil (231): No ms de
20 ppme (Oficial Ol-dic-2015)
Suplcrnentos OictCticos / BJnabJ 63 31
Impurezas Orgnica_s ,
PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cu111pie coi 1 io' 1eyu1,fio,.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Polvo de Bacopa a 1 05 - durante 3 horas: pierde no ms
de 5% de su peso.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 101 ufc/mL.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE Ml_C~OORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requ1s1tos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botnicos
(565).
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artculo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bacsido Ai USP
ER Extracto en Polvo de Bacopa USP
Relativo
o 73
1 00
1 04
1 15 Agregar lo siguiente:
1 22
Hojas de Banaba
DEFINICIN
Las Hoja_s deB~naba consisten en las hojas secas de Lagers-
troem1a speoosa (L.) Pers. (Fam. Lythraceae). Contienen
no menos de 0,2% de cido coroslico (C 30 H48 0 4), calcu-
lado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. Cumplen con los requisitos en Pruebas Especficas Ca-
ractersticas Botnicas. '
8. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,2 mg/ml de ER cido Coros-
lico USP en metanol
Solucin estndar B: 1 O mg/ml de ER Extracto Seco
de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP en metanol. So-
meter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Aproximadamente 0,2 g de Hojas de
Banaba, reducidas a polvo fino, en 1O ml de metano!.
Someter a ultrasonido durante 15 minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Modo: HPTLC
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partJCula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 6 L de Solucin estndar A y
de Solucin estndar B, y 8 L de Solucin muestra, en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33%, usando un dis-
positivo adecuado.
6332 BJnJbJ /Suplementos OictCticos
Fase mvil: Una mncla de tolueno, acetato de etilo y
cido actico (55: 45: 0,5)
Reactivo de derivatizacin: 85 rnL de rnetanol en-
friado con hielo mezclado con 1O rnL de cido aclirn
glacial, 5 rnL de cido sulfrico y 0,5 mL de p-
anisaldehdo. , 100 mL, ajustar con metano! a volumen y mezclar. An-
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para HPTLC
adecuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogra-
mas en una cmara no saturada, retirar la placa ae la
cmara y secar. Tratar con Reactivo de derivatizacin,
calentar a 100 durante 3 minutos y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: Bajo luz visible, el cromatograma
de la Solucin estndar B presenta la banda ms intensa,
una banda de color violeta o azul, con valor RF y color
similares a la banda de cido coroslico en el cromato-
grama de la Solucin estndar A; una banda de color
azul cercana al origen (valor RF de aproximadamente
O, 1), consistente con cido asitico; dos bandas meno-
res de color azul entre las bandas de los cidos coros-
lico y asitico; una banda menor de color azul debida a
cido virgtico, por encima de la banda debida a cido
coroslico; y directamente por debajo de la banda de
cido asitico, una banda menor de color marrn. La
Solucin estndar B tambin presenta dos bandas meno-
res de color violeta, separadas, en aproximadamente
tres cuartos del cromatograma; la banda con el valor RF
inferior corresponde a cido oleanlico.
Criterios de aceptacin: Bajo luz visible, el cromato-
grama de la Solucin muestra presenta la banda ms
intensa como una banda de color violeta correspon-
diente en color y valor RF a la banda debida a cido
coroslico en el cromatograma de la Solucin estndar
A, as como las siguientes bandas correspondientes a
bandas similares de la Solucin estndar B: una banda
menor de color azul cercana al origen (valor RF de apro-
ximadamente O, 1 ), una banda menor de color amarro-
nado por encima del cido coroslico y una banda me-
nor de color violeta en aproximadamente tres cuartos
del cromatograma.
C. HPLC
AIJlisis: Proceder segn se indica en Contenido de
Acido Coroslico.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta un grupo de tres picos. El pico
central es el ms intenso del grupo y ocurre a un
tiempo de retencin correspondiente al de cido coro-
slico en el cromatograma de la Solucin estndar A. La
intensidad del pico que eluye antes del cido coroslico
es de aproximadamente la mitad a un tercio de la in-
tensidad del cido coroslico, y el pico que eluye des-
pus del cido coroslico tiene la menor de las tres in-
tensidades y es consistente con cido virgtico. Un pico
menor debido a cido oleanlico eluye despus en el
cromatograma.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDO COROSLICO
Solucin A: Diluir cido fosfrico hasta O, 1% en agua.
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Una mezcla de Solucin A y Solucin B (4:6)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER cido Coros-
lico USP en metanol
Solucin estndar B: 5,0 mg/mL de ER Extracto Seco
de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP en metano!. So-
meter a ultrasonido, si fuera necesario. Antes de inyec-
tar, pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor. Desechar los
primeros mL del filtrado.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 5,0 g
de Hojas de Banaba, reducidas a polvo fino y pesadas
con exactitud, a un matraz de fondo redondo. Agregar
usr 38
75 ml. de metano!, someter a reflujo durante 15 minu-
tos, dejar en reposo para que sedimente y decantar el
sobrenadante. Repetir la extraccin tres veces ms,
luego Lomui11dr lo~ extractos. Filtrar y concentrar a pre-
sin reducida. Transferir a un matraz volumtrico de
tes de inyectar, pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de porode 0,45 m o menor. Desechar
los primeros mL de filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta <621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 25
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
para los picos individuales de cido coroslico, cido
virgtico y cido oleanlico son 1,0; 1, 1 y 3,2,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto Seco
de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre el pico de cido
coroslico y el pico precedente, Solucin estndar B
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido coroslico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de cido coroslico en
inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Identificar los tiempos de retencin relativos para los
picos de cido coroslico, cido virgtico y cido olea-
nlico de la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de cido coroslico en la porcin
de Hojas de Banaba tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = rea del pico de cido coroslico de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cido coroslico de la
Solucin estndar A
Cs concentracin de cido coroslico en la
=
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Hojas de Banaba tomado para
preparar la Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,2% de cido
coroslico con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS <233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 2,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5 g/g
Mercurio: No ms de 0,2 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas <561): Cumplen con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO <2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram-negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g.
USP 38
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS <2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Safmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Las hojas de banaba varan en forma,
incluyendo lanceoladas, oblongo-lanceoladas, oblongas
y elptico ovadas. Son de hasta 34 cm de longitud y
11 cm de ancho; de color verde oliva a marran amari-
llento; enteramente o ligeramente onduladas en los
mrgenes; base aguda; pice agudo a acuminado; tex-
tura coricea; y peciolada con pecolos de hasta 1 cm
de longitud.
Microscpicas
Seccin transversal de la nervadura central: Una
capa de la epidermis superior compuesta de clulas
rectangulares a redondeadas cubiertas con una cut-
cula delgada; unas pocas capas de clulas colenquim-
ticas; numerosas capas de clulas parenquimticas, al-
gunas contienen cristales de oxalato de calcio en
grupos, con grandes espacios intercelulares; grupos de
haces de fibras lignificadas; y canales secretores disper-
sos en la zona del parnquima. Haz vascular bicolateral
rodeado por una vaina continua de fibras acompaada
por esclernquima y clulas que contienen cristales de
oxalato de calcio en grupos; canales secretores entre
los haces vasculares; numerosas capas de clulas pa-
renquimticas, algunas contienen cristales de oxalato
de calcio en grupos, con grandes espacios intercelula-
res; unas pocas capas de colnquima; una capa de c-
lulas epidrmicas inferiores.
Seccin transversal de la lmina: Una capa de la epi-
dermis superior compuesta de clulas rectangulares
con aproximadamente el doble de tamao que las de
la epidermis inferior. Algunas son clulas secretoras,
que tienden a protuberar en el mesfilo y a veces pa-
recen estar por debajo de la epidermis superior. Dos
capas de clulas rectangulares en empalizada; 4-6 ca-
pas de clulas parenquimticas, algunas que contienen
prismas de oxalato de calcio y otras que contienen
cristales de oxalato de calcio en grupos, con grandes
espacios intercelulares; grupos de haces vasculares dis-
persos en la zona del parnquima; una epidermis infe-
rior que presenta estomas .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(?61): No ms de 2,0%
PERDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar 2,0 g de Hojas de Banaba, reducidas a
polvo fino, a 105 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 10%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Anlisis: 2,0 g de Hojas de Banaba reducidas a polvo
fino
Cr~terios de aceptacin~ No ms de 7,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohpl, Mtodo 1 (561): t)Jo ms de 10,0% , Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Anlisis: 4,0 g de Hojas de Banaba reducidas a polvo
fino
Cri):erios de aceptacin:, No ms de 2%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 1 (561 ): No menos de 18,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta contenidas en el artculo.
Supicmentos Dietticos/ Banaba 6333
EST~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Coroslico USP
ER Extracto Seco de Hojas de Laqerstroemia speciosa USP
lt..USPJ8
Agregar lo siguiente:
Hojas de Banaba en Polvo
DEFINICIN
Las Hojas de Banaba en polvo consisten en las hojas secas
de Lagerstroemia speciosa (L.) Pers. (Fam. Lythraceae) re-
ducidas a polvo o polvo muy fino. Contiene no menos de
0,2% de la cantidad declarada de cido coroslico
(C30H4s4), calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. Cumplen con los requisitos en Pruebas Especficas, Ca-
ractersticas Botnicas.
B. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA ,
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Acido Coros-
lico USP en metano!
Solucin estndar B: 1O mg/mL de ER Extracto Seco
de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP en metano!. So-
meter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Aproximadamente 0,2 g de Hojas de
Banaba en Polvo en 1O mL de metano!. Someter a ultra-
sonido durante 15 minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Modo: HPTLC
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de part1cula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 6 L de Solucin estndar A y
de Solucin estndar B, y 8 L de Solucin muestra, en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33%, usando un dis-
positivo adecuado.
Temperatura de la columna: 25
Fase mvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo y
cido actico (55: 45: 0,5)
Reactivo de derivatizacin: 85 mL de metano! en-
friado con hielo mezclado con 1O mL de cido actico
glacial, 5 mL de cido sulfrico y 0,5 mL de p-
anisaldehdo.
Anlisis
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para HPLTC
adecuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogra-
mas en una cmara no saturada, retirar la placa de la
cmara y secar. Tratar con el Reactivo de derivatizacin,
calentar a 100 durante 3 minutos y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: Bajo luz visible, el cromatograma
de la Solucin estndar B presenta la banda ms intensa,
una banda de color violeta o azul, con valor Rr y color
similares a la banda de cido coroslico en el cromato-
grama de la Solucin estndar A; una banda de color
azul cercana al origen (valor Rr de aproximadamente
O, 1), consistente con cido asitico; dos bandas meno-
res de color azul entre las bandas de coroslico y asi-
tico; una banda menor de color azul debida a cido
virgtico, por encima de la banda debida a cido coro-
slico; y directamente por debajo de la banda de asi-
6.B4 Rc111rifM / Suplf>rnentos Dietticos
tico, una bandJ men de color marrn. La Solucin
estndar B tambin presenta dos bandas menores de
color violeta, separadas, en aproximadamente tres cuar-
tos del cromatograma; _la banda con el valor Rr inferior
corresponde a cido oleanlico.
Criterios de aceptacin: Bajo luz visible, el cromato-
grama de la Solucin muestra presenta la banda ms
1~tensa como una banda de color violeta correspon-
diente en color y valor Rr a la banda debida a cido
coroslico en el cromatograma de la Solucin estndar
A, as como las siguientes bandas correspondientes a
bandas similares de la Solucin estndar B: una banda
menor de color azul cercana al origen (valor Rr de apro-
ximadamente O, 1), una banda menor de color amarro-
nado por encima del cido coroslico y una banda me-
nor de color violeta en aproximadamente tres cuartos
del cromatograma.
C. HPLC
AIJlisis: Proceder segn se indica en Contenido de
Acido Coroslico.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta un grupo de tres picos. El pico
central es el ms intenso del grupo y ocurre a un
tiempo de retencin correspondiente al de cido coro-
slico en el cromatograma de la Solucin estndar A. La
intensidad del pico que eluye antes del cido coroslico
es de aproximadamente la mitad a un tercio de la in-
tensidad del cido coroslico, y el pico que eluye des-
pus del cido coroslico tiene la menor de las tres in-
tensidades y es consistente con cido virgtico. Un pico
menor debido a cido oleanlico eluye despus en el
cromatograma.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDO COROSLICO
Solucin A: Diluir cido fosfrico hasta O, 1% en agua.
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Una mezcla de Solucin A y ~olucin B (4:6)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Acido Coros-
lico USP en metano!
Solucin estndar B: 5,0 mg/mL de ER Extracto Seco
de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP en metano!. So-
meter a ultrasonido, si fuera necesario. Antes de inyec-
tar, pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor. Desechar los
primeros mL del filtrado.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 5,0 g
de Hojas de Banaba en Polvo, pesadas con exactitud, a
un matraz de fondo redondo. Agregar 75 mL de meta-
no!, someter a reflujo durante 15 minutos, dejar en re-
poso para que sedimente y decantar el sobrenadante.
Repetir la extraccin tres veces ms, luego combinar los
extractos. Filtrar y concentrar a presin reducida. Trans-
ferir a un matraz volumtrico de 100 mL, ajustar con
metanol a volumen y mezclar. Antes de inyectar, pasar
a travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m o menor. Desechar los primeros mL
del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
para los picos individuales de cido coroslico, cido
virgtico y cido oleanlico son 1,0; 1, 1 y 3,2,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
LJSP 38
de referencia provisto con el lote de ER Extracto
Seco de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre el pico de cido
coroslico y el pico precedente, Solucin estndar B
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido coroslico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de cido coroslico en
inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Identificar los tiempos de retencin relativos para los
picos de cido coroslico, cido virgtico y cido olea-
nlico de la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cido
coroslico en la porcin de Hojas de Banaba en Polvo
tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = rea del pico de cido coroslico de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cido coroslico de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de cido coroslico en la
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Hojas de Banaba en Polvo tomado
para preparar la Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,2% de la can-
tidad declarada de cido coroslico con respecto a la
materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 2,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5 g/g
f'v1ercurio: No ms de ,0,2 g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumplen con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g;
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 102 ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Polvo de color verde grisceo
Microscpicas: Fragmentos de la epidermis superior
con clulas poligonales, algunas contienen cristales de
oxalato de calcio, y sin estomas; fragmentos de clulas
de la epidermis inferior con formas irregulares y paredes
ligeramente onduladas, estomas anomocticos; fragmen-
tos de clulas de la epidermis superior con clulas en
empalizada subyacentes; fragmentos de clulas paren-
quimticas, algunas contienen prismas de oxalato de
calcio y otras contienen cristales de oxalato de calcio en
grupos; clulas con aceites; fragmentos de fibras lignifi-
cadas; fragmentos de vasos espiralados; fragmentos de
vgsos punteados asocia<;Jos con fibras.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis cf~ Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumplen con los
r~qu1s1tos.
PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 2,0 g de Hojas de Banaba reducidas a polvo
fino
USP 38
Anlisis: Secar la Muestra a 105 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 10%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561)
Anlisis: 2,0 g de Hojas de Banaba reducidas a polvo
fino
Criterios de aceptacin: No ms de 7,0% , Anlisis
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Anlisis: 4,0 g de Hojas de Banaba reducidas a polvo
fino
Criterios de aceptacin: No ms de 2%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 1 (561): No menos de 10,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 1 (561): No menos de 18,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la i;>lanta contenida en el artculo.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Coroslico USP
ER Extracto Seco de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP
AUSP38
Agregar lo siguiente:
Extracto Seco de Hojas de Banaba
DEFINICIN
El Extracto Seco de Hojas de Banaba se prepara a partir de
las hojas secas de Lagestroemia speciosa (L.) Pers. (Fam.
Lythraceae) mediante extraccin con mezclas hidroalcoh-
licas. Contiene no menos de 90,0% y no ms de 110,0%
de la cantidad declarada de cido coroslico (C30H4a4),
calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. Cumple con los requisitos en Pruebas Especficas, Ca-
ractersticas Bot,nicas.
B. (ROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA , central es et ms intenso del grupo y ocurre a un
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Acido Coros-
lico USP en metano!
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Extracto Seco
de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP en metano!. So-
meter a ultrasonido durante 1O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Extracto Seco de Hoas de Banaba
en metano! a una concentracin equiva ente a 0,2 mg/
mL de cido coroslico de acuerdo a la cantidad decla-
rada. Someter a ultrasonido, si fuera necesario.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Modo: HPTLC
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de part1cula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 6 L, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33%, usando un dis-
positivo adecuado.
Temperatura de la columna: 25
Fase mvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo y
cido actico (55: 45: 0,5)
Supiememos Dietticos /Banaba 6335
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 85 mL de metano! en-
friado con hielo mezclado con 1 O mL de cido actico
glacial, 5 mL de cido sulfrico y 0,5 mL de p-
anisaldehdo
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para HPLTC
adecuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogra-
mas en una cmara no saturada, retirar la placa de la
cmara y secar. Tratar con Reactivo de dervatizacin,
calentar a 100 durante 3 minutos y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: Bajo luz visible, el cromatograma
de la Solucin estndar B presenta la banda ms intensa,
una banda de color violeta o azul, con un valor Rr y
color similares a la banda de cido coroslico en e[ cro-
matograma de la Solucin estndar A; una banda de
color azul cercana al origen (valor Rr de aproximada-
mente O, 1 ), consistente con cido asitico; dos bandas
menores de color azul entre las bandas de coroslico y
asitico; una banda menor de color azul debida a cido
virgtico, por encima de la banda debida a cido coro-
sllco; y directamente por debajo de la banda de asi-
tico, una banda menor de color marrn. La Solucin
estndar B tambin presenta dos bandas menores de
color violeta, separadas, en aproximadamente tres cuar-
tos del cromatograma; la banda con el valor Rr inferior
corresponde a cido oleantico.
Criterios de aceptacin: Bajo luz visible, el cromato
grama de la Sofucin muestra presenta la banda ms
intensa como una banda de color violeta correspon-
diente en color y valor Rr a la banda debida a cido
coroslico en el cromatograma de la Solucin estndar
A, as como las siguientes bandas correspondientes a
bandas similares de la Solucin estndar 8: una banda
menor de color azul cercana al origen (valor Rr de apro-
ximadamente O, l ), dos bandas menores de color pur-
pura por debajo de cido coroslico, dos bandas meno-
res de color azul por encima del cido coroslico, y dos
bandas menores de color violeta, que estn separadas,
en aproximadamente tres cuartos del cromatograma.
C. HPLC
Al)lisis: Proceder segn se indica en Contenido de
Acido Coroslico.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta un grupo de tres picos. El pico
tiempo de retencin correspondiente al de cido coro-
slico en el cromatograma de la Solucin estndar A. La
intensidad del pico que eluye antes del cido coroslico
es de aproximadamente la mitad a un tercio de la in-
tensidad del cido coroslico, y el pico que eluye des-
pus del cido coroslico tiene la menor de las tres in-
tensidades y es consistente con cido virgtico. Un pico
menor debido a cido oleanlico eluye despus en el
cromatograma.
COMPOSICIN , ,
CONTENIDO DE ACIDO COROSOLICO
Solucin A: Diluir cido fosfrico hasta O, 1% en agua.
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Una mezcla de Solucin A y ~olucin B (4:6)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Acido Coros-
lico USP en metano!
Solucin estndar B: 5,0 mg/mL de ER Extracto Seco
de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP en metano!. So-
meter a ultrasonido, si fuera necesario. Antes de inyec-
tar, pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor. Desechar los
primeros mL del filtrado.
Solucin muestra: Extracto Seco de Hoas de Banaba
en metano! a una concentracin equiva ente a O, 1 mg/
mL de cido coroslico de acuerdo a la cantidad decla-

rnrl<i Someter a ultrasonido, si fuera necesario. Antes de
inyectar, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor. Desechar los
pri11ie1u~ rnl dei fiitrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,6 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
para los picos individuales de cido coroslico, cido
virgtico y cido oleanlico son 1,00; 1, 1 y 3,2,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar Bes similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto
Seco de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre el pico de cido
coroslico y el pico precedente, Solucin estndar B
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido coroslico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de cido coroslico en
inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Identificar los tiempos de retencin relativos para los
picos de cido coroslico, cido virgtico y cido olea-
nlico de la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cido
coroslico en la porcin de Extracto Seco de Hojas de
Banaba tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de cido coroslico de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cido coroslico de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de cido coroslico en la
Solucin estndar A (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto Seco de Hojas de
Banaba en la Solucin muestra (mg/mL)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cido
coroslico en la porcin de Extracto tomada:
Resultado = (PI L) x 100
P = contenido de cidocoroslico segn se
determin anteriormente (%)
L = cantidad declarada de cido coroslico (%)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de cido coroslico con respecto a la materia
seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 2,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5 g/g
Mercurio: No ms de 0,2 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g;
USP 38
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1Q3 ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas par~ det~rminar la au-
sencia de Salmonella spp. y Eschench1a col1.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 2,0 g de Extracto Seco de Hojas de Banaba
Anlisis: Secar la Muestra a 105 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 8%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta a partir de las que se deriv el artculo. Cumple
con los requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos
(565).
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER cido Coroslico USP
ER Extracto Seco de Hojas de Lagerstroemia speciosa USP
,1i.USP38
Beta Caroteno-ver Beta Caroteno en
Monografas Generales
Beta Caroteno, Cpsulas-ver Beta
Caroteno, Cpsulas en Monografas Generales
Beta Caroteno, Preparacin
DEFINICIN
La Preparacin de Beta Caroteno es una combinacin de
beta caroteno con una o ms sustancias inertes. Puede
presentarse en forma slida o lquida. Contiene no menos
de 95,0% y no ms de 1 30,0% de la cantidad declarada
de beta caroteno total (C40Hs6), con respecto a la sustan-
cia anhidra. Contiene no menos de 95,0% de la forma
todo trans de beta caroteno en el contenido de beta caro-
teno total.
(Pospuesto indefinidamente)
IDENTIFICACIN
A.
Solucin muestra: Transferir 5,0 mL de Solucin madre
de la muestra A o Solucin madre de la muestra B, a
partir de la prueba de Contenido de Beta Caroteno, a un
matraz volumtrico de 100 mL y diluir con ciclohexano
a volumen. Pasar la solucin a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m.
Anlisis: Reqistrar el espectro UV-Vis de 300 a 600 nm.
Criterios de -aceptacin: La Solu<in muestra presenta
un hombro a aproximadamente 427 nm, un mximo
de absorcin a aproximadamente 455 nm y otro m-
ximo a aproximadamente 483 nm. El cociente de ab-
sorbancias Am/.A.40; est entre 1, 14 y 1, 18 .
B .. El tiempo de retencin del pico princ]pal d~ la Solu-
cion muestra corresponde al de la Soluc1on estandar, se-
gn se obtienen en la prueba de Contenido de Beta
Caroteno.
USP 38
COMPOSICIN
CONTENIDO DE BETA CAROTENO
(NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica.]
Fase mvil: 1ranstem .'.>O mg de but1I h1drox1tolueno a
un matraz volumtrico de 1 L y disolver con 20 ml de
2-propanol. Agregar 0,2 ml de N-etildiisopropilamina,
25 ml de solucin de acetato de amonio al 0,2%,
455 mL de acetonitrilo y aproximadamente 450 mL de
metanol. Dejar que la solucin alcance la temperatura
ambiente y diluir con metanol a volumen.
Diluyente: 50 g/mL de butil hidroxitolueno en alcohol
Solucin de aptitud del sistema: Transferir 20 mg de
ER Beta Caroteno para Aptitud del Sistema USP a un
matraz volumtrico de 50 ml. Agregar 1 ml de agua y
4 mL de tetrahidrofurano, y someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos. Diluir con Diluyente a volumen y so-
meter a ultrasonido durante 5 minutos. Enfriar a tempe-
ratura ambiente, pasar la suspensin a travs de un
filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m y usar el filtrado transparente.
Solucin madre del estndar: 60 g/ml de ER Beta
Caroteno USP en tetrahidrofurano
Solucin estndar A: Transferir 5,0 mL de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 100 ml,
agregar 5,0 ml de tetrahidrofurano y diluir con Dilu-
yente a volumen. La concentracin de la forma todo
trans de beta caroteno en esta solucin se determinar
mediante el procedimiento espectrofotomtrico, usando
Solucin estndar B, segn se indica a continuacin.
Solucin estndar B: Transferir 5,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 100 ml y
diluir con ciclohexano a volumen. Preparar por
triplicado.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Longitud de onda analtica: 457 nm
Paso de celda: 1 cm
Blanco: Ciclohexano
Anlisis
Muestra: Solucin estndar B
Calcular la concentracin de beta caroteno total
(mg/mL), como la forma todo trans de beta caroteno
(C40Hs6) en la Solucin estandar B.
Resultado= A/F
A = absorbancia promedio de las tres
preparaciones de la Solucin estndar B
F = absortividad de la forma todo trans de beta
caroteno pura en ciclohexano, 250,5
Solucin madre de la muestra A (para Preparaciones
slidas de Beta Caroteno): Transferir una cantidad de
Preparacin, equivalente a 1 O mg de beta caroteno, a
un matraz volumtrico de 250 mL. Agregar 250 mg de
butil hidroxitolueno, 0,5 mL de proteasa R alcalina y
15 mL de agua. Inclinar ligeramente el matraz para hu-
medecer todo el contenido. Someter la solucin a ultra-
sonido en un bao ultrasnico a aproximadamente 50
durante 30 minutos y agitar por rotacin suave en
intervalos de 1 O minutos. Agregar 1 00 mL de alcohol a
la suspensin tibia y agitar vigorosamente. Agregar
1 35 ml de cloruro de metileno y agitar nuevamente.
Dejar la mezcla en reposo en la oscuridad hasta que
alcance la temperatura ambiente (aproximadamente 2
horas). Diluir con cloruro de metileno a volumen, agitar
vigorosamente y dejar que los slidos sedimenten en la
oscuridad.
Solucin madre de la muestra B (para suspensiones l-
quidas de Beta Caroteno en Preparaciones oleosas):
Transferir una cantidad de Preparacin, equivalente a
20 mg de beta caroteno, a un matraz volumtrico de
250 mL. Agregar 250 mg de butil hidroxitolueno,
120 mL de cloruro de metileno y 1 00 ml de alcohol.
Agitar el matraz hasta que la muestra se haya disuelto o
suspendido completamente. Dejar la mezcla en reposo
'\11ilPmPnio1 DiPtNico1 /Beta Camteno 6337
en la oscuridad hasta que alcance la temperatura am-
biente (aproximadamente 2 horas). Agregar cloruro de
metileno a volumen y agitar de nuevo vigorosamente.
Solucin muestra: Transferir 5,0 mL de SoiuC1on madre
de la muestro A o Solurin madrP de la miutra B a un
matraz volumtrico de 50 mL y diluir con una mezcla
de cloruro de metileno y Diluyente (1 :1) a volumen. Pa-
sar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 448 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L68 de 5 m
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin es-
tndar A
Los tiempos de retencin relativos aproximados de los
componentes en la Solucin de aptitud del sistema se
proveen en la Tabla 7.
Tabla 1
-
Tiempo de 1 Factor de 1
Retencin Respuesta
Nombre Relativo Relativa
Forma todo trans de alfa
ca rote no o 93 11
Forma todo trans de be-
ta caroteno 1 00 1
9-cis-Beta caroteno 1 07 1
1 3-cis-Beta caroteno 1 17 12
15-cis-Beta caroteno 1 21 14
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin de aptitud del sistema es similar al cro-
matograma de referencia provisto con el ER Beta Ca-
roteno para Aptitud del Sistema USP usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre beta caroteno y
alfa caroteno, y entre beta caroteno y 9-cis-beta caro-
teno, Solucin de aptitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
beta caroteno, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de beta caroteno en inyecciones repetidas, So-
lucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A y Solucin muestra
[NOTA-Los factores de respuesta relativa para 1 3-cis-
beta caroteno y 15-cis-beta caroteno son 1,2 y 1,4,
respectiva mente.]
Registrar los cromatogramas e identificar los picos de
los analitos pertinentes de la Solucin muestra por
comparacin con los de la Solucin de aptitud del sis-
tema. Medir el rea de los picos.
Calcular el porcentaje de beta caroteno total en la por-
cin de Preparacin tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) x 100
ru = [(rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno) + (rea del pico de 9-cis-beta
caroteno) + (rea del pico de 1 3-cis-beta
caroteno x 1,2) + (rea del pico de 15-cis-
beta caroteno x 1,4) + (suma de las reas de
los picos de otros ismeros-cis de beta
caroteno)] en la Solucin muestra
r1 = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solucin estndar A
6338 Beta Carotcno /Suplementos Dietticos
C, = concentracin cJp la fnrma torio tmm rle beta
caruter ru e11 ia Sulucin e>lndar A, segn se
determina usando el procedimiento
b.JeCUv1_1_1~t1 iLv (11 t'::j/111Lj . 1 3 S 7 9 i
C = concentracion nominal de Preparac1on en la
Solucin muestra (mg/mL)
Calcular el porcentaje de la forma todo trans de beta
caroteno en la porcin de Preparacin tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C/Cu) x 100
r11 = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solucin estndar A
Cs = concentracin de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solucin estndar A, segn se
determina mediante el procedimiento
espectromtrico (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de Preparacin en la
Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: La Preparacin contiene
95 0%-130 0% de la cantidad declarada de beta caro-
te~o total, ~a/culado como (C40Hs6) con respecto a la
sustancia anhidra, y no menos de 95,0% de la forma
todo trans de beta caroteno en el contenido de beta
caroteno total.
(Pospuesto indefinidamente)
ALFA CAROTENO Y OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS
Fase mvil, Solucin de aptitud del sistema, Solucin
muestra y Sistema cromatogrfico: Proceder segn
se indica en la prueba de Contenido de Beta Caroteno.
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Volumen de inyeccin: 20 L
Calcular el porcentaje de alfa caroteno y de otros com-
puestos relacionados in<;Jividua!es relat1_~os al beta ca-
roteno total en la porc1on de Preparac1on tomada:
Resultado = (ru! rr) x 1 00
r11 = rea del pico de alfa caroteno u otros
compuestos relacionados individuales
rr = suma de las reas de todos los picos
Criterios de aceptacin
Alfa caroteno: No ms de 1,0%
Cualquier otro compuesto relacionado individual:
No ms de 1,0%
Compuestos relacionados totales (incluyendo alfa ca-
roteno): No ms de 5,0%
IMPUREZAS , cada muestra y promediar. Determinar el porc~ntaie re-
RESIDUO DE INCINERACION (281>: No ms de 2,0%
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
1O ppme (Oficial 01-dic-2015)
PRUEBAS ESPECFICAS
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo I (921>: No ms de
8,0% para Preparaciones slidas; no ms de 1,0% para
Preparaciones lquidas.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases se-
llados hermticamente y resistentes a la luz y al oxgeno.
Almacenar en un lugar fresco. . mismo, el porcentaje relativo de glucano con enlaces
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre y el conten1,do
de vehculos y antioxidantes agregados a la formulac1on,
y el contenido de rarotenoides totales como beta
ca roten o.
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Beta Caroteno USP
(todo-E)- 1, 1 ' -( 3, 7, 12,1 6-Tetrametil-
3 i S i l-octadecanonaeno-1, l 8-d11l)b1s
2 6, 6-tri~etil<:-i~lohexeno].
ER Beta Caroteno para Aptitud del Sistema USP
Beta Glucano
DEFINICIN
El Beta Glucano se obtiene mediante extraccin de la pared
celular de levadura de cerveza Baker (Saccharomyces cere-
visiae) fermentada y procesad? trmicamente. Est C?~
puesto principalmente de po/1meros de glucano ram1f1ca~
dos /)-(1,3)/(1,6). Asimismo, se puede esperar la presencia
de pequeas cantidades de /3-(1,6)-glucano y quitina en el
producto final. Contiene no menos de 70% de beta glu-
cano calculado como glucosa despus de la hidrlisis en-
zimtica, con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIN
RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR (761>
Solucin estndar: Disolver 1 O mg de ER Beta Glucano
USP en O 6 mL de dimetil sulfxido-d6 y calentar a 100
durante 1, hora. Luego, agregar O, 1 mL de D10~ mezclar
la solucin y transferir a un tubo para resonancia mag-
ntica nuclear (RMN).
Solucin muestra: Disolver 1 O mg de Beta Glucano en
O 6 mL de dimetil sulfxido-d6 y calentar a 100 du-
r~nte 1 hora. Luego, agregar O, 1 mL de D10, mezclar la
solucin y transferir a un tubo para RMN.
Anlisis: Registrar los espectros 1 H NMR a_~O y compa-
rar las resonancias individuales de la Soluoon muestra
con las de la Solucin estndar. Las seales principales
asociadas con Beta Glucano se presentan en la Tabla 7.
Tabla 1
Seales de RMN Principales
de 1 H ER Beta Glucano USP
H-1 11 3)-alucano 4 52 d 1 = 7 5 Hz lH
H-2 4 v 5 (1 3-) 3 27-3 33 m 3H
t-------------
_.tt:3 y 6b (1,3-) 3 45-3 48 m 2H
H-6a 11 3-) 3 71 d 1 = 11 Hz lH
H- 1 11 6)-alucano 4 27 d 1 = 7 7 Hz lH
Integrar el rea bajo los picos en cin.co ocasiones pa_ra
lativo de glucano con enlaces (1,6) en la porc1on de
Beta Glucano tomada:
Resultado = {A/(A + 8)) x 1 00
A = valores de integracin para la seal a
4,27 ppm, correspondientes a H-1 del
glucano (1,6)
B = valores de integracin para la seal a
4,52 ppm, correspondientes a H-1 del
glucano (1, 3)
Criterios de aceptacin: El espectro de 1 H de _la So/u- ,
cin muestra presenta un patron de desplazamiento qu1-
mico con ubicaciones de seal e intensidades relativas
que corresponden a las de la Solucin estndar. Asi-
(1,6) equivale a 10%-18% de los enlaces totales.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE BETA GLUCANO
Solucin amortiguadora A: Disolver 11,6 mL de cido
actico glacial en aproximadamente 900 mL de agua.
USP 38
Aj11\t;ir l;i 'nl11rin rnn \nlllin rlP hidrxido dP 'orlio
di 20% d u11 pH de 5 y dilui1 Lll dYUd lld~ld 1000 rnl.
Solucin amortiguadora B: Disolver 69,6 rnL de cido
aLliui ~laLial et 1 fJ' uxi111aJa111e11te 800 rnL de agua.
Austar con solucin de hidrxido de sodio al 20% a un
pH de 3,8 y diluir con agua hasta 1000 rnL.
Solucin amortiguadora C: Disolver 12, 12 g de lris(hi-
droxirnetil)aminornetano (TRIS), 11,69 g de cloruro de
sodio y 4, 16 g de la sal tetrasdica dihidrato del cido
etilendiaminotetraactico (EDTA) en aproximadamente
900 rnL de agua. Ajustar con cido clorhdrico concen-
trado o con solucin de hidrxido de sodio al 20% a
un pH de 7,5 y diluir con agua hasta 1 000 rnL. [NOTA-
La Solucin amortiguadora C se puede almacenar du-
rante 1 ao a 2c-8.]
Solucin amortiguadora D 1 : Transferir 45,287 g de
fosfato dibsico de potasio, 30, 382 g de cido p-hidro-
xibenzoico y 4 g de azida sdica a un matraz volum-
trico de 1000 rnL y agregar cuidadosamente 800 rnL de
agua. Mezclar con una barra mezcladora y calentar mo-
deradamente hasta disolver por completo. Dejar que la
solucin se enfre, ajustar con solucion de hidrxido de
potasio al 16,7% a un pH de 7,4 y diluir con agua a
volumen. [NOTA-Almacenar la Solucin amortiguadora
D en un frasco color mbar con una fecha de caduci-
dad de 3 aos a 4.]
Solucin de liticasa: Preparar el volumen requerido de
liticasa a partir de Arthrobacter luteus 2 a una concentra-
cin de 1 O U/L disolviendo la cantidad declarada por
el fabricante (U/mg) en una solucin que contenga So-
lucin amortiguadora Cal 10% (v/v). [NOTA-La solucin
no utilizada se puede almacenar a no ms de -15 con
una fecha de caducidad de 1 ao. Cada vez que se
utilice un lote diferente de liticasa, se debe calificar la
concentracin de solucin de liticasa requerida.]
Solucin de (1,6)-glucanasa: Solucin de 1 U/300 L
de (1,6)-glucanasa liofilizada 3 en Solucin amortigua-
dora A. [NOTA-Es posible que los slidos no se disuel-
van por completo; por lo tanto, esta solucin se debe
manejar corno una suspensin homognea. Esta solu-
cin es estable durante al menos 60 das a no ms de
-15 .]
Mezcla de enzimas de pulido: Mezclar 2000 U de exo-
beta-glucanasa4 y 400 U de beta-glucosidasa 5 en
100,0 rnL de Solucin amortiguadora A. Se puede usar
corno alternativa una prernezcla de las enzimas 6
[NOTA--Almacenar sobre hielo durante el procedimiento
y para su uso en una valoracin en el mismo da. La
mezcla de enzimas de pulido no utilizada se puede volver
a congelar una vez a no ms de -15 con una fecha de
caducidad de 2 aos.]
Reactivo de glucosa oxidasa/peroxidasa: Disolver el
contenido del Reactivo de Determinacin de Glucosa 7
en 1 L de agua que contenga 50 mL de Solucin amorti-
guadora D. [NOTA-Almacenar el reactivo en un frasco
de color mbar y etiquetar con una fecha de caducidad
de 3 meses a una temperatura entre 2 y 8 o 1 ao a
no ms de -1 r. Minimizar el tiempo en que el reactivo
est a temperatura ambiente.]
Solucin muestra: Transferir 15-20 mg de Beta Glu-
cano a un vial de vidrio de 16 x 100 mm. Colocar el
vial en un bano de hielo. Agregar una alcuota de
0,4 rnL de hidrxido de potasio fro (1 en 6) mientras
se mezcla en un mezclador de vrtice hasta dispersar el
polvo. Devolver el vial al bao de hielo. Continuar con
' Esta solucin amortiguadora tambien est disponible como Frasco #3 (Bottle
#3) del kit K-YBGL (MegMyme), o Frasco #1 (Bottle #1) del kit de GOPOD
(Meg01vme)
2 Liticasa de Arlhrobacter luleus, Sigma L4025 o equivalente.
i Disponible comercialmente como Pustulanasa, Cell 36, Proka2yme o equiva-
lente.
'E-EXBGL 200 U/ml, 200 U/frasco, Mcgayme o equivalente.
'200 U/frasco, Megaqrne u equivalente.
6 E-EXBGOS, MegaLynw o equivalente.
7 Frasco #4 (Bottle #4) riel kit K-YBGL o Frasco #2 (Bottle !12) del kit GOPOD,
Megazyme o equivalente.
Sup!crncntos Diettico~ /Beta G!ucano 6339
los ricios de mezcla en un mezclador de vrtice y colo-
LdLi11 de lo:, vidle> en el ba1'10 de hielo durante 20
minutos. La mezcla debe convertirse en una dispersion
1_ ~ ~- - - ::._ - - . '--~-_,l,', ... :,.J,,
1IUI11uye1 lt:'.Cl y u Cl.)IUUUa.
Solucin estndar: Proceder seqn se indica en la Solu-
cin muestra excepto que se debe usar ER Beta Glucano
USP en lugar de Beta Glucano. [NOTA-Preparar la Solu-
cin muestra y la Solucin estndar por triplicado. Re-
sulta crtico para el xito de la valoracin que la mues-
tra est bien dispersada.]
Digestin de liticasa: Al retirar todos los viales que
contienen la Solucin muestra o la Solucin estndar del
bao de hielo, agregar 1,6 mL de Solucin amortigua-
dora By 600 L de Solucin de liticasa a cada vial. Incu-
bar la mezcla a 50 durante 12-18 horas y enfriar a
temperatura ambiente.
Digestin de (1,6)-glucanasa: Despus de enfriar to-
dos los viales, retirar una alcuota de 1 30 L de cada
vial y digerir ms agregando 25 L de solucin de hi-
drxido de potasio al 16,7% y 300 L de Solucin de
(7, 6)-glucanasa. Incubar los viales a 80 durante 15 mi-
nutos y enfriar a temperatura ambiente.
Digestin de beta glucanasa/glucosidasa: Despus de
enfriar todos los viales, agregar 390 L de la Mezcla de
enzimas de pulido a cada vial e incubar los viales a 40
durante 1 hora. Enfriar los viales a temperatura am-
biente, centrifugar y transferir alcuotas de 50 L (por
duplicado) a nuevos viales.
Solucin blanco de enzimas: Preparar blancos de en-
zima por triplicado combinando todos los reactivos usa-
dos durante las etapas de digestin, excepto por la So-
lucin muestra o la Solucin estndar.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analtica: 51 O nm
Anlisis: Diluir las alcuotas de 50 L obtenidas despus
de la Digestin de beta glucanasa/glucosidasa con 50 L
de agua y luego agregar 3 mL de Reactivo de glucosa
oxidasa/peroxidasa. Incubar los viales durante 20 minu-
tos a 40. Determinar las absorbancias de cada vial de
la Solucin muestra o de la Solucin estndar contra la
Solucin blanco de enzimas. Preparar una curva estndar
usando la absorbancia de una serie de estndares de
glucosa tratados de manera similar (O; O, 1; 0,25; 0,5 y
1,0 mg/mL). A partir de la pendiente de la curva estn-
dar y de la absorbancia de la Solucin muestra y de las
Soluciones estndar digeridas, determinar la concentra-
cin, C, en mg/mL, de glucosa liberada en la cubeta:
Resultado = (A1 - Ae)/pendiente
A, = absorbancia promedio de la muestra o de ER
Beta Glucano USP
As = absorbancia promedio de la Solucin blanco de
enzimas
Calcular el porcentaje de beta glucano como glucosa en
la porcin de Beta Glucano tomada:
Resultado= 100 x C/{[(WT1/FI) x (F2/F3)]/2)
WT1 = peso original de la muestra o de ER Beta
Glucano USP (mg)
FI = volumen total en el vial durante la Digestin
de liticasa, 2,6 mL
F2 = volumen de la muestra o de ER Beta Glucano
USP transferido a un nuevo vial durante la
Digestin de (7, 6)-glucanasa, O, 1 30 m L
F3 = volumen total durante la Digestin de beta
glucanasa/glucosidasa, 0,845 mL
CritPrio~ dP aceptacin: No menos de 70% de beta
glucano, calculado como glucosa despus de la hidrli-
sis enzimtica, con respecto a la sustancia seca
6340 RPtJ Clucano / Sup!ernentos Dietticos lJSP 38

CONTENIDO DE PROTENA Criterim de aceptacin: No ms de l ,01i1

Muestra: 1,0 g de Beta Glucano . . MANOSA
Anlisis: Proceder segun se ndica en J)p/prmmauon de Solucin A: Aguci purificada al 1OO'Yo
nitrgcns :~ 61) y :-~:u!! p!:cdi (_- cv1tcitid0 de 11trogenu SuluL11 B: ii1drox1uo ce sodio 9Sb mivi
por 6 . 25. Fase mvil: Ver !J Tabla 2.
Criterios de aceptacin: No mas de 10,0%
CONTENIDO DE GRASA
Tabla 2
Muestra: 2 g de Beta Glucano, previamente secado.,
Anlisis: Transferir la Muestra a un dedal de extracc1on 1empo Sol UCI'n A Solucin B
y mezclar con una can!idad equiva!ente de arena. se.ca y lmin) __ .......__.____ ___ _{%) l/o)
limpia. Colocar un tapan de algodon o lana de vidrio o - --
2Q,_() __ 64 o
exento de grasa en la parte superi.~r del dedal. Col~xar 1 so 36 o 64 o
el dedal en un aparato de extracc1on continuo equi- 35,0 (inyeccin de
pado con un matraz de recoleccin tarado. Verter muestra) 59 4 40 6
------- t - - - - -
75 ml de ter de petrleo a travs de la mezcla en el 80 o 59 4 40 6
matraz de recoleccin. Extraer a una velocidad de con-
densacin de 5-6 gotas/segundo durante 4 horas y (NOTA-El tiempo de corrida generalmente requerido es
lueqo a una velocidad de 2-3 gotas/segundo durante 80 minutos.] .
las si9uientes 1 6 horas. Desconectar el. matraz de reco- Solucin de estndar interno: 0,8 mg/ml de ER lnos1-
leccion, evaporar cuidadosamente el disolvente y secar tol USP en agua
el matraz de recoleccin y su contenido en un horno Solucin muestra: Pesar 2,0-4,0 mg de Beta Glucano
de secado a 1 00 durante 30 minutos hasta peso cons- por duplicado en viales con barras mezcladoras. Agre-
tante. Calcular el porcentaje del extracto (grasa cruda) gar 500 L de cido trifluoroactico (TFA) puro y deiar
en la porcin de Beta Glucano tomada. que la mezcla forme una dispersin uniforme mez-
Criterios de aceptacin: No ms de 20,0% clando durante 1 hora a temperatura ambiente. Incubar
CONTAMINANTES
en un bao de agua a 80 durante 2 horas mezclando
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
y luego enfriar a temperatura ambiente. Agreg~r 1 00 L
Criterios de aceptacin de la Solucin de estndar interno a cada vial e incubar
Arsnico: No ms de 0,5 g/g mezclando en un bao de agua hirviendo duran!e 15
Cadmio: No ms de 0,5 g/g minutos. Enfriar nuevamente a temperatura ambiente y
Plomo: No ms de 0,5 g/g luego agregar 1,07 ml de agua a .ca9a vial, e incubar
mezclando en un bao de agua h1rv1endo durante 1
Mercurio: No ms de O, 1 ~tg/g
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- hora. Enfriar las soluciones a temperatura ambiente y
tal de microorganismos aerobios no excede de 2 x 10 4 secar durante toda la noche en un aparato SpeedVac o
ufc/g; el recuento total combinado de hongos filamento- equivalente, a baja temperatura con el .~istema de crio-
sos y levaduras no excede de 2,5 x 10 1 ufc/g; y el re.-. bombeo apagado. Disolver la preparac1on ~eca en .
cuento de bacterias Gram negativas tolerantes a la bilis 2,5 ml de agua desionizada y pasa~ a traves de un filtro
no excede de 1 O ufc/g. de PTFE para jeringa, con ur: tamano de poro de 0,2
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
m. Diluir con un volumen igual de agua antes de
ple con los requisitos de las pruebas .Pa.ra de.terminar la inyectar. ..
ausencia de Salmone!la spp. y Eschenchw col1. Soluciones estndar: Preparar una soluc1on de ER Dex-
trosa USP de 4 mg/ml y una solucin de ER Manosa
PRUEBAS ESPECFICAS USP de 80 pg/mt.: Transferir por separado alcuotas de
GucGENO estas soluciones a viales individuales (ver la Tabla 3).
Solucin amortiguadora B: Preparar segn se indica Preparar cada estndar por ?uplicado y liofilizarl?,s. Tra-
en Contenido de Beta Glucano. tar los viales liofilizados segun se 1nd1ca en Soluoon
Solucin de amiloglucosidasa/invertasa8 : Una mezcla muestra, comenzando donde dice "Agregar 500 L de
de 1630 U/ml de amiloglucosidasa y 500 U/ml de in- cido trifluoroactico puro".
vertasa en solucin de glicerol (50% v/v)
Muestra: 1 00 mg . . . Tabla 3
Anlisis: Transferir la Muestra por triplicado a viales indi-
Nmero
viduales de vidrio con tapa de rosca de 16 x 150 mm.
de L/Vial Conteni- L/Vial Conteni-
Colocar los viales en un bao de hielo y agregar a cada
ldenti- de do de do
vial una al1cuota de 2 ml de hidrxido de potasio fro
ficacin 4 mg/mL de 80 pg/mL de
(1 en 6) mientras se mezcla en un mezclador _de vrtice
del de Glu- Glucosa de Mano- Manosa
hasta dispersar el polvo. Devolver el vial al bano de 1

Estndar cosa 1 110) sa "10)

hielo. Continuar con los ciclos de mezcla en un mezcla-
dor de vrtice y colocacin de los viales en el bao de
hielo durante 20 minutos. La mezcla debe convertirse
_ _Q _ _
1
-
100
o-- -+-------~
i 400
o
25
o
2
en una dispersin homognea y traslcida. Agregar 2 200 800 so 4

Ft=r
-

~: -+-!.~.~~---~-
8 ml de Solucion amortiguadora B. Mezclar minuc1o~a- [ 1200 100 8
111ente en un mezclador.de vrtice y agregar inmediata- 200 16
mente 200 L de Solucion de amiloglucos1dasa/mvertasa ~-- -1000 400 'l2
y mezclar de nuevo en un mezclador .de vrtice .. Incu-
bar la mezcla a 40' durante 30-35 minutos. Enfriar a Sistema cromato9rfico
temperatura ambiente. Mezclar nuevamente en un, (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
mezclador de vrtice, transferir a un tubo de centrifuga Modo: HPLC
adecuado y centrifugar hasta obtener un sobrenada1ite Detector: Electroqumico _ , .
transparente. Transferir alkuotas duplicadas d_e 50 ~tl de Modo del detector: Deteccion amperometrica por
sobrenadante a nuevos viales y proceder segun se in- pulso~
dica en el Anlisis de Contenido de Beta Glucano. Intervalo del detector: 3000 C (se puede modificar
s Como alternc\i~a. se puede lJlar directamente el Frasco #2 (Bottle #2) del en caso necesario)
kit K-YBGI (Meca1vme n P'l<J1valente)
USP 38 Sult>mt"ntos ni:;tf"ticos /Aceite de ScmillJ de Borraja 6341

Electrodo de trabajo: Oro ESTNDARES DE REFERENCIA USP 111)

Electrodo de referencia: pH, plata-cloruro de plata tR Beta Glucano USP
Forma de onda electroqu1mica: Ver la Tabla 4. ER Dextrosa USP
ER inositoi USP
Tabla 4 rR Manos;i USP
--- ------- ,---------------~-

Tiempo Potencial
(s) ---
(V) lntearacin
o 00 010
o 20 010 Inicio Biotina-ver Botna en Monografas
o 40 010 Fin
Generales
o 41 --2 00
o 42 -2 00
o 43 o 60
~-___QI_'\__ o 10 ----- Aceite de Semilla de Borraja
o 50 010
[84012-16-8].
Columnas DEFINICIN
Guarda columna: 4 mm x 5 cm; relleno L47 El Aceite de Semilla de Borraja se obtiene a partir de semi-
Columna analtica: 4 mm x 25 cm; relleno L47 llas de Borago officinalis L. El aceite se extrae mediante
Temperatura de la columna: 30 prensado en fro o con fluidos s~p~rcrticos y luego se
Velocidad de flujo: 0,4 ml/min refina. Se puede agregar un ant1ox1dante adecuado.
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema IDENTIFICACIN
Muestra: Identificacin de estndar #5 A. Cumple con los requisitos de Prueb,as Especficas en
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para inositol, Grasas y Aceites Fijos, Composicin de Acidos Grasos (401 ).
manosa y glucosa son 0,68; 0,95 y 1,0
respectivamente.] IMPUREZAS
Requisito de aptitud:
Resolucin: No menos de 1,5 entre manosa y
9,lucosa Eliminar lo siguiente:
Ana lisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra METALES PESADOS, Mtodo JI (231 ): No ms de 1 o g/
Calcular los cocientes entre las reas de los picos de ge (Oficial Ol-dic-2015)
glucosa y manosa y el estndar interno de las Solucio- PRUEBAS ESPECFICAS ,
nes estndar. Generar dos lneas de respuesta estndar GRASAS y ACEITES F11os, Indice de Acidez (401): No ms
graficando el cociente entre las reas de los picos en de 1,0 ,
funcin de la cantidad (g) de glucosa y manosa en GRASAS y ACEITES F11os, Indice de Perxido (401): No ms
las Soluciones estndar. Calcular el cociente entre las de 5,0 ,
reas de los picos de glucosa y manosa y el estndar GRASAS y ACEITES F11os, Indice de Saponificacin (401):
interno de la Solucin muestra. A partir de los cocientes 184-194
de respuesta calculados entre los picos de glucosa y GRASAS y ACEITES F11os, Materia lnsaponificable (401): No
manosa y sus respectivas lneas de respuesta estndar, ms de 2,0% ,
determinar el contenido de glucosa, Ce, y manosa, CM, GRASAS y ACEITES F11os, Composicin de Acidos Grasos
ambos en g, en la Solucin muestra. (401 ): El Aceite de Semilla de Borraja presenta el perfil
Calcular el porcentaje de manosa en la porcin de Beta de composicin de cidos grasos de la Tabla 7.
Glucano tomada:
Resultado = CM/(CM + Ce) x 100 Tabla 1
Anotacin Porcentaje
CM =contenido de manosa en la Solucin muestra a cido Graso Abreviada (%)
partir de la lnea de regresin de manosa
cido oalmtico } 6:0 8 0-11 o
(g) .,
Ce = contenido de glucosa en la Solueton muestra a cido esterico 18:0 2 0-5 o
partir de la lnea de regresin de glucosa cido oleico 18:1 ___ljL0-19 _o__
(g) , cido Y-linolnico ,__ - _Ul_:_l__ --- t----- 18 0--24 o
Criterios de aceptacin: No mas de 1,0% de manosa, cido linoleico 18:2 ---
___ _14,0-42,Q _ _
como una funcin de hexosa rernperada total (glucosa cido araaudico 20:0 No ms de O 5
y manosa) ,
cido gadoleico 20:1 2 0-6 o
RESIDUO DE INCINERACION (281): No ms de 2,5% r---
~---------

PRDIDA POR SECADO (731) cido behnico 22:0 No ms de O 8

Muestra: 1 g cido ercico ---- - - - - - - - 2_2_: 1 _______ ,,_ No ms de 5 O
Anlisis: Secar la Muestra a 1 05 durante 3 horas. cido nervnico 24:1 No ms de 4 5
Criterios de aceptacin: No ms de 8,0%
NDICE DE REFRACCIN (831 ): 1,47 4-1,478 a 20"
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- REQUISITOS ADICIONALES .
permeables y resistentes a la luz. ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, preferiblemente bajo una atmsfera de gas
inPrtP Protpger de la luz.
6342 Bo::iwelia / Sulcmcntos OictCticos
Boswelia Serrata
DEFINICIN
La. Boy.~elia Serr dtd es Id resir1d oleogommd obtenida por
1nc1s1on o producida mediante exudado espontneo del
tallo y las ramas de Boswe!lia serrato Roxb. (Fam. Bursera-
ceae). Contiene no menos de 1,0% de los derivados ceto
de cido J-boswlico, calculado con respecto a la materia
seca como la suma de cido 11-ceto-J-boswlico y cido
3-acetil-11-ceto-3-boswlico.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar: Tratar una cantidad de ER Extracto
de Boswelia Serrata USP calentando suavemente en me-
tano! para obtener una solucin con ur1d concentracin
conocida de 30 mg/ml, enfriar, centrifugar, y usar el
sobrenadante.
Solu~in mui::stra: Usar la Solucin muestra, preparada
segun se )nd1ca en la prueba de Con len ido de Derivados
Ceto de Acidos f3-Boswlicos siguiente y concentrar hasta
10% del volumen.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm
Fase mvil: Mezcla de hexdno y dcetato de etilo (6:4)
R~activo p~~a inmersin: Preparar una solucin de
ac1d(_) sulfunco al 10% en metano!. [NOTA-Preparar in-
mediatamente antes de su uso.]
Volumen de aplicacin: 1 O L
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
hasta .que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente 90% de la placa. Retirar, secar, y
observar bajo luz UV a 254 nm. Sumergir en el Reac-
tivo para inmersin, calentar durante 5-1 O minutos a
100, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: Bajo luz UV a 254 nm, la Solu-
C/On muestra presenta dos zonas principales debidas a
cido 11-ceto-J-boswlico y cido 3-acetil-11-ceto-J-
boswlico a valores Rr de aproximadamente 0,30 y
0,36, respectivamente, correspondientes a zonas de la
Solucin estndar. Bajo luz visible, la Solucin muestra
presenta dos zonas adicionales debidas a cido J-bos-
wlico y cido 3-acetil-/3-boswlico a valores Rr de apro-
xi.madamente 0,49 y 0,58, respectivamente, correspon-
diente a zonas de la Solucin estndar. Se observan
otras zonas de menor intensidad en la Solucin muestra
y la Solucion estndar.
B. - El cromatograma a 210 nm de la Solucin JT1Uestra, en
la pru_e.ba de Contenido de Derivados Celo de Acidos J-
Bosw~ltcos, presenta picos para cido l l -ceto-f3-bosw-
l1co, ac1do 3-acetil-11-ceto-J-boswlico, cido J-bosw-
lico y cido 3-acetil-/3-boswlico a tiempos de retencin
que corresponden a los del cromatogr arnd d 21 O nm de
la Solucin estndar By al Cromatograma de Referencia a
21 O nm provisto con el ER Extracto de Boswelia Serrata
USP.
COMPOSICIN
Cambio en la redaccin:
CONTENIDO DE DERIVADOS CHO DE CIDOS J-BOSWLICOS
S9lucin estndar A: Disolver una cantidad de ER
Acido 3-Acetil-11-ceto-J-bosvvlico USP en metar1ol pdrd
obtener una solucin con una concentracin conocida
de O, 1 mg/ml.
Solucin estndar B: Tratar una cantidad de ER Ex-
tracto de Boswelia Serrata USP calentando suavemente
USP 38
en metano! para obtener una solucin con una concen-
tracin conocida de 1O mg/ml. Antes de la inyeccin,
pasar a travs de un filtro con un tamao de poro de
0,45 ~tm.
Solucin muestra: Transferir apruximdddiTH:'nle 2,0 g
de Boswelia Serrata triturada a un matraz Erlenmeyer, y
someter a reflu10 en 50 ml de metano! en un bao de
agua durante 15 minutos, mezclando con un agitador
magntico. Repetir hasta que el ltimo extracto se
torne incoloro. Evaporar los extractos combinados hasta
aproximadamente 50 ml, transferir a un matraz volu-
mtrico de 100 ml, y diluir con metanol a volumen.
Antes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro con un
tamao de poro de 0,45 m y desechar los primeros
ml del filtrado.
Fase mvil: Preparar una mezcla filtrada y desgasificada
de acetonitrilo, agua y cido actico glacial
(900:100:0, 1 ). Realizar los ajustes necesarios.
Sistema cromato9rfico
(Ver CromatograflO (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: Ver la tabla de gradientes si-
guiente.
-----
Tiempo Velocidad de flujo
(min) mL/min)
o 1
5 15
10 2
--
30 2
32 1
45 1
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para cido
11-ceto-3-boswlico y cido 3-acetil-11-ceto-3-bosw-
lico son aproximadamente 1,0 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solucin
estndar B es similar al Cromatograma de Referencia a
254 nm provisto con el ER Extracto de Boswelia Se-
rrata USP.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
la respuesta del pico de cido 3-acetil- 11 -ceto-J-bos-
wlico en inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Factor de asimetra: No ms de 1,5, pico de cido
3-acetil-11-ceto-3-boswlico, ERR co1-dic-20B) Solucin es-
tndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar By el
Cromatograma de Referencia a 254 nm provisto con
el lote de ER Extracto de Boswelia Serrata USP, identi-
ficar los tiempos de retencin de los picos de cido
11-ceto-f-l-boswlico y cido 3-acetil-11-ceto-J-bosw-
lico en la SoluC1n muestra.
Calcular por separado los porcentajes de los dos anali-
tos en la porcion de Boswelia Serrata tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/W) x 1 OF
~ rea del pico de cada analito de la Solucin
muestra
= rea del pico de cido 3-acetil-11-ceto-J-
boswlico de la Solucin estndar A
= concentrac1on de ER cido 3-Acetil-11-ceto-/3-
boswelico USP en la Solucin estndar A
(mg/ml)
w = peso de Boswelia Serrata tomada para
preparar la Solucin muestra (g)

F =factor de conversin para cada analito
(O, 9 3 para cido l 1-ceto-/!-boswlico y
1,0 para cido 3-acetil-11-ceto-{3-boswlico)
Lntenos de aceptacin: Sumdr io~ orcenlae~ caicuia-
clos para cido 11-<eto-/l-hos\vflirn y 5cido 3-acctil
11-ceto-/3-boswlico: No menos de 1,0% con respecto
a la materia seca.
IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas , mediatamente antes de su uso.]
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 0,5%
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de 20 ppm
Impurezas Orgnicas, , Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia
Orgnica Extraa (56)): No ms de 2,0%, , grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
PROCEDIMIENTO 2: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Se presenta como lgrimas ovoides pe-
queas, que en ocasiones forman masas aglomeradas
de hasta 5 cm de largo y 2 cm de espesor; de color
blancuzco a amarillo dorado; la fractura es quebradiza y
la superficie fracturada es cerosa y translcida; presenta
un olor aromtico caracterstico; sabor aromtico y lige-
,ramente mucilaginoso.
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Boswelia Se-
rrata reducida a polvo fino a 105 durante 2 horas:
pierde no ms de 12,0%,de su peso.
(561):
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales
No ms de 2,0%, determinado en 2,0 g de Boswelia Se-
rra~a reducida a polvo fin,o.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561): No menos de 56%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar
en un lugar fresco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn de la especie de Boswellia de la que se obtuvo la
resina oleogomosa.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido 3-Acetil-11-ceto-/3-boswlico USP
ER Extracto de Boswelia Serrata USP
Extracto de Boswelia Serrata
DEFINICIN
El Extracto de Boswelia Serrata se prepara a partir de Boswe-
lia Serrata reducida a polvo, usando disolventes adecua-
dos tales como isopropanol, alcohol, metanol, hexanos o
mezclas de estos disolventes. La relacin entre el material
vegetal inicial y el Extracto es aproximadamente 6:1. Con-
tiene no menos de 90,0% y no ms de 110,0% de la
cantidad declarada de Extracto, calculado con respecto al
extracto seco como la suma de cido 11-ceto-/3-boswlico
y cido 3-acetil-11-ceto-3-boswlico; puede contener sus-
tancias agregadas adecuadas.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA \201)
Solucin estndar: Tratar una cantidad de ER Extracto
de Bosvvelia Serrata USP calentando suavemente en me-
tano! para obtener una solucin con una concentracin
conocida de 30 mg/mL, enfriar, centrifugar, y usar el
sobrenadante
Suplementos Diettico) / Bosvvelia 6 34 3
Solucin muestra: Tratar una cantidad de Extracto ca-
lenta1H.:lo sudvernente en metano! para obtener unJ so-
lucin con una concentrac1on conocida de 30 mg/mL,
t:-nf1 id1, Ler-,t-ifugat, y usu ci :-,obrcn{1dJntc.
Adsorbente: Capa de qel de slice para rromatografa
de 0,25 mm
Fase mvil: Mezcla de hexano y acetato de etilo (6:4)
Reactivo para inmersin: Preparar una solucin de
cido sulfrico al 10% en metano!. [NOTA-Preparar in-
Volumen de aplicacin: 1 O L
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente 90% de la placa. Retirar, secar, y
observar bajo luz UV a 254 nm. Sumergir en el Reac-
tivo para inmersin, calentar durante 5-1 O minutos a
100, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: Bajo luz UV a 254 nm, la Solu-
cin muestra presenta dos zonas principales debidas a
cido 11-ceto-3-boswlico y cido 3-acetil-11-ceto-/3-
boswlico a valores Rr de aproximadamente 0,30 y
0,36, respectivamente, correspondientes a zonas de la
Solucin estndar. Bajo luz visible, la Solucin muestra
presenta dos zonas adicionales debidas a cido /3-bos-
wlico y cido 3-acetil-3-boswlico a valores RF de apro-
ximadamente 0,49 y 0,58, respectivamente, correspon-
dientes a zonas de la Solucin estndar. Se observan
otras zonas de menor intensidad en la Solucin muestra
y la Solucin estndar.
B. El cromatograma a 21 O nm de la Solucin muestra, en
la prueba de Contenido de Derivados Ceto de Acidos /3-
Boswlicos, presenta picos para cido 11-ceto-3-bosw-
lico, cido 3-acetil-11-ceto-3-boswlico, cido /3-bosw-
lico y cido 3-acetil-{1-boswlico a tiempos de retencin
que corresponden a los del cromatograma a 21 O nm de
la Solucin estndar By al Cromatograma de Referencia a
21 O nm provisto con el ER Extracto de Boswelia Serrata
USP.
COMPOSICIN
Cambio en la redaccin:
CONTENIDO DE DERIVADOS CETO DE CIDOS /3-Boswucos
Solucin estndar A: Disolver una cantidad de ER
cido 3-Acetil-11-ceto-3-boswlico USP en metano! para
obtener una solucin con una concentracin conocida
de O, 1 mg/ml.
Solucin estndar B: Tratar una cantidad de ER Ex-
tracto de Boswelia Serrata USP calentando suavemente
en metano! para obtener una solucin con una concen-
tracin conocida de 1 O mg/ml. Antes de la inyeccin,
pasar a travs de un filtro con un tamao de poro de
0,45 m.
Solucin muestra: Tratar una cantidad de Extracto ca-
lentando suavemente en metano! para obtener una so-
lucin con una concentracin conocida de 1 O mg/ml.
Antes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro con un
tamao de poro de 0,45 pm y desechar los primeros
ml del filtrado.
Fase mvil: Preparar una mezcla filtrada y desgasificada
de acetonitrilo, agua y cido actico glacial
(900:100:0, 1 ). Realizar los ajustes necesarios.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: Ver la tabla de gradientes si-
guiente.
6344 BmwPliil ./ )up!emt>ntos Dietticos
~-----.:;;;.;~- ---- l - Velocidad de flujo l PRUEBAS ESPECFICAS
(m~n-)-----+~----___-___J_'!'_L_/~1 m__n_}===-~---j1
__
~~-i~f '{~~~-J___,
__,j_ _ _ _
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para cido
11-ceto-/J-boswlico y cido 3-acetil-11-ceto-/:l-bosw-
lico son aproximadamente 1,0 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solucin
estndar B es similar al Cromatograma de Referencia a
254 nm provisto con el ER l::xtracto de Boswelia Se-
rrata USP.
Factor de asimetra: No ms de 1,5, pico del cido
3-acetil-11-ceto-/3-boswlico,e ERR (ol-dic-2013) Solucin
estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
la respuesta del pico de cido 3-acetil- 11 -ceto-f3-bos-
wlico en inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Soluon estandar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar B y el
Cromatograma de Referencia a 254 nm provisto con
el lote de ER Extracto de Boswelia Serrata USP, identi-
ficar los tiempos de retencin de los picos de cido
11-ceto-/)-boswlico y cido 3-acetil-11-ceto-/3-bosw-
lico en el cromatograma de la Solucin muestra.
Calcular por separado los porcentajes de cido
11-ceto-f:l-boswlico y cido 3-acetil-11-ceto-f:l-bosw-
lico en la porcin de Extracto tomada:
Resultado = (ru/rs) x (CV /W) x 1 OOF
ru = rea del pico de cada analito de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de cido 3-acetil-11-ceto-/3-
boswlico de la Solucin estndar A
Cs = concentracin de ER cido 3-Acetil-11-ceto-/3-
boswlico USP en la Solucin estndar A
(mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Extracto tomado para preparar la
Solucin mues:a (mg)
F = factor de conversin de cada analito
(0,93 para cido 11-ceto-/3-boswlico y
1,0 para cido 3-acetil-11-ceto-/)-boswlico)
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de los
dos analitos. Contiene no menos de 90,0% y no ms
de 110,0% de la cantidad declarada de Extracto, calcu-
lado con respecto al extracto seco, como la suma de
cido l l -ceto-f3-boswlico y cido 3-acetil-11-ceto-/)-
boswlico.
IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo JI (231): No ms de
20 ppme (Oficial Ol-rlic-2015)
Impurezas Orgnic~s , .
PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Anlisis de Residuu; de Pluyuiudm (561 ):
Cumple con los requisitos
lJSP 38
PRDIDA POR SECADO (731 : Seun l , g de l::xtracto a
1 05 durante 2 horas: pierde no ms de 5,0% de su
.Jt:>U.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 \: El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 qi ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar
en un lugar fresco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de la que se prepar el artculo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER cido 3-Acetil-11-ceto-/3-boswlico USP
ER Extracto de Boswelia Serrata USP
Ascorbato de Calcio-ver Ascorbato de
Calcio en Monografas Generales
Carbonato de Calcio-ver Carbonato de
Calcio en Monografas Generales
Carbonato de Calcio, Suspensin
Oral-ver Carbonato de Calcio, Suspensin
Oral en ,f\.,1onografas Generales
Carbonato de Calcio, Tabletas-ver
Carbonato de Calcio, Tabletas en Monografas
Generales
Citrato de Calcio-ver Citrato de Calcio en
Monografas Generales
Citrato de Calcio, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Citrato de Calcio contienen no menos de
90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad declarada de
calcio (Ca).
IDENTIFICACIN
A. La Solucin muestra de la prueba de Contenido pro-
duce lneas de emisin o absorcin a las longitudes de
onda caractersticas del calcio .
B. IDENTIFICACIN-PRUEBAS GENERALES .. Calcio (191; y \i-
tratos (191)
Anlisis: Moler una Tableta hasta polvo fino en un mor-
tero. Transferir el polvo a un tubo de centrfuga, agre-
USP 38
gar 2-5 mL cie agua, snmPIPr a 11ltrasonido durante 1
minuto, agitar y cenlrifugdr.
Criterios de aceptacin: El sobrenaddnte cumple con
los requi~ilo~ de id~ p1 ueua::i.
CONTENIDO
[NOTA-Una solucin madre del estndar est disponible co-
mercialmente con diferentes concentraciones de calcio.
Pueden realizarse ajustes volumtricos necesarios en la So-
lucin estndar. Las concentraciones de la Solucin estn-
dar y la Solucin muestra pueden modificarse para que se
adapten al intervalo linea o de trabajo del instrumento.]
CONTENIDO DE CALCIO, Procedimiento 1
Solucin madre del estndar: Pesar aproximadamente
1,001 g de carbonato de calcio, previamente secado a
300 durante 3 horas y enfriado en un desecador du-
rante 2 horas, y disolver en 25 mL de cido clorhdrico
1 N. Calentar a ebullicin para expulsar el dixido de
carbono y diluir con agua hasta 1 00 mL para obtener
una solucin con una concentracin conocida de apro-
ximadamente 4000 g/mL de calcio.
Solucin estndar: Agregar a un matraz volumtrico
de 200 mL, 100 mL de agua y 4 mL de cido ntrico, y
mezclar meticulosamente. Pipetear y transferir 25,0 mL
de Solucin madre del estndar al matraz volumtrico y
diluir con agua a volumen para obtener una solucin
con una concentracin conocida de aproximadamente
500 _g/mL de calcio.
Solucion muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porcin pesada de
Tabletas reducidas a polvo, equivalente a aproximada-
mente O, 1 g de calcio, a un matraz de 50 ml. Agregar
4 mL de cido ntrico y calentar la solucin a ebullicin
suave, durante la cual se desprenda humo. Calentar a
ebullicin la solucin durante 30 minutos adicionales
con agitacin constante por rotacin suave, periodo du-
rante el cual no debe observarse desprendimiento de
humo. Enfriar la solucin a temperatura ambiente,
transferir cuantitativamente toda la solucin a un ma-
traz volumtrico de 200 mL, diluir con agua a volumen,
mezclar y filtrar.
Condiciones instrumentales
(Ver Espcctroqurnica de Plasma (730).)
Modo: Plasma inductivamente acoplado, ICP-AES
Longitud de onda analtica: 317,93 nm. [NOTA-Las
condiciones de operacin pueden desarrollarse y opti-
mizarse basndose en las recomendaciones del fabri-
cante. La configuracin tpica incluye una potencia de
radiofrecuencia (RF) de aproximadamente 1 300 vatios,
un flujo de antorcha de argn de aproximadamente
15 L/min, un flujo auxiliar de argn de aproximada-
mente 0,2 L/min y una velocidad de flujo del nebuliza-
dor de aproximadamente 0,8 L/min.]
Anlisis: Determinar la emisin de la Solucin estndar,
la Solucin muestra y una solucin de cido ntrico al
2% como el blanco a la longitud de onda indicada
anteriormente.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de calcio
(Ca) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cr) x 100
r11 = respuesta del pico de calcio de la Solucin
muestra
11 ~ respuesta del pico de calcio de la Solucin
estndar
C = concentracin de calco en la Solucin estndar
(g/mL)
Cu = concentracin nominal de Cdlcio en la Solucin
muestra (~tg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-11 0,0%
CONTENIDO DE CALCIO, Procedimiento 2
Solucin de cloruro de lantano: 267 mg/mL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en cido clorhdrico O, 125
N 15 minutos.
'\111lpmpntm Dietticos /Calcio 6345
Solucin estndar de calcio: Disolver 1,001 g de car-
bonato de calcio, previamente secado a 300" durante 3
horas, y enfriado en un desecador durante 2 horas, en
25 rnL de cido c!orhdrfco 1 t'J. Ca!ent(lr !1 t?hullirin
ha\ta expulsar el dixido de carbono y diluir con agua
hasta 1 000 mL para obtener una concentracin de
400 _g/mL de calcio.
Solucion madre del estndar: 100 g/mL de calcio, a
partir de Solucin estndar de calcio en cido clorhdrico
O, 125 N
Soluciones estndar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos
matraces volumtricos de 1 00 mL. Agregar a cada ma-
traz 1,0 mL de Solucin de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen hasta obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 g/mL de calcio.
Solucin muestra: [NOTA-Reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas.] Transferir el equivalente a 5 Table-
tas, a partir de Tabletas reducidas a polvo, a un crisol_
de porcelana. Calentar el rnsol en una mufla mantenida
a 550 durante 6-12 horas y enfriar. Agregar 60 mL de
cido clorhdrico y calentar a ebullicin suave en un?
placa caliente o en un bao de vapor durante 30 minu-
tos, enjuagando intermitentemente la superficie interna
del crisol con cido clorhdrico 6 N. Enfriar y transferir
cuantitativamente el contenido del crisol a un matraz
volumtrico de 100 ml. Enjuagar el crisol con pequeas
porciones de cido clorhdrico 6 N y agregar los enjua-
gues al matraz. Diluir con agua a volumen y filtrar, des-
echando los primeros 5 mL del filtrado. Diluir esta solu-
cin cuantitativamente con cido clorhdrico O, 125 N
hasta obtener una concentracin de 2 g/mL de calcio,
agregando 1 mL de Solucin de cloruro de lantano por
1 00 mL del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cal-
cio a 422,7 nm
Lmpara:. Calcio, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solucin de cloruro de lantano por 1 00 mL
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones, usando
el Blanco. A partir de la ecuacin de regresin lineal,
calculada usando las absorbancias de las Soluciones
estndar en funcin de las concentraciones, determi-
nar la concentracin, C, en g/mL de calcio en la
Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin determinada de calcio en la
Solucin muestra
Cu = concentracin nominal de calcio en la Solucin
muestra
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0%
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1000
ufc/g. El recuento total combinado de hongos filamento-
sos y levaduras no excede de 100 uf,c/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Escherichia coli.
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos en Desintegracin,
6 ~46 Cillcio / Suplementos Dietticos
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091\;
Cumplen con los requisitos. '
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de calcio en
trminos de mg/Tableta.
Fosfato Dibsico de Calcio-ver Fosfato
Dibsico de Calcio Anhidro y Fosfato Dibsico
de Calcio Dihidrato en Monografas Generales
Fosfato Dibsico de Calcio, Tabletas-
ver Fosfato Dibsico de Calcio, Tabletas en
Monografas Generales
Fosfato Tribsico de Calcio-ver Fosfato
Tribsico de Calcio en Monografas Generales
Glubionato de Calcio, Jarabe-ver
Glubionato de Calcio, jarabe en Monografas
Generales
Gluceptato de Calcio-ver Gluceptato de
Calcio en Monografas Generales
Gluconato de Calcio-ver Gluconato de
Calcio en Monografas Generales
Gluconato de Calcio, Tabletas-ver
Gluconato de Calcio, Tabletas en Monografas
Generales
Lactato de Calcio-ver Lactato de Calcio en
Monografas Generales
Lactato de Calcio, Tabletas-ver Lactato
de Calcio, Tabletas en Monografas Generales
Lactobionato de Calcio-- ver Lactobionato
de Calcio en Monografas Generales
USP 38
Levulinato de Calcio-wr I evulinoto de
Calcio en Monografas Generales
L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio
11/N
o
C20H23CaN10o xH,O
C20HnCaN106 (anhidro) 497,52
N-[ 4-[[(2-Amino-1,4,5,6,7,8-hexahydro-5-methyl-4-oxo-( 6S)-
pteridinyl)methyl]amino ]benzoyl]-L-glutamic acid, calcium
salt (1 :1 );
Sal clcica (1 :1) del cido N-{4-[[((6S)-2-amino- l ,4,5,6,7,8-
hexa h id ro-5-meti 1-4-oxo-6-pterid i nil)meti l]a mino ]-benzoil}-
L-g l utm ico [151533-22-1 ].
DEFINICIN
El L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio contiene no menos de
95,0% y no ms de 102,0% de 5-metiltetrahidrofolato de
calcio (C20H23CaN106), la suma de los diastereoismeros L
y D, calculada con respecto a la sustancia anhidra y
exenta de disolventes, de la cual no ms de 1,0% corres-
ponde a D-5-metiltetrahidrofolato de calcio.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197K)
[NOTA-Si los espectros obtenidos presentan diferencias,
disolver la sustancia a examinar y el ER DL-5-Metiltetra-
hidrofolato de Calcio USP por separado en una canti-
dad mnima de agua y agregar gota a gota suficiente
acetona para producir un precipitado. Dejar en reposo
durante 15 minutos, centrifugar para recoger el precipi-
tado, lavar el precipitado dos veces con una cantidad
mnima de acetona y secar. Registrar los nuevos espec-
tros usando los residuos.]
B. IDENTIFICACIN-PRUEBAS GENERALES, Calcio (191): Una
solucin de 5 mg/ml cumple con los requisitos.
C. HPLC: El tiempo de retencin del pico principal de la
Solucin muestra corresponde al de la Solucin estndar,
segn se obtienen en la Valoracin. Cumple con los crite-
rios de aceptacin de la prueba de Pureza Enantiomrica.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Solucin amortiguadora: 7,8 g/L de fosfato dicido de
sodio dihidrato en agua
Solucin A: Ajustar Solucin amortiguadora con solucin
de hidrxido de sodio al 32% (p/v) a un pH de 6,5.
Solucin B: Metano! y Solucin amortiguodora (35:65).
Ajustar con solucin de hidrxido de sodio al 32% (p/v)
a un pH de 8,0.
Fase mvil: Elucin por gradiente. Ver la Toblo 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A nnT Solucin B
1--------~(=~=n~)~ +--
T
--~~--H-n+------(~o)
11
[ __ . . ~---------"1---~~~-=+---~=l
r-:
~
1 . 1 j ::: -
USP )8 Suplementos Dietticos /Calcio 6347

[NOTA Despus de! anlisis, se debe lavar la columna y IMPUREZAS

almacenarla en una mezcla de metano! y agua CLORURO
(85:15).] Muestra: 300 mg
~olus:1n de aptitud dei sistema: fransferir 25 mg de Blanco: Mezciar 1 m L de cido niuico con 7 5 m L de
ER Acido Flico USP y 25 mg rlP ER Acirlo 4-aminoben- agua.
zoilglutmico USP a un matraz volumtrico de 100 mL. Sistema volumtrico
Agregar aproximadamente 15 mg de bicarbonato de (Ver Volumetra (541 ).)
sodio y de carbonato de sodio al matraz, agregar sufi- Modo: Valoracin directa
ciente agua, someter a ultrasonido hasta disolver y di- Solucin volumtrica: Nitrato de plata 0,005 M SV
luir con agua a volumen. Transferir 1,0 mL de esta solu- Deteccin del punto final: Potenciomtrica
cin a un segundo matraz volumtrico de 100 mL que Anlisis: Disolver la Muestra en 75 mL de agua (calentar
contenga 50 mg de ER DL-5-Metiltetrahidrofolato de hasta un mximo de 40'), agregar 1 mL de cido n-
Calcio USP, disolver y diluir con agua a volumen. trico y valorar con Solucin volumtrica. Realizar una de-
[NOTA-Las siguientes Soluciones estndar y muestra terminacin con un Blanco y hacer las correcciones
deben inyectarse inmediatamente despus de su pre- necesarias.
paracin y slo una vez.] Calcular el porcentaje de cloruro (CI) en la Muestra
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de ER DL-5-Metiltetrahi- tomada:
drofc;il,ato de Calcio USP en agua
Soluc1on muestra: 0,5 mg/mL de L-5-Metiltetrahidrofo- Resultado = [(Vs - VB) x M x F/W] x 100
lato de Calcio en agua
Sistema cromato9rafico Vs = volumen de Solucin volumtrica consumida
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.) por la Muestra (mL)
Modo: HPLC Vs = volumen de Solucin volumtrica consumida
Detector: UV 280 nm por el Blanco (mL)
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m M = molaridad real de la Solucin volumtrica
Temperatura de la columna: 32 (mmol/mL)
Velocidad de flujo: 1, 1 mL/min F = factor de equivalencia, 35,45 mg/mmol
Volumen de inyeccin: 1 O L W = peso de la Muestra (mg)
Aptitud del sistema Criterios de aceptacin: No ms de 0,5%
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
estndar Criterios de aceptacin
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi- Boro: No ms de 50 g/g
cos de los componentes de la Solucin de aptitud del Platino: No ms de 1O g/g
sistema se listan en la Tabla 2. Los ismeros L y o de Arsnico: No ms de 1,5 g/g
5-metiltetrahidrofolato coeluyen como un solo pico. El Cadmio: No ms de 0,5 g/g
cido 4a-hidroxi-5-metiltetrahidroflico, el cido 5-me- Plomo: No ms de 1,0 g/g
tiltetrahidropteroico y el cido dimetiltetrahidroflico Mercurio: No ms de 1,5 g/g
se incluyen como componentes menores en el ER DL- DISOLVENTES RESIDUALES (467)
5-Metiltetrahidrofolato de Calcio USP.] Criterios de aceptacin
Requisitos de aptitud Etanol: No mas de 0,5%
Resolucin: Solucin de aptitud del sistema 2-Propanol: No ms de 0,5%
No menos de 6 entre cido 4-aminobenzoilglut- [NOTA-Para los criterios de aceptacin para cualquier
mico y cido 4a-hidroxi-5-metiltetrahidroflico otro disolvente residual, ver Disolventes Residuales
No menos de 8 entre cido flico y cido (467).]
5-metiltetrahidroflico COMPUESTOS RELACIONADOS
No menos de 15 entre cido 5-metiltetrahidrof- Solucin A, Solucin B, Fase mvil, Solucin de apti-
lico y cido dimetiltetrahidroflico tud del sistema, Solucin estndar, Solucin mues-
Desviacin estndar relativa: Preparar tres Soluciones tra, Sistema cromatogrfico, Aptitud del sistema y
estndar distintas e inyectar cada una inmediata- Requisitos de aptitud: Proceder segn se indica en la
mente y slo una vez. No ms de 2,0%; factor de Valoracin.
respuesta del pico en tres inyecciones Anlisis
Anlisis Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra [NOTA-Las impurezas se listan en la Tabla 2.]
Calcular el porcentaje de 5-metiltetrahidrofolato de cal- Calcular el porcentaje de cada impureza, como cido
cio (CoH21CaN106), la suma de los diastereoismeros L libre, en la porcin de L-5-Metiltetrahidrofolato de Cal-
y D, en la porcin de 1-5-Metiltetrahidrofolato de Cal- cio tomada:
cio Lomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x F x (M,;/M,2) x 100
Resultarlo = (r1,/r1) x (Cs/C11) x 100
ru = respuesta del pico de la impureza
r,. respuesta del pico de la Solucin muestra
= correspondiente de la Solucin muestra
r, = respuesta del pico de la Solucion estndar rs = respuesta del pico principal de la Solucin
C, = concentracin de ER DL-5-Metiltetrahidrofolato estndar
de Calcio USP en la Solucin estndar Cs = concentracin de ER DL-5-Metiltetrahidrofolato
(mg/mL) de Calcio USP en la Solucin estndar
C - concentracin de L-5-Metiltetra- (mg/mL)
hidrofolato de Calcio en la Solucin muestra Cu = concentracin de L-5-Metiltetra-
(mg/mL) hidrofolato de Calcio en la Solucin muestra
Criterios de aceptacin: 95,0%-102,0%, con respecto (mg/mL)
a la sustancia anhidra y exenta de disolventes F = factor de respuesta relativa para el pico de la
impureza correspondiente (ver !a Tabla 2)
= peso molecular de cido L-
5-metiltetrahidroflico, 459,46
= peso molecular de L-5-metiltetra-
hidrofolato de calcio, 497,52
6348 Calcio /Suplementos Dieti'licos usr 38

Criterios de aceptacin Modo: HPLC

fNJA-No tomar en cuenta los picos de impurezas me- Detector: UV 280 nm
nores de 0,05%.J Columna: 4,0 mm x 1 S cm; rPllPno 179 1 de 5 um
Impurezas individuales: Ver la labia l. Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Tabla 2 Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema
Criterios de Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Tiempo de Factor de Aceptacin, [NOTA-Los tiempos de retencin relativos para L-5-me-
Retencin Respuesta No ms de tiltetrahidrofolato y D-5-metiltetrahidrofolato son apro-
Nombre Relativo Relativa (%) ximadamente 1 y 1,5, respectivamente.]
cido 4-aminoben- Requisitos de aptitud
-~lgllltmico' o 29 o 91 05 Resolucin: No menos de 1,5 entre L-5-metiltetrahi-
cido 4a-hidroxi-5- drofolato y D-5-metiltetrahidrofolato
metil-tetr ahidrof- Anlisis
lico" o 37 1 09 1 o Muestra: Solucin muestra
(6R)-Mefox' d o 49 1 05 - Calcular el porcentaje de D-5-metiltetrahidrofolato en la
1,0 (suma de
porcin de L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio tomada:
(65)-MefOX'"' o 50 1 05 6R V 65)
Resultado = [(ro/(ro + rt) x 100]
cido tetrahidrof-
lico' o 65 J,QQ'< 05 ro ~ respuesta del pico de D-5-metiltetrahidrofolato
cido 7,8-dihidro- de la Solucin muestra
flico 1 o 83 o 95 05 r1 = respuesta del pico de L-5-metiltetrahidrofolato
cido flico" o 85 o 83 05 de la Solucin muestra
cido 5, 10-metile-
Criterios de aceptacin: No ms de 1,0% de D-
notetrahidrofli- 5-metiltetrahidrofolato
cot1 o 88 1 ' 05
PRUEBAS ESPECFICAS
cido 5-metiltetra- CALCIO
hidrooteroico' 1 10 o 67 05 Muestra: 250 mg
cido dimetiltetra- Blanco: 150 ml de agua, 15 ml de hidrxido de sodio
hidrofliw
lmourezas totales
1 25
-
1 '
-
015
2 5
1 N y 300 mg de azul de hidroxinaftol
Sistema volumtrico
'cido N-(4-aminobenzoil)-L-glutmico. (Ver Volumetra (541 ).)
b cido N-[4-({[(65)-2-amino-4a-hidroxi-5-metil-4-oxo-1,4,4a,5,6,7,8,8a-oc- Modo: Valoracin directa
tahidropteridin-6-il]metil}amino)benzoil]-L-glutmico. Solucin volumtrica: Edetato disdico 0,05 M SV
' 2-Ami no-8-metil-4, 9-dioxo-7 -metil-p-aminobenzoil-g lutamato-6, 7,8, 9-te- Deteccin del punto final: Visual
trah idro-4H-pi razino-(1 ,2-a)- s-triazi na. Anlisis: Disolver la Muestra en 150 ml de agua, agre-
0 Informar la impureza Mefox como la suma de 65- y 6R-Mefox.
gar 15 ml de hidrxido de sodio 1 N y 300 mg de azul
'cido N-[4-({[(5)-2-amino-4-oxo-1,4,5,6,7,8-hexahidropteridin-6-il]me- de hidroxinaftol, y valorar con Solucin volumtrica hasta
til}amino)benzoil]-L-glutmico. que la solucin tenga un color azul intenso. Realizar
1cido N-(4-{[(2-amino-4-oxo-1,4,7,8-tetrahidropteridin-6-il)metil]ami-
no}benzoil)-L-glutmico.
una determinacin con un Blanco y hacer las correccio-
" cido N-( 4-{[(2-amino-4-oxo- 1,4-dihidropteridin-6-il)metil]amino}ben-
nes necesarias.
zoil)-L-glutmico. Calcular el porcentaje de calcio (Ca) en la Muestra
h cido N-(4-(3-amino-l -oxo-5,6,6a,7-tetrahidroimidazo[1,5-f]pteridin- tomada:
8(1 H,4H,9H)-il)bencil)-L-glutmico.
'cido (5)-4-{[(2-amino-5-metil-4-oxo- 1,4,5,6, 7,8-hexahidropteridin-6- Resultado = [(Vs - Va) x M x F/W] x 100
il)metil]amino}benzoico.
1 cido N-L4-({[(5)-5-metil-2-(metilamino)-4-oxo- l ,4,5,6,7,8-hexahidropteri- Vs volumen de Solucin volumtrica consumida
=
din-6-il]metil}amino)benzoil]-L-glutmico. por la Muestra (ml)
k Factor estimado.
VB = volumen de Solucin volumtrica consumida
PUREZA ENANTIOMRICA por el Blanco (ml)
Solucin amortiguadora: 4,54 g/L de fosfato dicido M = molaridad real de la Solucin volumtrica
de sodio dihidrato en agua (mmol/ml)
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora F =factor de equivalencia, 40,08 mg/mmol
(3:97). Ajustar con hidrxido de sodio al 32% (p/v) a W = peso de la Muestra (mg)
un pH de 6,8. Criterios de aceptacin: 7,0%-8,5% con respecto a la
Solucin estndar: 0,5 mg/ml de ER DL-5-Metiltetrahi- sustancia a,nhidra y exenta de disolventes
drofolato de Calcio USP en agua DETERMINACION DE AGUA, Mtodo le (921)
Solucin muestra: 0,5 mg/ml de L-5-Metiltetrahidrofo- Muestra: Transferir 40 mg de L-5-Metiltetrahidrofolato
lato de Calcio en agua de Calcio a un vial para muestreo de fase gaseosa de
Solucin de aptitud del sistema: Transferir 1,0 ml de 20 ml y tapar hermticamente. Calentar el vial en un
Solucin estndar a un matraz volumtrico de 50 ml y horno adecuado a 250 para determinacin por Karl
diluir con Solucin muestra a volumen. Fischer.
Sistema cromato~rfico Anlisis: FI agua liberada y evaporada se transfiere a
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) una celda de valoracin en una corriente de nitrgeno
seco a una velocidad de flujo de aproximadamente
40 ml/m1n segun se indica en Determinacin de Agua,
Mtodo le (921).
' Una protenJ de reco11oci111ie11to quirdi, alli111ina srica humana de (HSA,
por sus siglas en inqls), qu1micamente ligada a part1culas de slice, de aproxi-
madamente 5 pm rle rlimetro. Por e1emplo: Chromtech Chiral HSA, disponi-
ble en www.chromtech.com
USP 38 Suplementos Dietticos/ Calcio 6349

Criterios de aceptacin: fi,0% 17,0% lente a O, 1 mg/ml de L-5-metiltetrahidrofolato de cal-

cio, a partir del contenido combinado de las Cpsulas,
REQUISITOS ADICIONALES en Solucion A y filtrar .
ENVASADO y AL:\1AC[NAf.'11ENTC: /\!rnJccnar en un envase Sistema uomato9rfico
imperme<1hle en tin l11g<1r fre'>c o y seco. (Ver Cromatoqraf10 (621 ), Aptitud dPI Si\tPma.)
ESTAJ:IDARES DE REFERENCIA USP (11) Modo: HPLC
E~ Acido 4-aminobenzoilglutmico USP Detector: UV 280 nm
Acido N-( 4-aminobenzoil)-L-glutmico. Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
C "H 14N)O, 266,25 Temperatura de la columna: 32
ER DL-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio USP Velocidad de flujo: 1, 1 ml/min
Sal clcica (1 :1) del cido N[4-[[(2-amino- l ,4,5,6,7,8- Volumen de inyeccin: 1O L
hexahidro-5-meti 1-4-oxo-6-pterid in i l)meti l]am i no ]ben- Aptitud del sistema
zoi 1)-L-g l utm ico. Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin
C29H2lCaN10o 497,52 estndar
ER Acido Flico USP [NOTA-Para la Solucin de aptitud del sistema, los tiem-
pos de retencin relativos para cido flico y los is-
meros L y o de 5-metiltetrahidrofolato, que coeluyen
como un solo pico, son 0,85 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio, Resolucin: No menos de 8 entre cido flico y
Cpsulas cido 5-metiltetrahidroflico, Solucin de aptitud del
sistema
DEFINICIN Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
Las Cpsulas de L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio contie- cin estndar
nen no menos de 90,0% y no ms de 110,0% de la can- Anlisis
tidad declarada de L-5-metiltetrahidrofolato de calcio Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
(C20HnCaN106). Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
L-5-metiltetrahidrofolato de calcio (C20H23CaN106) en
IDENTIFICACIN la porcin de Cpsulas tomada:
A. HPLC: El tiempo de retencin del pico principal de la
Solucin muestra corresponde al de la Solucin estndar, Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
segn se obtienen en Contenido, y al del ismero L de la
Solucin estndar en la prueba de Pureza Enantiomrica, ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de la Solucin estndar
CONTENIDO Cs = concentracin de ER D,L-
PROCEDIMIENTO 5-Metiltetrahidrofolato de Calcio USP en la
Solucin amortiguadora: 7,8 g/L de fosfato dicido de Solucin estndar (mg/ml)
sodio dihidrato en agua Cu = concentracin nominal de L-
Solucin A: Ajustar Solucin amortiguadora con solucin 5-metiltetrahidrofolato de calcio en la
de hidrxido de sodio al 32% (p/v) a un pH de 6,5. Solucin muestra (mg/ml)
Solucin B: Metanol y Solucin amortiguadora (35:65), Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0%
Ajustar con solucin de hidrxido de sodio al 32% (p/v)
d Ull pH de 8,0.
IMPUREZAS
Fase mvil: Elucin por gradiente. Ver la Tabla 7. PUREZA ENANTIOMRICA
Solucin amortiguadora: 4,54 g/L de fosfato dicido
de sodio dihidrato en agua
Tabla 1 Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora
Tiempo Solucin A Solucin B (3:97). Ajustar con hidrxido de sodio al 32% (p/v) a
(min) (%) (%) un pH de 6,8.
o 100 o Solucin estndar: 0,4 mg/ml de ER D,L-5-Metiltetrahi-
drofolato de Calcio USP en agua
14 45 55
.. Solucin muestra: Porcin fiftrada, equivalente a
17 o 100 0,4 mg/ml de L-5-metiltetrahidrofolato de calcio, a par-
24 -- ~
o 100 tir del contenido de no menos de 30 Cpsulas, en agua
24 01 100 o Solucin de aptitud del sistema: Transferir 0,2 ml de
33 100 o Solucin estndar a un matraz volumtrico de 1 O ml y
--~

diluir con Solucin muestra a volumen.

Solus:in de aptitud del sistema: Transferir 25 mg de
ER Acido Flico USP a un matraz volumtrico de
l 00 ml. Agregar aproximadamente 15 mg de bicarbo-
nato de sodio y de carbonato de sodio al matraz, agre-
gar suficiente agua, someter a ultrasonido hasta disolver
y diluir con agua a volumen. Transferir 1,0 ml de esta
solucin a un segundo matraz volumtrico de 100 ml
que contenga 50 mg de ER D,L-5-Metiltetrahidrofolato
de Calcio USP, disolver y diluir con agua a volumen,
[NOTA--La Solucin estndar y la Solucin muestra si-
guientes deben inyectarse inmediatamente despus de
su preparacion y solo una vez.]
Solucin estndar: O, 1 mg/ml de ER D,L-5-Metiltetrahi-
drofolato de Calcio USP en Solucin A
Solucin muestra: Retirar, tanto como sea posible, el
contenido de no menos de 30 Cpsulas y pesar con
exactitud. Preparar una solucin, nominalmente equiva-
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,0 mm x 15 cm; relleno L79 1 de 5 m
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para L-5-me-
Liltelrahidrofolato y D-5-metiltetrahidrofolato son apro-
ximadamente 1 y 1,5, respectivamente.]
Una proteina de reconol imiento yui1 di, dil>ln1lind s1 ica hurlld1"1d (HSA, por
sus siglas en ingls), qumicamente ligada a partculas de slice, de aproxima-
damente 5 m de dimetro. Por ejemplo: Chromtech Chiral HSA, disponible
en www.chromtech.com.
6350 Calcio / )up!Pmf'ntos Ditticos USP 38

Requisitos de aptitud gar s11ficiPntP agua, someter a ultrasonido hasta disolver

Resolucin: No menos de 1,5 entre L-5-metiltetrahi- y uiluir COll agua a volumen. Transferir 1,0 mL de esta
drofolato y u-5-metiltetrahidrofolato solucin a un segundo matraz volumtrico de 100 mL
Anlisis que L011le11ya SO 111~ Je ::R lJ,L-.S-ivieliilelrahicirooiato
Muestra: Solucin muestra de Calcio USP, disolver y diluir con agua a volumen.
Calcular el porcentaje de D-5-metiltetrahidrofolato en la [NOTA-La Solucin l?stndar y la Solucin muestra si-
porcin de L-5-metiltetrahidrofolato de calcio tomada: guientes deben inyectarse inmediatamente despus de
su preparacin y slo una vez.]
Resultado = [rn/(rn + r1)] x 100 Solucin estndar: O, 1 mg/mL de ER D,L-5-Metiltetrahi-
drofolato de Calcio USP en Solucin A
r[) =respuesta del pico de o-5-metiltetrahidrofolato Solucin muestra: Disolver una porcin, a partir de no
de la Solucin muestra menos de 30 Tabletas reducidas a polvo fino, en Solu-
rL = respuesta del pico de L-5-metiltetrahidrofolato cin A, agitando minuciosamente. Diluir con Solucin A
de la Solucin muestra para obtener una solucin, nominalmente equivalente a
Criterios de aceptacin: No ms de 1,0% O, 1 mg/mL de L-5-metiltetrahidrofolato de calcio, y
filtrar.
PRUEBAS DE DESEMPEO Sistema cromato9rfico
DESINTEGRACIN V DISOLUCIN (2040>:Cumplen con los (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud di?! 5istema.)
requisit9s de Desintegracin. Modo: HPLC
VARIACION DE PESO (2091>: Cumplen con los requisitos.
Detector: UV 280 nm
REQUISITOS ADICIONALES Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Almacenar en un envase Temperatura de la columna: 32
impermeable y resistente a la luz, en un lugar fresco y Velocidad de flujo: 1, 1 mL/min
seco. Volumen de inyeccin: 1 O ~LL
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11 > Aptitud del sistema
ER Q,L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio USP Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin
ER Acido Flico USP estndar
[NOTA-Para la Solucin de aptitud del sistema, los tiem-
pos de retencin relativos para cido flico y los is-
meros L y o de 5-metiltetrahidrofolato, que coeluyen
como un solo pico, son 0,85 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio, Resolucin: No menos de 8 entre cido flico y
Tabletas cido 5-metiltetrahidroflico, Solucin de aptitud del
sistema
DEFINICIN Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
Las Tabletas de L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio contie- cin estndar
nen no menos de 90,0% y no ms de 11 0,0% de la can- Anlisis
tidad declarada de L-5-metiltetrahidrofolato de calcio Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
(C20HnCaN106). Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
L-5-metiltetrahidrofolato de calcio (C20HnCaN106) en
IDENTIFICACIN la porcin de Tabletas tomada:
A. HPLC: El tiempo de retencin del pico principal de la
Solucin muestra corresponde al de la Solucin estndar, Resultado = (ru! r,) x ( C/ Cu) x 1 00
segn se obtienen en Contenido, y al del ismero L de la
Solucin estndar en la prueba de Pureza Enantiomrica. ru = respuestadel pico de la Solucin muestra
r5 respuesta del pico de la Solucin estndar
=
CONTENIDO Cs = concentracin de ER D,L-
PROCEDIMIENTO 5-Metiltetrahidrofolato de Calcio USP en la
Solucin amortiguadora: 7,8 g/L de fosfato dicido de Solucin estndar (mg/mL)
sodio dihidrato en agua Cu = concentracin nominal de L-
Solucin A: Ajustar Solucin amortiguadora con solucin 5-metiltetrahidrofolato de calcio en la
de hidrxido de sodio al 32% (p/v) a un pH de 6,5. Solucin muestra (mg/mL)
Solucin B: Metano! y Solucion amortiguadora (35:65). Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0%
Ajustar con solucin de hidrxido de sodio al 32% (p/v)
a un pH de 8,0. IMPUREZAS
Fase mvil: Elucin por gradiente. Ver la Tabla 7. PUREZA ENANTIOMRICA
Solucin amortiguadora: 4,54 g/L de fosfato diacido
Tabla 1 de sodio dihidrato en agua
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora
- - - Ti~mp~ . r Solucin A 1. Solucin B-- (3:97). Ajustar con hidrxido de sodio al 32% (p/v) a
>----'~m=i=n~)---+------~<~Yo~L__ (%) un pH de 6,8.
o 100 ------ o Solucin estndar: 0,4 mg/mL de ER D,L-5-Metiltetrahi-
14 45 1 55 drofolato de Calcio USP en agua
Solucin muestra: Porcin filtrada, equivalente a
f------~~4_7_ _ _-+------~~----i----~~-~--- 0,4 mg/mL de L-5-metiltetrahidrofolato de calcio, a par-
tir de no menos de 30 Tabletas reducidas a polvo fino,
>-----2~4JD_________~1~0~0_ _ _ + - - l_ _ _ o~----< en agua
33 100 ! o Solucin de aptitud del sistema: Transferir 0,2 mL de
Solucin estndar a un matraz volumtrico de 1 O mL y
Solus:in de aptitud del sistema: Transferir 25 mg de diluir ron \nlwin muestra a volumen.
ER Acido Flico USP a un matraz volumtrico de Sistema cromato9rfico
100 mL. Agregar aproximadamente 1 5 mg de bicarbo- (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
nato de sodio y de carbonato de sodio al matraz, agre-
lJW ~R Suplementos Dietticos /Calcio 6351

Modo: HPLC contienen otras vitaminas o minerales para los que se de-
Detector: UV 280 nm clare un valor nutrimental. Pueden contener otras su~tar1-
Columna: 4,0 mm x 1 S cm; relleno L79' de 5 m cias a~r~gadas, decl~~adas o ingredientes adicionales en
lemperatura de la columna: 4Q~ cantidades 1nooeLau1e~.
Velocidad de flujo: 1,0 ml /min
Volumen de inyeccin: 1O L CONTENIDO
Aptitud del sistema CALCIO
Muestra: Solucin de aptitud del sistema [NOTA-Se puede usar una solucin estndar de calcio
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para L-5-me- para absorcin atmica disponible comercialmente
tiltetrahidrofolato y D-5-metiltetrahidrofolato son apro- cuando se describe la preparacin de una Solucin ma-
ximadamente 1 y 1,5, respectivamente.] dre del estndar de calcio en la siguiente valoracin. Se
Requisitos de aptitud pueden modificar las concentraciones de las Soluciones
Resolucin: No menos de 1,5 entre L-5-metiltetrahi- estndar y de la Solucin madre de la muestra para ajus-
drofolato y D-5-metiltetrahidrofolato tarse al intervalo lineal o de trabajo del instrumento.]
Anlisis Solucin de cloruro de lantano: Disolver 26, 7 g de
Muestra: Solucin muestra cloruro de lantano en cido clorhdrico O, 125 N para
Calcular el porcentaje de D-5-metiltetrahidrofolato en la obtener 100 ml.
porcin de L-5-metiltetrahidrofolato de calcio tomada: Solucin madre del estndar de calcio: Pesar 1,001 g
de carbonato de calcio, previamente secado a 300 du-
Resultado = [rn/(ro + r)] x 100 rante 3 horas y enfriado en un desecador durante 2
horas, y disolver en 25 mL de cido clorhdrico 1 N. Ca-
ro = respuestadel pico de D-5-metiltetrahidrofolato lentar a ebullicin para expulsar el dixido de carbono
de la Solucin muestra y diluir con agua hasta 1000 mL para obtener una solu-
rL = respuesta del pico de L-5-metiltetrahidrofolato cin con una concentracin de 400 g/mL de calcio.
de la Solucin muestra Solucin madre del estndar: 100 g/mL de calcio, a
Criterios de aceptacin: No ms de 1,0% partir de un volumen de Solucin madre del estndar de
calcio en cido clorhdrico O, 1 25 N
PRUEBAS DE DESEMPEO Soluciones estndar: Pipetear por separado 1,0; 1,5;
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los 2,0; 2,5 y 3,0 mL de Solucin madre del estndar y
requisit9s de Desintegracin. transferir a sendos matraces volumtricos de 100 mL .
VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos. Agregar a cada matraz 1,0 mL de Solucin de cloruro de
lantano y diluir con agua a volumen para obtener Solu-
REQUISITOS ADICIONALES ciones estndar con concentraciones de 1,0; 1,5; 2,0;
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en un envase
2,5 y 3,0 g/mL de calcio.
impermeable y resistente a la luz, en un lugar fresco y Solucin madre de la muestra: Pesar y reducir a polvo
seco. fino no menos de 20 Tabletas. Transferir el equivalente
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11) a 500 mg de calcio a 25 mL de cido clorhdrico con-
ER Q,L-5-Metiltetrahidrofolato de Calcio USP centrado y calentar durante 30 minutos en un bao de
ER Acido Flico USP
vapor. Enfriar, diluir con agua hasta 1000 mL, y filtrar.
Solucin muestra: Diluir cuantitativamente un volumen
de la Solucin madre de la muestra con cido clorhdrico
O, 125 N para obtener una concentracin de 1 00 g/mL
de calcio. Transferir 2,0 mL de esta solucin a un matraz
Pantotenato de Calcio-ver Pantotenato volumtrico de 100 mL, agregar 1,0 mL de Solucin de
de Calcio en Monografas Generales cloruro de lantano, y diluir con agua a volumen.
Condiciones espectromtricas
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotmetro de absorcin atmica
Pantotenato de Calcio Racmico-ver Lmpara:, Calcio, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Pantotenato de Calcio Racmico en Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cal-
Monografas Generales cio, 422,7 nm
Blanco: 1 mL de Solucin de cloruro de lantano por
100 mL de cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Pantotenato de Calcio, Tabletas-ver Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Pantotenato de Calcio, Tabletas en Blanco, Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
Monografas Generales tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL de
Calcio con Vitamina D, Tabletas calcio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
DEFINICIN cio (Ca) en la porcin de Tabletas tomada:
Las Tabletas de Calcio con Vitamina D contienen no menos
de 90,0% y no ms de 125,0% de la cantidad declarada Resultado = (C/Cu) x 100
de calcio (Ca), derivado de sustancias generalmente reco-
C = concentracin medida de calcio en la Solucin
nocidas como seguras, y no menos de 90,0% y no ms
de 165,0% de la cantidad declarada de Vitamina D, como muestra (9/ml)
colecalciferol (C21H44) o ergocalc1terol (L2sH44). No
C, - concentracion nnminI rlP rlrio Pn lil Solwin
muestra (g/mL)
' Una protena de reconocimiento quiral, albmina srica humana (HSA, por Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
sus siqlas en ingls), qumicamente ligada a partculas de slice, de aproxima- declarada de calcio (Ca)
damente 5 pm de dimetro. Por ejemplo: Chromtech Chiral HSA, disponible
en www chromtech.com.
6352 Calcio / Suplementos Dietticos
COLECALCIFEROL O ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D)
[NOTA-Usdr llldlerial de vidrio con proteccin act1nica
durante lodo esle procedimiento.]
Fase mvil. 11-i ie.x.d11u y dicuhoi isopropiico (99: l)
Solucin estndar: 2 g/mL de ER Ergocalciferol USP o
ER Colecalciferol USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solucin estndar a 60c' durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (ergocalciferol o colecal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solucin muestra: Pesar y moler no menos de 20 Ta-
bletas. Transferir el equivalente a 20 g de colecalciferol
o ergocalciferol a un recipiente con tapa de rosca con
recubrimiento interno de tefln. Agregar 8 mL de dime-
til sulfxido y 12 mL de n-hexano, y agitar durante 45
minutos en un agitador de movimiento tipo mueca
(wrist-action) con tubos en un bao de agua mante-
nido a 60. Centrifugar durante 1 O minutos, retirar la
capa de hexano con una pipeta, y transferir a un ma-
traz de evaporacin. Agregar 12 mL de n-hexano a la
capa de dimetil sulfxido, mezclar en un mezclador de
vrtice durante 5 minutos, y retirar nuevamente la capa
de hexano con una pipeta y a9regar al matraz de eva-
poracin. Repetir esta extraccion con tres porciones adi-
cionales de 12 mL de n-hexano, agregando los extrac-
tos de hexano al matraz de evaporacin. Evaporar los
extractos de hexano combinados al vaco a temperatura
ambiente hasta sequedad. Disolver y diluir el residuo en
un volumen de n-hexano para obtener una concentra-
cin de 2 g/mL.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44) o ergocalciferol (C2sH44) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/r 5) x (C/Cu) x F x 100
ru rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
=
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(g/mL)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/mL)
F = factor de correccin que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la Solucin
muestra, 1,09
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44)
o ergocalciferol (C2sH44)
USP 38
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolucin con
respecto a, calcio
Medio: AL ido LlorhdriLO O, 1 N; 900 ml
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 30 min
Anlisis: Determinar la cantidad disuelta de calcio (Ca)
usando el procedimiento de Calcio, haciendo los ajustes
volumtricos necesarios.
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de Ca.
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3000 ufc/
g, y el recuento total combinado de hongos filamentosos
y levaduras no excede de ;wo ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Calcio con Vitamina O. La etiqueta indica adems
las cantidades de calcio y Vitamina D en trminos de
unidades mtricas/Tableta, y la forma salina de calcio y la
forria qumica de Vitamina D presente en la Tableta.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
Calcio y Vitamina D con Minerales,
Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Calcio y Vitamina D con Minerales contienen
Vitamina D como Ergocalciferol (Vitamina D2) o Colecalci-
ferol (Vitamina D3), Calcio, y uno o ms minerales deriva-
dos de sustancias generalmente reconocidas como segu-
ras, que presentan uno o ms de los siguientes elementos
en forma ionizable: cobre, magnesio, manganeso y cinc.
Las Tabletas contienen no menos de 90,0% y no ms de
165,0% de la cantidad declarada de vitamina D, como
colecalciferol (CnH44) o ergocalciferol (C2sH44), y no
menos de 90,0% y no ms de 125,0% de las cantidades
declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), magnesio (Mg),
manganeso (Mn) y cinc (Zn). Pueden contener otras sus-
tancias agregadas declaradas generalmente reconocidas
como seguras, en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D)
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (99: 1)
Solucin estndar: 2 g/mL de ER Ergocalciferol USP o
ER Colecalciferol USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solucin estndar a 60 durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (ergocalciferol o colecal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Tabletas y
moler las Tabletas a polvo fino. Transferir el equivalente
a 20 g de colecalciferol o ergocalciferol a un recipiente
con tapa de rosca con recubrimiento interno de tefln.
USP 38
Agregar 8 ml de dimetil sulfxido y 12 ml de n-he-
xano, y agitar durante 45 minutos en un agitador de
movimiento tipo mueca (wrist-action) con tubos en un
bao de agua mantenido a 60''. Centrifugar durante 1O
minutos, retirar la capa de hexano con una pipela, y
transferir a un matraz de evaporacin. Agregar 12 ml
de n-hexano a la capa de dimetil sulfxido, mezclar en
un mezclador de vrtice durante 5 minutos, y retirar
nuevamente la capa de hexano con una pipeta y a9re-
gar al matraz de evaporacin. Repetir esta extraccion
con tres porciones adicionales de 12 ml de n-hexano,
agregando los extractos de hexano al matraz de evapo-
racin. Evaporar los extractos de hexano combinados al
vaco a temperatura ambiente hasta sequedad. Disolver
y diluir el residuo en un volumen de n-hexano para
obtener una concentracin de 2 g/ml.
Sistema cromatowfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las respuestas de los picos de vitamina D. Calcu-
lar el porcentaje de la cantidad declarada de colecal-
ciferol (C21H44) o ergocalciferol (C2sH44) en la por-
cin de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 1 00
ru = altura del pico de colecalciferol o
ergocalciferol de la Solucin muestra
rs = altura del pico de colecalciferol o
ergocalciferol de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Ergocalciferol USP o ER
Colecalciferol USP en fa Solucin estndar
(g/ml)
Cu = concentracin nominal de ergocalciferol o
colecalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
F = factor de correccin para considerar la
cantidad promedio de previtamina D
presente en la Solucin muestra, 1,09
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de colecalciferol (C21H44) o ergocalciferol
(C23H44)
CALCIO, Mtodo 7
[NOTA-Se puede usar una solucin estndar de calcio
para absorcin atmica disponible comercialmente
cuando se describe la preparacin de una Solucin ma-
dre del estndar de calcio en la siguiente seccin. Se
pueden modificar las concentraciones de las Soluciones
estndar y de la Solucin madre de la muestra para ajus-
tarse al intervalo lineal o de trabajo del instrumento.]
Solucin de cloruro de lantano: 267 mg/ml de clo-
ruro de lantano heptahidrato en cido clorhdrico O, 125
N Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
Solucin madre del estndar de calcio: 400 g/ml de
calcio. Disolver 1,001 g de carbonato de calcio, secado
previamente a 300 durante 3 horas y enfriado en un
desecador durante 2 horas, y disolver en 25 ml de
cido clorhdrico 1 N. Calentar a ebullicin para expul-
sar el dixido de carbono y diluir con agua hasta
1000 ml.
'\111JIPrr1Pnto\ Dif'tftiros /Calcio 6353
Solucin madre del estndar: 1 00 g/ml de calcio, a
partir de Soluc1on estandar de calc1o diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: l'1petear y transferir i ,O; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 ml de Solucin madw drl rstndar a sendos
matraces volumtricos de 1 00 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 ml de Solucin de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen para obtener Soluciones estndar
con concentraciones de 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 g/ml
de calcio.
Solucin madre de la muestra: Pesar y reducir a polvo
fino no menos de 20 Tabletas. Mezclar una porcin del
polvo equivalente a una cantidad nominal de 500 mg
de calcio con 25 ml de cido clorhdrico concentrado y
calentar durante 30 minutos en un bao de vapor. En-
friar, diluir con agua hasta 1000 ml, y filtrar.
Solucin muestra: Diluir cuantitativamente un volumen
de la Solucin madre de la muestra con cido clorhdrico
0, 125 N para obtener una concentracin nominal de
100 g/ml de calcio. Transferir 2,0 ml de esta solucin
a un matraz volumtrico de 100 ml, agregar 1,0 ml de
Solucin de cloruro de lantano, y diluir con agua a
volumen.
Condiciones espectromtricas
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara:, Calcio; de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cal-
cio, 422,7 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solucin de cloruro de lantano/100 ml
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica, deter-
minar la concentracin, en g/ml, de calcio en la
Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de calcio en la Solucin
muestra (9/ml)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de Calcio (Ca)
COBRE, Mtodo 7
Solucin estndar de cobre: Disolver 1,00 g de lmina
de cobre en un volumen mnimo de una solucin de
cido ntrico al 50% (v/v) y diluir con una solucin de
cido ntrico al 1 % (v/v) hasta 1000 ml. Esta solucin
contiene 1000 g/ml de cobre.
Solucin madre del estndar: 100 g/ml de cobre, a
partir de Solucin estndar de cobre diluida con cido
clorhdrico O, 1 25 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 ml de la Solucin madre del estndar a sendos ma-
traces volumtricos de 200 ml. Diluir con agua a volu-
men para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0
y 4,0 ~tg/ml de cobre.
nos de 20 Tabletas. Transferir el equivalente a 5 mg de
cobre, a partir de Tabletas reducidas a polvo, a un crisol
de porcelana. Calentar durante 6-12 horas en una mu-
fla man len ida a 550 y enfriar. Agregar 1 5 ml de cido
clorhdrico y calentar a ebullicin suave sobre una placa
de calentamiento o en un bao de vapor durante 30
minutos, enjuagando intermitentemente la superficie in-
terior del crisol con cido clorhdrico 6 N. Enfriar y
6354 Calcio / 'lupiern'nlos Dietticos
transferir cuantitativamente el contenido del crisol a un
matraz volumtrico de 100 mL, enjuagando el crisol
con porciones de cido clorhdrico 6 N. Diluir el conte-
nido de matraz con agua a volumen y filtrar, dese-
chando los primeros 5 rnL del filtrado. Diluir el filtrado
cuantitativamente con cido clorhdrico O, 125 N para
obtener una concentracin de 2 g/mL de cobre.
Condiciones espectromtricas
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cobre; de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de co-
bre, 324,,7 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica, deter-
minar la concentracin, C, en g/mL, de cobre en la
Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de Co-
bre (Cu) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de cobre en la Solucin
muestra ($)/mL)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solucin
muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
MAGNESIO, Mtodo 1
Solucin de cloruro de lantano: 267 mg/mL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en cido clorhdrico O, 125
N 4,0 mL de la Solucin madre del estndar a sendos ma-
Solucin madre del estndar de magnesio: Transferir
1,00 g de magnesio a un matraz volumtrico de
1000 mL, disolver en 50 mL de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen, y mezclar para obtener una
solucin con una concentracin conocida de 1 000 g/
mL.
Solucin madre del estndar: 20 g/mL de magnesio,
a partir de Solucin madre del estndar de magnesio di-
luida con cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 mL de la Solucin madre del estndar a sendos ma-
traces volumtricos de 100 ml. Agregar a cada matraz
1,0 mL de Solucin de cloruro de lantano y diluir con
cido clorhdrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 g/mL de
magnesio.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir el equivalente a 200 mg de mag-
nesio a un crisol de porcelana. Calentar durante 6-12
horas en una mufla mantenida a 550 y enfriar. Agregar
15 mL de cido clorhdrico y calentar a ebullicin suave
sobre una placa de calentamiento o en un bao de
vapor durante 30 minutos, enjuagando intermitente-
mente la superficie interior del crisol con cido clorh-
drico 6 N. Enfriar y transferir cuantitativamente el conte-
nido del crisol a un matraz volumtrico de 100 mL,
enjuagando el crisol con porciones de cido clorhdrico
6 N. Diluir el contenido del matraz con agua a volumen
y filtrar, desechando los primeros 5 mL del filtrado. Di-
luir el filtrado cuantitativamente con cido clorhdrico
O, 125 N para obtener una concentracin de 0,4 ~tg/mL
de magnesio, agregando 1 mL de Solucin de cloruro de
lantano/100 mL del volumen final.
Condiciones espectromtricas
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de LuL (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Magnesio; de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
magnesiq, 285,2 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solucin de cloruro de lantano/100 mL
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica, de-
terminar la concentracin, C, en g/mL, de magnesio
en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 1 00
C 7 concentracin medida de magnesio en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de magnesio en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
MANGANESO, Mtodo 1
Solucin madre del estndar de manganeso: Transfe-
rir 1,000 g de manganeso, a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en 20 mL de cido ntrico, diluir con
cido clorhdrico 6 N a volumen, y mezclar para obte-
ner una solucin con una concentracin de 1000 g/
mL de manganeso.
Solucin madre del estndar: 50 g/mL de manga-
neso, a partir de Solucin madre del estndar de manga-
neso diluida con cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
traces volumtricos de 100 mL. Diluir el contenido de
cada matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen
para obtener soluciones con concentraciones de 0,5;
0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 g/mL de manganeso.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir el equivalente a 9 mg de manga-
neso, a partir de Tabletas reducidas a polvo, a un crisol
de porcelana. Calentar durante 6-12 horas en una mu-
fla mantenida a 550 y enfriar. Agregar 15 mL de cido
clorhdrico y calentar a ebullicin suave sobre una placa
de calentamiento o en un bao de vapor durante 30
minutos, enjuagando intermitentemente la superficie in-
terior del crisol con cido clorhdrico 6 N. Enfriar y
transferir cuantitativamente el contenido del crisol a un
matraz volumtrico de 1 00 mL, enjuagando el crisol
con porciones de cido clorhdrico 6 N. Diluir el conte-
nido del matraz con agua a volumen y filtrar, dese-
chando los primeros 5 mL del filtrado. Diluir el filtrado
cuantitativamente con acido clorhdrico O, 125 N para
obtener una concentracin de 1 g/mL de manganeso.
Condiciones espectromtricas
(Ver Espect rofolometria y Dispersin de LuL (851).)
Modo: Espectrototometra de absorcin atmica
Lmpara: Manganeso; de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
mangane,so, 279,5 nrn
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Grat1car las absorbanc1as de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de manganeso y trazd la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as1
USP 38
C, ell ITH:J/illl,
uule11iud, uele1111illdl id LUllLt:lllldLill,
de manganeso en la Solucin muestra.
Calcular el riorcentaie de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 1 00
C concentracin medida de manganeso en la
= agua regia y agua (1 en 1 O) agregando un volumen de
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de manganeso en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso
CINC, Mtodo 7 ntrico al 5% (v/v) con Diluyente (1 :1 :198), y mezclar .
Solucin madre del estndar de cinc: 1000 g/mL de
cinc, a partir de xido de cinc disuelto en cido clorh-
drico 5 M (3,89 mg/mL) y diluida con agua hasta el
volumen final. [NOTA--Disolver en cido clorhdrico 5 M
entibiando, si fuera necesario, enfriar, y luego diluir a
volumen final.]
Solucin madre del estndar: 50 g/mL de cinc, a
partir de Solucin madre del estndar de cinc diluida con
cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 g/
mL de cinc.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir el equivalente a 40 mg de
cinc, a partir de Tabletas reducidas a polvo, a un crisol
de porcelana. Calentar durante 6-12 horas en una mu-
fla mantenida a 550 y enfriar. Agregar 15 mL de cido
clorhdrico y calentar a ebullicin suave sobre una placa
de calentamiento o en un bao de vapor durante 30
minutos, enjuagando intermitentemente la superficie in-
terior del crisol con cido clorhdrico 6 N. Enfriar y
transferir cuantitativamente el contenido del crisol a un
matraz volumtrico de 1 00 mL, enjuagando el crisol
con porciones de cido clorhdrico 6 N. Diluir el conte-
nido del matraz con agua a volumen y filtrar, dese-
chando los primeros 5 mL del filtrado. Diluir el filtrado
cuantitativamente con cido clorhdrico O, 125 N para
obtener una concentracin de 2 g/mL de cinc.
Condiciones espectromtricas
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cinc; de ctodo hueco
Llama: Aire--acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cinc,
21 3,8 nrry
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica, deter-
minar la concentracin, C, en ~1g/ml, de c111c en la
Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) " 1 00
C concentracin medida de cinc en la Solucin
=
muestra (8/mL)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/mL) . en mg/L, de los minerales de inters y trazar la recta
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
)uplcmcntos U1ctet1cos /Calcio 6355
CALCIO, COBRE, MAGNESIO, MANGANESO y CINC, Mtodo 2
Solucin madre de agua regia: Preparar una mezcla
de cido clorhdriro y cido ntrico (3:1) aqreqando el
cido ntrico al cido clorhdrico. [NOTA-Ventilar peri-
dicamente la solucin en una campana de extraccin
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solucin madre de
Solucin madre de agua regia a dos volmenes de agua.
Diluir con ms agua a volumen y mezclar bien.
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1 000 mg/L de itrio en solucin de cido ntrico al
5% (v/v) y 1000 mg/L de escandio en solucin de cido
Solucin madre del estndar (Ca, Cu, Mg, Mn y Zn):
[NOTA-Slo es necesario incluir los minerales de inters
en la solucin.] Usando soluciones estndar de ele-
mentos (individuales o combinados) disponibles comer-
cialmente en solucin de cido ntrico al 5% (v/v), pi-
petear la cantidad apropiada de solucin_ e~tndar_d~
elementos, transferir a un matraz volumetnco, y diluir
con solucin de cido ntrico al 5% (v/v) para obtener
una solucin con concentraciones finales de aproxima-
damente 1000 mg/L de calcio, 100 mg/L de cobre,
500 mg/L de magnesio, 1 00 mg/L de manganeso y
250 mg/L de Sine. .,
Soluciones estandar: Preparar una mezcla de Soluoon
madre del estndar en Diluyente para preparar una curva
de calibracin de seis puntos que abarque el intervalo
de concentracin de cada mineral de inters.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porcin que sea igual
al peso promedio por Tableta a un matraz volumtrico
de 250 ml. Agregar lentamente 25 ml de Solucin ma-
dre de agua regia en incrementos de 5 ml seguidos de
mezclado. [NOTA-Si la muestra contiene carbonato, se
producir burbujeo. Esperar hasta que cese el burbujeo
para proceder.] Calentar la solucin a ebullicin sobre
una placa de calentamiento. Continuar calentando sua-
vemente hasta que cese la produccin de humos (apro-
ximadamente 1 hora). Retirar del calor, enfriar, y diluir
con agua a volumen. Filtrar aproximadamente 30 mL
en un tubo de centrfuga usando un filtro de nailon
para jeringa con un tamao de poro de 5 m. Si fuera
necesario, realizar diluciones adicionales usando
Diluyente.
Condiciones espectromtricas
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometra de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrmetro ajustado para medir
la emisin de cada mineral de inters aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente.
[NOTA-Las condiciones operativas se pueden desarrollar
y optimizar basndose en la recomendacin del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema ., . .
[NOTA-Analizar la Soluc1on de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta segn se indica en el Anlisis.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar la emisin de cada mineral de inters en
las Soluciones estndar y la Solucin muestra con un
sistema de plasma inductivamente acoplado usando
Diluyente como blanco. Graficar la emisin de las So-
luciones estndar en funcin de las concentraciones,
que mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir
de la grfica, determinar la concentracin, C, en
mg/L, de cada mineral de inters en la Solucin mues-
6 356 Calcio / Suplementos Dietticos
tra. CalculJr el porcentilje de la cantidad declarada de
cada mineral:
Resuitado ~ L x lV/W) x ~ x (WTIL) x 100
C = concentracin medida del elemento pertinente
en la Solucin muestra (mg/L)
V = volumen de la Solucin muestra (L)
W = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilucin de la Solucin muestra
WT = peso promedio por Tableta (mg)
L = cantidad declarada del elemento pertinente
(mg/Tableta)
Criterios de aceptacin: No menos de 90,0%-125,0%
de la cantidad declarada de calcio (Ca), cobre (Cu),
magnesio (Mg), manganeso (Mn) y cinc (Zn).
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolucin con
respecto a, calcio
Medio: Acido clorhdrico O, 1 N; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 30 min
Anlisis: Determinar la cantidad disuelta de calcio (Ca)
usando el procedimiento de la valoracin de Calcio, rea-
lizando los ajustes volumtricos necesarios.
Tolerancias: No menos de 75% (Q) de la cantidad de-
clarada de Ca.
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETTICOS (2021 ): El recuento total de mi-
croorganismos aerobios no excede de 3000 ufc/g, y el
recuento total combinado de hongos filamentosos y leva-
duras no excede de 300 ufc/g. , Glicerofosfato de Calcio tomada:
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS-SUPLEMENTOS
NUTRICIONALES y DIETTICOS (2022): Cumplen con los re-
quisitos de las pruebas para determinar la ausencia de
Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococcus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Calcio y Vitamina O con Minerales. La etiqueta tam-
bin indica las cantidades de cada mineral y vitamina D/
unidad de dosificacin, la forma salina del mineral usado
como la fuente de cada elemento presente y la forma
qumica de vitamina D presente en la unidad de
dosificacin.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
Glicerofosfato de Calcio
HO ()'
(JH
C3H1Ca06P 21O,14
1,2, 3-Propanetriol, mono(dihydrogen phosphate) calcium
salt (1 :1 );
Glicerofosfato de calcio [27214-00-2).
DEFINICIN
El Glicerofosfato de Calcio es una mezcla, en proporciones
variables, de (RS)-2,3-dihidroxipropil fosfato de calcio y
2-hidroxi-1-(hidroximetil)etil fosfato de calcio, que pueden
USP 38
eslar i1idralados. FI Glicerofosfato de Calcio contiene no
menos de 18,6rl{i y no ms dr 19,4'.Yo de calcio (Ca), cal-
CI dado con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIN
A.
Anlisis: Incinerar O, 1 g en un crisol. Tomar el residuo
con 5 mL de cido ntrico, calentar en un bao de agua
durante 1 minuto y filtrar. Mezclar 1 mL del filtrado con
2 mL de molibdalo de amonio SR.
Criterios de aceptacin: Se desarrolla un color
amarillo.
B.
Anlisis: Disolver 20 mg de la sustancia en anlisis en
5 mL de cido actico 5 M y agregar 0,5 mL de solu-
cin de ferrocianuro de potasio (53 mg/mL). La solu-
cin resultante permanece transparente. Agregar 50 mg
de cloruro de Jmonio la solucin transparente.
Criterios de aceptacin: Se produce un precipitado
blanco cristalino.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Muestra: 200 mg
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Edetato disdico O, 1 M SV
Deteccin del punto final: Calorimtrico
Blanco: 300 mL de agua. Agregar 6 mL de hidrxido
de sodio 1 O M y 15 mg de cido calconcarboxlico
triturado.
Anlisis: Disolver la Muestra en 300 mL de agua, agre-
gar 6 mL de hidrxido de sodio 1 O M y 15 mg de acido
calconcarboxlico triturado. Valorar con Solucion volum-
trica hasta que la solucin adquiera un color azul ntido.
Calcular el porcentaje de calcio (Ca) en la porcin de
Resultado = [(V - B) x M x F x 100)/W
V = volumen de solucin volumtrica consumido
por la Muestra (mL)
B = volumen de solucin volumtrica consumido
por el Blanco (mL)
M = molaridad de la solucin volumtrica
(mM/mL)
F = factor de equivalencia, 40,08 mg/mM
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptacin: 18,6%-19,4% con respecto a
la sustancia seca
IMPUREZAS
PLOMO (251 ): No ms de 4 ppm
HIERRO (241)
Solucin estndar: Diluir 1 volumen de Solucin de
Hierro Estndar, preparada segn se indica en el cap-
tulo, con agua a 1O volmenes (1 g/mL).
Anlisis: Disolver 0,20 g en 1O mL de agua. Agregar
2 mL de una solucin de cido ctrico al 20% (p/v) y
O, 1 mL de cido tiogliclico y mezclar. Alcalinizar con
amonaco 1O M, diluir con agua hasta 20 mL y dejar en
reposo durante 5 minutos. Cualquier color rosado que
se produzca no es ms intenso que el obtenido tra-
tando 4 mL de la Solucin e'tndar de la misma ma-
nera.
Criterios de aceptacin: No ms de 20 ppm
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo I (231): No ms de
2j) ppme (Oficial Ol-dic-2015)
LIMITE DE CLORUROS
Solucin estndar: 8,24 g/mL de cloruro de sodio en
agua
USP 38
Solucin muestra: Disolvf'r 125 mg en 1 O ml de una
rm:Lcld Je ciJo dLlico 5 M y dLJUd (2:8) y Jiluir con
agua hasla 15 ml.
Anlisis. Agregar a id 5uluci01i 1iu5ti l mL de cido
ntrico 2 M, luego agregar 1 ml de una solucin de ni-
trato de plata (1 7 mg/ml) y dejar en reposo durante 5
minutos protegida de la luz. Agregar 5 ml de agua,
1 ml de cido ntrico 2 M y 1 ml de solucin de nitrato
de plata (1 7 mg/ml) a 1 O ml de la Solucin estndar y
dejar en reposo durante 5 minutos protegida de la luz.
Cuando se observa contra un fondo oscuro, la Solucin
muestra no es ms turbia que la Solucin estndar.
~riterios de aceptacin: No ms de 0,04%
LIMITE DE SULFATOS
Solucin estndar: 36,2 g/ml de sulfato de potasio
en agua
Solucin muestra: Usar la Solucin muestra preparada
segn se indica en la prueba de Apariencia de la
Solucin.
Anlisis: Agregar 0,5 ml de cido actico 5 M y 1 ml
de solucin de cloruro de bario (250 mg/ml) a 15 ml
de la Solucin estndar. Repetir, usando 15 ml de la So-
lucin muestra. Dejar las soluciones en reposo durante 5
minutos protegidas de la luz. Cuando se observa contra
un fondo oscuro, la Soiucin muestra no es ms turbia
que la Solucin estndar.
~riterios de ,aceptacin: No ms de 0,2%
LIMITE DE ARSENICO
Solucin madre del estndar: En un matraz volum-
trico de 250 ml, disolver 330 mg de trixido de ars-
nico en 5 ml de hidrxido de sodio 2 N y diluir con
agua a volumen. Transferir 1 ml de esta solucin a un
matraz volumtrico de 1 00 ml y diluir con agua a
volumen.
Solucin estndar: Transferir 1 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz volumtrico de 1 O ml, diluir
con agua a volumen.
Solucion de cloruro de estao (11): Calentar 20 g de
estao con 85 ml de cido clorhdrico hasta que no se
desprenda ms hidrgeno. Dejar que se enfre. Diluir 1
volumen de esta solucin con 1 O volmenes de cido
clorhdrico diluido (200 mg/ml de cido clorhdrico en
agua).
Solucin muestra: Transferir 330 mg de Glicerofosfato
de Calcio a un matraz volumtrico de 25,0 ml y diluir
con agua a volumen.
Aparato: Preparar un matraz Erlenmeyer de 100 ml
con brazo lateral que contenga una barra mezcladora
magntica. Acoplar al matraz Erlenmeyer un tapn de
vidrio esmerilado a travs del cual pasa un tubo de vi-
drio de 20 cm de largo con un dimetro interno de
5 mm. El extremo inferior del tubo est dentro del ma-
traz Erlenmeyer y se ha estrechado hasta formar una
punta con un dimetro interno de 1 mm. A 15 mm de
la punta y al menos 3 mm por debajo de la superficie
inferior del tapn, hay un orificio de 3 mm de dimetro.
El extremo superior del tubo tiene una superficie esme-
rilada plana en ngulo recto respecto al eje del tubo.
Un segundo tubo de vidrio con el mismo dimetro
interno y 30 mm de longitud, con una superficie esme-
rilada plana similar, se coloca en contacto con la super-
ficie esmerilada del primer tubo y se mantiene en posi-
cin mediante una pinza y resortes. Insertar dentro del
tubo inferior, como un relleno poco compacto, 55 mg
de algodn con acetato de plomo. Entre las superficies
planas de los tubos, colocar un disco de papel de bro-
muro mercrico.
Anlisis: Antes de colocar el montaje de tubos dentro
del matraz, transferir la Solucin muestra al matraz y
agregar 15,0 ml de cido clorhdrico, O, 1 ml de Solu-
cin de cloruro de estao (//) y 5 ml de yoduro de pota-
sio SR. Dejar en reposo durante 15 minutos y agregar
5 g de cinc activado. Ensamblar el aparato inmediata-
mente y sumergir el matraz en un bao de agua a una
temperatura tal que se mantenga un desprendimiento
Suplementos Dietticos/ Calcio 6357
uniforme de gas. Despus de no menos de 2 horas,
observar la mancha producida en el papel de bromuro
mercrico. Realizar el mismo procedimiento usando
1,0 1T1L de la Solucin estnda. La mtJnchJ poducid<l Cl
el papel de bromuro mercrico por la Solucin muestra
no es ms intensa que la producida por la Solucion
estndar.
~riterios de aceptacin: No ms de 3 ppm
LIMITE DE FOSFATOS
Solucin sulfomolbdica: Disolver con calentamiento
2,5 g de molibdato de amonio en 20 ml de agua. Diluir
28 ml de cido sulfrico con 50 ml de agua y enfriar.
Mezclar las dos soluciones y diluir con agua hasta
100 ml.
Solucin de cloruro de estao (11): Preparar segn se
indica en la prueba de Lmite de Arsnico.
Solucin madre del estndar: 14,3 g/ml de fosfato
monobsico de potasio en agua
Solucin estndar: Transferir 1,0 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz volumtrico de 100 ml y diluir
con agua a volumen.
Solucion muestra: Transferir 2,5 ml de la Solucin
muestra de la prueba de Apariencia de la Solucin a un
matraz volumtrico de 1 00 ml y diluir con agua a
volumen.
Anlisis: Agregar 4 ml de Solucin sulfomolbdica a
1 00 ml de la Solucin muestra, mezclar y agregar
O, 1 ml de Solucin de cloruro de estao (//). Agregar
4 ml de Solucin sulfomolbdica a 100 ml de Solucin
estndar, mezclar y agregar 0, 1 ml de Solucin de clo-
ruro de estao (//). Dejar las preparaciones en reposo
durante 1 O minutos y luego observar 20 ml de cada
preparacin. Cualquier color producido por la Solucin
muestra no es ms intenso que el producido por la So-
lucin estndar.
,Criteri9s de aceptacin: No ms de 0,04%
ACIDO CITRICO
Solucin de sulfato de mercurio (11): 1 g de xido
mercrico en 20 ml de agua y 4 ml de acido sulfrico
Anlisis: Mezclar 5 g de Glicerofosfato de Calcio con
20 ml de agua exenta de dixido de carbono y filtrar.
Agregar al filtrado 0, 15 ml de cido sulfrico y filtrar.
Agregar al filtrado 5 ml de Solucin de sulfato de mer-
curio (//) y calentar a ebullicin. Agregar 0,5 ml de per-
man~anato de potasio 0,2 M y calentar a ebullicin.
Criterios de aceptacin: No se forma precipitado.
GLICEROL Y SUSTANCIAS SOLUBLES EN ALCOHOL
Anlisis: Mezclar 1 g con 25 ml de alcohol y agitar du-
rante 1 minuto. Filtrar, evaporar hasta sequedad el fil-
trado en un bao de agua y secar el residuo a 70
durante 1 hora.
Criterios de aceptacin: El residuo pesa no ms de
5 mg (0,5%).
PRUEBAS ESPECFICAS
APARIENCIA DE LA SOLUCIN
Suspensin opalescente: Disolver 1 g de sulfato de hi-
drazina en 1 00 ml de agua y dejar en reposo durante
4-6 horas. Agregar 25 ml de esta solucion a 25 ml de
una solucin que contenga 100 mg/ml de metenamina
en agua y dejar en reposo durante 24 horas.
Suspension de referencia primaria: Diluir 15,0 ml de
Suspensin opalescente con agua hasta 1 000 ml.
[NOTA-Esta suspensin se prepara en el momento y se
puede almacenar durante no ms de 24 horas.]
Suspensin de referencia: Suspensin de referencia pri-
maria y agua (30:70). [NOTA-Agitar antes de usar.]
Solucin muestra: Disolver 1,5 g a temperatura am-
biente en 150 ml de agua exenta de dixido de
carbono.
Anlisis: Comparar la opalescencia de volmenes igua-
les de la Solucin muestra y de la Suspensin de referen-
cia.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra no es ms
opalescente que la Suspensin de referencia.
6358 Calcio ! Suplementos Dietticos
ACIDEZ O ALCALINIDAD
Anlisis: Disolver 1 LJ de Glicerofosfato de Calcio en
1 00 mL de agua. Agregar O, 1 mL de solucin de fenolf-
tJlcnJ .:JI 1,0% (p/v).
Criterios de aceptacin: Se requiere no ms de 0,5 mL
de hidrxido de sodio O, 1 M o de cido clorhdrico O, 1
,M para cambiar el color del indicador.
PERDIDA POR SECADO (731 >: Secar una muestra a 150
durante 4 horas: pierde no ms de 12,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y almacenar a temperatura ambiente
controlada.
Piedra Caliza Molida
DEFINICIN
La Piedra Caliza Molida es un polvo microcristalino fino, de
color blanco a blanquecino, que consiste principalmente
en carbonato de calcio. Se obtiene mediante trituracin,
molienda y clasificacin de piedra caliza natural, benefi-
ciada por flotacin y/o clasificacin area. Despus de se-
car a 200 durante 4 horas, contiene no menos de 94 0%
y no ms de 100,5% de carbonato de calcio (CaC0 3).1
IDENTIFICACIN
A. IDENTIFICACIN-PRUEBAS GENERALES, Calcio (191)
Anlisis: Agregar cido actico a la Piedra Caliza Molida
y calentar a ebullicin la solucin resultante.
Criterios de aceptacin: La solucin produce eferves-
cencia (presencia de carbonato) despus de la adicin
de cido actico. Despus de calentar a ebullicin, cum-
ple con los requisitos del cgptulo.
B. ~~STANCIAS INSOLUBLES EN ACIDO: Cumple con lo,s re-
qu1s1tos de la prueba para Sustancias Insolubles en Acido.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Muestra: 200 mg de Piedra Caliza Molida, previamente
secada a 200 durante 4 horas
Blanco: Proceder segn se indica en Anlisis, excepto
que se debe omitir la muestra de prueba.
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 >.)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Edetato disdico 0,05 M SV
Deteccin del punto final: Visual
Anlisis: Transferir la Muestra a un vaso de precipitados
de 250 rnL. Humedecer minuciosamente con unos po-
cos mL de agua y agregar, gota a gota, suficiente acido
clorhdrico 3 N para disolver. Agregar 100 mL de agua,
1? mL.de hidrxido de sodio 1 N )' 300 m<; de azul de
h1drox1naftol, y valorar con Solucion volumetnca hasta
que la solucin se torne de color un azul distintivo. Rea-
lizar una determinacin con el Blanco.
Calcular el porcentaje de carbonato de calcio (CaCO,)
en la Muestra tornada:
Resultado = {[( V1 - VB) x M x F]/W} x 100
V\ = volumen de Solucin volumtrica consumido
por la Muestra (ml)
VR = volumen de Solucin volumtrica consumido
por el Blanco (mL)
M ~ molaridad real de la Solucin volumtrica
(mM/mL)
F = factor de equivalencia, 100, l mg/mM
W = peso de la Muestra (mg)
USP 38
Criterios de aceptacin: 94,0% 1 00,5%
IMPU~EZAS
ARSENICO, fv1todo / ,';211 l
Preparacin de prueba: D1so!ver lentamente 1,0 g en
15 mL de cido clorhdrico y diluir con agua hasta
55 ml.
Anlisis: Proceder segn se indica en el captulo, ex-
cepto que se debe omitir la adicin de 20 mL de cido
sulfrico 7 N.
Criterios de aceptacin: Cumple con los requisitos del
captulo (no mas de 3 ppm).
PLOMO (251>
Preparacin de prueba: Mezclar 1,0 g con 5 ml de
agua, agregar lentamente 8 mL de cido clorhdrico
3 N, evaporar en un bao de vapor hasta sequedad y
disolver el residuo en 5 mL de a~ua.
Criterios de aceptacin: No mas de 3 ppm
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS (231>
Preparacin de prueba: Mezclar 1,0 g con 5 ml de
agua, agregar lentamente 8 mL de cido clorhdrico 3 N
y evaporar en un bao de vapor hasta sequedad. Disol-
ver el residuo en 20 ml de agua, filtrar y agregar agua
al filtrado hasta obtener 25 ml.
Criterios de aceptacin: No ms de 20 ppme (Oficial 01-dic
, 2015)
LIMITE DE MAGNESIO Y SALES ALCALINAS
Muestra: 1,0 g
Anlisis: Mezclar la Muestra con 40 mL de agua. Agre-
gar cuidadosamente 5 mL de cido clorhdrico, calentar
la solucin y calentar a ebullicin durante 1 minuto.
Agregar rpidamente 40 mL de cido oxlico SR y mez-
clar vigorosamente hasta que se establezca bien la pre-
cipitacin. Agregar inmediatamente a la mezcla tibia
2 gotas de rojo de metilo SR y luego hidrxido de amo-
nio 6 N, gota a gota, hasta que la mezcla se torne ape-
nas alcalina. Enfriar a temperatura ambiente. Transferir a
una probeta graduada de 100 mL, diluir con agua hasta
1 00 mL, mezclar y dejar en reposo durante 4 horas o
durante toda la noche. Filtrar y agregar a 50 ml del
filtrado transparente en una cpsula de platino 0,5 ml
de cido sulfrico, y evaporar la mezcla en un bao de
vapor hasta un volumen pequeo. Calentar cuidadosa-
mente sobre una llama libre hasta sequedad y continuar
calentando hasta completar la descomposicion y volati-
lizacin de las sales de amonio. Incinerar el residuo
hasta peso constante.
Criterios de aceptacin: No ms de 3,5%. El peso del
, residuo es no ms de 1 7,5 mg.
LIMITE DE FLUORUROS
[NOTA~Preparar y almacenar todas las soluciones en en-
vases de plstico.]
Solucin amortiguadora: 294 mg/ml de citrato de so-
dio dihidrato en agua
Solucin madre del estndar: 1, 1 052 mg/mL de ER
Fluoruro de Sodio USP en agua
Solucin estndar: Transferir 20,0 mL de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 100 ml
que contenga 50,0 ml de Solucin amortiguadora, diluir
con agua a volumen y mezclar. Cada ml de Solucin
estndar contiene 1 00 pg de in fluoruro.
Solucin muestra: Transferir 2,0 g de Piedra Caliza Mo-
lida a un vaso de precipitados que contenga una varilla
mezcladora recubierta de plstico. Agregar 20 ml de
agua y 4,0 ml de cido clorhldrico, y mezclar hasta di-
solver ..Agregar 50,0 ml de Solucin amortiguadora y su-
ficiente agua hasta obtener l 00 mL.
Sistema de electrodos: Usar un electrodo especfico in-
dicador de in fluoruro y un electrodo de referencia de
plata-cloruro ele plata conectado a un medidor de pH
USP 38
capaz de medir los potPnrialP<> ron 1ma reproducibi!i-
dad mnima Je ~t0,2 111V (ver H (791)).
Anlisis
Muestras: So/uclon ni.:11Jw y Suiuci11 111ue)ilu
Lnea de respuesta del estndar: Transferir 50,0 mL
de Solucin amortiguadora y 4,0 mL de cido clorh-
drico a un vaso de precipitados, y agregar agua hasta
obtener 100 ml. Agregar una barra mezcladora recu-
bierta de plstico, insertar los electrodos en la solu-
cin, mezclar durante 1 5 minutos y leer el potencial,
en mV. Continuar mezclando y agregar, en intervalos
de 5 minutos, 100; 1 00; 300 y 500 L de la Solucin
estndar, leyendo el potencial 5 minutos despus de
cada adicin. Graficar los logaritmos de las concentra-
ciones de in fluoruro acumulado (O, 1; 0,2; 0,5 y
1,0 g/mL) en funcin del potencial, en mV.
Enjuagar y secar los electrodos, insertarlos en la Solu-
cin muestra, mezclar durante 5 minutos y leer el po-
tencial, en mV. A partir del potencial medido y de la
Lnea de respuesta del estndar, determinar la concen-
tracin, C (en g/mL), de in fluoruro en la Solucin
muestra.
Calcular el contenido de fluoruro en la porcin de Pie-
dra Caliza Molida tomada:
Resultado = (C x V)/W
C =concentracin de in fluoruro, obtenida a
partir de la Lnea de respuesta del estndar,
en la Solucin muestra (g/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Piedra Caliza Molida tomado para
preparar preparar la Solucin muestra (g)
Criterios de aceptacin: No ms de 50 ppm
PRUEBAS ESPECFICAS
SUSTANCIAS INSOLUBLES EN CIDO
Muestra: 5,0 g
Anlisis: Mezclar la Muestra con 25 mL de agua. Agre-
gar 25 mL de cido clorhdrico, gota a gota, agitando,
hasta que cese la efervescencia. Agregar agua hasta que
la mezcla alcance 200 ml y filtrar. Lavar el residuo inso-
luble con agua hasta que el ltimo lavado no presente
ms cloruro e incinerar y pesar el residuo.
Criterios de aceptacin: 0,2%-2,5%. El peso del resi-
,duo est entre 1 O y 125 mg.
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 200
durante 4 horas: pierde no ms de 2,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Fluoruro de Sodio USP
Cardo Mariano
DEFINICIN
El Cardo Mariano se compone del fruto maduro seco de
Slybum marianum (L.) Gaertn. (Fam. Asteraceae), una vez
eliminado el vilano. Contiene no menos de 2,0% de sili-
marina, calculado como silibina (C2:,H220rn), con respecto
a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: l ,O mg/rnL de ER Silidianina USP en
metano!
Solucin muestra: Usar la Solucin muestra, preparada
segn se indica en la prueba de Contenido de Silimarina,
Sistema cromatogrfico
(Ver lromatogratw (621 ), lromatograt1a en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de s111ce para cromatograt1a
de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de longitud
(placas de TLC)
Volumen de aplicacin: 1O L
Fase mvil: Mezcla recientemente preparada de cloro-
formo, acetona y cido frmico anhidro (75: 16,5: 8,5)
Solucin reveladora A: Solucin de difenilborinato de
2-aminoetilo de 1 O mg/mL en metano!
Solucin reveladora B: Solucin de polietilenglicol
4000 de 50 mg/mL en alcohol
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa y secarla durante 30 minutos en una
corriente de aire fro. Rociar la placa con Solucin reve-
ladora A, dejar que se seque y luec;io rociar con Solu-
cin reveladora B. Una hora despues, observar la placa
bajo luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una zona fluorescente azul ver-
dosa intensa a un valor R1 de aproximadamente 0,5
(presencia de silibina) y presenta una mancha azul gri-
scea a un valor R1 de aproximadamente 0,4 que co-
rresponde a una mancha observada en el cromato-
grama de la Solucin estndar. El cromatograma de la
Solucin muestra puede presentar otras zonas colorea-
das: una zona azul verdosa intensa a un valor R1 de
aproximadamente 0,25 (presencia de silicristina) y una
zona anaranjada rojiza a un valor R1 de aproximada-
mente 0,3 (presencia d~ taxifolina).
8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido de
Silimarina.
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de
los picos para silidianina, silicristina, silibina A, silibina B,
isosilibina A e isosilibina B en el cromatograma de la
Solucin muestra corresponden a los del cromatograma
de la Solucin estndar de cardo mariano.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE SILIMARINA
Solucin A: Metano!, cido fosfrico y agua
(20: 0,5: 80)
Solucin B: Metano!, cido fosfrico y agua
(80: 0,5: 20)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (O/o)
f--~~~--~--~f--~~~~~~~-+--~~~~~~-
5 85 15
t--~~~2~---~--+~~~~5~5~~~-+-~~~-4~5~--~
Solucin estndar de cardo mariano: 0,7 mg/mL de
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP en meta-
no!. Someter a ultrasonido durante 20 minutos para di-
solver. Pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor. Diluir 1 en 5
cor1 rnelanol para obtener una solucin de O, 14 mg/mL
de ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP.
Soluciones estndar de silibina: 0,20; 0,02 y
0,004 mg/mL de ER Silibina USP en metano!. Pasar a
travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m o menor.
6360 Cardo Mari<1no ./ 'luJIPrrwn/n) ()ip/p/ic m
Solucin madre de la muestra: Transferir 1 O g de
Cardo Mariano reducido a polvo tino a un dedal de
extraccin y cubr.ir con una bola pequera de algodn.
Transferir el dedal a un aparato de extracc1on continua
equipado con un matraz de fondo redondo de 250 mL
que contenga 150 mL de ter de petrleo y calentar el
matraz sobre un manto de calentamiento durante 4 ho-
ras. Despus de la extraccin, separar el matraz de
fo~do redondo que contiene el extracto de ter de pe-
troleo del aparato de extraccin y desechar la solucin
de ter de petrleo. Eliminar el ter de petrleo rema-
nente e_n el dedal de extraccin mediante secado y
transferir el dedal a un aparato de extraccin adecuado
para extraccin en caliente y equipado con un matraz
de fondo redondo de 250 mL que contenga 100 mL de
acetato de etilo. [NOTA-Ajustar el volumen de acetato
d_~ etilo, ~i fuera necesario, para mantener una extrac-
c1on continua.] Calentar el matraz sobre un manto de
calentamiento para permitir el reflujo suave del disol-
vente. Despus de 8 horas, transferir el extracto cuanti-
tativamente a un matraz volumtrico de 100 mL y diluir
con metanol a volumen.
Solucin muestra: Diluir la Solucin madre de la mues-
tra (1 en 25) con metanol.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 j, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 288 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar de cardo mariano
[NOTA-Para los tiempos de retencin relativos, ver la
Tabla 2.]
Tabla 2
Tiempo de
Retencin
Relativo
Silicristll}-. ______ -----~- --~-~-- --------- o 68
Silidianina o 73
Silibina A 1 00
Silibina B 1 05
Deshidrosilibina 1 09
lsosilibina A 1 15
lsosilibina B 1 19
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar de cardo mariano es similar al
cromatograma de referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre silibina A y sili-
bina B
Factor de asimetra: 0,8-2,0
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
la suma de las respuestas de los picos debidos a sili-
bina A y silibina B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar de cardo mariano, cada
una de las Soluciones estndar de silibina y Solucin
muestra
ld_e~tificarlos picos debidos a silicristina, silidianina, si-
l1b1na A, silibina B, isosilihina A e isosilibina B por
C()mparacin con el cromatograma de la Solucin es-
tandar de cardo mariano, y medir las reas de los pi-
cos pertinentes. Graficar las reas de la suma de los
picos de silibina A y silibina B en funcin de la con-
centracin de ER Silibina USP en las Soluciones estn-
dar de silibina, y obtener una lnea de regresin para
calibracin.
USP 38
CalculJr por sepJrJdo el porcentJje de cada compo-
nente pertinente rle silimarina, como silibina
(C,1H))010), en la porcion de Cardo Mariano tomada:
Resultarlo - r , (ViV'v) ~: n -: 100
C = concentracin del componente pertinente en
la Solucin muestra segn se interpola en la
grfica de calibracin (mg/mL)
V = volumen de la Solucin madre de la muestra
(mL)
W = peso de la porcin de Cardo Mariano tomada
(mg)
O = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra a partir de Solucin madre de la
muestra, 25
Calcular el contenido de silimarina, como porcentaje,
en la porcin de Cardo Mariano tomada sumando los
porcentajes individuales.
Criterios de aceptacin: No menos de 2,0% de silima-
rina, calculado como silibina (C2sH2210), con respecto a
la materia seca
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS (231 ,No ms de 1 o g/g
>:
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561j: Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 >:
El recuento to-
tal bacteriano no excede de 1 0 4 ufc/g, y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 2 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022j: Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli, y la ausen-
cia de Staphylococcus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Los frutos (aquenios) son ovoides y
alargados, ligeramente retorcidos, moderadamente
aplanados, de 6-7 mm de longitud aproximadamente,
de hasta 3 mm de ancho y 1,5 mm de espesor; tienen
un borde saliente amarillo brillante y cartilaginoso en la
superficie superior y un hilo acanalado en la base. El
recubrimiento del fruto es negro amarronado brillante o
m,a:rn grisceo mate co~ lneas de color oscuro o gris
palido; contiene el embnon recto con dos cotiledones
gruesos y aplanados que contienen aceite graso y gr-
nulos de aleurona.
Microscpicas: La epidermis de la pared del fruto con-
~iene clulas en empalizada casi incoloras dispuestas en
angulos rectos con respecto a la superficie. Poseen pa-
redes externas muy gruesas dentro de las cuales el
lumen contina durante cierta distancia en forma de
ranura. Observadas desde arriba con gran aumento las
clulas muestran slo un lumen en forma de ranur;.
Poseen rebordes gruesos que aparecen como engrosa-
mientos nodulares de la pared celular cuando se obser-
van desde arriba. La capa subepidrmica de la pared
del fruto se compone de clulas parenquimticas de
pared delgad,a no l!gnificadas_ y c~nstituye una capa de
pigmento. Celulas incoloras, ind1v1duales y en grupos,
se alternan con clulas pigmentadas de nmero varia-
ble, lo que le da a la pared del fruto su apariencia mo-
teada. A continuacin se encuentra el tejido de la pared
del fruto, con un grosor de aproximadamente 8 capas
de clul.as, con clulas parenquimticas punteadas alar-
gadas situadas a lo largo del eje longitudinal del fruto.
Las clulas de la capa ms interna de la pared del fruto
pueden estar colapsadas; contienen grandes prismas de
oxalato de calcio monoclnicos o en forma de cigarro.
La ep1derm1s de la cubierta de la semilla est formada
por clulas grandes amarillas en empalizada. Las clulas
tienen un lumen estrecho, algo expandido en cada ex-
tremo de la clula, y las paredes celulares muestran una
USP 38
laminacin conspicua. Las clulas subepidrmicas de la
cubierta de la semilla contienen clulas punteadas pecu-
liares; sus membranas celulares lignificadas tienen rebor-
des o cngo'.">omicnto~ poinincnlc:> cerrado'.:> ("clu!J:,
en red") junto a ellas hay una niu1 capa de clulas
con paredes duras, algo hinchadas y con contenido li-
poflico (residuo de endosperma). El embrin consiste
en clulas de paredes delgadas que, adems de glndu-
las pequeas, contienen grupos de cristales y gotculas
d~ grasa (en los cotiled9nes).
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 8,0%, determinado en 1,0 g de Cardo Ma-
r\ano reducido a polvo fino.
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Cardo Ma-
riano reducido a polvo fino a 105 durante 2 horas:
pierde no ms de 8,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en CONTENIDO
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la CONTENIDO DE SILIMARINA
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP
ER Silibina USP
ER Silidianina USP
Cardo Mariano, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Cardo Mariano se preparan a partir de Ex-
tracto en Polvo de Cardo Mariano. Contienen no menos
de 90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad declarada
de silimarina como silibina (C;,Hn010), calculada como la
suma de silidianina, silicristina, silibina A, silibina B, isosili-
bina A e isosilibina B.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1,0 mg/mL de ER Silidianina USP en
metano!
Solucin muestra: Equivalente a 5 mg/mL de silima-
rina, a partir del contenido de las Cpsulas reducido a
polvo (reducir a polvo fino el contenido de no menos
de 20 Cpsulas) en metano!. Agitar durante 1 minuto y
someter a ultrasonido durante 1 O minutos. Dejar en re-
poso durante 15 minutos antes de usar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, por lo ~eneral de 20 cm de longitud
Volumen de aplicacion: 1 O L
Fase mvil: Mezcla recientemente preparada de cloro-
formo, acetona y cido frmico anhidro (75: 16,5: 8,5)
Solucin reveladora A: Solucin de difenilborinato de
2-aminoetilo de 1 O mg/mL en metano!
Solucin reveladora B: Solucin de polietilenglicol
4000 de 50 mg/mL en alcohol
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa y secarla durante 30 minutos en una
corriente de aire fro. Rociar la placa con Solucin reve-
Sup!ernenlos Dietticos/ Cardo Mariano 6361
/adora A, dejar que se seque y luego rociar con Solu-
cin reveladora B. Una hora despues, observar la placa
bao luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptacin: [! uomiltogrm de I So/u-
<ir5n muestra presenta una zona fluorescente azul ver-
dosa intensa a un valor Rr de 0,5 (presencia de silibina)
y presenta una mancha azul griscea a un valor R, de
0,4 que corresponde a una mancha observada en el
cromatograma de la Solucin estndar. El cromatograma
de la Solucin muestra puede presentar otras zonas colo-
readas: una zona azul verdosa intensa a un valor Rr de
0,25 (presencia de silicristina) y una zona anaranjada
rojiza a un valor Rr de 0,,3 (presencia de taxifolina).
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido de
Silimarina.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta picos para silidianina, silicristina,
silibina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B a tiem-
pos de retencin que corresponden a los de la Solucin
estndar de cardo mariano.
Solucin A: Metano!, cido fosfrico y agua
(20: 0,5: 80)
Solucin B: Metano!, cido fosfrico y agua
(80: 0,5: 20)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%)
o o o
5 85 15
20 55 45
40 55 45
41 85 15
55 85 15
Solucin estndar de cardo mariano: 0,7 mg/mL de
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP en meta-
no!. Someter a ultrasonido durante 20 minutos para
disolver.
Soluciones estndar de silibina: 0,20; 0,02 y
0,004 mg/mL de ER Silibina USP en metano!. Pasar a
travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino el conte-
nido de no menos de 20 Cpsulas. Transferir una canti-
dad del polvo, pesada con exactitud, equivalente a
100 mg de silimarina a un matraz volumtrico de
100 mL, agregar 90 mL de metano! y someter a ultraso-
nido durante 20 minutos, agitando ocasionalmente. En-
friar a 20 y diluir con metano! a volumen. Filtrar a
travs de una membrana con un tamao de poro de
0,45 m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromalografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 288 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar de cardo mariano
[NOTA~Para los tiempos de retencin relativos, ver la
Tabla 2.]
6362 Cardo Marilno / Suplementos Dietticos USP 38

Tabla 2 Aparato 2: 1 00 rpm

Tiempo: 45 min
1
1
Nombre
1

----+--________
Tiempo de
Retencin
Relativo ~
Determinar la cantidad de silimarina, como silibina
(( J-1
\ ' - L JI
(!_
lU~
\
il!/f
rfir1 inlt-:l 11rnrln ni rn,;;tnrl" nn l""l ..,,.., 1,-,.h-.
U I J U ' - H....... U...1'-"1 IUV

de Contenido dP Silimarina, reali1ando las modificacio-

'--1 11 ''-1..V\..IV '---11 HA f'-'11 Ul..-UU

Siliuhtind o 68 nes necesarias.

Silidia11ina ----- o 73 Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
Silibina A
~----"------
1 00 rada de silimarina como silibina (C2sHnOro)
Silibina B ------~ --- ----
1 05 VARIACIN DE PESO (2091 ): Cumplen con los requisitos.
Deshidrosilibina 1 09
CONTAMINANTES
lsosilibina A 1 15 PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
lsosilibina B 1 19 tal bacteriano no excede de 10 4 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
Requisitos de aptitud cede de 10 3 ufc/g, y el recuento de enterobacterias no
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma excede de 10 2 ufc/g. ,
de la Solucin estndar de cardo mariano es similar al AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
cromatograma de referencia provisto con el lote de ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP usado. ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
Resolucin: No menos de 1,0 entre silibina A y sili-
bina B REQUISITOS ADICIONALES
Factor de asimetra: 0,8-2,0 ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para permeables y resistentes a la luz.
la suma de las respuestas de los picos debidos a sili- ETIQUETADO: La etiqueta ndica el nombre cientfico en
bina A y silibina B latn y, despus de la denominacin oficial, el artculo a
Anlisis partir del que se prepararon las Cpsulas. La etiqueta
Muestras: Solucin estndar de cardo mariano, cada tambin indica el contenido de silimarina, en mg/
una de las Soluciones estndar de silibina y Solucin Cpsula.
muestra ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
Identificar los picos debidos a silicristina, silidianna, sili- ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP
bina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B compa- ER Slibina USP
rando el cromatograma de la Solucin estndar de ER Silidianina USP
cardo mariano con el cromatograma de referencia y
medir las reas de los picos pertinentes. Graficar las
reas de la suma de los picos de silibna A y slbna B
en funcin de la concentracin de ER Slibina USP en
las Soluciones estndar de silibina, y obtener una lnea Cardo Mariano en Polvo
de regresin para calibracin.
Calcular por separado el contenido, en mg, de cada DEFINICIN
componente pertinente de silimarina, como silibina El Cardo Mariano en Polvo es Cardo Mariano reducido a
(C2sH220ro), en la porcin de contenido de Cpsulas polvo fino o muy fino. Contiene no menos de 2,0% de
tomada: silimarina, calculado como silibna (C2sH22010), con res-
Resultado = cX V pecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
C = concentracin del componente pertinente en A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
la Solucin muestra segn se interpola en la DELGADA
grfica de calibracin (mg/mL) Solucin estndar: 1,0 mg/mL de ER Slidianna USP en
V =volumen de la Solucin muestra (mL) metano!
Calcular el contenido de silmarina, como porcentaje, Solucin muestra: Usar la Solucin muestra, preparada
en la porcin de Cpsulas tomada: segn se indica en la prueba de Contenido de Silimarina.
Resultado= Cs x (Awc!W) x (100/L) Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
e = suma del contenido de cada componente gada.)
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
pertinente de silimarina en la porcin de
contenido de Cpsulas tomada (mg) de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de longitud
Aw, = peso promedio del contenido de las Cpsulas (placas de TLC)
(mg/Cpsula) Volumen de aplicacin: 1 O L
W = peso de la porcin del contenido de las Fase mvil: Mezcla recientemente preparada de cloro-
Cpsulas tomada (mg) formo, acetona y cido frmico anhidro (75: 16,5: 8,5)
L = cantidad declarada de silimarina (mg/Cpsula) Solucin reveladora A: Solucin de difenilborinato de
Criterios de aceptacin: 90,0%-11 0,0% de la cantidad 2-aminoetilo de 1 O mg/mL en metano!
declarada de silimarina como silibina Solucin reveladora B: Solucin de polietilenglicol
4000 de 50 mg/mL en alcohol
PRUEBAS DE DESEMPEO Anlisis
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
requisitos para Disolucin. Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
Solucin amortiguadora: 6,9 g/L de fosfato monob- fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
sico de sodio y 1,52 g/L de hidrxido de sodio en agua. to> Je la placa y secarla durante 30 minutos en una
Ajustar a un pH de 7,5. corriente de are fro. Rociar la placa con Solucin reve-
Medio: Solucin amortiguadora que contenga lauril sul- ladora A. dejar que se seque y luego roriar ron 'iolu-
fato al 2%; 900 mL cin reveladora B. Una hora despues, observar la placa
bajo luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una zona fluorescente azul ver-
USP 38 SunlPmPntos
' DiPtPtirm ./tardo Mariano 6 36 3

dosa intensa a un valor R1 de aproximadamente 0,5 Sistema cromatogrfico

(presencia de sli1b1na) y presenta una mancha azul gri- (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
scea a un valor R1 de aproximadamente 0,4 que co- Modo: HPLC
rrPsnonrle a 1ma manrh;i nh,Prv:irfa Pn PI crom!to- Detector: U\/ 288 nrn
grama de la Solucin estndar. El cromatograma de la Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 ,Ltm
Solucin muestra puede presentar otras zonas colorea- Temperatura de la columna: 40
das: una zona azul verdosa intensa a un valor Rr de Velocidad de flujo: 1 ml/min
aproximadamente 0,25 (presencia de silicristina) y una Volumen de inyeccin: 1 O L
zona anaranjada rojiza a un valor R, de aproximada- Aptitud del sistema
mente O, 3 (presencia d~ taxifolina). Muestra: Solucin estndar de cardo mariano
8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC [NOTA-Para los tiempos de retencin relativos, ver la
Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido de Tabla 2.]
Silimarina.
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de Tabla 2
los picos para silidianina, silicristina, silibina A, silibina B,
isosilibina A e isosilibina B en el cromatograma de la Tiempo de
Solucin muestra corresponden a los del cromatograma Retencin
de la Solucin estndar de cardo mariano. Relativo
Silicristina o 68
COMPOSICIN Silidianina o 73
CONTENIDO DE SILIMARINA
Silibina A 1 00
Solucin A: Metano!, cido fosfrico y agua
(20: 0,5: 80) Silibina B 1 05
Solucin B: Metanol, cido fosfrico y agua Deshidrosilibina 1 09
(80: 0,5: 20) lsosilibina A 1 15
Fase mvil: Ver la Tabla 7. lsosilibina B --~
1 19

Tabla 1 Requisitos de aptitud

-------- -
Tiempo Solucin A Solucin B
lmln\ t 0 /o\
o o
5 85
20 55
40 55
41 85
55 85
Solucin estndar de cardo mariano: 0,7 mg/ml de
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP en meta-
nol. Someter a ultrasonido durante 20 minutos para di-
solver. Pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor. Diluir 1 en 5
con metanol hasta obtener una solucin de O, 14 mg/
ml de ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP.
Soluciones estndar de silibina: 0,20; 0,02 y
0,004 mg/ml de ER Silibina USP en metanol. Pasar a
travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m o menor.
Solucin madre de la muestra: Transferir 1 O g de
Cardo Mariano en Polvo a un dedal de extraccin y
cubrir con una bola pequea de algodn. Transferir el
dedal a un aparato de extraccin continua equipado
con un matraz de fondo redondo de 250 ml que con-
tenga 150 ml de ter de petrleo y calentar el matraz
sobre un manto de calentamiento durante 4 horas.
Despus de la extraccin, separar el matraz de fondo
redondo que contiene el extracto de ter de petrleo
del aparato de extraccin y desechar la solucin de ter
de petrleo. Eliminar el ter de petrleo remanente en
el dedal de extraccin mediante secado y transferir el
dedal a un aparato de extraccin adecuado para extrac-
cin en caliente y equipado con un matraz de fondo
redondo de 250 ml que contenga 100 ml de acetato
de etilo. (NOTA-Ajustar el volumen de acetato de etilo,
si fuera necesario, para mantener una extraccin con-
tinua.] Calentar el matraz sobre un manto de calenta-
miento para permitir el reflujo suave del disolvente.
Despus de 8 horas, transferir el extracto cuantitativa-
mente a un matraz volumtrico de 100 ml y diluir con
metanol a volumen.
Solucin muestra: Diluir la Solucin madre de la mues-
tra (1 en 25) con metanol.
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar de cardo mariano es similar al
llo\ cromatograma de referencia provisto con el lote de
o ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP usado.
15 Resolucin: No menos de 1,0 entre silibina A y sili-
45 bina B
45 Factor de asimetra: 0,8-2,0
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
15 la suma de las respuestas de los picos debidos a sili-
15 bina A y silibina B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar de cardo mariano, cada
una de las Soluciones estndar de silibina y Solucin
muestra
Identificar los picos debidos a silicristina, silidianina, si-
libina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B por
comparacin con el cromatograma de la Solucin es-
tndar de cardo mariano, y medir las reas de los pi-
cos pertinentes. Graficar las reas de la suma de los
picos de silibina A y silibina B en funcin de la con-
centracin de ER Silibina USP en las Soluciones estn-
dar de silibina, y obtener una lnea de regresin para
calibracin.
Calcular por separado el porcentaje de cada compo-
nente pertinente de silimarina, como silibina
(C 25 H22010), en la porcin de Cardo Mariano en Polvo
tomada:
Resultado= e X (V/W) X o X 100
e = concentracin del componente pertinente en
la Solucin muestra segn se interpola en la
grfica de calibracin (mg/ml)
V = volumen de la Solucin madre de la muestra
(ml)
w = peso de la porcin de Cardo Mariano en Polvo
tomada (mg)
o = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra a partir de Solucin madre de la
muestra, 25
Calcular el contenido de silimarina, como porcentaje,
en la porcin de Cardo Mariano en Polvo tomada
sumando los porcentajes individuales.
Criterios de aceptacin: No menos de 2,0% de silima-
rina, calculado como silibina (C2sH22010), con respecto a
la materia seca
6364 Cardo Mariano / Suplementos Dietticos
CONTAMINANTES
METALES PESADOS 2311: J'-io rnc~ de 20 pg/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple rnn lm requisitos
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 >: El recuento to-
ldl bdcteriano no excede de 10 1 utc/g, y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 2 ufc/g. , DELGADA
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia co!i, y la ausen-
cia de Staphylococcus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: El polvo se caracteriza por
presentar fragmentos de clulas incoloras, hasta de apro-
ximadamente 75 m de longitud y 8 m de ancho, de la
capa en empalizada de la epidermis de la pared del
fruto, que poseen una capa de pigmento adherente (ad-
quieren un color rojo en preparaciones de hidrato de clo-
ral), y por partculas grises, vistas desde arriba, con el
lumen en forma de hendija producido por el engrosa-
miento pronunciado de la pared o por los nudos presen-
tes en la pared celular formados por las crestas engrosa-
das; fragmentos de la capa de pigmento vistos desde
arriba, con la coloracin rojiza que se diluye de ellos en
las preparaciones de hidrato de cloral, clulas pigmenta-
rias que alternan con clulas parenquimticas incoloras;
clulas incoloras claramente punteadas a travs de las
cuales pueden verse las clulas pigmentadas cuando se
las observa desde arriba; prismas de oxalato de calcio
monoclnicos o en forma de cigarro, que se depositan
sueltos o en grupos de clulas; numerosos fragmentos de
las clulas en empalizada color amarillo limn del recu-
brimiento de la semilla, hasta aproximadamente 150 m
de longitud, con un lumen muy angosto y claramente
punteado notablemente flameados cuando se los observa
desde arriba; fragmentos amarillo plido de la capa de
clulas en red junto con porciones de embrin formado
por clulas de paredes delgadas con pequeas glndulas
y systancias lipoflicas. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561 ): No ms de 2,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas lota/es (561):
No ms de 8,0%, determinado en 1,0 g de Cardo Ma-
riano en Polvo
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Cardo Ma-
riano en Polvo a 105' durante 2 horas: pierde no ms de
8,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP
ER Silibina USP
ER Silidianina USP
Extracto en Polvo de Cardo Mariano
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Cardo Mariano se prepara a partir
de los frutos o las semillas de Cardo Mariano mediante la
remocin de la materia grasa y la posterior extraccin con
disolventes adecuados. Contiene no menos de 90,0% y
no ms de 110,0% de la cantidad declarada de silimarina,
calculada como silibina (C2sH22010), con respecto al ex-
tracto seco, que consiste en no menos de 20,0% y no
USP 38
ms de 45,0% de la suma de silidianina y silicristina, no
menos de 40,0% y no mas de 65,0% de la suma de
silibina A y silibina B, y no menos de 10,0% y no ms de
70, 0% rle l;i '11m;i rlP ;,milihin:i A ,.., isosilibina 8.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
Solucin estndar: 1,0 mg/mL de ER Silidianina USP en
metanol
Solucin muestra: 1O mg/mL de Extracto en Polvo en
metanol y dejar en reposo durante 15 minutos antes de
usar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de longitud
Volumen de aplicacion: 1O L
Fase mvil: Mezcla recientemente preparada de cloro-
formo, acetona y cido frmico anhidro (75: 16,5: 8,5)
Solucin reveladora A: Solucin de difenilborinato de
2-aminoetilo de 1O mg/mL en metanol
Solucin reveladora B: Solucin de polietilenglicol
4000 de 50 mg/mL en alcohol
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa y secarla durante 30 minutos en una
corriente de aire fro. Rociar la placa con Solucin reve-
ladora A, dejar que se seque y luego rociar con Solu-
cin reveladora B. Una hora despues, observar la placa
bajo luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una zona fluorescente azul ver-
dosa intensa a un valor RF de aproximadamente 0,5
(presencia de silibina) y presenta una mancha azul gri-
scea a un valor RF de aproximadamente 0,4 que co-
rresponde a una mancha observada en el cromato-
grama de la Solucin estndar. El cromatograma de la
Solucin muestra puede presentar otras zonas colorea-
das: una zona azul verdosa intensa a un valor RF de
aproximadamente 0,25 (presencia de silicristina) y una
zona anaranjada rojiza a un valor RF de aproximada-
mente 0,3 (presencia d~ taxifolina).
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido de
Silimarina.
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de
los picos para silidianina, silicristina, silibina A, silibina B,
isosilibina A e isosilibina B en el cromatograma de la
Solucin muestra corresponden a los del cromatograma
de la Solucin estndar de cardo mariano.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE SILIMARINA
Solucin A: Metanol, cido fosfrico y agua
(20: 0,5: 80)
Solucin B: Metano!, cido fosfrico y agua
(80: 0,5: 20)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo 1
Solucin A
1
Solucin B
1
Cmin) 1
(%) 1
(%)
o o o
5 85 15
20 55 45
40 ---- -- - - __ _?_L __ I 45
15
41 85
55 85 15
USP 38 Sur1it'rrw11im DiPIPli< u\/ Cardo Mariano 6365

Solucin estndar de cardo mariano: 0,7 mg/ml de \V peso de la porcin de Extracto en Polvo
=
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP en meta- tomada (mg)
no!. Someter a ultrasonido durante 20 minutos para Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
disolver. s1l1manna en la porc1on de txtracto en Polvo tomada:
Soluciones estndar de silibina: 0,20; 0,02 y
0,004 mg/mL de ER Silibina USP en metano!. Pasar a Resultado = L.S/ L x 1 00
travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m o menor. L:S suma de los porcentajes de cada componente
=
Solucin muestra: Disolver una muestra de Extracto en pertinente de silimarina
Polvo en metano! hasta obtener una solucin equiva- L = cantidad declarada de silimarina, como
lente a 0,4 mg/ml de silimarina. Someter a ultrasonido porcentaje, en el Extracto en Polvo
durante 20 minutos, enfriar a 20" y pasar a travs de Criterios de aceptacin: 90,0%-11 0,0% de la cantidad
un filtro con un tamao de poro de 0,45 ~tm o menor. declarada de silimarina, calculada como silibina
Sistema cromato9rfico (C2sH22010), con respecto a la materia seca, que con-
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) siste en: 20,0%-45,0% para la suma de silidianina y
Modo: HPLC silicristina; 40,0%-65,0% para la suma de silibina A y
Detector: UV 288 nm silibina B; y 10,0%-20,0% para la suma de isosilibina A
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m e isosilibina B
Temperatura de la columna: 40
CONTAMINANTES
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema Eliminar lo siguiente:
Muestra: Solucin estndar de cardo mariano
[NOTA-Para los tiempos de retencin relativos, ver la METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de 20 g/
Tabla 2.] ge (Oficial Ol-dic-2015)
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Tabla 2 tal bacteriano no excede de 104 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
Tiempo de cede de 10 3 ufc/g, y el recuento de enterobacterias no
Retencin
excede de 103 ufc/g. ,
Nombre Relativo AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Silicristina o 68 ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
Silidianina o 73 ausencia de Salmonella spp. y Eschercha coli.
Silibina A 1 00 OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Silibina B 1 05 Botnicos (565) para las pruebas en las secciones Residuos
Deshidrosilibina 1 09 de Plaguicidas y Disolventes Residuales.
lsosilibina A 1 15 PRUEBAS ESPECFICAS
lsosilibina B 1 19 PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105
durante 2 horas: pierde no ms de 5,0% de su peso.
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma REQUISITOS ADICIONALES
de la Solucin estndar de cardo mariano es similar al ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
cromatograma de referencia provisto con el lote de permeables, resistentes a la luz y en un lugar fresco.
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP usado. ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
Resolucin: No menos de 1,0 entre silibina A y sili- latn y, a continuacin de la denominacin oficial, la
bina B parte de la planta a partir de la que se prepar el art-
Factor de asimetra: 0,8-2,0 culo. Cumple con los requisitos de Extractos Botnicos
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para (5~5), Etiquetado.
la suma de las respuestas de los picos debidos a sili- ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
bina A y silibina B ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP
Anlisis ER Silibina USP
Muestras: Solucin estndar de cardo mariano, cada ER Silidianina USP
una de las Soluciones estndar de silibina y Solucin
muestra
Identificar los picos debidos a silicristina, silidianina, sili-
bina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B por com-
paracin con el cromatograma de la Solucin estndar Cardo Mariano, Tabletas
de cardo mariano, y medir las reas de los picos perti-
nentes. Graficar las reas de la suma de los picos de DEFINICIN
silibina A y silibina B en funcin de la concentracin Las Tabletas de Cardo Mariano se preparan a partir de Ex-
de ER Silibina USP en las Soluciones estndar de silibina, tracto en Polvo de Cardo Mariano. Contienen no menos
y obtener una lnea de regresin para calibracin. de 90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad declarada
Calcular por separado el porcentaje de cada compo- de silimarina, como silibina (C ,sH22010), calculada como la
nente pertinente de silimarina, como silibina suma de silidianina, silicristina, silibina A, silibina B, isosili-
(C2sHn010), en la porcin de Extracto en Polvo bina A e isosilibina B.
tomada:
IDENTIFICACIN
Resultado = eX (V/W) X 100 A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
e = concentracin del componente pertinente en Solucin estndar: 1,0 mg/ml de ER Silidianina USP en
la Solucin muestra segn se interpola en la metano!
grfica de calibracin (mg/mL) Solucin muestra: Equivalente a 5 mg/ml de silima-
V = volumen de la Solucin muestra (mL) rina, a partir de Tabletas reducidas a polvo fino (no me-
nos de 20) en metano!. Agitar durante 1 minuto y so-
6366 CJrdo MJriano / SuplPmPnto' Dif:'IPli<m USP 38

meter a 1iltrasonido durante 1 O minutos. Dejar en de metanol y someter a ullra,onido durante 70 minu-
reu'u durante 15 minutos antes de usar. tos, agitando ocasionalmente. Enfriar a 20' y diluir con
Sistema cromatogrfico metanol a volumen. Filtrar a travs de una memhrana
(Ver Cru111uiuyw1u \62 l , Cromatogratw en lapa Uel- con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
gada.) Sistema cromatografico
Modo: TLC (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa Modo: HPLC
de 0,25 mm, por lo 9eneral de 20 cm de longitud Detector: UV 288 nm
Volumen de aplicacion: 1 O L Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Fase mvil: Mezcla recientemente preparada de cloro- Temperatura de la columna: 40'
formo, acetona y cido frmico anhidro (75: 16,5: 8,5) Velocidad de flujo: 1 ml/min
Solucin reveladora A: Solucin de difenilborinato de Volumen de inyeccin: 1 O L
2-aminoetilo de 1O mg/ml en metanol Aptitud del sistema
Solucin reveladora B: Solucin de polietilenglicol Muestra: Solucin estndar de cardo mariano
4000 de 50 mg/ml en alcohol [NOTA-Para los tiempos de retencin relativos, ver la
Anlisis Tabla 2.]
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la Tabla 2
fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la placa y secarla durante 30 minutos en una Tiempo de
corriente de aire fro. Rociar la placa con Solucin reve- Retencin
ladora A, dejar que se seque y luego rociar con Solu- Nombre Relativo
cin reveladora B. Una hora despues, observar la placa Silicristina o 68
bajo luz UV de longitud de onda larga. Silidianina o 73
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- Silibina A 1 00
cin muestra presenta una zona fluorescente azul ver- Silibina B 1 05
dma intensa a un valor Rr de 0,5 (presencia de silibina) - - ---------------
y presenta una mancha azul griscea a un valor Rr de Deshidrosilibina 1 09
0,4 que corresponde a una mancha observada en el lsosilibina A 1 15
cromatograma de la Solucin estndar. El cromatograma lsosilibina B 1 19
de la Solucin muestra puede presentar otras zonas colo-
readas: una zona azul verdosa intensa a un valor Rr de Requisitos de aptitud
0,25 (presencia de silicristina) y una zona anaranjada Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
rojiza a un valor R1 de O,, 3 (presencia de taxifolina). de la Solucin estndar de cardo mariano es similar al
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC cromatograma de referencia provisto con el lote de
Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido de ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP usado.
Silimarina. Resolucin: No menos de 1,0 entre silibina A y sili-
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- bina B
cin muestra presenta picos para silidianina, silicristina, Factor de asimetra: 0,8-2,0
silibina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B a tiem- Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
pos de retencin que corresponden con los de la Solu- la suma de las respuestas de los picos debidos a sili-
cin estndar de cardo mariano. bina A y silibina B
Anlisis
CONTENIDO Muestras: Solucin estndar de cardo mariano, cada
CONTENIDO DE SILIMARINA una de las Soluciones estndar de silibina y Solucin
Solucin A: Metanol, cido fosfrico y agua muestra
(20: 0,5: 80) Identificar los picos debidos a silicristina, silidianina, sili-
Solucin B: Metanol, cido fosfrico y agua bina A, silibina B, isosilibina A e isosilibina B compa-
(80: 0,5: 20) rando el cromatograma de la Solucin estndar de
Fase mvil: Ver la Tabla 1. cardo mariano con el cromatograma de referencia y
medir las reas de los picos pertinentes. Graficar las
Tabla 1 reas de la suma de los picos de silibina A y silibina B
Tiempo
--- Solucin A Solucin B
en funcin de la concentracin de ER Silibina USP en
las Soluciones estndar de silibina, y obtener una lnea
(min) (%) (%) de regresin para calibracin.
o __ _Q_ __ o -- Calcular por separado el contenido, en mg, de cada
5 85 15 componente pertinente de silimarina, como silibina
20 55 45 (C2sH22010), en la porcin de Tabletas tomada:
40 55 45
41
55
------

-=t ____ ____fil__

85
- - ----
15
15 C
Resultado =
= concentracin del componente pertinente en
la Solucin muestra segn se interpola en la
eX V

Solucin estndar de cardo mariano: 0,7 mg/ml de grfica de calibracin (mg/ml)

ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP en meta-
no!. Someter a ultrasonido durante 20 minutos para
disolver.
Soluciones estndar de silibina: 0,20; 0,02 y
0,004 mg/ml de ER Silibina USP en metanol. Pasar a
travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 pm o menor.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad del polvo,
pesada con exactitud, equivalente a 100 mg de silima-
rina a un matraz volumtrico de 1 00 ml, agregar 90 ml
V = volumen de la Solucin muestra (ml)
Calcular el contenido de silimarina, como porcentaje,
en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= Cs x (Awr!W) x (100/L)
C = suma del contenido de cada componente
pertinente de silimarina en la porcin de
Tabletas tomada (mg)
Aw: = peso promedio de las Tabletas (mg/Tableta)
W = peso de la porcin de Tabletas tomada (mg)
usr 38
1. = cantidad declarada de silimarina (mg/Tableta)
Criterios de aceptacin: 90,0%- 110,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040\: Cumrlen ron lm
requisitos para Disolucion. , no menos de 1 5 cm y secar la placa en una corriente
Solucin amortiguadora: 6,9 g/L de fosfato monoba-
sico de sodio y 1,52 g/L de hidrxido de sodio en agua.
Ajustar a un pH de 7,5. . luz diurna.
Medio: Solucin amortiguadora que contenga launl sul-
fato al 2%; 900 mL
Aparato 2: 1 00 rpm
Tiempo: 45 min
Determinar la cantidad de silimarina, como silibina
(C2sH2010), disuelta usando el mtodo en la prueba
de Contenido de Silimarina, realizando las modificacio-
nes necesarias.
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de silimarina, como silibina (C;sHn010)
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 10 4 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 1 0 3 ufc/g, y el recuento de enterobacterias no
excede de 10 2 ufc/g. , frico, mientras se mezcla y enfra. Preparar inmediata-
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas .Pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Eschenchw co/1.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes ? la luz. . ,.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1ent1f1co en
latn y, a continuacin de la denominacin oficial, el art-
culo a partir del que se prepararon las Tabletas. La eti-
queta tambin indica el contenido de silimarina, en mg/
Tableta.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP
ER Silibina USP
ER Silidianina USP
Castao de Indias
DEFINICIN
El Castao de Indias consiste en las semillas secas de Aescu-
lus hippocastanum L. (Fam. Hippocastanaceae). Se cose~ha
durante el otoo. Contiene no menos de 3,0% de gl1cos1-
dos triterpnicos, calculado con respecto a la materia seca
como escina (CssHs624).
IDENTIFICACIN , trar, lavar el filtro con 1 O mL de ter y desechar los
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 5 mg/mL de ER Escina USP en
metanol
Solucin muestra: Transferir 1 g del material vegetal re-
ducido a polvo a un tubo de centrfuga con tapa de
rosca, agregar 1 O mL de una mezcla de alcohol y ag.ua
(7:3), y calentar en un bao de vapor durante 1 O minu-
tos. Centrifugar y usar el sobrenadante transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 1 O L
Fase mvil: Usar la fase superior de una mezcla de
1-butanol, cido actico glacial y agua (5:1 :4).
Suplementos Dietticos / Cistano de Indias 6367
Solucin reveladora: Metanol, cido actico glacial,
cido sulfric.o y -anisaldehdo (85: 1 O: 5: 0,5)
Anlisis
Mu~~lrd~: Su/w.i11 1::;iu11Jur y Suluci11 111u1::;itu
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de
de aire. Rociar la placa con Solucin reveladora, calen-
tar a 1 00 durante 5 minutos y observar la placa bajo
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una zona de color violeta ,azulado
correspondiente a escina, comparable en pos1c1on y
color a la zona principal en el cromatograma de la Solu-
cin estndar. Por encima de esta zona, el cromato-
grama de la Solucin muestra presenta diversas zonas
estrechas de color marrn a rojo amarronado menos
intensas que la zona correspondiente a escina.
COMPOSICIN , ,
CONTENIDO DE GLICOSIDOS TRITERPENICOS
Disolvente A: Metanol y agua (13:7)
Disolvente B: Usar la fase inferior de una mezcla de
cloroformo, cido clorhdrico O, 1 N y 1-propanol
(5:3:2). , .
Reactivo: Disolver 75 mg de cloruro fernco en 50 mL
de cido actico glacial. Agregar 50 mL de cido sul-
mente antes de usar.
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Escina USP en
cido actico glacial, agitando durante 1 minuto.
Solucin estndar B: 0,4 mg/mL de ER Escina USP en
cido actico glacial, agitando durante 1 minuto .
Solucin estndar C: 0,6 mg/mL de ER Escina USP en
cido actico glacial, agitando durante 1 minuto.
Solucin muestra: Pesar 1 g de semillas molidas y colo-
car en un matraz de fondo redondo de 250 ml. Agre-
gar exactamente 100 mL de Disolvente A y pesar el ma-
traz lleno con una precisin de 0, 1 g. Acoplar un
condensador al matraz, someter a reflujo durante 30
minutos y dejar que se enfre. Ajustar al peso inicial
agregando Disolvente A, segn sea necesario, y filtrar.
Transferir 30,0 mL del filtrado a un matraz de fondo
redondo y evaporar los disolventes al vaco. Disolver el
residuo con 20 mL de cido clorhdrico O, 1 N y transfe-
rir cuantitativamente con ayuda de dos porciones adi-
cionales de 5 mL de cido clorhdrico O, 1 N a un em-
budo de separacin de 250 mL. Agregar 20 mL de
1-propanol y 50 mL de cloroformo, y agitar vigorosa-
mente durante 2 minutos. Separar la capa clorofrmica
y agregar Disolvente B a la fase superior remanente en
el embudo de separacin. Agitar vigorosamente durante
2 minutos y separar la capa clorofrmica. Combinar las
capas clorofrmicas en un matraz de fondo redondo y
evaporar hasta sequedad al vaco. Evaporar los disolven-
tes remanentes con ayuda de una corriente de aire. La-
var el residuo con dos porciones de 1 O ml de ter, fil-
filtrados etreos. Despus de la evaporacin del ter re-
sidual, agregar al residuo una porcin de 1 O mL de
cido actico glacial y pasar a travs del filtro seco
usado previamente a un matraz volumtrico de 50 mL.
Repetir la adicin de cido actico glacial seguida de
dos pasos adicionales de filtracin, combinando los fil-
trados en el matraz volumtrico. Lavar el matraz de
fondo redondo con pequeas cantidades de cido ac-
tico glacial y filtrar en el matraz volumtrico. Diluir con
cido actico glacial a volumen.
Condiciones instrumentales
Modo: Visual
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Longitud ,de onda: 540 nm
Blanco: Acido actico glacial
Anlisis: Transferir 1 mL de la Solucin estndar A, de la
Solucin estndar B, de la Solucin estndar C, de la So-
lucin muestra y del Blanco a sendos tubos de ensayo
6368 Castao de Indias/ Suplementos Dietticos
con tapn. Aqreqar 4,0 ml de Reactivo a cada tubo,
tapar los tubos y coloci.lrlos en un ba1o de agua a 60
durante 25 minutos, i.lgitando ocasionalmente. Medir
las absorbJnciJ~ de !.J s~;/u(in lnufstra reaccionada y de
las Solucione; Pstndnr A, R y C reaccionadas, y corregir
por el Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones
estndar A, By C reaccionadas en funcin de sus con-
centraciones, en mg/mL, de ER Escina USP en la Solu-
cin estndar correspondiente. A partir de las grficas,
determinar la concentracin, C, en mg/mL, de glicsi-
dos triterpnicos, como escina (C 51 H86 024), en la Solu-
cin muestra.
Calcular el porcentaje de glicsidos triterpnicos como
escina en la porcin de Castao de Indias tomada:
Resultado= (C/VV) x (50/3)
C = concentracin de glicsidos triterpnicos en la
Solucion muestra segun se obtuvo
anteriormente (mg/mL)
W = peso de Castao de Indias tomado para
preparar la Solucin muestra (g)
Criterios de aceptacin: No menos de 3,0% de glicsi-
dos triterpnicos, calculado como escina (Cs 5 Hs624),
con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS, Mtodo,!// (231): No ms de 20 g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 106 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 4 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias es no ms de 1 0 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Las semillas de Castao de Indias son
compactas y duras, subesfricas a ovaladas, levemente
aplanadas y de 2 a 4 cm de dimetro. El recubrimiento
de la semilla es de color marrn oscuro de 1 a 1,5 mm
de espesor, con una mancha grande y redonda de color
marron claro (hilo). El recubrimiento de la semilla es
brilloso, pero slo cuando es fresca. El espacio bajo el
recubrimiento est totalmente ocupado por un enorme
embrin macizo brilloso y sus grandes cotiledones de
color amarillo plido que carecen de endosperma.
Microscpicas: La epidermis de la testa vista desde la
superficie presenta clulas de color marrn amarillento
de tamao bastante uniforme, en su mayora con forma
redonda a poligonal y unas pocas con forma cuadrada
a levemente triangular. Las paredes de estas clulas tie-
nen un espesor considerable pero irregular y carecen de
puntuaciones. Al corte, las clulas son columnares,
aproximadamente 3-4 veces ms altas que anchas, con
la pared periclinal externa significativamente engrosada,
irregular y que se afina hacia la base; debajo de la epi-
dermis se observan unas pocas capas de clulas colen-
quimticas engrosadas con pequeos espacios intercelu-
lares; la parte ms grande de la testa consiste en clulas
parenquimticas de mayor tamao no muy comprimi-
das que forman un tejido esponjoso; las paredes pre-
sentan un engrosamiento variable e irregular, con gran-
des espacios intercelulares circulares bien marcados; la
capa interna de la testa es una zona estrecha, con clu-
las mal definidas de paredes ms delgadas. Todas las
clulas parenquimticas de la testa presentan una pig-
mentacin oscura. El embrion tiene una capa exterior
de clulas incoloras pequeas, casi cuadradas al corte,
con paredes externas y laterales engrosadas. Desde la
superficie, nicamente pueden vislumbrarse los lmenes
USP 38
irrPgulares y ms o menos poligonales, lo que propor-
cior1a un aspecto reticulado con puntuaciones. Los coti-
ledones son moderadamente engrosados y con puntua-
1_iu11e) ir 1Jislir rlas, con ciuias parenquimticas
redondeadas a ovoides densamente llenas de almidn.
Los grnulos de almidn, en su mayora simples, se pre-
sentan en dos intervalos de tamao: de 15 a 30 m y
de 3 a 1 O m. Los grnulos ms grandes presentan una
forma que vara de circular, ovoide, y claramente poli-
gonal a piriforme, la mayora de los cuales tienen un
hilio radial o hendido bien marcado y carecen de es-
tras. Los grnulos de almidn ms pequeos son me-
nos variables, de forma esfrica a ovoide, con el hilio
frecuentemente como un punto. Es poco frecuente la
presencia de gr?nulos de almidn compuestos.
SUSTANCIAS EXTRAIBLES
Anlisis: Proceder segn se indica en Artculos de Origen
Botnico (561 ), Extractos Solubles en Alcohol, Mtodo 2,
excepto 9ue se debe usar una mezcla de metano! y
agua (8:2) en lugar de alcohol.
Criterios de aceptacin: No menos de 18,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
<?61): No ms de 2,0%
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 1 05
du~ante2 horas: pierde '1 ms de .1 0,0% de su peso .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cemzas Totales (561):
No ms de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en un envase
bien cerrado y resistente a la luz. Proteger de la
humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn, y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo .
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11/
ER Escina USP
Castao de Indias en Polvo
DEFINICIN
El Castao de Indias en Polvo es Castao de Indias reducido
a polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de 3,0%
de glicsidos triterpnicos, calculado con respecto a la
materia seca como escina (CssHs624).
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 5 mg/mL de ER Escina USP en
metano!
Solucin muestra: Transferir 1 g de Castao de Indias
en Polvo a un tubo de centrfuga con tapa de rosca,
agregar 1 O mL de una mezcla de alcohol y agua (7: 3),
y calentar en un bao de vapor durante 1 O minutos.
Centrifugar y usar el sobrenadante transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 1 O L
Fase mvil: Usar la fase superior de una mezcla de
1-butanol, cido actico glacial y agua (5:1 :4).
Solucin reveladora: Metano!, cido actico glacial,
cido sulfrico y p-anisaldehdo (85: 1 O: 5: 0,5)
Anlisis
Muestras; Solucin i:ol(),,Jur y Sulucin muestra
Desarrollar los cromalogramas hasta una longitud de no
menos de i 5 cm y secar la placa en una corriente de
aire. RociM la placa con Solucin reveladora, calentar a
USP 38
l 00" durante S mintnm y observar Id JJldLd bdjo luL
diurna.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una zona de color violeta azulado
correspondiente a escina, comparable en posicin y
color a la zona principal en el cromatograma de la Solu-
cin estndar. Por encima de esta zona, el cromato-
grama de la Solucin muestra presenta diversas zonas
estrechas de color marrn a rojo amarronado menos
intensas que la zona correspondiente a escina.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIOOS TRITERPNICOS
Disolvente A: Metanol y agua (1 3:7)
Disolvente B: Usar la fase inferior de una mezcla de
cloroformo, cido clorhdrico O, 1 N y 1-propanol
(5:3:2).
Reactivo: Disolver 75 mg de cloruro frrico en 50 mL
de cido actico glacial. Agregar 50 mL de cido sul-
frico, mientras se mezcla y enfra. Preparar inmediata-
mente antes de usar.
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Escina USP en
cido actico glacial, agitando durante 1 minuto.
Solucin estndar B: 0,4 mg/mL de ER Escina USP en
cido actico glacial, agitando durante 1 minuto.
Solucin estndar C: 0,6 mg/mL de ER Escina USP en
cido actico glacial, agitando durante 1 minuto.
Solucin muestra: Pesar 1 g de Castao de Indias en
Polvo y colocar en un matraz de fondo redondo de
250 mL. Agregar exactamente 100 mL de Disolvente A y
pesar el matraz lleno con una precisin de 0, 1 g. Aco-
plar un condensador al matraz, someter a reflujo du-
rante 30 minutos y dejar que se enfre. Ajustar al peso
inicial agregando Disolvente A segn sea necesario y fil-
trar. Transferir 30,0 mL del filtrado a un matraz de
fondo redondo y evaporar los disolventes al vaco. Di-
solver el residuo con 20 mL de cido clorhdrico O, 1 N y
transferir cuantitativamente con ayuda de dos porciones
adicionales de 5 mL de cido clorhdrico O, 1 N a un
embudo de separacin de 250 mL. Agregar 20 mL de
1-propanol y 50 mL de cloroformo, y agitar vigorosa-
mente durante 2 minutos. Separar la capa clorofrmica
y agregar Disolvente B a la tase superior remanente en
el embudo de separacin. Agitar vigorosamente durante
2 minutos y separar la capa clorofrmica. Combinar las
capas clorofrmicas en un matraz de fondo redondo y
evaporar hasta sequedad al vaco. Evaporar los disolven-
tes remanentes con ayuda de una corriente de aire. La-
var el residuo con dos porciones de 1 O mL de ter, fil-
trar, lavar el filtro con 1 O mL de ter y desechar los
filtrados etreos. Despus de la evaporacin del ter re-
sidual, agregar al residuo una porcin de 1 O mL de
cido actico glacial y pasar a travs del filtro seco
usado previamente a un matraz volumtrico de 50 mL.
Repetir la adicin de cido actico glacial seguida de
dos pasos adicionales de filtracin, combinando los fil-
trados en el matraz volumtrico. Lavar el matraz de
fondo redondo con pequeas cantidades de cido ac-
tico glacial y filtrar en el matraz volumtrico. Diluir con
cido actico glacial a volumen.
Condiciones instrumentales
Longitud de onda: 540 nm
Modo: Visible
Blanco: cido actico glacial
Anlisis: Transferir 1 mL de la Solucin estndar A, de la
Solucin estndar B, de la Solucin estndar C, de la So-
lucin muestra y del Blanco a sendos tubos de ensayo
con tapn. Agregar 4,0 mL de Reactivo a cada tubo,
tapar los tubos y colocarlos en un bao de agua a 60
durante 25 minutos, agitando ocasionalmente. Medir
las absorbancias de la Solucin muestra reaccionada y de
las Soluciones estndar A, By C reaccionadas, y corregir
Supiememos Dietticos / C1-,1 cHlO de Indias 6369
por el Blanco. Graficar las absorbancias obtenidas de las
Soluciones estndar A, B y C reaccionadas en funcin de
sus concentraciones, en mg/mL, de ER Escina USP en la
Solucin estndar correspondiente. A partir de ias grfi-
cas as obtenida~, determi11dr la concentracin, C, en
mg/mL, de glicsidos triterpnicos, como escina
(CssHB<,024), en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de glicsidos triterpnicos como
escina en la porcin de Castao de Indias en Polvo
tomada:
Resultado= (C/V\/) x (50/3)
C = concentracin de glicsidos triterpnicos en la
Solucin muestra, segn se obtuvo
anteriormente (mg/mL)
W = peso de Castao de Indias en Polvo tomado
para preparar la Solucin muestra (g)
Criterios de aceptacin: No menos de 3,0% de glicsi-
dos triterpnicos, calculado como escina (CssHs624),
con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS, Mtodo,!// (231): No ms de 20 ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 6 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 104 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias es no ms de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmone/la spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Polvo de color marrn ama-
rillento, inodoro, con un sabor algo harinoso, desagrada-
blemente amargo y persistente. Presenta numerosas goti-
tas de aceite graso de diferentes tamaos que estn
libres o dentro del tejido incoloro de pared delgada de
los cotiledones. Los fragmentos de la testa consisten en
clulas esclerenquimticas de pared gruesa con puntua-
ciones. Tambin se presenta lo siguiente: grnulos de al-
midn individuales piriformes, redondeados o reniformes
de mayor tamao de 15 a 30 m de dimetro, grnulos
individuales ms pequeos de 3 a 1 O m y slo unos
pocos grnulos compuestos que consisten en 2-4 granos
individuales que forman filas de hasta 45 m de largo.
Muchos de los grnulos de almidn tienen un hilio bies-
trellado o poliest~ellado, pero rara vez simple.
SUSTANCIAS EXTRAIBLES
Anlisis: Proceder segn se indica en Artculos de Origen
Botnico (561 ), Extractos Solubles en Alcohol, Mtodo 2,
excepto que se debe usar una mezcla de metano! y
agua (8:2) en lugar de alcohol.
c;::riterios de aceptacin: No menos de 18,0%
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105'
dur,ante 2 horas: pierde }O ms de 10,0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en envases
bien cerrados y resistentes a la luz. Proteger de la
humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn, y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla11ta de donde se obtuvo el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
FR Fsrina LJSP
6370 Castailo df' India\ / S111lnrwnim Oieiiiws
Extracto en Polvo de Castao de Indias
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Castano de Indias ,se prepara a partir
de Castano de Indias mediante extraccion con mezclas de
alcohol-agua o mezclas de metanol-agua. La relacin en-
tre el mat_erial vegetal inicial y el extracto est entre 5:1 y
8:1. Contiene no menos de 90,0% y no ms de 110,0%
de la cantidad declarada de glicsidos triterpnicos, calcu-
lado con respecto a la materia seca como escina
(CssHs624). Puede contener sustancias agregadas
adecuadas.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 5 mg/mL de ER Escina USP en
metano!
Soluc_in muestra: Agregar a 1 O mL de metanol una
cant1d~d de Extracto en Polvo equivalente a 25 mg de
la cant1_dad declarada de glicsidos triterpnicos y agi-
tar. Deiar en reposo durante 15 minutos antes de usar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 1 O L
Fase mvil: Usar la fase superior de una mezcla de
1-butanol, cido actico glacial y agua (5:1 :4).
Solucin reveladora: Metano! cido actico glacial
cido sulfrico y p-anisaldehd (85: 1 O: 5: 0,5) '
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de no
menos de 15 cm y secar la placa en una corriente de
aire. Rociar la placa con Solucin reveladora, calentar a
1 ~O durante 5 minutos y observar la placa bajo luz
diurna.
Cri!erios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
oon muestra presenta una zona de color violeta azulado
correspondiente a escina, comparable en posicin y
color a la zona principal en el cromatograma de la Solu-
cin estndar. Por encima de esta zona, el cromato-
grama de la Solucin muestra presenta diversas zonas
~strechas de color marrn a rojo amarronado menos
intensas que la zona correspondiente a escina.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS TRITERPNICOS
Disolvente A: Metanol y agua (13:7)
Disolvente B: Usar la fase inferior de una mezcla de
cloroformo, cido clorhdrico O, 1 N y 1-propanol
(5:3:2).
Reactivo: Disolver 75 mg de cloruro frrico en 50 mL
de cido actico glacial. Agregar 50 mL de cido sul-
frico, mientras se agita y enfra. Preparar inmediata-
mente antes de usar.
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Escina USP en
cido actico glacial, agitando durante 1 minuto.
Solucin estndar B: 0,4 mg/mL de ER Escina USP en
cido actico glacial, agitando durante 1 minuto.
Solucin estndar C: 0,6 mg/mL de ER Escina USP en
cido actico glacial, agitando durante 1 minuto.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto
en Polvo, equivalente a 50 mg de la cantidad declarada
de glicsidos triterpnicos, a un matraz de 50 ml. Agre-
gar 20 ml de cido clorhdrico O, 1 N y agitar durante 5
minutos. Filtrar en un embudo de separacin de
250 mL con ayuda de dos porciones adicionales de
5 mL de cido clorhdrico O, 1 N. Agregar 20 mL de
1-propanol y 50 mL de cloroformo, y agitar vigorosa-
mente durante 2 minutos. Separar la capa clorofrmica
USP 38
y agregar Oi-,olvenle B a la fase superior remanente en
el embudo de separacin. Agitar vigorosamente durante
2 minutos y separar la capa clorofrmica. Comhinar las
capas clorofrmicas en uri matraz de fondo redondo y
evaporar hasta sequedad al vac10. Evaporar los disolven-
tes remanentes con ayuda de una corriente de aire. La-
var el residuo con dos porciones de 1 O ml de ter, fil-
trar, lavar el filtro con 1 O mL de ter y desechar los
filtrados etreos. Despus de la evaporacin del ter re-
sidual, agregar al residuo una porcin de 1 O mL de
cido actico glacial y pasar a travs del filtro seco
usado previamente a un matraz volumtrico de 100 ml.
Repetir la adicin de cido actico glacial seguida de
dos pasos adicionales de filtracin, combinando los fil-
trados en el matraz volumtrico. Lavar el matraz de
fondo redondo con pequeas cantidades de cido ac-
tico glacial y filtrar en el matraz volumtrico. Diluir con
cido actico glacial a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Visible
Longitud ,de onda: 540 nm
Blanco: Acido actico glacial
Anlisis: Transferir 1 mL de la Solucin estndar A, de la
Solucin estndar B, de la Solucin estndar C, de la So-
lucin muestra y del Blanco a sendos tubos de ensayo
con tapn. Agregar 4,0 mL de Reactivo a cada tubo,
tapar los tubos y colocarlos en un bao de agua a 60
durante 25 minutos, agitando ocasionalmente. Medir
las absorbancias de la Solucin muestra reaccionada y de
las Soluciones estndar A, By C reaccionadas, y corregir
por el Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones
estndar A, B y C reaccionadas en funcin de sus con-
centraciones, en mg/mL, de ER Escina USP en la Solu-
cin est_ndar correspondiente. A partir de las grficas,
determinar la concentracin, C, en mg/mL, de glicsi-
dos triterpnicos como escina (CssHs624) en la Solucin
muestra.
Calcular _el p~rc_entaje de la ca_~tidad declarada de glic-
s1dos tnterpenicos en la porc1on de Extracto en Polvo
tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin de glicsidos triterpnicos en la
Solucin muestra, segn se obtuvo
anteriormente (mg/mL)
Cu concentracin nominal de glicsidos
=
. . triterpnic<;>~ en la Solucin muestra (mg/ml)
Cntenos de aceptac1on: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de glicsidos triterpnicos, como escina
(CssHs624), con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231 ): No ms de 20 g/
9 (Oficial Oldic-2015)
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 2 ufc/g; y el recuento de ente-
robacterias no excede de 1 oi ufc/g.,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO <731>: Secar 1 g a 105'' durante 2
horas: pierde no ms de 5,0% de su peso.
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Botnicos (565), Requisitos Farmacopeicos Generales, para
Envasado y Almacenamiento, Disolventes Residuales y Resi-
duos de Plaguicidas para extractos en polvo.
USP 38 Suplementos Dietticos/ CempasCJChil 6371

REQUISITOS ADICIONALES longitud de onda analtica: 450 nm

ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- Paso de celda: 1 cm
permeables y resistentes a la luz. Almacenar en un lugar Blanco: Etanol
fresco. Ancli~i~
ETIQUETADO: La etiqueta indica PI nombre cientfico en Muestra: Solucin muestra
latn, y despus de la denominacin oficial, la parte de la [NOTA-La lectura de la absorbancia debe estar entre
planta de la que se prepar el artculo. La etiqueta tam- 0,2 AU y 1,0 AU. Si no fuera as, reajustar la dilucin
bin indica el contenido de glicsidos triterpnicos, el di- de la solucin.]
solvente o la mezcla de disolventes de extraccin usados Calcular el porcentaje de carotenoides totales como
para la preparacin, la relacin entre el material vegetal zeaxantina (C40Hs62):
crudo inicial y el Extracto en Polvo, y el nombre y conte-
nido de cualquier sustancia agregada. Cumple con los Resultado = A/(C x F)
requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) A = absorbancia de la Solucin muestra
ER Escina USP C concentracin de la Solucin muestra (g/mL)
=
F = coeficiente de extincin (f1%) de zeaxantina en
etanol (100 mL. g 1 . cm 1), 2480
Criterios de aceptacin: No menos de 36,0% de caro-
tenoides totales ( D como zeaxantina (C40Hs602) con
Extracto de Zeaxantina de Cempaschil respecto a la materia seca
CONTENIDO DE ZEAXANTINA
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica.]
Solucin A: terc-Butil metil ter
Solucin B: Agua
Solucin C: Metano!
CJI,
Diluyente: Mezcla de hexano, etanol, acetona y to-
lueno (10:6:7:7)
(40Hso2 568,87 Fase mvil: Elucin en gradiente. Ver la Tabla 7.
(all-E)-1, 1'-(3,7,12, 16-Tetramethyl-1, 3,5,7, 9, 11, 13,15, 1 7-oc-
tadecanonaene-1, 18-diyl)bis[2,6,6-trimethylcyclohexene- Tabla 1
3-ol]; Tiempo Solucin A Solucin B Solucin C
3R, 3' R-/3,/3-Caroteno-3, 3'-diol [148-68-3]. (min) (%) (%) (%)
DEFINICIN 00 5 7 88
El Extracto de Zeaxantina de Cempaschil es un extracto 15 15 7 78
purificado, derivado de las flores de Tagetes erecta L., la 30 45 7 48
cual se cultiva de las semillas de variedades del cultivar 60 75 65 18 5
Scarletade rico en zeaxantina. El extracto contiene no me- 66 75 19
nos de 36,0% de carotenoides totales, calculado como ----~-6-
zeaxantina (C40Hs602), no menos de 30,0% de todo-trans- 76 5 7 88
zeaxantina y no ms de 8,0% de lutena, calculado con 86 5 7 88
respecto a la materia seca.
Solucin madre del estndar: Transferir 20,0 mg de ER
IDENTIFICACIN Extracto de Zeaxantina de Cempaschil USP a un ma-
A. traz volumtrico de 1 00 mL, agregar 75 mL de Diluyente
Solucin muestra: Usar la Solucin muestra de la al matraz para suspender la muestra y someter a ultra-
prueba de Contenido de Carotenoides Totales. sonido durante 5 minutos. Diluir con Diluyente a volu-
Anlisis: Registrar el espectro UV-Vis desde 300-600 men y mezclar bien. Dejar que la materia insoluble sedi-
nm. mente durante al menos 1 O minutos. Pasar el
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta sobrenadante a travs de un filtro de membrana con un
un hombro a aproximadamente 428 nm, un mximo tamao de poro de 0,45 m.
de absorcin a aproximadamente 450 nm y otro m- Solucin estndar: Transferir 0,5 mL de Solucin madre
ximo a aproximadamente 478 nm. del estndar a un vial de 8 mL y evaporar hasta seque-
B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu- dad con ayuda de una corriente de nitrgeno. Disolver
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se- el residuo en 4,0 mL de una mezcla de terc-butil metil
gn se obtienen en la prueba de Contenido de ter y metano! (5:95).
Zeaxantina. Solucin madre de la muestra: Transferir 20,0 mg de
C. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu- Extracto a un matraz volumtrico de 1 00 mL, agregar
cin muestra corresponde al de 3R,3'R-/3,f3-caroteno-3,3'- 75 mL de Diluyente al matraz para suspender la muestra
diol de la Solucin estndar, segn se obtienen en la y ~ometer a ultrasonido durante 5 minutos. [PRECAU-
prueba de Composicin Estereoisomrica. CION-Las cargas electrostticas pueden causar la disper-
sin descontrolada de la muestra y que sta se pegue a
COMPOSICIN las paredes del matraz. Usando Diluyente, lavar el pro-
CONTENIDO DE CAROTENOIDES TOTALES ducto con cuidado en el matraz.] Diluir con Diluyente a
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica.] volumen y mezclar bien. Dejar que la materia insoluble
Solucin madre de la muestra: Usar la Solucin madre sedimente durante al menos 1 O minutos. Pasar el sobre-
de la muestra de la prueba de Contenido de Zeaxantina. nadante a travs de un filtro de membrana con un ta-
Solucin muestra: Transferir 2,0 mL de Solucin madre mao de poro de 0,45 m.
de la muestra a un matraz volumtrico de 1 00 mL, diluir Solucin muestra: Transferir 0,5 mL de Solucin madre
con etanol a volumen y mezclar bien. de la muestra a un vial de 8 mL y evaporar hasta seque-
Condiciones instrumentales dad rnn ayuda de una corriente de nitrgeno. Disolver
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).) el residuo en una mezcla de 4,0 mL de terc-butil metil
ter y metano! (5:95).
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografia (621 /, Aptitud del Sistema.)
6372 CemrasCichil /Suplementos Dietticos USP 38

Modo: HPLC Tabla 2

Detector: 450 nm - --------- ----------~------ 1,--~

Tiempo 1 n-Hexano j 2-Propanol

Columna: 2,0 mm x 15 crn; relleno L62 de 3 rn
Velocidad de flujo: 0,4 mL/min ( min) I {_Djtl_ _____+------'l'-'l'-"
1.1...'- - - -

Volumen de inyeccin: 1 O L 1 Q,Q_____--+-_ _ _ _ _9_)________ L 5

Aptitud del sistema c_ ____ ____2Q___ ---J---- _ _c:_95"-----t-----5"-------j
Muestra: Solucin estndar 55 50 50
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados 63 50 50
para lutena y zeaxantina son 0,87 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma Solucin madre del estndar: O, 1 mg/mL de ER Ex-
de la Solucin estndar es similar al cromatograma de tracto de Zeaxantina de Cempaschil USP en cloruro de
referencia provisto con el ER Extracto de Zeaxantina metileno. Someter a ultrasonido, si fuera necesario,
de Cempaschil USP usado. . hasta disolver la muestra.
Resolucion: No menos de 1,0 entre zeaxantina y Solucin estndar: Transferir 1,0 mL de Solucin madre
lutena del estndar a un tubo de ensayo de 15 ml y evaporar
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de hasta sequedad con ayuda de una corriente de nitr-
zeaxantina geno. Disolver el residuo en una mezcla de 1 0,0 ml de
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para 2-propanol y hexano (5:95). Pasar a travs de un filtro
el pico de zeaxantina de membrana con un tamao de poro de 0,45 m.
Anlisis Solucin madre de la muestra: Pesar 1O mg de Ex-
Muestra: Solucin muestra tracto en un matraz volumtrico de 1 00 ml, agregar
Calcular el porcentaje de todo-trans-zeaxantina 85 mL de cloruro de metileno, someter a ultrasonido y
(C0Hs602) en la porcin de la muestra tomada: mezclar por rotacin suave hasta disolver. Diluir con
cloruro de metileno a volumen.
Resultado = (ru/ rr) x T Solucin muestra: Transferir 1,0 mL de Solucin madre
ru = respuesta del pico de todo-trans-zeaxantina de
de la muestra a un tubo de ensayo de 15 mL y evaporar
la Solucin muestra hasta sequedad con ayuda de una corriente de nitr-
r1 = suma de las respuestas de todos los picos de
geno. Disolver el residuo en una mezcla de 1 0,0 mL de
la Solucin muestra 2-propanol y hexano (5:95). Pasar la so~ucin a travs
T = porcentaje de carotenoides totales, segn se
de un filtro de membrana con un tamano de poro de
determina en la prueba de Contenido de 0,45 m.
Carotenoides Totales Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografla (621 )1 Aptitud del Sistema.)
Criterios de aceptacin: No menos de ~0,0% de todo-
Modo: HPLC
trqns-zeaxantina con respecto a la materia seca
Detector: 450 nm
LUTEINA V OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L51 de 5 m
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica.]
Velocidad de flujo: 0,8 ml/min
Fase mvil, Solucin estndar, Solucin muestra, Sis-
Volumen de inyeccin: 20 L
tema cromatogrfico y Aptitud del sistema: Proce-
der segn se indica en la prueba de Contenido de Zea- Aptitud del sistema
xantina. Muestra: Solucin estndar
Anlisis
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
Muestra: Solucin muestra para (3R,3'S meso)-zeaxantina, (3R,3'R)-zeaxantina y
(3R,3'R,6'R)-lutena son 0,92; 1,00 y 1,12,
Calcular el porcentaje de lutena en la porcin de la
muestra tomada: respectivamente.]
Requisitos de aptitud .
Resultado = (ru/ r1) x T Resolucin: La resolucin entre cada par de picos de-
bidos a (3R,3'S meso)-zeaxantina, (3R,3'R)-zeaxantina
ru = respuesta del pico de lutena de la Solucin y (3R,3' R,6' R)-lutena es no menos de 1,0.
muestra Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
rr = suma de las respuestas de todos los picos de de la Solucin estndar es similar al cromatograma de
la Solucin muestra referencia provisto con el ER Extracto de Zeaxantina
T = porcentaje de carotenoides totales, segn se de Cempaschil USP usado.
determina en la prueba de Contenido de Anlisis
Carotenoides Totales Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de otros compuestos relacionados Identificar los picos de los analitos pertinentes en el cro-
en la porcin de la muestra tomada: matograma de la Solucin muestra, comparndolos con
los del cromatograrna de la Solucin estndar obtenido
Resultado = (ru!r1) x 100 en Aptitud del sistema. , .
Calcular los porcentajes de (3R,3 S meso)-zeaxant1na y
ru = respuesta de los picos de compuestos __ (3R,3'R)-zeaxantina en la porcin de la muestra
relacionados individuales de la Soluoon tomada:
muestra
r1 = suma de las respuestas de todos los picos de Resultado= (ru!rr) x 100
la Solucin muestra
Criterios de aceptacin . ~ respuesta del pico del analito correspondiente
Lutena: No ms de 8,0% con respecto a la materia ~ suma de !as respuestas de dos picos
seca
Otros cqmpuestos rela,cionados: No ms de 1,0%
COMPOSICION ESTEREOISOMERICA
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica.]
Fase mvil: Elucin en gradiente. Ver la Tabla 2.
USP 38
Criterios de aceptacin
(3R,3'R)-Zeaxantina: No menos de 99,0%
(3R,3'5 meso)-71'axantina: No ms de 1,0%
IMPUREZAS
METALES PESADOS Mtodo 11 (231): No ms de 20 g/g
RESIDUO DE INCINRACIN (281): No ms de 10,0%
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar una muestra al vaco a 105 durante 3
horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 25,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto de Zeaxantina de Cempaschil USP
Centella asiatica
DEFINICIN
La Centella asiatica consiste en las partes areas secas de
Centella asiatica (L.) Urb. [Sin: Hydrocotyle asiat!ca L.]
(Fam. Apiaceae). Tambin se la conoce comerc1almen~e
como gotu kola. Contiene no menos de 2,0% de d~riva
dos triterpnicos, calculado con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIN
A. La Centella asiatica cumple con los requisitos de Prue-
bas Especficas, Caractersticas Botnicas. ,
8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Asiaticsido
USP en metano!
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP en metano!. Someter a
ultrasonido durante aproximadamente 1 O minutos, cen-
trifugar, y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Aproximadamente 0,5 g de Centella
asiatica, reducida a polvo fino, en 5 ~L de metano!.
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar,
y usar el sobrenadante.
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 1 ~-15 m (placas
para TLC) o con un tamao promedio de part1cula de 5
m (placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L (placas para TLC) o 4 L
(placas para HPTLC) . filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
Fase mvil: Una mezcla de cloruro de metileno, meta-
nol y agua (14:6:1) ., ,. ,.
Solucin reveladora: Una soluc1on de ac1do sulfurico al
10% en metanol. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar,
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mo-
vil haya recorrido aproximad~mente tres cuar~os de la
placa. Retirar la placa de la camara, secar1 rociar con
Solucin reveladora, calentar durante 3 minutos a
120, y observar b~jo luz visible.
Criterios de aceptacion: El cromatogrdrna de la Solu-
cin muestra presenta una banda de col.ar, violeta en el
tercio inferior de la placa debida a as1at1cos1d.~, que, co-
rresponde en color y valor Rr a la de la Soluc1on estar;-
dar A; una banda de color violeta debida a madecaso-
Suplerneni<J~ lJipti-5ticos /Centella 6373
sido a un valor R, menor que el de asiaticsido; y do~
bandas de color violeta adicionales en el tercio superior
de la placa debidas a cido asitico y cido madecs1co.
Las bandas detectadas en la :)QJuoon mue~1ru cor~e~fJ' 1-
dcn en pmici11 y color a las bandas rlc la Soluc1on es
tndar B. Se pueden observar _otras ,bandas menores en
la Solucin muestra y la Soluc1on estandar B.
c. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC: El cromato- .
grama de la Solucin muestra de la prueba de _Contenido
de Derivados Triterpnicos presenta _un p_1co al tiempo de
retencin correspondiente al de as1at1cos1do en la Solu-
cin estndar A. Identificar otros picos de derivados triter-
pnicos en la Solucin muestra por comparacin con el
. cromatograma de la Solucin estndar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Ex~racto
en Polvo de Centella asiatica USP usado. La Soluc1on
muestra presenta picos adicionales correspondientes a
madecassido y asiati~_sido ,B. (estos dos y1cos p_u~den
coeluir), cido madecas1co, ac1do terminolico y ac1do
asitico.
COMPOSICIN ,
CONTENIDO DE DERIVADOS TRITERPENICOS
Solucin A: Diluir 3 mL de cido fosfrico con agua
hasta 1000 mL, mezclar, filtrar, y desgasificar.
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin 8
lmin) (%) (%)
o 78 22
65 45 55
66 5 95
75 5 95
76 78 22
~-
85 78 22
Solucin estndar A: 0,05 mg/mL de ER Asiaticsido
USP en metano!
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
cin de ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP en
metano! hasta obtener una solucin con una concentra-
cin de aproximadamente 5,0 mg/mL. Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros mL del filtrado. . .
Solucin madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 1,0 g de Centella asiatica, reducida a polvo fino y
pesada con exactitud, a un aparato de Soxhlet. Agregar
100 mL de metanol extraer durante 8 horas, enfriar, y
diluir con metanol hasta 100 mL. Pasar a travs de un
m o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
[NOTA-Usar un dedal con un tamao adecuado para
que el volumen de metanol usado en la extraccin en
el aparato de Soxhlet sea al menos el doble del volu-
men del dedal.] . _.
Solucin muestra: Diluir 5,0 mL de Soluc1on madre de
la muestra con metano! hasta 1 O ml.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O ~tL
Aptitud del sistem~ , ..
Muestras: Solucion estandar A y Soluc1on estandar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP usado.
6374 Centella /Suplementos Diett>tir ' USP 38
Factor de asimetra: Entre 0,8 y 2,0 para el pico de
asialic~ido, Solucin estndar A
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de
c'cido 111dJeecs1Lu y cido term1no11co, JOluC1on estn-
dar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de-
terminada a partir del pico de asiaticsido en inyec-
ciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. [NOTA-La Solucin estndar A, Solu-
cin estndar B y Solucin muestra se mantienen esta-
bles durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
Solucin estndar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Cente-
lla asiatica USP usado, identificar los tiempos de reten-
cin de los picos correspondientes a los diferentes de-
rivados triterpnicos. Los tiempos de retencin
relativos aproximados para los diferentes derivados tri-
terpnicos se proporcionan en la siguiente tabla.
Tiempo de Retencin
Analito Relativo Aproximado
Madecassido o 71
Asiaticsido B o 72
Asiaticsido 1 00
cido madecsico 2 40
cido terminlico 2 44
cido asitico 312
Calcular por separado los porcentajes de la suma de
madecassido y asiaticsido B (estos dos picos pueden
coeluir), asiaticsido, la suma de cido madecsico y
cido terminlico, y cido asitico en la porcin de
Centella asiatica tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V /W) x D x F x 100
ru = respuestas de los picos de derivados
triterpnicos de la Solucin muestra
= respuesta del pico de asiaticsido de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de ER Asiaticsido USP en la
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin madre de la
muestra (mL)
w = peso de Centella asiatica usada para preparar
la Solucin madre de la muestra (mg)
D = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra a partir de la Solucin madre de la
muestra
F = factores de conversin para los analitos:
1,00 para asiaticsido; 1,01 7 para la suma de
madecassido y asiaticsido B; 0,526 para la
suma de cido madecsico y cido
terminlico y 0,509 para cido asitico
Criterios de aceptacion: Sumar los porcentajes de los
diferentes derivados triterpnicos: No menos de 2,0%
con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS, Mtodo)// (231): No ms de 20 ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal combinado de microorganismos aerobios no excede
de 10 5 ufc/g, el recuento total combinado de hongos
filamentosos y levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g y el
recuento de bacterias Gram negativas tolerantes a la bilis
no excede de 1 oi ufc/g. ,
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con lm reyuisiim rlP las pruPbas para determinar la au
sencia de Salmone!la spp. y Escheric/Jia coli.
PRUE:BAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS 80T NICAS
Macroscpicas: El tallo es delgado, de color marrn
amarillento, con entrenudos largos e inserciones de ra-
ces en los nudos; las hoas son de color verde grisceo,
simples, alternadas o agrupadas en los nudos, renifor-
mes o elptico oblongas, con venacin palmada, por lo
general con 7 venas, pice obtuso, margen crenado,
base cordada, de tamaos variables, 1-4 cm de largo,
2-4 cm y en ocasiones de hasta 7 cm de ancho, las
hojas jvenes presentan unos pocos tricomas en la su-
perficie inferior y las hojas adultas son glabras; los pe-
colos son largos, estriados, con base ms ancha y en-
vainada; la inflorescencia, si estuviera presente, es una
sola umbela y consiste en 3 flores, en raras ocasiones en
2 4; las flores son muy pequeas (aproximadamente
2 mm), pentmeras y tienen un ovario inferior; el fruto
es de color gris amarronado, con cremocarpio orbicular,
de hasta 5 mm de largo, lateralmente muy aplanado y
tiene 7-9 crestas curvadas prominentes. El artculo far-
macopeico consta de masas de color verde a verde
amarillento compuestas en su mayora fragmentos de
hojas y tallos; el olor es suave; el sabor es ligeramente
amargo a dulce.
Histologa
Se~cin transversal de los tallos: Capa epidrmica,
celulas subredondeadas o subcuadradas; de 2-4 capas
de clulas colenquimticas; 6-8 capas de clulas pa-
renquimticas de paredes delgadas con espacios inter-
celulares; 6-7 haces vasculares colaterales, vasos de xi-
lema dispuestos en forma radial, grupos de fibras
ligeramente lignificadas que ocurren en la parte exte-
rior del floema; mdula grande, compuesta de clulas
parenquimticas de paredes delgadas; canales secreto-
res, compuestos de 5-7 clulas secretoras, observadas
en los radios de la corteza y medulares.
Seccin transversal de las hojas: Epidermis superior e
inferior; mesfilo compuesto de clulas parenquimti-
cas, algunas contienen cristales de oxalato de calcio;
2-3 capas de colnquima presentes en la regin de la
nervadura central junto a ambas capas epidermicas;
haces vasculares en el centro con xilema en la parte
ventral y floema en la parte dorsal. La seccin trans-
versal de los pecolos en forma de U presenta una epi-
dermis inferior y una superior, seguidas por 2-3 capas
de colnquima junto a ambas capas epidrmicas; una
zona parenquimtica amplia, algunas clulas contienen
cristales de oxalato de calcio; 7 haces vasculares que
forman una U en la zona parenquimtica, donde los
dos presentes en los brazos que se proyectan estn
menos desarrollados.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 7,0%, del cual no ms de 5,0% con-
siste en rganos subterrneos y no ms de 2% consiste
en otra materia extraa.
PRDIDA POR SECADO (731): Secar 1,0 g de Centella asia-
tica reducida a polvo fino a 105 durante 2 horas: pierde
no ,ms de 12,0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No ms de 12%, determinado en 1,0 g de Centella asia-
tica, reducida a polvo finq. ~
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 3,5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperctlura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta contenidas en el artculo. La etiqueta indica que
el artculo est exento de los requisitos de las Adverten-
USP 38
cim Generales con respecto J !J declaracin sobre emba-
razo y lactancia (seccin 10.40.50 Etiquetado de los Pro-
ductos Botnicos).
ESTNDARES DE REFERENCIA USP ( l 1)
CR Asiaticsido USP
ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP
Centella asiatica en Polvo
DEFINICIN
La Centella asiatica en Polvo es Centella asiatica reducida a
polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de 2,0%
de derivados triterpnicos, calculado con respecto a la
materia seca.
IDENTIFICACIN
A. La Centella asiatica en Polvo cumple con los requisi-
tos de Pruebas Especficas. Caractersticas Botnjcas.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Asiaticsido
USP en metano!
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Centella miatica USP en metano!. Someter a
ultrasonido durante aproximadamente 1 O minutos, cen-
trifugar, y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Aproximadamente 0,5 g de Centella
asiatica en Polvo en 5 mL de metano!. Someter a ultra-
sonido durante 1 O minutos, centrifugar, y usar el
sobrenadante.
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 1 0-15 m (placas
para TLC) o con un tamao promedio de part1cula de 5
m (placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L (placas para TLC) o 4 L
(placas para HPTLC)
Fase mvil: Una mezcla de cloruro de metileno, meta-
no! y agua (14:6:1)
Solucin reveladora: Una solucin de cido sulfrico al
1 0% en metano!. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar, rociar con
Solucin reveladora, calentar durante 3 minutos a
120, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una banda violeta en el tercio
inferior de la placa debida a asiaticsido, que corres-
ponde en color y valor R, a la de la Solucion estndar A;
una banda violeta debida a madecassido a un valor R,
menor que el de asiaticsido; y dos bandas violetas adi-
cionales en el tercio superior de la placa debidas a
cido asitico y cido madecsico. Las bandas detecta-
das en la Solucin muestra corresponden en posicin y
color a las bandas de la Solucin estndar B. Se pueden
observar otras bandas menores en la Solucin muestra y
la Solucin estndar B.
c. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC: El cromato-
grama de la Solucin muestra de la prueba de Contenido
dP Oprivados Triterpnicos presenta un pico al tiempo de
retencin correspondiente al de asiaticsido en la Solu-
cin estndar A. Identificar otros picos de derivados triter-
pnicos en la Solucin muestra por comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
Suplementos Dietticos / Centella 6) 7 5
en Polvo de Centella asiatica USP usado. La Solucin
muestra pre~er1la picos adicionales correspondientes a
madecassido y asiaticsido B (estos dos picos pueden
c...uelui1 ), dciJu iT1adt:csico, cido tcrmn!ico y cldo
asitico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE DERIVADOS TRITERPNICOS
Solucin A: Diluir 3 mL de cido fosfrico con agua
hasta 1000 mL, mezclar, filtrar, y desgasificar.
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B
lmin) f/o\ (O/o)
o 78 22
65 45 55
66 5 95
75 5 95
76 78 22
85 78 ___ 22____
Solucin estndar A: 0,05 mg/mL de ER Asiaticsido
USP en metano!
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
cin de ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP en
metano! hasta obtener una solucin con una concentra-
cin de aproximadamente 5,0 mg/ml. Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Solucin madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 1,0 g de Centella asiatica en Polvo, pesados con
exactitud, a un aparato de Soxhlet. Agregar 100 mL de
metano!, extraer durante 8 horas, enfriar, y diluir con
metano! hasta 100 mL. Pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o me-
nor, desechando los primeros mL del filtrado. [NOTA-
Usar un dedal con un tamao adecuado para que el
volumen de metano! usado en la extraccin en el apa-
rato de Soxhlet sea al menos el doble del volumen del
dedal.]
Solucin muestra: Diluir 5,0 mL de Solucin madre de
la muestra con metano! hasta 1 O ml.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP usado.
Factor de asimetra: Entre 0,8 y 2,0 para el pico de
asiaticsido, Solucin estndar A
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de
cido madecsico y cido terminlico, Solucin estn-
dar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de-
terminada a partir del pico de asiaticsido en inyec-
ciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. [NOTA-La Solucin estndar A, la So-
lucin estndar By la Solucin muestra se mantienen
estables durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, la
Solucin estndar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Cente-
6376 Centella / )11p!Prrwntos Dietticos
/la asiatica USP usado, identificar los tiempos de reten-
c1on de los picos correspondientes a los diferentes de-
rivados triterpnicos. Los tiempos de retencin
rPlntivos aproximado:. p~u !o~ diferentes derivado~ lti-
terpnicos se proporc ion;in en la siquiente tabla.
------~
Tiempo de Retencin
Analito Relativo Aoroximado
Madecassido o 71
Asiaticsido B o 72
Asiaticsido - 1 00
cido madecsico 2 40
cido terminlico
2 44
cido asitico 3 12
Calcular por separado los porcentajes de la suma de
madecassido y asiaticsido B (estos dos picos pueden
coeluir), asiaticsido, la suma de cido madecsico y
cido terminlico y cido asitico en la porcin de
Centella asiatica en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x D x F x 100
ru = respuestas de los picos de derivados
triterpnicos de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de asiaticsido de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de ER Asiaticsido USP en la
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin madre de Ja
muestra (mL)
W = peso de Centella asiatica en Polvo usado para
preparar la Solucin madre de la muestra
(mg)d dI . , 1 S I .,
D = f actor e 1 uc1on para preparar a o uoon
muestra a partir de la Solucin madre de la
muestra
F factores de conversin para analitos: 1,00 para
= y 30:1. Contiene no menos de 90,0% y no ms de
asiaticsido; 1,01 7 para la suma de
madecassido y asiaticsido B; 0,526 para la
suma de cido madecsico y cido
terminlico, y 0,509 para cido asitico
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de los
diferentes derivados triterpnicos: No menos de 2,0%
con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo JI/ (231): No ms de 20 ppm
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , en Polvo de Centella asiatica equivalente a aproximada-
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: De color gris verdoso a ma-
rrn verdoso; olor leve; sabor ligeramente amargo a
dulce. Al microscopio, facciones de clulas epidermicas
de las hojas con cutcula estriada irregular, presentan es-
tomas anisocticos, algunos paracticos y en raras ocasio-
nes anomocticos; las clulas epidrmicas de las hojas j-
venes presentan tricomas no glandulares unicelulares y
en ocasiones multicelulares; canales secretores compues-
tos de 5-7 clulas secretoras; clulas parenquimticas, al-
gunas presentan prismas o rosetas de oxalato de calcio;
haces de fibras septadas estrechas en el tallo; vasos esp1-
USP 38
ralados; fragmentos de los frutos, capas de clula~ anchas
dispuestas en torma de parque, vasos anillados, celulas
parenquimticas que contienen grnulos de almidn sim-
P,ies o compuestos.
PRDIDA POR SECADO <731 :< Secar 1 'o g .de Centella, asia-
tica en Polvo a 105 durante 2 horas: pierde no mas de
12,0% de su peso.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561 ):
No ms de 12%, determinado en 1,0 g de Centella asia-
tica en Polvo ,
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 3,5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta contenidas en el artculo. La etiqueta indica que
el artculo est exento de los requisitos de las Adverten-
cias Generales con respecto a la declaracin de embarazo
y lactancia (seccin 10.40.50, Etiquetado de Productos Bo-
tnjcos).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Asiaticsido USP
ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP
Extracto en Polvo de Centella asiatica
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Centella asiatica se prepara a partir
de Centella asiatica mediante extraccin con alcohol, me-
tano!, acetona o una mezcla de estos disolventes. La rela-
cin entre el material vegetal y el extracto est entre 65:1
110,0% de la cantidad declarada de derivados triterpni-
cos; la cantidad declarada de derivados triterpnicos es no
ms de 40%, calculado con respecto a la materia seca
como la suma de madecassido, asiaticsido B, asiatic-
sido, cido madecsico, cido terminlico y cido asitico.
Puede contener sustancias agregadas adecuadas como
portadores.
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Asiaticsido
USP en metano!
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP en metano!. Someter a
ultrasonido durante aproximadamente 1 O minutos, cen-
trifugar, y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto
mente 5 mg de derivados triterpnicos a un tubo de
centrfuga. Agregar 5 mL de metano!, someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar, y usar el
sobrenadante.
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 10-15 pm (placas
para TLC) o con un tamao promedio de partcula de 5
m (placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 1 O ~tL (placas para TLC) o 4 L
(placas para HPTLC)
Fase mvil: Una mezcla de cloruro de metileno, meta-
no! y agua (14:6:1)
Solucin reveladora: Una solucin de cido sulfrico al
10% en metano!. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
USP i8
Anlisis
Muestras: 'io/uC1on estandar A, Solucin esl11dur By
Solucin muestra
Aplicar las muestras en OdllUds d u11d pi,;ca pa;a CO-
rnatografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar, rociar con
Solucin reveladora, calentar durante 3 minutos a
120, y examinar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una banda violeta en el tercio
inferior de la placa debida a asiaticsido, gue corres-
ponde en color y valor Rf a la de la Solucion estndar A;
una banda violeta debida a madecassido a un valor RF
menor que el de asiaticsido; y dos bandas violetas adi-
cionales en el tercio superior de la placa debidas a
cido asitico y cido madecsico. Las bandas detecta-
das en la Solucin muestra corresponden en posicin y
color a las bandas de la Solucin estndar B. Se pueden
observar otras bandas menores en la Solucin muestra y
la Solucin estndar B.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC: El cromato-
grama de la Solucin muestra de la prueba de Contenido
de Derivados Triterpnicos presenta un pico al tiempo de
retencin correspondiente al de asiaticsido en la Solu-
cin estndar A. Identificar otros picos de derivados triter-
pnicos en la Solucin muestra por comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Centella asiatica USP usado. La Solucin
muestra presenta picos adicionales correspondientes a
madecassido y asiaticsido B (estos dos picos pueden
coeluir), cido madecsico, cido terminlico y cido
asitico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE DERIVADOS TRITERPNICOS
Solucin A: Diluir 3 mL de cido fosfrico con agua
hasta 1000 mL, mezclar, filtrar, y desgasificar.
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
-
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%)
o 78 22
65 45 55
66 5 95
75 5 95
76 "----
78 22
85 78 22
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Asiaticsido
USP en metano!
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
cin de ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP en
metano! para obtPner una solucin con una concentra-
cin de aproximadamente 5,0 mg/mL. Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamario de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Solucin muestra: Someter a ultrasonido una porcin
de Extracto en Polvo de Centella asiatica en metano!
para obtener und solucin con una concentracin de
aproximadamente 5,0 mg/mL. Antes de la inyeccin,
pasar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Sistema cromatogrfco
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
\111IPmPntm Dietticos /Centella 6377
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,0 rnLjmin
Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP usado.
Factor de asimetra: Entre 0,8 y 2,0 para el pico de
asiaticsido, Solucin estndar A
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de
cido madecsico y cido terminlico, Solucin estn-
dar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de-
terminada a partir del pico de asiaticsido en inyec-
ciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. [NOTA-La Solucin estndar A, la So-
lucin estndar B y la Solucin muestra se mantienen
estables durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, la
Solucin estndar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Cente-
lla asiatica USP usado, identificar los tiempos de reten-
cin de los picos correspondientes a los diferentes de-
rivados triterpnicos. Los tiempos de retencin
relativos aproximados para los diferentes derivados tri-
terpnicos se proporcionan en la siguiente tabla.
Tiempo de Retencin
Analito Relativo Aproximado
Madecassido o 71
Asiaticsido B o 72
Asiaticsido ------ ~-----
1 00
cido madecsico 2 40
cido terminlico 2 44
--------- ----------
-~-----
cido asitico 3 12
Calcular por separado los porcentajes de la suma de
madecassido y asiaticsido B (estos dos picos pueden
coeluir), asiaticsido, la suma de cido madecsico y
cido terminlico, y cido asitico en la porcin de
Extracto en Polvo de Centella asiatica tomada:
Resultado = (rll/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = respuestas de los picos de los derivados
triterpnicos de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de asiaticsido de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de ER Asiaticsido USP en la
Solucin estndar A (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de
Centella asiatica en la Solucin muestra
(mg/mL)
F = factores de conversin para analitos: 1,00 para
asiaticsido; 1,01 7 para la suma de
madecassido y asiaticsido B; 0,526 para la
suma de cido madecsico y cido
terminlico, y 0,509 para cido asitico
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de los
diferentes derivados triterpnicos: No menos de 90,0%
y no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de deri-
vados triterpnicos; la cantidad declarada de derivados
tritcrpnicos es no ms de 40%, calculado con respecto
a la materia seca.
6378 Centella ./ '\uplPmPntos Dietticos
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231 ): No ms de
20 P,pme (Of1c1al 01-dic-2015)
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
llSIS de Residuos de Plaguicidas <561 ): Cumple con los
requ1s1tos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO <2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10' ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Eschercha col.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Polvo de Centella asiatica a 105u durante 2 horas: pierde
no ms de 5% de su peso.
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botnicos
(565).
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de Ja
planta de donde se obtuvo el artculo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Asiaticsido USP
ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP
Triterpenos de Centella asiatica
DEFINICIN
Los Triterpenos de Centella asatica son una fraccin enrique-
cida en der_ivados triterpnicos de Centella asiatica. Se pre-
para a partir de Extracto de Centella asiatica usando disol-
ventes adecuados u otros medios. Contiene no menos de
90,0% de _deriva_dos triterpnicos, calculado con respecto
a la materia anhidra, como la suma de dos o ms de Jos
siguientes: madecassido, asiaticsido B, asiaticsido
cido madecsico, cido terminlico y cido asitico'. ---------~-----
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Asiaticsido
USP en metano!
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Centella asatica USP en metano!. Someter a
ul_trasonido durante aproximadamente 1 O minutos, cen-
trifugar, y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Triterpe-
nos de Centella asiatica equivalente a aproximadamente
5 mg de derivados triterpnicos a un tubo de centr-
fuga. Agregar 5 mL de metano!, someter a ultrasonido
durante 1 O minutos, centrifugar, y usar el
sobrenadante
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 10-15 m (placas
para TLC) o con un tamano promedio de partcula de 5
m (placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L (placas para TLC) o 4 L
(placas para HPTLC)
U~P 38
Fase mvil: Una me/cla de cloruro de metileno, meta-
no! y agua ( l 4:6: l)
Solucin reveladora: Una solucin de cido sulfrico al
l 0% en metanol. [NOT!l--Preparar en el momento de
su u~o.]
Anlisis
Muestras: Solucin estandar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
graffa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar rociar con
Solucin reveladora, calentar durante 3 minutos a
120, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
C/on muestra presenta una banda de color violeta en el
tercio inferior de la placa debida a asiaticsido, que co-
rresponde en color y valor RF a la de la Solucin estn-
dar A. La Solucin muestra presenta bandas adicionales
que corresponden a algunos o a todos los derivados
triterpnicos siguientes: una banda violeta debida a ma-
decassido a un valor RF menor que el de asiaticsido,
una banda violeta en el tercio superior de la placa de-
bida a cido asitico y una banda violeta debida a cido
madecsico a un valor R, menor que el de cido asi-
tico. Las bandas detectadas en la Solucin muestra co-
rresponden en posicin y color a bandas de la Solucin
estandar B. Se pueden observar otras bandas menores
en la Solucin muestra Y.. la Solucin estndar B.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: El cromato-
grama de la Solucin muestra de la prueba de Contenido
de Derivados Triterpncos presenta un pico al tiempo de
retencin correspondiente al de asiaticsido de la Solu-
cin estndar A. Identificar otros picos de derivados triter-
pnicos en la Solucin muestra por comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Centella asiatica USP usado. La Solucin
muestra presenta picos correspondientes a algunos o a
todos los siguientes: madecassido y asiaticsido B (estos
dos picos puede coeluir), cido madecsico, cido termi-
nlico y cido asitico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE DERIVADOS TRITERPNICOS
Solucin A: Diluir 3 mL de cido fosfrico con agua
hasta 1000 mL, mezclar, filtrar, y desgasificar.
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B
min lo lo
~~~--1-~~t-~-t=~-
L _ __ _ _.8=5 __ ____J_ 7________ 22
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Asiaticsido
USP en metano!
Sol_ucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
c1on de ER Extracto en Polvo de Centella aswtlca USP en
metano! para obtener una solucin con una concentra-
cin de aproximadamente 5,0 mg/ml. Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamano de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Solucin muestra: Aproximadamente 1,0 mg/mL de
Triterpenos de Centella asatca en metano!; someter a
ultrasonido si fuera necesario. Antes de la inyeccin, pa-
sar a travs de un filtro de membrana con un tamao
usr 7.8
OP poro OP 0,4'i pm o me11ur.' ue~echando los primeros
mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf/a (621 ;, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 pm
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O pL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Centella asiatica USP usado.
Factor de asimetra: Entre 0,8 y 2,0 para el pico de
asiaticfoido, Solucin estndar A
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de
cido madecsico y cido terminlico, Solucin estn-
dar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de-
terminada a partir del pico de asiaticsido en inyec-
ciones repetidas, Soiucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. [NOTA-La Solucin estndar A, la So-
lucin estndar B y Ja Solucin muestra se mantienen
estables durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
la Solucin estndar B y el cromatograma de referen-
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Centella asiatica USP usado, identificar los tiempos de
retencin de los picos correspondientes a los diferen-
tes derivados triterpnicos. Los tiempos de retencin
relativos aproximados para los diferentes derivados
triterpnicos se proporcionan en la siguiente tabla.
Tiempo de Retencin
Analito Relativo Aoroximado
1-'-'M~a=d=e~ca=s~=sid~o~-----------i----- _O,Zl__ ___---<
Asratrcsido L_ ______________ O 72
Asiaticsido 1 00
cido madecsico 2 40
cido terminlirn. ------------ _ _ _ ____1,__4____~
cido asitico 3 12
Calcular por separado los porcentajes de los derivados
triterpnicos en la porcin de Triterpenos de Centella
asiatica tomada:
Resultado = (ru/r,) x (Cs/Cu) x F x 100
r" = respuestas de los picos de los derivados
triterpnicos de la Soluci_n ,muestra
r1 = respuesta del pico de as1at1cos1do de la
Solucin estndar A
Cs Lo11centracin de ER Asiaticsido USP en la
= Solucion muestra: Someter a ultrasonido aproximada-
Soiucion estndar A (mg/mL)
C, ~. concentracin de Triterpenos de Centella
asiatica en la Solucin muestra (mg/mL)
F = factores de conversin para analitos: 1,00 para
asiaticsido; 1,01 7 para madecassido;
1,01 7 para asiaticsido B; 0,526 cido
madecsico; 0,526 para cido terminlico y
0,509 para cido asitico . Volumen de aplicacin: 1 O pl (placas para TLC) o 4 pL
Criterios de aceptacin: Sumar los porcenta1es de los
diferentes derivados triterpnicos: No menos de 90,0%
con respecto a la materia anhidra.
Sup/prrw11o' Dil?tPtico\ / Chancapiedra 6379
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231 ): No ms de
20 P,pm (Ofirnl Ol-dic-201 SJ ,
ARTCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 1 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 2 ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con Jos requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo I (921 ): No ms de 5%
OTROS REQUISITOS: Cumple con Jos requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botnicos
(565).
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artculo.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Asiaticsido USP
ER Extracto en Polvo de Centella asiatica USP
Chancapiedra
DCI: Phyllanthus amarus
DEFINICIN
La Chancapiedra consiste en las partes areas secas de .
Chancapiedra Schumach. (Fam. Euphorbraceae). Contiene
no menos de 0,25% de lignanos, calculado como la suma
de filantina e hipofilantina con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. La Chancapiedra cumple con Jos requisitos de Pruebas
Especficas en Caracterstir;,as Botnicas. ,
8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA <201)
Solucin estndar A: O, l mg/ml de ER Filantina USP
en metanol
Solucin estndar B: 1 O mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Chancapiedra USP en metanol. Someter a ul-
trasonido durante aproximadamente 1 O minutos, centri-
fugar y usar el sobrenadante. . .
mente 0,5 g de Chancapiedra reducida a polvo fino, en
5 ml de metanol durante 1 O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de partrcula de 10-15 ~tm (placas
para TLC) o con un tamao promedio de partcula de 5
um (placas para HPTLC)
(placas para HPTLC)
Fase mvil: Hexano y acetato de etilo (2:1)
Solucin reveladora: Una solucin de cido sulfrico al
10% en metanol. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
6380 ChcJm clpiedra / Suplementos Dletet1cos
Anlisis
Muestras: So/ucion estcindar A, Solucin estcindar 8 y
Solucion muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar, rociar con
Solucin reveladora, calentar durante 3 minutos a
1 20 y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una banda de color azul en el
tercio inferior de la placa debida a filantina, que corres-
ponde en color y RF a la del cromatograma de la Solu-
cin estndar A; una banda de color violeta debida a
hipofilantina a un RF superior que el de filantina; una
banda azul a un Rf superior que el de hipofilantina; y
una banda violeta adicional en el tercio superior de la
placa. Las bandas detectadas en el cromatograma de la
Solucin muestra corresponden en posicin y color a las
bandas en el cromatograma de la Solucin estndar B.
Se pueden observar otras bandas menores en los cro-
matogramas de la Solucin muestra y la Solucin estn-
dar B.
C. HPLC: El cromatograma de la Solucin muestra obte-
nido en la prueba de Contenido de Lignanos presenta un
pico al tiempo de retencin correspondiente al de filan-
tina en el cromatograma de la Solucin estndar A. Identi-
ficar otros picos de lignano en el cromatograma de la
Solucin muestra por comparacin con el cromatograma
de la Solucin estndar 8 y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Chanca-
piedra USP usado. El cromatograma de la Solucin mues-
tra presenta un pico adicional correspondiente a
hipofilantina.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE LIGNANOS
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio en 900 ml de agua, agregar 0,5 ml de cido fosf-
rico, diluir con agua hasta 1000 ml, mezclar, filtrar y
desgasificar.
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin A ( 4:6)
Solucin estndar A: O, 1 mg/ml de ER Filantina USP
en metano!
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
cin de ER Extracto en Polvo de Chancapiedra USP en
metano! para obtener una solucin con una concentra-
cin de aproximadamente 5,0 mg/ml. Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Chancapiedra, reducida a polvo fino y pesada con
exactitud, a un matraz de 250 ml equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 50 ml de metano!, so-
meter a reflujo en un bao de agua durante aproxima-
damente 20 minutos, dejar que sedimente y decantar el
sobrenadante. Repetir hasta que el ltimo extracto se
torne incoloro. Combinar los extractos, concentrar al
vaco y ajustar el volumen hasta 100 ml con metano!.
Antes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o me-
nor, desechando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 230 nm
Columna: 4,n mm x /') rm; rPllPnn L1 de 5 ~tm
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar 8 es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Chancapiedra USP usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de fi-
lantina e hipofilantina, Solucin estndar B
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
filantina, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de-
terminada a partir del pico de filantina en inyecciones
repetidas, Solucin estandar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra. [NOTA-La Solucin estndar A, la So-
lucin estndar B y la Solucin muestra se mantienen
estables durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, de
la Solucin estndar 8 y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Chan-
capiedra USP usado, identificar los tiempos de reten-
cion correspondientes a filantina e hipofilantina.
Calcular por separado los porcentajes de filantina e hi-
pofilantina en la porcin de Chancapiedra tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/VV) x F x 100
ru = respuesta del pico del analito de la Solucin
muestra
rs = respuesta del pico de filantina de la Solucin
estndar A
Cs =concentracin de ER Filantina USP en la
Solucin estndar A (mg/ml)
V = volumen de la Solucin muestra (ml)
W = peso de Chancapiedra tomado para preparar
la Solucin muestra (mg)
F = factores de conversin para los analitos:
1,00 para filantina; 0,75 para hipofilantina
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de fi-
lantina e hipofilantina: Se encuentra no menos de
0,25% con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para el
Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
METALES PESADOS, Mtodo 1/1 (231): No ms de 20 ppm
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 O ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 oi ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Hierba anual erguida, de 10-60 cm de
altura; tallo delgado; las hojas en el tallo principal se
reducen a escamas; ramitas secundarias, cortas, que se
extienden en ngulos rectos, cada una con 15-30 ho-
jas; las lwja~ re~entan una superficie superior de color
verde con nervadura central elevada y una superficie
inferior de color verde plido con nervadura central
prominente y nervaduras secundarias, simples, alternas,
de 3-11 mm de largo, de 1,5-6 mm de ancho, pecolo
usr 38
corto, elptico-oblongo a obovado, pice obtuso y a
menudo con extremo puntiagudo pequeo, de margen
entero, base a. menudo ligeramente asimtrica; flores di-
1rn11ulds, dffldfiile11ldS, VefUOSdS O UldflLULLd, UfliSt:'XUd-
leS, axila:es en ramitas secundarias, 1 2 y en' ocasiones
3 por axila, los primeros 1-2 entrenudos de cada ramita
poseen 1-2 flores masculinas, el resto tienen flores mas-
culinas y femeninas; los frutos son cpsulas esfricas
aplanadas, de color pajizo, triloculares, de aproximada-
mente 2 mm de dimetro; a menudo con 2 semillas
por lculo, de color marrn claro, de aproximadamente
0'.9 mm de largo, triangulares con 6-7 nervaduras lon-
g1tudn:iales y m~chas estras transversales en la parte
posterior. El articulo farmacopeico consta de masas de
col<;ir verde ~ verde ?marillento compuestas en su ma-
yona por hops, ramitas y fragmentos de tallos; tiene
sabor amargo.
Histologa
Seccin t~ansversal de los tallos: Capa epidrmica;
de aproximadamente 15 capas de clulas de la cor-
teza,_ pared gruesa, contienen cloroplastos, algunos
~ont1enen cristales de oxalato de calcio, las 7-1 O capas
internas _constan de clulas de paredes gruesas in-
ter:ur;ip1das en intervalos irregulares por clulas paren-
qu!mat1cas; una _capa de clulas parenquimticas con
granulas de alm1don; floema de 7-1 O capas de clulas
de paredes delgadas; grupos de vasos de xilema m-
dula, multi~apa de _clulas de paredes delgadas, 'unas
poc_a,s contienen cristales de oxalato de calcio.
Secc1on transversal de ramitas: La seccin transversal
es redonda; de 6-8 capas de clulas de corteza de
paredes gruesas'. en su mayora contienen cloroplastos
y unos pocos cristales de oxalato de calcio, despus de
3-4 capas se presenta una capa de clulas que contie-
n~n gra~os de ~lmidn, s_eguidas por ,2-3 ~apas de
celulas fibrosas interrumpidas por parenqu1ma cortical
floema de 5-7 capas _de clula? de paredes delgadas; '
grupos de vasos de x1lema; medula, multicapa de clu-
las c;J~ paredes delgadas con cloroplastos.
Seccu;m transversal de las hojas: Epidermis superior e
inferior; u~a sol? capa de cl~las en empalizada que
ocupa casi la mitad del espacio entre cada epidermis;
de 3:-5 capas de clulas parenquimticas, unas pocas
contienen cristales de oxalato de calcio; tambin se
, presentan haces vasculares.
PERDID_A POR SECAD~ (731 ): Secar 1,0 g de Chancapiedra
reducida a polvo fino a 105 durante 2 horas: pierde no
m~ de 12,0% de su pes9.
ARTICU~OS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No mas de 8,0%, determinado en 1,0 g de Chancapiedra
red,ucida a polvo fino.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561 ): No ms de 5,0%, determinado en 1,0 g de
Ch~mcap1edra reducida a ,polvo fino.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
EngunADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latin y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la r;ilanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Filantina USP
ER Extracto en Polvo de Chancapiedra USP
Suplementos Dietticos / Chancapicdra 6381
Chancapiedra en Polvo
DEFINICIN
La Chancapiedra en Polvo es Chancapiedra reducida a polvo
C: a polvo muy fino. Contiene no menos de 0,25% de
l1_gnanos, calculado como la suma de filantina e hipofilan-
t1na, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. La Chancapiedra en Polvo cymple con los requisitos
de Pruebas Especificas, Caractemticas Botanicas.
8. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Filantina USP
en metanol
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Chancapiedra USP en metano!. Someter a ul-
trasonido durante aproximadamente 1 O minutos, centri-
fuga~ y usar el sobrenadante.
Soluc1on muestra: Someter a ultrasonido aproximada-
mente 0,5 g de Chancapiedra en Polvo en 5 mL de me-
tano! durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 10-15 m (placas
para TLC) o con un tamao promedio de partcula de 5
m (placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 10 pL (placas para TLC) o 4 L
(placas para HPTLC)
Fase ~vil: Hexano y acetato de etilo (2:1)
Soluc1on reveladora: Una solucin de cido sulfrico al
1 0% en metano!. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso.]
Anlisis
Muestr,as: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucion muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
mat()grafa en capa delg~da adecuada (ver Cromato-
graf1a (621 )). Usar una camara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa de la cmara secar rociar con
Solucin reveladora, calentar durante 3 m(nutos a
120 y observar bajo luz visible .
Cri~erios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
oon muestra presenta una banda de color azul en el
tercio inferior de la placa debida a filantina, correspon-
diente, en c~lor y valor Rf a la del cromatograma de la
Solu_cion estandar A; una banda violeta debida a hipofi-
lantina a un valor Rf mayor que el de filantina una
b~rnda de_ color azul a un valor R, mayor que ~I de
h1pofilantina; y una banda adicional de color violeta en
el tercio superior de la placa. Las bandas detectadas en
el cromatograma de la Solucin muestra corresponden
en posicin y color a las bandas en el cromatograma de
la Soluoon estandar B. Se pueden observar otras bandas
menores en los cromatogramas de la Solucin muestra y
la Solucin estndar B.
C. HPLC: El cromatograma de la Solucin muestra obte-
nido en la prueba de Conte:ijdo de Lignanos presenta un
pico a un tiempo de retenc1on correspondiente al de fi-
lant1na en el cromatograma de la Solucin estndar A.
ldentific_~r otros picos de lignano en el cromatograma de
la Soluoon muestra por comparacin con el cromato-
grama de la Solucin estndar By el cromatograma de
referencia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Cl1ancdpiedra USP usado. El cromatograma de la Solucin
muestra presenta un pico adicional correspondiente a
hirofilantina
6382 Chancapiedra / '\uplPnwntos Dietticos
COMPOSICIN
CONTENIDO DE LIGNANOS
S~lucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
~.10 Pn _9~0 mi_ cic igua, agrcgJr 0,5 :1iL de Jcidv fosf-
rico, d1lu1r con agua hasta 1 000 mi, mPTrl<ir, filtrar y
desgasificar.
Fase r:r!vil: ,Acetonitrilo y Solucin A ( 4:6)
Soluc1on estandar A: O, 1 mg/mL de ER Filantina USP
en metano!
Sol~cin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
c1on de ER Extracto en Polvo de Chancapiedra USP en
metano! para obtener una solucin con una concentra-
cin .?e aproximadan;ente 5,0 mg/mL. Antes de la in-
yecc1on, pasar a traves de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 pm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Chancap1edra en Polvo, pesados con exactitud, a un
matr.az de 250 mL equipado con un condensador de
refluo_._ Agregar 50 mL de metano!, someter a reflujo en
un bano de agua durante aproximadamente 20 minu-
tos, dejar que sedimente y decantar el sobrenadante.
Repetir hasta que el ltimo extracto se torne incoloro.
Combinar los extractos, concentrar al vaco y austar el
vo}umen con met~mol hasta 100 mL. Antes de a inyec-
c1on, pasar a traves de un filtro de membrana con un
tar:nao de poro de 0,45 pm o menor, desechando los
primeros mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 230 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 pm
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O pL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Chancapiedra USP usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de fi-
lantina e hipofilantina, Solucin estndar B
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
filantina, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0% de-
terminado a partir del pico de filantina en i~yecciones
repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. [NOTA-La Solucin estndar A la So-
lucin estndar By la Solucin muestra se manti~nen
estables durante 48 horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A de
la So.lucin estndar By el cromatograma de refere~cia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Chan-
capiedra USP usado, identificar los tiempos de reten-
c1on de los picos correspondientes a filantina e
hipofilantina.
Calcular por separado los porcentajes de filantina e hi-
pofilantina en la porcin de Chancapiedra en Polvo
tomada:
Resultado = (ru!r1) X e A (V!W) X F .x. 100
ru = respuesta del pico del analito de la Solucin
muestra
= respuesta del ico de filantina de la 5oluoon
estndar A
= concentracin rlP FR Filantina USP en la
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen de la Solucin muestra (mL)
w = peso de Chancapiedra en Polvo tomarla para
preparar la Solucin muestra (mg)
USP 38
F = factores de conversin para los analitos:
1,00 para fllanllna; O, 75 para hipofilantina
c.riterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de fi-
ia11L111a e h1oiiantina: :ie encuentra no meno-. de
0,25'-!lo con respecto a la materia SE-Cc1
CONTAMINANTES
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requ1s1tos.
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 ppm
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 os ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 0 3 ufc/g .
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS Polvo de color verdoso a ma-
rrn verdoso; sabor amargo. Al microscopio, se presentan
fragmentos de clulas epidrmicas de las hojas con pare-
des onduladas, que presentan estomas anisoctcos y pa-
racticos; clulas parenquimticas, algunas presentan gru-
pos de cristales de oxalato de calcio; fibras estrechas del
tallo; vasos punteados del tallo; fragmentos del epicarpio
qe los frutos que presentan estomas anomocticos.
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Chancapiedra
en Polvo a 1 05 durante 2 horas: pierde no ms de
12,_9% de su peso. ,
ARTICU~OS DE ORIGEN BOTA.NICO, Cenizas Totales (561):
No mas de 8,0%, determinado en 1,0 g de Chancapiedra
en Polvo
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561 ): No ms de 5,0%, determinado en 1,0 g de
Chancap1edra en Polvo
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la J?lanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Filantina USP
ER Extracto en Polvo de Chancapiedra USP
Cianocobalamina-ver Cianocobalamina en
Monografas Generales
Cimicfuga Racemosa
DEFINICIN
La Cimicfuga Racemosa consiste en el rizoma y las races
secos rle Artaea racPmosn L. [Cimicifuga raccmosa (L.)
Nutt.] (Ranuncu/aceae). Se cosecha durante el verano.
Contiene no menos de ,4% de glicosidos triterpnicos,
calculado como 23-epi-26-desoxiactena 1 (C, 7 H56 0 10 ) con
respecto a la mJtcria seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
1 ~n o~asione\
xiacteina.
<:ie hace reff'rrncia ,1 la 21-e,ni-76-rlp-.nxicJdena c_orno 27-deso-
USP 38
Solucin e~lndr A; 1 00 rng/mL de ER Extracto en
Polvo de Cimicfuga Racemosa USP en metanol
Solucin estndar B: 1 mq/mL de ER Actena USP, de
ER 23-epi-26-Desoxiactena USP y de cido isoferlico
en metano!
Solucin muestra: Transferir 5 g de Cimicfuga Race-
mosa en polvo a un tubo de centrfuga con tapa de
rosca, agregar 1 O mL de una mezcla de alcohol y agua
(7:3), y calentar en un bao de vapor durante 1 O minu-
tos. Centrifugar y usar el sobrenadante transparente.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 10-15 m
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L
Fase mvil: Usar la fase superior de una mezcla de al-
cohol butlico, cido actico glacial y agua (5:1 :4).
Solucin reveladora: Metano!, cido actico glacial,
cido sulfrico y p-anisaldehdo (85:10:5:0,5) LNOTA-
Almacenar en un refrigerador. El reactivo es incoloro;
desechar si aparece color.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente 15 cm y
secar la placa con ayuda de una corriente de aire.
Criterios de aceptacin: Observar la placa bajo luz UV
a 365 nm. El cromatograma de la Solucin muestra pre-
senta zonas principales similares en posicin y color a
las zonas principales de la Solucin estndar A. En el
tercio superior de la placa, la Solucin muestra presenta
una zona de color azul fluorescente al nivel de la zona
debida a cido isoferlico de la Solucin estndar B. Ro-
ciar la placa con la Solucin reveladora, calentar a 1 00
durante 5 minutos y observar bajo luz diurna. La Solu-
cin muestra presenta zonas principales similares en po-
sicin y color a las zonas principales de la Solucin es-
tndar A. La Solucin estndar B presenta zonas de color
violeta rojizo debidas a actena y 23-epi-26-desoxiac-
tena. La Solucin muestra presenta diversas manchas de
color marrn verdoso en el tercio inferior de la placa y
diversas zonas de color violeta por encima; dos de estas
zonas de color violeta se presentan en valores Rr simila-
res a aquellos debidos a actena y a 23-epi-26-desoxiac-
tena en la Solucin estndar B.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 5 m (placas
para HPTLC)
Solucin estndar A: 0,5 mL de la Solucin estndar A
preparada en la prueba de Identificacin A, diluidos con
metano! hasta 2 mL.
Solucin estndar B: 1,0 mL de la Solucin estndar B
preparada en la prueba de Identificacin A, diluido con
metano! hasta 5 mL.
Solucin muestra: Transferir 0,5 g de Cimicfuga Race-
mosa en polvo a un tubo con tapa de rosca, agregar
5 mL de metano!, someter a ultrasonido durante 1O mi-
nutos y filtrar en un matraz volumtrico de 1 O mL. La-
var el residuo en el papel de filtro cuatro veces, usando
1 mL de metano!_ para cada lavado, agregar los lavados
al matraz volumtrico y diluir con metano! a volumen.
Volumen de aplicacin: 2 pL en una banda de 8 mm
Fase mvil: Tolueno, formato de etilo y cido frmico
(5:3:2)
Solucin reveladora: Proceder segn se indica en la
prueba de Identificacin A.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente dos ter-
cios de la longitud de la placa y secar la placa con
Suplementos Dietti<m / Ci111idfu9a 383
ayuda de una corriente de aire. Rociar la placa con
Solucion reveladora, calentar a 1 00 durante 5 minu-
tos y observar bajo luz diurna.
Criterios de aceptacin: La )o/ucion muestra presenta
LOnas princi,Mie'> '>imildre'> en osicin y color a las zo-
nas principales de la Solucin estndar A. La Solucin
estndar B presenta zonas de color violeta rojizo debidas
a actena y 23-epi-26-desoxiactena a valores Rr de apro-
ximadamente 0,5 y 0,4, respectivamente. La Solucin
muestra presenta zonas similares en color y valores Rr a
aqullas debidas a actena y 23-epi-26-desoxiactena de
la Solucin estndar B.
c. La Solucin muestra_pre~e~ta picos para ,cimirracem-
s1do A, 26-desox1c1mrc1fugos1do, (26S)-acte1na, 23-epi-
26-desoxiactena, cimigenol-arabinsido y cimigenol-xi-
lsido a tiempos de retencin correspondientes a estos
compuestos en la Solucin estndar, segn se obtienen
en la prueba de Contenido de Glicsidos Triterpnicos. El
cociente entre las reas de los picos de cimigenol-arabi-
nsido y cimigenol-xilsido es no menos de 0,4 (diferen-
cia con Cimicifuga foetida).
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS TRITERPNICOS
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP en meta-
no!, agitando durante 1 minuto, y diluir con metanol
hasta obtener una solucin con una concentracin co-
nocida de 30 mg/ml. Pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Soluciones estndar de 23-ep-26-desoxiactena: Di-
solver ER 23-epi-26-Desoxiactena USP en metanol agi-
tando durante 1 minuto. Diluir cuantitativamente, y en
diluciones sucesivas si fuera necesario, para obtener so-
luciones con concentraciones conocidas de 500, 100,
50, 25 y 12,5 g/mL. Pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER Ac-
tena USP y de ER 23-epi-26-Desoxiactena USP en
metano!
Solucin muestra: Pesar con exactitud aproximada-
mente 750 mg de material vegetal molido y colocar en
un tubo de centrfuga de 20 mL con tapa de tefln.
Pipetear y transferir 15 mL de metano!, someter a ultra-
sonido durante 30 minutos, centrifugar y transferir el
sobrenadante a un matraz de evaporacin. Repetir la
extraccin dos veces. Evaporar los extractos combina-
dos al vaco a 45-50. Disolver el residuo en metanol y
transferir cuantitativamente a un matraz volumtrico de
1 O ml. Diluir con metanol a volumen y pasar a travs
de un filtro de membrana con un tamao de poro de
0,45 m o m,enor.
Solucin A: Acido trifluoroactico al 0,05% en agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
------------
Tiempo Agua Solucin A Solucin 8
(min) l/o) 1%) (%)
o o 80 20
8 -------- ,,_ --
ig_ , __ lQ - - -----
lS 68 o 32
SS 36 o 64
6S s o 9S
70 s o 9S
8S o 80 20
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatografw <621 ), Aptitud del Sistema.)
6384 Cimictuga _/ Sup/p111P11/os Dietticos
Modo: HPLC
Detector: l::vaporativo de dispersin de luz
[No rA---Ajustar el detector segn las instrucciones del
fdbrtcdnte para acanzar una relacron senal-ruido de no
menos dr 1 O para la Solucin estnJw Je 2 3-epi-
26-desoxiactena de 12,5 pg/ml.]
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 pm
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,6 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 pL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema, Solucin es-
tndar y Solucin estndar de 2 3-epi-26-desoxiactena
de 100 pg/mL
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar es similar al Cromatograma de
Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Cimicfuga Racemosa USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de
(26S)-actena y 23-epi-26-desoxiactena, Solucin de
aptitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
23-epi-26-desoxiactena, Solucin estndar de 23-epi-
26-desoxiactena de 1 00 pg/mL
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% del
logaritmo de la respuesta del rea del pico de 23-epi-
26-desoxiactena en inyecciones repetidas, Solucin
estndar de 2 3-epi-26-desoxiactena de 100 pg/mL
Anlisis
Muestras: Solucin de aptitud del sistema, Solucin es-
tndar, Soluciones estndar de 23-epi-26-desoxiactena y
Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar y el
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Cimicfu9a Racemosa USP,
identificar los tiempos de retencion de los picos co-
rrespondientes a los glicsidos triterpnicos. Los tiem-
pos de retencin relativos aproximados para los glic-
sidos triterpnicos se proveen en la Tabla 2.
Tabla 2
Compuesto
Cimicifuqsido H-1
Cimirracemsido A
(26R)-Actena
26-Desoxicimicifuqsido
(265)-Actena
23-eoi-26-Desoxiaclena
Acetil-shenqmanol-xilsido
Cimiqenol-arabinsido
Cimiqenol-xilsido (cimicifuqfoido)
26-Desoxiactena
25-Acetil-cimiqenol-arnbiq{sigo___
-- - -------
(245)-25-Aceti1-ci miqeno 1xilsido
___25_:_Qlletil:_c:im~rig.!=:arab_l1sido _____
--- -~---
25-0-Metil-cimiqenol-xilsido
Graficar los logaritmos de las reas de los picos en
funcin de los logaritmos de las concentraciones, en
~tg/mL, de las Soluciones estndar de 23-epi-26-deso-
xiactena y determinar la lnea de regresin usando un
anlisis de cuadrados mnimos. El coeficiente de co-
rrelacin para la lnea de regresin es no menos de
0,995. A partir de las grficas as obtenidas, determi-
nar la concentracin, C, en pg/mL, del analito perti-
nente en la Solucin muestra. Calcular por separado
los porcentajes de cimicifugsido H-1, cimirracem-
sido A, (26R)-actena, 26-desoxicimicifugsido, (26S)-
actena, 23-epi-26-desoxiactena, acetil-shengma-
USP 38
nol-xilsido, cimigenol-arahinsido, cimigenol-xil-
sido (cimicifu9sido), 26-desoxiactena, 25-acetil-cimi-
qenol-arabinosido (24S)-25-acetil-cimioenol-xilsirln
.25-0-metil-cimige~ol-arabinsido y 25=-'0-metil-cimi-'
geno! xrlos1do como 23-epl-26-desoxiaclena
(C1H,1;10) en la porcin de Cimicfuga Racemosa
tomada:
Resultado = (V x C)!(F x W) x 100
V =volumen final de la Solucin muestra (mL)
C = concentracin del analito pertinente en la
Solucin muestra (pg/mL)
F = factor de conversin (de mg a pg)
1 ~Lg/mg
W = peso de Cimicfuga Racemosa tomado para
preparar la Solucin muestra (mg)
Calcular el porcentaje de glicsidos triterpnicos en la
porcin de Cimicfuga Racemosa tomada sumando
todos los porcentajes calculados para los analitos
individuales.
Criterios de aceptacin: No menos de 0,4% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
METALES PESADOS (231 ): No ms de 1 o ppm
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: El rizoma de la Cimicfuga Racemosa es
de color marrn oscuro, longitudinalmente acanalado,
Tiempo de
spero, muy nudoso y algo rizado e irregular. Tiene
Retencin
15 cm de largo y hasta 2,5 cm de espesor. La superficie
Relativo
superior est cubierta con numerosas cicatrices redon-
das de Jos tallos anteriores; lateralmente, est clara-
o 61 mente rizada y la superficie inferior est cubierta por
o 78 races delgadas, longitudinalmente acanaladas de color
o 94 marrn oscuro que se quiebran con facilidad. La frac-
o 96 tura es crnea y fibrosa. El corte transversal presenta
o 98 una corteza externa delgada que rodea un anillo de nu-
1 00 merosas cuas plidas y estrechas de tejido vascular <.1-
ternando con radios medulares oscuros y una gran m-
1 03 dula central. Las races de Cimicfuga Racemosa son de
1 08 color marrn oscuro, con un dimetro de entre 1 y
1 13 3 mm, quebradizas, casi cilndricas u obtusamente cua-
1 22 drangulares y con arrugas longitudinales. La fractura es
1 60 corta. El corte transversal presenta una lnea cambia!
1 64
que separa una corteza exterior amplia de una regin
central compuesta por tres a seis cuas de tejido de
- _ ___1_S)_Q____ __
xilema lignificado unido por sus pices y separados por
1 93 amplios radios medulares no lignificados.
Microscpicas: Vistas desde la superficie, las clulas epi-
drmicas suberosas son tabulares con paredes modera-
damente engrosadas. La corteza parenquimtica est re-
llena de almidn. Las cuas de xilema son lignificadas y
se componen de numerosos vasos pequeos con pun-
tuaciones areoladas o paredes engrosadas de manera
reticular, fibras de paredes delgadas y parnquima xile-
mtico. El parnquima de la mdula no est lignificado_
Los radios medulares estn rellenos de grnulos de al-
midn, que son esfricos o poligonales y en su mayora
simples o con dos o tres compuestos, pero que pueden
ser de hasta seis compuestos. Los grnulos individuales
USP 38
cip almicin tiPnPn 11n rlimPtro de entre 3 y 15 ,um,
cada uno con un hilo ca~i cntrico en forma de
hendidura .
ARTCULOS OE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica [xtmi1a
(561 ): No ms de 2,0l!lo de materia orgnica extraa y
no ms de 5,0% de bases de tallos
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561 ): No menos de 8, 0%, usando una
f11ezcla de alcohol y agua (1: 1) en lugar de alcohol.
PERDIDA POR SECADO (731): Secar a 105 durante 2 ho-
ras: pierde no ms de 12,0% de su peso.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 1 0,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en un envase
bien cerrado y resistente a la luz. Proteger de la hume-
dad. Almacenar a temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta contenidas en el artculo. Las formas farmacuti-
cas preparadas con este artculo deben llevar la siguiente
leyenda: Descontinuar el uso y consultar con un profesio-
nal de la salud si tuviera un trastorno heptico o desarro-
llara sntomas de un problema heptico, tales como do-
lor abdominal, orina oscura o ictericia.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Actena USP
ER Extracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP
ER 23-epi-26-Desoxiactena USP
Cimicfuga Racemosa en Polvo
DEFINICIN
La Cimicfuga Racemosa en Polvo es Cimicfuga Racemosa
reducida a polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos
de 0,4% de glicsidos triterpnicos, calculado como
23-epi-26-desoxiactena (C11Hs610) con respecto a la ma-
teria seca.
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Cimicfuga Racemosa USP en metano!
Solucin estndar B: 1 mg/mL de ER Actena USP, de
ER 23-epi-26-Desoxiactena USP y de cido isoferlico
en metanol
Solucin muestra: Transferir 5 g de Cimicfuga Race-
mosa en Polvo a un tubo de centrfuga con tapa de
rosca, agregar 1 O mL de una mezcla de alcohol y agua
(7: 3), y calentar en un bao de vapor durante 1 O minu-
tos. Centrifugar y usar el sobrenadante transparente.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 10-15 ~tm
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L
Fase mvil: Usar la fase superior de una mezcla de al-
cohol butlico, cido actico glacial y agua (5:1 :4).
Solucin reveladora: Metanol, cido actico glacial,
cido sulfrico y p-anisaldehdo (85:10:5:0,5). [NOTA-
Almacenar en un refrigerador. El reactivo es incoloro;
desechar si aparece color.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
Solucin mue>lra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente 15 cm y
secar la placa con ayuda de una corriente de aire.
Suplementos Diettico' / Cimirfuga 6385
Criterios de aceptacin: Observar la placa bajo luz UV
a 365 nm. El cromatograma de la Solucin muestra pre-
senta zonas principales similares en posicin y color a
lus LnJ~ prlnc:pa!cs de !a Solucin estndar A. En e!
tercio 'it1perior de la placa, la Solucin muestra presenta
una zona de color azul fluorescente al nivel de la zona
debida a cido isoferlico de la Solucin estndar 8. Ro-
ciar la placa con la Solucin reveladora, calentar a 1 00
durante 5 minutos y observar bajo luz diurna. La Solu-
cin muestra presenta zonas principales similares en po-
sicin y color a las zonas principales de la Solucin es-
tndar A. La Solucin estndar 8 presenta zonas de color
violeta rojizo debidas a actena y 23-epi-26-desoxiac-
tena. La Solucin muestra presenta diversas manchas de
color marrn verdoso en el tercio inferior de la placa y
diversas zonas de color violeta por encima; dos de estas
zonas de color violeta se presentan a valores Rr similares
a aquellos debidos a actena y a 23-epi-26-desoxiactena
en la Solucin estndar 8.
8. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mL de la Solucin estndar A
preparada en la prueba de Identificacin A, diluidos con
metanol hasta 2 mL.
Solucin estndar B: 1,0 mL de la Solucin estndar 8
preparada en la prueba de Identificacin A, diluido con
metanol hasta 5 mL.
Solucin muestra: Transferir 0,5 g de Cimicfuga Race-
mosa en Polvo a un tubo con tapa de rosca, agregar
5 mL de metanol, someter a ultrasonido durante 1 O mi-
nutos y filtrar en un matraz volumtrico de 1 O ml. La-
var el residuo en el papel de filtro cuatro veces, usando
1 mL de metanol para cada lavado, agregar los lavados
al matraz volumtrico y diluir con metanol a volumen.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 5 m (placas
para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 2 Len una banda de 8 mm
Fase mvil: Tolueno, formato de etilo y cido frmico
(5:3:2)
Solucin reveladora: Proceder segn se indica en la
prueba de Identificacin A.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente dos ter-
cios de la longitud de la placa y secar la placa con
ayuda de una corriente de aire. Rociar la placa con
Solucin reveladora, calentar a 1 oou durante 5 minu-
tos y observar bajo luz diurna.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
zonas principales similares en posicin y color a las zo-
nas principales de la Solucin estndar A. La Solucin
estndar 8 presenta zonas de color violeta rojizo debidas
a actena y 23-epi-26-desoxiactena a valores Rr de apro-
ximadamente 0,5 y 0,4, respectivamente. La Solucin
muestra presenta zonas similares en color y valores Rr a
aqullas debidas a actena y 23-epi-26-desoxiactena de
la Solucin estndar 8.
C. La Solucin muestra presenta picos para cimirracem-
sido A, 26-desoxicimicifugsido, (26S)-actena, 23-epi-
26-desoxiactena, cimigenol-arabinsido y cimigenol-xi-
lsido a tiempos de retencin correspondientes a aque-
llos compuestos en la Solucin estndar, segn se obtie-
nen en la prueba de Contenido de Glicsidos Triterpnicos.
El cociente entre las reas de los picos de cimigenol-ara-
binsido y cimigenol-xilsido es no menos de 0,4 (dife-
rencia con Cimicifuga foetida).
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS TRITERPNICOS
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP en meta-
no!, agitando durante 1 minuto, y diluir con metanol
6386 Cimicfu9a / Sup!ernentos Dietticos
hasta obtener una solucin con una concentracin co-
nocida de 30 mg/ml. Pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamano de poro de 0,45 m o
m~nor.
Soluciones estndar de 23-ep-26-desoxiactena: Di-
solver ER 23-epi-26-Desoxiactena USP en metano! agi-
tando durante 1 minuto. Diluir cuantitativamente, y en
diluciones sucesivas si fuera necesario, para obtener so-
luciones con concentraciones conocidas de 500, 100,
50, 25 y 12,5 g/ml. Pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/ml de ER Ac-
tena USP y de E:R 23-epi-26-Desoxiactena USP en
metano!
Solucin muestra: Pesar con exactitud aproximada-
mente 750 mg de Cimicfuga Racemosa en Polvo y co-
locar en un tubo de centrfuga de 20 ml con tapa de
tefln. Pipetear y transferir 15 ml de metano!, someter
a ultrasonido durante 30 minutos, centrifugar y transfe-
rir el sobrenadante a un matraz de evaporacin. Repetir
la extraccin dos veces. Evaporar los extractos combina-
dos al vaco a 45-50. Disolver el residuo en metano! y
transferir cuantitativamente a un matraz volumtrico de
1 O ml. Diluir con metano! a volumen y pasar a travs
de un filtro de membrana con un tamao de poro de
0,45 m o m.enor.
Solucin A: Acido trifluoroactico al 0,05% en agua Cimiaenol-arabinsido
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7 a continuacin. 26-Desoxiactena
Tabla 1
Tiempo Agua Solucin A Solucin B 25-0-Metil-cimiaenol-arabinsido
Cmin) (%) (%) (%)
o o 80 20
8 o 80 20
15 68 o 32
55 36 o 64
65 5 o 95
70 5 o 95
8'i o 80 20
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Evaporativo de dispersin de luz
[NOTA-Ajustar el detector segn las instrucciones del
fabricante para alcanzar una relacin seal-ruido de no
menos de 1 O para la Solucin estndar de 2 3-epi-
26-desoxiactena de 12,5 g/ml.]
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema, Solucin es-
tndar y Solucin estndar de 23-epi-26-desoxiactena
de 1 00 ~tg/ml
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estandar es similar al Cromatograma de
Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Cimicfuga Racemosa USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de
(26S)-actena y 23-epi-26-desoxiactena, Solucin de
aptitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
23-epi-26-desoxiactena, Solucin estndar de 23-epi-
26-desoxiactena de l 00 ~tg/ml
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% del
logaritmo de la respuesta del rea en inyecciones re-
USP 38
petidas, Solucion estndar de 23-epi-26 dcsoxiactena
de 100 gimL
Anlisis
Mue~lra~: Suiuuon de apmud ae1 sistema, ~oluoon es-
tndar, Solucionn P\tndar dr 21-r17i-2C.-deso~ioc!f'nu y
Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar y el
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP,
identificar los tiempos de retencion de los picos co-
rrespondientes a los glicsidos triterpnicos. Los tiem-
pos de retencin relativos aproximados para los glic-
sidos triterpnicos se proveen en la Tabla 2.
Tabla 2
Tiempo de
Retencin
-------------- Nombre Relativo
Cimicifuasido H-1 o 61
Cimirracemsido A o 78
(26Rl-Actena o 94
26-Desoxicimicifuqsido o 96
!2651-Actena ---------------------------------
o 98
23-eoi-26-Desoxiactena 1 00
Acetil-shenamanol-xilsido 1 03
1 08
Cimiaenol-xilsido (cimicifuasido) 1 13
1 22
25-Acetil-cimiaenol-arabinsido 1 60
(245)-25-Acetil-cimiaenol-xilsido 1 64
1 90
25-0-Metil-cimiaenol-xilsido 1 93
Graficar los logaritmos de las reas de los picos en
funcin de los logaritmos de las concentraciones, en
g/ml, de la Solucin estndar de 23-epi-26-desoxiac-
tena y determinar la lnea de regresin usando un
anlisis de cuadrados mnimos. El coeficiente de co-
rrelacin para la lnea de regresin es no menos de
0,995. A partir de las grficas as obtenidas, determi-
nar la concentracin, C, en g/ml, del analito perti-
nente en la Solucin muestra. Calcular por separado
los porcentajes de cimicifugsido H-1, cimirracem-
sido A, (26R)-actena, 26-desoxicimicifugsido, (26S)-
actena, 23-epi-26-desoxiactena, acetil-shengma-
nol-xilsido, cimigenol-arabinsido, cimigenol-xil-
sido (cimicifugsido), 26-desoxiactena, 25-acetil-cimi-
genol-arabinosido, (24S)-25-acetil-cimigenol-xilsido,
25-0-metil-cimigenol-arabinsido y 25-0-metil-cimi-
genol-xilsido como 23-epi-26-desoxiactena
(C11Hs610) en la porcin de Cimicfuga Racemosa
tomada:
Resultado = (V x C)/(F x W) x 100
V volumen de Solucin muestra (ml)
=
C rnncentracin del analito pertinente en la
=
Solucin muestra (g/ml)
F = factor de conversin (de mg a g)
l 000 pg/mg
W = peso de Cimicfuga Racemosa en Polvo
tomado para preparar la Soluc1on muestra
(mg)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
glicsidos triterpnicos en la porcin de Cimicfuga
Racemosa en Polvo tomada sumando todos los
porcentajes calculados para los analitos individuales.
Criterios de aceptacin. ~" 111e11us ue 0,4% con res-
pecto a la materia seca
USP 38
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS (231 ): ,No mas de 1 ppm o ER 2 3-ep1-26-Desox1arteina LJ':.P y de ac1do 1soterlico
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Ana-
lisis de Residuos de Plaguicidas <561 ): Lumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 1 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 oi ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 oi ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: El material es un polvo de
color marrn claro a oscuro, inodoro o con un olor leve
y un sabor acre o amargo. Presenta numerosos grnulos
de almidn simples o compuestos con estras concntri-
cas. Los grnulos individuales son esfricos o ms o me-
nos poligonales y tienen un dimetro de entre 3 y 15
m, cada uno con un hilo casi cntrico en forma de hen-
didura. Presenta vasos con puntuaciones areoladas y fi-
bras lignificadas. Presenta adems fragmentos de color
rojizo a marrn de epidermis suberizada con clulas ms
o menos tabulares.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561): No menos de 8,0%, usando una
rriezcla de alcohol y agua (1 :1) en lugar de alcohol.
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105
dur,ante 2 horas: pierde }O ms de 12,0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No,ms de 10,0% , ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz. Proteger de la humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
ILl plLlnta de donde se obtuvo el artculo. Las formas far-
macuticas preparadas con este artculo deben llevar la
siguiente leyenda: Descontinuar el uso y consultar con un
profesional de la salud si tuviera un trastorno heptico o
desarrollara sntomas de un problema heptico, tales
como dolor abdominal, orina oscura o ictericia.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Actena USP
ER Extracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa LJSP
ER 23-epi-26-Desoxiactena USP
Extracto en Polvo de Cimicfuga
Racemosa
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa se prepara a
partir de Cimic1tuga Racemosa mediante extracc1on con
mezclas hidroalcohlicas u otros disolventes adecuados.
Contiene no menos de 90,0% y no ms de 110,0% de la
cantidad declarada de glicsidos triterpnicos, calculado
como 23-epi-26-desoxictena (C37H160rn) con respecto a
la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Cimicfuga Racemosa USP en rnetanol
"''f'lf-'11wr11,,1 r;1.,1?iicos / Cimictuga 6387
Solucin estndar B: 1 mg/mL de ER Actena USP, de
en metanol
~olucion muestra: Agitar una cantidad de Extracto en
Polvo, equiv,1lente a 25 mg de glicsidos triterpnicos,
en 1 O mL de metano!. Dejar en reposo durante 15 mi-
nutos antes de usar.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 10--15 m
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L
Fase mvil: Usar la fase superior de una mezcla de al-
cohol butlico, cido actico glacial y agua (5:1 :4).
Solucin reveladora: Metanol, cido actico glacial,
cido sulfrico y p-anisaldehdo (85:10:5:0,5) lNOTA-
Almacenar en un refrigerador. El reactivo es incoloro;
desechar si aparece color.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente 1 5 cm y
secar la placa con ayuda de una corriente de aire.
Criterios de aceptacin: Observar la placa bajo luz UV
a 365 nm. El cromatograma de la Solucin muestra pre-
senta zonas principales similares en posicin y color a,
las zonas principales en el cromatograma de la SoluC1on
estndar A. En el tercio superior de la placa, el cromato-
grama de la Solucin muestra presenta una zona de
color azul fluorescente al nivel de la zona debida a
cido isoferlico en el cromatograma de la Solucin es-
tndar B. Rociar la placa con la Solucin reveladora, ca-
lentar a 100 durante 5 minutos y observar bajo luz
diurna. El cromatograma de la Solucin muestra pre-
senta zonas principales similares en posicin y color a
las zonas principales en el cromatograma de la Solucin
estndar A. El cromatograma de la Solucin estndar B
presenta zonas de color violeta rojizo debidas a actena
y 23-epi-26-desoxiactena. El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta diversas manchas de color marrn
verdoso en el tercio inferior de la placa y diversas zonas
de color violeta por encima; dos de estas zonas de color
violeta se presentan en valores Rr similares a aquellos
debidos a actena y a 23-epi-26-desoxiactena en el cro-
matograma de la Soluci9n estndar B. ,
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mL de la Solucin estndar A
preparada en la prueba de Identificacin A, diluidos con
metanol hasta 2 mL.
Solucin estndar B: 1,0 mL de la Solucin estndar B
preparada en la prueba de Identificacin A, diluido con
metanol hasta 5 mL.
Solucin muestra: Diluir 1 mL de la Solucin muestra
preparada en la prueba de Identificacin A con metanol
hasta 1 O mL.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 5 m (placas
para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 2 L en una banda de 8 mm
Fase mvil: Tolueno, formato de etilo y cido frmico
(5:3:2)
Solucin reveladora: Proceder segn se indica en la
prueba de Identificacin A.
Anlisis
Muestras: Solucin estnclw A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente dos ter-
cios de la longitud de la placa y secar la placa con
ayuda de una comente de aire. Rociar la placa con
Solucin reveladora, calentar a 1 00 durante 5 minu-
tos y observar a la luz diurna.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta zonas principales similares en po-
6388 Cimicfuga /Suplementos Dit>tPfi,o\ USP 38

sicin y rnlor a las ?Onas principales en e! cromato-
lJldrTld Je Id Sulucin estandar A. El cromdtograma de la
Sulucin eslndar B pre>enta zonas de color violeta ro-
jizu deuiJd> ct ctLlell td y 2:l-ep1-2-de,oxiactena a valo-
res R~ de aproximadamente 0,5 y 0,4, respectivamente.
El cromatograma de la Solucin muestra presenta zonas
similares en color y valores R, a aqullas debidas a ac-
tena y 23-epi-26-desoxiactena en el cromatograma de
la Solucin estndar B.
C. El cromatograma de la Solucin muestra presenta picos
para cimirracemsido A, 26-desoxicimicifugsido, (26S)-
actena, 23-epi-26-desoxiactena, cimigenol-arabinsido y
cimigenol-xilsido a tiempos de retencin correspondien-
tes a aquellos compuestos en el cromatograma de la So-
lucin estndar, segn se obtienen en la prueba de Conte-
nido de Glicsidos Triterprnicos. El cociente entre las reas
de los picos de cimigenol-arabinsido y cimigenol-xil-
sido es no menos de 0,4 (diferencia con Cimicfuga
foetida).
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS TRITERPNICOS
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP en meta-
no!, agitando durante 1 minuto, y diluir con metano!
hasta obtener una solucin con una concentracin co-
nocida de 30 mg/ml. Pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Soluciones estndar de 23-epi-26-desoxiactena: Di-
solver ER 23-epi-26-Desoxiactena USP en metano! agi-
tando durante 1 minuto. Diluir cuantitativamente, y en
diluciones sucesivas si fuera necesario, para obtener so-
luciones con concentraciones conocidas de 500, 100,
50, 25 y 12,5 g/ml. Pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/ml de ER Ac-
tena USP y de ER 23-epi-26-Deosxiactena USP en
metano!
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto
en Polvo, equivalente a 7,5 mg de glicsidos triterpni- Cimirracemsido _A______
cos, a un matraz volumtrico de 1 O ml, agregar 7 ml
de metano! y someter a ultrasonido durante 30 minu-
tos. Diluir con metano! a volumen. Centrifugar o pasar
a travs de un filtro con un tamao de poro de 0,45 (2651-Actena
m o menor.,
Solucin A: Acido trifluoroactico al 0,05% en agua Acetil-shenamanol-xilsido
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
~-----~-----~------------.-- ,--------~ 25-Acetil-cimiqenol arabinsido
Tiempo Agua Solucin A Solucin B (245)-25-Acetil-cimiaenol-xilsido -----------
{min) {%) {%) (%)
.________ _ ______+---~----<---~8~----+----2_0_----<
1s 68 o 32
55 36 1 ____ 9____ 64
~liS---~=-:~--- 5 ~=t -----~ ______22___ _
70 5 oti 95
~-~85c__ ~~------~----~----8~0~ ____,____
20_ _~
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621'>, Aptitud dPI Sistpma.)
Modo: HPLC
Detector: Evaporativo de dispersin de luz
[NOIA-Ajustar el detector segun las instrucciones del
fabricante para alcanzar una relacin seal-ruido de no
menos de 1 O para la Solucin estndar de 2 3 epi
26-desoxiactena de 12,5 pg/ml.]
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del 5j5tema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema, Solucin es-
tndar y Solucin estndar de 2 3-epi-26-desoxiactena
de 100 g/ml
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar es similar al Cromatograma de
Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Cimicfuga Racemosa USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de
(26S)-actena y 23-epi-26-desoxiactena, Solucin de
aptitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
23-epi-26-desoxiactcna, Solucin estndar de 2 3-epi-
26-desoxiactena de 1 00 g/ml
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% del
logaritmo de la respuesta del rea del pico de 23-epi-
26-dcsoxiactena en inyecciones repetidas, Solucin
estndar de 2 3-epi-26-desoxiactena de 100 g/ml
Anlisis
Muestras: Solucin de aptitud del sistema, Solucin es-
tndar, Soluciones estndar de 23-epi-26-desoxiactena y
Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar y el
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP,
identificar los tiempos de retencion de los picos co-
rrespondientes a los glicsidos triterpnicos. Los tiem-
pos de retencin relativos aproximados para los glic-
sidos triterpnicos se proveen en la Tabla 2.
Tabla 2
Tiempo de
Retencin
Nombre Relativo
Cimicifuasido H-1 o 61
o 78
------- - ----- - ---- --1--
(26R)-Actena -- o 94
26-Desoxicimicifuqsido o 96
o 98
23-eci-26-Desoxiactena ---------- 1 00
1 03
Cimiaenol-arabinsido 1 08
Cimiaenol-xilsido (cimicifugsido) - 1 13
26-Desoxiactena 1 22
1 60
1 64
25-0-Metil-cimiaenol-arabinsido 1 90
25-0-Metil-cimiaenol-xilsido 1 93
Graficar los logaritmos de las respuestas de los picos
en funcin de los logaritmos de las concentraciones,
en g/ml, de las Soluciones estndar de 23-epi-26-des-
oxiactena y determinar la lnea de regresin usando
un anlisis de cuadrados mnimos. El coeficiente de
correlacin para la lnea de regresin es no menos de
0,995. A partir de las grficas as obtenidas, determi-
nar la concentracin, C, en pg/ml, del analito perti-
nente en la Solucin muestra. Calcular por separado
los porcentajes de cimicifugsido H-1, cimirracem-
sido A, (26R) actena, 26-desoxicimicifugsido, (265)-
actena, 23-epi-26-desoxiactena, acetil-shengma-
nol-xilsido, cimiqenol-arabinsido, cimigenol-xil-
sido (cimicifugsido), 26-desoxiactena, 25-acetil-cimi-
genol-arabinosido, (24S)-25-acetil-cimigenol-xilsido,
25-0-metil-cimigenol-arabinsido y 25-0-metil-cimi-
USP 38 Suplementos Dietticos / Cimicfuga 6389

genol-xilsido corno 23-epi-26-desoxiactena IDENTIFICACIN

(C ,,H\r,O!n) en ia porcin de Exlraclo lomada: A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Resultado = (V x C)/(F x W) x 100 Solucin estndar A: 1 00 mq/mL de ER Extracto en
Polvo de Cimicfuga Racemosa USP en metano!
V = volumen de Solucin rr1ueslm (mL) Solucin estndar B: 1 mg/ml de ER Actena USP, de
C = concentracin del analito pertinente en la ER 23-epi-26-Desoxiactena USP y de cido isoferlico
Solucin muestra (g/mL) en metano!
F = factor
para convertir mg en g, 1 000 g/mg Solucin muestra: Extracto Fluido
W peso de Extracto en Polvo tomado para
= Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
preparar la Solucin muestra (mg) con un tamao promedio de partcula de 10-15 m
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de (placas para TLC)
glicsidos triterpnicos en la porcin de Extracto Volumen de aplicacin: 1 O L
tomada sumando todos los porcentajes calculados Fase mvil: Usar la fase superior de una mezcla de al-
para los analitos individuales. cohol butlico, cido actico glacial y agua (5:1 :4).
Criterios de aceptacin: 90,0%-11 0,0% con respecto Solucin reveladora: Metano!, cido actico glacial,
a la materia seca cido sulfrico y p-anisaldehdo (85:10:5:0,5). [NOTA-
CONTAMINANTES
Almacenar en un refrigerador. El reactivo es incoloro;
desechar si aparece color.]
Anlisis
Eliminar lo siguiente: Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
METALES PESADOS (231 ): No ms de 10 ppme cofcial 01-dic- Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
201s) fase mvil haya recorrido aproximadamente 15 cm y
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): Cumple con secar la placa con ayuda de una corriente de aire .
los requisitos de las pruebas para determinar la ausencia Criterios de aceptacin: Observar la placa bajo luz UV
de Salmonella spp. y Escherichia coli. El recuento total a 365 nm. La Solucin muestra presenta zonas principa-
bacteriano no excede de 1 0 4 ufc/g, y el recuento total les similares en posicin y color a las zonas principales
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex- de la Solucin estndar A. En el tercio superior de la
cede de 1 oi ufc/g. placa, la Solucin muestra presenta una zona de color
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos azul fluorescente al nivel de la zona debida a cido iso-
Botnicos (565), Residuos de Plaguicidas. ferlico de la Solucin estndar B. Rociar la placa con la
Solucin reveladora, calentar a 100 durante 5 minutos y
PRUEBAS ESPECFICAS observar bajo luz diurna. La Solucin muestra presenta
PRDIDA POR SECADO (731): No ms de 5,0% zonas principales similares en posicin y color a las zo-
nas principales de la Solucin estndar A. La Solucin
REQUISITOS ADICIONALES estndar B presenta zonas de color violeta rojizo debidas
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- a actena y 23-epi-26-desoxiactena. La Solucin muestra
permeables y resistentes a la luz. Almacenar en un lugar presenta diversas manchas de color marrn verdoso en
fresco. el tercio inferior de la placa y diversas zonas de color
ETIQUETADO: Cumple con los requisitos en Extractos Bot- violeta por encima; dos de estas zonas de color violeta
nicos (565). Etiquetar indicando el contenido de glicsi- se presentan a valores RF similares a aquellos debidos a
dos triterpnicos, como porcentaje, calculado como actena y a 23-epi-26-desoxiactena en la Solucin estn-
23-epi-26-desoxiactena. Las formas farmacuticas prepa- dar B.
radas con este artculo deben llevar la siguiente leyenda: 8. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
"Descontinuar el uso y consultar con un profesional de la DELGADA
salud si tuviera un trastorno heptico o desarrollara snto- Solucin estndar A: 0,5 mL de la Solucin estndar A
mas de un problema heptico, tales como dolor abdomi- preparada en la prueba de Identificacin A, diluidos con
nal, orina oscura o ictericia". metano! hasta 2,0 mL.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) Solucin estndar B: 1,0 mL de la Solucin estndar B
ER Actena USP preparada en la prueba de Identificacin A, diluido con
ER Extracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP metano! hasta 5,0 mL.
ER 23-epi-26-Desoxiactena USP Solucin muestra: Usar Extracto Fluido, diluyendo si
fuera necesario con un disolvente adecuado hasta obte-
ner una concentracin de 0,25 mg/mL de glicsidos
triterpnicos.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
Extracto Fluido de Cimicfuga con un tamao promedio de partcula de 5 m (placas
Racemosa para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 2 L en una banda de 8 mm
DEFINICIN Fase mvil: Tolueno, formato de etilo y cido frmico
El Extracto Fluido de Cimicfuga Racemosa se prepara a par- (5:3:2)
tir de Cimicfuga Racemosa mediante extraccin con mez- Solucin reveladora: Proceder segn se indica en la
clas hidroalcohlicas o mezclas de isopropanol-agua. prueba de Identificacin A.
Cada mL contiene los reconstituyentes extrados de 1 g Anlisis
del material vegetal. Contiene no menos de 90,0% y no Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de glicsidos Solucin muestra
triterpnicos, calculado como 23-epi-26-desoxiactena Desarrollar hasta que el frente de la fase mvil haya
(Ci1Hs6010). recorrido dos tercios de la longitud de la placa y se-
car la placa con ayuda de una corriente de aire. Ro-
ciar la placa con Solucin reveladora, calentar a 1 00
durante 5 minutos y observar bajo luz diurna.
Criterios de aceptacion: La Solucion muestra presenta
zonas principales similares en posicin y color a las zo-
nas principales de la Solucin estndar A. La Solucin
6390 Cimicfuqa /Suplementos Dietticos USP 38

estndor B presenta zonas de color violeta rojizo debidas Requisitos de aptitud

a aLle11a y 23-P(Ji-76-rlemxiactena a valores f<1 de apro- Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
ximadamente 0,5 y 0,4, respectivamente. La Solucin de la Solucin e5tndar es similar al Cromatograma de
muP,tra presenta zonas similares en color v valores Re a R_~ferr:nc!a prov!5to con e! !otc d(: ER Extracto en
aqullas debidas a actena y 23-epi-26-desoxiactena de Polvo de Cimicfuga Racemosa USP usado.
j Soluc1on estandar B. Resolucin: No menos de l ,O entre los picos de
C. La Solucin muestra presenta picos para cimirracem- (26S)-actena y 23-epi-26-desoxiactena, Solucin de
sido A, 26-desoxicimicifugsido, (26S)-actena, 23-epi- aptitud del sistema
26-desoxiactena, cimigenol-arabinsido y cimigenol-xi- Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
lsido a tiempos de retencin correspondientes a aque- 23-epi-26-desoxiactena, Solucin estndar de 23-epi-
llos compuestos en la Solucin estndar, segn se obtie- 26-desoxiactena de 1 00 g/mL
nen en la prueba de Contenido de Glicsidos Triterpnicos. Desviacin estndar relativa: No ms de 2,010 del
El cociente entre las reas de los picos de cimigenol-ara- logaritmo de la respuesta del rea del pico de 23~epi-
binsido y cimigenol-xilsido es no menos de 0,4 (dife- 26-desoxiactena en inyecciones repetidas, Solucion
rencia con Cimicifuga foetida). estndar de 23-epi-26-desoxiactena de 100 g/mL
Anlisis
COMPOSICIN Muestras: Solucin de aptitud del sistema, Solucin es-
CONTENIDO DE Gucs1oos TRITERPNICOS tndar, Soluciones estndar de 23-epi-26-desoxiactena y
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Ex- Solucin muestra
tracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP en meta- Usando el cromatograma de la Solucin estndar y el
no!, agitando durante 1 minuto, y diluir con metanol Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
hasta obtener una solucin con una concentracin co- ER Extracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP,
nocida de 30 mg/mL. Pasar a travs de un filtro de identificar los tiempos de retencion de los picos co-
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o rrespondientes a los glicsidos triterpnicos. Los tiem-
menor. pos de retencin relativos aproximados para los glic-
Soluciones estndar de 23-epi-26-desoxiactena: Di- sidos triterpnicos se proveen en la Tabla 2.
solver ER 23-epi-26-Desoxiactena USP en metano! agi-
tando durante 1 minuto. Diluir cuantitativamente, y en
diluciones sucesivas si fuera necesario, para obtener so- Tabla 2
luciones con concentraciones conocidas de 500, 1 00, Tiempo de
50, 25 y 12,5 g/ml. Pasar a travs de un filtro de Retencin
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o Compuesto Relativo
menor. Cimicifuasido H-1 o 61
Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER Ac- Cimirracemsido A o 78
tena USP y de ER 23-epi-26-Desoxiactena USP en
metano! (26Rl-Actena o 94
Solucin muestra: Usar Extracto Fluido, diluyendo si 26-Desoxicimicifuasido o 96
fuera necesario con metanol hasta obtener una concen- (265)-Actena - --------- o 98
tracin de aproximadamente 0,75 mg/mL de glicsidos 23-eoi-26-Desoxiactena -~-
1 00
triterpnicos. Centrifugar o pasar a travs de un filtro Acecil-shenamanol-xilsido 1 03
con un tama~o de poro de 0,45 m o menor. Cimiaenol-arabinsido 1 08
Solucin A: Acido trifluoroactico al 0,05% en agua
Cimiaenol-xilsido (cimicifuqsido) 1 13
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 1. 26-Desoxiactena 1 22
25-Acetil-cimiaenol-arabinsido 1 60
Tabla 1 (245)-25-Acetil-cimiqenol-xilsido 1 64
25-0-Metil-cimiqenol-arabinsido 1 90
Tiempo Agua Solucin A Solucin B
fmin) 25-0-Metil-cimiqenol-xilsido 1 93
(%) (%) (%)
'----
o o 80 20 Graficar los logaritmos de las respuestas de los picos
8 o 80 20 en funcin de los logaritmos de las concentraciones,
15 68 o 32 en g/mL, de las Soluciones estndar de 2 3-epi-26-des-
55 36 o 64 oxiactena y determinar la lnea de regresin usando
65 5 o 95
un anlisis de cuadrados mnimos. El coeficiente de
correlacin para la lnea de regresin es no menos de
70 5 o 95
0,995. A partir de las grficas as obtenidas, determi-
~__--2___ .J_____ Q_ 80 20 nar la concentracin, C, en g/mL, del analito perti-
nente en la Solucin muestra. Calcular por separado
Sistema cromatogrfico las concentraciones, en g/mL, de cimicifugosido H-
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.) 1, cimirracemsido A, (26R)-actena, 26-desoxicimici-
Modo: HPLC fugsido, (26S)-actena, 23-epi-26-desoxiactena, ace-
Detector: Evaporativo de dispersin de luz til-shengmanol--xilsido, cimigenol-arabinsido, cimi-
[NOTA-Ajustar el detector segn las instrucciones del genol-xilsido (cimicifugsido), 26-desoxiactena,
fabricante para alcanzar una relacin seal-ruido de no 25-acetil-cimigenol-arabinsido, (24S)-25-acetil-cimi-
menos de 1 O para la Solucin estndar de 2 3-epi- genol-xilsido, 25-0-rnelil-cimigenol-arabinsido y
26-desoxioctena de 12,5 g/ml.] 25-0-metil-cimigenol-xilsido como 23-epi-26-deso-
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m xiactena (C,1Hs6010) en la porcin de Extracto Fluido
Temperatura de la columna: 35 tomada:
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L Resultado = (O x C/V)
Aptitud del sistema
Muestras: So/ucion de aptitud del sistema, Solucion es- O = factor de dilucin para la Solucin muestra, si
tndar y Solucin estndar de 23-epi-26-desoxiactena fuera aplicable: volumen final de la Solucin
de 100 g/mL muestra/volumen de la alcuota de Extracto
Fluido tomado (mL/mL)
USP 38
C =concentracin del analito pertinente en la
Solucin muestra (g/ml)
V ~ volumen de l::xtrJcto Fluido tomado para
pCfJ<l d !u Sulu~fn :nuc:-,tra (mL)
Calcular el pnrrPntajP rlP la cantidad declarada de
glicsidos triterpenicos en la porc1on de Extracto
Fluido tomada:
Resultado = 2..C/L x 1 00
2..C = suma de las concentraciones de glicsidos
triterpnicos individuales (mg/ml)
L = concentracin declarada de glicsidos
triterpnicm del Extracto Fluido (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-11 0,0%
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS (231 ): No ms de 10 ppme coticial 01-dic-
201s1
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 >: El recuento to-
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g, y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 1 oi ufc/g.
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Extractos
Botnicos (565), Disolventes Residuales y Residuos de
Plaguicidas.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar en un lugar
fresco.
ETIQUETADO: Cumple con los requisitos de Etiquetado en
Extractos Botnicos (565). Etiquetar indicando el conte-
nido, como porcentaje, de glicsidos triterpnicos, calcu-
lado como 23-epi-26-desoxiactena. Las formas farmacu-
ticas preparadas con este artculo deben llevar la
siguiente leyenda: Descontinuar el uso y consultar con un
profesional de la salud si tuviera un trastorno heptico o
desarrollara sntomas de un problema heptico, tales
COIJ10 dolor abdominal, orinJ oscura o ictericia.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Actena USP
ER Extracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP
ER 23-epi-26-Desoxiactena USP
Cimicfuga Racemosa, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Cimicfuga Racemosa contienen Extracto en
Polvo de Cimicfuga Racemosa o Extracto Fluido de Cimi-
cfuga Racemosa. Las Tabletas contienen no menos de
90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad declarada de
Extracto en Polvo o Extracto Fluido, representada por el
contenido de glicsidos triterpnicos, calculado como
2 3-epi-26-desoxiactena (C FH,r,01 o).
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Adsorbente: MezclJ de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 10-15 m
(placas para TLC)
Solucin muestra: 1 O mL de la Solucin muestra prepa-
rada para la prueba de Identificacin B. Evaporar hasta
sequedad y disolver nuevame11te en 1nL Je metano!.
Solucin estndar A: 1 00 rng/mL de ER Extracto en
Polvo de Cimicfuga Racemosa USP en metano!
\1mlPmPntm
, DiPtPticos / Cimicfuaa 6391
~
Solucin estndar B: 1 mg/mL de rn Actena USP, de
ER 23 epi 26 Desoxiactefna USP y de acido isoferulico
en metano!
Volumen de ap!!cacln: 1 O pL
Fase mvil: Usar la fase superior de una mezcla de al-
cohol butll1co, ac1do actico glacial y agua (5:1 :4)
Solucin reveladora: Metano!, acido actico glacial,
cido sulfrico y p-anisaldehdo (85: 1 0:5:0,5)
[NOTA-Almacenar en un refrigerador. El reactivo es in-
coloro; desechar si aparece color.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Desarrollar hasta que el frente de la fase mvil haya
recorrido 15 cm y secar la placa con ayuda de una
corriente de aire. Observar la placa bajo luz UV a una
longitud de onda de 365 nm. Rociar la placa con
Solucin reveladora, calentar a 100 durante 5 minu-
tos, y observar a la luz diurna.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
zonas principales similares en posicin y color a las zo-
nas principales de la Solucin estndar A. Observada
bajo luz UV, la Solucin muestra presenta una zona fluo-
rescente de color azul al nivel de la zona debida al
cido isoferlico de la Solucin estndar B, en el tercio
superior de la placa. Observada despus del tratamiento
con Solucin reveladora, la Solucin muestra presenta di-
versas manchas de color marrn verdoso en el tercio
inferior de la placa y diversas zonas de color violeta por
encima; dos de estas zonas de color violeta se presen-
tan en valores RF similares a aquellos debidos a actena
y a 23-epi-26-desoxiact~na en la Solucin es~ndar B.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 5 m (placas
para HPTLC)
Solucin muestra: Transferir el equivalente de la canti-
dad declarada de Extracto en Polvo o Extracto Fluido,
que contenga 25 mg de glicsidos triterpnicos, a partir
de una porcin de Tabletas reducidas a polvo, a 25 ml
de agua, agitar hasta dispersar y someter a ultrasonido
durante 1 O minutos. Agregar 75 mL de metano! y so-
meter a ultrasonido durante 1 O minutos. Dejar en re-
poso durante 15 minutos y usar el sobrenadante
transparente.
Solucin estndar A: Metano! y Solucin estndar A
preparada en la prueba de Identificacin A (3:1)
Solucin estndar B: Metano! y Solucin estndar B
preparada en la prueba de Identificacin A ( 4: 1)
Volumen de aplicacin: 2 L, en una banda de 8 mm
Fase mvil: Tolueno, formiato de etilo y cido frmico
(5:3:2)
Solucin reveladora: Metano!, cido actico glacial,
cido sulfrico y p-anisaldehdo (85:10:5:0,5)
[NOTA-Almacenar en un refrigerador. El reactivo es in-
coloro; desechar si aparece color.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
So/ucion muestra
Desarrollar hasta que el frente de la fase mvil haya
recorrido dos tercios de la longitud de la placa, y
secar la placa con ayuda de una corriente de aire.
Rociar la placa con Solucin reveladora, calentar a
loo- durante 5 minutos, y observar bajo luz diurna.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
zonas principales similares en posicin y color a las zo-
nas principales de la Solucin estndar A, dos de las cua-
les son zonas de color violeta rojizo a valores Rf de 0,5
y 0,4, similares en color y valor Rf a aquellas debidas a
JctcfnJ y J 23 epi 26-desoxiactena en la Solucin estn-
dar B.
C. La Solucin muestra presenta picos de cimirracemsido
A, 26-desoxicimicifugsido, (265)-actena, 23-epi-26-deso-
xiactena, cimigenol-arabinsido y cimigenol-xilsido a
6392 Cimicfuga /Suplementos Dietticos USP 38

los tiempos de retencin correspondientes a tales com- cia rrovistn con el lotr de ER Extracto en Polvo de
puestos en la Solucion estndar, segn se obtienen en la Cirnicfuga Racemosa USP.
prueba de Contemdo de Glicos1dos l rilerpnicos. El co- Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de
ciente entre !J~ Jrcu~ de ~v:, pc_o.> de cimigcnol-aiabin- (2.J)-aLleir 1a y 23-t'p1-2-uesux1aue1na, Sowuon de
sido y cimigenol-xilsirln es no menos de 0,4 (diferencia aptitud del sistema
con Cimicduga foetida). Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
23-epi-26-desoxiactena, Solucin estndar de 23-epi-
CONTENIDO 26-desoxiactena de 100 g/ml
CONTENIDO DE Gucsmos TRITERPNICOS Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% del
Solucin A: cido tritluoroactico al 0,05%, filtrado y logaritmo de las reas en inyecciones repetidas, Solu-
desgasificado, en agua cion estndar de 2 3-epi-26-desoxiactena de 100 g/
Solucin B: Acetonitrilo filtrado y desgasificado mL
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente. Anlisis
Muestras: Solucin de aptitud del sistema, Solucin es-
Tiempo Agua Solucin A Solucin B tndar, Soluciones estndar de 23-epi-26-desoxiactena y
lmin) - - ~-- _i"Jc>L__ (%) (/o) Solucin muestra
o o 80 20 Usando el cromatograma de la Solucin estndar y el
---- ~--

8 o 80 20
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Cimicfu9a Racemosa USP,
15 68 o 32
identificar los tiempos de retencion de los picos co-
55 36 o 64 rrespondientes a los glicsidos triterpnicos. Los tiem-
65 5 ----
o -- ---
__--22_ ____ pos de retencin relativos aproximados para los glic-
70 5 o 95 sidos triterpnicos se proveen en la siguiente tabla.
85 o 80 20
Tiempo de
Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER Ac- Retencin
tena USP y de ER 23-epi-26-Desoxiactena USP en Nombre Relativo
metano! Cimicifunsido H-1 o 61
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP en meta- Cimirracemsido A o 78
no! agitando durante 1 minuto y diluir con metano! f26Rl-Actena o 94
para obtener una solucin con una concentracin cono- 26-Desoxicimicifuosido o 96
cida de 30 mg/ml. Pasar a travs de un filtro de mem- f265)-Actena o 98
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor. 23-eni-26-Desoxiactena 1 00
Soluciones estndar de 23-ep-26-desoxiactena: Di- Acetil-shenomanol-xilsido 1 03
solver ER 23-epi-26-Desoxiactena USP en metanol agi-
Cimioenol-arabinsido 1 08
tando durante 1 minuto. Diluir cuantitativamente, y en
diluciones sucesivas si fuera necesario, para obtener so- Cimioenol--xilsido ( cimicifuasido) 1 13
luciones con concentraciones conocidas de 500, 100, 26-Desoxiactena 1 22
50, 25 y 12,5 g/mL. Pasar a travs de un filtro de 25-Acetil-cimioenol-arabinsido 1 60
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o (245l-25-Acetil-cimiaenol-xilsido 1 64
menor. _25-0-Metil-cimiaenol-arabinsido 1 90
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Tabletas y
25-0-Metil-cimiaenol-xilsido 1 93
reducir a polvo fino. Transferir una cantidad del polvo,
equivalente a 8 mg de glicsidos triterpnicos, a un Graficar los logaritmos de las reas de los picos en
tubo de centrfuga adecuado con tapn de tefln. funcin de los logaritmos de las concentraciones, en
Agregar 3 mL de agua, agitar hasta dispersar, y someter g/mL, de las Soluciones estndar de 23-epi-26-deso-
a ultrasonido durante 1 O minutos a 60. Agregar 3 mL xiactena y determinar la lnea de regresin usando un
de metanol y someter a ultrasonido durante 1 O minu- anlisis de cuadrados mnimos. El coeficiente de co-
tos. Centrifugar y transferir el sobrenadante transfa- rrelacin para la lnea de regresin es no menos de
rente a un matraz volumtrico de 1 O mL. Lavar e resi- O, 995. A partir de las grficas as obtenidas, determi-
duo dos veces con 1,5 ml de una mezcla de metanol y nar la concentracin, C, en r1g/ml, del analito perti-
agua (1: 1 ), y transferir los lavados al matraz volum- nente en la Solucin muestra.
trico. Diluir con una mezcla de metanol y agua (1 :1) a Calcular la cantidad, en mg, de glicsidos triterpnicos
volumen, y pasar a travs de un filtro de membrana en la porcin de Tabletas tomada:
con un tamao de roro de 0,45 m o menor.
Sistema cromato9rafico Resultado = CTl 00
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC C1 =suma de las concentraciones C, en g/ml, de
Detector: Evaporativo de dispersin de luz todos los glicsidos triterpnicos pertinentes,
[NOTA-Ajustar el detector segn las instrucciones del calculados como 23-epi-26-desoxiactena
fabricante para alcanzar una relacin seal-ruido de no Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
menos de 1 O para la Solucin estndar de 2 3-epi- Extracto en la porcin de Tabletas tomada:
26-desoxiactena de 12,5 g/mL.]
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 ~tm Resultado~ (Aw1/W) x (100/Lr) x (100/L) x Cn
Temperatura de la columna: 35'
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min Awr = peso promedio de las Tabletas (mg/Tableta)
Volumen de inyeccin: 20 pl W = peso de la muestra
Aptitud del sistema Lr = contenido declarado, como porcentaje, de
Muestras: Solurin df' aptitud del sistema y Solucin es- triterpenos en el Extracto usado para
tndar de 23-epi-26-de~oxiactelna de 100 g/ml preparar ias Tabletas
Requisitos de aptitud L = cantidad declarada de Extracto por Tableta
Perfil cromatogrfico: El cromatograma de la Solu- Cn = con ten ido, en mg, de triterpenos en la
cin estndar es similar al Cromatograma de Referen- 1nuestra
USP 38
Criterios de aceptacin: 90.0%-110,0% de la cantidad
declarada de Extracto en Polvo o Extracto Fluido, repre-
sentado por el contenido de glicos1dos triterpnicos
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Desintegracin
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETTICOS (2021 ): El recuento total bacte-
riano no excede de 104 ufc/g, y el recuento total combi-
nado de hongos filamentosos y levaduras no excede de
1 0 3 ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS-SUPLEMENTOS
NUTRICIONALES y DIETTICOS (2022): Las Tabletas cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz, y almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el a.rtculo a
partir del cual se prepararon las Tabletas. La etiqueta
tambin indica la cantidad, en mg/Tableta, de Extracto
en Polvo o Extracto Fluido; los disolventes usados para
preparar el Extracto en Polvo o el Extracto Fluido; y la
relacin entre el material vegetal crudo inicial y el Ex-
tracto en Polvo o el Extracto Fluido. Etiquetar indicando
el contenido de glicsidos triterpnicos, como porcen-
taje, calculado como 23-epi-26-desoxiactena en el Ex-
tracto en Polvo o Extracto Fluido usado para preparar las
Tabletas.
La etiqueta lleva la siguiente leyenda: Descontinuar el
uso y consultar con un profesional de la salud si tuviera
un trastorno heptico o desarrollara sntomas de un
problema heptico, tales como dolor abdominal, orina
oscura o ictericia.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Actena USP
ER Extracto en Polvo de Cimicfuga Racemosa USP
ER 23-epi-26-Desoxiactena USP
Citrato de Cinc
o cido ntrico al 1 %
o
211.0
j
',
o
C12H10014Zn 3 2H20 610,36
2-Hydroxy-1,2, 3-propanetricarboxylic acid zinc salt,
dihydrate
Sal de cinc del cido 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxlico,
dihidrato [5990-32-9].
Anhidro [546-46-3].
DEFINICIN
El Citrato de Cinc contiene no menos de 31,3% de cinc
(Zn), calculado con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIN
A. IDENTIFICACIN-PRUEBAS GENERALES, Cinc (191): Una
solucin (1 en 1 O) cumple con los requisitos .
B. IDENTIFICACIN-PRUEBAS GENERALES, Citratos (191 ):
Una solucin (1 en 1 O) cumple con los requisitos.
Suplementos OietPtico' /Cinc 6191
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Muestra: 350 mg de Citrato de Cinc, previamente seca-
do~ J 1 os" durJntc 2 hcrJ~
Blanco: 60 mi de agua
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Edetato disdico 0,05 M SV
Deteccin del punto final: Visual
Anlisis: Disolver la Muestra en 60 mL de agua. Agregar
1 O mL de solucin amortiguadora de amoniaco-cloruro
de amonio SR y O, 1 mL de negro de eriocromo SR. Va-
lorar con Solucin volumtrica hasta un punto final azul.
Realizar una determinacin con un blanco.
Calcular el porcentaje de cinc (Zn) en la porcin de
Citrato de Cinc tomada:
Resultado= [(V- B) X M X f X 100]/W
V = volumen de solucin volumtrica consumida
por la muestra (mL)
B = volumen de solucin volumtrica consumida
por el blanco (mL)
M = molaridad de la solucin volumtrica
(mM/mL)
F = factor de equivalencia, 65,4 mg/mM
W = peso de la muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 31,3% con res-
pecto a la sustancia seca
IMPUREZAS
CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221 ): Una porcin de
1,0 g no presenta ms cloruro que el correspondiente a
O 7 mL de cido clorhdrico 0,020 N (no mas de 0,05%).
CLORUROS v SULFATOS, Sulfatos (221 ): Una porcin de
1,8 g no presenta ms sulfato que el correspondiente a
9,5 mL de cido sulfrico 0,020 N (no ms de 0,05%).
LIMITE DE ARSENICO, CADMIO Y PLOMO
Solucin estndar de arsnico: 1,0 g/mL en cido n-
trico al 1 %, preparada a partir de una solucin estndar
de arsnico (1 O mg/L)
Solucin estndar de cadmio: 1,0 g/mL en cido n-
trico al 1 %, preparada a partir de una solucin estndar
de cadmio (1 O mg/L)
Solucin estndar de plomo: 1,0 g/mL en cido n-
trico al 1 %, preparada a partir de una solucin estndar
de plomo (1 O mg/L)
Solucin estndar de mltiples elementos: 1 O g/L de
plomo, 5 g/L de cadmio y 3 g/L de arsnico en cido
ntrico al 1 %, preparada a partir de Solucin estndar de
plomo, Solucin estndar de cadmio y Solucin estndar
de arsnico, respectivamente
Solucin muestra: 2 mg/mL de Citrato de Cinc en
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Modo: Plasma inductivamente acoplado, ICP-MS
Radiofrecuencia: 1 350 Vatios
Velocidad de flujo del nebulizador: 0,9 L/min
[NOTA-Las condiciones operativas de radiofrecuencia y
velocidad de flujo del nebulizador pueden desarrollarse
y optimizarse basndose en las recomendaciones del
fabricante.]
Masas atmicas de deteccin: As, Cd y Pb
Blanco: Solucin de cido ntrico al 1 %
Anlisis
Muestras: Solucin estndar de mltiples elementos, So-
lucin muestra y Blanco
Determinar las respuestas de la Solucin estndar de
mltiples elementos, la Solucin muestra y el Blanco a
las masas indicadas anteriormente .
6394 Cinc / SuplPmPntm DiPtticos
Calcular el conterndo de cada elemento, en pg/g, en
la porcin de Citrato de Cinc tomada:
RP<;tilt;irlo = (r,irJ Y (jc)
ru = respuesta del pico del elemento
correspondiente de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico del elemento
correspondiente de la Solucin estndar de
mltiples elementos . gar 1 O mL de cido ntrico y calentar la_ s.C>luc1on en
Cs = concentracin del elemento correspondiente
en la Solucin estndar de mltiples elementos
(pg/L)
Cu = concentracin de Citrato de Cinc en la
Solucin muestra (g/L)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 3 g/g
Cadmio: No ms de 5 pg/g
Plomo: No ms de 1O pg/g
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 105
durante 2 horas: pierde no ms de 1,0% de su peso.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 3 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 2 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
Citrato de Cinc, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Citrato de Cinc contienen no menos de
90,0% y no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de
cinc (Zn).
IDENTIFICACIN
A. La Solucin muestra en Contenido produce lneas de
emisin o absorcin a las longitudes de onda caractersti-
cas del cinc.
B. IDENTIFICACIN-PRUEBAS GENERALES, Citratos (191)
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Tabletas
reducidas a polvo, equivalente apr()ximadamente a
15 mg de cinc, a un tubo de centrifuga. Agregar . [NOTA-Disolver en acido clorh1dnco 5 M, ent1b1ando,
2-5 mL de agua, someter a ultrasonido durante 1 mi-
nuto, agitar y centrifugar. . .
Criterios de aceptacin: Cumplen con los requ1s1tos.
CONTENIDO
CONTENIDO DE CINC
Mtodo 1
[NOTA-Se encuentra disponible comercialmente una
solucin madre del estndar con diferentes concentra-
ciones de cinc, que puede usarse en la pr_eparacin de
la Solucin madre del estndar. Puede realizarse el
ajuste volumtrico necesario en la Solucin estndar.
Las concentraciones de la Solucin estndar y la Solu-
cin muestra pueden modificarse para que se adapten
al intervalo lineal o de trabajo del instrumento.]
Solucin madre del estndar: Disolver 625 mg de
xido de cinc pesados y previamente incinerados
hasta peso co'nstante, en 1 O mL de cido ntrico, y
agregar agua hasta obtener 500,0 ml. Esta soluc1on
contiene 1000 mg/L de cinc.
Solucin estndar: Agregar 200 mL de agua y 1 O mL
de cido ntrico a un matraz volumtrico de 500 mL y
USP 38
mezclar minuciosamente. Pipetear y transferir 10,0 mL
de Solucin madre del estndar al matraz volumtrico y
diluir con agua a vol~men hasta obtener una solucin
e.en unJ (.l(Cnlrucion Lv;1uudu de uprGAiit1cJdan1ente
?O mc;ll rle cinc . .
Solucion muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porcin pesada de
las Tabletas reducidas a polvo, equivalente aproxima-
damente a O, 1 g de cinc, a un matraz de 50 fl1L. Agre-
una placa de calentamiento hasta ebulhcion suave, du-
rante la cual se desprenda humo. Calentar a ebullicin
la solucin durante 30 minutos adicionales, agitando
constantemente por rotacin suave, perodo durante el
cual no debe observarse desprendimiento de humo.
Enfriar la solucin a temperatura ambiente, transferir
cuantitativamente toda la solucin a un matraz volu-
mtrico de 500 mL, diluir con agua a volumen y mez-
clar. Pipetear y transferir 25,0 mL de esta soluc1on, .un
matraz volumtrico de 250 mL, agregar 5 mL de acido
ntrico, diluir con agua a volumen, mezclar y filtrar .
Sistema de plasma inductivamente acoplado
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Modo: Espectroscopa de emisin atmica
Longitud de onda analtica: 206,20 nm. [NOTA---:-La.s
condiciones operativas pueden desarrollarse y opt1m1-
zarse basndose en las recomendaciones del fabri-
cante. La configuracin tpica incluye una potencia de
radiofrecuencia (RF) de aproximadamente 1 300 va-
tios, un flujo de antorcha de argn de l?roximada- .
mente 15 L/min, un fluio auxiliar de argon de aproxi-
madamente 0,2 L/min y una velocidad deflujo del
nebulizador de aproximadamente 0,8 L/min.]
Blanco: Solucin de cido ntrico al 2%
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar, Solucin muestra y
Blanco
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta de la Solucin muestra
rs = respuesta d~ la Solucin es~nda~
Cs = concentracion de la Soluoon estandar (mg/L)
Cu = concentracin nominal de cinc en la Solucin
muestra (mg/L)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0%
Mtodo 2
Solucin madre del estndar A: 1000 pg/mL de cinc,
a partir de xido de cinc en cido clorhdric? 5 M
(3,89 mg/mL) diluid~ con agua, a _volumen f1n?I:
si fuera necesario. Enfriar y luego diluir a volumen
final.] .
Solucin madre del estndar B: 50 g/mL de cinc, a
partir de Solucin madre del estndar A diluida con
cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5 O mL de Solucin madre del estandar B a sendos ma-
t(aces volumtricos de 1 00 ml. Diluir el contenido de
cada matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 pg/mL de cinc. . .
Solucin muestra: Reduur a polvo fino no menm de
20 tabletas. Transferir el equivalente a 5 tabletas a un
crisol de porcelana. Calentar el crisol en una .mufla
mantenida a 550'' durante 6-12 horas y enfriar. Agre-
gar 60 mL de cido clorh1drico y calentar a ebullicin
suave en una placa de calenta.miento o un bao de
vapor durante 30 minutos, eniuagando in~e.rm1tente,
mente la superficie interna .del rnsol con ac1do clorh1-
drico 6 N. Enfriar y transferir cuant1tat1vamente el con-
tenido del crisol a un matraz volumtrico de 100 mL.
Enjuagar el crisol con pequeas porciones de cido
USP 38
clorhdrico 6 N y aqreqar los enjuagues al matraz. Di-
luir con agua a volumen y filtrar, desechando los pri-
meros 5 mL del filtrado. Diluir esta solucin cuantitati-
vamente, con cido clorhdrico O, 125 N hasta obtener
una concentracin nominal de 2 g/mL de cinc.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: 21 3,8 nm
Lmpara: Cinc; de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones frente al
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de la concentracin, en g/mL, de
cinc y trazar la lnea recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
cinc en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin determinada de cinc en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN (2040)
Medio: Agua; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Anlisis: Proceder segn se indica en Mtodo 7 o M-
todo 2 en Contenido, realizando los ajustes volumtricos
necesarios.
Solucin muestra: Cuando se usa el Mtodo 7, pipetear
y transferir 10,0 mL de la solucin en anlisis, filtrada y
combinada a un matraz volumtrico de 50 mL, y diluir
con solucin de cido ntrico al 2% hasta 50 ml.
Cuando se usa el Mtodo 2, diluir la solucin en anlisis,
filtrada y combinada con cido clorhdrico O, 125 N
hasta alcanzar una concentracin que se encuentre den-
tro del intervalo de las Soluciones estndar.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) disuelta:
Resultado = cX (VMI a) X (DI L) X 100
C = concentracin de cinc en la Solucin muestra
(mg/L)
V1v1 =volumen de Medio, 900 mL
a = alcuota de la solucin en anlisis (mL)
D = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra, a partir de la alcuota tomada
L = cantidad declarada (mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de cinc
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 3 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 2 ufc/g. .
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
Suplemmtos Dieteticos /Cinc 6395
ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de cinc en
trminos de mg/Tableta.
Cinc y Vitamina C, Tabletas de
Disolucin Bucal
DEFINICIN
Las Tabletas de Disolucin Bucal de Cinc y Vitamina C con-
tienen no menos de 90,0% y_ no ms de 110,0% de la
cantidad declarada de cinc (Zn) obtenido de sustancias
generalmente reconocidas como inocuas y que proporcio-
nan una forma ionizable de cinc;J no menos de 90,0% y
no ms de 120,0% de la cantida declarada de vitamina
C, como cido ascrbico (C6Hs06), ascorbato de sodio
(C6H1Na06) o ascorbato de calcio di hidrato (C12H 14Ca012
2H20). No contiene ninguna otra vitamina ni mineral con
valor nutricional declarado. Puede contener otras sustan-
cias agregadas o ingredientes adicionales declarados en
cantidades que no son objetables.
IDENTIFICACIN
A.
Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido en Con-
tenido de Cinc.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra produce
lneas de emisin o absorcin a las longitudes de onda
caractersticas del cinc.
B.
Anlisis: Triturar una cantidad de Tabletas de Disolucin
Bucal reducidas a polvo fino con una cantidad de al-
cohol suficiente para obtener una solucin que con-
tenga el equivalente a 20 mg/mL de cido ascrbico,
ascorbato de sodio o ascorbato de calcio dihidrato y
filtrar. Agregar 1 mL de cido clorhdrico O, l N a 4 mL
del filtrado, a partir de Tabletas de Disolucin Bucal,
que contengan ascorbato de sodio o ascorbato de
calcio.
Criterios de aceptacin: Una porcin del filtrado re-
duce el tartrato cprico alcalino SR lentamente a tem-
peratura ambiente pero ms rpidamente al calentar.
CONTENIDO
CONTENIDO DE CINC
Procedimiento 1
[NOTA-Se encuentra disponible comercialmente una
solucin madre del estndar con diferentes concentra-
ciones de cinc, que puede usarse en la preparacin de
la Solucin madre del estndar. Puede realizarse el
ajuste volumtrico necesario a la Solucin estndar. Las
concentraciones de la Solucin estndar y la Solucin
muestra pueden modificarse para que se adaf ten al
intervalo lineal o de trabajo del instrumento.
Solucin madre del estndar: Disolver 625 mg de
xido de cinc, pesados y previamente incinerados
hasta peso constante, en 1 O mL de cido ntrico, y
agregar agua hasta obtener 500,0 mL. Esta solucin
contiene 1000 g/mL de cinc.
Solucin estndar: Agregar 200 mL de agua y 1 O mL
de cido ntrico a un matraz volumtrico de 500 mL y
mezclar minuciosamente. Pipetear y transferir 10,0 mL
de Solucin madre del estndar al matraz volumtrico,
y diluir con agua a volumen para obtener una solucin
con una concentracin conocida de aproximadamente
20 g/mL de cinc.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas de Disolucin Bucal. Transferir una
porcin de Tabletas de Disolucin Bucal, pesada con
exactitud, equivalente aproximadamente a O, 1 g de
cinc, a un matraz de 50 mL. Agregar 1 O mL de cido
ntrico y calentar la solucin en una placa de calenta-
miento hasta ebullicin suave, durante la cual se des-
6396 Cinc / Suplt'mentos Dietticos
prenda humo. Calentar a ebullicin la solucin durante
30 r11i11ulu~ adilionaies, agitando constantemente por
rotacin suave, periodo durante el cual no debe obser-
varse rlesprendimiento rle humo. Fnfriar la snlurin a
temperatura ambiente, transferir cuantitativamente
toda la soluc1on a un matraz volumlrico de 500 ml,
diluir con agua a volumen y mezclar. Pipetear y trans-
ferir 25,0 ml de esta solucin a un matraz volumtrico
de 250 ml, agregar 5 ml de cido ntrico, diluir con
agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema de plasma inductivamente acoplado
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Modo: Espectroscopa de emisin atmica
Longitud de onda analtica: 206,20 nm
[NOTA-Las condiciones operativas pueden desarro-
llarse y optimizarse basndose en las recomendacio-
nes del fabricante. La configuracin tpica incluye
una potencia de radiofrecuencia (RF) de aproxima-
damente 1 300 vatios, un flujo de antorcha de argn
de aproximadamente 15 L/min, un flujo auxiliar de
argn de aproximadamente 0,2 L/min y una veloci-
dad de flujo del nebulizador de aproximadamente
0,8 L/min.]
Blanco: Solucin de cido ntrico al 2%
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar, Solucin muestra y
Blanco
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Tabletas de Disolucin Bucal
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta de la Solucin muestra
rs = respuesta de la Solucin estndar
Cs = concentracin de cinc en la Solucin estndar
(g/mL)
Cu = concentracin nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la canti-
dad declarada de cinc
Procedimiento 2
Solucin madre del estndar A: Disolver xido de
cinc en cido clorh1drico 5 M, entibiando si fuera nece-
sario, hasta obtener una solucin con una concentra-
cin de 3,89 mg/mL. Diluir con agua hasta obtener
una solucin con una concentracin de 1000 g/mL
de cinc.
Solucin madre del estndar B: 50 g/mL de cinc, a
partir de Solucin madre del estndar A en cido clorh-
drico O, 1 25 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solucin madre del estndar B a sendos ma-
traces volumtricos de 1 00 ml. Diluir el contenido de
cada matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen
para obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5;
2,0 y 2,5 g/mL de cinc.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas de Disolucin Bucal. Transferir el equiva-
lente a 5 Tabletas de Disolucin Bucal a un crisol de
porcelana. Calentar el crisol en una mufla mantenida a
550' durante 6-12 horas y enfriar. Agregar 60 ml de
cido clorhdrico y calentar a ebullicion suave en una
placa de calentamiento o en un bao de vapor du-
rante 30 minutos, enjuagando intermitentemente la
superficie interna del crisol con cido clorhdrico 6 N.
Enfriar y transferir cuantitativamente el contenido del
crisol a un matraz volumtrico de 1 00 ml. Enjuagar el
crisol con pequeas porciones de cido clorh1drico 6 N
y agregar los enjuagues al matraz. Diluir con agua a
volumen y filtrar, desechando los primeros 5 mL del
filtrado. Diluir esta solucin cuantitativamente con
cido clorhdrico O, 125 N para obtener una concentra-
cin nominal de 2 g/mL de cinc.
USP 38
Condiciones instrumentales
v
(Ver Espcctrofotomctra Dispersin de Luz 851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: 213,8 nrn
Lmpara: Cinc; de ctodo huern
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones frente al
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de la concentracin, en g/ml, de
cinc y trazar la lnea recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
cinc en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Tabletas de Disolucin Bucal
tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin determinada de cinc en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la canti-
dad declarada
CONTENIDO DE VITAMINA C
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 Tabletas
de Disolucin Bucal a un matraz volumtrico de
1000 mL que contenga 250 mL de cido metafosfri-
co-cido actico SR. Tapar el matraz y agitar mecnica-
mente durante 30 minutos o hasta que las tabletas de
disolucin bucal se hayan desintegrado completamente.
Diluir con agua a volumen. Transferir una porcin de la
solucin a un tubo de centrfuga y centrifugar hasta
obtener un sobrenadante transparente. Diluir cuantitati-
vamente el sobrenadante transparente con agua, si
fuera necesario hasta obtener una solucin que con-
tenga 0,5 mg/mL de cido ascrbico.
Blanco: Una mezcla de 5,5 mL de cido metafosfrico-
cido actico SR y 15 mL de agua
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Solucin estndar de diclorofe-
nol-indofenol SV
Deteccin del punto final: Visual, un color rosado
que persista durante al menos 5 segundos.
Anlisis: Transferir un volumen de la Solucin muestra,
equivalente a 2 mg de cido ascrbico, a un matraz
Erlenmeyer de 50 mL. Agregar 5 mL de cido metafos-
frico-cido actico SR y valorar con Solucin volum-
trica. Corregir por el volumen de la Solucin volumtrica
consumido por el Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cido
ascrbico (C6Hs06) en la porcin de Tabletas de Disolu-
cin Bucal tomada:
Resultado = {[( V1 - Vs) x FJ/ W} x 100
Vs = volumen de Solucin volumtrica consumido
por la Solucin muestra (ml)
Ve = volumen de Solucin volumtrica consumido
por el Blanco (mL)
F = equivalente de cido ascrbico de la Solucin
volumtrica (mg/mL)
W = peso nominal de cido ascrbico tomado para
el Anlisis (mg)
Criterios de aceptacin: 90,0%-1 20 . 0% de la rantidad
declarada
USP 38
PRUEBAS ESPECFICAS
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (202 l ): ti recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10' ufc/g,
Y_ el recuento t_ota_i combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de l 0 2 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Escherichia coli.
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN (2040)
Medio: cido clorhdrico O, 1 N; 900 mL
Aparato 2: 7 5 rpm
Tiempo: 60 min . .
Anlisis: Determinar la cantidad de cinc (Zn) y v1tam1na
c disuelta, usando los procedimientos .en sontenido ~n
Contenido de Cinc y en Contenido de V1tamma C, reali-
zando los ajustes volumtricos necesarios. [NOTA-Pro-
ceder sin demora con la determinacin de vitamina C.]
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) disuelta:
Resultado= cX (VM/a) X (O/L) X 100
C = concentracin medida de Cinc en la Solucin
muestra (mg/mL)
VM =volumen de Medio, 900 mL
a = alcuota de la solucin en anlisis tomada (mL)
O = factor de dilucion para preparar la Solucin
muestra, a partir de la alcuota tomada
L = cantidad declarada de cinc (mg/Tableta)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
vitamina C, como cido ascrbico (C6Hs06), disuelta:
Resultado= (V5 - Vs) x Fx [(VM!a)/L] x 100
V5 = volumen de Solucin volumtrica consumido
por la Solucin muestra (mL)
V8 = volumen de Solucin volumtrica consumido
por el Blanco (mL)
F = concentracin de la Solucin volumtrica en
trminos del equivalente de cido ascrbico
(mg/mL)
VM = volumen de Medio, 900 mL
a = volumen de la alcuota tomada para el Anlisis
L = cantidad declarada de cido ascrbico
(mg/Tableta) . aparato Soxhlet con 150 mL de alcohol durante 6 ho-
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de cinc (Zn) y vitamina C
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
ETIQUETADO: La etigueta indica la cantidad de cinc y de
vitamina C, como acido ascrbico, en mg por Tableta de
Disolucin Bucal, y la forma salina del cinc y la forma
qumica de la vitamina C presentes en las Tabletas de
Disolucin Bucal.
Gluconato de Cinc-ver Gluconato de Cinc
en Monografas Generales
Ciruelo Africano
DEFINICIN
El Ciruelo Africano consiste en la corteza de Prunus africana
(Hook f.) Kalkman (Pygeum africanum Hook f.) (Fam. Rosa-
ceae). Contiene no menos de 9,0% de materia extrable.
\u1/:;mpntos Diet.Oticos /Ciruelo Africano 6397
IDENTIFICACIN ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: i O mg;ml de ER Extracto de Ci-
n11?lo Afric;ino USP en cloroformo
Solucin estndar B: 1 mg/mL de ER /:1-Sitosterol USP
en cloroformo
Solucin muestra: Transferir a un aparato soxhlet 1 O g
de material vegetal en polvo. Extraer con 150 mL de
cloruro de metileno durante 4 horas. Evaporar el ex-
tracto al vaco hasta sequedad. Disolver el residuo en
1 O mL de cloruro de metileno.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: l O pL
Fase mvil: Cloruro de metileno en una cmara
saturada ,
Solucin reveladora: Acido sulfrico y agua (1 :1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de
no menos de 1 5 cm y secar la placa en una corriente
de aire. Rociar la placa con Solucin reveladora y ca-
lentar la placa a 100 durante 1 O minutos. Observar
la placa bajo luz blanca. .
Criterios de aceptacin: El cromatograma c;>bten1do..
con la Solucin muestra presenta una zona violeta ro11za
que se torna marrn griscea cerca del origen y que
corresponde en color y valor RF a la del cromatograma
de la Solucin estndar A; una zona violeta rojiza que se
torna marrn griscea a un valor RF de aproximada-
mente 0,08, que corresponde en color y valor RF a la
del cromatograma de la Solucin estn_dar B; _sobre estas
manchas puede haber una zona marron gnsacea que
corresponde en color y valor RF a la del cromatograma
de la Solucin estndar A. Otras zonas coloreadas de
diferentes intensidades pueden observarse en el croma-
tograma de la Solucin muestra.
COMPOSICIN
MATERIA EXTRABLE
Anlisis: Extraer 2,00 g del material en polvo en un
ras. Evaporar la solucin hasta sequedad al vaco y secar
el residuo a 105 durante 24 horas .
Criterios de aceptacin: No menos de 9,0% de ma-
teria extrable
CONTAMINANTES
METALES PESADOS (231): No ms de 20 pg/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Las piezas de corteza consisten en frag-
mentos largos de dimensiones variables, desde apenas
unos pocos centmetros hasta 1 m de largo con un gro-
sor que vara de unos pocos mm a 1-2 cm .. Es de color
marrn, ms o menos oscuro en la superf1c1e externa y
marrn claro a marrn rojizo en la superficie interna. La
parte externa de la corteza presenta u~ ritidom_a _muy .
oscuro y fisurado que en muestras de arboles v1e1os esta
fragmentado en placas ms o menos cuadradas de
1-5 cm. El grosor vara de 1 mm en plantas jvenes o
ramas hasta 5-8 mm en plantas viejas. La superficie ex-
terna tambin puede estar cubierta con lquenes blan-
quecinos con m_usgo delgad9 filamentoso. La corteza
interna, bao el nt1doma, es mas clara y presenta una
coloracin ms rojiza, con una hendidura larga y fibrosa
de color marrn rojizo a marrn claro y marrn oscuro,
6398 Ciruelo Africano / Suplementos Dietticos
generalmente rnn <Jrietil~ de estratificacin concntri-
cas. La suerficie i11tema es ms clara y presenta arru-
gas peque11as.
Microscpicas. [i Lutle l1d11wersai de id corteLa pre-
senta una capa suberizada con un grosor que depende
de la edad de la planta y que est compuesta de mlti-
ples capas de clulas pequeas y cuadradas con paredes
de grosor moderado. Presenta un parnquima cortical
de clulas ms o menos redondas, con pocas formacio-
nes aparentes de esclereidas de paredes muy delgadas,
bien definidas. A menudo, en el parnquima, existen
grupos de clulas que contienen drusas de oxalato;
tambin pueden observarse algunas clulas ms gran-
des con paredes gruesas. Muestra un lber con zonas de
floema y radios medulares. Las porciones de floema
contienen grupos de clulas fibrosas con paredes muy
engrosadas as1 como elementos de floema y parn-
quima, que algunas veces contienen drusas de oxalato.
Los radios medulares son de forma cnica, ms grandes
en la superficie externa y ms delgados en su lado
in,terno; tambin puedefl contener drusas de oxalato.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(?61): No ms de 5,0%
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar a 60 durante 15 ho-
ras:, pierde no ms de 1 0,0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 10,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la P,lanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto de Ciruelo Africano USP
ER /3-Sitosterol USP
Ciruelo Africano, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Ciruelo Africano contienen Extracto de Ci-
ruelo Africano. Las Cpsulas contienen no menos de
90,0% y no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de
Extracto, calculado como esteroles y ferulato de docosilo.
IDENTIFICACIN
A. Los tiempos de retencin de los picos de campesterol,
estigmasterol y /3-sitosterol de la Solucin muestra corres-
ponden a los de la Solucin estndar, segn se obtienen
en la prueba de Contenido de Esteroles.
B. El tiempo de retencin del pico de ferulato de doco-
silo de la Solucin muestra corresponde al de la Solucin
estndar, segn se obtienen en la prueba de Contenido de
Ferulato de Docosi/o.
CONTENIDO
CONTENIDO DE ESTEROLES
Solucin de derivatizacin: Bis(trimetilsilil)acetamida y
trimetilclorosilano (9: 1)
Solucin de estndar interno: 2 mg/mL de 5a-coles-
tano en cloroformo
Solucin madre de aptitud del sistema: 2 mg/mL de
campesterol, de estigmasterol y de ER /3-Sitosterol USP
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar 2,0 mL de la
Soluoon madre de aptitud del sistema y 2,0 mL de la
Solucin de estndar interno, y diluir con cloroformo
hasta 1 O mL. Evaporar 500 L de esta solucin hasta se-
quedad usando una corriente de nitrgeno. Disolver el
residuo en 80 L de Solucin de derivatizacin y 20 L
de piridina. Dejar en reposo durante no menos de 1 O
minutos a temperatura ambiente.
USP 38
Solucin madre del estndar: 2,0 mc/mL de ER /-J-Si-
tosterol USP en cloroformo
Solucin estndar: Mezclar 2,0 mL de la Solucin ma-
dre del estandar y L,U mL de la ::ioluc/On de estandar
intprno, y diluir con cloroformo hasta 1 O mL. Evaporar
500 ~1L de esta solucin hasta sequedad usando una co-
rriente de nitrgeno. Disolver el residuo en 80 L de
Solucin de derivatizacin y 20 L de piridina. Dejar en
reposo durante no menos de 1 O minutos a temperatura
ambiente.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Cpsulas
equivalente a 1 00 mg de la cantidad declarada de Ex-
tracto a un matraz de fondo redondo de 1 00 mL. Agre-
gar 2,0 mL de la Solucin de estndar interno y 20 mL
de cido clorhdrico diluido. Acoplar un condensador y
someter a reflujo en un bao a 1 00 durante 30 minu-
tos. Enfriar la solucin a temperatura ambiente y ajustar
agregando aproximadamente 5 mL de hidrxido de so-
dio 1 O N hasta un pH de 8. Extraer dos veces usando
50 mL de ter cada vez, lavar las fases orgnicas recogi-
das con 50 mL de agua, y evaporar la fase orgnica
hasta sequedad al vaco. Disolver el residuo con 4 mL
de cloroformo y transferir a un cartucho que contenga
500 mg de relleno L8 acondicionado con un volumen
de n-hexano equivalente a 2 veces el volumen de la
columna. [NOTA-Un cartucho adecuado es Chroma-
bond NH2, fabricado por Macheray Nagel, o equiva-
lente.] Recoger el eluato. Eluir dos veces con un volu-
men de una mezcla de cloroformo e isopropanol (2:1)
equivalente a 1 columna. Combinar los eluatos y evapo-
rar hasta sequedad. Disolver el residuo en 1 O mL de clo-
roformo. Evaporar 500 L de esta solucin hasta seque-
dad bajo una corriente de nitrgeno. Disolver el residuo
con 80 L de Solucin de derivatizacin y 20 L de piri-
dina. Dejar en reposo durante no menos de 1 O minutos
a temperatura ambiente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la llama
Columna: Capilar, de 0,32 mm x 30 m, recubierta con
fase G27 de 0,25 m de espesor
Temperatura
Detector: 285
Inyector: 285
Columna: Ver la tabla de programa de temperatura
siguiente.
'~m:.I.m~"
Tiempo de
Espera (Hold
Time)
Temperatura a Tempera-
Inicial Temperatura 1 Final tura Final
n {"/min) ( ) {min)
250
250 1
L
o
') -+- 1
250
320
---- _____ ___J_ _______
5
segn sea ne-
cesario
Gas transportador: Helio. [NOTA-Ajustar la velocidad
de flujo del gas transportador para obtener un tiempo
de retencin de 19 minutos para /3-sitosterol.]
Gas de compensacin: Helio
Volumen de inyeccin: 2 L
Tipo de inyeccin: Sistema de inyeccin dividida
Relacin de particin: 1: 50
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
lNOTA-Los tiempos de retencin relativos para 5a-co-
lestano, campesterol, estigmasterol y 3-sitosterol son
aproximadamente 0,66; 0,94; 0,96 y 1,00,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 2 entre campesterol y
estigmasterol
USP 38
Eficiencia de la columna: Nn mPnn~ de l 50 000 pla-
tos tericos para el pico de 5lt-coleslano
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para cada pico
r.erli11e11le
Analisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Identificar las seales correspondientes a los analitos
pertinentes por comparacin con los cromatogramas
obtenidos con la Solucin de aptitud del sistema.
Calcular los porcentajes de la cantidad declarada de
Extracto como esteroles en la porcin de las Cpsulas
tomada:
Resultado = (LRu/Rs) x (Cs x V/W) x (Aw x 100/L) x
100/L
LRu = suma de los cocientes de respuesta de
campesterol, estigmasterol y 3-sitosterol
relativos al estndar interno de la Solucin
muestra
Rs = cociente entre los picos de 3-sitosterol y
estndar interno de la Solucin estndar
Cs Solucin
= concentracin de 3-sitosterol en la
madre del estndar (mg/mL)
V = volumen de la Solucin madre del estndar
usado para preparar la Solucin estndar
(2,0 mL)
w =peso de la muestra de Cpsulas tomada para
preparar la Solucin muestra (mg)
Aw = peso promedio del contenido de Cpsulas
(mg/Cpsula)
= contenido de esteroles en 100 mg del Extracto
usado para preparar las Cpsulas (m9)
L = cantidad declarada de Extracto por Capsula
(mg/Cpsula)
Criterios de aceptacin: 90%-11 0% de la cantidad de-
clarada de Extracto, calculado como esteroles
CONTENIDO DE FERULATO DE DOCOSILO
Solucin A: Metano\ y agua (95:5)
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Solucin A y Solucin B (17:3)
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Feru-
lato de Docosilo USP en cloroformo y diluir, en dilucio-
nes sucesivas si fuera necesario, con acetonitrilo para
obtener una concentracin de 0,01 mg/ml. Pasar a
travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Pesar el contenido de no menos de
20 Cpsulas y transferir una cantidad del material equi-
valente a 0,2 mg de ferulato de docosilo a un vaso de
precipitados de 50 mL. Agregar 5 mL de cloroformo y
disolver en un bao ultrasnico. Transferir a un matraz
volumtrico de 20 mL con ayuda de no ms de 2 mL
de cloroformo. Diluir con acetonitrilo a volumen y mez-
clar. Pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 323 nm
Columna: 4 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 25u
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 320 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1 700 platos
tericos para el pico de ferulato de docosilo
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para ferulato de
docosilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de los analitos.
Supit:mcntos Dietticos /Ciruelo Africano 6399
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de Ex-
tracto de ferulato de dornsilo e11 Id porcin de Cp-
sulas lomdda:
Resultado = (r,jr'..) >< (C'.. >< V/W) >< (A. >< 100/Lr) ><
l 00/L
fu = respuesta del pico de ferulato de docosilo de
la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de ferulato de docosilo de
la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Ferulato de Docosilo USP
en la Solucin estndar (mg/mL)
V = volumen final de Solucin muestra (20,0 mL)
w = peso de la muestra de Cpsulas tomado para
preparar la Solucin muestra (mg)
Aw = peso promedio del contenido de Cpsulas
(mg/Cpsula)
= contenido de ferulato de docosilo en 100 mg
del Extracto usado para preparar las Cpsulas
(mg)
L = cantidad declarada de Extracto por Cpsula
(mg/Cpsula)
Criterios de aceptacin: 90%-11 0% de la cantidad de-
clarada de Extracto, calculado como ferulato de doco-
silo y esteroles (de Contenido de Esteroles)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Prueba de Rup-
tura para Cpsulas Blandas ,
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETTICOS (2021 >: El recuento total bacte-
riano no excede de 1000 ufc/g. El recuento total combi-
nado de hongos filamentosos y levaduras no excede de
1000 ufc/g. ,
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Las
Cpsulas cumplen con los requisitos de las pruebas para
determinar la ausencia de Salmonella spp. y Escherichia
coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y almacenar a temperatura ambiente
controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del cual se prepararon las Cpsulas. La etiqueta
tambin indica la cantidad de Extracto en mg/Cpsula.
Etiquetar las Cpsulas indicando la cantidad de esteroles
y ferulato de docosilo como porcentaje del Extracto con-
ten)do en las Cpsulas.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ferulato de Docosilo USP
ER Extracto de Ciruelo Africano USP
ER 3-Sitosterol USP
Extracto de Ciruelo Africano
DEFINICIN
El Extracto de Ciruelo Africano se prepara a partir de Ciruelo
Africano reducido a polvo, usando disolventes adecuados.
Contiene no menos de 90% v no ms de 11 0% de la
cantidad declarada de ferulato de docosilo y no menos de
90% y no ms de 11 0% de la cantidad declarada de este-
roles totales, como 3-sitosterol, calculado con respecto a
la materia seca.
6400 Ciruelo Africano / Suplementos Dietticos
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar/\: 15 rng/niL de ER Ext<lcto de Ci-
ruelo Africano USP en cloroformo
Solucin estndar B: 2 mg/ml de f::R tJ-Sitosterol USP
en cloroformo
Solucin muestra: Disolver 150 mg de Extracto en
1 O ml de cloroformo.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 1 O L
Fase mvil: Cloruro de metileno en una cmara
saturada
Solucin reveladora: cido sulfrico y agua (1: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta una longitud de
no menos de 1 5 cm y secar Ja placa en una corriente
de aire. Rociar la placa con Solucin reveladora y ca-
lentar la placa a 100 durante 1 O minutos. Observar
la placa bajo luz blanca.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una zona violeta rojiza que se
torna marrn griscea cerca del origen y que corres-
ponde en color y valor RF a la de la Solucion estndar A;
y una zona violeta rojiza que se torna marrn griscea a
un valor Rr de 0,08, que corresponde en color y valor RF
a la del cromatograma de la Solucin estndar B; sobre
estas manchas puede haber una zona marrn griscea
que corresponde en color y valor Rr a la de la Solucin
estndar A; y otras zonas coloreadas de diferentes inten-
sidades pueden observa,rse en la Solucin muestra.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Ferulato de Docosilo.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta un pico de ferulato de docosilo
que corresponde en tiempo de retencin al pico princi-
pal en el cromatograma de la Solucin estndar.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ESTEROLES
Solucin de derivatizacin: Bis(trimetilsilil)acetamida y
trimetilclorosilano (9:1)
Solucin de estndar interno: 2 mg/ml de 5cx-coles-
tano en cloroformo
Solucin madre de aptitud del sistema: 2 mg/ml de
campesterol, de estigmasterol y de ER f3-Sitosterol USP
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar 2,0 ml de la
Solucin madre de aptitud del sistema y 2,0 ml de la
Solucin de estndar interno, y diluir con cloroformo
hasta 1 O ml. Evaporar 500 L de esta solucin hasta se-
quedad usando una corriente de nitrgeno. Disolver el
residuo en 80 L de Solucin de derivatizacin y 20 L
de piridina. Dejar en reposo durante no menos de 1 O
minutos a temperatura ambiente.
Solucin madre del estndar: 2,0 mg/ml de ER tJ-Si-
tosterol USP en cloroformo
Solucin estndar: Mezclar 2,0 ml de la Solucin ma-
dre del estndar y 2,0 ml de la Solucin de estndar
interno, y diluir con cloroformo hasta 1 O ml. Evaporar
500 L de esta solucin hasta sequedad usando una co-
rriente de nitrgeno. Disolver el residuo en 80 L de
Solucin de derivatizacin y 20 L de piridina. Dejar en
reposo durante no menos de 1 O minutos a temperatura
ambiente
Solucin muestra: Transferir 1 00 mg de Extracto a un
matraz de fondo redondo de 100 ml. Agregar 2,0 ml
de Solucin de estndar interno y 20 mL de cido clorh-
drico diluido. Acoplar un condensador y someter a re-
USP 38
flujo en un bao a 1 00'' durante 30 minutos. Enfriar la
~olucin hasta temperatura ambiente y ajustar a un pH
de 8 agregando aproximadamente 5 ml de hidrxido
dt::: >uJiu 1O hl. E:xlraer Jm vece~ u~ando 50 mL de eter
cada vez, lavar las fases orgnicas recolectadas con
50 ml de agua y evaporar la fase orgnica al vaco
hasta sequedad. Disolver el residuo con 4 ml de cloro-
formo y transferir a un cartucho relleno con 500 mg de
material L8 1 previamente acondicionado con un volu-
men de n-hexano equivalente a 2 veces el volumen de
la columna. Recoger el eluato. Eluir dos veces, con un
volumen equivalente a 1 columna, de una mezcla de
cloroformo e isopropanol (2: 1 ). Combinar los eluatos y
evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo en 1 O ml
de cloroformo. Evaporar 500 L de esta solucin hasta
sequedad bajo una corriente de nitrgeno. Disolver el
residuo con 80 L de Solucin de derivatizacin y 20 L
de piridina. Dejar en reposo durante no menos de 1 O
minutos a temperatura ambiente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la llama
Columna: Capilar, de 0,32 mm x 30 m; recubierta con
fase G27 de 0,25 m de espesor
Temperaturas
Inyector: 285
Detector: 285
Columna: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo de
Espera (Hold
Time)
Temperatura Rampa de Temperatura a Tempera-
Inicial Temperatura Final tura Final
{) (/min) () lmin)
250 o 250 5
250 5 320 o
Gas transportador: Helio. [NOTA-La velocidad de
flujo del gas transportador debe ajustarse para obtener
un tiempo de retencin de aproximadamente 19 mi-
nutos para f3-sitosterol.]
Gas de compensacin: Helio
Volumen de inyeccin: 2 .L
Tipo de inyeccin: Sistema de inyeccin dividida
Relacin de particin: 1 :50
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para 5cx-co-
lestano, campesterol, estigmasterol y f3-sitosterol son
aproximadamente 0,66; 0,94; 0,96 y 1,00,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 2 entre campesterol y
estigmasterol
Eficiencia de la columna: No menos de 150 000 pla-
tos tericos para el pico de 5cx-colestano
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para cada pico
r.ertinente
Analisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Identificar las seales correspondientes a los analitos
pertinentes por comparacin con los cromatogramas
obtenidos con la Solucin de aptitud del sistema.
Calcular por separado los porcentajes de campesterol,
estigmasterol y f.l-sitosterol, como f3-sitosterol, respecti-
vamente, en la porcin de Extracto de Ciruelo Africano
torncHJa:
( = (Ru/Rs) x Cs x (V/VV) x 100
1Un cartucho adecuado es Chromahond NH2, fahricado por Macheray Na-
gel, o un cartucho equivalente.
USP 38 tlf!lt>mt>niu<. Dt>tft(OS / Cistina 6401

Ru - cociente de respuestJ entre los picos de P = porcentaje de ferulato de docosilo en la

esterol correspondiente y el estndar interno porcron de l::xtracto tomada
de la Solucin muestra L = cantidad declarada de ferulato de docosilo en
R, = cociente de respuesta entre los picos de /j- el txtracto de Crrueo Africano llo)
silosterol y el eslnJar interno de la Solucin Criterios de aceptacin: 90%-11 orv.. de la cantidad de-
estndar clarada de ferulato de docosilo con respecto a la ma-
Cs = concentracin de tJ-sitosterol en la Solucin teria seca
madre del estndar (mg/ml)
V = volumen de Solucin madre del estndar CONTAMINANTES
tomado para preparar la Solucin estndar
(ml) Eliminar lo siguiente:
W = peso de Extracto de Ciruelo Africano tomado
para preparar la Solucin muestra (mg)
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231 ): 20 g/ g (Oficial 01 die
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
2015), ,
esteroles totales como tJ-sitosterol:
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
Resultado = ('LC/ L) x 1 00 (561 ): No ms de 4 g/kg de aflatoxinas totales B1, B2,
Gl ,Y G2; no ms de 2 g/kg de aflatoxina B1
e = porcentaje individual de cada esterol, segn se ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
calcul anteriormente
L = cantidad declarada de esteroles totales en el requisitos. ,
Extracto de Ciruelo Africano tomado ExTRACTOS BOTANICOS, Preparaciones (565): Cumple con
Criterios de aceptacin: 90%-11 0% de la cantidad de- los requisitos en Requisitos Farmacopeicos Generales, Disol-
clarada de esteroles totales como j3-sitosterol con res- ventes Residuales
pecto a la materia seca PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
CONTENIDO DE FERULATO DE DOCOSILO tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g
Solucin A: Metanol y agua (95:5) y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
Solucin B: Acetonitrilo levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. ,
Fase mvil: Solucin A y Solucin B (17:3) AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Feru- ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
lato de Docosilo USP en cloroformo y diluir con aceto- ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
nitrilo hasta obtener una concentracin de 0,02 mg/ml. PRUEBAS ESPECFICAS
Pasar a travs de un filtro con un tamao de poro de PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto du-
0,45 m o menor.
Solucin muestra: Agregar a 250 mg de Extracto 5 ml rante 3 horas a 11 O: pierde no ms de 1 0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
de cloroformo y diluir con acetonitrilo hasta 25 ml. Pa- No ms de 0,5%
sar a travs de un filtro con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros 4 ml de filtrado. REQUISITOS ADICIONALES
Sistema cromato9rfico ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en envases im-
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.) permeables. Proteger de la luz.
Modo: HPLC ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
Detector: UV 323 nm latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
Columna: 4 mm x 25 crn; relleno L7 planta de la que se prepar el artculo. Etiquetar indi-
Temperatura de la columna: 25 cando el contenido en porcentaje de esteroles totales
Velocidad de flujo: 1 ml/min como j3-sitosterol y de ferulato de docosilo. Tambin
Volumen de inyeccin: 20 L cumple con los requisitos en Extractos Botnicos (565),
Aptitud del sistema Etiquetado.
Muestra: Solucin estndar ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
Requisitos de aptitud ER Ferulato de Docosilo USP
Eficiencia de la columna: No menos de 1 700 platos ER Extracto de Ciruelo Africano USP
tericos para el pico de ferulato de docosilo ER /3-Sitosterol USP
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para ferulato de
docosilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de ferulato de docosilo (P) en la
porcin de Extracto tomada: Clorhidrato de Cistena--ver Clorhidrato
de Cistena en Monografas Generales
P = (r11/r1) X Cs X (V/W) X 100
ru = rea del pico de ferulato de docosilo de la
Solucin muestra Cistina
rs = rea del pico de ferulato de docosilo de la
Solucin estndar o
Cs concentracin de ER Ferulato de Docosilo USP
=
en la Solucin estndar (mg/ml) l
V = volumen de la Solucin muestra (ml) NH

W = peso de Extracto tomado para preparar la

Solucin muestra (mg) C6H12N204S2 240,30
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de L-Cystine;
ferulato de docosilo: ~, 3 -Disulfanediyibis [(2R)-2-d111i11up10pa11oic acid],
Acido 3, 3' -disulf anodiilbis[(2R)-2-aminopropanoico]
Resultado = (PI L) x 1 00 [56-89-3].
6402 Cistina / Suplementos Dietticos
DEFINICIN
La Cistina contiene nu 111e11m de 98,5%J y no ms de
101,5% de cistina (C,HuN204S2), como L-Cistina, calcu-
IJdo con respecto id >u>ldr1ud ~eca.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCJN,EN EL INFRARROJO (197K)
B. ROTACION OPTICA, Rotacin Especfica (781S)
Solucin muestra: 20 mg/ml, en cido clorhdrico 1 N.
Realizar las mediciones inmediatamente despus de su
preparacin.
Criterios de aceptacin: -215 a -225, determinada a
20
C. El valor Rr de la mancha principal de la Solucin mues-
tra en la prueba de Impurezas Orgnicas corresponde al
de la Solucin estndar.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Solucin muestra: Transferir aproximadamente O, 1 g
de Cistina a un matraz con tapn de vidrio y disolver
en una mezcla de 2 ml de hidrxido de sodio diluido
(1 en 20) y 1 O ml de agua. Agregar 1 O ml de solucin
de bromuro de potasio (200 g/L en agua ), 50,0 ml de
bromato de potasio O, 1 N S\/ y 15 ml de cido clorh-
drico diluido (17 en 100). Tapar el matraz inmediata-
mente y enfriar en un bao de agua-hielo. Dejar en
reposo protegida de la luz durante 1 O minutos.
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin residual
Solucin volumtrica: Bromato de potasio O, 1 N SV
Solucin de retrovaloracin: Tiosulfato de sodio O, 1
N SV
Deteccin del punto final: Visual
Equivalencia: Cada ml de bromato de potasio O, 1 N
SV equivale a 2,403 mg de cistina (C6H12N24S2) con
respecto a la sustancia seca.
Anlisis: Agregar 1,5 g de yoduro de potasio y despus
de 1 minuto, valorar con tiosulfato de sodio O, 1 N SV,
usando almidn SR como indicador. Realizar una deter-
minacin con un blanco y hacer las correcciones
necesarias.
Criterios de aceptacin: 98,5%-101,5% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281 ): No ms de O, 1%
CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221): No ms de
200 pfm. Una porcin de 0,7 g no presenta ms cloruro
que e correspondiente a 0,40 ml de cido clorhdrico
0,01 N.
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo I (231): No ms de
1 O ppm (Oficial Ol-dic-2015)
CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221): No ms de
200 pf m. Una porcin de 1,2 g no presenta ms sulfato
que e correspondiente a 0,25 ml de cido sulfrico
0,020 N .
HIERRO (241 ): t'Jo ms de 1 o ppm
IMPUREZAS 0RGANICAS
Solucin de aptitud del sistema: Disolver cantidades
de ER Cistina USP y ER Clorhidrato de Arginina USP en
cido clorhdrico 1 N, y diluir con agua hasta obtener
una solucin con una concentracin conocida de apro-
ximadamente 0,4 mg/ml de cada uno.
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Cistina
USP en cido clorhdrico 1 N y diluir con agua hasta
obtener una solucin con una concentracion conocida
de aproximadamente 0,02 mg/ml.
Solucin muestra: Disolver una cantidad de Cistina en
cido clorhdrico 1 N y diluir con agua hasta obtener
USP 38
una solucin con una concentracin conocida de apro-
ximadamente 1 O m_9./ml.
Sistema cromatografico
(Ver Cromatografa (621 ), Cromatografa en Capa Del-
guJu.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 5 L
Fase mvil: Una mezcla de amonaco y 2-propanol
(3:7)
Solucin reveladora: Disolver 0,2 g de ninhidrina en
1 00 ml de una mezcla de butanol y cido actico 2 N
(95:5).
Anlisis
Muestras: Solucin de aptitud del sistema, Solucin es-
tndar y Solucin muestra
Proceder segn se indica en Cromato9rafa (621 ), Cro-
matografa en Capa Delgada. Despues de secar la placa
al aire, rociar con Solucin reveladora y calentar a una
temperatura entre 100 y 1 05 durante aproximada-
mente 15 minutos. Observar la placa. El cromato-
grama de la Solucin de aptitud del sistema presenta
dos manchas claramente separadas.
Criterios de aceptacin: Ninguna mancha secundaria
de la Solucin muestra es de mayor tamao o intensidad
que la mancha principal de la Solucin estndar.
Impurezas individuales: No ms de 0,2%
Impurezas totales: No ms de 2,0%
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar una muestra a 1 05 durante 3 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 0,2%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Arginina USP
ER Cistina USP
Gluconato de Cobre-ver Gluconato de
Cobre en Monografas Generales
Colecalciferol-ver Colecalciferol en
Monografas Generales
Colecalciferol, Solucin-ver
Coleca/ciferol, Solucin en Monografas
Generales
Coleus Forskohlii
DEFINICIN
El Coleus Forskohlii consiste en las races secas de Plectrant-
hus barbatus Andrews, tambin conocida como Coleus
barbatus (Andrews) Benth. y Coleus forskohlii Briq. (Fam.
Lamiaceae). Contiene no menos de 0,4% de forscolina,
calculado con respecto a la materia seca.
USP 38 Suplementos Dietticos / Coleus 6403

IDENTIFICACIN de fondo redondo de 1 00 mL provisto con un conden-

A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOC.RAFA EN CAPA sador de reflujo. Agregar 50 mL de acetonitrilo, someter
DELC.ADA (201) a reflujo en un bao de agua durante 20 minutos, en-
Soludn e~l<11udr A; .SO ptj/ 111L Je ER Fui ~Liina USP friar a ternperatura ambiente, y dccmtar el sobrcna-
en acetonitrilo. Someter a ultrasonido durante aproxi- dante. Repetir hasta que el ltimo extracto sea incoloro.
madamente 1 O minutos. Combinar los extractos, filtrar, concentrar al vaco, y
Solucin estndar B: 5 mgmL de ER Extracto en Polvo ajustar el volumen con acetonitrilo hasta 100 ml. Antes
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo. Someter a ul- de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri- brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor,
fugar, y usar el sobrenadante. desechando los primeros 5 mL del filtrado.
Solucin madre de la muestra: Usar Solucin muestra, Solucin de aptitud del sistema: Solucin estndar A y
preparada segn se indica en la prueba de Contenido de tolueno al 0,01 % en acetonitrilo (1 :1)
Forscolina. Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Solucin muestra: Diluir 1 O mL de Solucin madre de la
muestra con acetonitrilo hasta 25 ml. Tiempo Solucin A Solucin B
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un lmln) (%) 1%)
tamao de partcula promedio de 1 0-15 m (placas
para TLC) o 45 55
Volumen de aplicacin: 1O r1L en bandas de 4 mm 25 45 55
Fase mvil: Tolueno y acetato de etilo (85:15) 28 95 5
Solucin reveladora: Vainillina al 5% en cido actico 35 95 5
glacial y cido sulfrico al 10% en agua (1 :1) 36 45 55
Anlisis 45 45 55
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
Solucin muestra Sistema cromatogrfico
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro- (Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato- Modo: HPLC
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar Detector: UV 220 nm
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m- Columna: 4,6 mm x 25 cm; 5 m, 100 A
vil haya recorrido aproximadamente 90% de la placa. Temperatura de la columna: 30 2
Retirar la placa de la cmara, secar, rociar con Solu- Velocidad de flujo: 1,8 mL/min
cin reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a Volumen de inyeccin: 20 L
1 05, y observar bajo luz visible. Aptitud del sistema
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
cin muestra presenta lo siguiente: una zona de color Solucin de aptitud del sistema
violeta debida a forscolina a un valor RF de aproximada- [NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
mente 0,3, que corresponde en color y valor RF a la del para isoforscolina y forscolina son 0,51 y 1,00,
cromatograma de la Solucin estndar A; y una zona respectivamente.]
menor de color violeta, una zona de color rosado y una Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solucin
zona de color rojo ladrillo a valores RF de aproximada- estndar 8 es similar al cromatograma de referencia
mente O, 1; 0,62 y 0,69, debidas a isoforscolina, 1,9- provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Coleus
didesoxiforscolina y crocetindialdehdo, respectiva- Forskohlii USP usado.
mente. Las zonas detectadas en el cromatograma de la Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de fors-
Solucin muestra corresponden en posicin y color a las colina y tolueno, Solucin de aptitud del sistema
zonas en el cromatograma de la Solucin estndar B. Se Desviacin estndar relativa: No ms de 2% deter-
pueden observar otras zonas menores en los cromato- minada a partir del pico de forscolina en inyecciones
gramas de la Solucin muestra y la Solucin estndar B. repetidas, Solucin estndar A
B. El cromatograma de la Solucin muestra obtenido en Anlisis
la prueba de Contenido de Forscolina presenta un pico Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
principal al tiempo de retencin correspondiente a fors- Solucin muestra
colina en el cromatograma de la Solucin estndar A. Usando el cromatograma de la Solucin estndar A, So-
Identificar otros picos de diterpenos en el cromatograma lucin estndar 8 y el cromatograma de referencia
de la Solucin muestra por comparacin con el cromato- provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Co-
grama de la Solucin estndar 8 y el cromatograma de leus Forskohlii USP, identificar los tiempos de reten-
referencia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de cin de los picos correspondientes a isoforscolina y
Coleus Forskohlii USP. El cromatograma de la Solucin forscolina.
muestra presenta un pico adicional correspondiente a Calcular el porcentaje de forscolina en la porcin de
isoforscolina. Coleus Forskohlii tomada:
COMPOSICIN Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
CONTENIDO DE fORSCOLINA
Solucin A: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado. ru = respuesta del pico de forscolina de la Solucin
Solucin B: Usar agua filtrada y desgasificada. muestra
Solucin estndar A: Someter a ultrasonido una canti- rs = respuesta del pico de forscolina de la Solucin
dad de ER Forscolina USP en acetonitrilo para obtener estndar A
una solucin con una concentracin conocida de apro- C concentracin de ER Forscolina USP en la
=
ximadamente 1,0 mg/mL. Solucin estndar A (mg/mL)
Solucin estndar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo C, = concentracin de Coleus Forskohlii en la
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo, someter a ul- Solucin muestra (mg/mL)
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri- Criterios de aceptacin: No menos de 0,4% con res-
fugar, y usar el sobrenadante. Antes de la inyeccin, pecto a la materia seca
pasar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Coleus Forskohlii, reducido a polvo fino, a un matraz
6404 Coleus / SuplPmPntns DiPtticos
IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas , ER Forscolina USP
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en cido
(561\: Nn mis de 2'Yc
METALES PESADOS, Mtodo /JI <231 ): No mi<> rlP 20 ppm
Impurezas Orgnicas, , .
PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Matena
Orgnica Extraa (56 J): No ms de 2,0%, , Coleus Forskohlii en Polvo
PROCEDIMIENTO 2: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Raz fresca de color amarillo rosado p-
lido cilndrica a subcilndrica, con extremos ahusados,
con' una longitud de 5-12 cm y un dimetro _d~
1-2 cm; su superficie es spera, y presenta ra1c1llas late-
rales o cicatrices de raicillas y lenticelas que se presen-
tan transversalmente. El artculo farmacopeico es de
color marrn oscuro, con superficie spera, irregular-
mente cilndrico, longitudinalmente arrugado, con es-
tras irregulares y crestas prominentes; la fractura e~
corta; la superficie cortada es de color blanco amari-
llento; presenta un olor caracterstico y aromtico agra-
dable, y un sabor ligeramente amargo a acre.
Histologa
Seccin transversal de las races: Presenta una forma
circular irregular; sber estrecho de 10-15 hilera~ de
clulas suberosas tangencialmente elongadas y dis-
puestas radialmente; la corteza est compuesta de
10-15 hileras de clulas parenquimticas de pared del-
gada que presentan esclereidas y cristales de ox~lato
de calcio; cmbium vascular en forma de un anillo
continuo; el xilema se presenta en radios estrechos de
vasos, unas pocas fibras lignificadas estn presente~ en
las races mas antiguas, radios medulares de 3-8 celu-
las de ancho, y el parnquima presenta unas poca~ ,
esclereidas canales de oleorresina y granos de alm1don
simples; la' mdula est compuesta de clulas paren-
quimticas en las races jvenes y es reemplazada por
vasos, fibras y traqueidas dispuestos de manera com-
pacta en las races maduras.
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Coleus Fors-
kohlii reducida a polvo fino a 105'' durante 3 horas:
pierde no ms de 12,0% de su peso .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 6%, determinado en 1,0 g de Coleus Fors-
kohlii reducida a polvo fino
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561): No menos de 25,0%
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10' ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10' ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Eschenchw col!.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente. . ,.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1ent1f1co en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta contenidas en el artculo.
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Coleus Forskohlii USP
DEFINICIN
El Coleus Forskohlii en Polvo es Coleus Forskohlii reducido a
polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de 0,4%
de forscolina, calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar A: 50 g/mL de ER Forscolina USP
en acetonitrilo. Someter a ultrasonido durante aproxi-
madamente 1 O minutos.
Solucin estndar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo. Someter a ul-
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri-
fugar, y usar el sobrenadante. .,
Solucin madre de la muestra: Usar Soluoon muestra,
preparada segn se indica en la prueba de Contenido de
Forscolina.
Solucin muestra: Diluir 1 O mL de Solucin madre de la
muestra con acetonitrilo hasta 25 ml.
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao de partcula promedio de 1 0-15 m (placas
para TLC)
Volumen de aplicacin: 1O L en bandas de 4 mm_
Fase mvil: Una mezcla de tolueno y acetato de etilo
(85: 15) . . . , . , .
Solucin reveladora: Vainillina al 5% en aC1do acet1co
glacial y cido sulfrico al 10% en agua (1 :1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido apro;<imadamente 90_% de la placa.
Retirar la placa de la camara, secar, roc1a_r con Solu-
cin reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a
1 05, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
una zona violeta debida a forscolina a un valor RF de
aproximadamente 0,3, que corresponde en color y va-
lor Rr a la de la Solucin estndar A; y una zona menor
de color violeta una zona de color rosado y una zona
de color rojo ladrillo a valores RF de aproximadamen~e
O, 1; 0,62 y 0,69 debidas a isoforscolina, l ,9-d1desox1-
forscolina y crocetindialdeh1do, respectivamente. Las zo-
nas detectadas de la Solucin muestra corresponden en
posicin y color a las zonas de la Solucin estndar B. Se
pueden observar otras zonas menores de la Solucin
muestra y la Solucin estndar B. .
B. La Solucin muestra de la prueba de Contenido de .~ors
colina presenta un pico principal al tiempo d_e rete.nC1on
correspondiente al de forscolina de la Solueton e~tandar A.
Identificar otros pirm de diterpenos en la Solueton mues-
tra por comparacin con la Solucin estndar B y el cro-
matograma de referencia provisto con el lote de ER Ex-
tracto en Polvo de Coleus Forskohlii USP usado. El
cromatograma de la _Solucin mucstra_presenta un pico
adicional correspondiente a 1soforscolina.
usr 38
COMPOSICIN
CONTENIDO DE FORSCOLINA
Solucin A: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado.
Solucin B: Usar agua filtrada y desgasiticada.
Solucin estndar A: Someter a ultrasonido ur1d canti-
dad de ER Forscolina USP en acetonitrilo para obtener
una solucin con una concentracin conocida de apro-
ximadamente 1,0 mg/ml.
Solucin estndar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo. Someter a ul-
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri-
fugar, y usar el sobrenadante. Antes de la inyeccin,
pasar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 3,0 g
de Coleus Forskohlii en Polvo a un matraz de fondo
redondo de 1 00 mL provisto con un condensador de
reflujo. Agregar 50 mL de acetonitrilo, someter a reflujo
en un bao de agua durante 20 minutos, enfriar a tem-
peratura ambiente, y decantar el sobrenadante. Repetir
hasta que el ltimo extracto sea incoloro. Combinar los
extractos, filtrar, concentrar al vaco, y ajustar el volu-
men con acetonitrilo hasta 100 ml. Antes de la inyec-
cin, pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando los
primeros 5 mL del filtrado.
Solucin de aptitud del sistema: Una mezcla de Solu-
cin estndar A y tolueno al 0,01 % en acetonitrilo (1 :1)
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (O/o)
o 45 55
25 45 55
28 95 5 kohlii en Polvo
35 95 5
36 45 ~
55
45 45 55
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; 5 m, 1 00 A
Temperatura de la columna: 30 2
Velocidad de flujo: 1,8 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para isofors-
colina y forscolina son 0,51 y 1,00, respectivamente.]
Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solucin
estndar B es similar al cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Coleus
Forskohlii USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% deter-
minada a partir del pico de forscolina en inyecciones
repetidas, Solucin estndar A
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de fors-
colina y tolueno, Solucin de aptitud del sistema
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar A, So-
lucin estndar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Co-
leus Forskohlii USP usado, identificar los tiempos de
retencin de los picos correspondientes a isoforsco-
lina y forscolina.
Calcular el porcentaje de forscolina en la porcin de
Coleus Forskohlii en Polvo tomada:
Suplementos Dietticos / Co!eus 6405
r,; = respuesta del pico de forscolina de la Solucion
muestra
r, = respuesta del pico de forscolina de la Solucion
estndar A
C - concentracin dC' ER Forscolina USP en la
Solucin estndar A (mg/mL)
C, = concentracin de Coleus Forskohlii en Polvo
en la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,4% con res-
pecto a la materia seca
IMPUREZAS
lmpu!'ezas Inorgnicas , ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 2%
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 ppm
Impurezas Orgnicas
PROCEDIMIENTO: ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Polvo de color marrn ama-
rillento, con un olor caracterstico y aromtico agradable,
y con un sabor ligeramente amargo a acre. Bajo el mi-
croscopio, presenta clulas parenquimticas con canales
de oleorresina, granos de almidn y prismas de oxalato
de calcio, glbulos de aceite, granos de almidn simples,
clulas suberosas, esclereidas, clulas ptreas, vasos pun-
t~ados y fibras de paredes delgadas .
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Coleus Fors-
kohlii en Polvo a 1 OS durante 3 horas: pierde no ms de
12,_9% de su peso. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 6%, determinado en 1,0 g de Coleus Fors-
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561): No menos de 25,0%
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. ,
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sen,cia de Salmonella spp., y Escherichia coli.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la r;ilanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Forscolina USP
ER Extracto en Polvo de Coleus Forskohlii USP
Extracto en Polvo de Coleus Forskohlii
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Coleus ~orskohlii se prepara a partir
de Coleus Forskohlii, usando disolventes adecuados tales
como metanol, acetato de etilo, hcxano o una mezcla de
estos disolventes. La relacin entre el material vegetal y el
extracto est entre 65: 1 y 35: 1 . Contiene no menos de
90,0% y no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de
forscolina, calculado con respecto a la sustancia seca.
6406 Coleus /Suplementos Dietticos USP 38

Contiene sustancias agregadas arlPn1arlas romo Solucin muestra: Transferir una cdnlidad de Extracto
portadores. en Polvo de Coleus Forskohlii equivalente a aprox!m.a-
damente 25 mq de forscolina a un matraz volumetnco
IDENTIFICACIN , de ~ mL y agregar 1 5 ml de acetonitrilo. Someter a
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA ul1 ra~u11ido y calentar en un bano ~e agua _durante
DELGADA (201 j . aproximadamente 1 O minutos, enfriar, diluir con, aceto-
Solucin estndar A: 50 ,ug/mL de ER Forscol1na US~ nitrilo a volumen, y mezclar. Antes de la inyecc1on, pa-
en acetonitrilo. Someter a ultrasonido durante aproxi- sar a travs de un filtro de membrana con un tamano
madamente 1 O minutos. de poro de 0,45 pm o menor, desechando los primeros
Solucin estndar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo 5 mL del filtrado.
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo. Someter a ul- Solucin de aptitud del sistema: Una mezcla de Solu-
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri- cin estndar A y tolueno al 0,01_ % en ~cet_on1tnlo (1 :1)
fugar, y usar el sobrenadante. Fase mvil: Ver la tabla de gradientes s1gu1ente.
Solucin muestra: 5 mg/mL de Extracto en Polvo d.e
Coleus Forskohlii en acetonitrilo. Someter a ultrasonido
durante aproximadamente 15 minutos, centrifugar, y Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) (%) (%)
usar el sobrenadante.
45 - 55
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un ~---- --------
tamao de partcula promedio de 1 0-15 ,um (placas 25 45 55
para TLC) 28 95 5
Volumen de aplicacin: 1 O ,uL en bandas de 4 mm_ 35 95 5
Fase mvil: Una mezcla de tolueno y acetato de etilo 36 45 55
(85: 15)
Solucin reveladora: Vainillina al 5% en cido actico 45 45 55
glacial y cido sulfrico al 10% en agua (1 :1) Sistema cromatogrfico
Anlisis (Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By Modo: HPLC
Solucin muestra Detector: UV 220 nm
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro- Columna: 4,6 mm x 25 cm; 5 m, 100 A
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato- Temperatura de la columna: 30 2
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar, Velocidad de flujo: 1,8 mL/min
los cromatogramas hasta que el frente de la fase mo- Volumen de inyeccin: 20 ,uL
vil haya recorrido aproximadamente 90% de la placa. Aptitud del sistema
Retirar la placa de la cmara, secar, rocia_r con Solu- Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
cin reveladora, calentar durante 5-1 O minutos a Solucin de aptitud del sistema, . .
105, y observar bajo luz visible. [NOTA-Los tiempos de retenc1on relativos P?ra 1sofors-
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta colina y forscolina son 0,51 y 1,00, respectivamente),
una zona violeta debida a forscolina a un valor RF de Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Sol.ueton
aproximadamente 0,3, que corresponde en color y va- estndar B es similar al cromatograma de referencia
lor RF a la de la Solucin estndar A; y una zona menor provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Coleus
de color violeta, una zona de color rosado. y una zona Forskohlii USP usado.
de color rojo ladrillo a valores RF de aproximadamente Desviacin estndar relativa: No ms de 2% deter-
O, 1; 0,62 y 0,69 debidas a isoforscolina, l ,9-d1desox1- minada a partir del pico de forscolina en inyecciones
forscolina y crocetindialdehdo, respectivamente. Las zo- repetidas, Solucin estndar A .
nas detectadas de la Solucin muestra corresponden en Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de fors-
posicin y color a las zonas de la Solucin estndar B. Se colina y tolueno, Solucin de aptitud del sistema
pueden observar otras zonas menores de la Solucin Anlisis
muestra y la Solucin estndar B. . Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
B. La Solucin muestra de la prueba de Contemdo de .~ors Solucin muestra
colina presenta un pico princ!pal al tiempo d,e rete,nc1on Usando el cromatograma de la Solucin estndar~, So-
correspondiente al de forscol1na de la Solueton e~tandar A. lucin estndar B y el cromatograma de referencia
Identificar otros picos de diterpenos en la Soluoon mues- provisto con el lote de ER ~xtra~~o en Pol:io de Co-
tra por comparacin con la Solucin estndar By el cro- leus Forskohlii USP usado, 1dent1f1car los tiempos de
matograma de referencia provisto con el lote de ER Ex- retencin de los picos correspondientes a isoforsco-
tracto en Polvo de Coleus Forskohlii USP usado. El lina y forscolina. . .,
cromatograma de la Solucin muestra_presenta un pico Calcular el porcentaje de forscol1na en __ la porc1on de
adicional correspondiente a 1soforscolina. Extracto en Polvo de Coleus Forskohl11 tomada:
COMPOSICIN Resultado = (ru/rs) x (C/Cu) x 1 00
CONTENIDO DE FORSCOLINA
Solucin A: Usar acetonitrilo filtrado y desgasificado. ru = respuesta del pico de forscolina de la Solucin
Solucin B: Usar agua filtrada y desgasificada. . muestra
Solucin estndar A: Someter a ultrasonido una canti- r5 = respuesta del pico de forscolina de la Solucin
dad de ER Forscolina USP en acetonitrilo para obtener Pstndar A
una solucin con una concentracin conocida de apro- C1 concentracin de ER Forscolina USP en la
=
ximadamente 1,0 mg/ml. Solucin estndar A (mg/mL)
Solucin estndar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo Cu = concentracin de Extracto en Polvo de Coleus
de Coleus Forskohlii USP en acetonitrilo. Someter a ul- Forskohlii en la Solucin muestra (mg/mL)
trasonido durante aproximadamente 15 minutos, centri- Criterios de aceptacin: No menos de 90,0% y n~
fugar, y usar el sobrenadante. Antes de la inyeccin, _ ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de forsrnl1na
pasar a travs de un filtro de membrana con un tamano con respecto al extracto seco.
de poro de 0,45 pm o menor.
USP 38 Suplementos Dietticos /Colina 6407

IMPUREZAS VALORACIN
Impurezas Inorgnicas PROCEDIMIENTO
Muestra: 200 mg
Sistema volumtrico
Eliminar lo siguiente: (Ver Volumetn (541 ).)
Modo: Valoracin directa
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de Solucin volumtrica: cido perclrico O, 1 N SV
20 ppme (Oficial Ol-ct1c.Z015) Deteccin del punto final: Potenciomtrica
Impurezas Orgnicas , Blanco: 50 mL de cido actico glacial
PROCEDIMIENTO: ARTCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo Anlisis: Disolver la Muestra en 50 mL de cido actico
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): glacial y valorar con Solucin volumtrica . .
Cumple con los requisitos. Calcular el porcentaje de bitartrato de colina
PRUEBAS ESPECFICAS (C9H19N01) en la Muestra tomada:
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Resultado = [(V - 8) x N x F x 100]/W
Polvo de Coleus Forskohlii a 105 durante 3 horas: pierde
no ms de 5,0% de su peso . V = volumen de solucin volumtrica consumido
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- por la Muestra (mL)
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g. B = volumen de solucin volumtrica consumido
El recuento total combinado de hongos filamentosos y por el Blanco (mL) ., , .
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. N = normalidad de la soluc1on volumetnca
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU- (mEq/mL)
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple F =factor de equivalencia, 253,2 mg/mEq
con los requisitos de las pruebas par~ det~rminar la au- W = peso de la Muestra (mg)
sencia de Salmonella spp. y Eschench1a col1. Criterios de aceptacin: 99,0%-100,5% con respecto
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Prueba de Aflatoxinas a la sustancia anhidra
(561): Cumple con los requisitos.
IMPUREZAS
REQUISITOS ADICIONALES DISOLVENTES RESIDUALES (467): Cumplen con los requisi-
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien tos excepto que el lmite de 1,4-dioxano es 1 O g/g .
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a RESDUO DE IHCINERACIN (281): No ms de 0,1%
temperatura ambiente contr.olada. . ,. ARSNICO, Mtodo I (211)
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1entlf1co en Anlisis: Agregar 30 mL de agua y 5 mL de cido clor-
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la hdrico para disolver la muestra.
planta de donde se obtuvo el artculo. C~n:iple con otros Criterios de aceptacin: No ms de 2 ppm
requisitos de etiquetado en Extractos Botamcos (565). PLOMO (251)
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de ]a. [NOTA-Usar cloruro de metileno en lugar de cloroformo
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botamcos para preparar la Solucin de Extraccin de Ditizona y So-
(565). lucin de Ditizona Estndar.]
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11) Solucin A: Transferir 8,4 g de solucin de hidrxido de
ER Forscolina USP sodio (1 en 2) a un frasco de plstico, agregar 100 mL
ER Extracto en Polvo de Coleus Forskohlii USP de hidrxido de amonio y mezclar.
Solucin estndar: Transferir 1,0 mL de la Solucin de
Plomo Estndar Diluida a un embudo de separacin que
contenga 25,0 mL de agua. .
Solucin muestra: Disolver 3,00 g de B1tartrato de Co-
Bitartrato de Colina lina en un embudo de separacin que contenga
25,0 mL de agua.
''! Anlisis
OH Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
HU y
OH
Por separado, agregar 6,0 n;L de Solucin de Citrato de
Amonio y 3,0 mL de Soluc1on de Cwnuro de Potasio a
la Solucin estndar y la Solucin muestra. Extraer cada
C9H 19 N0 7 253,25 una de las soluciones resultantes tres veces con por-
2-Hydroxyethanaminium, -N, N, N-trimethyl-, [ R-(R*, R*)]-2, 3- ciones de 5,0 mL de Solucin de Extraccin de Diti-
dihydroxybutanedioate (1 :.1 ); . . . zona agitando durante 60 segundos y drenando
L-(+)-Tartrato de (2-h1drox1etil)tnmetilamon10, sal (1 :1) cada' extracto en otro separador. Agitar las soluciones
[87-67-2]. de ditizona combinadas durante 30 segundos con
20,0 mL de cido ntrico (1 en 100) y desechar la
DEFINICIN
capa de cloruro de metileno. Agregar 6,0 n1L de Solu-
El Bitartrato de Colina contiene no menos de 99,0% y no cion de Cianuro y Amoniaco, 2 mL de Soluc1on A y
ms de 100 5% de bitartrato de colina (C9H19N01), calcu- 1 O mL de Solucin de Ditzona Estndar, y agitar du-
lado con re;pecto a la sustancia anhidra. rante 45 segundos. Dejar que las fases se separen y
IDENTIFICACIN medir la absorbancia de la capa inferior a 51 O nm
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197K) con un espectrofot?metro adecuado.. .,
B. Criterios de aceptacion: La absorbanc1a de la Soluc1on
Muestra: 1 g muestra es no mayor que la absorbancia de la Solucion
Anlisis: Disolver la Muestra en 20 mL de agua y agre- estndar (no ms de 0,3 ppm).
gar 2 mL de solucin de cloruro de potasio. (1 en 4).
Criterios de aceptacin: Se forma un prec1p1tado Eliminar lo siguiente:
blanco de bilartralo de pota-,io.
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
1 O ppm (Oficial Ol-dic-2015)
6408 Colina /Suplementos Diettirns
LMITE DE AMINAS TOTALES
Solucin estndar: 500 g/ml de clorhidrato de
trimetilamina
Solucin muestra Transferir 10,0 g d" Bitartrato de Co-
lina a un vaso de precipitados que contenga una barra
mezcladora recubierta de plstico, agregar 70 ml de hi-
drxido de sodio SR y 1 30 ml de agua, y mezclar hasta
disolver.
Solucin madre de aptitud del sistema: 1 O g/ml de
clorhidrato de trimetilamina
Solucin de aptitud del sistema: Transferir 10,0 ml de
Solucin madre de aptitud del sistema a un vaso de pre-
cipitados que contenga una barra mezcladora recu-
bierta de plstico, agregar 160 ml agua y 30,0 ml hi-
drxido de sodio SR, y mezclar hasta disolver.
Sistema de electrodos: Usar un electrodo indicador,
detector de gases, especfico para amonaco con refe-
rencia interna conectado a un medidor de pH capaz de
medir los potenciales con una reproducibilidad mnima
de 0, 1 mV (ver pH (791)).
Lnea de respuesta del estndar: Mezclar 30,0 ml de
hidrxido de sodio SR y 170 ml de agua. Agregar una
barra mezcladora recubierta de plstico, insertar el elec-
trodo en la solucin y registrar el potencial, en mV.
Continuar mezclando y, en intervalos de 5 minutos,
agregar 0,200; 0,600; 1,00 y 2,00 ml de Solucin estn-
dar, y registrar el potencial despus de cada adicin.
Graficar los logaritmos de las concentraciones acumula-
das de clorhidrato de trimetilamina (0,50; 1,50; 2,50 y
5,00 g/ml) en funcin del potential, en mV, y deter-
minar fa pendiente (S) de la Lnea de respuesta del es-
tndar para el electrodo.
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Proceder segn se indica en Anlisis, excepto que debe
remplazarse la Solucin muestra con la Solucin de apti-
tud del sistema y en la frmula siguiente remplazar W
con V, que es igual a 1 O ml.
Requisitos de aptitud: El cambio total es no menos
de 1 O mV para una adicin acumulada de 0,4 ml de
la Solucin estndar; la cantidad de clorhidrato de tri-
metilamina encontrada es 8,5-11,5 g/L.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Enjuagar el electrodo, insertarlo en la Solucin muestra,
mezclar y registrar el potencial, en mV. Agregar
O, 100 ml de la Solucin estndar y registrar el poten-
cial. Agregar O, 100 ml adicionales de la Solucin es-
tndar y registrar el potencial. [NOTA-Si el cambio
total despus de la segunda adicin de la Solucin
estndar es menos de 1 O mV, agregar una tercera
alcuota de 0,200 ml.]
Calcular el contenido, en g/g, de aminas totales, como
clorhidrato de trimetilamina, en la porcin de muestra
tomada:
Resultado = ce X VA)![(F . 1) X W]
Cs = concentracin de la Solucin estndar (g/ml)
V,, = volumen total de Solucin estndar agregado a
la Solucin muestra (ml)
W = peso de Bitartrato de Colina tomado para
preparar la Solucin muestra (g)
F = factor de correccin, calculado por la frmula:
F = antilog [(mVr - mVo)/S]
mVr = lectura final despus de las adiciones de la
Solucin estndar (mV)
USP 38
mV.. = lectura inicial de la Solucin muestra (mV)
S = pendiente de la Lmea de respuesta del estndar
para el electrodo
Criterio) e acept~cin: i\io mas de 1U g/g
PUREZA CROMATOGRAFICA
Solucin amortiguadora: 7, 1 g/L de fosfato dibsico
de sodio anhidro. Ajustar con acido fosfrico a un pH
de 2,5.
Fase mvil: Solucin amortiguadora y acetonitrilo (7:3)
Solucin estndar: Transferir una cantidad, no ms de
100 mg, de ER Cloruro de Colina USP a un vial de
24 ml con tapa de rosca y agregar 400 mg de cloruro
de 3,5-dinitrobenzolo y 1 O ml de acetonitrilo. Tapar el
vial, calentar a 55 y continuar calentando durante 2
horas. Enfriar a temperatura ambiente y agregar 5 ml
de agua. Dejar en reposo durante 5 minutos. Transferir
cuantitativamente la solucin a un matraz volumtrico
de 25 ml y diluir con acetonitrilo a volumen. Diluir un
volumen de esta solucin con Fase mvil hasta obtener
una concentracin de 2,0 g/ml de ER Cloruro de Co-
lina USP.
Solucin muestra: Transferir 500 mg de Bitartrato de
Colina a un tubo de centrfuga, agregar 2,0 ml de agua
y mezclar por rotacin suave hasta disolver. Agregar
0,5 ml de solucin de cloruro de potasio (7,5 en 25),
centrifugar, y transferir 1,0 ml del sobrenadante a un
vial de 24 ml con tapa de rosca. Secar a 120 durante
2 horas. Agregar 400 mg de cloruro de 3,5-dinitroben-
zolo y 1 O ml de acetonitrilo. Tapar el vial, calentar a
55 durante 2 horas. Enfriar a temperatura ambiente,
agregar 5 ml de agua y dejar en reposo durante 5 mi-
nutos. Transferir cuantitativamente esta solucin a un
matraz volumtrico de 50 ml y diluir con Fase mvil a
volumen. Pipetear y transferir 2,0 ml de la solucin a
un matraz volumtrico de 25 ml y diluir con Fase mvil
a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 208 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 30n
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de capacidad (k'): No menos de 2
Desviacin estndar relativa: No ms de 5%, deter-
minada a partir del pico del derivado de colina
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcin
de Bitartrato de Colina tomada:
Resultado= (ru!rs) x (CJCu) x (M,,/Md x 100
= respuesta del pico de cada impureza,
ru
excluyendo las de derivado de colina y cido
3,5-dinitrobenzoico de la Solucin muestra
= respuesta del pico del derivado de colina de la
Solucin estndar
= concentracin de ER Cloruro de Colina USP en
la Solucin estndar (mg/rnL)
~ concentracin de Bitartrato de Colina en la
Solucin muestra (mg/ml)
= peso molecular de bitartrato de colina, 253,25
= peso molecular de cloruro de colina, 1 39,62
USP 38 '\uplementos Oieteticos /Colina 6409

Criterios de Meptacion RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de 0,05%

Impurezas individuales: l~u ms de 0,3% ARSNICO, Mtodo I (211 >
Impurezas totales: No ms de 2,0'Yo Anlisis: Agregar 30 ml de agua y 5 ml de cido clor-
hdrico para dlso!ver !~ ni1_pc;;trri
PRUEBAS ESPECFICAS Criterios de aceptacin: No ms de 2 ppm
ROTACIN PTICA, kotac1on tspeuf1ca <)81 S; PLOMO (251)
Solucin muestra: 400 mg/ml en agua [NOTA-Usar cloruro de metileno en lugar de cloroformo
Criterios de aceptacin: + 1 7,5' a + 18,5' para preparar la Solucin de Extraccin de Ditizona y la
PH (791): 3,0-4,0, en una solucin (1 en 1 O) Solucin de Ditizona Estndar.]
DETERMINACION DE AGUA, Mtodo I (921 ): No ms de Solucin A: Transterir 8,4 g de solucin de hidrxido de
0,5% sodio (1 en 2) a un frasco de plstico, agregar 1 00 ml
de hidrxido de amonio y mezclar.
REQUISITOS ADICIONALES
Solucin estndar: Transferir 1,0 ml de Solucin de
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien Plomo Estndar Diluida a un embudo de separacin que
cerrados. contenga 25,0 ml de agua.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
Solucin muestra: Disolver 3,00 g de Cloruro de Colina
ER Bitartrato de Colina USP en un embudo de separacin que contenga 25,0 ml de
ER Cloruro de Colina USP agua.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar por separado 6,0 ml de Solucin de Citrato de
Amonio y 3,0 ml de Solucin de Cianuro de Potasio a
Cloruro de Colina la Solucin estndar y a la Solucin muestra. Extraer
cada una de las soluciones resultantes tres veces con
porciones de 5,0 ml de Solucin de Extraccin de Diti-
HO zona, agitando durante 60 segundos y escurriendo
cada extracto en otro separador. Agitar las soluciones
de ditizona combinadas durante 30 segundos con
CsH14CINO 1 39,62 20,0 ml de cido ntrico (1 en 100) y desechar la
(2-Hydroxyethyl)trimethylammonium chloride; capa de cloruro de metileno. Agregar 6,0 ml de Solu-
Cloruro de 2-hidroxi-N,N,N-trimetiletanaminio [67-48-1 ]. cion de Cianuro y Amonaco, 2 ml de Solucin A y
DEFINICIN 1 O ml de Solucin de Ditizona Estndar, y agitar du-
El Cloruro de Colina contiene no menos de 99,0% y no ms rante 45 segundos. Dejar que las fases se separen y
de 100,5% de cloruro de colina (CsH14CINO), calculado medir la absorbancia de la capa inferior a 51 O nm
con respecto a la sustancia anhidra. con un espectroftometro adecuado.
Criterios de aceptacin: La absorbancia de la Solucin
IDENTIFICACIN muestra es no mayor que la absorbancia de la Solucin
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (l 97K) estndar (no ms de 0,3 ppm) .
B. IDENTIFICACIN-PRUEBAS GENERALES, Cloruros \191 ):
Una solucin (1 en 20) cumple con los requisitos. Eliminar lo siguiente:
VALORACIN
PROCEDIMIENTO METALES PESADOS, Mtodo JI (231): No ms de
Muestra: 120 mg 19 ppme (Oficial 01-dic-2015)
Sistema volumtrico LIMITE DE AMINAS TOTALES
(Ver Volumetra (541 ).) Solucin estndar: 500 g/ml de clorhidrato de trime-
Modo: Valoracin directa tilamina en agua
Solucin volumtrica: Nitrato de plata O, 1 I'~ SV Solucin muestra: Transferir 10,0 g de Cloruro de Co-
Deteccin del punto final: Potenciomtrica lina a un vaso de precipitados que contenga una barra
Blanco: 35 ml de agua. Agregar 3 gotas de cido agitadora recubierta de plstico, agregar 1 70 ml de
actico. agua y 30,0 ml de hidroxido de sodio SR, y mezclar
Anlisis: Disolver la Muestra en 35 ml de agua y agre- hasta disolver.
gar 3 C)Otas de cido actico. Valorar con Solucin Solucin madre de aptitud del sistema: 1 O g/ml de
volumetrica. clorhidrato de trimetilamina en agua
Calcular el porcentaje de cloruro de colina (CsH14CINO) Solucin de aptitud del sistema: Transferir 10,0 ml de
en la Muestra tomada: Solucin madre de aptitud del sistema a un vaso de pre-
cipitados que contenga una barra mezcladora recu-
Resultado= [(V B) X N X F X 100]/W bierta de plstico, agregar 160 ml de agua y 30,0 ml
de hidrxido de sodio SR, y mezclar hasta disolver.
V = volumen de solucin volumtrica consumido Sistema de electrodos: Usar un electrodo indicador,
por la Muestra (ml) detector de gases especfico para amonaco, con refe-
B = volumen de solucin volumtrica consumido rencia interna conectado a un medidor de pH capaz de
por el Blanco (ml) medir los potenciales con una reproducibilidad mnima
N = normalidad de la solucin volumtrica de 0, l mV (ver pH (791 )).
(mEq/mL) Lnea de respuesta del estndar: Mezclar 30,0 ml de
F =factor de equivalencia, 139,6 mg/mEq hidrxido de sodio SR y 1 70 ml de agua. Agregar una
W = peso de la Muestra (mg) barra mezcladora recubierta de plstico, insertar el elec-
Criterios de aceptacin: 99,0%-100,5% con respecto trodo en la solucin y registrar el potencial, en mV.
a la sustancia anhidra Cu11linuar mezclando y, en intervalos de 5 minutos,
agregar 0,200; 0,600; 1,00 y 2,00 ml de Solucin estn-
IMPUREZAS rlor, y registrar el potencial despus de cada adicin .
DISOLVENTES RESIDUALES (467): Cumple con los requisitos, Graficar los logaritmos de las concentraciones de clorhi-
excepto que el lmite para 1,4-dioxano es 1 O g/g. drato de trimetilamina acumuladas (0,50; 1,50; 2,50 y
5,00 pg/ml) en funcin del potencial, en mV, y deter-
641 O Colina ! Suplcmpntm niPtNims
minar la pendiente (S) de la Lmea de respuesta del es-
tndar para el electrodo.
Aptitud del sistema
Muestra: )nfurn de aptitud del si~tc:nc:
Proceder segn se indica en Anli1is, PxcPrto que se
debe reernplaar la Soluoon muestra con la Solucin
de aptitud del sistema y en la frmula siguiente reem-
plazar W con V, que es igual a 1 O mL.
Requisitos de aptitud: El cambio total es no menos
de 1O mV para una adicin acumulada de 0,4 mL de
la Solucin estndar; la cantidad de clorhidrato de tri-
metilamina encontrada es 8,5-11,5 g/L.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Enjuagar el electrodo, insertarlo en la Solucin muestra,
mezclar y registrar el potencial, en mV. Agregar
O, 100 mL de la Solucion estandar y registrar el poten-
cial. Agregar O, 100 mL adicionales de la Solucin estn-
dar y registrar el potencial. [NOTA-Si el cambio total
despus de la segunda adicin de la Solucin estndar
es menos de 1O mV, agregar una tercera alcuota de
0,200 mL.]
Calcular el contenido, en g/g, de aminas totales, como
clorhidrato de trimetilamina, en la porcin de muestra
tomada:
Resultado = (C1 x VA)l[(F - 1) x W]
= concentracin de la Solucin estndar (g/mL)
= volumen total de la Solucin estndar
agregado a la Solucin muestra (mL)
w = peso de Cloruro de Colina tomado para
preparar la Solucin muestra (g)
F = factor de correccin, calculado por la frmula:
F = antilog [(mVr - mVo)I S]
mVF = lectura final despus de las adiciones de la
Solucin estndar (mV)
mVo = lectura inicial de la Solucin muestra (mV)
S = pendiente de la Lnea de respuesta del estndar
para el electrodo
Criterios de acept!;1cin: No ms de 1O g/g
PUREZA CROMATOGRAFICA
Solucin amortiguadora: 7, 1 g/L de fosfato dibsico
de sodio anhidro. Ajustar con acido fosfrico a un pH
de 2,5.
Fase mvil: Solucin amortiguadora y acetonitrilo (7:3)
Solucin estndar: Transferir una cantidad, no ms de
100 mg, de ER Cloruro de Colina USP a un vial de
24 mL con tapa de rosca y agregar 400 mg de cloruro
de 3,5-dinitrobenzolo y 1 O mL de acetonitrilo. Tapar el
vial, calentar a 55 y continuar calentando durante 2
horas. Enfriar a temperatura ambiente y agregar 5 mL
de agua. Dejar en reposo durante 5 minutos. Transferir
cuantitativamente la solucin a un matraz volumtrico
de 25 mL y diluir con acetonitrilo a volumen. Diluir un
volumen de esta solucin con Fase mvil hasta obtener
una concentracin de 2,0 g/mL de ER Cloruro de Co-
lina USP.
Solucin muestra: Transferir 11 O mg de Cloruro de Co-
lina a un vial de 24 mL con tapa de rosca. Secar a 120
durante 2 horas. Agregar 400 mg de cloruro de 3,5-
dinitrobenzolo y 1 O mL de acetonitrilo. Tapar el vial,
calentar a 55 y continuar calentando durante 2 horas.
Enfriar a temperatura ambiente y agregar 5 mL de
agua. Dejar en reposo durante 5 minutos. Transferir
cuantitativamente la solucin a un matraz volumtrico
de 50 mL y diluir con Fase mvil a volumen. Pipetear y
transferir 2,0 mL de la solucin a un matraz volumtrico
de 25 mL y diluir con Fase mvil a volumen.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograft0 (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 208 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 1,0 rnl/1nir1
Volumen de inyeccin: 20 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de capacidad (k'): No menos de 2
Desviacin estndar relativa: No ms de 5%, deter-
minada a partir del pico de derivado de colina.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcin
de Clorhidrato de Colina tomada:
RPsultado = (ru/r,) x (C/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de cada impureza,
excluyendo las de derivado de colina y cido
3,5-dinitrobenzoico de la Solucin muestra
r1 = respuesta del pico del derivado de colina de la
Solucin estndar
C = concentracin de ER Cloruro de Colina USP en
la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin de Cloruro de Colina en la
Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin
Impurezas individuales: No ms de 0,3%
Impurezas totales: No ms de 2,0%
PRUEBAS ESPECFICAS
PH (791 ): 4,0-7,0, en una solucin (1 en 1 O)
DETERMINACION DE AGUA, Mtodo I (921 ): No ms de
0,5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Cloruro de Colina USP
Co-QlO-ver Ubidecarenona en Suplementos
Dietticos
Condroitina Sulfato de Sodio
Chondroitin, hydrogen sulfate, sodium salt;
Bisulfato sdico de condroitina [9082-07-9).
DEFINICIN
La Condroitina Sulfato de Sodio es la sal sdica del glicosa-
minoglicano lineal sulfatado que se obtiene de cartlagos
bovinos, porcinos o avcolas de animales saludables y do-
msticos usados en alimentos para humanos. La Condroi-
tina Sulfato de Sodio est compuesta principalmente por
la sal sdica del ster sulfrico del copolmero de N-acetil-
condrosamina (2-acetamido-2-desoxi-/3-o-galactopiranosa)
y cido D-glucurnico. l::stas hexosas estn unidas en el
polmero en forma alternada mediante uniones /J-1,4 y /J-
1,3. Las unidades de condrosamina en el glicosaminogli-
cano prevaleciente estn monosulfatadas principalmente
en la posicin 4 y, con menor frecuencia, en la posicin
6. Contiene no menos de 90,0% y no ms de 105,0% de
condroitina sulfato de sodio, cakulado con respecto a la
sustancia seca.
[NOTA-La Condroitina Sulfato de Sodio es extremadamente
higroscpica una vez que se seca. Evitar la exposicin a la
atmsfera y pesar inmediatamente.]
USP 38
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN ~N El INFRARROJO ( l 97K)
B. IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERALES, Sodio <191 ):
Cumple con los requ1s1tos.
Solucin m}Jeslra: 0,5, SJ e11 1 O ml de agua
C. COMPOSICON DE DISACARIDOS
El cromatograma de la Solucion muestra digerida enzim-
ticamente, segn se obtiene en la prueba de Lmite de
Oiscaridos lnespecficos presenta tres picos principales
correspondientes a cido anhidroglucurnico-[1---73]-
condrosamina-4-sulfato (i\Di-4S), cido anhidro91ucur-
nico-[l ---73]-condrosamina-6-sulfato (i\Di-6S) y acido an-
hidroglucurnico-[l ---73]-condrosamina sin sulfato (i\Di-
OS) en la Solucin estndar digerida enzimticamente.
La respuesta del pico de i\Di-4S es la ms abundante,
seguida de la respuesta del pico de ~\Di-6S, siendo la
respuesta de i\Di-OS la menos abundante de las tres, en
trminos de rea. El cociente entre las respuestas del
pico de ,"1Di-4S Y, el de ,~Di-6S es no menos de 1,0.
D. ROTApON ESPECIFICA: Cumple con los requ1s1tos de Ro-
tacin Optica, Rotacin Especfica (781 S) en Pruebas
Especficas
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CONDROITINA SULFATO DE SODIO
Soluciones estndar: 1,5; 1,0 y 0,5 mg/mL de ER Con-
droitina Sulfato de Sodio USP en agua
Solucin muestra: Transferir 100 mg de Condroitina
Sulfato de Sodio secada a un matraz volumtrico de
1 00 mL, disolver en 30 mL de agua y diluir con agua a
volumen.
Diluyente: Pesar aproximadamente 297 mg de fosfato
monobsico de potasio, 492 mg de fosfato dibsico de
potasio y 250 mg de polisorbato 80, y transferir a un
vaso de precipitados de 1 L. Disolver en 900 mL de
agua y ajustar con hidrxido de potasio o cido fosf-
rico a un pH de 7,0 0,2. Diluir con agua hasta 1 L y
mezclar minuciosamente.
Sistema volumtrico
(Ver Volumetri (541 ).)
Modo: Valoracin volumtrica con deteccin
fotomtrica
Solucin volumtrica; 1 1119/mL de cloruro de cetilpi-
ridinio en agua. Desgasificar antes de usar.
Deteccin del punto final: Turbidimtrica con una
sonda fototoelctrica
Anlisis: Transferir 5,0 mL de la Solucin estndar y de
la Solucin muestra a sendos vasos de valoracin y agre-
gar 25 mL de Diluyente a cada uno. Mezclar hasta obte-
ner una lectura estable con un fototrodo ya sea a 420;
550 660 nm. Ajustar el instrumento a cero en modo
de absorbancia. Valorar con Solucin volumtrica usando
el fototrodo para determinar el punto final turbidimtri-
camente. A partir de una ecuacin de regresin lineal,
que se calcula usando los volC1menes de Solucin volu-
mtrica consumidos en funcin de las concentraciones
de las Soluciones estndar, determinar la concentracin
de condroitina sulfato de sodio en la Solucin muestra.
Calcular PI porcentaje de condroitina sulfato de sodio
en la porcin de Condroitina Sulfato de Sodio tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
C = concentracin de condroitina sulfato sodio en
la alicuota de la Solucin muestra, obtenida a
partir de la ecuacin de regresin (mg/mL)
e,, = concentracin de Condroitina Sulfato de Sodio
en la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-1 05,0% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281): 20,0%-30,0% con res-
pecto a la sustancia ~eci1
Suplementos Dietticos / Condroitina 6411
CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221 ): No ms de 0,50%;
una porcin de O, 1O g no presenta mcis cloruro que el
correspondiente a 0,7 mL de cido clorhdrico 0,020 N .
CLORUROS y SULtAIOS, Sufutm \221;
Solucin muestra: Disolver 200 mg en 40 mL de agua.
Agregar 1 O mL de una solucin de cloruro de cetilpiridi-
nio de 30 mg/mL, pasar a travs de un filtro y usar una
porcin de 25 mL del filtrado.
Criterios de aceptacin: No ms de 0,24%; la Solucin
muestra no presenta ms sulfato que el correspondiente
a 0,25 mL de cido sulfrico 0,020 N.
PUREZA ELECTROFORTICA
[PRECAUCIN-Los voltajes utilizados en la electroforesis
pueden producir fcilmente una electrocuci?n letal. El .
riesgo se ve aumentado por el uso de soluciones amorti-
guadoras acuosas y la posibilidad de trabajar en entornos
hmedos. El equipo, con la posible excepcin de la fuente
de energa, debe estar contenido en una caja de metal
con conexin a tierra o en una caja de material aislante.
La caja debe tener un sistema que corte la fuente de ener-
ga cuando la caja se abra y que evite la reactivacin
hasta que se lleve a cabo un reinicio del interruptor. Los
cables de alto voltaje que van desde la fuente de energa
al aparato deben ser preferiblemente de un tipo en el cual
un blindaje de metal trenzado encierre completamente al
conductor central aislado y, adems, el blindaje debe te-
ner conexin a tierra. La base del aparato debe ser de
metal con conexin a tierra o contener un borde de metal
con conexin a tierra construido de forma que cualquier
fuga de electrlito produzca un cortocircuito que corte la
fuente de energa antes de que el electrlito pueda salir
mas all de la cubierta protectora. Si la fuente de alimen-
tacin contiene condensadores como parte de un circuito
de filtro, tambin debe contener una resistencia de deriva-
cin para garantizar la descarga de los condensadores an-
tes de que se abra la caja de proteccin. La existencia de
una barra de cortocircuito que se active al abrir la caja
puede ser considerada como una precaucin adicional.
Dado el riesgo potencial asociado a la electroforesis, el
personal de laboratorio debe estar totalmente familiari-
zado con el equipo de electroforesis antes de utilizarlo.]
Solucin amortiguadora de acetato de bario: Disolver
25,24 g de acetato de bario en 900 mL de agua. Ajustar
con cido actico a un pH de 5,0 y diluir con agua
hasta 1000 ml.
Reactivo de tincin: Disolver 1 g de azul de toluidina
en 1000 mL de cido actico O, 1 M.
Solucin estndar A: 30 mg/mL de ER Condroitina Sul-
fato de Sodio USP en agua
Solucin estndar B: Diluir 1 mL de Solucin estndar A
con a~ua hasta 50 mL. ..
Solucion muestra: 30 mg/mL de Condro1t1na Sulfato
de Sodio en agua
Anlisis: Llenar las cmaras de un aparato de electrofo-
resis adecuado para separaciones en membranas de
acetato de celulosa 1 (una pequea cmara submarina
para geles o una dedicada a los medios de membrana)
con Solucin amortiguadora de acetato de bario. Empa-
par una membrana de acetato de celulosa, de 5-6 cm x
12-14 cm, en Solucin amortiguadora de acetato de ba-
rio durante 1O minutos, o hasta que se humedezca uni-
formemente, y luego secar entre dos hojas de papel
absorbente. Usando un aplicador 7 adecuado para elec-
troforesis, aplicar volmenes iguales (0,5 L) de la Solu-
cin muestra, la Solucin estndar A y la Solucin estn-
dar B al lado ms brillante de la membrana colocada
sobre un soporte del aplicador o sobre un puente de
separacin en la cmara. Asegurar que ambos extremos
de la membrana estn sumergidos a una profundidad
de por lo menos 0,5-1,0 cm en las cmaras con solu-
.1 .Las membranas de acetato de celulosa adecuadas para electrotores1s estan
disponibles en Malta Chemetron SRL, Miln, Italia; F.luka Chemical Corp., Mil-
waukee, WI; y D1aSys Corp., Waterbury, CT (www.d1asys.com).
' Lm aplicadures adecuados cstan dispornblcs en D1aSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasy>.com) y Helena Laborator1es, Beaumont, TX (www.helena.com).
6412 Condroitina / Suplementm OietPfic os USP 38

cin amortiguadora. Ap!icar una corriente constante de Eliminar lo siguiente:

60 vollios (6 mA al princ1p10) durante 2 horas. [NOTA-
Llevar a cabo la aplicacin de soluciones y voltaje den- . METALES PESADOS, ,"v1todo (231): No ms de
t10 Je ius S 111111utos, porque un mayor secado del pa-
20 ppme (Ofici:il 01 die 2015;
pel absorbente rPduce lil 5ensibilidad ]
Colocar la membrana en una bandeja de tincin de PRUEBAS ESPECFICAS
plstico y, con el lado de la aplicacin hacia abajo, LMITE DE DISACRIDOS INESPECFICOS
hacer flotar o sumergir ligeramente en Reactivo de tin- Solucin A: Agua ajustada con cido clorhdrico O, 1 N
cin durante 5 minutos. Luego, mezclar la solucin a un pH de 3,5
suavemente durante 1 minuto. Retirar la membrana y Solucin B: Cloruro de sodio 1 M ajustada con cido
decolorar en cido actico al 5% hasta que el fondo se clorhdrico O, 1 N a un pH de 3,5
aclare. Comparar las bandas. [NOTA-Documentar los Fase mvil: Ver la Tabla 7.
resultados tomando una fotografa dentro de los 15
minutos de completada la decoloracin.] Tabla 1
Criterios de aceptacin: El electroferograma de la Solu-
cin muestra presenta una banda principal idntica en Tiempo Solucin A Solucin B
posicin a la banda de la Solucin estndar A. La banda lmin) 1/o) 1/o)
de la Solucin estndar B es claramente visible a una 00 100 ---- . - -
movilidad similar a la de la banda de la Solucin estn- 45 100 o
dar A. Ninguna banda secundaria en el electrofero- 21 o 61 39
grama de la Solucin muestra es de mayor intensidad
que la banda de la Solucin estndar B. Se encuentra no 21 1 100 o
ms de 2% de cualquier impureza individual. [NOTA- Solucin amortiguadora: Tris(hidroximetil)aminome-
Documentar los resultados tomando una fotografa den- tano 50 mM y acetato de sodio 60 mM (1 :1 ), ajustada
, tro de los 15 .minutos de completada la decoloracin.] con cido clorhdrico diluido a un pH de 8,0
LIMITE DE PROTEINA
Solucin de condroitinasa AC: Combinar 2 unidades
Solucin A: 20 mg/mL de tartrato de sodio dihidrato de condroitinasa AC 3 y 0,5 mL de Solucin amortigua-
Solucin B: 1 O mg/mL de sulfato cprico dora. Diluir con agua hasta 10,0 mL y mezclar
Solucin C: 20 mg/mL de carbonato de sodio anhidro minuciosamente.
en hidrxido de sodio O, 1 M Aptitud enzimtica: Diluir la Solucin estndar dige-
Reactivo de Folin-Ciocalteu diluido: Diluir Folin-Ciocal- rida (ver Anlisis en la seccin a continuacin) (1 en
teu para fenoles SR con agua (1 :5). Preparar inmediata- 1 O) y medir la absorbancia a 230 nm en celdas de
mente antes de su uso. 1 cm de paso.
Reactivo tartrato cprico alcalino: Mezclar 1 mL de Calcular la absortividad de ER Condroitina Sulfato de
Solucin A y de Solucin B, y agregar lentamente Sodio USP:
100 mL de Solucin Ca la mezcla, mezclando. Usar
dentro de las 24 horas y desechar despus de dicho Resultado = A/(C x O x d)
plazo.
Solucin estndar: 36 g/mL de estndar certificado A = absorbancia de la Solucin estndar diluida y
de albmina srica bovina en agua digerida
Solucin muestra: Transferir una porcin de Condroi- C = concentracin de ER Condroitina Sulfato de
tina Sulfato de Sodio, equivalente a 60 mg de la ma- Sodio USP en la Solucin estndar (mg/mL)
teria seca, a un matraz volumtrico de 100 mL, disolver O = factor de dilucin de la Solucin estndar
y diluir con agua a volumen. digerida (1 /5)
Condiciones instrumentales d = factor de dilucin para la medicin UV (1 /1 O)
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).) Requisitos de aptitud enzimtica: La absortividad de
Longitud de onda analtica: 750 nm ER Condroitina Sulfato de Sodio USP digerido es no
Blanco: Agua menos de 8 AU mL. mg 1 cm 1
Anlisis Solucin estndar: 2,4 mg/mL de ER Condroitina Sul-
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Blanco fato de Sodio USP seco en agua
Agregar 2,0 mL de Reactivo tartrato cprico alcalino re- Solucin muestra: Transferir aproximadamente 250 mg
cientemente preparado a tubos de ensayo que con- de Condroitina Sulfato de Sodio secada (a 105 durante
tengan 2,0 mL de la Solucin estndar, 2,0 mL de la 4 horas) a un matraz volumtrico de 1 00 mL, disolver y
Solucin muestra o 2,0 mL del Blanco. Despus de 1 O diluir con agua a volumen.
minutos, agregar 1,0 mL de Reactivo de Folin-Ciocalteu Solucin de aptitud del sistema: Agregar 1 volumen
diluido a cada tubo de ensayo y mezclar inmediata- de Solucin estndar a 1 volumen de Solucin muestra.
mente y de manera vigorosa. Despus de 30 minu- Blanco: Agua
tos, medir la absorbancia de la Solucin estndar y la Sistema cromatogrfico
Solucin m1wstra contra el Blanco. (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Criterios de aceptacin: No ms de 6,0% con respecto Modo: HPLC
a la sustancia seca; la absorbancia de la Solucin mues- Detector: UV 230 nm
tra es no mayor que la absorbancia de la Solucin Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L14 de 5 m
estndar. Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
CONTAMINANTES
[NOTA-El Volumen de inyPrin se puede reducir para
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- mejorar la forma del pico de los analitos.]
tal bacteriano no excede de 1 0 3 ufc/g y el recuento total Aptitud del sistema
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex- Muestras: Soluoon estandar y Solucin de aptitud del
cede de 1 0 2 ufc/g. , sistema (preparada segn se indica a continuacin en
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- Anlisis, l\1uestras)
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la [NOTA--Los tiempos de retencin relativos para los pi-
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli. cos de i1Di-OS, .\Di-6S y ADi-4S son 0,80; O, 97 y 1,0,
respectivamente.]
-,-Co-r-1d-ro-i-tin-a-sa-AC de Chromadex, part0 ncimero ASB-00003613-1 O.
USP 38
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromalograma5: El uomatograma
de la Solucin estndar es similar al Cromatograma de
Refere11ua p1 ov>lu coi 1 el [R Condroitina Sulfato de
Sodio USP.
Resolucin: No menos de 2,0, entre los picos de
i'.\Di-4S y .:'.Di-6S
Factor de recuperacin: No menos de 95% del ER
Condroitina Sulfato de Sodio USP agregado a la Solu-
cin muestra
[NOTA-Esta prueba est destinada para demostrar la
ausencia de inhibicin enzimtica debida a impurezas
en las muestras. Se requiere realizar esta prueba slo
para muestras que no cumplen con los Criterios de
aceptacin siguientes. El factor de recuperacin se
puede calcular segn se indica a continuacin.
Resultado = [(2 x IrlY) - Ir11]/Ir1 x 100
Irsy = suma de las reas de los picos de L'lDi-OS, L'lDi-
4S y L'lDi-6S de la Solucin de aptitud del
sistema
"Lru = suma de las reas de los picos de L'lDi-OS, L'lDi-
4S y L'lDi-6S de la Solucin muestra
Ir1 = suma de las reas de los picos de L'lDi-OS, L'lDi-
4S y i'.\Di-65 de la Solucin estndar]
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0% para
los picos de L'lDi-OS, L'lDi-4S y L'lDi-6S
Anlisis
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra, Solucin
de aptitud del sistema y Blanco
En cuatro viales individuales, combinar 4 volmenes de
Solucin de condroitinasa AC con 1 volumen de Solu-
cin estndar, de Solucin muestra, de Solucin de apti-
tud del sistema y de Blanco. Mezclar minuciosamente.
Incubar a 37C durante 3 horas. Dejar que se enfre
antes de inyectar.
Calcular el porcentaje de disacridos especficos en la
muestra tomada:
Resultado = (Iru/'Lrs) x (C/Cu) x 100
2Ju = suma de las reas de los picos de L'lDi-OS, L'lDi-
4S y L'lDi-6S de la Solucin muestra
"Lrs = suma de las reas de los picos de L'lDi-OS, L'lDi-
4S y L'lDi-6S de la Solucin estndar
Cs = concentracin de condroitina sulfato de sodio
en la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin de Condroitina Sulfato de Sodio
en la Solucin muestra (mg/mL)
Calcular el contenido de disacridos inespecficos en la
muestra tomada:
Resultado = CSC - SDC
CSC contenido de Condroitina Sulfato de Sodio
=
obtenido de la prueba de Contenido de
Condroitina Sulfato de Sodio (%)
SDC = contenido de disacridos especficos (%)
Criterios de aceptacin: No ms qe 10,0%
TRANSPARENCIA Y COLOR DE LA SOLUCION
Solucin muestra: Transferir 2,5 g de Condroitina Sul-
fato de Sodio a un matraz volumtrico de 50 ml. Disol-
ver y diluir con agua exenta de dixido de carbono a
volumen y observar inmediatamente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersion de Luz (851 ).)
Longitud de onda analtica: 420 nm
Celda: 1 cm
Blanco: Agua exenta de dixido de carbono
Anlisis: Medir la absorbancia de la Solucin muestra.
Criterios de aceptacin: Su absorbancia es no ms de
0,35., ,
ROTACION OPTICA, Rotacin Especfica (781 S): -20,0 a
-30,0
Suplementos Oietticm / C- ondroitina 641 3
Solucin muestra: 30 mg/mL
PH (791): 5,5 -7,5, en una solucin (1 en 100)
PRDIDA POR SECADO \731 ): Secar una muestra a 105
duuntc 4 horJ:;: pierde ne rns de 12,0l?lc; de su peso.
[NnrA-la Cnndroitina Sulfato de Sodio es extremada-
mente higroscop1ca una vez que se seca. Evitar la exposi-
cin a la atmsfera y pesar inmediatamente.]
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases
impermeables.
ETIQUETADO: Etiquetar indicando la fuente de la que se
deriv el artculo, ya sea bovina, porcina, avcola o una
me,zcla de cualquiera de stas.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Condroitina Sulfato de Sodio USP
Condroitina Sulfato de Sodio, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Condroitina Sulfato de Sodio contienen no
menos de 90,0% y no ms de 120,0% de la cantidad
declarada de condroitina sulfato de sodio.
[NOTA-La Condroitina Sulfato de Sodio es extremadamente
higroscpica una vez que se seca. Evitar la exposicin a la
atmsfera y pesar inmediatamente.]
IDENTIFICACIN
A. ELECTROFORESIS (726)
Solucin amortiguadora de acetato de bario: Disolver
25,24 g de acetato de bario en 900 mL de agua. Ajustar
con cido actico a un pH de 5,0 y diluir con agua
hasta 1000 ml.
Reactivo de tincin: Azul de toluidina al O, 1 % (p/v) en
cido actico O, 1 M
Solucin estndar: Usar la Solucin estndar de media
concentracin de Contenido de Condroitina Sulfato de
Sodio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Conte-
nido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Anlisis: Llenar las cmaras de un aparato de electrofo-
resis adecuado para separaciones en membranas de
acetato de celufosa 1 (una pequea cmara submarina
para geles o una dedicada a los medios de membrana)
con Solucin amortiguadora de acetato de bario. Empa-
par una membrana de acetato de celulosa, de 5-6 cm x
12-14 cm, en Solucin amortiguadora de acetato de ba-
rio durante 1 O minutos, o hasta que se humedezca uni-
formemente, y luego secar entre dos hojas de papel
absorbente. Usando un aplicador 2 adecuado para elec-
troforesis, aplicar volmenes iguales (0,5 L) de la Solu-
cin muestra y de la Solucin estndar al lado ms bri-
llante de la membrana colocada en posicin en un
soporte de aplicador adecuado o en un puente de se-
paracin en la cmara. Asegurar que ambos extremos
de la membrana estn sumergidos a una profundidad
de por lo menos 0,5-1,0 cm en las cmaras con solu-
cin amortiguadora. Aplicar una constante de 60 voltios
(6 rnA al principio) durante 2 horas. [NOTA-Llevar a
cabo la aplicacin de soluciones y voltaje dentro de los
5 minutos, porque un mayor secado del papel absor-
bente reduce ia )emibilidaJ.]
Colocar la membrana en una bandeja de tincin de
plstico y, con el lado de la aplicacin hacia abajo,
hacer flotar o sumergir ligeramente en Reactivo de tin-
cin durante 5 minutos. Luego, mezclar la solucin
Las membranas de acetato de celulosa adecuadas para electroforesis estn
disponibles en Maita Lhemerron ')RL, fvliin, ltali~ (www.niallddteinetron.
com); lukd Chemical Corp., Milwdukee, WI; y D1aSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com) .
' Los aplicadores adecuados estan disponibles en DiaSys Corp., Waterbury, CT
(www.dtasys.com) y Helena Laborator1es, Bedur11011l, TX (www.helena.com).
64 14 Condroitina / SuplPmPntos Dif'ti'ticos
suavemente durante l mmulo. Retirar la membrana v
<iPrnlorar en acido actico al SCl'CJ hJstJ que el fondo 'se
aclare.
Criterio() rfp aceptacin: La mancha princip)! de lJ So-
lucin muestra presenta la misma migracin C]llf' la man-
cha principal de la Solucin estandar. [NOTA-Documen-
tar los resultados tomando una fotografa dentro de los
15 minutos de completada la decoloracin.]
CONTENIDO
CONTENIDO DE CONDROITINA SULFATO DE SODIO
Soluciones estndar: 1,5; 1,0 y 0,5 mg/ml de ER Con-
droitina Sulfato de Sodio USP en agua
Solucin muestra: Transferir el equivalente a 1 00 mg
de condroitina sulfato de sodio, a partir de no menos
de 20 Tabletas, reducidas a polvo fino, a 60 ml de agua
y agitar hasta suspender el polvo en la solucin. Some-
ter a ultrasonido en un bao de agua a 65 durante 20
minutos. Retirar del bao, mezclar o agitar durante 5
minutos, diluir con agua hasta 1 00 ml y centrifugar o
pasar a travs de un filtro adecuado.
Diluyente: Pesar aproximadamente 297 mg de fosfato
monobsico de potasio, 492 mg de fosfato dibsico de
potasio y 250 mg de polisorbato 80, y transferir a un
vaso de precipitados de 1 L. Disolver en aproximada-
mente 900 ml de agua y ajustar con hidrxido de po-
tasio o cido fosfrico a un pH de 7,0 0,2. Diluir con
agua hasta 1 Ly mezclar minuciosamente.
Sistema volumetrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin volumtrica con deteccin
fotomtrica
Solucin volumtrica: 1 mg/ml de cloruro de cetilpi-
ridinio en agua
Deteccin del punto final: Turbidimtrica con una
sonda fototoelctrica
Anlisis: Transferir 5,0 ml de la Solucin estndar y de
la Solucin muestra a sendos vasos de valoracin y agre-
gar 25 ml de Diluyente a cada uno. Mezclar hasta obte-
ner una lectura estable con una sonda fotoelctrica ya
sea a 420, 550 660 nm. Ajustar el instrumento a cero
en modo de absorbancia. Valorar con Solucin volum-
trica usando la sonda fotoelctrica para determinar el
punto final turbidimtricamente. A partir de una ecua-
cin de regresin lineal, que se calcula usando los vol-
menes de Solucin volumetrica consumidos en funcin
de las concentraciones de las Soluciones estndar, deter-
minar la concentracin de sulfato de condroitina sulfato
de sodio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de con-
droitina sulfato de sodio en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin determinada de condroitina
sulfato de sodio en la Solucin muestra
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de condroitina sulfato
de sodio en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-120,0% de la cantidad
declarada
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolucin.
Medio: Agua; 900 ml
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Solucin volumtrica y Diluyente: Preparar segn se
indica en Contenido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Soluciones estndar: 1,5; 1,0 y 0,5 mg/ml de ER Con-
droitina Sulfato de Sodio USP en agua
Solucin muestra: Combinar porciones iguales de las
soluciones extradas de 6 vasos de disolucin y pasar a
USP 38
travs de un filtro adecuado; usar la muestra combi-
nada como la muestra de prueba.
Anlisis: Transferir 5,0 ml de cada Solucion estandar y
u11a al(uula Je ia Sufuuun rnue~rru equivaiente a apro-
ximadamente 5 mg de condroitinJ sulfato ele sodio a
sendos vasos de valoracin. Agregar 25 ml de Diluyente
a cada vaso de valoracin. Mezclar hasta obtener una
lectura estable con una sonda fotoelctrica. Ajustar el
instrumento a cero en modo de absorbancia. Valorar
con Solucin volumtrica usando la sonda fotoelctrica
para determinar el punto final turbidimtricamente, ya
sea a 420, 550 660 nm. A partir de una ecuacin de
regresin lineal, que se calcula usando los volmenes de
Solucin volumtrica consumidos en funcin de la canti-
dad, en mg, de condroitina sulfato de sodio de cada
Solucin estndar, determinar la cantidad, en mg, de
condroitina sulfato de sodio en la alcuota de Solucin
muestra tomada.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de con-
droitina sulfato de sodio disuelta:
Resultado= (Ws/a) x (V//) x 100
Ws = cantidad de condroitina sulfato de sodio en la
alcuota de Solucin muestra tomada (mg)
a = volumen de la alcuota de Solucin muestra
tomada
V = volumen de Medio, 900 ml
L = cantidad declarada de condroitina sulfato de
sodio (mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de condroitina sulfato de sodio.
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: Etiquetar indicando las especies de origen
de las que se obtuvo la condroitina usada para preparar
las Tabletas. Etiquetar indicando las fuentes de la con-
droitina sulfato de sodio, ya sea bovina, porcina, avcola
o una mezcla de cualquiera de stas. La etiqueta indica
en el panel frontal el contenido de condroitina sulfato de
soqio con respecto a la materia seca.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Condroitina Sulfato de Sodio USP
Picolinato de Cromo
CsH12NJOCr 418,30
Chromium Tripicolinate
Tripicolinato de Cromo [14639-25-9].
DEFINICIN
El Picolinato de Cromo contiene no menos de 98,0% y no
ms de 102,0% de picolinato de cromo CCxH1 ,N,O;;Cr),.
calculado con respecto a la sustancia seca.
USP 38
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO \l97M)
B.
Solucion muestra: 4 mg/mL
Anlisis: A<::J' e<::Jdl 1 111L de hicJ1xido de sodio 5 N y
1 O gotas de perxido de hidrgeno al 30% a 5 mL de
la Solucin muestra, y calentar suavemente durante 2
minutos.
Criterios de aceptacin: Se desarrolla un color
amarillo.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Solucin madre del estndar: 100 g/mL de cromo.
Transferir 0,283 g de dicromato de potasio, previamente
secados a 120 durante 4 horas, a un matraz volum-
trico de 1 000 mL, y diluir con agua a volumen. Almace-
nar en un frasco de polietileno.
Soluciones estndar: 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 g/mL de
cromo. Transferir por separado 1,0 y 2,0 mL de Solucin
madre del estndar a sendos matraces volumtricos de
100 mL y transferir 1,5 y 2,0 mL de Solucin madre del
estndar a sendos matraces volumtricos de 50 ml.
Agregar 1,0 mL de cido ntrico a cada matraz y diluir
el contenido de cada matraz con agua a volumen.
Solucin muestra: Transferir 200 mg de Picolinato de
Cromo a un vaso de precipitados de 100 mL y agregar
25 mL de agua. Agregar lentamente 1 O mL de cido n-
trico y calentar a ebullicin durante 1 O minutos agi-
tando constantemente por rotacin suave. Enfriar la so-
lucin, transferir cuantitativamente a un matraz
volumtrico de 500 mL y diluir con agua a volumen.
Filtrar una porcin de la solucin y transferir 5,0 mL del
filtrado a un matraz volumtrico de 100 ml. Agregar
1 mL de cido ntrico y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: 357,9 nm
Lmpara: Cromo, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido ntrico diluido
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las Soluciones estndar
y la Solucin muestra. Graficar las absorbancias de las
Soluciones estndar en funcin de la concentracin de
cromo, en g/mL, y trazar la lnea recta que mejor se
ajuste a los cuatro puntos graficados. A partir de la
grfica as obtenida, determinar la concentracin de
cromo, en g/mL, en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de picolinato de cromo
(Cl8H12N iOCr) en la porcin de Picolinato de Cromo
tomada:
Resultado= (Cer/Cu) x (M,/A,) x 100
Ce, = concentracin de cromo en la Solucin
muestra, obtenida a partir de la grfica
(g/mL)
Cu -= concentracin de Picolinato de Cromo en la
Solucin muestra (g/mL)
M = peso molecular de picolinato de cromo,
418,31
A = peso atmico de cromo, 51, 996
Criterios de aceptacin: 98,010- l 02,0% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221)
Solucin muestra: Disolver 30 mg rle Pirolinilto de
Cromo en 30-40 mL de agua y calentar a 70. Enfriar
durante la noche y filtrar para eliminar el precipitado.
Anlisis: Agregar 1 ml de cido ntrico y de nitrato de
plata SR, y agregar suficiente agua para obtener 50 ml.
Suplementos Dietticos / Crnmo 641 5
Mezclar y dejar en reposo durante 5 minutos, protegido
de la luz solar directa.
Criterios de aceptacin: Cualquier turbidez formada
no es mayor que ia producida en una ~oiucin conlrui
tratada de forma simil.:ir que conteng.:i 0,25 mL de
cido clorhdrico 0,002 N (no ms de 0,06%).
CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221)
Solucin muestra: Disolver 1 00 mg de Picolinato de
Cromo en 30-40 mL de agua y calentar a 90'. Enfriar
durante la noche y filtrar para eliminar el precipitado.
Anlisis: Agregar 1 mL de cido clorhdrico 3 N, 3 mL
de cloruro de bario SR y suficiente agua para obtener
50 mL. Mezclar y dejar en reposo durante 1O minutos.
Criterios de aceptacin: Cualquier turbidez formada
no es mayor que la producida en una solucin control
tratada de forma similar que contenga 0,2 mL de cido
sulfrico 0,02 N (no ms de 0,2%).
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 1 05
durante 4 horas: pierde no ms de 4,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases
imr;>ermeables.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Picolinato de Cromo USP
Picolinato de Cromo, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Picolinato de Cromo contienen no menos de
95,0% y no ms de 125,0% de la cantidad declarada de
cromo (Cr).
IDENTIFICACIN
A. La Solucin muestra preparada segn se indica en la
prueba de Contenido proporciona un resultado positivo a
la prueba de cromo, determinado a 357,9 nm, usando
las Condiciones instrumentales de la prueba de Contenido
de Cromo.
CONTENIDO
CONTENIDO DE CROMO
Solucin madre del estndar A: 1000 g/mL de
cromo a partir de dicromato de potasio, previamente
secados a 120 durante 4 horas, en agua. Almacenar en
un frasco de polietileno.
Solucin madre del estndar B: Transferir 1,0 mL de
Solucin madre del estndar A a un matraz volumtrico
de 100 mL, agregar 5,0 mL de cido clorhdrico 6 N y
diluir con agua a volumen hasta obtener una solucin
con una concentracin de 1 O g/mL de cromo.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
B con cido clorhdrico O, 125 N hasta obtener concen-
traciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 g/mL de cromo.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo,
equivalente a 5 Tabletas, a un crisol de porcelana, ca-
lentar el crisol en una mufla mantenida a aproximada-
mente 550 durante 6-12 horas y enfriar. Agregar
60 mL de cido clorhdrico y calentar a ebullicion suave
sobre una placa de calentamiento o en un bao de
vapor durante 30 minutos, enuagando intermitente-
mente la superficie interna de crisol con cido clorh-
drico 6 N. Enfriar y transferir el contenido del crisol a un
matraz volumtrico de 100 ml. Enjuagar el crisol con
pequeas porcione~ de ;.cirlo clorhrlriro 6 N v agregar
los enjuagues al matraz. Diluir con agua a vo(umen,
mezclar y filtrar, desechando los primeros 5 mL del fil-
trado. Diluir esta solucin con cido clorhdrico O, 125 N
6416 Cromo / Suplementos Dietticos USP 38

hasta obtener una solticin con una concentracin de
2,5 g/ml de crumu.
Condiciones instrumentales
(Ver Espcctrofotometrio y Di>pe1'>1un Je Luz (851;.)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cromo, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: 357,9 nm (lnea de emi-
sin de cromo)
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las Muestras, usando el
Blanco. A partir de una ecuacin de regresin lineal,
calculada usando las absorbancias de las Soluciones
estndar en funcin de la concentracin, en g/ml,
de cromo, determinar la concentracin, C, en g/ml,
de cromo en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C concentracin determinada de cromo en la
= Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de Acidos Grasos
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de cromo en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 95,0%-125,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN V DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS LIMITE DE ARSENICO
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Desintegracin.
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y almacenar a temperatura ambiente
controlada.
Aceite de Crypthecodinium cohnii
DEFINICIN
El Aceite de Crypthecodinium cohnii se obtiene de la fermen-
tacin y extraccin de algas de la especie Crypthecodinium
cohnii y contiene no menos de 35,0% (p/p) de cido do-
cosahexaenoico (DHA, por sus siglas en ingls, C22H322)
(C22: 6 n-3), como el nico cido graso poliinsaturado
significativo presente. Se pueden agregar antioxidantes
adecuados en concentraciones apropiadas.
IDENTIFICApN
PERFIL DE ACIDO GRASO INSATURADO DE CADENA LARGA:
Proceder segn se indica en Contenido de DHA.
Anlisis
Muestras: Solucin Estndar 2 y Solucin de Prueba
Calcular el porcentaje de rea de cada cido graso
como ster metlico en la Solucin de Prueba 7:
Resultado = (ru/rr) x 100
ru = respuesta del pico de cada cido graso
individual como ster metlico
r1 = suma
de las respuestas de todos los picos,
excepto los picos del disolvente y butil
hidroxitolueno
Criterios de aceptacin: El tiempo de retencin de los
picos de ster metlico del cido docosahexaenoico y de
ster metlico del cido eicosapentaenoico de la Solucin
de Prueba 7 corresponde al de la Solucin Estndar 2,
segn se obtienen en la prueba de Contenido de EPA y
DHA. El porcentaje de rea para los steres metlicos de
los cidos grasos de la Solucin de Prueba 7 Pn la
prueba de Contenido de EPA y DHA cumplen con los
requisitos para cada cido qraso presentado en la tahla
siguiente.
Tiempo Lmite Lmite
de Anota- Infer- Supe-
Reten- cin or rior
cido cin Abrevia- (%de (%de
Graso Relativo da rea) rea)
cido linoleico o 52 18:2 n 6 o 1 o
cido eicosapen-
taenoico o 79 20:5 n-3 o o1
cido docosapen-
taenoico o 94 22:5 n-6 o o1
cido docosahe-
xaenoico 1 00 22:6 n-3 35 o 47 o
COMPOSICIN
CONTENIDO DE DHA
Anlisis: Proceder segn se indica en, Grasas y Aceites
Omega-3, Contenido de EPA y DHA.
Criterios de aceptacin: No menos de 35,0% (p/p) de
cido docosahexaenoico (DHA)
IMPUREZAS
Impurezas lno,rgnicas
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de arsnico tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solucin A: Transferir 1 g de metal de paladio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
20 ml de agua y 1 O ml de cido ntrico, y entibiar
sobre una placa de calentamiento hasta disolver. Dejar
que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumetrico de 100 ml, y diluir
con a9ua desionizada a volumen.
Solucion B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de cido ntrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumtrico de 100 ml, y diluir
con a9ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin By cido ntrico al 2%
(3:2:5). Un volumen de 5 L proporciona 0,015 mg de
paladio y, 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1 :19)
Solucin madre del estndar: Transferir 1 0,0 ml de
Solucin Estndar de Arsnico, preparada se9n se in-
dica en Arsnico (211 ), a un matraz volumetrico de
100 ml. Agregar 40 ml de agua y 5 ml de cido n-
trico, y diluir con agua a volumen. Esta solucin con-
tiene O, 1 O g/ml de arsnico.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/ml de arsnico.
Solucin muestra: Para preparar la Solucin muestra,
usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrn de 2455 MHz y una potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %,
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimientos internos de tefln de 100 ml. Usar
USP 38
membranas de rurtura r;ira ventilar los vasos si la pre-
sin excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
de desbo1damie11lo. Eyuidr el horno de microondas
con un tubo de escape para permitir el escape de los
humos. [PRECAUCIN-Usar proteccin adecuada para
los ojos adems de ropa y guantes protectores.]
Transferir aproximadamente 500 mg de Aceite de
Crypthecodinium cohnii, pesados con una aproxima-
cin de O, 1 mg, a un vaso de digestin con recubri-
miento interno de tefln. Preparar las muestras por
duplicado. Agregar 1 5 mL de cido ntrico y agitar
por rotacin suave. Cubrir los vasos con tapas de-
jando fuera el accesorio de ventilacin. Digerir previa-
mente durante toda Ja noche bajo una campana. Co-
locar la membrana de ruptura en el accesorio de
ventilacin y ajustar la tapa. Colocar todos los vasos
en el plato giratorio del horno de microondas. Co-
nectar los tubos de escape a la trampa de ventilacin
y conectar la lnea del sensor de presin al vaso apro-
piado. Iniciar un procedimiento de digestin de dos
etapas calentando el microondas con una potencia
del 15% durante 15 minutos, seguida de una poten-
cia del 25% durante 45 minutos. Retirar el plato gira-
torio con los vasos del horno y dejar que Jos vasos se
enfren a temperatura ambiente. [NOTA-Se puede
usar un bao de agua fresca para acelerar el proceso
de enfriamiento.] Ventilar los vasos cuando alcancen
la temperatura ambiente. Retirar las tapas y agregar
lentamente 2 mL de perxido de hidrogeno al 30% a
cada uno. Dejar que las reacciones cesen y sellar los
vasos. Volver a colocar los vasos en el plato giratorio
del horno de microondas y calentar durante 15 minu-
tos adicionales a una potencia del 30%. Retirar los
vasos del horno y dejar que se enfren a temperatura
ambiente. Transferir los digeridos enfriados a un ma-
traz volumtrico de 25 mL y diluir con agua a
volumen.
Anlisis: Pro9ramar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 11 5 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argn de 300 mL/min. Carbonizar
la muestra a 1 000' usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una temperatura ajustada a
20 y un flujo de argn de 300 mL/min. Atomizar a
2400 usando una rampa de O segundos y un tiempo
de espera de 5 segundos con el flujo de argn dete-
nido, y limpiar a 2600 con una rampa de 1 segundo y
un tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 L) de las Soluciones estan-
dar, de la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 L de la Solucin C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para arsnico. Determinar el rea del pico en la lnea
de emisin de arsnico a 193,7 nm, corregida por la
absorcin de fondo. Graficar las reas de los picos co-
rregidas de las Soluciones estndar en funcin de sus
contenidos de arsnico, en g/mL, y calcular la lnea
de regresin que mejor se ajuste a los puntos. Determi-
nar la concentracin, C, en ~rg/mL, de arsnico en cada
mL de la Solucin muestra interpolando a partir de la
lnea de regresin.
Calcular el contenido de arsnico en la porcin de
Aceite de Crypthecodinium cohnii tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin, segn se obtuvo
anteriormente
Suplementos Dietticos / Crypthecodinium 641 7
W = peso de Aceite de Crypthecodinium cohnii
tomado para preparar lil Solucin muestra
(g)
,Criterio> de <1ccptacin: r--Jo ms de O, 1 g/g
LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparacion de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solucin A: 1 O g de fosfato monobsico de amonio ul-
tra puro en 1 mL de cido ntrico y 40 mL de agua
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 ml.
Solucin B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
40 mL de agua y 1 mL de cido ntrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumtrico de 1 00 mL, y diluir
con a~ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin B y cido ntrico al 2%
(2:1 :2). Un volumen de 5 L proporciona 0,2 mg de
fosfato y ,0,01 m9 de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido nitrico y agua (1 :19)
Solucin madre del estndar: Transferir 10,0 mL de
Solucin Madre de Nitrato de Plomo, preparada segn se
indica en Metales Pesados (231 ), a un matraz volum-
trico de 100 mL. Agregar 40 mL de agua y 5 mL de
cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Transferir
1,0 mL de esta solucin a un segundo matraz volum-
trico de 1 00 mL, agregar 50 mL de agua y 1 mL de
cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
cin contiene O, 1 O g/mL de plomo.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/mL de plomo.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico.
Anlisis: Pro9ramar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 mL/min. Carbonizar
la muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20 y
un flujo de argn de 300 mL/min. Atomizar a 2100
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido, y
limpiar a 2600 con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 L) de las Soluciones estn-
dar, de la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 L de la Solucin C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para plomo. Determinar el rea del pico en la lnea de
emisin de plomo a 283, 3 nm, corregida por la absor-
cin de fondo. Graficar las reas de los picos corregidas
de las Soluciones estndar en funcin de sus contenidos
de plomo, en g/mL, y calcular la lnea de regresin
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con-
centracin, C, en ,ug/mL, de plomo en cada mL de la
Solucin muestra interpolando a partir de la lnea de
regresin.
6418 f'ryrthecodiniurn / Suplementos Dietticos
Calcular el contenido de plomo en la porcin de
!\ccitc de Crypthecodinium cohnii tom'ada:
Resu!tado
C ~ concenlracin, segn se obtuvo
anteriormente
W = peso de Aceite de Crypthecodinium cohnii
tomado para preparar la Solucin muestra
(g)
,Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.J
Solucin A: 1O g de fosfato monobsico de amonio ul-
tra puro en 40 ml de agua y 1 ml de cido ntrico
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 1 00 ml.
Solucin B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de cido ntrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumtrico de 100 ml, y diluir
con $lua desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin By cido ntrico al 2%
a volumen (2:1 :2). Un volumen de 5 L proporciona
0,2 mg d,e fosfato y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1 :19)
Solucin madre del estndar A: O, 1 372 mg/ml de ni-
trato de cadmio
Solucin madre del estndar B: Solucin madre del es-
tndar A, cido ntrico y agua (2: 1 :97). Esta solucin
contiene O, 1 O g/mL de cadmio. [NOTA-Antes de lle-
var a volumen final, disolver en una porcin de agua y
cido ntrico.]
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
B con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/ml de cadmio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico.
Anlisis: Programar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20 y
un flujo de argn de 300 ml/min. Atomizar a 2400
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido, y
limpiar a 2600" con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 L) de las Soluciones estn-
dar, de la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 L de la Solucin C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lampara de ctodo hueco
para cadmio. Determinar el rea del pico en la lnea de
emisin de cadmio a 228,8 nm, corregida por la absor-
cin de fondo. Graficar las reas de los picos corregidas
de las Soluciones estndar en funcin de sus contenidos
de cadmio,. en pglml, y calcular la lnea de regresin
que mejor se ajuste a los puntos.
USP 38
Determinar la concentracin, C, en ,ug/mL, de cadmio
en cada mL de la :ioluuon rnuf'stra interpolando a
partir de la linea de regresin.
Caicuiar ei contenido de cadmio en el Aceite de Crypt-
hccodiniurn cohnii tom;irlo
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin, segn se obtuvo
anteriormente
W = peso de Aceite de Crypthecodiniurn cohnii
tomado para preparar la Solucin muestra
(g)
,Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE MERCURIO: Proceder segn se indica en Mer-
curio (261 ), Mtodo /la, excepto que se debe usar una
Solucin Estndar de Mercurio con el equivalente a O, 1
g/mL de mercurio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico combinando
los dos digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL de
Solucin de Permanganato de Potasio.
Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
PRUEBAS ESPECFICAS
GRASAS y ACEITES FIJOS, ndice de Anisidina (401): No ms
de 20,0 _ .
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Acidez (Acidos Grasos Li-
bres) (401 ): Los cidos grasos libres en 1 O g requieren
para su neutralizacin no ms de 1,42 mL de hidrxido
de sodio O, 1 N. ,
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401): No ms
de 5,0 ,
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Oxidacin Total (TOTOX)
(401): No rns de 26, calculado como:
Resultado = (2 x PV) + AV
PV = ndice de perxido
AV = ndice de anisidina
GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401): No
ms de 3,5%
PESO ESPECFICO (841): 0,91-0,93
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y evitar la exposicin al
calor excesivo.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de cido do-
cosahexaenoico en mg/g. Tambin indica el nombre y la
COl)Centracin de cualquier antioxidante agregado.
ESTA~DARES DE REFERf.NCIA USP (11)
ER ~ster Etlico del ~cido Docosahexaenoico USP
ER Ester Etlico del Acido Eicosapentaenoico USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Aceite de Crypthecodinium cohnii,
Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Aceite de Cryplhecodinium cohnii se prepa-
ran a partir de Aceite de Crypthecodinium cohnii y contie-
nen no menos de 95,0')f; y no ms de 105,0% de la can-
tidad declarada de cido docosahexaenoico (DHA, por sus
siglas en ingls; C,,HuO,) (C22:6 n-1).
IDENTIFICACIN
PERFIL DE CIDO GRASO INSATURADO DE CADENA LARGA:
Proceder segn se indica en Contenido de DHA.
USP ~8 111Jlt>mt>ntos Dietticos / Cypthecodinium 6419

Anlisis PRUEBAS DE DESEMPEO

Muestras: \nluonn Estandar J y \oiuC1on de prueba DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
Calcular el porcentaje de area de cada cido graso requisit9s de Prueba de Ruptura para Cpsulas Blandas.
como ester met1l1co en ta )otucron ele prueba I: VARIACION DE Puo \2091 : Cumplen con ios requisilos.
Resultado = (rLJ/r:) x 100 IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas
ru = respuesta del pico de cada cido graso LIMITE DE ARSENICO
individual como ster metlico [NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
rT = suma de las respuestas de todos los picos, sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
excepto los picos del disolvente y butil antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
hidroxitolueno de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
los picos de ster metlico del cido docosahexaenoico activos para que tengan un contenido de arsnico tan
y del ster metlico del cido eicosapentaenoico de la bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
Solucin de prueba 7 corresponden a los de la Solucin reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
Estndar 2, segn se obtienen en la prueba de Conte- los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
nido de EPA y DHA. El porcentaje de rea para los ste- remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
res metlicos de los cidos grasos de la Solucin de tos y enjuagando con agua desionizada.]
prueba 7 en la prueba de Contenido de EPA y DHA cum- Solucin A: Transferir 1 g de metal de paladio ultra
plen con los requisitos para cada cido graso presen- puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
tado en la Tabla 7. 20 mL de agua y 1 O mL de cido ntrico, y entibiar
sobre una placa de calentamiento hasta disolver. Dejar
Tabla 1 que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumetrico de 100 mL, y diluir
Tiempo Lmite Lmite con $:lua desionizada a volumen.
de Anota- Infer- Supe- Solucion B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
Reten- cin or rior puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
cido cin Abrevia- (%de (%de 40 mL de agua y 1 mL de cido ntrico, y entibiar sobre
Graso Relativo da rea) rea) una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
cido linoleico o 52 18:2 n-6 o 1 o Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
cido eicosapen- transferirla a un matraz volumtrico de 1 00 mL, y diluir
taenoico o 79 20:5 n-3 o o1 con $:lua desionizada a volumen.
cido docosapen- Solucion C: Solucin A, Solucin By cido ntrico al 2%
taenoico o 94 22:5 n 6 o o1 (3:2:5). Un volumen de 5 L proporciona 0,015 mg de
cido docosahe-
paladio y, 0,01 mg de nitrato de magnesio.
_ _2<aerioico ______ __l_,_QQ_._ ....1f.&__Q::3 35 o 47 o Blanco: Acido ntrico y agua (1 :19)
Solucin madre del estndar: Transferir 10,0 mL de
Solucin Estndar de Arsnico, preparada segn se in-
CONTENIDO dica en la prueba de Arsnico (211 ), a un matraz volu-
CONTENIDO DE DHA mtrico de 1 00 ml. Agregar 40 mL de agua y 5 mL de
Solucin de prueba 1 y Solucin de prueba 2: Pesar cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
no menos de 1 O Ccpsulas en un frasco de pesada ta- cin contiene O, 1 O g/mL de arsnico.
rado. Con una cuchilla afilada u otros medios apropia- Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
dos, abrir cuidadosamente las Cfsulas, sin perder ma- con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
terial de la cubierta, y transferir e contenido 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/mL de arsnico.
combinado de las Capsulas a un vaso de precipitados Solucin muestra: Para preparar la Solucin muestra,
de 100 mL. Retirar cualquier sustancia adherida a las cu- usar un horno de microondas con una frecuencia del
biertas de las Cpsulas vacas lavando con varias porcio- magnetrn de 2455 MHz y una potencia de salida se-
nes pequeas de isooctano. Desechar los lavados y de- leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %,
jar que las cubiertas de las Cpsulas se sequen en una equipado con vasos de material compuesto avanzado
corriente de aire seco hasta que se haya evaporado por con recubrimientos internos de tefln de 100 ml. Usar
completo el isooctano. Pesar las cubiertas de las Cpsu- membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
las vacas en el frasco de pesada tarado original y calcu- sin excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
lar el peso de llenado promedio (AFW, por sus siglas en giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
ingls) de aceite de Crypthecodinium cohnni/Cpsula. de desbordamiento. Equipar el horno de microondas
Proceder con el contenido de las Cpsulas segun se in- con un tubo de es,cape para permitir el escape de los
dica en el Anlisis. humos. [PRECAUCION-Usar proteccin adecuada para
Anlisis: Proceder segtn se indiCi1 en_ Grasas y Aceites los ojos adems de ropa y guantes protectores.]
Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de Acidos Grasos Transferir aproximadamente 500 mg de aceite de
Omega-3, Contenido de EPA y DHA. Crypthecondinium cohnii, a partir de Cpsulas, pesados
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cido con una aproximacin de O, 1 mg, a un vaso de di-
docosahexaenoico (DHA) en las Cpsulas tomadas: gestin con recubrimiento interno de tefln. Preparar
las muestras por duplicado. Agregar 15 mL de cido
Resultado= R x AFW/L ntrico y agitar por rotacin suave. Cubrir los vasos
con tapas dejando fuera el accesorio de ventilacin.
R = porcentajedeterminado de DHA en la porcin Digerir previamente durante toda la noche bajo una
de aceite tomada de las Cpsulas (%) campana. Colocar la membrana de ruptura en el ac-
AFW = peso de llenado promedio de las Cpsulas cesorio de ventilacin y ajustar la tapa. Colocar todos
tomadas (mg) los vasos en el plato giratorio del horno de microon-
L = cantidad declarada de DHA (mg/Cpsula) da). Cor1eclar los tubos de e)Lape a la trampa de
Criterios de aceptacin: No menos de 95,0% y no ventilacin y conectar la lnea del sensor de presin al
ms de 105,0% de la cantidad declarada de DHA vaso apropiado. Iniciar un procedimiento de digestin
de dos etapas calentando el microondas con una po-
tencia del 1 5% durante 15 minutos, seguida de una
6420 Crvpthccodinium / SuplPmPnto\ lJiptPtico\
rotPnri;i rlPI 25% durante 45 minutos. Retirar el
pldlo qirdlorio con los vasos del horno y dejar que los
vasos se enfren a temperatura ambiente. [NOTA-Se
pueJe md1 u11 cii'to tie d9Ud resca para aceierar el
proceso de enfriamiento.] Ventilar lm vasm cuando
alcancen la temperatura ambiente. Retirar las tapas y
agregar lentamente 2 ml de perxido de hidrgeno
al 30% a cada uno. Dejar que las reacciones cesen y
sellar los vasos. Volver a colocar los vasos en el plato
giratorio del horno de microondas y calentar durante
15 minutos adicionales a una potencia del 30%. Reti-
rar los vasos del horno y dejar que se enfren a tem-
peratura ambiente. Transferir los digeridos enfriados a
un matraz volumtrico de 25 ml y diluir con agua a
volumen.
Anlisis: Programar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 115c usando una rampa de 1
segundo, un tiPmpo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argn de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 1000 usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una temperatura ajustada a
20 y un flujo de argn de 300 ml/min. Atomizar a
2400 usando una rampa de O segundos y un tiempo
de espera de 5 segundos con el flujo de argn dete-
nido, y limpiar a 2600 con una rampa de 1 segundo y
un tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 L) de las Soluciones estan-
dar, de la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 L de la Solucin C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para arsnico. Determinar el rea del pico en la lnea
de emisin de arsnico a 193,7 nm, corregida por la
absorcin de fondo. Graficar las reas de los picos co-
rregidas de las Soluciones estndar en funcin de sus
contenidos de arsnico, en g/ml, y calcular la lnea
de regresin que mejor se ajuste a los puntos. Determi-
nar la concentracin, C, en g/ml, de arsnico en cada
ml de la Solucin muestra interpolando a partir de la
lnea de regresin.
Calcular el contenido de arsnico en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin, segn se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cpsulas tomado
para preparar la Solucin muestra (g)
,Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua des1onizada.J
Solucin A: 1 O g de fosfato monobsico de amonio ul-
tra puro en 1 ml de cido ntrico y 40 ml de agua
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 ml.
Solucin B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregdr
40 ml de agua y 1 ml de cido ntrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
USP 38
transferirla a un matraz volumtrico de 100 ml, y diluir
con agua desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin B y rido ntrico al 2%
(2: 1:2). Un volumPn de 5 pl proporciona 0,2 mg de
fmfdlo y ,0,01 m;:i de nitrJto de magnesio.
Blanco: Acido n1trico y agua (1 :19)
Solucin madre del estndar: Transferir 10,0 ml de
Solucin Madre de Nitrato de Plomo, preparada segn se
indica en Metales Pesados (231 ), a un matraz volum-
trico de 100 ml. Agregar 40 ml de agua y 5 ml de
cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Transferir
1,0 ml de esta solucin a un segundo matraz volum-
trico de 1 00 ml, agregar 50 ml de agua y 1 ml de
cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
cin contiene O, 1 O g/ml de plomo.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/ml de plomo.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico.
Anlisis: Programar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20 y
un flujo de argn de 300 ml/min. Atomizar a 2100
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido, y
limpiar a 2600 con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 L) de las Soluciones estn-
dar, de la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 L de la Solucin C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para plomo. Determinar el rea del pico en la lnea de
emisin de plomo a 283,3 nm, corregida por la absor-
cin de fondo. Graficar las reas de los picos corregidas
de las Soluciones estndar en funcin de sus contenidos
de plomo, en ~tg/ml, y calcular la lnea de regresin
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con-
centracin, C, en g/ml, de plomo en cada ml de la
Solucin muestra interpolando a partir de la lnea de
regresin.
Calcular el contenido de plomo en la porcin de Cp-
sulas tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin, segn se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cpsulas tomado
para preparar la Solucin muestra (g)
,Criterios de aceptacin: No ms de 0, 1 g/g
LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y Jlmacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasm de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solucin A: 1O g de tosfato monobasico de amonio ul-
tra puro en 40 ml de agua y 1 ml de cido ntrico
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 rnl.
USP 38
Solucin B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados rle tefin Agregar
40 ml de agua y 1 mL de cido ntrico, y entibiar sobre
tina piara rle ralentamiento hasta disolver los slirlos.
Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un rnatraL volumtrico de 1 00 mL, y diluir
con a9ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin B y cido ntrico al 2%
a volumen (2:1 :2). Un volumen de 5 L proporciona
0,2 mg d,e fosfato y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1: 19)
Solucin madre del estndar A: O, 1 372 mg/mL de ni-
trato de cadmio
Solucin madre del estndar B: Solucin madre del es-
tndar A, cido ntrico y agua (2:1 :97). Esta solucin
contiene O, 1 O g/mL de cadmio. [NOTA-Antes de lle-
var a volumen final, disolver en una porcin de agua y
cido ntrico.]
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
B con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/mL de cadmio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico.
Anlisis: Pro~ramar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 mL/min. Carbonizar
la muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20 y
un flujo de argn de 300 mL/min. Atomizar a 2400
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido, y
limpiar a 2600 con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 ~tL) de las Soluciones estn-
dar, de la Solucin muestro y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 L de la Solucin C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para cadmio. Determinar el rea del pico en la lnea de
emisin de cadmio a 228,8 nm, corregida por la absor-
cin de fondo. Graficar las reas de los picos corregidas
de las Soluciones estndar en funcin de sus contenidos
de cadmio, en g/mL, y calcular la lnea de regresin
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con-
centracin, C, en g/mL, de cadmio en cada mL de la
Solucin muestra interpolando a partir de la lnea de
regresin.
Calcular el contenido de cadmio en las Cpsulas
tomadas:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin, segn se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cpsulas tomado
para preparar la Solucin muestra (g)
,Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE MERCURIO: Proceder segn se indica en Mer-
curio (261), Mtodo /la, excepto que se debe usar una
Solucin Estndar de Mercurio con el equivalente a O, 1
~tg/mL de mercurio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico, combi-
nando los dos digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL
de Solucin de Permanganato de Potasio.
Criterios de aceptacin: No ms de O, l g/g
PRUEBAS ESPECFICAS
GRASAS y ACEITES F11os, ndice de Anisidina (401): No ms
de 20,0, determinado en el contenido de las Cpsulas
Suplementos Dietticos/ Crcuma 6421
GRASAS y ACEITES F11os, cidos Grasos Libres (401): Los
cidos grasos libres en 1 O g requieren para su neutraliza-
cin no ms de 1,42 m~ de hidrxido de sodio O, 1 N.
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401 >: No ms
de 5,0, determinado en, el contenido de las Cpsulas
GRASAS V ACEITES F11os, Indice de Ox1dacion Total (TOIOX)
(401): No ms de 26 (determinado en el contenido de
las Cpsulas), calculado como:
Resultado = (2 x PV) + AV
PV = ndice de perxido
AV = ndice de anisidina
GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401 ): No
ms de 3,5%, determinado en el contenido de las
Cpsulas ,
PESO ESPECIFICO (841): 0,91-0,93, determinado en el
contenido de las Cpsulas
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y evitar la exposicin al
calor excesivo.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de cido do-
cosahexaenoico en mg/Cpsula. Tambin indica el nom-
bre y la concentracin de cualquier antioxidante
ag~egado.
ESTA~DARES DE REFER~NCIA USP (11)
ER ~ster Etlico del ~cido Docosahexaenoico USP
ER Ester Etlico del Acido Eicosapentaenoico USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Crcuma
DEFINICIN
La Crcuma es el rizoma seco de Curcuma longa L., tambin
conocida como C. domestica Val., (Fam. Zingiberaceae).
Se conoce comnmente como Crcuma, Curcum, Haridra
y Azafrn de la India. Contiene no menos de 3,0% de
curcuminoides, calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,2 mg/mL de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solucin muestra: Reducir a polvo aproximadamente
5 g de Crcuma. Transferir aproximadamente 0,2 g de
la muestra reducida a polvo a un tubo de ensayo, agre-
gar 3 mL de acetona, someter a ultrasonido durante 30
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L, en bandas
Fase mvil: Cloroformo, metanol y cido frmico
(96:4:1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas sobre una placa para
cromatografa en capa delgada adecuada (ver Croma-
tografa (621 ), Cromatografa en Capa Delgada). Usar
una cmara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar y observar
bajo luz diurna y luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta bandas marrn amarillentas debi-
das a bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina a valores Rf de aproximadamente 0,4; 0,6 y
6422 Crcuma /Suplementos Dietticos
0,7, respectivamente, que corresponden en posicin y
coior a ia' obtenidas de la '>oluCJon estndar.
B. Los tiempos de retencin de los picos para curcumina,
desmetoxirnrrnminil y hi,rle<;metm:icurcumina del cro-
matograma de la Solucin muestra corresponden a los de
la So/uC/on e:>lndar para el Estndar de Referencia USP
correspondiente, segn se obtienen en la prueba de Con-
tenido de Curcuminoides.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase mvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de cido c-
trico en agua (4:6)
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido para
disolver el Estndar de Referencia en cada Solucin es-
tndar; todas las soluciones deben pasar a travs de un
filtro con un tamao de poro de 0,45 m antes de
inyectar. El ER Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina
USP y ER Bisdesmetoxicurcumina USP pueden prepa-
rarse tambin en una solucin estndar que contenga la
concentracin final especificada para cada una a
continuacin.]
Solucin estndar A: 40 g/mL de ER Curcuminoides
USP en Fase mvil
Solucin estndar B: 40 g/mL de ER Curcumina USP
en Fase mvil
Solucin estndar C: 1 O g/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase mvil
Solucin estndar D: 2 g/mL de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase mvil
Solucin madre de la muestra: Reducir a polvo aproxi-
madamente 5,0 g de Crcuma. Transferir aproximada-
mente 0,5 g de la muestra reducida a polvo a un ma-
traz volumetrico de 50 mL, agregar 30 mL de acetona y
someter a ultrasonido durante 30 minutos. Diluir con
acetona a volumen, mezclar y centrifugar.
Solucin muestra: Transferir 5 mL de Solucin madre de
fa muestra a un matraz volumtrico de 50 mL, diluir con
Fase mvil a volumen y mezclar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 ~tL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar A
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son 1,0; 1,2 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con el ER Curcuminoides USP
usado.
Resolucin: No menos de 2,0, entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O y Solucin
muestro
Calcular el porcentaje de curcumina, desmetoxicurcu-
mina y bisdesmetoxicurcumina en la porcin de Cr-
cuma tomada:
Resultado= (r11/r1) X e X (V/VV) X o X 100
USP 38
ru = respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumin o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucion
n;uc:;tra
r, = respuesta del piro rle rurrumina,
desmetox1curcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
estndar correspondiente
C = concentracin de la Solucin estndar
correspondiente (mg/mL)
V = volumen de la Solucion madre de la muestra
(mL)
W = peso de Crcuma usado para preparar la
Solucin madre de la muestra (mg)
O = factor de dilucin para obtener la Solucin
muestra, a partir de la Solucin madre de la
muestra
Criterios de aceptacin: No menos de 3% como la
suma de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina, con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo)// (231): No ms de 20 ppm
ARTCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
req,uisitos. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y las bacterias Gram-
negativas tolerantes a la bilis no exc~den de 1 0 3 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Sa/monella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: La crcuma se presenta como rizomas
primarios ovados, oblongos o en forma de pera, tam-
bin conocidos como bulbo o crcuma redonda, de
aproximadamente 3 cm de dimetro y 4-5 cm de longi-
tud, con cicatrices foliares anulares transversas, y tam-
bin se presenta en forma de rizomas secundarios ciln-
dricos, a veces con ramificaciones cortas, tambin
conocido corno crcuma larga o en forma de dedos, de
aproximadamente 1 cm de dimetro y 2-7 cm de longi-
tud con cicatrices de ramas laterales. La crcuma cu-
rada y seca comercializada es de color entre amarillo
brillante y amarillo plido, con una superficie spera o
pulida y un olor aromtico caracterstico. La textura es
dura y no se rompe con facilidad, y la fractura es suave
y finamente granular. Internamente es de color amarillo
anaranjado a anaranjado y presenta una corteza sepa-
rada de un cilindro central por una endoderrnis definida
Histologa
Seccin transversal del rizoma: Presenta una hilera
de clulas epidrmicas aplanadas de paredes finas;
unas pocas capas de clulas parenquirnticas del sber
de paredes delgadas, en forma de ladrillo, una corteza
amplia que consiste en capas mltiples de clulas pa-
renquirnticas de paredes delgadas que presentan ha-
ces vasculares dispersos; una capa delgada de clulas
oblongas de la endodermis; un periciclo que consiste
en una a dos hileras de clulas parenquirnticas; y una
mdula que consiste en celulas parenquimticas que
presentan haces vasculares dispersos, la mayora de los
cuales forman anillos discontinuos prximos a la endo-
dermis y en menor grado hacia adentro. Los haces
vasculares son del tipo colateral; los vasos tif'nf'n prin-
cipalmente engrosamiento espiralado y unos pocos tie-
nen engrosamiento reticulado y anillado. Dispersas por
todo el parnquima de la mdula y la corteza hay c-
lulas con oleorresina que contienen aceite y part1culas
USP 38
dispersas de un pigmento amarillo anaranjado y pris-
mJs de oxalJto de cJlcio, que usualmente se ven oscu-
recidos debido al color amarillo brillante del contenido
de pigrncnto. Las c:!u!as Jrcnqu:mJticJs estn llcnJs
de grnulm de ;ilmidn, de 1 S-30 prn de t;im;io y
t5xma plana o de discq. Ausencia de tibras de lber.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Contenido de Aceites Vol-
tile~ (561 ): No menos d~ 3,0 mL/l 00 g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561 ): No ms de 2,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohpl, Mtodo 2 (561 ): !;Jo menos de 100 mg/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 2 (561): No menos de 9,0%
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo 1a (921 ): No menos de
10%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 7,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561 ): No ms de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad. Almacenar
a temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bisdesmetoxicurcumina USP
ER Curcumina USP
ER Curcuminoides USP
ER Desmetoxicurcumina USP
Crcuma en Polvo
DEFINICIN
La Crcuma en Polvo es Crcuma reducida a polvo fino o
muy fino.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,2 mg/mL de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 0,2 g
de Crcuma en Polvo a un tubo de ensayo, agregar
3 mL de acetona, someter a ultrasonido durante 30 mi-
nutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O ~tL, en bandas
Fase mvil: Cloroformo, metano! y cido frmico
(96:4:1)
Anlisis
Muestras: Solucion estandar y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas en una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 ), Cromatografa en Capa Delgada). Usar
una cmara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar y observar
bajo luz diurna y luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta bandas marrn amarillentas debi-
das a bisdcsmctoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina a valores Rf de aproximadamente 0,4; 0,6 y
0,7, respectivamente, que corresponden en posicin y
color a las obtenidas de la Solucin estndar.
B. Los tiempos de retencin de los picos de curcumina,
dcsmetoxicurcumina y bisdcsmctoxicurcumina del cro-
matograma de la Solucin muestra corresponden a los de
!a Solucjn estndar de! Estndar de Referencia USP co
rrespondienle . segn se obtienen en la prueba de Conte-
nido de Curcummo1des .
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase mvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de cido c-
trico en agua (4:6)
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido para
disolver el Estndar de Referencia en cada Solucin es-
tndar; todas las soluciones se deben pasar a travs de
un filtro con un tamao de poro de 0,45 m antes de
inyectar. El ER Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina
USP y ER Bisdesmetoxicurcumina USP pueden preparase
tambin en una solucin estndar que contenga la con-
centracin final specificada para cada uno a
continuacin.]
Solucin estndar A: 40 g/mL de ER Curcuminoides
USP en Fase mvil
Solucin estndar B: 40 g/mL de ER Curcumina USP
en Fase mvil
Solucin estndar C: 1 O g/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase mvil
Solucin estndar D: 2 g/mL de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase mvil
Solucin madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 0,5 g de Crcuma en Polvo, pesados con exacti-
tud, a un matraz volumtrico de 50 mL, agregar 30 mL
de acetona y someter a ultrasonido durante 30 minu-
tos. Diluir con acetona a volumen, mezclar y
centrifugar.
Solucin muestra: Transferir 5 mL de Solucin madre de
la muestra a un matraz volumtrico de 50 mL. Diluir
con Fase mvil a volumen y mezclar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar A
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son 1,0; 1,2 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con ER Curcuminoides USP.
Resolucin: No menos de 2,0 entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina, y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndor C, Solucin estndar D y Solucin
muestra
Calcular el porcentaje de curcumina, desmetoxicurcu-
mina y bisdesmetoxicurcumina en la porcin de Cr-
cuma en Polvo tomada:
RP-;ultado = (r,,/r1) X e X (V/Wl X oX 100
6424 Crcuma / Suplementos Dietticos
ru = respuesta del oico de curcumina,
desmetoxicurcumina u
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
rr;uc~>lra
(< = respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
estndar correspondiente
= concentracin de la Solucin estndar
correspondiente (mg/mL)
V = volumen de Solucin madre de la muestra (mL)
w = peso de Crcuma en Polvo usado para
preparar la Solucin madre de la muestra
(mg) 1 S I .,
D = factor de dilucin para preparar a o uoon
muestra, a partir de la Solucin madre de la
muestra
Criterios de aceptacin: No menos de 3% como la
suma de curcumina, desmetoxicurcumina y
bisdesmetoxicurcumina
CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 ppm
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
req_uisitos.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Prueba de Aflatoxinas
(561 ): Cumple con los requisitos .
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no exce~e de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y las bacterias Gram-
negativas tolerantes a la bilis no exc~den de 10 3 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas .Pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a cofl.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Es de color amarillo intenso,
con un olor aromtico caracterstico. Al microscopio, la
Crcuma en Polvo revela clulas parenquimticas de pa-
redes delgadas que contienen grnulos de almidn,
15-30 pm de tamano, de forma plana o de disco, ge_lat1-
nizados o sin gelatinizar; clulas oleosas_ llenas de .aceite y
partculas dispersas de pigmentos amarillo anarania<:Jos;
prismas de oxalato de calcio, generalmente _oscurec1~os
debido al color amarillo brillante del contenido del pig-
mento, detectados al microscopio de luz polarizada
como prismas anaranjados brillantes; fragment~s de va-
sos espiralados y algunos vasos ret1cu.1a9os y anilla?os;
fragmentos de clulas suberosas y ep1de.rm1cas; gra.nulos
de almidn; tricomas no glandulares unicelulares disper-
sos y ausencia de fibras de lber.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Determinacin de Aceite
Voltil (561): No menos de 3,0 mL/l 00 g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561): No menos de 100 mg/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extracto<, Solubles en Agua,
Mtodo 2 (561): No menos de 9,0%
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo 7a (921 ): No menos de
10%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 7,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad. Almacenar
a temperatura ambiente. . ..
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1ent1f1co en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta contenida en el articulo.
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bi>desmetoxicurcumina USP
ER Curcumina USP
ER Cu1Lu11111uUe~ USP
ER DesmetoxicurcuminJ USP
Extracto en Polvo de Crcuma
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Crcuma se prepara a partir de los
rizomas reducidos a polvo de Curcuma longa L. ~Fam. Zin-
giberaceae), usando acetona, metano! u otros d1solven~es
adecuados. Contiene no menos de 20% de curcum1no1des
totales, calculado con respecto a la materia seca. Puede
contener otras sustancias agregadas.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,2 mg/mL de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solucin muestra: 1 O mg/mL de Extracto en Polvo de
Crcuma en acetona
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo general de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O pL, en b_andas .
Fase mvil: Cloroformo, metanol y ac1do form1co
(96:4:1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas sobre una placa para
cromatografa en capa delgada adecuada (ver Croma-
tografa (621 ), Cromatografa en Capa Delgada). Usar
una cmara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase mvil haya :ecorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
. placa. Retirar la placa de la cmara, secar y observar
bajo luz diurna y luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptacin: El cromat?grama _de la So/u-.
cin muestra presenta ban<:Jas marran an:ianllent~s debi-
das a bisdesmetoxicurcum1na, desmetox1curcumina y
curcumina a valores Rf de aproximadamente 0,4; _9,6 y
0,7, respectivamente, que corresr>onde;i en pos1oon y
color a las obtenidas de la Soluoon estandar.
B. Los tiempos de retencin de los picos de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetox1curcumina del cro-
matograma de la Solucin muestra corresponden a los de
la Solucin estndar para el Estndar de Referencia USP
correspondiente, segn se obtienen en la prueba de Con-
tenido de Curcuminoides.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase mvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de cido c-
trico en agua (4:6) .
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido. para
disolver el Estndar de Referencia en cada Soluoon es-
tndar; todas las soluciones se deben pasar a travs de
un filtro con un tamano de poro de 0,45 p~ antes de
inyectar. El ER Curcumina USP, ER Desmetox1curcum1na
USP y ER Bisdesmetox1curcum1na LJ)P pueden prepa-
rarse tambin en una solucin estnd;ir que contenga la
concentracin final especificada para cada una a
continuacin.]
Solucin estndar A: 40 pg/mL de ER Curcuminoides
USP en Fase mvil
Solucin estndar B: 40 p<:J/i11L dt> ER Curcu111i11a USP
en Fase mvil
Solucin estndar C: 1 O pg/mL de ER Desmetoxicurcu-
minJ USP en Fase mvil
USP 38
Solucin estndar D: 2 uo/ml de ER Bisdesmetoxicur-
cuinina USP e11 Fase mvi(
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 100 mg
de [xtracto C't rol/O de CCUTIU, pc:>Jdo~
tud, a un matraz volumtrico dP 50 ml, agregar 10 mi
de acetona y someter a ultrasonido durante 30 minu-
tos. Diluir con acetona a volumen y centrifugar. Transfe-
rir 5 ml a un matraz volumtrico de 50 ml, diluir con
Fase mvil a volumen y mezclar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar A
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son 1,0; 1,2 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con ER Curcuminoides USP.
Resolucin: No menos de 2,0 entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina, y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O y Solucin
muestra
Calcular el porcentaje de curcumina, desmetoxicurcu-
mina y bisdesmetoxicurcumina en la porcin de Ex-
tracto en Polvo de Crcuma tomada:
Res u Ita do ~ (ru! r;) x ( Cs/ C1) \( 1 00
ru = respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
muestra
r1 = respuesta
del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
estndar correspondiente
Cs = concentracin de la Solucin estndar
correspondiente (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de
Crcuma en la Solucin muestra (mg/ml)
Sumar los porcentajes debidos a curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina.
Criterios de aceptacin: No menos de 20% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de
20 P,pm e (Oficial Ol-dic-2015)
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodn GPneral para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
req_uisitos. , n1min<i y curcumina a valores R, de aproximadamente
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g;
Sup!r>mr>ntn' Dir>tPtirm / C-urrnminoides 6425
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10' ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
con CXJCti ple con !o~ rcqu:sitc:: de !as pruebas para determinar !a
ausPncia rlP Sofmonella spp. y Escherichia coli.
EXTRACTOS BOTANICOS, 01soiventes Hes1duaies \565/:
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g a 1 05 durante 2
horas: pierde no ms de 7,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad. Almacenar
a temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta a partir de la que se prepar el artculo. Cumple
con los otros requisitos de etiquetado indicados en Ex-
trac;tos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bisdesmetoxicurcumina USP
ER Curcumina USP
ER Curcuminoides USP
ER Desmetoxicurcumina USP
Curcuminoides
DEFINICIN
Los Curcuminoides son un complejo natural parcialmente
purificado de derivados diaril heptanoides aislados de la
Crcuma, Curcuma longa L. Contienen no menos de
95,0% de curcuminoides, calculado con respecto a la ma-
teria seca como la suma de curcumina, desmetoxicurcu-
mina y bisdesmetoxicurcumina. Contienen no menos de
70,0% y no ms de 80,0% de curcumina, no menos de
15,0% y no ms de 25,0% de desmetoxicurcumina, y no
menos de 2,5% y no ms de 6,5% de
bisdesmetoxicurcum1na.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,2 mg/mL de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solucin muestra: 2 mg/mL de Curcuminoides en
acetona
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O pl, en bandas
Fase mvil: Cloroformo, metano! y cido frmico
(96:4:1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar la~ muestras en bandas a una placa para cro-
matografla en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621) Cromatografa en Capa Delgada). Usar
una cmara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el trente de la fase mvil haya recorrido
JproximJdJmente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar y observar
ba10 luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
c.in rnue)l1u presenta bandas de color marrn amari-
llento debidas a bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicur-
0,4; 0,6 y 0,7, respectivamente, que corresponden en
posicin y color a las obtenidas de la Solucin estndar.
B. Los tiempos de retencin de los picos de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina del ero-
6426 CurrnminoirlP<; ./ 'luplPmmtos Dietticos
matograma de la Solucin muestra corresponden a los de
la !:io/ucion estndar para el Estndar de Referencia USP
correspondiente, )egn se obtienen en la prueba de Con-
tPnidn (P Curcuminoides.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase mvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de cido c-
trico en agua (4:6)
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido para
disolver el ER en cada Solucin estndar; todas las solu-
ciones deben pasarse a travs de un filtro con un ta-
mao de poro de 0,45 m antes de la inyeccin. El ER
Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina USP y ER Bis-
desmetoxicurcumina USP tambin se pueden preparar
en una solucin estndar que contenga la concentra-
cin final especificada a continuacin para cada uno.]
Solucin estndar A: 40 g/mL de ER Curcuminoides
USP en Fase mvil
Solucin estndar B: 40 g/mL de ER Curcumina USP
en Fase mvil
Solucin estndar C: 1 O g/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase mvil
Solucin estndar D: 2 g/mL de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase mvil
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 20 mg
de Curcuminoides a un matraz volumtrico de 50 mL,
agregar aproximadamente 30 mL de acetona y someter
a ultrasonido durante 30 minutos. Diluir con acetona a
volumen y centrifugar. Transferir 5 mL a un matraz vo-
lumtrico de 50 mL, diluir con Fase mvil a volumen y
mezclar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar A
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son 1,0; 1,2 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con el ER Curcuminoides USP.
Resolucin: No menos de 2,0, entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O y Solucin
muestra
Calcular el porcentaje de curcumina, desmetoxicurcu-
mina y bisdesmetoxicurcumina en la porcin de Cur-
cuminoides tomada:
Resultado= (ru/r,) x (Cs/Cu) x 100
= respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcuminJ o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
muestra
= respuesta del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
estndar correspondiente
USP 38
C = concentracin de la Solucion estandor
corre>pu11Jie11 te (n 19/rn L)
Cu =concentracin de Curcuminoides en la
5uh;cin n1uestru (rng/ntL)
Criterios de aceptacin: Los Curcumnoides contienen
no menos de 95,0% de curcuminoides, calculado con
respecto a la materia seca como la suma de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina. Contie-
nen no menos de 70,0% y no ms de 80,0% de curcu-
mina, no menos de 15,0% y no ms de 25,0% ?e
des-
metoxicurcumina, y no menos de 2,5% y no mas de
6,5% de bisdesmetoxicurcumina.
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo /JI (231 ): No ms de
20 P,pm (Oficial 01 -dic-201 S) ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(56,1 ): Cumplen con los ,requisitos. .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxmas
(561): Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a coil.
PRUEBAS ESPECFICAS ,
INTERVALO o TEMPERATURA DE FUSION, Clase I (741):
172- l 78
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g a 105 durante 2
horas: pierde no ms de 2,0% de su peso.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561 ):
No ms de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de curcumi-
noides y el contenido de curcuminoides individuales, con
respecto a la materia seca, y el nombre cientfico en latn
y I~ parte de la planta usada para preparar el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bisdesmetoxicurcumina USP
ER Curcumina USP
ER Curcuminoides USP
ER Desmetoxicurcumina USP
Curcuminoides, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Curcurninoide~ se preparan a partir de ~ur
cuminoides y contienen no menos de 90,0% y no mas de
11 0,0% de la cantidad declarada de curcuminoides, cal-
culado como la suma de curcumina, desmetoxicurcumina
y bisdesmPtoxirnrrnmina
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar: 0,2 mg/ml de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino el conte-
nido de no menos de 20 Cpsuias. Transferir una por-
cin del polvo, equivalente a aproximadamente 1 O mg
de curcuminoides, a un recipiente adecuado, agregar
5 mL de acetona, agitar durante 1 minuto y someter a
USP 38
ultrasonido durante l O minutos. Dejar en reposo du-
rante 15 minutos antes de usar.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamano promedio de partcuia de 1O-15 m
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L, en bandas
Fase mvil: Cloroformo, metanol y cido frmico
(96:4: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
longitud de la placa. Retirar la placa de la cmara,
secar y observar bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta bandas de color marrn amari-
llento debidas a bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicur-
cumina y curcumina a valores R1 de aproximadamente
0,4; 0,6 y 0,7, respectivamente, que corresponden en
posicin y color a las obtenidas de la Solucin estndar.
B. Los tiempos de retencin de los picos de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina de la Solu-
cin muestra corresponden a los de la Solucin estndar
para el Estndar de Referencia USP correspondiente, se-
gn se obtienen en la prueba de Contenido de
Curcuminoides.
CONTENIDO
CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase mvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de cido c-
trico en agua (4:6)
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido para
disolver el ER en cada Solucin estndar; todas las solu-
ciones deben pasarse a travs de un filtro con un ta-
mao de poro de 0,45 m antes de la inyeccin. El ER
Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina USP y ER Bis-
desmetoxicurcumina USP tambin se pueden preparar
en una solucin estndar que contenga la concentra-
cin final especificada a continuacin para cada uno.]
Solucin estndar A: 40 g/mL de ER Curcuminoides
USP en Fase mvil
Solucin estndar B: 40 g/mL de ER Curcumina USP
en Fase mvil
Solucin estndar C: 1 O g/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase mvil
Solucin estndar D: 2 g/mL de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase mvil
Solucin madre de la muestra: Pesar y reducir a polvo
fino el contenido de no menos de 20 Cpsulas. Transfe-
rir una cantidad del polvo, pesada con exactitud, equi-
valente a aproximadamente 20 mg de curcuminoides, a
un matraz volumtrico de 50 mL. Agregar aproximada-
mente 30 mL de acetona, someter a ultrasonido du-
rante 30 minutos, diluir con acetona a volumen, mez-
clar y centrifugar.
Solucin muestra: Diluir una porcin de la Solucin ma-
dre de la muestra 1 en 1 O con Fase mvil y mezclar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-vis 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar A
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
cos de c.urc.umina, desmeloxicurcumina y L>isdesmeto-
xicurcumina son aproximadamente 1,0; 1,2 y 1,4,
respectivamente.]
'\11JIP111Pr1tc\ Oipt,Jtin-i\ / CurnJminoide5 6427
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: t.I cromatograma
de la Solucion estandar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con ei iote de E.R Curcuminoi-
des U<;P usado.
Resolucin: No menos de 2,0 entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina, y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O y Solucin
muestra
Calcular la cantidad, en mg, de curcumina, desmetoxi-
curcumina y bisdesmetoxicurcumina en cada Cpsula:
Resultado= (ru/r1) x C1 x O x V x (Wr/Wu)
ru = rea del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
muestra
= rea del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
estndar correspondiente
Cs = concentracin de la Solucin estndar
correspondiente (mg/mL)
o = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra a partir de la Solucin madre de la
muestra
V =volumen de Solucin madre de la muestra (mL)
w, = peso promedio de llenado de las Cpsulas
(mg)
= peso del contenido de las Cpsulas tomado
para preparar la Solucin madre de la muestra
(mg)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
curcuminoides en la Cpsula:
Resultado = CiQ/ L) x 100
IQ = suma de las cantidades de curcumina,
desmetoxicurcumina y
bisdesmetoxicurcumina en la Cpsula (mg)
L = cantidad declarada de curcuminoides
(mg/Cpsula)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN (2040)
Modo: Disolucin
Medio: Agua que contenga lauril sulfato de sodio al
1%; 900 mL
Aparato 2: 1 00 rpm
Tiempo: 60 min
Solucin muestra: Combinar porciones de 25 mL de la
solucin en anlisis de cada uno de los seis vasos de
disolucin y mezclar. Transferir 5 mL a un matraz volu-
mtrico de 25 mL y diluir con Fase mvil a volumen.
Anlisis: Determinar la cantidad disuelta de curcumina
(C21 H2o06), usando el mtodo empleado en Contenido,
haciendo las modificaciones necesarias.
Tolerancias: No menos de 75% del contenido de cur-
cumin,a (C 2! H2o0c)
VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g,
64/8 Curcuminoides ! Suplementos Dietticos
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 O' ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen cor: !e:; rcquis:to'.> de !Js puebas par a detefn tit dr ld
ausencia de SolmonP/lo spp. y Escherichia co!i.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de curcumi-
noi,des en mg/Cpsula.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Bisdesmetoxicurcumina USP
ER Curcumina USP
ER Curcuminoides USP
ER De~metoxicurcumina USP
Curcuminoides, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Curcuminoides se preparan a partir de Cur-
cuminoides y contienen no menos de 90,0% y no ms de
110,0% de la cantidad declarada de curcuminoides, cal-
culado como la suma de curcumina, desmetoxicurcumina
y bisdesmetoxicurcumina.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar: 0,2 mg/mL de ER Curcuminoides
USP en acetona
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo,
equivalente a aproximadamente 1O mg de curcuminoi-
des, a un recipiente adecuado, agregar 5 mL de ace-
tona, agitar durante 1 minuto y someter a ultrasonido
durante 1O minutos. Dejar en reposo durante 15 minu-
tos antes de usar.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
ron un tamao promedio de partcula de 10-15 m
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L, en bandas
Fase mvil: Cloroformo, metanol y cido frmico
(96:4: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
longitud de la placa. Retirar la placa de la cmara,
secar y observar bajo luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta bandas de color marrn amari-
llento debidas a bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicur-
cumina y curcumina a valores RF de aproximadamente
0,4; 0,6 y 0,7, respectivamente, que corresponden en
posicin y color a las obtenidas de la Solucin estndar.
B. Los tiempos de retencin de los picos de curcumina,
desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina de la Solu-
cin muestra corresponden a los de la Solucin estndar
para el Estndar de Referencia USP correspondiente, se-
gn se obtienen en la prueba de Contenido de
Curcuminoides.
CONTENIDO
CONTENIDO DE CURCUMINOIDES
Fase mvil: Tetrahidrofurano y 1 mg/mL de cido c-
trico en agua ( 4:6)
[NOTA-Puede ser necesario someter a ultrasonido para
disolver el ER en cada Solucin estndar; todas las solu-
USP 38
ciones deben pasarse a travs de un filtro con un ta-
mao de poro de 0,45 m antes de la inyeccin. El ER
Curcumina USP, ER Desmetoxicurcumina USP y ER Bis-
desmetoxicurcumina USP tamb1en se pueden preparar
en una mlucin estndar que contenga Id concentra-
cin final especificada a continuacin para cada uno.]
Solucin estndar A: 40 g/ml de ER Curcuminoides
USP en Fase mvil
Solucin estndar B: 40 g/mL de ER Curcumina USP
en Fase mvil
Solucin estndar C: 1 O g/mL de ER Desmetoxicurcu-
mina USP en Fase mvil
Solucin estndar D: 2 g/ml de ER Bisdesmetoxicur-
cumina USP en Fase mvil
Solucin madre de la muestra: Pesar y reducir a polvo
fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad
del polvo pesada con exactitud, equivalente a aproxi-
madamente 20 mg de curcuminoides, a un matraz vo-
lumtrico de 50 mL. Agregar aproximadamente 30 mL
de acetona, someter a ultrasonido durante 30 minutos,
diluir con acetona a volumen, mezclar y centrifugar.
Solucin muestra: Diluir una porcin de Solucin madre
de la muestra (1 en 1O) con Fase mvil y mezclar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografra (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Vis 420 nm
Columna: 4,6 mm x 20 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar A
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
cos de curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmeto-
xicurcumina son aproximadamente 1,0; 1,2 y 1,4,
respectiva mente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia provisto con el lote de ER Curcuminoi-
des USP usado.
Resolucin: No menos de 2,0 entre los picos de cur-
cumina y desmetoxicurcumina y los picos de desme-
toxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para los picos de
bisdesmetoxicurcumina, desmetoxicurcumina y
curcumina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de desmetoxicurcumina, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O y Solucin
muestra
Calcular la cantidad, en mg, de curcumina, desmetoxi-
curcumina y bisdesmetoxicurcumina en cada Tableta:
Resultado= (ru/r1) x Cs x O x V x (WF!Wu)
ru = rea del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de curcumina,
desmetoxicurcumina o
bisdesmetoxicurcumina de la Solucin
estndar correspondiente
Cs = concentracin de la Solucin estndar
correspondiente (mg/mL)
O = factor de dilucin para preparar la Solucin
111uE:",/ru a partir de ia Solucin madre de ia
muestra
V = volumen de Solucin muestra (ml)
USP 38 )upft?n1t?ntos Dit?tFticos / DiosminJ 6429

IV, = pe~o promedio de !as Tabletas (mg)

w,, = peso del polvo de las labletas tomadas para Diosmina
preparar la Solucion madre de la muestra
(mg)
Calcular el urLentaje de la eantidad declarada de
curcuminoides en la Tableta:

Resultado = (L.Q/ L) x 100

I.Q =suma de las cantidades de curcumina,

011 OH O

desmetoxicurcumina y
bisdesmetoxicurcumina en la Tableta (mg)
C2sH321s 608,54
L = cantidad declarada de curcuminoides
5-Hyd roxy-2-(3-hyd roxy-4-methoxyphenyl)-7 -
(mg/Tableta) [ (2 S, 3 R,4S,5 S, 6R)-3, 4, 5-trihydroxy-6-[[ (2 R, 3 R, 4 R,5 R, 6S)-
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad 3,4 ,5-trihyd roxy-6-methyloxan-2-yl]oxymethyl]oxa n-
declarada
2-yl]oxychromen-4-one; . . .
PRUEBAS DE DESEMPEO 7-[[ 6-0-( 6-Desoxi-cx-L-manopiranosil)-/3-D-g 1ucop1 ran?SI l]ox1 ]-
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN (2040) 5-hid roxi-2-( 3-hidroxi-4-metoxifenil)-4H-1 -benzopi ran-
Modo: Disolucin 4-ona [520-27-4].
Medio: Agua que contenga lauril sulfato de sodio al
DEFINICIN
1%; 900 mL La Diosmina contiene no menos de 90,0% y no ms de
Aparato 2: 1 00 rpm 102,0% de diosmina (C2sHi21s), calculada con respecto a
Tiempo: 60 min la sustancia anhidra.
Solucin muestra: Combinar porciones de 25 mL de la
solucin en anlisis de cada uno de los seis vasos de IDENTIFICACIN
disolucin y mezclar. Transferir 5 mL a un matraz volu- A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197K)
mtrico de 25 mL y diluir con Fase mvil a volumen. B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
Anlisis: Determinar la cantidad disuelta de curcumina cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
(C21 H200 6) usando el mtodo empleado en Contenido de gn se obtienen en la Valoracin.
Curcuminoides, haciendo las modificaciones necesarias.
Tolerancias: No menos de 75% del contenido de cur- VALORACIN
cumirJ.a (C21H2006). PROCEDIMIENTO
VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos. Fase mvil: Metanol, acetonitrilo, cido actico y agua
(27:2:6:65)
CONTAMINANTES Solucin estndar: 1,0 mg/mL de ER Diosmina USP en
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- dimetil sulfxido
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 04 ufc/g, Solucin de aptitud del _sistema: 1 mg~mL ?e ER ,D_ios-
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y mina para Aptitud del Sistema USP ~n d1~etrl sulfox1~0
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. , Solucion muestra: 1,0 mg/mL de D1osmrna en d1met1I
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- sulfxido
plen con los requisitos de las pruebas para d_eterminar la Sistema cromato9rfico
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a col1. (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
REQUISITOS ADICIONALES Detector: UV 275 nm
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien Columna: 4,6 mm x 1O cm; relleno L1 de 3 m
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a Temperatura de la columna: 40
temperatura ambiente. Velocidad de flujo: 1,2 mL/min
ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de curcumi- Volumen de inyeccin: 1O L
noLdes en mg/Tableta. Aptitud del sistema
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin es-
ER Bisdesmetoxicurcumina USP tndar.
ER Curcumina USP [NOTA-Permitir un tiempo de corrida de aproximada-
ER Curcuminoides USP mente 6 veces el tiempo de retencin de diosmina.
ER Desmetoxicurcumina USP Los tiempos de retencin relativos para diosmina, ace-
toisovainillona, hesperidina, isorroifolina, linarina y
diosmetina son 1; 0,5; 0,6; 0,8; 2,6 y 4,5,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Dexpantenol-ver Dexpantenol en Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
Monografas Generales de la Solucin de aptitud del sistema es similar al Cro-
matograma de Referencia provisto con el lote de ER
Diosmina para Aptitud del Sistema USP usado.
Resolucin: No menos de 2,5 entre hesperidina e
Dexpantenol, Preparacin-ver i:>orroifolina, Solun de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
Dexpantenol, Preparacin en Monografas cin estndar
Generales Anlisis
Muestras: Soluoon estndar y Soiucin muestra
Calcular el porcentaje de diosmina (C2sH i20is), en la
porcin de Diosmina tomada:

Re~ultado = (r11/r1) x (C/Cu) x 100

ru = respues'.a del pico de la Solucin muestra

6430 Diosmim /Suplementos Dit=>f Pf<o1 USP 38

r( = re~r11e5ti1 de! pico de la Solucin estndar matograma de Referencia provisto con el lote rle FR
e = LOrKentracin de ER Diosm1na USP en la Diosmina para Aptitud del Sistema USP usado.
Solucin estndar (mg/ml) Resolucin: No menos de 2.5 entre hesperirlina e
C: - Lu11Le11 lr dLIOfl de Diosmina en ia )o/uC1on isorroifolina, Solucin de aptitud del sistema
muestra (m9/ml) Anlisis
Criterios de aceptacion: 90,0%-102,0%, con respecto Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
a la sustancia anhidra Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcin
de Diosmina tomada: [NOTA-No tomar en cuenta las
IMPUREZAS impurezas menores de O, 1 %.]
RESIDUO DE INCINERACIN (281)
Muestra: 1,0 g Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) x F x 100
Criterios de aceptacin: No ms de 0,2%
ru = respuesta del pico de cada impureza de la
Solucin muestra
Eliminar lo siguiente: r1 = respuesta del pico de diosmina de la Solucin
estndar
METALES PESADOS, Mtodo JI (231) C1 = concentracin de ER Diosmina USP en la
Muestra: 2,0 g Solucin estndar (mg/mL)
Criterios de aceptacin: No ms de 20 ppm. (Oflcia1 01-ctic-
Cu = concentracin de Diosmina en la Solucin
, 2015) muestra (mg/ml)
LIMITE DE YODO F = factor de correccin para cada impureza
Determinar potenciomtricamente el contenido total de individual (ver la Tabla 1)
yodo, usando un electrodo selectivo de yoduro, des- Criterios de aceptacin
pus de una combustin en un matraz con oxgeno Impurezas totales: No ms de 1 0%
(ver Combustin en Matraz c9n Oxgeno (471)). Impurezas individuales: Ver la Tabla 1.
Solucin muestra: [PRECAUCION-Se deben cumplir rigu- Suma de acetoisovainillona y otras impurezas: No
rosamente las precauciones especificadas en el Procedi- ms de 1 %
miento de Combustin en Matraz con Oxgeno (471 ).]
Envolver O, 1 00 g de Diosmina en una hoja de papel de
filtro exento de haluros y colocar en el portamuestras Tabla 1
de malla de platino. Introducir en el matraz 50,0 ml de Criterios de
una solucin de 0,2 g/L de hidrazina. Purgar el matraz Tiempo de Factor de Aceptacin,
con oxgeno durante 1 O minutos. Incinerar el papel de Retencin Correccin No ms de
filtro. Mezclar el contenido del matraz inmediatamente Nombre Relativo (F\ (%)
despus de terminada la combustin para disolver com- Acetoisovainillona' 05 o3 1
pletamente los productos de la misma. Continuar mez- Hesneridina 0 06 1 5
clando durante 1 hora.
Solucin estndar: 33,2 g/ml de yoduro de potasio lsorroifolina 1 __QJL___ 1 3
en agua, equivalente a 25,4 g/ml de yodo Linarina" 26 1 3
Solucin de nitrato de potasio: 200 mg/ml de nitrato Diosmetina ---- -------
_1,2 __Q,_L 3
de potasio en cido ntrico O, 1 M Cualquier otra im- -

Anlisis pureza 1 1
Muestras: Solucin muestra y Solucin estndar Impurezas totales - ____J -- 10
Transferir 30 ml de la Solucion de nitrato de potasio a " 1-(3-Hidroxi-4-metoxifenil)etanona.
un vaso de precipitados, sumergir los electrodos y 0 (2S)-7 -[[ 6-0-( 6-Desoxi-<X-L-manopira nosil)-':i-D-glucopiranosil]oxi]-5-h idro-
mezclar durante 1 O minutos. El potencial (nU1) debe xi-2-( 3-hid roxi-4-metoxifen il)-2, 3-dih id ro-4 H- l -benzopi ran-4-ona.
permanecer estable. Medir el potencial (nU,). Agregar ' 7-[[ 6-0-( 6-Desoxi-u-L-manopiranosil)-':i-D-gl ucopiranosil]oxi J-5-h id roxi-2-
1 ml de la Solucin muestra y medir el potencial ( 4-hidroxifenil)-4 H- l -benzopiran-4-ona.
(nU2). d 7-[[ 6-0-( 6-Desoxi-<l-L-ma no pira no si 1)-/J-D-glucopi rano si 1jox i]-5-h id roxi-2-

Transferir 30 ml de la Solucin de nitrato de potasio a (4-metoxifen i 1)-4H-1 -benzopi ra n-4-ona.

e 5,7-Dihidroxi-2-(3-hidroxi-4-metoxifenil)-4H-l -benzopiran-4-ona
un vaso de precipitados, sumergir los electrodos y
mezclar durante 1 O minutos. El potencial (nS,) debe PRUEBAS ESPECFICAS
permanecer estable. Medir el potencial (nS1). Agregar DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo la < 921)
80 L de la Solucin estndar y medir el potencial Muestra: 0,3 g
(nS2). Criterios de aceptacin: No ms de 6,0%
Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 %: El valor ab-
soluto de la Solucin muestra l(nU2) - (nU1)I no es ma- REQUISITOS ADICIONALES
yor 9ue el valor absoluto de la Solucin estndar l(nS2) - ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
(nS1)I. permeables bien cerrados.
COMPUESTOS RELACIONADOS ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
Fase mvil, Solucin de aptitud del sistema, Solucin ER Diosmina USP
muestra y Sistema cromatogrfico: Proceder segn ER Diosmina para Aptitud del Sistema USP
se indica en la Valoracin.
Solucin estndar: 0,05 mg/ml de ER Diosmina USP
en dimetil sulfxido
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema. [NOTA-Per- Eleuterococo
mitir un tiempo de corrida de aproximadamente 6 ve-
ces el tiempo de retencin d~ diosmina. Lo_s t1er:npos DEFINICIN
de retencion relativos para d1osm1na, aceto1sova1n1- El Eleuterococo es el rizoma seco con races de Flrnthrrococ-
llona, hesperidina, isorroifolina, linarina y diosmetina
cus senticosus (Rupr. & Maxim.) Maxim. (Fam. Araliaceae)
son 1; 0,5; 0,6; 0,8; 2,6 y 4,5, respectivamente.]
[Acanthopanax senticosus (Rupr. & Maxim.) Harms]. Con-
Requisitos de aptitud del sistema
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin de aptitud del sistema es similar al Cro-
USP 38
Lie11e 110 me11u~ de 0,08% de i.:i ~umd de eleuterfoidu B v
eleutersido E, calculado con respecto a la materia seca.,
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar A: 1 mg/ml de ER Eleutersido E
USP en metanol
Solucin estndar B: 1 mg/ml de ER Eleutersido B
USP en metanol
Solucin estndar C: O, 1 g de ER Extracto en Polvo de
Eleuterococo USP en 5 ml de etanol en agua al 50%.
Someter a ultrasonido durante 1O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
El~uterococo, reducido a polvo fino, a un tubo de cen-
tnfug~, agregar 5 ml de etanol en agua al 50% y mez-
clar bren. Someter a ultrasonido durante 1O minutos.
Centrifugar o filtrar la solucin y usar el sobrenadante o
el filtrado.
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L en bandas
Fase ~vil: Cloroformo, meta~ol y agua (35:15:2)
Soluc1on reveladora: Colocar 18 ml de metano! en un
matraz de vidrio y enfriar en un bao de agua, hielo y
sal o en un congelador. Agregar 2 ml de cido sul-
frico, lenta y cuidadosamente, al metano! helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se ajuste a la tempe-
ratura ambiente.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B So-
lucin estndar C y Solucin muestra ' travs del algodn al matraz volumtrico, lavar el resi-
Antes de desarrollar el cromatograma, saturar la c-
mara durante 20 minutos con Fase mvil. Registrar la
temperatura y la humedad en el laboratorio. Si la hu-
medad relativa excede de 50%, acondicionar la placa
a una humedad relativa de aproximadamente 30%,
usando un dispositivo adecuado. Desarrollar la placa
en un recorrido de 6 cm, secar y rociar con Solucin
reveladora. Calentar la placa a 1 00 durante 5 minu-
. tos. y observar bajo luz visible y luz UV a 365 nm.
Cntenos de aceptacin: Bajo luz visible, la Solucin
muestra presenta dos bandas marrones debidas al eleu-
tersido E y eleutersido B a valores Rf de aproximada-
mente 0,34 y 0,45, que corresponden en color y valor
R1 a la~ bandas presentes en la Solucin estndar A y la
SoluC1on estandar B, respectivamente. La Solucin mues-
tra tambin presenta dos bandas marrones adicionales
cerca de la zona de aplicacin, que corresponden en
color y valor R1 a las bandas presentes en la Solucin
estndar C. Se pueden observar otras bandas en los cro-
matogramas de la Solucin muestra y Solucin estndar
C. Bajo luz UV, la Solucin muestra presenta una banda
marrn debida a eleutersido E que corresponde en
color y valor Rf a la banda presente en la Solucin estn-
dar A.
B. HPLC: El cromatograma de la Solucin muestra obte-
nida en la prueba de Contenido de Eleutersidos B y E
presenta un pico a un tiempo de retencin que corres-
p~nde a) de eleutersido B en el cromatograma de Solu-
C1on estandar By un pico a un tiempo de retencin que
corresponde al de eleutersido E en el cromatograma de
Solucin estndar A.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ELEUTERSIDOS 8 Y E
Disolvente: Metanol y agua (1 :1)
Solucin A: Acetonitrilo y agua (5:95)
Solucin B: Acetonitrilo y agua (60:40)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
)upicmcntos Dietticos/ E!euterococo 6431
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (~;o}
--
o
-- - - -- -
07
, 3
5 97 3
30 60 40
31 5 95
45 5 95
45 1 97 3
60 97 3
Solucin estndar A: O, 1 mg/ml de ER Eleutersido E
USP en metanol. Transferir 2,0 ml a un matraz volum-
trico de 5 ml y diluir con Disolvente a volumen.
Solucin estndar B: O, 1 mg/ml de ER Eleutersido B
USP en metanol. Transferir 2,0 ml a un matraz volum-
trico de 5 ml y diluir con Disolvente a volumen.
Solucin estndar C: 5,0 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP en Disolvente. Someter a ul-
trasonido durante 30 minutos, enfriar a temperatura
ambiente, decantar y pasar a travs de un filtro de nai-
lon con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 5,0 g
de El~uterococo, reducido a polvo fino y pesado con
exactitud, a un matraz con fondo redondo equipado
con un c~mdens_ador. Agregar 50 ml de Disolvente y ca-
lentar bajo reflujo durante 30 minutos. Filtrar el sobre-
nadante a travs de algodn en un matraz volumtrico
de 100 ml. Transferir el algodn al matraz de fondo
redondo y r~petir la extraccin dos veces, usando
22 ml de Disolvente para cada extraccin. Filtrar a
duo y el algodn con Disolvente, enfriar a temperatura
ambiente, diluir con Disolvente a volumen y mezclar.
Antes de inyectar, pasar a travs de un filtro de nailon
con un tamao de poro de 0,45 m o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 4,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar By Solucin estndar e
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar C es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0% de-
terminado a partir del pico de eleutersido Ben' in-
yecciones repetidas, Solucin estndar B.
Analisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B So-
lucin estndar C y Solucin muestra '
Identificar los picos de eleutersido B y eleutersido E
en la Solucin muestra por comparacin con los croma-
togramas de la Solucin estndar By la Solucin estn-
dar A, respectivamente, y medir las respuestas de los
picos.
Calcular por separado los porcentajes de eleutersido B
y eleutersido E en la porcin de Eleuterococo
tomada:
Resultado = (ru! rs) x Cs x ( V/W) x l 00
ru ~ respuesta de! pico de! analito pertinente de !a
Solucin muestra
r, = respuesta del pico de eleutersido E o
eleutersido B de la Solucin estndar A o de
la Solucin estndar B, respectivamente
64 32 Eleuterococo / )11rilnrwntos Dietticos
r, ~ concentracin de clcutcrsido E o cleutersido
B en la Soluoon estandar A o de la Solucin
estandar 8, respectivamente (mg/mL)
V = volumen de la 'ioluoon muestra (mL)
W = fWSO dP fieuterococo lOflldUU fJdrd reparar la
. . Solucin mu~stra (mg)
Cnteno~ de aceptacion:, Agregar los porcentajes de
eleuteros1do B y eleuterosido E: no menos de 0,08%
con respecto a la sustancia seca.
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS, Mtodo)// (231):. No ms de 20 ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos .
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismo~ aerobios no excede de 1 os ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
lev?duras no excede de 1 0 3 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
ple cor; los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: El riz~ma es nudoso y tiene forma ciln-
drica irregular y un diametro de 15-40 mm. El duramen
es de color marrn claro y la albura conectora es de
color amarillo plido. La corteza tiene aproximada-
n:iente 2 mm de espesor y est firmemente adherida al
xil,ema. La superficie es de color marrn grisceo o ma-
rron negr~zco, gruesa y con surcos y pliegues longitudi-
nales. El rizoma fracturado es grueso y fibroso, en parti-
cular dentro del xilema. La superficie fracturada de la
co,rteza presenta fibras cortas y delgadas. Numerosas
r?1ces nacen de la parte inferior del rizoma. Estas races
tienen de 35-150 mr;i de longitud, son cilndricas y nu-
dosas y ~1enen ~n d1ametro de 3-15 mm. La superficie
de las ra1ces vana de color marrn grisceo a marrn
neg.ruzco, es ms lisa que el rizoma y tiene rayas longi-
tudinal.es. u.na corteza delgada de 0,5 mm de espesor
s.e adhiere f1;memente al xilema de color amarillo p-
lido. Una ra1z fracturada .es escasamente fibrosa y pre-
senta un color gris amarillento al descamar la fina
epidermis.
Histologa: Las races tienen de cinco a siete hileras de
clulas suberosas marrones. Aparecen grupos de cuatro
o cinco e.males secretores con contenido marrn y no
tienen mas de 20 m de dimetro. Se presentan fibras
del floema con paredes gruesas lignificadas individual-
mente o en pequeos grupos; se concentran cristales
d~ oxalato de calcio en el parnquima floemtico. Las
celul~s parenquimti~as rodean a las clulas secretoras y
las, celulas de los radios medulares contienen pequeos
granulos de almidn. El xilema presenta vasos con en-
grosamientos reticulares y puntuaciones. El rizoma es
similar a las races excepto en sus canales secretores
mayores, de hasta 25 m de dimetro, y la presencia
de una medula con clulas parenquimticas que contie-
,nen grnulos de almidn.
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 1 05"
hasta peso constante: pierde no ms de 14,0% de su
peso .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 8,0%
ARTCULOS DE O.RIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Agua
Mtodo 2 (561 >: No menos de 4 0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, M~teria Orgnica Extraa
(561): No ms de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
USP 38
ET1gunADO: la Ptirp1eta indica el nombre cientfico en
lat1n y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta contenidas en PI artrnln
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Eleuterosido B USP
j.i-D-Glucopiransido, 4-(3-hidroxi- l -propenil)-2,6-
d1metox1fenilo.
C11H24o 372,37
ER Eleutersido E USP
j.i-D-Gl~copiransi~o, (te~rahidro-1 H,3H-furo(3,4-c)furan-
l ,4-d1il)b1s(2,6-d1metox1-4, 1-fenilen)bis-.
C14H461s 742,70
ER Extracto en Polvo de Eleuterococo USP
Eleuterococo en Polvo
DEFINICIN
El Eleuterococo en Polvo es Eleuterococo reducido a polvo o
a polvo muy fino. Contiene no menos de 0,08% de la
suma de eleutersido B y eleutersido E, calculado con
respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar A: 1 mg/mL de ER Eleutersido E
USP en metano!
Solucin estndar B: 1 mg/mL de ER Eleutersido B
USP en metano!
Solucin estndar C: 0, 1 g de ER Extracto en Polvo de
Eleuterococo USP en 5 mL de etanol en agua al 50%.
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
Eleuterococo en Polvo a un tubo de centrfuga, agregar
.5 mL de etanol en agua al 50% y mezclar bien. Some-
ter a ultraso.r;1do durante 1 O minutos. Centrifugar o fil-
trar la soluc1on y usar el sobrenadante o el filtrado.
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicacin: 1 O L, en bandas
Fase mvil: Cloroformo, metano! y agua (35:15:2)
Solucin reveladora: Colocar 18 mL de metano! en un
matraz de vidrio y enfriar en un bao de agua, hielo y
sal o en un congelador. Agregar 2 mL de cido sul-
frico, len.ta y cuidadosamente, al metano! helado y
mezclar bien. Deiar que la mezcla se ajuste a la tempe-
ratura ambiente.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B So-
lucin estndar C y Solucin muestra '
Antes de desarrollar el cromatograma, saturar la c-
mara durante 20 minutos con Fase mvil. Registrar la
temperatura y la humedad en el laboratorio. Si la hu-
medad relativa excede de 50%, acondicionar la placa
a una humedad relativa de aproximadamente 30%
usando un d.ispositivo adecuado. Desarrollar la plac'a
en un recorrido de 6 cm, secar y rociar con Solucin
reveladora. Calentar la placa a 100 durante 5 minu-
tos y observar bajo luz visible y luz UV a 365 nm.
Criterios de aceptacin: Bajo luz visible, la Solucin
muestra presenta dos bandas marrones debidas a eleu-
' tersido E y eleutersido B a valores R1 de aproximada-
mente 0,34 y 0,45, que corresponden en color y valor
R1 a la? bandas presentes en la Solucin estndar A y la
Soluoon estandar B, respectivamente. La Solucin mues-
tra tambin presenta dos bandas adicionales de color
marrn cerca de la zona de aplicacin, que correspon-
den en color y valor R, a las bandas presentes en la
Solucin estndar C. Se pueden observar otras bandas
en los cromatogramas de la Solucin muestra y Solucin
USP 38
estndar C. Bajo luz UV, !a Solucin mue~tm presenta
una banda marrn debida a eleutersido E que corres-
ponde en color y valor Rf a la banda presente en la
Soiucin estndar A.
B. HPLC: FI cromJtogrJmJ de la Solucin muestra obte-
nido en la prueba de Contenido de Eleutersidos B y E
presenta un pico a un tiempo de retencin que corres-
ponde al de eleutersido B en el cromatograma de la
Solucin estndar B y un pico a un tiempo de retencin
que corresponde al de eleutersido E en el cromato-
grama de la Solucin estndar A.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ELEUTERSIDOS B Y E
Disolvente: Metano! y agua (1 :1)
Solucin A: Acetonitrilo y agua (5:95)
Solucin B: Acetonitrilo y agua (60:40)
Fase mvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) (%) (%)
o 97 3 W
-- 5 97 3 preparar la Solucin muestra (mg)
30 60 40
31 5 95
45 5 95
45 1 97 3 CONTAMINANTES
60 97 3 MET,ALES PESADOS, Mtodo,fll (231): No ms de 20 ppm
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Eleutersido E
USP en metano!. Transferir 2,0 mL a un matraz volum-
trico de 5 mL y diluir con Disolvente a volumen.
Solucin estndar B: O, 1 mg/mL de ER Eleutersido B
USP en metano!. Transferir 2,0 mL a un matraz volum-
trico de 5 mL y diluir con Disolvente a volumen.
Solucin estndar C: 5,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP en Disolvente. Someter a ul-
trasonido durante 30 minutos, enfriar a temperatura
ambiente, decantar y pasar a travs de un filtro de nai-
lon con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir 5,0 g de Eleuterococo en
Polvo, pesados con exactitud, a un matraz de fondo
redondo equipado con un condensador. Agregar 50 mL
de Disolvente y calentar bajo reflujo durante 30 minu-
tos. Filtrar el sobrenadante a travs de algodn en un
matraz volumtrico de 100 mL. Transferir el al9odn al
matraz de fondo redondo y repetir la extraccion dos
veces, usando 22 mL de Disolvente para cada extrac-
cin. Filtrar a travs de algodn al matraz volumtrico,
lavar el residuo y el algodn con Disolvente, enfriar a
temperatura ambiente, diluir con Disolvente a volumen
y mezclar. Antes de inyectar, pasar a travs de un filtro
de nailon con un tamao de poro de 0,45 m o me-
nor, desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 4,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar B y Solucin estndar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar C es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de eleutersido B en in-
yecciones repetidas, Solucin estndar B.
Suplementos Dietticos / Eleuterococo 64 3 3
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Identificar los picos de eieutersido B y clcutcrsido E
en la Solucin muestra por comparacin con los croma-
togramas de la Solucin estandar B y la Soluon estan-
dar A, respectivamente, y medir las respuestas de los
picos.
Calcular por separado los porcentajes de eleutersido B
y eleutersido E en la porcin de Eleuterococo en
Polvo tomada:
Resultado= (ru/rs) X e X (V/W) X 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = respuesta del pico de eleutersido E o
eleutersido B de la Solucin estndar A o de
la Solucin estndar B, respectivamente
Cs = concentracin de eleutersido E o eleutersido
B en la Solucin estndar A o en la Solucin
estndar B, respectivamente (mg/mL)
V = volumen de la Solucin muestra (mL)
= peso de Eleuterococo en Polvo tomado para
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de eleu-
tersido B y eleutersido E: no menos de 0,08% con
respecto a la materia seca.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos .
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 Q3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: El polvo es de color marrn
con un leve olor aromtico y un ligero sabor acre persis-
tente. Presenta grupos de canales secretores con conte-
nido de color marrn rodeados de clulas parenquimti-
cas que contienen cristales agrupados de oxalato de
calcio. Las clulas parenquimticas presentan pequeos
grnulos de almidn, fibras lignificadas de paredes grue-
sas y fragmentos de vasos reticulados y punteados. Se
torna de color amarillo brillante cuando se monta en una
solucin de hidrxido de sodio.
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 1 05
hasta peso constante: pierde no ms de 14,0% de su
pes,o. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No ms de 8,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Eleutersido B USP
fl-o-Glucopiransido, 4-(3-hidroxi-1-propenil)-2,6-
dimetoxifenilo.
C11H249 372,37
6434 Eleuterornco / '\uplementos Dietticos
ER Eleutersido E USP
J:!-D-Glucopiransido, (tctrahidro-1 H, 3H-furo(3,4-c)fur an-
1,4-dii l)bis(2,6-dimetoxi-4, 1-fcnilen)bis-.
\"H'"'" 742,70
ER Extracto en Polvo de Eleuterococo lJ<iP
Extracto en Polvo de Eleuterococo
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Eleuterococo se prep_ara a partir d~
Eleuterococo usando mezclas hidroalcohol1cas. La relac1on
entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto en
Polvo est entre 1 3: 1 y 25: 1 . Contiene no menos de
0,8% de eleutersidos B y E, calculado c~m respecto a la
materia anhidra. Puede contener sustancias agregadas.
IDENTIFICACIN , 45
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar A: 1 mg/ml de ER Eleutersido E
USP en metano!
Solucin estndar B: 1 mg/ml de ER Eleutersido B
USP en metano!
Solucin estndar C: O, 1 g de ER Extracto en Polvo de
Eleuterococo USP en 5 ml de etanol en agua al 50%.
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: O, 1 g de Extracto en Polvo en 5 ml
de etanol en agua al 50%. Someter a ultrasonido du-
rante 1 O minutos, centrifugar y usar el sobr~nadante.
Adsorbente: Gel de slice para cromatograf1a con un
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicacin: 1 O .L, en bandas
Fase mvil: Cloroformo, metano! y agua (35:15:2)
Solucin reveladora: Colocar 18 ml de metano! en un
matraz de vidrio y enfriar en un bao de agua, hielo y
sal o en un congelador. Agregar 2 ml de cido sul-
frico, lenta y cuidadosamente, al met?nol helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se auste a la tempe-
ratura ambiente.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Antes de desarrollar el cromatograma, saturar la c-
mara durante 20 minutos con Fase mvil. Registrar la
temperatura y la humedad en el labor~t~xio. Si la hu-
medad relativa excede de 50%, acond1c1onar la placa
a una humedad relativa de aproximadamente 30%,
usando un dispositivo adecuado. De~arrollar la pl~~a
en un recorrido de 6 cm, secar y rooar con Solu~/On
reveladora. Calentar la placa a 1 00 durante 5 minu-
tos y observar bajo luz visible y luz UV a 365 nri;.
Criterios de aceptacin: Bajo luz visible, la Soluoon
muestra presenta dos bandas de color marrn debidas a
eleutersido E y eleutersido B a valores Rr de aproxi-
madamente O 34 y O 45 que corresponden en color y
valor Rr a las bandas 1pre~entes en la Solucin estndar A
y la Solucin estndar 8, respectivamente._ ~a Soluoon
muestra tambin presenta dos bandas ad.1~1onales de
color marrn cerca de la zona de aplicac1on, que corres-
ponden en color y valor R1 a las bandas presentes en la
Solucin estndar C. Se pueden ob~ervar otras bandas,
en los cromatogramas de la Solucion muestra y Soluoon
estndar C. Bajo luz UV, la Solucin muestra P,r~senta
una banda de color marrn debida a eleuteros1do E que
corresponde en color y valor R1 a la banda presente en
Ja Solucin estndar A.
B. HPLC: El cromatograma de la Solucin muestra obte-
nido en la prueba de Contenido de Eleutecsidos 8 y E
presenta un pico a un tiempo de retenc1on que corres-
ponde al de eleutersido B en el cromatograma de la
USP 38
Solucin 1tndar B y un pico a un tiempo de retencin
que Ll responde al de eleutersido E en el cromato-
grama de la Solucin estndar A.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ELEUTERSIDOS 8 Y E
Disolvente: Metano! y agua (1 : 1)
Solucin A: Acetonitrilo y agua (5:95)
Solucin B: Acetonitrilo y agua (60:40)
Fase mvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin 8
<min) (O/o) {O/o)
o 97 3
r----------
5 97 3
30 60 40
31 5 95
5 95
97 3
45 1
60 97 3
Solucin estndar A: O, 1 mg/ml de ER Eleutersido E,
USP en metano!. Transferir 2,0 ml a un matraz volume-
trico de 5 ml y diluir con Disolvente a volumen., .
Solucin estndar B: O, 1 mg/ml de ER Eleuteros1do B,
USP en metano!. Transferir 2,0 ml a un matraz volume-
trico de 5 ml y diluir con Disolvente a volumen.
Solucin estndar C: 5,0 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP en Disolvente. Someter a ul-
trasonido durante 30 minutos, enfriar a temperatura
ambiente y decantar. Antes de inyectar, pasar a travs
de un filtro de nailon con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir 500 mg de Extracto en
Polvo a un matraz volumtrico de 100 ml, agregar
80 ml de Disolvente y someter a ult~asonid<;> ~urante ~O
minutos. Enfriar a temperatura ambiente, diluir con Di-
solvente a volumen y mezclar. Antes de inyectar, pasar a
travs de un filtro de nailon con un tamano de poro de
0,45 m o menor, desechando los primeros ml del
filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 4,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema , ., ,
Muestras: Solucin estandar 8 y Soluoon estandar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar Ces similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Eleuterococo USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de eleutersido B en in-
yecciones repetidas, Solucin estndar 8
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8, So-
lucin estndar C y Solucin mi.:estra , .
Identificar los picos de eleuteros1do B X eleuteros1do E
en Ja Solucin muestra por comparac1on con los .~ro
matogramas de la Solucin estndar. 8 y la Soluoon
estndar A, respectivamente, y medir las respuestas
de los picos.
Calcular por separado los porc~ntajes de eleutersido
R v eleutersido E en la porc1on de Extracto en Polvo
tomada:
Resultado= (ru!r1) x (C1/C11) x 100
usr 38 Suplementos Dietticos/ Equincea 6435

f,, = P~r11P~t; dPI rico dPI ;in;ilito rertinente de la menos de 0,075% de isobutilamidas del cido dodecate-
Soiutin muestra traenoico (C1,,H2,NO) con respecto a la materia seca.
r, respuesta del pico de eleutersido E o
=
eleule1sidu B de la SuluLi11 t:stndw A o de IDENTIFICACIN
la Solucin estndar B, respectivamente A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
C = concentracin de eleutersido E o eleutersido Presencia de equinacsido y cido dicafeoilqunico
B en la Solucin estndar A o en la Solucin (cinarin(a))
estndar B, respectivamente (mg/mL) Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Equinacsido
Cu = concentracin de Extracto en Polvo en la USP y 0,2 mg/ml de cido dicafeoilqunico (cinarina)
Solucin muestra (mg/mL) en metanol
Criterios de aceptacin: No menos de 0,8% con res- Solucin estndar B: 0,05 rT)g/mL de ER cido Caft-
pecto a la materia anhidra rico USP, O, 1 mg/m~ de ER Acido Clorognico USP y
0,05 mg/mL de ER Acido Chicrico USP en metanol
CONTAMINANTES Solucin estndar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Angustifolia USP en metanol. Agi-
tar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
Eliminar lo siguiente: minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Equincea Angus-
METALES PESADOS, Mtodo 11 <231 ): No ms de tifolia reducida a polvo tino a un tubo de centrfuga,
20 ppme (Oficial Ol-dic-2015) agregar 1 O ml de metanol, mezclar bien y someter a
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO <2021 ): El recuento to- ultrasonido durante 1 O minutos. Centrifugar y usar el
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g. sobrenadante.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y Sistema cromato!)rfico
levaduras no excede de 1 oi ufc/g. (Ver Cromatograf/O (621 ), Cromatografa en Capa Del-
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS <2022): Cum- gada.)
ple co~ los requisitos de las pruebas para determinar la Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
ausencia de Salmone/Ja spp. y Escherichia coli. grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m
PRUEBAS ESPECFICAS (placas para HPTLC)
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo la <921 ): No ms de Volumen de aplicacin: 5 L de Solucin estndar C
5,0% y de Solucin muestra, y 2 L de Solucin estndar A y
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales <561): de Solucin estndar B en bandas de 8 mm
No ms de 1 0,0% Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
DETERMINACIN DE ALCOHOL, Mtodo 11 <611): No ms de medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
0,5% dispositivo adecuado.
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Disolven- Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
tes Residuales y Residuos de Plaguicidas en Extractos Bot- cetona, agua y cido frmico (5:3:1 :1)
nicos (565). Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/ml de difenilbori-
REQUISITOS ADICIONALES nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- Anlisis
permeables y resistentes a la luz. Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B,
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en Solucin estndar C y Solucin muestra
latn y, a continuacin de la denominacin oficial, la Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
parte de la planta de la que se prepar el artculo. La matografa en capa delgada adecuada y secar al aire.
etiqueta tambin indica el contenido de eleutersidos el Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
disolvente de extraccin utilizado para la preparacin 'y la rada. Retirar la placa de la cmara, calentar a 100
relacin entre el material vegetal crudo inicial y el Ex- durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras est
tracto en Polvo. Cumple con los requisitos de Etiquetado tibia con Reactivo de derivatizacin, secar al aire y ob-
en ,Extractos Botnicos (565). servar bajo luz UV a 366 nm.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presenta
ER Eleutersido B USP dos bandas principales de color azul, una en el tercio
f:i-D-Glucopiransido, 4-(3-hidroxi- l -propenil)-2,6- inferior del cromatograma debida a equinacsido y la
dimetoxifenilo. otra banda en la parte media del cromatograma de-
Ci1H249 372,37 bida a cido dicafeoilqunico (cinarina). La Solucin es-
ER Eleutersido E USP tndar B presenta dos bandas principales de color azul
/3-D-Glucopiransido, (tetrahidro-1 H,3H-furo(3,4-c)furan- aproximadamente en la parte media del cromato-
l ,4-diil)bis(2,6-dimetoxi-4, 1-fenilen)bis-. 9rama debidas a cido caftrico (valor Rr inferior) y
Ci4H4601s 742,70 acido clorognico (valor Rr superior) que estn clara-
ER Extracto en Polvo de Eleuterococo USP mente separadas, y una banda azul de cido chicrico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
azul en el tercio inferior del cromatograma a un valor
Equincea Angustifolia Rr correspondiente al de la banda de equinacsido en
el cromatograrna Je la Solucin estndar A y de la So-
lucin estndar C (ausente en Equincea purprea). El
DEFINICIN
cromatograma de la Solucin muestra presenta una
La Equincea Angustifolia est formada por las races y el banda prominente de color azul verdoso en la parte
rizoma secos de Echinacea angustifolia DC. (Fam. Astera- media del cromatograma a un valor Rr correspon-
ceae). Se cosecha en el otoo despus de 1 ao o ms de diente al de la banda de cido dicafeoilqunico (cina-
crecimiento. Contiene no menos de 0,5% de fenoles tota- rina) en el cromatograma de la Solucin estndar A y
les, calculado con respecto a la materia seca como la de la Solucin estndar C (ausente en Equincea plida
suma de equinacsido (C3sH4 6 20), cido dicafeoilqunico y Equincea purprea). El cromatograma de la Solucin
(C1sH2412) y cido clorognico (C,6Hrn0q). Contiene no muestra no presenta, o presenta bandas de color azul
muy tenues, a un valor Rf correspondiente a las ban-
6436 Equincea I ~urlPrnentos Dietticos
das de cido caftrico y cido chicrico en la Solucin
P'tandar? (a difercnciJ de Equincea plida y Equin-
cea purpurea). El cromatograma de la Solucin muestra
~~~~s~~ ~~~j~~~i~~~r~o~~srl~~s~a1~~:~~~~~ec\c~JoeJ~ 1 -
rug~nico aun valor R1 correspondiente al de cido clo-
rogenico en 19 Solucin estndar B.
B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER tJ-Sitosterol
USP en metano!
Solucin estndar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de_ Equincea Angustifolia USP en diclorome-
tano. Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido du-
rant~ _5 minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Soluc1on mu_estra: Transferir 1 g de Equincea Angus-
tifol1a reducida a polvo fino a un tubo de centrfuga
agregar 1 O mL d_e diclorometano, mezclar bien y so~
meter a ultrasonido durante 1 O minutos. Centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a \621), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsor~ente: Ge.1 de slice para cromatografa con un
tamano promedio de partcula de 5 m (placas para
HPTLC)
Volumen _de aplicacin: 5 L de Solucin estndar By
de Solucion muestra, y 2 L de Solucin estndar A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado. ' 25
Fase mvil: Una mezcla de tolueno acetato de etilo
ciclohexano y cido frmico (8: 2: { 0,3)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 1 00 mL y enfriarlo en
un bao de agua con hielo y sal o en un congelador.
Ag_r~gar lentamente y con cuidado 1 O mL de cido
acet1co y 5 mL de cido sulfrico al metano! helado y
mezclar bien. Dear que la mezcla se enfre a tempe-
ratura ambiente, luego agregar O 5 mL de p-
anisaldehdo ' Solucin estndar C: 80 .g/ml de ER Equinacsido
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las, Muestras en bandas a una placa para cro-
matograf1a en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
rad_a. Retirar la placa de la cmara, secar al aire, deri-
vat1zar con Reactivo de derivatizacin, calentar a 100
durante 3-5 minutos, dejar que se enfre y observar
bajo luz visible.
Aptitud del sistema: La banda de tJ-sitosterol del cro-
matograma de.la Solucin estndar By las dos bandas
por debajo estan claramente separadas entre s. Estas
dos band_as, en valor R, decreciente, incluyen una
banda pr1nc1pal de color violeta azulado y una banda
amarilla.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
de color violeta azulado en el tercio inferior del croma-
togra_rna (mucho menos prominente en Equincea
purpurea y ausente en Equincea plida). Esta banda
de color violeta azulado est entre dos bandas: una
banda menos prominente de color violeta azulado a
un _valor R, superior correspondiente al de la banda de
tJ-s1tosterol en los cromatogramas de la Solucin estn-
~ar A y de la Solucion estndar B, y una banda caracte-
nst1ca de color amarillo a un valor Rr inferior (ausente
en Equincea purprcJ y Equincea plida). La banda
de color amarillo se torna de color rosado rojizo al
calentar la placa a 100 durante ms de 1 O minutos. El
cromatograma de la Solucin muestra presenta una
banda menor de color violeta rosado aproximada-
USP 38
mente en la parte media del cromatogr;ma (mucho
mas prominentf' en Equincea purprea ), una banda
menor de color violeta rosado a aoroximarlamente rlos
tercio~ del cr_o_m~tograma (mucho ms prominente en
rqumiKea pal1dJ) '/ una banda ancha violeta rmada
cercana al frente de la fase mvil.
C._. El tiempo de retencin del pico principal de la So/u-
uon muestra corresponde al del pico de equinacsido de
la Soluuon estandar A y de la Solucin estndar B; y el
tiempo de reren.~in del pico del cido 1, 3-dicafeoilqu-
nlC() de la Solucion muestra corresponde al de la Solucin
estandar A, todos los picos segn se obtienen en la
prueba de Contenido de Fenoles Totales.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE fENOLES TOTALES
Solucin A: cido fosfrico (O, 1 en 100) en agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%)
------- ---~~ ----- 90 10
3 90 10
16 78 22
17 60 40
20 60 40
20 5 90 10
9Q_ 10
' Disolvente: Alcohol y agua (7:3)
Solucin estndar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
Equincea Angustifolia USP en Disolvente, agitando y ca-
lentando en un bao de agua. Diluir con Disolvente
hasta obtener una solucin con una concentracin co-
nocida de 1 mg/ml. Pasar a travs de un filtro de mem-
bran~, con u,n tamao de poro de 0,45 m o menor.
Soluoon estandar B: 40 ~tg/mL de ER Acido Clorog-
nico USP en Disolvente
USP en Disolvente
Solucin '!1uestra: T~ansferir ap~oximadamente 125 mg
de Equinacea Angust1fol1a reducidos a polvo fino (capaz
de pasar a travs de un tamiz de malla 40), pesados
con exactitud, a un matraz de fondo redondo equipado
con un condensador. Agregar 25,0 mL de Disolvente y
calentar bajo reflujo, agitando mecnicamente durante
15 minutos. Centrifugar o pasar a travs de u~ filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 pm
Temperatura de la columna: 35'
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
Extract?. en Polvo de Equincea Angustifolia USP.
Resoluc1on: No menos de 1 O entre el ismero del
~ido 1,3-dicafeoil~unico y ~quinacsido, Solucin es-
tandar A. [NOTA-E1 piLu Je equinacsido puede re-
solverse en dos componentes.]
Factor de _capacidad (k'): No menos de 3,0 a partir
de So/uoon cstandar C
USP 38
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
equindcsido, Solucin estndar C
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
~~itfc~~~s e~~~d~~r~csido en inyecciones c:pctidas,
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Identificar los analitos pertinentes en el cromatograma
de la Solucin muestra por comparacin con el cro-
matograma de la Solucin estndar A. Medir las reas
de los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de cido clorog-
nico (C16Hrn09), cidos dicafeoilqunicos (C2sH24012) y
equinacsido (C1sH4r.20) en la porcin de Equincea
Angustifolia tomada:
Resultado= (r11/r1) x C1 x (V/W) x Fx 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = respuesta del pico de cido clorognico o de
ambos componentes de equinacsido de la
Solucin estndar correspondiente
Cs = concentracin de cido clorognico o
equinacsido en la Solucin estndar
correspondiente (m9/mL)
V = volumen de la Solucion muestra (mL)
w = peso de Equincea Angustifolia tomada para
preparar la Solucin muestra (mg)
F =factor de respuesta y es igual a 0,729 para
cidos dicafeoilqu1nicos, con respecto a cido
clorognico, 1,00 para cido clorognico y
1,00 para componentes de equinacsido
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porcin
de Equincea Angustifolia tomada sumando los
porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptacin: No menos de 0,5% de fenoles
totales con respecto a la materia, seca
CONTENIDO DE ISOBUTILAMIDAS DEL ACIDO
DODECATETRAENOICO
Fase mvil: Acetonitrilo y agua (55:45)
Solucin estndar A: Disolver, sometiendo a ultraso-
nido, ER Extracto en Polvo de Equincea Angustifolia
USP en metano!, agitando durante 1 O minutos, y diluir
con metanol hasta obtener una solucin con una con-
centracin de 5 mg/mL. Pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
S9lucin estndar B: 1 O g/mL de ER lsobutilamida del
Acido 2f,4f-Hexadienoico USP en metanol
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Equincea Angustifolia, pesados con exactitud, redu-
cidos a polvo fino (capaz de pasar a travs de un tamiz
de malla 40) a un matraz de fondo redondo. Agregar
80 mL de metanol y someter a reflujo durante 30 minu-
tos. Enfriar a temperatura ambiente y filtrar en un ma-
traz volumtrico de 1 00 mL, usando pequeas porcio-
nes de metanol para enjuagar el matraz y el filtro. Diluir
con metano! a volumen. Pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 ~im o
menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al cromatograma
Sup!ementrn OietPtirm .1 FcuincPn 64 '3 7
de referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equin5ccaAngustifolia USP.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilJrnidJs de! c:do dodecJtet;aenoico, Solucin es-
tndar A
Factor de asimetna: No mas de 2,0 para el pico de
isobutilamida del cido 2f,4E-hexadienoico, Solucin
estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
el pico de isobutilamida del cido 2E,4f-hexadienoico
en inyecciones repetidas, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Identificar los picos debidos a isobutilamida del cido
dodeca-2E,4E,8Z, 1 OE-tetraenoico e isobutilamida del
cido dodeca-2E,4E,8Z, 1 OZ-tetraenoico en el croma-
tograma de la Solucin muestra en comparacin con
el cromatograma de la Solucin estndar A. Medir las
reas de los picos pertinentes.
Calcular el porcentaje de isobutilamidas del cido do-
decatetraenoico en la porcin de Equincea Angusti-
folia tomada:
Resultado= (ru!rs) x Cs x (V/W) x Fx 100
ru = suma de las respuestas de los picos de los
analitos pertinentes de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de isobutilamida del cido
2E,4f-hexadienoico de la Solucin estrdar B
= concentracin de ER lsobutilamida del Acido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solucin
estndar B (mg/mL)
V = volumen de la Solucin muestra (mL)
w = peso de Equincea Angustifolia tomada para
preparar la Solucin muestra (mg)
F = factor de respuesta de isobutilamida del cido
2E,4f-hexadienoico, 1,353
Criterios de aceptacin: No menos de 0,075% de iso-
butilamidas del cido dodecatetraenoico (C16H2sNO)
con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: La superficie externa del rizoma es de
color marrn plido a amarillento, est coronada con
restos del tallo areo y a veces presenta anillos en la
superficie de hasta 15 mm de dimetro. Las races tam-
bin son de color marrn plido a amarillento, cilndri-
cas o ligeramente ahusadas, a veces torcidas en espiral,
longitudinalmente rugosas y profundamente surcadas,
con un dimetro de hasta 4-1 O mm y pasando imper-
ceptiblemente al rizoma. La fractura es corta, cuando se
seca, se hace resistente y flexible al quedar expuesta al
aire.
Microscpicas: Los rizomas y races en la seccin trans-
versal presentan una corteza externa delgada separada
de un amplio xilema por una lnea cambia! visible. El
sber est compuesto por varias hileras de clulas de
paredes delgadas que contienen un pigmento de color
marrn amarillento. ti rizoma tiene una pequella m-
dula circular, pequenos grupos ocasionales de fibras lig-
nificadas de paredes gruesas en el periciclo y una cor-
teza parenquimtica. El floema y el xilerna estn
6438 Equincea / Suplementos Dietticos
compuestos por bandas estrechas de tejido vascular se-
paradas or amriim rildios medulares no lignificados.
Los vasos del xilema estn lignificados, tienen un di-
metro de 25-75 pm . ror lo CJPnPr;il ron engrosamien-
tos reticulados pero ocasionalmente con engrosamien-
tos csp1ralados o anillados. Las esclereidas aparecen
solas o en pequeos grupos y su tamao y forma varan
considerablemente, pueden ser redondeadas, rectangu-
lares o alargadas y de tipo fibroso, con una longitud de
hasta 300 m y 20--40 m de ancho, con espacios
intercelulares que forman canales esquizgenos de oleo-
rresina de 80-150 m de dimetro y que contienen un
depsito negro denso. Los canales solamente estn pre-
sentes fuera del cilindro central (a diferencia de Equin-
cea Plida, donde estn presentes dentro y fuera del
cilindro central). Masas esferocristalinas de inulina se
encuentran presentes en los tejidos parenquimticos.
Las fibras lignificadas, con una longitud de 300-800
m, se encuentran presentes en grupos dispersos y, por
lo general, estn rodeadas de fitomelanina (a diferencia
de lo que ocurre en las fibras de Equincea Plida, que
suelen aparecer en forma individual en la periferia de la
corteza y tienen una longitud de 1 00-300 m y en las
ql)e a menudo est aus~nte la fitomelanina).
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(~61): No ms de 3,0%
PERDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar una muestra a 105u durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 10,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 7,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la ;ilanta contenidas en el artculo.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~cido Caftrico USP
ER Acido Chicrico USP
ER cido Clorognico USP
ER Extracto en Polvo de Equincea Angustifolia USP
ER Equinacsido USP,
ER lsobutilamida del Acido 2f,4f-Hexadienoico USP
ER /3-Sitosterol USP
Equincea Angustifolia en Polvo
DEFINICIN
La Equincea Angustifolia en Polvo est formada por las ra-
ces y el rizoma secos de Echinacea angustifolia DC. (Fam.
Asteraceae). Se cosecha en el otoo despus de un ao o
ms de crecimiento y se reduce a polvo. Contiene no me-
nos de 0,5% de fenoles totales, calculado con respecto a
la materia seca como la suma de equinacsido
(CisH46020), cido dicafeoilqunico (C21H2411) y cido clo-
rognico (C16HrnOo). Contiene no menos de 0,075% de
isobutilamidas del cido dodecatetraenoico (C 16H2sNO)
con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de equinacsido y cido dicafeoilqunico
(cinarin(a))
Solucin estndar A: Una me7Cla de 0,2 mg/mL de
ER Equinacsido USP y 0,2 mg/mL de cido dicafeoil-
qunico (cinarina) en metanol
usr 38
Solucin estndar B: 0,05 rT)g/mL de ER cido Caft-
rico USP, O, 1 mg/m~ de ER Aciuo Clorognico USP y
0,05 mg/ml de ER Acido Chicrico LJSP en metanol
Solucin estndar C: 20 rr19/r11L de ER Exlrciclu er1
Polvo rle Fquincea Anqustifolia USP en metano!. Agi-
tar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Equincea Angus-
tifolia en Polvo a un tubo de centrfuga, agregar
1 O mL de metanol, mezclar bien y someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos. Centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 pl de Solucin estndar C
y de Solucin muestra, y 2 L de Solucin estndar A y
de Solucin estndar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado .
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y cido frmico (5:3:1 :1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B,
Solucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
rada. Retirar la placa de la cmara, calentar a 100
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras est
tibia con Reactivo de dervatzacin, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presenta
dos bandas principales de color azul, una en el tercio
inferior del cromatograma debida a equinacsido, y la
otra banda en la parte media del cromatograma de-
bida a cido dicafeoilqunico (cinarina). La Solucin es-
tndar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
9rama debidas a cido caftrico (valor RF inferior) y
acido clorognico (valor Rr superior) claramente sepa-
radas, y una banda de color azul para cido chicrico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
de color azul en el tercio inferior del cromatograma a
un valor Rr correspondiente al de la banda de equina-
csido en el cromatograma de la Solucin estndar A y
de la Solucin estndar C (ausente en Equincea pur-
prea). El cromatograma de la Solucin muestra pre-
senta una banda prominente de color azul verdoso en
la parte media del cromatograma a un valor Rr corres-
pondiente al de la banda de cido dicafeoilqunico (ci-
narina) en el cromatograma de la Solucin estndar A y
de la Solucin estndar C (ausente en Equincea plida
y Equincea purprea). El cromatograma de la Solucin
muestra no presenta, o presenta bandas de color azul
muy tenues, a un valor R, correspondiente a las ban-
das de cido caftrico y cido chicrico en la Solucin
estndar B (a diferencia de Equincea plida y Equin-
cea purprea). El cromatograma de la Solucin muestra
presenta bandas menores entre las posiciones de equi-
nacsido y cinarina. Una de estas se debe a cido clo-
rognico a un valo1 R, conbondiente al de cido clo-
rognico en la Solucin estndar B.
USP 18 Suplementos DietPtirns I Equincea 6439

B. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA C.., El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
Presencia de alquilamidas Clon muestra corresponde al del pico de equinacsido de
Sol_ucin estnd~r A: 0,2 mg/mL de ER '3-Sitosterol la SoluC1on estanda,r A y la Solucin estndar B, y el
U'.:>P en mel<rno1 licrnpo de rctcncion de! pico de c!do 1, 3-rlicaf Pniln11-
Solucin estndar B: 1 00 mg/mL de ER Extracto en nico de la 'iolucin muestra corresponde al de la Solucin
Polvo de Equincea Angustifolia USP en diclorome- estandar A, todos los picos segn se obtienen en la
tano. Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido du- prueba de Contenido de Fenoles Totales.
rant~ ,5 minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Soluc1on muestra: Transferir 1 g de Equincea Angus- COMPOSICIN
tifol1a en Po.lvo a un tubo de centrfuga, agregar CONTENIDO DE fENOLES TOTALES
1 O mL. de d1clorometano, mezclar bien y someter a ul- Solucin A: cido fosfrico (O, 1 en 1 00) en agua
trasonido durante 1 O minutos. Centrifugar y usar el Solucin B: Acetonitrilo
sobrenadante. Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del- Tabla 1
gada.)
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (O/o)
tamao promedio de part1cula de 5 pm (placas para
HPTLC) o 90 10
Volumen .~e aplicacin: 5 pL de Solucin estndar By 3 90 10
de SoluC1on muestra, y 2 pL de Solucin estndar A en 16 78 22
bandas de 8 mm 17 60 40 -
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu- 20 60 40
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado. ' 20 5 90 10
Fase mvil: Una mezcla de tolueno acetato de etilo 25 90 10
ciclohexano y cido frmico (8: 2: { 0,3) '
Distancia de desarrollo: 6 cm Disolvente: Alcohol y agua (7:3)
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 mL de meta- Solucin estndar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
nol en un frasco de vidrio de 1 00 mL y enfriarlo en Equincea Angustif9lia USP en Disolvente, agitando y ca-
un bao de agua con hielo y sal o en un congelador. lentando en un bano de agua. Diluir con Disolvente
Ag;egar lentamente y con cuidado 1 O mL de cido hasta obtener una solucin con una concentracin co-
acet1co y 5 mL de cido sulfrico al metanol helado y nocida de 1 mg/mL. Pasar a travs de un filtro de mem-
bran~, con u,n tamao de poro de 0,45 m o menor.
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfre a tempe-
ratura ambiente, luego agregar O 5 mL de p Soluc1on estandar B: 40 g/mL de ER Acido Clorog-
anisaldehdo. ' nico USP en Disolvente
Anlisis Solucin estndar C: 80 pg/mL de ER Equinacsido
Muestras: Solucin estndar A Solucin estndar B y USP en Disolvente
Solucin muestra ' Solucin muestra: Transferir aproximadamente 125 mg
Aplicar las, Muestras en bandas a una placa para cro- de E,quincea Angustifolia en Polvo (capaz de pasar a
matograf1a en capa delgada adecuada y secar al aire. traves de un tamiz de malla 40), pesados con exactitud
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu- a un matraz de fondo redondo equipado con un con- '
rad.a. Retirar la placa de la cmara, secar al aire, deri- dens.ador .. Agregar 25,0 .mL de Disolvente y calentar bajo
vat1zar con Reactivo de derivatizacin, calentar a 100 reflujo, agitando mecan1camente, durante 15 minutos.
durante 3-5 minutos, secar al aire y observar bajo luz Centrifugar o pasar a travs de un filtro de membrana
visible. con un tamao de r,oro de 0,45 m o menor.
Aptitud del sistema: La banda de f:3-sitosterol del cro- Sistema cromato9rafico
matograma de la Solucin estndar By las dos bandas (Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
por debajo estn claramente separadas entre s. Estas Modo: HPLC
dos band.as'. en valor Rr decreciente, incluyen una Detector: UV 330 nm
banda pnnc1pal de color violeta azulado y una banda Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
amarilla. Temperatura de la columna: 35
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda Volumen de inyeccin: 5 L
de color violeta azulado en el tercio inferior del croma- Aptitud del sistema
togra;na (mucho menos prominente en Equincea Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
purpurea y ausente en Equincea plida). Esta banda Requisitos de aptitud
de color violeta azulado est entre dos bandas: una Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
banda menos prominente de color violeta azulado a de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
un .valor R1 superior correspondiente al de la banda de de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
/3-sitosterol en los cromatogramas de la Solucin estn- Extract?, en Polvo de Equincea Angustifolia USP.
~ar A y de la Solucin estndar B, y una banda caracte-
Resoluc1on; . No menc:s de .1,0 ,er:itre los picos de is-
rist1ca de color amarillo a un valor Rr inferior (ausente mero del a.ocio l ,,3d1cafeo1lqu1nico y de equinac-
en Equincea purprea y Equincea plida). La banda s1do, SoluC1on estandar A. [NOTA-El pico de equinac-
de color amarillo se torna de color rosado rojizo al sido puede resolverse en dos componentes.]
calentar la placa a 1 ooc durante ms de 1O minutos. El Factor de capacidad (k'): No menos de 3 O Solucin
cromatograma de la Solucin muestra presenta una estndar c 1
'

banda menor de color violeta rosado aproximada- Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
m~nte en .la parte media del cromatograma (mucho
equinacsido, Solucin estndar C
mas prominente en Equincea purprea ), una banda Desviacin estn.dar ~elativa: No ms de 2,5% para
menor de color violeta rosado a aproximadamente dos los picos de equinacos1do en inyecciones repetidas
Solucin estndar C '
tercio~ del c~o.matograma (mucho ms prominente en
Equinacea pal1da) y una banda ancha violeta rosada Anlisis
cercana al frente de la fase mvil. Muestras: Solucin estndar A Solucin estndar B So-
lucin estndar C y Solucin m~estra '
6440 Equincea / Suplemrntm Dietticos
Identificar los analitos pertinentes en el cromatograma
de Id '\nurin muestra en compJrJcin con el cromd-
tograma de la Solucin estndar A. Medir las reas de
los picos f1PrtinPntP,_
Calcular por separado el porcentaje dP rido clorog-
nico (C16H1809), cidos d1cafeoilquinicos (C2sH2417) y
equinacsido (C isH4,;2(J) en la porcin de Equincea
Angustifolia en Polvo tomada:
Resultado = (ru/ rs) x Cs x (V/\!\!) x F x 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = respuesta del pico de cido clorognico o de
ambos componentes de equinacsido de la
Solucin estndar correspondiente
Cs = concentracin de cido clorognico o
equinacsido en la Solucin estndar
correspondiente (mg/mL)
V = volumen de la Solucion muestra (mL)
W = peso de Equincea Angustifolia en Polvo usado
para preparar la Solucin muestra (mg)
F = factor de respuesta: 0,729 para cidos
dicafeoilqu1nicos, con respecto a cido
clorognico, 1,00 para cido clorognico y
1,00 para componentes de equinacsido
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porcin
de Equincea Angustifolia en Polvo tomada sumando
los porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptacin: No menos de 0,5% de fenoles
totales con respecto a la materia, seca
CONTENIDO DE ISOBUTILAMIDAS DEL ACIDO
DODECATETRAENOICO
Solucin estndar A: Disolver, sometiendo a ultraso-
nido, ER Extracto en Polvo de Equincea Angustifolia
USP en metano!, agitando durante 1 O minutos, y diluir
con metanol hasta obtener una solucin con una con-
centracin de 5 mg/mL. Pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
S9lucin estndar B: 1 O g/mL de ER lsobutilamida del
Acido 2f,4f-Hexadienoico USP en metano!
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Equincea Angustifolia en Polvo (capaz de pasar a
travs de un tamiz de malla 40), pesados con exactitud,
a un matraz de fondo redondo. Agregar 80 mL de me-
tano! y someter a reflujo durante 30 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y filtrar en un matraz volum-
trico de 100 mL, usando pequeas porciones de meta-
no! para enjuagar el matraz y el filtro. Diluir con meta-
no! a volumen. Pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Fase mvil: Acetonitrilo y agua (55:45)
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 30'
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equincea Angustifolia USP.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilamidas del cido dodecatetraenoico, Solucin es-
tndar A
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
isobutilamida del cido 2f,4f-hexadienoico, Solucin
estndar B
USP 38
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
el pico de rsohutilamida del cido 2f,4f-hexadienoico
en inyecciones repetidas, Solucin estndar B
Aniisis
Muestras: 50/u1 i1!11 e.,!cmlur A, Solucin estandar By
Solucin muestra
Identificar los picos debidos a isobutilamida del cido
dodeca-2f,4f,8Z, 1 Of-tetraenoico e isobutilamida del
cido dodeca-2f,4f,8Z, 1 OZ-tetraenoico en el cromato-
grama de la Solucin muestra en comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar A. Medir las
reas de los picos pertinentes.
Calcular el porcentaje de isobutilamidas del cido dode-
catetraenoico en la porcin de Equincea Angustifolia
en Polvo tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/\1\1) x Fx 100
ru = suma de las respuestas de los picos de los
analitos pertinentes de la Solucin muestra
r.s = respuesta del pico de isobutilamida del cido
2f,4f-hexadienoico de la Solucin estrdar B
C5 = concentracin de ER lsobutilamida del Acido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solucin
estndar B (mg/mL)
V = volumen de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Equincea Angustifolia en Polvo usada
para preparar la Solucin muestra (mg)
F = factor de respuesta de isobutilamida del cido
2f,4f-hexadienoico, 1, 353
Criterios de aceptacin: No menos de 0,075% de iso-
butilamidas del cido dodecatetraenoico (C, 6H2sNO)
con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: La Equincea Angustifolia en
Polvo es un polvo de color marrn con un ligero olor
aromtico y un sabor dulce gue rpidamente se convierte
en acre dejando una sensacion de hormigueo en la len-
gua. Al microscopio, se observan las siguientes caracters-
ticas: clulas suberosas poligonales de paredes delgadas
con contenido de color marrn rojizo; vasos reticulados
lignificados; abundantes clulas petreas de formas varia-
das; fragmentos de canales de oleorresina con contenido
de color marrn rojizo y un abundante parnquima de
P,ared delgada con masas esferocristalinas de inulina.
PERDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar una muestra a 105'' durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin:_ No mas de 10,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Tato/es (561):
No ms de 7,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta de las que se obtuvo el artculo
USP 38
EST~DARES DE REFERENCIA USP <11 \
ER Acido Caftrico USP . .
ER Acido Chicrico USP
ER cido Cioroyer11co SF
ER Extracto en Polvo de Equincea Anqustifolia USP
ER Equinacsido USP
ER lsobutilamida del cido 2f,4f-Hexadienoico USP
ER /3-Sitosterol USP
Extracto en Polvo de Equincea
Angustifolia
DEFINICIN
El Extracto en. Polvo de Eq~incea Angustifolia se prepara a
partir ,de ra1ces de Equinacea Arn;;iustifolia mediante la ex-
tracc1on con mezclas h1droalcohol1cas u otros disolventes
adecuados. La relacin entre el material vegetal crudo ini-
cial y el Extracto en Polvo es de 2:1-8:1. Contiene no
menos de 4,0% y no ms de 5,0% de fenoles totales,
calculado con respecto a la materia seca como la suma de
cido clorognico. (Ci6,Hrn09), cidos dicafeoilqunicos
(C2sH2412) y eqwnacos1do (C1sH4620). Contiene no me-
nos de O, 1 % de isobutilamidas del cido dodecatetrae-
noico (C16H2sNO) con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de equinacsido y cido dicafeoilqunico
(cinarin(a))
Solucir:t est.~dar A: Una mezcla de 0,2 mg/mL de
ER Equinacos1do USP y 0,2 mg/mL de cido dicafeoil-
qunico (cinarina) en metanol
S~lucin estndar B: 0,05 ll)g/mL de ER cido Caft-
nco USP, O, 1 mg/m~ de ER Acido Clorognico USP y
0,05 mg/mL de ER Acido Chicrico USP en metano!
Solucin estndar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Eciuincea Angustifolia USP en metano!. Agi-
tar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos v centrifugar. Usar el sobrenadante
Solucin muestra: 20 mg/mL de Extracto e~ Polvo de
Equincea Angustifolia en metano!. Agitar hasta disper-
sar, someter a ultrasonido durante 5 minutos y centri-
fugar. Usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adso~bente: Mezcla de gel de slice para cromato-
graf1a con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L de Solucin estndar C
y de Solucin muestra, y 2 L de Solucin estndar A y
de Solucin estndar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado. ' dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una rneLcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y cido frmico (5: 3: 1:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B
Solucin estndar C y Solucin muestra ' actico y 5 ml de cido sulfrico al metano! helado, y
Aplicar las, muestras en bandas a una placa para cro-
matograf1a e11 capa delyada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
rada. Retirar la piara de la cmara, calentar a 100
durante 5 minutos, derivatizar mientras est tibia con
Reactivo de derivatizacin, secar al aire y observar bajo
luz UV a 366 nm.
Sup!ernentos Dietticos / Equincecl 6441
Aptitud del sistema: La Soluc1on estndar A presenta
do; bandas pnnupales de color azul, una en el tercio
~~'..~nb~;-~~e~ ~~~,~.:~ft~~~J~b~~f c~o~~~~~~~~~~oJc la
b1da a ac1do d1cakoilqu1nico (cinanna) La Solucin P'-
tandar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
gr?ma debid?s. a cido caftrico (valor R1 inferior) y
ac1do clorogenico (valor R, superior) que estn clara-
r;i~nte s~p~ir.adas, y una banda de color azul para
ac1do ch1conco en el tercio superior del
cromatograma.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
de color azul en el tercio inferior del cromatograma a
u~ valor Rr correspondiente al de la banda de equina-
cos1do en los cromatogramas de la Solucin estndar A
y ?e la Solucin estndar C (ausente en Equincea pur-
purea). El cromatograma de la Solucin muestra pre-
senta una banda prominente de color azul verdoso en
la parte media del cromatograma a un valor R1 corres-
po~diente al de la banda de cido dicafeoilqunico (ci-
nanna) en los cromatogramas de la Solucin estndar A
y de la Solucin estndar C (ausente en Equincea p-
lida y Equincea purprea). El cromatograma de la So-
lucion muestra no presenta, o presenta bandas de color
azul muy tenues, a un valor R1 correspondiente a las
bandas de cido caftrico y cido chicrico en la Solu-
cin. e~tndar B (a diferencia de Equincea plida y
Equ1nacea purpurea). El cromatograma de la Solucin
muestra presenta bandas menores entre las posiciones
de equinacsido y cinarina. Una de estas se debe a
cido clorognico a un valor R1 correspondiente al de
cido clorog,nico en la Solucin estndar B.
8. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER /3-Sitosterol
USP en metano!
Solucin estndar B: 1 00 rng/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Angustifolia USP en diclorome-
tano. Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido du-
rant~ ,5 minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Soluc1on muestra: 1 00 mg/mL de Extracto en Polvo
de Equi.ncea Angustifolia en diclorometano. Agitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC)
Volumen .de aplicacin: 5 L de Solucin estndar By
de Soluc1on muestra, y 2 L de Solucin estndar A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
Fa.se mvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo
c1clohexano y cido frmico (8: 2: 1: O, 3) '
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 ml de meta-
no! en un frasco de vidrio de 1 00 mL y enfriar en un
bao de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lentamente y con cuidado 1O ml de cido
mezclar bien. De1ar que la mezcla se enfre a tempe-
ratura ambiente y lueqo agreqar O 5 mL de p-
anisaldehdo. ~ '
Anlisis
Muestras: Su/u(in t'Sltndor A Solucin estndar By
Solucin muestra '
Aplicar las, muestras en bandas a una placa para cro-
matograf1a en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
6442 Equincea / Su(llPmP11tn~ Dietf>ticos
rada. Retirar la placa de la cmara, secar al aire, deri-
vatizar con Reactivo dr dcrivatizacion, calentar a 1 00
durante 3-5 minutos, secar al aire y observar bajo luz
visihlP
Aptitud del sistema: La banda dP /)-sitmtProl del cro-
matograma de la Soluc1on estandar B y las dos bandas
por debajo estn claramente separadas entre s. Estas
dos bandas, en valor Rr decreciente, incluyen una
banda principal de color violeta azulado y una banda
amarilla.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
de color violeta azulado en el tercio inferior del croma-
tograma (mucho menos prominente en Equincea
purprea y ausente en Equincea plida). Esta banda
de color violeta azulado est entre dos bandas: una
banda menos prominente de color violeta azulado a
un valor Rr superior correspondiente al de la banda de
/3-sitosterol en los cromatogramas de la Solucin estn-
dar A y de la Solucin estndar B, y una banda caracte-
rstica de color amarillo a un valor R1 inferior (ausente
en Equincea purprea y Equincea plida). La banda
de color amarillo se torna de color rosado rojizo al
calentar la placa a 1 00 durante ms de 1 O minutos. El
cromatograma de la Solucin muestra presenta una
banda menor de color violeta rosado aproximada-
mente en la parte media del cromatograma (mucho
ms prominente en Equincea purprea), una banda
menor de color violeta rosado a aproximadamente dos
tercios del cromatograma (mucho ms prominente en
Equincea plida) y una banda ancha violeta rosada
cercana al frente de la fase mvil.
C. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al del pico de equinacsido de
la Solucin estndar A y la Solucin estndar B; y el tiempo
de retencin del pico del cido 1, 3-dicafeoilqunico de la
Solucin muestra corresponde al de la Solucin estndar A,
todos los picos segn se obtienen en la prueba de Conte-
nido de Fenoles Totales.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Solucin A: cido fosfrico (O, l en 1 00) en agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
- equinacsido en la Solucin estndar
Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) (%) -
(%)
o 90 --
____l_O_ _ _
3 90 10
16 78 22
~-- --- - - - - - - - - 1---
17 60 40
-----
20 . -------- 60 --1---
40
205_____ - -
90 10
25 -- ---- 90 10
Disolvente: Alcohol y agua (7: 3)
Solucin estndar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
Equincea Angustifolia USP en Disolvente, agitando y ca-
lentando en un bao de agua. Diluir con Disolvente
hasta obtener una solucin con una concentracin co-
nocida de 1 mg/mL. Pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 }tm o menor.
Solucin estndar B: 40 g/mL de ER Acido Clorog-
nico USP en Disolvente
Solucin estndar C: 80 g/ml de ER Equinacsido
USP en Disolvente
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 60 mg
de Extracto en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
traz de fondo redondo apropiado equipado con un
condensador. Agregar 25,0 mL de Disolvente y calentar
bajo reflujo, agitando mecnicamente, durante 15 mi-
USP 38
nutos Centrifugar o pasar a travs de un filtro de mem-
ura11a con un tamano de poro de 0,45 ~tm o menor.
Sistema cromatogrfico
('v'e1 C1u111uiuyruw \02 i ;, AptltucJ Oel :-i1stema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno Ll de 5 m
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estandar A y Solucin estndar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
Extracto en Polvo de Equincea Angustifolia USP.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de is-
mero del cido 1,3-dicafeoilqunico y de equinac-
sido, Solucin estndar A. [NOTA-El pico de equinac-
sido puede resolverse en dos componentes.]
Factor de capacidad (k'): No menos de 3,0, Solucin
estndar c
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
equinacsido, Solucin estndar C
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
los picos de equinacsido, Solucin estndar C
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Identificar los analitos pertinentes en el cromatograma
de la Solucin muestra en comparacin con el croma-
tograma de la Solucin estndar A. Medir las reas de
los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de cido clorog-
nico (C16H 1s9), cidos dicafeoilqunicos (C2sH2412) y
equinacsido (C3sH1020) en la porcin de Extracto en
Polvo tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) '< F x. 100
r11 = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = respuesta del pico de cido clorognico o de
ambos componentes de equinacsido de la
Solucin estndar correspondiente
Cs = concentracin de cido clorognico o
correspondiente (mg/ml)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de
Equincea Angustifolia en la Solucin muestra
(mg/ml)
F = O, 729 para cidos dicafeoilqunicos, 1,00 para
cido clorognico y 1,00 para componentes
de equinacosido
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porcin
de Extracto en Polvo tomada sumando los
porcentajes individuales.
Criterios de aceptacin: No menos de 4,0lii y no ms
de 5,0% rle fenoles totales con respecto a la materia
seca
CONTENIDO DE lsOBUTILAMIDAS DEL CIDO
DODECATETRAENOICO
Solucin estndar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
Equincea Angustrtol1a USP en metano!, agitando du-
rante 1 minuto y rliluir con metano! a volumen hasta
obtener una solucin con una concentracin conocida
de 1 mg/ml. Pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 pm o menor.
S9lucin estndar B: 1 O .UCJ/ml de ER lsobutilamida del
Acido 2E,4f-Hexadie;1oic0 USP e11 111elanol
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 500 mg
de Extracto en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
traz volumtrico de 100 ml. Agregar 80 ml de metano!
y someter a ultrasonido durante 30 minutos. Diluir con
USP 38
metanol a volumen v pasar a travs de un filtro de
mcmb1 ana con un tamao de poro de 0,45 ~tm o
menor.
Fase n1vil: Acctc1t;lu y JguJ (55:-15)
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del )1stema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 pm
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 25 pL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equincea Angustifolia USP.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilamidas del cido dodecatetraenoico, Solucin es-
tndar A
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
isobutilamida del cido 2f,4f-hexadienoico, Solucin
estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
el pico de isobutilamida del cido 2f,4f-hexadienoico
en inyecciones repetidas, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Identificar los picos debidos a isobutilamida del cido
dodeca-2f,4f,8Z, 1 Of-tetraenoico e isobutilamida del
cido dodeca-2f,4f,8Z, 1 OZ-tetraenoico en el croma-
tograma de la Solucin muestra en comparacin con
el cromatograma de la Solucin estndar A. Medir las
reas de los picos pertinentes.
Calcular el porcentaje de isobutilamidas del cido do-
decatetraenoico en la porcin de Extracto en Polvo
tomada:
Resultado= (r11/r1) x (Cs/C11) x Fx 100
r11 suma de las respuestas de los picos de los
= como la suma de cido caftrico (CnH1209), cido chic-
analitos pertinentes de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de isobutilamida del cido
2f,4f-hexadienoico de la Solucin estrdar B
C1 = concentracin de ER lsobutilamida del Acido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solucin
estndar B (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de
Equincea Angustifolia en la Solucin muestra
(mg/mL)
F = factor de respuesta de isobutilamida del cido
2f,4f-hexadienoico, 1,353
Criterios de aceptacin: No menos de O, 1 % de isobu-
tilamidas del cido dodecatelraenoico (C16H2sNO) con
respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 pg/g
Cadmio: No ms de 0,5 pg/g
Plomo: No ms de 5,0 pg/g
Mercurio: No ms de 1,0 pg/g
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO \2021): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 3 ufc/g. , Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
Suplementos Dietticos / Equincea 6443
OTROS REQUISITOS: . Cumple con los requisitos en Extractm
Botnicos (565 ), 01solvmtes Resduaies y Residuos dP
Plaguicidas.
PRUEBAS ESPECIFICAS
PRDIDA POR SECADO \73 1)
Muestra: 1 g
Anlisis: Secar la Muestra a 1 OS' durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz, en un lugar fresco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta a partir de las que se prepar el artculo. Si est
estandarizado por el contenido de alcamidas, etiquetar
indicando el contenido esperado de isobutilamidas del
cido dodecatetraenoico. La etiqueta contiene una decla-
racin que indica que la Equincea Angustifolia puede
causar en raras ocasiones reacciones alrgicas y erupcio-
nes o agravar el asma. Cumple con los requisitos en Ex-
tra~tos Botnicos (565), Etiquetado.
ESTAl)IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Caftrico USP
ER cido Chicrico USP
ER cido Clorognico USP
ER Extracto en Polvo de Equincea Angustifolia USP
ER Equinacsido USP,
ER lsobutilamida del Acido 2f,4f-Hexadienoico USP
ER f}-Sitosterol USP
Equincea Plida
DEFINICIN
La Equincea Plida est constituida por las races y el ri-
zoma secos de Echinacea pal/ida (Nutt.) Nutt. (Fam. Aster-
aceae). Se cosecha en el otoo despus de tres aos o
ms de crecimiento. Contiene no menos de 0,5% de fe-
noles totales, calculados con respecto a la materia seca,
rico (C22Hl8012), cido clorognico ((6H1s9) y equinac-
sido (C3sH46020).
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de equinacsido y ausencia de cido dica-
feoilqunico (cinarin(a))
Solucin estndar A: Una mezcla de 0,2 mg/mL de
ER Equinacsido USP y 0,2 mg/mL de cido dicafeoil-
qunico (cinarina) en metanol ,
Solucin estndar B: 0,05 rT)g/mL de ER Acido Caft-
rico USP, O, 1 mg/m~ de ER Acido Clorognico USP y
0,05 mg/mL de ER Acido Chicrico USP en metanol
Solucin estndar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Plida USP en metanol. Agitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Equincea Plida
reducida a polvo fino a un tubo de centrfuga, agregar
1 O mL de metanol, mezclar bien y someter a ultraso-
nido durante 1 O minutoc; C'Pntrifugar y usar el
sobrenadan te .
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 pm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 pL de Solucin estndar C
y de Solucin muestra, y 2 pL de Solucin estndar A y
de Solucin estandar B en bandas de 8 mm
6444 Equincea / Suplerrwntos Dietticos
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
rlispositivo adecuado.
Fa~e mvil 111121 mezc!a de acetato de etilo, mctil ctil
cetona, agua y cido frmico (5: 3: 1: 1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B,
Solucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
rada. Retirar la placa de la cmara, calentar a 100
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras est
tibia con Reactivo de derivatizacin, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presenta
dos bandas principales de color azul, una en el tercio
inferior del cromatograma debida a equinacsido y la
otra banda en la parte media del cromatograma de-
bida a cido dicafeoilqunico (cinarina). La Solucin es-
tndar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
grama debidas a cido caftrico (valor RF inferior) y
acido clorognico (valor Rr superior) que estn clara-
mente separadas, y una banda azul de cido chicrico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
azul en el tercio inferior del cromatograma a un valor
R1 correspondiente al de la banda de equinacsido en
los cromatogramas de la Solucin estndar A y de la
Solucin estandar C (ausente en Equincea purprea).
El cromatograma de la Solucin muestra no presenta
una banda de color azul a un valor RF correspondiente
al de la banda de cido dicafeoilqunico (cinarina) en
el cromatograma de la Solucin estndar A (presente
en Equincea angustifolia). El cromatograma de la So-
lucin muestra puede presentar bandas de menor in-
tensidad a los valores RF correspondientes a las bandas
de cido caftrico y cido chicrico en los cromatogra-
mas de la Solucin estndar B y la Solucin estndar C
(ausentes en Equincea angustifolia y mucho ms pro-
minentes en Equincea purprea). El cromatograma de
la Solucin muestra presenta bandas menores entre las
posiciones de equinacsido y cido caftrico. Una de
estas se debe a cido clorognico a un valor RF corres-
pondiente al de cido clorognico en la Solucin estn-
dar B.
B. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER {3-Sitosterol
USP en metanol
Solucin estndar B: 1 00 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Plida USP en diclorometano. Agi-
tar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Equincea Plida
reducida a polvo fino a un tubo de centrfuga, agregar
1 O mL de diclorometano, mezclar bien y someter a ul-
trasonido durante 1 O minutos. Centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatoi;irfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamano promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L de Solucin estndar By
de Solucin muestra, y 2 L de Solucin estndar A en
bandas de 8 mm
USP 38
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 3 3%, usando un
dispositivo adecuado.
rase mvil: U11ct 11teLLict Je luiue11u, acelalu de etiio,
ciclohexano y cido frmico (8: 2: 1: 0,3)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 1 00 mL y enfriarlo en
un bao de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lentamente y con cuidado 1 O mL de cido
actico y 5 mL de cido sulfrico al metano! helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfre a tempe-
ratura ambiente, luego agregar 0,5 mL de p-
anisaldehdo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
rada. Retirar la placa de la cmara, secar al aire, deri-
vatizar con Reactivo de derivatizacin, calentar a 100
durante 3-5 minutos, dejar que se enfre y observar
bajo luz visible.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar A presenta una banda de color violeta corres-
pondiente a fi-sitosterol. El cromatograma de la Solu-
cin estndar B presenta la banda ms prominente
como una banda de color violeta en el tercio superior
del cromatograma. El cromatograma de la Solucin es-
tndar B presenta una banda de color violeta menos
prominente en el tercio inferior del cromatograma y
una banda ancha de color violeta rosado cercana al
frente de la fase mvil.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
de color violeta en el tercio superior del cromato-
grama, correspondiente en valor Rr a una banda simi-
lar observada en la Solucin estndar B (mucho menos
prominente en Equincea angustifolia y ausente en
Equincea purprea). El cromatograma de la Solucin
muestra presenta una banda menos prominente de
color violeta en el tercio inferior del cromatograma co-
rrespondiente en valor Rr a una banda similar obser-
vada en la Solucin estndar B (mucho menos promi-
nente en Equincea purprea y ausente en Equincea
angustifolia). El cromatograma de la Solucin muestra
presenta una banda menor de color violeta a un valor
R1 correspondiente a la banda de /3-sitosterol en los
cromatogramas de la Solucin estndar A y Solucin es-
tndar B y una banda ancha de color violeta rosado
cercana al frente de la fase mvil.
C. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al del pico de equinacsido de
la Solucin estndar A y la Solucin estndar B, segn se
obtienen en la prueba de Contenido de Feno/es Totales. El
rea del pico de cualquiera de los picos detectados en el
cromatograma de la Solucin muestro en el sitio del cido
1, 3-dicafeoilqunico (Solucin estndar C) es no ms de
1 % del rea del pico de equinacsido.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Solucin A: cido fosfrico (O, 1 en 1 00) en agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
i------'=m=i=n,____ _r-----'-~Yo,_,__ _ _t - - - - ___f'lhl__
o 90 10
i----~3----+----~9~~ 10
~---1~6~--~_____7_8_____ _l_ ____ _fl_
USP ~8
Tabla 1 (Cuntinu~H in)
, - - Tie~~o Solucin A 1 Solucin 8
(~~n)
--- (;;' : ';;>
2~:5 -+~ ~::=1--::
1 cido caftrico, 0,881; cido clorognico,
Disolvente: Alcohol y agua (7:3)
Solucin estndar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
Equincea Plida USP en Disolvente, agitando y calen-
tando en un bao de agua. Diluir con Disolvente hasta
obtener una solucin con una concentracin conocida
de 1 mg/ml. Pasar a travs de un filtro de membrana
con ~,n tam~o de poro de 0,45 pm o i;nenor.
Soluc1on estandar B: 40 pg/mL de ER Acido Clorog-
nico USP en Disolvente
Solucin estndar C: 80 pg/mL de ER Equinacsido
USP en Disolvente
So.luci':' es.tndar D: 40 g/mL de cido dicafeoilqu-
nico (cinanna) en Disolvente
Solucin n:iuestra: Tra.nsferir 125 mg de Equincea P-
lida reducida a polvo fino (capaz de pasar a travs de
un tamiz de malla 40) a un matraz de fondo redondo
equipado con un condensador. Agregar 25,0 mL de Di-
solvente y calentar bajo reflujo, agitando mecnica-
mente ~urante 1 5 minutos. Centrifugar o pasar a travs
de un filtro de membrana con un tamao de poro de
0,45 m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 5 pL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
Requisitos de aptitud
Similitud de ,los c~omatogramas: El cromatograma
de la Soluc1on estandar A es sttrnlar al Cromatograma
de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
Extracto en Polvo de Equincea Plida USP.
Factor de capacidad (k'): No menos de 3,0 para el
pico de equinacsido, Solucin estndar C. [NOTA-El
pico de equinacsido puede resolverse en dos
componentes.]
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
equinacsido, Solucin estndar C
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
los p1_c,os de, equinacsido en inyecciones repetidas,
Soluc1on estandar C
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B So-
lucin estndar C, Solucin estndar D y Solucin '
muestra
Identificar los analitos pertinentes en el cromatograma
de la Solucin muestra por comparacin con el cro-
matograma de la Solucin estndar A. Medir las reas
de los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de cido caftrico
(C1 ,H110q), cido chicrico (C22HrnOd, cido clorog-
nico (Ci6H1sOq) y equinacsido (CisH460 2 o) en la por-
cin de Equincea Plida tomada:
Result;ido = (r,Jr,) X e X (V/Wl
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Suluun 111unt10
r, = respuesta del pico de cido clorognico o de
ambos componentes de equinacsido de la
Solucin estndar correspondiente
Sup!crncntos Dietticos / Equincea 6445
C = concentracin de cido clorognico o
eyuit 1au.J~ido en la Solucin estndar
1
correspondiente (mg/mL)
j 'v'
W
= vulurneit de la 5o/ucion rr;ucJlra (ml)
"" peso de Equincea Plida en polvo mado para
3 preparar la Solucin muestra (mg)
F = factor de respuesta: cido chicrico, 0,695;
1,000; con respecto a cido clorognico; y
componentes de equinacsido, 1,000
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porcin
de Equincea Plida tomada, sumando los
porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptacin: No menos de 0,5% de fenoles
totales, con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 pg/g
Cadmio: No ms de 0,5 ~tg/g
Plomo: No ms de 5,0 pg/g
fV!ercurio: No ms de) ,O pg/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requ1s1tos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: La superficie externa del rizoma es de
color marrn plido a marrn amarillento, est coro-
nada con restos del tallo areo y a veces, presenta ani-
llos en la superficie de hasta 15 mm de dimetro. Las
races, de hasta 4-1 O mm de dimetro, son de color
marrn plido a marrn amarillento, cilndricas o ligera-
mente a~usadas, algunas veces espiraladas, con arrugas
longitudinales y surcos profundos, y la transicin al ri-
zoma es imperceptible. La fractura es corta cuando
s~ca, se, t<?rna dura Y. flexible por exposicin al aire.
M1croscopicas: Los rizomas y las ratees en la seccin
transversal presentan una corteza externa delgada sepa-
rada de un amplio x1lema por una lnea cambial visible.
El sber est compuesto por varias hileras de clulas de
paredes finas que contienen un pigmento de color ma-
rrn amarillento. El rizoma tiene una pequea mdula
circular, pequeos grupos ocasionales de fibras lignifica-
das de paredes gruesas en el periciclo y una corteza
parenquimtica. El floema y el xilema estn compuestos
por bandas _estrechas de tejid<? v~scular separadas por
amplios radios medulares no l1gn1ficados. Los vasos del
xilema estn lignificados, tienen un dimetro de 25-75
pm, por lo general con engrosamientos reticulados pero
ocasionalmente con engrosamientos espiralados o ani-
llados. Las esclereidas aparecen solas o en pequeos
grupos, varan considerablemente de tamao y forma,
de redondeadas a rectangulares o alargadas y de tipo
fibroso, con una longitud de hasta 300 pm y de 20-40
m de ancho, con espacios intercelulares que forman
canales esquizgenos de oleorresina de 80-150 m de
dimetro y contienen un depsito negro denso dentro
y fuera del cilindro central (a diferencia de Equincea
Angustifolia, en la que los canales estn presentes slo
fu~ra del cilindro central). En todos los tejidos parenqui-
mattcos aparecen masas esferocristalinas de inulina. Las
f~bras lignificadas, presentes en la periferia de la corteza,
tienen de 100-300 m de largo y se presentan en
forma individual, a menudo sin fitomelanina (a diferen-
X Fx 100 cia de la Equincea Angustifolia, en la que las fibras se
presentan en grupos dispersos, tienen de 300-800 pm
de largo y frecuentemente estn rodeadas de
fitomelanina)
ARTCULOS DE RIGEN BOTNICO, Determinacin de Aceites
Vol9tiles (561 ): 1,0-2,0 ryiL/l 00 g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orqnica Extraa
(561): No ms de 3,0% -
6446 Equincea / Suplementm {)iptf'tirm
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizos Tata/e\ (561 ):
No ms de /,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en odo
(561'>: No m-; rle 4,0%
PRDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar una muestra a 105 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 10,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la glanta contenidas en el artculo.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Caftrico USP
ER cido Chicrico USP
ER cido Clorognico USP
ER Extracto en Polvo de Equiniicea Plida USP
ER Equinacsido USP
ER /3-Sitosterol USP
Equincea Plida en Polvo
DEFINICIN
La Equincea Plida en Polvo est constituida por las races y
el rizoma secos de Echinacea pal/ida (Nutt.) Nutt. (Fam.
Asteraceae). Se cosecha en el otoo despus de tres aos
o ms de crecimiento y se reduce a polvo. Contiene no
menos de 0,5% de fenoles totales, calculado con respecto
a la materia seca, como la suma de cido caftrico
(C13H129), cido chicrico (C22H18012), cido clorognico
(C16H1809) y equinacsido (C3sH46020).
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de e9uinacsido y ausencia de cido dica-
feoilqunico (cmarin(a))
Solucin estndar A: Una mezcla de 0,2 mg/mL de
ER Equinacsido USP y 0,2 mg/ml de cido dicafeoil-
qunico (cinarina) en metanol , USP en metanol
Solucin estndar B: 0,05 ll)g/mL de ER Acido Caft-
rico USP, O, 1 mg/m~ de ER Acido Clorognico USP y
0,05 mg/mL de ER Acido Chicrico USP en metanol
Solucin estndar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Plida USP en metanol. Agitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Equincea Plida
en Polvo a un tubo de centrfuga, agregar 1 O mL de
metanol, mezclar bien y someter a ultrasonido durante
1 O minutos. Centrifugar y usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L de Solucin estndar C
y de Solucin muestra, y 2 L de Solucin estndar A y
de Solucin estndar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y cido frmico (5:3: 1: 1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solurin e1tndar B,
Solucin estndar C y Solucin muestra
USP 18
Aplicar las M11P1trm en bandas a una placa para cro-
mato91 dd e11 Cdpd deigada adecuada y_secar al aire.
Desarrollar lm cromatogramas en una camara satu-
ada. R.:cti1a1 ia f.JidLd Je id Ldllldfd, cdientar a i 00"
durante 5 minutos. dcrivJtizar la placa mientras est
tibia con Reactivo de derivati?an, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presenta
dos bandas principales de color azul, una en el tercio
inferior del cromatograma debida a equinacsido y la
otra banda en la parte media del cromatograma de-
bida a cido dicafeoilqunico (cinarina). La Solucin es-
tndar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
grama debidas a cido caftrico (valor Rr inferior) y
acido clorognico (valor R1 superior) que estn clara-
mente separadas, y una banda azul de cido chicrico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
azul en el tercio inferior del cromatograma a un valor
Rr correspondiente al de la banda de equinacsido en
los cromatogramas de la Solucin estndar A y de la
Solucin estandar C (ausente en Equincea purprea).
El cromatograma de la Solucin muestra no presenta
una banda de color azul a un valor Rr correspondiente
al de la banda de cido dicafeoilqunico (cinarina) en
el cromatograma de la Solucin estndar A (presente
en Equincea angustifolia). El cromatograma de la So-
lucin muestra puede presentar bandas de menor in-
tensidad a los valores R1 correspondientes a las bandas
de cido caftrico y cido chicrico en los cromatogra-
mas de la Solucin estndar B y de la Solucin estndar
C (ausentes en Equincea angustifolia y mucho ms
prominentes en Equincea purprea). El cromato-
grama de la Solucin muestra presenta bandas menores
entre las posiciones de equinacsido y cido caftrico.
Una de stas se debe a cido clorognico a un valor R1
correspondiente al de cido clorogenico en la Solucin
estndar B.
B. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER /J-Sitosterol
Solucin estndar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Plida USP en diclorometano. Agi-
tar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Equincea Plida
en Polvo a un tubo de centrfuga, agregar 1 O mL de
diclorometano, mezclar bien y someter a ultrasonido
durante 1 O minutos. Centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Cel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 5 prn (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 ,LtL de Solucin estndar By
de Soluc1on muestra, y 2 L de Solucin estndar A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo,
ciclohexano y cido frmico (8: 2: 1: O, 3)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 mL de meta-
nol en un frasco de vidrio de 100 mL y enfriarlo en
un bdr-ru dfc' agua con hieio y sal o en un congelador.
Agrega1 lentamente y con cuidado 1 O mL de cido
actico y 5 mL de cido sulfrico al metanol helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla ~e enfre a tempe-
USP 38 Suplementos Oietetirm ,1 Frp 1in(rPl 644 7

ratura ambiente. luego agregar 0,5 ml de p-
d11i~dldel1do. , m o menor.
Anlisis
tv1uestras. Ju/uLin e st11dur A, 5oluLin e:>tndar B y
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
rada. Retirar la placa de la cmara, secar al aire, deri-
vatizar con Reactivo de derivatizacin, calentar a 1 00
durante 3-5 minutos, dejar que se enfre y observar
bajo luz visible.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar A presenta una banda de color violeta corres-
pondiente a f.l-sitosterol. El cromatograma de la Solu-
cin estndar 8 presenta la banda ms prominente
como una banda de color violeta en el tercio superior
del cromatograma. El cromatograma de la Solucin es-
tndar 8 presenta una banda menos prominente de
color violeta en el tercio inferior del cromatograma y
una banda ancha de color violeta rosado cercana al
frente de la fase mvil.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
de color violeta en el tercio superior del cromato-
grama, correspondiente en valor Rr a una banda simi-
lar observada en la Solucin estndar 8 (mucho menos
prominente en Equincea angustifolia y ausente en
Equincea purprea). El cromatograma de la Solucin
muestra presenta una banda menos prominente de
color violeta en el tercio inferior del cromatograma co-
rrespondiente en valor Rr a una banda similar obser-
vada en la Solucin estndar 8 (mucho menos promi-
nente en Equincea purprea y ausente en Equincea
angustifolia). El cromatograma de la Solucin muestra
presenta una banda menor de color violeta a un valor
Rr correspondiente a la banda de /3-sitosterol en los
cromatogramas de la Solucin estndar A y de la Solu-
cin estndar 8 y una banda ancha de color violeta
rosado cercana al frente de la fase mvil.
C. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al del pico de equinacsido de
la Solucin estndar A y la Solucin estndar 8, segn se
obtienen en la prueba de Contenido de Fenoles Totales. El
rea del pico de cualquiera de los picos detectados en el
cromatograma de la Solucin muestra en el sitio del cido
1,3-dicafeoilqunico (Solucin estndar C) es no ms de
1 % del rea del pico de equinacsido.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Solucin A: cido fosfrico (O, 1 en 1 00) en agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
filtro de membrana con un tamalo de poro de 0,45
.
Solucin estndar B: 40 pg;ml de ER Acido Clorog-
nico USP en Disolvente
Solucin estndar C: 80 pg/mL de ER Equinacsido
USP en Disolvente
Solucin estndar D: 40 g/ml de cido dicafeoilqu-
nico (cinarina) en Disolvente
Solucin muestra: Transferir 125 mg de Equincea P-
lida en Polvo (capaz de pasar a traves de un tamiz de
malla 40) a un matraz de fondo redondo equipado con
un condensador. Agregar 25,0 ml de Disolvente y calen-
tar bajo reflujo, agitando mecnicamente durante 15
minutos. Centrifugar o pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
Extracto en Polvo de Equincea Plida USP.
Factor de capacidad (k'): No menos de 3,0 para el
pico de equinacsido, Solucin estndar C. [NOTA-El
pico de equinacsido puede resolverse en dos
componentes.]
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
equinacsido, Solucin estndar C
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
los picos de equinacsido en inyecciones repetidas,
Solucin estndar C
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8, So-
lucin estndar C, Solucin estndar D y Solucin
muestra
Identificar los analitos pertinentes en el cromatograma
de la Solucin muestra por comparacin con el cro-
matograma de la Solucin estndar A. Medir las reas
de los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de cido caftrico
(C13H129), cido chicrico (C22H1s012), cido clorog-
nico (C16H1s9) y equinacsido (CisH16020) en la por-
cin de Equincea Plida en Polvo tomada:
Resultado= (r11/r1) x Cs x (V/W) x F x 100

Tabla 1 ru = respuesta del pico del analito pertinente de la

---"

r . ---, Solucin muestra

-----
Tiempo
(min)
9
3
~-
solucin A
. --- (%)
90
90
+
---+
Solucin B
(%)
10
10
rs

e
= respuesta del pico de cido clorognico o de
ambos componentes de equinacsido de la
Solucin estndar correspondiente
= concentracin de cido clorognico o
equinacsido en la Solucin estndar
16 78 . 22
!
40
correspondiente (mg/ml)
17 60
V = volumen final de la Solucin muestra (ml)
20 1 60 40 W ~ peso de Equincea PlidJ en Polvo tomJdo
-- 2.0~~
--1- JQ. ___ ==t 10 para preparar la Solucin muestra (mg)
25 ____J_ 90 __L 10 F = factor de respuesta: cido chicrico, 0,695;
cido caftrico, 0,881; cido clorognico,
Disolvente: Alcohol y d<.;)Ud (7:3) 1,000; con respecto a c.ido clorognico; y
Solucin estndar A: Disolver ER Extracto en Polvo de componentes de equinacsido, 1,000
Equin;rea Plida l JSP en Dirnlvente. agitando y calen- Calcular el porcentaje de fennle' tntle' en I rnrcin
tando en un bao de agua. Diluir con Disolvente hasta de Equincea Plida tomada sumando los porcentajes
obtener una solucin con una concentracin conocida individuales calculados.
de aproximadamente 1 mg/ml. Pasar a travs de un Criterios de aceptacin: No menos de 0,5% de fenoles
totales con respecto a la materia seca
6448 E.quincea / Suplrmmtos Dietticos
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: Nn rn' de 1,0 pg/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: La Equincea Plida en Polvo
es un polvo de color marrn con un leve olor aromtico
y un sabor ligeramente acre y persistente. Se vuelve de
color amarillo cuando se monta en solucin de hidrxido
de sodio. Al microscopio, se observan las siguientes ca-
ractersticas: grupos de canales secretores con contenido
marrn, rodeados de clulas parenquimticas que contie-
nen cristales agrupados de oxalato de calcio; y clulas
parenquimticas con pequeos grnulos de almidn, fi-
bras lignificadas de paredes gruesas y fragmentos de va-
sos reticulados y con puntuaciones.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Determinacin de Aceite
Vol(itil (561): 1,0-2,0 mVlOO g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 7,0% , matografa en capa delgada adecuada Y, secar al aire.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 4,0%
PRDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar una muestra a 105 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 10,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin, oficial, las partes de
la P,lanta de las que se obtuvo el articulo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER cido Caftrico USP
ER cido Chicrico USP
ER cido Clorognico USP
ER Extracto en Polvo de l:quincea Plida USP
ER Equinacsido USP
ER /Viitosterol USP
Extracto en Polvo de Equincea Plida
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Equincea Plida se prepara a partir
de las races de Echinacea pal/ida mediante la extraccin
con meLclas hidroalcohlicas u otros disolventes adecua-
dos. La relacin entre el material vegetal crudo inicial y el
Extracto en Polvo est entre 2: 1 y 8: 1. Contiene no me-
nos de 4,0% y no ms de 5,0% de fenoles totales, calcu-
lados corno la suma de cido caftrico (CnHp9), cido
chicrico (C)2H 18012), cido clorognico (C16H1s9) y equi-
nacsido (C ,1 H40 0 2 u) con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de equinacsido y ausencia de cido dica-
feoilqunico (cinarin(a))
Solucin estndar A: Una mezcla de 0,2 mg/mL de
ER Equinacsido USP y 0,2 mg/mL de cido dicafeoil-
qunic_o (cin~rina) en metanol , . , Solucin estndar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Solucion estandar B: 0,05 ll)g/mL de ER Ac1do Cafta-
rico USP, O, 1 mg/m~ de ER Acido Clorognico USP y
0,05 mg/mL de ER Acido Chicrico USP en metano!
Solucin estndar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Plida USP en metanol. Agitar
USP 38
hasta rlispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: 20 mg/mL de Extracto en Polvo en
meta11ui. Ayildr hdsld dispersdr, someter a ultrasonido
durante 5 minutos y centrifugar. Usilr el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L de Solucin estndar C
y de Solucin muestra, y 2 L de Solucin estndar A y
de Solucin estndar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado. . . .
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metd etd
cetona, agua y cido frmico (5:3:1:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B,
Solucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
Desarrollar los cromatogramas en una camara satu-
rada. Retirar la placa de la cmara, calentar a 100
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras est
tibia con Reactivo de derivatizacin, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presen~a
dos bandas principales de colo: azul, un.a en, e.1 tercio
inferior del cromatograma debida a equ1nacos1do y la
otra banda en la parte media del cromatograma de-
bida a cido dicafeoilqunico (cinarina). La Solucin es-
tndar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
grama debidas a cido caftrico (valor R1 inferior) y
acido clorognico (valor RF superior) que estn clara-
mente separadas, y una banda azul de cido chicrico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
azul en el tercio inferior del cromatograma a un valor
R1 correspondiente al de la banda de equinacsido en
los cr~mato9ramas de la Solucin est(Jdar A y d,e la
So/ucion estandar C (ausente en Equ1nacea purpurea).
El cromatograma de la Solucin muestra no presenta
una banda de color azul a un valor R1 correspondiente
al de la banda de cido dicafeoilqunico (cinarina) er
el cromatograma de la Solucin estndar A (presente
en Equincea angustifolia). El cromatograma de la So-
lucin muestra puede presentar bandas de menor in-
tensidad a los valores R1 correspondientes a las bandas
de cido caftrico y cido chicrico en los cromatogra-
mas de la Solucin estndar By de la Solucin estndar
C (ausentes en Equincea angustifolia y mucho ms
prominentes en Equincea purprea). El cromato-
grama de la Solucin muestra presenta bandas menores
entre las posiciones de equinacsido y cido caftrico.
Una de stas se debe a, _cido clorog.nico a un valo~, R1
correspondiente al de ac1do clorogen1co en la <ioluc1on
estndar B.
B. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER f:-Sitosterol
USP en metanol
Polvo de Equincea Plida USP en diclorometano. Agi-
tar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: 1 00 mg/mL de Extracto en Polvo
en diclorometano. Agitar hasta dispersar, someter a ul-
USP 38 Supiementos Dietliw-. / Fquin<< Pa 6449

trasonido durante 5 minutos y centrifuqar. Usar el COMPOSICIN

sobrenadante. ~ CONTENIDO DE fENOLES TOTALES
Sistema cromatoqrfico Solucin A: cido fosfrico (O, 1 en 1 00)
(Ver Cromatografa (621 >, Cromatografa en Capa Del- Solucin B: Acetonitnlo
gada.) Fase mvil: Ver ia Tu/Jiu 7.
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para Tabla 1
HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L de Solucin estndar By Tiempo Solucin A Solucin B
de Solucin muestra, y 2 L de Solucin estndar A en lmin\ l/o\ (%)
bandas de 8 mm o 90 -~
~-
10
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu- 3 90 10
meda~ relativa de aproximadamente 33%, usando un 16 78 22
d1spos1tivo adecuado. 60 40
17
Fase mvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo
~ _ _1Q_ _____ 60 40
ciclohexano y cido frmico (8: 2: 1: O, 3) ' ~

Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 ml de meta-
no! en un frasco de vidrio de 100 ml y enfriarlo en
un bao de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lentamente y con cuidado 1 O ml de cido
actico y 5 ml de cido sulfrico al metanol helado y
mezclar bien. Dejar que la mezcla se enfre a tempe-
ratura ambiente, luego agregar 0,5 ml de p-
anisaldehdo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
rada. Retirar la placa de la cmara, secar al aire, deri-
vatizar con Reactivo de derivatizacin, calentar a 1 00
durante 3-5 minutos, dejar que se enfre y observar
bajo luz visible.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar A presenta una banda de color violeta corres-
pondiente a f:i-sitosterol. El cromatograma de la Solu-
cin estndar B presenta la banda ms prominente
como una banda de color violeta en el tercio superior
d~I cromatograma. El cromatograma de la Solucin es-
tandar B presenta una banda de color violeta menos
prominente en el tercio inferior del cromatograma y
una banda ancha de color violeta rosado cercana al
frente de la fase mvil.
Criterios de aceptacin: La banda ms prominente en
el cromatograma de la Solucin muestra es una banda
de color violeta en el tercio superior del cromato-
grama, correspondiente en valor Rr a una banda simi-
lar observada en la Solucin estndar B (mucho menos
prominente en Equincea angustifolia y ausente en
Equincea purprea). El cromatograma de la Solucin
muestra presenta una banda menos prominente de
color violeta en el tercio inferior del cromatograma co-
rrespondiente en valor R, a una banda similar obser-
vada en la Solucin estndar B (mucho menos promi-
nente en Equincea purprea y ausente en Equincea
angustifolia). El cromatograma de la Solucin muestra
presenta una banda menor de color violeta a un valor
R, correspondiente a la banda de f:i-sitosterol en los
cromatogramas de la Solucin estndar A y de la Solu-
cin estndar By una banda ancha de color violeta
rosado cercana al frente de la fase mvil.
C. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al del pico de equinacsido de
la Solucin estndar A y la Solucin estandar B, segn se
obtienen en la prueba de Contenido de Fenoles Totales. El
rea del pico de cualquiera de los picos detectados en el
cromatograma de la Solucin muestra en el sitio del cido
1, 3-dicafeoilqunico (Solucin estndar C) es no ms de
1 % del rea del pico de equinacsido.
20 5 90 10
25 90 10
Disolvente: Alcohol y agua (7:3)
Solucin estndar A: Disolver ER Extracto en Polvo de
Equincea Plida USP en Disolvente, agitando y calen-
tando en un bao de agua. Diluir con Disolvente hasta
obtener una solucin con una concentracin conocida
de 1 mg/ml. Pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 m o 1J1enor.
Solucin estndar B: 40 g/ml de ER Acido Clorog-
nico USP en Disolvente
Solucin estndar C: 80 g/ml de ER Equinacsido
USP en Disolvente
Solucin estndar D: 40 g/ml de cido dicafeoilqu-
nico (cinarina) en Disolvente
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 60 mg
de Extracto en Polvo, pesado con exactitud, a un ma-
traz de fondo redondo apropiado equipado con un
condensador. Agregar 25,0 ml de Disolvente y calentar
bajo reflujo, agitando mecnicamente, durante 15 mi-
nutos. Centrifugar o pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno Ll de 5 m
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C.
[NOTA-El pico de equinacsido puede resolverse en
dos componentes.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia para fenoles totales provisto con el ER
Extracto en Polvo de Equincea Plida USP.
Factor de capacidad (k'): No menos de 3,0 para el
pico de equinacsido, Solucin estndar C
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
equinacsido, Solucin estndar C
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
los picos de equinacsido en inyecciones repetidas,
Solucin estndar C
Anlisis
Muestras: Solucin muestra, Solucin estndar A, Solu-
cin estndar B, Solucin estndar C y Solucin estndar
D
Identificar los analitos pertinentes en el cromatograma
de la Solucin muestra por comparacin con el cro-
matograma de la Solucin estndar A. Medir las reas
de los picos pertinentes.
Calcular por separado el porcentaje de cido caftrico
(C 1iH1209), cido chicrico (CJ)H 18012), cido clorog-
6450 Equinct>a / '\uplt>nwnto\ Dil:'tticos
nico (C:0H;00,,) y equinacsido (C,H4b01u) en la por-
cin de E:xtracto en Polvo tomada:
Re~uildUU = (ru/rs) x (C!Cu) x F x OO
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
r, = respuesta del pico de cido clorognico o de
ambos componentes de equinacsido de la
Solucin estndar correspondiente
Cs = concentracin de cido clorognico o de
equinacsido en la Solucin estndar
correspondiente (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo en la
Solucin muestra (mg/mL)
F =factor de respuesta: cido chicrico, 0,695;
cido caftrico, 0,881; cido clorognico,
1,000; con respecto a cido clorognico; y
componentes de equinacsido, 1,000
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porcin
de Extracto en Polvo tomada, sumando los
porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptacin: No menos de 4,0% y no ms
de 5,0% de fenoles totales, con respecto a la materia
seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 1 0 3 ufc/g. , gada.)
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos para Extrac-
tos Botnicos (565), Disolventes Residuales y Residuos de
Plaguicidas.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1 g
Anlisis: Secar la Muestra a 1 05 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Amacenar en un lugar
fresco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta de las que se prepar el artculo. La etiqueta
incluye una advertencia que indica que la Equincea P-
lida puede provocar reacciones alrgicas espordica-
mente, sarpullido o agravar el asma. Cumple con los re-
qu~sitos para Extractos Botnicos (565), Etiquetado.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Caftrico USP
ER ~cido Chicrico USP
ER Acido Clorognico USP
ER Extracto en Polvo de Equincea Plida USP
ER Equinacsido USP
ER /3-Sitosterol USP
USP 38
Equincea Purprea en Polvo
DEFINICIN
La Equincea Purprea en Polvo est formada por las races
y el rizoma secos de Echinacea purpurea (L.) Moench
(Fam. Asteraceae). Se cosecha en el otoo despus de tres
aos o ms de crecimiento y se reduce a polvo. Contiene
no menos de 0,5% de tenoles totales, calculado con res-
pecto a la materia seca como la suma de cido caftrico
(C1;H1209), cido chicrico (C22H1s012) y cido clorog-
nico (Ci6H1s9). Contiene no menos de 0,025% de alca-
midas, calculado como isobutilamidas del cido dodecate-
traenoico (C16H2sNO).
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de cido chicrico y ausencia de
equinacsido
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Equinacsido
USP en metano!
Solucin estndar B: 0,2 mg/mL de ER cido Caft-
rico USP, O, 1 mg/n;iL de ER Acido Clorognico USP y
0,2 m_g/mL de ER Acido Chicrico USP en metano!
Solucion estndar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Purp(irea USP en metanol. Agitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Equincea Pur-
prea en Polvo a un tubo de centrfuga, agregar
1 O mL de metano!, mezclar bien y someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos. Centrifugar y usar el
sobrenadante .
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografa en Capa Del-
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L de Solucin estndar C
y Solucin muestra, y 2 p L de Solucin estndar A y
Solucin estndar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y cido frmico (5:3:1:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/ml de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B,
Solucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
rada. Retirar la placa de la cmara, calentar a 1 oou
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras est
tibia con Reactivo de derivatizacin, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presenta
una banda principal azul en el tercio inferior del cro-
matograma debida a equinacsido. La Solucin estn-
dar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
grama debidas a cido caftrico (valor Rr inferior) y
acido clorognico (valor R, ~upPrior) que estn clara-
mente separadas, y una banda azul de cido chicrico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterio~ de aceptacin: La ms prominente de las
bandas en el cromatograma de la Solucin muestra es
una banda azul en el tercio superior del cromato9rama
a un valor R1 correspondiente ai de la banda de acido
chicrico en los cromatogramas de la Solucin estndar
USP 38
B y J Solucin 2stndar C (menos prominente en Equi-
ncea Plida y ausente o ca<>i ausente en Equincea
Angustifolia). La segunda ms prominente de las ban-
das en el cromatograma de la Soluc1on muestra es una
bdrldd de color dLUI dpruxi111ddd111e11le en id pdrle me-
dia del cromatograma debida a cido caftrico, corres-
pondiente a una banda en el cromatograma de la So-
lucin estndar C (ausente en Equincea Angustifolia y
una banda menor en Equincea Plida). El cromato-
grama de la Solucin muestra no presenta ninguna
banda al valor R1 de equinacsido en la Solucin estn-
dar A (a diferencia de Equincea Plida y Eguincea
Angustifolia). El cromatograma de la So/ucion muestra
puede presentar bandas menores de color azul corres-
pondientes a bandas similares en el cromatograma de
la Solucin estndar C. Una de stas se debe a cido
clorognico a un valor R1 correspondiente a cido clo-
rognico en 19 Solucin estndar B.
B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER /3-Sitosterol
USP en metano!
Solucin estndar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Purprea USP en diclorometano.
Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Equincea Pur-
prea en Polvo a un tubo de centrfuga, agregar
1 O mL de diclorometano, mezclar bien y someter a ul-
trasonido durante 1 O minutos. Centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L de Solucin estndar By
Solucin muestra, y 2 L de Solucin estndar A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo,
ciclohexano y cido frmico (8: 2: 1: O, 3)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 1 00 mL y enfriarlo en
un bao de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lentamente y con cuidado 1 O mL de cido
actico y 5 mL de cido sulfrico al metano! enfriado
con hielo y mezclar bien. Dejar que la mezcla se en-
fre a temperatura ambiente, luego agregar 0,5 mL de
p-anisaldehdo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una capa para croma-
tografa en capa delgada adecuada y secar al aire.
Acondicionar la placa a una humedad relativa de
aproximadamente 33% usando un dispositivo ade-
cuado. Desarrollar los cromatogramas en una cmara
saturada. Retirar la placa de la cmara, secar al aire,
derivatizar con Reactivo de derivatizacin, calentar a
1 oou durante 3-5 minutos, dejar que se enfre y ob-
servar bajo luz visible.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar B presenta la ms prominente de las bandas
como una banda violeta rosada aproximadamente en
la parte media del cromatograma, y justo debajo de
esta banda rosada, una banda violeta a un valor R1
inferior, similar en posicin y color a la banda de /)-
Suplementos Oietiiws ! Equinced 6451
sitosterol en los cromatoqramas de la Solucin estndar
A. Estas dos bandas estn claramente separadas entre
s. El cromatograma de la Solucin estndar B tambin
presenta una banda ancha violeta rosada cercana al
frente de Id d~e rnvil.
Criterios de aceptacin: La ms prominente de las
bandas del cromatograma de la Solucin muestra es
una banda violeta rosada aproximadamente en la
parte media del cromatograma, similar en posicin y
color a una banda en el cromatograma de la Solucin
estndar B (mucho menos prominente en Equincea
Angustifolia y Equincea Palida), una banda de color
violeta correspondiente a la banda de /)-sitosterol en
los cromatogramas de la Solucin estndar A y la Solu-
cin estndar B, y una banda ancha violeta rosada cer-
cana al frente de la fase mvil, similar en posicin y
color a la banda en el cromatograma de la Solucin
estndar B. El cromatograma de la Solucin muestra no
presenta ninguna banda de color amarillo por debajo
de la banda de /)-sitosterol (a diferencia de Equincea
Angustifolia) ni una banda prominente violeta aproxi-
madamente en dos tercios del cromatograma (a dife-
rencia de Equincea Plida).
C. El tiempo de retencin del pico principal en la Solu-
cin muestra corresponde al del pico de acido chicrico
en la Solucin estndar A, y el segundo de los picos ms
prominentes corresponde al del pico de cido caftrico
de la Solucin estndar B. El cromatograma de la Solucin
muestra no presenta ningn pico o presenta un pico mu-
cho menor al tiempo de retencin correspondiente al
pico de equinacsido en el cromatograma de la Solucin
estndar D. Todos los picos segn se obtienen en la
prueba de Contenido de Fenoles Totales.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Solucin A: cido fosfrico (O, 1 en 1 00) en agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
- -------
Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) -----1'.'ftl____ (%)
o 90 10
13 78 22
14 60 40
l_Ll__ 60 40
18 90 10
30 90 10
Disolvente: Alcohol y agua (7:3) _
Solucin estndar A: 30 g/mL de ER Acido Chicrico
USP en Disolvente
Solucin estndar B: 20 g/ml de ER cido Caftrico
USP en Disolvente
Solucin estndar C: 20 g/mL de ER cido Clorog-
nico USP en Disolvente
Solucin estndar D: 20 g/mL de ER Equinacsido
USP en Disolvente
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 125 mg
de Equincea Purprea en Polvo (capaz de pasar a
travs de un tamiz de malla 40), pesados con exactitud,
d un rndlidL de fondo redondo equipado con un con-
densador. Agregar 25,0 mL de Disolvente y calentar bajo
reflujo, agitando mecnicamente, durante 15 minutos.
Centrifugar o pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamano de P.ro de 0,45 m o menor.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
6452 Equincea / Suplementos Dietticos
Modo: HPLC
Detector: UV 330 11111
Columna: 4,6 mm x 25 un; relleno L1 de 5 rn
Temperatura de la colt..11n1-.c1. 35
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 ,ul
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% para el
pico de cido chicrico en inyecciones repetidas, So-
lucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O y Solucin
muestra
Calcular por separado el porcentaje de cido caftrico
(C, ,H, ?g), cido chicrico (C22Hrn17) y cido cloro-
gnico (C16HrnO,,) en la porcin de Equincea Pur-
prea en Polvo tomada:
Resultado = (r11/r1) X e X (V!VV) X 100
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin estndar correspondiente
Cs = concentracin del analito pertinente en la
Solucin estndar correspondiente (mg/ml)
V = volumen de la Solucin muestra (ml)
W = peso de la Equincea Purprea en Polvo usada
para preparar la Solucin muestra (mg)
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porcin
de Equincea Purprea en Polvo tomada, sumando
los porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptacin: No menos de 0,5% de fenoles
totales con respecto a la materia seca
CONTENIDO DE ALCAMIDAS
Fase mvil: Acetonitrilo y agua (55:45)
Solucin estndar A: 5 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de Equincea Purprea USP en metanol. Disolver,
usando ultrasonido y agitando durante 1 O minutos.
Despus de diluir, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
S9lucin estndar B: 1 O g/ml de ER lsobutilamida del
Acido 2E,4E-Hexadienoico USP en metano!
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Equincea Purprea en Polvo (capaz de pasar a
travs de un tamiz de malla 40) a un matraz de fondo
redondo. Agregar 80 ml de metanol y someter a reflujo
durante 30 minutos. Enfriar a temperatura ambiente y
filtrar en un matraz volumtrico de 100 ml, usando pe-
queas porciones de metanol para enjuagar el matraz y
el filtro. Diluir con metanol a volumen. Pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 ,um
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucion estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equinicea Purprea USP.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilamidas del cido dodecatetraenoico, Solucin es-
tndar A
USP 38
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
1)obutilam1da del aci<io 2f,4E-hexadienoico, Solucion
estandar B
Desviacin estndar relativa: No mas de 2,5% para
rl pirn <ie isobutilarnida de! cdu 2f,4F-hexadienuic.o
en inyecciones repetidas, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Identificar los picos de las 1 O alca midas principales en
el cromatograma de la Solucin muestra en compara-
cin con el cromatograma de la Solucin estndar A.
Calcular el porcentaje de alcamidas en la porcin de
Equincea Purprea en Polvo tomada:
Resultado = (ru! r1) x Cs x ( V/VV) x F x 100
r11 = suma de las rea<> de lm picos de los analitos
pertinentes de la Solucion muestra
r1 = rea del pico de isobutilamida del cido 2E,4E-
hexadienoico de la Solucin estndar B
C = concentracin de ER lsobutilamida del cido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solucin
estndar B (mg/ml)
V = volumen de la Solucin muestra (ml)
W = peso de Equincea Purprea en Polvo usado
para preparar la Solucin muestra (rng)
F = factor de respuesta para isobutilamida del
cido 2f,4f-hexadienoico, 1,353
Criterios de aceptacin: No menos de 0,025% con
respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Al microscopio, se observan
las siguientes caratersticas: vasos (80 x 30 m) con pare-
des sesgadas en los extremos y paredes secundarias espi-
raladas o punteadas; clulas suberosas rectan$Julares
(150 x 60 m) con inclusiones de color marron; clulas
parenquimticas rectangulares (120 x 30 m), algunas
punteadas; clulas fibrosas alargadas con un lmen estre-
cho y extremo en forma de embudo (20-40 m de an-
cho); esclereidas poligonales; una capa melanognica de
espesor variable, intercalada entre las paredes celulares
del parnquima; y esclereidas, vasos y fibras lignificadas.
El almidn est presente; los cristales de oxalato de calcio
e inulina estn ausentes.
PRDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar una muestra a 105 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 1 0,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No ms de 7,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 4,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn, y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artculo.
USP 38
EST~DARES DE REFERENCIA USP 111)
ER Acido Cafldrico USP ' '
ER cido Chicrico USP
ER ALidu Ciu1Ut,J11iLu USP
ER Extracto en Polvo de Equincea Purprea USP
ER Equinacsido USP
ER lsobutilamida del cido 2f,4f-Hexadienoico USP
ER ,B-S1tosterol USP
Extracto en Polvo de Equincea
Purprea
DEFINICIN
El Extracto en _Polvo de, Eguincea ~urprea se prepara a
partir de _Ra1z de Egu1nacea Purpurea seca, Partes Areas
de Equ1.~acea Purpurea o una mezcla de ellas, mediante
extracoon con mezclas hidroalcohlicas u otros disolven-
tes adecuados. La relacin entre el material vegetal crudo
1~1c1al y el Extracto en Polvo est entre 2:1 y 8:1. Con-
tiene no menos de 4,0% de fenoles totales, calculado
como la suma de cido caftrico (C 13 H120 9), cido chic-
nco (C22Hrn012) y cido clorognico (C16H 18 0 9 ), con res-
pecto a la materia seca. Contiene no menos de O 025%
de isobutilamidas del cido dodecatetraenoico '
(C16H2sNO), calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de cido chicrico y ausencia de
equinacsido
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Equinacsido
USP en metano!
S<?lucin estndar B: 0,2 mg/mL de ER cido Caft-
nco USP, O, 1 mg/ll)L de ER Acido Clorognico USP y
0,2 m_g/mL de ER Acido Chicrico USP en metano!
Solucion estndar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo d.e Equincea Purprea USP en metano!. Agitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solu~i~n muestr_?: 20 mg/mL de Extracto en Polvo de
Equ1nacea Purpurea en metano!. Agitar hasta dispersar,
someter a ultrasonido durante 5 minutos y centrifugar.
Usar el sobrenadante.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adso~bente: Mezcla de gel de slice para cromato-
graf1a con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L de Solucin estndar C
y Solucin muestra, y 2 L de Solucin estndar A y
Solucin estndar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado. ' ciclohexano y cido frmico (8: 2: 1: O, 3)
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y cido frmico (5:3:1:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B
Solucin estndar C y Solucin muestra '
Aplicar las_ Muestras en bandas a una placa para cro-
malograf1a en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
rada. Retirar la placa de la cmara, calentar a 100
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras est
t1b1a con Reactivo de derivatizacin, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm.
Suplementos Dietticos / EquinccJ 6453
Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presenta
una banda fJlllllfJal aLul en el lerLio inferior del cro-
matograma debida a equinacsido. La Solucin e>tn-
Jw B p1 e)e1 ita dos bandciS Je l.ul0r dLul apru.><in 1ada-
rnente en). parte media del cromatograma debidas a
ac1do caftanco (valor Rr inferior) y cido clorognico
(valor R1 superior) q~e estn. c!aramente separadas, y
una banda azul de ac1do ch1conco en el tercio superior
del cromatograma.
Criterios de aceptacin: La ms prominente de las
bandas en el cromatograma de la Solucin muestra es
una banda azul en el tercio superior del cromato9rama
a un valor R1 correspondiente al de la banda de acido
chicrico en los cromatogramas de la Solucin estndar
By la SoJ1:'cin estndar C (menos prominente en Equi-
nacea ~al1da y ausente o cas} ausente en Equincea
Angust1fol1a). La segunda mas prominente de las ban-
das en el cromatograma de la Solucin mue<;tra es una
b?nda de color azul aproximadamente en la parte me-
dia del cromatograma debida a cido caftrico corres-
pondiente a una banda en los cromatogramas 'de la
Solu.ci~n estndar ~Y. la Solucin estndar C (ausente en
Equ1n~~ea Angust1fol1a y una banda menor en Equin-
cea Pahda). El cromatograma de la Solucin muestra no
presenta_ ning~na banda a! valor Rr de equinacsido en
la Soluoon estandar A (a diferencia de Equincea Plida
Y. ~quincea Angustifolia). El cromatograma de la Solu-
oon muestra puede presentar bandas menores de color
azul correspondientes a bandas similares en el croma-
tograma de la Solucin estndar C. Una de stas se
d~be a sido clorog~ic.o a un valor R1 correspon-
diente a ac1d9 clorogernco en la Solucin estndar B.
B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER ,B-Sitosterol
USP en metano!
Solucin estndar B: 100 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Purprea USP en diclorometano.
Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: 1 00 mg/mL de Extracto en Polvo
d~ Equincea Purprea en diclorometano. Agitar hasta
dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minutos y
centrifugar. Usar el sobrenadante.
Sistema cromatowfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC)
Volum.~n de aplicacin: 5 L de Solucin estndar By
Soluoon muestra, y 2 L de Solucin estndar A en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado. '
Fase mvil: Una mezcla de tolueno, acetato de etilo
'
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 mL de meta-
no! en un frasco de vidrio de 1 00 mL y enfriarlo en
un bao de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lentamente y con cuidado 1 O mL de cido
actico y 5 mL de cido sulfrico al metano! enfriado
con hielo y mezclar bien. Dejar que la mezcla se en-
fre a temperatura ambiente, luego agregar O 5 mL de
p-anisaldehdo. '
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar _las Muestras en bandas a una capa para croma-
tograf1a en capa delgada adecuada y secar al aire.
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
rada. Retirar la placa de la cmara, secar al aire deri-
vatizar con Reactivo de derivatizacin, calentar ~ 1 00
6454 Equincca / Suplementos Dietticos U~P 38

durante 1--S mini 1tn~, dejar que se enfre y observar Tabla 1 (Cu11li11uucio11)
bajo luL visible. ----,---
Tiempo Solucin A Solucin B
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin r (min) 1 (~,Q\ 10! \ 1
\ "/O/
c-.,tandar B 1-11 e~et tld id 111..s prominente de las bandas
como una banda violetJ rosJdJ Jproximadamente en 1 14 60 1
40 1

la parte media del cromatograma, y justo debajo de 17 60 1 40

=F--
1

esta banda rosada, una banda violeta a un valor Rr 1 --- 1;25

inferior, similar en posicin y color a la banda de {3-
sitosterol en el cromato9rama de la Solucin estndar
A. Estas dos bandas estan claramente separadas entre
s. El cromatograma de la Solucin estndar B tambin
presenta una banda ancha violeta rosada cercana al
frente de la fase mvil. La banda de f3-sitosterol del
cromatograma de la Solucin estndar B y la banda
violeta rosada que aparece debajo estn claramente se-
paradas entre s1.
Criterios de aceptacin: La ms prominente de las
bandas del cromatograma de la Solucin muestra es
una banda violeta rosada aproximadamente en la
parte media del cromatograma, similar en posicin y
color a la banda en el cromatograma de la Solucin
estndar B (mucho menos prominente en Equincea
Angustifolia y Equincea Palida), una banda de color
violeta correspondiente a la banda de /3-sitosterol en
los cromatogramas de la Soiucin estndar A y la Solu-
cin estndar B, y una banda ancha violeta rosada cer-
cana al frente de la fase mvil, similar en posicin y
color a la banda en el cromatograma de la Solucin
estndar B. El cromatograma de la Solucin muestra no
presenta ninguna banda de color amarillo por debajo
de la banda de /3-sitosterol (a diferencia de Equincea
Angustifolia) ni una banda prominente violeta aproxi-
madamente en dos tercios del cromatograma (a dife-
rencia de Equincea Plida).
C. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al del pico de acido chicrico
de la Solucin estndar A, y el segundo de los picos ms
prominentes corresponde al del pico de cido caftrico
de la Solucin estndar B. El cromatograma de la Solucin
muestra no presenta ningn pico o presenta un pico mu-
cho menor al tiempo de retencin correspondiente al
pico de equinacsido en el cromatograma de la Solucin
estndar D, todos los picos segn se obtienen en la
prueba de Contenido de Fenoles Totales.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
Disolvente: Alcohol y agua (7:3) , pecto a la materia seca
Solucin estndar A: 30 g/mL de ER Acido Chicrico
USP en Disolvente
Solucin estndar B: 20 g/mL de ER cido Caftrico
USP en Disolvente
Solucin estndar C: 20 g/mL de ER cido Clorog-
nico USP en Disolvente
Solucin estndar D: 20 g/mL de ER Equinacsido
USP en Disolvente
Solucin muestra: Transferir 60 mg de Extracto en
Polvo de Equincea Purprea a un matraz de fondo re-
dondo equipado con un condensador. Agregar 25 mL
de Disolvente y calentar bajo reflujo, agitando mecnica-
mente, durante 1 5 minutos. Centrifugar o pasar a
travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45,,Llm o menor.
Solucin A: Acido fosfrico (O, 1 en 1 00) en agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: VPr la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo 1
Solucin A Solucin B
lmin) 1 /o) - -.i-----
/o)
o 1 90 10
13 1 78 22
90 10
90 10
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% para el
pico de cido chicrico en inyecciones repetidas, So-
lucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar D y Solucin
muestra
Calcular, por separado, el porcentaje de cido caftrico
(C13H129), cido chicrico (CnHrn012) y cido cloro-
gnico (C15H1s9) en la porcin de Extracto en Polvo
de Equincea Purprea tomada:
Resultado= (ru/rs) x (CdCu) x 100
ru = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = respuesta del pico del analito pertinente de la
Solucin estndar correspondiente
Cs = concentracin del analito pertinente en la
Solucin estndar correspondiente (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de
Equincea Purprea en la Solucin muestra
(mg/rnL)
Calcular el porcentaje de fenoles totales en la porcin
de Extracto en Polvo de Equincea Purprea tomada,
sumando los percentajes individuales calculados.
Criterios de aceptacin: No menos de 4,0% con res-
,
CONTENIDO DE ISOBUTILAMIDAS DEL ACIDO
DODECATETRAENOICO
Solucin estndar A: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Equincea Purprea USP en metano!. Disolver
usando ultrasonido y agitando durante 1 O minutos.
Despus de diluir, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
S9lucin estndar B: 1 O g/ml de ER lsobutilamida del
Acido 2f,4E-Hexadienoico USP en metano!
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 500 mg
de Extracto en Polvo de Equincea Purprea, pesados
con exactitud, a un mJtraz volumtrico de 1 00 ml.
Agregar 80 ml de metano! y someter a ultrasonido du-
rante 30 minutos. Enfriar a temperatura ambiente y di-
luir con metano! a volumen. Pasar a travs de un filtro
de membrana con un tamao de poro de 0,45 ~1m o
menor.
Fase mvil: Acetonitrilo y agua (55:45)
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf10 <621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm >' 25 cm; relleno Ll de 5 pm
TcmpcrJturu de la co!urnna: 30
Velocidad de flujo: 1, 'i mi ./min
Volumen de inyeccin: 25 ftL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equincea Purprea USP.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilamidas del cido dodecatetraenoico, Solucin es-
tndar A
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
isobutilamida del cido 2f,4f-hexadienoico, Solucin
estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
el pico de isobutilamida del cido 2f,4f-hexadienoico
en inyecciones repetidas, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Identificar los picos debidos a isobutilamida del cido
2E,4E,8Z, 1 Of-dodecatetraenoico e isobutilamida del
cido 2E,4E,8Z, 1 OZ-dodecatetraenoico en el cromato-
grama de la Solucin muestra en comparacin con el
cromalograma de la Solucin estndar A. Medir las
reas de los picos pertinentes.
Calcular el porcentaje de isobutilamidas del cido do-
decatetraenoico en la porcin de Extracto en Polvo
de Equincea Purprea tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x F x 1 00
ru = suma de las respuestas de los picos de los
analitos pertinentes de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de la Solucin estndw B
C = concentracin de ER lsobutilamida del Acido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solucin
e~tndar B (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de
Equincea Purprea en la Solucin muestra
(mg/ml)
F = factor de respuesta para convertir la
isobutilamida del acido 2f,4f-hexadienoico
en isobutilamidas del cido
dodecatetraenoico, 1,353
Criterios de aceptacin: No menos de 0,025% con
respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 pg/g
Cadmio: No ms de 0,5 pg/g
Plomo: No ms de 5,0 ,ug/g
Mercurio: No ms de 1,0 pg/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 10 4 ufc/g. El recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 1 ufc/g. , (placas para HPTLC)
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de SaJmonella spp. y Escherichia coli.
EXTRACTOS BOTANICOS, Disolventes Residuales (565): Cum-
ple con los requisitos.
Suplementos Dietticos / Equincea 6455
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1 g
Anlisis: SccJr !J /'duc:;tra J 1 05, durJntc 2 horas.
Criterios de aceptacin: No mis ele 'i,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz, en un lugar fresco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn, y despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta a partir de las que se prepar el artculo. Si se
deriva de raz y de partes areas, indicar los porcentajes
correspondientes de cada uno. Etiquetar indicando el
contenido de fenoles totales e isobutilamidas del cido
dodecatetraenoico. La etiqueta incluye una advertencia
que indica que la Equincea Purprea puede causar reac-
ciones alrgicas espordicamente, erupciones cutneas o
agravar el asma. Cumple con los requisitos de Extractos
Botnicos (565), Etiquetado.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER cido Caftrico USP
ER cido Chicrico USP
ER cido Clorognico USP
ER Extracto en Polvo de Equincea Purprea USP
ER Equinacsido USP,
ER lsobutilamida del Acido 2f,4f-Hexadienoico USP
ER f:l-Sitosterol USP
Equincea Purprea, Partes Areas
DEFINICIN
Las Partes Areas de Equincea Purprea estn compuestas
por las partes areas de Echinacea purpurea (L.) Moench
(Fam. Asteraceae). Se cosecha durante la etapa de flora-
cin. Contiene no menos de 1,0% de la suma de cido
caftrico (C11H1,0o) y cido chicrico (CnHrn012), y no
menos de 0,01 % de isobutilamidas del cido dodecate-
traenoico (C1r,H,,NO), calculado con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de cido chicrico y ausencia de
equinacsido
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Equinacsido
USP en metano! ,
Solucin estndar s, 0,2 mg/mL de ER Acido Caftrico
USP, 0,,1 mg de ER Acido Clorognico USP y 0,2 mg/mL
de ER Acido Chicrico USP en metanol
Solucin estndar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Purprea USP en metanol. Agitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Partes Areas de
Equincea Purprea reducidas a polvo fino a un tubo de
centrfuga, agregar 1 O mL de metanol, mezclar bien y
someter a ultrasonido durante 1 O minutos. Centrifugar
y usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de part1cula de 5 pm
Volumen de aplicacin: 5 pL de Solucin estndar C y
Solucin muestra, y 2 pL de Solucion estandar A y Solu-
cin estndar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33%, usando un dis-
positivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y cido frmico (5:3:1 :1)
6456 Equinacea / Su,nlrmrntm DiPtPticm
Distancia de desarrollo: 6 crn
Reactivo de derivatizacin: 5 rng/mL de difcnilbori-
nato de 2-aminoelilo en acetato de etilo
Anli~i~
Muestras: Solucin estndar A. Solucin e\l<ndar R So-
lucin e;lndar C y Solucin muestra , -
Aplicar _las Muestras en bandas a una placa para croma-
tograf1a en capa delgada adecuada y secar al aire. De-
sarrollar los cromatogramas en una cmara saturada.
Retirar la placa de la cmara calentar a 1 00 durante
5 minutos, derivatizar la pla~a mientras est tibia con
React1Vo de derivatizacin, secar al aire y observar bajo
luz UV a 366 nm.
Aptitud del si~ter:na: La Solucin estndar A presenta
una banda principal azul en el tercio inferior del croma-
tograma debida a equinsido. La Solucin estndar B
presenta dos bandas principales de color azul aproxima-
da_m.ente en_ la parte media del cromatograma debidas
a ac1do caftanco (valor Rr inferior) que estn claramente
separadas y una banda azul de cido chicrico en el
tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptacin: La ms prominente de las
bandas en el cromatograma de la Solucin muestra es
una banda azul en el tercio superior del cromato9rama
a un_ valor Rr correspondiente al de la banda de acido
ch1conco en el cromatograma de la Solucin estndar B
y la Solucin estndar C. La segunda ms prominente de
las bandas en el cromatograma de la Solucin muestra
es una ba~da de color azul aproximadamente en la
parte media del cromatograma debida a cido caft-
rico, correspondiente a una banda en el cromatograma
d.e_ la Solucin estndar C. El cromatograma de la Solu-
c1on. mu~stra no presenta ninguna banda al valor Rr de
equinacos1do en la Solucin estndar A (a diferencia de
Equincea Plida y de Equincea Angustifolia). El croma-
tograma de la Solucin muestra presenta bandas meno-
res de color azul correspondientes a bandas similares en
el cromatograma de la Solucin estndar C. Una de es-
tas bandas se debe a cido clorognico a un valor Rr
ccmespondiente a cido clorognico en la Solucin es-
tandar B. El cromatograma de la Solucin muestra pre-
senta una banda de color rojo debida a clorofila cer-
cana al frente de la tase mvil.
B._. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
oon muestra corresponde al del pico de cido chicrico
de la .solucin estndar A y el segundo de los picos ms
prominente: corr~sponde al del pico de cido caftrico
en la Soluoon estandar B. El cromatograma de la Solucin
n:uestra no presenta o presenta un pico mucho menor al
t1~mpo de retencin correspondiente al pico de equina-
cos1do en el cromatograma de la Solucin estndar C to-
dos los p,icos segn se obtienen en la prueba de cor:te-
nido de Acido Chicrico y Acido Caftrico.
C. Los t.i~mpos de ret~ncin de los picos pertinentes de
la Soluoon muestra, pr~nc1palmente debidos a los picos de
las 1sobutllam1das del ac1do dodecatetraenoico, corres-
ponden a los de la Solucin estndar A, segn se obti~
nen en la prueba de Contenido de lsobutilamidas del Acido
Dodewtetraenoico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ,\croo CHICRICO V CIDO CAFTRICO
Solucin A: Acido fosfrico (O, 1 en 100) en agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
78
---- --- 14 __ _ 60
17 5 60
USP 38
Tabla 1 ((nntinwKi(1n)
Tiempo - --.1- Solu(~~o)n A - ---_, Solu(:'._o_}n B 1
_____ J_rriin_) ,,
.___ _ _1,__,8'------L,- ___9_0____ -- _)_ 1o - --1
1-----J"-'U'-_ ______J ______ ____'i_Q__ -------'-------'-1"-0_ __
Disolvente: Alcohol y agua (7:3)
Solucin estndar A: 30 g/mL de ER cido Chicrico
USP en Disolvente
Solucin estndar B: 20 g/mL de ER cido Caftrico
USP en Disolvente
Solucin estndar C: 20 g/mL de ER Equinacsido
USP en Disolvente
Solucin muestra: Transferir aproximadamente
125 mg, pesados con exactitud, de Partes Areas de
Equincea Purprea reducidas a polvo fino (capaz de
pasar a travs de un tamiz de malla 40) a un matraz de
fondo redondo equipado con un condensador. Agregar
25,0 .m.L de Disolvente y calentar bajo reflujo, agitando
mecanica~ente, d~rante 15 minutos. Centrifugar o pa-
sar a traves de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 330 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 35)
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0% para
el pico de cido chicrico en la Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B So-
lucin estndar C y Solucin muestra '
Calcular, por separado, los porcentajes de cido caft-
nco (C13H129) y cido chicrico (C22H 18 01 2) en la
porcin de Partes Areas de Equincea Purprea
tomada:
Resultado = (ru/rs) x C1 x (V!W) x 100
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin estndar correspondiente
C1 = concentracin del analito pertinente en la
Solucin estndar correspondiente (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso d_e las Partes Areas de Equincea
Purpurea tomadas para preparar la Solucin
muestra (mg)
C?l~ular el porcentaje de la _suma de cido chicrico y
ac1do caftanco en la porc1on de Partes Areas de
Equincea Purprea tomada, sumando los porcentajes
individuales calculados.
Criterios de aceptacin: No menos de 1,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTENIDO DE ISOBUTILAMIDAS DEL CIDO
DODECATETRAENOICO
Fase mvil: .Acetonitrilo y agua (55:45)
Solucin estndar A: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Equinacea Purprea USP en metanol. Disolver, some-
tiendo a ultrasonido y agitando durante 1 O minutos.
Despus de diluir, pasar a travs de un filtro de mem-
bran?. con u_n tamao de poro de 0,45 m o menor.
Soluc1on estandar B: 1 O uo/mL de ER lsobutilamida del
Acido 2E,4E-Hexadienoico SP en metanol
Solucin mu_estra: Transfe_rir aproxir:iadamente 2,5 g
de Partes Aereas de Equinacea Purpurea reducidas a
polvo tino (capaz de pasar a travs de un tamiz de
USP 38
malla 40). pesados con exactitud, a un matraz de fondo
redondo. Agregar 80 mL de metano! y someter a reflujo
durante 30 minutos. Enfriar a temperatura ambiente y
filtrar en un matra,: volumtrico de 100 mL, usando pe-
queas porciones de metano! para enjuagar el matraz y
el filtro. Diluir con metano! a volumen. Pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equincea Purprea USP.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilamida del cido dodecatetraenoico, Solucin es-
tndar A
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para la isobutila-
mida del cido 2f,4f-hexadienoico, Solucin estndar
B llas tubulares del disco son a menudo anaranjadas, de
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
el pico de isobutilamida del cido 2f,4f-hexadienoico
en inyecciones repetidas, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Identificar los picos de los dos ismeros de las isobuti-
lamidas del cido dodecatetraenoico en el cromato-
grama de la Solucin muestra por comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar A. Medir las
reas de los picos pertinentes.
Calcular el porcentaje de isobutilamidas del cido do-
decatetraenoico en la porcin de Partes Areas de
Equincea Purprea tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/V\/) x F x 100
ru = suma de las reas de los picos de los analitos
pertinentes de la Solucion muestra
r1 = rea del pico de la isobutilamida del cido
2f,4f-hexadienoico de la Solucin estrdar B
Cs = concentracin de ER lsobutilamida del Acido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solucin
estndar B (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de las Partes Areas de Equincea
Purprea tomadas para preparar la Solucin
muestra (mg)
F = factor de respuesta para convertir la
isobutilamida del acido 2f,4f-hexadienoico
en isobutilamidas del cido
dodecatetraenoico, 1, 35 3
Criterios de aceptacin: No menos de 0,01 % de iso-
butilamidas del cido dodecatetraenoico con respecto a
la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/y
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 pg/g
M,ercurio: No ms de 1,0 g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumplen con los
requisitos.
Suplementos Dietticos / Equincea 6457
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0' ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10' ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias no excede de 10 3 ufc/q.,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Es una hierba perenne, erecta, gruesa,
pubescente y spera, normalmente de hasta 90 cm de
altura, raras veces de hasta 180 cm. Sus hojas son alter-
nas y simples; las hojas ms bajas son ms delgadas,
largas y pecioladas, ovadas a ampliamente lanceoladas;
en su mayor parte pentanervadas, agudas o acuminadas
en el pice; en la base se estrechan bruscamente y raras
veces tienen forma cordada, normalmente muy dentadas
y de 7-20 cm de longitud y de 2,5-7,5 cm de ancho; los
pecolos son en su mayor parte alados en la cspide. Las
hojas superiores son ms estrechas, a menudo completa-
mente ssiles, lanceoladas u ovado lanceoladas y normal-
mente con 3 nervaduras.
Los captulos florales son radiados, de hasta 1 5 cm de
dimetro, solitarios o en grupos pequeos y con un
pednculo largo, con 12-20 florecillas radiadas, de
color prpura, carmes o raras veces plidas; las floreci-
3,5-7,5 cm de longitud; el involucro es hemisfrico y
hundido; las brcteas son lanceoladas, extendidas o
adpresas, imbricadas en series de 2-4 y pilosas en la
superficie ms externa con mrgenes ciliados; el recep-
tculo es cnico, las escamas del receptculo son rgi-
das, espinescentes y notablemente mayores que las
florecillas del disco; la brctea es carenada y en forma
de cspide; los aquenios tienen de 3-4 mm de longi-
tud, con cuatro caras, bipiramidales y gruesos; el vi-
lano tiene una corona corta y dentada.
Microscpicas
Hoja: La hoja tiene un grosor de 200-350 m, con
una epidermis de 9-1 3 m de grosor, en gran parte
sin cloroplastos; los estomas tienen de 28-35 m, son
abundantes en :a superficie ventral y ms escasos en la
superficie dorsal; el mesfilo est claramente dividido
en parnquima en empalizada y parnquima espon-
joso. El grosor del parnquima en empalizada es de
una capa, con clulas alargadas de 50-65 m de lon-
gitud, orientadas en ngulo recto a la superficie de la
hoja, con numerosos cloroplastos. El parnquima es-
ponjoso es de 150-250 m de grosor, con clulas de
forma irregular y tiene mltiples capas celulares, pocos
cloroplastos y grandes espacios intercelulares. Los ha-
ces del floema de las nervaduras laterales dentro del
parnquima esponjoso estn unidos por una vaina de
una capa de pequeas clulas parenquimticas, con
los elementos vasculares de la nervadura central rodea-
dos por grandes clulas de parnquima. Los tricomas
uniseriados son pocos en la superficie ventral, numero-
sos es la superficie dorsal, tpicamente tricelulares, oca-
sionalmente tetra o pentacelulares, de 250-500 m de
longitud, cada uno surgiendo de una clula epidr-
mica; las paredes de las clulas epidrmicas aparecen
con un engrosamiento moderado; los vasos son varia-
dos, escalariformes, con un ancho del reticulado
variable.
Pecolo: El parnquima aparece sin cloroplastos, en va-
rias capas adyacentes a una capa de colnquima; de
':>-7 haces de floema con un tamao de vasos de pe-
queo a mediano que estn dbilmente lignificados y
embebidos en el parnquima en forma de arco; las
nervaduras aladas de la superficie superior del pecolo,
ligeramente hueco, son marginales.
Inflorescencias: Las clulas epidrmicas de las floreci-
llas radiadas son cuadradas, de 50 m, con una pared
6458 Equincea / \uplPmPntm Oiettiw<;
celular, en forma de rosario, transparente; diversos ele-
mentos de las Asterceas muestran inflorescencias; los
numermos tricomas articulados multicelulares de las
hr;\rtea' de! involucro tienen de 500 800 m de Ion
qitud; las secciones tangenciales de las pleas con nu-
merosos haces de fibras tienen de 10-15 m de di-
metro y de 100-150 m de longitud; las paredes
celulares son delgadas. La epidermis de las florecillas
radiadas es de color rojizo a violeta; las clulas epidr-
micas del final de la corola forman papilas redondea-
das; est presente un estigma de celulas papilares; los
granos de polen de las Asterceas son de 20-30 m y
esfricos con una exina rugosa.
El oxalato de calcio est ausente; los cristales de inu-
,lina y grnulos de alll)idn son raros.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(?61): No ms de 3,0%
PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1 g de material vegetal en polvo
Anlisis: Secar la Muestra.
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 12%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No,ms de 10,0%, deter~inadas en 3 g , Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu-
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 2,5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en envases im-
permeables y resistentes a la luz, a temperatura ambiente
controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn, y despus de la denominacin oficial, las partes de
la r;>lanta contenidas en el artculo.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~cido Clorognico USP
ER Acido Caftrico USP
ER cido Chicrico USP
ER Equinacsido USP,
ER lsobutilamida del Acido 2E,4f-Hexadienoico USP
ER Extracto en Polvo de Equincea Purprea USP
Raz de Equincea Purprea
DEFINICIN
La Raz de Equincea Purprea est formada por las races y
el rizoma secos de Echinacea purpurea (L.) Moench (Fam.
Asteraceae). Se cosecha en el otoo despus de tres aos
o ms de crecimiento. Contiene no menos de 0,5% de
fenoles totales, calculado con respecto a la materia seca
como la suma de cido caftrico (C 13 H129), cido chic-
rico (C22H1s12) y cido clorognico (C16H1809). Contiene
no menos de 0,025% de alcamidas, calculado como iso-
butilamidas del cido dodecatetraenoico (C 16H2sNO).
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de cido chicrico y ausencia de
equinacsido
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Equinacsido
USP en metanol , USP en metano!
Solucin estndar B: 0,2 mg/mL de ER Acido Caft-
rico USP, O, 1 mg/ll)L de ER Acido Clorognico USP y
0,2 m.9/mL de ER Acido Chicrico USP en metanol
Solucion estndar C: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Purprea USP en metano!. Agitar
hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5 minu-
tos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Raz de Equincea
Purprea reducida a polvo fino a un tubo de centr-
fuga, agregar 1 O mL de metanol, mezclar bien y some-
ter a ultrasonido durante 1 O minutos. Centrifugar y
usar el sobrenadante.
USP 38
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf1a 621 ), Cromatografo t'll Copa Dt'l-
gada.)
/\.dsorbcntc: ~v1cLclu dt_: gel de sflicc para cro1T1ato-
grafil rnn un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L de Solucin estndar C
y Solucin muestra, y 2 pL de Solucin estndar A y
Solucin estndar B en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando
un dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metil etil
cetona, agua y cido frmico (5:3:1 :1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B,
Solucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada y secar al aire.
rada. Retirar la placa de la cmara, calentar a 1 00
durante 5 minutos, derivatizar la placa mientras est
tibia con Reactivo de derivatizacin, secar al aire y ob-
servar bajo luz UV a 366 nm .
Aptitud del sistema: La Solucin estndar A presenta
una banda principal azul en el tercio inferior del cro-
matograma debida a equinacsido. La Solucin estn-
dar B presenta dos bandas principales de color azul
aproximadamente en la parte media del cromato-
grama debidas a cido caftrico (valor Rr inferior) y
acido clorognico (valor Rr superior) que estn clara-
mente separadas, y una banda azul de cido chicrico
en el tercio superior del cromatograma.
Criterios de aceptacin: La ms prominente de las
bandas en el cromatograma de la Solucin muestra es
una banda azul en el tercio superior del cromato9rama
a un valor R, correspondiente al de la banda de acido
chicrico en los cromatogramas de la Solucin estndar
B 'j la Solucin estndar C (menos prominente en Equi-
nacea Plida y ausente o casi ausente en Equincea
Angustifolia). La segunda ms prominente de las ban-
das en el cromatograma de la Solucin muestra es una
banda de color azul aproximadamente en la parte me-
dia del cromatograma debida a cido caftrico, corres-
pondiente a una banda en el cromatograma de la So-
lucin estndar C (ausente en Equincea Angustifolia y
una banda menor en Equincea Plida). El cromato-
grama de la Solucin muestra no presenta ninguna
banda al valor Rr del equinacsido en la Solucin estn-
dar A (a diferencia de Equincea Plida y Equincea
Angustifolia). El cromatograma de la Solucion muestra
puede presentar bandas menores de color azul corres-
pondientes a bandas similares en el cromatograma de
la Solucin estndar C. Una de stas se debe a cido
clorognico a un valor R, correspondiente a cido clo-
rognico en 19 Solucin estndar B.
8. CROMATOGRAFIA EN (APA DELGADA
Presencia de alquilamidas
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER /3-Sitosterol
Solucin estndar B: 1 00 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Equincea Purpurea USP en diclorometano.
Agitar hasta dispersar, someter a ultrasonido durante 5
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 1 g de Raz de Equincea
Purprea reducida a polvo fino a un tubo de centr-
fuga, agregar 1 O rnL de diclorometano, mezclar bien y
someter a ultasonido durante l O minutos. Centrifuydr
y usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
USP 38 <;u,nlemrntm DietPticos / Equincea 6459

Adsorbente: Gel de slice para cromatoqrafa con un COMPOSICIN

tilmilo promedio de pilt1cula de 5 pm (placJs pJrJ CONTENIDO DE FENOLES TOTALES
HPTLC) Solucin A: cido fosfrico (O, 1 en 100) en agua
Volum_cn de aplicacin: 5 L de Solucin estndar By Solucin B: .A.cetonitri!o
Solunon muestra, y 2 L de Solucin estndar A en Fase mvil: Ver la Tabla 7.
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu- Tabla 1
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado. ' Tiempo Solucin A Solucin 8
Fase mvil: Una mezcla de tolueno acetato de etilo Cmin) (%) (%)
ciclohexano y cido frmico (8: 2: i': 0,3) ' o 90 10
Distancia de desarrollo: 6 cm 13 78 22
Reactivo de derivatizacin: Colocar 85 ml de meta- 14 40
no! en_ un frasco de vidrio de 100 ml y enfriarlo en
- - - -------~---
-~------- -~-- --~----

17 5 60 40
un bano de agua con hielo y sal o en un congelador.
Agregar lentamente y con cuidado 1O ml de cido 18 90 10
actic? y 5 ml de cido sulfrico al metano! enfriado 30 90 10
ccm hielo y mezclar bien. Dejar que la mezcla se en-
fne a temperatura ambiente, luego agregar O 5 ml de Disolvente: Alcohol y gua (7:3)
p-anisaldehdo. ' Solucin estndar A: 30 g/ml de ER cido Chicrico
Anlisis USP en Disolvente
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y Solucin estndar B: 20 g/ml de ER cido Caftrico
Solucin muestra USP en Disolvente
Aplicar }as Muestras en bandas a una capa para croma- Solucin estndar C: 20 g/ml de ER cido Clorog-
tograf1a en capa delgada adecuada y secar al aire. nico USP en Disolvente
Desarrollar los cromatogramas en una cmara satu- Solucin estndar D: 20 g/ml de ER Equinacsido
rad_a. Retirar la placa de la cmara, secar al aire, deri- USP en Disolvente
vat1zar con Reactivo de derivatizacin, calentar a 1 00 Solucin muestra: Transferir 125 mg de Raz de Equin-
durante 3-5 minutos, dejar que se enfre y observar cea ~urprea reducida a polvo fino (capaz de pasar a
bajo luz visible. traves de un tamiz de malla 40) a un matraz de fondo
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin redondo equipado con un condensador. Agregar
estndar B presenta la ms prominente de las bandas 25,0 ,m_L de Disolvente y calentar bajo reflujo, agitando
como una b~nda violeta rosada aproximadamente en mecarncar:nente du~ante 15 minutos. Centrifugar o pa-
la parte media del cromatograma, y justo debajo de sar a traves de un filtro de membrana con un tamao
esta banda rosada, una banda violeta a un valor RF de poro de 0,45 m o menor.
i~ferior, similar en posicin y color a la banda de f3-
Sistema cromato9rfico
s1tosterol en los cromatogramas de la Solucin estndar (Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
A; Estas dos bandas estn claramente separadas entre Modo: HPLC
s1. El cromatograma de la Solucin estndar B tambin Detector: UV 330 nm
presenta una banda ancha violeta rosada cercana al Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
frente de la fase mvil. Temperatura de la columna: 35"
Criterios de aceptacin: La ms prominente de las Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
bandas del cromatograma de la Solucin muestra es Volumen de inyeccin: 5 L
una banda violeta rosada aproximadamente en la Aptitud del sistema
parte media del cromatograma, similar en posicin y Muestra: Solucin estndar A
col<;>r a una banda en el cromatograma de la Solucin Requisitos de aptitud
estandar B (mucho menos prominente en Equincea D~sviaci,n _estnda,r _relativa: No ms de 2% para el
A_ngustifolia y Equincea Palida), una banda de color pico de ac1do ch1conco en inyecciones repetidas So-
violeta correspondiente a la banda de /3-sitosterol en lucin estndar A '
lo~ cron;atogramas de la Solucin estndar A y la Solu-
Anlisis
oon estandar B, y una banda ancha violeta rosada cer- Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B So-
cana al frente de la fase mvil, similar en posicin y lucin estndar C, Solucin estndar D y Solucin '
col<;>r a la banda en el cromatograma de la Solucin muestra
estandar B.. El cromatograma de la Solucin muestra no Calcular, por separado, el porcentaje de cido caftrico
presenta ninguna banda de color amarillo por debajo (~1i_H129), cido chicrico (C22Hrn012) y cido cloro-
de la banda de /3-sitosterol (a diferencia de Equincea gernco (C16Hrn09) en la porcin de Raz de Equincea
Angust1fol1a) ni una banda prominente violeta aproxi- Purprea tomada:
n;adamente en los dos tercios del cromatograma (a
Resultado= (rufr,) X(; X (V/\N) X 100
diferencia de Equincea Plida).
c.. , El tiempo de retencin del pico principal de la Solu- ru ~ rea del pico del analito pertinente de la
oon muestra corresponde al del pico de acido chicrico Solucin muestra
de la _Solucin estndar A y el segundo de los picos ms r\ = rea del pico del analito pertinente de la
prominentes corresponde al del pico de cido caftrico Solucin estndar correspondiente
de la Solucin estndar B. El cromatograma de la Solucin C = concentracin del analito pertinente en la
muestra no pre;;enta ningn pie.~ o presenta un pico mu- Solucin estndar correspondiente (mg/ml)
c~o menor ~I t1e;n_po de retenc1on correspondiente al V = volumen de la Solucin muestra (ml)
pico de equinacos1do en el cromatograma de la Solucin W = peso de la Raz de Equincea Purprea tomada
estndar D, todos los picos segn se obtienen en la para prepar?r la Solucin muestra (mg)
prueba de Contenido de Fenoles Totales. Calcular el porcentae de fenoles totales en la porcin
de Raz de Equincea Purprea tomada, sumando los
porcentaes individuales calculados.
Criterios de aceptacin: No menos de 0,5% de fenoles
totales con respecto a la materia seca
6460 Equincea / Suplementos Dietticos
CONTENIDO DE ALCAMIDAS
Fase mvil: AcPtonitriio y agua (55:45)
Solucin estndar A: 5 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de Equincea PtJrf)treil l Jc:;p Pn mPtilnol f)i\olwr, 50me-
tiendo a ultrasonido y aqitando durante 1 O minutos.
espus de diluir, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
S9lucin estndar B: 1 O g/ml de ER lsobutilamida del
Acido 2f,4f-Hexadienoico USP en metanol
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Raz de Equincea Purprea reducida a polvo fino
(capaz de pasar a travs de un tamiz de malla 40) a un
matraz de fondo redondo. Agregar 80 ml de metanol y
someter a reflujo durante 30 minutos. Enfriar a tempe-
ratura ambiente y filtrar en un matraz volumtrico de
100 ml, usando pequeas porciones de metanol para
eniuagar el matraz y el filtro. Diluir con metanol a volu-
men. Pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 j, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al Cromatograma
de Referencia para alcamidas provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Equincea Purprea USP.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de iso-
butilamida del cido dodecatetraenoico, Solucin es-
tndar A
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
isobutilamida del cido 2f,4f-hexadienoico, Solucin
estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
el pico de isobutilamida del cido 2f,4f-hexadienoico
en inyecciones repetidas, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Identificar los picos de las 1 O alca midas principales en
el cromatograma de la Solucin muestra en compara-
cin con el cromatograma de la Solucin estndar A.
Medir las reas de los picos pertinentes.
Calcular el porcentaje de alcamidas en la porcin de
Raz de Equincea Purprea tomada:
Resultado= (ru/r1) x C, x (V/W) x F x 100
ru suma de las reas de los picos de los analitos
= REQUISITOS ADICIONALES
pertinentes de la Solucion muestra
r, = rea del pico de isobutilamida del cido 2f,4f-
hexadienoico de la Solucin estndar B
C, = concentracin de ER lsobutilamida del cido
2f,4f-Hexadienoico USP en la Solucin
estndar B (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de la Raz de Equincea Purprea tomada
para preparar la Solucin muestra (mg)
F = factor de respuesta para convertir la
isobutilamida del acido 2f,4f-hexadienoico
en isobutilamida del cido
dodccatetraenoico, 1, 35 3
Criterios de aceptacin: No menos de 0,025% con
respecto a la materia seca
USP 38
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: !'Jo ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
M~rcurio: No ms de 1,0 g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Las races son cilndricas y con ramifica-
ciones irregulares. La superficie externa est estriada
longitudinalmente y es de color marrn oscuro; las frac-
turas son cortas y duras. Las secciones transversales pre-
sentan una peridermis delgada y un xilema amarillento
con radios visibles. En races mas viejas, la mdula es
esponjosa, con un centro amarronado de contorno
amarillo.
Microscpicas: Los rizomas y las races en la seccin
transversal presentan una corteza externa delgada sepa-
rada de un amplio xilema por un cmbium vascular de
color marrn. El sber est compuesto por varias hileras
de clulas de paredes finas que contienen un pigmento
de color marrn. La corteza presenta canales esquizge-
nos de resina. El rizoma contiene fibras de lber y clu-
las ptreas. El xilema, con radios visibles, contiene ele-
mentos traqueales compuestos por vasos reticulados y
traqueidas (de aproximadamente 80 x 30 m) con pun-
tuaciones areoladas y paredes terminales sesgadas. Los
vasos y traqueidas estan rodeados por un parnquima
de paredes gruesas y fibras; las fibras son alargadas con
lmenes estrechos y extremos con forma de embudo
(de 20-40 m de ancho). Tambin se encuentran escle-
reidas poligonales (de aproximadamente 50 m de di-
metro). Las fibras del xilema tienen un mnimo o nin-
gn depsito de fitomelanina (a diferencia de
Equincea Angustifolia y Equincea Plida). Entre las pa-
redes adyacentes de las clulas parenguimticas del xi-
lema se encuentra una capa melanogenica. El rizoma,
con mdula, est compuesto por clulas parenquimti-
cas con puntuaciones que contienen cristales de inulina.
El almidn es escaso o est ausente y no se encuentran
cristales de oxalato de calcio.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
\?61j: No ms de 3,0%
PERDIDA POR SECADO (731 j
Anlisis: Secar una muestra a 105 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 10,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561j:
No ms de 7,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561j: No ms de 4,0%
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn, y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTAl)IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Caftrico USP
ER cido Chicrico USP
ER cido Clorognico USP
ER Extracto en Polvo de Equincea Purprea USP
ER Equinsido USP ,
ER lsobutilamida del Acido 2f,4f-Hexadienoico USP
ER /3-Sitosterol USP
USP 38
Ergocalciferol-ver Ergocalcifero/ en
Monografas Generales
Ergocalciferol, Cpsulas-ver
Ergocalcifero/, Cpsulas en Monografas
Generales
Ergocalciferol, Solucin Oral-ver
Ergoca/cifero/, Solucin Oral en Monografas
Generales
Ergocalciferol, Tabletas-ver
Ergoca/ciferol, Tabletas en Monografas
Generales
Hierro, Carbonilo-ver Hierro, Carbonita en
Monografas Generales
Hojas con Flores de Espino Blanco
DEFINICIN
Las Hojas con Flores de Espino Blanco consisten en los extre-
mos secos de las ramas con flores de hasta 7 cm de largo
de Crataegus monogyna jacq. emend Lindman. o Cratae-
gus laevigata (Poir.) DC., tambin conocido como Cratae-
gus oxycantha L. (Fam. Rosaceae). Contiene no menos de
0,6% de flavonas C-glicosiladas, expresadas como vitexina
(C21H2010), y no menos de 0,45% de flavonas 0-glicosila-
das, expresadas como hipersido (C21 H1012), calculados
con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar: O, 1 mg/ml de cido clorognico,
de rutina, de ER Hipersido USP y de ER Vitexina USP
en metanol. [NOTA-Reservar una porcin de esta solu-
cin para su uso en la prueba de Identificacin B.]
Solucin muestra: O, 1 g/ml preparados segn se in-
dica a continuacin. Reducir a polvo fino 1 O g de Hojas
con Flores de Espino Blanco. Transferir 1 g del polvo a
un matraz y agregar 1 O ml de metano!. Calentar el ma-
traz en un bao de agua mantenido a 65 durante 5
minutos, enfriar, filtrar, y usar el filtrado.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,50 mm
Fase mvil: Acetato de etilo, cido actico glacial, cido
frmico y agua (10:1, 1:1,1 :2,6)
Solucin reveladora A: Difenilborinato de 2-aminoetilo
en metanol (1 en 1 00)
Solucin reveladora B: Polietilenglicol 4000 en meta-
no! (5 en 1 00)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Proceder segn se indica en el captulo, excepto que
se debe secar la placa a 105, y rociar la placa mien-
tras est caliente con 1 O ml de Solucin reveladora A
y luego con 1 O ml de Solucin reveladora B. Dejar
que la placa se seque al aire durante 30 minutos y
observar la placa bajo luz UV de longitud de onda
larga.
Suplementos Dietticos / Espino Bl<:mco 6461
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin estndar presenta una zond de color anaranjado
intenso (a un valor Rr de 0,3) debida a rutina; una zona
iuore~cenle de cuiu1 ctLul cict1u (ct u11 valor Rr de 0,4)
debida a 3cido clorognico; una zona de color anaran-
jado amarillento (a un valor Rr de 0,55) debida a hipe-
rsido; y una zona de color verde amarillento (a un
valor Rr de 0,65) debida a vitexina. El cromatograma de
la Solucin muestra, adems de las zonas debidas a ru-
tina, cido clorognico, hipersido y vitexina, presenta
una zona de color verde amarillento (a un valor Rr de
0,35) debida a vitexina-2-ramnsido; una zona fluores-
cente de color azul claro (a un valor Rr de 0,6) debida a
espirsido; y una zona fluorescente de color azul claro
cerca del frente de la fase mvil (a un valor Rr de O, 9)
debida a cido cafeico. El cromatograma de la Solucin
muestra presenta tambin otras zonas con fluorescencia
ms dbil.
8. PROCEDIMIENTO
Solucin A: Tetrahidrofurano, acetonitrilo y metano!
(92,4:3,4:4,2)
Solucin B: Acido fosfrico al 0,5% en agua
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B
lmin\ l/o\ (%)
o 12 88
12 12 88
25 18 82
30 18 82
Solucin estndar: Usar la Solucin estndar reservada
de la prueba de Identificacin A.
Solucion muestra: Transferir 3 g de Hojas con Flores de
Espino Blanco reducidas a polvo fino a un matraz de
fondo redondo de 100 ml, agregar 60 ml de una mez-
cla de metano! y agua (4:1 ), y calentar en un bao de
agua caliente bajo reflujo durante 1 hora. Enfriar, filtrar,
y recoger el filtrado en otro matraz. Transferir el residuo
del filtrado de vuelta al matraz, agregar 40 ml de una
mezcla de metano! y agua (4:1 ), y calentar en un bao
de agua caliente bajo reflujo durante 1 O minutos. En-
friar, filtrar, y combinar el filtrado con el filtrado obte-
nido de la primera extraccin. Evaporar el disolvente de
los filtrados combinados al vaco hasta un volumen de
20 ml. Diluir la solucin resultante con una mezcla de
metano! y agua (4:1) hasta 25,0 ml. Filtrar 5,0 ml de
esta solucin a travs de una columna de extraccin de
fase slida recientemente acondicionada que contenga
360 mg de relleno L1, recoger el filtrado en un matraz
volumetrico de 1 O ml, y diluir con una mezcla de me-
tano! y agua (4: 1) a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 336 nm
Columna: 4,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura: 25'
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para cido
clorogen1co, vitexina, rutina e h1persido son 0,26;
1,0; 1, 16 y 1,4, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
[NOTA-Lo::. tiempos de retencin relativos para acetil
vitexina-2"-0-ramnsido, vitexina, isovitexina y vite-
xina-2"-0-ramnsido son 1,53; 1,0; 0,73 y 0,67,
respectivamente.]
6462 Espino Blanco / Suplementos Dietticos
Medir los tiempm rle retenrin para los picos
principab. ..
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retenc1on de
lo:; picos de cido 1...liu<::J11i1...u, vilex111a, rulina e hiper-
sido de la Solucin muestra corresponden a los de la
Solucin estndar.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE FLAVONAS C-GLICOSILADAS
Solucin A: Solucin al 0,5% de cido fosfrico en
agua
Solucin B: Tetrahidrofurano, alcohol isoproplico y ace-
tonitrilo (10:8:3)
Fase mvil: Solucin A y Solucin B (22:3)
Solucin estndar: 0,3 mg/mL de ER Vitexina USP en
Solucin B, calentando si fuera necesario
Solucin muestra: Reducir a polvo fino 100 g de Hojas
con Flores de Espino Blanco. Transferir aproximada-
mente 4 g del polvo, pesados con exactitud, a un apa-
rato de extraccin continua equipado con un matraz
que contenga 80 mL de metano! y extraer la muestra
de prueba durante 5 horas. Enfriar, retirar el matraz, y
evaporar el disolvente del extracto al vaco hasta 40 ml.
Transferir esta solucin a un matraz volumtrico de
50 mL y diluir con metano! a volumen. Transferir
10,0 mL de la solucin a un matraz adecuado equipado
con un condensador de reflujo, agregar 4 mL de cido
clorhdrico al 25%, y calentar el matraz bajo reflujo en
un bao de agua a 65 durante 90 minutos. Enfriar, ,
transferir el contenido del matraz a un matraz volume-
trico de 50 mL y diluir con metanol a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 336 nm
Columna: 4 mm x 1O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 3000 platos
tericos
Factor de asimetra: 0,8-2
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de flavonas C-glicosiladas, .~xpresada.s
como vitexina (C21H2010), en la porc1on de Hojas con
Flores de Espino Blanco tomada:
Resultado = (Cs/Cu) x (ru/rs) x 100
C = concentracin de ER Vitexina USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin de Hojas con Flores de Espino
Blanco en la Solucion muestra (mg/mL)
.Lru = suma de las reas de los picos de vitexina e
isovitexina, con un tiempo de retencin
relativo de aproximadamente 1,0 y 0,85,
respectivamente, en el cromatograma de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de vitexina de la Solucin
estndar
Criterios de aceptacin: No menos de 0,6% de flavo-
nas C-glicosiladas, expresadas como vitexina (C21H2010)
con respecto a la materia seca
CONTENIDO DE FLAVONAS 0-GLICOSILADAS
Fase mvil: Metanol, cido fosfrico y agua
(100:1:100) . nas principales ligeramente prominentes. Las hojas de
Solucin estndar: 0,05 mg/mL de ER Quercet1na USP
en metanol
Solucin muestra: Proceder segn se indica en la Solu-
cin muestra en Contenido de Flavonas C-Glicosiladas, ex-
USP 38
cepto que se debe usar 1 mL de cido clorhdri~o. al
2.'>% durante 60 minutos en lugar de 4 mL de ac1do
clorhdrico al 25% durante 90 minutos.
Sistema cromato9ratico
(Ver Cromotogmf1u i621 \, Ap/i/rnl dt'i Sislt'rnu.)
Modo: HPLC
Detector: UV 370 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O pL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 3000 platos
tericos
Factor de asimetra: 0,8-2
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Calcular el
porcentaje ~e flavonas C-glicosiladas, exp,resadas .
como hiperosido (C21H20012), en la poroon de Hojas
con Flores de Espino Blanco tomada:
Resultado = (r,i/rs) x (C/Cu) x (M,1/M2) x 100
ru = rea del pico de quercetina de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de quercetina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Quercetina USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracinde Hojas con Flores de Espino
Blanco en la Solucion muestra (mg/mL)
M,1 = peso molecular de hipersido, 464,38
M,2 = peso molecular de quercetina, 302,24
Criterios de aceptacin: No menos d~ 0,~5.% de flavo-
nas 0-glicosiladas, expresadas como h1peros1do
(C21H2012) con respecto a la materia seca
IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo JI/ (231): No ms de
20 ppme (Oficial 01-dic-2015)
Impurezas Orgnicas, , .
PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Matena
Orgnica Extraa (561 ): No ms de 8,0% de materia
lignificada ,
PROCEDIMIENTO 2: ARTCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos
de Plaguicidas (561): Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Presenta fragmentos de ramas lignifica-
das de color marrn oscuro, por lo general de 1 mm a
no ms de 2,5 mm de dimetro, con hojas pec.ioladas
alternas pequeas y a menudo con formas dec1duas, y
con numerosas flores de color blanco dispuestas en co-
rimbo. Las hojas son relativamente muy lobadas y sus
mrgenes son ligera o muy ligeramen~e a~~rrados: .La. C.
laevigata tiene hojas pinatilobadas a p1natif1das, ?1v1d1-
das en tres, cinco o siete lbulos obtusos; las hojas de
C. monogyna son casi pinatisectas con tr~s a cinco lbu-
los agudos. La superficie adaxial de la hoja es de color
verde oscuro a verde amarronado; la superficie abaxial
es ms de color verde grisceo ms claro y presenta
una densa red de venculas claramente visibles y de ve-
C. laevigata y de C. monogyna son glabras o p;esentan
tricomas aislados. Las flores consisten en un caliz tubu-
lar de color verde amarronado que termina en su parte
superior en cinco segmentos triangulares y cinco pta-
USP 38
los libres de color blanco amarillento a amarronado, re-
dondeados a ampliamente ovalados, apenas unguicula-
dos y con numerosos estambres. El ovario, unido al
cliz tubular, presenta de uno a Lres estilm largos y
consiste en el mismo n(1mero de c;irpelos, cad;i uno
con un vulo frtil. La C. monogyna presenta un estilo y
un carpelo, y la C. laevigata presenta dos o tres estilos y
carpelos.
Microscpicas: Cuando se reduce a polvo fino y se exa-
mina al microscopio, el polvo verde amarillento pre-
senta las siguientes caractersticas: tricomas de recubri-
miento unicelulares, por lo general con paredes gruesas
y lmenes amplios, casi rectos a algo curvados, con
puntuaciones en la base; fragmentos de la epidermis de
la hoja con clulas de paredes sinuosas a poligonales y
largos estomas anamocticos rodeados por cuatro a
siete clulas subsidiarias; grupos de clulas parenquim-
ticas que contienen cristales de oxalato de calcio, por lo
general de 10-20 m de largo; fragmentos de ptalos
que presentan clulas epidrmicas poligonales redon-
deadas, muy papilosas, con paredes engrosadas, cuya
cutcula presenta claramente estriaciones onduladas;
fragmentos de anteras cuyo endotecio presenta un mar-
gen arqueado y regularmente engrosado; fragmentos
de tallos que contienen clulas colenquimticas, vasos y
fibras de esclernquima lignificado, con lmenes estre-
chos; numerosos granos de polen redondeados a elp-
tico triangulares de hasta 45 m de dimetro, con exi-
nas libres y tres poros germinales.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETTICOS (2021 ): El recuento total bacte-
riano no excede de 104 ufc/g, el recuento total combi-
nado de hongos filamentosos y levaduras no excede de
1 00 ufc/g, y cumple con los requisitos de la prueba para
determinar la ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli
Y, Staphylococcus aureus. . debida a cido cafeico. El cromatograma de la Solucin
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar aproximadamente
1,0 g de Hojas con Flores de Espino Blanco reducidas a
polvo fino a 105 durante 2 horas: pierde no ms de
1 O,f)o/o de su peso. , Solucin A: Tetrahidrofurano, acetonitrilo y metanol
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 9,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en un envase
bien cerrado. Proteger de la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la r;ilanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Hipersido USP
ER Quercetina USP
ER Vitexina USP
Ho,as con Flores de Espino Blanco en
Po vo
DEFINICIN
Las Hojas con Flores de Espino Blanco en Polvo son Hojas
con Flores de Espino Blanco reducidas a polvo fino o a
polvo muy fino.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar: O, 1 mg/mL de cido clorognico,
de rutina, de ER Hipersido USP y de ER Vitexina USP
en metanol. [NOTA-Reservar una porcin de esta solu-
cin para su uso en la prueba de Identificacin B.]
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1 g de
Hojas con Flores de Espino Blanco en Polvo a un matraz
Suplementos Dieteticos / [spino Blanco 6463
y agregar 1 O mL de metano!. Calentar el matraz en un
baho de agua mantenido a 65 durante 5 minutos, en-
friar, filtrar, y usar el filtrado.
Adsorbente: Capa de 111eLcia de gel de slice para cro-
mJtografi dr 0.50 mm
Fase mvil: Acetato de etilo, cido actico glacial, cido
frmico y agua (10:1,1:1,1:2,6)
Solucin reveladora A: Difenilborinato de 2-aminoetilo
en metano! (1 en 1 00)
Solucin reveladora B: Polietilenglicol 4000 en meta-
no! (5 en 100)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Proceder segn se indica en el captulo, excepto que
se debe secar la placa a 105 y rociar la placa mien-
tras est caliente con 1 O mL de Solucin reveladora A
y luego con 1 O mL de Solucin reveladora B. Dejar
que la placa se seque al aire durante 30 minutos y
observar la placa bajo luz UV de longitud de onda
corta.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin estndar presenta una zona de color anaranjado
intenso (a un valor RF de 0,3) debida a rutina; una zona
de color azul claro fluorescente (a un valor RF de 0,4)
debida a cido clorognico; una zona de color anaran-
jado amarillento (a un valor RF de 0,55) debida a hipe-
rsido; y una zona de color verde amarillento (a un
valor RF de 0,65) debida a vitexina. El cromatograma de
la Solucin muestra, adems de las zonas debidas a ru-
tina, cido clorognico, hipersido y vitexina, presenta
una zona de color verde amarillento (a un valor RF de
0,35) debida a vitexina-2-ramnsido; una zona de color
azul claro fluorescente (a un valor RF de 0,6) debida a
espirsido; y una zona de color azul claro fluorescente
cerca del frente de la fase mvil (a un valor RF de 0,9)
muestra presenta adems otras zonas con fluorescencia
ms tenue.
8. PROCEDIMIENTO
(92,4:3,4:4,2)
Solucin B: Acido fosfrico al 0,5% en agua
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B
~ __ Jmin) _____ (%) (%)
~
o 12 88
12 12 88
25 18 82
30 - - 18 82
Solucin estndar: Usar la Solucin estndar reservada
de la prueba de Identificacin A.
Solucion muestra: Transferir aproximadamente 3 g de
Hojas con Flores de Espino Blanco en Polvo a un matraz
de fondo redondo de 100 ml, agregar 60 ml de una
mezcla de metano! y agua (4: 1 ), y calentar en un bao
de agua caliente bajo reflujo durante 1 hora. Enfriar,
filtrar, y recoger el filtrado en otro matraz. Transferir el
residuo del filtro nuevamente al matraz, agregar 40 mL
de una mezcla de metanol y agua (4:1), y calentar en
un bao de agua caliente bajo reflujo durante 1 O minu-
tos. Enfriar, filtrar, y combinar el filtrado con el filtrado
obtenido de la primera extraccin. Evaporar el disol-
vente de los filtrados combinados al vaco hasta un vo-
lumen de 20 mL. Diluir la solucin resultante con una
mezcla de metano! y agua (4:1) hasta 25,0 mL. Filtrar
5,0 mL de esta solucin a travs de una columna de
extraccin de fase slida recientemente acondicionada
que contenga 360 1119 de relier10 L1, recoger el filtrado
en un matraz volumtrico de 1 O ml, y diluir con una
mezcla de metanol )'. agua (4:1) a volumen.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
6464 Espino Blanco / Suplementos Dietticos USP 38

Modo: HPLC Lru = suma de las reas de los picos de vitexina e

Detector: UV 336 nm isovitexina, con un tiempo de retencin
Columna: 4,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 pm relativo de aproximadamente 1,0 y 0,85,
Temperatura: 25 - r e~fJedivd111erile, de ict Suiucin mues ira
Velocidad de flujo: 1 ml/min r., -= rea del pico de vitexina de la Solucin
Volumen de inyeccin: 5 pl estndar
Aptitud del sistema C1 = concentracin de ER Vitexina USP en la
Muestra: Solucin estndar Solucin estndar (mg/ml)
(NOTA-Los tiempos de retencin relativos para cido Cu = concentracin de Hojas con Flores de Espino
clorognico, vitexina, rutina e hipersido son 0,26; Blanco en Polvo en la Solucin muestra
1,0; 1, 16 y 1,4, respectivamente.] (mg/mL)
Requisitos de aptitud Criterios de aceptacin: No menos de 0,6% de flavo-
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% nas 0-glicosiladas, expresadas como vitexina (C21 H20010)
Anlisis CONTENIDO DE FLAVONAS 0-GLICOSILADAS
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra Fase mvil: Metanol, cido fosfrico y agua
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para acetil (100:1:100)
vitexina-2"-0-ramnsido, vitexina, isovitexina y vite- Solucin estndar: 0,05 mg/ml de ER Quercetina USP
xina-2"-0-ramnsido son 1,53; 1,0; 0,73 y 0,67, en metano!
respectivamente.] Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
Medir los tiempos de retencin de los picos muestra en Contenido de Flavonas C-Glicosi/adas, excepto
principales. que se debe usar 1 mL de cido clorhdrico al 25% du-
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de rante 60 minutos en lugar de 4 mL de cido clorhdrico
los picos de cido clorognico, vitexina, rutina e hiper- al 25% durante 90 minutos.
sido de la Solucin muestra corresponden a los de la Sistema cromato!;jrfico
Solucin estndar. (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
COMPOSICIN Detector: UV 370 nm
CONTENIDO DE FLAVONAS C-GUCOSILADAS Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Solucin A: Solucin al 0,5% de cido fosfrico en Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
agua Volumen de inyeccin: 1O pl
Solucin B: Tetrahidrofurano, alcohol isoproplico y ace- Aptitud del sistema
tonitrilo (10:8:3) Muestra: Solucin estndar
Fase mvil: Solucin A y Solucin B (22:3) Reguisitos de aptitud
Solucin estndar: 0,3 mg/ml de ER Vitexina USP en Eficiencia de la columna: No menos de 3000 platos
Solucin B, calentando si fuera necesario tericos
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 4 g de Factor de asimetra: 0,8-2
Hojas con Flores de Espino Blanco en Polvo, pesados Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
con exactitud, a un aparato de extraccin continua Anlisis
equipado con un matraz que contenga 80 ml de meta- Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
no! y extraer la muestra de prueba durante 5 horas. Medir las reas de los picos principales. Calcular el
Enfriar, retirar el matraz, y evaporar el disolvente del porcentaje de flavonas 0-glicosiladas, expresadas
extracto al vaco hasta 40 ml. Transferir esta solucin a como hipersido (C21 H2012), en la porcin de Hojas
un matraz volumtrico de 50 mL y diluir con metano! a con Flores de Espino Blanco en Polvo tomada:
volumen. Transferir 10,0 mL de la solucin a un matraz
adecuado equipado con un condensador de reflujo, Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,i/Mr2) x 1 00
agregar 4 mL de cido clorhdrico al 25%, y calentar el
matraz bajo reflujo en un bao de agua a 65 durante ru = rea del pico de quercetina de la Solucin
90 minutos. Enfriar, transferir el contenido del matraz a muestra
un matraz volumtrico de 50 ml, y diluir con metano! a r5 = rea del pico de quercetina de la Solucin
volumen. estndar
Sistema cromato!Jrfico Cs = concentracin de ER Quercetina USP en la
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) Solucin estndar (mg/ml)
Modo: HPLC Cu = concentracin de Hojas con Flores de Espino
Detector: UV 336 nm Blanco en Polvo en la Solucin muestra
Columna: 4 mm x 1 O cm; relleno L1 (mg/ml)
Velocidad de flujo: 1 ml/min M,, = peso molecular de hipersido, 464,38
Volumen de inyeccin: 5 pL M, 2 = peso molecular de quercetina, 302,24
Aptitud del sistema Criterios de aceptacin: No menos de 0,45% de flavo-
Muestra: Solucin estndar nas 0-glicosiladas, expresadas como hipersido
Requisitos de aptitud (C21 H10012)
Eficiencia de la columna: No menos de 3000 platos
tericos IMPUREZAS
Factor de asimetra: 0,8-2 Impurezas Inorgnicas
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis Eliminar lo siguiente:
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Calcular el METALES PESADOS, Mtodo JI/ (231): No ms de
porcentaje de flavonas C-glicosiladas, expresadas
20 ppme (Ofiual Ol-d1c-201;
como vitexina (C21 H2010), en la porcin de Hojas con Impurezas Orgnicas, ,
Flores de Espino Blanco en Polvo tomada: PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO,Materia
Resultado = (Lr"/r,) x (Cs/C") x 100
Orgnica Extrar1a (561): No ms de 8,0% de materia
lignificada , ,
PROCEDIMIENTO 2: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos
de Plaguicidas (561 ): Cumple con los requisitos
USP 38 Suplementos Diettico~/ hpino BlarH n 6465

PRUEBAS ESPECFICAS Gluconato Ferroso, Cpsulas-ver

CARACTERSTICAS BOTNICAS
Microscpicas: Cuando se examina al microscopio, el Gluconato Ferroso, Cpsulas en Monografas
polvo verde amarillento presenta las siguientes caracte- Generales
rsticas: tricomas no glandulares uniseriados, por lo ge-
neral con paredes gruesas y lmenes amplios, casi rec-
tos a algo curvados, con puntuaciones en la base;
fragmentos de la epidermis de la hoja con clulas de Gluconato Ferroso, Solucin Oral-ver
paredes sinuosas a poligonales y estomas anomocticos
grandes rodeados por cuatro a siete clulas subsidiarias; Gluconato Ferroso, Solucin Oral en
grupos de clulas parenquimticas que contienen crista- Monografas Generales
les de oxalato de calcio, por lo general de 1 0-20 m de
largo; fragmentos de ptalos que presentan clulas epi-
drmicas poligonales redondeadas, muy papilosas, con
paredes engrosadas, cuya cutcula presenta claramente Gluconato Ferroso, Tabletas-ver
estriaciones onduladas; fragmentos de anteras cuyo en-
dotecio presenta un margen arqueado y regularmente
Gluconato Ferroso, Tabletas en Monografas
engrosado; fragmentos de tallos que contienen clulas Generales
colenquimticas, vasos y fibras de esclernquima lignifi-
cado, con lmenes estrechos; y numerosos granos de
polen redondeados a elptico triangulares de hasta 45
m de dimetro, con exinas libres y tres poros Sulfato Ferroso-ver Sulfato Ferroso en
germinales. Monografas Generales
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETTICOS (2021 ): El recuento total bacte-
riano no excede de 1 0 4 ufc/g, el recuento total combi-
nado de hongos filamentosos y levaduras no excede de
100 ufc/g, y cumple con los requisitos de las pruebas Sulfato Ferroso, Jarabe-ver Sulfato
para determinar la ausencia de Salmonella spp., Escheri- Ferroso, jarabe en Monografas Generales
cf?ia co/i y Staphylococcus aureus .
PERDIDA POR SECADO (731): Secar aproximadamente
1,0 g de Hojas con Flores de Espino Blanco en Polvo a
105 durante 2 horas: pierde no ms de 10,0% de su Sulfato Ferroso Seco-ver Sulfato Ferroso
pesp. , Seco en Monografas Generales
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 9,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en un envase Sulfato Ferroso, Solucin Oral-ver
bien cerrado. Proteger de la luz. Sulfato Ferroso, Solucin Oral en Monografas
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de Generales
la ;>lanta de donde se obtuvo el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Hipersido USP
ER Quercetina USP Sulfato Ferroso, Tabletas-ver Sulfato
ER Vitexina USP Ferroso, Tabletas en Monografas Generales

Fitonadiona-ver Fitonadiona en
Fenilalanina-ver Fenilalanina en Monografas Generales
Monografas Generales

Fitonadiona, Tabletas-ver Fitonadiona,

Fumarato Ferroso-ver Fumarato Ferroso Tabletas en Monografas Generales
en Monografas Generales

cido Flico-ver cido Flico en

Fumarato Ferroso, Tabletas-ver Monografas Generales
Fumarato Ferroso, Tabletas en Monografas
Generales
cido Flico, Tabletas-ver cido Flico,
Tabletas en Monografas Generales
Gluconato Ferroso-ver Gluconato Ferroso
en Monografas Generales
6466 Ganoderma / Suplementos DietPticos USP 38

Solucin reveladora: Una solucin de cido sulfrico

Canoderma lucidum, Cuerpo Fructfero al 1 0% en alcohol. [NOTA-Preparar en el momento de
su uso. Aqregar cido sulfrico lenta y gradualmentP a
DEFINICIN alcohol helado y mezclar bien.]
El Cuerpo Fructfero de Ganoderma lucidutn co11sisle e11 el Aptitud del sistema
cuerpo fructfero seco de Ganoderma lucidum (W. Curt.: Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Fr.) P. Karst. (Fam. Ganodermataceae). Contiene no me- Solucin estndar C
nos de 0,3% de cidos triterpenoicos, calculado con res- Requisitos de aptitud
pecto a la materia seca como la suma de cidos ganodri- Disposicin cromatogrfica: Bajo luz UV de longitud
cos A, B, C2, D, F, G y H, y cidos ganodernicos B, C y de onda larga (365 nm) y bajo luz blanca, los croma-
D. togramas presentan las disposiciones de bandas apro-
ximadamente correspondientes en color y posicin a
IDENTIFICACIN los especificados en la Tabla 7.
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA Reproducibilidad del factor de retardo (Rr): Los fac-
Solucin estndar A: 1,0 mg/mL de ER cido Ganod- tores de retardo obtenidos con la Solucin estndar A
rico A USP en alcohol y la Solucin estndar B estn dentro del 1 0% de los
Solucin estndar B: 0,3 mg/mL de ER Ergosterol USP valores especificados en la Tabla 7.
en alcohol [NOTA-Las Soluciones estndar se mantienen estables
Solucin estndar C: 50 mg/mL de ER Extracto en durante 72 horas a temperatura ambiente.]
Polvo de Cuerpo Fructfero de Ganoderma lucidum USP Anlisis
en alcohol. Someter a ultrasonido durante aproximada- Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
mente 1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante. Solucin muestra. Aplicar las muestras en bandas y se-
Solucin muestra: Someter a ultrasonido aproximada- car al aire. Desarrollar en una cmara saturada hasta
mente 1 g de Cuerpo Fructfero de Ganoderma lucidum, que el frente de la fase mvil haya recorrido aproxima-
reducido a polvo fino, en 50 mL de alcohol durante 15 damente cuatro quintos de la longitud de la placa,
minutos, centrifugar, retirar el sobrenadante y evaporar retirar la placa de la cmara, secar al aire, tratar con
hasta sequedad bajo presin reducida a 50. Disolver el Solucin reveladora, calentar durante aproximadamente
residuo en 2,0 mL de alcohol, centrifugar y usar el 5 minutos a 105- l l O y observar inmediatamente
sobrenadante. bajo luz blanca y bajo luz UV de longitud de onda
Sistema cromato9rfico larga (365 nm).
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del- Criterios de aceptacin: Bajo luz UV de longitud de
gada.) onda larga (365 nm) y bajo luz blanca, el cromato-
Modo: HPTLC grama de la Solucin muestra presenta las bandas co-
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un rrespondientes en color y valor Rr a bandas similares en
tamao promedio de partrcula de 5 m (placa para el cromatograma de la Solucin estndar C, a los valores
HPTLC). 1 Predesarrollar la placa en metano! y secar a Rr listados en Aptitud del sistema. Bajo luz blanca, el
105 durante 30 minutos. cromatograma de la Solucin muestra presenta una
Volumen de aplicacin: 2 L de Solucin estndar A y banda adicional de color violeta por encima de la
de Solucin estndar B, y 4 L de Solucin estndar C y banda de ergosterol.
de Solucin muestra en bandas de 8 mm [NOTA-La Solucin muestra se mantiene estable durante
Temperatura: Ambiente, que no exceda de 30. 72 horas a temperatura ambiente.]
Fase mvil: Una mezcla de tolueno, formiato de etilo
y cido frmico (5: 5: 0,2)
1 HPTLC Silica Gel 60 F254 son placas adecuadas, comercialmente disponibles

en EMD Millipore (p.ej., Parte N. 1.05642.0001 ).

Tabla 1
Luz UV de Longitud de Onda Larga
Factor de r------,-~=-='-'-'-'-'-'-"-.-------+--------~-==-''"-'-"""-"-"--.--------
l365 nm\ Luz Blanca
Reta rdo Solucin es- Solucin es- Solucin es- Solucin es- Solucin es- Solucin es-
Comnonente l Rr\ tndar A tndar B tndar C tndar A tndar B tndar e
Desconocido O 80 - - Verde-azulado
f-=E"-'rn,_,o"'s""te"-'ro"-'l------~---'"'-"6'--7---l-- ______
-- _____________A~z~u~I--t----~A'-"z=-'u,_,_l___+--------+---'-'A""'zu,,_,1_ _+------'-A"z"'u'--1---1

---:r=-- -
f-=D"'e""sc=-'o"'n"'o"'ci-"'d-"-o-----+------'"-'-"'-5"-0---1---- ___ -::: __ -------t---------J-'-'A"--'n,,_,ar_,,a,_._n"'1a,,_do"---l-----------t--------+--'V'-"io,,_,l>eet""a-'-"-a""z"'ul,,,_ad"-'o"-I
cido oanodrico F O 37 -
cido aanodrico D .
r-~~~~1i~~:~~~:~~=:~=:=.~~~~n~~~c~~-+----~3-'-1--+--------+------------1- ~r<:Je_:iJ_;ul_lg_o __ ----+--------+---V-'-'e"'-rd"'-e"---"'z=-'u"'la'-"d~o
r-~ci~d~o-a~a~n=od=e=,r~ic~o~8~---i 1

1- '-'1"'-~:,_, ~=:-'~'-":"-'~-"-:~" :"-'-,~'-'~n" ~- '-c~-'- -B-+- -'2

cido oanodrico A
__________--= ____
Verde a verde-
L___ - Amarillo 1

Verde a verde- ! Violet~~~;ula- -t- --------+-~=~=-"--J

- Violeld-roiiLo

t-':'-'c"'id"'o-'o,_,a"-'n"'o_,,_de"-'r-"''-'-'ni"'-co"--'-'A'----t---'<'-'-1"'-6--+---"-'-'-m"'a'-'-ri"-'lle'-'-n'-"to,,__+---=---=-----l---"!.'!me!.<a!.'.r!'.'ill~ _ ___c:!Q__I --------+-V~i='=e=ta~-a=z=u-"'la=d-"--o

cido oanodrico C2 1 f
t-':"'c"'id=-'"-'"-'n=o_,,_de"-'r-"'e'-'-'ni"'"co"'--"C~t-1_0'<'-'-1-"-3---+---=-=---+---=-=-----l-~A.,,n-"-'ar..'!a'.!.nii_g_a~do"'---L - 1 -
Violeta-ro-izo
'-"D~e"'"sc=o~n=o=ci=d-"-o_____ ___ _-_ ___J__ __:-=-_ ______ _=-=----___j-~A"'n-"-'ar..'!a!..'.nii_g_aO'.do"'---_J_- ___ =- ___! -
USP ~8 Suplementos Dietticos / Ganoderma 6467

B. HPLC dad de aproximadamente 1 gota/segundo, empleando

Anlisis: Proceder segun se indica en la prueba de Con- vaco. Enjuagar la columna con 3 ml de agua y dese-
tenido de Acidos Triterpenoicos. char el enjuague. Eluir con 2,0 ml de metanol, recoger
C.riterios de aceptacion: Ei cromatograrna de ia Suiu- el elualu en un rnatraz volumtco de 2,0 rnL, JjustJr
cin muestro presenta piros a los tiempos de retencin con metanol a volumen y mezclar bien 1
correspondientes a los de cido ganodernico C, cido [NOTA-Este mtodo puede resultar en la coelucin de
ganodrico C2, cido ganodrico G, cido ganodernico cido ganodernico A y cido ganodrico K.]
B, cido ganodrico B, cido ganodrico A, cido gano- Sistema cromato9rfico
drico H, cido ganodernico D, cido ganodrico D y (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
cido ganodrico F en el cromatograma de la Solucin Modo: HPLC
estndar B. Detector: UV 257 nm
C. HPLC Columna: 2, 1 mm x 15 cm; relleno L1 de 1,8 m
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con- Temperatura de la columna: 25
tenido de Polisacridos Hidrosolubles. Velocidad de flujo: 0,4 ml/min
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- Volumen de inyeccin: 5 L
cin muestra presenta picos a los tiempos de retencin Aptitud del sistema
correspondientes a los picos debidos a manosa, cido Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
glucurnico, dextrosa, galactosa y L-fucosa en el croma- Requisitos de aptitud
tograma de la Solucin estndar. Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
COMPOSICIN de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Cuerpo Fructfero de Ganoderma lucidum
Cambio en la redaccin: USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de
CONTENIDO DE CIDOS TRITERPENOICOS
cido ganodrico A y cido ganodrico H, Solucin
Solucin A: cido fosfrico al 0,075% en agua estndar B
Solucin B: Acetonitrilo Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
Fase mvil: Ver la Tabla 2. cido ganodrico A, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de-
terminada a partir del pico de cido ganodrico A en
Tabla 2 inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Tiempo Solucin A Solucin B Anlisis
(min) (%) (%) Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
o 80 o 20 o Solucin muestra
[NOTA-La Solucin estndar A, la Solucin estndar By
3 73 5 26 5
la Solucin muestra se mantienen estables durante 24
34 73 5 26 5 horas a temperatura ambiente.]
52 61 5 38 5 Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, la
53 80 o 20 o Solucin estndar B y el cromatograma de referencia
58 80 o 20 o provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Cuerpo
Fructfero de Ganoderma lucidum USP usado, identificar
[NOTA-Mantener la Fase mvil a 73,5% de Solucin A todos los cidos ganodricos y ganodernicos especifi-
durante un periodo suficiente para la elucin completa cados en el cromatograma de la Solucin muestra. Los
del cido ganodrico A.] , tiempos de retencin relativos aproximados, con res-
Solucin estndar A: O, 1 mg/ml de ER Acido Ganod- pecto a cido ganodrico A, se listan en la Tabla 3.
rico A USP en metano!. Someter a ultrasonido hasta di-
solver, si fuera necesario. Tabla 3
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido 40 mg de
ER Extracto en Polvo de Cuerpo Fructfero de Gano- Tiempo de Factor de
derma lucidum USP en 5 ml de alcohol y centrifugar. Retencin Respuesta
Pasar a travs de un filtro de nailon con un tamao de Ana lito Relativo Relativa
poro de 0,2 m y desechar el primer ml del filtrado. cido qanodernico e o 36 o 51
Solucin muestra: Transferir 2,0 g de Cuerpo Fructfero cido qanodrico e, o 42 1 05
de Ganoderma lucidum, reducido a polvo fino y pesado cido qanodrico G o 56 1 18
con exactitud, a un matraz de fondo redondo de cido qanodernico B --~- o 60 o 45
200 ml, agregar 75 ml de alcohol, acoplar un conden-
sador, someter a reflujo durante 45 minutos, enfriar y cido qanodrico B o 66 1 1o
filtrar. Enjuagar el matraz con dos porciones de 1O ml cido qanodrico A 1 00 1 00
de alcohol y filtrar, combinando los lavados y el filtrado. cido qanodrico H . - L02. - ._ ___ --- 1 54
---"---

Evaporar hasta sequedad bajo presin reducida y disol- cido qanodernico D 1 25 o 51

ver el residuo en aproximadamente 20 ml de alcohol. cido qanodrico D _LlL_ ------- ..... ___l,Q!L__
Transferir la solucion a un matraz volumtrico de 25 ml, cido qanodrico F 1 54 1 45
diluir con alcohol a volumen y mezclar bien. Pasar a
travs de un filtro de nailon con un tamao de poro de Calcular por separado los porcentajes de cada cido tri-
0,2 m y desechar el primer ml del filtrado. terpenoico en la porcin de Cuerpo Fructfero de Ga-
[NOTA-Para aumentar la vida til de la columna croma- noderma lucidum tornada:
togrfica, se puede emplear el siguiente procedimiento
de extraccin de fase slida. Acondicionar la columna Resultado= (ru/r,) X e X (V/V\/) X F X 100
para EFS, que contiene aproximadamente 200 mg de
relleno L1, con 5 ml de metano!, seguido de 3 ml de ru = rea del pico del analito pertinente de la
agua; no dejar que la columna se seque. Transferir Soucin muestra
2,0 ml de solucin de Cuerpo Fructfero de Gano- rs =rea del pico de cido ganodrico Ae ERR(Ol-dic-
derma lucidum en alcohol a un matraz volumtrico de 2014) de la Solucin es,tndar A
20 ml, diluir con agua a volumen y mezclar bien. Apli- Cs = concentracin de ER Acido Ganodrico A USP
car todo el volumen a la columna y eluir a una veloci- en la Solucin estndar A (mg/ml)
6468 Ganoderma / Suplementos Dietticos USP 38

V = volumen de la Solu1in muestra (mL) rantc 1 hora. Acoplar un condensador, calentar bajo re-
W - peso de CueqJu Fr ullfero de Ganoderma tluo durante 4 horas y filtrar inmediatamente. Transferir
luudum tomado para preparar la Solucin el residuo y el filtro al mismo matraz de fondo redondo
rnue:)tra (n1g) de 200 mL, agregar 60 mL de agua, calentar bajo re-
F = factor de respuesta relativa, con respecto a flujo durante 3 horas y filtrar inmediatamente. Enuagar
cido ganodrico A (ver la Tabla 2)e ERR (Ol- el matraz con tres porciones de 5 mL de agua y filtrar.
dic-2014) Combinar los filtrados y los enjuagues en un vaso de
Calcular la suma de los porcentajes de todos los cidos precipitados de 250 mL, y evaporar en un bao de
triterpenoicos especificados. agua hasta sequedad. Disolver el residuo en 5 mL de
Criterios de aceptacin agua, agregar 75 mL de alcohol, mezclar bien, dejar en
Suma de cidos triterpenoicos: No menos de O, 3% reposo a 4 durante 12 horas y centrifugar a 4000 rpm
con respecto a la materia seca durante 30 minutos. Desechar el sobrenadante y secar
el precipitado en un bao de agua. Disolver el residuo
CONTAMINANTES en agua caliente, transferir cuantitativamente a un ma-
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233) traz volumtrico de 1 O mL, enfriar a temperatura am-
Criterios de aceptacin biente, diluir con agua a volumen y mezclar bien. Cen-
Arsnico: No ms de 2,0 g/g trifugar a 4000 rpm durante 1 O minutos. Transferir con
Cadmio: No ms de 1,0 g/g exactitud 0,250 mL del sobrenadante a un vial de reac-
Plomo: No ms de 5,0 g/g- cin y a9regar aproximadamente 0,25 mL de cido tri-
1V1ercurio: No ms de 1,0 g/g fluoroacetico 4 M. Sellar el vial, calentar a 11 O durante
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An- 4 horas, enfriar a temperatura ambiente, agregar
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los 0,5 mL de metano! y evaporar hasta sequedad a 60 al
requisitos. vaco. Repetir la adicin de 0,5 mL de metano! y la sub-
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- siguiente evaporacin tres veces. Agregar O, 125 mL de
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g, agua, O, 125 mL de Solucin de estndar interno,
y el recuento de bacterias Gram-negativas tolerantes a la 0,300 mL de solucin de hidrxido de sodio O, 15 M y
bilis no excede de 1 Q3 ufc/g. , 0,50 mL de Reactivo al residuo. Sellar el vial, calentar a
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- 70 durante 30 minutos y enfriar a temperatura am-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la biente. Agregar O, 300 mL de cido clorhdrico O, 15 M y
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli. 0,65 mL de agua al vial, mezclar bien y pasar a travs
de un filtro de nailon con un tamao de poro de 0,45
PRUEBAS ESPECFICAS
m o menor.
CONTENIDO DE POLISACRIDOS HIDROSOLUBLES
Sistema cromato9rfico
Solucin A: Solucin amortiguadora de fosfato 0,05 M (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
de pH 6,0 Modo: HPLC
Solucin B: Acetonitrilo Detector: UV 250 nm
Fase mvil: Ver la Tabla 4. Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 35
Tabla 4 Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Tiempo Solucin A Solucin B Volumen de inyeccin: 1 O L
(min) (O/o) (O/o) Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
o 13_<\,() ~ -~--
16 o
Requisitos de aptitud
30 82 5 17 5 Resolucin: No menos de 1,5 entre D-lixosa y el pico
55 81 o 19 o subsiguiente ms cercano, Solucin estndar; no me-
60 81 o 19 o nos de 1,5 entre cido glucurnico y el pico anterior
61 84 o 16 o ms cercano, Solucin estndar
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
Reactivo: Solucin O, 1 M de 1-fenil-3-metil-5-pirazolona dextrosa, Solucin estndar
en metano! Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de-
Solucin de estndar interno: 0,5 mg/mL de D-lixosa terminada para el pico de dextrosa en inyecciones
en agua repetidas, Solucin estndar
Solucin madre del estndar: Solucin compuesta que Anlisis
contenga 0,20 mg/mL de ER Manosa USP, de ER Acido Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
D-Glucurnico USP y de ER Galactosa USP; 2,0 mg/mL [NOTA-La Solucin estndar y la Solucin muestra se
de ER Dextrosa USP y O, 1 O mg/mL de ER L-Fucosa USP mantienen estables durante 24 horas a temperatura
en agua. ambiente.]
Solucin estndar: Combinar O, 125 ml de Solucin Usando los cromatogramas de la Solucin estndar y el
madre del estndar con O, 125 ml de Solucin de estn- cromatograma de referencia provisto con el lote de ER
dar interno, 0,300 mL de solucin de hidrxido de sodio Extracto en Polvo de Cuerpo Fructfero de Ganoderma
O, 15 M y 0,50 mL de Reactivo en un vial de reaccin lucidum USP usado, identificar los monosacridos indi-
con tapa. Sellar el vial, calentar a 70 durante 30 minu- viduales derivatizados a aproximadamente los tiempos
tos y enfriar a temperatura ambiente. Agregar 0,300 mL de retencin relativos siguientes con respecto a dex-
de cido clorhdrico O, 15 M y 0,65 mL de agua al vial, trosa: 0,48 para manosa, 0,58 para lixosa, 0,82 para
mezclar bien y pasar a travs de un filtro de nailon con cido D-glucurnico, 1,09 para galactosa y 1,35 para L-
un tamao de poro de 0,45 m o menor. fucosa.
[NOTA-Las cantidades de analitos individuales (As) en la Calcular por separado los porcentajes de monosacridos
alcuota de O, 125 mL de la Solu<in estndar sometida derivatizados en la porcion de Cuerpo Fructfero de
a derivatizacin son aproximadamente 0,25 mg para Ganoderma lucidum tomada:
dextrosa y 0,025 mg para manosa, galactosa y cido
D-glucuronirn.] kesultado = (Ru! R,) x A, x (F/ W) x 1 00
Solucin muestra: Transferir 2,0 g de Cuerpo Fructfero
de Ganoderma lucidum, reducido a polvo fino y pesado Ru = cociente de respuesta entre los picos del
con exactitud, a un matraz de fondo redondo de analito pertinente y estndar interno de la
200 mL, agregar 60 mL de agua y dejar en reposo du- Solucin muestra
USP 38
R, = cociente de 1e~f-Jubta entre los picos del
analito pertinente y estndar interno de la
Solucin t>stndar
As = cantidad del analito pertinente en la alcuota
de la Solucin estndar sometida a
derivatizacin (mg)
F = factor de dilucin que se debe tomar en
cuenta para la alcuota de la muestra
sometida a derivatizacin (0,250 mL) con
respecto al volumen de la Solucin muestra
(10,0 mL), 40
W = peso de Cuerpo Fructfero de Ganoderma
lucidum tomado para preparar la Solucin
muestra (mg)
Calcular la suma de los porcentajes de manosa, cido D-
glucurnico, dextrosa, galactosa y L-fucosa.
Criterios de aceptacin
Suma de monosacridos: No menos de 0,7% con
respec,to a la mat~ria seca
CARACTERISTICAS BOTANICAS
Macroscpicas: La morfologa del basidiocarpo (cuerpo
fructfero) es altamente variable. La forma del pleo
(sombrero) vara de reniforme a subcircular, convexa o
cncava, de 15 cm o ms de ancho, con grosor en ca-
pas simples o mltiples (hasta 3 cm); el borde es gene-
ralmente grueso y redondeado, a veces agudo. La su-
perficie del pleo est radialmente rugosa (arrugada) y
surcada concntricamente; brillante, de color rojo-ama-
rillento a negro-ro/"izo. El estipe (tallo) con fijacin pre-
dominantemente ateral; la longitud del estipe vara de
muy corto a 10-12 cm de largo, de 1-3 cm de grosor
cilndrico, de color rojizo a casi negro, lacado (la-
queado). El himenforo (superficie porosa) es de color
blanco amarillento a amarillo tostado. Los poros son pe-
queos, de circulares a irregulares, de 4-7 por mm, de
6-200 m de dimetro, la distancia entre los ejes de
poros es aproximadamente de 260 m.
Microscpicas: El sistema hita! trimtico con hialina, de
pared delgada, con conexiones (clamps), hifales genera-
tivas septadas, de 1-4 m de dimetro, con septos limi-
tados en las conexiones, escasamente ramificadas,
abundantes en el borde de crecimiento del pleo y dise-
pimentos (particiones). Las hitas esqueletales son arbori-
formes, septadas, sin conexiones, muy largas, de 3-6
m de dimetro, escasamente ramificadas, ramificacio-
nes con crecimiento limitado en el extremo distal, con
paredes gruesas; componen la mayor parte del con-
texto (carne) y disepimentos y se originan inmediata-
mente detrs del borde de crecimiento de las hitas ge-
nerativas. Las hifas de unin del tipo "Bovista" son
septadas, sin conexiones, profusamente, ramificadas, ge-
neralmente ms delgadas y de color mas claro que las
esqueletales, de 1-3 m de dimetro. Las basidiosporas
son ovoides, de pared doble, truncadas en el pice. La
epspora es delgada, ovoide, con hialina, de 9,0-11,5 x
6,0-8,0 m; la endospora es gruesa, ovoide, de 6,5-8,5
x 5,0-6,5 m, con relativamente pocos equnulos grue-
sos y largos que soportan la epspora, a veces fundidos
formando una cresta corta.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Cuerpo Fructfero de Ganoderma luci-
dum reducido a polvo
Anlisis: Secar a 105 durante 4 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 1 7,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Cuerpo Fructfero de Ganoderma luci-
dum reducido a polvo
Criterios de aceptacin: No ms de 4,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 7 (561)
Muestra: 2-4 g de Cuerpo Fructfero de Ganoderma lu-
cidum reducido a polvo
Supiernn1fo~ OielPli<m / Canoderma 6469
Cri,terios de aceptacin:, r"fo menos de 2,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 7 (561)
Muestra: 2-4 g de Luerpo ~ruct1tero de Ganoderma iu-
cidum reducido a polvo
Criterios de aceptacin: No menos de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte del
ho~go de la que deriv el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Dextrosa USP
ER Ergosterol USP
ER L-Fucosa USP
ER Galactosa USP
ER cido Ganodrico A USP
ER Extracto en Polvo de Cuerpo Fructfero de Ganoderma
lucidum USP
ER cido D-Glucurnico USP
ER Manosa USP
Ganoderma lucidum, Cuerpo Fructfero
en Polvo
DEFINICIN
El Cuerpo Fructfero de Ganoderma lucidum en Polvo es
Cuerpo Fructfero de Ganoderma lucidum seco, reducido a
polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de 0,3%
de cidos triterpenoicos, calculado con respecto a la ma-
teria seca como la suma de cidos ganodricos A, B, C2,
D, F, G y H, y cidos ganodernicos B, C y D.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA ,
Solucin estndar A: 1,0 mg/mL de ER Acido Ganod-
rico A USP en alcohol
Solucin estndar B: 0,3 mg/mL de ER Ergosterol USP
en alcohol
Solucin estndar C: 50 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Cuerpo Fructfero de Ganoderma lucidum USP
en alcohol. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Someter a ultrasonido aproximada-
mente 1 g de Cuerpo Fructfero de Ganoderma lucidum
en Polvo, en 50 mL de alcohol durante 15 minutos,
centrifugar, retirar el sobrenadante y evaporar hasta se-
quedad bajo presin reducida a 50. Disolver el residuo
en 2,0 mL de alcohol, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Modo: HPTLC
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC). 1 Predesarrollar la placa en metano! y secar a
105 durante 30 minutos.
Volumen de aplicacin: 2 ~tL de Solucin estndar A y
de Solucin estndar B, y 4 L de Solucion estndar C y
de Solucin muestra en bandas de 8 mm
Temperatura: Ambiente, que no exceda de 30.
Fase mvil: Una mezcla de tolueno, formiato de etilo
y cido frmico (5:5:0,2)
' HPTLC Silica Gel 60 F,.,, son placas adecuadas, comercialmente disponibles
en EMD Millipore (p.ej., Parle N. 1 .05642.0001 ).
6470 GanodermJ /Suplementos Det<5tios USP 38

Solucin reveladora: Una solucin de cido sulfrico cido qanodrico F en el cromatograma de la Solucin
al 10% e11 cJicohol. [Nu1A-Preparar en el momento de estndar B.
su uso. Agregar cido :ulfrico. lenta y gradualmente a C. HPLC
ulchvl heiaJu y 11 leLLldf Ulell. J Analisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
Aptitud del sistema k11iJu ele Polisocridos Hidrosolublcs.
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
Solucin estndar C cin muestra presenta picos a los tiempos de retencin
Requisitos de aptitud correspondientes a los picos debidos a manosa, cido
Disposicin cromatogrfica: Bajo luz UV de longitud glucurnico, dextrosa, galactosa y L-fucosa en el croma-
de onda larga (365 nm) y bajo luz blanca, los croma- tograma de la Solucin estndar.
togramas presentan las disposiciones de bandas apro-
ximadamente correspondientes en color y posicin a COMPOSICIN
los especificados en la Tabla 7.
Reproducibilidad del factor de retardo (Rr): Los fac- Cambio en la redaccin:
tores de retardo obtenidos con la Solucin estndar A
y la Solucin estndar B estn dentro del 1 0% de los CONTENIDO DE CIDOS TRITERPENOICOS
valores especificados en la Tabla 7. Solucin A: cido fosfrico al 0,075% en agua
[NOTA-Las soluciones estndar se mantienen estables Solucin B: Acetonitrilo
durante 72 horas a temperatura ambiente.] Fase mvil: Ver la Tabla 2.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra Tabla 2
Aplicar las muestras en bandas y secar al aire. Desarro- Tiempo Solucin A Solucin B
llar en una cmara saturada hasta que el frente de la (min) (O/o) (O/o)
fase mvil haya recorrido aproximadamente cuatro o 80 o 20 o
quintos de la longitud de la placa. Retirar la placa de
____3________ r---- 73 5 26 5
la cmara, secar al aire, tratar con Solucin reveladora y f---

calentar durante aproximadamente 5 minutos a 34 73 5 26 5

105- l l O. Observar inmediatamente bajo luz blanca 52 61 5 38 5
y bajo luz UV de longitud de onda larga (365 nm). 53 80 o 20 o
Criterios de aceptacin: Bajo luz UV de longitud de 58 80 o 20 o
onda larga (365 nm) y bajo luz blanca, el cromato-
grama de la Solucin muestra presenta las bandas co- [NOTA-Mantener la Fase mvil a 73,5% de Solucin A
rrespondientes en color y valor Rr a bandas similares en durante un periodo suficiente para la elucin completa
el cromatograma de la Solucin estndar C, a los valores del cido ganodrico A.] ,
Rr listados en Aptitud del sistema. Bajo luz blanca, el Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Acido Ganod-
cromatograma de la Solucin muestra presenta una rico A USP en metano!. Someter a ultrasonido hasta di-
banda adicional de color violeta por encima de la solver, si fuera necesario.
banda de ergosterol. Solucin estndar B: Someter a ultrasonido 40 mg de
[NOTA-La Solucin muestra permanece estable durante ER Extracto en Polvo de Cuerpo Fructfero de Gano-
72 horas a temperatura ambiente.] derma lucidum USP en 5 mL de alcohol y centrifugar.
B. HPLC Pasar a travs de un filtro de nailon con un tamao de
Anlisis: Proceder segn se indica en id prueba de Con- poro de 0,2 m y desechar el primer mL del filtrado.
tenido de Acidos Triterpenoicos. Solucin muestra: Transferir 2,0 g de Cuerpo Fructfero
Criterios de aceptacion: El cromatograma de la Solu- de Ganoderma lucidum en Polvo, pesado con exactitud,
cin muestra presenta picos a los tiempos de retencin a un matraz de fondo redondo de 200 mL y agregar
correspondientes a los de cido ganodernico C, cido 75 mL de alcohol. Acoplar un condensador, someter a
ganodrico C2, cido ganodrico G, cido ganodernico reflujo durante 45 minutos, enfriar y filtrar. Enjuagar el
B, cido ganodrico B, cido ganodrico A, cido gano- matraz con dos porciones de 1O mL de alcohol y filtrar,
drico H, cido ganodernico D, cido ganodrico D y
Tabla 1
--- -- ------------
Luz UV de Longitud de Onda Larga
Factor de -- C365 nm) Luz Blanca
Retardo Solucin Solucin Solucin Solucin Solucin Solucin
Comoonente CR,) estndar A - estndar B estndar e estndar A -
estndar B estndar e
Desconocido o 80 -
- - t--------
- Verde-azulado - --- -
Eraosterol -- _Q,QZ_ - -
-
------------ --
Azul Azul -- Azul Azul

~.~~ +----~~----
Desconocido r-------- Anaraniado --- - Violeta-azulado
cido aanodrico ~ --- ----
-- 1 -- -
cido aanodrico D 1

cido aanodernico D o 31 - - Verde-azulado - - Verde-azulado

cido oanodrico G --
cido aanodrico B
cido aanodernico B
1
cido aanodrico H o 22 1
- Amarillo - ! -- V1oleta-roiizo
cido aanodrico A Verde a verde- Verde a verde- Violeta-
1
cido aanodernirn A o 16 amarillento iJrnJri!Jcnto
' -- dLUldd - Violeta-azulado
cido aanodricoe
cido aanodernico C o 13 -- - Anaranjado 1 - -
'--
Violeta-roiizo
Desconocido - - - Anaranjado - - -
~
USP 38 Suplementos Dietticos / Ganoderma 6471

combin.:mdo !os lavados y el filtrado. Evaporar hasta se- Tabla 3 (Conlinuacion)

quedad bajo presion reducida y disolver el residuo en
Tiempo de Factor de
aproximadamente 20 mL de alcohol. Transferir la solu- Respuesta
1

Retencin
c1on a un matraz voiumtrico de 25 rnL, diluir con ai- Relativo
Ana lito Relativa ~
col 101 a volumen y me7cli1 bien. Plsar l trJvs d(' un
filtro de nailon con un tamao de poro de 0,2 ~tm y cido udnodrico A 1 00 1 00 '
desechar el primer mL del filtrado. cido aanodrico H 1 05 __ ____.l_,,2_____
[NOTA-Para aumentar la vida til de la columna croma- cido aanodernico O 1 25 o 51
togrfica, se puede emplear el siguiente procedimiento cido aanodrico O 1 33 1 08
de extraccin de fase slida. Acondicionar la columna cido aanodrico F 1 54 1 45
para EFS, que contiene aproximadamente 200 mg de
relleno L1, con 5 mL de metano!, seguido de 3 mL de Calcular por separado los porcentajes de cada cido tri-
agua; no dejar que la columna se seque. Transferir terpenoico en la porcin de Cuerpo Fructfero de Ga-
2,0 mL de solucin de Cuerpo Fructfero de Gano- noderma lucidum en Polvo tomada:
derma lucidum en Polvo en alcohol a un matraz volu-
mtrico de 20 mL, diluir con agua a volumen y mez- Resultado = (r11/r1) x C1 x (V/W) x F x 100
clar bien. Aplicar todo el volumen a la columna y eluir
a una velocida~ de aproximadamente 1 gota/segundo, r11 = rea del pico del analito pertinente de la
empleando vac10. Enjuagar la columna con 3 mL de Solucin muestra
agua y desechar el enjuague. Eluir con 2 O mL de me- rs = rea del pico de cido ganodrico Ae ERR (Ol-dic
tano!, recoger el eluato en un matraz voumtrico de 2014) de la Solucin es,tndar A
2,0 mL, ajustar con metano! a volumen y mezclar = concentracin de ER Acido Ganodrico A USP
bien.] en la Solucin estndar A (mg/mL)
[NOTA-Este mtodo puede resultar en la coelucin de V = volumen de la Solucin muestra (mL)
cido ganodernico A y cido ganodrico K.] w = peso de Cuerpo Fructfero de Ganoderma
Sistema crornatogrfico lucidum en Polvo tomado para preparar la
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) Solucin muestra (mg)
Modo: HPLC F = factor de respuesta relativa, con respecto a
Detector: UV 25 7 nm cido ganodrico A (ver la Tabla 2)e ERR (01.
Columna: 2, 1 mm x 15 cm; relleno L1 de 1,8 m dic-2014)
Temperatura de la columna: 25 Calcular la suma de los porcentajes de todos los cidos
Velocidad de flujo: 0,4 mL/min triterpenoicos especificados.
Volumen de inyeccin: 5 L Criterios de aceptacin
Aptitud del sistema Suma de cidos triterpenoicos: No menos de 0,3%
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B con respecto a la materia seca
Requisitos de aptitud
Similitud de los crornatograrnas: El cromatograma CONTAMINANTES
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en Criterios de aceptacin
Polvo de Cuerpo Fructfero de Ganoderma lucidum Arsnico: No ms de 2,0 g/g
USP usado. Cadmio: No ms de 1,0 g/g
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de Piorno: No ms de 5,0 g/g
cido ganodrico A y cido ganodrico H, Solucin IV!ercurio: No ms de ,1,0 g/g,
estndar B ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para An-
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
cido ganodrico A, Solucin estndar A requisitos.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de- PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
terminada a partir del pico de cido ganodrico A en tal de microorganismos aerobios no excede de 1 os ufc/g,
inyecciones repetidas, Solucin estndar A y el recuento de bacterias Gram-negativas tolerantes a la
Anlisis bilis no excede de 101 ufc/g. ,
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Solucin muestra ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
[NOTA-La Solucin estndar A, la Solucin estndar By ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
la Solucin muestra se mantienen estables durante 24 PRUEBAS ESPECFICAS
horas a temperatura ambiente.] CONTENIDO DE POLISACRIDOS HIDROSOLUBLES
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, la Solucin A: Solucin amortiguadora de fosfato 0,05 M
Solucin estndar B y el cromatograma de referencia
de pH 6,0
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Cuerpo Solucin B: Acetonitrilo
Fructfero de Ganoderma lucidum USP usado, identificar Fase mvil: Ver la Tabla 4.
todos los cidos ganodricos y ganodernicos especifi-
cados en el cromatograma de la Solucin muestra. Los
tiempos de retencin relativos aproximados, con res- Tabla 4
pecto a cido ganodrico A, se listan en la Tabla 3. Tiempo Solucin A Solucin B

,- lmin) --- (%) __ (%)

----- -
Tabla 3 o 84 o ___12,Q__
~1 Tiempo~-T-----
de Factor de 30 82 5 17 5
Retencin Respuesta 55 81 o 19 o
Ana lito Relativo Relativa 60 81 o 19 o
cido aanodernico C o 36 o 51 61 84 o 16 o
cido aanodrico e, o 42 1 05
cido aanodrico G o 56 1 18 Reactivo: Solucin O, 1 M de l -fenil-3-metil-5-pirazolona
en metano!
cido aanodernico B o 60 o 45 Solucin de estndar interno: 0,5 mg/mL de D-lixosa
cido aanodrico B o 66 1 1o en agua
6472 Ganoderma / Suplementos Dietticos
Solucin madre del estndar: Solucin compuesta q11e
contenga 0,20 mg/mL de ER Manosa USP, de ER Acido
D-Glucurnico USP y de ER Galactosa USP; 2,0 mg/mL
de ER Dextrosa USP y O, 1O n19/rnL de ER L-ucosa USP
en agua.
Solucin estndar: Combinar O, 125 mL de Solucin
madre del estndar con O, 125 mL de Solucin de estn-
dar interno, 0,300 mL de solucin de hidrxido de sodio
O, 15 f'v1 y 0,50 mL de Reactivo en un vial de reaccin
con tapa. Sellar el vial, calentar a 70 durante 30 minu-
tos y enfriar a temperatura ambiente. Agregar 0,300 mL
de cido clorhdrico O, 15 f'v1 y 0,65 mL de agua al vial,
mezclar bien y pasar a travs de un filtro de nailon con
un tamao de poro de 0,45 m o menor.
[NOTA-Las cantidades de analitos individuales (As) en la
alcuota de O, 125 mL de la Solucin estndar sometida
a derivatizacin son aproximadamente 0,25 mg para
dextrosa y 0,025 mg para manosa, galactosa y cido
o-glucuronico.]
Solucin muestra: Transferir 2,0 g de Cuerpo Fructfero
de Ganoderma lucidum en Polvo, pesado con exactitud,
a un matraz de fondo redondo de 200 mL, agregar
60 mL de agua y dejar en reposo durante 1 hora. Aco-
plar un condensador, calentar bajo reflujo durante 4
horas y filtrar inmediatamente. Transferir el residuo y el
filtro al mismo matraz de fondo redondo de 200 mL,
agregar 60 mL de agua, calentar bajo reflujo durante 3
horas y filtrar inmediatamente. Enjuagar el matraz con
tres porciones de 5 mL de agua y filtrar. Combinar los
filtrados y los enjuagues en un vaso de precipitados de
250 mL, y evaporar en un bao de agua hasta seque-
dad. Disolver el residuo en 5 mL de agua, agregar
75 mL de alcohol, mezclar bien, dejar en reposo a 4
durante 12 horas y centrifugar a 4000 rpm durante 30
minutos. Desechar el sobrenadante y secar el precipi-
tado en un bao de agua. Disolver el residuo en agua
caliente, transferir cuantitativamente a un matraz volu-
mtrico de 1 O mL, enfriar a temperatura ambiente, di-
luir con agua a volumen y mezclar bien. Centrifugar a
4000 rpm durante 1 O minutos. Transferir con exactitud
0,250 mL del sobrenadante a un vial de reaccin y
agregar aproximadamente 0,25 mL de cido trifluoroa-
cetico 4 M. Sellar el vial y calentar a 11 O durante 4
horas. Enfriar a temperatura ambiente, agregar 0,5 mL
de metano! y evaporar hasta sequedad a 60 al vaco.
Repetir la adicin de 0,5 mL de metano! y la subsi-
guiente evaporacin tres veces. Agregar O, 125 mL de
agua, O, 125 mL de Solucin de estndar interno,
O, 300 mL de solucin de hidrxido de sodio O, 15 f'v1 y
0,50 mL de Reactivo al residuo. Sellar el vial, calentar a
70 durante 30 minutos y enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 0,300 mL de cido clorhdrico O, 15 f'v1 y
0,65 mL de agua al vial, mezclar bien y pasar a travs
de un filtro de nailon con un tamao de poro de 0,45
m o menor.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografw <621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 250 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 ~tm
Temperatura de la columna: 35'
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,5 entre o-lixosa y el pico
subsiguiente ms cercano, Solucin estndar; no me-
nos de 1,5 entre cido glucurnico y el pico anterior
ms cercano, Solucin estndar
Factor de asimetra: No m'> de 2,0 para el pico de
dextrosa, Solucin estndar
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de-
terminada para el pico de dextrosa en inyecciones
repetidas, Solucin estndar
USP 38
Anlisis
Muestras: SoluC1on estandar y Solucion muestra
[NOTA--La Solucin estandar y la Solucion muestra per-
manecen estabies durante 14 horas a temperatura
ambientr.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar y el
cromatograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto en Polvo de Cuerpo Fructfero de Ganoderma
lucidum USP usado, identificar los monosacridos indi-
viduales derivatizados a aproximadamente los tiempos
de retencin relativos siguientes, con respecto a dex-
trosa: 0,48 para manosa, 0,58 para lixosa, 0,82 para
cido o-glucurnico, 1,09 para galactosa y 1, 35 para L-
fucosa.
Calcular por separado los porcentajes de monosacridos
derivatizados en la porcion de Cuerpo Fructfero de
Ganoderma lucidum en Polvo tomada:
Resultado= (Ru/Rs) x As x (F/W) x 100
Ru = cociente de respuesta entre los picos del
analito pertinente y estndar interno de la
Solucin muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos del
analito pertinente y estndar interno de la
Solucin estndar
As = cantidad del analito pertinente en la alcuota
de la Solucin estndar sometida a
derivatizacin (mg)
F = factor de dilucin que se debe tomar en
cuenta para la alcuota de la muestra
sometida a derivatizacin (0,250 mL) con
respecto al volumen de la Solucin muestra
(10,0 mL), 40
W = peso de Cuerpo Fructfero de Ganoderma
lucidum en Polvo tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Calcular la suma de los porcentajes de manosa, cido D-
glucurnico, dextrosa, galactosa y L-fucosa.
Criterios de aceptacin
Suma de monosacridos: No menos de 0,7% con
respec,to a la mat~ria seca
(ARACTERISTICAS BOTANICAS: Cuando se muele, el cuerpo
fructfero tpicamente forma una masa fibrosa o se frac-
tura en diminutas tiras y no tanto en polvo fino. El sis-
tema hifal trimtico con hialina, de pared delgada, con
conexiones (clamps), hifales generativas septadas, de 1-4
m de dimetro, con septos limitados en las conexiones,
escasamente ramificadas, abundantes en el borde de cre-
cimiento del pleo y disepimentos (particiones). Las hifas
esqueletales son arboriformes, septadas, sin conexiones,
muy largas, de 3-6 m de dimetro, escasamente ramifi-
cadas, ramificaciones con crecimiento limitado en el ex-
tremo distal, con paredes gruesas; componen la mayor
parte del contexto (carne) y disepimentos y se originan
inmediatamente detrs del borde de crecimiento de las
hifas generativas. Las hifas de unin del tipo "Bovista"
son septadas, sin conexiones, profusamente ramificadas,
generalmente ms delgadas y de color ms claro que las
esqueletales, de 1-3 ~tm de dimetro. Las basidiosporas
son ovoides, de pared doble, truncadas en el pice. La
epspora es delgada, ovoide, con hialina, de 9,0-11,5 x
6,0-8,0 m; la endospora es gruesa, ovoide, de 6,5-8,5
x 5,0-6,5 m, con relativamente pocos equnulos grue-
sos y largos que soportan la epspora, a veces fundidos
formando una cresta corta.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
<?61): No ms de 2,0%
PERDIDA POR SECADO <731)
Muestra: 1,0 g de Cuerpo Fructfero de Ganoderma luci-
dum en Polvo ieJuciJu a uivo
USP 38
Anlisis: SPcar a 10')' durante 4 horas.
Cri,terios de aceptacin:, No 111c~ de 17,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Mue~lrd: i ,O~ dt= CueqJo FructfHo de Ganod2rma luci-
dum en Polvo reducido a polvo
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 4,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 7 (561)
Muestra: 2-4 g de Cuerpo Fructfero de Ganoderma lu-
cidum en Polvo reducido a polvo
Cri,terios de aceptacin~ No menos de 2,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 7 (561)
Muestra: 2-4 g de Cuerpo Fructfero de Ganoderma lu-
cidum en Polvo reducido a polvo
Criterios de aceptacin: No menos de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte del
ho~go de la que deriv el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Dextrosa USP
ER Ergosterol USP
ER L-Fucosa USP
ER Galactosa USP
ER cido Ganodrico A USP
ER cido D-Glucurnico USP
ER Manosa USP
ER Extracto en Polvo de Cuerpo Fructfero de Ganoderma
lucidum USP
Garcinia cambogia
DEFINICIN
La Garcinia cambogia consiste en el pericarpio seco de los
frutos de Garcinia gummi-gulta (L.) N. Robson, tambin
conocida como Garcinia cambogia (Gaertn.) Desr. (Fam.
Clusiaceae). Contiene no menos de 12% de la suma de
cido (-)-hidroxictrico y lactona de cido (-)-hidroxic-
trico, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. La Garcinia cambogia cumple con los requisitos de
Pruebas Especficas, Caractersticas Botnicas.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: El cromatograma
de la Solucin muestra presenta un pico de cido hidroxi-
ctrico a un tiempo de retencin correspondiente al de la
Solucin estnqar A, segn se obtienen en la prue!Ja de
Contenido de Acido (-)-Hidroxictrico y Lactona de Acido
(-)-Hidroxictrico. La Solucin muestra tambin presenta un
pico para lactona de cido hidroxictrico. Los picos de
cido hidroxictrico y lactona de cido hidroxictrico son
los picos principales en el cromatograma de la Solucin
muestra.
COMPOSICIN
C9NTENIDO DE CIDO, (-)-HIOROXICTRICO Y LACTONA DE
Ac1Do (-)-HID~OXICITRICO
Solucin A: Acido fosfrico al 30% en agua
Fase mvil: Disolver 1,36 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, ajustar con Solucin A a
un pH de 2,5, completar hasta 1000 ml con agua,
mezclar, filtrar, y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de Solucin A y agua (1 :9)
Solucin estndar A: Una solucin de ER (-)-Hidroxici-
trato de Calcio USP equivalente a aproximadamente
2,5 mg/mL de cido (-)-hidroxictrico en Disolvente. An-
tes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
Suplt>mMtos ()ipt(>tirm _/ Garcinia 6473
brana con un tamano de poro de 0,45 m o menor,
desechando los primeros ml del filtrado.
Solucin estndar B: 5 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de HidroxicitrJto de Garcinia USP en Disolvente. Antes
de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamano de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 5 g de
Garcinia cambogia, reducida a polvo fino y pesados con
exactitud, a un matraz de fondo redondo de 250 ml
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
50 ml de Disolvente, someter a reflujo mientras se mez-
cla en un bano de agua durante 30 minutos, dejar que
sedimente, y decantar el sobrenadante. Repetir la ex-
traccin usando cuatro porciones de 50 mL de agua,
combinar todos los extractos, enfriar, filtrar en un ma-
traz volumtrico de 250 mL, y completar con agua a
volumen. Antes de la inyeccin, pasar a travs de un
filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
cos de lactona de cido hidroxictrico y cido hidroxi-
ctrico son aproximadamente 0,9 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre lactona de cido
hidroxictrico y cido hidroxictrico, Solucin muestra
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido hidroxictrico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de cido hidroxictrico en
inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. [NOTA-La Solucin estndar A, la So-
lucin estndar B y la Solucin muestra se mantienen
estables durante 6 horas.]
Calcular los porcentajes de cido (-)-hidroxictrico y
lactona de cido (-)-hidroxictrico en la porcin de
Garcinia cambogia tomada:
Resultado = (r,,/r\) X e X (V /W) X F X 1 00
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cido hidroxiclrico de la
Solucin estndar A
Cs =concentracin de cido ( )-hidroxictrico en la
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen tina! de la Solucin muestra (ml)
W = peso de Garcinia cambogia usado para
preparar la Solucin muestra (mg)
F = factor de conversin para cada analito:
2, 1 7 para lactona de cido (-)-hidroxictrico
y 1,00 para cido (-)-hidroxictrico
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de
cido (-)-hidroxictrico y lartona de cido (-)-hidroxic-
trico: Se encuentra no menos de 1 2% con respecto a la
materia seca.
6474 Garcinia / Suplrn1Pntns Dietticos
IMPUREZAS
lmpu~ezas Inorgnicas , .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Ccmzas Insolubles en Acido
(561): Nn rns de 2,0%
METALES PESADOS, Mtodo 1111231): Nn ms de 20 ppm
Impurezas Orgnicas, , polvo fino: no ms de 3,0% y no ms de 8,0% si se
PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia
Orgnica Extraa (561): No ms de 2,0%
PROCEDIMIENTO 2: ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Los frutos frescos tienen forma esfrica
a ovalada, de 4-8 cm de altura, 3-6 cm de ancho, de
color amarillento a rosado plido cuando estn madu-
ros, parecidos a una calabaza en miniatura, con 7-13
estras profundas longitudinales, que se extienden hasta
una base elevada circular de estigma con runta ne-
gruzca, situada en el extremo hundido de fruto, que
contiene 6-8 semillas rodeadas por un arilo suculento.
El artculo farmacopeico consiste en piezas secas de pe-
ricarpio, longitudinales, de tamao y forma variable,
fuertemente curvadas hacia dentro; coriceas; speras
en la parte exterior, con arrugas irregulares, longitudi-
nalmente acanaladas; lisas en la parte interior, con lige-
ras estras y crestas longitudinales. De color marrn os-
curo a marrn negruzco; olor caracterstico; sabor agrio,
astringente, y ligeramente amargo.
Histologa
Seccin transversal del pericarpio: Presenta una
capa de epicarpio, compuesta de clulas rectangulares
a tangencialmente alargadas cubiertas con una cut-
cula delgada; mesocarpio amplio, compuesto de
100-150 hileras de clulas parenquimticas de tamao
y forma variable, las hileras exteriores estn compues-
tas de clulas relativamente ms grandes con espacios
intracelulares amplios; haces vasculares que aparecen
por todo el mesocarpio, ms hacia la zona interna; se
encuentran presentes exudados gomosos de color ma-
rrn oscuro, grnulos de almidn simples y compues-
tos y prismas de oxalato de calcio en las clulas paren-
, quimatlcas en !ocio el mesocarpio.
LIMITE DE ACIDO CITRICO
Disolvente y Sistema cromatogrfico: preparar segn
se indica en la prueqa de Contenido de Acido (-)-Hidroxi-
ctrico y Lactona de Acido (-)-Hidroxictri~o.
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de ER Acido Ctrico USP
en Disolvente. Antes de la inyeccin, pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Anlisis
Muestra: Solucin estndar
Calcular el porcentaje de cido ctrico en la porcin de
Garcinia cambogia tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = rea del pico de cido ctrico de la Solucin
muestra en la prueba de Cante.nido de Acido
(-)-Hidroxicltrico y Lactona de Acido (-)-
Hidroxiotrico (mg/rnL)
rs = rea del pico de acido ctrico de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER cido Ctrico USP en la
Solucin estndar (rng/rnL)
V = volumen final de la Solucin muestra (rnL)
W = peso de Garcinia cambogia usado para
preparar la So(ucin muestra en la prueba de
Contenido de Acido (-)-Hidroxictrico v Lactona
de cido H-ffidroxictrico (rng)
Criterios de aceptacin: No ms de 2% de cido c-
trico con respecto a la materia seca
USP 38
PRDIDA POR SECADO \731 ): Secar 2,0 q de Garcinia cam-
boqia reducida a polvo tino a l 05 durante 3 horas:
pie~de no ms de 12,0'Yo.de su peso .
ARTt(ULO~ DE ORIGEN BOTANICO, Cemzns Totnles (561 ):
Dctcrmin;irlo pn 1, O g de Gwt iuiu e urnbogia reducida a
agreg cloruro de sodio corno conservante durante la re-
coleccin de los frutos .
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Grarn negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 1 ufc/g. ,
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonclla spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la lu1 y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER (-)-Hidroxicitrato de Calcio USP
ER Acido Ctrico USP
ER Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP
Garcinia cambogia en Polvo
DEFINICIN
La Garcinia cambogia en Polvo es Garcinia cambogia redu-
cida a polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de
12% de la suma de cido (-)-hidroxictrico y lactona de
cido (-)-hidroxictrico, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. La Garcinia cambogia en Polvo cumple con los requisi-
tos de Pruebas Especficas, Caractersticas Botnicas.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: El cromatograma
de la Solucin muestra presenta un pico para cido hidro-
xictrico a un tiempo de retencin correspondiente al de
la Solucin estqndar A, segn se obtienen en la pryeba de
Contenido de Acido (-)-Hidroxictrico y Lactona de Acido
(-)-Hidroxictrico. La Solucin muestra tambin presenta un
pico para lactona de cido hidroxictrico. Los picos de
cido hidroxictrico y lactona de cido hidroxictrico son
los picos principales en el cromatograma de la Solucin
muestra.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDO (-)-HIDROXICTRICO Y LACTONA DE
CIDO H-HIDR,OXICTRICO
Solucin A: Acido fosfrico al 30% en agua
Fase mvil: Disolver 1,36 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, austar con Solucin A a
un pH de 2,5, completar con agua hasta 1000 mL,
mezclar, filtrar, y desgasificar.
Disolvente: Solucin A y agua ( 1 :9)
Solucin estndar A: Una solucin de ER (-)-Hidroxici-
trato de Calcio USP equivalente a aproximadamente
2,5 mg/mL de cido (-)-hidroxictrico en Disolvente. An-
tes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 pm o menor.
Solucin estndar B: 5 mg/rnL de ER Exlracto en Poivo
de Hidroxicitrato de Garcinia USP en Disolvente. Antes
de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 pm o menor,
desechando los primeros rnL del filtrado.
USP 38
Solucin muestra: T<Jnsfcrir aproximadamente 5 g de
Gamma rnmbogw en Polvo, re,ados con exactitud, a
un matraz de fondo redondo de 250 mL equipado con
un condensador de retluo. Agregar )0 mL de U1so/-
vcntc, '.>Omeler a reflujo rnie11L1a> se 1-r1ezcla en un bao
de agua durante 30 minutos, dejar que sedimente, y
decantar el sobrenadante. Repetir la extraccin usando
cuatro porciones de 50 mL de agua, combinar todos los
extractos, enfriar, filtrar en un matraz volumtrico de
250 mL, y completar con agua a volumen. Antes de la
inyeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 l '
Velocidad de flujo: 1,O ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
C()S_ de lactona de cido hidroxictrico y cido hidroxi-
c1tnco son aproximadamente O, 9 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de lac-
tona de cido hidroxictrico y cido hidroxictrico So-
lucin muestra ' estndar
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido hidroxictrico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terrrnnada a partir del pico de cido hidroxictrico en
inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: So/uC1on estandar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
[NOTA-La Solucin estndar A, la Solucin estndar By
la Solucin muestra se mantienen estables durante 6
horas.]
Calcular los porcentajes de cido (-)-hidroxictrico y lac-
tona de cido (-)-hidroxicltrico en la porcin de Garci-
nia cambogia en Polvo tomada:
Resultado = (ru/r,) x Cs x (V /W) x F x 100
r11 = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
r, = rea del pico de cido hidroxictrico de la
Solucin estndar A
C, =concentracin de cido (-)-hidroxictrico en la
Sol11nn estndar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Garcinia cambogia en Polvo usado
para preparar la Solucin muestra (mg)
F ~ factor de conversin para cada analito:
2, 17 para lactona dr= cido (-)-hidroxictrico
y 1,00 para cido (-)-hidroxictrico
Criterios de aceptacin: No menos de 1 2% con res-
pecto a la materia seca
IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas , ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Ceniza:; Insolubles en cido
(561 ): No ms de 2,0%
Suplementos Di2tticos / GJrciniJ 6475
METALES PESAD?S, Mtodo 111 (231 ): No ms de 20 ppm
Impurezas Organicas
PROCEDIMIENTO: ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO Mtodo
General para Anaisi<, de Reiduus de Puyuicidu; (561 /:
Cumrle con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Polvo de color marrn os-
curo; olor caractersti_co; sabo_r agrio, astrin_gente y ligera-
m~nte amargo. A_I m1croscop10 presenta celulas parenqui-
mat1cas que contienen exudados gomosos de color
marrn rojizo oscuro; las clulas parenquimticas contie-
nen grnulos de almidn simples y compuestos; prismas
de oxalato de calcio; y fragmentos de vasos anillados y
~spiralado,s. ,
LIMITE DE ACIDO CITRICO
Disolvente: Pr,eparar segn se indica en la pruebg de
Contenido de Acido (-)-Hidroxictrico v Lactona de Acido
(-)-Hidroxictrico. .
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de ER Acido Ctrico USP
en Disolvente. Antes de la inyeccin, pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Anlisis
Muestra: Solucin estndar
Calcular el porcentaje de cido ctrico en la porcin de
Garcinia cambogia en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V /W) x 100
ru = rea del pico de cido ctrico de la Soluc[n
muestra en la prueba de Conte,nido de Acido
(-)-Hidroxictrico y Lactona de Acido (-)-
Hidroxictrico
rs = rea del pico de cido ctrico de la Solucin
Cs = concentracin de ER cido Ctrico USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Garcinia cambogia en Polvo usado
para preparar la Solucin ,muestra en la
prueba de Contenido de Ac[do (-)-
Hidroxictrico y Lactona de Acido (-)-
Hidroxictrico (mg)
Criterios de aceptacin: No ms de 2% de cido c-
,trico, calculado con respecto a la materia seca
PERD_IDA POR SECADO (731 ): Secar 2,0 g de Garcinia cam-
bog1a en Polvo a 105 durante 3 horas: pierde no ms de
1 2,,0% de su peso. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
Determinado en 1,0 g de Garcinia cambogia en Polvo: no
ms de 3,0% y no ms de 8,0% si se agreg cloruro de
sodio como conservante durante la recoleccin de los
frutos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 os ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de l 0 5 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 oi ufc/g. ,
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE Ml_CROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requ1s1tos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta contenida en el artculo.
6476 Garcinia /Suplementos Diett5/irn1
ESTNDARES DE REFERENCIA USP \11)
ER (-)-Hidroxicitrato de Calcio USP
ER Acido Ctrico USP
CR [xtractu e11 Puivo de Hidroxicitrato de Garcrnia USP
Carcinia indica
DEFINICIN
La Garcinia indica consiste en el pericarpio seco de los frutos
de Garcinia indica (Thouars) Choisy (Fam. Clusiaceae).
Contiene no menos de 12% de la suma de cido (-)-
hidroxictrico y lactona de cido (-)-hidroxictrico, con res-
pecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. La Garcinia indica cumple con los requisitos de Prue-
bas Especficas, Caracters~icas Botnicas. , Solucin muestra: Transferir aproximadamente 5 g de
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de garcinol en alcohol
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Garcinia indica, reducida a polvo fino, a un aparato
de Soxhlet, agregar 1.00 mL de alcohol, y extraer du-
rante 6 horas. Filtrar y concentrar al vacro hasta aproxi-
madamente 1 O ml. [NOTA-Usar un dedal con un ta-
mao adecuado para que el volumen de alcohol usado
en la extraccin en el aparato de Soxhlet sea al menos
el doble del volumen del dedal.]
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 5 m (placas
para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L, en bandas de 8 mm
Fase mvil: Tolueno, acetato de etilo y cido frmico
(4:1 :0,5)
Solucin reveladora: Una mezcla de vainillina al 1 % en
alcohol y cido sulfrico al 10% en alcohol (1 :1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 >). Usar una cmara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
longitud de la placa. Retirar la placa de la cmara,
secar, rociar con Solucin reveladora, calentar durante
5-1 O minutos a aproximadamente 105, y observar
bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una banda de color gris verdoso
debida a garcinol a un valor RF de aproximadamente
0,6, que corresponde en posicin y color a la banda
principal en el cromatograma de la Solucin estndar. La
Solucin muestra presenta las siguientes bandas adicio-
nales: dos bandas de color prpura, dos bandas de
color gris verdoso, dos bandas de color azul y una
banda prpura a valores Rr de aproximadamente 0,31;
0,34; 0,37; 0,47; 0,54; 0,83 y 0,93, respectivamente.
Se pueden observar otr~s bandas en la Solucin muestra.
c. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC: El cromatograma
de la Solucin muestra presenta un pico para cido hidro-
xictrico a un tiempo de retencin correspondiente al de
la Solucin estqndar A, segn se obtienen en la pr_weba de
Contenido de Acido (-)-Hidroxictrico y Lactona de Acido
(-)-Hidroxictrico. La Solucin muestra tambin presenta un
pico para lactona de cido hidroxictrico. Los picos de
cido hidroxictrico y lactona de cido hidroxictrico son
los picos principales en el cromatograma de la Solucin
muestra.
USP 38
COMPOSICIN
C9NTENIDO DE CIDO, (-)-HIDROXICTRICO Y LACTONA DE
ACIDO (-)-HIDROXICITRICO
Solucin A: Acido fosfrico al 30% en agua
Fase mvil: Disolver 1,36 y de fmfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, ajustar con Solucin A a
un pH de 2,5, completar con agua hasta 1000 mL,
mezclar, filtrar, y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de Solucion A y agua (1 :9)
Solucin estndar A: Una solucin de ER (-)-Hidroxici-
trato de Calcio USP equivalente a aproximadamente
4 mg/mL de cido (-)-hidroxictrico en Disolvente. Antes
de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor,
desechando los primeros mL del filtrado.
Solucin estndar B: 8 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hidroxicitrato de Garcinia USP en Disolvente. Antes
de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Garcinia indica, reducida a polvo fino y pesados con
exactitud, a un matraz de fondo redondo de 250 mL
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
50 mL de Disolvente, someter a reflujo mientras se mez-
cla en un bao de agua durante 30 minutos, dejar que
sedimente, y decantar el sobrenadante. Repetir la ex-
traccin usando cuatro porciones de 50 mL de agua,
combinar todos los extractos, enfriar, filtrar en un ma-
traz volumtrico de 250 mL, y completar con agua a
volumen. Antes de la inyeccin, pasar a travs de un
filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
Solucin muestra
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
cos de lactona de cido hidroxictrico y cido hidroxi-
ctrico son aproximadamente 0,9 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar 8 es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de lac-
tona de cido hidroxictrico y cido hidroxictrico, So-
lucin muestra
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido hidroxictrico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de cido hidroxictrico en
inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
Solucin muestra. [NOTA-La Solucin estndar A, la So-
lucin estndar 8 y la Solucin mue.stra se mantienen
estables durante 6 horas.]
Calcular los porcentajes de cido (-)-hidroxictrico y
lactona de cido (-)-hidroxictrico en la porcin de
Garciniu inciiw tomada:
Resultado = (r,,/r,) X e y (V /W) y F y 1 00
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cido hidroxictrico de la
Solucin estndar A
USP 38
e = concentracin de cido (-)-hidroxictrico en la
Soluoon P~tandar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Gamma mdica u~ado ara rear at ia
Sulucin muestra (mg)
F factor de conversin para cada analito:
= W
2, 1 7 para lactona de cido (-)-hidroxictrico
y 1,00 para cido H-hidroxictrico
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de
cido H-hidroxictrico y lactona de cido H-hidroxic-
trico: Se encuentra no menos de 12% con respecto a la
materia seca.
IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en
cido (561): No ms de 0,5%
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 ppm
Impurezas Orgnicas:, , .
PROCEDIMIENTO 1: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Matena
Orgnica Extraa (561): No ms de 2,0%
PROCEDIMIENTO 2: ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Los frutos frescos tienen forma globu-
lar, 3-4 cm de dimetro, de color purpreo a naranja
rosado cuando estn maduros, con lbulos del cliz
persistentes en la base y estigma ssil radiado y apla-
nado en el pice; contienen 5-8 semillas rodeadas por
un arilo suculento. El artculo farmacopeico consiste en
piezas secas de pericarpio, de color negr.o azulado, de
varias formas y tamaos, aplanados, flexibles; pueden
presentar restos de pedicelos, cliz y estigma; olor ca-
racterstico; sabor agrio.
Histologa
Seccin transversal del pericarpio: Una capa de epi-
carpio, compuesta de clulas isodiamtricas, con cut-
cula delgada y estomas; la hipodermis consiste en va-
rias hileras de clulas de paredes gruesas
tangencialmente alargadas y dispuestas de manera
compacta con contenido de color marrn oscuro, que
presentan cavidades alargadas irre_gulares estrec~asj .el
mesocarpio exterior consiste en celulas parenqu1mat1-
cas tangencialmente alargadas y dispuestas de manera
laxa, unas pocas llenas de grano~ de almidn, atrave-
sadas por bandas estrechas de celulas colapsadas y
duetos de oleoresina; mesocarpio interno que consiste
en clulas colapsadas y dispuestas de manera com-
pacta que presentan hiler~s .de haces fibrovasc~lares; el
endocarpio no es caractenst1co y consiste en celulas
colapsadas de paredes delgadas con contenido de
color marrn oscuro.
LMITE DE CIDO CTRICO
Disolvente y Sistema cromatogrfico: Preparar segn.
se indica en la pruel:a de Contenido de AC1do (-)-H1drox1-
ctrico y Lactona de Acido (-)-Hidroxictri):o: ..
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de ER Ac1do C1tnco USP
en Disolvente. Antes de la inyeccin, pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Anlisis
Muestra: Solucin estndar
Calcular el porcentaje de cido ctrico en la porcin de
Garcinia indica tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V /W) x 1 00
ru ~ rea del pico de cido ctrico de la Solucin
muestra en la prueba de Conte,nido de Acido
(-)-Hidroxictrico y Lactona de Acido (-)-
Hidroxictrico
Suplementos Dietticos/ GMcinia 6477
r5 = rea del pico de cido ctrico de la Solucin
estndar _
C, = concentracin de ER Acido Ctrico USP en la
Solucin f:)lndar (n1g/mL)
V - volumen final de la Solucin muestra (mL)
= peso de Garcinia indica usado para preparar la
Solucin muestra en la prueba de Contemdo
de jcido (-)-Hidroxictrico y Lmite de Lactona
de Acido (-)-Hidroxictrico (mg)
Criterios de aceptacin: No ms de 2% de cido c-
trico con respecto a la materia seca
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 2,0 g de Garcinia indica
reducida a polvo fino a 105 durante 3 horas: pierde no
ms de 12,0% de su peso.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
Determinado en 1,0 g de Garcinia indica reducida a polvo
fino: no ms de 3,0% y no ms de 8,0% si se agreg
cloruro de sodio como conservante durante la recolec-
cin de los frutos .
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. ,
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmoneila spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta contenida en el artculo.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER (-)-Hidroxicitrato de Calcio USP
ER Acido Ctrico USP
ER Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP
Garcinia indica en Polvo
DEFINICIN
La Garcinia indica en Polvo es Garcinia indica reducida a
polvo fino o a polvo muy fino. Contiene no menos de
12% de la suma de cido (-)-hidroxictrico y lactona de
cido (-)-hidroxictrico, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. La Garcinia indica en Polvo cumple con los requisitos
de Pruebas Especficas, CaJactersticas Botnicas;
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de garcinol en alcohol
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Garcinia indica en Polvo a un aparato de Soxhlet,
agregar 1 00 mL de alcohol, y extraer durante 6 horas.
Filtrar y concentrar al vaco hasta aproximadamente
1 O mL. [NOTA-Usar un dedal con un tamao adecu.~do
para que el volumen de alcohol usado en la extracc1on
en el aparato de Soxhlet sea al menos el doble del volu-
men del dedal.]
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao promedio de partcula de 5 m (placas
para HPTLC)
Volume!1 de aplicacin: 5 L, en banda: ~e 8 ~m.
Fase movil: Tolueno, acetato de etilo y ac1do formrco
(4:1:0,5) ...
Solucin reveladora: Una mezcla de va1rnlltna al 1 % en
alcohol y cido sulfrico al 10% en alcohol (1 :1)
6478 Garcinia / Suplementm nietP!icos
Anlisis
Muestras: Soluoon estndar y So/ucion muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para cro-
matografa Pfl r.1p;i delgada adecuada ('<'Cr Crvrnato-
grafia (621 )). Usar una cmara saturarla f)psarrollar
los cromatogramas hasta que el trente de la tase m-
vil haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
longitud de la placa. Retirar la placa de la cmara,
secar, rociar con Solucin reveladora, calentar durante
5-1 O minutos aproximadamente a 105", y observar
bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una banda principal de color gris
verdoso debida a garcinol a un valor Rr de aproximada-
mente 0,6, que corresponde en posicin y color a la
banda principal en el cromatograma de la Solucin es-
tndar. La Solucin muestra presenta las siguientes ban-
das adicionales: dos bandas prpuras, dos bandas de
color gris verdoso, dos bandas azules y una banda pr-
pura a valores Rr de aproximadamente 0,31; 0,34; 0,37;
0,47; 0,54; 0,83 y 0,93, respectivamente. Se pueden
observar otras bandas en la Solucin muestra.
c. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC: El cromatograma
de la Solucin muestra presenta un pico para cido hidro-
xictrico a un tiempo de retencin correspondiente al del
cromatograma de la Solucin estnqar A, segn se obtie-
nen en la pr,ueba de Contenido de Acido (-)-Hidroxictrico y
Lactona de Acido (-)-Hidroxictrico. La Solucin muestra
tambin presenta un pico para lactona de cido hidroxi-
ctrico. Los picos de cido hidroxictrico y lactona de
cido hidroxictrico son los picos principales en el croma-
tograma de la Solucin muestra.
COMPOSICIN
C9NTENIDO DE CIDO, (-)-HIDROXICTRICO V LACTONA DE
ACIDO (-)-HIDR,OXICITRICO
Solucin A: Acido fosfrico al 30% en agua
Fase mvil: Disolver 1,36 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, ajustar con Solucin A a
un pH de 2,5, completar con agua hasta 1000 mL,
mezclar, filtrar, y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de Solucin A y agua (1 :9).
Solucin estndar A: Una solucin de ER (-)-Hidroxici-
trato de Calcio USP equivalente a aproximadamente
4 mg/mL de cido (-)-hidroxictrico en Disolvente. Antes
de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor,
desechando los primeros mL del filtrado.
Solucin estndar B: 8 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hidroxicitrato de Garcinia USP en Disolvente. Antes
de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 5 g de
Garcinia indica en Polvo, pesados con exactitud, a un
matraz de fondo redondo de 250 mL equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 50 mL de Disolvente,
someter a reflujo mientras se mezcla en un bao de
agua durante 30 minutos, dejar que sedimente, y de-
cantar el sobrenadante. Repetir la extraccin usando
cuatro porciones de 50 ml de agua, combinar todos los
extractos, enfriar, filtrar en un matraz volumtrico de
250 mL, y completar con agua a volumen. Antes de la
inyeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
U~P 38
Modo: HPLC
Detector: UV l. 15 nm
Columna: 4,6 mm > 25 cm; relleno L1
T~rnperatura de la columna: 25 + 1
Velocidad de flujo. 1,0 1r!l.irni11
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
[Nor A-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
cos de lactona de cido hidroxictrico y cido hidroxi-
ctrico son aproximadamente O, 9 y 1,0,
respectivamente. J
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de lac-
tona de cido hidroxictrico y cido hidroxictrico, So-
lucin muestra
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido hidroxictrico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de cido hidroxictrico en
inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra. [NOTA-La Solucin estndar A, la So-
lucin estndar By la Solucin muestra se mantienen
estables durante 6 horas.]
Calcular los porcentajes de cido (-)-hidroxictrico y
lactona de cido (-)-hidroxictrico en la porcin de
Garcinia indica en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x C, x (V /W) x F x 100
r1, = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cido hidroxictrico de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de cido (-)-hidroxictrico en la
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Garcinia indica en Polvo usado para
preparar la Solucin muestra (mg)
F ~ factor de conversin para cada analito:
2, 1 7 para lactona de cido (--)-hidroxictrico
y 1,00 para cido (--)-hidroxictrico
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de
cido (-)-hidroxictrico y lactona de cido (-)-hidroxic-
trico: Se encuentra no menos de 12% con respecto a la
materia seca.
IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas , .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cemzm Insolubles pn Acido
(561): No ms de 0,5%
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 ppm
Impurezas Orgnic~s , .
PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Polvo de color marrn oscu-
ros; olor caracterrstico; sabor agrio. Al microscopio pre-
senta clulas con contenido de color marrn oscuro; c-
lulas con conteniJo Je rnlor amarillo, clulas
parenquimticas que contienen grnulos de almidn sim-
ples y compuestos.: frnfJmPntos de clulas de epicarpio
que contienen estomas; y fragmentos de vasos anillados
y espiralados.
USP 38
LMITE oc c:oo CTRICO
Disolvente y Sistema cromatogrtico: Preparar segun
se indica en la prueba de Contenido de AC/do (-)-Hidroxi-
c1tnco y Lactona de ACldO (-)-Htdrox1C1trt\:O.
Solucin e~tntldr: 0,5 111~/rnl de ER Acido Ctrico USP
en Disolvente. Antes de la inyeccin, pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamano de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Anlisis
Muestra: Solucin estndar
Calcular el porcentaje de cido ctrico en la porcin de
Garcinia indica en Polvo tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x (V /W) x 1 00
ru = rea del pico de cido ctrico de la Solucin
muestra en la prueba de Conte,nido de Acido
(-)-Hidroxictrico y faetona de Acido (-)-
Hidroxictrico
rs = rea del pico de cido ctrico de la Solucin
estndar
Cs = mncentracin de FR cido Ctrico USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
V =volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Garcinia indica en Polvo usado para
preparar la So~ucin muestra en la prueba de
ConJenido de Acido (-)-Hidroxictrico y Lactona
de Acido (-)-Hidroxictrico (mg)
Criterios de aceptacin: No ms de 2% de cido c-
,trico con respecto a la materia seca
PERDIDA POR SECADO (731): Secar 2,0 g de Garcinia indica
en Polvo a 105 durante 3 horas: pierde no ms de
1 2,flo/o de su peso. , Hidroxicitrato de Garcinia en Disolvente. Antes de la in-
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
Determinado en 1,0 g de Garcinia indica en Polvo: No
ms de 3,0%; y no ms de 8,0% si se agreg cloruro de
sodio como conservante durante la recoleccin de los
frutos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 1 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram 11eyalivas tolerante~ a la bilis no excede de
10 3 ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmone/la spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER H-Hidroxicitrato de Calcio USP
ER Acido Ctrico USP
ER Extracto en Polvo dP Hidroxicitralo de Garcinia USP
Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de
Garcinia
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia se prepara
a partir dP \,arcinia comhogia o Garcinia indica mediante
extraccin con agua, alcohol o mezclas de estos disolven-
tes, seguida de estabilizacin del contenido de cido (-)-
hidroxictrico en forma de sal clcica, potsica, magnsica
y/o sdica. La relacin entre el material vegetal y el ex-
Suplementos Oietet;rns / Garcinia 6479
tracto est aproximadamente entre 5: 1 y 1O:1. Contiene
no menos de 40% de cido (-)-hidroxictrico, calculado
con respecto a la materia seca. Puede contener sustancias
agregadas adecuadas.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC: El cromatograma
de la Solucin muestra presenta un pico para cido hidro-
xictrico a un tiempo de retencin correspondiente al de
la Solucin estqndar A, segn se obtienen en la prueba de
<:;ontenido de Acido (-)-Hidroxictrico y Lmite de Lactona de
Acido (-)-Hidroxictrico.
COMPOSICIN
CONTENIDO, DE CIDO {-)-HID~OXICTRICO V LMITE DE LAC-
TONA DE ACIDO, (-)-HIDROXICITRICO
Solucin A: Acido fosfrico al 30% en agua
Fase mvil: Disolver 1, 36 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua, ajustar con Solucion A a
un pH de 2,5, completar hasta 1 000 mL con agua,
mezclar, filtrar, y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de Solucin A y agua (1 :9)
Solucin estndar A: Una solucin de ER (-)-Hidroxici-
trato de Calcio USP equivalente a aproximadamente
2,5 mg/mL de cido (-)-hidroxictrico en Disolvente. An-
tes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin estndar B: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hidroxicitrato de Garcinia USP en Disolvente. Antes
de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor .
Solucin muestra: 5 mg/mL de Extracto en Polvo de
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno Ll
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP usado .
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido hidroxictrico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de cido hidroxictrico,
Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra. [NOTA-La Solucin estndar A, la So-
lucin estndar B y la Solucin muestra se mantienen
estables durante 6 horas.)
Calcular el porcentaje de cido (--)-hidroxictrico y el l-
mite de lactona de cido (-)-hidroxictrico, si estuviera
presente, en la porcin de Extracto en Polvo de Hidro-
xicitrato de Garcinia tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cido hidroxictrico de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de cido (-)-hidroxictrico en la
Solucin estndar A (mg/mL)
6480 GarciniJ /Suplementos DiPtti<os
e 1 = conrPntracin de Extracto en Polvo de
Hidroxicitrato de Garcinia en la Solucion
muestra (rng/mL)
r - fdLlu1 Je Lu11ver~ion pdra cada anailto:
2, 1 7 para lactona de cido (-)-hidroxictrico
y 1,00 para cido (-)-hidroxictrico
Criterios de aceptacin: No menos de 40% de cido
(-)-hidroxictrico y no ms de 8% de lactona de cido
(-)-hidroxictrico con respecto a la materia seca
IMPUREZAS
lmpu~ezas Inorgnicas , , ER Acido Ctrico USP
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 3,0%
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo fil (231): No ms de
20 ppme (Oficial Ol-dic-2015)
Impurezas Orgnic~s , .
PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos
de Plaguicidas (561): Cumple con los requisitos.
PRl}EBAS E~PECFl~AS
LIMITE DE ACIDO CITRICO
Disolvente: Pr,eparar segn se indica en la prueba de
Contenido de Acido (-)-Hidroxictrico y Lmite de Lactona
de Acido (-)-Hidroxictrico. , pecto a la materia seca.
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de ER Acido Ctrico USP
en Disolvente. Antes de la inyeccin, pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor.
Anlisis
Muestra: Solucin estndar
Calcular el porcentaje de cido ctrico en la porcin de
Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 1 00
ru = rea del pico de cido ctrico, usando el rea
del pico de cido ctrico de la Solucin ,
mueslra en la prueba de Contenido de A,cido
(-)-Hidroxictrico y Lmite de Lactona de Acido
(-)-Hidroxictrico
rs = rea del pico de cido ctrico de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER cido Ctrico USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de
Hidroxicitrato de Garcinia en la Solucir]
muestra en la prueba de Contenido de A,cido
(-)-Hidroxictrico y Lmite de Lactona de Acido
(-)-Hidroxictrico (mg/mL)
Criterios de aceptacin: No ms de 5% de cido c-
trico con respecto a la materia seca
IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERALES (191 ): Pruebas para
determinar la presencia de calcio, magnesio, potasio y/o
sodio .
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 2,0 g de Extracto en
Polvo a 1 05'' durante 3 horas: El Extracto en Polvo que
contiene hidroxicitrato de calcio pierde no ms de 5,0%
de su peso; el Extracto en Polvo que contiene otras sales
pierde no ms de 9,0% de su peso.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 Q1 ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botnicos
(565).
USP 38
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteqer de la luz y la humedad. v almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica ei nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta a partir de la que se prepar el artculo. Cumple
con otros requisitos de Etiquetado en Extractos Botnicos
(565).
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11 /
ER (-)-Hidroxicitrato de Calcio USP
ER Extracto en Polvo de Hidroxicitrato de Garcinia USP
Ginkgo
DEFINICIN
El Ginkgo consiste en la hoja seca de Ginkgo biloba L. (Fam .
Ginkgoaceae). Contiene no menos de 0,5% de flavonoi-
des, calculado como glicsidos de flavonol, con una masa
molecular media de 756,7; y no menos de O, 1 % de lacto-
nas terpnicas, calculado como la suma de biloblido
(C1sH1ss), ginkglido A (C20H249), ginkglido B
(C2oH2410) y ginkglido C (C20H2411), ambos con res-
IDENTIFICACIN , ,
PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Prueba de flavonoides
Solucin estndar: Una soluciqn de 0,6 mg/mL de ER
Rutina USP, 0,2 mg/mL de ER Acido Clorognico USP
y 0,2 mg/mL de ER Quercetina USP en metano!
Solucin muestra: Transferir 1,0 g de Ginkgo reducido
a polvo fino a un matraz de fondo redondo de 50 mL
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
1 O mL de metano! y someter a reflujo en un bao de
agua durante 1 O minutos, dejar que se enfre a tempe-
ratura ambiente y filtrar. [NOTA-Reservar una porcin
de la Solucin muestra para usar en la Prueba de faeto-
nas terpnicos.]
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L
Fase mvil: Acetato de etilo, agua, cido frmico anhi-
dro y cido actico glacial (100:26: 11 : 11)
Solucin reveladora 1: 5 mg/mL de difenilborinato de
2-aminoetilo en metano!
Solucin reveladora 2: 50 mg/mL de polietilenglicol
400 en alcohol
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Antes de desarrollar los cromatogramas, saturar la c-
mara durante 20 minutos con Fase mvil. Registrar la
temperatura y humedad en el laboratorio. Si la hu-
medad relativa excede de 50%, acondicionar la placa
a una humedad relativa de aproximadamente 35%,
usando un dispositivo adecuado. Aplicar las muestras,
por separado y en bandas, a una placa para cromato-
grafa en capa delgada adecuada (ver Cromatografa
(621 )) y dejar que las bandas se sequen. Desarrollar la
placa en un recorrido de 6 cm, retirar la placa de la
cmara cromatogrfica y secar en un horno de aire
circulante d 1 OY durante 5 minutos. Rociar inmedia-
tamente la placa caliente con Solucin reveladora 1,
luego con 'iolucin reveladora 2, secar y observar bajo
luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptacin: La Solucin estndar presenta
en su parte inferior, con valores R1 crecientes, una zona
fluorescente de color marrn amarillento debida a ru-
tina (R, de 0,28), una zona fluorescente de color azul
USP 38
claro dPbida a rirlo rlorognico (Rr de O, 36) y una
zona fluoresce11Le de culur amarillo debida a querce-
tina (R, de 0,92). La Solucin muestra presenta una
zona iuu1e>ce11Le Je color m<Jrrn amarillento, un;
zona fluorescente de color azul claro y una zona fluo-
rescente de color marrn amarillento a valores Rr simi-
lares a los de rutina, cido clorognico y quercetina,
respectivamente, en la Solucin estndar. Se detectan
zonas adicionales de color amarillento a verde amari-
llento debidas a fl9vonoides en el cromatograma de la
Solucin muestra. Estas incluyen una zona por debajo
de la zona de rutina, dos zonas entre las zonas de
rutina y cido clorognico, y dos zonas por encima de
la zona de cido clorognico. Se pueden detectar otras
zonas en el cromatograma de la Solucin muestra.
Prueba de lactonas terpnicas
Solucin estndar: Disolver una cantidad de ER Lacto-
nas Terpnicas de Ginkgo USP en metano! para obte-
ner una solucin que contenga en cada mL aproxima-
damente 1,0; O, 9; 0,6; O, 7 y 0,2 mg de biloblido,
ginkglido A, ginkglido B, ginkglido C y ginkglido
J, respectivamente.
Solucin muestra: Usar la Solucin muestra preparada
en la Prueba de flavonoides.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L
Fase mvil: Tolueno, acetato de etilo, acetona y meta-
no! (20 : 1O : 1 O : 1,2)
Solucin reveladora: Anhdrido actico
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Sumergir una placa para cromatografa en capa del-
gada adecuada, recubierta con Adsorbente, durante 2
segundos en una solucin de 8 g/200 mL de acetato
de sodio en metano!. Dejar que el exceso de lquido
de recubrimiento escurra de la placa, secar en una
estufa de conveccin forzada a 70 durante 30 minu-
tos y enfriar en un desecador. Aplicar las muestras,
por separado y en bandas, a la placa impregnada (ver
Cromatografa (621 )) y dejar que las manchas se se-
quen al aire. Antes de desarrollar los cromatogramas,
saturar la cmara durante 20 minutos con Fase mvil.
Registrar la temperatura y humedad en el laboratorio.
Si la humedad relativa excede de 50%, acondicionar
la placa a una humedad relativa de aproximadamente
35%, usando un dispositivo adecuado. Desarrollar la
placa en un recorrido de 6 cm, retirar la placa de la
cmara cromatogrfica y secar en una corriente de
aire fro. Rociar la placa con Solucin reveladora, ca-
lentar a 180 durante 1O minutos, enfriar y observar
bajo luz UV de longitud de onda corta.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin estndar presenta cinco zonas de extincin bien
definidas, que corresponden a las diferentes lactonas
terpnicas de ginkgo: ginkglido e, ginkglido J, gink-
glido B, ginkglido A y biloblido a valores Rr de
aproximadamente O, 1 3; O, 1 8; O, 32; O, 38 y 0,45, res-
pectivamente. El cromatograma de la Solucin muestra
presenta una zona de extincin bien pronunciada en
el lugar de la aplicacin, una zona ancha de extincin
cerca del frente de la fase mvil y cinco zonas de ex-
tincin bien definidas que corresponden a las diferen-
tes lactonas terpnicas de ginkgo a valores R, similares
a los de las detectadas en el cromatograma de la Solu-
cin estndar.
[NOTA-Los valores R, pueden variar de una placa a la
otra debido a la etapa de impregnacin.]
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS DE FLAVONOL
Disolvente de extraccin: Alcohol, cido clorhdrico y
agua (25:4:1 O)
Suplementn' {)iptr'tirm I Ginkgo 6481
Fase mvil: Metanol, agua y cido fosfrico
(100:100:1)
Solucin estndar A: 0,02 mg/ml de ER Quercetina
USP en metano!
Solucin estndar B: 0,02 mg/ml de ER Kaempferol
USP en metanol
Solucin estndar C: 0,005 mg/mL de ER lsorhamne-
tina USP en metanol
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ginkgo, reducido a polvo fino, a un matraz de
250 mL equipado con un condensador de reflujo. Agre-
gar 78 mL de Disolvente de extraccin y someter a re-
flujo en un bao de agua caliente durante 135 minutos.
[NOTA-La solucin se tornar de color rojo intenso. El
color de la solucin no es una indicacin definitiva de la
totalidad de la reaccin.] Dejar que se enfre a tempera-
tura ambiente. Decantar en un matraz volumtrico de
100 mL. Agregar 20 ml de metanol al matraz de
250 mL y someter a ultrasonido durante 30 minutos.
Filtrar, recoger el filtrado en el matraz volumtrico de
100 mL, lavar el residuo en el filtro con metanol, reco-
ger el lavado en el mismo matraz volumtrico de
1 00 mL, diluir con metanol a volumen y mezclar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 370 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin estndar C
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para querce-
tina, kaempferol e isorhamnetina son aproximada-
mente 1,0; 1,8 y 2,0 respectivamente; Solucin estn-
dar A, Solucin estndar By Solucin estndar C.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de quercetina en inyeccio-
nes repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de cada glicsido de flavonol en
la porcin de Ginkgo tomada:
Resultado= (ru!rs) x (C/V\I) x Fx 10
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin estndar A, Solucin estndar B o
Solucin estndar C
e = concentracin del analito pertinente en
Solucin estndar A, Solucin estndar B o
Solucin estndar C (mg/mL)
W == peso de Ginkgo tomado para preparar la
Solucin muestra (g)
F = factor de la masa molecular media para
convertir cada analito en glicsido de
flavonol con una masa molecular media de
756,7: 2,504 para quercetina; 2,437 para
isorhamnetina; y 2,588 para kaempferol
Calcular el porcentaje total de glicsidos de flavonol,
sumando los porcentajes individuales calculados.
Criterios de aceptacin: No menos de 0,5% de flavo-
noides, como glicsidos de flavonol, con una masa
molecular media de 756,7, con respecto a la materia
seca
CONTENIDO DE LACTONAS TERPNICAS
Disolvente: Metanol y agua (9: 1)
Solucin amortiguadora: Disolver 1, 19 g de fosfato di-
bsico de sodio y 8,25 g de fosfato monobsico de po-
tasio en 1000 mL de agua y ajustar a un pH de 5,8.
6482 Cinkgo / Suplementos Dietticos
Diluyente: Metano! v aqua (1: 1)
Solucin A: Agua , ~
Solucin B: Metano!
Fase mvil: Ver !u TcOfu 7.
Tabla 1
--~---------.
Tiempo Solucin A Solucin B
(mln) --~-
(%)
o 75
23 52
28 52
30 25
35 10
40 75
50 75
Soluciones estndar: Usando el contenido declarado
de lactonas terpnicas individuales, preparar cinco solu-
ciones del ER Lactonas Terpnicas de Ginkgo USP en
Diluyente dentro del intervalo de 5-500 g/mL para
cada una de las lactonas terpnicas pertinentes. Si fuera
necesario, usar ultrasonido para disolver los analitos. Pa-
sar a travs de un filtro con un tamao de poro de 0,45
m o menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,5 g
de Ginkgo, pesados con exactitud, a un tubo de centr-
fuga de vidrio de 30 mL con tapa de rosca y junta de
PTFE. Agregar 10,0 mL de Disolvente, sellar el tubo y
mezclar bien en un mezclador de vrtice. Calentar en
un bao de agua a 90 durante 30 minutos. Mezclar la
suspensin caliente en un mezclador de vrtice y repetir
el calentamiento a 90 durante 30 minutos. Enfriar,
centrifugar, transferir el sobrenadante a un matraz y de-
volver el residuo al tubo de vidrio. Repetir la extraccin
dos veces ms, usando cada vez 10,0 mL de Disolvente.
Combinar los extractos, dejar que se enfren a tempera-
tura ambiente y evaporar hasta sequedad al vaco en un
bao de agua mantenido a 50. Agregar 1 O mL de Solu-
cin amortiguadora al residuo y someter a ultrasonido
durante 5 minutos. Transferir cuantitativamente la solu-
cin a un tubo cromatogrfico de vidrio relleno de tie-
rra silcea para cromatografa capaz de contener 20 mL
de fase acuosa. 1 Enjuagar el vaso de precipitados con
dos porciones de 5 mL de Solucin amortiguadora y
transferir los lavados a la columna. [NOTA-No exceder
de 20 mL de fase acuosa total ni la capacidad de con-
tencin del tubo cromatogrfico.]
Dejar que la Solucin amortiguadora sea absorbida por
la columna. Despus de 15 minutos, eluir la columna
con 1 00 mL de acetato de etilo, recoger la solucin de
acetato de etilo y evaporar hasta sequedad al vaco en
un bao de agua mantenido a 50. Disolver el residuo
en 10,0 mL de Diluyente.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Evaporativo de dispersin de luz. [NOTA-
Los parmetros del detector se ajustan para lograr la
mejor relacin seal-ruido, de acuerdo con las reco-
mendaciones del fabricante.]
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1 rnL/min
Volumen de inyeccin: 15 pL
Aptitud del sistema
Muestras: Soluciones estndar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromato~ramas: Los cromatogra-
mas de las Soluciones estandar son similares al croma-
tograma de referencia provisto con el lote de ER Lac-
tonas Terpnicas de Ginkgo USP usado.
-----
' El mdleral adecuado d1spon1ble comercialmente es Extrelut n NT 20 de E
Merck Scence.
lJ)P )8
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de b1lobal1do en 1nyecc10-
nes repetidas.
Cuefi<.ienle de correiacin: 'JO menos de
0.995 pJra l.i lfnc.i rlP rpgrp;im. ;09C;n ;p rlPtermina
en el Anlisis.
Anlisis
Muestras: Soluciones estandar y Solucin muestra
(%) Registrar los cromatogramas e identificar los picos de
25 los analitos pertinentes en los cromatogramas de las
48 Soluciones estndar por comparacin con el cromato-
48 grama de referencia provisto con el lote de ER Lacto-
75 nas Terpnicas de Ginkgo USP usado. Medir las reas
de los picos de los analitos. Graficar los logaritmos de
90 las respuestas de los picos pertinentes en funcin de
25 los logaritmos de las concentraciones, en mg/mL, de
25 cada a na lito de las Soluciones estndar y determinar la
lnea de regresin usando un anlisis de cuadrados
mnimos.
A partir de las grficas, determinar la concentracin, C,
en mg/mL, del analito pertinente en la Solucin
muestra.
Calcular por separado los porcentajes de biloblido
(C1sH1sOs), ginkglido A (C20H249), ginkglido B
(C70H1.,0in) y ginkglido C (C20H7.111) en la porcin
de Ginkgo tomada:
Resultado = (C/VV) x 1000
C = concentracin del analito pertinente en la
Solucin muestra (mg/ml)
W = peso de Ginkgo tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Calcular el porcentaje total de lactonas terpnicas en la
porcin de Ginkgo tomada, sumando los porcentajes
calculados para cada analito.
Criterios de aceptacin: No menos de O, 1 % de lacto-
nas terpnicas, calculado como la suma de biloblido,
ginkglido A, ginkglido B y ginkglidc C, con respecto
a la materia seca.
CONTAMINANTES
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 g/g
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 1 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Hojas enteras desecadas, plegadas o
fragmentadas, con o sin pecolo adherido, que varan
de color verde caqui a marrn verdoso, por lo general,
de color ms marrn en el borde apical y ms oscuras
en la superficie adaxial. La lmina es ampliamente ob-
cuneada (en forma de abanico), de 2-12 cm de ancho
y de 2--9,5 cm de largo desde el pecolo hasta el mar-
gen apical; en su mayora son de 1,5-2 veces ms an-
chas que largas. Los margenes de la base son enteros,
cncavos; el margen apical es sinuoso, por lo general,
truncado o con hendidura ce11t1 al, y e11 raras ocasiones
con mltiples hendiduras. La superficie es glabra, de
apariencia arrugada debido a las pronunciada; nervadu-
ras dicotmicas que parecen paralelas y que se extien-
den desde la base de la lmina hasta el margen apical.
Los pecolos son de un color similar a la hoja, acanala-
dos en la superficie adaxial y de 2-8 cm de largo.
USP 38
Histologa
Seccin transversal de la lmina: Se presenta una
cutcula delgada pero marcada sobre una sola capa de
ciuias epidrmica'> en arnba'> -.uericie-.. Se rese11lar1
estomas Cmiramcntc en la superficie inferior con clu-
las guardianas hundidas con respecto a las clulas epi-
drmicas adyacentes. Se presentan clulas de clorn-
quima en empalizada, alargadas, perpendiculares a la
superficie y a menudo de apariencia irregular, justo de-
bajo de la epidermis superior. Se presentan haces vas-
culares a intervalos a lo largo del ancho de la lmina
con cristales de oxalato de calcio en grupos adyacen-
tes. Las clulas del mesfilo son ms pequeas que las
clulas en empalizada, alargadas paralelas a la superfi-
cie de la hoja y separadas por grandes espacios
intercelulares.
Lmina y pecolo en polvo: Al microscopio, los frag-
mentos transversales de la hoja muestran una cutcula
lisa, presente en ambas superficies de la hoja y que se
tien de color anaranjado rosceo con sudan 111 SR.
Vistas desde la superficie, las clulas de la epidermis
superior son alargadas y de paredes onduladas, con
abundantes gotitas de color amarillo de 2-12 m de
dimetro visibles en las hojas maduras y ms antiguas,
no as en las hojas jvenes. Las clulas de la epidermis
inferior presentan una forma similar pero con paredes
ms rectas y estn interrumpidas por estomas anisocti-
cos. Se presentan numerosos elementos lignificados
derivados de la lmina y el pecolo, incluyendo vasos
de xilema con engrosamientos anillados, traqueidas y
vasos con puntuaciones areoladas. El grado de lignifi-
cacin, particularmente en el pecolo, se incrementa
con la edad de la hoja. Los cristales de oxalato de
calcio son numerosos y se presentan de manera dis-
persa o asociados con los vasos, con tamaos que va-
ran de 5-50 m en las hojas jvenes, y de 15-100 m
en las hojas maduras. Utilizando filtros cruzados polari-
zados, pueden observarse numerosos elementos bri-
llantes de menor tamao en forma de lgrimas o pris-
mas de origen indeterminado. En ocasiones, se
pueden observar tricomas de recubrimiento muy alar-
gados y uniseriados sin paredes transversales y de su-
perficies lisas o rugosas. Las hojas maduras pueden
presentar muy escasos grnulos de almidn poligona-
les a circulares de aproximadamente 20 m de dime-
tro, con un hilio central y exhibiendo una cruz de
ry1alta marcada bajo lu? polarizada.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 3,0% de tallos y no ms de 2,0% de
~tra materia orgnica extraa
PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Ginkgo reducido a polvo fino
Anlisis: Secar la Muestra a 105n durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 11,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Ginkgo reducido a polvo fino
Criterios de aceptacin: No ms de 11,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta contenida en el articulo.
Suplementos Dietticos / Ginkgo 6483
EST~DARES DE REFERENCIA USP ( 11)
ER Acido Clorognico USP
ER Lactonas Terpnicas de Ginkgo USP
ER buri1a11111eli11a USP
ER Kaempfcro! USP
ER Quercetina USP
ER Rutina USP
Ginkgo, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Ginkgo se preparan con Extracto en Polvo
de Ginkgo y contienen, en la cantidad declarada de Ex-
tracto en Polvo, no menos de 22,0% y no ms de 27,0%
de glicsidos de flavonol, y no menos de 5,4% y no ms
de 12,0% de lactonas terpnicas, calculados como la
suma de biloblido (CisH1ss), ginkglido A (C20H249),
ginkglido B (C20H2410) y ginkglido C (C20H2411).
IDENTIFICACIN
A. HPLC: En la prueba de Contenido de Glicsidos de Fla-
vonol, los tiempos de retencin de los picos de querce-
tina, isorhamnetina y kaempferol de la Solucin muestra
corresponden a los de la Solucin estndar. En el croma-
tograma de la Solucin muestra, la relacin entre el pico
de kaempferol y el de quercetina es no menos de 0,7; y
el pico de isorhamnetina es no menos de O, 1 veces el
tamao del pico de quercetina.
B. HPLC: Los tiempos de retencin de los picos de bilo-
blido, ginkglido A, ginkglido B y ginkgolido C de la
Solucin muestra corresponden a los de las Soluciones
estndar, segn se obtienen en la prueba de Contenido de
Lactonas Terpnicas.
CONTENIDO
CONTENIDO DE GucSIDOS DE FLAVONOL
Fase mvil: Metano!, agua y cido fosfrico
(100:100:1)
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Quercetina USP
en metanol
Solucin estndar B: 0,2 mg/mL de ER Kaempferol USP
en metanol
Solucin estndar C: 0,05 mg/mL de ER lsorhamnetina
USP en metanol
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino el conte-
nido de no menos de 20 Cpsulas. Transferir una canti-
dad del polvo pesada con exactitud, equivalente a
aproximadamente 50 mg de glicsidos de flavonol, a
un matraz volumtrico de 50 mL. Agregar 20 mL de
metano! y someter a ultrasonido durante 3 minutos.
Agregar 20 mL de cido clorhdrico 1,5 N y someter a
ultrasonido nuevamente durante 1 O minutos. Dejar que
se enfre a temperatura ambiente y diluir con metanol a
volumen. Centrifugar y transferir una porcin del sobre-
nadante transparente a un vial de vidrio con proteccin
actnica y tapa de goma. Calentar en un bao de vapor
durante 25 minutos y enfriar a temperatura ambiente
en un bao de hielo.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 370 nm
Columna: 4,6 mm . ,., 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Sulucin e~lnJar C
[NOTA~Los tiempos de retencin relativos para querce-
tina, kaempferol e isorhamnetina son aproximada-
mente 1,0; 1,8 y 2,0, respectivamente; Solucin estn-
dar A, Solucin estndar By Solucin estndar C.]
6484 Ginkgo / 'luplPmPntos Dietticos
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de quercetina en inyeccio-
nes repetidas, Solucin estndar lt
Anlisis
Muestras: Solucion estandar A, Solucion estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Calcular la cantidad, en mg, de cada glicsido de flavo-
nol en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/ rs) x Cs x F x 50
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin estndar A, Solucin estndar B o
Solucin estndar C
Cs concentracin del analito pertinente en la
= solucin de acetato de etilo y evaporar hasta sequedad
Solucin estndar A, Solucin estndar B o
Solucin estndar C (mg/ml)
F = factor de la masa molecular media para
convertir cada analito en glicsido de
flavonol con una masa molecular media de
756,7: 2,504 para quercetina, 2,437 para
isorhamnetina y 2,588 para kaempferol
Calcular la cantidad total, en mg, de glicsidos de
flavonol en la porcin de Cpsulas tomada, sumando
las cantidades individuales calculadas. Calcular la
cantidad total, en mg, de glicsidos de flavonol por
Cpsula y el porcentaje de glicsidos de flavo~ol en la
cantidad declarada de Extracto en Polvo de G1nkgo.
Criterios de aceptacin: 22,0%-27,0% de glicsidos
de flavonol
CONTENIDO DE LACTONAS TERPNICAS
Disolvente: Metano! y agua (9:1)
Solucin amortiguadora: Disolver 1, 19 g de fosfato di-
bsico de sodio y 8,25 g de fosfato monobsico de po-
tasio en 1 000 ml de agua, y ajustar a un pH de 5,8.
Diluyente: Metano! y agua (1: 1)
Solucin A: Agua
Solucin B: Metano!
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) (lo' J."&)_____
o 75 25
23 52 48
28 - ---------- 52 48
30 25 75
35 10 90
--
40 75 25
50 75 25
Soluciones estndar: Usando el contenido declarado
de lactonas terpnicas individuales, preparar cinco solu-
ciones del ER Lactonas Terpnicas de Ginkgo USP en
Diluyente dentro del intervalo de 5-500 pg/ml para
cada una de las lactonas terpnicas pertinentes. Si fuera
necesario, usar ultrasonido para disolver los analitos. Pa-
sar a travs de un filtro con un tamao de poro de 0,45
pm o menor.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino el conte-
nido de no menos de 20 Cpsulas. Transferir una canti-
dad del polvo, pesada con exactitud, equivalente a
aproximadamente 120 mg de Extracto en Polvo de
Ginkgo, a un tubo de centrfuga de vidrio de 30 ml
con tapa de rosca y junta de PTFE. Agregar 10,0 ml de
Disolvente, sellar el tubo y mezclar bien en un mezcla-
dor de vrtice. Calentar en un bao de agua a 90
durante 30 minutos. Mezclar la susensin caHente en
un mezclador de vrtice y repetir e calentamiento a
90c durante 30 minutos. Enfriar, centrifugar, transferir el
USP 38
sobrenadante a un matraz y devolver el residuo al tubo
de vidrio. Repetir la extraccion dos veces ms, usando
cada vez 10,0 ml de Disolvente. Combinar los extractos,
ueiar que se entren a temperatura ambiente y evaporar
hasta s0qu<'dad al vacio en ur 1 uar10 ue agua _mante-
nido a 50". Agregar 1 O ml de Soluc/On amort.1guadora al
residuo y someter a ultrasonido dura~te 5 minutos.
Transferir cuantitativamente la soluc1on a un tubo cro-
matogrfico de vidrio relleno de tierra silcea para cro-
matografa capaz de contener 20 ml de fase acuosa. 1
Enjuagar el vaso de precipitados con dos porciones de
5 ml de Solucin amortiguadora y transfenr los lavados a
la columna. [NOTA-No exceder de 20 ml de fase
acuosa total ni la capacidad de contencin del tubo
cromatogrfico.] Dejar que la Solucin amortiguadora se
absorba en la columna. Despus de 15 minutos, eluir la
columna con 100 ml de acetato de etilo, recoger la
al vaco en un bao de agua mantenido a 50. Disolver
el residuo en 20,0 ml de Diluyente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Evaporativo de dispersin de luz. [NOTA-
Los parmetros del detector se ajustan para lograr la
mejor relacin seal-ruido, de acuerdo con las reco-
mendaciones del fabricante.]
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 pl
Aptitud del sistema
Muestras: Soluciones estndar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromato<;ramas: Los cromatogra-
mas de las Soluciones estandar son similares al croma-
tograma de referencia provisto con el lote de ER Lac-
tonas Terpnicas de Ginkgo USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de biloblido en inyeccio-
nes repetidas
Coeficiente de correlacin: No menos de 0,995 para
la lnea de regresin, segun se determina en el
Anlisis.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Registrar los cromatogramas e identificar los picos de
los analitos pertinentes en el cro,matograma de las So-
luciones estandar por comparac1on con el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Lacto-
nas Terpnicas de Ginkgo USP usado. Medir las reas
de los picos de los analitos. Graficar los logaritmos de
las respuestas de los picos pertinentes en funcin de
los logaritmos de las concentraciones, en mg/ml, de
cada analito obtenido de las Soluciones estndar y de-
terminar la lnea de regresin, usando un anlisis de
cuadrados mnimos.
A partir de las grficas, determinar la concentracin, C,
en mg/ml, del analito pertinente en la Solucin
muestra.
Calcular por separado las cantidades, en mg, de bilob-
lido (C 1sHrn08),. gin~8lido A (C20H249), ginkglid,o B
(C20H241u) y g1nkgolido C (C20H2411) en la porc1on
de Cpsulas tomada:
Resultado = e A 20
C concentracin del analito pertinente en la
=
Solucin muestra (mg/ml)
Calcular la cantidad total de lactonas terpnicas en la
porcin de Cpsula~ tornada, sumando las cantidades
calculadas de cada analito. Calcular la cantidad total,
en mg, de lactonas terpnicas por Cpsula y el
1 El material adecudo disronible romerc1almente es Extrelut 1' NT 20 de E
Merck Science.
USP 38
porcentaje de lactonas terpnicas en la cantidad
declarada de Extracto en Polvo rlP Ginkgo.
Criterios de aceptacin: 5,41<)-12,0% de lactonas ter-
rF>nir;i<;_ r;ilrtililrlil<; rnmo lil <;11ma de biloblido . ginkg-
lido A, ginkglido B y qinkqlido C.
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN <2040): Cumplen con los
requisitos 9e Disolucin.
Medio: Acido clorhdrico O, 1 N; 500 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 45 min
Soluciones estndar: Proceder segn se indica en la
prueba de Contenido de Lactonas Terpnicas.
Solucin muestra: Combinar porciones de 25 mL de la
solucin en anlisis, de cada uno de los seis vasos de
disolucin, en un embudo de separacin. Extraer con
cuatro porciones de 50 mL de acetato de etilo. Combi-
nar los extractos y evaporar al vaco hasta sequedad.
Disolver el residuo sometiendo a ultrasonido en 5,0 mL
de una mezcla de agua y metano! (1 :1 ).
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Lactonas Terpnicas para determinar la concen-
tracin, C, en mg/mL, de ginkglido B en la Solucin
muestra.
Calcular la cantidad disuelta de ginkglido B como
porcentaje:
Resultado = 5000C/3G
C = concentracin de ginkglido B en la Solucin
muestra (mg/mL)
G =contenido de ginkglido B, segn se
determin en la prueba de Contenido de
Lactonas Terpnicas (mg/Cpsula)
Tolerancias: No menos de 75% del contenido de gink-
glidq B
VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, el artculo
usado para preparar las Cpsulas. Etiquetar las Cpsulas
indicando la cantidad, en mg, de Extracto en Polvo de
Gi]kgo por Cpsula.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Lactonas Terpnicas de Ginkgo USP
ER lsorhamnetina USP
ER Kaempferol USP
ER Quercetina USP
Ginkgo, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Ginkgo se preparan a partir de Extracto en
Polvo de Ginkgo y contienen, en la cantidad declarada de
Extracto en Polvo, no menos de 22,0% y no ms de
27,0% de glicsidos de flavonol, y no menos de 5,4% y
no ms de 1 2,0% de lactonas terpnicas, que consisten
Suplementos Dietticos / Ginkgo 6485
en biloblido (C 11H 1808), ginkglido A (C10H240.,), ginkg-
lido B (CoH ,4010) y ginkglido C (C20H24011 ).
IDENTIFICACIN
A. HPLC: en Ja prueba de Contenido de Gic-,ido'> de Fu-
vonol, los tiempos de retPncin dr los picos de quercc-
tina, isorhamnetina y kaempferol de la Solucin muestra
corresponden a los de la Solucin estndar. En el croma-
tograma de la Solucin muestra, la relacin entre el pico
de kaempferol y el de quercetina es no menos de 0,7; y
el pico de isorhamnetina es no menos de O, 1 veces el
tamao del pico de quercetina.
B. HPLC: Los tiempos de retencin de los picos de bilo-
blido, ginkglido A, ginkglido By ginkgolido C de la
Solucin muestra corresponden a los de las Soluciones es-
tndar, segn se obtienen en la prueba de Contenido de
Lactonas Terpnicas.
CONTENIDO
CONTENIDO DE GUCSIDOS DE FLAVONOL
Fase mvil: Metano!, agua y cido fosfrico
(100:100:1)
Solucin estndar A: 0,2 mg/mL de ER Quercetina USP
en metano!
Solucin estndar B: 0,2 mg/mL de ER Kaempferol USP
en metano!
Solucin estndar C: 0,05 mg/mL de ER lsorhamnetina
USP en metano!
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad del polvo
pesada con exactitud, equivalente a aproximadamente
50 mg de glicsidos de flavonol, a un matraz volum-
trico de 50 ml. Agregar 20 mL de metano! y someter a
ultrasonido durante 3 minutos. Agregar 20 mL de cido
clorhdrico 1,5 N y someter a ultrasonido nuevamente
durante 1 O minutos. Dejar que se enfre a temperatura
ambiente y diluir con metano! a volumen. Centrifugar y
transferir una porcin del sobrenadante transparente a
un vial de vidrio con proteccin actnica y tapa de
goma. Calentar en un bao de vapor durante 25 minu-
tos y enfriar a temperatura ambiente en un bao de
hielo.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 370 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin estndar C
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para querce-
tina, kaempferol e isorhamnetina son aproximada-
mente 1,0; 1,8 y 2,0, respectivamente; Solucin estn-
dar A, Solucin estndar B y Solucin estndar C]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de quercetina en inyeccio-
nes repetidas, Solucin estndar A.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Calcular la cantidad, en mg, de cada glicsido de flavo-
nol en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado (r::/ r,) " C'. >< F >< 50
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
= rea del pico del analito pertinente de la
Solucin estndar A, Solucin estndar B o
Solucin estndar C
6486 Ginkgo / Suplementos Dietticos
C =concentracin del analito pertinente en la
Solurin PWnrlar A, Soluon estndar B o
Solucin PStnrlar (mg/ml)e
F = factor de la ma<;a molen 1l;ir mPrlia rara
convertir cada analito en qlicsido de
f!avonoi Cll una masa molecular media de
756,7: 2,504 para quercetina, 2,437 para
isorhamnetina y 2,588 para kaempferol
Calcular la cantidad total, en mg, de glicsidos de
flavonol en la porcin de Tabletas tomada, sumando
las cantidades individuales calculadas. Calcular la
cantidad total, en mg, de glicsidos de flavonol por
Tableta y el porcentaje de glicsidos de flavonol en la
cantidad declarada de Extracto en Polvo de Ginkgo.
Criterios de aceptacin: 22,0%-27,0% de glicsidos
de flavonol
CONTENIDO DE LACTONAS TERPNICAS
Disolvente: Metano! y agua (9:1)
Solucin amortiguadora: Disolver 1, 19 g de fosfato di-
bsico de sodio y 8,25 g de fosfato monobsico de po-
tasio en 1000 ml de agua, y ajustar a un pH de 5,8.
Diluyente: Metano! y agua (1 : 1)
Solucin A: Agua
Solucin B: Metano!
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%)
o 75 25
23 52 48
28 52 48
30 25 75
35 10 90
40 75 25
50 -~~--------
75 25
Soluciones estndar: Usando el contenido declarado
de lactonas terpnicas individuales, preparar cinco solu-
ciones del ER Lactonas Terpnicas de Ginkgo USP en
Diluyente dentro del intervalo de 5-500 g/ml para
cada una de las lactonas terpnicas pertinentes. Si fuera
necesario, usar ultrasonido para disolver los analitos. Pa-
sar a travs de un filtro con un tamao de poro de 0,45
m o menor.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino el conte-
nido de no menos de 20 Tabletas. Transferir una canti-
dad del polvo pesada con exactitud, equivalente a
aproximadamente 120 mg de Extracto en Polvo de
Ginkgo, a un tubo de centrfuga de vidrio de 30 ml
con tapa y junta de PTFE. Agregar 1 0,0 ml de Disol-
vente, sellar el tubo y mezclar bien en un mezclador de
vrtice. Calentar en un bao de agua a 90 durante 30
minutos. Mezclar la suspensin caliente en un mezcla-
dor de vrtice y repetir el calentamiento a 90 durante
30 minutos. Enfriar, centrifugar, transferir el sobrena-
dante a un matraz y devolver el residuo al tubo de
vidrio. Repetir la extraccin dos veces ms, usando cada
vez 1 0,0 ml de Disolvente. Combinar los extractos, de-
jar que se enfren a temperatura ambiente y evaporar
hasta sequedad al vaco en un bao de agua mante-
nido a 50. Agregar 1 O ml de Solucin amortiguadora al
residuo y someter a ultrasonido durante 5 minutos.
Transferir cuantitativamente la solucin a un tubo cro-
matogrfico de vidrio relleno de tierra silcea para cro-
matografa capaz de contener 20 ml de fase acuosa. 1
Enjuagar el vaso de precipitados con dos porciones de
5 ml de Solucin amortiguadora y transferir los lavados a
la columna. [NOTA-No exceder de 20 ml de fase
acuosa total ni la capacidad de contencin del tubo
cromatogrfico.] Dejar que la Solucin amortiguadora se
' El material adecuado disponible comercialmente es ExtreluL NT 20 de [
Merck Science.
USP 38
absorba en la columna. Despus de 15 minutos, eluir la
columna con 100 ml de acetato de etilo, recoger la
soluc.in de acetato de etilo y evaporar hasta sequedad
a! \.racfo en un bJho de JguJ n(1nlcndv J 50 . Di.soh/e
el residuo en 20,0 mi rle {)il11ypntp
Sistema cromatogratico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Evaporativo de dispersin de luz. [NOTA-
Los parmetros del detector se ajustan para lograr la
mejor relacin senal-ruido, de acuerdo con las reco-
mendaciones del fabricante.]
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 25 1'
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 pl
Aptitud del sistema
Muestras: Soluciones estndar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromato9ramas: Los cromatogra-
mas de las Soluciones estandar son similares al croma-
tograma de referencia provisto con el lote de ER Lac-
tonas Terpnicas de Ginkgo USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de biloblido en inyeccio-
nes repetidas.
Coeficiente de correlacin: No menos de 0,995 para
la lnea de regresin, segn se determina en el
Anlisis.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Registrar los cromatogramas e identificar los picos de
los analitos pertinentes en el cromatograma de las So-
luciones estandar por comparacin con el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Lacto-
nas Terpnicas de Ginkgo USP usado. Medir las reas
de los picos de los analitos. Graficar los logaritmos de
las respuestas de los picos pertinentes en funcin de
los logaritmos de las concentraciones, en mg/ml, de
cada analito de las Soluciones estndar y determinar la
lnea de regresin usando un anlisis de cuadrados
mnimos.
A partir de las grficas, determinar la concentracin, C,
en mg/ml, del analito pertinente en la Solucin mues-
tra.
Calcular por separado las cantidades, en mg, de bilob-
lido (C 11H 1sOs), ginkglido A (C20H249), ginkglido B
(C20H2410) y ginkglido C (C20H2411) en la porcin
de Tabletas tomada:
Resultado = eX 20
C concentracin del analito pertinente en la
=
Solucin muestra (mg/ml)
Calcular la cantidad total de lactonas terpnicas en la
porcin de Tabletas tornada, sumando las cantidades
calculadas de cada analito. Calcular la cantidad total,
en mg, de lactonas terpnicas por Tableta y el
porcentaje de lactonas terpnicas en la cantidad
declarada de Extracto en Polvo de Ginkgo.
Criterios de aceptacin: 5,4%~ 12,0% de lactonas ter-
pnicas, que consisten en biloblido, ginkglido A,
ginkglido B y ginkglido C.
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos pe D1soluc1on.
Medio: Acido clorhdrico O, 1 N; 500 ml
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 45 min
Soluciones estndar: Proceder sean se indica en la
prueba de Contenido de Lactonos ferpnicas.
Solucin muestra: Combinar porciones de 25 ml de la
solucin en anlisis de cada uno de los seis vasos de
disolucin en un embudo de separacin. Extraer con
lJSP 18
cuatro porciones de 50 mL de acetato de etilo. Combi-
nar los cxtrJctos y cvJporJr JI vaco hJsta sequedJd.
Disolver el residuo sometiendo a ultrasonido en 5,0 mL
de una n1ezc!.:: de Jgu.:: y n:etano! (1: 1).
Anlisis: Proceder ~eun :,e indica en la prueba de Con-
temdo de Lactonas ferpemcas para determinar la concen-
tracin, C, en mg/rnL, de ginkglido B en la Solucin
muestra.
Calcular la cantidad disuelta de ginkglido B corno
porcentaje:
Resultado = 5000C/3G
C = concentracin de ginkglido B en la Solucin
muestra (rng/mL)
G = contenido de ginkglido B, segn se
determin en la prueba de Contenido de
Lactonas Terpnicas (rng/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% del contenido de gink-
glidq B
VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para ~eterminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a co!I.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, el artculo
usado para preparar las Tabletas. Etiquetar las Tabletas
indicando e contenido, en mg, de E:xtracto en Polvo de
GilJkgo por Tableta.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Lactonas Terpnicas de Ginkgo USP
ER lsorhamnetina USP
ER Kaernpferol USP
ER Quercetina USP
Extracto en Polvo de Ginkgo
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Ginkgo se prepara a partir de las
hojas desecadas y trituradas de Ginkgo por extraccin con
una mezcla de acetona-agua u otros disolventes adecua-
dos. La relacin entre el material vegetal crudo y el Ex-
tracto en Polvo est entre 35:1 y 67:1. Contiene no me-
nos de 22,0% y no ms de 27,0% de flavonoides,
calculados como glicsidos de flavonol, con una masa
molecular rnedia de 756,7, con respecto a la materia seca.
Contiene no menos de 5,4% y no ms de 12,0% de lac-
tonas terpnicas, constituidas por 2,6%--5,8% de bilob-
lido (C1 sHrn08); y ,2,8%-6,2% de la suma de ,ginkglido A
(C20H24 9 ), ginkgolido B (C20H2410) y g1nkgolido C
(C20H2411 ), con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Prueba de flavonoides
Solucin estndar: Una soluciT) de 0,6 mg/mL de ER
Rutina USP y 0,2 mg/mL de ER Acido Clorognico USP
y de ER Quercetina USP en metanol
Solucin muestra: 5 mg/mL de Extracto en Polvo en
una mezcla de metanoi y agua (4: 1)
'\u,nlPmPntm OiPf Ptirns .1 Ginkgo 6487
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamano promedio de partcula de 5 pm
(placa:, para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 pL
Fase mvil: Acetato de etilo, agua. cido frmico anhi-
dro y ac1do actico giac1al l i 00:26: 1 l: 1 1)
Solucin reveladora 1: 5 mg/mL de difenilborinato de
2-aminoetilo en metanol
Solucin reveladora 2: 50 mg/mL de polietilenglicol
400 en alcohol
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Antes de desarrollar los cromatogramas, saturar la c-
mara durante 20 minutos con Fase mvil. Registrar la
temperatura y humedad en el laboratorio. Si la hu-
medad relativa excede de 50%, acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
35%, usando un dispositivo adecuado. Aplicar las
muestras, por separado y en bandas, a una placa
para cromatografa en capa delgada adecuada (ver
Cromatografa (621 )) y dejar que se sequen las ban-
das. Desarrollar la placa en un recorrido de 6 cm,
retirar la placa de la cmara cromatogrfica y secar
en un horno de aire circulante a 105 durante 5
minutos. Rociar inmediatamente la placa caliente
con Solucin reveladora 7, luego con Solucin revela-
dora 2, secar y observar bajo luz UV de longitud de
onda larga.
Criterios de aceptacin: La Solucin estndar presenta
en su parte inferior, con valores Rf crecientes, una zona
fluorescente de color marrn amarillento debida a ru-
tina (Rf de 0,28), una zona fluorescente de color azul
claro debida a cido clorognico (RF de 0,36) y una
zona fluorescente de color amarillo debida a querce-
tina (RF de 0,92). La Solucin muestra presenta una
zona fluorescente de color marrn amarillento, una
zona fluorescente de color azul claro y una zona fluo-
rescente de color marrn amarillento a valores Rr simi-
lares a los de rutina, cido clorognico y quercetina,
respectivamente, en la Solucin estndar. Se detectan
zonas adicionales de color amarillento a verde amari-
llento debidas a flavonoides detectados en el cromato-
grama de la Solucin muestra. stas incluyen una zona
por debajo de la zona de rutina, dos zonas entre las
zonas de rutina y cid() ~lorognic(), y dos zonas por
encima de la zona de ac1do clorogen1co. Se pueden
detectar otras zonas en el cromatograma de la Solucin
muestra.
B. HPLC: En la prueba de Contenido de Glicsidos de Fla-
vonol, los tiempos de retencin de los picos ~e querce-
tina, isorhamnetina y kaempferol de la Soluoon muestra
corresponden a los de la Solucin estndar. En el croma-
tograma de la Solucin muestra, la relacin entre el pico
de kaempferol y el de quercetina es no menos de 0,7; y
el pico de isorharnnetina es no menos de O, 1 veces el
tamano del pico de quercetina.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS DE FLAVONOL
Disolvente de extraccin: Alcohol, cido clorhdrico y
agua (25:4:1 O)
Fase mvil: Metanol, agua y cido fosfrico
(100:100:1)
Solucin estndar A: O, 125 mg/mL de ER Quercetina
usr en metano!
Solucin estndar B: O, 125 mg/mL de ER Kaempferol
USP en metano!
Solucin estndar C: 0,03 mg/mL de ER lsorhamnetina
U SP e11 111ela1101
Solucin muestra: Transferir aproximadamente O, 3 g
rlP Extracto en Polvo. oe<;ado<; con exactitud. a un ma-
traz de 250 mL equipado con un condensador de re-
flujo. Agregar 78 mL de Disolvente de extraccin y some-
ter a reflujo en un bao de agua caliente durante 1 35
6488 Ginkgo / '\up/pmentos Dietticos USP 38

minutos. [NOTA-La solucin se tornar de color rojo Soluciones estndar: Usando el contenido declarado
intenso. El color de la solucin no es una indicacin de l<ldur1as lerpnic<ls individuales, prep<lrdr cinco solu-
definitiva de la totalidad de la reaccin.) Dejar que se ciones de ER Lactonas Terpnicas de Ginkgo USP en
enfre a temperatura ambiente. Tr'1nsfcrir J un miltraz Diluyente de11lru del i11le1vdiu de 5 500 g/rnl para
volumtrico de 1 00 mL, diluir con ag11a a volumen y cada una de las lactonas terpnicas pertinentes. Usar
mezclar. ultrasonido hasta disolver los analitos, si fuera necesario.
Sistema cromato9rfico Pasar a travs de un filtro con un tamafio de poro de
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) 0,45 m o menor.
Modo: HPLC Solucin muestra: Transferir aproximadamente 120 mg
Detector: UV 370 nm de Extracto en Polvo, pesados con exactitud, a un vaso
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de precipitados de 25 ml. Agregar 1O ml de Solucin
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min amortiguadora al residuo y someter a ultrasonido du-
Volumen de inyeccin: 20 L rante 5 minutos. Transferir cuantitativamente la solucin
Aptitud del sistema a un tubo cromatogrfico de vidrio relleno de tierra sil-
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y cea para cromatografa capaz de contener 20 mL de
Solucin estndar C fase acuosa. 1 Enjuagar el vaso de precipitados con dos
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para querce- porciones de 5 mL de Solucin amortiguadora y transfe-
tina, kaempferol e isorhamnetina son aproximada- rir los lavados a la columna. No exceder de 20 ml de
mente 1,0; 1,8 y 2,0 respectivamente; Solucin estn- fase acuosa total ni la capacidad de contencin del
dar A, Solucin estndar B y Solucin estndar C] tubo cromatogrfico. Dejar que la Solucin amortigua-
Requisitos de aptitud dora se absorba en la columna. Despus de 15 minutos,
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de- eluir la columna con 1 00 mL de acetato de etilo, reco-
terminada a partir del pico de quercetina en inyeccio- ger la solucin de acetato de etilo y evaporar al vaco
nes repetidas, Solucin estndar A hasta sequedad en un bafio de agua mantenido a 50.
Anlisis Disolver el residuo en 20,0 ml de Diluyente.
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So- Sistema cromato9rfico
lucin estndar C y Solucin muestra (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud dPI SistPma.)
Calcular el porcentaje de cada qlicsido de flavonol en Modo: HPLC
la porcin de Extracto en Polvo tomada: Detector: Evaporativo de dispersin de luz. [NOTA-
Los parmetros del detector se ajustan para lograr la
Resultado= (ru/rs) x (Cs/W) x F x 1 O mejor relacin sefial-ruido, de acuerdo con las reco-
mendaciones del fabricante.)
ru = rea del pico del analito pertinente de la Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Solucin muestra Temperatura de la columna: 25 1
rs = rea del pico del analito pertinente de la Velocidad de flujo: 1 ml/min
Solucin estndar A, Solucin estndar B o Volumen de inyeccin: 15 L
Solucin estndar C Aptitud del sistema
Cs = concentracin del analito pertinente en la Muestras: Soluciones estndar
Solucin estndar A, Solucin estndar B o Requisitos de aptitud
Solucin estndar C (mg/mL) Similitud de los cromat0<;ramas: Los cromatogra-
W = peso de Extracto en Polvo tomado para mas de las Soluciones estandar son similares al croma-
preparar la Solucin muestra (g) tograma de referencia provisto con el lote de ER Lac-
F = factor de la masa molecular media para tonas Terpnicas de Ginkgo USP usado.
convertir cada analito en glicsido de Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
flavonol con una masa molecular media de terminada a partir del pico de biloblido en inyeccio-
756,7: 2,504 para quercetina; 2,437 para nes repetidas
isorhamnetina y 2,588 para kaempferol Coeficiente de correlacin: No menos de
Calcular el porcentaje total de glicsidos de flavonol, 0,995 para la lnea de regresin, segn se determina
sumando los porcentajes individuales calculados. en el Anlisis.
Criterios de aceptacin: 22,0%-27,0% de flavonoides, Anlisis
calculados como glicsidos de flavonol con una masa Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
molecular media de 756,7, con respecto a la materia Registrar los cromatogramas e identificar los picos de
seca los analitos pertinentes en los cromatogramas de las
CONTENIDO DE LACTONAS TERPNICAS Soluciones estndar por comparacin con el cromato-
Disolvente: Metano! y agua (9:1) grama de referencia del lote de ER Lactonas Terpnicas
Solucin amortiguadora: Disolver 1, 19 g de fosfato di- de Ginkgo USP usado. Medir las reas de los picos de
bsico de sodio y 8,25 g de fosfato monobsico de po- los analitos. Graficar los logaritmos de las respuestas
tasio en 1000 mL de agua y ajustar a un pH de 5,8. de los picos pertinentes en funcin de los logaritmos
Diluyente: Metano! y agua (1 : 1) de las concentraciones, en mg/mL, de cada analito de
Solucin A: Agua las Soluciones estndar y determinar la lnea de regre-
Solucin B: Metano! sin, usando un anlisis de cuadrados mnimos.
Fase mvil: Ver la Tabla 7. A partir de las grficas, determinar la concentracin, C,
en mg/ml, del analito pertinente en la Solucin mues-
Tabla 1 tra.
.- ---- -- ----------- ---------------- Calcular por separado los porcentajes de biloblido
Tiempo Solucin A Solucin B (C1sH1,;x), ginkglido A (CuH249), ginkglido B
lmin) 1/o) 1%)
(C;oHn010) y ginkglido C (C,,0H21011) en la porcin
o 75 25 de Extracto en Polvo tomada:
23 52 48
Resultado = (C/W) x 2000
28 ---------- -- ___ _2L_ 48
30 2'.J 75
C = concentracin del analito pertinente en la
35 1o 90 Solucin muestra (mg/mL)
40 75 25 -
' El material adecuado disponible cornercialrnente es Extrelut NT 20 de E
50 75 25 Merck Science.
USP 38 Suplementos Dietticos ! Ginkgo 6489

W = oPso del Extracto en Polvo tomado para [NOTA-Si se observa el deterioro de las formas de los .
' prepd1 di Id Solucin muestra (mg) , . picos, lavar la columna usand_o unJ mezcla de acctoni
Calcular el porcentaje total de lactonas terpenicas en la trilo y agua (9: 1) a 1,0 ml/m1n durante 30 minutos.]
porcin de Extracto en Polvo torn;id;i .>um;indo los Anlisis
porcentajes calculados para cada anal1to. Muestras: '\n/11rin Pstndar y Solucin muestra
Criterios de aceptacin Usar el cromatograma de la Solucion estndar para iden-
Lactonas terpnicas totales: 5,4%-12,0% tificar los picos de rutina y quercetina.
Biloblido: 2,6%-5,8% Calcular los porcentajes de rutina y quercetina en la
Suma de ginkglido A, ginkglido B y ginkglido C: porcin de Extracto en Polvo tomada:
2,8%-6,2%
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
CONTAMINANTES
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Residuos de Plaguicidas ru = rea del pico del analito pertinente de la
(561 ): Cumple con los requisitos. Solucin muestra
rs = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin estndar
Eliminar lo siguiente:
Cs = concentracin de ER Rutina USP o ER
Quercetina USP en la Solucin estndar
METALES PESADOS, Mtodo JI (231): No ms de 20 g/ (mg/ml)
9 (Oficial 01-dic-2015) Cu = concentracin de Extracto en Polvo en la
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to- Solucin muestra (mg/ml)
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g, Criterios de aceptacin: No ms de 4% de rutina y no
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y , ms de Q,5% de quers:etina
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. , LIMITE DE ACIDOS GINKGOLICOS
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- Solucin A: cido fosfrico al 0,01 % en agua
ple con los requisitos de las pruebas _pa_ra de_terminar la Solucin B: cido fosfrico al 0,01 % en acetonitrilo
ausencia de Salmonella spp. y EschenchJO col1. Fase mvil: Ver la Tabla 3.
PRUEBAS ESPECFICAS
LMITE DE RUTINA y QUERCETINA Tabla 3
---
Solucin A: Acido frmico al O, 1 % en agua Tiempo Solucin A Solucin B
Solucin B: Acetonitrilo (min) (%) (O/o)
Fase mvil: Ver la Tabla 2.
o 25 75
6 10 90
Tabla 2
7 10 90
Tiempo Solucin A Solucin B 8 25 75
(min) (%) (O/o)
10 25 75
o 90 10
40 64 36 Solucin estndar: Disolver ER cidos Ginkglicos USP
45 o 100 en metanol y diluir con agua, si fuera necesario, hasta
50 o 100
obtener una concentracin de 0,25 g/ml de cidos
C-----
ginkg~icos, ca,lcula_dos como la, suma <;Je ~ic;Jos cong-
51 90 10 neres; acido g1nkgol1co Cl 3:0, ac1do g1nkgol1co Cl 5:1 y
60 90 10 cido ginkglico Cl 7:1.
Solucin muestra: Transferir 0,5 g de Extracto en Polvo
Solucin estndar: Preparar una solucin compuesta a un matraz volumtrico de 1 O ml. Agregar 8 ml de
combinando 0,4 mg/ml de ER Rutina USP y 0,05 mg/ metano! para disolver y diluir con agua a volumen.
ml de ER Quercetina USP en metano!. Someter a ultra- Sistema cromato9rfico
sonido hasta disolver, si fuera necesario, y mezclar bien. (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Solucin muestra: Transferir 100 mg de Extracto en Modo: HPLC
Polvo a un matraz volumtrico de 1 O ml. Agregar apro- Detector: UV 21 O nm
ximadamente 7 ml de metanol y someter a ultrasonido Columna: 4,6 mm x 5 cm; relleno L7 desactivado para
hasta disolver. Diluir con metano! a volumen y mezclar bases
bien. Pasar a travs de un filtro con un tamao de poro Temperatura de la columna: 35
de 0,45 m o menor. Velocidad de flujo: 1 ml/min
Sistema cromato9rfico Volumen de inyeccin: 100 L
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.) Aptitud del sistema
Modo: HPLC Muestra: Solucin estndar
Detector: UV 254 nm Requisitos de aptitud
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m desac- Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
tivado para bases es similar al c~omatograma de referencia provisto con
Temperatura de la columna: 30 el lote de ER Acidos Ginkglicos USP usado.
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
Volumen de inyeccin: 1 O L cido ginkglico e 15:1
Aptitud del sistema Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0% para
Muestra: Solucin estndar el pico de cido ginkglico c 15:1 en inyecciones
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos son 1,0 y repetidas
1,8 para rutina y quercetina, respectivamente.] Anlisis
Requisitos de aptitud Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Eficiencia de la columna: No menos de 15 000 pla- [NOTA-Identificar los picos de los analitos pertinent~s
tos tericos para el pico de rutina y no menos de por comparaciqn con ei cromatograma de referencia
20 000 para el pi~o de quercetina . . del lote de ER Acidos Ginkglicos USP usado. S1 se
Factor de asimetna: 0,8-2,0 para el pico de rutina observa el deterioro de las formas de los picos, lavar la
Desviacin estndar relativa: No mas de 2,0% para
el pico de rutina en inyecciones repetidas
6490 Ginkgo I )urilrmrntns OirtNicos
columna usando una mezcla de rnetanol y agua (9: 1)
durante 30 rninutos.j
Calcular la concentracin, en g/g, de cada cido gink-
g0!ico en !a porcin de Extracto en Polvo tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/W) x P x 10
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin estndar , Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Cs = concentracin de ER Acidos Ginkglicos USP
en la Solucin estndar (mg/mL)
W = peso del Extracto en Polvo tomado para
preparar la Solucin muestra (mg)
P = cont~nido del cido ginkglico pertinente en
ER Acidos Ginkglicos USP (g/g)
Calcular la cantidad total de cidos ginkglicos,
sumando los contenidos individuales.
<;:riterios de aceptacin: No ms de 5 g/g
PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Extracto en Polvo
Anlisis: Secar la Muestra a 1ose durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 5,0%
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Disolven-
tes Residuales en Extractos Botnicos (565).
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Proteger de la hume-
dad. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de la que se prepar el artculo. La etiqueta tam-
bin indica el contenido de glicsidos de flavonol y de
lactonas terpnicas, el disolvente de extraccin usado
para la preparacin y la relacin entre el material vegetal
cru,do inicial y el Extracto en Polvo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER cido Clorognico USP
ER ~actonas Terpnicas de Ginkgo USP
ER Acidos Ginkglicos USP
ER lsorhamnetina USP
ER Kaempterol USP
ER Quercetina USP
ER Rutina USP
Ginseng Americano
DEFINICIN
El Ginseng Americano consiste en las races secas de Panax
quinquefolius L. (Fam. Araliaceae). Contiene no menos de
4,0% de ginsensidos totales, calculados con respecto a la
materia seca.
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 20 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en metano!
Solucin estndar B: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asitico USP en metano!
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ginseng Americano reducido a polvo fino a un ma-
traz volumtrico de 25 mL equipado con un condensa-
dor de reflujo. Agregar 1 0,0 mL de una mezcla de me-
tano! y agua (7:1 3), y calentar bajo reflujo durante 15
minutos. Enfriar, filtrar v diluir el filtrado con metano!
hasta 1 0,0 ml. , aproximadamente 2 mg de ginsensido Rg,, a un reci-
Adsorbente: Capa de gel de slice de 0,25 mm, por lo
regular de 20 cm de longitud (placas para TLC)
USP 38
Volumen de aplicacin: 20 L
Fase mvil A: Cloroformo, metano! y agua (13:7:2).
Usar la fase inferior.
Fase mvil B: Akuho! btf!cc, ~~e ctJto de etilo y aguJ
(4:1 ')). lhar la fase surerinr
Solucin reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehdo
en 1 O mL de cido actico glacial, agregar 85 mL de
metano!, mezclar y agregar cuidadosamente 5 mL de
cido sulfrico.
Anlisis
Solucin muestra
Desarrollar en una cmara que contenga Fase mvil A
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
1 0,5 cm a partir del origen. Retirar las placas y dejar
que se sequen. Girar las placas 90 y desarrollar en
una cmara que contenga Fase mvil B hasta que el
frente de la fase mvil haya recorrido 10,5 cm a partir
del origen. Retirar las placas y dejar que se sequen.
Rociar con Solucin reveladora. Calentar las placas a
105-l l O durante 1 O minutos y observar.
Requisitos de aptitud: El orden, de arriba hacia abajo,
de ginsensidos en las placas cromatogrficas es: Rg2 (a
la izquierda) y Rg, (a la derecha), Rf, Re, Rd,. Re, R~2. (a
la izquierda) y Rb, (a la derecha) y Ro. Los g1nsenos1dos
Rg 2, Rg 1, Rf, Re y Rd se encuentran en la mitad superior
de las placas; los ginsensidos remanentes se en~uen
tran en la mitad inferior despus de cromatograf1ar con
la Fase mvil B. La Solucin estndar A no presenta una
mancha para ginsensido Rf. La Solucin estndar B pre-
senta una mancha para ginsensido Rf.
Criterios de aceptacin: Las manchas de la Solucin
muestra corresponden a las de la Solucin estndar A.
B. Los tiempos de retencin de los picos de ginsensidos
Rg 1, Re, Rb 1, Rb2, Rc2 y Rd de la Solucin m~estra co~res
ponden a los de la Solucin estndar A, se9un se obtie-
nen en la prueba de Contenido. de Ginse'.1osido_s., El co-
ciente de respuesta entre los picos de g1nsenos1do Rb2 y
Rb 1 es menos de 0,4, y el cociente de respuesta entre los
picos de ginsensido Rg1 y Rb1 es menos de 0,3. El cro-
matograma no presenta un pico significativo al tiempo
de retencin correspondiente al de ginsensido Rf de la
Solucin estndar B, segn se obtiene en la prueba de
Contenido de Ginsensidos.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GINSENSIDOS
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitrilo y agua (4: 1)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
lmin' (%) (O/o\
o 76 24
- -----1.1______ _ -- - - ------ ------'2~4'---------"
1------2=8~-------- 35
f----~~--r------"'5Co'6=5'-------+---4-'-'3"-5"---
l-----gL ---+--------''-------i-------'-'1""~--
1--------'6,_.4~5'--- i 76 24
.L _zr,_ ____ _ ________.-"'-24-'------
Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
Solucin estndar A: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Americano USP, equivalente
a aproximadamente 2 mg de ginsensido Rb,, a un re-
cipiente adecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
Solucin estndar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Asitico USP, equivalente a
piente adecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
Solucin muestra: Reducir 1 00 g de Ginseng Ameri-
cano a polvo y transferir aproximadamente 1,0 g del
USP 38
polvo, pesados con exactitud, a un matraz de fondo
redondo de 1 00 ml equipJdo con un condensador de
reflujo. Agregar 50 ml de Diluyente y unos pocos gra-
nos de piedra pmez, calentar J ebullicin en un b<lo
de agua bajo reflujo durante 1 hora, Pnfriar y filtrar.
Lavar el matraz y el residuo con 20 mL de Diluyente y
pasar a travs del mismo filtro. Combinar los filtrados y
evaporar en un evaporador rotatorio a 50 hasta seque-
dad. Disolver el residuo en 10,0 mL de Diluyente.
Sistema cromato!)rfico
(Ver Cromatograf1a (621 j, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Columna analtica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
m secretores presentes en el floema secundario.
Temperatura de la columna: 25
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar 8
Requisitos de aptitud:
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
es similar al Cromatograma de Referencia provisto
con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asi-
tico USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada para la suma de las reas de los picos de
los 6 ginsensidos principales, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
Solucin muestra
Identificar los ginsensidos Rg,, Re, Rb,, Re, Rb2 y Rd en
las Soluciones estndar y la Solucin muestra compa-
rando los cromatogramas con el Cromatograma de Re-
ferencia provisto con el ER Extracto en Polvo de Gin-
seng Americano USP y medir las respuestas de los
picos.
Calcular los porcentajes de ginsensidos individuales en
la porcin de Ginseng Americano tomada:
Resultado= (ru!rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = respuesta del pico de ginsensido Rg,, Re,
Rb1, Re, Rb2 o Rd de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de ginsensido Rg,, Re,
Rb1, Re, Rb2 o Rd de la Solucin estndar
correspondiente
Cs = concentracin de ginsensido Rg1, Re, Rb,, Re,
Rb2 o Rd en la Solucin estndar
correspondiente (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
w = peso de Ginseng Americano tomado para
preparar la Solucin muestra (mg)
Calcular el porcentaje de ginsensidos totales en la
porcin de Ginseng Americano tomada sumando los
porcentajes individuales.
Criterios de aceptacin: No menos de 4,0% de ginse-
nsidos totales con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231 >: No ms de 20 ppm
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 j: Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 1 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 100 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022j: Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
Suplementos Dietticos/ Ginseng 6'191
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Races fusiformes o cilindricas, en oca-
siones con rJmificaciones, por lo regular de 1-1 O cin y
en ocasiones de hasta 20 cm de largo y de hasta
2,5 cm de dimetro en la corona, con una o ms cica-
trices de insercin del tallo. Coloracin externa amarilla
plida a dorada, textura spera, con anillos horizontales
prominentes y finos rebordes longitudinales como resul-
tado del secado. Presenta cicatrices de insercin de ra-
ces o raicillas finas. Cuando se presenta una base de
tallo, las escamas son delgadas y se desprenden (a dife-
rencia de P. ginseng, en el que las escamas en la base
del tallo son carnosas y persistentes). La fractura es
corta; la superficie fracturada es de color blanco a mar-
fil, con un olor aromtico distintivo y anillos de canales
Histologa
Seccin transversal de la raz: Presenta mltiples ca-
pas de clulas suberosas de paredes delgadas. El
floema secundario se caracteriza por lagunas de aire
conspicuas; parnquima de almacenamiento que con-
tiene almidn en abundancia; unos pocos elementos
cribosos que se encuentran en pequeos grupos; y
anillos de canales secretores esquizgenos. Cada canal
secretor est revestido internamente con 6-8 clulas
epiteliales que carecen de almidn. El xilema se carac-
teriza por un parnquima de almacenamiento que
contiene almidn en abundancia y unos pocos ele-
mentos traqueales compuestos por traqueidas no ligni-
ficadas y vasos reticulados o espiralados ligeramente
lignificados que carecen de canales secretores y que se
encuentran aislados o en grupos pequeos. En ocasio-
nes se presentan cristales en drusas dentro de las clu-
las parenquimticas vasculares. El xilema primario
diarco o triarco se encuentra en el centro de la raz .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(561j: No ms de 2,0%
PRDIDA POR SECADO (731 >: Secar 1 g del artculo, redu-
cido a polvo fino, a 105 durante 2 horas: pierde no ms
de ,10,0% de su peso. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561j:
No ms de 8%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar protegiendo
del calor.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la ;>lanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11 j
ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP
Ginseng Americano en Polvo
DEFINICIN
El Ginseng Americano en Polvo es Ginseng Americano redu-
cido a polvo fino o muy fino. Contiene no menos de
4,0% de ginsensidos totales, calculado con respecto a la
materia seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en metano:
Solucin estndar B: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asitico USP en metanol
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ginseng Americano en Polvo a un matraz de 25 mL
6492 Ginseng / Suplementos DietPtirns
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
10,0 mL de una me?Cla de metanol y agua (7:1 3) y
calentar bajo reflujo durante 15 minutos. Enfriar, filtrar
y rlil11ir el filtr;irln rrin mctanol hasta 10,0 ml.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, tpicamente de 20 cm de largo (placas
para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 L
Fase mvil A: Cloroformo, metanol y agua (13:7:2).
Usar la fase inferior.
Fase mvil B: Alcohol butlico, acetato de etilo y agua
(4: 1 :5). Usar la fase superior.
Solucin reveladora: Disolver 0,5 ml de anisaldehdo
en 1O mL de cido actico glacial, agregar 85 ml de
metanol, mezclar, y agregar con cuidado, 5 mL de
cido sulfrico.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Desarrollar en una cmara que contenga Fase mvil A,
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
10,5 cm desde el origen. Retirar la placas y dejar que
se sequen. Girar las placas 90 y desarrollar en una
cmara que contenga Fase mvil B, hasta que el frente
de la fase mvil haya recorrido 10,5 cm desde el ori-
gen. Retirar la placas y dejar que se sequen. Rociar con
Solucin reveladora. Calentar las placas a 1 05-11 O du-
rante 1 O minutos y observar.
Requisitos de aptitud: El orden de ginsensidos en las
placas cromatogrficas, desde arriba hacia abajo, es: Rg2
(a la izquierda) y Rg1 (a la derecha), Rf, Re, Rd, Re, Rb2
(a la izquierda) y Rb 1 (a la derecha), y Ro. Ginsensidos
Rg2, Rg1, Rf, Re y Rd se encuentran en la mitad superior
de las placas; el resto de los ginsensidos se encuentran
en la mitad inferior despus de cromatografiar con Fase
mvil B. La Solucin estndar A no muestra ninguna
mancha para ginsensido Rf. La Solucin estndar B pre-
senta una mancha para ginsensido Rf.
Criterios de aceptacin: Las manchas de la Solucin
muestra corresponden a las de la Solucin estndar A.
B. Los tiempos de retencin de los picos para ginsensi-
dos Rg1, Re, Rb1, Rb2, Rc2 y Rd de la Solucin muestra
corresponden a los de la Solucin t>5tndar A, segCm se
obtienen en la prueba de Contenido de Ginsensidos. El
cociente de respuesta entre los picos para ginsensidos
Rb2 y Rb1 es menor de 0,4 y el cociente de respuesta
entre los picos para ginsensidos Rg1 y Rb1 es menor de
0,3. El cromatograma no muestra ningn pico principal
en el tiempo de retencin correspondiente al del ginse-
nsido Rf de la Solucin estndar B, segn se obtienen en
la prueba de Contenido de Ginsensidos.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GINSENSIDOS
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
~ ----- - ---- ,-------- ---
Tiempo Solucin A
~-- ___(min)_ . -----.-- (%}
o 76 --------- ~-
12 76
28 ~ __ _____J)2___
51 5 56 5
52 5 o 100
64 5 76
77 76
Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
Solucin estndar A: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Americano USP equivalente
USP 38
a aproximadamente 2 mg de ginsensido Rb1, a un re-
cipiente Jdecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
Solucin estndar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Po!vo de Ginseng Asitico USP equivalente a
aproximadamente 2 mg de ginsensido Rg1, a un reci-
piente adecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ginseng Americano en Polvo pesado con exactitud,
a un matraz de 1 00 mL, de fondo redondo equipado
con un condensador de reflujo. Agregar 50 mL de Dilu-
yente y unos granos de piedra pmez, calentar a ebulli-
cin en un bao de agua bajo reflujo durante 1 hora,
enfriar y filtrar. Lavar el matraz y el residuo con 20 ml
de Diluyente y pasar a travs del mismo filtro. Combinar
los filtrados y evaporar en un evaporador rotatorio a
50 hasta sequedad. Disolver el residuo en 10,0 mL de
Diluyente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Columna analtica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
m
Temperatura de la columna: 2SV
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
es similar al Cromatograma de Referencia provisto
con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asi-
tico USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada para la suma de las reas de los picos de
los 6 ginsensidos principales en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Identificar ginsensidos Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd en las
Soluciones estndar y la Solucin muestra, comparando
los cromatogramas con el Cromatograma de Referen-
cia provisto con el ER Extracto en Polvo de Ginseng
Americano USP y medir las respuestas de los picos.
Calcular los porcentajes de ginsensidos individuales en
la porcin de Ginseng Americano en Polvo tomada:
Resultado = (ru! r1) X e X (V/W) X 100
ru =respuesta del pico de ginsensido Rg1, Re,
Rb1, Re, Rb2 o Rd de la Solucin muestra
= respuesta del pico de ginsensido Rg1, Re,
Rb1, Re, Rb2 o Rd de la Solucin estndar
correspondiente
= concentracin de ginsensido Rg1, Re, Rb1, Re,
Rb2 o Rd en la Solucin estndar
correspondiente (mg/ml)
Solucin B V = volumen de Solucin muestra (ml)
(%) w = peso de Ginseng Americano en Polvo tomado
24 para preparar la Solucin muestra (mg)
24 Calcular el porcentaje de ginsensidos totales en la
35 porcin de Ginseng Americano en Polvo tomada
43 5 sumando los porcentajes individuales.
Criterios de aceptacin: No menos de 4,0% de ginse-
nsidos totales con respecto a la materia seca
24
24 CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 ppm
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
USP 38 Suplementos Dietticos/ Ginseng 6493

PRUEBAS ESPECFICAS Requisitos de aptitud: El orden, de arriba hacia abajo,

CARACTERSTICAS BOTNICAS: Polvo de color marrn ama- de ginsensidos en las placas cromatogrficas es: Rg2 (a
rillento plido con un olor ligeramente aromtico. Clulas la izquierda) y Rg1 (a la derecha), Rf, Re, Rd, Re, Rb2 (a
parenquimlicds ovdies iierids de l)cnulos de dimidn y id iLquierdd) y Rb1 (d id derecha) y Ro. Los gimenfoidos
cristales drusas dr oxalato de calcio aislados. Vasos secre- Rg!, Rg,, Rf, Re y Rd se encuentran en la mitad superior
tores de color marrn amarillento con contenido marrn de las placas; los ginsensidos remanentes se encuen-
amarillento . tran en la mitad inferior despus de cromatografiar con
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa la Fase mvil B. La Solucin estndar A no presenta una
(561): No ms de 2,0% mancha para ginsensido Rf. La Solucin estndar B pre-
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g, reducido a polvo senta una mancha para ginsensido Rf .
fino, a 105 durante 2 horas: pierde no ms de 10,0% Criterios de aceptacin: Las manchas de la Solucin
de su peso. muestra corresponden a las de la Solucin estndar A.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561): B. Los tiempos de retencin de los picos de ginsensi-
No ms de 8% dos Rg1, Re, Rb1, Rb2, Re y Rd de la Solucin muestra
corresponden a los de la Solucin. estnda: A, s~gn se
REQUISITOS ADICIONALES obtienen en la prueba de Contenido de Gmsenos1dos. El
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- cociente de respuesta entre los picos de ginsensido Rb2
permeables. Proteger de la luz, la humedad y el calor. y Rb 1 es menos de 0,4, y el cociente de respuesta entre
ETIQUETADO: La etiqueta declara el nombre cientfico en los picos de ginsensido Rg1 y Rb1 es menos de 0,3. La
latn, y despus de la denominacin oficial, las partes de Solucin muestra no presenta un pico significativo al
la P,lanta contenidas en el artculo. tiempo de retencin correspondiente al de ginsensido
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) Rf de la Solucin estndar B, segn se obtiene en la
ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP prueba de Contenido de Ginsensidos.
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GINSENSIOOS
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Extracto en Polvo de Ginseng Fase mvil: Ver la Tabla 1.
Americano
Tabla 1
DEFINICIN Tiempo Solucin A Solucin B
El Extracto en Polvo de Ginseng Americano se prepara a tmin\ f/o) (O/o\
partir de las races secas reducidas a polvo de Panax quin- o 76 24
quefolius L. (Fam. Araliaceae) usando disolventes adecua-
12 76 24
dos y se seca hasta obtener un polvo. Contiene no menos
de 1 0,0% de ginsensidos totales, calculados con res- 28 65 35
pecto a la materia anhidra. La relacin entre el material 51 5 56 5 43 5
vegetal crudo inicial y el Extracto en Polvo de Ginseng 52 5 __Q 100
Americano est entre 3:1 y 7:1. 64 5 76 24
~--- ___ _}7 76 -- ______________ 24 - - - - -
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
DELGADA Solucin estndar A: Transferir una cantidad de ER Ex-
Solucin estndar A: 20 mg/mL de ER Extracto en tracto en Polvo de Ginseng Americano USP, equivalente
Polvo de Ginseng Americano USP en metanol a aproximadamente 2 mg de ginsensido Rb1,_ a un re-
Solucin estndar B: 20 mg/mL de ER Extracto en cipiente adecuado y disolver en 1 0,0 mL de Diluyente.
Polvo de Ginseng Asitico USP en metano! Solucin estndar B: Transferir una cantidad de ER Ex-
Solucin muestra: 20 mg/mL en metano! tracto en Polvo de Ginseng Asitico USP, equivalente a
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa aproximadamente 2 mg de ginsensido Rg1, a un reci-
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla- piente adecuado y disolver en 10,0 mL de Diluyente.
cas para TLC) Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto
Volumen de aplicacin: 20 L en Polvo de Ginseng Americano, equivalente a aproxi-
Fase mvil A: Cloroformo, metano! y agua (1 3:7:2). madamente 5 mg de ginsensidos, a un recipiente ade-
Usar la fase inferior. cuado. Disolver en 1 0,0 mL de Diluyente, sometiendo a
Fase mvil B: Alcohol butlico, acetato de etilo y agua ultrasonido durante 1O minutos y filtrar.
(4:1 :5). Usar la fase superior. Sistema cromato9rfico
Solucin reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehdo (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
en 1 O mL de cido actico glacial, agregar 85 mL de Modo: HPLC
metanol, mezclar y agregar cuidadosamente 5 mL de Detector: UV 203 nm
cido sulfrico. Columnas
Anlisis Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y Columna analtica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
Solucin muestra m
Desarrollar en una cmara que contenga Fase mvil A Temperatura de la columna: 25
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
10,5 cm a partir del origen. Retirar las placas y dejar Volumen de inyeccin: 1O L
que se sequen. Girar las placas 90 y desarrollar en Aptitud del sistema
una cmara que contenga Fase mvil B hasta que el Muestra: Solucin estndar B
frente de la fase mvil haya recorrido 1 0,5 cm a partir Requisitos de aptitud:
del origen. Retirar las placas y dejar que se sequen. Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
Rociar con Solucin reveladora. Calentar las placas a es similar al Cromatograma de Referencia provisto
1 05"-11 O durante 1O minutos y observar. con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asi-
tico USP usado.
6494 Ginsenq / Suplementos Dietticos
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
tern1i11add f-Jdl a id surna de las reas de ios picos de
los 6 gimenosidos principale'>, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Identificar los ginsensidos Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd en
las Soluciones estndar y la Solucin muestra compa-
rando los cromatogramas con el Cromatograma de Re-
ferencia provisto con el ER Extracto en Polvo de Gin-
seng Americano USP y medir las respuestas de los
picos.
Calcular los porcentajes de ginsensidos individuales en
la porcin de Extracto en Polvo de Ginseng Americano
tomada:
Resultado= (r11/r1) x (C/C11) x P
ru = respuesta del pico de ginsensidos Rg1, Re,
Rb1, Re, Rb 2 o Rd de la Solucin muestra
r5 = respuesta del pico de ginsensidos RCj1, Re,
Rb1, Re, Rb2 o Rd de la Solucin estandar
correspondiente
Cs = concentracin de ginsensidos Rg1, Re, Rb1,
Re, Rb2 o Rd en la Solucin estndar
correspondiente (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de
Ginseng Americano en la Solucin muestra
(mg/mL)
P = cantidad declarada, como porcentaje, de cada
ginsensido pertinente en el ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP
Calcular el porcentaje de ginsensidos totales en. la
porcin de Extracto en Polvo de Ginseng Americano
tomada sumando los porcentajes individuales. . extractos combinados hasta sequedad al vaco a
Criterios de aceptacin: No menos de 10,0% de g1n-
sensidos totales con respecto a la materia anhidra
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo JI (231>: No ms de
20 P,pme (Oficial Ol-dic-2015) , Fase mvil B: La fase superior de una mezcla de al-
ARTCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 >: Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 >: El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 oi ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022>: Cum-
ple con los requisitos de las pruebas .Pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschenchta colt.
PRUEBAS ESPECFICAS
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo I (921 ): No ms de
7,0%
EXTRACTOS BOTNICOS, Residuo de Evaporacin (565>:
Cumple con, los requisitos. _ . . rar las placa<; dP la cmara y dejar que se sequen.
DETERMINACION DE ALCOHOL, Metodo 11 \611): No ms de
0,25%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la. luz. . ,.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1ent1f1co en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artculo. Etiquetar .indi-
cando el contenido de ginsensidos totales, el disolvente
de extraccin usado para la preparacin y la relacin en-
tre el material vegetal crudo inicial y el Extracto en Polvo.
Cumple con los requisitos de etiquetado en Extractos Bo-
tnicos (565>.
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP
Ginseng Americano, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Ginseng Americano contienen Extracto en
Polvo de Ginseng Americano. Las Cpsulas contienen no
menos de 90,0% y no ms de 11 0,0% de la cantida.d
declarada de Extracto, calculado como la suma de ginse-
nsidos Rg 1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd.
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin muestra
Cpsulas de gelatina blanda: Transferir una porcin
del contenido de las Cpsulas, equivalente a 1 00 mg
de Extracto en Polvo, a un embudo de separacin que
contenga 30 mL de una mezcla de hexanos, metano! y
agua (20:15:1 O), disolver en esta. mezcla, y recoger la
capa inferior. Lavar la capa superior con tres porciones
de 15 mL de una mezcla de metano! y agua (15: 1 O), y
combinar los lavados con la capa inferior. Evaporar
hasta sequedad al vaco a 45-50. Disolver e residuo
en 5 mL de metano!.
Cpsulas de gelatina dura: Transferir una porcin del
contenido de las Cpsulas, equivalente a 100 mg de
Extracto en Polvo, a un matraz Erlenmeyer. Extraer a
una temperatura de 55 con tres porciones de 20 mL
de una mezcla de metano! y agua (2:8). Evaporar los
45-50. Disolver el residuo en 5 mL de metano!.
Solucin estndar A: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en metano!
Solucin estndar B: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asitico USP en metano!
Volumen de aplicacin: 20 L
Fase mvil A: La fase interior de una mezcla de cloro-
formo, metano! y agua (13:7:2)
cohol butlico, acetato de etilo y agua (4:1 :5)
Solucin reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehdo
en 1O mL de cido actico glacial, agregar 85 mL de
metano!, mezclar, y agregar cuidadosamente 5 mL de
cido sulfrico, y mezclar.
Anlisis
Muestras: Solucin muestra, Solucin estndar A y Solu-
cin estndar B
Desarrollar los cromatogramas en una cmara que
contenga Fase mvil A hasta que el frente de la fase .
mvil haya recorrido 1 0,5 cm a partir del origen. Reti-
rar las placa'> de lacmara y dejar que se ?equen .
Girar las placas 90 y desarrollar en una ca mara que
contenga Fase mvil B hasta que el frente de la fase .
mvil haya recorrido 10,5 cm a partir del origen. Reti-
Rociar con Solucin reveladora. Calentar las placas a
105 -11 O durante 1 O minutos y observar. El orden
de lm ginsensi<i0s en las placas, de arriba a abajo,
es: Rg) (a la izquierda) y Rg1 (a la derecha), Rf, Re,
Rd, Re, Rb2 (a la izquierda) y Rb 1 (a la derecha) y Ro.
Los ginsensidos Rg, Rg1, Rf, Re y Rd se encuentra'.1.
en las mitJdes superiores de las placas; los g1nsenos1-
dos remanentes se encuentran en las mitades inferio-
res despus de crornatoqrafiar con la Fase mvil B.
Criterios de aceptacin: La Solucin estndar A no pre-
senta una mancha para ginsensido Rt. La Solucin es-
tndar B presenta una mancha para ginsensido Rt. Las
manchas de la Solucion muestra corresponden a las de
la Solucin estndar A.
USP 38
B. los tiempos de retPncin de lm piros de ginsensidos
Rg 1, Re, Rb 1, Rb2, Rc2 y Rd en el uomatograma.de la .
Solucin muestra corresponden a los de la Soluoon estan-
Jw, se~ll se uulie11e11 efl ia fJIUeUd de Conlemuo Je G111-
sensidos. El cociente de respuesta entre los picos de Rb.
y Rb 1 es menos de 0,4; y el cociente de respuesta. entre
los picos de Rg1 y Rb1 es menos de 0,3. La Soluc1on mues-
tra no presenta un pico significativo al tiempo de reten-
cin correspondiente al de ginsensido Rf que se observa
en la Solucin de aptitud del sistema, segn se obtienen
en la prueba de Contenido de Ginsensidos.
CONTENIDO
CONTENIDO DE GINSENSIDOS
Mtodo 1
Diluyente: Agua y alcohol (3:2)
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%)
o 76 24
12 76 24
28 65 35
51 5 56 5 --- -- .... 1.?.LL_~
52 5 o 100
64 5 76 24
24
77 76
Solucin estndar: Una solucin de ER Extracto en rs
Polvo de Ginseng Americano USP en Diluyen.te qu~ .
contenga el equivalente de 0,2 mg/ml de g1nsenos1do
Rb1
Solucin muestra (para 9psulas de gela.tina blanda~:
Abrir no menos de 20 Capsulas, transferir el contenid?
a un recipiente adecuado, y mezclar hasta homogenei-
zar. Transferir una porcin, que se espera contenga.
una cantidad de Extracto equivalente a 12 mg de g1n-
sensidos a un matraz adecuado con tapn. Agregar
5,0 ml d~ tetrahidrofurano y someter a ultrasonido
durante 5 minutos. Agregar 25,0 ml de una mezcla de
metanol y agua (4:6), y agitar durante 50 minutos en
un agitador automtico. Transfer~ 15,0 ml de ~a emul-
sin obtenida a un tubo de centrifuga con tapon,
agregar 800 mg de cloruro de sodio, agitar durante 30
segundos, y centrifugar hasta obtener una fase _supe-
rior transparente. Diluir 1,0 ml de la fase superior con
4 ml de agua en un tubo adecuado y transferir la so-
lucin a una columna que contenga 360 mg de re-
lleno L2 previamente tratado con 3,0 mL_ de metanol
seguidos de 8,0 ml de agua. [NOTA-Elu1r lentamente
en todas las etapas de elucin, a una velocidad no
mayor de 1 gota/segundo. No usar vaco.] Enjuagar el
tubo con 5 ml de agua, transferir a la columna te-
niendo cuidado de eluir lentamente, y desechar el
eluato. Repetir la elucin con 5 ml de una mezcla de
metano! y agua ( 4:6), y desechar el eluato. El u ir los
ginsensidos con 5,0 ml de .m~tanol. Evaporar la solu-
cin bajo una corriente de nitrogeno a 40 (50 m1~u
tos) y disolver el residuo con 1,0 ml de una soluoon
de acetonitrilo y agua (1 :4).
Solucin de aptitud del sistema: 24 mg/ml de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Asitico USP en Diluyente.
Filtrar.
Sistema cromato~rfico
(ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columna
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Columna analtica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de
3 ~tm
Suplementos Dietticos / Ginscng 6495
Temperatura de la columna: 25"
Velocidad de flujo: 1,5 ml/mi11
Volumen de inyeccin: 1 O pl
Aptitud del ~i~ter~1a . . .
Muestra: Solucion de aptitud del mtema (inyectar
20 pl)
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin de aptitud del sistema es similar al Cro-
matograma de Referencia provisto con el lote de ER
Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada para la suma de las reas de los picos de
los seis ginsensidos principales en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Identificar lo~ gins~nsidos Rg1, Re Rb1, Re, Rb2 y Rd
en la Solucion estandar y la Soluc1on muestra compa-
rando los cromatogramas con el Cromatograma de
Referencia provisto con el ER Extracto ~n Polvo de
Ginseng Americano USP usado, y medir las respues-
tas de los picos. . ..
Calcular la cantidad, en mg, de cada ginsenos1~,o per-
tinente (Rg 1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd) en la porc1on del
contenido de Cpsulas tomada:
Resultado = 0,3 x (ru/rs) x Cs x P
ru = rea del pico de cada ginsensido pertinente
de la Solucin muestra
= rea del pico de cada ginsensido pertinente
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Extracto en Polvo de
Ginseng Americano USP en la Solucin
estndar (mg/ml)
P = cantidad declarada, en porcentaje, de cada
ginsensido pertinente en el lote de ER
Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
usado
Calcular el contenido total de ginsensidos, T, en
mg, sumando las cantidades de los ginsensidos
individuales.
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo con
respecto a la cantidad declarada:
Resultado =T x (Aw1/W) x (100/Lr) x (100/L)
T = contenido total de ginsensidos en la porcin
del contenido de Cpsulas tomada (mg)
AWT = peso promedio del contenido de Cpsulas
(mg/Cpsula)
W = peso de la porcin del contenido de Cpsulas
tomada (mg)
L1 = contenido total de ginsensidos, mg, en
1 00 mg del Extracto usado para preparar las
Cpsulas . .
L = cantidad de Extracto por Capsula segun la
cantidad declarada (mg/Capsula)
Mtodo 2
Diluyente, Solucin A, Solucin B, Fase mvil,
Solucin de aptitud del sistema, Sistema
cromatogrfico y Reciuisitos de aptitud: Proceder
segn se indica en Meto~o 7.
Disolvente A: Fase superior de una mezcla que con-
siste en hexano, metanol y agua (4:3:2)
Disolvente B: Fase inferior de una mezcla que consiste
en hexano, metano! y agua (4:3:2)
Solucin estndar: Una solucin de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en Dilu_yente_q_ue
contenga el equiva!ente a 1 mg/ml de ginsenos1do
Rb1
Solucin muestra A (para Cpsulas de gelatina
blanda): Abrir no menos de 20 Cpsulas y transferir el
contenido a un recipiente adecuado. Mezclar hasta ho-
6496 Ginseng / Suplementos Dietticos
moqeneizar y transferir una porcin, que se espera
contenga una cantidad de Extracto equivalente d
15 mg de ginsensidos totales, a un matraz de 50 ml.
Agregar 1 0,0 mL de Di;ofvcnte A y someter a ultraso-
111do dur;mtP 3-5 minutos a 25-30u. Transferir la solu-
cin a un embudo de separacin de 125 mL. Agregar
1? mL de Disolvente. B al residuo y someter a ultraso-
111do durante 3-5 minutos a 25-30. Transferir la solu-
cir: al mismo embudo de separacin. Repetir el pro-
ced1m1ento anterior dos veces (el volumen total ser
aproximadamente 60 mL). Agitar y luego dejar que las
fases se separen. Recoger la fase inferior combinada en
un matraz de fondo redondo y lavar la fase superior
combinada dos veces con 1 O mL de Disolvente B. Eva-
porar la fase inferior combinada hasta sequedad al va-
co a 45-50. Transferir el residuo a un matraz volu-
mtrico de 1 O mL usando volmenes pequeos de
metano! y diluir con metano! a volumen.
Solucin muestra B (para Cpsulas de gelatina dura):
Pesar el contenido de no menos de 20 Cpsulas y
mezclar. Transferir una porcin de la mezcla, que se
espera contenga una cantidad de Extracto equivalente
a 15 mg de ginsensidos totales, a un matraz Erlenme-
yer. Agregar 15 mL de metano! y agitar hasta mezclar.
Someter a ultrasonido a 25"-30 durante 30 minutos.
Enfriar, pasar a travs de papel de filtro, y regresar el
residuo al matraz Erlenmeyer. Agregar otros 15 mL de
metano!, someter a ultrasonido la mezcla a 25-30
durante 30 minutos, y filtrar. Lavar el residuo con tres
porciones de 15 mL de metano!. Evaporar los extractos
y el lavado combinados hasta sequedad al vaco a
45-50. Transferir el residuo a un matraz volumtrico
de 1 O mL usando volmenes pequeos de metano! y
diluir con metano! a volumen.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Identificar los ginsensidos Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd
en la Solucin estndar y la Solucin muestra compa-
rando los cromatogramas con el Cromatograma de
Referencia provisto con el ER Extracto en Polvo de
Ginseng Americano USP, y medir las respuestas de
los picos.
Calcular la cantidad, en mg, de cada ginsensido per-
tinente (Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd) en la porcin del
contenido de Cpsulas tomada:
Resultado = O, 1 x (ru/rs) x Cs x P
ru = rea del pico de cada ginsensido pertinente
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de cada ginsensido pertinente
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Extracto en Polvo de
Ginseng Americano USP en la Solucin
estndar (mg/mL)
p = cantidad declarada, en porcentaje, de cada
ginsensido pertinente en el lote de ER
Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
usado
Calcular el contenido total de ginsensidos, T, en
mg, sumando las cantidades de los ginsensidos
individuales.
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo con
respecto a la cantidad declarada:
Resultado = T x (Awi/W) x (100/L>) x (100/L)
T = contenido total de ginsensidos en la porcin
del contenido de Cpsulas tomada (mg)
AwT = peso promedio del contenido de Cpsulas
(mg/Cpsula)
w = peso de la porcin del contenido de Cpsulas
tomada (mg)
USP 38
lr = contenido total de ginsensidos, mg, en
1 00 mg del Extracto usado para preparar las
Cpsulas
L = Ldflliddd Je ExlrciLlu ur Ccipsuia segn ia
cantidad declarada (mg/Capsula)
Criterios de aceptacin: 90,0%-11 0,0% de Extracto,
calculado como la suma de ginsensidos Rg1, Re, Rb1,
Re, Rb 1 y Rd
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Desintegracin
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz. Almacenar a temperatura
ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del cual se prepararon las Cpsulas. La etiqueta
tambin indica la cantidad de Extracto en mg/Cpsula.
Etiquetar las Cpsulas indicando el porcentaje de ginse-
nsidos en el Extracto contenido en las Cpsulas. Para
Cpsulas de gelatina blanda, indicar el mtodo de Conte-
nido de Ginsensidos con el que cumple el producto ni-
camente si no se usa el Mtodo 7.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP
Ginseng Americano, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Ginseng Americano contienen Extracto en
Polvo de Ginseng Americano. Las Tabletas contienen no
menos de 90,0% y no ms de 110,0% de Extracto, calcu-
lado como la suma de ginsensidos Rg,, Re, Rb1, Re, Rb2
y Rd.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar A: 20 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en metano!
Solucin estndar B: 20 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asitico USP en metano!
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Tabletas
reducidas a polvo fino equivalente a 100 mg de Ex-
tracto a un matraz Erlenmeyer. Extraer a una tempera-
tura de 55c con tres porciones de 20 mL de una mezcla
de metano! y agua (2:8). Evaporar los extractos combi-
nados hasta sequedad al vaco a 45-50. Disolver el
residuo en 5 mL de metano!.
Volumen de aplicacin: 20 L
Fase mvil A: La fase inferior de una mezcla de cloro-
formo, metano! y agua (13:7:2)
Fase mvil B: La fasP superior dP 1ma mezcla de al-
cohol butlico, acetato de etilo y agua (4:1 :5)
Solucin reveladora: Disolver 0,5 ml de anisaldehdo
en 1 O mL de cido actico glacial, agregar 85 ml de
USP 38
metanol, mezclilr, y qrcqr cuidJdosilmcntc 5 mL de
cido sulfrico, y mezclar.
Anlisis
Muestras: !loluc1on estandar A, ~oluoon estandar By
Solucin mue~lru
Proceder segn se indica en el captulo. Desarrollar en
una cmara que contenga Fase mvil A hasta que el
frente de la fase mvil haya recorrido 10,5 cm a partir
del origen. Retirar las placas de la cmara y dejar que
se sequen. Girar las placas 90 y desarrollar en una
cmara que contenga Fase mvil B hasta que el frente
de la fase mvil haya recorrido 10,5 cm a partir del
origen. Retirar las placas de la cmara y dejar que se
sequen. Rociar con Solucin reveladora. Calentar las
placas a 105-11 O durante 1 O minutos y observar. El
orden de los ginsensidos en las placas, de arriba a
abajo, es: Rg2 (a la izquierda) y Rg1 (a la derecha), Rf,
Re, Rd, Re, Rb2 (a la izquierda) y Rb1 (a la derecha) y
Ro. Los ginsensidos Rg2, Rg1, Rf, Re y Rd se encuen-
tran en las mitades superiores de las placas; los ginse-
nsidos remanentes se encuentran en las mitades in-
feriores despus de cromatografiar con la Fase mvil
B.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin estndar A no presenta una mancha para ginsen-
sido Rf. La Solucin estndar B presenta una mancha
para ginsensido Rf. Las manchas de la Solucin muestra
corresponden a las de la Solucin estndar A.
B. Los tiempos de retencin de los picos de ginsensidos
Rg1, Re, Rb1, Rb2, Rc2 y Rd en el cromatograma de la
Solucin muestra corresponden a los de la Solucin estn-
dar, segn se obtienen en la prueba de Contenido de Gin-
sensidos. El cociente de respuesta entre los picos de Rb2
y Rb1 es menos de 0,4; y el cociente de respuesta entre
los picos de Rg 1 y Rb 1 es menos de 0,3. El cromatograma
de la Solucin muestra no presenta un pico significativo al
tiempo de retencin correspondiente al de ginsensido
Rf que se observa en la Solucin de aptitud del sistema,
segn se obtienen en la prueba de Contenido de Ginsen-
s1dos.
CONTENIDO
CONTENIDO DE GINSENSIDOS
Diluyente: Agua y alcohol (3:2)
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
- -~-----~
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (O/o) (%)
o 76 24
12 76 24
28 65 35
51 5 56 5 43 5
52 5 o 100
64 5 76 24
77 76 24
Solucin estndar: Una solucin de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Americano USP en Diluyente que con-
tenga el equivalente a 1 mg/mL de ginsensido Rb1
Solucin muestra: Pesar con exactitud y reducir a
polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir a un
matraz Erlenmeyer una porcin, pesada con exactitud,
del polvo que se espera contenga una cantidad de Ex-
tracto equivalente a 15 mg de ginsensidos totales,
agregar 15 mL de metano!, y agitar hasta mezclar. So-
meter a ultrasonido a 25-30 durante 30 minutos. En-
friar, pasar a travs de papel de filtro, y regresar el resi-
duo al matraz Erlenmeyer. Agregar otros 15 mL de
metano!, someter a ultrasonido la mezcla a 25-30 du-
rante 30 minutos, y filtrar. Lavar el residuo con tres por-
ciones de 15 mL de metano!. Evaporar los extractos y
)urJIPmPnfm DiPtPticos / Ginseng 6497
lavados combinados hasta sequedad al vaco a 45-50.
Transferir el residuo a un matraz volumetrico de
10,0 mL usando volmenes pequenos de metanol y di-
luir con metanoi a voiumen.
Solucin de aptitud del sistema: 24 m9/ml de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Asitico USP en Diluyente.
Filtrar.
Sistema cromato9rfico
(ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columna
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Columna analtica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
m
Temperatura de la columna: 25
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema (inyectar
20 L)
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin de aptitud del sistema es similar al Cro-
matograma de Referencia provisto con el lote de ER
Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada para la suma de las reas de los picos de
los seis ginsensidos principales en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Identificar los ginsensidos Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd
en la Solucin estndar y la Solucin muestra compa-
rando los cromatogramas con el Cromatograma de
Referencia provisto con el ER Extracto en Polvo de
Ginseng Americano USP, y medir las respuestas de los
picos.
Calcular la cantidad, en mg, de cada ginsensido per-
tinente (Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado = O, 1 x (ru/rs) x Cs x P
ru = rea del pico de cada ginsensido pertinente
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de cada ginsensido pertinente
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Extracto en Polvo de
Ginseng Americano USP en la Solucin
estndar (mg/mL)
P = cantidad declarada, en porcentaje, de cada
ginsensido pertinente en el lote de ER
Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
usado
Calcular el contenido total de ginsensidos, T, en mg,
sumando las cantidades de los ginsensidos
individuales.
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo con
respecto a la cantidad declarada:
Resultado = T x (Awr/W) x (1 00/LE) x (100/L)
T = contenido total de ginsensidos en la porcin
de Tabletas tomada (mg)
Aw1 = peso promedio de Tabletas (mg/Tableta)
W = peso de la porcin de Tabletas tomada (mg)
L1 = contenido total de ginsensidos, mg, en
1 00 mg del Extracto usado para preparar las
Tabletas
L - cantidad de Extracto por Tableta segn la
cantidad declarada (mg/Tableta)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de Extracto
en Polvo, calculado como la suma de ginsensidos Rg1,
Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd
6498 Ginseng / Suplementos Dietticos
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Desintegracin
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENlOS Dll:ttll(OS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz. Almacenar a temperatura
ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del que se prepararon las Tabletas. La etiqueta tam-
bin indica la cantidad de Extracto en mg/Tableta. Eti-
quetar las Tabletas indicando el porcentaje de ginsensi-
dos totales en el Extracto contenido en las Tabletas.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP
Ginseng Asitico
DEFINICIN
El Ginseng Asitico consiste en las races secas de Panax gin-
seng C.A. Mey. (Fam. Araliaceae). Contiene no menos de
0,2% de ginsensido Rg1 y no menos de O, 1 o/o de ginse-
nsido Rb1, ambos calculados con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 5 mg/mL de arbutina y de escina,
en metanol
Solucin muestra: 1,0 g de Ginseng Asitico reducido
a polvo fino a un matraz de 25 mL equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 10,0 mL de una mezcla
de metanol y agua (7:3), y calentar bajo reflujo durante
15 minutos. Enfriar, filtrar y diluir el filtrado con meta-
no! hasta 10,0 ml.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 L, en bandas
Fase mvil: La capa superior de una mezcla de alcohol
butlico, acetato de etilo y agua (10:2,5:5) en una c-
mara no saturada
Solucin reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehdo
en 1 O mL de cido actico glacial, agregar 85 mL de
metanol, mezclar, agregar cuidadosamente 5 mL de
cido sulfrico y mezclar.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cmara, marcar el trente de la tase mvil y dejar que la
placa se seque. Rociar con Solucin reveladora. Calentar
la placa a 1 05'' 11 oc durante 1 O minutos y observar la
placa.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar presenta, en el tercio superior, una zona de
USP 38
color marrn correspondiente a arbutina y, en el tercio
interior, una zona de color gris correspondiente a
escina.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
zonas de color gris violceo correspondientes a ginsen-
sido Rg1 en la parte superior y a ginsensido Re en la
parte media y entre las zonas correspondientes a arbu-
tina y escina en la Solucin estndar. Una zona de color
gris violceo correspondiente a ginsensido Rb1 se loca-
liza al mismo valor Rf que la zona de color gris corres-
pondiente a escina en la Solucin estndar. Se pueden
observar otras bandas de menor intensidad entre las zo-
nas debidas a ginsensidos Rb1 y Re, y la zona ms
cercana al origen corresponde a ginsensido Re. Se
pueden observar otras manchas en el tercio inferior del
cromatograma .
B. Los tiempos de retencin de los picos de ginsensidos
Rg1, Re, Rf, Rb1, Re y Rd en el cromatograma de la Solu-
cin muestra corresponden a los de la Solucin estndar,
segn se obtienen en la prueba de Contenido de Ginsen-
sidos Rb1 y Rg1. El cociente entre las reas de los picos de
ginsensido Rb2 y ginsensido Rb1 es no menos de 0,4 (a
diferencia de Ginseng Americano).
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GINSENSIDOS RB, Y RG,
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) (%) (%)
o 76 24
12 76 24
28 65 35
51 5 56 5 43 5
52 5 o --
______ _lQQ__
64 5 76 24
77 76 24
Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
Solucin estndar: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Asitico USP, equivalente a
2 mg de ginsensido Rg1, a un recipiente adecuado y
disover en 10,0 mL de Diluyente. [NOTA-No se espera
que las concentraciones de ginsensido Rg 1 y ginsen-
sido Rb1 en esta solucin sean iguales y stas se deter-
minan basndose en las cantidades declaradas presentes
en ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP.]
Solucin muestra: Reducir 1 00 g de Ginseng Asitico a
polvo y transferir aproximadamente 1,0 g del polvo, pe-
sados con exactitud, a un matraz de fondo redondo de
1 00 mL equipado con un condensador de reflujo. Agre-
gar 50 mL de Diluyente y unos pocos granos de piedra
pmez, calentar a ebullicin en un bao de agua bajo
reflujo durante 1 hora, enfriar y filtrar. Lavar el matraz y
el residuo con 20 mL de Diluyente y pasar a travs del
mismo filtro. Combinar los filtrados y evaporar en un
evaporador rotatorio a 50" hasta sequedad. Disolver el
residuo en 1 0,0 mL de Diluyente.
Sistema cromato9rfico
(Ver CromatograflO (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Columna analtica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
m
USP 38
Temperatura de la columna: 25"
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1O p L
Aptitud del shtema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud:
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
es similar al Cromatograma de Referencia provisto
con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asi-
tico USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada para la suma de las reas de los picos de
los 6 ginsensidos principales, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular los porcentajes de ginsensidos Rb1 y Rg 1 en la
porcin de Ginseng Asitico tomada:
Resultado= (ru!r1) x Cs x (V/W) x 100
r11 = respuesta del pico de ginsensido Rg1 o
ginsensido Rb1 de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de ginsensido R_g1 o
ginsensido Rb1 de la Solucin estandar
C = concentracin de ginsensido Rg1 o
ginsensido Rb1 en la Solucin estndar
(mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Ginseng Asitico tomado para
preparar la Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin
Ginsensido Rg,: No menos de 0,2% con respecto a
la materia seca
Ginsensido Rb,: No menos de O, 1 % con respecto a
la materia seca
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS, Mtodo 111 (231 /: No ms de 20 ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561/: Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 100 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022/: Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Races fusiformes o cilndricas, con olor
aromtico distintivo, en ocasiones con ramificaciones,
por lo regular de 1-1 O cm y en ocasiones de hasta
20 cm de largo y de hasta 2,5 cm de dimetro en la
corona, con una o ms cicatrices de insercin del tallo.
Coloracin externa amarilla plida a dorada, textura s-
pera en la parte inferior, con anillos horizontales promi-
nentes y finos rebordes longitudinales como resultado
del secado. Presenta cicatrices de insercin de races o
raicillas finas. Las fracturas son cortas, con la superficie
fracturada, de color blanco a marfil y exponen un anillo
de canales secretores presentes en el floema secundario.
Histologa
Seccin transversal de la raz: Presenta mltiples ca-
pas de clulas suberosas de paredes delgadas. El
floema secundario se caracteriza por lagunas de aire
conspicuas; parnquima de almacenamiento que con-
tiene almidn en abundancia; unos pocos elementos
cribosos; y anillos de canales secretores esquizgenos.
El xilema se caracteriza por un parnquima de almace-
namiento que contiene almidn en abundancia, unos
pocos elementos traqueales y carencia de canales se-
Suplcrncntos Dietticos / Cinsenq 6499
cretores. En ocasiones se presentan cristales en drusas
c;on clulds pdre11quin1~ticas vasculare,.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Oryonica Extrarlo
\561 ;: r-Jo ms de 2, 0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561/: No menos de 14,0%
PRDIDA POR SECADO (731 /: Secar 1,0 g de Ginseng Asi-
tico reducido a polvo fino a 105 durante 2 horas: pierde
no ,ms de 12,0% de su ;ieso. .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 /:
No ms de 8,0%, determinado en 1,0 g de Ginseng Asi-
ticq reducido a polvo fin9. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561/: Nomsdel,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar en un lugar fresco y seco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11 /
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP
Ginseng Asitico en Polvo
DEFINICIN
El Ginseng Asitico en Polvo es Ginseng Asitico reducido a
polvo fino o a polvo muy fino. Contiene no menos de
0,2% de ginsensido Rg1 y no menos de O, 1 % de ginse-
nsido Rb1, ambos calculados con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 5 mg/mL de arbutina y de escina,
en metano!
Solucin muestra: 1,0 g de Ginseng Asitico en Polvo
en un matraz de 25 mL equipado con un condensador
de reflujo. Agregar 10,0 mL de una mezcla de metano!
y agua (7:3), y calentar bajo reflujo durante 15 minu-
tos. Enfriar, filtrar y diluir el filtrado con metano! hasta
10,0 mL.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 pL, en bandas
Fase mvil: La capa superior de una mezcla de alcohol
butlico, acetato de etilo y agua (10:2,5:5) en una c-
mara no saturada
Solucin reveladora: Disolver 0,5 mL de anisaldehdo
en 1 O mL de cido actico glacial y agregar 85 mL de
metano!, mezclar y agregar cuidadosamente 5 mL de
cido sulfrico a esta mezcla.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
tos de la longitud de la placa. Retirar la Flaca de la
cmara, marcar el frente de la fase mvi y dejar que la
placa se seque. Rociar con Solucin reveladora. Calentar
la placa a 1 OS- -11 O'' durante 1 O minutos y observar la
placa.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar presenta, en el tercio superior, una zona de
color marrn correspondiente a arbutina y, en el tercio
inferior, una zona de color gris correspondiente a
escina.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
zonas de color gris violceo correspondientes a ginsen-
sido Rg 1 en la parte superior y a ginsensido Re en la
6500 Ginseng / Suplementos Dietticos
parte media y entre las zonas correspondientes a arbu-
tina y escina en la Solucin estndar. Una zona de color
gris violceo correspondiente a ginsensido Rb 1 se loca-
liza al mismo valor F?,, que la Lona de color gris corres-
pondiente a escina f'n la Solucin estndar. Se pueden
observar otras bandas de menor intensidad entre las zo-
nas debidas a ginsensidos Rb1 y Re, y la zona ms
cercana al origen corresponde a ginsensido Re. Se
pueden observar otras manchas en el tercio inferior del
cromatograma.
B. Los tiempos de retencin de los picos de ginsensidos
Rg1, Re, Rf, Rb1, Re y Rd en el cromatograma de la Solu-
cin muestra corresponden a los de la Solucin estndar,
segn se obtienen en la prueba de Contenido de Ginsen-
sidos Rb1 y Rg1. El cociente entre las reas de los picos de
ginsensido Rb2 y ginsensido Rb1 es no menos de 0,4 (a
diferencia de Ginseng Americano).
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GINSENSIDOS RB, Y RG,
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitrilo y agua (4:1)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
lmin) (%) (%)
o 76 24
12 76 24
28 65 35
51 5 56 5 43 5
52 5 o 100
64 5 76 24
77 76 24
Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
Solucin estndar: Transferir una cantidad de ER Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Asitico USP, equivalente a
2 mg de ginsensido Rg 1, a un recipiente adecuado y
disolver en 1 0,0 mL de Diluyente. [NOTA-No se espera
que las concentraciones de ginsensido Rg, y ginsen-
sido Rb, en esta solucin sean iguales y stas se deter-
minan basndose en las cantidades declaradas presentes
en ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP.]
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Ginseng Asitico en Polvo, pesados con exactitud, a
un matraz de fondo redondo de 1 00 mL equipado con
un condensador de reflujo. Agregar 50 mL de una mez-
cla de Diluyente y unos pocos granos de piedra pmez,
calentar a ebullicin en un bao de agua bajo reflujo
durante 1 hora, enfriar y filtrar. Lavar el matraz y el
residuo con 20 mL de Diluyente y pasar a travs del
mismo filtro. Combinar los filtrados y evaporar en un
evaporador rotatorio a 50 hasta sequedad. Disolver el
residuo en 10,0 mL de Diluyente.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
Columna analtica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
pm
Temperatura de la columna: 25
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O pL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
es similar al Cromatograma de Referencia provisto
con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asi-
tico USP usado.
USP 38
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada para la suma de las reas de los picos de
los 6 ginsenosidos principales, en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular los porcentajes de ginsensidos Rb 1 y Rg, en la
porcin de Ginseng Asitico en Polvo tomada:
Resultado= (r11/r1) x Cs x (V/ltV) x 100
ru = respuesta del pico de ginsensido Rg, o
ginsensido Rb, de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de ginsensido R_g1 o
ginsensido Rb, de la Solucin estandar
Cs = concentracin de ginsensido Rg, o
ginsensido Rb1 en la Solucin estndar
(mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Ginseng Asitico en Polvo tomado
para preparar la Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin
Ginsensidos Rg,: No menos de 0,2% con respecto a
la materia seca
Ginsensido Rb,: No menos de O, 1 % con respecto a
la materia seca
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS, Mtodo)// (231): No ms de 20 ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 2 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Polvo de color marrn ama-
rillento plido con un ligero olor aromtico. Al microsco-
pio, el polvo presenta las siguientes caractersticas: trazas
de sber compuesto de clulas poligonales de paredes
delgadas pero principalmente con felodermis en el exte-
rior; una corteza amplia de clulas parenquimticas con
numerosos canales secretores dispuestos en zonas con-
cntricas; xilema parenquimtico con traqueidas no ligni-
ficadas y vasos ligeramente lignificados con engrosamien-
tos espiralados y reticulados, aislados o en grupos
pequeos; pequeos grnulos de almidn de 0,5-1,0 pm
de dimetro en todas las clulas parenquimticas; y, en
ocasiones, en las clulas de la regin central se observan
grupos de cristales oxalat,o de calcio.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(56)): No ms de 2,0%,
ARTICULOS DE ORIGEN 80TANICO, Extractos Solubles en Al-
c9hol, Mtodo 2 (561): No menos de 14,0%
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Ginseng Asi-
tico en Polvo a 105" durante 2 horas: pierde no ms de
1 2,p% de su peso. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 8,0%, determinado en 1,0 g de Ginseng Asi-
tico en Polvo.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y almacenar en un lugar fresco y seco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artculo.
usr 38 Suplementos Dietticos / Ginseng 6501

ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11) Criterios de aceptacin: Se desarrolla un color marrn

ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP rojizo en la zona de contacto. . ..
C. Los tiempos de retencin de los picos de ginsenos1dos
Rg 1, Re, Rf, Rb 1, Ro2, Re y RJ er1 el cromatogama de 1.a
Solucin murstra corresponden a los de la SoluC1on estan-
dar segn se obtienen en la prueba de Contenido de Gm-
Extracto en Polvo de Ginseng Asitico sensidos. El cociente entre las reas de los picos de Rb2 y
Rb1 es no menos de 0,4 (a diferencia de Ginseng
DEFINICIN Americano).
El Extracto en Polvo de Ginseng Asitico se prepara a partir
COMPOSICIN
de Ginseng Asitico mediante maceracin, per~olacin o
CONTENIDO DE GINSENSIDOS
ambos procesos realizados a temperatura ambiente con
Solucin A: Agua
disolventes adecuados tales como alcohol, metano!, agua
Solucin B: Acetonitrilo y agua (4:1)
o mezclas de estos disolventes, y concentrando el extracto
Fase mvil: Ver la Tabla 1.
fluido a temperaturas por debajo de 50. La relacin entre
el material vegetal crudo inicial y el Extract? en Polvo de
Ginseng Asitico est entre 3:1 y 7:1. Contiene no menos Tabla 1
de 3,0% de ginsensidos Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd com- Tiempo Solucin A Solucin B
binados, calculado con respecto a la materia anhidra. lmin) (O/o) (O/o)
Puede contener otras sustancias agregadas. o 76 24
IDENTIFICACIN , 12 76 --- - '
24
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA 28 65 35
DELGADA 51 5 56 5 43 5
Columna de extraccin: Usar una columna de extrac- 52 5 o 100
cin en fase sltda que contenga relleno Cl 8 con ,un
64 5 76 24
tamao de partcula de 55 a 105 m y una relac1on
entre la masa de sorbente y el volumen de la columna 77 76 24
de 360 mg/0,85 mL o equivalente. Acondicionar la co-
Diluyente: Alcohol y agua (4:6)
lumna antes de usar lavando con 3 mL de metano! y
Solucin estndar: 24 mg/mL de ER Extracto en Polvo
8 mL de agua.
de Ginseng Asitico USP en Diluyer:te. Disolver some-
Solucin estndar: Transferir aproximadamente O, 1 g
tiendo a ultrasonido durante 1 O minutos, mezclar y
de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP a un
filtrar.
matraz volumtrico de 5 mL y proceder segn se indica
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
en Solucin muestra, comenzando donde dice "Disolver
estndar, excepto que se debe usar Extracto en Polvo
en agua".
de Ginseng Asitico.
Solucin muestra: Aproximadamente 1,0 g de Ex~ra~to
Sistema cromato9rfico
en Polvo de Ginseng Asitico en u~ matraz volume~rico. (Ver Cromatografw (621), Aptitud del Sistema.)
de 25 mL. Disolver en agua, sometiendo a ultrasorn~o s1
Modo: HPLC
fuera necesario. Diluir con agua a volumen. Transferir
Detector: UV 203 nm
4 O mL de esta solucin a la Columna de extraccin, la-
Columnas
v~r con 1 O mL de agua y desechar el eluato. Eluir la, Guarda columna: 4,6 mm x 2,0 cm; relleno L1
columna con 2 mL de metano!. [NOTA-No usar vac10,
Columna analtica: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 3
eluir manualmente y de forma lenta.] Recoger el eluato
m
en un vial adecuado.
Temperatura de la columna: _25
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
matografa de 0,2 mm sobre una plac?yara cromato- Volumen de inyeccin: 20 ~1L
grafa en capa delgada de alta resoluc1on Aptitud del sistema
Volumen de aplicacin: 1 O L, en bandas
Muestra: Solucin estndar
Fase mvil: Cloroformo, metano! y agua (65:35:1 O).
Requisitos de aptitud
Usar la fase inferior.
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
Solucin reveladora: Alcohol, anhdrido actico y cido
es similar al Cromatograma de Referencia provisto
sulfrico (18:1 :1)
con el lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asi-
Anlisis
tico USP usado.
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
Saturar la cmara con Fase mvil durante 2 horas. De-
terminada para la suma de las reas de los picos de
sarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
los 6 ginsensidos principales, en inyecciones
fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar-
repetidas
tos de la longitud de la placa. Retirar !Flaca .de la Anlisis
cmara marcar el frente de la fase mov1 y de1ar que la
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
placa s~ seque. Rociar con Solucin reveladora y calen-
Identificar los picos de ginsensidos por comparacin
tar en un horno a 105 durante 1 O minutos. Observar
con el Cromatograma de Referencia provisto con el
inmediatamente la placa a la luz blanca.
lote de ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta,
usado y medir las reas de los picos de los 6 ginsensi-
entre otras manchas, ocho manchas de color violeta
amarronado a valores Rr de aproximadamente 0,70; dos principales. . . . .
Calcular el porcentaje de cada ginsenos1do pertinente
0,60; 0,50; O, 36; O, 30; 0,28; 0,20 Y, O, 18, que corres-
(Rg 1, Re, Rb1, Re, Rb 2 y .~d) en la porcin de Extracto
ponden en color y valores Rr a aquellas obtenidas para
en Polvo de G1nseng As1at1co tomada:
la Solucin estndar.
B. Agregar 2 mL de cido acti~o glacial a O, 1 g de Ex- Res11ltado = (r,,/r,) x (C/C11) x P
tracto en Polvo de Ginseng Asiat1co, ent1b1ar durante 5
minutos en un bao de agua caliente y filtrar. Agregar ru = rea del pico de cada ginsensido pertinente
con rnidado 0,5 mL de cido sulfrico a 1,0 mL del de la Solucin muestra
filtrado.
6502 Ginsenq / Suplementos Dietticos
r1 = rea del pico de carfa gimensido pertinente
de la Solucin e'>lndur
C, = concentracin de ER Extracto en Polvo de
Ginscng Asitico USP e11 ict Suluuun e;tandar
(mq/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de
Ginseng Asitico en la Solucin muestra
(mg/mL)
P = cantidad declarada, como porcentaje, de cada
ginsensido pertinente en el ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asitico USP
Calcular el porcentaje de ginsensidos sumando los
porcentajes de cada ginsensido pertinente.
Criterios de aceptacin: No menos de 3,0% con res-
pecto a la materia anhidra
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS (231 ): No ms de 30 ppm. (Oficial 01-dic-
2015),
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 300 ufc/
g. El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 00 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmone/la spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo I (921 ): No ms de
7,0%, deterrriinado en una muestra de O, 15 g
DETERMINACION DE ALCOHOL, Mtodo 11 (611): No ms de
0,25%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Cumple con los requisitos
en Extractos Botnicos (565).
ETIQUETADO: Cumple con los requisitos en Extractos Bot-
nic9s (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP
Ginseng Asitico, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Ginseng Asitico se preparan a partir de Ex-
tracto en Polvo de Ginseng Asitico. Contienen no menos
de 90,0% y no ms de 11 0,0% de Extracto en Polvo,
calculado como la suma de ginsensidos Rg1, Re, Rb1, Re,
Rb2 y Rd.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar: 5 mg/mL de arbutina y de escina,
en metano!
Solucin muestra: Transferir el equivalente a 1 00 mg
de Extracto en Polvo, a partir de Tabletas reducidas a
polvo, a un matraz Erlenmeyer y extraer tres veces,
cada una con una porcin de 20 mL de una mezcla de
metano! y agua (4:1 ), en un bao a 55 durante 30
minutos, mezclando con un agitador magntico. Evapo-
rar los extractos combinados hasta sequedad al vaco a
una temperatura entre 45" y 50, y disolver el residuo
en 1 O mL de una mezcla ue rnetanol y agua (3:2).
USP 38
Volumen de aplicacin: 20 ~1L, en bandas
Fase mvil: La fase superior de una mezcla de alcohol
butlico, acetato de etilo y aqua ( 4: 1 :2) en una cmara
no saturada
Solucin reveladora: 0,5 mL de anisaldehdo en 1O ml
de cido actico glacial. Agregar 85 mL de metano!,
agregar cuidadosamente 5 mL de cido sulfrico, y
mezclar.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Proceder segn se indica en el captulo. Retirar la placa
de la cmara de desarrollo y dejar que se seque. Ro-
ciar con Solucin reveladora. Calentar la placa a
105-11 O durante 1 O minutos y observar la placa.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin estndar presenta, en el tercio superior, una zona
de color marrn correspondiente a arbutina y, en el
tercio inferior, una zona de color gris correspondiente a
escina. Entre estas dos zonas, el cromatograma de la
Solucin muestra presenta zonas de color gris violceo
correspondientes a ginsensido Rg1 en la porcin supe-
rior y a ginsensido Re en la parte media. Una zona de
color gris violceo correspondiente a ginsensido Rb1 se
localiza al mismo valor RF que la zona de color gris
correspondiente a escina en el cromatograma de la So-
lucin estndar. Se pueden observar otras bandas de
menor intensidad entre las zonas debidas a ginsensi-
dos Rb1 y Re, y la zona ms cercana al origen corres-
ponde a ginsensido Re. Se pueden observar otras
manchas en el tercio inferior del cromatograma .
B. Los tiempos de retencin de los analitos pertinentes
de la Solucin muestra corresponden a los de la Solucin
estndar, segn se obtienen en la prueba de Contenido de
Ginsensidos. El tiempo de retencion del pico de ginsen-
sido Rf de la Solucin muestra corresponde al de la Solu-
cin estndar, segn se obtienen en la prueba de Conte-
nido de Ginsensidos.
CONTENIDO
CONTENIDO DE GINSENSIDOS
Diluyente: Agua y alcohol (3:2)
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitrilo y agua (4: 1)
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%)
o 76 24
12 76 24
28 65 35
51 5 56 5 43 5
52 5 o 100
64 5 76 24
~-
77 76 24
Solucin estndar: 40 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Ginseng Asitico USP en Diluyente. Filtrar.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad del polvo
equivalente a 200 mg de Extracto en Polvo a un matraz
Erlenmeyer y extraer tres veces, cada una con una por-
cin de 20 ml de una mezcla de metano! y agua (4:1 ),
en un bao a 55 durante 30 minutos, mezclando con
un agitador magntico. Evaporar los extractos combina-
dos hasta sequedad al vaco a una temperatura entre
45 y 50'. Disolver el residuo en 5,0 mL de Diluyente y
filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 \. Aptitud dPI '\istf'ma.)
LJSP 18
Modo: HPLC
Detector: UV 203 nm
Columna
Guarda coiumna: 4,6 rnrn x 2,0 u11; 1die11u L1
Columna analtica: 4,6 mm >'. 15 cm; relleno L1 de 3
m REQUISITOS ADICIONALES
Temperatura de la columna: 25
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar es similar al Cromatograma de
Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asitico USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada para la suma de las reas de los picos de
los seis ginsensidos principales en inyecciones
repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Registrar los cromatogramas, identificar los picos de
ginsensidos por comparacin con el Cromatograma
de Referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Ginseng Asitico USP usado, y medir las
reas de los picos de los seis ginsensidos principales.
Calcular la cantidad, en mg, de cada ginsensido per-
tinente (Rg1, Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado = 0,05 x (ru/rs) x Cs x P
ru = rea del pico de cada ginsensido pertinente
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de cada ginsensido pertinente
de la Solucin estndar
C = concentracin de ER Extracto en Polvo de
Ginseng Asitico USP en la Solucin estndar
(mg/mL)
P = cantidad declarada, en porcentaje, de cada
ginsensido pertinente en el lote de ER
Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP
usado
Calcular el contenido total de ginsensidos, T, en mg,
sumando las cantidades de ginsensidos individuales.
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo con respecto
a la cantidad declarada:
Resultado = T x (Awi/W) x (100/L) x (100/L)
T = contenido total de ginsensidos en la porcin
de Tabletas tomada (mg)
AwT = peso promedio de Tabletas (mg/Tableta)
W = peso de la porcin de Tabletas tomada (mg)
LE = contenido total de ginsensidos en 100 mg
del Extracto usado para preparar las Tabletas
(mg)
L = cantidad de Extracto por Tableta segn la
cantidad declarada (mg/Tablela)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de Extracto
en Polvo, calculado como la suma de ginsensidos Rg 1,
Re, Rb1, Re, Rb2 y Rd
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Desintegracin
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1000 ufc/g.
Sup!eme11tO' niptr'tirn<. .1 Glicil 6503
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Las
Tabletas cumplen con los requisitos de las pruebas para
determinar la ausencia de Salmonella spp. y Escherichia
coli.
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del que se prepararon las Tabletas. La etiqueta tam-
bin indica la cantidad de Extracto en Polvo, en mg/
Tableta, y el contenido, en mg, de ginsensidos por
1 09 mg de Extracto en Polvo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Ginseng Asitico USP
Ginseng Siberiano-ver Eleuterococo en
Suplementos Dietticos
Glicil-t-glutamina
H/J
C1H13N34 H10 221,21
L-2-(Amino acetamide)-4-amino-4-oxo-butanoic acid
monohydrate;
Glicil-L-glutamina hidrato [13115-71-4].
DEFINICIN
La Glicil-L-glutamina contiene no menos de 98,0% y no ms
de 101,5% de glicil-t-glutamina (C1HnN i4), calculado
con respecto a la sustancia anhidra y exenta de disolven-
tes, y excluyendo glicina y glutamina.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197A) ,
B. Cumple con los requisitos de Rotacin Optica, Rotacin
Especfica (781 S) en Pruebas Especficas.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Muestra: 300 mg
Blanco: Mezclar 5 mL de cido frmico con 50 mL de
cido actico glacial.
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: cido perclrico O, 1 N SV
Deteccin del punto final: Potenciomtrica
Anlisis: Disolver la Muestra en 5 mL de cido frmico,
agregar 50 mL de cido actico glacial y valorar con la
Solucin volumtrica. Realizar una determinacin con el
Blanco y hacer las correcciones necesarias.
Calcular el porcentaje de glicil-L-glutamim (CH ,N 14)
en la Muestra tomada:
Resultado1 = [(V1 - Vs) x N x (F/\1\1)] ,; 100
= volumen de la Solucin volumtrica consumida
oor la Muestra (mL)
= volumen de la Solucin volumtrica consumida
por el Blanco (mL)
N = normalidad real de la Solucin volumtrica
(mEq/mL)
6504 Glicil / Suplementos DiPtticos
F = factor de equivalencia, 203,2 mq/mEq
W = peso de Muestra (mg)
Calcular el porcentaje de glicil-L-glutamina (CH 1iN i0 4 )
en la Mue\trn tnmMia, excluyendo g!icinJ y glutamina:
Resultado1 ~[(Resultado, - a - b)]/[(l 00 - Gli - Gin)] x
100
a= Gli x (M,,/M2)
Gli = porcentaje de glicina a partir de la prueba de
Compuestos Relacionados
Gin = porcentaje de glutamina a partir de la prueba
de Compuestos Relacionados
Mr1 = peso molecular de glicil-L-glutamina, 203,2
M2 = peso molecular de glicina, 75, 1
M,! . = peso molecul,ar de glutamina, 146, 1
Cntenos de _acept?cion: 98,0%-101,5% con respecto
a la sust~noa anhidra y exenta de disolventes, y exclu-
yendo glicina y glutamina
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de 0,1%
CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221 >
Muestra: 0,89 g
Solucin estndar: 0,50 mL de cido clorhdrico O 01 O
N '
Criterios de aceptacin: No ms de 200 g/g
CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221 >
Muestra: 0,96 g
Solucin estndar: 0,20 mL de cido sulfrico O 01 O N
Criterios de aceptacin: No ms de 200 g/g '
HIERRO (241): No ms de 10 g/g
DISOLVENTES RESIDUALES (467)
Criterios de aceptacin
Etanol: No mas de 0,5%
[N?TA-Para lo_s Criterios de aceptacin de cualquier otro
, disolvente residual, ver Disolventes Residuales (467).]
LIMITE DE AMONIO
Solucin madr_e del estndar: Disolver 1,486 g de clo-
ruro de amonio en 500,0 mL de agua.
Soluciones estndar de calibracin: Transferir 0,01;
O, 1; 1,0 y 10,0 mL de Solucin madre del estndar a
sendos matraces volumtricos de 1 00 mL y diluir con
agua a volumen. Las concentraciones finales son O 1 1
1O y 1~O g/mL de iones amonio (NHd, ' ' '
respectivamente.
Solucin muestra: Transferir 1,0 g de Glicil-L-glutamina
a un vaso de precipitados de 150 mL que contenga una
barra mezcladora recubierta de plstico, agregar
~ 00,0 mL de agua y mezclar hasta disolver.
Sistema de electrodos: Usar un electrodo indicador
dete~tc;ir de gases, especfico para amonaco con ref~
renc1_a interna co~ectado a un medidor de pH capaz de
medir los potenciales con una reproducibilidad mnima
de 0, 1 mV (ver pH (791 )). Acondicionar el electrodo
de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Anlisis
Lnea de respuesta del estndar: Transferir 100 mL
de agua a un vaso de precipitados de 150 mL que
contenga una barra mezcladora recubierta de plstico,
insertar el electrodo en el agua, mezclar y medir el
potencial. Agregar 1 mL de solucin de hidrxido de
sodio.~ O N~ mezclar y medir el potencial despus de la
estabil1zac1on (aproximadamente 3 minutos). La dife-
rencia de potencial debe ser inferior a 20 mV. Transfe-
rir 1 00,0 mL de cada una de las Soluciones de calibra-
cin estndar (O, 1; 1; 1 O y 100 g/rnL de iones
amonio) a sendos vasos de precipitados de 150 mL y
agregar 1 mL de hidrxido de sodio 1O N. Insertar el
electrodo en cada solucin, mezclar y medir el poten-
cial despus de la estabilizacin (aproximadamente 3
lJSP 38
m~nutos). Graficar u_na curva (cuatro puntos de calibra-
c1011) del potencial (rnV) en funcion de las concentra-
ciones de in amonio (pg/mL).
Muestra: Suucun rnue:,/ra
Enjuagar el electrodo, insrrtJrlo Pn lil Solucin muestra,
agregar 1 mL de hidrxido de sodio 1 O N y mezclar.
Verificar el pH, que debe ser superior a 11; si no fuera
as, ajustar con hidrxido de sodio 1O N. Despus de
3 minutos, medir el potencial y determinar la conce-
tracin de in amonio correspondiente, a partir de la
curva de calibracin.
Calcular el contenido de amonio en la porcin de la
Muestra tomada:
Resultado = (V x C)/W
V = volumende la Solucin muestra (mL)
C concentracin de iones amonio en la Solucin
=
muestra, determinada a partir de la Lnea de
respuesta del estndar (g/mL)
W = peso de Glicil-L-glutamina tomada para
preparar la Solucin muestra (g)
Criterios de aceptacin: No ms de 200 g/g
COMPUESTOS RELACIONADOS
Solucin amortiguadora: Disolver 6,84 g de fosfato de
potasio en 1 000 mL de agua .
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora
(65:35)
Solucin de aptitud. del sistema: Transferir 25 mg de
E~ L-Alanil-L-glutam1na USP y 5 mg de ER L-Alanil-L-ala-
nina USP a un matraz volumtrico de 25 mL y diluir
con agua a volumen. Transferir 1,0 mL de esta solucin
a un matraz volumtrico de 1O mL que contenga
20 mg de ER Glicil-L-glutamina USP y diluir con Fase
mvil a volumen .
Solucin estndar 1: 0,0125 mg/mL de ER Glutamina
USP en Fase mvil
Solucin estndar 2: 0,025 mg/mL de ER Glicina USP
en Fase mvil
Solucin muestra: 2,5 mg/mL de Glicil-L-glutamina en
Fase mvil
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 215 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L8 de 5 m
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para L-alanil-
L-alanina, L-alanil-L-glutamina y glicil-L-glutamina son
0,83; O, 96 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
EficJ~ncia de la columna: No menos de 8000 platos
teonco;; ,rara el pico de L-alanil-L-glutamina
Resolucion: No menos de 2,0 entre L-alanil-L-gluta-
mina y L-alanil-L-alanina
Anlisis
Muestras: Solucin estndar 7, Solucin estndar 2 y
Solucin muestra
Ca_l~ular el porcentaje de glutamina y glicina en la por-
c1on de la Muestra tomada:
Re-,ullcido = (r:Jr,,) x. (CdCu) x 100
respuesta del pico de glutamina o glicina de la
ru =
Soluuon muestra
Is = 1e) puesta dei pico de glutamina de la Solucin
estndar 1 o glicina de la Solucin estndar 2
= rnncentracin de ER Glutamina USP en la
Solucin estndar 7 (mg/mL) o concentracin
de ER Glicina USP en la Solucin estndar 2
(mg/mL)
USP 38 '.urlPmPntm Dietticos I Glicil 6505

(, = ronrentrarin de Glicil-L-glutamina en la IDENTIFICACIN

Sulucin tnueslra (mg/ml) A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197A) _
Calcular el porcenlaje de cualquier otra impureza B. Cumple con los requisitos de Rotacin Optica, Rotacin
e'ecificada y -,e, especificada rn la porcin de la Especfica <781 Sj en Pruebas Especficas.
Muestra tomada:
VALORACIN
Resultado = (ru! r,) x 100 PROCEDIMIENTO
Muestra: 300 mg
ru respuesta del pico de cada impureza individual
= Blanco: Mezclar 5 ml de cido frmico con 50 ml de
rr = suma de las respuestas de todos los picos, cido actico glacial.
excluyendo las respuestas de los picos de Sistema volumtrico
glicina y glutamina (Ver Volumetra (541 ).)
Criterios de aceptacin: Ver la Tabla 7. Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Acido perclrico O, 1 N SV
Tabla 1 Deteccin del punto final: Potenciomtrica
Anlisis: Disolver la Muestra en 5 ml de cido frmico,
Criterios de agregar 50 ml de cido actico glacial y valorar con la
Tiempo de Aceptacin, Solucin volumtrica. Realizar una determinacin con el
Retencin No ms de Blanco y hacer las correcciones necesarias.
Nombre Relativo (O/o)
Calcular el porcentaje de glicil-L-tirosina (C11 H14N24) en
Ciclolali-aln) o 28 02 la Muestra tomada:
Glutamina --- --
o 54 05
Resultado1 = [(Vs - VB) x N x (F/W)] x 100
---~---

cido oiroalutmico o 56 o1
Glicina o 59 1o Vs volumen de la Solucin volumtrica consumida
=
Gli-ali-aln 1 20 o3 por la Muestra (ml)
Gli-alu 210 02 Vs = volumen de la Solucin volumtrica consumida
Cualquier impureza no espe- por el Blanco (ml)
cificada - o1 N = normalidad real de la Solucin volumtrica
Impurezas no especificadas (mEq/mL)
totales - 05 F = factor de equivalencia, 238,2 mg/mEq
W = peso de Muestra (mg)
Calcular el porcentaje de glicil-L-tirosina (C11 H14N204) en
PRUEBAS ESPECFICAS la Muestra tomada, excluyendo glicina y tirosina:
ROTACIN PTICA, Rotacin Especfica (781 S)
Solucin muestra: 100 mg/ml en cido clorhdrico Resultado2 = [(Resultado1 - a - b)]/[(1 00 - Gli - Tir)] x
2 N. Realizar la medicin a 20. 100
Criterios de aceptacin: -5,5 a -7,5 con respecto a
la sustancia anhidra
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo la (921): 7,0%-9,0% a= Gli x (M,,/M,2)
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- b = Tir x (M,/M,i)
pe~meables, bien cerrados y resistentes a la luz.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) Gli = porcentaje de glicina a partir de la prueba de
ER L-Alanil-L-alanina USP Compuestos Relacionados
ER L-Alanil-L-glutamina USP Tir = porcentaje de tirosina a partir de la prueba de
ER Glutamina USP Compuestos Relacionados
ER Glicina USP M,1 peso molecular de glicil-L-tirosina, 238,2
=
ER Glicil-L-glutamina USP M,2 = peso molecular de glicina, 75, 1
M,3 = peso molecular de tirosina, 181,2
Criterios de aceptacin: 98,0%-1 01,5% con respecto
a la sustancia anhidra y exenta de disolventes, y exclu-
yendo glicina y tirosina
Glicil-L-tirosina IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de 0,1%
CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221)
Muestra: 0,89 g
Solucin estndar: 0,50 ml de cido clorhdrico 0,01 O
011 N
Criterios de aceptacin: No ms de 200 g/g
CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221)
Muestra: 0,96 g
Ci1H14N204 2H20 274,27 Solucin estndar: 0,20 ml de cido sulfrico 0,01 O N
L-2-Aminoacetamide-3-(parahydroxyphenyl) propionic acid Criterios de aceptacin: No ms de 200 ~Lg/g
dihydrate; HIERRO (241 ): No ms de 1o g/g
Glicil-L-tirosina dihidrato [ 658-79-7]. DISOLVENTES RESIDUALES (467)
Criterios de aceptacin
DEFINICIN
Etanol: No mas de 0,5%
La Glicil-L-tirosina contiene no menos de 98,0% y no ms
[NOTA-Para los Criterios de aceptacin de cualquier otro
de 101,5% de glicil-L-tirosina (C11H14N24), calculado con disolvente residual, ver Disolventes Residuales (467).]
respecto a la sustancia anhidra y exenta de disolventes, y
LMITE DE AMONIO
excluyendo glicina y tirosina. Solucin madre del estndar: Disolver 1,486 g de clo-
ruro de amonio en 500,0 ml de agua.
6506 Glicil / Su,nlpmpntm Dietticos USP 38

Soluciones de calibracin estndar: Transferir 0,01; Modo: HPLC

O, 1; 1,0 y 10,0 ml de Solucin madre del estndar a Detector: UV 215 nm
sendos matrace~ volumtricos de 1 00 ml y diluir con
rlgt Jil n vo!umen. Las conccntrJcioncs fin.JIC'.> son O, 1, 1,
1O y 100 g/ml de iones amonio (NH 1 ), Volumen de inyeccin: 20 ii
re~pectivamente.
Solucin muestra: Transferir 1,0 g de Glicil-L-tirosina a
un vaso de precipitados de 150 ml que contenga una
barra mezcladora recubierta de plstico, agregar
1 00,0 ml de agua y mezclar hasta disolver.
Sistema de electrodos: Usar un electrodo indicador,
detector de gases, especfico para amonaco con refe-
rencia interna conectado a un medidor de pH capaz de
medir los potenciales con una reproducibilidad mnima
de 0, 1 mV (ver pH (791 )). Acondicionar el electrodo
de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Anlisis
Lnea de respuesta del estndar: Transferir 100 ml
de agua a un vaso de precipitados de 150 ml que
contenga una barra mezcladora recubierta de plstico,
insertar el electrodo en el agua, mezclar y medir el
potencial. Agregar 1 ml de solucin de hidrxido de
sodio 1O N, mezclar y medir el potencial despus de la
estabilizacin (aproximadamente 3 minutos). La dife- ru
rencia de potencial debe ser inferior a 20 mV. Transfe-
rir 100,0 mL de cada una de las Soluciones de calibra-
cin estndar (O, 1; l; 1 O y 100 g/mL de iones
amonio) a sendos vasos de precipitados de 150 mL y
agregar 1 mL de hidrxido de sodio 1 O N. Insertar el
electrodo en cada solucin, mezclar y medir el poten-
cial despus de la estabilizacin (aproximadamente 3
minutos). Graficar una curva (cuatro puntos de calibra-
cin) del potencial (mV) en funcin de las concentra-
ciones de in amonio (g/mL).
Muestra: Solucin muestra
Enjuagar el electrodo, insertarlo en la Solucin muestra,
agregar 1 mL de hidrxido de sodio 1 O N y mezclar.
Verificar el pH, que debe ser superior a 11; si no fuera
as, ajustar con hidrxido de sodio 1 O N. Despus de
3 minutos, medir el potencial y determinar la conce-
tracin de in amonio correspondiente, a partir de la rr
curva de calibracin.
Calcular el contenido de amonio en la porcin de la
Muestra tomada:
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L8 de 5 ,um
Vduc.idad de flujo: ,7 mL;m1n
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para glicil-L-
tirosina, L-alanil-L-alanina y L-alanil-L-glutamina son 1,0;
1,6 y 1,8, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 8000 platos
tericos para el pico de L-alanil-l-glutamina
Resolucin: No menos de 2,0 entre L-alanil-L-gluta-
mina y L-alanil-L-alanina
Anlisis
Muestras: Solucin estndar 7, Solucin estndar 2 y
Solu<in muestra
Calcular el porcentaje de tirosina y glicina en la porcin
de la Muestra tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
respuesta del pico de tirosina o glicina de la
=
Solucin muestra
rs = respuesta del pico de tirosina de la Solucin
estndar 7 o glicina de la Solucin estndar 2
Cs = concentracin de ER L-Tirosina USP en la
Solucin estndar 7 (mg/mL) o concentracin
de ER Glicina USP en la Solucin estndar 2
(mg/mL)
Cu = concentracin de Glicil-L-tirosina en la Solucin
muestra (mg/mL)
Calcular el porcentaje de cualquier otra impureza
especificada y no especificada en la porcin de la
Muestra tomada:
Resultado = (ru/r;) x 100
r0 = respuesta del pico de cada impureza individual
suma de las respuestas de todos los picos,
=
excluyendo las respuestas de los picos de
glicina y tirosina
Criterios de aceptacin: Ver la Tabla 7.

V =
Resultado = (V x C)!W

volumen de la Solucin muestra (mL)

_ T_______ll_____
Tabla 1

Tiempo de
Criterios de
Aceptacin,
C = concentracin de iones amonio en la Solucin
Retencin No ms de
muestra, determinada a partir de la Lnea de
Nombre Relativo ---- - - - - - (%)
respuesta del estndar (g/mL)
W = peso de Glicil-L-tirosina tomada para preparar Ciclo(ali-tir) o 41 02
la Solucin muestra (g) Pivaloil-1-tirmina ~
o 48 o1
Criterios de aceptacin: No ms de 200 g/g Tirosina --
_O_E____ ~---1 5
COMPUESTOS RELACIONADOS
Solucin amortiguadora: Disolver 6,84 g de fosfato de
potasio en 1 000 mL de agua.
Glicina
~Ql:g)i_::li_r_ __
---1 1 15
1 27
- -----+------~-- --~
1
1o
o 3
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora
(65:35)
C~:~~~=~~mp~reLa no
Impurezas no especificadas
:_J __ ----==-----m-- L-
!
o1
Solucin de aptitud del sistema: Transferir 25 mg de 1 1

ER L-Alanil-L-glutamina USP y 5 mg de ER L-Alanil-t-ala- totales __ j ----

- 05 1

nina USP a un matraz volumtrico de 25 mL y diluir

con agua a volumen. Transferir 1,0 mL de esta solucin PRUEBAS ESPECFICAS
a un matraz volumtrico de 1 O ml que contenga ROTACIN PTICA, Rotarinn F~pecfca (781 S)
20 mg de ER Glicil-L-tirosina USP y diluir con Fa.se mvil Solucin muestra: 20 mg/mL en agua. Realizar la me-
a volumen. dicin a 20 .
Solucin estndar 1: 0,037 mg/mL de ER L-Tirosina Criterios de aceptacin: r46,0' a +50,0' con respecto
USP en Fase mvil a la sustancia anhidra
Solucin estndar 2: 0,025 mg/mL de ER Glicina USP DETERMINACIN DE AGUA, MPtodo la (921 ): 1 0,0%-16,0%
en Fase mvil
Solucin muestra: 2, 5 m<Jiml de Glicil-L-tirosina en REQUISITOS ADICIONALES
Fase mvil ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Sistema cromato9rfico permeables, bien cerrados y resistentes a la luz.
(Ver Cromatografta (621 >. Aptitud del fotemn.)
USP 38 Suplementos Dietticos ,1 Glucmamina 6507

ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11) Aptitud del sistema

ER L-Alanil-1 -alanina LJSP Muestra: Solucin estndar
ER L-Alanil-L-glutamina USP Requisitos de aptitud
ER Cltctna USP Factor de asimetra: t'Jo m.)s de 2,0 para el pico de
ER Giicil-L-lirmi1 Id USP glucosamina
ER L-Tirosina USP Eficiencia de la columna: No menos de l 500 piatos
tericos
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Glicina-ver Glicina en Monografas Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (CGH1 iNOs) en la porcin de Tabletas
Generales tomada:

Resultado= (ru/rs) x (C/Cu) x (M,/M,2) x 100

Glucosamina, Tabletas ru = respuesta del pico de glucosamina de la
Solucin muestra
DEFINICIN r5 = respuesta del pico de glucosamina de la
Las Tabletas de Glucosamina se preparan a partir de Clorhi- Solucin estndar
drato de Glucosamina, Sulfato de Glucosamina Cloruro C5 = concentracin de ER Clorhidrato de
Sdico, Sulfato de Glucosamina Cloruro Potsico o una Glucosamina USP en la Solucin estndar
mezcla de cualquiera de estos. Las Tabletas contienen no (mg/mL)
menos de 90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad Cu = concentracin nominal de glucosamina en la
declarada de glucosamina (C6HnNOs). Solucin muestra (mg/mL)
M, 1 = peso molecular de glucosamina, 179,17
IDENTIFICACIN M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
A. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu- 215,63
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se- Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0%
gn se obtienen en la prueba de Contenido de
Glucosamina. PRUEBAS DE DESEMPEO
B. IDENTIFICACIN-PRUEBAS GENERALES, Cloruros (191 ): DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
Cumple con l9s requisitos. (2040): Cumplen con los requisitos de Disolucin.
c. IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERAL~S, Sulfatos (191): Medio: Agua; 900 mL
Cumple con los requisitos. [NOTA-Unicamente para Ta- Aparato 2: 75 rpm
bletas que declaran contener glucosamina sulfato sdico Tiempo: 60 min
o glucosamina sulfato potsico] Solucin estndar: Disolver una cantidad adecuada de
ER Clorhidrato de Glucosamina USP en agua hasta ob-
CONTENIDO tener una concentracin similar a la esperada en la So-
CONTENIDO DE GLUCOSAMINA lucin muestra.
Solucin amortiguadora: En un matraz volumtrico de Solucin muestra: Porcin filtrada de la solucin en
1 L, disolver 3,5 g de fosfato dibsico de potasio en anlisis
agua. Agregar 0,2'i mL de hidrxido de amonio, diluir Solucin amortiguadora: Mezclar 1,0 mL de cido fos-
con agua a volumen y mezclar. Ajustar con cido fosf- frico con 2 L de agua y ajustar con hidrxido de pota-
rico a un pH de 7,5. sio a un pH de 3,0.
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora (2:3)
(75:25) Sistema cromatogrfico
Diluyente: Acetonitrilo y agua (50:50) (Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Solucin estndar: 3,75 mg/mL de ER Clorhidrato de Modo: HPLC
Glucosamina USP en Diluyente Detector: UV 195 nm
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me- Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
nos de 20 Tabletas. Transferir una porcin pesada con Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
exactitud de material reducido a polvo fino, equivalente Volumen de inyeccin: 1 O pL
a aproximadamente 312 mg de glucosamina, a un ma- Aptitud del sistema
traz volumtrico de 100 mL. Agregar 60 mL de Dilu- Muestra: Solucin estndar
yente y someter a ultrasonido durante 1 O minutos. Agi- Requisitos de aptitud
tar mecnicamente durante 15 minutos. Diluir con Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
Diluyente a volumen y mezclar. Pasar una porcin de glucosamina
esta solucin a travs de un filtro de membrana con un Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
lamano de poro de 0,45 pm o menor. Anlisis
Sistema cromatogrfico Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.) Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
Modo: HPLC cosamina (C6HllNOs) disuelta:
Detector: UV 195 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 5 pm Resultado= (r:/r,) x (C x V/I.) x (Mr1/M,?) x 100
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min ru = rea del pico de la Solucin muestra
Volumen de inyeccin: 1O pL rs = rea del pico de la Solucin estndar
lNOTA-EI pico de la unidad de glucosamina eluye apro- C\ = concentracin de ER Clorhidrato de
ximadamente a los 1 O minutos. El cromatograma pre- Glucosamina USP en la Solucin estndar
senta un pico adicional de gran tamno cerca del vo- (mg/mL)
lumen muerto, debido al in cloruro.] V = volumen de Medio, YOO mL
L = cantidad declarada de glucosamina
(mg/Tableta)
M,, = peso molecular de glucosarnir1d, 1 79, 1 7
6508 Glucosamina /Suplementos Oielt>lic m
M, PP'n molecular de clorhidrato de glucosa mina,
= cin amortiquadora. Aplicar una constante de 60 V
215,63
Tolerancias: No menos de 75% (Q) de la cantidad de-
clarada Je ':)tULO)dflllld (C6HnNs)
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES . hacer flotar o sumergir ligeramente en Reactivo d,e tm-
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el tipo de sal de glucosa-
mina contenido en el artculo.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
Glucosamina y Condroitina Sulfato de
Sodio, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Glucosa mina y Condroitina Sulfato .de Sodio
se preparan a partir de Clorhidrato de Glucosam1na, Sul-
fato de Glucosamina Cloruro Sdico, Sulfato de Glucosa-
mina Cloruro Potsico o una mezcla de cualquiera de es-
tos con Condroitina Sulfato de Sodio. Las Tabletas
co~tienen no menos de 90,0% y no ms de 120,0% d~
las cantidades declaradas de condroitina sulfato de sodio
y glucosamina (C6HllNOs).
[NOTA-La Condroitina Sulfato de Sodi<? es extrema.d~,mente
higroscpica una vez que se seca. Evitar la expos1C1on a la
atmsfera y pesar inmediatamente.]
IDENTIFICACIN
A. El tiempo de retencin de los picos princip?les d~ la
Solucin muestra corresponde a los de la Soluc1on estan-
dar, segn se obtienen en la prueba de Contenido de
Glucosamina.
B. ELECTROFORESIS (726)
Solucin amortiguadora de acetato de bario: Dis.olver
25,24 g de acetato de bario en 900 mL .de agua. Austar
con cido actico a un pH de 5,0 y diluir con agua
hasta 1 000 ml.
Reactivo de tincin: Azul de toluidina al O, 1 % (p/v) en
cido actico O, 1 M . tura ambiente durante 1 hora.
Solucin estndar: Usar la Solucin estndar de media
concentracin de la prueba de Contenido de Condroitina
Sulfato de Sodio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en la .
prueba de Contenido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Anlisis: Llenar las cmaras de un aparato de electrofo-
resis adecuado para separaciones en membranas de
acetato de celulosa 1 (una pequea cmara submarina
para geles o una dedicada a los medios de membrana)
con Solucin amortiguadora de acetato de bono. Empa-
par una membrana de acetato de celulosa, de 5-6 cm x
12-14 cm, en Solucin amortiguadora de acetato de ba:
rio durante 1 O minutos, o hasta que se humedezca uni-
formemente, y luego secar entre dos hojas de papel
absorbente. Usando un aplicador 2 adecuado para elec-
troforesis, aplicar volmenes iguales (0,5 L) de )a So_lu-
cin muestra y de la Solucin estndar al. 1990 mas bri-
llante de la membrana colocada en pos1C1on en un
soporte de aplicador adecuado o en un puente de se-
paracin en la cmara. Asegurar que ambos extre.mos
de la membrana estn sumergidos a una profundidad
de por lo menos 0,5-1,0 cm en las cmaras con solu-
' Las membranas de acetato de celulosa adecuadas para electroforesis estn
disponibles en Maltil ChemPtron '>RI, Mil;,,., Italia (vvvvw.maltachemetron.
com); Fluka Chemical Corp., Milwaukee, WI; y DiaSys Corp., Waterbury, CT
(www.dasys.com). . . . .
2 Los aplicadores adecuadm estan disponibles en D1aSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com) y Helenil 1 ;ihor;itnries, 8edumont, TX (www.helena.com).
USP 38
(6 mA al principio) durante. 2 horas. [NOTA-~Llevar a
cabo la aplicacin de soluciones y volta1e dentro de los
S minutos, porque un mayor secado del papel absor-
be11te reduce la sensibilidad.)
Colocar la membrana en una bandeja de tincin de
plstico y, con el lado de la aplicacin hacia .abajo, .
cin durante 5 minutos. Luego, mezclar la soluc1on
suavemente durante 1 minuto. Retirar la membrana y
decolorar en cido actico al 5% hasta que el fondo se
aclare.
Criterios de aceptacin: La .mancha prin~ipal de la So-
lucin muestra presenta la_ misma m1grac1on que la man-
cha principal de la Soluoon estandar.
[NOTA--Documentar los resultados tomando una foto-
grafa dentro de los 15 minutos de completada la
decoloracin.]
CONTENIDO
CONTENIDO DE GLUCOSAMINA
Diluyente: Transferir 29 ~tL de ~ci?o actico y 5 mL de
acetonitrilo a un matraz volumetnco de 100 mL que
contenga 50 mL de agua. Diluir con agua a volumen.
Solucin amortiguadora de b~rato: 0,2 ~ ~76,3 gil,
de borato de sodio en agua) a1ustada con ac1do clorh1-
drico SR a un pH de 9,5
Solucin amortiguadora de acetato: 6,80 g/~ ~e ace-,
tato de sodio trihidrato en agua a1ustada con ac1do ace-
tico diluido a un pH de 5,9 .
Reactivo de derivatizacin: En un tubo de cultivo de
polipropileno de 14 mL, disolver 50 mg de o-ftalalde-
hdo en 1 25 mL de metano! anhidro. Agregar 50 L de
cido 3-~ercaptopropinico y 11,2 mL de Solucin.
amortiguadora de borato y mezclar suavemente. Deiar
en reposo en la oscuridad d~rante 30 n:inutos ante~ de
usar. [NOTA-La conc~ntracion del reactivo .s,e ~ant1ene
agregando 1 O L de acido 3-mercapt~prop1on1co cada
2 das. Se debe almacenar en la oscuridad a tempera-
tura ambiente y se puede usar durante no ms de 2
semanas.]
Fase mvil: Metanol y Solucin amortiguadora de ace-
tato (1 :9) .
Solucin estndar: 1,0 mg/mL de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en agua. Dejar en reposo a tempera-
Solucin muestra: Transferir el equivalente a 25 mg de
glucosamina a partir de Tabletas reducidas a polvo fino
(no menos ce 20), a un matraz volumtrico de 25 ml.
Diluir con Diluyente a volumen. Mezclar en un n:~zcla
dor de vrtice hasta suspender el polvo en soluc1on.
Someter a ultrasonido en un bao de agua a 65 du-
rante 20 minutos. Retirar del bao, mezclar durante 5
minutos con ayuda de un agitador magntico y
centrifugar.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 340 nm
Columna: 3,0 mm x 5 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema , . . . .,
Muestras: Cinco alicuotas 1nd1v1duales de la '>oluoon
estndar derivatizadas segn se indica en Anlisis. Cada
alcuota derivatizada se inyecta una sola vez.
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para. el an-
mero ('J y el anomero u son.] ,O y 1,8, respectiva-
mente. El tiempo de retenc1on para el anomero f3 es
no menos de 4 minutos.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% en
cinco inyecciones repetidas
USP 38
Anlisis
Muestras: Solucin eslndar y Solucin rnueslra
Transferir 100 pL del Reactivo de derivatizacin y 100 pL
de ia Soution eslandur u id Sulutiun 1nut:stro a un vial
que contenga 400 pL de Solucin amortiguadora de bo-
rato. Dejar que la derivatizacin prosiga durante 1 mi-
nuto. Inyectar las soluciones derivatizadas inmediata-
mente despus de la reaccin de derivatizacin.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (C6H1 iNOs) en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado= (rulrs) x (CslCu) x (Mr1IM,2) x 100
ru = respuesta del pico del anmero /3 de la
Solucin muestra derivatizada
rs = respuesta del pico del anmero f3 de la
Solucin estndar derivatizada
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solucin estndar
(mglmL)
Cu = concentracin nominal de glucosamina en la
Solucin muestra (mglmL)
M,1 = peso molecular de glucosamina, 179,17
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Criterios de aceptacin: 90,0%-120,0%
CONTENIDO DE CONDROITINA SULFATO DE SODIO
Diluyente: Pesar aproximadamente 297 mg de fosfato
monobsico de potasio, 492 mg de fosfato dibsico de
potasio y 250 mg de polisorbato 80, y transferir a un
vaso de precipitados de 1 L. Disolver en aproximada-
mente 900 mL de agua y ajustar con hidrxido de po-
tasio o cido fosfrico a un pH de 7,0 0,2. Diluir con
agua hasta 1 L y mezclar minuciosamente.
Soluciones estndar: 1,5; 1,0 y 0,5 mglmL de ER Con-
droitina Sulfato de Sodio USP en agua
Solucin muestra: Transferir el equivalente a 1 00 mg
de condroitina sulfato de sodio, a partir de Tabletas re-
ducidas a polvo fino (no menos de 20), a 60 ml de
agua. Agitar hasta suspender el polvo en la solucin.
Someter a ultrasonido en un bao de agua a 65 du-
rante 20 minutos. Retirar del bao y mezclar o agitar
durante 5 minutos. Diluir con agua hasta 100 mL y cen-
trifugar o pasar a travs de un filtro adecuado.
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin volumtrica con deteccin
fotomtrica
Solucin volumtrica: 1 mglmL de cloruro de cetilpi-
ridinio en agua. Desgasificar antes de usar.
Deteccin del punto final: Turbidimtrica con una
sonda fototoelctrica
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Transferir 5,0 mL de la Solucin estndar y de la Solu-
cin muestra a sendos vasos de valoracin. Agregar
25 mL de Diluyente a cada uno. Mezclar hasta obte-
ner una lectura estable con una sonda fotoelctrica ya
sea a 420; 550 660 nm. Ajustar el instrumento a
cero en modo de absorbancia. Valorar con Solucin
volumtrica usando la sonda fotoelctrica para deter-
minar el punto final turbidimtricamente. A partir de
una ecuacin de regresin lineal, que se calcula
usando los volmenes de Solucin volumtrica consu-
midos en funcin de las concentraciones de las Solu-
ciones estndar, determinar la concentracin de sul-
fato de condroitina sulfato de sodio en la Solucin
muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de con-
droitina sulfato de sodio en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado = (CIC) x 100
Suplementos Dietticos / Glucosamina 6509
c = concentracin determinada de condroitina
sulfato de sodio en la Solucin muestra
(mg/mL)
- conccntrJcin nominJI de condroitina sulfato
de ~orlio en la Solu<in muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-120,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolucin.
Medio: Agua; 900 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Determinar el porcentaje de la cantidad declarada de
glucosamina (C6H13NOs) disuelta usando el siguiente
mtodo.
Solucin estndar: Proceder segn se indica en la
prueba de Contenido de Glucosamina. Diluir con una
cantidad adecuada de agua, si fuera necesario.
Solucin muestra: Usar la solucin en anlisis.
Solucin amortiguadora de borato, Solucin amorti-
guadora de acetato, Reactivo de derivatizacin, Fase
mvil y Sistema cromatogrfico: Proceder segn se
indica en la prueba de Contenido de Glucosamina.
Anlisis: Preparar segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Glucosamina.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (C6HnNOs) disuelta:
Resultado= (rulrs) x (Cs x VIL) x (M,i/M,2) x 100
ru = rea del pico de la Solucin muestra
derivatizada
rs = rea del pico de la Solucin estndar
derivatizada
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solucin estndar
(mglmL)
V = volumen de Medio, 900 mL
L = cantidad declarada de glucosamina
(mglTableta)
Mc1 = peso molecular de glucosamina, 179, 17
M,; = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de glucosamina (C6HnNOs)
Determinar el porcentaje de la cantidad declarada de
condroitina sulfato de sodio disuelta usando el siguiente
mtodo.
Soluciones estndar, Solucin volumtrica y Dilu-
yente: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Solucin muestra: Usar la solucin en anlisis.
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de con-
droitina sulfato de sodio disuelta:
Resultado= (C x VIL) x 100
C = concentracin determinada de condroitina
sulfato de sodio en la Solucin muestra
(mglmL)
V = volumen de Medio, 900 mL
L = cantidad declarada de condroitina sulfato de
sodio (mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de condroitina sulfato de sodio
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica los tipos de sales de glu-
cosamina contenidos en el artculo y las fuentes de las
651 O Glucosamina ./ )11rlPmentos Dietticos
gue se obtuvo la condroitina. Etiquetar indicando las
tuentes de ! condroitina sulfato de sodio, ya sea bovina,
porcina, av1cola o una mezcla de cualquiera de stas. La
Pt1r1_11_Pt-1 1nci!CJ en e! panel front~! e! contenido de con-
drq1t1na sulfato de sodio con respenn a la matl"ria seca.
EST ANDARES DE REFERENCIA USP ( 11)
ER Condroitina Sulfato de Sodio USP
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
Glucosamina y Metilsulfonilmetano
Tabletas ' [NOTA-Los tiempos de retencin relativos para el an-
DEFINICIN
Las Tabletas _de Glucosamina y Metilsulfonilmetano se prepa-
ran a partir de Clorhidrato de Glucosamina Sulfato de
Glucosamina Cloruro Sdico, Sulfato de Gl~cosamina Clo-
ruro_ Potsico o una mezcla de cualquiera de estos, con
Metilsulfornlmetano. Las Tabletas contienen no menos de
90,0% y no ms de 120,0% de la cantidad declarada de
glucosamina (C6HllNOs) y no menos de 90,0% y no ms
de 110,0% de la cantidad declarada de metilsulfonilme-
tano (C2H602S).
IDENTIFICACIN
A. PRESEl':ICIA DE_ GLUCOSAMINA: Los tiempos de retencin
de los picos pnnc1pal.~s de l,a Solucin ,muestra correspon-
den a los de la Soluc10n estandar, segun se obtienen en
Contemdo de Glucosamina.
B. PR_E,SENCIA ~E METILSULFONILMETANO: El tiempo de re-
tencion del pico principal de la Solucin muestra corres-
ponde _al de la Solucin estndar, segn se obtienen en
Contemdo de Metilsulfonilmetano.
CONTENIDO
CONTENIDO DE GLUCOSAMINA
Diluyen~e.: Transferir 29 L de cido actico y 5 mL de
acetorntrilo a un matraz volumtrico de 100 mL que
contenga 50 mL de agua y diluir con agua a volumen.
Solucin amortig';Jadora de borato: 0,2 M (76,3 g/L
de_ borato de sodio en agua) ajustada con cido clorh-
drico SR a un pH de 9,5. [NOTA-La solucin amorti-
guadora debe almacenarse a temperatura ambiente. Se
debe entibiar para disolver si se presenta cristalizacin.]
Solucin am_orti$Juadora de acetato: 6,80 g/L de ace-
tato de sodio trih1drato en agua, ajustada con cido
actico diluido a un pH de 5,9
Reactivo de derivatizacin: En un tubo de cultivo de
P()lipropileno de 14 mL, disolver 50 mg de o-ftalalde-
~1do en 1,25 mL de metano! anhidro. Agregar 50 L de
ac1do _3-mercaptopropinico y 11,2 mL de Solucin
amortiguadora de borato, y mezclar suavemente. Dejar
en reposo en la oscuridad durante 30 minutos antes de
usar. [NOTA-La concentracin del reactivo se mantiene
agr~gando 1 O L de cido 3-mercaptopropinico cada
2 d1as. Se debe almacenar en la oscuridad a tempera-
tura ambiente y se puede usar durante no ms de 2
semanas.]
Fase mvil: Metano! y So/ucion amortiguadora de ace-
tato (1 :9)
Solucin estndar: 1,0 mg/mL de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en agua. Dejar en reposo a tempera-
tura ambiente durante 1 hora.
Solucin ~uestra: Transferir el equivalente a 25 mg de
glu~osam1na, a partir de no menos de 20 Tabletas, re-
ducidas a polvo fino, a un matraz volumtrico de 2S ml
y diluir con Diluyente a volumen. Mezclar en un mezcla-
dor de vrtice hasta suspender el polvo en solucin.
Someter a ultrasonido e11 uri bano de agua a 6S- du-
rante 20 minutos. Retirar del bano, mezclar durante S
lJSP 18
minutos con ayuda de un agitador magntico y
ce11trifugar.
Sistema cromatogrfico
(Ve1 Cw111uiocpuw \621 ;, Apuwd dei 51srema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 340 nm
Columna: 3,0 mm x S cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Cinco alcuotas individuales de la Solucin
estndar derivatizadas segn se indica en Anlisis. Cada
alcuota derivatizada se inyecta una sola vez.
mero /3 y el anomero a son 1,0 y 1,8, respectiva-
mente. El tiempo de retencin para el anmero f3 es
no menos de 4 minutos.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% en
cinco inyecciones repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Transferir 109 L d~I Reactivo de der:ivatizacin y 100 L
de la Soluc1on estandar o la Soluc1on muestra a un vial
que contenga 400 L de Solucin amortiguadora debo-
rato. Deiar que la derivatizacin prosiga durante 1 mi-
nuto. Inyectar las soluciones derivatizadas inmediata-
mente despus de la reaccin de derivatizacin .
Calrnlar el porcentaje de la can~idad declarada de gluco-
sam1na (C6H11N01) en la porcion de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2 ) x 100
ru = respuesta del pico del anmero f3 de la
Solucin muestra derivatizada
r1 = respuesta del pico del anmero f3 de la
Solucin estndar derivatizada
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de glucosamina en la
Solucin muestra (mg/ml)
M: ~ peso molecular de glucosa mina 1 79 17
M2 = peso molecular de clorhidrato de glu'cosamina
21 S,63 ,
Criterios de aceptacin: 90,0%-120,0% de la cantidad
declarada
CONTENIDO DE METILSULFONILMETANO
Diluyente: Transferir 9SO ml de metano! a un matraz
volumtrico de 1 L. Agregar O 60 ml de ter metlico de
dietilenglicol y diluir con met;nol a volumen.
Solucin estndar: 0,4 mg/mL de ER Metilsulfonilme-
tano USP en Diluyente. Someter a ultrasonido a SO du-
rante 1 minuto y dejar que se enfre a temperatura
ambiente.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Disolver una porcin del material reducido
a polvo fino, equiv_alente a 1 Tableta, en Diluyente y
someter a ~ltrason1do durante 1 S minutos a SO. Dejar
que se enfrie a temperatura ambiente, diluir con Dilu-
yente a volumen y mezclar. Diluir cuantitativamente con
Diluyente hasta obtener una concentracin final de
0,4 mg/ml de metilsulfonilmetano. Transferir 1 ml de la
suspensin a un tubo de microcentrfuga de 1 S mL y
centrifugar durante 20 segundos. Usar el sobr~nadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la llama
Columna: Capilar, de O,S3 mm x 30 rn; recubrimiento
de fase C2 de 5 ,um
USP 38 Suplementos Dietticos / G!ucosamina 6511

Temperatura Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-

Columna: 1 20 rada tje (C,H 1 iNOs)
Inyector: 250 VARIACION DE PESO (2091 ): Cumplen con los requisitos.
Detector: 250
Gas transportador: Helio REQUISITOS ADICIONALES
Velocidad de flujo: 5 ml/min ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Volumen de inyeccin: 1 L permeables y resistentes a la luz.
Tipo de inyector: Relacin de particin, 2:1 ETIQUETADO: La etiqueta indica los tipos de sales de glu-
Aptitud del sistema co~amina contenidos en el artculo.
Muestra: Solucin estndar ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
Requisitos de aptitud ER Clorhidrato de Glucosamina USP
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para ER Metilsulfonilmetano USP
el cociente de respuesta entre los picos de metilsulfo- Dimetil sulfona.
nilmetano y ter metlico de dietilenglicol, en inyec- C2H602S 94, l 3
ciones repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de me-
tilsulfonilmetano (C2H602S) en la porcin de Tabletas Glucosamina, Condroitina Sulfato de
tomada: Sodio y Metilsulfonilmetano, Tabletas
Resultado= (Ru/R1) x (Cs/Cu) x 100
DEFINICIN
Ru = cociente de respuesta entre los picos de Las Tabletas de Glucosamina, Condroitina Sulfato de Sodio y
metilsulfonilrnetano y ter metlico de Metilsulfonilmetano se preparan a partir de Clorhidrato de
dietilenglicol de la Solucin muestra Glucosamina, Sulfato de Glucosamina Cloruro Sdico, Sul-
Rs = cociente de respuesta entre los picos de fato de Glucosamina Cloruro Potsico o una mezcla de
metilsulfonilmetano y ter metlico de cualquiera de estos, con Condroitina Sulfato de Sodio y
dietilenglicol de la Solucin estndar Metilsulfonilmetano. Las Tabletas contienen no menos de
Cs = concentracin de ER Metilsulfonilmetano USP 90,0% y no ms de 120,0% de las cantidades declaradas
en la Solucin estndar (mg/mL) de condroitina sulfato de sodio y glucosamina (C6HllNOs)
Cu = concentracin nominal de metilsulfonilmetano y no menos de 90,0% y no ms de 110,0% de la canti-
en la Solucin muestra (mg/mL) dad declarada de metilsulfonilmetano (C2H602S).
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad [NOTA-La Condroitina Sulfato de Sodio es extremadamente
declarada higroscpica una vez que se seca. Evitar la exposicin a la
atmsfera y pesar inmediatamente.]
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los IDENTIFICACIN
requisitos de Disolucin. A. PRESENCIA DE GLUCOSAMINA: El tiempo de retencin
Medio: Agua; 900 mL del pico principal de la Solucin muestra corresponde al
Aparato 2: 75 rpm de la Solucin estndar, segn se obtienen en la prueba
Tiempo: 60 min de Contenido de Glucosamina.
Determinar el porcentaje de glucosamina disuelta segn B. PRESENCIA DE CONDROITINA SULFATO DE SODIO
se indica a continuacin. (Ver Electroforesis (726).)
Solucin estndar: Preparar segn se indica en la Solucin amortiguadora de acetato de bario: Disolver
prueba de Contenido de Glucosamina. Diluir con una 25,24 g de acetato de bario en 900 mL de agua. Ajustar
cantidad adecuada de agua, si fuera necesario. con cido actico a un pH de 5,0 y diluir con agua
Solucin muestra: Usar la solucin en anlisis. hasta 1 000 mL.
Solucin amortiguadora de borato, Solucin amorti- Reactivo de tincin: Azul de toluidina al O, 1 % (p/v) en
guadora de acetato, Reactivo de derivatizacin, Fase cido actico 0, 1 M
mvil, Sistema cromatogrfico y Anlisis: Proceder Solucin estndar: Usar la Solucin estndar de media
segn se indica en la prueba de Contenido de concentracin de Contenido de Condroitina Sulfato de
Glucosamina. Sodio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu- Solucin muestra: Preparar segn se indica en Conte-
cosamina (C6HllNOs) disuelta: nido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Anlisis: Llenar las cmaras de un aparato de electrofo-
Resultado = (ru! r1) X (e X V/ L) X (Mc1/ M,2) X 100 resis adecuado para separaciones en membranas de
acetato de celulosa 1 (una pequea cmara submarina
ru = rea del pico obtenida de la Solucin muestra para geles o una dedicada a los medios de membrana)
deriva tiza da con Solucin amortiguadora de acetato de bario. Empa-
= rea del pico obtenida de la Solucin estndar par una membrana de acetato de celulosa, de 5-6 cm x
derivatizada 12-14 cm, en Solucin amortiguadora de acetato de ba-
= concentracin de ER Clorhidrato de rio durante 1 O minutos, o hasta que se humedezca uni-
Glucosamina USP en la Solucin estndar formemente, y luego secar entre dos hojas de papel
(mg/mL) absorbente. Con ayuda de un aplicador2 adecuado para
V =volumen de Medio, 900 mL electroforesis, aplicar volmenes iguales (0,5 L) de So-
L = cantidad declarada de glucosamina lucin muestra y Solucin estndar en el lado ms bri-
(mg/Tableta) llante de la membrana colocada en posicin en un so-
M,, = peso molecular de glucosamina, 179, l 7 porte de aplicador adecuado o en un puente de
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina, separacin en la cmara. Asegurar que ambos extremos
215,63 1 Las mcmbrJnJs de acetJto de ce\u!os~ para elE'ftroforPsis rHiPniadas estn
disponibles en Malta Chemetron SRL, Milan, Italia (www.maltachemetron.
com); Fluka Chem1cal Corp., Milwaukee, WI; y DiaSys Corp., Waterbury, CT
(www.diasys.com).
' Los apHcadores adecuadm estn cfponibles en DiaSys Corp., Waterbury, CT
(www.d1asys.com) y Helena Laboratories, Beaumont, TX (www.helena.com).
6512 Glucosamina / Suplementos Dietticos
de la membrana estf'n s11mergidos a una profundidad
de por lo menm 0,5-1,0 cm en las cmaras con solu-
cin amortiguadora. Aplicar una constante de 60 voltios
(6 mA al inicio) du1d11le 2 l1ora~. [NutA-Llevar a cabo
la aplicacin de soluciones y voltaje dentro de los 5
minutos, porque un mayor secado del papel absorbente
reduce la sensibilidad.]
Colocar la membrana en una bandeja de tincin de
plstico y, con el lado de la aplicacin hacia abajo,
hacer flotar o sumergir ligeramente en Reactivo de tin-
cin durante 5 minutos. Luego, mezclar la solucin
suavemente durante 1 minuto. Retirar la membrana y
decolorar en cido actico al 5% hasta que el fondo se
aclare.
Criterios de aceptacin: La banda principal de la Solu-
cin muestra presenta la misma migracin que la banda
principal de la Solucin estndar. [NOTA-Documentar
los resultados tomando una fotografa dentro de los 15
minutos de completada la decoloracin.]
c. PRESENCIA DE METILSULFONILMETANO: El tiempo de re-
tencin del pico principal de la Solucin muestra corres-
ponde al de la Solucin estndar, segn se obtienen en
Contenido de Metilsulfonilmetano.
CONTENIDO
CONTENIDO DE GLUCOSAMINA
Diluyente: Transferir 29 .L de cido actico y 5 mL de
acetonitrilo a un matraz volumtrico de 100 mL que
contenga 50 mL de agua y diluir con agua a volumen.
Solucin amortiguadora de borato: 0,2 M (76,3 g/L
de borato de sodio en agua) ajustada con cido clorh-
drico SR a un pH de 9,5
Solucin amortiguadora de acetato: 6,80 g/L de ace-
tato de sodio trihidrato en agua, ajustada con cido
actico diluido a un pH de 5,9. [NOTA-La solucin
amortiguadora se debe almacenar a temperatura am-
biente y se puede entibiar para disolver si se presenta
cristalizacin.]
Reactivo de derivatizacin: En un tubo de cultivo de
polipropileno de 14 mL, disolver 50 mg de o-ftalalde-
hdo en 1,25 mL de metano! anhidro. Agregar 50 L de
cido 3-mercaptopropinico y 11,2 mL de Solucin
amortiguadora de borato y mezclar suavemente. Dejar
en reposo en la oscuridad durante 30 minutos antes de
usar. [NOTA-La concentracin del reactivo se mantiene
agregando 1 O L de cido 3-mercaptopropinico cada
2 das. Se debe almacenar en la oscuridad a tempera-
tura ambiente y se puede usar durante no ms de 2
semanas.]
Fase mvil: Metanol y Solucin amortiguadora de ace-
tato (1 :9)
Solucin estndar: 1,0 mg/mL de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en agua. Dejar en reposo a tempera-
tura ambiente durante 1 hora.
Solucin muestra: Transferir el equivalente a 25 mg de
glucosamina, a partir de no menos de 20 Tabletas, re-
ducidas a polvo fino, a un matraz volumtrico de 25 mL
y diluir con Diluyente a volumen. Mezclar en un mezcla-
dor de vrtice hasta suspender el polvo en solucin.
Someter a ultrasonido en un bao de agua a 65 du-
rante 20 minutos. Retirar del bao, mezclar durante 5
minutos con ayuda de un agitador magntico y
centrifugar.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromalografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 340 nm
Columna: 3,0 mm x 5 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Cinco alcuotas individuales de la Solucin
estndar derivatizadas segn se indica en Anlisis. Cada
alcuota derivatizada se inyecta una sola vez.
usr 38
[NOTA-Los tiempos de retencin relativo~ para el an-
mero /)y el anomero n son 1,0 y 1,8, respectiva-
mente. El tiempo de retencin para el anmero f3 es
no menos de 4 minutos.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% en
cinco inyecciones repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Transferir 100 L del Reactivo de derivatizacin y 1 00 L
de la Solucin estndar o de la Solucin muestra a un
vial que contenga 400 L de Solucin amortiguadora de
borato y dejar que la derivatizacin proceda durante 1
minuto. Inyectar las soluciones derivatizadas inmedia-
tamente despus de la reaccin de derivatizacin.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (C6H1 iNOs) en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = respuesta del pico del anmero f3 de la
Solucin muestra derivatizada
rs = respuesta del pico del anmero f3 de la
Solucin estndar derivatizada
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solucin estndar
(mg/mL)
Cu = concentracin nominal de glucosamina en la
Solucin muestra (mg/mL)
M,1 = peso molecular de glucosamina, 179, 17
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Criterios de aceptacin: 90,0%-120,0% de la cantidad
declarada
CONTENIDO DE CONDROITINA SULFATO DE SODIO
Soluciones estndar: 1,5; 1,0 y 0,5 mg/mL de ER Con-
droitina Sulfato de Sodio USP en agua
Solucin muestra: Transferir el equivalente a 100 mg
de condroitina sulfato de sodio, a partir de no menos
de 20 Tabletas, reducidas a polvo fino, a 60 mL de agua
y agitar hasta suspender el polvo en la solucin. Some-
ter a ultrasonido en un bao de agua a 65 durante 20
minutos. Retirar del bao, mezclar o agitar durante 5
minutos, diluir con agua hasta 100 mL y centrifugar o
pasar a travs de un filtro adecuado.
Diluyente: Pesar aproximadamente 297 mg de fosfato
monobsico de potasio, 492 mg de fosfato dibsico de
potasio y 250 mg de polisorbato 80, y transferir a un
vaso de precipitados de 1 L. Disolver en aproximada-
mente 900 mL de agua y ajustar con hidrxido de po-
tasio o cido fosfrico a un pH de 7,0 0,2. Diluir con
agua hasta 1 L y mezclar minuciosamente.
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin volumtrica con deteccin
fotomtrica
Solucin volumtrica: 1 mg/ml de cloruro de cetilpi-
ridinio en agua
Deteccin del punto final: Turbidimtrica con una
sonda tototoelctrica
Anlisis: Transferir 5,0 mL de la Solucin estndar y de
la Solucin muestra a sendos vasos de valoracin y agre-
gar 25 mL de Diluyente a cada uno. Mezclar hasta obte-
ner una lectura estable con una sonda fotoelctrica ya
sea a 420; 550 660 nm. Ajustar el instrumento a cero
en modo de absorbancia. Valorar con Solucin volum-
trica usando la sonda fotoelctrica para determinar el
punto final turbidimtricamente. A partir de una ecua-
cin de regresin lineal, que se calcula usando los vol-
menes de 5oluoon volumetnca consumidos en funcin
de las concentraciones de las Soluciones estndar, deter-
minar la concentracin de condroitina sulfato de sodio
en la Solucin muestra.
USP 38
Calcular el porcentaje de condroitina sulfato de sodio
en Id porci11 Lle Tdbletas tomada:
Rcsult)do = (C/ C1.) ,< 100
l = concentracin determinada de condroitina
sulfato de sodio en la Solucin muestra
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de condroitina sulfato
de sodio en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-120,0% de la cantidad
declarada
CONTENIDO DE METILSULFONILMETANO
Diluyente: Transferir 950 ml de metano! a un matraz
volumtrico de 1 L. Agregar 0,60 ml de ter metlico de
dietilenglicol y diluir con metanol a volumen.
Solucin estndar: 0,4 mg/ml de ER Metilsulfonilme-
tano USP en Diluyente. Someter a ultrasonido a 50 du-
rante 1 minuto y dejar que se enfre a temperatura
ambiente.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Disolver una porcin del material reducido
a polvo fino, equivalente a 1 Tableta, en Diluyente y
someter a ultrasonido durante 15 minutos a 50. Dejar
que se enfre a temperatura ambiente. Diluir cuantitati-
vamente con Diluyente hasta obtener una concentracin
final de 0,4 mg/ml de metilsulfonilmetano. Transferir
1 ml de la suspensin a un tubo de microcentrfuga de
1,5 ml y centrifugar durante 20 segundos. Usar el
sobrenadante.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la llama
Columna: Capilar, de 0,53 mm x 30 m, recubierta con
fase G2 de 5 m
Temperatura
Columna: 120
Inyector: 250
Detector: 250
Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 pl
Tipo de inyeccin Relacin de particin, 2:1
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el cociente de respuesta entre los picos de metilsulfo-
nilmetano y ter metlico de dietilenglicol, en inyec-
ciones repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de me-
tilsulfonilmetano (C2H602S) en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado= (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente entre las reas de los picos de
metilsulfonilmetano y ter metlico de
dietilenglicol de la Solucin muestra
Rs = cociente entre las reas de los picos de
metilsulfonilmetano y ter metlico de
dietilenglicol de la Solucin estndar
C = concentracin de ER Metilsulfonilmetano USP
en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de metilsulfonilmetano
en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos de Disolucin.
Suplementos Dietticos / Glucosamina 651 3
Medio: Agua; 900 ml
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Determinar e! porcentaje de glucosamina disuelta segn
~e indica a continuacin.
Solucin amortiguadora de borato, Solucin amorti-
guadora de acetato, Reactivo de derivatizacin,
Fase mvil, Sistema cromatogrfico y Anlisis: Pro-
ceder segn se indica en la prueba de Contenido de
Glucosamina.
Solucin estndar: Preparar segn se indica en la
prueba de Contenido de Glucosamina. Diluir con una
cantidad adecuada de agua, si fuera necesario.
Solucin muestra: Usar la solucin en anlisis.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de glu-
cosamina (C6Hl3NOs) disuelta:
Resultado= (ru/rs) x (Cs x V/L) x (M,,/M,2) x 100
ru = rea del pico obtenida de la Solucin muestra
derivatizada
r5 = rea del pico obtenida de la Solucin estndar
derivatizada
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solucin estndar
(mg/ml)
V = volumen de Medio, 900 ml
L = cantidad declarada de glucosamina
(mg/Tableta)
M,1 = peso molecular de glucosamina, 179,1 7
M,2 = peso molecular de clorhidrato de glucosamina,
215,63
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de (C6Hl3NOs)
Determinar el porcentaje de condroitina sulfato de so-
dio disuelta segn se indica a continuacin.
Solucin volumtrica, Diluyente, Soluciones estndar
y Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de
Contenido de Condroitina Sulfato de Sodio.
Solucin muestra: Usar la solucin en anlisis.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de con-
droitina sulfato de sodio disuelta:
Resultado= (C X V/L) X 100
C = concentracin determinada de condroitina
sulfato de sodio en la Solucin muestra
(mg/ml)
V = volumen de Medio, 900 ml
L = cantidad declarada de condroitina sulfato de
sodio (mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de condroitina sulfato de sodio
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica los tipos de sales de glu-
cosamina contenidos en el artculo y las fuentes de las
que se obtuvo la condroitina. Etiquetar indicando las
fuentes de la condroitina sulfato de sodio, ya sea bovina,
porcina, avcola o una mezcla de cualquiera de stas. La
etiqueta indica en el panel frontal el contenido de con-
drqitina sulfato de sodio con respecto a la materia seca.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Condroitina Sulfato de Sodio USP
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
ER Metilsulfonilmetano USP
Dimetil sulfona.
C2H602S 94, 1 3
6514 Glucosarnina /Suplementos Dietticos
Clorhidrato de Glucosamina
\ 1)
nCJ OH HCI
NH.
C6H13NOs HCI 215,63
D-Glucose, 2-amino-2-deoxy-, hydrochloride;
Clorhidrato de 2-amino-2-desoxi-/3-D-glucopiranosa
[66-84-2].
DEFINICIN
El Clorhidrato de Glucosamina contiene no menos de
98,0% y no ms de 1 02,0% de clorhidrato de glucosa-
mina (C6H1 iNOs HCI), calculado con respecto a la sustan-
cia seca.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN ~N EL INFRARROJO (197K)
B. IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERALES, Cloruros (191):
Cumple con los requisitos.
C. El tiempo de retencin del pico de glucosamina de la
Solucin muestra corresponde al de la Solucin estndar,
segn se obtienen en la Valoracin.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Solucin amortiguadora: En un matraz volumtrico de
1 L, disolver 3,5 g de fosfato dibsico de potasio en
agua. Agregar 0,25 ml de hidrxido de amonio, diluir
con agua a volumen y mezclar. Ajustar con cido fosf-
rico a un pH de 7,5.
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora
(75:25)
Diluyente: Acetonitrilo y agua (50:50)
Solucin estndar: 3,8 mg/ml de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en Diluyente
Solucin muestra: 3,8 mg/ml de Clorhidrato de Gluco-
samina en Diluyente. [NOTA-Agitar por medios mecni-
cos para ayudar en la disolucin.]
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 195 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 5 m
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-El pico de la unidad de glucosamina eluye apro-
ximadamente a los 1 O minutos. El cromatograma pre-
senta un pico adicional de gran tamao cerca del vo-
lumen muerto, debido al in cloruro.]
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
glucosamina
Eficiencia de la columna: No menos de 1500 platos
tericos
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de clorhidrato de glucosamina
(C6HuNOs HCI) en la porcin de Clorhidrato de Glu-
cosarnina lornada:
Resultado= (r,,fr,) x (C/Cu) x 100
r,, = respuesta del pico de la Solucin muestra
r1 = respuesta del pico de la Solucin estndar
USP 38
= concentracin de ER Clorhidrato de
Glucosam1na USP en la '>oluoon estndar
(mg/ml)
= concentracin de Ciorhidrato de Glucosam1na
en lv SnlucicSn mup,:tro (mg/rnL)
Criterios de aceptacin: 98,0%-102,0% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de O, 1%
CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221 ): Una porcin de
O, 1 O g no presenta ms sulfato que el correspondiente a
0,2;> ml de cido sulfrico 0,020 N (No ms de 0,24%).
ARSENICO, Mtodo JI (211): No ms de 3 ppm
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231 ): No ms de
1 O ppme (Oficial Ol-dic-2015)
PRUEBAS ESPECFICAS
ROTACIN PTICA, Rotacin Especfica(781S): +70,0 a
+73,0
Solucin muestra: 25 mg/ml. Medir la rotacin espec-
fica 3 horas despus de su preparacin.
PH (791)
Solucin muestra: 20 mg/ml
<;:riterios de aceptacin: 3,0-5,0
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105
durante 2 horas: pierde no ms de 1,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
pe~meables y resistentes a la luz.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
Sulfato de Glucosamina Cloruro
Potsico
(C6H14NOs)2S04 2KCI 605,52
Bis(o-glucose, 2-amino-2-deoxy-), sulfate potassium chloride
complex;
Complejo de sulfato de bis(2-amino-2-desoxi-,6-o-glucopira-
nosa) con cloruro de potasio (,-) [38899-05-7].
DEFINICIN
El Sulfato de Glucosamina Cloruro Potsico contiene no me-
nos de 98,0% y no ms de 1 02,0% de sulfato de glucosa-
mina cloruro potsico [(C6H14NOs)2S0.1 2KCI], calculado
con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO \197K)
Muestra: Transferir 50 mg de Sulfato de Glucosamina
Cloruro Potsico a un tubo de centrfuga y disolver en
2 ml de agua. Agregar 0,5 ml de cloruro de bario SR y
centrifugar. Recoger el sobrenadante y evaporar hasta
sequedad. Secar el residuo a 105u durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: El espectro IR de la Muestra
corresponde al de una preparacin similar de ER Clorhi-
drato de Glucosamina USP, excepto que se debe omitir
la adicin de cloruro de bario SR.
B. IDENTIFICACIN-PRUEBAS GENERALES, Cloruros (191) y
Potasio \191 ): Cumple con lu~ requisitos.
C. El tiempo de retencin del pico de glucosamina de la
Solucin muestra correspondP ;I rlp la ')n/ucin estndar,
segn se obtienen en la Va/oracion.
D. SULFATOS: En la prueba de Contenido de Sulfatos, des-
pus de la adicin de cloruro de bario SR, se forma un
precipitado blanco.
USP 38
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Solucin amortiguadora: En un matraz volumtrico de
1 L, lfolver 3,S g de osato dibasico de potasio en
;iguJ, Jgreg;ir 0,25 mi rle hirlrxirlo rlP Jmonio, rliluir
con agua a volumen y mezclar. Ajustar con cido fosf-
rico a un pH de 7,5.
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora
(75:25)
Diluyente: Acetonitrilo y agua (50:50)
Solucin estndar: 3,8 mg/ml de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en Diluyente. Agitar durante 5 minu-
tos mecnicamente para disolver por completo.
Solucin muestra: Transferir 263 mg de Sulfato de Glu-
cosamina Cloruro Potsico a un matraz volumtrico de
50 ml. Disolver en 30 ml de Diluyente y agitar mecni-
camente. Diluir con Diluyente a volumen.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 195 nm
Columna: 4,6 mm x 1 5 cm; relleno L8 de 5 m
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O ~1L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-El pico de la unidad de glucosamina eluye apro-
ximadamente a los 1O minutos. El cromatograma pre-
senta picos adicionales cerca del volumen muerto, de-
bido a los contraiones.]
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
glucosa mina
Eficiencia de la columna: No menos de 1500 platos
tericos
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de sulfato de glucosamina cloruro
potsico [(C6H14NOs)2S4 2KCI) en la porcin de Sul- Sulfato de Glucosamina Cloruro Sdico
fato de Glucosamina Cloruro Potsico tomada:
Resultado= (ru/r,) x (C/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
r.1 = respuesta del pico de la Solucin estndar
C = concentracin de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin de Sulfato de Glucosamina
Cloruro Potsico en la Solucin muestra
(mg/ml)
M,, = peso molecular de sulfato de glucosamina
cloruro potsico, 605,52
Me = dos veces el peso molecular de clorhidrato de
glucosamina, 431,26
Criterios de aceptacin: 98,0%-102,0% con respecto
a la sustancia seca
OTROS COMPONENTES
CONTENIDO DE SULFATOS
Muestra: 1 g de Sulfato de Glucosamina Cloruro
Potsico
Anlisis: Transferir la Mueslru a un vaso de precipitados
de 250 ml y disolver en 100 ml de agua. Agregar 4 ml
de cido clorhdrico 6 N. Calentar la solucin a ebulli-
cin y agregar, mezclando constantemente, suficiente
cloruro de bario SR hirviendo para precipitar completa-
mente el sulfato. Agregar 2 ml adicionales de cloruro
de bario SR y digerir en un bao de vapor durante 1
hora. Pasar la mezcla a travs de un filtro de papel sin
cenizas. Transferir el residuo cuantitativamente a un fil-
tro nuevo y lavar el residuo con agua caliente hasta
'lupl2m2ntos Di2tPtico~ / Glucosamina 6515
que, al agregar 1 ml de nitrato de plata SR a 5 ml del
lavado, no se obtenga ningn precipitado. Transferir el
papel que contiene el residuo a un crisol tarado. Carbo-
nizar ei papei, sin quemar, e incinerar ei crisol y su con-
tPnicfo h;i<;t;i pe<;o con-;t;inte Calrnl;ir el contenido de
sulfato multiplicando el peso obtenido por 0,4116.
Criterios de aceptacin: 15,5%-16,5%
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281): 26,5%-31,0%
SODIO: Una solucin (1 en 1O) analizada en un alambre
de platino no imparte un color amarillo pronunciado a
una llama no luminosa.
ARSNICO, Mtodo 11 (211 ): No ms de 3 g/g
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
1 O ppme (Oficial Oldic-2015)
PRUEBAS ESPECFICAS
ROTACIN PTICA, Rotacin Especfica (781 S)
Solucin muestra: 35 mg/ml. Medir la rotacin espec-
fica 3 horas despus de su preparacin.
Criterios de aceptacin: +47,0 a +53,0
PH (791)
Solucin muestra: 20 mg/ml
~riterios de aceptacin: 3,0-5,0
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 105
durante 2 horas: pierde no ms de 1,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
pe~meables y resistentes a la luz.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
(C6H14N;)2S04 2NaCI 573,31
Bis(D-glucose, 2-amino-2-deoxy-), sulfate sodium chloride
complex;
Complejo de sulfato de bis(2-amino-2-desoxi-f:l-D-glucopira-
nosa) con cloruro de sodio(-,-) [38899-05-7).
DEFINICIN
El Sulfato de Glucosamina Cloruro Sdico contiene no me-
nos de 98,0% y no ms de 102,0% de sulfato de glucosa-
mina cloruro sdico [(C6H 14NO)2S04 2NaCI], calculado
con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197K)
Muestra: Transferir 50 mg de Sulfato de Glucosamina
Cloruro Sdico a un tubo de centrfuga y disolver en
2 ml de agua. Agregar 0,5 ml de cloruro de bario SR y
centrifugar. Recoger el sobrenadante y evaporar hasta
sequedad. Secar el residuo a 1 05n durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: El espectro IR de la Muestra
corresponde al de una preparacin similar de ER Clorhi-
drato de Glucosamina USP. omitiendo la adicin de clo-
ruro de bario SR.
B. IDENTIFICACIN-PRUEBAS GENERALES, Cloruros (191) y
Sodio (191 ): Cumple con los requisitos.
C. El tiempo de retencin del pico de glucosamina de la
Solucin muestra corresponde al de la Solucin estndar,
segn se obtienen en la Valoracin.
D. SULFATOS: f:.n la prueba de Contenido de Su/tatos, des-
pus de la adicin de cloruro de bario SR, se forma un
precipitado blanco.
651 6 Glucosamin.:i / Suplementos Dietticos
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Solucin amortiguadora: En un matraz volumtrico de
1 L, disolver 3,5 g Je fu>dlu Jiuc:>icu Je fJUldsio en
agua, agregar 0,25 ml de hidrxido de amonio, diluir
con agua a volumen y mezclar. Ajustar con cido fosf-
rico a un pH de 7,5.
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora
(75:25)
Diluyente: Acetonitrilo y agua (50:50)
Solucin estndar: 3,8 mg/ml de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en Diluyente. Agitar mecnicamente
durante 5 minutos para disolver completamente.
Solucin muestra: Transferir 250 mg de Sulfato de Glu-
cosamina Cloruro Sdico a un matraz volumtrico de
50 ml. Disolver en 30 ml de Diluyente y agitar mecni-
camente. Diluir con Diluyente a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 195 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 5 pm
Temperatura de la columna: 35
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA~EI pico de la unidad de glucosamina eluye a
aproximadamente 1O minutos. El cromatograma pre-
senta picos adicionales cerca del volumen muerto, de-
bidos a los contra-iones.]
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
glucosa mina
Eficiencia de la columna: No menos de 1500 platos
tericos
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de sulfato de glucosamina cloruro
sdico [(C6H14Ns)2S4 2NaCI) en la porcin de Sul-
fato de Glucosamina Cloruro Sdico tomada:
Resultado= (ru!r1) x (Cs/Cu) x (M,1/M2) x 100
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
r1 = respuesta del pico de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de
Glucosamina USP en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin de Sulfato de Glucosamina
Cloruro Sdico en la Solucin muestra
(mg/ml)
M, 1 = peso molecular de sulfato de glucosamina
cloruro sdico, 573,31
M2 = dos veces el peso molecular de clorhidrato de
glucosamina, 431,26
Criterios de aceptacin: 98,0%-1 02,0% con respecto
a la sustancia seca
OTROS COMPONENTES
CONTENIDO DE SULFATOS
Muestra: 1 g de Sulfato de Glucosamina Cloruro Sdico
Anlisis: Transferir la Muestra a un vaso de precipitados
de 250 ml y disolver en 100 ml de agua. Agregar 4 ml
de cido clorhdrico 6 N. Calentar la solucin a ebulli-
cin y agregar, mezclando constantemente, suficiente
cloruro de bario SR en ebullicin, para precipitar com-
pletamente el sulfato. Agregar 2 ml de cloruro de bario
SR adicionales y digerir en un bao de vapor durante 1
hora. Pasar la mncla a travs de un pape de filtro sin
cenizas. Transferir el residuo cuantitativamente a un
nuevo filtro y lavar el residuo con agua caliente hasta
que no se forme precipitado al agregar 1 ml de nitrato
USP 38
de plata SR a 5 ml del lavado. Transferir el papel que
contiene el residuo a un crisol tarado. Carbonizar el pa-
pel, sin encenderlo, e inc.inerar el crisol y su contenido
hasta peso constante. Calcular el contenido de sultato
multiplicilndo el peso obtenido por 0,4116.
Criterios de aceptacin: 16,3%-17,3%
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281): 22,5%-26,0%
ARSNICO, Mtodo 11 (211 ): No ms de 3 pg/g
POTASIO
Anlisis: Acidificar 5 ml de una solucin (1 en 20) con
cido actico 6 N y agregar 5 gotas de cobaltinitrito de
sodio SR.
Criterios de aceptacin: No se forma precipitado.
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231 >: No ms de
1 O ppme (Oficial Ol-dic-2015)
PRUEBAS ESPECFICAS
ROTACIN PTICA, Rotacin Especfica (781 S)
Solucin muestra: 35 mg/ml. Medir la rotacin espec-
fica 3 horas despus de su preparacin.
Criterios de aceptacin: +50,0 a +55,0
PH (791)
Solucin muestra: 20 mg/ml
<;:riterios de aceptacin: 3,0-5,0
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 1 05
durante 2 horas: pierde no ms de 1,0% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
pe~meables y resistentes a la luz.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de Glucosamina USP
cido Glutmico
o
. - )___
r OH
Nl-I,
147, 13
CsH9N4
L.-Glutamic acid;
Acido S-2-aminopentanodioico [56-86-0).
DEFINICIN
El cido Glutmico contiene no menos de 98,5% y no ms
de 101,5% de cido L-glutmico (CsH9N4), calculado
con respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197K)
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Muestra: 140 mg de cido Glutmico
Blanco: Mezclar 6 ml de cido frmico y 50 ml de
cido actico glacial.
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Ac1do perclrico O, 1 N SV
Deteccin del punto final: Potenciomtrica
Anlisis: Disolver !a Muestra en 6 ml de cido frmico y
50 ml de cido actico glacial, y valorar con la Solucin
volumtrica. Realizar una determinacin con el Blanco.
USP 18
Calcular el porcentaje de cido glutmico (C 5 H9 N0 4 )
en la Muestra tomada:
RP~lJltado-= {[(V, - Ve) x N X F]/W} x 100
V, ~
volumen de Soiucin voiumtrica consumido
por la Muestra (ml)
Vs = volumen de Solucin volumtrica consumido
por el Blanco (ml)
N = normalidad real de la Solucin volumtrica
(mEq/mL)
F =factor de equivalencia, 147, 1 mg/mEq
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptacin: 98,5%-101,5% con respecto
a la sustancia seca
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de 0,1%
CLORUROS y SULFATOS, Cloruros (221)
Solucin estndar: 0,40 ml de cido clorhdrico 0,01 O
N
Muestra: 0,7 g de cido Glutmico
Criterios de aceptacin: No ms de 0,02%
CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos (221)
Solucin estndar: ,0,25 ml de cido sulfrico 0,020 N
Muestra: 1,2 g de Acido Glutmico
Criterios de aceptacin: No ms de 0,02%
HIERRO (241): No ms de 1 o g/g
Ellminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 7 (231 ): No ms de 1o g/
9 (Oficial Ol-dic-2015)
COMPUESTOS RELACIONADOS
Solucin estndar: 0,05 mg/ml de ER cido Glutmico
USP en agua
Solucin muestra: 1 O mg/ml en una solucin de amo-
naco SR y agua (1 :1)
S9lucin de aptitud del sisterria: 0,4 mg/ml de ER
Acido Asprtico USP y de ER Acido Glutmico USP en
agua
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 5 L
Fase mvil: Alcohol butlico, cido actico glacial y
agua (3:1 :1)
Solucin reveladora: 2 mg/ml de ninhidrina en una
mezcla de alcohol butlico y cido actico 2 N (95:5)
Aptitud del sistema
Requisitos de aptitud: El cromatograma de la Solucin
de aptitud del sistema presenta dos manchas clara-
mente separadas.
Anlisis: Despus de secar la placa al aire, repetir el
proceso de desarrollo. Despues de secar la placa al aire
por segunda vez, rociar con Solucin reveladora y calen-
tar a una temperatura entre 1 00 y 105 durante apro-
ximadamente 15 minutos. Observar la placa bajo luz
blanca.
Criterios de aceptacin: Ninguna mancha secundaria
de la Solucin muestra es de mayor tamao o intensidad
que la mancha principal de la Solucin estndar.
Suplementos Dietticos / Glutatin 651 7
Impurezas individuales: No ms de 0,5%
Impurezas totales: No ms de 2,0%
PRUEBAS ESPECFICAS
ROTACIN PTICA, HotaClon l:speut1ca \78 l S
Solucin muestra: 1 00 mg/ml, en cido clorhdrico
2N
Anlisis: Proceder segn se indica en el captulo, ex-
cepto que se debe medir a 20.
<;riterios de aceptacin: + 31,5 a + 32,5
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 1 05
durante 3 horas: pierde no ms de O, 1 % de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
ESTAl!IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~cido Asprtico USP
ER Acido Glutmico USP
Glutatin
SH
o
( H
~
- N
11
Nl-I:' o
C10H17N306S 307,32
Pentanoic acid, 2-amino-5-[(R)- l -(carboxymethylamino)-
3-mercapto- l-oxopropan-2-ylamino ]-5-oxo, (S);
N-(N-L-y-Glutamil-L-cisteinil)glicina [70-18-8].
DEFINICIN
El Glutatin contiene no menos de 98,0% y no ms de
101,0% de C10H 11Ni06S, como glutatin, calculado con
respecto a la sustancia seca.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCJN,EN EL INFRARROJO (197K)
B. ROTACION OPTICA, Rotacin Especfica (781 S)
Solucin muestra: 40 mg/ml en agua
Criterios de aceptacin: -15,5 a -1 7,5, a 20
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Muestra: 500 mg de glutatin previamente secado
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Yodo O, 1 N SV
Deteccin del punto final: Visual
Blanco: 50 ml de cido metafosfrico (1 en 50)
Anlisis: Disolver la Muestra en 50 ml de cido meta-
fosfrico (1 en 50) y valorar con la Solucin volumtrica.
Calcular el porcentaje de glutatin (C10H11N,06S) en la
porcin de Glutatin tomada:
Resultado = [(V - B) x N x F x 1 00]/W
V = volumen de solucin volumtrica consumido
por la Muestra (ml)
B = volumen de solucin volumtrica consumido
por el Blanco (ml)
N = normalidad de la solucin volumtrica
(mEq/mL)
F = factor de equivalencia, 307,32 mg/mEq
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptacin: 98,0%-101,0% con respecto
a la materia seca
6518 Glutatin / Suplementos Diettico~
IMPUREZAS
Impurezas Inorgnicas
AMONIO
Solucin e~tndar: 1O pg de amonio, a partir de una
solucin de cloruro de amonio diluida
Solucin mue5tra: 50 mg de Glutatin
Anlisis: Transferir la Solucin muestro y la Solucin es-
tndar a sendos recipientes de 25 mL provistos con ta-
pas y disolver en 1 mL de agua. Agregar 0,30 g de
xido de magnesio. Cerrar inmediatamente despus de
colocar bajo fas tapas un cuadrado de papel de manga-
neso/plata de 5 mm de lado humedecido con unas po-
cas gotas de agua. Agitar por rotacin suave, evitando
proyecciones de lquido, y dejar en reposo a 40 du-
rante 30 minutos.
Criterios de aceptacin: Si el papel de manganeso/
plata rresenta un color gris, ste no es ms intenso
que e estndar (no ms de 200 ppm).
ARSENICO <211): No ms de 2 ppm
CLORUROS y SULFATOS, Cloruros <221): Disolver 0,7 g con
agua hasta obtener 15 ml. La solucin no presenta ms
cloruro que el correspondiente a 0,20 mL de cido clor-
hdrico 0,020 N (no ms de 200 ppm).
CLORUROS y SULFATOS, Sulfatos <221 ): Disolver 0,8 g con
agua hasta obtener 15 ml. La solucin no presenta ms
sulfato que el correspondiente a 0,25 mL de cido sul-
frico 0,020 N (no ms de 300 ppm).
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 1 (231 ): No ms de
1 O ppme (Oficial 01-dic-2015)
HIERRO <241): No ms de 1 o ppm
RESIDUO DE INCINERACIN <281): No ms de 0,1%
Impurezas Orgnicas
PROCEDIMIENTO
Fase mvil: 6,8 g/L de fosfato dicido de potasio con
2,02 g/L de 1-heptanosulfonato de sodio. Ajustar con
cido fosfrico a un pH de 3,0. Mezclar 970 mL de esta
solucin con 30 mL de metanol.
Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER L-
Fenilalanina USP, 0,,5 mg/mL de ER Glutatin USP y
0,5 m_g/mL de ER Acido Ascrbico USP en Fase movil
Solucion estndar: 0,01 mg/mL de ER Glutatin USP
en Fase mvil. [NOTA-Esta solucin tiene una concen-
tracin equivalente a 2,0% de la concentracin de la
Solucin muestra.]
Solucin muestra: 50 mg de glutatin en 100 mL de
Fase mvil. [NOTA-Dejar la solucin en reposo durante
5 minutos antes de su uso.]
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: Ajustar de manera que el tiempo
de retencin de glutatin sea aproximadamente 5
minutos.
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 5,0 entre los picos de
cido ascrbico y glutatin; y no menos de 5,0 en-
tre los picos de glutatin y L-fenilalanina
Desviacin estndar relativa: No ms de 1,5% en
inyecciones repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de cualquier impureza en la por-
cin de Glutatin tomada:
Resultado = (ru/r,) x (C,/Cu) x 100
USP 38
ru = respuesta de cualquier pico de la Solucin
muestra diferente Je yluldlin
r, = respuesta del pico de glutatin de la Solucin
c~tndar
(', = oncentracin de ER Glutatin USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin de Glutatin en la Solucin
muestra (m~/mL)
Criterios de aceptacion
Impureza individual: No ms de 1,5% para la impu-
reza con el tiempo de retencin relativo de aproxima-
damente 4
Impurezas totales: No ms de 2,0%
PRUEBAS ESPECFICAS
TRANSPARENCIA Y COLOR DE LA SOLUCIN
Solucin muestra: O, 1 g/mL en agua
Anlisis: Usando tubos idnticos de vidrio incoloro,
transparente y neutro con base plana y un dimetro
interno de 15-25 mm, comparar el lquido a examinar
con agua, siendo la profundidad de la capa 40 mm.
Comparar los colores bajo luz diurna difusa, observando
verticalmente contra un fondo blanco.
Criterios de aceptacin: La solucin es transparente e
incolora.
PRDIDA POR SECADO (731): No ms de 0,5%, 105 du-
rante 3 horas
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases
impermeables.
ESTAl)IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Ascrbico USP
ER Glutatin USP
ER L-Fenilalanina USP
Guggul
DEFINICIN
El Guggul es la oleogomorresina que se obtiene por incisin
o se produce por exudacin espontnea del tallo y las
ramas de Commiphora wightii (Arnott) Bhandari, tambin
conocida como Commiphora mukul (Hook. ex. Stocks)
Engl. o Balsamodendrum mukul (Hook.) (Fam. Bursera-
ceae). Contiene no menos de 1,0% de gugulesteronas E y
Z, calculado con respecto a la materia seca como gugu-
lesterona Z.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1 O mg/mL de ER Extracto de Gug-
gul Purificado USP en acetonitrilo, calentando.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 0,5 g
de Guggul triturado a un tubo de centrfuga. Agregar
25 mL de acetonitrilo y agitar durante 1 minuto. Calen-
tar en un bao de agua durante 10--15 minutos agi-
tando, enfriar, centrifugar y usar el sobrenadante.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Copa Del-
gada.)
Fase mvil: Una mezcla de hexano y dcelato de etilo
(6:4)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longituJ
Volumen de aplicacin: 1O L
Anlisis
Muestras: Solucion estndar y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada.
Usar una cmara saturada. DPsarrollar hasta que el
frente de la fase mvil haya recorrido aproximada-
USP 38
mente tres cuartos de la longitud de la placa, secar la
placa y observar bajo luz UV a 254 nm.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
oon muc~ta pc::.cntJ bLlndJ~ .:i './alores R.- de aproxima
damente 0,38 y 0,47, rlPhirlil<> il gugulesteronil E y z,
respectivamente. Ambas bandas corresponden en valo-
res Rf a las bandas de la Solucin estndar.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Gugulesteronas E y Z
Cri!erios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
c10n muestra prese.n,ta picos para gugulesterona E y za
tiempos de retenc1on que corresponden a los de la So-
lucin estndar A.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GUGULESTERONAS E V Z
Fase ~vil: ,una mezcla de acetonitrilo y agua (45:55)
Soluc1on est.andar A: 1O mg/mL de ER Extracto de
Guggul Pu~1!1cado U~P en acet~:mitrilo, calentando. Pa-
sar la soluc1on a traves de un filtro con un tamao de
poro de 0,45 m antes de la inyeccin.
Solucin estndar B: O, 1 mg/mL de ER Gugulesterona
Z USP en acetonitrilo. Pasar la solucin a travs de un
filtro c.~n un tamao de poro de 0,45 m antes de la
1nyecc1on.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2 O g
de Guggul triturado a un matraz Erlenmeyer y extraer
cuatro veces cada una con una porcin de 50 mL de
acetonitrilo. Agitar durante 1 minuto y someter a reflujo
en un bao de agua durante 30 minutos, mezclando
c?n un agitador magntico. Evaporar los extractos com-
binados hasta aproximadamente 50 mL y transferir a un
matraz volumtrico de 100 ml. Diluir con acetonitrilo a
volumen y pasar a travs de un filtro con un tamao de
poro de 0,45 m antes de la inyeccin.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 242 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 2,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 ul
Temperatura de la columna: 27 1
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para gugu-
lesteronas E y Z son aproximadamente 0,69 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto de
Guggul Purificado USP usado.
Resolucin: No menos de 2,0 entre el pico de gugu-
lesterona Z y el pico precedente, Solucin estndar A
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
gugulesterona Z, Solucin estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0% en
inyecciones repetidas para el pico de gugul~sterona
Z, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Dejar que la Solucin estndar A eluya durante no me-
nos de dos veces el tiempo de retencin de guguleste-
rona Z, segn se determina en Solucin estndar B.
Usando el cromatograma de la Solucin estndar A y el
cromatograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto de Guggul Purificado USP usado, identificar
los tiempos de retencin de los picos correspondientes
a gugulesterona E y gugulesterona Z.
Suplementos Dietticos / Guggul 6519
Calcular el porcentaje de gugulesteronas E y z como
gugulesterona Z en la porcin de Guggul tomada:
RP<>tiltildo ~ (dr.) :< C x (V/V\!):< 100
ru - suma de las respuestas de los picos de
gugulesteronas E y Z de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de gugulesterona Z de la
Solucin estndar B
Cs = concentracin de ER Gugulesterona Z USP en
la Solucin estndar B (m9/mL)
V = volumen final de la Solucion muestra, 1 00 mL
W =peso de Guggul tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 1,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
MET_,ALES PESADOS, Mtodo)// (231): No ms de 20 g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requ1s1tos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: El Guggul se produce en conglomera-
dos r~dondeados o irre~ulares de lgrimas, de varios
lama.nos, de color marran claro a oscuro, ligeramente
pegaiosos al tacto, con olor aromtico caracterstico y
Uf) sabor aromtico astrjngente.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 1 %
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561): No menos de 33%
EXTRACTOS SOLUBLES EN ACETATO DE ETILO
Muestra: Aproximadamente 5,0 g de Guggul reducido
a polvo grueso
Anlisis: , Transf~rir. la Muestra a un matr~z Erlenmeyer
con tapan de vidrio. Agregar 25 mL de eter de petr-
leo, tapar el matraz, agitar durante 1 hora, filtrar y de-
sechar el filtrado. Repetir dos veces y secar el residuo al
vaco sobre pentxido de fsforo a temperatura am-
biente durante 8 horas. Triturar el material seco y ex-
traer con cuatro cantidades, cada una de 25 mL de
acetato de etilo, agitando cada vez durante 1 h~ra a
temperatura ambiente, seguida por filtracin a travs de
un embudo de vi.cirio sinterizado (tamao de poro N
3). Evaporar los filtrados combinados bajo presin redu-
cida en un matraz tarado, secar el residuo al vaco so-
bre pentxido de fsforo a temperatura ambiente du-
rante 12 horas y pesar. Determinar el porcentaje de
extractos solubles en acetato de etilo calculados a par-
tir del peso de Guggul tomado. '
<;:riterios de aceptacin: 22%-30%
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 o g a 1 05 durante 2
horas: pierde no ms,de 8,0% des~ peso.
RESIDUO DE INCINERACION (281): No ms de 10,0%, inci-
nerado a 800 25
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561 ): No ms de 2, 0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar en
un lugar fresco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
l~tn de las especies de Commiphora de las que se ob-
t1en.e la oleogomorresina y, despus de la denominacin
of1c1al, la parte de la planta contenida en el artculo.
6520 Guggul / Suplementos Dietticos
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gugulcsterona Z USP
ER Extracto de Guggul Purificado USP
Extracto de Guggul Nativo
DEFINICIN
El Extracto de Guggul Nativo se prepara a partir de Gu9gul,
usando acetato de etilo, alcohol o metano!. La relacion
entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto Nativo
es aproximadamente 9:1. Contiene no menos de 5,0% de
gugulesteronas E y Z, calculadas con respecto a la materia
anhidra como gugulesterona Z. No contiene sustancias
agregadas.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1 O mg/mL de ER Extracto de Gug-
gul Purificado USP en acetonitrilo, calentando.
Solucin muestra: Homogeneizar el Extracto de Gug-
gul Nativo calentando en un bao de agua a 60-80.
Preparar una solucin de 5 mg/mL en acetonitrilo
calentando.
Sistema cromato9rfico
(Ver CromatograflO (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Fase mvil: Una mezcla de hexano y acetato de etilo
(6:4)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud
Volumen de aplicacin: 1 O L
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada.
Usar una cmara saturada. Desarrollar hasta que el
frente de la fase mvil haya recorrido aproximada-
mente tres cuartos de la longitud de la placa, secar la
placa y observar bajo luz UV a 254 nm.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta bandas a valores RF de aproxima-
damente 0,38 y 0,47, debidas a gugulesterona E y Z,
respectivamente. Ambas bandas corresponden en valo-
res RF a las bandas en el cromatograma de la Solucin
estndar.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Gugulesteronas E y Z.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta picos para gugulesterona E y Z a
tiempos de retencin que corresponden a los de la So-
lucin estndar A.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GUGULESTERONAS E Y Z
Fase mvil: Una mezcla de acetonitrilo y agua (45:55)
Solucin estndar A: 1 O mg/mL de ER Extracto de
Guggul Purificado USP en acetonitrilo, calentando. Pa-
sar la solucin a travs de un filtro con un tamao de
poro de 0,45 m antes de la inyeccin.
Solucin estndar B: O, 1 mg/mL de ER Gugulesterona
Z USP en acetonitrilo. Pasar la solucin a travs de un
filtro con un tamao de poro de 0,45 m antes de la
inyeccin.
Solucin muestra: Homogeneizar el Extracto de Gug-
gul Nativo calentando en un bao de agua a 60-80.
Disolver una cantidad pesada de Extracto Nativo homo-
geneizado, calentando, en acetonitrilo hasta obtener
una solucin con una concentracin conocida de apro-
ximadamente 0,2 mg/mL de gugulesteronas E y Z. Pa-
LJSP 38
sar a travs de un filtro con un tamao de poro de 0,45
m antes de la inyeccin.
S~~~e~a cromato09r!i~? . . .. . .. - .
~ ve1 uurnuluyrw1u \bL 1;, Apurua ae1 )Jstema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 242 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 2,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Temperatura de la columna: 27 1
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para gugu-
lesteronas E y Z son aproximadamente 0,69 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto de
Guggul Purificado USP usado.
Resolucin: No menos de 2,0 entre el pico de gugu-
lesterona Z y el pico precedente, Solucin estndar A
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
gugulesterona Z, Solucin estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de gugulesterona Z (inyecciones repetidas),
Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Dejar que la Solucin estndar A eluya durante no me-
nos de dos veces el tiempo de retencin de guguleste-
rona Z, segn se determina en Solucin estndar B.
Usando el cromatograma de la Solucin estndar A y el
cromatograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto de Guggul Purificado USP usado, identificar
los tiempos de retencin de los picos correspondientes
a gugulesterona E y gugulesterona Z.
Calcular el porcentaje de gugulesteronas E y Z como
gugulesterona Zen la porcin de Extracto de Guggul
Nativo tomada:
Resultado= (ru/r1) x Cs x (V/VV) x 100
ru = suma de las respuestas de los picos de
gugulesteronas E y Z de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de gugulesterona Z de la
Solucin estndar B
Cs = concentracin de ER Gugulesterona Z USP en
la Solucin estndar B (m9/mL)
V = volumen final de la Solucion muestra (mL)
W = peso de Extracto Nativo tomado para preparar
la Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 5,0% de gugu-
lesteronas E y Z, calculado como gugulesterona Z, con
respecto a la materia anhidra.
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de 20 g/
ge (p!icial Ol dic-2015)
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos. ,
EXTRACTOS BOTANICOS, Disolventes Residuales (565): Cum-
ple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g.
USP 38
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum
ple con os requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo 7a (921 ): No ms de
5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar en
un lugar fresco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artculo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gugulesterona Z USP
ER Extracto de Guggul Purificado USP
Extracto de Guggul Purificado
DEFINICIN
El Extracto de Guggul Purificado se prepara a partir de Ex-
tracto de Guggul Nativo mPdiante fraccionamiento
usando metanol acuoso. Contiene no menos de 90,0% y
no ms de 110,0% de la cantidad declarada de gugules-
teronas E y Z, calculado como gugulesteronas Z. Puede
ser un extracto semislido sin sustancias agregadas o ex-
tracto en polvo que contenga sustancias agregadas
adecuadas.
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1 O mg/mL de ER Extracto de Gug-
gul Purificado USP en acetonitrilo, calentando.
Solucin muestra: 1 O mg/mL en acetonitrilo, a partir
de Extracto de Guggul Purificado, disolver calentando,
enfriar y centrifugar.
Sistema cromato9rfico
(Ver CromatografJO (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Fase mvil: Una mezcla de hexano y acetato de etilo
(6:4)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud
Volumen de aplicacin: 1O L
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada.
Usar una cmara saturada. Desarrollar hasta que el
frente de la fase mvil haya recorrido aproximada-
mente tres cuartos de la longitud de la placa, secar la
placa y observar bajo luz UV a 254 nm.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta bandas a valores Rr de aproxima-
damente 0,38 y 0,47, debidas a gugulesterona E y Z,
respectivamente. Ambas bandas corresponden en valo-
res Rr a las bandas en el cromatograma de la Solucin
estndar.
8. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Gugulesteronas E y Z.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta picos para gugulesterona E y Z a
tiempos de retencin que corresponden a los de la So-
lucin estndar A.
'\upll:'rrwnto~ Dif'l~tiw~ / Guggul 6521
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GUGULESTERONAS E Y Z
Fase mvil: Una mezcla de acetonitrilo y agua (45:55)
Solucin estandar A: 1O mg/mL de E:R E:xtracto de
Guggul Purificado USP en du:tunilrilo, calentando. Pa-
sar la solucin a travs de un filtro con un tamao de
poro de 0,45 m antes de la inyeccin.
Solucin estndar B: 0, 1 mg/mL de ER Gugulesterona
Z USP en acetonitrilo. Pasar la solucin a travs de un
filtro con un tamao de poro de 0,45 m antes de la
inyeccin.
Solucin muestra: Disolver una cantidad pesada de Ex-
tracto de Guggul Purificado, calentando, en acetonitrilo
hasta obtener una solucin con una concentracin co-
nocida de aproximadamente 0,2 mg/mL de guguleste-
ronas E y Z. Pasar a travs de un filtro con un tamao
de poro de 0,45 m antes de la inyeccin.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 242 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 2,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Temperatura de la columna: 27 1
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para gugu-
lesteronas E y Z son aproximadamente 0,69 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto de
Guggul Purificado USP usado.
Resolucin: No menos de 2,0 entre el pico de gugu-
lesterona Z y el pico precedente, Solucin estndar A
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
gugulesterona Z, Solucin estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% en
inyecciones repetidas para el pico de gugulesterona
Z, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Dejar que la Solucin estndar A eluya durante no me-
nos de dos veces el tiempo de retencin de guguleste-
rona Z, segn se determina en Solucin estndar B.
Usando el cromatograma de la Solucin estndar A y el
cromatograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto de Guggul Purificado USP usado, identificar
los tiempos de retencin de los picos correspondientes
a gugulesterona E y gugulesterona Z.
Calcular el porcentaje de gugulesteronas E y Z como
gugulesterona Zen la porcin de Extracto de Guggul
Purificado tomada:
Resultado= (ru/r1) XC X (V/W) X 100
ru = suma de las respuestas de los picos de
gugulesteronas E y Z de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de gugulesterona Z de la
Solucin estndar B
Cs = concentracin de ER Gugulesterona Z USP en
la Solucin estndar B (m_g/mL)
V = volumen final de la So/ucion muestra (mL)
W = peso de Extracto de Guggul Purificado
tomado para preparar la Solucin muestra
(mg)
Criterios de aceptacin: 90,0%~ 11 0,0% de la cantidad
declarada de gugulesteronas E y Z, calculado como gu-
gulesteronas Z
6522 Guqqul /Suplementos Dietticos
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mlodo JI (231): No ms de 20 g/
ge (ptrDJI OJ-dl(-2015) ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
EXTRACTOS BOTNICOS, Disolventes Residuales (565): Cum-
ple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobim no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 1 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022):
Cumple con los requisitos de las pruebas para determinar
la ausencia de Salmone/Ja spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar en
un lugar fresco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artculo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gugulesterona Z USP
ER Extracto de Guggul Purificado USP
Guggul, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Guggul se preparan a partir de Extracto de
Guggul Nativo o Extracto de Guggul Purificado. Las Table-
tas contienen no menos de 90,0% y no ms de 110,0%
de la cantidad declarada de Extracto, calculado como la
suma de 0ugulesteronas E y Z.
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1 O mg/mL de ER Extracto de Gug-
gul Purificado USP en acetonitrilo, calentando.
Solucin muestra: Reducir a polvo y transferir una por-
cin de las Tabletas equivalente a 1 00 mg de Extracto a
un matraz Erlenmeyer. Extraer tres veces, cada una con
25 mL de acetonitrilo, en un bao de agua a 55 du-
rante 15 minutos mezclando con un agitador magn-
tico y filtrar. Evaporar los extractos combinado~ hasta
sequedad al vac10 a una temperatura entre 45c y 50,
disolver el residuo en 1 O mL de acetonitrilo, centrifugar
y usar el sobrenadante transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Crn1nutoyrufw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Fase mvil: Una mezcla de hexano y acetato de etilo
(6:4)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud
Volumen de aplicacin: 1 O L
Anlisis
Muestras; Solucin e)tnciur y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada.
Usar una cmara '>aturada. Desarrollar hasta que el
frente de la fase mvil haya recorrido aproximada-
mente tres cuartos de la longitud de la placa, secar la
placa v observar bajo luz UV a 254 nm.
USP 38
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
c1on muestra presenta bandas a valores R de aproxima-
1
damente O, 38 y 0,4 7, debidas a gugulesterona E y Z,
respectivamente. Ambas bandas corresponden en v~lo
res R, a las bandas en el c1on1alu'.:)td111a de la Soluuon
estndar.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Gugulesteronas E y Z.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta picos para gugulesterona E y Za
tiempos de retencin que corresponden a los de la So-
lucin estndar A.
CONTENIDO
CONTENIDO DE GUGULESTERONAS E Y Z
Fase mvil: Una mezcla de acetonitrilo y agua (45:55)
Solucin estndar A: 1O mg/ml de ER Extracto de
Guggul Purificado USP en acetonitrilo, calentando. Pa-
sar la solucin a travs de un filtro con un tamao de
poro de 0,45 m antes de la inyeccin .
Solucin estndar B: O, 1 mg/mL de ER Gugulesterona
Z USP en acetonitrilo. Pasar la solucin a travs de un
filtro con un tamao de poro de 0,45 m antes de la
inyeccin.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una cantidad pesada del
polvo, equivalente a aproximadamente 1 O mg de gugu-
lesteronas E y Z, a un matraz Erlenmeyer, y extraer
cinco veces, cada una con una porcin de 20 mL de
acetonitrilo, agitar durante durante 1 minuto y someter
a reflujo en un bao de agua durante 30 minutos, mez-
clando con un agitador magntico. Evaporar los extrac-
tos combinados hasta sequedad al vaco a una tempera-
tura de 45-50. Disolver el residuo en 50,0 mL de
acetonitrilo y pasar a travs de un filtro con un tamao
de poro de 0,45 m antes de la inyeccin.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 242 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 2,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 ~tL
Temperatura de la columna: 27 1
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA~Los tiempos de retencin relativos para gugu-
lesteronas E y Z son aproximadamente 0,69 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto de
Guggul Purificado USP usado.
Resolucin: No menos de 2,0 entre el pico de gugu-
lesterona Z y el pico rrecedente, Solucin estndar A
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
gugulesterona Z, Solucin estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de gugulesterona Z (inyecciones repetidas),
Solucion estandar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucion muestra
Dejar que la Solucin estndar A eluya durante no me-
nos de dos veces el tiempo de retencin de guguleste-
rona Z, segn se determina en Solucin estndar B.
Usando el cromatograma de la Solucin estndar A y el
cromatograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto de Guggul Purificado USP usado, identificar
los tiempos de retencir1 de los picos correspondientes
a gugulesterona E y gugulesterona Z.
USP 38 Supfemrntos DiPtticos / Gymnema 6523

Calcular el contenido de 9ugulsteronas E y Z como gu-
gulsterona Zen la porcion de Tabletas tomada:
r 1 .. 1,_ \ r .
L - ~11/11\) "' L\ ""
1,1
V IDENTIFICACIN
ru = suma de las respuestas de los picos de
gugulesteronas E y Z de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de gugulesterona Z de la
Solucin estndar B
Cs = concentracin de ER Gugulesterona Z USP en
la Solucin estndar B (m9/mL)
V = volumen final de la Solucion muestra (mL)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de Extracto
de Guggul tomada:
Resultado = C, x (Aw1!VV) x (1 00/ Lt) x (100/ L)
C, = contenido de gugulesteronas E y Z en la
porcin de Tabletas tomada (mg)
Awr = peso promedio de las Tabletas (mg)
W = peso de las Tabletas reducidas a polvo tomado
(mg)
LE = porcentaje declarado de la suma de
gugulesteronas E y Zen el Extracto usado
para preparar las Tabletas
L = cantidad declarada de Extracto (mg/Tableta)
Criterios de aceptacin: 90,0%-11 0,0% de la cantidad
declarada de Extracto, calculado como la suma de gu-
gulesteronas E y Z
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumple con el re-
quisito de Desintegracin nicamente; 30 minutos, omi-
tiendo el uso del disco.
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 1 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
DISOLVENTES RESIDUALES (467): Cumple con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del que se prepararon las Tabletas. La etiqueta tam-
bin indica la cantidad de Extracto, en mg/Tableta y el
contenido, en mg, de gugulesteronas E y Z por 1 00 mg
de Extracto.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gugulesterona Z USP
ER Extracto de Guggul Purificado USP
Glutamina-ver Glutamina en Monografas
Generales
Gymnema
DEFINICIN
La Gymnema consta de las hojas secas de Gymnema sylves-
tre (Retz.) R. Br. ex Schult. (Fam. Asclepiadaceae). Con-
tiene no menos de 1,0% de cidos gymnmicos, calcula
dos como gymnemagenina con respecto a la materia
seca.
A. (11mple ron lm rer11isitos rle Pnwhas Fspecfirns, Ca-
ractensticas Botanicas.
B. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Gymnemage-
nina USP en metano!
Solucin estndar B: 20 mg/mL de ER Extracto Nativo
de Gymnema USP en metano!. Someter a ultrasonido
durante 1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Aproximadamente 0,5 g de Gym-
nema, reducida a polvo fino, en 5 mL de metano!. So-
meter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de diclorometano, metano! y
cido frmico (75:25:1 O)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Una mezcla de metano! y
cido sulfrico (9:1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
placa para cromatografa en capa delgada de alta reso-
lucin adecuada y secar al aire (ver Cromatografa
(621 )). Desarrollar los cromatogramas en una cmara
saturada, retirar la placa de la cmara, secar al aire,
derivatizar la placa con Reactivo de derivatizacin, ca-
lentar a 11 O durante 3 minutos y observar bajo luz
visible y luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar B presenta dos bandas claramente separadas
a un valor Rr de aproximadamente 0,6-0,7 por debajo
de la banda debida a gymnemagenina en la Solucin
estndar A y la banda ms prominente se ubica a
aproximadamente un tercio del cromatograma, visible
en color marrn bajo luz blanca y en color azul bajo
luz UV .
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes en color y posicin a las bandas del cromato-
grama de la Solucin estndar B: dos bandas a un valor
Rr de aproximadamente 0,6-0,7, por debajo de la
banda debida a gymnemagenina en la Solucin estndar
A; la banda ms prominente a aproximadamente un
tercio del cromatograma, visible en color marrn bajo
luz blanca y en color azul bajo luz UV; y en el tercio
interior del cromatograma, bajo luz UV, una banda azul
verdosa clara y una banda oscura por debajo de sta.
C. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Gymnmicos.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta un pico principal a un tiempo de
retencin correspondiente al del pico de gymnemage-
nina en el cromatograma de la Solucin estndar A y un
pico adicional correspondiente a cido
desacilgymnmico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDOS GVMNMICOS
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua y agregar 0,5 mL de
cido fosfrico. Diluir con agua hasta 1 000 mL, mezclar,
filtrM y rlf'sgasifirar.
6524 Gymnema / Suplementos Dietticos
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
1 1
'
Tiempo Solucin A Solucin B
lmin) 1/o) /O/o)
o 75 25
20 45 55
25 40 60
30 40 60
35 75 25
40 75 25
Disolvente: Etanol al 50% en agua
Solucin de hidrxido de potasio: Hidrxido de pota-
sio al 12% en agua , Solucin estndar A (mg/mL)
Solucin de cido clorhdrico: Acido clorhdrico 4 N
Solucin estndar A: 0,3 mg/mL de ER Gymnemage-
nina USP en metano!
Solucin estndar B: Transferir aproximadamente
0,25 g de ER Extracto Nativo de Gymnema USP a un
matraz de fondo redondo de 100 mL equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 mL de Disolvente y
2 mL de Solucin de hidrxido de potasio, someter a re-
flujo en un bao de agua durante 1 hora y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 5,5 mL de Solucin de
cido clorhdrico, someter a reflujo en un bao de agua
durante 2 horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajus-
tar la solucin con Solucin de hidrxido de potasio a un
pH de 7,5-8,5, transferir a un matraz volumtrico de
50 mL, diluir con Disolvente a volumen y mezclar. Antes
de inyectar, pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 m o menor, dese-
chando los primeros mL del filtrado.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 0,75 g
de Gymnema, reducidos a polvo fino y pesados con
exactitud, a un matraz de fondo redondo de 1 00 mL
equipado con un condensador de reflujo. Agregar
25 mL de Disolvente y 2 mL de Solucin de hidrxido de
potasio, someter a reflujo en un bao de agua durante
1 hora y enfriar a temperatura ambiente. Agregar
5,5 mL de Solucin de cido clorhdrico, someter a reflujo
en un bao de agua durante 2 horas y enfriar a tempe-
ratura ambiente. Ajustar la solucin con Solucin de hi-
drxido de potasio a un pH de 7,5-8,5, filtrar en un
matraz volumtrico de 1 00 mL, diluir con Disolvente a
volumen y mezclar. Antes de inyectar, pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 210 nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m, 100
A dura. Se encuentran tricomas distribuidos profusa-
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1,6 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto Na-
tivo de Gymnema USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
gymnemagenina, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de gymnemagenina, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
USP 38
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
Solucin e>lnuur B y el crornc1lograrna de referencia
provisto con el lote de ER Extracto Nativo de Gym-
nema USP usado, identificar los tiempos de 1ele11ci11
de los picos correspondientes a cido desacilgymn-
mico y gymnemagenina de la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de cidos gymnmicos, calcula-
dos como gymnemagenina, en la porcin de Gym-
nema tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = rea del pico de gymnemagenina de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de gymnemagenina de la
Solucin estndar A
Cs =concentracin de gymnemagenina en la
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Gymnema usada para preparar la
Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 1,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
MET_ALES PESADOS, Mtodo,!// (231 ):, No ms de 20 g/g,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Ana-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 oi ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Hojas opuestas; pecioladas; simples,
elpticas u ovadas; de pice agudo; margen entero;
base aguda a acuminada; venacin reticulada; rubes-
centes en ambas superficies, la superficie dorsa es ms
pubescente; aproximadamente 2-6 cm de largo,
1-4 cm de ancho; la superficie superior es de color ma-
rrn amarillento, la superficie inferior es de color verde
oscuro; sabor amargo, al masticarla tiene la propiedad
de paralizar el sentido del gusto durante unas pocas
horas para sustancias dulces y amargas, particularmente
sustancias dulces. El artculo farmacopeico consiste en
hojas secas, quebradizas y de color verde a verde
amarillento.
Microscpicas
Seccin transversal del pecolo: En forma de herra-
mente sobre toda la periferia, uniseriados, multicelula-
res y de paredes anchas. Una capa de clulas
epidrmicas de paredes gruesas; 4-5 capas de corteza
colenquirnatosa; y parnquima interno. Los haces vas-
culares se presentan como un arco en la parte media,
tres en nmero-dos laterales pequeos y uno grande
en medio. El haz de la parte media consta de elemen-
tos de xilema agrupados en hileras radiales, rodeadas
por floema. El xilerna consta de elementos de vasos,
traqueidas y fibras. Se presentan cristales en forma de
roseta en las clulas colenquimticas y parenquimti-
cas, con mayor nmero en las clulas hacia ef centro.
Los grnulos de almidn son poligonales, simples o
compuestos, en grupos de dos o ms, hilio indistinto.
Seccin transversal de la lmina: Clulas de la epi-
dermis superior e inferior de paredes delgadas, cubier-
tas con una cutcula estriada delgada. Tricomas en am-
bas superficies, de una a tres clulas, uniseriados, y de
USP 38
paredes gruesas. Una sola capa en empalizada debajo
de la epidermis superior que ocupa un tercio del gro-
sor de la lmina, sequida por 3-5 capas de clulas
parenquimticas con grandes espacios intercelulares.
Seccin transversal de la nervadura central: Clulas
de la epidermis superior e inferior de paredes delga-
das, cubiertas con una cutcula estriada delgada. Se
presentan tricomas uniseriados, de una a tres clulas y
de paredes gruesas, seguidos por 4-5 capas de clulas
parenquimticas compactas en ambos lados de la ner-
vadura central; se presentan haces vasculares colatera-
l~s que forman un arc9.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(56,1): No ms de 2,0%,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
coh,ol, Mtodo I (561): N,o menos de 20%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
fl;ltodo I (561): No menos de 20%
PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Gymnema reducida a polvo fino
Anlisis: Secar a 105 durante 3 horas.
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 7,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Gymnema reducida a polvo fino
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 1 5% , grama de la Solucin estndar B: dos bandas a un valor
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 1,0 g de Gymnema reducida a polvo fino
Criterios de aceptacin: No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gymnemagenina USP
ER Extracto Nativo de Gymnema USP
Extracto Nativo de Gymnema
DEFINICIN
El Extracto Nativo de Gymnema se prepara a partir de Gym-
nema usando mezclas hidroalcohlicas. La relacin entre
el material vegetal y el extracto es aproximadamente 8:1.
Contiene no menos de 5,0% de cidos gymnmicos, cal-
culado como gymnemagenina con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIN ~-
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA i----~---
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Gymnemage-
nina USP en metano!
Solucin estndar B: 20 mg/mL de ER Extracto Nativo
de Gymnema USP en metano!. Someter a ultrasonido
durante 1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: 20 mg/mL de Extracto Nativo de
Gymnema en metano!. Someter a ultrasonido durante
1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 Len bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de diclorometano, metanol y
cido frmico (75:25: l O)
Supementos Dietticos / Gymnema 6525
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Una mezcla de metano! y
cido sulfrico (9: 1)
Anlisis
Muestras: Sulucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
placa para cromatografa en capa delgada de alta reso-
lucin adecuada y secar al aire (ver Cromatografa
(621 )). Desarrollar los cromatogramas en una cmara
saturada, retirar la placa de la cmara, secar al aire,
derivatizar la placa con Reactivo de derivatizacin, ca-
lentar a 110' durante 3 minutos y observar bajo luz
visible y luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar B presenta dos bandas claramente separadas
a un valor R1 de aproximadamente 0,6-0,7 por debajo
de la banda debida a gymnemagenina en la Solucin
estndar A y la banda ms prominente se ubica a
aproximadamente un tercio del cromatograma, visible
en color marrn bajo luz blanca y en color azul bajo
luz UV.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes en color y posicin a las bandas del cromato-
RF de aproximadamente 0,6-0,7, por debajo de la
banda debida a gymnemagenina en la Solucin estndar
A; la banda ms prominente a aproximadamente un
tercio del cromatograma, visible en color marrn bajo
luz blanca y en color azul bajo luz UV; y en el tercio
inferior del cromatograma, bajo luz UV, una banda azul
verdosa clara y una banda oscura por debajo de sta.
B. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Gymnmicos.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta un pico principal a un tiempo de
retencin correspondiente al del pico de gymnemage-
nina en el cromatograma de la Solucin estndar A y un
pico adicional correspondiente a cido
desacilgymnmico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDOS GVMNMICOS
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua y agregar 0,5 mL de
cido fosfrico. Diluir con agua hasta 1 000 mL, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%)
o - e-- 75 - --- - - ...12.. ----.----~
20 45 55
25 40 60
30 40 60
35 75 25
40 75 25
Disolvente: Etanol al 50% en agua
Solucin de hidrxido de potasio: Hidrxido de pota-
sio al 12% en agua .
Solucin de cido clorhdrico: Acido clorhdrico 4 N
Solucin estndar A: 0,3 mg/mL de ER Gymnemage-
nina USP en metano!
Solucin estndar B: Transferir aproximadamente
0,25 g de ER Extracto Nativo de Gymnema USP a un
matraz de fondo redondo de 1 00 mL equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 mL de Disolvente y
2 ml de Solucin de hidrxido de potasio, someter a re-
flujo en un bao de agua durante 1 hora y enfriar a

temperatura ambiente. AgregJr 5,5 ml de Solucin de
arnJo clor/11dnco, someter a reflujo en un bao de agua
dur~nte _2 horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajus-
tar 1a so1uc1on con :-iotuoon de h1drox1do de potasio a un
pH d0 7, ";-8, \ tiiinsferir a un rnalrctL volumtrico de
50 ml, diluir con Disolvente a volumen y mezclar. Antes
de inyectar, pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamaf1_o de poro de 0,45 m o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto
Nativo de ~ymnema, eguivalente a aproximadamente
30 mg de ac1dos gymnemicos, a un matraz de fondo
redo_ndo de 100 ml equipado con un condensador de
reflu_o. ,Agregar 25 ml de Disolvente y 2 ml de Solucin
de h1drox1do de potasio, someter a reflujo en un bao de
agua durante 1 hora y enfriar a temperatura ambiente.
Agregar 5,5 ml de Solucin de cido clorhdrico someter
a reflujo en un bao de agua durante 2 horas 'y enfriar
. ~emperatu;a_ ambiente. Ajustar la solucin con Solu-
c_1on de h1drox1do de po,tasio a un pH de 7,5-8,5, transfe-
rir a un matraz volumetnco de 100 ml, diluir con Disol-
vent~ a volumen y mezclar. Antes de inyectar, pasar a
traves de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
ml del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m, 100
A REQUISITOS ADICIONALES
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: Ecl cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto Na-
tivo de Gymnema USP usado.
Factor de asimetra: . No ms de 1,5 para el pico de
gyrn11emagen1na, )otuc1on estandar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0% de-
termin_ada a partir del pico de gymnemage~ina 'en
inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Usando, los cromatogramas de la Solucin estndar A,
Soluuon estandar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto t-..Jativo de Gym-
nema USP usado, identificar los tiempos de retencin
de los picos correspondientes a cido desacilgymn-
m1co y gymnemagenina de la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de cidos gymnmicos, calcula-
dos como gymnemagenina, en la porcin de Extracto
Nativo de Gymnema tomada:
Resultado= (r,,jr,) x (C/C 11) x 100
ru = area del pico de gymnemagenina de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de qymnemagenina de la
Solucin estndar A
C = concentracin de gymnemagenina en la
Solucin estndar A (mg/ml)
e,, = concentracin
de Extracto Nativo ele
Gymnema en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: No menos de 5 0% con res-
pecto a la materia seca ' A?sorbentc: Mezcla de gel d slice para cro1 natoyr a-
USP 38
CONTAMINANTES
Eliminar fo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo /JI (231): No ms de 20 g/
ge (9t1cial Ol-dic-2015)
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
llSIS de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requ1s1tos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Mu,e~t.ra: 1,0 g de Extracto Nativo de Gymnema
Anahs1s: Secar a 105 durante 3 horas.
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 5,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Extracto Nativo de Gymnema
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 8%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas fmoluhlP\ en .cido
(561)
Muestra: 1,0 g de Extracto Nativo de Gymnema
Criterios de aceptacin: No ms de 2,0%
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta_ de la que se obtuvo el artculo. Cumple con otros
requ1s1tos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gymnemagenina USP
ER Extracto Nativo de Gymnema USP
Extracto Purificado de Gymnema
DEFINICIN
El Extracto Puri_ficado de Gymnema se prepara a partir de
Extracto Nat1v,o de Gy~nema ~ediante precipitacin
usando solucion de ac1do clorh1dnco diluido. La relacin
entre el material v_egetal y el extracto es aproximada-
mente 25:1. Contiene no menos de 90,0% y no ms de
110,0% de la cantidad declarada de cidos gymnmicos
calculado como gymnemagenina, con respecto a la ma-'
tena seca. Puede contener sustancias agregadas adecua~
das como vehculos.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
So_lucin estndar A: 0,5 mg/ml de ER Gymnemage-
n1na USP en metanol
Solucin estndar B: 20 mg/ml de ER Extracto Nativo
de Gymnema USP en metano!. Someter a ultrasonido
dura~,te 1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Soluc1on muestra: 20 mg/ml de Extracto Purificado
de Gymnema en metano!. Someter a ultrasonido du-
rante 1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Sistema cromatogrfico
fia con un tamao promedio de partcula de 5 ~tm
(placas para HPTLC)
USP 38
Volumen de aplicacin; 5 ~il en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de dicloromctano, metanoi y
cido frmico (75:25:1 O)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Una mezcla de metano! y
cido sulfrico (9: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
placa para cromatografa en capa delgada de alta reso-
lucin adecuada y secar al aire (ver Cromatografa
(621 )). Desarrollar los cromatogramas en una cmara
saturada, retirar la placa de la cmara, secar al aire,
derivatizar la placa con Reactivo de derivatizacin, ca-
lentar a 11 on durante 3 minutos y observar bajo luz
visible y luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar B presenta dos bandas claramente separadas
a un valor Rf de aproximadamente 0,6-0,7 por debajo
de la banda debida a gymnemagenina en la Solucin
estndar A y la banda ms prominente se ubica a
aproximadamente un tercio del cromatograma, visible
en color marrn bajo luz blanca y en color azul bajo
luz UV.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes en color y posicin a las bandas del cromato-
grama de la Solucin estndar B: dos bandas a un valor
RF de aproximadamente 0,6-0,7, por debajo de la
banda debida a gymnemagenina en la Solucin estndar
A; la banda ms prominente a aproximadamente un
tercio del cromatograma, visible en color marrn bajo
luz blanca y en color azul bajo luz UV; y en el tercio
inferior del cromatograma, bajo luz UV, una banda azul
verdosa clara y una banda oscura por debajo de sta.
B. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Gymnmicos.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta un pico principal a un tiempo de
retencin correspondiente al del pico de gymnemage-
nina en el cromatograma de la Solucin estndar A y un
pico adicional correspondiente a cido
desacilgymnmico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDOS GYMNMICOS.
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 ml de agua y agregar 0,5 ml de
cido fosfrico. Diluir con agua hasta 1000 ml, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A
(m=in""t)'-------- ____________ __l"&l_
r----'"
- l __
o 75
20 45
------~25--- .---40 _____
r---~3~--- 40 - -~~---
~ __ _]_i_____ ---- Z___
40 75
Disolvente: Etanol al 50% en agua
Solucin de hidrxido de potasio: Hidrxido de pota-
sio al 12% en agua , Cs
Solucin de cido clorhdrico: Acido clorhdrico 4 N
Solucin estndar A: 0,3 mg/ml de ER Gymnemage-
nina USP en metanol
)upicrncntos L):ctct1co:; / Gymnema 6!-J2/
Solucin estndar B: Tramferir aproximadamente
0,25 g de ER Extracto Nativo de Gymnema USP a un
matraz de fondo redondo de 1 00 mL equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 ml de' Disolvente y
2 ml de 5oiuC1on de hidroxido de potasio, someter a re-
flujo en un bao de agua durante 1 hora y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 5,5 ml de Solucin de
cido clorhdrico, someter a reflujo en un bao de agua
durante 2 horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajus-
tar la solucin con Solucin de hidrxido de potasio a un
pH de 7,5-8,5, transferir a un matraz volumtrico de
50 ml, diluir con Disolvente a volumen y mezclar. Antes
de inyectar, pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 m o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto
Purificado de Gymnema, equivalente a aproximada-
mente 30 mg de cidm gymnmicos, a un matraz de
fondo redondo de 100 rnl equipado con un condema-
dor de reflujo. Agregar 25 ml de Disolvente y 2 ml de
Solucin de hidrxido de potasio, someter a reflujo en un
bao de agua durante 1 hora y enfriar a temperatura
ambiente. Agregar 5,5 ml de Solucin de cido clorh-
drico, someter a reflujo en un bao de agua durante 2
horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajustar la solu-
cin con Solucin de hidrxido de potasio a un pH de
7,5-8,5, transferir a un matra volumtrico de 1 00 ml,
diluir con Disolvente a volumen y mezclar. Antes de in-
yectar, pasar a travs de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando los
primeros ml del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m, 1 00
A
Temperatura de la columna: 25 t 1
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto Na-
tivo de Gymnema USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 1 ,5 para el pico de
gymnemagenina, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de gymnemagenina, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
Solucin estndar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto Nativo de Gym-
nema USP usado, identificar los tiempos de retencin
de los picos correspondientes a cido desacilgymn-
Solucin B mico y gymnemagenina en el cromatograma de la So-
--~'~V~)_ ______, lucin muestro.
25 Calcular el porcentaje (P) de cidos gymnmicos, calcu-
55 lados como gymnemagenina, en la porcin de Ex-
QQ_ _
tracto Purificado de Gymnema tomada:
- _ _QQ _ __
P= (ru! r1) X ( Cs/ Cu) X l 00
--~2=5-----t
25 r0 - rea del pico de gymnemagenina de la
Solucin muestra
r, = rea del pico de gymnemagenina de la
SoluC1on estndar A
= concentracin de gymnemagenina en la
Solucin estndar A (mg/ml)
Cu = concentracin de Extracto Purificado de
Gymnema en la Solucin muestra (mg/ml)
6528 Gymnema / Suplementos DiPthicos
CalrnlM e! porcentaje de la cantidad declarada de
cicidos gymnmicos en la porcin de l:xtracto
Purificado de Gymnema tomada:
Resultado= (PIL) x 100
P contenido de cidos gymnmicos segn se
= sobrenadante.
determin anteriormente (%)
L = cantidad declarada de cidos gymnmicos (%)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 g/
9 C9ficial Oldic-2015)
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 101 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Extracto Purificado de Gymnema
Anlisis: Secar a 1 05 durante 3 horas.
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 5,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Extracto Purificado de Gymnema
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 8% , en color marrn bajo luz blanca y en color azul bajo
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizm Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 1,0 g de Extracto Purificado de Gymnema
Criterios de aceptacin: No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artculo. Etiquetar indi-
cando el contenido de cidos gymnmicos, como por-
centaje. Cumple con otros requisitos de etiquetado en
Extractos Botanicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Gymnemagenina USP
ER Extracto Nativo de Gymnema USP
Gymnema en Polvo
DEFINICIN
La Gymnema en Polvo es Gymnema reducida a polvo o a
polvo muy fino. Contiene no menos de 1,0% de cidos
gymnmicos, calculado como gymnemagenina, con res-
pecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. Cumple con los requisitos de Pruebas Especficas, Ca-
ractersticas Botnicas.
B. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Gymnemage-
nina USP en metano!
USP 38
Solucin estndar B: 20 mg/mL de ER Extracto Nativo
de Gymnema USP en metano!. Someter a ultrasonido
durante 1 O minutos, centrifuqar y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Aproximadamente 0,5 g de Gym-
nerna en Polvo en 5 mL de metano!. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33% usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de diclorometano, metano! y
cido frmico (75:25:1 O)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Una mezcla de metano! y
cido sulfrico (9: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
placa para cromatografa en capa delgada de alta reso-
lucin adecuada y secar al aire (ver Cromatografa
(621 )). Desarrollar los cromatogramas en una cmara
saturada, retirar la placa de la cmara, secar al aire,
derivatizar la placa con Reactivo de derivatizacin, ca-
lentar a 11 O durante 3 minutos y observar bajo luz
visible y luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar B presenta dos bandas claramente separadas
a un valor RF de aproximadamente 0,6-0,7 por debajo
de la banda debida a gymnemagenina en la Solucin
estndar A y la banda ms prominente se ubica a
aproximadamente un tercio del cromatograma, visible
luz UV.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas correspon-
dientes en color y posicin a las bandas del cromato-
grama de la Solucin estndar B: dos bandas a un valor
RF de aproximadamente 0,6-0,7, por debajo de la
banda debida a gymnemagenina en la Solucin estndar
A; la banda ms prominente a aproximadamente un
tercio del cromatograma, visible en color marrn bajo
luz blanca y en color azul bajo luz UV; y en el tercio
inferior del cromatograma, bajo luz UV, una banda azul
verdosa clara y una banda oscura por debajo de sta.
C. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Gymnmicos.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta un pico principal a un tiempo de
retencin correspondiente al del pico de gymnemage-
nina en el cromatograma de la Solucin estndar A y un
pico adicional correspondiente a cido
desacilgymnmico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDOS GYMNMICOS.
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua y agregar 0,5 mL de
cido fosfrico. Diluir con agua hasta 1 000 mL, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
So 1uc1on
. B
Tiempo So 1uc1on
., A
1
lmin) (%) i (O/o)
o 75 1 25
20 -- 4'.l
-----------~--
_L_. 55
USP 38
----
Tabla 1 (tnntinuacion)
r------
Tiempo
_(min)
25
Solucin A
(%)
40
l Solucin 8
. ___ _i&t_
60
30 40 60
35 75 25
40 75 25
Disolvente: Etanol al 50% en agua
Solucin de hidrxido de potasio: Hidrxido de pota-
sio al 12% en agua , Solucin estndar A
Solucin de cido clorhdrico: Acido clorhdrico 4 N
Solucin estndar A: 0,3 mg/ml de ER Gymnemage-
nina USP en metano!
Solucin estndar B: Transferir aproximadamente
O 25 g de ER Extracto Nativo de Gymnema USP a un
~atraz de fondo redondo de 100 ml equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 ml de Disolvente y
2 ml de Solucin de hidrxido de potasio, someter a re-
flujo en un bao de agua durante 1 hora y enfri~,r a
temperatura ambiente. Agregar _5,5 ml de ~oluoon de
cido clorhdrico, someter a reflujo en un bano de ag~a
durante 2 horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajus-
tar la solucin con Solucin de hidrxido de potasio a un
pH de 7 5-8 5 transferir a un matraz volumtrico de
50 ml diluir' c~n Disolvente a volumen y mezclar. Antes
de iny~ctar, pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 m o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 0,75 g
de Gymnema en Polvo, pesados con exactitud, a un
matraz de fondo redondo de 1 00 ml equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 25 ml de Disolvente y
2 ml de Solucin de hidrxido de potasio, someter a re-
flujo en un bao de agua durante 1 hora y enfria,r a
temperatura ambiente. Agregar .5,5 ml de ~oluoon de
cido clorhdrico, someter a reflujo en un ban? de ag~a
durante 2 horas y enfriar a temperatura ambiente. Ajus-
tar la solucin con Solucin de hidrxido de potasio a un
pH de 7,5-8,5, filtrar en un matraz volumtrico de
100 ml diluir con Disolvente a volumen y mezclar. An-
tes de i~yectar, pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 m o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 4 6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m, 1 00
' ARTCLOs DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Agua,
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistem~ , . , Anlisis: Secar a 105 durante 3 horas.
Muestras: Solucion estandar A y Soluc1on estandar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto Na-
tivo de Gymnema USP usado. . (561)
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
gymnemagenina, Solucin estndar A,
Desviacin estndar relativa: No mas de 2,0% para
el pico de gymnemagenina, Solucion estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar~'
Solucin estndar By el cromatograma _de referencia
provisto con el lote de ER Extracl_o Nativo de Gym.-,
nema USP usado, identificar los tiempos de retenc1on
Suplementos Oiettirm / Gymnemi1 6529
de los picos correspondientes a cid_<? desacilgymn-
mico y gymnemugenina de lu Soluoon muestra.
..
Calcular el porcentaje de cidos ~ymnmicos, calcula-
do~ corno gymnemagcninJ, en .a porcin de Gym-
nema en Polvo tomarla:
-
-
Resultado= (ru!r1) x C1 x (V/W) x 100
ru = rea del pico de gymnemagenina de la
Solucin muestra
r5 = rea del pico de gymnemagenina de la
C5 = concentracin de gymnemagenina en la
Solucin estndar A (mg/ml)
V =volumen final de la Solucin muestra (ml)
W = peso de Gymnema en Polvo usada para
preparar la Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 1,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231 ): No ms de 20 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 Q3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _parn de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a co/1.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Microscpicas . .
Al microscopio, present~ fragme_nt?s de la ep1derm1s su-
perior e inferior, con celulas ep1de.rm1cas pol1gonale~,
de paredes delgadas y rectas, cub1er~~s con una cut1-
cula estriada y con estomas anomoc1t1co~;. se encuen-
tran presentes tricomas en ambas superf1c1es, de una a
tres clulas, uniseriados, y con paredes gruesas; frag-
mentos de clulas colenquimticas y parenquimti~as,
algunos contienen rosetas de oxalato de calcio; granu.-
los de almidn, poligonales, simples o compuestos, _h1-
lio indistinto; fragmentos de vasos reticulados y esp1ra-
lados, y traqueidas .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol Mtodo I (561 ): No menos de 20%
Mtodo / (561 ): No menos de 20%
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Gymnema en Polvo
Criterios de aceptacin: No ms de 7,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Gymnema en Polvo
Criterios de aceptacin: No ms de 1 5% .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
Muestra: 1,0 g de Gymnema en Polvo
Criterios de aceptacin: No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente. . _.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1ent1f1co en
latn y, despus de la denominac!n oficial, la parte de la
planta usada para preparar el ait1culo.
6530 Gymnema /Suplementos DiPtPtirm
ESTNDARES DE REFERENCIA USP ( 11)
ER C.ymnPma9enina U)P
ER Extracto Nativo de Gyrnnerna USP
Hidrastis
DEFINICIN
El Hidrastis se compone de las races y rizomas secos de
Hydrastis canadensis L. (Fam. (Ranunculaceae). Contiene
no menos de 2,0% de hidrastina (C21H21N06) y no menos
de 2,5% de berberina (C20H 18 N0 4), calculado con res-
pecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de ER Cloruro de Berbe-
rina USP y de ER Hidrastina USP en metanol
Sol!-lcin muestra: Reducir a polvo fino el rizoma y la
ra1z. Transferir 0,5 g del polvo a un vial de vidrio ade-
cuado y agregar 0,5 mL de carbonato de sodio al 10%.
Agregar 5 mL de metanol y calentar durante 1O minu-
tos e.n un b.ao de agua a 60. Enfriar a temperatura
ambiente, filtrar y secar bajo una corriente de nitr-
geno. Agregar 0,5 mL de metano! para disolver el
residuo.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 10-20 L, en bandas
Fase mvil: Acetato de etilo, alcohol butlico, cido fr-
mico y agua (5:3:1 :1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cmara saturada
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa, secar al aire y observar bajo luz
UV a 365 nm.
Criterios de aceptacin: Los cromatogramas presentan
zonas con fluorescencia de color amarillo limn debidas
a berberina a un valor Rr de aproximadamente 0,53 y
una fluorescencia de color blanco azulado debida a hi-
drastina a un valor R1 de aproximadamente 0,42.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE BERBERINA E HIDRASTINA Y LMITE DE
PALMATINA
Fase mvil: Disolver 9,93 g de fosfato monobsico de
potasio en 730 mL de agua, agregar 270 mL de aceto-
nitrilo, mezclar, filtrar y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de fosfato monobsico de po-
tasio O, 1 M y acetonitrilo (60:40)
Solucin estandar: 0,05 mg/mL de ER Cloruro de Ber-
berina USP y de ER Hidrastina USP en una mezcla de
metano! y agua (1: 1)
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una solucin
de palmatina en una mezcla de agua y metanol (1 :1)
con una concentracin conocida de aproximadamente
0,05 mg/mL. Mezclar volmenes iguales de esta solu-
cin y de la Solucin estndar.
Solucin muestra: Reducir a polvo tino una cantidad
de Hidrastis y transferir aproximadamente O, 12 g, pesa-
dos con exactitud, a un matraz volumtrico de 50 ml.
Agregar 40 mL de Disolvente, someter a ultrasonido du-
rante 5 minutm y agitar durante 1O minutos. Diluir con
Disolvente a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
usr 38
Modo: HPLC
Detector: UV 235 nm
Columna: 4,6 mm '-' 150 mm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,8 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O pl
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de ber-
berina y palmatina, y no menos de 1,5 entre los pi-
cos de hidrastina y palmatina, Solucin de aptitud del
sistema
Factor de capacidad: No menos de 3,0, determi-
nado a partir de los picos de hidrastina y berberina,
Solucin estndar
EficJ~ncia de la columna: N? menos de 5000 platos
teoncos determinados a partir de los picos de hidras-
tina y berberina, Solucin estndar
Factor de asimetra: No ms de 2,0, determinado a
partir de los picos de hidrastina y berberina, Solucin
estndar
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5%, de-
terminada a partir de los picos de hidrastina y berbe-
rina en inyecciones repetidas, Solucin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular los porcentajes de berberina e hidrastina en la
porcin de Hidrastis tomada:
Resultado = (ru/r5) x (5 x (V/W) x 100
ru = rea del pico de berberina o hidrastina de la
Solucin muestra
r5 = rea del pico de berberina o hidrastina de la
Solucin estndar
Cs concentracin de berberina o hidrastina en la
=
Solucin estndar (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Hidrastis reducida a polvo usado para
preparar la Solucin muestra (mg)
Con los valores obtenidos del cromatograma de la
Solucin muestra, dividir el rea del pico de berberina
por el rea de cualquier pico en el sitio de palmatina
(si estuviera presente).
Criterios de aceptacin: No menos de 2,0% de hi-
drastina (C21 H11 N06) y no menos de 2,5% de berbe-
rina (C20H13N4), con respecto a la materia seca. La
relacin entre las reas de los picos de berberina y
cualquier otro pico en el sitio de palmatina es mayor
de 50:1.
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS, Mtodo)// (231 ): No ms de 20 ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requ1s1tos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: El rizoma es nudoso, subcilndrico y en
ocasiones con un tallo areo. Tiene 1-5 cm de longitud
y 2-1 O mm de dimetro. En la parte externa, el rizoma
es de color marrn a anaranjado amarillento oscuro,
con surcos profundos y marcado con numerosas cicatri-
ces escamosas de insercin del tallo y yemas. Numero-
sas races quebradizas brotan desordenadamente del
mismo lado del eje principal. Las fracturas son cortas y
resinosas, con una corteza de color amarillo oscuro a
marrn amarillento, bordes de color amarillo verdoso y
un centro de color anaranjado amarillento de apariencia
cerosa: Tambin se presenta un crculo interrumpido de
peque_nos hace~ .fibrovasculares radial mente alargados.
Las ra1ces son filiformes, de hasta 35 cm de longitud y
de 1 mm de dimetro, curvadas o torcidas, enredadas
USP 38
entre s o rotas. Las fracturas son cortas y quebradiLas y
presentan en su intenor un color anaranado amarillento
a arnarillo verdoso.
Histologa
Seccin transversal del rizoma y la raz: El rizoma
presenta clulas suberosas poligonales de color marrn
amarillento con paredes delgadas a ligeramente grue-
sas. Los haces vasculares en forma de cua estn sepa-
rados por radios medulares amplios. Los elementos tra-
queales estn lignificados y presentan puntuaciones en
forma de hendidura. Tambien se presentan unos pocos
vasos grandes con engrosamientos reticulados. El te-
jido parenquimtico est compuesto por clulas poli-
gonales con abundantes granos de almidn simples o
compuestos de hasta 8 m de dimetro. En la corteza
y la mdula se encuentran presentes unas pocas clu-
las con formas irregulares productoras de resina. Asi-
mismo, en los tejidos parenquimticos se encuentran
presentes masas de materia granular de color marrn
anaranjado. Las races tienen una sola capa de clulas
suberosas irregularmente alargadas. Los elementos tra-
queales se asocian con fibras lignificadas. En ocasiones,
se presentan fragmentos de la epidermis cerca de la
base del rizoma y estn compuestos por clulas con
garedes gruesas, lignifi,cadas en forma de rosario.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(;i61): No ms de 2,0%
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 2 g de Hidrastis redu-
cida a polvo fino a 1 00 durante 5 horas: pierde no ms
de) 2,0% de su peso. , con una concentracin conocida de aproximadamente
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No ms de 9%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar protegiendo de la luz, la hume-
dad y el calor.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la P,lanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP <11)
ER Cloruro de Berberina USP
ER Hidrastina USP
Hidrastis en Polvo
DEFINICIN
El Hidrastis en Polvo es Hidrastis reducido a polvo fino o a
polvo muy fino. Contiene no menos de 2,0% de hidras-
tina (C21 H11 N06) y no menos de 2,5% de berberina
(C20H1sN04), calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de ER Cloruro de Berbe-
rina USP y de ER Hidrastina USP en metano!
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 0,5 g
de Hidrastis en Polvo, pesado con exactitud, a un vial
de vidrio adecuado y agregar 0,5 mL de carbonato de
sodio al 1 0%. Agregar 5 mL de metano! y calentar du-
rante 1 O minutos en un bao de agua a 60. Enfriar a
temperatura ambiente, filtrar y secar bajo una corriente
de nitrgeno. Agregar 0,5 rnL de metano! para disolver
el residuo.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Suplementos Oieteticos / Hidrastis 6531
Volumen de aplicacin: 10-20 L, en bandas
Fase mvil: Acetato de etilo, alcohol butllico, 21rnio for-
mico y agua (5:3:1 :1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar ios crornatograms en una cmara saturada
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa, secar al aire y observar bajo luz
UV a 365 nm.
Criterios de aceptacin: Los cromatogramas presentan
zonas con fluorescencia de color amarillo limn debidas
a berberina a un valor Rr de aproximadamente 0,53 y
una fluorescencia de color blanco azulado debida a hi-
drastina a un valor Rr de aproximadamente 0,42.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE BERBERINA E HIDRASTINA V LMITE DE
PALMATINA
Fase mvil: Disolver 9,93 g de fosfato rnonobcisico de
potasio en 730 mL de agua, agregar 270 mL de aceto-
nitrilo, mezclar, filtrar y desgasificar.
Disolvente: Una mezcla de fosfato monob<lsico de po-
tasio O, 1 M y acetonitrilo (60:40)
Solucin estandar: 0,05 mg/mL de ER Cloruro de Ber-
berina USP y de ER Hidrastina USP en una mezcla de
metano! y agua (1 : 1)
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una solucin
de palmatina en una mezcla de agua y metano! (1 :1)
0,05 mg/mL. Mezclar volmenes iguales de esta solu-
cin y de la Solucin estndar.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente O, 12 g
de Hidrastis en Polvo, pesados con exactitud, a un ma-
traz volumtrico de 50 ml. Agregar 40 mL de Disol-
vente, someter a ultrasonido durante 5 minutos y agitar
durante 1 O minutos. Diluir con Disolvente a volumen,
mezclar y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 235 nm
Columna: 4,6 mm x 150 mm; relleno Ll
Velocidad de flujo: 1,8 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de ber-
berina y palmatina, y no menos de 1,5 entre los pi-
cos de hidrastina y palmatina, Solucin de aptitud del
sistema
Factor de capacidad: No menos de 3,0, determi-
nado a partir de los picos de hidrastina y berberina,
Solucin estndar
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
tericos determinados a partir de los picos de hidras-
tina y berberina, Solucin estndar
Factor de asimetra: No ms de 2,0, determinado a
partir de los picos de hidrastina y berberina, Solucin
estndar
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5%, de-
terminada a partir de los picos de hidrastina y berbe-
rina en inyecciones repetidas, Solucin estndar
Anlisis
Muestras: Soluetn estandar y Solueton muestra
Calcular los porcentajes de berberina e hidrastina en la
porcin de Hidrastis en Polvo tomada:
Resultado= (r:Jr1) X e X (V/VV) X 100
ru = rea del pico de berberina o hidrastina de la
Solucin muestra
65 32 Hidras lis / Suplementos Dietticos
r, = rea del pico de berberina o hidrastina de la
Sulucin estndar
e = concentracin de berberina o hidrastina en la
Solucin estndar (mg/ml)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de H1drastis en Polvo usado para
preparar la Solucin muestra (mg)
Con los valores del cromatograma de la Solucin
muestra, dividir el rea del pico de berberina por el
rea de cualquier pico en el sitio de palmatina (si
estuviera presente).
Criterios de aceptacin: No menos de 2,0% de hidras-
tina (C21 H21 N06) y no menos de 2,5% de berberina
(C20H1sN04), con respecto a la materia seca. La relacin
entre las reas de los picos de berberina y cualquier
otro pico en el sitio de palmatina es mayor de 50:1.
CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 ppm
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: El polvo es de color amarillo
oscuro a amarillo moderadamente verdoso, con olor aro-
mtico y sabor amargo. Se presentan abundantes grnu-
los de almidn con formas esfricas u ovoides; los grnu-
los son simples o compuestos, en ocasiones con con hilo
en forma de hendidura. Las clulas parenquimticas va-
ran de poligonales a redondas y estn rellenas de almi-
dn o resina de color marrn. Se encuentran presentes
elementos traqueales con puntuaciones en forma de hen-
didura y unos pocos vasos reticulados de gran tamao,
adems de clulas epidrmicas alargadas de paredes
gruesas en forma de rosario. Tambin se presentan frag-
mentos delgados de capa suberosa.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
PRDIDA POR SECADO (731): Secar 2 g de Hidrastis en
Polvo a 1 00 durante 5 horas: pierde no ms de 12,0%
de su peso .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 9% , una mezcla de metano! y agua (1: 1 ). Someter a ultraso-
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar protegiendo de la luz y la
humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, las partes de
la FJlanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Cloruro de Berberina USP
ER Hidrastina USP
Extracto en Polvo de Hidrastis
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Hidrastis se prepara a partir de races
y rizomas secos y reducidos a polvo de Hydrastis canaden-
sis L. (Fam. Ranunculaceae), usando disolventes adecua-
dos. Contiene no menos de 5% de hidrastina (C21 H21 N06)
y no menos de 10% de la suma de berberina (C20H 18N04)
e hidrastina, calculado con respecto a la materia seca. La
relacin entre el material vegetal crudo inicial y el Ex-
tracto en Polvo es 2: 1.
USP 38
IDENTIFICACIN . ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,5 mg/mL de ER Cloruro de Berbe-
rina USP y de ER Hidrastina LJSP en metano!
Solucin muestra: 1O mg/mL de Extracto en Polvo en
una mezcla de metanol y agua (1: 1). Someter a ultraso-
nido durante 20 minutos, enfriar a temperatura am-
biente y filtrar.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 1.0-20 pL, en b'!ndas, . ,
Fase mvil: Acetato de etilo, alcohol butil1co, ac1do for-
mico y agua (5:3:1 :1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cmara saturada
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa, secar al aire y observar bajo luz
UV a 365 nm.
Criterios de aceptacin: Los cromatogramas presentan
zonas con fluorescencia de color amarillo limn debidas
a berberina a un valor RF de aproximadamente 0,53 y
una fluorescencia de color blanco azulado debida a hi-
drastina a un valor RF de aproximadamente 0,42.
COMPOSICIN ,
CONTENIDO DE BERBERINA E HIDRASTINA Y LIMITE DE
PALMATINA
Fase mvil: Disolver 9,93 g de fosfato monobsico de
potasio en 730 mL de agua, agregar 270 mL de aceto-
nitrilo, mezclar, filtrar y desgasificar.
Solucin estndar: 0,05 mg/mL de ER Cloruro de Ber-
berina USP y de ER Hidrastina USP en una mezcla de
metanol y agua (1 :1) .
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una solucin
de palmatina en una mezcla de agua y metanol (1 :1)
con una concentracin conocida de aproximadamente
0,05 mg/mL. Mezclar volmenes iguales de esta solu-
cin y de la Solucin estndar.
Solucin muestra: 2 mg/mL de Extracto en Polvo en
nido durante 20 minutos, enfriar a temperatura am-
biente y filtrar. [NOTA-La mezcla que se va a usar en
esta prueba no debe someterse a las condiciones espe-
cificadas en la prueba de Prdida por Secado. Se usa una
muestra separada para determinar el contenido con res-
pecto a la materia seca.]
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 235 nm
Columna: 4,6 mm x 150 mm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,8 ml/min
Volumen de inyeccin: 1O pL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud .
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de ber-
berina y palmatina, y no menos de 1,5 entre los pi-
cos de hidrastina y palmatina, Solucin de aptitud del
sistema
Factor de capacidad: No menos de 3,0, determi-
nado a partir de los picos de hidrastina y berberina,
Solucin estndar
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
tericos determinados a partir de los picos de hidras-
tina v herherina Solucin estndar
Factor de asimetra: No ms de 2,0, determinado a
partir de los picos de hidrastina y berberina, Solucin
estndar
USP 38
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5%, de-
terminada a partir de los picos de hidrastina y berbe-
rina en inyecciones repetidas, Solucin estndar
Analiss
Muestras: Solu<in estndar y So!ucion muestra
Calcular los porcentajes de berberina e hidrastina en la
porcin de Extracto en Polvo tomada:
Resultado= (ru/r,) >< (C/C11) x 100
ru = rea del pico de berberina o hidrastina de la
Solucin muestra
r, = rea del pico de berberina o hidrastina de la
Solucin estndar
e = concentracin de berberina o hidrastina en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo en la
Solucin muestra (mg/mL)
Con los valores del cromatograma de la Solucin
muestra, dividir el rea del pico de berberina por el
rea de cualquier pico en el sitio de palmatina (si
estuviera presente).
Criterios de aceptacin: No menos de 5% de hidras-
tina y no menos de 10% de la suma de hidrastina y
berberina, con respecto a la materia seca. La relacin
entre las reas de los picos de berberina y cualquier
otro pico en el sitio de palmatina es mayor de 50:1.
CONTAMINANTES
Ellmlnar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
20 P,pme (Oficial 01-dic-2015) ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonefla spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Polvo a 1 05 durante 2 horas: pierde no ms de 5,0% de
su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar protegiendo de la luz y la
humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta a partir de la que se prepar el artculo. Etiquetar
indicando el contenido de hidrastina y berberina, el disol-
vente de extraccin usado para la preparacin y la rela-
cin entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto
en Polvo.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Cloruro de Berberina USP
ER Hidrastina USP
\uplPmPntos Dietticos /jengibre 6533
Hidroxocobalamina-ver
Hidroxocobalamina en Monografas Generales
Histidina-ver Histidina en Monografas
Generales
lsoleucina-ver lsoleucina en Monografas
Generales
Jengibre
DEFINICIN
El Jengibre es el rizoma seco de Zingiber officinale Roscoe
(Fam. Zingiberaceae), pelado, parcialmente pelado o sin
pelar. Se conoce comercialmente como jengibre no
blanqueado.
IDENTIFICACIN
A.
Anlisis: Reducir a polvo 5 g de jengibre. Agregar 5 mL
de cido actico diluido, preparado diluyendo 1 parte
de cido actico glacial con 1 parte de agua, a 1 g de
jengibre, reducido a polvo, y agitar durante 15 minu-
tos. Filtrar y agregar unas gotas de oxalato de amonio
SR al filtrado.
Criterios de aceptacin: No se produce ms que una
ligera turbidez .
B.
Muestra: 50 mg del residuo obtenido en la prueba de
Artculos de Origen Botnico, Extractos Solubles en
Alcohol.
Anlisis: Disolver la Muestra en 25 mL de agua y ex-
traer esta solucin con dos porciones de 15 mL de ter.
Combinar los extractos etreos y evaporar en una cp-
sula de porcelana. Agregar 5 mL de solucin de cido
sulfrico (7,5 en 10,0) y 5 mg de vainillina al residuo.
Dejar en reposo durante 15 minutos y agregar un volu-
men igual de agua.
Criterios de aceptacin: La solucin se torna azul
celeste.
C. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: Proceder segn se indica en Solu-
cin muestra, excepto que se deben usar 0,2 g de ER
jengibre en Polvo USP.
Solucin estndar B: Usar la Solucin de aptitud del sis-
tema, preparada segn se indica en la prueba de Conte-
nido de Gingeroles y Gingerdionas.
Solucin muestra: Reducir a polvo 5 g de jengibre.
Transferir 0,2 g de jengibre reducido a polvo a un tubo
de ensayo, agregar 5 mL de metano!, agitar durante 30
minutos y centrifugar. Aplicar el sobrenadante a la
placa.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,50 mm
Volumen de aplicacin: 20 L para la Solucin muestra
y la Solucin estndar A; 40 L para la Solucin estndar
B
Fase mvil: ter y hexc;inos (7:3)
Solucin reveladora: Acido sulfrico al 10% en alcohol
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin mue~tra
Proceder segn se indica en el captulo. Observar la
placa bajo luz UV a 254 nm. Rociar la placa con Solu-
cin reveladora, calentar a 1 00-1 05 durante 1 O mi-
nutos y observar bajo luz diurna.
65 34 jenqbre / Suplementos Dieteticos USP 38

Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- Calcular el porcentaje de gingeroles y gingerdionas en

cin l)iue~l!u fJresenia 1rna mancha debida a gingeroles la mueslra tomauci:
que ocurre a un valor R, de 0,2. Se puede presentar
IF /lAJ\ 1 /'\
una mancha de shoaaoles a 1m valor R, rlP 0,4, corres- Rcsu!tJdc = ,,..:. ~Li/ YV) A IV
pondiente a la preser1te en el cromatoqrama de la Solu-
cin estndar B. [NOTA-Los uornalograrnas de la Solu- 11 =surna de las respueslas de los picos de
cin muestra y Solucin estndar A pueden presentar gingeroles y gingerdionas de la Solucin
otras manchas en la regin superior y en e origen de la muestra
placa.] r1 = respuesta del pico de capsaicina de la Solucin
estndar
COMPOSICIN Cs = concentracin de ER Capsaicina USP en la
CONTENIDO DE GINGEROLES Y GINGERDIONAS Solucin estndar (mg/mL)
Solucin A: Acetonitrilo, cido fosfrico diluido (1 en W = peso de jengibre usado en la prueba de
1000) y metano! (55:44: 1) Artculos de Origen Botnico, Extractos Solubles
Solucin B: Acetonitrilo en Alcohol (e;)
Fase mvil: Usar la Solucin A durante no menos de Criterios de aceptacion: No menos de 0,8%
siete veces el tiempo de retencin de capsaicina.
Lavado de la columna: Despus de cada corrida cro- CONTAMINANTES
matogrfica, lavar la columna, segn se indica en la ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Residuos de Plaguicidas
Tabla 7. (561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 10 5 ufc/g; el recuento total
Tabla 1
--------- --- combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
Tiempo Solucin A Solucin B cede de 10 3 ufc/g; el recuento de bacterias Gram-negati-
(min) (%) (%) vas tolerantes a la bilis no excede d~ 10 3 ufc/g.
------- o 100 o AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
2 o 100 ple con Jos requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
12 o 100
14 100 o PRUEBAS ESPECFICAS
29 100 o CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Los rizomas de jengibre se presentan
Solucin estndar: O, 1 mg/mL de ER Capsaicina USP en piezas aplanadas horizontal y lateralmente ramifica-
en metano! das simpodialmente. Los rizomas enteros son de
Solucin de aptitud del sistema: Reconstituir el conte- 5-15 cm de largo, de 1,5-6 cm de ancho y de hasta
nido de 1 vial de ER Mezcla de Componentes de jengi- 2 cm de grosor; a veces se dividen longitudinalmente;
bre USP en 1 mL de la Solucin estndar. su parte externa presenta un color beige amarillento
Solucin muestra: Usar el filtrado reservado de la plido o marrn claro, es estriada longitudinalmente y
prueba de Artculos de Origen Botnico, Extractos Solubles algo fibrosa; las ramificaciones son aplanadas, obova-
en Alcohol. das, cortas, aproximadamente de 2 cm de largo, y cada
Sistema cromato9rfico una termina con una cicatriz hendida en el tallo; la frac-
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) tura es corta con fibras salientes o, a veces, resinosas; su
Modo: HPLC interior es de color marrn amarillento, presenta una
Detector: UV 282 nm endodermis amarilla que separa la corteza estrecha de
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 Ja estela ancha, observndose mltiples puntos amari-
Velocidad de flujo: 1 ml/min llentos, clulas secretoras y numerosos puntos grisceos
Volumen de inyeccin: 25 L ms grandes, haces vasculares, dispersos en toda la su-
Aptitud del sistema perficie. El rizoma sin pelar presenta, adems, una capa
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del externa de sber marrn oscuro. Las caractersticas
sistema morfolgicas de distintas variedades y formas de jengi-
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para 6-ginge- bre provenientes de distintas reas geogrficas se espe-
rol, capsaicina y 6-shogaol son aproximadamente 0,8; cifican en la Tabla 7 del captulo de informacin general
1,0; y 1,9, respectivamente, Solucin de aptitud del Informacin Complementaria para Artculos de Origen Bo-
sistema.] tnico (2030).
Requisitos de aptitud Histologa: Un corte transversal del rizoma pelado pre-
Resolucin: No menos de 3,0 entre los picos de senta una corteza constituida por capas mltiples de
6-gingerol y capsaicina; y no menos de 1 0,0 entre los clulas parenquimticas con abundantes grnulos de al-
picos de capsaicina y 6-shogaol, Solucin de aptitud midn simples, grandes, aplanados, ovoides o en forma
del sistema de saco, de 5-15 ~tm de ancho y 30-60 m de largo,
Factores de asimetra: No ms de 2,0 para los picos con un hilio excntrico, algunos con estras transversales
de 6-gingerol, capsaicina y 6-shogaol, Solucin de ap- leves. La corteza tambin presenta numerosas clulas
titud del sistema oleorresinosas con un contenido de color amarillo o
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5%, Solu- marrn amarillento y haces vasculares colaterales disper-
cin estndar sos; una nica capa de clulas endodrmicas sin almi-
Anlisis dn; una estela central ancha constituida por clulas
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Solu- parenquimticas abundantes en almidn y clulas oleo-
cin de aptitud del sistema rresinosas similares a las de la corteza, y que contiene
Calcular la suma de las respuestas de los picos debidos haces vasculares colaterales dispersos, algunos recubier-
a gingeroles y gingerdionas, que se presentan _aproxi- tos de una vaina de fibras tabicadas no lignificadas con
madamente a los siguientes tiempos de retenc1on, re- un Jumen ancho. Adems de lo mencionado anterior-
lativos a 1,0 para capsaicina: 0,8 para 6-gingerol; mente, el rizoma sin pelar presenta una zona externa
1,5 para 8-gingerol A; 2,2 para 8-gingerol B; 2,5 par a de clulas suberosas de color marrn oscuro.
6-gingerdiol; 2,6 para 6-gingerdiona; 3,4 para 10-gin- LMITE DE SHOGAOLES
gerol y 5,2 para 8-gingerdiona. Anlisis: A partir de los cromatogramas obtenidos en la
prueba de Contenido de Gingeroles y Gingerdionas, cal-
USP 38
cular la suma de las respuestas correspondientes a los
picos de shogaoles, que se presentan a los siguientes
tiempos de retencin, relativos a 1,0 para capsaicina:
1, 9 pJr J 6 ::.hog~o!, 1,2 para 8-shogaol; y 5,8 par~
1 0-shnqrnl
Calcular el porcentae de shogaoles en la porcin
tomada:
Resultado= (r,/r.) x (C/W) x 10
r1 = suma de las respuestas de los picos de
shogaoles de la Solucin muestra
r, = respuesta del pico de capsaicina de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Capsaicina USP en la
Solucin estndar, preparada segn se indica
en la prueba de Contenido de Gingeroles y
Gingerdionas (mg/mL)
W = peso de Jengibre usado en la prueba de
Articulas de Origen Botnico, Extractos Solubles
en Alcohol (g)
Cri,terios de aceptacion~ No ms de O, 18% , Anlisis: Disolver la Muestra en 25 mL de agua y ex-
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(56,1): No ms de 2,0%,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561)
Anlisis: Recoger el filtrado en un matraz volumtrico
de 1 00 mL y diluir con alcohol a volumen. Evaporar
50 mL del filtrado a una temperatura que no exceda de
90. [NOTA~Reservar el residuo para usarlo en la
prueba de Identificacin By reservar el volumen rema-
nente del filtrado para usarlo en las pruebas de Lmite
de Shogaoles y Contenido de Gingeroles y Gingerdionas.]
Criterios de aceptacin: Se encuentra no menos de
4,5% de residuo .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Contenido de Almidn,
Mtodo 1 (561): No menos de 42%, usando el Mtodo
la de los Procedimientos Generales .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(56,1 ): No ms de 1,0%,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 8,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Determinacin de Aceite
Volgtil (561): No menos,de 1,8 mL/100 g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Solubles en Agua
(56,1 ): No menos de 1, 9,%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 2 (561): No menos de 10,0%
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo Ja (921 ): No ms de
10%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad. Almacenar
en un lugar fresco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta contenida en el artculo. El artculo est exento de
los requisitos de las Advertencias Generales con respecto a
la declaracin de embarazo y lactancia (seccin 1 0.40.50.
Etiquetado de Productos Botnicos).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Capsaicina USP
ER Mezcla de Componentes de Jengibre USP
ER Jengibre en Polvo USP
Jengibre, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de jengibre se preparan a partir de Jengibre en
Polvo y contienen no menm de 90,0% y no ms de
11 0,0% de la cantidad declarada de gingeroles, ginger-
Suplementos Dietticos /jengibre 6535
dianas y shogaoles; y no menos e.Je 90,0'Yo de la cantidad
derli1a(fa dP aceite voltil.
IDENTIFICACIN
A.
Anlisis: Rec.JuLi1 ct f.!Ulvo una cantidad dPI contenido de
Cpsulas equivalente a 5 g de jengibre. Agregar a una
cantidad equivalente a 1 g de jengibre 5 mL de cido
actico diluido que se prepara diluyendo 1 parte de
cido actico glacial con 1 parte de agua y agitar du-
rante 15 minutos. Filtrar y agregar unas pocas gotas de
oxalato de amonio SR al filtrado.
Criterios de aceptacin: Se produce no ms que una
leve turbidez.
B.
Muestra (ver Artculos de Origen Botnico (561 ), Extractos
Solubles en Alcohol, Mtodo 2): Recoger el filtrado en
un matraz volumtrico de 100 mL y diluir con alcohol a
volumen. Evaporar 50 mL del filtrado a una temperatura
que no exceda de 90". Usar 50 mg del residuo para la
prueba.
traer con dos porciones de 15 mL de ter. Combinar los
extractos etreos y evaporar en una cpsula de porce-
lana. Agregar al residuo 5 mL de solucin de cido sul-
frico (7,5 en 10,0) y 5 mg de vainillina. Dejar en re-
poso durante 15 minutos y agregar un volumen igual
de agua.
Criterios de aceptacin: La solucin se torna de color
azul celeste.
C. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: Proceder segn se indica en Solu-
cin muestra, excepto que se debe usar 0,2 g de ER
Jengibre en Polvo USP.
Solucin estndar B: Usar la Solucin de aptitud del sis-
tema, preparada segn se indica en la prueba de Conte-
nido de Gingeroles, Gingerdionas y Shogaoles.
Solucin muestra: Reducir a polvo una cantidad del
contenido de Cpsulas equivalente a 5 g de jengibre.
Transferir una cantidad equivalente a 0,2 g de jengibre
a un tubo de ensayo, agregar 5 mL de metano!, agitar
durante 30 minutos y centrifugar. Aplicar el sobrena-
dante a la placa.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,50 mm
Volumen de aplicacin: 20 .L para la Solucin estndar
A y para la Solucin muestra; 40 L para la Solucin es-
tndar B
Fase mvil: ter y hexsrnos (7:3)
Solucin reveladora: Acido sulfrico al 1 0% en alcohol
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Proceder segn se indica en el captulo. Observar la
placa bajo luz UV a 254 nm. Rociar la placa con Solu-
cin reveladora, calentar a 1 00"-1 05 durante 1 O mi-
nutos y observar bajo luz diurna.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una mancha debida a gingeroles
que ocurre a un valor Rr de 0,2; y se puede presentar
una mancha de shogaoles a un valor Rr de 0,4, corres-
pondiente a la presente en el cromatograma de la Solu-
cin estndar B. [NOTA~Los cromatogramas de la Solu-
cin estndar A y de la Solucin muestra pueden
presentar otras manchas en la regin superior y en el
origen de la placa.]
CONTENIDO
CONTENIDO DE GINGEROLES, GINGERDIONAS V SHOGAOLES
Solucin A: Acetonitrilo, cido fosfrico diluido (1 en
l 000) y metanol (55:44: l)
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Usar la Solucin A durante no menos de
siete veLes el tiempo de retencin de capsaicina.
6536 Jengibre / Suplernentos Dietticos
Lavado de la columna: Despus de cada corrida cro-
matoqrfica, lavar la columnd ~egn ~e indica en la
Tabla 7.
Tabla 1
-- -----~---
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%)
o 100 o Wu
2 o 100
12 o 100
14 100 o gingerdionas y shogaoles (mg/Cpsula)
29 -- l.QQ_ o Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
Solucin estndar: O, 1 mg/ml de ER Capsaicina USP
en metano!
Solucin de aptitud del sistema: Reconstituir el conte-
nido de 1 vial de ER Mezcla de Componentes de Jengi-
bre USP en 1 ml de la Solucin estndar.
Solucin muestra: Mezclar y reducir a polvo fino el
contenido de no menos de 20 Cpsulas, y transferir una
cantidad equivalente a 2,0 g de jengibre reducido a
polvo a un matraz Erlenmeyer con tapn de vidrio.
Agregar 50 ml de alcohol, tapar el matraz y macerar
durante 24 horas, agitando frecuentemente durante las
primeras 8 horas, y luego dejando en reposo durante
16 horas. Filtrar y usar el filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 282 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para 6-ginge-
rol, capsaicina y 6-shogaol son aproximadamente 0,8;
1,0 y 1,9, respectivamente, Solucin de aptitud del
sistema.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 3,0 entre los picos de
6-gingerol y capsaicina; y no menos de 10,0 entre los
picos de capsaicina y 6-shogaol, Solucin de aptitud
del sistema
Factores de asimetra: No ms de 2,0 para los picos
de 6-gingerol, capsaicina y 6-shogaol, Solucin de ap-
titud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% para
el pico de capsaicina en inyecciones repetidas, Solu-
cion estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Solu-
cin de aptitud del sistema
Calcular la suma de las respuestas de los picos debidos
a gingeroles y gingerdionas, que se presentan aproxi-
madamente a los siguientes tiempos de retencion, re-
lativos a 1,0 para capsaicina: 0,8 para 6-gingerol;
1,5 para 8-gingerol A; 2,2 para 8-gingerol B; 2,5 para
6-gingerdiol; 2,6 para 6-gingerdiona; 3,4 para 10-gin-
gerol y 5,2 para 8-gingerdiona.
Calcular la suma de las respuestas de los picos debidos
a shogaoles, que se presentan aproximadamente a los
siguientes tiempos de retencin, relativos a 1,0 para
capsaicina: 1, 9 para 6-shogaol; 4,2 para 8-shogaol y
5,8 para 10-shogaol.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de gin-
geroles, gingerdionas y shogaoles en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado= (r,/r1) x C1 x (V/Wu) x (A1h/L) x 100
USP 38
r, = suma de las respuestas de los picos de
gingeroles, gingerdionas y shogaoles de la
Solucin muestra
r, = respuesta del pico de capsaicina de !a Solucin
estndar
C = concentracin de ER Capsa1c1na USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
V = volumen final de la Solucin muestra (ml)
= peso de la porcin de Cpsulas tomada (mg)
Awc = peso promedio del contenido de las Cpsulas
(mg)
L = cantidad declarada de gingeroles,
declarada de gingeroles, gingerdionas y shogaoles
Calcular la cantidad (Ca), en mg, de 6-gingerol en cada
Cpsula tomada:
Ca= (ru/rs) x (C/W) x Vx A
ru = respuesta del pico de 6-gingerol de la Solucin
muestra
r5 = respuesta del pico de capsaicina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Capsaicina USP de la
Solucin estndar (mg/ml)
W = peso de jengibre reducido a polvo usado en la
preparacin de la Solucin muestra (g)
V = volumen final de la Solucin muestra (ml)
A = peso promedio de llenado de las Cpsulas (g)
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Determinacin de Aceite
Voltil (561)
Muestra: Reducir a polvo fino una cantidad de Cpsu-
las, equivalente a 100 g de jengibre en polvo.
Criterios de aceptacin: No menos de 1,4 ml/100 g
(no menos de 90,0% de la cantidad declarada de aceite
voltil)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos ~e Disolucin.
Medio: Acido clorhdrico O, 1 N; 500 ml
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
[NOTA-Colocar en cada vaso de disolucin un nmero
de Cpsulas equivalente a 20 mg de las cantidades de-
claradas de gingeroles, gingerdionas y shogaoles.]
Solucin A, Solucin B, Fase mvil, Lavado de la co-
lumna, Solucin de aptitud del sistema, Sistema cro-
matogrfico y Aptitud del sistema: Proceder segn
se indica en la prueba de Contenido de Cingeroles, Cin-
gerdionas y Shogaoles.
Solucin madre del estndar: Usar la Solucin estndar
preparada en la prueba de Contenido de Cingeroles, Cin-
gerdionas y Shogaoles.
Solucin estndar: 0,025 mg/ml de ER Capsaicina
USP, a partir de Solucin madre del estndar, en Medio
Solucin muestra: Transferir una alcuota de solucin
de cada vaso de disolucin a un vial adecuado. Dejar
en reposo durante 5 minutos de manera que el polvo
sedimente en la suspensin o centrifugar hasta obtener
un sobrenadante transparente. Pasar a travs de un fil-
tro de membrana con un tamao de poro de 0,45 m
o menor.
Anlisis
Muestras: Solucin estandar y Solucin muestra
[NOTA-Dejar que la Solucin muestra eluya durante no
menos de tres veces el tiempo de retencin de
capsaicina.]
Calcular la cantidad disuelta, C, en mg, de 6-gingerol
de cada Cpsula tomada:
C = (ru/rs) x (C/N) x V
USP 38 Suplementm Dieteticos /jengibre 6537

ru = respuesta del pico de 6-gingerol de la Solucion Solucin estndar B: Usar la Solucin de aptitud del sis-
muestra tema, preparada seqn se in_dica en la prueba de Conte-
r, = respuesta del pico de capsaicina de la Solucin nido de Gingeroles y Gingerd1onas. .
estndar Solucin muestra: Transferir 0,2 g de Jengibre en Polvo
( concentracin de ER Capsaicina USP en la
= a un tubo de ensayo, agregar ) ml de metanoi, agitar
)oluc1on estndar (mg/mL) durante 30 minuto'> y centrifugar ..Aplicar el sobrena-
N = nmero de Cpsulas en cada vaso dante a la placa.
V = volumen de Medio; 500 mL Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
Calcular el porcentaje de la cantidad relativa disuelta matografa de 0,50 mm .,
de 6-gingerol: Volumen de aplicacin: 20 L para la Solurn:m mu,estra
y la Solucin estndar A; 40 L para la Soluoon estandar
Resultado = (G/Go) x 100 B ,
Fase mvil: Eter y hex9nos (7:3)
Go = contenido de 6-gingerol en cada Cpsula, Solucin reveladora: Acido sulfrico al 10% en alcohol
segn se determina en la prueba de Anlisis
Contenido de Gingeroles, Gingerdionas y Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Shogaoles (mg) Solucin muestra
Tolerancias: No menos de 60% del contenido de Proceder segn se indica en el captulo. Observar la
6-gingerol (Ci 1H2604) placa bajo luz UV a 254 nm. Rociar la placa con So(u-
VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos. cin reveladora, calentar a 100-105 durante 1 O mi-
nutos y examinar bajo luz diurna.
REQUISITOS ADICIONALES Criterios de aceptacin: El cromatogr~ma de. la Solu-
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien cin muestra presenta una mancha debida a g1ngeroles
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada. que ocurre a un valor RF de 0,2. Se puede presentar
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
una mancha de shogaoles a un valor RF de 0,4, corres-
latn y, despus de la denominaci?n oficial, I? parte de la pondiente a la presente en el cromatograma de la Solu-
planta de la que se prepar e! articulo. L~ et1qu~ta tam- cin estndar B. [NOTA-Los cromatogramas de la Solu-
bin indica el contenido de gingeroles,. g1ngerd1o~as y , cin muestra y de la Solucin estndar A pueden
shogaoles, en mg/Cpsula, y el contenido de aceite ':'ola- presentar otras manchas en la regin superior y en el
til, en L/Cpsula. El artculo est exento de los requ1s1tos origen de la placa.]
de las Advertencias Generales con respecto a la declara-
cin de embarazo y lactancia (seccin 10.40.50. Etique- COMPOSICIN
tado de Productos Botnicos). CONTENIDO DE GINGEROLES Y GINGERDIONAS
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11) Solucin A: Acetonitrilo, cido fosfrico diluido (1 en
ER Capsaicina USP 1000) y metanol (55:44:1)
ER Mezcla de Componentes de Jengibre USP Solucin B: Acetonitrilo
ER Jengibre en Polvo USP Fase mvil: Usar la Solucin A durante no menos de
siete veces el tiempo de retencin de capsaicina.
Lavado de la columna: Despus de cada corrida cro-
matogrfica, lavar la columna segn se indica en la
Tabla 1.
Jengibre en Polvo
Tabla 1
DEFINICIN
El Jengibre en Polvo es jengibre reducido a polvo fino o Tiempo Solucin A Solucin B
muy fino. (min) (O/o) (%)
o 100 o
IDENTIFICACIN 2 o 100
A. 12 o 100
Anlisis: Agregar 5 mL de ~ci.do ac~ti.co diluido, prepa-
rado diluyendo 1 parte de ac1do acet1co glacial con 14 100 o
1 parte de agua, a 1 g de Jengibre en Polvo y agitar 29 --- 100 o
durante 15 minutos. Filtrar y agregar unas pocas gotas
de oxalato de amonio SR al filtrado. Solucin estndar: O, l mg/mL de ER Capsaicina USP
Criterios de aceptacin: Se produce no ms que una en metanol
leve turbidez. Solucin de Ftitud del sistema: Reconstituir el cont~
B.
nido de 1 via de ER Mezcla de Componentes de Jengi-
Muestra: 50 mg del residuo obtenido en la prueba de bre USP en 1 mL de la Solucin estndar.
Artculos de Origen Botnico, Extractos Solubles en Alcohol Solucin muestra: Usar el filtrado reservado de la
Anlisis: Disolver la Muestra en 25 mL de agua y ex- prueba de Artculos de Origen Botnico, Extractos Solubles
traer esta solucin con dos porciones de 15 mL de ter. en Alcohol.
Combinar los extractos etreos y evaporar en una cp- Sistema cromato9rfico
sula de porcelana. Agregar 5 mL de ?.l~cin de ~cido (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
sulfrico (7,5 en l 0,0) y 5 mg de va1nillina al residuo. Modo: HPLC
Dejar en reposo durante 1 5 minutos y agregar un volu- Detector: UV 282 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
men igual de agua. . ., Velocidad de flujo: 1 ml/min
Criterios de aceptacion: La soluc1on se torna azul
celeste. , Volumen de inyeccin: 25 L
C. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR (ROMATOGRAFIA EN CAPA
Aptitud del sistema
DELGADA
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
Solucin estndar A: Proceder seqn se indica en la sistema
Solucin muestra, excepto que se deben usar 0,2 g de [f'JOTA-Los tiempo~ dP rPtencin relativos para 6-ginge-
ER Jengibre en Polvo USP. rol, capsaicina y 6-shogaol son aproximadamente 0,8;
1,0 y 1, 9, respectivamente, Solucin de aptitud del
si5tPma.]
6538 jengibre /Suplementos Dietticos
Requisitos de aptitud
Resolucin: ~~o menos Je 3,0 entrP lm ricm de
6-gingerol y capsaicina; y no menos de 1 0,0 entre los
picos de capsaicina y 6-<;hogaol. Solucin dP aptitud
del sistema
Factores de asimetra: No mas de 2,0 ara los icos
de 6-gingerol, capsaicina y 6-shogaol, Solucin de ap-
titud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Solu-
cin de aptitud del sistema
Calcular la suma de las respuestas de los picos debidos
a gingeroles y gingerdionas, que se presentan aproxi-
madamente a los siguientes tiempos de retencion, re-
lativos a 1,0 para capsaicina: 0,8 para 6-gingerol;
1,5 para 8-gingerol A; 2,2 para 8-gingerol B; 2,5 para
6-gingerdiol; 2,6 para 6-gingerdiona; 3,4 para 10-gin-
gerol y 5,2 para 8-gingerdiona.
Calcular el porcentaje de gingeroles y gingerdionas en
la muestra tomada:
Resultado = (rr!r1) x (C/W) x 1 O
rr = suma de las respuestas de los picos de
gingeroles y gingerdionas de la Solucin
muestra
rs = respuesta del pico de capsaicina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Capsaicina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
W = peso de jengibre en Polvo usado en la prueba
de Artculos de Origen Botnico, Extractos
Solubles en Alcohol (g)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,8%
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS (231 ): ,No ms de 20 ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 1 0 ufc/g; el recuento total
5
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 3 ufc/g; el recuento de bacterias Gram negati-
vas tolerantes a la bilis no excede d~ 10 3 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Al microscopio, el jengibre
en Polvo muestra principalmente grnulos de almidn y
las clulas parenquimticas que los contienen; grnulos
de almidn simples, grandes, aplanados, ovoides o en
forma de saco, de 5-15 m de ancho y 30-60 m de
largo, con un hilio excntrico, alc;unos con estras trans-
versales leves; clulas parenquimaticas que contienen sus-
tancias resinosas de color marrn amarillento a marrn
oscuro; grupos de fibras tabicadas grandes, no lignifica-
das, de paredes finas y de lumen amplio; porciones de
fibras tabicadas con vasos unidos; vasos grandes con en-
grosamiento anillado, espiralado o rcticulado, a menudo
acompaados por clulas parenquimticas con contenido
marron; oleorresina en fragmentos o gotitas, que se tien
con yodo SR y yoduro de potasio SR; y rara vez, frag-
mentos de tejido suberoso marrn, normalmente obser-
vados en la superficie. No se encuentran clulas esc/eren-
guimticas, tricomas ni oxalato de calcio.
LIMITE DE SHOGAOLES
Anlisis: A partir de los cromatogramas obtenidos en la
prueba de Contenido de Gingeroles y Gingerdionas, cal-
cular la suma de las respuestas de los picos debidos a
shogaoles, que se presentan a los siguientes tiempos de
USP 38
relencion, relativos a 1,0 para capsa1cina: 1, 9 para
6-shogJol; 4,2 para 8-shogaol y 5,8 para 10-slioyaol.
Calcular el porcentaje de shogaoles en la porcin de
jengibre e:: Pc!vo ton:JdJ.
Resuitado = (r1/ r1) x ( C/ W) x l O
rr = suma de las respuestas de los picos de
shogaoles de la Solucin muestra
r, = respuesta del pico de capsaicina de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Capsaicina USP en la
Solucin estndar, preparada segn se indica
en la prueba de Contenido de Gingeroles y
Gingerdionas (mg/ml)
W = peso de jengibre en Polvo usado en la prueba
de Artculos de Origen Botnico, Extractos
Solubles en Alcohol (g)
Cri,terios de aceptacin:, No mas de O, 18% _
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(56)): No ms de 2,0%,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561)
Anlisis: Recoger el filtrado en un matraz volumtrico
de 1 00 ml y diluir con alcohol a volumen. Evaporar
50 ml del filtrado a una temperatura que no exceda de
90.
Criterios de aceptacin: Se encuentra no menos de
4,5% de residuo. [NOTA-Reservar el residuo para usarlo
en la prueba de Identificacin By reservar el volumen
remanente del filtrado para usarlo en las pruebas de
Lmite de Shogaoles y Contenido de Gingeroles y
Gingerdionas.]
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Contenido de Almidn,
Mtodo 1 (561): No menos de 42%, usando el Mtodo
la de los Procedimientos Generales .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 8,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Determinacin de Aceite
Vol<jtil (561): No menos,de 1,8 ml/100 g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Solubles en Agua
(56) ): No menos de 1, 9_%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 2 (561): No menos de 10,0%
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo la (921 ): No ms de
10%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y de la humedad, y almace-
nar en un lugar fresco .
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el articulo. El artculo est
exento de los requisitos de las Advertencias Generales con
respecto a la declaracin de embarazo y lactancia (sec-
ci,n 1 0.40.50. Etiquetado de Productos Botnicos).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Capsaicina USP
ER Mezcla de Componentes de jengibre USP
ER jengibre en Polvo USP
Jengibre, Tintura
DEFINICIN
Preparar la Tintura de jengibre segun se indica a
continuacin.
en ibre - - - - - - - t - - - -_ _2_0_0_g~.=:=J
Una mezcla de Alcohol y Agud (7:3), 1
1 cantidad suf1uente P-"- QQtener 1 000 ml 1
usr 38 Suplementos Dietticos / lenqibre 6539

PrPrilril lil Tintura segun se indica en Extractos Botnicos Modo: HPLC

(565), Tinlwm, P1Uu:; de Maceracin. Contiene no menos Detector: UV 282 nm
de O, 1 0% de gingerole,. Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mi /min
IDENTIFICACIN Volumen de inyeccin: 25 L
PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA Aptitud del sistema
DELGADA Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
Solucin estndar A: Transferir 0,2 g de ER jengibre en sistema
Polvo USP a un tubo de ensayo, agregar 5 mL de meta- [NOTA-Los tiempos de retencin relativos para 6-ginge-
no!, agitar durante 30 minutos y centrifugar. Aplicar el rol, capsaicina y 6-shogaol son aproximadamente 0,8;
sobrenadante a la placa. 1,0 y 1, 9, respectivamente, Solucin de aptitud del
Solucin estndar B: Usar la Solucin de aptitud del sis- sistema.]
tema, preparada segn se indica en la prueba de Conte- Requisitos de aptitud
nido de Gingeroles. Resolucin: No menos de 3,0 entre los picos de
Solucin muestra: Tintura 6-gingerol y capsaicina; y no menos de 1 0,0 entre los
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro- picos de capsaicina y 6-shogaol, Solucin de aptitud
matogratia de 0,50 mm del sistema
Volumen de aplicacin: 20 L para la Solucin muestra Factores de asimetra: No ms de 2,0 para los picos
y la Solucin estndar A; 40 p L para la Solucin estndar de 6-gingerol, capsaicina y 6-shogaol, Solucin de ap-
B titud del sistema
Fase mvil: ter etlico,y hexanos (7:3) Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5%, Solu-
Solucin reveladora: Acido sulfrico al 1 0% en alcohol cin estndar
Anlisis Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Solu-
Solucin muestra cin de aptitud del sistema
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la Calcular el porcentaje de gingeroles en la porcin de
fase mvil haya recorrido aproximadamente tres cuar- Tintura tomada:
tos de la placa. Retirar la placa de la cmara y secar.
Observar la placa bajo luz UV a 254 nm. Rociar la Resultado = (ru/ rs) x Cs x O, 1
placa con Solucin reveladora, calentar a 100- l 05
durante 1 O minutos y observar bajo luz diurna. ru = suma de las respuestas de los picos de
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- gingeroles de la Solucin muestra
cin muestra presenta una mancha debida a gingeroles rs = respuesta del pico de capsaicina de la Solucin
que ocurre a un valor Rf de 0,2. Se puede presentar estndar
una mancha de shogaoles a un valor RF de 0,4, corres- Cs = concentracin de ER Capsaicina USP en la
pondiente a la presente en el cromatograma de la Solu- Solucin estndar (mg/mL)
cin estndar B. [NOTA-Los cromatogramas de la Solu- Criterios de aceptacin: No menos de O, 1 0%
cin muestra y de la Solucin estndar A pueden
presentar otras manchas en la regin superior y en el OTROS COMPONENTES
origen de la placa.] DETERMINACIN DE ALCOHOL, Mtodo I (611): No menos
de 90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad declarada
CONTENIDO de C2HsOH
CONTENIDO DE GINGEROLES
Solucin A: Acetonitrilo, cido fosfrico diluido (1 en CONTAMINANTES
1000) y metanol (55:44:1) ARSNICO, Mtodo 11 (211 ): No ms de 1 ppm
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Usar la Solucin A durante no menos de Eliminar lo siguiente:
siete veces el tiempo de retencin de capsaicina.
Lavado de la columna: Despus de cada corrida cro- METALES PESADOS, Mtodo 111 (231 ): No ms de 1 o g/
matogrfica, lavar la columna segn se indica en la
Tabla 7. ge (9ficial 01-dic-2015)
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
Tabla 1 requisitos.
----------------------------~

Tiempo Solucin A Solucin B PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-

min lo lo tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
'-------~'------- 100 o levaduras no excede de 1 0' ufc/g.
______2_____ o 100
12
----------------- o
-----+----~--~------<
100 PRUEBAS ESPECFICAS
- - - - - - - -14
------- 100 o LMITE DE 6-SHOGAOL
29 _lOQ____ _ ___O_ Anlisis: Usando los cromatogramas de la prueba de
Contenido de Gingeroles, calcular el porcentaje de 6-sho-
Solucin estndar: O, 1 mg/mL de ER Capsaicina USP gaol en la porcin de Tintura tomada:
en metanol
Solucin muestra: Tintura Resultado = (r,,/ r1) X e X O, 1
Solucin de aptitud del sistema: Reconstituir el conte-
nido de 1 vial de ER Mezcla de Componentes de jengi- ru = respuesta del pico de 6-shogaol de la Solucin
bre USP en 1 mL de la Solucin estndar. muestra
Sistema cromato9rfico r; = respuesta del pico de capsaicina de la Solucin
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) estndar
c, concentracin de ER Capsaicina USP en la
=
Solucin estandar (mg/ml)
Criterios de aceptacin: No ms de 0,034%
LMITE DE RESIDUOS No VOLTILES: Evaporar una porcin
de 1O mL en una cpsula de platino o porcelana tarada y
6540 jengibre I )u1lementos Dietticos lJSP 18

secar a l 05 durante 6 horas: el peso del residuo es Calcular. el rorcent9je de rea de ca_da cido graso
80~120 mg. , como esteres melll1cos en la porcion de Aceite de Kril
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ): tomada:
Nn mi5 cir 0,5%
PESO ESPECFICO (841): 0,90-0,95 Resultado ~ (U r;) x 1 00
OTROS _REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos
Botamcos (565), Envasado y Almacenamiento. rA = rea del pico de cada cido graso individual
de la Solucin muestra
REQUISITOS ADICIONALES rR = suma de las reas de todos los picos, excepto
ETIQUETADO: Etiquetar indicando que solo debe utilizarse los picos del disolvente y butil
p_a_ra fines de fabricacin~ ~dems de I~ informacin espe- hidroxitolueno, de la Solucin muestra
c1f1cada en Extractos Botamcos (565), Tinturas, Etiquetado. Criterios de aceptacin: Los cidos grasos obtenidos
Este artculo est exento de los requisitos de las Adverten- de la Solucin muestra cumplen con los requisitos de
ctas Generales con respecto a la declaracin de embarazo lmite de la Tabla 7.
y lactancia (seccin 1 0.40.50. Etiquetado de Productos
Bot,nicos). Tabla 1
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Capsaicina USP Lmite Lmite
ER MeLcla de Componentes de jengibre USP Anotacin Inferior Superior
ER jengibre en Polvo USP cido Graso Abreviada frea %) Crea %)
cidos grasos monoin
saturados ----- - ---------~--

cido oalmitoleico .. 16:1 n-7 25 90

cido cis-vaccnico 18:1 n-7 4 7 70
Aceite de Kril cido oleico 18:1 n-9 70 14 5
cido eicosnico 20:1 n-9 o1 12
DEFINICIN 22:1 n-9 00 09
cido ercico
El Aceite de Kril es el aceite fijo que se extrae de la biomasa
del kril antrtico (Euphausia superba Dana) usando disol- cidos grasos poliinsa
ven~es org~icos d.e grado alimenticio apropiados. El turados
Aceite de Knl contiene no menos de 28% (p/p) y no ms cido linoleico 18:2 n-6 14 30
de 52% (p/p) de fosfolpidos totales, de los cuales 60% a cido a-linolnico 18:3 n-3 05 35
90~ ~s fo~fatidilcolina. ~ontiene no menos de 10% (p/p) cido morctico 18:4 n-3 18 72
de ac1do e1cosapentaeno1co (EPA) y no menos de 5 0% cido eicosaoentaenoico 20:5 n-3 14 o 22 1
(p/p) de cido docosahexaenoico (DHA) en forma de fos- cido docosaoentaenoico 22:5 n-3 00 07
folpidos: Tambin contiene no menos de 0,01 % de
astaxant1na. cido docosahexaenoico 22:6 n-3 75 13 2

IDENTIFICACIN 8. PERFIL DE FOSFOLPIDOS

A. PERFIL DE CIDOS GRASOS
Solucin antioxidante, Solucin de aptitud del sis-
tema 1 y Sistema cromatogrfico: Proceder segn se
1nd1ca en. Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin y
Perfil de Acidos Grasos Omega-3.
Solucin estndar: Preparar segn se indica en Solucin
de Prueba 1 en ,Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determina-
cin y Perfil de Acidos Grasos Omega-3, excepto usar
250 mg de ER Aceite de Kril USP.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
estndar, excepto usar Aceite de Kril en lugar de ER
Aceite de Kril USP.
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema 1 y Solucin
estndar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido de la Solucin estndar es similar al croma-
tograma de referencia provisto con el lote de ER
Aceite de Kril USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de
ole~to de metilo y cis-vaccinato de metilo, Solucin
estandar
Porcentajes tericos de rea: Cumple con los requi-
sitos para Solucin de aptitud del sistema 7.
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Identificar los tiempos de retencin de los steres metli-
cos de los cidos grasos pertinentes en la Solucin
muestra, comparando el cromatograma de la Solucin
muestra con el de la Solucin estndar y el cromato-
grama de referencia USP.
Solucin A, Estndar de forma del pico ( 1 H), Estndar
de sensibilidad ( 1H), Estndar de sensibilidad (31P),
Estndar interno, Solucin muestra, Solucin estn-
dar, Condiciones instrumentales, Aptitud del sistema
y Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de
Contenido de Fosfolpidos Totales en Composicin.
Criterios de acep~acin: .La Solucin n:u_estra contiene
todos los fosfol1p1dos siguientes: fosfat1d1lcolina
[_60%-90% (p/p) del contenido total de fosfolpidos],
l1sofosfat1dilcolina (como una mezcla de 1-lisofosfatidil-
colina y 2-lisofosfatidilcolina) y fosfatidiletanolamina.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE EPA Y DHA
Solucin estndar 1 a, Solucin estndar 1 b, Solucin
estndar 2a, Solucin estndar 2b, Solucin de apti-
tud del sistema 1 y Sistema cromatogrfico: Proce-
der s_eg_r; se indica en ,Gmsas y Aceites Fijos (401 ), De-
termtnacton y Perfil de Ac1dos Grasos Omega-3.
Solu~in de prueba 1: Preparar segn se indica en So-
lucton de Prueba 7 el) Grasas y Aceites Fijos (401 ), Deter-
minacin y Perfil de Acidos Grasos Omega-3, excepto
usar 250 mg de Aceite de Kril.
Solu~in de prueba 2: Preparar segn se indica en So-
luc1on de Prueba 2 el) Grasas y Aceites Fijos (401 ), Deter-
minacin y Perfil de Acidos Grasos Omcga-3, excepto
usar 250 mg de Aceite de Kril.
Anlisis: Proceder segn se indica en Anlisis (para tri-
glicridos) e,n Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin
y Perfil de Acidos Grasos Omega-3.
Criterios de aceptacin: No menos de 10,0% (p/p) de
EPA y no menos d~ 5,0/ci (p/p) de DHA
CONTENIDO DE FOSFOLIPIDOS TOTALES
(Ver Espectroscopa de Resonancia Magntica Nuclear
(761 ), Anal1m de RMN Cualitativo y Cuantitativo).
USP 38
[NOJA-Todos los disolventes deuterados usados en este
mtodo deben tener una pureza atomica de no menos
de 99,8'Vo de D. Cuando se use agua en este mtodo,
>tJ debe >cr de ouficiente calidad para asegurM la at1-
sencia rle tra1as de metales u otros contaminantes que
pudieran afectar el anlisis.]
Solucin A: EDTA 0,2 M, ajustada a un pH de 7,2-7,5
con una solucin de carbonato de cesio 1 M. Registrar
el pH final y la cantidad de solucin de carbonato de
cesio 1 M necesaria para obtener el pH deseado.
[NOTA-Usar carbonato de cesio de un grado suficiente
para el anlisis de trazas de metales.]
Estndar de forma del pico (1 H): Cloroformo al 1% en
acetona-do
Estndar de sensibilidad (1H): Etilbenceno al O, 1 % en
cloroformo-d
Estndar de sensibilidad ( 31 P): Trifenilfosfato 0,0485 M
en acetona-d6
Estndar interno: Usar un estndar analtico de trifenil-
fosfato adecuado para RMN con una pureza de no me-
nos de 99,0%.
Solucin muestra: [NOTA-Se dispone de disolventes
para RMN que contienen tetrametilsilano (TMS).
Cuando los disolventes usados no contienen TMS, ste
debe agregarse a la Solucin muestra en una concentra-
cin aproximada de 0,05% (v/v) para su uso como re-
ferencia en la escala del desplazamiento qumico.]
Transferir 300-350 mg de Aceite de Kril a un vial de
vidrio de 5 mL que se pueda sellar. Agregar 25,0 mg de
Estndar interno al vial. Agregar al vial 1 mL de cloro-
formo deuterado (cloroformo-d) y de metano! deute-
rado (metanol-d 4 ) de un grado adecuado para anlisis
de RMN para disolver la muestra. Una vez que se com-
plete la disolucin, a9regar 1 mL de Solucin A, sellar el
vial y agitar la solucion durante 10-20 minutos, luego
centrifugar el contenido del vial. Transferir la fase org-
nica inferior a un tubo para RMN apropiado. Es crtico
recoger toda la fase orgnica y transferirla al tubo para
RMN. Puede que sea inevitable transferir tambin pe-
queas porciones de la fase acuosa al recoger la fase
orgnica en el tubo para RMN. Esta es una prctica
aceptable, siempre que la fase acuosa permanezca com-
pletamente separada y sobre la fase orgnica en el tubo
para RMN. La cantidad total de fase acuosa debe estar
por encima de la bobina de radiofrecuencia (RF) de la
sonda (fuera del rea de anlisis del tubo). Si la fase
orgnica contuviera materiales sin disolver, stos deben
permanecer suspendidos en la interfase orgnica acuosa
y fuera del rea de anlisis del tubo. La fase orgnica
debe estar libre de burbujas y materiales suspendidos
que puedan interferir con la adquisicin de datos para
RMN.
Solucin estndar: Preparar segn se indica en Solucin
muestra, usando 300-350 mg de ER Aceite de Kril USP
en lugar de la muestra.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroscopia de Resonancia Magntica Nuclear
(761 ).)
Fuerza del campo magntico: No menos de
300 MHz para la frecuencia de 1 H
Sonda: Observar directamente una sonda capaz de
ajustarse a la frecuenciJ de resonancia de 31 P (que de-
pende de la fuerza del campo magntico especfico
usado)
Calificacin de desempeo del instrumento
[NOTA---La sensibilidad y la forma del pico deben anali-
zarse en el intervalo de tiempo especificado por el fa-
bricante del instrumento usado. Este mtodo requiere
realizar estas pruebas mensualmente como mnimo,
pero se pueden realizar ms a menudo, segn se re-
quiera. La resolucin debe analizarse durante cada
anlisis y documenU1rse como parte de los resultados
analticos.]
Prueba de la forma del pico en modalidad 1 H:
Usando el Estndar de forma del pico (1 H) y el proto-
Suplementos Dietticos / Kril 6541
colo recomendado por el fabricante del instrumento,
el instrumento debe alcarJLar las especificaciones de
la forma del pico para la sonda que se est usando,
semn lo requiera el fabricante del instrumento.
[NOTA- - El fabricante del instrumento puede requerir
recomendar una solucin estndar diferente; cloro-
formo al 1 % en acetona-do es la ms comnmente
usada.]
Prueba de sensibilidad 1 H: Usando el Estndar de
sensibilidad (i H) y el protocolo recomendado por el
fabricante del instrumento, el instrumento debe al-
canzar las especificaciones de sensibilidad requeridas
por el fabricante del instrumento. [NOTA-El fabri-
cante del instrumento puede requerir o recomendar
una solucin estndar diferente; etilbenceno al O, 1%
en cloroformo-d es la ms comnmente usada.]
Prueba de sensibilidad 31 P: Usando el Estndar de
sensibilidad (1 1P) y el protocolo recomendado por el
fabricante del instrumento, el instrumento debe al-
canzar las especificaciones de sensibilidad requeridas
por el fabricante del instrumento. [NOTA-El fabri-
cante del instrumento puede requerir o recomendar
una solucin estndar diferente; trifenilfosfato 0,0485
M en acetona-d6 es la ms comnmente usada.]
Prueba de resolucin en modalidad 1 H: La resolu-
cin se demuestra mediante la capacidad de detectar
las dos seales satelitales de 29 Si del TMS. Las seales
satelitales deben resolverse a partir de la seal del
TMS en el espectro con un factor de ensanchamiento
de la lnea de no ms de 0,5 ppm.
Prueba de resolucin en modalidad 31 P: La resolu-
cin se demuestra usando el pico de ter de fosfati-
dilcolina y el pico de fosfatidilcolina. La separacin de
estos picos (con un factor de ensanchamiento de la
lnea de 1,0) debe demostrarse, segn se indica a
continuacin. Usando la lnea base como referencia,
determinar la altura total del pico de ter de fosfati-
dilcolina y trazar una lnea a 30% de la altura total
del pico (intensidad). El pico de ter de fosfatidilco-
lina y el pico de fosfatidilcolina cercano deben resol-
verse por completo en un punto que sea no ms de
30% de la altura del pico de ter de fosfatidilcolina.
Recoleccin de datos: Usar los parmetros especifica-
dos en la Tabla 2. Usar pulsos de 90 grados y calibrar
los pulsos antes de usar de acuerdo con las recomen-
daciones provistas por el fabricante del instrumento.
Tabla 2
Medicin Medicin
Cuantitativa Cualitativa
Parmetro de RMN - "P de RMN - 1 H
H desaco lado de
1 ll P Pulso sim le 'H
50 ppm (25 ppm a 20 ppm (-3 ppm a
Ancho es ectral 25 m 17 m
Posicionami2nto del Centro del ancho es- Centro del ancho
T~:~~;~;e;pera ~
pE'._c_t ral, _Q QP_ll_l espectral, 7 m
ara relaacin 1 __l_-5 se undos
Tiempo de cidcuisi--
c1on 1-6 se undos
Suma del tiempo de
espera para relaja-
cin y del tiempo Nn nwnn' rlP 1' No menos de 15
de ad uisicin se undm
f---~~~~~---+--~--------+--~~-------1
se undos
No menos de 64k No menos de 64k
Tamano del conjunto (32k con completa- (32k con comple-
de datos do de cerm tado de ceros
[NOTA--EI tiempo de adquisicin depende de la fuerza
del campo y del dominio del tiempo. Usando un ins-
trumento de 300 MHL se deben adquirir no menos de
51 2 barridos.]
6542 Kril / Suplernt>ntos Dietticos
Aptitud del sistema: En lils condiciones descritas en Re-
coleccin de datos, la sel 1al Je Rvli'\J "P rle t rifenilfosfato
0
debe observarse a -1 7,80 ppm y el espectro de RMN 1
H debe referenciarse con la sen al de H de TMS
1 ((HltCn!dO de bifen!C.S poJjcJorJdGJ (rCB, fJO SUS sigla~
(O ppm) para todos los espectros adquiridos en el Anli-
sis. Pdr d cin<llisis cuantitativos, debe adquirirse un n-
mero suficiente de barridos, de forma que la relacin
senal-ruido para la sen_al de fosfatidilcolina en el espec-
tro de 31 P de la Solucin muestra adquirido en el Anlisis
sea no menos de 2000.
Anlisis: Adquirir los datos descritos en Recoleccin de
datos. Adquirir, como mnimo, el espectro de 1 H (huella
dactilar) de la Solucin muestra y la Solucin estndar as
como el espectro cuantitativo de 11 P de la Solucin
muestra y la Solucin estndar. Registrar los espectros
resul_tantes y realizar la integracin manualmente o por
medios automatizados en el espectro cuantitativo de
RMN de 31 P de la Solucin muestra. La integracin de
los picos contenidos en el espectro de la Solucin mues-
tra debe realizarse de forma que el conjunto completo
de los picos de fosfolpidos (segn se identificaron por
comparacin con el espectro de la Solucin estndar y
su espectro de referencia) se incluya en la integracin.
La regin de integracin para cada seal debe exten-
derse 0,05 ppm en ambos lados de la seal de 31 P.
f
Cuantificar los fosfolpidos totales resentes, el conte-
nido de ter de fosfatidilcolina y e contenido de fosfati-
dilcolina en la Solucin muestra por comparacin con la
concentracin del Estndar interno.
Comparar el espectro de 1 H de la Solucin muestra con
el de la Solucin estndar para determinar la similitud
de huellas dactilares de acuerdo con cules de los fos-
folpidos identificados en el espectro de referencia de
la Solucin estndar estn presentes en el espectro de
la Solucin muestra.
Criterios de aceptacin
Fosfolpidos totales: 28%-52% (p/p)
Fosfatidilcolina: 60%-90% (p/p) del contenido de
Fosfolpidos totales
CONTENIDO DE ASTAXANTINA
[NOTA-Realizar este anlisis bajo luz difusa, usando ma-
terial de vidrio con proteccin actnica.]
Solucin muestra: 0,005 g/mL en cloroformo. [NOTA-
Si la solucin no es transparente, centrifugarla en una
centrfuga apropiada hasta obtener un sobrenadante
transparente.]
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851).)
Longitud de onda analtica: 486 nm
Paso de celda: 1 cm
Blanco: Cloroformo
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Calcular el porcentaje de astaxantina en la porcin de
Aceite de Kril tomada:
Resultado ~ A/(F x C)
A = absorbanciade la Solucin muestra
F =coeficiente de extincin (E 1 ''") de astaxantina
pura en cloroformo (1 00 mL . g 1 cm 1 ) ,
1692
C = concentracin de la Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,01 %
CONTAMINANTES
GRASAS y ACEITES FIJOS(401): No ms de O, l ppm de Pb,
ge Cd, de As inorgnico y de Hg
LIMITE DE DIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POUCLORADOS
Anlisis: Determinar el contenido de dibenzo-para-dio-
xinas policloradas (PCDD, por sus siglas en ingls) y
dibenzofuranos policloradus (PCDF, por sus siglas en 1n-
USP 38
gles) mediante la Revisin B del Metodo N 161 3 de la
rnv1ronment.:il Protcction Agcncy (Agencia de ProteL-
cin Ambiental de los Estados Unidos). Determinar el
en ingls) mediante Id rPvisin A riel mitodo N 1668
de ia Environmental l,rotect1on Agency.
Criterios de aceptacin: La suma de PCDD y PCDF es
no ms de 2,0 pg/g de equivalentes txicos de la Orga-
nizacin Mundial de la Salud, OMS. La suma de PCDD,
PCDF y PCB tipo dioxina (bifenilos policlorados, cong-
neres no-orto de la IUPAC PCB-77, PCB-81, PCB-126 y
PCB-169, y congneres mono-orto de la IUPAC PCB-
105, PCB-114, PCB-118, PCB-123, PCB-156, PCB-157,
PCB-167 y PCB-189) es no ms de 3,0 pg/g de equiva-
lentes txicos de la OMS.
PRUEBAS ESPECFICAS
ESTERIFICACIN DE ASTAXANTINA
Solucin estndar A: 1O mg/mL de E:R steres de Asta-
xantina de Haematococcus pluvw/1s USP en acetona
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Astaxantina
(Sinttica) USP en acetona
Solucin muestra: 250 mg/mL de Aceite de Kril en
acetona
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromalografw en Capa Del-
gada.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm. [NOTA-Secar el gel de slice a 11 O du-
rante 1 hora antes de usar.]
Volumen de aplicacin: 5 L
Fase mvil: Hexano y acetona (70:30)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Desarrollar el cromatograma en la Fase mvil hasta que
el frente de la fase mvil haya recorrido aproximada-
mente 15 cm de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cmara y dejar que se seque.
Criterios de aceptacin: La mancha principal de la So-
lucin estndar B, localizada en la mitad inferior de la
placa, es astaxantina libre. La Solucin muestra puede
presentar una mancha menor, clara, en el mismo lugar.
Las manchas principales de la Solucin estndar A son
de monosteres (mancha principal, localizada ligera-
mente por encima del medio de la placa) y disteres
(mancha secundaria, localizada en el tercio superior de
la placa). La mancha principal de la Solucin muestra
debe corresponder en color y valor R1 a la mancha del
dister de la Solucin estndar A. La mancha secundaria
de la Solucin muestra debe corresponder en color y
aproximadamente el mismo valor Rr que la mancha del
monoster de la Solucin estndar A. [NOTA-Pueden
existir ligeras diferencias en valor R1 entre las manchas
de monosteres y entre las manchas de disteres de-
bido a las diferentes i11tensidades.]
GRASAS y ACEITES FIJOS, l,nd1ce de Acidez (401 ): 1 70-190
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401): No ms
de 5,0 mEq de perxido/kg
GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401): No
ms de 1,5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente controlada. Puede envasarse en frascos o
en envases de los que se haya extrado el aire mediante
vaco o un gas inerte.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido promedio de
DHA y EPA, en mq/q. Tambin indica el nombre v la
concentracin cie cualquier antioxidante agregad.
USP 38 Suplementos Dietticos / Kril 654 3

ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11) Tabla 1

ER steres de Astaxantina de / laematococcus pluvialis USP
ER f>.slaxantina (Sin~tica) USP Lmite
1 lmite 1

Anotacin
[R
ER
[ste [tflic del Acido Dvco'.>JhcxJcnoico USP
ster Etlico del cido Eiosarent;pnoirn lJSP
1

~, cido Gra.~
' ACId os grasos monom
+ 1!1ferior
A.bre11iada-+ (Area "lo)
S~perior
(Area 0101
ER Aceite de Kril USP
ER Tricosanoato de Metilo USP saturados --~------ ------ ~-

cido nalmitoleico 16:1 n-7 25 90

cido cis-vaccnico __lfil__rr::L. ~
4 7 70
cido oleico 18:1 n-9 7o 14 5
cido eicosnico 20:1 n-9 o1 12
Aceite de Kril, Cpsulas cido ercico 22:1 n-9 00 09
cidos grasos poliinsa-
DEFINICIN turados
Las Cpsulas de Aceite de Kril contienen no menos de cido linoleico 18:2 n-6 14 3o
95,0% y no ms de 105,0% de la cantidad declarada de
Aceite de Kril donde el Aceite de Kril es el aceite fijo ex- cido a-linolnico 18:3 n-3 o5 35
trado de la biomasa del kril antrtico (Euphausia superba cido morctico - ------ J 8: 4-D.::l ___ ~8 72
Dana) usando un disolvente de extraccin adecuado. cido eicosaoentaenoico 20:5 n-3 14 o 22 1 --

cido docosanentaenoico 22:5 n-3 00 07

IDENTIFICACIQN
A. PERFIL DE ACIDOS GRASOS
Solucin antioxidante, Solucin de aptitud del sis-
tema 1 y Sistema cromatogrfico: Proceder segn se
indica en. Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin y
Perfil de Acidos Grasos Omega-3.
Solucin estndar: Proceder segn se indica en Solu-
cin de Prueba 7 e,n Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determi-
nacin y Perfil de Acidos Grasos Omega-3, excepto usar
250 mg de ER Aceite de Kril USP.
Solucin muestra: Usando la porcin de aceite, a partir
de no menos de 1 O Cpsulas, proceder segn se indica
en Solucin de Prueba 7 ei Grasas y Aceites Fijos (401 ),
Determinacin y Perfil de Acidos Grasos Omega-3.
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema 7 y Solucin
estndar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido de la Solucin estndar es similar al croma-
tograma de referencia provisto con el lote de ER
Aceite de Kril USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de
oleato de metilo y cis-vaccinato de metilo, Solucin
estndar
Porcentajes tericos de rea: Cumplen con los re-
quisitos para Solucin de aptitud del sistema 7.
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Identificar los tiempos de retencin de los steres metli-
cos de los cidos grasos pertinentes en la Solucin
muestra, comparando el cromatograma de la Solucin
muestra con el de la Solucin estndar y el cromato-
grama de referencia USP.
Calcular el porcentaje de rea de cada cido graso
como steres metlicos en la porcin de aceite tomada,
a partir de las Cpsulas:
Resultado= (rAirB) x 100
rA = readel pico de cada cido graso individual
de la Solucin muestra
rB = suma de las reas de todos los picos, excepto
los picos del disolvente y butil
hidroxitolueno, de la Solucin muestro
Criterios de aceptacin: Ver la Tabla 7.
cido docosahexaenoico 22:6 n-3 75 13 2
8. PERFIL DE FOSFOLPIDOS
Solucin A, Estndar de forma del pico ( 1 H), Estndar
de sensibilidad ( 1 H), Estndar de sensibilidad ( 31 P),
Estndar interno, Solucin muestra, Solucin estn-
dar, Condiciones instrumentales, Aptitud del sistema
y Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de
Contenido de Fosfolpidos Totales en Contenido.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra contiene
todos los fosfol1pidos siguientes: fosfatidilcolina
[60%-90% (p/p) del contenido total de fosfolpidos],
lisofosfatidilcolina (como una mezcla de 1-lisofosfatidil-
colina y 2-lisofosfatidilcolina) y fosfatidiletanolamina.
CONTENIDO
CONTENIDO DE ACEITE DE KRIL
Anlisis: Pesar no menos de 1 O Cpsulas en un frasco
de pesada tarado y abrir las Cpsulas con cuidado, sin
perder material de las cubiertas. Transferir el contenido
combinado de las Cpsulas a un vaso de precipitados
de 1 00 ml. Retirar cualquier sustancia adherida a las
Cpsulas vacas, lavando con varias porciones pequeas
de 2,2,4-trimetilpentano. Desechar los lavados, y dejar
que las Cpsulas vacas se sequen en una corriente de
aire seco hasta que el 2,2,4-trimetilpentano se evapore
por completo. Pesar las Cpsulas vacas en el frasco de
pesada tarado original y calcular el peso neto promedio
por Cpsula.
Criterios de aceptacin: 95,0%-105,0%
CONTENIDO DE EPA Y DHA
Solucin estndar 1 a, Solucin estndar 1 b, Solucin
estndar 2a, Solucin estndar 2b, Solucin de apti-
tud del sistema 1 y Sistema cromatogrfico: Proce-
der segn se indica en ,Grasas y Aceites Fijos (401 ), De-
terminacin y Perfil de Acidos Grasos Omega-3.
Solucin de prueba 1: Usando la porcin de 250 mg
de aceite, a partir de no menos de 1O Cpsulas, proce-
der segn se indica en Solucin de Prueba 7 en Grasas y
Aceites Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de Acidos Gra-
sos Omega-3.
Solucin de prueba 2: Usando la porcin de 250 mg
de aceite, a partir de no menos de 1 O Cpsulas, proce-
der segn se indica en Solucin de Prueba 2 ,en Grasas y
Aceites Fijos (401 ), Determmaon y Perfil de Acidos Gra-
sos Omega-3.
Anlisis: Proceder segn se indica en Anlisis (para tri-
glicridos) en Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin
y Perfil de Acidos Grasos Omega-3.
Calcular el porcentaje de EPA y DHA en la porcin de
ac.eite Lomada, a partir de las Cpsulas.
Criterios de aceptacin: No menos de 10,0% (p/p) de
EPA y no menos de 5,0% (p/p) de DHA
6544 Kril / Suplementos Diethicos
CONTENIDO DE FOSFOLPIDOS TOTALES
(VPr Espectroscopm de Resonancia Magntica Nuclear
(761), Anlisis de RMN Cualitativo y Cuantitativo).
[No1 A- -Torlm lo-; (folventes deuterados usados en este
mtodo deben tener una pureza atmica de no menos
U(C 99,8% Je D. Cuando se use agua en este mtodo,
sta debe ser de suficiente calidad para asegurar la au-
sencia de trazas de metales u otros contaminantes que
pudieran afectar el anlisis.]
Solucin A: EDTA 0,2 M, ajustada a un pH de 7,2-7,5
con una solucin de carbonato de cesio 1 M. Registrar
el pH final y la cantidad de solucin de carbonato de
cesio 1 M necesaria para obtener el pH deseado.
[NOTA-Usar carbonato de cesio de un grado suficiente
para el anlisis de trazas de metales.]
Estndar de forma del pico (1H): Cloroformo al 1 % en
acetona-d6
Estndar de sensibilidad (1 H): Etilbenceno al O, 1 % en
cloroformo-d
Estndar de sensibilidad ( 31 P): Trifenilfosfato 0,0485 M
en acetona-d6
Estndar interno: Usar trifenilfosfato para RMN con
una pureza de no menos de 99,0% como estndar de
referencia.
Solucin muestra: [NOTA-Se dispone de disolventes
para RMN que contienen tetrametilsilano (TMS).
Cuando los disolventes usados no contienen TMS, ste
debe agregarse a la Solucin muestra en una concentra-
cin aproximada de 0,05% (v/v) para su uso como re-
ferencia en la escala del desplazamiento qumico.]
Transferir la porcin de 300-350 mg de aceite, a partir
de no menos de 1 O Cpsulas, a un vial de vidrio de
5 mL que se pueda sellar. Agregar 25,0 mg de Estndar
interno al vial. Agregar al vial 1 mL de cloroformo deu-
terado (cloroformo-d) y de metanol deuterado (meta-
nol-d4) de un grado adecuado para anlisis de RMN
para disolver la muestra. Una vez que se complete la
disolucin, agregar 1 mL de Solucion A, sellar el vial y
agitar la solucin durante 10-20 minutos, luego centri-
fugar el contenido del vial. Transferir la fase orgnica
inferior a un tubo para RMN apropiado. Es crtico reco-
ger toda la fase orgnica y transferirla al tubo para
RMN. Puede que sea inevitable transferir tambin pe-
queas porciones de la fase acuosa al recoger la fase
orgnica en el tubo para RMN. Esta es una prctica
aceptable, siempre que la fase acuosa permanezca com-
pletamente separada y sobre la fase orgnica en el tubo
para RMN. La cantidad total de fase acuosa debe estar
por encima de la bobina de radiofrecuencia (RF) de la
sonda (fuera del rea de anlisis del tubo). Si la fase
orgnica contuviera materiales sin disolver, stos deben
permanecer suspendidos en la interfase orgnica acuosa
y fuera del rea de anlisis del tubo. La fase orgnica
debe estar libre de burbujas y materiales suspendidos
que puedan interferir con la adquisicin de datos para
RMN.
Solucin estndar: Proceder segn se indica en Solu-
cin muestra, excepto usar 300-350 mg de ER Aceite de Proarama de pulso
Kril USP.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroscopa de Resonancia Magntica Nuclear Posicionamiento del
(761).)
Fuerza del campo magntico: No menos de Tiempo de espera
300 MHz para la frecuencia de 1 H
Sonda: Ob>ervar directamente una sonda capaz de
ajustarse a la frecuencia de resonancia de 31 P (que de-
pende de la fuerza del campo magntico especfico cin
usado)
Calificacin de desempeo del instrumento espera para relaja-
[NOTA-La sensibilidad y la forma del pico deben anali-
zarse en el intervalo de tiempo especificado por el fa-
bricante del instrumento usado. Este mtodo requiere
realizar estas pruebas mensualmente como mnimo, Tamao del conjunto
pero se pueden realizar ms a menudo, segn se re- de datos
quiera. La resolucin debe analizarse durante cada
USP 38
anlisis y documentarse como parte de los resultados
analtico>.]
Prueba de la forma del pico en modalidad 1 H:
Usando el [stndw d fo1111u Je/ piw (' H) y ei proto-
colo recomendado por e! fabricante del instrumento,
el instrumento debe alcanzar las especificaciones de
la forma del pico para la sonda que se est usando,
segn lo requiera el fabricante del instrumento.
[NOTA-El fabricante del instrumento puede requerir
o recomendar una solucin estndar diferente; cloro-
formo al 1% en acetona-d6 es la ms comnmente
usada.]
Prueba de sensibilidad 1H: Usando el Estndar de
sensibilidad de (' H) y el protocolo recomendado por
el fabricante del instrumento, el instrumento debe al-
canzar las especificaciones de sensibilidad requeridas
por el fabricante del instrumento. [NOTA-El fabri-
cante del instrumento puede requerir o recomendar
una solucin estndar diferente; etilbenceno al O, 1%
en cloroformo-d es la ms comnmente usada.]
Prueba de sensibilidad 3 1 P: Usando el Estndar de
sensibilidad de (3 1P) y el protocolo recomendado por
el fabricante del instrumento, el instrumento debe al-
canzar las especificaciones de sensibilidad requeridas
por el fabricante del instrumento. [NOTA-El fabri-
cante del instrumento puede requerir o recomendar
una solucin estndar diferente; trifenilfosfato 0,0485
M en acetona-d6 es la ms comnmente usada.]
Prueba de resolucin en modalidad 1H: La resolu-
cin se demuestra mediante la capacidad de detectar
las dos seales satelitales de 29 Si del TMS. Las seales
satelitales deben resolverse a partir de la seal del
TMS en el espectro con un factor de ensanchamiento
de la lnea de no ms de 0,5 ppm.
Prueba de resolucin en modalidad 31 P: La resolu-
cin se demuestra usando el pico de ter de fosfati-
dilcolina y el pico de fosfatidilcolina. La separacin de
estos picos (con un factor de ensanchamiento de la
lnea de 1,0) debe demostrarse, segn se indica a
continuacin. Usando la lnea base como referencia,
determinar la altura total del pico de ter de fosfati-
dilcolina y trazar una lnea a 30% de la altura total
del pico (intensidad). El pico de ter de fosfatidilco-
lina y el pico de fosfatidilcolina cercano deben resol-
verse por completo en un punto que sea no ms de
30% de la altura del pico de ter de fosfatidilcolina.
Recoleccin de datos: Usar los parmetros especifica-
dos en la Tablo 2. Usar pulsos de 90 grados y calibrar
los pulsos antes de su uso de acuerdo con las reco-
mendaciones provistas por el fabricante del
instrumento.
Tabla 2
Medicin Medicin
Cuantitativa Cualitativa
Parmetro de RMN - "P de RMN - 1 H
1H desacoplado de 11 P Pulso simple 1 H
50 ppm (25 ppm a 20 ppm ( 3 ppm a
Ancho esoectral -25 nnm) 17 oom)
Centro del ancho es- Centro del ancho
transmisor nectral O oom esoectral 7 nnm
oara relaiacin 2-5 segundos 2- 5 seaundos
Tiempo de adquisi-
1-6 seaundos 1-6 seaundos
Suma del tiempo de
cin y del tiempo No menos de 15 No menos de 15
1
de adquisicin -- - ~equndos
1
,equ11dm
No menos de 64k No menos de 64k
(32k con completa- (32k con comple-
do de cero,) tado de ceros)
USP 38
[i'~OTAEl tiempo de adquisicin depende de la fuerza
del campo y del dominio del tiempo. Usando un ins-
trumento de 300 MHz se deben adquirir no menos de
) 11. barridos. J
Aptitud del sistema: En las condiciones descritas en Re-
coleccin de datos, la seal de RMN 31 P de trifenilfosfato
debe observarse a -1 7,80 ppm y el espectro de RMN 1
H debe referenciarse con la seal de 1 H de TM S
(O ppm) para todos los espectros adquiridos en el Anli-
sis. Para anlisis cuantitativos, debe adquirirse un n-
mero suficiente de barridos, de forma que la relacin
seal-ruido para la seal de fosfatidilcolina en el espec-
tro de 31 P de la Solucin muestra adquirido en el Anlisis
sea no menos de 2000.
Anlisis: Adquirir los datos descritos en Recoleccin de
datos. Adquirir, como mnimo, el espectro de 1 H (huella
dactilar) de la Solucin muestra y la Solucin estndar as
como el espectro cuantitativo de ' 1 P de la Solucin
muestra y la Solucin estndar. Registrar los espectros
resultantes y realizar la integracin manualmente o por
medios automatizados en el espectro cuantitativo de
RMN de 31 P de la Solucin muestra. La integracin de
los picos en el espectro de la Solucin muestra debe
realizarse de forma que el conjunto completo de los
picos de fosfolpidos (segn se identificaron por compa-
racin con el espectro de la Solucin estndar y su es-
pectro de referencia) se incluya en la integracin. La
regin de integracin para cada seal debe extenderse
0,05 ppm en ambos lados de la seal de 31 P. Cuantifi-
car los fosfolpidos totales presentes, el contenido de
ter de fosfatidilcolina y el contenido de fosfatidilcolina
en la Solucin muestra por comparacin con la concen-
tracin del Estndar interno.
Comparar el espectro de 1 H de la Solucin muestra con
el de la Solucin estndar para determinar la similitud
de huellas dactilares de acuerdo con cules de los fos-
folpidos identificados en el espectro de referencia de
la Solucin estndar estn presentes en el espectro de
la Solucin muestra.
Criterios de aceptacin
Fosfolpidos totales: 28%-52% (p/p)
Fosfatidilcolina: 60%-90% (p/p) del contenido de
fosfolpidos totales
CONTENIDO DE ASTAXANTINA
[NOTA-Realizar este anlisis bajo luz difusa, usando ma-
terial de vidrio con proteccin actnica.]
Solucin muestra: 0,005 g/mL en cloroformo, usando
la porcin de aceite, a partir de no menos de 1 O Cp-
sulas. [NOTA-Si la solucin no es transparente, centrifu-
garla en una centrfuga apropiada hasta obtener un so-
brenadante transparente.]
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851).)
Longitud de onda analtica: 486 nm
Paso de celda: 1 cm
Blanco: Cloroformo
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Calcular el porcentaje de astaxantina en la porcin de
aceite tomada, a partir de las Cpsulas:
Resultado = A/(F x C)
A = absorbancia
de la Solucin muestra
F coeficiente de extincin (E 1%) de astaxantina
= debe corresponder en color y valor Rr a la mancha del
pura en cloroformo (100 mL. g 1 . cm 1),
1692
C = concentracin de la Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,01 %
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos en Prueba de Ruptura para Cpsulas Blandas.
Sup/Pr11P11to~ Dietticos / Kril 6545
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
LMITE DE OIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POLICLORADOS
Anlisis: _Determinar el contenido de dibenzo-para-dio-
x1.nas pohcloradas (PCDD, por sus siglas en ingls) y
d1~enzofuranos pol1clorados (PCDF, por sus siglas en in-
gles) mediante la Revisin B del Mtodo 161 3 de la
En,vironm~ntal Protection Agency (Agencia de Protec-
c1on Ambiental de los Estados Unidos). Determinar el
con_tenido de bifenilos policlorados (PCB, por sus siglas
en ingls) mediante la Revisin A del Mtodo 1668 de
la Environmental Protection Agency.
Criterios de aceptacin: La suma de PCDD y PCDF es
no ms de 2,0 pg/g de equivalentes txicos de la Orga-
nizacin Mundial de la Salud, OMS. La suma de PCDD,
PCDF y PCB tipo dioxina (bifenilos policlorados, cong-
neres no-orto de la IUPAC PCB-77, PCB-81, PCB-126 y
PCB-169, y congneres mono-orto de la IUPAC PCB-
105, PCB-114, PCB-118, PCB-123, PCB-156, PCB-157,
PCB-167 y PCB-189) es no ms de 1 0,0 pg/g de equi-
valentes txicos de la OMS.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 3 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 102 ufc/g .
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmone/la spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
ESTERIFICACIN DE ASTAXANTINA
Soluc!n estndar A: 1 O mg/mL de ER steres de Asta-
xantina de Haematococcus pluvialis USP en acetona
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Astaxantina
(Sinttica) USP en acetona
Solucin muestra: Usando la porcin de aceite, a partir
de no menos de 1 O Cpsulas, preparar una solucin de
250 mg/mL en acetona.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografia en Capa Del-
gada.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm. [NOTA-Secar el gel de slice a 11 O du-
rante 1 hora antes de usar.]
Volumen de aplicacin: 5 pL
Fase mvil: Hexano y acetona (70:30)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Desarrollar el cromatograma en la Fase mvil hasta que
el frente de la fase mvil haya recorrido aproximada-
mente 15 cm de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cmara y dejar que se seque.
Crite!ios d,e aceptacin: La mancha principal de la So-
lucron estandar B, localizada en la mitad inferior de la
placa, es astaxantina libre. La Solucin muestra puede
presentar una mancha menor, clara, en el mismo lugar.
Las manchas principales de la Solucin estndar A son
de monosteres (mancha principal, localizada ligera-
mente por encima del medio de la placa) y disteres
(mancha secundaria, localizada en el tercio superior de
la placa). La mancha principal de la Solucin muestra
dister de la Solucin estndar A. La mancha secundaria
de la Solucin muestra debe corresponder en color y
aproximadamente el mismo valor Rr gue la mancha del
monoster de la Solucin estandar A. LNOTA-Pueden
existir ligeras diferencias en valor Rr entre las manchas
de monosteres y entre las manchas de disteres de-
bido a las diferentes in_tensidades.]
GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401): No ms
de 5,0 mEq de perxido/kg
6546 Kril / Supl'mentos Dietticos USP 38

REQUISITOS ADICIONALES Criterios de aceptacin: Ver ia Tahin

ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar a temperatura ambiente. Proteger Tabla 1
de la luL.
ETIQUETADO: LJ ctiquctJ indicJ la cantidad de cido do- i 1m1 e 1m1 e I
cosahexaenoico (DHA), cido eicosapentaenoico (EPA), 1 Anotacin Inferior Superior
fosf ol pi dos totales y astaxantina. cido Graso Abreviada (rea%\ rea %\
ESTAi'."DARES DE REFERENCIA USP (11) cidos grasos monoin-
ER Esteres de Astaxantina de Haematococcus pluvialis USP saturados --~---
.-

ER .i;..staxantina (Sinttica) USP cido nalmitoleico 16:1 n-7 25 90

ER Ester Etlico del Acido Docosahexaenoico USP cido cs-vaccnico 18:1 n-7 4 7 70
ER ster Etlico del cido Eicosapentaenoico USP cido oleico 18:1 n-9 __LQ___ 14 5
ER Aceite de Kril USP
ER Tricosanoato de Metilo USP cido eicosnico 20:1 n-9 o1 12
cido ercico 22:1 n-9 00 09
cidos grasos poliinsa-
turados -----~-

cido linoleico 18:2 n-6 14 3o

Aceite de Kril, Cpsulas de Liberacin
Retardada
DEFINICIN
Las Cpsulas de Liberacin Retardada de Aceite de Kril con-
tienen no menos de 95,0% y no ms de 105,0% de la
cantidad declarada de Aceite de Kril, donde el Aceite de
Kril es el aceite fijo extrado a partir de la biomasa del kril
antrtico (Euphausia superba Dana) usando un disolvente
de extraccin adecuado.
IDENTIFICACIN
A. PERFIL DE CIDOS GRASOS
Solucin antioxidante, Solucin de aptitud del sis-
tema 1 y Sistema cromatogrfico: Proceder segn se
indica en, Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin y
Perfil de Acidos Grasos Omega-3.
Solucin estndar: Proceder segn se indica en Solu-
cin de Prueba 7 e,n Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determi-
nacin y Perfil de Acidos Grasos Omega-3, excepto usar
250 mg de ER Aceite de Kril USP.
Solucin muestra: Usando la porcin de aceite, a partir
de no menos de 1 O Cpsulas, proceder segn se indica
en Solucin de Prueba 7 eri Grasas y Aceites Fijos (401 ),
Determinacin y Perfil de Acidos Grasos Omega-3.
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema 7 y Solucin
estndar
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido de la Solucin estndar es similar al croma-
tograma de referencia provisto con el lote de ER
Aceite de Kril USP usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de
oleato de metilo y cis-vaccinato de metilo, Solucin
estndar
Porcentajes tericos de rea: Cumplen con los re-
9~i.sitos para Solucin de aptitud del sistema 7.
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Identificar lm tiempos de retencin de los steres metli-
cos de los cidos grasos pertinentes en la Solucin
muestra, comparando el cromatograma de la Solucin
muestra con el de la Solucin estndar y el cromato-
grama de referencia USP.
Calcular el porcentaje de rea de cada cido graso
como steres metlicos en la porcin de aceite tomada,
a partir de las Cpsulas:
Resultado = (rA/rs) x 100
r" = rea del pico de cada cido graso individual
de la Solucin muestra
r8 = suma de las reas de todos los picos, excepto
los picos del disolvente y butil
hidroxitolueno, de la Solucin muestra
cido u-linolnico 18:3 n-3 05 35
cido morctico 18:4 n-3 18 72
cido eicosaoentaenoico 20:5 n-3 14 o 22 1
cido docosaoentaenoico 22:5 n-3 00 07
cido docosahexaenoico 22:6 n-3 75 13 2
B. PERFIL DE FOSFOLPIDOS
Solucin A, Estndar de forma del pico ( 1H), Estndar
de sensibilidad ( 1 H), Estndar de sensibilidad ( 31 P),
Estndar interno, Solucin muestra, Solucin estn-
dar, Condiciones instrumentales, Aptitud del sistema
y Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de
Contenido de Fosfolpidos Totales en Contenido.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra contiene
todos los fosfol1pidos siguientes: fosfatidilcolina
[60%-90% (p/p) del contenido total de fosfolpidos],
lisofosfatidilcolina (como una mezcla de 1-lisofosfatidil-
colina y 2-lisofosfatidilcolina) y fosfatidiletanolamina.
CONTENIDO
CONTENIDO DE ACEITE DE KRIL: Pesar no menos de 1 o
Cpsulas en un frasco de pesada tarado y abrir las Cpsu-
las con cuidado, sin perder material de las cubiertas.
Transferir el contenido combinado de las Cpsulas a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier sustan-
cia adherida a las Cpsulas vacas, lavando con varias
porciones pequeas de 2,2,4-trimetilpentano. Desechar
los lavados, y dejar que las Cpsulas vacas se sequen en
una corriente de aire seco hasta que el 2,2,4-trimetilpen-
tano se evapore por completo. Pesar las Cpsulas vacas
en el frasco de pesada tarado original y calcular el peso
neto promedio por Cpsula.
Criterios de aceptacion: 95,0%-105,0%
CONTENIDO DE EPA Y DHA
Solucin estndar 1 a, Solucin estndar 1 b, Solucin
estndar 2a, Solucin estndar 2b, Solucin de apti-
tud del sistema 1 y Sistema cromatogrfico: Proce-
der segn se indica en ,Grarns y Aceites Fijos (401 ), De-
terminacin y Perfil de Acidos Grasos Omega-3.
Solucin de prueba 1: Usando la porcin de 250 mg
de aceite, a partir de no menos de 1 O Cpsulas, proce-
der segn se indica en Solucin de Prueba 7 en Grasas y
Aceites Fijos (401 ), Delerminacin y Perfil de Acidos Gra-
sos Omega- 3.
Solucin de prueba 2: Usando la porcin de 250 mg
de aceite, a partir de no menos de 1 O Cpsulas, proce-
der segn se indica en Solucin de Prueba 2 ,en Grasas y
Aceites Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de Acidos Gra-
sos Omega-3.
Anlisis: Proceder segn se indica en Anlisis (para tri-
glicridos) ~n Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin
y Perfil de Acicios Grasos Omega3.
Calcular el porcentaje de EPA y DHA en la porcin de
aceite tomada, a partir de las Cpsulas.
Criterios de aceptacin; No 111e11m de 10,0% (p/p) de
EPA y no menos de 5,0% (p/p) de DHA
usr) 38
CONTENIDO DE Fo~fOLl'IOOS TOTALES
(Ver EspPClro.1rnp10 de Rcsononria Mogntica Nuclear
1761 \. Anlisis de RIV1N Cuolitativo y \uantitativo).
[NOTA--Todos los disolventes deuterados usados en este
metodo deben tener una purez Jtm1c de no menos
de 99,8% de D. Cuando se use agua en este mtodo,
sta debe ser de suficiente calidad para asegurar la au-
sencia de trazas de metales u otros contaminantes que
pudieran afectar el anlisis. j
Solucin A: EDTA 0,2 M, ajustada a un pH de 7,2-7,5
con una solucin de carbonato de cesio 1 M. Registrar
el pH final y la cantidad de solucin de carbonato de
cesio 1 M necesaria para obtener el pH deseado.
[Nm A-Usar carbonato de cesio de un grado suficiente
para el anlisis de trazas de metales.]
Estndar de forma del pico ( 1 H): Cloroformo al 1 % en
acetona-d6
Estndar de sensibilidad ( 1 H): Etilbenceno al O, 1 % en
cloroformo-d
Estndar de sensibilidad ( 31 P): Trifenilfosfato 0,0485 M
en acetona-d6
Estndar interno: Usar trifenilfosfato para RMN con
una pureza de no menos de 99,0% como estndar de
referencia.
Solucin muestra: [NOTA Se dispone de disolventes
para RMN que contienen tetrametilsilano (TMS).
Cuando los disolventes usadm no contienen TMS, ste
debe agregarse a la Solucin muestra en una concentra-
cin aproximada de 0,05% (v/v) para su uso como re-
ferencia en la escala del desplazamiento qumico.]
Transferir la porcin de 300-350 mg de aceite, a partir
de no menos de 1 O Cpsulas, a un vial de vidrio de
5 mL que se pueda sellar. Agregar 25,0 mg de Estndar
interno al vial. Agregar al vial 1 mL de cloroformo deu-
terado (cloroformo-d) y de metano! deuterado (meta-
nol-d4) de un grado adecuado para anlisis de RMN
para disolver la muestra. Una vez que se complete la
disolucin, agregar 1 mL de Solucin A, sellar el vial y
agitar la solucin durante 10-20 minutos, luego centri-
fugar el contenido del vial. Transferir la fase orgnica
inferior a un tubo para RMN apropiado. Es crtico reco-
ger toda la fase orgnica v transferirla al tubo para
RMN. Puede que sea inevitable transferir tambin pe-
queas porciones de la fase acuosa al recoger la fase
orgnica en el tubo para RMN. Esta es una prctica
aceptable, siempre que la fase acuosa permanezca com-
pletamente separada y sobre la fase orgnica en el tubo
para RMN. La cantidad total de fase acuosa debe estar
por encima de la bobina de radiofrecuencia (RF) de la
sonda (fuera del rea de anlisis del tubo). Si la fase
orgnica contuviera materiales sin disolver, stos deben
permanecer suspendidos en la interfase orgnica acuosa
y fuera del rea de anlisis del tubo. La fase orgnica
debe estar libre de burbujas y materiales suspendidos
que puedan interferir con la adquisicin de datos para
RMN.
Solucin estndar: Preparar segn se indica en Solucin
muestra, excepto usar 300-350 mg de ER Aceite de Kril
USP.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroscopa de Resonancia IV1agnetica Nuclear
(761 ).)
Fuerza del campo magntico: No menos de
300 MHz para la frecuencia de 1 H
Sonda: Observar directamente una sonda capaz de
ajustarse a la frecuencia de resonancia de ii P (que de-
pende de la fuerza del campo magntico especfico
usado)
Calificacin de desempeo del instrumento
[NmA-La semibilidad y la forma del pico deben anali-
zarse en el intervalo de tiempo especificado por el fa-
bricante del instrumento usado. Este mtodo requiere
realizar estas pruebas mensualmente como mnimo,
pero se pueden realizar ms a menudo, segn se re-
quiera. La resolucin debe analizarse durante cada
Supiemenros Dietticos / Kril 6547
anlisis v documentarse como parte de los resultados
analticos.]
Prueba de la forma del pico en modalidad 1 H:
Usando el fltndar de forma del pico (1 H) y el proto-
colo recomendado por el fabriui11te del iristrumento,
el instrumento debe alcanzar las especificaciones de
la forma del pico para la sonda que se est usando,
segn lo requiera el fabricante del instrumento.
[NOTA-El fabricante del instrumento puede requerir
o recomendar una solucin estndar diferente; cloro-
formo al 1 % en acetona-d6 es la ms comnmente
usada.]
Prueba de sensibilidad 1 H: Usando el Estndar de
sensibilidad de (1 H) y el protocolo recomendado por
el fabricante del instrumento, el instrumento debe al-
canzar las especificaciones de sensibilidad requeridas
por el fabricante del instrumento. [NOTA-El fabri-
cante del instrumento puede requerir o recomendar
una solucin estndar diferente; etilbenceno al O, 1 %
en cloroformo-d es la ms comnmente usada.]
Prueba de sensibilidad 31 P: Usando el Estndar de
sensibilidad de ( 31 P) y el protocolo recomendado por
el fabricante del instrumento, el instrumento debe al-
canzar las especificaciones de sensibilidad requeridas
por el fabricante del instrumento. [NOTA-El fabri-
cante del instrumento puede requerir o recomendar
una solucin estndar diferente; trifenilfosfato 0,0485
M en acetona-d6 es la ms comnmente usada.]
Prueba de resolucin en modalidad 1H: La resolu-
cin se demuestra mediante la capacidad de detectar
las dos seales satelitales de 29 Si del TMS. Las seales
satelitales deben resolverse a partir de la seal del
TMS en el espectro con un factor de ensanchamiento
de la lnea de no ms de 0,5 ppm.
Prueba de resolucin en modalidad 3 1 P: La resolu-
cin se demuestra usando el pico de ter de fosfati-
dilcolina y el pico de fosfatidilcolina. La separacin de
estos picos (con un factor de ensanchamiento de la
lnea de 1,0) debe demostrarse, segn se indica a
continuacin. Usando la lnea base como referencia,
determinar la altura total del pico de ter de fosfati-
dilcolina y trazar una lnea a 30% de la altura total
del pico (intensidad). El pico de ter de fosfatidilco-
lina y el pico de fosfatidilcolina cercano deben resol-
verse por completo en un punto que sea no ms de
30% de la altura del pico de ter de fosfatidilcolina.
Recoleccin de datos: Usar los parmetros especifica-
dos en la Tabla 2. Usar pulsos de 90 grados y calibrar
los pulsos antes de su uso de acuerdo con las reco-
mendaciones provistas por el fabricante del
instrumento.
Tabla 2
---------r
-- --
Parmetro
Programa_Qf_J>LJbo
t c:.!:~:~:~~va
de RMN "P
H desae<:lpj<!_QQ~_
50 ppn1 (25 ppm a
1 c~:~!~~~:a
de RMN - 1 H
Pulso sim le 1H
20 ppm (-3 ppm a
Anchll__espectral t- ~:i_Jlpm) 17 m
Posicio11amiento del t. Ce11tr d..el anch.o es-. ti Centro del ancho
transmisor ___ pectra!, QJ>Q_rl} ___ es ectral 7 m
Tiempo de espera
1
ara rela acin
Tiempo de adquisi
2 '.> se undos
1---c~io~n~------+--1-6 se_gLmdo~--
Suma de! tiempo de
t 2-5 se undos
_ 1-6 segundos _
1
espera para relaja-
r cin y del tiempo No menos de 15 No menos de 15
-- de adguis_r_cin ---+--s=e~u~nd~o~s-----+-~s=e=un~d=o=s----1
1
No menos de 64k No menos de 64k
1 Tamano del conjunto (32k con completa- (32k con comple-
1
~._d~e~d~a~to~s_ _ _ _~ ___ do_d_e_c_e~ro~sl~--~---tado de ceros)_
6548 Kril / )11ih'11w11fo\ iJiPlticos
[NOTA-E! tiempo de Jdquisicin depende de la fuerza
del campo y del dominio del tiempo. Usando un ins-
trumento de 300 MHz se deben adquirir no menos de
51 2 barridos. J
Aptitud del sistema: En Id' co11dicione' descritas en Re-
coleccin de datos, la seal de RMN 31 P de trifenilfosfato
debe observarse a -1 7,80 ppm y el espectro de RMN
H debe referenciarse con la seal de 1H de TMS
(O ppm) para todos los espectros adquiridos en el Anli-
sis. Para anlisis cuantitativos, debe adquirirse un n-
m~ro su.ficiente de barridos, de forma que la relacin
senal-rurdo para la seal de fosfatidilcolina en el espec-
tro de 31 P de la Solucin muestra adquirido en el Anlisis
sea no menos de 2000.
Anlisis: Adquirir los datos descritos en Recoleccin de
datos. Adquirir, como mnimo, el espectro de 1H (huella
dactilar) de la Solucin muestra y la Solucin estndar as
como el espectro cuantitativo de 11 P de la Solucin
muestra y la Solucin estndar. Registrar los espectros
resul~antes y realizar la integracin manualmente o por
medros automatizados en el espectro cuantitativo de
RMN. de 31 P de la Solucin muestra. La integracin de
los picos en el espectro de la Solucin muestra debe
r~alizarse de forma que el conjunto completo de los
prcos de fosfolpidos (segn se identificaron por compa-
racin con el espectro de la Solucin estndar y su es-
pectro de referencia de la Solucin estndar) se incluya
en la integracin. La regin de integracin para cada
seal debe extenderse 0,05 ppm en ambos lados de la
seal de 31 P. Cuantificar los fosfolpidos totales presen-
tes, el contenido de ter de fosfatidilcolina y el conte-
nido de fosfatidilcolina en la Solucin muestra por com-
paracin con la concentracin del Estndar interno.
Comparar el espectro de 1 H de la Solucin muestra con
el de la Solucin estndar para determinar la similitud
de huellas dactilares de acuerdo con cules de los fos-
folpidos identificados en el espectro de referencia de
la Solucin estndar estn presentes en el espectro de
la Solucin muestra.
Criterios de aceptacin
Fosfolpidos totales: 28%-52% (p/p)
Fosfatidilcolina: 60%-90% (p/p) del contenido de
fosfolpidos totales
CONTENIDO DE ASTAXANTINA
[NOTA-Realizar este anlisis bajo luz difusa, usando ma-
terial de vidrio con proteccin actnica.]
Solucin muestra: 0,005 g/mL en cloroformo, usando
la porcin de aceite, a partir de no menos de 1 O Cp-
sulas. [NOTA-Si la solucin no es transparente, centrifu-
garla en una centrfuga
brenadante transparente.
f ropiada hasta obtener un so-
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz <851 ).)
Longitud de onda analtica: 486 nm
Paso de celda: 1 cm
Blanco: Cloroformo
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Calcular el porcentaje de astaxantinJ en la porcin de
aceite tomada de las Cpsula':
Resultado = A!(f x C)
A = absorbancia de la Solucin muestra
F = coeficiente de extincin (E1'"') de astaxantina
pura en cloroformo (100 mL. g 1 cm 1),
1692
C = concentracin de la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,01 %
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos en Desintegracin, Cpsulas de Liberacin Retar-
dada (recubrimiento entrico) blandas.
USP 38
VARIACIN DE PESO (2091'>: CumrlPn rnn los requisitos.
CONTAMINANTES
LMITE DE DIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POLICLORADOS
Anlisis: .Delermindl el c.o11le11ido de dibenzo-pJra-dio-
xr.nas polrcloradas (PCDD, por sus siglas en ingls) y
1 drbenzofuranos polrclorados (PCDF, por sus siglas en in-
gls) mediante la Revisin B del Mtodo 161 3 de la
Environmental Protection Agency (Agencia de Protec-
cin Ambiental de los Estados Unidos). Determinar el
contenido de bifenilos policlorados (PCB, por sus siglas
en ingls) mediante la Revisin A del Mtodo 1668 de
la Environmental Protection Agency.
Criterios de aceptacin: La suma de PCDD y PCDF es
no ms de 2,0 pg/g de equivalentes txicos de la Orga-
nizacin Mundial de la Salud, OMS. La suma de PCDD,
PCDF y PCB tipo dioxina (bifenilos policlorados, cong-
neres no-orto de la IUPAC PCB-77, PCB-81, PCB-126 y
PCB-169, y congneres mono-orto de la IUPAC PCB-
105, PCB-114, PCB-118, PCB-123, PCB-156, PCB-157,
PCB-167 y PCB-189) es no ms de 10,0 pg/g de equi-
valentes txicos de la OMS.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO <2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 3 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 2 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS <2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
ESTERIFICACIN DE ASTAXANTINA
Solucin estndar A: 1 O mg/mL de ER steres de Asta-
xantina de Haematococcus pluvialis USP en acetona
Solucin estndar B: 1 O mg/mL de ER Astaxantina
(Sinttica) USP en acetona
Solucin muestra: Usando la porcin de aceite, a partir
de no menos de 1 O Cpsulas, preparar una solucin de
250 mg/mL en acetona.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografia <621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm. [NOTA-Secar el gel de slice a 11 O du-
rante 1 hora antes de usar.]
Volumen de aplicacin: 5 L
Fase mvil: Hexano y acetona (70:30)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Desarrollar el cromatograma en la Fase mvil hasta que
el frente de la fase mvil haya recorrido aproximada-
mente 15 cm de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cmara y dejar que se seque.
Criterios de aceptacin: La mancha principal de la So-
lucin estndar B, localizada en la mitad inferior de la
placa, es astaxantina libre. La Solucin muestro puede
presentar una mancha menor; clara, en el mismo lugar.
Las manchas principales de la Solucin estndar A son
de monosteres (mancha principal, localizada ligera-
mente por encima del medio de la placa) y disteres
(mancha secundaria, localizada en el tercio superior de
la placa). La mancha principal de la Solucin muestra
debe corresponder en color y valor Rr a la mancha del
dister de la Solucin estndar A. La mancha secundaria
de la Solucin muestra debe corresponder en color y
aproximadamente el mismo valor R, gue la mancha del
monoster de la Solucin estndar A. [NOTA-Pueden
existir ligeras diferencias en valor Rr entre las manchas
de rnono'>teres y entre las manchas de disteres de-
bido a las diferentes il)tensidades.]
GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido <401 ): No ms
de 5,0 mEq de perxido/kg
USP 38
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar a temperatura ambiente. Proteger
Je la luL.
ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de cido do-
cosahexaenoico (DHA), cido eicosapentaenoico (EPA),
fosfolpicos totales y astaxantina.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Esteres de Astaxantina de Haematococcus pluvialis USP
ER ~staxantina (Sinttica) USP
ER ~ster Etlico del ~cido Docosahexaenoico USP
ER Ester Etlico del Acido Eicosapentaenoico USP
ER Aceite de Kril USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Leucina-ver Leucina en Monografas
Generales
Levocarnitina-ver Levocarnitina en
Monografas Generales
Levocarnitina, Solucin Oral-ver
Levocarnitina, Solucin Oral en Monografas
Generales
Levocarnitina, Tabletas-ver
Levocarnitina, Tabletas en Monografas
Generales
Licopeno
C4oHs6 536,88
[502-65-8].
DEFINICIN
El Licopeno es una mezcla de ismeros geomtricos de lico-
peno. Contiene no menos de 96,0% y no ms de 101,0%
de licopeno (CoHs6), calculado con respecto a la sustancia
seca.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL ULTRAVIOLETA VISIBLE (197U)
Intervalo de longitud de onda: 300-700 nm
Solucin de prueba: Preparar segn se indica en Solu-
cin muestra en la prueba de Contenido de Licopeno.
Criterios de aceptacin: Cumple con los requisitos del
captulo. El cociente entre A476/ Asos es 1, 10-1,14.
B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en la prueba de Contenido de Licopeno
todo E, Licopeno SZ y Compuestos Relacionados.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE LICOPENO
Solucin madre de la muestra: Transferir 25 mg de Li-
copeno y 25 mg de butil hidroxitolueno a un matraz
volumtrico de 100 ml. Agregar 60 ml de cloruro de
metileno y someter a ultrasonido hasta disolver. Diluir
con cloruro de metileno a volumen.
Suplementos DietPticm / Licopeno 6549
Solucin muestra: Transferir 2,0 mL de Solucin madre
de la muestra a un matraz volumtrico de 200 mL y
diluir con ciclohexano a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver F1rP<tmfotomelra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV-V1s
Longitud de onda analtica: 476 nm
Blanco: Ciclohexano
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Calcular el porcentaje de licopeno (C40Hs6) en la por-
cin de Licopeno tomada:
Resultado = Au![(a x Cu)] x 100
Au = absorbancia de la Solucin muestra
a = absortividad de licopeno puro en ciclohexano,
331 (mL-mg1 -cmi)
Cu = concentracin de la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 96,0%-101,0% con respecto
a la sustancia seca
CONTENIDO DE LICOPENO TODO E, LICOPENO 5Z Y COMPUES-
TOS RELACIONADOS
Fase mvil: terc-Butil metil ter, metano! y tetrahidrofu-
rano (784:665:74)
Solucin estndar: Transferir una cantidad pesada de
ER Licopeno USP, equivalente a aproximadamente 5 mg
de licopeno, a un matraz volumtrico de 250 ml. Agre-
gar aproximadamente 60 unidades de preparacin de
proteasa alcalina bacteriana u otra enzima adecuada y
aproximadamente 25 mg de butil hidroxitolueno. Agre-
gar 2,5 mL de hidrxido de amonio diluido (2 en 100)
en agua y mezclar. Colocar en un bao ultrasnico a
50 durante 1 O minutos, rotar el matraz ocasionalmente
para evitar que el material se pegue a la superficie de
vidrio y continuar hasta que el material se haya disper-
sado sin grumos. Agregar 5 mL de tetrahidrofurano,
40 mL de alcohol deshidratado y mezclar. Colocar en
un bao ultrasnico durante aproximadamente 1 mi-
nuto. Enfriar a temperatura ambiente y diluir con terc-
butil metil ter a volumen. Agitar vigorosamente y
luego dejar que el precipitado sedimente. Filtrar el
sobrenadante.
Solucin madre de la muestra: Transferir 15 mg de Li-
copeno a un matraz volumtrico de 25 mL y disolver en
tetrahidrofurano que contenga 50 mg/L de butil hidro-
xitolueno. Diluir con el mismo disolvente a volumen.
Solucin muestra: Pipetear y transferir 2 mL de Solucin
madre de la muestra a un matraz volumtrico de 50 mL
y agre9ar 8 mL de tetrahidrofurano. Diluir con terc-butil
metil eter a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 472 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, relleno L62 de 5 m; una
segunda columna conectada en serie, de 4,6 mm x
25 cm, relleno L62 de 3 m. [NOTA-Las columnas
nuevas pueden requerir acondicionamiento.]
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para los pi-
cos de licopeno todo E y licopcno 5Z son 1,0 y aproxi-
madamente 1,07, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de lico-
peno todo E y licopeno 5Z
Factor de asimetra: 0,8-2,0 para el pico de licopeno
todo E
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de licopeno todo E
6550 l irnpeno / Suplementos Dietticos USP 38

Anlisis adecuados. Puede presentarse en forma slida o lquida

Muestra: Solucin muestra oleosa. Contiene no menos de 9\0% y no mas de
Calcular el porcentaje de licopeno todo E en la porcin 120,0% de la cantidad declarada de licopeno (C11H,"),
de Licopcno tvn1JdJ: caicuiado con respecto a la sustancia anhidra.
Resultado = (rrl r1) x T IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL ULTRAVIOLETA VISIBLE (l 97U)
( = respuestadel pico del ismero de licopeno Intervalo de longitud de onda: 300-700 nm
todo E Solucin de prueba: Preparar segCm se indica en Solu-
( = suma de las respuestas de todos los picos cin muestra en la prueba de Contenido de Licopeno.
T = porcentaje de ismeros de licopeno totales Criterios de aceptacin: Cumple con los requisitos del
obtenidos en la prueba de Contenido de captulo. El cociente entre A416/ A:,08 es 1, 10-1,14 en ci-
Licopeno clohexano. El cociente entre A4n/ A,04 es 1,09-1, 1 3 en
Criterios de aceptacin: No menos de 70,0% de lico- alcohol isoproplico.
peno todo E
Calcular el porcentaje de ismero de licopeno 5Z en la COMPOSICIN
porcin de Licopeno tomada: CONTENIDO DE LICOPENO
Procedimiento para preparaciones oleosas
Resultado = (rsz/ rr) x T Solucin madre de la muestra: Transferir una canti-
dad pesada de Preparacin oleosa que contenga
rsz = respuesta del pico del ismero 5Z de licopeno 25 mg de licopeno a un matraz volumtrico de
rr = suma de las respuestas de todos los picos 100 ml. Agregar 25 mg de butil hidroxitolueno y
T = porcentaje de ismeros de licopeno totales 60 ml de cloruro de metileno, y someter a ultrasonido
obtenidos en la prueba de Contenido de hasta disolver. Diluir con cloruro de metileno a volu-
Licopeno men.
Criterios de aceptacin: No ms de 23,0% del is- Solucin muestra: 2,0 ml de Solucin madre de la
mero de licopeno 5Z muestra diluidos con ciclohexano hasta 200,0 ml
Calcular el porcentaje de compuestos relacionados en la Condiciones instrumentales
porcin de Licopeno tomada: (Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Resultado = (rs/ rr) x T Longitud de onda analtica: 476 nm
Blanco: Ciclohexano
rs = suma de las respuestas de todos los picos, Anlisis
excepto el pico de licopeno todo E y el pico Muestra: Solucin muestra
de licopeno 5Z Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de lico-
( = suma de las respuestas de todos los picos peno (C40Hs6) en la porcin de Preparacin tomada:
T = porcentaje de ismeros de licopeno totales
obtenidos en la prueba de Contenido de Resultado = Au![(a x Cu)] x 100
Licopeno
Criterios de aceptacin: No ms de 9,0% de otros Au = absorbancia de la Solucin muestra
compuestos relacionados calculados como licopeno a = absortividad de licopeno puro en ciclohexano,
331 (ml mg 1 cmi)
IMPUREZAS Cu = concentracin nominal de licopeno en la
RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de 0,2% Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 95,0%-120,0% con respecto
Eliminar lo siguiente: a la sustancia anhidra
Procedimiento para preparaciones slidas
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de Solucin madre de la muestra: Transferir una canti-
1O ppme (Oficial Ol-dic-2015) dad pesada de Preparacin slida, equivalente a apro-
ximadamente 5 mg de licopeno, a un matraz volum-
PRUEBAS ESPECFICAS trico de 200 ml. Agregar aproximadamente 60
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra al vaco unidades de preparacin de proteasa alcalina bacte-
sobre pentxido de fsforo a 40 durante 4 horas: pierde riana u otra enzima adecuada y aproximadamente
no ms de 0,2% de su peso. 25 mg de butil hidroxitolueno. Agregar 2,5 ml de hi-
drxido de amonio diluido (2 en 1 00) en agua y mez-
REQUISITOS ADICIONALES clar. Colocar en un bao ultrasnico a 50'' durante 1 O
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- minutos, rotar el matraz ocasionalmente para evitar
permeables y resistentes a la luz bajo gas inerte. Almace- que el material se pegue a la superficie de vidrio y
nar en un lugar fresco. continuar hasta que el material se haya dispersado sin
ETIQUETADO: Etiquetar indicando si el artculo es de ori- grumos. Agregar 5 ml de tetrahidrofurano, 40 ml de
gen natural o sinttico. Si es de origen natural, etiquetar alcohol deshidratado y mezclar. Colocar en un bao
indicando la fuente natural, incluyendo su nombre cient- ultrasnico durante aproximadamente 1 minuto. En-
fico en latn. friar a temperatura ambiente y diluir con terc-butil me-
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11) til ter a volumen. Agitar vigorosamente y luego dejar
ER Licopeno USP en reposo hasta que el slido sedimente.
Solucin muestra: 2,0 ml de Solucin madre de la
muestra diluidos con alcohol isoproplico hasta 25,0 ml
Condiciones instrumentales
(Ver Especltofulurnelru y Dispersin de Luz (851 ).)
Preparacin de Licopeno
DEFINICIN
La Preparacin de Licopeno es una combinacin de Lico-
peno con una o ms sustancias inertes y antioxidantes
LJSP )8 ',uplcmcntos Dietticos / Licopeno 6551

Modo: UV-Vis Velocidad de flujo: 1 ml/min

Longitud de onda analitica: 4 72 11111 Volumen de inyeccin: 1 O pl
Blanco: Alcohol isoproplico Aptitud del sistema
Anlisis Muestra: )u/uciu e:iiuuJur
Muestra: Snlurin rn;;p_,tn1 [NOTA Los tiempos de retencin relativos para los pi
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de lico- cos de licopeno todo E y licopeno 5Z son 1,0 y aproxi-
peno en la porcin de Preparacin tomada: madamente 1,07, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resultado = Aul[(a x C)] x 100 Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de lico-
peno todo E y licopeno 5Z
Au = absorbancia de la Solucin muestra Factor de asimetra: 0,8-2,0 para el pico de licopeno
a = absortividad de licopeno puro en alcohol todo E
isoproplico, 320 (ml mg i . cm 1) Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
Cu = concentracin nominal de licopeno en la el pico de licopeno todo E
Solucin muestra (mg/ml) Anlisis
Criterios de aceptacin: 95,0%-120,0% con respecto Muestra: Solucin muestra
a la sustancia anhidra Calcular el porcentaje de licopeno todo E en la porcin
CONTENIDO DE LICOPENO TODO E, LICOPENO SZ Y COMPUES- de Preparacin tomada:
TOS RELACIONADOS
Fase mvil: terc-Butil metil ter, metano! y tetrahidrofu- Resultado = (r1/ rr) x 1 00
rano (784:665:74)
Solucin estndar: Transferir una cantidad pesada de r1 = respuesta del pico del ismero de licopeno
ER Licopeno USP, equivalente a aproximadamente 5 mg todo E
de licopeno, a un matraz volumtrico de 250 ml. Agre- rr = suma de las respuestas de todos los picos
gar aproximadamente 60 unidades de preparacin de Criterios de aceptacin: No menos de 65,0% de lico-
proteasa alcalina bacteriana u otra enzima adecuada y peno todo E
aproximadamente 25 mg de butil hidroxitolueno. Agre- Calcular el porcentaje del ismero de licopeno 5Z en la
gar 2,5 ml de hidrxido de amonio diluido (2 en 100) porcin de Preparacin tomada:
en agua y mezclar. Colocar en un bao ultrasnico a
50 durante 1 O minutos, rotar el matraz ocasionalmente Resultado = (rsLI r,) x 100
para evitar que el material se pegue a la superficie de
vidrio y continuar hasta que el material se haya disper- rsz = respuesta del pico del ismero de licopeno 5Z
sado sin grumos. Agregar 5 ml de tetrahidrofurano, r, = suma de las respuesta de todos los picos
40 ml de alcohol deshidratado y mezclar. Colocar en Criterios de aceptacin: No ms de 23,0% del is-
un bao ultrasnico durante aproximadamente 1 mi- mero de licopeno 5Z
nuto. Enfriar a temperatura ambiente y diluir con terc- Calcular el porcentaje de compuestos relacionados en la
butil metil ter a volumen. Agitar vigorosamente y porcin de Preparacin tomada:
luego dejar que el precipitado sedimente. Filtrar el
sobrenadante. Resultado = (rs/ r,) x 1 00
Solucin muestra para preparaciones oleosas: Trans-
ferir una cantidad de Preparacin oleosa, equivalente a rs = suma de las respuestas de todos los picos,
1 5 mg de licopeno, a un matraz volumtrico de 25 ml excepto el pico de licopeno todo E y el pico
y disolver en tetrahidrofurano que contenga 50 mg/L de licopeno 5Z
de butil hidroxitolueno. Diluir con el mismo disolvente r, = suma de las respuestas de todos los picos
a volumen. Pipetear y transferir 2 ml de esta solucin a Criterios de aceptacin: No ms de 14% de otros
un matraz volumtrico de 50 ml y agregar 8 ml de te- compuestos relacionados calculados como licopeno
trahidrofurano. Diluir con terc-butil metil ter a PRUEBAS ESPECFICAS
volumen. DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo I (921 ): No ms de
Solucin muestra para preparaciones slidas: Transfe- 8,0%
rir una cantidad pesada de Preparacin slida, equiva-
lente a aproximadamente 5 mg de licopeno, a un ma- REQUISITOS ADICIONALES
traz volumtrico de 250 ml. Agregar aproximadamente ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
60 unidades de preparacin de proteasa alcalina bacte- permeables y resistentes a la luz bajo gas inerte. Almace-
riana u otra enzima adecuada y aproximadamente nar la Preparacin oleosa en un lugar fresco y la Prepara-
25 mg de butil hidroxitolueno. Agregar 2,5 ml de hi- cin slida a temperatura ambiente controlada.
drxido de amonio diluido (2 en 1 00) en agua y mez- ETIQUETADO: Etiquetar indicando el nombre y el conte-
clar. Colocar en un bao ultrasnico a 50 durante 1 O nido de antioxidantes y sustancias inertes agregadas. Eti-
minutos, rotar el matraz ocasionalmente para evitar que quetar indicando si el artculo se prepar con licopeno de
el material se pegue a la superficie de vidrio y continuar origen natural o sinttico. Si se prepar con licopeno de
hasta que el material se haya dispersado sin grumos. origen natural, etiquetar indicando la fuente natural, in-
Agregar 5 ml de tetrahidrofurano, 40 ml de alcohol cluyendo su nombre cientfico en latn.
deshidratado y mezclar. Colocar en un bao ultrasnico ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
durante aproximadamente 1 minuto. Enfriar a tempera- ER Licopeno USP
tura ambiente y diluir con terc-butil metil ter a volu-
men. Agitar vigorosamente y luego de1ar que el precipi-
tado sedimente. Filtrar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621), Aptitud del Sistema.) Extracto de Tomate con Licopeno
Modo: HPLC
Detector: UV 472 nm DEFINICIN
Columna: 4,6 mm x. 25 un, relleno LG2 de S ~tm; una El Extracto de Tomate con Licopeno es un extracto de ace-
segunda columna conectada en serie, de 4,6 mm x tato de etilo de los lpidos naturales del tomate. Se pro-
25 cm, relleno L62 de 3 pm. [NOTA-Las columnas duce a partir de la pulpa de frutos maduros de Lycopersi-
nuevas pueden requerir acondicionamiento.] con esculentum Mili. (~am. Solanaceae), despus de
6552 Licopcno / Suplt>mPntO\ DiP/Pfi( m
eliminr lil fraccin de tomate hidrosoluble. Contiene no
menm de 95,0% y no ms de l 05,0% de la cantidad
declarada de licope~o ~C::40H11). Contiene no menos de
4,70,;, y 11u 111as oe 12,U'Yo de 11copeno (L40H,6), no menos
de 0,8% de IJ cJnti(fad combinada de fitoflueno (C10HGs)
y fitoeno (C40HM), no menos de 0,2% de beta caroteno
(C40Hs6) y no menos de 1,0% de tocoferoles (C28H4802),
con respecto a la sustancia anhidra. Los tocoferoles se
pueden agregar como antioxidantes.
IDENTIFICACIN
A. PRESENCIA DE LICOPENO, FITOFLUENO Y FITOENO
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de otros Carotenoides y Tocoferoles.
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de
los picos de licopeno, fitoflueno y fitoeno de la Solucin
muestra, corresponden a los de la Solucin estndar C.
B. RELACION DE LICOPENO TODO E Y LICOPENO SZ
Solucin madre de butil hidroxitolueno: Proceder se-
gn se indica en la prueba de Contenido de Licopeno.
Fase mvil: Diisopropiletilamina al 0,05% en n-hexano;
someter a ultrasonido durante 3-4 minutos.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en la
prueba de Contenido de Licopeno, excepto que se debe
diluir 5 a 100 con n-hexano.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Vis 472 nm
Columna: Dos de 4,0 mm x 25 cm; r~lleno L3 de 5
m (con un tamao de poro de 300 A), conectadas en
serie
Temperatura de la columna: 22
Velocidad de flujo: 0,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
[NOTA-El pico de licopeno todo E eluye en 30-45
minutos.]
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para lico-
peno todo E y licopeno 5Z son 1,00 y dentro del inter-
valo 1,04-1, 1O, respectivamente.]
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Medir las reas de los dos picos principales y calcular
el cociente de sus reas:
Resultado = r111/r112
r111 = rea del pico de licopeno 5Z
rw = rea del pico de licopeno todo E
Criterios de aceptacin: No ms de O, 1O para el co-
ciente de sus reas
COMPOSICIN
CONTENIDO DE LICOPENO
Solucin madre de butil hidroxitolueno: 5 mg/mL de
butil hidroxitolueno en cloruro de metileno. [NOTA-
Esta solucin se puede almacenar protegida de la luz
durante hasta 3 meses.]
Fase mvil: Acetonitrilo, cloruro de metileno, n-hexano
y metano! (850:25:25:100). Agregar diisopropiletilamina
al 0,05%, mezclar y someter a ultrasonido durante 3-4
minutos.
Diluyente: Acetonitrilo, cloruro de metileno, n-hexano,
butil hidroxitolueno y metano! (600: 150:100:0,5:150).
Agregar diisopropiletilamina al 0,05%, mezclar y some-
ter a ultrasonido durante 3-4 minutos.
Solucin estndar A: Transferir una cantidad pesada de
ER Licopeno USP, equivalente a aproximadamente 5 mg
de licopeno, a un matraL volumtrico de 100 ml. Agre-
gar aproximadamente 60 unidades de preparacin de
proteasa alcalina bacterian u otra enzima adecuada y
aproximadamente 25 mg de butil hidroxitolueno. Agre-
gar 2,5 mL de hidrxido de amonio diluido en agua (2
en 100), mezclar y colocar en un bao ultrasnico a
50 durante 1O minutos, rotando el matraz ocasional-
USP 38
mente, para evitar que se adhiera rnaleri<ll d la superfi-
cie del vidrio. Continuar hasta que el material se dis-
perse y no contenqa qrumos. Aqreqar 5 mL de
tetrahidrofurano y agitar hasta que no quede ningn
p1ecipilado de coior. /\gregur otrJ porc1on de 2 mL de
tetrahidrofurano y 40 mL de Diluyente, y agitar hasta
que la mezcla sea homognea. Diluir con Diluyente a
volumen, agitar vigorosamente y dejar en reposo, si
fuera necesario, hasta gue sedimente el slido.
Calcular la concentracion exacta de esta solucin me-
diante el si9uiente mtodo.
Solucin estandar B: Agregar 1O mL de alcohol y
1 O mL de Solucin madre de butil hidroxitolueno a 2,0 mL
de Solucin estndar A y diluir con n-hexano hasta
100 ml. Preparar por triplicado.
Determinar la absorbancia de la Solucin estndar B a la
absorbancia mxima a aproximadamente 472 nm,
usando una mezcla de alcohol, Solucin madre de butil
hidroxitolueno y n-hexano (1O:10:80) como blanco.
Calcular la concentracin de Solucin estndar A, en
g/mL, de licopeno:
Resultado = (Ax/ F) x 50 000
Ax = absorbancia promedio de las tres
preparaciones de la Solucin estndar B
F = absortividad de licopeno puro en n-hexano a
472 nm, 345
Solucin estndar C: Transferir una cantidad pesada de
ER Extracto de Tomate con Licopeno USP, equivalente a
aproximadamente 6 mg de licopeno, a un matraz volu-
mtrico de 1 00 mL y disolver en 1 mL de Solucin ma-
dre de butil hidroxitolueno y 9 mL de cloruro de meti-
leno, usando un sonicador. Diluir con Diluyente a
volumen hasta obtener una solucin con una concen-
tracin conocida de aproximadamente 0,06 mg/mL de
licopeno.
Solucin madre de la muestra: Entibiar el Extracto de
Tomate con Licopeno a 50 en un bao de agua. Re-
volver bien con una varilla de vidrio o una esptula.
Pesar y disolver una cantidad de 1-1,2 g de la muestra
en 1 O mL de Solucin madre de butil hidroxitolueno y
30 mL de cloruro de metileno, y someter a ultrasonido
la solucin durante 1 minuto para disolver la muestra
completamente. Enfriar a temperatura ambiente y diluir
con cloruro de metileno hasta 100 mL.
Solucin muestra: Diluir la Solucin madre de la mues-
tra con Diluyente (1 en 1 O).
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Vis 472 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7 de 5 m
Temperatura de la columna: 39 1
Velocidad de flujo: 0,7 mL/min
Volumen de inyeccin: 1O pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar A
[NOTA-El tiempo de retencin de licopeno es aproxi-
madamente 6 minutos.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 1,5% para
el rea del pico de licopeno
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A o Solucin estndar C y
Solucin muestra
Medir las respuestas de los picos principales de
licopeno.
Calcular el porcentaje de licopeno en la porcin de
Extracto de Tomate con Licopeno tomada:
Resultado= (ru/r,) X e X (V/W) X D X 100
ru = JrCil del pico de licopeno de la Solucin
muestra
USP 38
ro = irPa cif'I pico de licopeno de la Solucin
eslmlur A u de la Solucin estndar C
Cs = concentracin de licopeno en la Solucin
<:sti1du1 A o en la Solucin e~tndar C
(g/mL)
V = volumen de Solucin madre de la muestra (mL)
W = peso de Extracto de Tomate con Licopeno
tomado para preparar la Solucin madre de la
muestra (mg)
O = factor de dilucin usado para preparar la
Solucin muestra a partir de Solucin madre
de la muestra
Criterios de aceptacin: No menos de 95,0%-no ms
de 105,0% de la cantidad declarada de licopeno; no
menos de 4,7%-no ms de 12,0% de licopeno (C40Hs6)
CONTENIDO DE OTROS CAROTENOIDES Y TOCOFEROLES (FITO-
FLUENO, FITOENO, BETA CAROTENO Y TOCOFEROLES)
Solucin madre de butil hidroxitolueno, Diluyente,
Solucin estndar A, Solucin estndar B, Solucin
estndar C y Solucin muestra: Proceder segn se
indica en la prueba de Contenido de Licopeno.
Fase mvil: Acetonitrilo, cloruro de metileno, n-hexano
y metano! (19:1 :1 :19). Agregar diisopropiletilamina al
0,05%, mezclar y someter a ultrasonido durante 3-4
minutos.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Vis; a 472 nm para licopeno; a 450 nm para
beta caroteno; a 350 nm para fitoflueno y a 288 nm
para fitoeno y tocoferol
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 39 l
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar C
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos son aproxi-
madamente 0,6 para los ismeros de tocoferol;
1,0 para licopeno todo E; 1,5-1,7 para los ismeros de
beta caroteno; 1,6-1,8 para los isomeros de fitoflueno
y 1,8-2,2 para fitoeno.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar C es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto de
Tomate con Licopeno USP usado.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% para
licopeno todo E
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A y Solucin muestra
Localizar los picos de los ismeros de licopeno, de
beta caroteno, de fitoflueno y el pico de fitoeno me-
diante comparacin con el cromatograma de referen-
cia provisto con el lote correspondiente de ER Ex-
tracto de Tomate con Licopeno USP. Medir la suma
de las respuestas de los picos de los ismeros de lico-
peno a 472 nm en la Solucin estndar A. [NOTA-Los
ismeros de licopeno pueden resolverse en ms de
un pico en este sistema cromatogrfico.] En la Solu-
cin muestra, medir la suma de las respuestas de los
picos de los ismeros de beta caroteno a 450 nm, la
suma de las respuestas de los picos de los ismeros
de fitoflueno a 350 nm, la respuesta del pico de fi-
toeno a 288 nm y la suma de las respuestas de los
picos de todos los tocoferoles a 288 nm.
Determinar la concentracin de Solucin estndar A,
segn se indica en la prueba de Contenido de
Licopeno.
Calcular el porcentaje de beta caroteno en la porcin
de Extraclo de Tomate cun Licopenu lu111ada:
Resultado= (r11/r1) X e X (V/W) X o X F X 100
Suplementos Dietticos! Licopeno 6553
r" = suma de las respuestas de los picos de los
ismeros de beta carotcno a 450 nm de la
Soluc1on muestra
r, - ea del pico de licopcno a 472 nm de la
Solucin estcindar A
Cs = concentracin de licopeno en la Solucin
estndar A (g/mL)
V = volumen de Solucin madre de la muestra (ml)
W = peso de Extracto de Tomate con Licopeno
tomado para preparar la Solucin madre de la
muestra (mg)
O = factor de dilucin usado para preparar la
Solucin muestra, a partir de la Solucin
madre de la muestra
F = cociente entre las absortividades de licopeno
puro y beta caroteno puro, 345/259,2
Calcular el porcentaje de fitoflueno en la porcin de
Extracto de Tomate con Licopeno tomada:
Resultado= (ru/rs) x C1 x (V/W) x O x Fx 100
ru = suma de las respuestas de los picos de los
ismeros de titotlueno a 350 nm de la
Solucin muestra
rs = suma de las respuestas de los picos de los
ismeros de licopeno a 472 nm de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de licopeno en la Solucin
estndar A (g/ml)
V = volumen de Solucin madre de la muestra (mL)
W = peso de Extracto de Tomate con Licopeno
tomado para preparar la Solucin madre de la
muestra (mg)
O = factor de dilucin usado para preparar la
Solucin muestra, a partir de la Solucin
madre de la muestra
F = cociente entre las absortividades de licopeno
puro y fitoflueno puro, 345/135
Calcular el porcentaje de fitoeno en la porcin de
Extracto de Tomate con Licopeno tomada:
Resultado = (ru/ r,) x Cs x (V/ W) x O x F x 100
ru = rea de la respuesta del pico de fitoeno a 288
nm de la Solucin muestra
rs = suma de las respuestas de los picos de los
ismeros de licopeno a 472 nm de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de licopeno en la Solucin
estndar A (g/ml)
V = volumen de Solucin madre de la muestra (ml)
W = peso de Extracto de Tomate con Licopeno
tomado para preparar la Solucin madre de la
muestra (mg)
O = factor de dilucin usado para preparar la
Solucin muestra, a partir de la Solucin
madre de la muestra
F = cociente entre las absortividades de licopeno
puro y fitoeno puro, 345/125
Calcular el porcentaje de tocoferoles en la porcin de
Extracto de l omate con Licopeno tomada para
preparar la Solucion muestra:
Resultado= (ru/r,) X e X (V/W) X oX F X 100
ru = suma de las respuestas de todos los picos de
tocoerol a 288 nm de la Solucin muestra
rs = suma de las respuestas de los picos de los
ismeros de licopeno a 472 nm de la
Solucin estndar A
C1 = concentracin de licopeno en la Solucin
estndar A (pg/mL)
V = volumen de Solucin madre de la muestra (ml)
 USP 38

W = peso de Extracto de Tomate con Licopeno 450x. Hacer un barrido del portaobjetos y anotar el ta-
tomJdo pJrJ prepJrar la Solucin madre de fu ma1 Je las partculas inuividuales.
muestra (mg) Criterios de aceptacin: No menos de 98% de las par-
O fJctor de d!luc:n u~Jdo puu fJCfJ<l<lr IJ tculas tienen w1ct iu11l:JiluJ i11fe1iu1 ct 20 p111 cuamio se
Solucin rnuP.\fro, il rilrtir OP I ')nl11cin miden a lo largo del eje ms largo. no menos de 60%
madre de la muestra de las partculas tienen una longitud inferior a 5 pm y
F = cociente entre la absortividad de licopeno no menos de 40% de las partculas tienen una longitud
puro y la absortividad promedio de los inferior a 2 pm.
tocoferoles, 345/8,5
Criterios de aceptacin: No menos de 0,8% de la can- REQUISITOS ADICIONALES
tidad combinada de fitoflueno (C40H6s) y fitoeno ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
(CoHM), no menos de 0,2% de beta caroteno (C40Hs6) permeables y resistentes a la luz. Almacenar en un lugar
y no menos de 1,0% de tocoferoles (C2sH4s2), con res- fresco.
pecto a la sustancia anhidra ETIQUETADO: Etiquetar indicando el contenido de lico-
peno como un porcentaje y que el material se debe ca-
CONTAMINANTES lentar a 50 y mezclar antes de usar. Etiquetar indicando
el nombre cientfico en latn y la parte de la planta de la
qufi' se obtuvo el artculo.
Eliminar lo siguiente: ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Licopeno USP
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231 ): No ms de 1og/ ER Extracto de Tomate con Licopeno USP
9 (9ficial 01-dk2015) , .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxmas
(561 ): No ms de 4 ng/ g del total de aflatoxinas B1,
B2,, Gl y G2; no ms de ,2 ng/g de aflatoxina Bl
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos .
Aceite de Semilla de Lino
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to- [8001-26-1 ].
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 3 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y DEFINICIN
levaduras no excede de 2 x 102 ufc/g. El Aceite de Semilla de Lino se obtiene a partir de semillas
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- de lino o linaza (Linum usitatissimum L.). El aceite se ex-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la trae de las semillas duras y diminutas mediante prensado
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Pseudomo- en fro y luego se refina. No se usan disolventes ni calor
nas aeruginosa. externo en el proceso de extraccin. No contiene sustan-
cias agregadas.
PRUEBAS ESPECFICAS
TRANSPARENCIA DE LA SOLUCIN IDENTIFICACIN
Anlisis: Entibiar la muestra a 50' en un bao de agua. A. Cumple con los requisitos de Pruebas Esp,ecficas en
Revolver bien con una varilla de vidrio o una esptula y Grasas y Aceites Fijos (401 ), Composicin de Acidos Grasos.
transferir 1 g de Extracto directamente a un matraz vo-
lumtrico de 1 00 ml. Agregar 50 mL de cloruro de me- IMPUREZAS
tileno y someter a ultrasonido la solucin durante 1 mi- GRASAS Y ACEITES FIJOS, Trazas de Metales (401): Cumple
nuto para disolver completamente la muestra. Llevar a con los requisitos para arsnico, plomo, mercurio y
temperatura ambiente y diluir con cloruro de metileno cadmio.
a volumen.
Criterios de aceptacin: La solucin es transparente: PRUEBAS ESPECFICAS ,
no se forma depsito ni turbidez. GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Acidez (401): No ms
de 2,0 ,
GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401 ): No ms
Cambio en la redaccin: de 2,0 ,
GRASAS y ACEITES FIJOS, (ndice de Yodo (401): 150-165
v1scoSIDAD-MTODOS ROTATORIOS (912). 01-may-2015)
(AF GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Saponificacin (401 ):
Anlisis: Equilibrar el Extracto de Tomate con Licopeno 180-190
a 37 en un vial de vidrio de 30 mL. Determinar la vis- GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401): No
cosidad usando un viscosrnetro rotatorio equipado con ms de 1, 1 ,
un vstago (N' 6) que tenga un cilindro de 1,47 cm de GRASAS y ACEITES FIJOS, Composicin de Acidos Grasos
dimetro y O, 16 cm de altura acoplado a un eje de (401): El Aceite de Semilla de Lino presenta el perfil de
0,32 cm de dimetro, con una distancia de 3,02 cm composicin de cidos grasos de la Tabla 7.
desde la parte superior del cilindro a la punta inferior
del eje. El vstago gira a la velocidad y profundidad de Tabla 1
inmersin adecuadas para obtener una lectura de escala ~----------T - -A~~Lt~i-n - - ----P-o-rc-e-;:;-ta_j_e___ _
del 1 0%-90% de la escala total. Calcular la viscosidad,
en centipoises, multiplicando la lectura de la escala por f---__c_id_o_G_r_a_so___+-- .... Abreviada_______ (%)
la constante del vstago y la velocidad usada. cido palmtico 16:0 2 0-7 5
Criterios de aceptacin: No ms de 5000 cent~oises cido esterico 18:0 1 0-6 O
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo la (921 ): No mas de cido oleico 18: 1 12 0-24 O
0,8% cido linoleico 18:2 11 0-23 O
DISTRIBUCIN DEL TAMAO DE PARTCULA
cido u-linolnico 18:3 50 0-65 O
(Ver Microscopia ptica <716).)
Anlisis: Transferir 1 gota a un portaobjetos para mi- NDICE DE REFRACCIN (831/: 1 .460-1 .490 a 20'
croscopio y esparcir uniformemente. Se puede usar iso-
propanol como diluyente, si fuera necesario. Examinar REQUISITOS ADICIONALES
el portaobjetos bajo un microscopio equipado con un ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
micrmetro ocular calibrado, usando un aumento de cerrados, impermeables y resistentes a la luz.
USP 38 Suplementos Dietticos / Lipoico 6555

IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281 ): Menos de 0, 11!/u
cido Alfa Lipoico
Eliminar lo siguiente:

METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de

s s
1 O ppm (Oficial QJ .dic2D) 5)
PUREZA CROMATOGRAFICA, PROCEDIMIENTO 1
CsH1402S2 206, 33 Solucin amortiguadora, Fase mvil, Solucin estn-
Thioctic acid; dar, Soluci~ mue.str~ y Sistema cro~atogrfico:
~cido 1,2-ditiolano-3-pentanoico; Proceder segun se indica en la Valoracion.
Acido 1,2-ditiolano-3-valrico [1077-28-7]. Solucin estndar diluida: Diluir la Solucin estndar (1
en 1000) con Fase mvil.
DEflNICIN Aptitud del sistema
El Acido Alfa Lipoico contiene no menos de 99 0% y no ms Muestra: Solucin estndar diluida
de 1 01,0% de CsH 142S2, calculado con respecto a la sus- Requisitos de aptitud
tancia seca. Relacin seal-ruido: No menos de 1O
Desviacin estndar relativa: No ms de 1 O 0%
IDENTIFICACIN Anlisis '
A. El tiemRc;> de retencin del pico del cido alfa lipoico Muestra: Solucin muestra
d~ la Solum~n muestra corresponde al de la Solucin es- CaiCLlar el porcentaje de cada impureza en la porcin
tandar, segun se obtienen en la Valoracin. de Acido Alfa Lipoico tomada:
B. ABSORCION EN EL INFRARROJO (l 97K)

VALORACIN
Resultado = (ru/ rr) x 100
PROCEDIMIENTO ru = respuesta del pico de cada impureza individual
Solucin amortiguadora: 0,68 g/L de fosfato monob- de la Solucin muestra
sico de potasio r, = suma de las respuestas de todos los picos de
Fa~e mvil: Met~nol, Solucin amortiguadora y acetoni-
la Solucin muestra
tnlo (58:46:9). Ajustar con solucin de cido fosfrico Criterios de aceptacin
(8,3 _e,n 100~ a un pH de 3,0-3, 1. , Impurezas individuales: No ms de O 1 %
Soluc1on estandar: 1,0 mg/ml de ER Acido Alfa Lipoico Impurezas totale~: No ms de 2,0% '
USP en Fase mvil PUREZA CROMATOGRAFICA, PROCEDIMIENTO 2
Solucin muestra: 1,0 mg/ml de cido Alfa Lipoico en [NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica.]
Fase mvil Soll!cin estndar A: 40,0 mg/ml de ER cido Alfa Li-
Sistema cromato!;.Jrfico po1co USP en dimetilformamida
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.) Solucin estndar B: 20,0 mg/ml de ER cido Alfa Li-
Modo: HPLC po1co USP en dimetilformamida, a partir de Solucin es-
Detector: UV 215 nm tndar A
Columna: 4,6 mm x 250 mm; relleno L1 Soll!cin estndar C: 1 0,0 mg/ml de ER cido Alfa Li-
Temperatura de la columna: 35 po1co USP en dimetilformamida, a partir de Solucin es-
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min tndar B
Volumen de inyeccin: 20 L Solucin muestra: 40,0 mg/ml de cido Alfa Lipoico
Aptitud del sistema en dimetilformamida
Muestra: Solucin estndar Sistema cromatO!;,Jrfico
Requisitos de aptitud (Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
Eficiencia de la columna: No menos de 1O 000 pla- gada.)
tos tericos Modo: TLC
Factor de asimetra: No ms de 2 O para el pico de Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
cido alfa lipoico ' matografa de 0,25 mm
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0% para Volumen de aplicacin: 5 L
cido alfa lipoico ' Fase. m?vil: Alcohol n-proplico, acetato de etilo, agua
Anlisis e h19rox1do de amonio al 25% (40:40:10:5). Dejar que
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra la camara se sature durante al menos 1 hora.
Calcular el porcent9je de cido alfa lipoico (C 8 H140 7 S2) Cma~a saturada con vapor de yodo: Transferir 4 g
en la porcin de Acido Alfa Lipoico tomada: de cristales de yo,do a un vidrio de_ reloj pequeo y
cc;>locar en una camara cromatograf1ca. Dejar que la
Resultado= (ru/rs) x (C1/Cu) x 100
camara se sature durante al menos 2 horas.
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra Anlisis
rs = respuesta del pico de )a Solucin estndar Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B So-
C = concentracin de ER Acido Alfa Lipoico USP en lucin estndar C y Solucin muestra '
la Solucin estndpr (mg/ml) Proceder segn se indica en el captulo, excepto que se
Cu = concentracin de Acido Alfa Lipoico en la debe desarrollar hasta que el frente de la fase movil
Solucin muestra (mg/ml) haya recorrido 1 O cm. Retirar la placa y dejar que se
Criterios de aceptacin: 99,0%-101,0% con respecto seque al aire hasta que el amoniaco desaparezca por
a la sustancia seca completo. Calentar a 50 durante 20 minutos, enfriar
la placa y colocarla en la Cmara saturada con vapor
de yodo hasta que las manchas se tornen visibles. El
valor Rr de la mancha del cido alfa lipoico es
0,25-0,30 y el de la mancha del cido lipoico polim-
nco es O.
Criterios de aceptacin: Ninguna mancha diferente de
la mancha de cido alfa lipoico de la Solucin muestra,
6556 Lipoico / SuplPmr>ntos DiPthicos
es ms intensa que la mancha al valor Rf = O de la
.~oluuon estandar A.
PRUEBAS ESPECFICAS
INTERVA,LO 9 TEMPERATURA DE FUSIN (741): 60,0-62,0
ROTACION OPTICA, Rotac1on lspeotica ,(781 S)
Solucin muestra: 50 mg/ml de Acido Alfa Lipoico en
alcohol deshidratado
Criterios de aceptacin: -1,0 a + 1,0
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra al vaco a
40 durante 3 horas: pierde no ms de 0,2% de su peso.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
ESTl)IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Alfa Lipoico USP
cido Alfa Lipoico, Cpsulas PRUEBAS DE DESEMPEO
DEFINICIN
Las Cpsulas de cido Alfa Lipoico contienen no menos de
90,0% y no ms de 115,0% de la cantidad declarada de
CsH142S2.
IDENTIFICACIN
El tiempo de retencin del pico principal de la Solucin
muestra corresponde al de la Solucin estndar, segn se
obtienen en la prueba de Contenido de Acido Alfa Lipoico.
CONTENIDO
CONTENIDO DE CIDO ALFA LIPOICO
Fase mvil: cido fosfrico 0,025 M y acetonitrilo
(62:38) , con una concentracin esperada de 0,02 mg/ml cido
Solucin estndar: 0,05 mg/ml de ER Acido Alfa Li-
poico USP en acetonitrilo y agua (1 :1)
Solucin muestra A (para Cpsulas de gelatina dura):
Vaciar y mezclar el contenido de no menos de 20 Cp-
sulas. Transferir una porcin del polvo, equivalente a
100 mg de cido alfa lipoico, a un recipiente adecuado.
Agregar 70 ml de una mezcla de acetonitrilo y agua
(1 :1 ), y agitar mecnicamente durante 45 minutos.
Transferir a un matraz volumtrico de 100 ml, diluir
con la mezcla de acetonitrilo y agua (1 :1) a volumen, y
filtrar una porcin de esta preparacin, desechando los
primeros 5 ml del filtrado. Transferir 5,0 ml del filtrado
remanente a un matraz volumtrico de 100 ml y diluir
con acetonitrilo y agua (1 :1) a volumen.
Solucin muestra B (para Cpsulas de gelatina blanda):
Usando un instrumento cortante adecuado, abrir un n-
mero contado de Cpsulas equivalente a 500 mg de
cido alfa lipoico. Transferir el contenido y las cubiertas
a un recipiente adecuado con tapn, agregar 500,0 ml
de una mezcla de acetonitrilo y agua (1: 1), y agitar
mecnicamente durante 45 minutos. Filtrar una porcin
de esta preparacin, desechando los primeros 5 ml del
filtrado. Transferir 5,0 ml del filtrado remanente a un
matraz volumtrico de 100 ml y diluir con acetonitrilo
y agua (1:1) a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 3, 9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1 300 platos
tericos
USP 38
Factor de asimetra: No ms de 1,2 para cido alfa
lipoico
Desviacin estndar relativa: No ms de 1,0/c,
Anlisis
Muestras: Solu<inn estndar y Solucin muestra
apropiada
Calcular el porcentaje de cido alfa lipoico en la por-
cin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 1 00
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra A o
Solucin muestra B
rs = respuesta del pico de Ja Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Acido Alfa Lipoico USP en
la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de cido alfa lipoico en
la Solucin muestra A o Solucin muestra B
(mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-115,0%
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolucin
Medio: Agua; 900 ml
Aparato 1 (para Cpsulas de gelatina dura): 100 rpm
Aparato 2 (para Cpsulas de gelatina blanda): 75 rpm
Tiempo: 60 min ,
Solucin estndar: 1 mg/ml de ER Acido Alfa Lipoico
USP en una mezcla de acetonitrilo y agua (1 :1). Diluir
con agua para obtener una concentracin de 0,02 mg/
ml.
Solucin muestra: Retirar una porcin de la solucin
en anlisis y filtrar, desechando la primera porcin del
filtrado. Transferir una alcuota a un matraz volumtrico
y diluir con agua a volumen para obtener una solucin
alfa lipoico.
Fase mvil y Sistema cromatogrfico: proceder segn
se indica en la prueba de Contenido de Acido Alfa
Lipoico.
Volumen de inyeccin: 50 L
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de cido alfa lipoico (CsH142S2)
disuelto:
Resultado = (ru/rs) X (V X c X D/L) X 1 00
ru = rea del pico de la Solucin muestra
r5 = rea del pico de la Solucin estndar
V =volumen de Medio de, disolucin, 900 ml
C = concentracin de ER Acido Alfa Lipoico USP en
la Solucin estndar (mg/ml)
D = factor de dilucin de la muestra
L = cantidad declarada de cido alfa lipoico
(mg/Cpsula)
Tolerancias: No menos de 70% de la cantidad decla-
rada de CsH142S2.
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
USP 18
EST~DARES DE REFERENCIA USP ( 11)
l::R Ac1do Alfa L1po1co LJ)P
cido Alfa Lipoico, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de cido Alfa Lipoico contienen no menos de
, 90,0% y no ms de 115,0% de la cantidad declarada de
C8H1402S,.
IDENTIFICACIN
El tiempo de retencin del pico principal de la Solucin
muestra corresponde al de la Solucin estndar, segn se
obtienen en la prueba de Contenido de Acido Alfa Lipoico.
CONTENIDO
CONTENIDO DE CIDO ALFA LIPOICO
Fase mvil: cido fosfrico 0,025 M y acetonitrilo
(62:38)
Solucin estndar: 0,05 mg/ml de ER cido Alfa Li-
poico USP en acetonitrilo y agua (1 :1)
Solucin muestra: Transferir el equivalente a 1 00 mg
de cido alfa lipoico, a partir de no menos de 20 Table-
tas reducidas a polvo fino, a un recipiente adecuado.
Agregar 70 ml de una mezcla de acetonitrilo y agua
(1 :1 ), y agitar mecnicamente durante 45 minutos por
medios mecnicos. Transferir a un matraz volumtrico
de 100 ml, diluir con la mezcla de acetonitrilo y agua
(1 :1) a volumen, y filtrar una porcin de esta prepara-
cin, desechando los primeros 5 ml del filtrado. Trans-
ferir 5,0 ml del filtrado remanente a un matraz volum-
trico de l 00 ml y diluir con acetonitrilo y agua (1 :1) a
volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 1 300 platos
tericos
Factor de asimetra: No ms de 1,2 para cido alfa
lipoico
Desviacin estndar relativa: No ms de 1,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cido alfa lipoico (C8HH02S2) en la porcin de Table-
tas tomada:
Resultado = (r11/r1) x (C,/C11) x 100
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
r1 = respuesta del pico de )a Solucin estndar
C = concentracin de ER Acido Alfa Lipoico USP en
la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de cido alfa lipoico en
la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-115,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Disolucin
Suplrn1entos Dietticos / Lisina 655 7
Medio: Agua; 900 ml
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min ,
Solucin madre del estndar: l mgmL de ER Acido
Alfa lipoirn USP rn tmJ mr1clJ rlr Jcrtonitrilo y agua
(1 : 1)
Solucin estndar: 0,02 mg/ml, a partir de Solucin
madre del estndar en agua
Solucin muestra: Retirar una porcin de la solucin
en anlisis y filtrar, desechando la primera porcin del
filtrado. Transferir una alcuota a un matraz volumtrico
y diluir con agua a volumen para obtener una solucin
con una concentracin esperada de 0,02 mg/ml cido
alfa lipoico.
Fase mvil y Sistema cromatogrfico: proceder segn
se indica en la prueba de Contenido de Acido Alfa
Lipoico.
Volumen de inyeccin: 50 pl
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de cido alfa lipoico (CsH142S2)
disuelto:
Resultado = (ru/rs) X (V X eX D/L) X 100
r,, = rea del pico de la Solucin muestra
r, = rea del pico de la Solucin estndar
V =volumen de Medio de, disolucin, 900 ml
C = concentracin de ER Acido Alfa Lipoico USP en
la Solucin estndar (mg/ml)
D = factor de dilucin de la muestra
L = cantidad declarada de cido alfa lipoico
(mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 70% de la cantidad decla-
rada tje cido alfa lipoico (CsH142S2).,
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
ETIQUETADO: Cuando las Tabletas son recubiertas, as lo
ind)ca el etiquetado.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Alfa Lipoico USP
Acetato de Lisina-ver Acetato de Lisina en
Monografas Generales
Clorhidrato de Lisina-ver Clorhidrato de
Lisina en Monografas Generales
Clorhidrato de Lisina, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Clorhidrato de Lisina contienen no menos
de 90,0% y no ms de 120,0% de la cantidad declarada
de CoH ,4 N 2 02 HCI, como clorhidrato de L-lisina.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Soluci>n estndar: 0,4 mg/ml de ER Clorhidrato de L-
Lisina USP en agua
Solucin muestra: Una solucin filtrada en agua, equi-
valente J 0,4 mg/ml de clorhidrato de li~ina, a partir de
Tabletas reducidas a polvo.
6558 Lisina / Suplrn1Pntos DiPf Pli< m USP 38

Sistema cromatogrfico
(Ver Cromarograw <. 621 ), Cromatogralta en Capa Del-
gada.) Lutena
Muu: TLC
Adsorbentc: CJpJ dr grl OP -;lice riirii cromatog1afa
de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 1 O L
Fase mvil: Alcohol isoproplico e hidrxido de amo- ~!().,,,,.., CH

nio (70: 30)

Solucin reveladora: 2 mg/ml de ninhidrina en una
mezcla de alcohol butlico y cido actico 2 N (95:5)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar la placa y secar a 100- l 05' hasta que el
amonaco desaparezca por completo. Rociar con Solu-
cin reveladora y calentar a 100- l 05 durante 15 mi-
nutos. Observar la placa bajo luz blanca.
Criterios de aceptacin: El valor R, de la mancha prin-
cipal de la Solucin muestra corresponde al de la Solu-
cin estndar.
CONTENIDO
PROCEDIMIENTO
Muestra: Una porcin del polvo, a partir de no menos
de 20 Tabletas reducidas a polvo fino, equivalente a
75 mg de clorhidrato de lisina
Blanco: Proceder segn se indica en Anlisis omitiendo
la Muestra.
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Acido perclrico O, 1 N SV
Deteccin del punto final: Potenciomtrica o visual ,
Anlisis: Disolver la Muestra en 5 ml de acetato mercu-
rico SR, con calentamiento suave. Enfriar y luego agre-
gar 50 ml de cido actico glacial. Cuando sea necesa-
rio, agregar 3 gotas de cristal violeta SR. Valorar con
Solucin volumtrica. Realizar una determinacin con el
Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada. c;Je clor-
hidrato de L-lisina (C6H14N202 HCI) en la porc1on de
Muestra tomada:
Resultado = {[(V1 - Va) x N x F]/W} x 100
Vs = volumen de Solucin volumtrica consumido
por la Muestra (ml)
Vil = volumen de Solucin volumtrica consumido
por el Blanco (mL) ., , .
N = normalidad real de la SoluC1on volumetnca
(mEq/mL)
F =factor de equivalencia, 91,33 mg/mEq_.
W = cantidad nominal de clorhidrato de L-lis1na en
la Muestra tomada (mg)
Criterios de aceptacin: 90,0-120,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos de Desintegracin.
Tiemp9: 20 min ..
VARIACION DE PESO <2091): Cumplen con los requ1s1tos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Clorhidrato de L-Lisina USP
C0Hs602 568,87
(3+Carotene-3,3'-diol (3R,3'R,6'R) [127-40-2].
DEFINICIN
La Lutena es la fraccin purificada que se obtiene de la
saponificacin de la oleorresina de Tagetes erecta L. Con-
tiene no menos de 80,0% de caroteno1des totales calcula-
dos como lutena (C40Hs62). Contiene no menos de
74,0% de lutena y no ms de 8,5% de zeaxantina, am-
bos calculados como lutena (C0Hs602), con respecto a la
sustancia anhidra.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL ULTRAVIOLETA VISIBLE (197U)
Intervalo de longitud de onda: 300-700 nm
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solu-
cin muestra en la prueba de Contenido de Carotenoides
Totales.
Criterios de aceptacin: Cumple con los requisitos del
captulo. El cociente de absorbancia entre A446/ A474 es
1,09-1, l 4.
B. El tiempo de retencin del pico prin~]pal d~ la Solu-
cin muestra corresponde al de la Soluc1on estandar, se-
gn se obtienen en la prueba de Contenido de Lutena.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CAROTENOIDES TOTALES
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica_.]
Diluyente: Hexanos, acetona, tolueno y alcohol deshi-
dratado (10:7:7:6)
Solucin madre de la muestra: 0,3 mg/ml de Lutena
en Diluyente
Solucin muestra: 3,0 g/ml de Lutena en alcohol
deshidratado, a partir de la dilucin de Solucin madre
de la muestra
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Longitud de onda analtica: 446 nm
Blanco: Alcohol deshidratado
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Calcular el porcentaje de carotenoides totales (T),
como lutena (C40Hs602), en la porcin de Lutena
tomada:
Resultado = A/(F x C)
A = absorbancia de la Solucin muestra
F = coeficiente de extincin (E i''") de lutena en
alcohol (100 ml g 1 cm 1), 2550
C = concentracin de lutena en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de acep):acin: No menos de 80,0%
CONTENIDO DE LUTEINA
Fase mvil: Hexano y acetato de etilo (3:1)
Solucin estndar: 150 g/ml de ER Lutena USP en
Fase mvil
Solucin muestra: Transferir 1 mL de la Solucin madre
de la muestra de la prueba de Contenido de Carotenoides
Totales y evaporar bajo una corriente de nitrgeno
hasta sequedad. Agregar 1 ml de Fase mvil y someter
a ultrasonido hasta disolver.
Sistema cromato9rfico . .
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38 "iur1ll:'rrwnlm [)if:'!i:;;, u\/ lule11c1 6559

Modo: HPLC IMPUREZAS

Detector: UV-Vis a 446 nm RESIDUO DE INCINERACIN (281): No mas de 2,0%
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L3 de 5 m PLOMO (251 ): No ms de 1 ppm
Velocidad de tlujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema Eliminar lo siguiente:
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para lutena METALES PESADOS, Mtodo 11 (231 ): No ms de
y zeaxantina son aproximadamente 1,0 y 1,05, 5 ppme (Oficial Ol-dic-2015)
respectivamente.] PRUEBAS ESPECFICAS
Requisitos de aptitud DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo I (921): No ms de
Resolucin: No menos de 1,0 entre lutena y 1,0%
zeaxantina
Factor de asimetra: No ms de 2,0 REQUISITOS ADICIONALES
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases se-
Anlisis llados hermticamente y resistentes a la luz y al oxgeno.
Muestra: Solucin muestra Aln:iacenar en un lugar fresco.
Calcular el porcentaje del pico de lutena como el rea ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
total detectada en la porcin de Lutena tomada: ER Lutena USP
Resultado = (ru! r,) x 100
ru = respuesta del pico de lutena
rr = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptacin: No menos de 85% Lutena, Cpsulas
Calcular el porcentaje de lutena en la porcin de Lu-
tena tomada: DEFINICIN
Las Cpsulas de Lutena contienen no menos de 95,0% y no
Resultado = (ru/ rr) x T ms de 130,0% de la cantidad declarada de lutena
(C40Hs602). Pueden contener no ms de 9% de zeaxantina
ru = respuesta del pico individual del contenido de carotenoides totales.
rr = suma de las respuestas de todos los picos
T = porcentaje de carotenoides totales, segn se IDENTIFICACIN
determina en la prueba de Contenido de A. ABSORCIN EN EL ULTRAVIOLETA (197U)
Carotenoides Totales Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
Criterios de aceptacin: No menos de 74,0% de lu- muestra en la prueba de Contenido de Carotenoides
tena con respecto a la sustancia anhidra Totales.
ZEAXANTINA Y OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS Intervalo de longitud de onda: 300-700 nm
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica.] Relacin: A446/ A474, 1,09-1, 14
Fase mvil, Solucin estndar, Solucin muestra y Sis- B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
tema cromatogrfico: Proceder segn se indica en cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
Contenido de Lutena. gn se obtienen en la prueba de Contenido de Lutena y
Anlisis Zeaxantina.
Muestra: Solucin muestra
COMPOSICIN
Calcular el porcentaje de zeaxantina como el rea total
detectada en la porcin de Lutena tomada: CONTENIDO DE CAROTENOIDES TOTALES
Diluyente: Hexanos, acetona, tolueno y alcohol deshi-
Resultado = (ru! rr) x 1 00 dratado (10:7:7:6)
Solucin madre de la muestra: Pesar no menos de 1 O
ru = respuesta del pico de zeaxantina Cpsulas en un frasco de pesada tarado. Con ayuda de
rr = suma de las respuestas de todos los picos una cuchilla afilada u otro medio adecuado, abrir cuida-
Criterios de aceptacin: No ms de 9,0% dosamente las Cpsulas, sin perder el material de la cu-
Calcular el porcentaje de zeaxantina en la porcin de bierta y transferir tanto como sea posible del contenido
Lutena tomada: combinado de las Cpsulas a un recipiente adecuado.
Retirar cualquier sustancia adherida a las Cpsulas vacas
Resultado = (ru! r,) x T y los residuos de las cubiertas lavando con varias por-
ciones pequeas de n-hexano. Desechar los lavados y
ru = respuesta del pico de zeaxantina dejar que las cubiertas de las Cpsulas vacas y los res-
rr = suma de las respuestas de todos los picos tos de las cubiertas se sequen en una corriente de aire
T = porcentaje de carotenoides totales, segn se seco hasta que el olor a n-hexano sea imperceptible.
determina en la prueba de Contenido de Pesar las cubiertas de las Cpsulas vacas y los restos de
Carotenoides Totales las cubiertas en el frasco de pesada tarado original y
Calcular el porcentaje de otros compuestos relacionados calcular el peso neto promedio por Cpsula por diferen-
en la porcin de Lutena tomada: cia. Disolver una porcin pesada con exactitud del con-
tenido combinado de las Cpsulas en Diluyente mez-
Resultado = (ru/ rr) x 100 clando con una barra magntica durante 30 minutos y
diluir con Diluyente hasta un volumen desi9nado para
ru = respuesta del pico individual de cualquier otro obtener una solucin con una concentracion nominal
pico en el cromatograma (excluyendo de 0,2 mg/ml de lutena.
zeaxantina y lutena) Solucin muestra: Diluir una porcin de la Solucin ma-
rr = suma de las respuestas de todos los picos dre de la muestra con alcohol deshidratado para prepa-
Criterios de aceptacin: No ms de 8,5% de zeaxan- rar una solucin con una concentracin nominal de
tina; no ms de 1,0% de cualquier otro compuesto re- 2,0 g/ml de lutena.
lacionado individual con respecto a la sustancia anhidra Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
6560 Lutem / Suplementos Dietticos
Longitud de onda analtica: 446 nrn
Paso de celda: 1 un
Blanco: Alcohol de'.>hidralado
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Calcular el contenido de carotenoides totales como lu-
Lena (C40Hs602), ( T), en mg/Cpsula, en las Cpsulas
tomadas:
Resultado = [(A X D X V)!(F X VV)]
A absorbancia de la Solucin muestra
=
D dilucin para obtener la Solucin muestra, a
=
partir de la Solucin madre de la muestra
V = volumen de la Solucin muestra (mL)
F = absortividad de la lutena en alcohol, 255,0
(mL/mg cm)
W = peso del contenido de las cpsulas para
preparar la Solucin madre de Ja muestra
(mg)
Aw = peso promedio del contenido de las cpsulas
(mg/Cpsula)
CONTENIDO DE LUTEINA Y ZEAXANTINA
Fase mvil: Hexano y acetato de etilo (3:1)
Solucin estndar: 150 g/rnL de ER Lutena USP en
Fase mvil
Solucin muestra: Transferir 1 mL de Solucin madre de
la muestra de la prueba de Contenido de Carotenoides
Totales y evaporar bajo una corriente de nitrgeno
hasta sequedad. Agregar 1 mL de Fase mvil y someter
a ultrasonido hasta disolver.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis a 446 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L3 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para lutena
y zeaxantina son aproximadamente 1,0 y 1,05,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,0 entre lutena y
zeaxantina
Factor de asimetra: No ms de 2,0
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de lu-
tena en las Cpsulas tomadas:
Resultado= [(ru!rr) x 7] x (100/L)
ru = respuesta del pico de lutena
( e= suma de las respuestas de todos los picos
T = contenido de carotenoides totales segn se
determinaron en la prueba de Contenido de
Carotenoides Totales (mg/Cpsula)
L = cantidad declarada de lutena (mg/Cpsula)
Calcular el porcentaje de zeaxantina con respecto al
contenido de carotenoides totales en las Cpsulas
tomadas:
Resultado= (r//r1) x 100
rz = respuesta del pico de zeaxantina
r; suma de las respuestas de todos los picos
= a volumen. Agregar una barra magntica y mezclar du-
Criterios de aceptacin: 95,0%-130,0% de la cantidad
declarada de lutena; no ms de 9,0% de zeaxantina en
el contenido de carotenoides totales
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040): Cumplen con los requisitos de Desintegracin.
USP 38
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: Etiquetar indicando la cantidad de lutena y
la <;antidad de zeaxantina por Cpsula.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
X Aw ER Lutena USP
Lutena, Preparacin
DEFINICIN
La Preparacin de Lutena es una combinacin de Lutena
con una o ms sustancias inertes. Puede presentarse en
forma slida o lquida. Contiene no menos de 95,0% y no
ms de 1 30,0% de la cantidad declarada de lutena, cal-
culada como C40Hso02 con respecto a la sustancia anhi-
dra. Contiene no menos de 85,0% de lutena y no ms
de 9,0% de zeaxantina, ambos con respecto al contenido
de carotenoides totales.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL ULTRAVIOLETA (197U)
Longitud de onda analtica: 300-700 nm
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Contenido de Carotenoides
Totales.
Cociente: A446/A474, 1,09-1,14
B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en la prueba de Contenido de Lutena.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CAROTENOIDES TOTALES
Diluyente: Hexanos, acetona, tolueno y alcohol deshi-
dratado (10:7:7:6)
Solucin madre de la muestra A (para preparaciones
slidas de lutena que declara contener gelatina):
Transferir una cantidad de Preparacin, equivalente a
3,5 mg de lutena, a un tubo de centrfuga de 50 mL.
Agregar 15 mL de agua tibia, 60 unidades de prepara-
cin de proteasa alcalina bacteriana y 1 mg de brome-
lina. Tapar y someter a ultrasonido durante 20 minutos
agitando por rotacin suave ocasionalmente. Enfriar a
temperatura ambiente y agregar 20,0 mL de cloruro de
metileno. Agitar durante 1 minuto y centrifugar durante
5 minutos a 2000 rpm. Retirar la fase acuosa superior y
agregar 2-3 g de sulfato de sodio anhidro a la capa roja
remanente.
Solucin madre de la muestra B (para otras preparacio-
nes slidas de lutena): Transferir una cantidad de Pre-
paracin, equivalente a 1,5 mg de lutena, a un tubo de
centrfuga de 50 mL. Agregar 15 mL de agua tibia, ta-
par, y someter a ultrasonido durante 30 minutos agi-
tando por rotacin suave ocasionalmente. Enfriar a tem-
peratura ambiente y agregar 30,0 mL de acetato de
etilo y 2-3 g de cloruro de sodio. Agitar durante 1 mi-
nuto y centrifugar durante 5 minutos a 2000 rpm. Usar
la capa superior de color rojo anaranjado.
Solucin madre de la muestra C (para suspensiones l-
quidas de lutena en aceite): Transferir una cantidad
pesada de Preparacin equivalente a 20 mg de lutena a
un matraz volumtrico de 100 mL y diluir con Diluyente
rante 30 minutos.
Solucin muestra: Transferir 1,0 mL de Solucin madre
de la muestra A o 1,0 mL de Solucin madre de Ja mues-
tra 8 o 1,0 mL de Solucin madre de la muestra Ca un
matraz volumtrico de 100 mL, y diluir con alcohol des-
hidratado a volumen.
USP 38 Suplenwnlm Dietli< ri\ / Maunf'~io 6.'i61

Condiciones espectromtricas rr = suma de las respuestas de todos los picos

(Ver Espectrofotometra y Dispersion de Luz (851 ).) Calcular el porcentaje de luteina en la Preparacion
Longitud de onda analtica: 446 nm tomada:
Paso de celda: 1 cm
Blanco: Alcohol deshidratado Resultado -=- (r,,/r,) x T
Anlisis
Muestra: Solucin muestra ru = respuesta del pico individual de lutena en la
Calcular el porcentaje de carotenoides totales (T) Solucin muestra
como lutena (CoHs602) en la Preparacin: rr = suma de las respuestas de todos los picos
T = porcentaje de carotenoides totales segn se
Resultado = (A x V x D x 100)/(F x W) determina en la prueba de Contenido de
Carotenoides Totales
Criterios de aceptacin: No menos de 85,0% de lu-
A = absorbancia de la Solucin muestra tena en el contenido de carotenoides totales, y la Pre-
F = absortividad de la lutena en alcohol, 255,0 paracin contiene 95,0%-1 30,0% de la cantidad decla-
(mL/mg cm) rada de lutena, calculada como C4oHs607, con respecto
V = volumen de disolvente orgnico (20,0 mL para a la sustancia anhidra.
la Solucin madre de la muestra A, 30,0 mL ZEAXANTINA Y OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS
para la Solucin madre de la muestra B y Disolvente, Fase mvil, Solucin estndar, Solucin
100,0 mL para la Solucin madre de la muestra y Sistema cromatogrfico: Proceder segn
muestra C) usado en la preparacin de las se indica en la prueba de Contenido de Lutena.
Soluciones madre de la muestra Anlisis
D = factor de dilucin usado para preparar la Muestra: Solucin muestra
Solucin muestra a partir de las Soluciones Volumen de inyeccin: 1 O L
madre de la muestra Calcular el porcentaje de zeaxantina relativa a los caro-
W = peso de la Preparacin tomada para preparar tenoides totales en la Preparacin tomada:
las Solus:iones madre de la muestra (mg)
CONTENIDO DE LUTEINA Resultado = (ru/rT) x 100
Diluyente: Hexanos, acetona, tolueno y alcohol deshi-
dratado (10:7:7:6) ru = respuesta del pico individual de zeaxantina
Fase mvil: Hexano y acetato de etilo (75:25) rT = suma de las respuestas de todos los picos
Solucin estndar: 150 g/mL de ER Lutena USP en Criterios de aceptacin
Fase mvil Zeaxantina: No ms de 9,0%
Solucin muestra: Transferir 1,0 mL de Solucin madre Cualquier otro compuesto relacionado individual:
de la muestra A o 1,0 mL de Solucin madre de la mues- No ms de 1,0%
tra B o 2,0 mL de Solucin madre de la muestra C de la Compuestos relacionados totales (incluyendo zeaxan-
prueba de Contenido de Carotenoides Totales a un vial tina): No ms de 15,0%
adecuado. Evaporar el disolvente hasta sequedad bajo
una corriente de nitrgeno. Agregar 1,0 mL de Fase m- IMPUREZAS
vil y someter a ultrasonido hasta disolver. Impurezas lnorgnica,s
RESIDUO DE INCINERACION (281): No ms de 2,0%
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) PLOMO (251): No ms de 1 ppm
Modo: HPLC
Detector: UV 446 nm Eliminar lo siguiente:
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L3 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min . METALES PESADOS (231): No ms de 10 ppme (ficrar 01-drc-
Volumen de inyeccin: 1 O L 201si
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar PRUEBAS ESPECFICAS
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para lutena DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo I (921 ): No ms de
y zeaxantina son aproximadamente 1,0 y 1,05, 10,0%
respectivamente.]
Requisitos de aptitud REQUISITOS ADICIONALES
Resolucin: No menos de 1,0 entre lutena y ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases se-
zeaxantina llados hermticamente y resistentes a la luz y al oxgeno.
Factor de asimetra: No ms de 2 Almacenar en un lugar fresco.
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% ETIQUETADO: La etiqueta indica que este artculo no est
Anlisis destinado para su administracin directa en humanos o
Muestras: Solucin muestra animales.
Calcular el porcentaje de lutena relativa a los carote- ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
noides totales en la Preparacin tomada: ER Lutena USP

Resultado = (ru/rr) x 100

ru = respuesta del pico individual de lutena
6562 Maqnesio / Suplementos Dietticos
Gluconato de Magnesio-ver Gluconato
de Magnesio en Monografas Generales
Gluconato de Magnesio, Tabletas-ver
Gluconato de Magnesio, Tabletas en
Monografas Generales
xido de Ma9nesio, Cpsulas-ver xido
de Magnesio, Capsulas en Monografas
Generales
xido de Magnesio, Tabletas-ver xido
de Magnesio, Tabletas en Monografas
Generales
Gluconato de Manganeso-ver Gluconato
de Manganeso en Monografas Generales
Hierro, Carbonilo-ver Hierro, Carbonilo en
Monografas Generales
Hojas del rbol de Nuez de Malabar
DEFINICIN
Las Hojas del rbol de Nuez de Malabar, tambin conocidas
comercialmente como vasaka, consisten en las hojas secas
de justicia adhatoda L., tambin conocida como Adhatoda
vasica Nees (Fam. Acanthaceae). Contiene no menos de
0,6% de vasicina, calculado con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIN , metanol. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
A. Las Hojas del Arbol de Nuez de Malabar cumplen con
los requisitos de Pruebas Especficas, Caractersticas Botni-
cas. , ,
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Vasicina USP en
metanol. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
necesario.
Solucin estndar B; 50 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
metanol. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solucin mue~tra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar, reducidas a
polvo fino y pesadas con exactitud, a un matraz de
fondo redondo de 250 mL equipado con un condensa-
dor de reflujo. Agregar 50 mL de metanol, someter a
reflujo en un bao de agua durante 15 minutos, enfriar
a temperatura ambiente y decantar el sobrenadante.
Repetir hasta que el ltimo extracto )e tome incoloro.
Combinar los extractos, filtrar, concentrar al vaco y
ajustar el volumen hasta 25 mL usando metanol.
[NOTA-Reservar el filtrado para su uso en la prueba de
Contenido de Vasicina.]
USP 38
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamano promedio de part1cula de 10-15 m (placas
para TLC)
Voiumen de aplicacion: 1O L, en bandas de 4 mm
Fase mvil: U11d 111e1cla Je dcetalo Je etilo, metano! y
amonaco (8: 2: 0,2)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 ), Cromatografa en capa delgada). Usar
una cmara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido
aproximadamente tres cuartos de la longitud de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar y observar
bajo UV a 254 nm.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una zona de extincin a un valor
RF de aproximadamente O, 35 para vasicina, correspon-
diente a una zona en el cromatograma de la Solucin
estndar A. El cromatograma de la Solucin muestra
tambin presenta una zona de extincin adicional a un
valor RF de aproximadamente 0,53 para vasicinona, co-
rrespondiente a una zona similar en el cromatograma
de la Solucin estndar B. Se pueden observar otras zo-
nas menores en los cromatogramas de la Solucin mues-
tra y la Solucin estndar B.
C. HPLC: El cromatograma de la Solucin muestra de la
prueba de Contenido de Vasicina presenta un pico princi-
pal a un tiempo de retencin correspondiente al de vasi-
cina en el cromatograma de la Solucin estndar A. Iden-
tificar otros picos en la Solucin muestra por comparacin
con el cromatograma de la Solucin estndar B y el cro-
matograma de referencia proyisto con el lote de ER Ex-
tracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
USP usado. La Solucin muestra presenta un pico adicio-
nal correspondiente a vasicinona.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE VASICINA
Solucin amortiguadora: Disolver 1,36 g de fosfato
dicido de potasio anhidro en 900 mL de agua. Agregar
2,0 mL de cido fosfrico. Diluir con agua hasta
1000 mL y filtrar.
Fase mvil: Solucin amortiguadora, acetonitrilo y tetra-
hidrofurano (92:5:3)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Vasicina USP en
necesario.
Solucin estndar B; 5,0 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
metanol. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos. Antes de la inyeccin, pasar a travs
de un filtro de membrana con un tamao de poro de
0,45 m o menor.
Solucin muestra: Diluir la Solucin muestra, preparada
segn se indica en la prueba de Identificacin A (1 :5),
con metanol. Antes de la inyeccin, pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor y desechar la primera parte del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 O de 5 m
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 l
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA-Lo) tiempos de retencin relativos aproximados
de los picos de vasicina y vasicinona son 1,00 y 1,23,
respectivamente.]
USP 3R
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Soluoon estandar B es similar al cromatograma
de reterenc1a prov1slo con ei iote de ER Exlraclo e11
Polvo de Hojas del Arbol rle Nur1 dr Malabar USP
usado.
Resolucin: No menos de 2,0 entre los picos de vasi-
cina y vasicinona, Solucin estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de-
terminado a partir del pico de vasicina en inyecciones
repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar A, de
la Solucin estndar B y el cromatograma de referen-
cia provist9 con el lote de ER Extracto en Polvo de
Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP usado, iden-
tificar los tiempos de retencin de los picos corres-
pondientes a vasicina y vasicinona.
Calcular ~I porcentaje de vasicina en la porcin de Ho-
jas del Arbol de Nuez de Malabar tomada:
Resultado = (ru/ rs) x Cs x (V/ W) x 1 00
ru = respuesta del pico de vasicina de la Solucin
muestra
r1 = respuesta del pico de vasicina de la Solucin
estndar A
Cs concentracin de ER Vasicina USP en la
=
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen de la Solu~in muestra (mL)
W = peso de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
tomado para preparar la Solucin muestra
(mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,6% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS, Mtodo)// (231 >: No ms de 20 ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , necesario.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Hojas simples, de color verde a marrn
grisceo opaco, con pubescencia diminuta, lanceoladas
a ovado-lanceoladas, base ahusada y pice ligeramente
acuminado, de 10-20 cm de largo, 3-1 O cm de ancho,
con pecolos de 2~-8 cm de largo y 8-1 O pares de nerva-
duras laterales reticuladas; olor caracterstico y sabor
amargo. El artculo farmacopeico consiste en hojas se-
cas, partidas y de color marrn grisceo.
Histologa
Seccin transversal de las hojas: Las clulas epidrmi-
cas superiores son uniformes en tamao y con forma
sinuosa, mientras que las clulas epidrmicas inferiores
varan en tamao y son menos onduladas; 4-6 capas
de clulas colenquimticas debajo de la epidermis en
la regin de la nervadura central; presenta dos capas
de celulas en empali1ada con cistolitos alargados, los
cuales estn ausentes en las clulas epidrmicas ( carac-
terstica de diagnstico que no se observa en las hojas
eje Ailanthus excelsa, un adulterante de las Hojas del
Arbol de Nuez de Malabar); glbulos de aceite disper-
Suplementos Dietticos / MaL1bar 656 i
'>OS en capas espon1osas y en empalizada; numerosos
estomas diaclicos o a1101110Llicos; se observan trico-
mas, glandulares y no glandulares en ambas capas
, efJIUer 1111La>. .
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 q de Ho;is del Ar-
bol de Nuez de Malabar reducidas a polvo fino a 1OS
dur,ante 3 horas: pierde r;o m'> de 12,0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 >: '
No ms de 21 %, determinado en 1,0 g de Hojas del Ar-
bol, de Nuez de Malabar reducidas a polvo fino. .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561 ): No ms de 2%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11),
ER Extracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de
Malabar USP
ER Vasicina USP
Hojas del rbol de Nuez de Malabar en
Polvo
DEFINICIN
Las Hojas del rbol de Nuez de Malabar en Polvo son Hojas
del Arbol de Nuez de Malabar reducidas a polvo o a
polvo muy fino. Contienen no menos de 0,6% de vasi-
cina, calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. Las Hojas del rbol de Nuez de Malabar en Polvo
cumplen con los requisitos de Pruebas Especficas, Carac-
tensticas Botnicas .
B. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Vasicina USP en
metano!. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
Solucin estndar B; 50 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
metano!. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solucin mue~tra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar en Polvo, pesa-
dos con exactitud, a un matraz de fondo redondo de
250 mL equipado con un condensador de reflujo. Agre-
gar 50 mL de metano!, someter a reflujo en un bao de
agua durante 15 minutos, enfriar a temperatura am-
biente y decantar el sobrenadante. Repetir hasta que el
ltimo extracto se torne incoloro. Combinar los extrac-
tos, filtrar, concentrar al vaco y ajustar el volumen
hasta 25 mL usando metanol. lNorA-Reservar el fil-
trado para su uso en la prueba de Contenido de Vasi-
rina.]
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de partlcula de 10--15 pm (placas
para TLC)
Volumen de aplicacin: 1 O pi, en bandas de 4 mm
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metano! y
amonaco (8: 2: 0,2)
Anlisis
Muestras: Solucion estandar A, Solucin estandar By
Solucin muestra
6564 Malabar / Suplementos Dicteticos
Aplicar las. Muestras en banda~ a 1ma placa para cro-
matograf1a en capa delljada adecuada (ver Cromato-
grafw (621 ), Cromalografa en Capa Delgada). Usar
una c.'rnar..i s..itur..ida. Desarrullcit lu~ uurndlugramas
h<i~til ']Uf:' f:'I frente de !a fase mvil hava recorrido
aproximadamente tres cuartos de la Ingitud de la
placa. Retirar la placa de la cmara, secar y observar
bajo UV a 254 nm.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una zona de extincin a un valor
RF de aproximadamente 0,35 para vasicina, correspon-
diente a una zona en el cromatograma de la Solucin
estndar A. El cromatograma de la Solucin muestra
tambin presenta una zona de extincin adicional a un
valor R1 de aproximadamente 0,53 para vasicinona, co-
rrespondiente a una zona similar en el cromatograma
de la Solucin estndar B. Se pueden observar otras zo-
nas menores en los cromatogramas de la Solucin mues-
tra y la Solucin estndar B.
C. HPLC: El cromatograma de la Solucin muestra de la
prueba de Contenido de Vasicina presenta un pico princi-
pal a un tiempo de retencin correspondiente al de vasi-
cina en el cromatograma de la Solucin estndar A. Iden-
tificar otros picos en la Solucin muestra por comparacin
con el cromatograma de la Solucin estndar By el cro-
matograma de referencia proyisto con el lote de ER Ex-
tracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
USP usado. La Solucin muestra presenta un pico adicio-
nal correspondiente a vasicinona.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE VASICINA
Solucin amortiguadora: Disolver 1,36 g de ortofos-
fato dicido de potasio anhidro en 900 ml de agua de
grado HPLC. Agregar 2,0 ml de cido fosfrico. Diluir
con agua hasta 1000 ml y filtrar.
Fase mvil: Solucin amortiguadora, acetonitrilo y tetra-
hidrofurano (92:5:3)
Solucin estndar A: O, 1 mg/ml de ER Vasicina USP en
metano!. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
necesario.
Solucin estndar B; 5,0 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
metano!. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos. Antes de la inyeccin, pasar a travs
de un filtro de membrana con un tamao de poro de
0,45 m o menor.
Solucin muestra: Diluir la Solucin muestra, preparada
segn se indica en la prueba de Identificacin A (1 :5),
con metano!. Antes de la inyeccin, pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor y desechar la primera parte del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1O de 5 m
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
[NOTA---Los tiempos de retencin relativos aproximados
de los picos de vasicina y vasicinona son 1,00 y 1,23,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hoas del Arbol de Nuez de Malabar USP
usado.
Resolucin: No menos de 2,0 entre los picos de vasi-
cina y vasicinona, Solucin estndar B
USP 38
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de-
terminada a partir del pico de vasicina en inyecciones
repetidas, Solucion estandar A
Anlisis
Muestras: Soh1(/n t-_')l6udu1 A, Suucin e~lndar By
Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar A, de
la Solucin estndar By el cromatograma de referen-
cia provist9 con el lote de ER Extracto en Polvo de
Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP usado, iden-
tificar los tiempos de retencin de los picos corres-
pondientes a vasicina y vasicinona.
Calcular ~I porcentaje de vasicina en la porcin de Ho-
jas del Arbol de Nuez de Malabar en Polvo tomada:
Resultado = (ru/ r1) x Cs x (V/ W) x 100
r11 = respuesta del pico de vasicina de la Solucin
muestra
rs = respuesta del pico de vasicina de la Solucin
estndar A
C = concentracin de ER Vasicina USP en la
Solucin estndar A (mg/ml)
V = volumen de la Solu~in muestra (ml)
W peso de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
=
en Polvo tomado para preparar la Solucin
muestra (m<;)
Criterios de aceptacion: No menos de 0,6% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
METj\LES PESADOS, Mtodo)// (231): No ms de 20 ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 os ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 oi ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Polvo de color marrn ver-
doso; con olor caracterstico y sabor amargo. Al micros-
copio, presenta clulas parenquimticas con cistolitos
alargados; glbulos de aceite; clulas epidrmicas con
numerosos estomas diacticos o anomocticos, con trico-
mas rugosos glandulares y no glandulares, de 1 a 3 clu-
l9s y paredes delgadas. .
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Hojas del Ar-
bol de Nuez de Malabar en Polvo a 105 durante 3 ho-
ras:, pierde no ms de 12,0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561): .
No ms de 21 %, determinado en 1,0 g de Hojas del Ar-
bol de Nuez de Malabar en Polvo.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta contenida en el artculo.
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11),
ER Extracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de
Malabar USP
ER Vasicina USP
Extracto en Polvo de Hojas del rbol de
Nuez de Malabar
DEFINICIN , Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
El Extracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar
se prepara a partir de Hojas del Arbol de Nuez de Mala-
bar usando disolventes adecuados tales como a~ua, meta-
nol o una mezcla de estos disolventes. La relacion entre el
material vegetal y el extracto est entre 8:1 y 5:1. Con-
tiene no menos de 90,0% y no ms de 110,0% de la .
cantidad declarada de vasicina. Puede contener sustancias
agregadas adecuadas como portadores.
IDENTIFICACIN , 0,45 m o menor y desechar la primera parte del
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Vasicina USP en
metano!. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
necesario.
Solucin estndar B; 50 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP en
metano!. Someter a ultrasonido durante aproximada-
mente 15 minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Solucin m,uestra: 50 mg/mL de Extracto en Polvo de
Hojas del Arbol de Nuez de Ma_labar en metano!. _Some-
ter a ultrasonido durante aproximadamente 15 minu-
tos, centrifugar y usar, el sobrenadante. ,
Adsorbente: Gel de silice para cromatograf1a con un
tamao promedio de part1cula de 1 0-15 m (placas
para TLC)
Volumen de aplicacin: 1O L, en banda_s de 4 mm
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metano! y
amonaco (8: 2: 0,2)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 >, Cromatografa en Capa Delgada). Usar
una cmara saturada. Desarrollar los cromatogramas
hasta que el frente de la fase mvil haya recor~ido
aproximadamente tres cuartos de la placa. Retirar la
placa de la cmara, secar y observar bajo UV a 254
nm.
Criterios de aceptacin: El cromatogr!'lm.a_ de la Solu-
cin muestra presenta una zona de extin_c1on a un valor
RF de aproximadamente 0,35 para vas1c1na, corresp~m
diente a una zona en el cromatograma de la Soluoon
estndar A. El cromatograma de la Solucin muestra
tambin presenta una zona de extincin adi_ci_onal a un
valor RF de aproximadamente 0,53 para vas1c1nona, co-
rrespondiente a una zona similar en el cromatograma
de la Solucin estndar B. Se pueden observar otras zo-
nas menores en los cromatogramas de la Solucin mues-
tra y la Solucin estndar B.
B. HPLC: El cromatograma de la Solucin muestra d~ la_
prueba de Contenido de Va_~icina presenta. un pico pnno-
pal a un tiempo de retenc1on corresp?nd1e~te al de vas1-
cina en el cromatograma de la Soluoon estandar A. lde~
tificar otros picos en la Solucin muestra por comparac1on
con el cromatograma de la Solucin estndar By el cro-
matograma de referencia proyisto con el lote de ER Ex-
tracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Mala_b_ar
USP usado. La Solucin muestra presenta un pico ad1c10-
nal correspondiente a vasicinona.
Suplementos Dietticos / Malabar 6565
COMPOSICIN
CONTENIDO DE V ASICINA
Solucin amortiguadora: Disolver 1, 36 g de fosfato
dicido de potasio anhidro en 900 rllL Je ct~uct de
grado HPLC. Agregar 2,0 mL de cido fosfrico. Diluir
con agua hasta 1000 mL y filtrar. . .
Fase mvil: Solucin amortiguadora, aceton1tnlo y tetra-
hidrofurano (92:5:3)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Vasicina USP en
metano!. Someter a ultrasonido hasta disolver, si fuera
necesario.
Solucin estndar B; 5,0 mg/mL de ER Extracto en
metano!. Someter a ultrasonido durante aproximada- ,
mente 15 minutos. Antes de la inyeccin, pasar a traves
de un filtro de membrana con un tamao de poro de
0,45 m o menor.
Solucin muestra: 5,0 mg/mL de Extracto en _Polvo en
metano!. Someter a ultrasonido durante aproximada- ,
mente 15 minutos. Antes de la inyeccin, pasar a traves
de un filtro de membrana con un tamao de poro de
filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1O de 5 m
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistem_a , ., ,
Muestras: Solucion estandar A y Soluc1on estandar B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
de los picos de vasicina y vasicinona son 1,00 y 1,23,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de Malabar USP
usado.
Resolucin: No menos de 2,0 entre los picos de vasi-
cina y vasicinona, Solucin estndar B,
Desviacin estndar relativa: No mas de 2,0% de-
terminada a partir del pico de vasicina en inyecciones
repetidas, Solucin estandar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar A, de
la Solucin estndar By el cromatograma de referen-
cia provist9 con el lote de ER Extracto en Polvo d_e
Hojas del Arbol de Nuez de. ~alabar US_P usado, iden-
tificar los tiempos de retenc1on de los picos corres-
pondientes a vasicina y vasiciriona. .,
Calcular el porcentaje de vas1cina en la porc1on de Ex-
tracto en Polvo tomada:
Resultado= (r11/r,) x (C/C1) x 100
r,, = respuesta del pico de vasicina de la Solucin
muestra
rs = respuesta del pico de vasicina de la Solucin
estndar A
C = concentracin de ER Vasicina USP en la
Solucin estndar A (mg/mL) .
e,, = concentracin de Extracto en Polvo de Hoas
del rbol de Nuez de Malabar en la Solucin
muestra (mc/mL) .
Criterios de aceptacion: 90,0%-110,0% de la cantidad
declctr ctda Je vasicina
6566 Malabar / Suplementos Dietticos
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de
20 P,pme (Oficial Ol-dic-2015) ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Polvo a 1 05 durante 3 horas: pierde no ms de 5,0% de
su peso.
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botnicos
(565).
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artculo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11),
ER Extracto en Polvo de Hojas del Arbol de Nuez de
Malabar USP
ER Vasicina USP
Manzanilla
DEFINICIN
La Manzanilla se compone de captulos florales secos de Ma-
tricaria recutita L. (Matricaria chamomilla L., Matricaria cha-
momilla L. var. courrantiana, Chamomilla recutita L.) Raus-
chert (Fam. Asteraceae alt. Compositae). Contiene no
menos de 0,4% de aceite voltil azul, no menos de 0,3%
de apigenina-7-glucsido y no menos de O, 15% de deri-
vados de bisabolano, calculado como levomenol.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1,0 mg/mL de borneo!, 2,0 mg/mL
de acetato de bornilo y 0,4 mg/mL de guaiazuleno en
tolueno
Solucin muestra: Reducir 1,0 g de Manzanilla a polvo
grueso usando un mortero de porcelana. Transferir a
una columna cromatogrfica de 1,5 cm x 15 cm y api-
sonar suavemente con un manguito corto de goma. En-
juagar la mano de mortero y el mortero dos veces con
1 O mL de cloruro de metileno cada vez. Verter los en-
juagues en la columna. Recoger el percolado en un ma-
traz de cuello largo y estrecho, y eliminar el disolvente
mediante evaporacin en un bao de agua. Disolver el
residuo en 0,5 mL de tolueno.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm
Fase mvil: Cloroformo
Solucin reveladora: Mezclar anisaldehdo, cido ac-
tico glacial y metano! (0,5: 1 O: 85). Luego, agregar cui-
dado'>amente 5 mL de cido sultrico a esta solucin.
USP 38
Volumen de aplicacin: 1 O L, en bandas de 3 mm x
20mm
Anlisis
Muestras: ~oluoon estandar y Solucin muestra
Ohservar la placa bajo luz UV de longitud de onda
corta: la Solucin muestra presenta diversas zonas de
extincin, la mayor de las cuales se debe al en-in-
dicicloter y tiene el mismo valor Rr que la banda
debida al acetato de bornilo en la Solucin estndar.
Hay adems otra banda debida a la matricina cerca
de la lnea de aplicacin. Rociar la placa uniforme-
mente con la Solucin reveladora. Observar la placa
en luz diurna mientras se calienta a 100-l 05 du-
rante 5-1 O minutos. El cromatograma obtenido a
partir de la Solucin estndar presenta en el tercio in-
ferior una zona de color amarillo amarronado que se
torna gris violceo despus de unas pocas horas, lo
cual se debe al borneo!; en el medio, una zona de
color marrn amarillento a gris debida al acetato de
bornilo; y en el tercio superior una zona de color rojo
intenso con un borde azul debido al guaiazuleno.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
una zona azul debida a la matricina cerca del punto de
partida; varias zonas de color rojo violceo, una de las
cuales se debe al bisabolol, a valores Rr entre los de
borneo! y acetato de bornilo; una zona de color marrn
debida al en-in-dicicloter, a un valor Rr correspon-
diente al del acetato de bornilo; zonas de color rojo
debido a terpenos, a valores Rr similares a los del guaia-
zuleno; y otras zonas que aparecen en las partes media
e inferior del cromatograma.
B.
Anlisis: Disolver 0,25 g de dimetilaminobenzaldehdo
en una mezcla de 5 mL de cido fosfrico, 45 mL de
cido actico y 45 mL de agua. Transferir 2,5 mL de
esta solucin y O, 1 mL de la Solucin muestra, preparada
segn se indica en la prueba de Identificacin A, a un
tubo de ensayo. Calentar en un bao de agua durante
2 minutos y dejar que se enfre. Agregar 5 mL de ter
de petrleo y agitar.
Criterios de aceptacin: La capa acuosa tiene un color
azul verdoso o azul ntido.
COMPOSICIN
C9NTENIDO DE APIGENINA-7-GLUCSIDO
Acido fosfrico diluido: Mezclar 5,0 mL de cido fosf-
rico en 50 mL de a9ua. Diluir con agua hasta 100 ml.
Solucin A: Solucion de f9sfato monobsico de potasio
de 0,005 M. Ajustar con Acido fosfrico diluido a un pH
de 2,55 0,05.
Solucin B: Acetonitrilo y metano! (1 3:7)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
min ------ __ ___CT11L ... (%)
_____Q 74 26
---- ---------~
3 74 26
22 ~=t= 15 85
1
74 26
74 26
Solucin estndar: 25,0 g/mL de ER Apigenina-7-glu-
csido USP y 10,0 g/mL de 7-metoxicumarina en me-
tano! y agua (1: 1)
Solucion muestra: Transferir 1,0 g de Manzanilla a un
matraz adecuado equipado con un condensador de re-
flujo y un mezclador. Agregar 80,0 mL de metano! y
someter la mezcla a reflujo mPTclando durante 1 hora.
Enfriar el matraz a temperatura ambiente, pasar el ex-
tracto a travs de papel de filtro plegado y recoger el
filtrado en un matraz volumtrico de 100 mL. Enjuagar
el matraz con 3 mL de metano!, verter los enjuagues
USP 38 Suplcrncntos Dicttco5 / t\1JnzJni!!a 6567

metan>licos a travs del rape! de filtro y agregar el Tabla 2

----------
filtrado al matraz volumtrico. Diluir con metanol a vo- 1
Tiempo de
lumen y mezclar. Transferir 25,0 ml de la solucin fil-
1

i Espera 1

lrada ct ur1 rnctlrctL de or1du redu11Ju e4uiaJu cu11 u11

condensador de reflujo y un mezclador, agregar 5.0 ml
de solucin de hidrxido de sodio preparada disol-
viendo 0,4 g de hidrxido de sodio en 5,0 ml de agua,
y someter la mezcla a reflujo du~ante 25 minutos. ,En:
triar el matraz y ajustar la soluc1on con ac1do clorh1dnco
a un pH de 5,0-6,2. Trans!erir cuantitativamen.te la so-
lucin a un matraz volumetnco de 50 ml, d1lu1r con
metano! a volumen y filtrar, desechando los primeros
1O ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 335 nm
Columna: 4 mm x 12,5 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
[NOTA-Hacer ajustes, si fuera necesario, para obten~r
tiempos de retencin relativos de 0,63 para apigernna-
7-glucsido y 1,0 para 7-metoxirnmarina.]
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativo.s P!" apige-
nina-7-glucsido, 7-metoxicumanna, ap1gernna, trans-
espiroter y cis-espiroter son aproximadamente 0,63;
1,0; 1,2; 1,6 y 1,8, respectivamente.]
Requisitos de aptitud . .
Resolucin: No menos de 3,5 entre apigenina-7-glu-
csido y 7-metoxicumarina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
apigenina-7-glucsido
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
[NOTA-Dejar que la Solucin muestra eluya durante no
menos de 6 veces el tiempo de retencion de apige-
nina-7-glucsido.] . . , .
Calcular el porcentaje de ap1gernna-7-glucos1do en la
porcin de Manzanilla tomada:
Resultado~ (ru/r,) A e A (V/l!\/) A 100
ru = respuesta del pico de apigenina-7-glucsido
de la Solucin muestra
r1 = respuesta del pico de apigenina-7-glucsido
de la Solucin estndar
C =concentracin de ER Apigenina-7-glucsido
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
V = volumen de Solucin muestra (ml)
W = peso de Manzanilla tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,3%
CONTENIDO DE DERIVADOS DE BISABOLANO
Solucin estndar: 1 mg/ml de ER Levomenol USP en
ciclohexano
Solucin muestra: Transferir los aceites voltiles obteni-
dos en la prueba de Artculos de Origen Botnico (~61 ), CONTAMINANTES
Determinacin de Aceite Voltil a un matraz volumetnco
de 25 ml, enjuagar el tubo graduado del aparato con
una pequea porcin de ciclohexano, transferir el .en-
juague al matraz volumtrico de 25 ml, agregar C1clo-
hexano a volumen y mezclar.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la llama
Columna: Capilar, de slice fundida, de 0,32 mm x 30
m; recubierta con una pelcula de fase G 16 de 0,25
m PRUEBAS ESPECFICAS
Temperatura
Columna: Ver la Tabla 2.
(Hold Time) 1
Temperatura Rampa de Temperatura a la Tempe-~'
Inicial Temperatura Final r-a-tu- ra Final
1----'--'-----t------''-'-'/m=in""_L__+-_ _ l__.~)---+--~<m_in_)_ __
---- 70 --~-- 4 2_3Q__ -- - - _J_Q_ __
Detector: 250
Inyector: 220
Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 1,8 para levomenol
Desviacin estndar relativa: No mas de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Identificar los picos debi-
dos a levomenol xido de bisabolol B, xido de bisa-
bolol y xido de' bisabolol A en la Solucin muestra,
usando el tiempo de retencin de levome~ol en 1.a
Solucin estndar y los tiempos de rete~c1on relat1.vos
aproximados de 0,89; 0,97 y 1,1 para oxido de b1sa-
bolol B, xido de bisabolol y xido de bisabolol A,
respectivamente, con referencia al pico de levomenol.
Calcular el porcentaje de los derivados de bisabolano en
la porcin de Manzanilla tomada:
Resultado = (rrl rs) X e X (V/l!\/) X 100
rr = suma de las reas de los picos de xido de
bisabolol B, xido de bisabolol, levomenol y
xido de bisabolol A de la Solucin muestra
r_1 = rea del pico de levomenol de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Levomenol USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
V = volumen de Solucin muestra (ml)
W = peso de Manzanilla tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de O, 15%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Determinacin de Aceite
Voltil (561)
Anlisis: Proceder segn se indica, excepto que se debe
usar 60 g de Manzanilla reducida a polvo grueso como
muestra de prueba, un matraz de fondo redondo de
2 L, 300 ml de agua como lquido de destil~cin y
O 5 ml de xileno en el tubo graduado. Destilar durante
4' horas a una velocidad de 3-4 ml/minuto.
Criterios de aceptacin: Se encuentra no menos de .
O 4% de aceite voltil azul. [NOTA--Conservar los ace1-
t~s voltiles para usar en la prueba de Contenido de DP-
rivados de Bisaba/ano.]
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): E! recuento
bacteriano total no excede de 10' ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 1 oi ufc/g y el recuento de bacterias Gram-nega-
tivas tolerantes a la bilis no excede qe 10 1 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas .Pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonella SP,p. y Eschenchta colt.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: El captulo floral es semiesfrico, de
aproximadamente 6 mm de dimetro, compuesto. de
unas pocas florecillas radiadas, y numerosas florecillas
6568 Man1anilla / Sup!emenlos Dietticos
del disco que se encuentran sobre un receptculo ro-
deado por un involucro (la Matricaria discoidea se dife-
rencia por tener slo florecillas del disco). El involucro
es verde, formado por do:, o trc~ hiiera5 de brcteas
lanceoladas, glabra'> P imbricadas con pices redondea-
dos y bordes membranosos blanquecinos. Las florecillas
radiadas, que habitualmente se caen, tienen de
10-20 pistilos; la corola es ligulada y blanca, si bien se
oscurece a una longitud de 6 mm y a un grosor de
aproximadamente 2 mm, tiene 3 dientes y est atrave-
sada por cuatro nervaduras principales. Las florecillas
del disco son amarillas, perfectas, de aproximadamente
2 mm de longitud; la corola es tubular con cinco dien-
tes; cinco estambres son epiptalos y singensicos. El
receptculo es hueco (a diferencia de las especies de
Chrysantemum y Anthemis), semiesfrico en los captulos
florales jvenes y cnico en los ms viejos, tiene de
3-1 O mm de ancho y carece de pleas. El aquenio es
ovoide y tiene de tres a cinco nervaduras longitudinales.
Microscpicas: Separar el captulo en sus partes y exa-
minar al microscopio. La epidermis externa abaxial de
las brcteas del involucro presenta un margen membra-
noso con una capa simple de clulas elongadas radial-
mente y una parte central formada por tejido cloroflico
cubierto de clulas epidrmicas elongadas con paredes
laterales sinuosas, estomas y tricomas secretores. Los
haces vasculares estn rodeados de numerosas esclerei-
das elongadas y punteadas, con lmenes bastante gran-
des. En vista superficial, las corolas liguladas y tubulares
presentan clulas isodiamtricas o elongadas con pare-
des ms o menos onduladas y unos pocos tricomas
glandulares. La parte externa de la epidermis de las flo-
recillas liguladas se compone de clulas papilares con
cutcula estriada desde los extremos. En el mesfilo, al-
gunas veces se observan grupos muy pequeos de oxa-
lato de calcio. A lo largo de todo el mesfilo discurren
cuatro nervaduras principales, algunas veces acompaa-
das por una o dos nervaduras ms, que son ms cortas
y discurren paralelas a las nervaduras principales. Cada
una de las dos nervaduras medias principales se divide
en dos cerca del extremo y se anastomosan de dos en
dos con las nervaduras laterales para formar tres arcos
en los tres dientes terminales de la lgula. Los ovarios de
ambos tipos de florecillas son de formas ovales a esfri-
cas, y tienen en su base un anillo esclertico formado
por una hilera simple de clulas. La epidermis del ovario
est compuesta de clulas elongadas con paredes sinuo-
sas, entre las que se ubican tricomas secretores. Los
ovarios contienen grupos muy pequeos de oxalato de
calcio. En las florecillas tubulares, la parte inferior de
cada filamento estaminal est rodeada por clulas de
paredes gruesas. Los extremos de los dos estigmas po-
seen clulas epidrmicas papilosas. Los granos de polen
tienen un dimetro de aproximadamente 30 m y son
redondeados y triangulares, con tres poros germinales y
una exina espinosa.
FLORES PARTIDAS: No ms de 25% pasa a travs de un
tamiz de malla estndar N 25 (ver Estimacin de la Distri-
bucin del Tamao de Partcula por Tamizado Analtico
\78,6)). ' tograma de la Solucin muestra tambin presenta una
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561 ):
No ms de 13,0%, determinado en 1,0 g de Manzanilla
en polvo.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerradm. Proteger de la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta contenida en el artculo. El artculo est exento de
los requisitos de las Advertencias Generales con respecto a
la declaracin de embarazo y lactancia (seccin 1 0.40.50.
Etiquetado de Productos Botnicos).
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Apigenina-7-glucsido U':>P
ER Levomenol USP
Pino Martimo
DEFINICIN
El Pino Martimo consiste en la corteza de tallos de Pinus
pinaster Aiton (Pinus maritima Poir.) Fam. Pinaceae. Con-
tiene no menos de 8,0% y no ms de 12,0% de prociani-
dinas, calculado con respecto a la materia seca.
[NOTA-Este artculo est destinado solamente a la prepara-
cin de extractos y no para el consumo humano directo.]
IDENTIFICACIN
A. PRESENCIA DE PROCIANIDINAS
Muestra: Reducir a polvo 1 g de Pino Martimo seco.
Usar 1 O mg.
Anlisis: Agregar la Muestra a 1 mL de metanol y agre-
gar 6 mL de una mezcla de butanol y cido clorhdrico
(95:5). Calentar durante 2 minutos en un bao de
agua.
Criterios de aceptacin; La solucin se torn9 roja.
8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 25 mg/mL de ER Extracto de Pino
Martimo USP en alcohol
[NOTA-Reservar una porcin de esta solucin para usar
en la prueba de Identificacin C.]
Solucin muestra: Agregar 2 g de material seco redu-
cido a polvo a 20 mL de agua. Colocar en un bao de
agua durante 20 minutos y centrifugar. Extraer el sobre-
nadante con 40 mL de acetato de etilo. Evaporar la
capa de acetato de etilo hasta sequedad bajo una co-
rriente de nitrgeno, con calor suave. Disolver el resi-
duo as obtenido en 0,25 mL de alcohol.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 5 L
Fase mvil: Acetato de etilo, cido frmico y agua
(50:5:3)
Solucin reveladora: Alcohol y cido fosfrico (1 : 1)
que contenga 1% de vainillina.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas, secar la placa con ayuda
de una corriente de aire, rociar la placa con la Solucin
reveladora y calentar a 115 durante 15 minutos.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta tres bandas rojas que aparecen en
el tercio medio del cromatograma correspondientes a
dos procianidinas dimricas y catequina al mismo valor
R, de bandas similares en la Solucin estndar. El croma-
banda azul entre la banda superior debida a procianidi-
nas dimricas y la banda debida a catequina, al mismo
valor R1 de una banda similar encontrada en el croma-
tograma de la Solucin fStndar. ,
C. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar A: Usar la Solucin estndar, prepa-
rada segn se indica en la prueba de Identificacin B.
Solucin estndar B: 1 mg/mL de cido ferlico y de
cido protocatquico
Solucin muestra: Usar la Solucin muestra, preparada
segn se indica en la prueba de Identificacin B.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
USP 38
Adsorben!e t<'lr<'l rlP mP1cla de gel de slice para cro-
matogrdf1d de 0,25 1rnn
Volumen de aplicacin: 1 O L
Fd~e 1nvii: Clu1 ut u Je 111etileno, iT'1CtJnol, cido ac-
tico glacial y agua (80: 15:2:2)
Solucin reveladora: Solucin de cloruro frrico al 5%
en metano!
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Desarrollar el cromatograma, secar la placa a 11 O y
observar la placa bajo luz UV de longitud de onda
corta y larga. Los cromatogramas de la Solucin es-
tndar A y Solucin estndar B presentan bandas en el
~ercio medio y el tercio superior correspondientes a
ac1do protocatquico y cido ferlico, respectiva-
mente. Rociar la placa con la Solucin reveladora y
calentar a 115 durante 15 minutos. Las bandas debi-
das a cido ferC1lico y cido protocatquico se tornan
de color verde grisceo. Bandas de color verde gris-
ceo se hacen visibles en el cromatograma de la Solu-
cin estndar A por encima y por debajo del cido
protocatquico, indicando la presencia de cido ca-
feico y catequina, respectivamente.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta bandas debidas a catequina,
cido protocatquico, cido cafeico y cido ferlico que
corresponden en color y valores R1 a las del cromato-
grama de la Solucin estndar A y Solucin estndar B.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE PROCIANIDINAS
Solucin reactivo A: Butanol y cido clorhdrico (95:5)
[NOTA-Preparar esta solucin en el da de su uso.]
Solucin reactivo B: Disolver 2 g de sulfato frrico
amnico en una mezcla de 100 mL de agua y 17,5 mL
de cido clorhdrico. [NOTA-Esta solucin puede usarse
dentro de los 15 das desde su preparacin.]
Solucin estndar: 95 g/mL de procianidinas, a partir
de ER Extracto de Pino Martimo USP en metanol
Solucin madre de la muestra: Secar Pino Martimo
triturado a 11 O durante 3 horas. Colocar 1, 9 g del ma-
terial triturado en un vial de 20 mL y agregar 1 O mL de
metanol. Sellar el vial y someter a ultrasonido durante 2
minutos. Calentar en agua hirviendo durante 1 O minu-
tos. Enfriar a temperatura ambiente, dejar que se sedi-
mente y transferir el sobrenadante a un matraz volum-
trico de 100 mL, pasndolo a travs de un filtro con un
tamao de poro de 0,45 m. Lavar el sedimento dos
veces con 1 O mL de metanol y transferir la solucin al
mismo matraz volumtrico de 1 00 mL, pasndolo nue-
vamente a travs de un filtro con un tamao de poro
de 0,45 ~tm. Diluir con metanol a volumen.
Solucin muestra: Diluir la Solucin madre de la mues-
tra con metanol (1 en 20).
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometria y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda: 551 nm
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Transferir 1,0 mL de la Solucin estndar, de la Solucin
muestra y de metanol a sendos viales de 1 O mL. Agre-
gar a cada vial 6,0 mL de Solucin reactivo A y 0,25 ml
d_e Solucin reactivo B. Sellar los viales con tapas pre-
cintadas. Mezclar y calentar en un bao de agua du-
rante 40 minutos. Enfriar rpidamente a temperatura
ambiente en un bao de hielo. Transferir cuantitativa-
mente estas soluciones, con ayuda de Sofucion reactivo
A, a sendos matraces volumtricos de 1 O mL y diluir
con Solucin reactivo A a volumen.
Determinar la absorbancia de las soluciones obtenidas a
partir de la Solucin estndar y la Solucin muestra,
usando la solucin que contiene metanol como
blanco.
Suplpmpntm niPtPtirm .1 Pino Martimo 6569
Calcular el porcentaje de procianidinas totales en la por-
cin de Pino Martimo tomada:
PesultJcio ~ ( AJAJ " . x (VI W) x nx p
Au = dU'>ul bd11cid de Id '>lucion, a partir de la
Solucin muestra
= absorbancia de la solucin, a partir de la
Solucin estndar
= concentracin de ER Extracto de Pino
Martimo USP en la Solucin estndar
(mg/mL)
V = volumen de la Solucin madre de fa muestra
(mL)
w = peso de Pino Martimo tomado para preparar
la Solucin madre de fa muestra (mg)
o = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra a partir de Solucin madre de fa
muestra, 20
p = porcentaje de procianidinas en ER Extracto de
Pino Martimo USP
Criterios de aceptacin: 8,0%-12,0% con respecto a
la materia seca
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Los trozos de corteza tpicamente tie-
nen 1-3 cm de grosor. La corteza interna es plana a
levemente cncava, blanquecina a marrn claro, con ra-
yas longitud~nales; ,su superficie es br~llosa y ligeramente
irregular, y tiene solo unos pocos mil1metros de grosor.
Se observa un cambio abrupto en una secuencia de ca-
pas casi paralelas, duras y convexas, que se alternan
con capas lisas de color marrn claro. Se encuentran
hasta 50 o ms capas, segn la edad de la corteza. La
superficie externa de la corteza es de color marrn ro-
jizo oscuro y est compuesta por parches escamosos
irregulares, con fisuras profundas en forma de V. La su-
perficie externa tambin puede ser gris, verde griscea
o amarillo verdoso debido a la presencia de lquenes.
Microscpicas (seccin transversal de la corteza): La
corteza interna clara tiene rayas laterales irregulares for-
madas por 3-5 capas de clulas cribosas, delgadas y
largas, con paredes celulares horizontales con puntua-
ciones grandes y clulas parenquimticas poligonales
grandes que contienen un nico grnulo de almidn
redondeado e irregular, de 3-1 5 mm de ancho. Las ra-
yas laterales estn separadas entre s por clulas paren-
quimticas radiales. Las clulas parenquimticas radiales
tienen una apariencia homognea, con un ancho de
1-4 capas celulares y de 4-20 capas celulares de alto;
cada clula contiene un nico grnulo de almidn re-
dondeado e irregular, de 3-15 mm de ancho. Tambin
se encuentran celulas parenquimticas cilndricas de pa-
redes delgadas dispuestas en filas verticales con prismas
de oxalato de calcio. La parte exterior de la corteza
interna contiene clulas con forma de placa, de perider-
mis no diferenciada y peridermis ms antigua con ml-
tiples capas de felgeno. El felgeno desarrolla de 3-7
filas de sber hacia el exterior y de 2-4 filas de clulas
pequeas de felodermis hacid el interior. La parte ms
antigua y externa de la corteza est formada por seccio-
nes lignificadas de clulas de felodermis y de sber, de
15-35 mm de ancho, separadas por felgeno colap-
sado. Las clulas de felodermis y de sber miden hasta
100 mm de ancho y tienen forma cuadrada, rectangu-
lar, poligonal o irregular. Las paredes celulares son inco-
loras. Las clulas de felodermis son moderadamente
punteadas con un contenido marrn rojizo. Las paredes
del sber son ms gruesas, marcadamente punteadas,
de contorno ondulado y tienen un contenido marrn
amarillento a rojo amarronado. Entre las capas de felo-
dermis y sber se disponen en forma radial capas de
clulas parenquimticas radiales, de 5-8 clulas de es-
pesor, redondeadas a extendidas radialmente, con pare-
6570 Pino Martimo_/ Su1/ementos Dietticos USP 38

des delgada'>, marcadamente punteadas con clulas co- Criterios de aceptacin: El cromatoqrama de la Solu-
lapsadas y celulas cribo~as muertas. cin muestro pre-.enta bandas debidas a catequina,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgomco E:xtror?o cido protocatquico, cido cateico y cido ferlico que
1561\: Nn IT1<S de 5% Lu11e~por1lien en coior y valores 1<1 a las del cromato-
ARTCLOS DE ORIGEN BOTNICO, \ Pn7m Tnta/p, (561): gramJ de !J Snlurhln P"ltndo;- A y So!ur_it1 e.sjcndor B.
No tl1cl'> de 1,5% C. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Contenido de Aguo (561): DELGADA
No ms de 35,0/r, Solucin estndar: Usar la Solucin estndar A, prepa-
rada segn se indica en la prueba de Identificacin B.
REQUISITOS ADICIONALES Solucin muestra: Usar la Solucin muestra, preparada
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar a 25, con va- segn se indica en la prueba de Identificacin B.
riaciones permitidas entre 15 y 30. Conservar en un Sistema cromato9rfico
envase bien cerrado. Proteger de la humedad y del calor (Ver Cromatografw (621 ), Cromatografia en Capa Del-
excesivo. gada.)
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la matografa de 0,25 mm
pla,nta contenida en el artculo. Volumen de aplicacin: 5 L
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) Fase mvil: Acetato de etilo, cido frmico y agua
ER Extracto de Pino Martimo USP (50:5:3) '
Solucin reveladora: Acido fosfrico y alcohol (1 :1)
que contenga 1 % de vainillina
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Extracto de Pino Martimo Proceder segn se indica en el captulo, excepto que se
debe secar la placa con ayuda de una corriente de
DEFINICIN aire, rociar la placa con Solucin reveladora y calentar a
El Extracto de Pino Martimo se prepara a partir de Pino 115 durante 15 minutos. Aparecen tres bandas rojas
Martimo reducido a polvo usando disolventes adecuados. en el tercio medio del cromatograma de la Solucin
Contiene no menos de 65% y no ms de 75% de procia- estndar correspondientes a dos procianidinas dimri-
nidinas, calculado con respecto a la materia seca. cas y catequina. El cromatograma de la Solucin estn-
dar tambin presenta una banda azul entre la banda
IDENTIFICACIN superior debida a procianidinas dimricas y la banda
A. PRESENCIA DE PROCIANIDINAS debida a catequina.
Solucin muestra: Disolver 50 mg de Extracto en 6 mL Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
de una mezcla de butanol y cido clorhdrico (95:5). cin muestra contiene bandas que corresponden a las
Anlisis: Calentar durante 2 minutos en un bao de encontradas en el cromatograma de la Solucin
agua. estndar.
Criterios de aceptacin~ La solucin se torni roja. D. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA Solucin A: Metano!
DELGADA Solucin B: 1 mg/mL de cido fosfrico en agua
Solucin estndar A: 25 mg/mL de ER Extracto de Pino Fase mvil: Ver la Tablo 1.
Martimo USP en metano!
Solucin estndar B: 1 mg/ml. de cido ferlico y de Tabla 1
cido protocatquico en metano! -----Soluci-;;-A--
Solucin muestra: 25 mg/mL de Extracto en metano! Tiempo Solucin B
Sistema cromato9rfico (min) (%) (%)
(Ver Cromotograf10 (621 ), Cromatografa en Copo Del- o 8 92
gado.) 40 __}.!___ 66
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro- --
~--~5 2 --- 98
matografa de 0,25 mm
50 _________2_____ 98
Volumen de aplicacin: 5 L
Fase mvil: Cloruro de metileno, metano!, cido ac- 52 8 92 -
tico glacial y agua (80:15:2:2) 57 8 _L 92
Solucin reveladora: Solucin de cloruro frrico al 5%
en metano! Solucin estndar: 2 mg/mL de ER Extracto de Pino
Anlisis Martimo USP en Solucin A. Pasar a travs de una
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By membrana con un tamaro de poro de 0,45 pm o
Solucin muestra menor.
Desarrollar el cromatograma, secar la placa a 11 O y Solucin muestra: Agregar 20 mg de Extracto a 1 O mL
observar la placa bajo luz UV de longitud de onda de Soluc/On A y someter a ultrasonido durante 1 O minu-
corta y larga. Los cromatogramas de la Solucin es- tos para disolver. Pasar a travs de una membrana con
tndar A y Solucin estndar B pre'>entan bandas en el un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
tercio medio y el tercio superior correspondientes a los primeros 4 mL del filtrado.
cido protocatquico y cido ferlico, respectiva- Sistema cromato9rfico
mente. Rociar la placa con la Solucin reveladora y (Ver Cromalograf1a \621), Aptitud del Sistema.)
calentar a 115 durante 15 minutos. Las bandas debi- Modo: HPLC
das a cido ferlico y cido protocatquico se tornan Detector: UV 280 nm
de color verde grisceo. Bandas de color verde gris- Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 desactivado
ceo '>e hacen visibles en el cromatograma de la Solu- para bases, con un tamao de partcula menor de 5
cin estndar A por encima y por debajo del cido ~lm

prntocatquico, indicando la presencia de cido ca-

feico y catequina, respectivamente.

Temperatura de !a columna: 40c
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sster1ia . O
Muestra: )o/unon p)fonrior
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
es similar al cromatograma de referencia provisto con
el lote de ER Extracto de Pino Martimo USP usado.
Resolucin: No menos de 3,0 entre taxifolina y cido
ferlico
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para taxifolina
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Identificar los picos de catequina, cido cafeico, taxifo-
lina y cido ferlico por comparacin del cromato-
grama de la Solucin estndar con el cromatograma de
referencia.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta picos de catequina, cido c.afeico,
taxifolina y cido ferlico a los tiempos de retenc1on . ,
cor~espondientes a los del cromatograma de la Soluc1on
estandar.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE PROCIANIDINAS
Solucin reactivo A: Butano\ y cido clorhdrico (95:5)
[NOTA-Preparar esta solucin en el da de su ,us.o.]
Solucin reactivo B: Disolver 2 g de sulfato fernco
amnico en una mezcla de 100 mL de agua y 1 7,5 mL
de cido clorhdrico. [NOTA-Esta solucin puede usarse
dentro de los 15 das desde su preparacin.]
Solucin estndar: 95 g/mL de procianidinas, a partir
de ER Extracto de Pino Martimo USP en metano\
Solucin madre de la muestra: Transferir 250 mg de
Extracto a un matraz volumtrico de 100 ml. Disolver
con metano\ y diluir con el mismo disolvente a
volumen.
Solucin muestra: Diluir la Solucin madre de la mues-
tra con metano\ (1 en 20).
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 >.)
Modo: Vis
Longitud de onda: 551 nm
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Transferir 1,0 mL de la Solucin estndar, de la Solucin
muestra y de metano\ a sendos viales de 1 O ml. Agre-
gar a cada vial 6,0 mL de Solucin reactivo A y 0,25 mL
de Solucin reactivo B. Sellar los viales con tapas pre-
cintadas. Mezclar y calentar en un bao de agua du-
rante 40 minutos. Enfriar rpidamente a temperatura
ambiente en un bao de hielo. Transferir cuantitativa-
mente estas soluciones, con ayuda de Solucin reactivo
A, a sendos matraces volumtricos de 1 O mL y diluir
con Solucin reactivo A a volumen.
Determinar la absorbancia de las soluciones obtenidas a
partir de la Solucin estndar y la Solucin muestra,
usando la solucin que contiene metano\ como
blanco.
Calcular el porcentaje de procianidinas totales en la por-
cin de Extracto tomada:
Resultado = (Aul A1) X e X (V/ W)
A: = absorbancia de la solucin, a partir de la
Solucin muestra
= absorbancia de la solucin, a partir de la
Solucion estandar
= concentracin de ER Extracto de Pino
Martimo USP en la Solucin estndar
(mg/mL)
V = volumen de la Solucin madre de la muestra
(mL)
Suplementos Dietticos/ Meliltonina 6571
W peso de Extracto de Pino Martimo tomado
=
para preparar la Solucin madre de la muestra
(mg) , ..
- facto de dilucion para preparar !a Soluoon
muestra, a partir de 'lnlucin madre de la
muestra, 20
P = porcentaje de procianidinas en ER Extracto de
Pino Martimo USP
Criterios de aceptacin: 65%-75% con respecto a la
materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
. EXTRACTOS BOTNICOS, Metales Pesados (565): Cumple
con los requisitos.e (oficia1 01-ctic-201s1
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas .PT de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a col1.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731): Secar 1,0 g de Extracto du-
rante 3 horas a 11 O: pierde no ms de 8,0% de su peso.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de O, 7%
LMITE DE SUSTANCIAS INSOLUBLES EN AGUA
Anlisis: Pesar 0,50 g de Extracto y mezclar en 50 mL
de agua a 20 durante 15 minutos. Pasar a travs de un
filtro de vidrio sinterizado, previamente pesado. Secar el
filtro a 11 O durante 3 horas, enfriar a temperatura am-
biente y pesar el filtro. Calcular la cantidad de material
insoluble en agua.
Criterios de aceptacin: No ms de 1 0% de la canti-
dad de Extracto tomada
REQUISITOS ADICIONALES .
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar a 25, con variaciones permitidas
entre 15 y 30. Proteger de la luz. . ,_
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre c1ent1f1co en
latn y, despus de la denominaci~ ofici~I, la parte d~ la
planta a partir de la que se preparo el articulo,. ademas
de la informacin requerida en Extractos Botnicos (565),
Etiquetado.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto de Pino Martimo USP
Melatonina
Nl-1
X oX p OCH,
CnH 16 N202 232,28
N-Acetyl-5-methoxytryptamine;
N-(2-(5-Metoxi- l H-indol-3-il)etil) acetamida [73-31-4 ].
DEFINICIN
La Melatonina contiene no menos de 98,510 y 110 ms de
101,5% de melatonina (CuH16N202), calculado con res-
pecto a la sustancia seca.
6572 MelJtoninJ / 5uplemmtos {)pfpfi< m USP 38

IDENTIFICACIN COMPUESTOS RELACIONADOS

A. ABSORCl9N EN EL INFRARROJO ( 197K) Solucin A: Acetonitrilo
8. ABSORCION EN EL ULTRAVIOLETA (197U) Solucin B: Usar Solucin amortiauadora. prepararla ~e
longitud dt! onda analtica: 277 nm gn se indica en la Valoracin. -
Solucin_ muestra: l O pg/ml de Melatonina en alcohol Fase mvil: Ver ia Tabla l.
1sopropilico
Criterios_ de aceptacin: Cumple con los requisitos. las Tabla 1
absort1v1dades, calculadas con respecto a la sustancia
seca, no difieren en ms de 3,0%. Tiempo Solucin A Solucin B
C. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC lmin) (%) (%)
An.lis.is: Proceder s~9n se indica en la Valoracin. o 25 75
Cntenos de aceptacion: El tiempo de retencin del 7 25 75
pico principal de la Solucin muestra corresponde al de 15 80 20
la Solucin estndar. 25 75
18
VALORACIN _____ , 25 25 75
PROCEDIMIENTO
Solucin amortiguadora: 0,5 g/L de fosfato monob- Diluyente: Mezcla de Solucin A y Solucin B (25: 75)
sico de potasio en agua. Ajustar con cido fosfrico a Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/ml de ER
un pH de 3,5 y filtrar. Melatonina USP y 0,02 mg/ml de ER Compuesto Rela-
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora cionado A de Melatonina USP en Diluyente
(25:75) Solucin estndar: 5 g/ml de ER Melatonina USP en
Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/ml de ER Diluyente
~elatonina USP y 0,02 mg/ml de ER Compuesto Rela- Solucin muestra: 1 mg/ml de Melatonina en
cionado A de Melatonina USP en Fase mvil Diluyente
Solucin estndar: O, 1 mg/ml de ER Melatonina USP Sistema cromato9rfico
en Fase mvil (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Solucin muestra: O, 1 mg/ml de Melatonina en Fase Modo: HPLC
mvil Detector: UV 222 nm
Sistema cromato9rfico Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.) Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Modo: HPLC Volumen de inyeccin: 1 O L
Detector: UV 222 nm Aptitud del sistema
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min [NOTA-Los tiempos de retencin relativos para com-
Volumen de inyeccin: 1 O L puesto relacionado A de melatonina y melatonina son
Aptitud del sistema 0,4 y 1,0, respectivamente.]
Mue_stras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin Requisitos de aptitud
estandar Resolucin: No menos de 4,0 entre melatonina y
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para com- compuesto relacionado A de melatonina
puesto relacionado A de melatonina y melatonina son Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
0,4 y 1,0, respectivamente.] el pico de melatonina
Requisitos de aptitud Anlisis
Resolucin: . No menos de 4 entre melatonina y com- Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
puesto relacionado A de melatonina, Solucin de apti- Calcular el porcentaje de cada impureza individual en la
tud del sistema porcin de Melatonina tomada:
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0% Solu-
cin estndar ' ' Resultado = (ru! rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
Anlisis ru = respuesta del pico de cada impureza individual
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra de la Solucin muestra
Calcular el porcentaje de melatonina en la porcin de
Melatonina tomada:
rs = respuesta del pico de melatonina de la
Solucin estndar
Resultado= (ru/r1) x (Cs/C11) x 100 Cs = concentracin de ER Melatonina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
r11 = respuesta del pico de la Solucin muestra Cu = concentracin de Melatonina en la Solucin
r, respuesta del pico de la Solucin estndar
= muestra (m9/ml)
C = concentracin de ER Melatonina USP en la Criterios de aceptacion
Solucin estndar (mg/ml) Impurezas individuales: No ms de O, 1 %
C1 = concentracin de Melatonina en la Solucin Impurezas totales: No ms de 1,0%
muestra (m9/ml) PRUEBAS ESPECFICAS
Criterios de aceptacion: 98,5- l 01,5% con respecto a PRDIDA POR SECADO (731)
la sustancia seca Anlisis: Secar una muestra al vaco a 80 durante 3
IMPUREZAS horas.
RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de 0,1% Criterios de aceptacin: No ms de 1 ,0%
CLORUROS V SULFATOS, Cloruros< 221) REQUISITOS ADICIONALES
Estndar: O, 1 O ml de cido clorhdrico 0,020 N ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Muestra: 0,36 g de Melatonina pe~meables. Proteger de la luz.
Criterios de aceptacin: No ms de 0,02% ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Melaton1na USP
Eliminar lo siguiente: ER Compuesto Relacionado A de Melatonina USP
2-(5-Metoxi- l H-indol-3-il)etanamina.
. METALES PESADOS (231): No ms de 20 g/ge (Oficiall-dic C11 H14N20 190,24
2015)
USP 38 Suplementos Dietticos / Melatonina 6573

Anlisis: Proceder segun se indica en Contenido, ha-

ciendo lm aju~tes necesarios.
Melatonina, Tabletas Calcular la cantidad disuelta de melatonina
(CnH1l..J;O}) corno porcentaje de la cJntidad
DEFINICIN declarada:
Las Tabletas de Melatonina contienen no menos de 90,0% y
no ms de 110,0% de la cantidad declarada de melato- Resultado = (r11/ r1) X (e X VIL) X 1 00
nina (C1;H16N202).
ru = rea del pico de la Solucin muestra
IDENTIFICACIN rs = rea del pico de la Solucin estndar
A. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu- Cs = concentracin de ER Melatonina USP en la
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se- Solucin estndar (mg/mL)
gn se obtienen en Contenido. V = volumen de Medio, 500 mL
CONTENIDO L = cantidad declarada de melatonina
PROCEDIMIENTO
(mg/Tableta)
Solucin amortiguadora: 0,5 g/L de fosfato monob- Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
sico de potasio en agua. Ajustar con cido fosfrico a rada ge melatonina (CuH16N202). ,
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 >:
un pH de 3,5 y filtrar.
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin amortiguadora Cumplen con los requisitos.
(25:75) IMPUREZAS
Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER COMPUESTOS RELACIONADOS
Melatonina USP y 0,02 mg/mL de ER Compuesto Rela- Solucin A: Acetonitrilo
cionado A de Melatonina USP en Fase mvil Solucin B: Usar Solucin amortiguadora, preparada se-
Solucin estndar: O, 1 mg/mL de ER Melatonina USP gn se indica en Contenido.
en Fase mvil Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Solucin muestra: Porcin filtrada de la solucin en
Fase mvil, equivalente a O, 1 mg/mL de Melatonina, a
partir de no menos de 20 Tabletas reducidas a polvo Tabla 1
fino Tiempo Solucin A Solucin B
Sistema cromato9rfico (min) (%) (%)
(Ver Cromatograf1a (621 >, Aptitud del Sistema.) o 25 75
Modo: HPLC
7 25 75
Detector: UV 222 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m 15 80 20
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min 18 25 75
Volumen de inyeccin: 1 O L 25 25 75
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin Diluyente: Mezcla de Solucin A y Solucin B (25:75)
estndar Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER
[NOlA-Los tiempos de retencin relativos para com- Melatonina USP y 0,02 mg/mL de ER Compuesto Rela-
puesto relacionado A de melatonina y melatonina son cionado A de Melatonina USP en Diluyente
0,4 y 1,0, respectivamente.] Solucin estndar: 5 pg/mL de ER Melatonina USP en
Requisitos de aptitud Diluyente
Resolucin: No menos de 4 entre melatonina y com- Solucin muestra: Solucin filtrada en Diluyente, equi-
puesto relacionado A de melatonina, Solucin de apti- valente a 1 mg/mL de melatonina, a partir de no menos
tud del sistema de 20 Tabletas reducidas a polvo fino
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% Solu- Sistema cromato9rfico
cin estndar (Ver Cromatograf1a (621 >, Aptitud del Sistema.)
Anlisis Modo: HPLC
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra Detector: UV 222 nm
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mela- Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 pm
tonina (C13H16N202) en la porcin de Tabletas tomada: Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Resultado= (r11/r1) x (C1/Cu) x 100 Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
r11 = respuesta del pico de la Solucin muestra [NOTA-Los tiempos de retencin relativos para com-
r, = respuesta del pico de la Solucin estndar puesto relacionado A de melatonina y melatonina son
Cs = concentracin de ER Melatonina USP en la 0,4 y 1,0, respectivamente.]
Solucin estndar (mg/mL) Requisitos de aptitud
Cu = concentracin nominal de melatonina en la Resolucin: No menos de 4,0 entre melatonina y
Solucin muestro (mg/mL) compuesto relacionado A de melatonina
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de melatonina
PRUEBAS DE DESEMPEO Anlisis
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS Muestras: Solucin estandar y Soluc1on muestra
(2040>: Cumplen con los requisitos de Disolucin Calcular el porcentaje de cada impureza individual en la
Medio: Agua, 500 mL porcin de Tabletas tomada:
Aparato 2: 50 rpm
Tiempo: 30 min Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
Solucin estndar: Disolver una cantidad adecuada de
ER Melatonina USP en cll::JUcl para obtener una concen- r,, = respuesta del pico de cada impureza individual
tracin similar a la esperada en la Solucin muestra. de la Solucin muestra
Solucin muestra: Porcin filtrada de la solucin en r, = respuesta del pico de melatonina de la
anlisis Solucin estndar
65 7 4 Melatonina / '\11plernentos Dietticos U~P 38

= concentracin de ER Melatonina USP en la nilmetano y di(eti!englicol) metil ter en inyecciones

Solucin estndar (mg/mL) repetidas
"' concentracin nominal de melatonina en la Anlisis
Solucin rnucstra (n19/nL) Muestras: 'ioluc1on estandar y Solucin muestra
Criterios de aceptacin CilrnlJr rl "orcentaje clt' 11t'libu!fo11iimetano (CHo01S)
Impurezas individuales: No ms de O, 1% en la porcin de Metilsulfonilmetano tomada:
Impurezas totales: No ms de 1,0%
Resultado= (Ru/R,) x (C/Cu) x 100
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- Ru = cociente de respuesta entre los picos de
permeables y resistentes a la luz. metilsulfonilmetano y di(etilenglicol) metil
ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de Melatonina ter de la Solucin muestra
en _mg/Tableta. R1 = cociente de respuesta entre los picos de
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) metilsulfonilmetano y di(etilenglicol) metil
ER Melatonina USP ter de la Solucin estndar
ER Compuesto Relacionado A de Melatonina USP C1 = concentracin de ER Metilsulfonilmetano USP
2-(5-Metoxi- l H-indol-3-il)etanamina. en la Solucin estndar (mg/mL)
C11H14N20 190,24 e,, = concentracin de Metilsulfonilmetano en la
Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 98,0%-1 02,0% con respecto
a la sustancia anhidra
IMPUREZAS
Metilsulfonilmetano
o Eliminar lo siguiente:

METALES PESADOS, Mtodo I (231 ): No ms de 3 g/

ge (Oficial Oldic.2015) , , ,
C2H601S 94, 13 PUREZA CROMATOGRAFICA Y LIMITE DE DIMETIL SULFOXIDO
Dimethyl sulfone; Solucin madre del estndar: 1,0 mg/mL de ER Dime-
Sulfonilbismetano [67-71-0]. til Sulfxido USP en metano/
DEFINICIN
Solucin de control de sensibilidad: 2,0 g/mL, a par-
El Metilsu/fonilmetano contiene no menos de 98,0% y no tir de Solucin madre del estndar en metano/
ms de 1 02,0% de metilsulfonilmetano (C2H602S), calcu- Solucin de aptitud del sistema: O, 1 mg/mL de ER Di-
lado con respecto a la sustancia anhidra. La pureza cro- metil Sulfxido USP y 0,4 mg/mL de ER Metilsulfonilme-
matogrfica es no menos de 99,8%. tano USP en metano/. En un matraz volumtrico de
50 mL, disolver 20 mg de ER Metilsulfonilmetano USP
IDENTIFICACIN en 5 mL de Solucin madre del estndar y diluir con me-
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197K) tano! a volumen.
B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu- Solucin muestra: 2 rng/mL de Metilsulfonilmetano en
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se- metano/. Someter a ultrasonido a 50 durante 1 minuto
gn se obtienen en la Valoracin. y dejar que se enfre a temperatura ambiente.
Sistema cromatogrfico: Proceder segn se indica en
VALORACIN la Valoracin.
PROCEDIMIENTO Aptitud del sistema
Diluyente: Transferir 950 mL de metano! a un matraz Muestras: Solucin de control de sensibilidad y Solucin
volumtrico de 1 L. Agregar 0,60 mL de di(etilenglicol) de aptitud del sistema
metil ter y diluir con metano! a volumen. Requisitos de aptitud
Solucin estndar: 0,4 mg/mL de ER Metilsulfonilme- Relacin seal-ruido: No menos de 1O para el pico
tano USP en Diluyente. Someter a ultrasonido a 50 du- de dimetil sulfxido, Solucin de control de sensibilidad
rante 1 minuto y dejar que se enfre a temperatura Resolucin: No menos de 2,0 entre dimetil su/fxido
ambiente. y metilsulfonilmetano, Solucin de aptitud del sistema
Solucin muestra: 0,4 mg/mL de Metilsulfonilmetano Anlisis
en Diluyente. Someter a ultrasonido a 50 durante 1 Muestra: Solucin muestra
minuto y dejar que se enfre a temperatura ambiente. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcin
Sistema cromato9rfico de Metilsulfonilmetano tomada:
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases Resultado = (ru! rr) / 100
Detector: Ionizacin a la llama
Columna: Capilar, de 0,53 mm x 30 m recubierta con ru = respuesta de cada irnureza en la Solucin
fase G2 de 5 m muestra
Temperatura rr = suma de las respuestas de todos los picos
Columna: 120" diferentes del pico de disolvente
Inyector: 250 Criterios de aceptacin
Detector: 250 Impurezas individuales: No ms de O, 1 % de dimetil
Gas transportador: Helio sulfxido; no rns de 0,05% de cualquier otra impu-
Velocidad de flujo: 5 ml/min reza individual
Relacin de particin: 2:1 Impurezas totales: No ms de 0,2% para todas las
Volumen de inyeccin: 1 L impurezas, incluyendo dimetil sulfxido
Aptitud del sistema
PRUEBAS ESPECFICAS
Muestra: Solucin estndar
INTERVALO O TEMPERATURA DE FUSIN (741):
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para 108,5-110,5
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
el cociente de respuesta entre los icos de metilsulfo-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10' ufc/g

o mL, y e! recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 1 0 1 \JC/g o ml.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requ1s1tos para determinar ia ausencia de b-
cherichio LO!i en 1 O g .
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo I (921): No ms de
O, 1 %. [NOTA-Se pueden requerir 500 mg de metilsulfo-
nilmetano para este anlisis.]
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Dimetil Sulfxido USP
ER Metilsulfonilmetano USP
Dimetil sulfona.
C2H602S 94, 1 3
Metilsulfonilmetano, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Metilsulfonilmetano contienen no menos de
90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad declarada de
metilsulfonilmetano (C2H602S).
IDENTIFICACIN
A. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en el Procedimiento de Contenido.
CONTENIDO
PROCEDIMIENTO
Diluyente: Transferir 950 mL de metanol a un matraz
volumtrico de 1 L. Agregar 0,60 mL de dietilenglicol
metil ter y diluir con metano! a volumen.
Solucin estndar: 0,4 mg/mL de ER Metilsulfonilme-
tano USP en Diluyente. Someter a ultrasonido a 50 du-
rante 1 minuto y dejar que se enfre a temperatura
ambiente.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Disolver una porcin del material reducido
a polvo fino, equivalente a 1 Tableta, en Diluyente, y
someter a ultrasonido durante 15 minutos a 50. Dejar
que se enfre a temperatura ambiente, diluir con Dilu-
yente a volumen y mezclar. Diluir cuantitativamente con
Diluyente hasta obtener una concentracin final de
0,4 mg/mL de metilsulfonilmetano. Transferir 1 mL de la
suspensin a un tubo de microcentrfuga de 1,5 mL y
centrifugar durante 20 segundos. Usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la llama
Columna: Capilar, de 0,53 mm x. 30 m recubierta con
fase G2 de 5 m
Temperatura
Columna: 1 20'
Inyector: 250)
Detector: 250
Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 5 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 L
Tipo de inyector: Relacin de particin, 2: 1
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el cociente de respuesta entre los picos de metilsulfo-
nilmetano y dietilenglicol metil ter en inyecciones
repetidas
Suplementos Dietticos/ Minerales 6575
Anlisis
Muestras: Solucin e'tndw y Solucin mue:,tw
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de me-
libuifoniir11elar 10 (C2H602S) e11 :a fJulL.in Je Tabletas
tomada:
Resultado= (Ru!Rs) x (C/Cu) x 100
R11 = cociente de respuesta entre los picos de
metilsulfonilmetano y dietilenglicol metil ter
de la Solucin muestra
Ri = cociente de respuesta entre los picos de
metilsulfonilmetano y dietilenglicol metil ter
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Metilsulfonilmetano USP
en la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de metilsulfonilmetano
en la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos de Desintegracin; 30 minutos .
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
pe~meables y resistentes a la luz.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Metilsulfonilmetano USP
Dimetil sulfona.
C2H602S 94, 1 3
Metionina-ver Metionina en Monografas
Generales
Minerales, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Minerales contienen dos o ms minerales
derivados de sustancias generalmente reconocidas como
seguras, que presentan dos o ms de los siguientes ele-
mentos en forma ionizable: boro, calcio, cromo, cobre,
flor, yodo, hierro, magnesio, manganeso, molibdeno, n-
quel, fsforo, potasio, selenio, estao, vanadio y cinc. Las
Cpsulas contienen no menos de 90,0% y no ms de
125,0% de las cantidades declaradas de calcio (Ca), cobre
(Cu), hierro (Fe), magnesio (Mg), manganeso (Mn), fs-
foro (P), potasio (K) y cinc (Zn); y no menos de 90,0% y
no ms de 160,0% de las cantidades declaradas de boro
(B), cromo (Cr), flor (F), yodo (1), molibdeno (Mo), n-
quel (Ni), selenio (Se), estao (Sn) y vanadio (V). No con-
tienen vitaminas. Pueden contener otras sustancias agre-
gadas declaradas en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione ms de un mtodo de valoracin para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los mtodos especificados, declarando en el eti-
quetado el mtodo usado nicamente si no se usa el M-
todo 1. Se pueden usar soluciones estndar de absorcin
atmica disponibles comercialmente para los minerales, si es
aplicable, cuando se describe la preparacin de una Solucin
madre del estndar en las siguientes valoraciones. Usar agua
desionizada cuando se especifica agua. Cuando ~e especifica
espectrofotometra de absorcin atmica en la valoracin, se
pueden modificar las concentraciones de las Soluciones es-
tndar y de las Soluciones muestra para ajustarse al intervalo
lineal o de trabajo del instrumento.]
6576 Minerales /Suplementos Dit>tPtico~
CALCIO, MPtnrin 7 CROMO,
Solucin de cloruro de lantano: 267 mg/ml de clo-
ruro de lantano heptahidrato en cido clorhdrico O, 125
~~
Solucin estndar de calcio: 400 g/mL de calcio. Pe-
sar 1,001 g de carbonato de calcio, previamente secado
a 300 durante 3 horas y enfriado en un desecador du-
rante 2 horas. Disolver en 25 ml de cido clorhdrico
1 N. Calentar a ebullicin para expulsar el dixido de
carbono y diluir con agua hasta 1000 ml.
Solucin madre del estndar: 100 g/ml de calcio, a
partir de Solucin estndar de calcio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos
matraces volumtricos de 100 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 ml de Solucin de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 g/ml de calcio.
Solucin de polisorbato 80: Polisorbato 80 diluido con
alcohol (1 en 1 O)
Solucin muestra: Transferir 5 Cpsulas a un matraz
volumtrico de 1 00 ml. [NOTA-Para Cpsulas de gela-
tina dura, pesar no menos de 20 Cpsulas. Abrir las
Cpsulas, sin perder material de la cubierta, y transferir
el contenido a un recipiente adecuado. Eliminar cual-
quier contenido que se adhiera a las cubiertas vacas
lavando con varias porciones de ter. Desechar los lava-
dos y dejar que las cubiertas de las Cpsulas se sequen.
Pesar las cubiertas de las Cpsulas vaoas, calcular el
peso neto del contenido de las Cpsulas y transferir una
porcin del contenido de las Cpsulas, equivalente a 5
Cpsulas, a un matraz volumtrico de 100 ml.] Agregar
15 ml de agua, 1 O ml de cido clorhdrico 6 N y 1 ml
de Solucin de polisorbato 80 al matraz. Calentar sobre
una placa de calentamiento o bao de vapor, agitando
por rotacin suave intermitentemente, hasta que las
Cpsulas se desintegren por completo o el contenido se
disuelva. Calentar a ebullicin suave durante 15 minu-
tos adicionales. Enfriar, diluir con agua a volumen y fil-
trar, desechando los primeros 5 ml del filtrado. Diluir
esta solucin con cido clorhdrico O, 125 N para obte-
ner una concentracin de 2 g/ml de calcio, agre-
gando 1 ml de Solucin de cloruro de lantano por
100 ml del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara:, Calcio, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cal-
cio a 422,, 7 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solucin de cloruro de lantano por 100 mL
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
calcio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de calcio en la Solucin
muestra ($)/ml)
C. ~concentracion nominal de calcio en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
USP 38
Mtodo 7
Solucin estndar de cromo: 1000 g/ml de cromo, a
partir de dicromato de potasio previamente secado a
120'' durante 4 hora\ en agua. Almacenar en un frasco
Je fJOiielileno.
Solucin madre del estndar: 1 O g/ml de cromo, a
partir de Solucin estndar de cromo diluida con cido
clorhdrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estndar: Transferir 1 0,0 y 20,0 ml de Solu-
cin madre del estndar a sendos matraces volumtricos
de 100 ml, y transferir 15,0 y 20,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar a sendos matraces volumtricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 g/ml
de cromo.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 1 g/ml de cromo y omitir
el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cromo, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
cromo a ,357,9 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/mL,
de cromo en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de cromo en la Solucin
muestra ($)/ml)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
COBRE, Mtodo 7
Solucin estndar de cobre: Disolver 1,00 g de lmina
de cobre en un volumen mnimo de una solucin de
cido ntrico al 50% (v/v) y diluir con una solucin de
cido ntrico al 1 % (v/v) hasta 1000 ml. Esta solucin
contiene 1000 g/ml de cobre.
Solucin madre del estndar: 1 00 g/ml de cobre, a
partir de Solucin estndar de cobrP diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 200 ml. Diluir con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y
4,0 ~/ml de cobre.
Solucion muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 2 g/ml de cobre y omitir
el uso de Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver EsrPctrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cobre, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de co-
bre a 324,7 nm
USP 38
Blanco: .cido clorhdrico O, 1 25 N
Anlisis
Muestras: Solucione'> es/andar y Solucin muestra
Deler111111dr ds db,urbdrlUd' de id' 'uluciunes conlrd ei
Blanco. GrJficJr IJs JbsorbJnciJs de IJs Soluciones es
tndor en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en ~tg/ml, de
cobre en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de co-
bre (Cu) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/C11) x 100
C = concentracin medida de cobre en la Solucin
muestra (9/ml)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solucin
muestro (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
FLUORURO, Mtodo 7
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en envases de
plstico.]
Solucin de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de sodio en 600 ml de agua en un matraz vo-
lumtrico de 1 000 ml. Dejar que la solucin se equili-
bre a temperatura ambiente y diluir con agua a volu-
men. Ajustar con unas pocas gotas de cido actico a
un pH de 7,0.
Solucin de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 ml de agua en un matraz volumtrico
de 1000 ml. Agregar 28 ml de cido perclrico y diluir
con a9ua a volumen.
Solucion madre del estndar de fluoruro: 500 g/ml
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio, previamente secado a 100 durante 4 horas y
enfriado en un desecador, en agua
Solucin madre intermedia A: 1 00 g/ml de fluoruro,
a partir de Solucin madre del estndar de fluoruro di-
luida con agua
Solucin madre intermedia B: 1 O g/ml de fluoruro, a
partir de Solucin madre del estndar de fluoruro diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 3,0; 5,0 y 1 0,0 ml de
Solucin madre intermedio B, y 5,0 y 10,0 ml de Solucin
madre intermedio A a sendos matraces volumtricos de
100 ml diferentes. Agregar a cada matraz 10,0 ml de
cido clorhdrico 1 N, 25 ml de Solucin de acetato de
sodio 3 M y 25,0 ml de Solucin de citrato de sodio. Di-
luir el contenido de cada matraz con agua a volumen
para obtener concentraciones de O, 3; 0,5; 1,0; 5,0 y
1 0,0 g/ml de fluoruro.
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas
cortando las Cpsulas para abrirlas. Mezclar y determi-
nar el peso de los contenidos. Transferir una cantidad
del contenido de las Cpsulas mezclado, equivalente a
200 g de fluoruro, a un matraz volumtrico de
1 00 ml. Agregar 1 0,0 ml de cido clorhdrico 1 N,
25,0 ml de Solucin de acetato de sodio 3 M y 25,0 ml
de Solucin de citrato de sodio. Diluir con agua a
volumen.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestro
Transferir 50,0 ml de cada una de las Soluciones estn-
dar y de la Solucin muestra a sendos vasos de preci-
pitados de plstico, que contengan una barra mezcla-
dora recubierta de plstico. Medir los potenciales (ver
pH (791 )), en mV, de las Soluciones estndar y de la
Solucin muestro, con un medidor de pH capaz de
una reproducibilidad mnima de 0,2 mV y equipado
con un electrodo indicador especfico para in fluo-
ruro y un electrodo de referencia de calomel. [NOTA-
Al realizar las mediciones, sumergir los electrodos en
la solucin, mezclar en un agitador magntico con su
Suplrmmtos Oietetirns / M inrrales 65 77
parte superior aislada hasta lograr el equilibrio (1-2
minuto>), y regi,trar el potencial. Enjuagar y secar los
electrodos entre mediciones, procurando evitar que
'e Udr\e ei uisldi ciei eieclrocio especfico pard ei in.j
GrJficJr los logJritmos de IJs conccntrJcioncs de fluo.
ruro, en pg/mL, de las Soluciones estndar en funcin
del potencial, en mV. A partir de la curva de res-
puesta estndar as obtenida y del potencial medido
de la Solucin muestra, determinar la concentracin,
C, en g/ml, de fluoruro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
flor (F) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C concentracin medida de fluoruro en la
=
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
FLUORURO, Mtodo 2
[NOTA-Usar recipientes de plstico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
Solucin amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidrxido de sodio O, 1 N a 1 000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase mvil: Alcohol, cido sulfrico O, 1 N y agua
(20:5:1 75)
Solucin madre del estndar: 220 g/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solucin contiene
100 9/ml de fluoruro.
Solucion estndar
[NOTA-Acondicionar la columna de extraccin en fase
slida especificada para su uso en la Solucin estndar
y la Solucin muestra de la siguiente manera. Usando
vaco a una presin que no exceda de 5 mm de mer-
curio, lavar la columna con un volumen de columna
de metanol seguido de un volumen de columna de
Solucin amortiguadora de pH 7O, O. No dejar que la
parte superior de la columna se seque. Si la parte su-
perior de la columna se seca, reacondicionar la
columna.]
Transferir 1 0,0 ml de Solucin madre del estndar a un
matraz volumtrico de 100 ml. Agregar 75 ml de
agua y ajustar con hidrxido de sodio O, 1 N a un pH
de 10,4 O, 1. Diluir con agua a volumen. Filtrar, dese-
chando los primeros 1 5 ml del filtrado. Transferir
25,0 ml del filtrado a un matraz volumtrico de
50 ml. Agregar 15,0 ml de agua y ajustar con hidr-
xido de sodio O, 1 N a un pH de 10,0. Diluir con Solu-
cin amortiguadora de pH 70,0 a volumen. Eluir una
porcin de esta solucion a travs de una columna de
extraccin en fase slida de 3 ml que contenga re-
lleno L1, la cual se conecta a travs de un adaptador a
una segunda columna de extraccin en fase solida que
contenga relleno de intercambio catirnco fuerte de
sulfonilpropilo. Desechar los primeros 3 ml del eluato
y recoger el resto del eluato en un matraz adecuado
para inyeccin en el cromatgrafo.
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un recipiente de 1 00 ml. Si fuera necesario, eliminar
cualquier contenido que se adhiera a las cubiertas va-
cas lavando con varias porciones de ter. Desechar los
lavados y secar las cubiertas de las Cpsulas con ayuda
de una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cpsulas vacas en el frasco de pesada tarado y calcular
el peso neto del contenido de las Cpsulas. Transferir
una porcin del contenido de las Cpsulas, equivalente
a una cantidad nominal de 1 mg de flor, a un matraz
volumtrico de 100 ml. Agregar 15 ml de agua y agi-
tar vigorosamente. Enjuagar las paredes del matraz con
15 ml de agua y dejar en reposo durante 1 O minutos.
6578 Minerales ! Suplementos DiPttirn
Diluir con <HJllil hasta 85 ml, ajustar con hidrxido de
sodio 1 N d un pH de 1 0,4 O, l y diluir con agua
hasta 100 ml. Proceder segn se indica en Solucin es-
tndar, co1ne11LdftcJu dufl(ie dice "Fiitrar, desechando
los primeros 15 ml del filtrado."
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L1 7
Columna analtica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L17
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de fluoruro. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de flor (F) en la
porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/ri) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de la Solucin estndar
Cs = concentracin de fluoruro en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
YODURO
Agua de bromo: Agregar 100 ml de agua a 20 ml de
bromo en un frasco con tapn de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en reposo durante 30 minutos y usar el
sobrenadante.
Anlisis: Retirar el contenido de las Cpsulas cortando
las Cpsulas para abrirlas. Mezclar y determinar el peso
de los contenidos. Transferir una cantidad del conte-
nido, equivalente a 3 mg de yodo, a un crisol de n-
quel. Agregar 5 g de carbonato de sodio, 5 ml de solu-
cin de hidrxido de sodio al 50% (p/v) y 1 O ml de
alcohol, procurando que toda la muestra se hume-
dezca. Calentar el crisol en un bao de vapor hasta
evaporar el alcohol, luego secar el crisol a 100 durante
30 minutos para evitar salpicaduras durante el calenta-
miento subsiguiente. Transferir el crisol con su conte-
nido a un horno calentado a 500 y calentar el crisol
durante 15 minutos. [NOTA-El calentamiento a 500 es
necesario para carbonizar cualquier materia orgnica
presente; se puede usar una temperatura ms alta, si
fuera necesario, para asegurar la carbonizacin com-
pleta de toda la materia orgnica.] Enfriar el crisol,
agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol con un vidrio de
reloj y calentar a ebullicin suave durante 1O minutos.
Filtrar la solucin y lavar el crisol con agua hirviendo,
recogiendo el filtrado y los lavados en un vaso de preci-
pitados. Agregar cido fosfrico hasta que la solucin
sea neutra frente al anaranjado de metilo y luego agre-
gar 1 ml de cido fosfrico en exceso. Agregar un ex-
ceso de Agua de bromo y calentar la solucin a ebulli-
cin suave hasta que se torne incolora y luego durante
5 minutos ms. Agregar unos pocos cristales de cido
saliclico y enfriar la solucin a 20. Agregar 1 ml de
cido fosfrico y 0,5 g de yoduro de potasio, y valorar
el yodo liberado con tiosulfato de sodio 0,005 N SV,
agregando almidn SR cuando el color del yodo libe-
rado haya desaparecido casi por completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= V x N,1 x F x lme x (Aw/\!V) x (100/L)
USP 38
V ~ volumen de tiosulfato de sodio cons11mido
(ml)
NA = normalidad real de la solucin de tiosulfato dP
sodio usada (mEq/mL)
F = factor de correccin para convertir mg a g,
1000 1g/mg
lmc = miliequivalente de 1, 21, 16 mg/mEq
Aw = peso promedio del contenido de las Cpsulas
W = peso de la muestra del contenido de las
Cpsulas tomado
L = cantidad declarada de yodo (g/Cpsula)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
HIERRO, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en 25 ml de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estndar: Trdnsferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solucin madre del estndar de hierro a sen-
dos matraces volumtricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con agua a volumen para obtener
concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y 8,0 g/ml de
hierro.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 5 g/ml de hierro y omitir el uso de Solucin de
cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Hierro, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
hierro a .?48,3 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
hierro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de hierro en la Solucin
muestra (g/ml)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
MAGNESIO, Mtodo 7
Solucin de cloruro de lantano: Preparar segn se in-
dica en Calcio, Mtodo 7.
Solucin estndar de magnesio: Transferir 1,0 g de
cinta de magnesio a un matra1 volumtrico de
1000 ml, disolver en 50 ml de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar para obtener una
solucin con una concentracin de 1 000 g/ml de
magnesio.
Solucin madre del estndar: 20 pg/ml de magnesio,
a partir de Solucin estndar de maqnesio diluida con
cido clorh1dnco O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Agregar a cada matraz
1,0 ml de Solucin de cloruro de lantano y diluir con
lJSP 18
Jcido c!orhfdricc O, 125 f'J J volurnen para obtener con-
(entra(iones de 0,2; O, -l; 0,4; O,.'i y 0,6 pg/ml de
maqnesio.
~olucon de polisorbato ~o: !'reparar segn se rndrca
en Co/cio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segCm se indica en Ca/co,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra de manera que contenga 0,4 g/ml magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Magnesio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
magnesiq a 285,2 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solucin de cloruro de lantano por 100 mL
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/mL,
de magnesio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/C11) x 100
C = concentracin medida de magnesio en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de magnesio en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
MANGANESO, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de manganeso: Transfe-
rir 1,00 g de manganeso, a un matraz volumtrico de
1 000 ml. Disolver en 20 ml de cido ntrico, diluir con
cido clorhdrico 6 N a volumen y mezclar para obtener
una :.olucin con una concentracin de 1000 g/ml de
manganeso.
Solucin madre del estndar: 50 g/mL de manga-
neso, a partir de Solucin madre del estndar de manga-
neso diluida con cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 mL. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones de 0,5; 0,75;
1,0; 1,5 y 2,0 g/ml de manganeso.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 1 g/ml de manganeso y
omitir el uso de Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrototomelra de absorci11 atmica
Lmpara: Manganeso, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
mangane,so a 279,5 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 1 25 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las ab:.orbancias de la:. Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as
)uplPint'ntos DiPtt'ticos / Minerales 65 79
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/mL,
de manganeso en la So/uoon muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (lvin) en ia porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (C/C,,) x 100
C = concentracin medida de manganeso en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de manganeso en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
MOLIBDENO, Mtodo 7
Diluyente: 20 mg/ml de cloruro de amonio en agua
Solucin estndar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumtrico de
1 000 ml y disolver en 50 ml de cido ntrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1000 g/ml de molibdeno.
Solucin madre del estndar: 1 00 g/ml de molib-
deno, a partir de Solucin estndar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 10,0 y 25,0 mL de
Solucin madre del estndar a sendos matraces volum-
tricos de 100 ml, y agregar 5,0 ml de cido perclrico
a cada matraz. Calentar a ebullicin suave las soluciones
en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente y diluir cada una con Diluyente a volu-
men para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 g/mL de molibdeno.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Ca/co, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Ca/co,
Mtodo 7, excepto que se debe tomar un nmero de
Cpsulas o una porcin del contenido de las Cpsulas
equivalente a una cantidad nominal de 1000 g de mo-
libdeno y realizar diluciones apropiadas para obtener
una concentracin final de 1 O g/mL de molibdeno,
omitiendo la adicin de Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara:, Molibdeno, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de mo-
libdeno a 313,3 nm
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20:1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en ~tg/ml,
de molibdeno en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Cpsulas tomada:
Re:.ultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de molibdeno en la
Solucin muestra (ftg/ml)
e' = concentracin nominal de molibdeno en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
MOLIBDENO, Mtodo 2
Solucin de fluoruro de sodio: Agregar 200 ml de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solucin se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
6580 Minerales /Suplementos Dietticos
Solucin de sulfato ferroso: 4,98 rng/ml de sulfato fe-
rroso en agua
Solucin de tiocianato de potasio: 200 mg/ml de tio-
cianato de potasio en agua
Solucin de cloruro estannoso al 20%: Transferir 40 g
de cloruro estannoso a un vaso de precipitados, agre9ar
20 ml de cido clorhdrico 6,5 N y calentar la solucion
hasta que el cloruro estannoso se disuelva. Enfriar y di-
luir con agua hasta 100 ml.
Solucin de cloruro estannoso diluida: Solucin de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solucin en el momento de su uso.
Solucin estndar: 20 g/ml de molibdeno, a partir de
molibdato de amonio, eri agua
Muestra: Retirar el contenido de un nmero contado
de Cpsulas cortando las Cpsulas para abrirlas. Mezclar
y determinar el peso de los contenidos. Usar una canti-
dad del contenido de li:!s Cpsulas, equivalente a una
cantidad nominal de 40 g de molibdeno.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analtica: 465 nm
Blanco: Alcohol amlico
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 ml de Solucin estndar a
sendos vasos de precipitados de 200 ml. Agregar
20 ml de cido ntrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de
reloj y calentar a ebullicin lentamente sobre una
placa de calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 6 ml de cido percl-
rico, cubrir los vasos de precipitados con un vidrio de
reloj y continuar el calentamiento hasta que la diges-
tin sea completa, lo cual se indica cuando el lquido
se torna incoloro o amarillo plido. Evaporar las solu-
ciones en los vasos de precipitados hasta sequedad.
Enjuagar las paredes de los vasos de precipitados y
los vidrios de reloj con agua, y agregar ms agua a
cada vaso de precipitados hasta completar 50 ml en
cada vaso de precipitados. Calentar las soluciones
acuosas a ebullicin suave durante unos pocos minu-
tos. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar 2 gotas
de anaranjado de metilo SR y neutralizar con hidr-
xido de amonio. Agregar 8,2 ml de cido clorhdrico.
Transferir cuantitativamente el contenido de los vasos
de precipitados a sendos matraces volumtricos de
1 00 ml, enjuagar los vasos de precipitados con agua,
transferir los enjuagues a los matraces volumtricos
correspondientes y diluir con agua a volumen. Trans-
ferir 50,0 ml de cada solucin a embudos de separa-
cin. Agregar a cada embudo de separacin 1,0 ml
de Solucin de f/uoruro de sodio, 0,5 ml de Solucin de
sulfato ferroso, 4,0 ml de Solucin de tiocianato de po-
tasio, 1,5 mL de Solucin de cloruro estannoso al 20%
y 15,0 ml de alcohol amlico, y agitar los embudos
de separacin durante 1 minuto. Dejar que las capas
se separen y desechar las capas acuosas. Agregar
25 ml de Solucin de cloruro estannoso diluida a cada
embudo de separacin y agitar suavemente durante
15 segundos. Dejar que las capas se separen y dese-
char las capas acuosas. Transferir la capa organica de
cada embudo de separacin a un tubo de centrfuga
y centrifugar a 2000 rpm durante 1 O minutos. Deter-
minar las absorbancias de las fases orgnicas de la
Solucin estndar y la Muestra, y corregir con el
Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (A11/A\) x [(Vx Cs)/Mu] x 100
U~P 38
A = absorbancia de la solucin a partir de la
Miwstra
= absorbancia de la solucin a partir de la
~oluC1on estandar
l/
V ~ volunier 1 de Id Suluc ic)n e::,lncior analizada,
2,0 ml
= concentracin de molibdeno en la Solucin
estndar (g/ml)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(pg)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
FSFORO, Mtodo 1
Solucin de cido sulfrico: Agregar cuidadosamente
cido sulfrico al agua (37,5: 100) y mezclar.
Solucin de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solucin de cido sulfrico y agua
(2:3). (NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solucin de cido sulfrico a volumen.]
Solucin de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar una gota de cido sulfrico por
100 ml de solucin.
Solucin de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solucin madre del estndar de fsforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobsico de potasio, previamente
secados a 1 05 durante 2 horas y almacenados en un
desecador, y transferir a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en agua, agregar 6 ml de cido sul-
frico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1000 pg/ml de fsforo.
Solucin estndar: 20 g/ml de fsforo, a partir de So-
lucin madre del estndar de fsforo diluida con agua
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas
cortando las Cpsulas para abrirlas. Mezclar y determi-
nar el peso de los contenidos. Transferir una cantidad
del contenido de las Cpsulas, equivalente a una canti-
dad nominal de 100 mg de fsforo a 25 ml de cido
ntrico, y digerir sobre una placa de calentamiento du-
rante 30 minutos. Agregar 15 ml de cido clorhdrico y
continuar la digestin hasta que cese la produccin de
humos marrones. Enfriar y transferir el contenido del
matraz a un matraz volumtrico de 500 ml con ayuda
de pequeas porciones de agua. Diluir con agua a volu-
men. Transferir 1 0,0 ml de esta solucin a un matraz
volumtrico de 1 00 ml y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analtica: 650 nm
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Transferir a sendos matraces volumtricos de 25 ml,
5,0 ml de la Solucin estndar, de la Solucin muestra
y de agua para proporcionar el blanco. Agregar a
cada uno de los tres matraces 1,0 ml de Solucin de
molibdato. de omonio, de Solucin de hidroquinona y
de So/ucion de bisulfito de sodio, y agitar por rotacin
suave hasta me?Clar. Diluir el contenido de los matra-
ces con agua a volumen y dejar los matraces en re-
poso durante 30 minutos. Determinar las absorban-
cias de las soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fs-
foro (P) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (A/Al) x (CJC) x 100
A11 = absorbancia de la Solucin muestra
As = absorbancia de la SoiuC1on estandar
Cs = concentracin de fsforo en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu - concentracin nonri11al de fsforo en la
Solucion muestra (pg/ml)
USP 38
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de fsforo (P)
POTASIO
Solucin estndar de potasio: l 00 ~tg/ml de pota sin,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
105 durante 2 horas, en agua
Solucin madre del estndar: 1 O ~tg/mL de potasio, a
partir de Solucin estndar de potasio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 1 0,0; 15,0; 20,0 y
25,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 mL. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 c1/mL de potasio.
Solucion muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 1 g/mL de potasio y omitir
el uso de Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Potasio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de po-
tasio a 766,5 nm
Blanco: Agua
Anlisis
Muestras: Soluciones estandar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
potasio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de po-
tasio (K) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de potasio en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de potasio en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
SELENIO, Mtodo 7
Diluyente: Preparar segn se indica en Molibdeno, M-
todo 1.
Solucin estndar de selenio: [PRECAUCIN-El Selenio
es txico, manipular con cuidado.] Disolver 1 g de sele-
nio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1000 mL y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una concentracin de 1000
g/mL de selenio.
Solucin madre del estndar: 100 g/mL de selenio, a
partir de Solucin estndar de selenio diluida con agua
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 mL de
Solucin madre del estndar a sendos matraces volum-
tricos de 1 00 mL, y agregar 5,0 mL de cido perclrico
a cada matraz. Calentar a ebullicin suave las soluciones
durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada solucin con Diluyente a volumen para obte-
ner soluciones que contengan 5,0; 10,0 y 25,0 g/mL
de selenio.
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas
cortando las Cpsulas para abrirlas. Mezclar y determi-
nar el peso de los contenidos. Transferir una cantidad
del contenido de las Cpsulas, equivalente a una canti-
dad nominal de 1000 g de selenio a un matraz ade-
Suplementos Oieteticos /Minerales 6581
cuado y agregar 12 mL de cido ntrico. [NOTA-El volu-
men de cidn ntrico se puede variar para asegurar que
el polvo se disperse uniformemente.] Agitar el matraz
por rotacin suave cuidadosamente hasta dispersar la
muestra de prueba. Someter a ultrasonido durante 1 O
minuto' o hasta que la muestra de prueba se disuelva
por completo. Calentar la solucin a ebullicin suave
durante 15 minutos y enfriar a temperatura ambiente.
Agregar cuidadosamente 8 mL de cido perclrico al
matraz, calentar el matraz hasta que aparezcan humos
de cido perclrico y agitar el matraz por rotacin
suave para disipar los humos. Repetir el calentamiento y
la agitacin por rotacin suave hasta que los humos
aparezcan de nuevo. Enfriar a temperatura ambiente.
Transferir el contenido del matraz a un matraz volum-
trico de 50 ml con ayuda de Diluyente y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometr(a y Dispenin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Selenio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de sele-
nio a 196,0 nm
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20:1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
selenio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C concentracin medida de selenio en la
=
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de selenio en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
SELENIO, Mtodo 2 '
Solucin de cido clorhdrico: Acido clorhdrico diluido
con $lua (1 en 1 O)
Solucion de hidrxido de amonio al 50%: Hidrxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/mL de edetato disdico y 25 mg/mL
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disdico en una porcin de agua,
agregar clorhidrato de hidroxilamina y luego diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diaminonaftaleno
a un embudo de separacin de 250 mL y agregar
200 mL de cido clorhdrico O, 1 N. Lavar la solucin
con tres porciones de 40 ml de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solucin en un frasco
marrn y cubrir la solucin con una capa de ciclohe-
xano de 1 cm. Esta solucin permanece estable durante
1 semana si se almacena en un refrigerad9r.
Solucin madre del estndar: [PRECAUCION-EI Selenio
es txico, manipular con cuidado.] Disolver 1 g de sele-
nio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1 000 mL y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una solucin con una concen-
tracin de 1000 g/mL de selenio. Diluir un volumen
de la solucin con cido clorhdrico O, 125 N para obte-
ner una concentracin de 2,0 g/ml de selenio.
6582 Minerales / SuplPmmtos Dietticos
Solucin estndar: Transferir 1 0,0 ml de Solucin ma-
dre del Pstandar a un matraz con tapn de vidrio. Agre-
gar 1 ml de cido perclrico y 1 ml de Solucin de
nririn r!nrhlrlrico, y di!uir con agua hasta 20 ml.
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas
cortando las Cpsulas para abrirlas. Mezclar y determi-
nar el peso de los contenidos. Transferir una cantidad
del contenido de las Cpsulas, equivalente a una canti-
dad nominal de 20 g de selenio, a un matraz ade-
cuado. Agregar 1 O ml de cido ntrico y entibiar suave-
mente sobre una placa de calentamiento. Continuar
calentando hasta que haya cesado la reaccin inicial del
cido ntris:o y luego agregar 3 ml de cido perclrico.
[PRECAUCION-Tomar precauciones en esta etapa debido
a que la reaccin de acido perclrico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparicin de humos blancos de cido perclrico
o hasta que el digerido comience a oscurecerse. Agre-
gar 0,5 ml de cido ntrico y continuar el calenta-
miento, agregando cantidades adicionales de cido n-
trico si se presenta un oscurecimiento adicional. Digerir
durante 1 O minutos despus de la primera aparicin de
humos de cido perclrico o hasta que el digerido se
torne incoloro. Enfriar el matraz. Agregar 2,5 ml de So-
lucin de cido clorhdrico y devolver el matraz a la placa
de calentamiento para expulsar los residuos de cido
ntrico. Calentar la mezcla durante 3 minutos despus
de que comience a hervir. Enfriar el matraz a tempera-
tura ambiente y diluir con agua hasta 20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV
Celda: 1 cm
Longitud de onda analtica: 380 nm
Blanco: 1 ml de cido perclrico y 1 ml de Solucin
de cido clorhdrico diluido con agua hasta 20 ml
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Tratar la Solucin muestra, la Solucin estndar y el
Blanco segn se indica a continuacin. Agregar 5 ml
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotacin
suave hasta mezclar. Ajustar la solucin en cada ma-
traz con Solucin de hidrxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 :L O, 1. Agregar 5 ml de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotacin suave hasta mezclar. Co-
locar los matraces en un bao de agua mantenido a
50'' y equilibrar durante 30 minutos, teniendo cui-
dado de cubrir los matraces para protegerlos de la
luz. Enfriar a temperatura ambiente y transferir el
contenido de cada matraz a sendos embudos de se-
paracin. Transferir 10,0 ml de ciclohexano a cada
embudo de separacin y extraer vigorosamente du-
rante 1 minuto. Desechar la capa acuosa. Transferir la
capa de cliclohexano a un tubo de centrfuga y cen-
trifugar a 1 000 rpm durante 1 minuto para eliminar
cualquier residuo acuoso. Determinar las absorbancias
de las soluciones a fartir de las Muestras contra la
solucin a partir de Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcion de Cpsulas tomada:
Resultado = (Au/ As) x [(V x C)/ Mu] x 100
Au = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solucin muestra
As = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solucin estndar
V = volumen de la Solucin madre del estndar
usado para preparar la Solucin estndar,
10 ml
C = concentracin de selenio en la Solucin madre
del estndar (g/ml)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solucin
muestra (g)
USP 38
Criterios de aceptacin:. 90,0%-160,0lri de la cantidad
Jeclarada de selenio (Se)
CINC, Mtodo 7
Solucin e~lc:11ar de cinc: i g/ml de cinc, a par-
tir de xido de cinc disuE'ito Pn cirlo clorhdrico S M
(3,89 mg/ml) y diluida con agua hasta el volumen fi-
nal. [NOTA-Disolver en cido clorhdrico 5 M enti-
biando, si fuera necesario, enfriar y luego diluir hasta el
volumen final.]
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de cinc, a
partir de Solucin estndar de cinc diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 g/
ml de cinc.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 2 g/ml de cinc y omitir el uso de Solucin de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cinc, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cinc
a 213,8 f)m
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
cinc en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de cinc en la Solucin
muestra (~/ml)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
BORO, NQUEL, ESTAO y VANADIO, Mtodo 7; CALc19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, FOSFORO
y CINC, Mtodo 2; MOLIBDENO y SELENIO, Mtodo 3
Solucin madre de agua regia: Preparar una mezcla
de cido clorhdrico y cido ntrico (3:1) agregando el
cido ntrico al cido clorhdrico. [NOTA-Ventilar peri-
dicamente la solucin en una campana de extraccin
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solucion madre de
agua regia y agua (1 :9) agregando 1 volumen de Solu-
cin madre de agua regia a 2 volmenes de agua. Diluir
con ms agua a volumen y mezclar bien.
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1000 mg/L de itrio en solucin de cido ntrico al
5% (v/v) y 1 000 mg/L de escandio en solucin de cido
ntrico al 5% (v/v) con Diluyente (1: 1: 198), y mezclar.
Solucin madre del estndar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [f"~OTA-Slo es 11e(esariu incluir ios minerales
de inters en la solucin.] Usando soluciones estndar
de elementos (individuales o combinados) disponibles
comercialmente en solucin de cido ntrico al 5% (vi
v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de solu-
USP 38
ci_n estndar d_e, elementos a un matraz volumtrico, y
diluir con soluc1on de ac;do nitrico al 5% (v/v) hasta
obtener una solucin con concentraciones finales de
Jpoxn1<lJn1cr1lc 1000 rng/L de: cJ!cio, 100 :ng/L de
cobre, 2 50 mq/I rle hierro, 'iOO mg/I de magne~io,
100 mg/L de manganeso, 800 mg/L de tostoro y
250 mg/L de cinc.
Solucin madre, del estndar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Solo es necesario incluir los minerales de
inters en la solucin.] Usando soluciones estndar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solucin de cido clorhdrico al 20% PRUEBAS DE DESEMPEO
(v/v), pip~tear y transferir la cantidad apropiada de so-
luc1on estandar de elementos a un matraz volumtrico
y diluir con solucin de cido clorhdrico al 20% (v/v)'
hasta obtener una solucin con concentraciones finales
de aproximada_mente 200 ~g/L de boro y 1 00 mg/L de
cromo, de molibdeno, de niquel, de selenio, de estao
y de vanadio.
Soluciones estndar: Preparar una mezcla de Solucin
madre del estndar 7 y Solucin madre del estndar 2,
segn se requiera, en Diluyente, para preparar una curva
de calibracin de seis puntos que abarque el intervalo
de concentracin de cada mineral de inters.
Solucin muestra: Pesar y transferir 5 Cpsulas a un
matraz volumtrico de 250 ml, y calentar suavemente
sc:ibre una_ placa d~ calentamiento hasta que el conte-
nido comience a liberarse. Agregar cuidadosamente
25 ml de Solucin madre de agua regia en incrementos
de 5 ml y agitar por rotacin suave. Calentar, continuar
agitando por rotacin suave hasta que las Cpsulas se
disuelvan en el cido, retirar inmediatamente de la
f~ente de calor y agregar 150 ml de agua. Enfriar y
diluir con agua a volumen. Filtrar aproximadamente
30 ml en un tubo de centrfuga usando un filtro de
nail<;>n para jeringa con un tamao de poro de 5 m.
Realizar los ajustes necesarios usando Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometra de plasma inductivamente aco-
plado~ u,sando un esp~ctrmetro aj~stado para medir
la em1s1on de cada mineral de interes aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente. [NOTA---
L_as _condici<;ines operativas se pueden desarrollar y op-
t1m1zar basandose en las recomendaciones del fabri-
cante. S_e debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
e_specificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
s1on suf1c1entes.]
Aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solucin de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta segn se indica en el Anlisis.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar la emisin de cada mineral de inters en
las Soluciones estndar y la Solucin muestra con un
sistema de plasma inductivamente acoplado usando
Diluyente como blanco. Graficar la emisin de las So-
luciones estndar en funcin de las concentraciones,
en mg/L, de los minerales de inters y trazar la recta
que mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir
de la grfica as obtenida, determinar la concentra-
cin, C, en mg/L, de cada mineral de inters en la
Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cada mineral tomado:
Resultado = e X (V/W) X F X (T"/L) X 100
e = concentracin medida del elemento pertinente
en la Solucin muestra (mg/L)
V = volumen de la Solucin murstra (L)
w = peso de la muestra (mg)
\u,nlPmPntm DiPtPticos / Minerales 6583
F = !actor de dilucin de la Suluuon muestra
L. e peso promedio por Cpsula (mg)
L = cantidad declarada del elemento pertinente
(mg/Cpsu!a)
Criterios de aceptacin: 90%-125% de las cantidades
dec_laradas de calcio (Ca), cobre, (Cu), hierro (Fe), mag-
nesio (Mg), manganeso (Mn), fosforo (P) y cinc (Zn);
90%-1 60% de las cantidades declaradas de boro (B),
cromo (Cr), molibdeno (Mo), nquel (Ni), selenio (Se),
estao (Sn) y vanadio (V)
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de Disolucin.
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 101
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 102 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
plen c~n los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO:_ La etiqueta indica que el producto es Cp-
sulas de Minerales. La etiqueta tambin indica la forma
salina del mineral usado como la fuente de cada ele-
mento. Cuando se proporciona ms de un mtodo de
valoracin para un mineral en particular, el etiquetado
indica el mtodo de valoracin usado slo si no se usa el
w~~1. '
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Fluoruro de Sodio USP
Minerales, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Minerales contienen dos o ms minerales
derivados de sustancias generalmente reconocidas como
seguras, que presentan dos o ms de los siguientes ele-
mentos en forma ionizable: boro, calcio cromo cobre
flor, Y,odo, hierro, magnesio, mangane~o, molibdeno,' n-
quel, fosforo, potasio, selenio, estao, vanadio y cinc. Las
Tabletas contienen no menos de 90,0% y no ms de
125,0% de las cantidades declaradas de calcio (Ca), cobre
(Cu), hierro (Fe), magnesio (Mg), manganeso (Mn), fs-
foro (~), potasio (K) y cinc (Zn); y no menos de 90,0% y
no mas de 160,0% de las cantidades declaradas de boro
(B), cromo (Cr), flor (F), yodo (1), molibdeno (Mo), n-
9uel (Ni/, selenio (Se), estao (Sn) y vanadio (V). No con-
tienen vitaminas. Pueden contener otras sustancias agre-
gadas declaradas en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione ms de un m_todo de valoracin para un ingrediente
1nd1v1dual, los re,qu1s1tos se p_u_eden cumplir siguiendo cual-
quiera de lm metodos espec1f1cados, declarando en el eti-
quetado el mtodo usado nicamente si no se usa el M-
todo 1. Si aplica, se pueden usar soluciones estndar de
absorcin atmica disponibles comercialmente para los mi-
nerales cuando se describe la preparacin de una Solucin
madre _del estandar en las s1gu1_entes vaioraciones. Usar agua
des1onizada cuando se espec1f1ca agua. Cuando se especifica
espectrofotometra de absorcin atmica en la valoracin, se
pueden modificar ias concentraciones de las Soluciones es-
6584 Minf'rales / Suplmwntos Dietticos
tndar y de la Solucin muestra para ajustarse al intervalo
lineal o de trabajo del instrumento.]
CALCIO, Mtodo 1
Solucin de cloruro de lantano; 267 mg/ml de clo-
ruro de lantano heolahidrato en rido rlmhrlrirn O 125
N l -- '
Solucin estndar de calcio: 400 g/ml de calcio. Pe-
sar 1,001 g de carbonato de calcio, previamente secado
a 300 durante 3 horas y enfriado en un desecador du-
rante 2 horas. Disolver en 25 ml de cido clorhdrico
1 N. Calentar a ebullicin para expulsar el dixido de
carbono y diluir con agua hasta 1000 ml.
Solucin madre del estndar: 100 g/ml de calcio, a
partir de Solucin estndar de calcio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos
matraces volumtricos de 100 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 ml de Solucin de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 g/ml de calcio.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a 5 Tabletas, a un crisol de porcelana. Calentar el
crisol en una mufla mantenida a mantenida a 550 du-
rante 6-12 horas y enfriar. Agregar 60 ml de cido
clorhdrico y calentar a ebullicin suave sobre una placa
de calentamiento o en un bao de vapor durante 30
minutos, enjuagando intermitentemente la superficie in-
terior del crisol con cido clorhdrico 6 N. Enfriar y
transferir cuantitativamente el contenido del crisol a un
matraz volumtrico de 1 00 ml. Enjuagar el crisol con
pequeas porciones de cido clorhdrico 6 N y agregar
los enjuagues al matraz. Diluir con agua a volumen y
filtrar, desechando los primeros 5 ml del filtrado. Diluir
esta solucin cuantitativamente con cido clorhdrico
O, 125 N para obtener una concentracin nominal de
2 g/ml de calcio, agregando 1 ml de Solucin de clo-
ruro de lantano por 1 00 ml del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara:, Calcio, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cal-
cio a 422,, 7 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solucin de cloruro de lantano por 100 ml.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
calcio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/C,) x 100
C = concentracin medida de calcio en la Solucin
muestra (9/ml)
(, = concentracion nominal de calcio en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
CROMO, Mtodo 7
Solucin estndar de cromo: 1000 g/ml de cromo, a
partir de dicromato de potasio previamente secado a
120 durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
de polietileno.
USP 38
Solucin madre del estndar: 1 O g/ml de cromo, a
partir de Solucin estndar de cromo diluida con cido
clorhdrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones )lnddr: Tramferir 10,0 y 20,0 mL de Solu-
cin madre del estndar a sendos matraces volum('tricos
de 100 ml, y transferir 15,0 y 20,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar a sendos matraces volumtricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 g/ml
de cromo.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 1 g/ml de cromo y omitir
el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cromo, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
cromo a ,357,9 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/ml,
de cromo en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de cromo en la Solucin
muestra (9/ml)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
COBRE, Mtodo 7
Solucin estndar de cobre: Disolver 1,00 g de lmina
de cobre en un volumen mnimo de una solucin de
cido ntrico al 50% (v/v) y diluir con una solucin de
cido ntrico al 1 % (v/v) hasta 1000 ml. Esta solucin
contiene 1000 g/ml de cobre.
Solucin madre del estndar: 100 g/ml de cobre, a
partir de Solucin estndar de cobre diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 200 ml. Diluir con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y
4,0 g/ml de cobre.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 2 g/ml de cobre y omitir
el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cobre, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de co-
bre a 324,7 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
USP 38
cinco puntos qraficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determimr la concentracin, C, en g/ml, de
cobre en la Solucin muestra.
Calcular e! porcentaje de !a cantidad declarada de co-
bre (Cu) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = ( C/ Cu) x 100
C = concentracin medida de cobre en la Solucin
muestra (9/ml)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
FLUORURO, Mtodo 7
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en envases de
plstico.]
Solucin de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de sodio en 600 rnl de agua contenida en un
matraz volumtrico de 1 000 ml. Dejar que la solucin
se equilibre a temperatura ambiente y diluir con agua a
volumen. Ajustar con unas pocas gotas de cido actico
a un pH de 7,0.
Solucin de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 ml de agua en un matraz volumtrico
de 1000 ml. Agregar 28 ml de cido perclrico y diluir
con agua a volumen.
Solucion madre del estndar de fluoruro: 500 g/ml
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio, previamente secado a 100 durante 4 horas y
enfriado en un desecador, en agua
Solucin madre intermedia A: 1 00 g/ml de fluoruro,
a partir de Solucin madre del estndar de fluoruro di-
luida con agua
Solucin madre intermedia B: 1 O g/ml de fluoruro, a
partir de Solucin madre del estndar de f/uoruro diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 3,0; 5,0 y 10,0 ml de
Solucin madre intermedia B, y 5,0 y 10,0 ml de Solucin
madre intermedia A a sendos matraces volumtricos de
100 ml. Agregar a cada matraz 10,0 ml de cido clor-
hdrico 1 N, 25 ml de Solucin de acetato de sodio 3 M
y 25,0 ml de Solucin de citrato de sodio. Diluir el con-
tenido de cada matraz con agua a volumen para obte-
ner concentraciones de 0,3; 0,5; 1,0; 5,0 y 10,0 g/ml
de fluoruro.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de las Table-
tas reducidas a polvo fino, equivalente a una cantidad
nominal de 200 g de fluoruro, a un matraz volum-
trico de 1 00 ml. Agregar 1 0,0 ml de cido clorhdrico
1 N, 25,0 ml de Solucin de acetato de sodio 3 M y
25,0 ml de Solucin de citrato de sodio, y diluir con
agua hasta 100 ml.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Transferir 50,0 ml de cada una de las Soluciones estn-
dar y de la Solucin muestra a sendos vasos de preci-
pitados de plstico, que contengan una barra mezcla-
dora recubierta de plstico. Medir los potenciales (ver
pH (791 )), en rnV, de las Soluciones estndar y de la
Solucin muestra, con un medidor de pH capaz de
una reproducibilidad mnima de +0,2 mV y equipado
con un electrodo indicador especfico para in fluo-
ruro y un electrodo de referencia de calomel. [NOTA-
Al realizar las mediciones, sumergir los electrodos en
la solucin, mezclar en un agitador magntico con su
parte superior aislada hasta lograr el equilibrio (1-2
minutos), y registrar el potencial. Enjuagar y secar los
electrodos entre mediciones, procurando evitar que
se dae el cristal del electrodo especfico para el in.]
Surlementos Diett'ticm .1 Minerales 6585
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en g/ml, de las Soluciones estndar en funcin
del potencial, en mV. A partir de la curva de res-
puesta estndar as obtenida y del potencia! medido
de la Solucin muestra, determinar la concentracin,
C, en g/ml, de fluoruro en la Solucion muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
flor (F) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/ C11) x 1 00
C =concentracin medida de fluoruro en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
FLUORURO, Mtodo 2
[NlA-Usar recipientes de plstico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
Solucin amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidrxido de sodio O, 1 N a 1000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase mvil: Alcohol, cido sulfrico O, 1 N y agua
(20:5:175)
Solucin madre del estndar: 220 g/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solucin contiene
100 9/ml de fluoruro.
Solucion estndar
[NOTA-Acondicionar la columna de extraccin en fase
slida especificada para su uso en la Solucin estndar
y la Solucin muestra de la siguiente manera. Usando
vaco a una presin que no exceda de 5 mm de mer-
curio, lavar la columna con un volumen de columna
de metano! seguido de un volumen de columna de
Solucin amortiguadora de pH 7O, O. No dejar que la
parte superior de la columna se seque. Si la parte su-
perior de la columna se seca, reacondicionar la
columna.]
Transferir 10,0 ml de Solucin madre del estndar a un
matraz volumtrico de 100 ml. Agregar 75 ml de
agua y ajustar con hidrxido de sodio O, 1 N a un pH
de 1 0,4 O, 1. Diluir con agua a volumen. Filtrar, dese-
chando los primeros 15 ml del filtrado. Transferir
25,0 ml del filtrado a un matraz volumtrico de
50 ml. Agregar 15,0 ml de agua y ajustar con hidr-
xido de sodio O, 1 N a un pH de 1 0,0. Diluir con Solu-
cin amortiguadora de pH 70,0 a volumen. Eluir una
porcin de esta solucion a travs de una columna de
extraccin en fase slida de 3 ml que contenga re-
lleno L1, la cual se conecta a travs de un adaptador a
una segunda columna de extraccin en fase solida que
contenga relleno de intercambio catinico fuerte de
sulfonilpropilo. Desechar los primeros 3 ml del eluato
y recoger el resto del eluato en un matraz adecuado
para inyeccin en el cromatgrafo.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin de Tabletas reduci-
das a polvo, equivalente a una cantidad nominal de
1 mg de flor, a 15 ml de agua y agitar vigorosamente.
Enjuagar las paredes del matraz con 15 ml de agua y
dejar en reposo durante 1 O minutos. Diluir con agua
hasta 85 ml, ajustar con hidrxido de sodio 1 N a un
pH de 1 0,4 O, 1 y diluir con ac;iua hasta 100 ml. Pro-
ceder segn se indica en Solucion estndar, comen
zando donde dice "Filtrar, desechando los primeros
15 ml del filtrado."
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
6586 Minerales / Suplementos Dietcticos
Modo: HPLC
Detedor: Co11ri11niviri<iri
Columnas
Guarda columna: 4.6 mm x i rm rPllPnn L1 7
Columna analtica: 7,8 mm x 30 m; relleno L1 7
Veiocdad de flujo: 0,5 ml/mi11
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de fluoruro. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de flor (F) en la
porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r,) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la Solucin estndar
C = concentracin de fluoruro en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
YODURO
Agua de bromo: Agregar 100 ml de agua a 20 ml de
bromo en un frasco con tapn de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en reposo durante 30 minutos y usar el
sobrenadante.
Anlisis
Muestra: Tabletas
Transferir una porcin de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a una cantidad nominal de 3 mg de
yoduro, a un crisol de nquel. Agregar 5 9 de carbo-
nato de sodio, 5 ml de solucin de hidroxido de sodio
al 50% (p/v) y 1O ml de alcohol, procurando que
toda la muestra se humedezca. Calentar el crisol en un
bao de vapor para evaporar el alcohol, luego secar el
crisol a 1 oou durante 30 minutos para evitar salpicadu-
ras durante el calentamiento subsiguiente. Transferir el
crisol con su contenido a un horno calentado a 500 y
calentar el crisol durante 15 minutos.[NOTA-EI calen-
tamiento a 500' es necesario para carbonizar cualquier
materia orgnica presente; se puede usar una tempe-
ratura ms alta, si fuera necesario, para asegurar la car-
bonizacin completa de toda la materia orgnica.] En-
friar el crisol, agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol
con un vidrio de reloj y calentar a ebullicin suave
durante 1O minutos. Filtrar la solucin y lavar el crisol
con agua hirviendo, recogiendo el filtrado y los lava-
dos en un vaso de precipitados. Agregar cido fosf-
rico hasta que la solucin sea neutra frente al anaran-
jado de metilo y luego agregar 1 ml de cido fosfrico
en exceso. Agregar un exceso de Agua de bromo y
calentar la solucin a ebullicin suave hasta que se
torne incolora y luego durante 5 minutos ms. Agre-
gar unos pocos cristales de cido saliclico y enfriar la
solucin a 20 . Agregar 1 mL de cido fosfrico y
0,5 g de yoduro de potasio, y valorar el yodo liberado
con tiosulfato de sodio 0,005 N SV, agregando almi-
dn SR cuando el color del yodo liberado haya desa-
parecido casi por completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porcin de Tabletas tomada:
RPSLiitCtdo - \! .v N~ e'. F :< /,,,,. >'. (Aw/IV) >'. (100/L)
V = volumen de tiosulfato de sodio consumido
\ml)
N" = normalidad real de la solucin de tiosulfato de
sodio usada (mEq/mL)
USP 38
f- = factor de correccin para convertir mg a pg,
1000 g/mg
/,,,. = miliequivalente de 1, 21, 16 mg/mEq
A.. peso prorncdic de ld:, Tublctas
W = peso de la pnrrin rlP Tabletas tomada
L = cantidad declarada de yodo (g/Tableta)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
HIERRO, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en 25 ml de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solucin madre del estndar de hierro a sen-
dos matraces volumtricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con agua a volumen para obtener
concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y 8,0 pg/mL de
hierro.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 5 g/ml de hierro y omitir el uso de Solucin de
cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Hierro, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
hierro a .?48,3 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
hierro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de hierro en la Solucin
muestra (9/ml)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
MAGNESIO, Mtodo 7
Solucin de cloruro de lantano: Preparar segn se in-
dica en Calcio, Mtodo 7.
Solucin estndar de magnesio: Transferir 1,0 g de
cinta de magnesio a un matraz volumtrico de
1 000 mL, disolver en 50 ml de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar para obtener una
solucin con una concentracin de 1 000 g/ml de
magnesio.
Solucin madre del estndar: 20 g/ml de magnesio,
a partir de Solucin estndar de magnesio diluida con
cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Tran~f<'r ir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 ml de Solucin madrP dPI estndar a sendos matra-
ces volumetricos de 100 ml. Agregar a cada matraz
1,0 ml de Solucin de cloruro de lantano y diluir con
cido clorhdrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; O, 3; 0,4; 0,5 y 0,6 ~ig/ml de
magnesio
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para cuP contenga una concentracin nominal
de 0,4 ,ug/ml de magnesio.
USP 38
Condiciones instrumentales
(Ver Espcctrofotometra y Dispersion de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Magnesio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
magnesiq a 285,2 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solucin de cloruro de lantano por 1 00 mL
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/mL,
de magnesio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de magnesio en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de magnesio en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
MANGANESO, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de manganeso: Transfe-
rir 1,00 g de manganeso, a un matraz volumtrico de
1000 mL. Disolver en 20 mL de cido ntrico, diluir con
cido clorhdrico 6 N a volumen y mezclar para obtener
una solucin con una concentracin de 1000 g/mL de
manganeso.
Solucin madre del estndar: 50 g/mL de manga-
neso, a partir de Solucin madre del estndar de manga-
neso diluida con cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones de 0,5; 0,75;
1,0; 1,5 y 2,0 g/mL de manganeso.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 1 g/mL de manganeso y
omitir el uso de Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz <851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Manganeso, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
mangane,so a 279,5 nm
Blanco: Acido clorhdrico 0, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/mL,
de manganeso en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de manganeso en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de manganeso en la
Solucin muestra (g/mL)
Suplementos Dieteticos / Minerales 6587
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
MOLIBDENO, Mtodo 7
Diluyente: 20 mg/ml d" rlrm1rn rJP nmoni0 Pn il'J! 1a
Solucin estndar de molibdeno: Transferir 1,0 q de
alambre de molibdeno a un matraz volumtrico de
1000 mL y disolver en 50 mL de cido ntrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1 000 g/mL de molibdeno.
Solucin madre del estndar: 100 g/mL de molib-
deno, a partir de Solucin estndar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 1 0,0 y 25,0 mL de
Solucin madre del estndar a sendos matraces volum-
tricos de 100 mL, y agregar 5,0 mL de cido perclrico
a cada matraz. Calentar a ebullicin suave la solucin
en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente y diluir cada una con Diluyente a volu-
men para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 g/mL de molibdeno.
Solucin muestra: Transferir una porcin del polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 1000 g de mo-
libdeno, a un matraz adecuado y agregar 12 mL de
cido ntrico. [NOTA-El volumen de cido ntrico se
puede variar fara asegurar que el polvo se disperse uni-
formemente. Agitar el matraz por rotacin suave cuida-
dosamente hasta dispersar la muestra de prueba. Some-
ter a ultrasonido durante 1 O minutos o hasta que la
muestra de prueba se disuelva por completo. Calentar
la solucin a ebullicin suave durante 15 minutos y en-
friar a temperatura ambiente. Agregar cuidadosamente
8 mL de cido perclrico, calentar hasta que aparezcan
humos de cido perclrico, y agitar el matraz por rota-
cin suave para disipar los humos. Repetir el calenta-
miento y la agitacin por rotacin suave hasta que los
humos aparezcan de nuevo. Enfriar a temperatura am-
biente. Transferir cuantitativamente el contenido del
matraz a un matraz volumtrico de 100 mL con ayuda
de Diluyente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz <851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara:, Molibdeno, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de mo-
libdeno a 313,3 nm
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20: 1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/mL,
de molibdeno en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Tabletas tomada:
Res u Ita do = ( C/ Cu) x 1 00
C = concentracin medida de molibdeno en la
Solucin muestra (g/mL)
C, = concentracin nominal de molibdeno en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
MOLIBDENO, Mtodo 2
Solucin de fluoruro de sodio: Agregar 200 mL de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solucin se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solucin de sulfato ferroso: 4, 98 mg/mL de sulfato fe-
rroso en agua
6588 Minerdles /Suplementos Dietticos
Solucin de tiocianato de potasio: 200 mg/ml de tio-
cianato de puld~iu er 1 dlJUd
Solucin de cloruro estannoso al 20%: Transferir 40 g
de cloruro estannmo a un vaso de precipitados, agre_gar
20 ml de cido clorhdrico 6,5 N y calentar la solucion
hasla que ci cioruro estc:mnoso se disuelva. E.nlriar y di-
luir con agua hasta 100 ml.
Solucin de cloruro estannoso diluida: Solucin de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solucin en el momento de su uso.
Solucin estndar: 20 g/ml de molibdeno, a partir de
molibdato de amonio en agua
Muestra: Una porcin de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a una cantidad nominal de 40 g de
molibdeno
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analtica: 465 nm
Blanco: Alcohol amlico
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 ml de Solucin estndar a
sendos vasos de precipitados de 200 ml. Agregar
20 ml de cido ntrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de reloj
y calentar a ebullicin lentamente sobre una placa de
calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente. Agregar 6 ml de cido perclrico, cu-
brir los vasos de precipitados con un vidrio de reloj y
continuar el calentamiento hasta que la digestin sea
completa, lo cual se indica cuando el lquido se torna
incoloro o amarillo plido. Evaporar las soluciones en
los vasos de precipitados hasta sequedad. Enjuagar las
paredes de los vasos de precipitados y los vidrios de
reloj con agua, y agregar ms agua hasta completar
50 ml en cada vaso de precipitados. Calentar la solu-
cin acuosa a ebullicin suave durante unos pocos mi-
nutos. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar 2 gotas
de anaranjado de metilo SR y neutralizar con hidroxido
de amonio. Agregar 8,2 ml de cido clorhdrico.
Transferir cuantitativamente el contenido de los vasos
de precipitados a sendos matraces volumtricos de
100 ml, enjuagar los vasos de precipitados con agua,
transferir los enjuagues a los matraces volumtricos co-
rrespondientes y diluir con agua a volumen. Transferir
50,0 ml de cada solucin a embudos de separacin.
Agregar a cada embudo de separacin 1,0 ml de Solu-
cin de fluoruro de sodio, 0,5 ml de Solucin de sulfato
ferroso, 4,0 ml de Solucin de tiocianato de potasio,
1,5 ml de Solucin de cloruro estannoso al 20% y
15,0 ml de alcohol amlico, y agitar los embudos de
separacin durante 1 minuto. Dejar que las capas se
separen y desechar las capas acuosas. Agregar 25 ml
de Solucin de cloruro estannoso diluida a cada embudo
de separacin y agitar suavemente durante 15 segun-
dos. Dejar que las capas se separen y desechar las ca-
pas acuosas. Transferir la capa orgnica de cada em-
budo de separacin a un lubo de centrfuga y
centrifugar a 2000 rpm durante 1 O minutos. Determi-
nar las absorbancias de las fases orgnicas de la Solu-
cin estndar y la Muestra, y corregir con el Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (Au/A1) x [(V x Cs)/MuJ x 100
Au = absorbancia de la solucin a partir de la
Muestra
A1 = absorbancia de la solucin a partir de la
Solucin estndar
V = volumen de la Solucin estndar analizada,
2,0 ml
USP 38
C = concentracin de molibdeno en la Solucin
estandar (.ug/ml)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(pg)
Criterios de aceptacin: 90.0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
FSFORO, Mtodo 7
Solucin de cido sulfrico: Agregar cuidadosamente
cido sulfrico al agua (37,5:100) y mezclar.
Solucin de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solucin de cido sulfrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solucin de cido sulfrico a volumen.]
Solucin de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar una gota de cido sulfrico por
100 ml de solucin.
Solucin de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solucin madre del estndar de fsforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobsico de potasio, previamente
secado a 105 durante 2 horas y almacenado en un
desecador, y transferir a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en agua, agregar 6 ml de cido sul-
frico como conservante, diluir con agua a volumen, y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1 00 g/ml de fsforo.
Solucin estndar: 20 g/ml de fsforo, a partir de So-
lucin madre del estndar de fsforo diluida con agua
Solucin muestra: [NOTA-Reducir a polvo fino y pesar
un nmero contado de Tabletas.] Transferir una porcin
del polvo, equivalente a una cantidad nominal de
100 mg de fsforo, a 25 ml de cido ntrico y digerir
sobre una placa de calentamiento durante 30 minutos.
Agregar 15 ml de cido clorhdrico y continuar la di-
gestin hasta que cese la produccin de humos marro-
nes. Enfriar y transferir el contenido del matraz a un
matraz volumtrico de 500 ml con ayuda de pequeas
porciones de agua. Diluir con agua a volumen. Transfe-
rir 10,0 ml de esta solucin a un matraz volumtrico de
100 ml y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analtica: 650 nm
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Transferir a sendos matraces volumtricos de 25 ml,
5,0 ml de la Solucin estndar, de la Solucin muestra
y de agua para proporcionar el blanco. Agregar a
cada uno de los tres matraces 1,0 ml de Solucin de
molibdato de amonio, de Solucin de hidroquinona y
de Solucin de bisulfito de sodio, y agitar por rotacin
suave hasta mezclar. Diluir el contenido de cada ma-
traz con agua a volumen y dejar los matraces en re-
poso durante 30 minutos. Determinar las absorban-
cias de las soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fs-
foro (P) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (Au/As) x (C1/C,) x 100
Au = absorbancia de la Solucin muestra
As = absorbancia de la Solucin estndar
C1 = concentracin de fsforo en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de fsforo en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de fsforo (P)
POTASIO
Solucin estndar de potasio: 100 g/ml de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
105 durante 2 horas, en agua
usr 38
Solucin madre del estndar: 1 O !ICJ/ml de potasio, a
pdrlir de Solucin e;l11Jur Je polusio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Solucione~ e~lcnudr: l1d11~fe111 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra
ces volumtricos de 1 00 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 ~t~/ml de potasio.
Solucion muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 1, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 1 g/mL de potasio y omitir el uso de Solucin de
cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Potasio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de po-
tasio a 766,5 nm
Blanco: Agua
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
potasio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de po-
tasio (K) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de potasio en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de potasio en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
SELENIO, Mtodo 1
Diluyente: Preparar segn se indica en Molibdeno, M-
todo 1.
Solucin estndar de selenio: [PRECAUCIN-El Selenio
es txico, manipular con cuidado.] Disolver 1 g de sele-
nio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1 000 mL y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una concentracin de 1000
g/mL de selenio.
Solucin madre del estndar: 100 g/mL de selenio, a
partir de Solucin estndar de selenio diluida con agua
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 mL de
Solucin madre del estndar a sendos matraces volum-
tricos de 100 mL, y agregar 5,0 mL de cido perclrico
a cada matraz. Calentar a ebullicin suave las soluciones
durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada una con Diluyente a volumen para obtener
soluciones con concentraciones de 5,0; 10,0 y 25,0 g/
ml de selenio.
Solucin muestra: Transferir una porcin de polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 1 000 ~tg de se-
lenio, a un matraz adecuado y agregar 12 mL de cido
ntrico. [NOTA-El volumen de cido ntrico se puede
variar para asegurar que el polvo se disperse uniforme-
mente.] Agitar el matraz por rotacin suave cuidadosa-
mente hasta dispersar la muestra de prueba. Someter a
ultrasonido durante 1 O minutos o hasta que la muestra
de prueba se disuelva por completo. Calentar la solu-
cin a ebullicin suave durante 15 minutos y enfriar a
'>uplcmentos Dietetcos / Minerales 6589
temperatura ambiente. Agregar cuidadosamente 8 ml
de acido perclrico al rnalrdz, calenlar el matraz hasta
que aparezcan humos de cido perclrico y agitar el
111dlraL por 10Ldci11 ~udve pda di,ipdr ios humos. Repe-
tir el calentamiento y la agitacin por rotacin suave
hasta que los humos aparezcan de nuevo. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Transferir el contenido del matraz a
un matraz volumtrico de 50 mL con ayuda de Dilu-
yente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Selenio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de sele-
nio a 196,0 nm
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20: 1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
selenio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de selenio en la
Solucin muestra (g/mL)
C1 = concentracin nominal de selenio en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
SELENIO, Mtodo 2
Solucin de cido clorhdrico: cido clorhdrico diluido
con a~ua (1 en 1 O)
Solucion de hidrxido de amonio al 50%: Hidrxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/mL de edetato disdico y 25 mg/mL
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disdico en una porcin de agua,
agregar clorhidrato de hidroxilamina y luego diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2, 3-diaminonaftaleno
a un embudo de separacin de 250 mL y agregar
200 mL de cido clorhdrico O, l N. Lavar la solucin
con tres porciones de 40 mL de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solucin en un frasco
marrn y cubrir la solucin con una capa de ciclohe-
xano de 1 cm. Esta solucin permanece estable durante
1 semana si se almacena en un refrigerad9r.
Solucin madre del estndar: [PRECAUCION-EI Selenio
es txico, manipular con cuidado.] Disolver 1 g de sele-
nio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1000 mL y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una solucin con una concen-
tracin de 1000 g/mL de selenio. Diluir un volumen
de la solucin con cido clorhdrico O, 125 N para obte-
ner una concentracin de 2,0 g/mL de selenio.
Solucin estndar: Transferir 10,0 mL de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz con tapn de vidrio. Agre-
gar 1 mL de cido perclrico y 1 mL de Solucin de
cido clorhdrico, y diluir con agua hasta 20 ml.
Solucin muestra: Transferir una porcin de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a una cantidad no-
minal de 20 g de selenio, a un matraz adecuado.
Agregar 1 O mL de cido ntrico y entibiar suavemente
6590 Minerales / Suplementos Dietticos
sobre una placa de calentamiento. C ontintiar calen-
tando hJsta que lkiyct ce~duu Id redccin inicial del
cido rntriso y luego dgregar 3 mL de cido perclrico.
[PRECAUCION-Tencr cuidad0 e11 e~ta elclf.Jd Jeuiuo d
'lllP In reaccin de! cido perc!orico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparicin de liurnm blancos de cido perclrico
o hasta que el digerido comience a oscurecerse. Agre-
gar 0,5 mL de cido ntrico y continuar el calenta-
miento, agregando cantidades adicionales de cido n-
trico si se presenta an ms oscurecimiento. Digerir
durante 1O minutos despus de la primera aparicin de
humos de cido perclrico o hasta que el digerido se
torne incoloro. Enfriar el matraz, agregar 2,5 mL de So-
lucin de cido clorhdrico y volver a colocar el matraz
sobre la placa de calentamiento para expulsar los resi-
duos de cido ntrico. Calentar la mezcla durante 3 mi-
nutos despus de que comience a hervir. Enfriar el ma-
traz a temperatura ambiente y diluir con agua hasta
20 mL.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV
Celda: 1 cm
Longitud de onda analtica: 380 nm
Blanco: 1 mi de cido perclrico y 1 mL de Solucin
de cido clorhdrico diluida con agua hasta 20 mL
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Tratar la Solucin muestra, la Solucin estndar y el
Blanco segn se indica a continuacin. Agregar 5 mL
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotacin
suave hasta mezclar. Ajustar la solucin en cada ma-
traz con Solucin de hidrxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 O, 1. Agregar 5 mL de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotacin suave hasta mezclar. Co-
locar los matraces en un bao de agua mantenido a
50 y equilibrar durante 30 minutos, teniendo cui-
dado de cubrir los matraces para protegerlos de la
luz. Enfriar a temperatura ambiente y transferir el
contenido de cada matraz a sendos embudos de se-
paracin. Transferir 1 0,0 mL de ciclohexano a cada
embudo de separacin y extraer vigorosamente du-
rante 1 minuto. Desechar la capa acuosa. Transferir la
capa de ciclohexano a un tubo de centrfuga y centri-
fugar a 1 000 rpm durante 1 minuto para eliminar
cualquier residuo acuoso. Determinar las absorbancias
de las soluciones a partir de las Muestras contra la
solucin a partir del Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (Aul A1) x [(V x C)/ Mu] x 100
Au = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solucin muestra
A1 = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solucin estndar
V = volumen de la Solucin madre del estndar
usado para preparar la Solucin estndar,
10 mL
C concentracin de selenio en la Solucin madre
del estndar (g/ml)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solucin
muestra (g)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
CINC, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de cinc: 1 000 g/mL de
cinc, a partir de xido de cinc disuelto en cido clorh-
drico 5 M (3,89 mg/mL) y diluida con agua hasta el
volumen final. [NOTA Disolver en cido clorhdrico 5 M
entibiando, si fuera necesario, enfriar, y luego diluir
hasta e! volumen final.]
uw 38
Solucin madre del estndar: 50 ,ug/ml de cinc, a
partir de 5oluuon madre del estamiar efe Cinc diluida con
cido clorhdrico O, 125 N
Soiuciones estndar: Transferir i ,u; L,; 3,; 4,U y
5,0 mL rlc )n/urin rnnrfrp rfpf P')t/;ndor ; c;endos rnatra-
ces volumtricos de 1 00 mL. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 g/
mL de cinc.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 2 g/ml de cinc y omitir el uso de Solucin de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cinc, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cinc
a 213,8 IJm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
cinc en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de cinc en la Solucin
muestra (9/mL)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
BORO, NQUEL, ESTAO y VANADIO, Mtodo 7; CALC19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, FOSFORO
yCINC, Mtodo 2; MOLIBDENO y SELENIO, Mtodo 3
Solucin madre de agua regia: Preparar una mezcla
de cido clorhdrico y cido ntrico (3:1) agregando el
cido ntrico al cido clorhdrico. [NOTA-Ventilar peri-
dicamente la solucin en una campana de extraccin
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solucin madre de
agua regia y agua (1 :9) agregando 1 volumen de Solu-
cin madre de agua regia a 2 volmenes de agua. Diluir
con ms agua a volumen y mezclar bien.
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1 000 mg/L de itrio en solucin de cido ntrico al
5% (v/v) y 1000 mg/L de escandio en solucin de cido
ntrico al 5% (v/v) con Diluyente (1 :1 :198), y mezclar.
Solucin madre del estndar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Es necesJrio incluir slo los minerales de
inters en la solucin.] Usando soluciones estndar de
elementos (ind1v1duales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solucin de cido ntrico al 5% (v/v),
pipetear y transferir la cantidad apropiada de solucin
estndar de elementos, a un matraz volumtrico y diluir
con solucin de cido ntrico al 5% (v/v) hasta obtener
una solucin con concentraciones finales de aproxima-
damente 1 000 mg/L de calcio, 100 mg/L de cobre,
250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio, 1 00 mg/L
de manganeso y 800 mg/L de fsforo y 250 mg/mL de
cinc.
Solucin madre del estndar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Es necesario incluir slo los minerales de
inters en la solucin.] Usando soluciones estndar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
USP 38
rnercialmente en solucin de cido clorhdrico al 20%
(v/v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de so-
lucin estndar de elementos, a un matraz volumtrico
y diluir con solucin de ciudo cioritdricu al 20% (v/v)
h;:ista obtener un;:i solucin con concentraciones finales
de aproximadamente 200 mg/L de boro y 100 mg/L de
cromo, de molibdeno, de nquel, de selenio, de estao
y de vanadio.
Soluciones estndar: Preparar una mezcla de Solucin
madre del estndar 7 y Solucin madre del estndar 2,
segn se requiera, en Diluyente, para preparar una curva
de calibracin de seis puntos que abarque el intervalo
de concentracin de cada mineral de inters.
Solucin muestra 1 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados en la Solucin madre del estndar
7 y la Solucin madre del estndar 2): Pesar y reducir a
polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una por-
cin igual a 3,5 veces el peso promedio por Tableta a
un matraz volumtrico de 250 mL Agregar lentamente
25 ml de Solucin madre de agua regia en incrementos
de 5 mL seguidos de mezclado. [NOTA-Si la muestra
contiene carbonato, se producir burbujeo. Esperar
hasta que cese el burbujeo para proceder.] Calentar la
solucin a ebullicin sobre una placa de calentamiento.
Continuar calentando suavemente hasta que cese la
produccin de humos (aproximadamente 1 hora).
[NOTA-Si la muestra contiene selenio, digerir durante
no ms de 15 minutos.] Retirar del calor, enfriar y diluir
con agua a volumen. Filtrar aproximadamente 30 mL
en un tubo de centrfuga usando un filtro de nailon
para jeringa con un tamao de poro de 5 m. Si fuera
necesario, realizar diluciones adicionales usando Dilu-
yente.
Solucin muestra 2 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados nicamente en la Solucin madre
del estndar 2): Pesar y reducir a polvo fino no menos
de 20 Tabletas. Transferir una porcin igual a 3,5 veces
el peso promedio por Tableta a un matraz volumtrico
de 250 ml. Agregar lentamente 25 mL de Solucin ma-
dre de agua regia en incrementos de 5 mL seguidos de
mezclado. [NOTA-Si la muestra contiene carbonato, se
producir burbujeo. Esperar hasta que cese el burbujeo
para proceder.] Calentar la solucin a ebullicin sobre
una placa de calentamiento. Continuar calentando sua-
vemente hasta que cese la produccin de humos (apro-
ximadamente 1 hora). [NOTA-Si la muestra contiene
selenio, digerir durante no ms de 15 minutos.] Retirar
del calor, enfriar y diluir con agua a volumen. Filtrar
aproximadamente 30 mL en un tubo de centrfuga
usando un filtro de nailon para jeringa con un tamao
de poro de 5 m. Si fuera necesario, realizar diluciones
adicionales usando Diluyente.
Solucin muestra 3 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados nicamente en la Solucin madre
del estndar 7): Pesar y reducir a polvo fino no menos
de 20 Tabletas. Transferir una porcin pesada, igual al
peso promedio por Tableta, a un matraz volumtrico de
250 ml. Agregar lentamente 25 mL de Solucin madre
de agua regia en incrementos de 5 mL seguidos de
mezclado. [NOTA-Si la muestra contiene carbonato, se
producir burbujeo. Esperar hasta que cese el burbujeo
para proceder.] Calentar la solucin a ebullicin sobre
una placa de calentamiento. Continuar calentando sua-
vemente hasta que cese la produccin de humos (apro-
ximadamente 1 hora). Retirar del calor, enfriar y diluir
con agua a volumen. Filtrar aproximadamente 30 mL
en un tubo de centrfuga usando un filtro de nailon
para jeringa con un tamao de poro de 5 pm. Si fuera
necesario, realizar diluciones adicionales usando
Diluyente
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Suplementos Dietticos / Minerales 6591
Modo: Espectrometra de plasma inductivamente aco-
plado, usa11do un especlrmetrn ajustado para medir
la emisin de cada mineral de inters aproximada-
" 1e11le d la longitud d onda co;;espondiente. [~~OTA
Las condiciones operativas se pueden desarrollar y op-
timizar basndose en las recomendaciones del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solucin de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta segn se indica en el Anlisis.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar la emisin de cada mineral de inters en las
Soluciones estndar y la Solucin muestra con un sis-
tema de plasma inductivamente acoplado usando Dilu-
yente como blanco. Graficar la emisin de las Solucio-
nes estndar en funcin de las concentraciones,
en mg/L, de los minerales de inters y trazar la recta
que mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir de
la grfica as obtenida, determinar la concentracin, C,
en mg/L, de cada mineral de inters en la Solucin
muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cada
mineral tomado:
Resultado= Cx (V/W) x Fx (Tw/L) x 100
C = concentracin medida del elemento pertinente
en la Solucin muestra (mg/L)
V = volumen de la Solucin muestra (L)
W = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilucin de la Solucin muestra
Tw = peso promedio por Tableta (mg)
L = cantidad declarada del elemento pertinente
(mg/Tableta)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de las canti-
dades declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fsforo (P) y cinc
(Zn); y 90,0%-160,0% de las cantidades declaradas de
boro (B), cromo (Cr), molibdeno (Mo), nquel (Ni), se-
lenio (Se), estao (Sn) y vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Disolucin.
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 1
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 10 2 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Stuphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Minerales. La etiqueta tambin indica la forma sa-
lina del mineral usado como la fuente de cada elemento.
Cuando se proporciona ms de un mtodo de valoracin
para un mineral en particular, el etiquetado indica el m-
todo de valoracrcin usado, slo sr no se usa el Mtodo l.
6592 Minerales I Sup!PmPntos Dietticos
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~luoruro de Sodio USP
Extracto en Polvo de Mirtillo
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Mirtillo se prepara a partir de los
frutos maduros de Vaccinium myrtillus L. (Fam. Ericaceae)
usando disolventes adecuados como alcohol, metanol o
agua, o mezclas de estos disolventes. La relacin, entre el
material vegetal inicial y el Extracto en Polvo esta entr~
153:1 y 76:1. Contiene no menos de. 36!0% de antoc~a
nsidos, calculado como cloruro de ciarndin-3-0-gluco-
sido, y no ms de 1,0% de antocianidinas, calculado
como cloruro de cianidina, ambos calculados con res-
pecto a la materia anhidra.
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 4 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Mirtillo USP en metanol. Centrifugar y usar el sobre-
nadante transparente.
Solucin muestra: 4 mg/mL de Extracto en Polvo de
Mirtillo en metanol. Centrifugar y usar el sobrenadante
transparente.
Adsorbente: Usar placas para cromatografa en capa
delgada recubiertas con una capa de celulosa.
Volumen de aplicacin: 1 O L
Fase mvil A: cido actico glacial, cido clorhdrico y
agua (15:3:82),
Fase mvil B: Acido actico glacial y agua (6:4)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Usar una cmara saturada. Desarrollar los cromatogra-
mas usando Fase mvil A y secar la placa con ayuda
de una corriente de aire tibio. Desarrollar los croma-
togramas en la misma direccin usando Fase mvil B.
Observar la placa bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta tres bandas rojas principales con
valores RF de aproximadamente 0,55; 0,65 y 0,7_0 gue
son similares en posicin y color a las bandas pnnc1p.a,-
les correspondientes en el cromatograma de la So/uc1on
estndar.
B. Los tiempos de retencin de los picos de antocian-
sido en el cromatograma de la Solucin muestra corres-
ponden a los del cromatograma de la Solucin estndar
C, segn se obtienen en la prueba de Contentdo de Anto-
ciansidos y Antocianidinas. Los picos debidos ~I .cl.oruro
de delfinidin-3-0-galactsido y cloruro de delfin1d1n-3-0-
glucsido son los picos ms intensos y son de intei:sidad
similar, y cada uno es ms intenso que el pico d~b1do al
cloruro de cianidin-3-0-glucsido. Los picos debidos al
cloruro de cianidin-3-0-galactsido, cloruro de delfinidin-
3-0-arabinsido y cloruro de cianidin-3-0-glucsido son
de intensidad similar. Cada uno de los picos de antocia-
nsido restantes es de menor intensidad que el pico de-
bido al cloruro de cianidin-3-0-glucsido.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ANTOCIANSIDOS Y ANTOCIANIDINAS
Disolvente: Metanol y cido clorhdrico (49: 1)
Diluyente: A<;ido fosfrico al 85% y agua (l :9)
Solucin A: Acido frmico y agua (1 :9)
Solucin B: Acetonitrilo, metano!, cido tormico y agua
(45:45:20:80)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
USP 38
Tabla 1
Tiempo
1
(min}
L__o
' 35 ....LL_ ---- ----- --
25
45 35 65
46 o 100 ~
50 o 100
51 93 7
60 93 7
Solucin madre del estndar A: 0,4 mg/mL de ER Clo-
ruro de Cianidin-3-0-glucsido USP en Disolvente.
[NOTA-Disolver usando ultrasonido.]
Solucin estndar A: 0,08 mg/mL de ER Cloruro de
Cianidin-3-0-glucsido USP, a partir de Soluci;i madre
del estndar A en Diluyente. [NOTA-Esta soluc1on se
mantiene estable durante 48 horas a 4.]
Solucin madre del estndar B: 0,5 mg/mL de ER Clo-
ruro de Cianidina USP en Disolvente. [NOTA-Disolver
usando ultrasonido.]
Solucin estndar B: 0,01 mg/mL de ER Cloruro de
Cianidina USP, a partir de Solucin madre del estndar B
en Diluyente. [NOTA-Esta solucin se mantiene estable
durante 36 horas a 4]
Solucin estndar C: Transferir 125 mg de ER Extracto
en Polvo de Mirtillo USP a un matraz volumtrico de
100 mL, agregar 25 mL de Disolvente, someter a ultraso-
nido hasta disolver y diluir con Diluyente a volumen.
[NOTA-Esta solucin se mantiene estable durante 48
horas a 4.]
Solucin muestra: Transferir 125 mg de Extracto en
Polvo de Mirtillo a un matraz volumtrico de 100 mL,
agregar 25 mL de Disolvente, someter a ultrasonido
hasta disolver, y diluir con Diluyente a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
[NOTA-Usar viales para HPLC silanizados y
desactivados.]
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 535 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura
Muestreador automtico refrigerado: 4
Columna: 30 1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar Ces similar al Cromatograma
de Referencia provisto con ER Extracto en Polvo de
Mirtillo USP.
Resolucin: No menos de 0,8 entre los picos de del-
finidin-3-0-arabinsido, malvidin-3-0-galactsido y
petunidin-3-0-arabinosa, y no menos de 1,0 para
otros componentes, Solucin estndar C
Intervalo del factor de asimetra: 0,8-2,0 para el
pico de cloruro de cianidin-3-0-glucsido, Solucin es-
tndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de cloruro de cianidin-3-0-glucsido en inyec-
ciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estnJur C y Solucin muestra
Usando el cromatograma de Solucin estndar C y el
Cromatograma rle Referencia, identificar los tiempo_s
de retencin de los picos que corresponden a los dife-
rentes antociansidos y antocianidinas. Los tiempos de
retencin relativos aproximados, relativos a cloruro de
cianidin-3-0-glucsido, se proporcionan para los anto-
USP 38 Suplt>int'ntos Dietticos / MSM 659 3

ciansidos en la Tabla 2 y para las antocianidinas en la Criterios de aceptacin

Tabla 3. Suma de todos los antociansidos: No meno~ de
Calcular por separado los porcentajes de cada antocia- 36,0% con respecto a la materia anhidra
nsido (ver la Tabla 2) en la porcin de Extracto en Suma de todas las antocianidinas: f\Jo rn<l~ Je 1,0%
Polvo tomada: con respecto a la materia anhidra

Resultado= (r11/r1) x (Cs/C11) x 100 CONTAMINANTES

= respuesta del pico de cada uno de los

antociansidos de la Solucin muestra Eliminar lo siguiente:
= respuesta del pico de cloruro de cianidin-3-0-
glucsido de la Solucin estndar A . METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
Cs = concentracin de ER Cloruro de Cianidin-3-0- 20 P,pme (Oficial Ol-dic-2015)
glucsido USP en la Solucin estndar A ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
(mg/mL) lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
Cu = concentracin de Extracto en Polvo en la requisitos.
Solucin muestra (mg/mL) PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021)
Recuento total de microorganismos aerobios: No
ms de 104 ufc/g
Tabla 2 Recuento total combinado de hongos filamentosos y
Tiempo de levaduras: No ms de 10 3 ufc/g ,
Ana lito --~-
Retencin Relativo AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Cloruro de delfinidin-3-0-aalactsido o 61 ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
Cloruro de delfinidin-3-0-alucsido o 73
Cloruro de cianidin-3-0-aalactsido o 84 PRUEBAS ESPECFICAS
Cloruro de delfinidin-3-0-arabinsido o 86 FRACCIN INSOLUBLE EN CIDO:
Cloruro de cianidin-3-0-alucsido 1 00 Muestra: 5 g de Extracto en Polvo finamente molido
Cloruro de petunidin-3-0-aalactsido 1 08 Anlisis: Transferir aproximadamente 1 g a un matraz
de 500 mL, agregar 200 mL de cido clorhdrico O, 1 N
Cloruro de cianidin-3-0-arabinsido 1 11
y agitar vigorosamente durante 2 horas. Pasar la solu-
Cloruro de petunidin-3-0-alucsido 1 24 cin a travs de un filtro de vidrio sinterizado previa-
Cloruro de peonidin-3-0-aalactsido 1 36 mente tarado, lavar el matraz con 30 mL de cido clor-
Cloruro de petunidin-3-0-arabinsido 1 39 hdrico O, 1 N y transferir los lavados al filtro. Lavar el
Cloruro de oeonidin-3-0-alucsido 1 55 filtro con 30 mL de cido clorhdrico O, 1 N en porcio-
Cloruro de malvidin-3-0-aalactsido 1 58 nes de 5 mL. Secar el filtro durante 3 horas a 1 05,
enfriar en un desecador y pesar. Calcular el porcentaje
Cloruro de oeonidin-3-0-arabinsido 1 67
de la fraccin insoluble en cido.
Cloruro de malvidin-3-0-alucsido 1 76 Criterios de aceptacin: No ms de 5%
Cloruro de malvidin-3-0-arabinsido 1 91 DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo la (921): No ms de
4,5%, determinado en 0,5 g
Calcular por separado los porcentajes de antocianidinas RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de 3,0%, deter-
(ver la Tabla 3) en la porcin de Extracto en Polvo minado en 1,0,g
tomada: EXTRACTOS BOTANICOS, Disolventes Residuales (565): Cum-
ple con los requisitos.
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
REQUISITOS ADICIONALES
ru = respuesta del pico de cada una de las ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
antocianidinas de la Solucin muestra cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
rs = respuesta del pico de cloruro de cianidina de temperatura ambiente controlada.
la Solucin estndar B ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
Cs = concentracin de ER Cloruro de Cianidina USP latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
en la Solucin estndar B (mg/mL) planta a partir de la que se prepar el artculo. Cumple
Cu = concentracin de Extracto en Polvo en la con los otros requisitos de etiquetado indicados en Ex-
Solucin muestra (mg/mL) tractos Botnicos (565).
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
Tabla 3 ER Extracto en Polvo de Mirtillo USP
ER Cloruro de Cianidina USP
Tiempo de
ER Cloruro de Cianidin-3-0-glucsido USP
~-----J\_11alito Retencin Relativo
Cloruro de delfinidina 1 28
Cloruro de cianidina ----- ___________1,82 -------
Cloruro de oetunidina 2 08
Cloruro de oeonidina 2 27
Cloruro de malvidina 2 30
6594 MSM /Suplementos Dietticos
MSM-ver l\1etilsulfonilmetano en
Suplementos Dietticos
Niacina-ver Niacina en Monografas
Generales
Niacina, Tabletas-ver Niacina, Tabletas en
Monografas Generales
Niacinamida-ver Niacinamida en
Monografas Generales
Niacinamida, Tabletas-ver Niacinamida,
Tabletas en Monografas Generales
Oleovitaminas A y D-ver Oleovitaminas A
y O en Monografas Generales
Oleovitaminas A y D, Cpsulas-ver
y O, Cpsulas en Monografas
Oleovitaminas A
Generales
Olmo-ver Olmo en Monografas Generales
Olmo Americano-ver Olmo en
Monografas Generales
Triglicridos de cidos Omega-3
DEFINICIN ,
Los Triglicridos de Acidos Omega-3 son una mezcla de
mono-, di- y tristeres de cidos omega-3 con glice:ol
que contiene principalmente tristeres y que se obtiene .
por esterificacin de cidos omega-3 concentrados y puri-
ficados con glicerol o por transesterificacin de l,o~ steres
etlicos de los cidos omega-3 con glicerol. Los ac1dos
omega-3 provienen del aceite del cuerpo de pescados de
las familias Engraulidae, Carangidae, Cl~peidae, Osmen-
dae, Salmonidae y Scombridae y se definen como los si-
guientes: cido alfa-linolnico (Cl 8:3 n-3), cido morc-
tico (Cl 8:4 n-3), cido eicosatetraenoico (C20:4 n-3),
cido eicosapentaenoico (EPA, por sus siglas en ingls)
(C20:5 n-3), cido heneicosapentaenoico (C21 :5 n-3),
cido docosapentaenoico (C22:5 n-3) y cido docosahe-
xaenoico (DHA, por sus siglas en ingls) (C22:6 n-3).
Contienen no menos de 58,0% de cidos omega-3 totales
expresados como triglicridos y no menos de la cantidad
declarada de EPA y HA, expresada como cidos grasos
libres. Pueden agregarse antioxidantes adecuados en con-
centraciones apropiadas.
USP 38
IDENTIFICACIN
A. Los tiempos de retencin de los pic?s del ste_r met-
lico del cido eicosapentaeno1co y del ester metil1co del
ac1do docosahexaenoico de la Solucin muestra en la,s
prueba-, Je Contenido de EPA y DHA y Contenido de Acidos
Omega-3 Totales corresponden a los de los respectivos
compuestos de las Soluciones estndar. Si el etiquetado
no declara EPA o DHA, el pico correspondiente a ese
cido omega-3 no excede de 15,0% del rea total detec-
tada de la Solucin muestra en, las pruebas de Contenido
de EPA y DHA y Contenido de Acidos Omega-3 Totales.
B. El tiempo de retencin del pico correspondiente a los
triglicridos de la Solucin muestra corresponde al del
pico de triglicridos de la Solucin de aptitud del sistema
en la prueba de Contenido de Oligmeros y Glicridos
Parciales.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE EPA Y DHA
Anlisis: Proceder segn se indica en, Grasas y Aceites
Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de Acidos Grasos
Omega-3.
Criterios de aceptacin: No menos de la cantidad de-
clarada, expr,esado como cidos libres
CONTENIDO DE ACIDOS OMEGA-3 TOTALES
Anlisis: Proceder segn se indica en, Grasas y Aceites
Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de Acidos Grasos
Omega-3.
Criterios de aceptacin: No menos de 58,0% de ci-
dos omega-3 totgles, expresadq como triglicridos
CONTENIDO DE OLIGOMEROS Y GLICERIDOS PARCIALES
Fase mvil: Usar tetrahidrofurano. ,
Solucin muestra: 1,00 mg/mL de Triglicridos de Aci-
dos Omega-3 en Fase mvil
Solucin de aptitud del sistema: 0,5 mg/mL de mono-
docosahexaenona, 0,3 mg/mL de didocosahexaenona
y 0,2 mg/mL de tridocosahexaenona en Fase mvil.
LNOTA-Se pueden obtener grados adecuados de mo-
nodocosahexaenona, didocosahexaenona y tridocosa-
hexaenona de Nu-Chek Prep.]
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Refractmetro diferencial
Columnas: Tres columnas en secuencia, de 7,8 mm x
30 cm, con relleno L21 de 7 m. Dos de las columnas
tienen un tamao de poro de 50 nm y la otra, un
tamao de poro de 1O nm, configuradas de modo tal
que las columnas con un tamao de poro de 50 nm
sean las ms prximas al inyector.
Velocidad de flujo: 0,8 mL/min
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Orden de elucin: Tridocosahexaenona, didocosa-
hexaenona y monodocosahexaenona
Resolucin: No menos de 2,0 entre monodocosahe-
xaenona y didocosahexaenona, y no menos de 1,0
entre didocosahexaenona y tridocosahexaenona
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales.
Calcular el porcentaje de oligmeros en la rorcin de
Triglicridos de Acidos Omega-3 tomada:
Resultado = (ru! r1) x 100
ru = suma de las reas de los picos con un tiempo
de retencin menor que el del pico de
triglicrido
r, = suma de las reas de todos los picos en el
cromatograma
USP 38
Ca!cu!ar e! porcentae de glicridos parciales (rn,ono y
diglicridos) en ia porcin de Triglicridos de Acidos
Omega-3 lomada:
Resultado - (r:/r:) v 100
ru = suma de las reas de los picos que
corresponden a diglicridos y monoglicridos
,-, = suma de las reas de todos los picos en el
cromatograma
Criterios de aceptacin: No ms de 3,0% de oligme-
ros y no ms de 50,0% de glicridos parciales
CONTAMINANTES
LMITE DE ARSNICO
[N01A-Para la preparacin de todas l_as solu_ciones _arno-
sas y para enjuagar los vasos de v1dno, teflon y plast1co
antes de su uso, usar agua que se haya pasado primero
a travs de una resina de intercambio inico de lecho
mixto, de cido fuerte y de base fuerte. Sele~cionar to-,
dos los reactivos para que tengan un contenido de arse-
nico tan bajo como sea pos_ible y alma_ce~ar todas la_s_
soluciones reactivo en rec1p1entes de v1dno de boros1h-
cato. Limpiar los vasos de vidrio, tefln y plstico antes
de su uso empapando en cido ntrico 8 N tibio du-
rante 30 minutos y enjuagando con agua des1ornzada.]
Solucin A: Transferir 1 g de metal de paladio ultra
puro a un vaso de precipitados de teflon. Agregar
20 mL de agua y 1 O mL de cido ntrico, y entibiar so-
bre una placa de calentamiento hasta disolver. Dejar
que la solucin se enfre, a _temperatura ambi_en_te, trans-
ferir a un matraz volumetnco de 100 mL y diluir con
agua desionizada a volumen.
Solucin B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
40 mL de agua y 1 mL de cido nt~ico, y entib~a: sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los soh~os.
Dejar que la solucin se enfr_e a temperatura amb1e~te,
transferir a un matraz volumetnco de 1 00 mL y diluir
con a~ua desioniza_da a volum_en. , . , .
Solucion C: Solucion A, Soluoon By ac1do n1tnco al 2%
(3:2:5). Un volumen de 5 L proporciona 0,015 mg de
palaciio y, 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1 :19)
Solucin madre del estndar: Transferir 1 0,0 mL de
Solucin Estndar de Arsnico, preparada segn se indica
en Arsnico (211 ), a un matraz volumtrico de 1 00 mL.
Agregar 40 mL de agua y 5 mL de cido ntrico, y diluir
con agua a volumen. Esta solucin contiene O, 1 O g/mL
de arsnico.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
con Blanco hasta obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/mL de arsnico.
Solucin muestra: Para preparar la Solucin muestra,
usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrn de 2455 MHz y una potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %,
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimiento interno de tefln de 1 00 mL. Usar
membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
sin excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
para desbordamiento. Equipar el horno de microondas
con uri tubo de escape para ventilar los humo~. [PRE-
CAUCION-Usar proteccion adecuada para los. oos, a~e
ms de ropa y guantes protectores.] Transferir aproxi-
madamente 500 mg de Triglicridos de Acidos Omega-
3, pesados con una aproximacion de O, 1 mg, a_ un vaso
de digestin con recubrimiento interno de teflon. Pre-
parar las muestras por duplicad(). Agregar 15 mL de
cido ntrico y agitar por rotac1on suave. _Cubrir los_ va-
sos con tapas dejando cerrado el accesorio de ventila-
cin. Digerir previamente durante toda la noche bao
una campana. Colocar la membrana de ruptura en el
accesorio de ventilacin y ajustar la tapa. Colocar todos
Suolcmcntos Dietticos / Omeg<i 3 6595
los vasos en el plato giratorio ciel horno de microond_a_s.
Conectar los tubos de escape a la tr a111pa de ventdauon
y conectar la lnea del sensor de pres_in al_ vaso apro-
piaJu. i11icia1 u11 pi uceJi111ie11lu Je J19est1on de dos
etapas calentando el microondas con una potenc1_a del
1 5% durante 15 minutos, seguida de una potencia del
25% durante 45 minutos. Retirar el plato giratorio con
los vasos del horno y dejar que los vasos se enfren a_
temperatura ambiente. [NOTA---Se puede usar un bano
de agua fresca para acelerar el proceso de enfria-
miento.] Ventilar los vasos cuando alcancen la tempera-
tura ambiente. Retirar las tapas y agregar lentamente
2 mL de perxido de hidrgeno al 30% a cada uno.
Dejar que las reacciones cesen y sellar los vasos. Volver
a colocar los vasos en el plato giratorio del horno de
microondas y calentar durante 15 minutos adicionales a
una potencia del 30%. Retirar los vasos _del horno y .
dejar que se enfren a temperatura amb1e,nt_e. Transferir
los digeridos enfriados a mat rae es volumetncos de
25 mL y diluir con agua a volumen. . , . .
Anlisis: Programar el horno de grafito segun se 1nd1ca
a continuacion. Secar a 115' usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time} de 65 se~
gundos y un flujo de argn de 300 mL/m1n; carbonizar
la muestra a 1000 usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 mL/min; enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una temperatura de 20 y
un flujo de argn de 300 mL/min; atomizar a 2400
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido; y
limpiar a 2600 usando una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos ..
Inyectar por separado volumenes iguales (20 L) de las
Soluciones estndar, de la Solucin muestra y del Blanco,
seguidos de una inyeccin de 5 L de la Solucin C
para cada una de las muestras, en el tubo de grafito
de un espectrmetro de absorcin atmica con, un
horno de grafito adecuado equipado con una lampara
de ctodo hueco para arsnico. Determinar el rea del
pico en la lnea de emisi,n de arsnico a ~ 93,7 n111,
corregida por la ab_sorcion de fondo. Graf1ca_r las areas
de los picos corregidas de las Soluoones estandar en
funcin de sus contenidos de arsnico, en g/mL, y
calcular la lnea de regresin que mejor se ajuste a los
puntos. Determinar la concentra_c;in, C, en pg/mL, de
arsnico en cada mL de la Soluoon muestra interpo-
lando a partir de la lnea d~ r_egresin. ., .
Calcular el contenido de arsen1co en la porc1on de Tn-
glicridos de Acidos Omega-3 tomada:
Resultado= (C x \/)/W
C = concentracin de arsnico, segn se obtuvo
anteriormente, en la Solucin muestra
(g/mL) .
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Triglicridos de Acidos Omega-3
tomado para preparar la Solucin muestra (g)
Criterios de aceptacin: No mas de O, 1 ,ug/g
LMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparacin de todas l_as solu,ciones _acuo-
sas y para enjuagar los vasos de v1dno, teflon y plast1c_o
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a traves
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
cido fuerte y de hase fuerte. 5eleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas_ las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosil1cato. L1mp1ar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso .
empapando en 5cido ntrico 8 N ti_bio durante 30 m111u
tos y enjuagando con agua des1on1z?da.] .
Solucin A: 1 O g de fosfato monobas1co de amonio ul-
tra puro en 1 rnL de cido ntrico y 40 mL de agua para
6596 OmPga- 5 .1 Sup!emenlos Dietticos
disolver el foslato. Diluir con aaua desionizada hasta
100 ml. ~ ios vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
Solucin B: 1 g de nitrato de magnesio ultra puro a un
vaso de precipitado~ de tcfln. Agregar 40 ml Je d9Ud
y 1 ml de cido nt rirn, y entibiar sobre una placa de
calentamiento hasta disolver los slidos. Dejar que la
solucin se enfre a temperatura ambiente, transferir a
un matraz volumtrico de 1 00 ml y diluir con agua
desionizada a volumen.
Solucin C: Solucin A, Solucin By cido ntrico al 2%
(2:1 :2). Un volumen de 5 L proporciona 0,2 mg de
fosfato m,s 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1: 19)
Solucin madre del estndar: Transferir 10,0 ml de
Solucin Madre de Nitrato de Plomo, preparada segn se
indica en Metales Pesados (231 ), a un matraz volum-
trico de 1 00 ml. Agregar 40 ml de agua y 5 ml de
cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Transferir
1,0 ml de esta solucin a un segundo matraz volum-
trico de 100 ml, agregar 50 ml de agua y 1 ml de
cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Esta solucin
contiene O, 1 O g/ml de plomo.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
con Blanco hasta obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 pg/ml de plomo.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico.
Anlisis: Programar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 ml/min; carbonizar
la muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min; enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura de 20 y un flujo
de argn de 300 ml/min; atomizar a 2100 usando una
rampa de O segundos y un tiempo de espera de 5 se-
gundos con el flujo de argn detenido; y limpiar a
2600 usando una rampa de 1 segundo y un tiempo de
espera de 5 segundos.
Inyectar por separado volmenes iguales (20 L) de las
Soluciones estndar, de la Solucin muestra y del Blanco,
~eguidos de una inyeccin de 5 L de la Solucin C
para cada una de las muestras, en el tubo de grafito
de un espectrmetro de absorcin atmica con un
horno de grafito adecuado equipado con una lmpara
de ctodo hueco para plomo. Determinar el rea del
pico en la lnea de emisin de plomo a 283,3 nm,
corregida por la absorcin de fondo. Graficar las reas
de los picos corregidas de las Soluciones estndar en
funcin de sus contenidos de plomo, en g/ml, y cal-
cular la lnea de regresin que mejor se ajuste a los
puntos. Determinar la concentracin, C, en g/ml, de
plomo en cada ml de la Solucin muestra interpolando
a partir de la lnea de regresin.
Calcular el c9nten1do de plomo en la porcin de Trigli-
cridos de Ac1dos Omega-3 tomada:
Resultado= (C" \l)/W
C = concentracin de plomo, segn se obtuvo
anteriormente, en la Solucin muestra
(ug/ml)
V = volumen final de la Solucjn muestra (ml)
W = peso de Triglicridos Je Acidos Omega-3
tomado para preparar la Solucin muestra (g)
~riterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Pd1d la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
USP 38
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
empapando en cido nitrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enuagando con agua desionizada.J
Solucin A: 1 O~ de fosfato monobsico de amonio ul-
tra puro en 40 ml de agua y 1 ml de cido ntrico para
disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada hasta
100 ml.
Solucin B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de cido ntrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferir a un matraz volumtrico de 100 ml y diluir
con a9ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin B y cido ntrico al 2%
a volumen (2:1 :2). Un volumen de 5 L proporciona
0,2 mg d,e fosfato y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1: 19)
Solucin madre del estndar A: O, 1372 mg/ml de ni-
trato de cadmio
Solucin madre del estndar B: Solucin madre del es-
tndar A, cido ntrico y agua (2:1 :97). Esta solucin
contiene O, 1 O g/ml de cadmio. [NOTA-Antes de llevar
a volumen final, disolver en una porcin de agua y
cido ntrico.]
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del e)tndar
B con Blanco hasta obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/ml de cadmio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico.
Anlisis: Programar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 ml/min; carbonizar
la muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min; enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura de 20 y un flujo
de argn de 300 ml/min; atomizar a 2400 usando una
rampa de O segundos y un tiempo de espera de 5 se-
gundos con el flujo de argn detenido; y limpiar a
2600" usando una rampa de 1 segundo y un tiempo de
espera de 5 segundos.
Inyectar por separado volmenes iguales (20 L) de las
Soluciones estndar, de la Solucin muestra y del Blanco,
seguidos de una inyeccin de 5 L de la Solucin C
para cada una de las muestras, en el tubo de grafito
de un espectrmetro de absorcin atmica con un
horno de grafito adecuado equipado con una lmpara
de ctodo hueco para cadmio. Determinar el rea del
pico en la lnea de emisin de cadmio a 228,8 nm,
corregida por la absorcin de tondo. Graficar las reas
de los picos corregidas de las Soluciones estndar en
funcin de sus contenidos de cadmio, en g/ml, y
calcular la lnea de regresin que mejor se ajuste a los
puntos. Determinar la concentracin, C, en g/ml, de
cadmio en cada ml de la Solucin muestra interpo-
lando a partir de la lnea de regresin.
C;lcular el contenido de cadmio en los Triglicridos de
Acidos Omega- 3 tomados:
Resultado = (C x \l)/W
C = concentracin de cadmio, segn se obtuvo
anteriormente, en la Solucin muestra
(pg/ml)
V = volumen final dP la Solucfn muestra (ml)
W = peso de Triglicridos de Acidos Omega-3
tomado para preparar la Solucin muestra (q)
~riterios de aceptacin: No mas de O, 1 g/g
LIMITE DE MERCURIO: Proceder segn se indica en Mer-
curio (261), Mtodo /la, excepto que se debe usar una
Solucin Estandw de Mercurio con el equivalente a O, 1 g/
ml de mercurio.
USP 38 'iuplt"illt''ntos DiPtticos / Orovalc 6597

Solucin muestra: Prepdrdr ~egn se indica en Solucin disolvente. Luego se refina. Se puede agregar un antioxi-
mupstra en la prueba de Lmite de Arsnico, combinando dante adecuado.
lm 2 digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL de Solu-
cin de Permanganato de Potasio. IDENTIFICACIN
S:riterios de aceptacin: No mis de O, 1 ~1g/g A. Cumple con los requisitos de Pnwb,as Fsppficm en
LIMITE DE DIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POLICLORADOS Grasas y Aceites Fijos, Composicon de Acdos Grasos \401 ).
(PCBS, POR SUS SIGLAS EN INGLS)
IMPUREZAS
Anlisis: Determinar el contenido de dibenzo-para-dio-
xinas policloradas (PCDD, por sus siglas en ingls) y
dibenzofuranos policlorados (PCDF, por sus siglas en in- Eliminar lo siguiente:
gls) mediante la revisin B del mtodo N 161 3 de la
Environmental Protection Agency (Agencia de Protec- METALES PESADOS, Mtodo JI (231 >: No ms de 1 o g/
cin Ambiental de los Estados Unidos). Determinar el g (Oticial Ol-dic-2015)
contenido de bifenilos policlorados (PCB, por sus siglas
en ingls) mediante la revisin A del mtodo N 1668 PRUEBAS ESPECFICAS
de la Environmental Protection Agency. GRASAS y ACEITES FIJOS, ndice de Acidpz (401>: No ms
Criterios de aceptacin: La suma de PCDD y PCDF es de 1,0 .
no ms de 2,0 pg/g de equivalentes txicos de la OMS. GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401): No ms
La suma de PCDD, PCDF y PCB tipo dioxina (bifenilos de 5,0 .
policlorados, congneres IUPAC no-orto PCB-77, PCB- GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Saponificacin (401 >:
81, PCB-126 y PCB-169 y congneres IUPAC mono-orto 185-195
PCB-105, PCB-114, PCB-118, PCB-123, PCB-156, PCB- GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificab/e (401>: No
l 57, PCB-167 y PCB-189) es no ms de 10,0 pg/g de ms de 2,0% .
equivalentes toxicas de la OMS. GRASAS y ACEITES FIJOS, Composicin de Acidos Grasos
(401 >: El Aceite de Onagra presenta el perfil de compo-
PRUEBAS ESPECFICAS sicin de cidos grasos de la Tabla 1.
GRASAS y ACEITES FIJOS, ndice de Acidez (401>: No ms
de 3
Tabla 1
GRASAS y ACEITES FIJOS, ndice de Anisidina (401 >: No ms
de 30,0 Anotacin Porcentaje
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401>: No ms cido Graso Abreviada (%)
de 10,0 cido oalmtico 16:0 4 0-10 o
GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401 >: No cido esterico 18:0 1 0-4 o
ms de 2,0%
cido oleico 18:1 5 0-12 o
ABSORBANCIA
Solucin muestra: 0,24 mg/mL en isooctano cido Y-linolnico 18:3 7 0-14 o
Criterios de aceptacin: La absorbancia es no ms de cido linoleico . 18:2 _ _ _ ~_ 65 0-85 o
0,73, determinada a 233 nm.
NDICE DE REFRACCIN (831>: 1,477-1,479 a 20"
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- REQUISITOS ADICIONALES
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera- ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
tura ambiente controlada. Se puede envasar en frascos o permeables, preferiblemente bajo una atmsfera de gas
en otros envases de los cuales se haya expulsado el aire inerte. Proteger de la luz.
por generacin de vaco o mediante un gas inerte.
ETIQUETADO: La etigueta indica el contenido promedio de
DHA y EPA, como acidos libres, en mg/g, y el contenido
total de cidos omega-3, como cidos libres, en mg/g.
Tambin indica el nombre y la concentracin de cual- Orovale, Raz
quLer antioxidante agregado.
ESTA~DARES DE REFERf.NCIA USP (11> DEFINICIN
ER Ester Etlico del Acido Docosahexaenoico USP La Raz de Orovale es la raz madura y desecada de Withania
ster etlico del cido todo cis-4, 7, 1O,13,16, 19- somnfera (L.) Duna! (Fam. Solanaceae). Contiene no me-
docosahexaenoico. nos de 0,3% de withanlidos, calculado con respecto a la
C2 1 H,602 356,5? materia seca como la suma de agliconas de withanlidos,
El) Ester Etlico del Acido Eicosapentaenoico USP calculadas como withanlido A, y glicsidos de withanli-
Ester etlico del cido todo cis- dos, calculados como withansido IV.
5,8,11, 14, 1 7-eicosapentaenoico.
C22Hi.102 330,51 IDENTIFICACIN
ER Tricosanoato de Metilo USP A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
ster metlico del cido tricosanoico. DELGADA (201)
C24H4s02 368,64 Solucin estndar: Aproximadamente 200 mg de ER
Extracto de Raz de Orovale en Polvo USP en 1 O mL de
metano!. Calentar suavemente durante 10-15 minutos,
centrifugar, y usar el sobrenadante. [NOTA-Reservar el
volumen remanente del sobrenadante para su uso en la
Aceite de Onagra prueba de Contenido de Wthanldos.]
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 5,0 g
[90028-66-3]. de Raz de Orovale, reducida a polvo fino, a un matraz
de 250 mL provisto con un condensador de reflujo.
DEFINICIN Agregar 50 mL de metano!, someter a reflujo en un
El Aceite de Onagra se obtiene a partir de las semillas de bao de agua durante 1 0-15 minutos, enfriar a tempe-
Oenothera biennis L. El aceite se extrae mediante prensado ratura ambiente, y decantar el sobrenadante. Repetir
en fro, comprimiendo las semillas a una presin muy alta. hasta que el ltimo extracto se torne incoloro. Combi-
Tambin se puede extraer el aceite usando hexano como nar los extractos, filtrar, concentrar al vaco hasta apro-
6598 Orovale / Suplementos Dietticos USP 38

ximadamente 40 ml. v aimt;ir el volumen con metano! 1 Tiempo r- - Solucin A 1 Solucin B

--+-n-
1

hJsta 50,0 mL. [NOT_:'_R~servar el volumen remanente

de la Soluuon mu.estro fara su uso en la prueba de Con- ~ (~~n) ~5L___l,__--_-_-_..__<_;~~)----j~
lcn:do de VVithano/Jos.J ___ _ _ 1Q__ 1 95 5
Adsorbente: Gel de slice para cromJtogrJf1 de
0,25 mm 40 95 l~ ___5_ __J
Volumen de aplicacin: 25 pL Sistema cromatogrfico .
Fase mvil: Mezcla de acetato de etilo, tolueno y cido (Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
actico (45:55: 3) Modo: HPLC
Solucin reveladora: Mezclar 0,5 mL de anisaldehdo, Detector: UV 227 nm
1O mL de cido actico glacial, 85 mL de metanol y Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento ex-
5 mL de cido sulfrico concentrado en el orden haustivo (end-capped); relleno L1
especificado. Temperatura: 27 1 e
Anlisis Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra Volumen de inyeccin: 20 pl
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada Aptitud del sistema
(ver Cromatografa (621 )). Usar una cmara saturada. Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
Desarrollar hasta que el frente de la fase mvil haya Usando el cromatograma de la Solucin estndar C y el
recorrido aproximadamente 90% de la longitud de la cromatograma de referencia provisto con el lote de
placa. Secar la placa, rociar con Solucin reveladora, ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale USP usado,
calentar durante 5-1 O minutos a 100, y observar identificar los tiempos de retencin de los picos co-
bajo luz visible. rrespon,dientes a los diversos glicsid<;>s y agl.iconas de
Criterios de aceptacin: La Solucin mu~sf.fa presenta withanolidos. Los tiempos de retenc1on relativos apro-
cinco bandas principales de color azul gnsaceo con va- ximados de los glicsidos y agliconas de withanlidos
lores RF de aproximadamente O, 12; 0,29; 0,47; 0,67 y se proveen en la tabla siguiente.
0,73 que son similares en posicin y color a las bandas ________
principales de la Solucin estndar. Se observan otras
_,_

bandas de menor intensidad en la Solucin muestra y la Tiempo

Solucin estndar. Analito de Retencin Relativo
B. La Solucin muestra de la prueba de Contenido de Wit- Withansido IV ----
o 70
hanlidos presenta picos principales ? los !i~mpos de. re- Fisanulina D o 75
tencin correspondientes a los de w1thanohdo A y w1tha- 27-Hidroxiwithanona o 80
nsido IV en la Solucin estndar A y la Solucin estndar Withansido V o 89
B, respectivamente. Identificar otros pico~ ,de withanli-
dos en la Solucin muestra por comparac1on con la Solu- Withansido VI o 89
cin estndar C y el cromatograma de referencia provisto Withalerina A o 92
con el lote de ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale Withastramonlido o 96
USP usado. La Solucin muestra presenta picos adicionales Withanlido A ----- 1 00
correspondientes a algunos de los siguien~es wi,t~anli Withanona 1 01
dos: fisagulina D, 27-hidroxiwithanona, w1thanos1do V, Withanlido B 1 14
withansido VI, withaferina A, withastramonlido, witha-
nona y withanlido B. Requisitos de aptitud
El cromatograma de la Solucin estndar Ces similar al
COMPOSICIN cromatograma de referencia provisto con el lote de
CONTENIDO DE WITHANLIDOS
ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale USP usado.
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dici<;J~ de pot?- Resolucin: No menos de 1,0 para los picos de wit-
sio en 900 ml de agua, agregar 0,5 ml de ac1do fosfo- hanlido A y withanona, Solucin estndar C; no me-
rico, diluir con agua hasta 1000 mL, y me~clar. nos de 3 O entre el pico de withaferina A y el pico de
Solucin B: Acetonitrilo filtrado y desgas1ficado los compuestos que coeluyen de withansido V y wit-
Solucin estndar A: Disolver, usando calor suave, una hansido VI, Solucin estndar C
cantidad de ER Withanlido A USP en metano! para ob- Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
tener una solucin con una concentracin conocida de withanlido A, Solucin estndar A
aproximadamente O, 1 mg/mL. Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% en
Solucin estndar B: Disolver, usando calor suave, una inyecciones repetidas, pico de withanlido A, Solucin
cantidad de ER Withansido IV USP en metano! para estndar A
obtener una solucin con una concentracin conocida Anlisis
de aproximadamente O, 1 mg/mL. Muestras: Solucion estndar A, Solucin estndar B, So-
Solucin estndar C: Diluir 5 ml de la Solucin estn- lucin estndar C y Solucin muestra
dar preparada en la prueba de Identificacin A co.n me- Calcular el porcentaje de agliconas de withanlidos en
tano! hasta 1O ml y mezclar. Antes de la inyecc1on, pa- la porcin de Raiz de Orovale tomada:
sar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 pm o menor. Resultado = 5(rT/r1)(Cs/W)
Solucin muestra: Usar la Solucin muestra preparada
en la prueba de Identificacin A. Antes de la inyeccin,.. rr = suma de las resruestas de los picos de
pasar a travs de un filtro de membrana con un tamano withaferina A, withastramonolido,
de poro de 0,45 pm o menor, desechando los primeros withanlido A, withanona y withanlido B de
ml del filtrado. la Solucin muestra
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente. r1 = respuesta del pico de withanlido A de la
Solucin estndar A
Tiempo Solucin A 1
Solucin B 1
C1 = concentracin de ER Withanlido A USP en la
(min) (/o) -- - __CT<,l___J Solucin estndar A (mg/ml)
o 95 5 W = peso de Raz de Orovale tomada para preparar
_l _ _ _ _
la Solucin muestra (g)
1--------- -- - - -
55 45 -
25 20 80
USP 38
CalculJ el pOccntJjc de g!icsidos de withanlidos en
la porcin de Ra11 de Orovale tornada:
Resuitado = 5(rT 1s)( Csi\/v)
rr = suma de las respuestas de los picos de
withansido IV, withansido V y withansido
VI de la Solucin muestra
r, = respuesta del pico de withansido IV de la
Solucin estndar B
Cs = concentracin de ER Withansido IV USP en la
Solucin estndar B (mg/mL)
W = pesode Raz de Orovale tomada para preparar
la Solucin muestra (g)
Criterios de aceptacin: La suma de los porcentaes de
agl1conas de withanlidos y glicsidos de withan idos
es no menos de 0,3%, calculado con respecto a la ma-
teria seca. [NOTA-Debido a las variaciones inherentes
algunos de los withanlidos mencionados en esta ' temperatura ambiente.
prueba pueden presentarse en cantidades menores o
pueden estar totalmente ausentes. Se considerar que la
muestra cumple s1 la suma de los withanlidos totales
es no menos de 0,3%.]
IMPUREZAS
lmpu!"ezas Inorgnicas , ER Withansido IV USP
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 1,0%
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de 20 ppm
Impurezas Orgnicas
PROCEDIMIENTO 1: ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia
Orgnica Extraa (561): No ms de 2 0%
PROCEDIMIENTO 2: ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Las races primarias son rectas no rami-
ficadas, _cnicas o con forma de dedo, con un 'espesor
que vana_ con la edad; algunas presentan una corona
que consiste en restos de la base del tallo; la superficie
externa es de color beige a amarillo grisceo con arru-
gas long1tud1_nales; la factura es corta e irregular; las ra-
ces secundarias son delgadas y fibrosas.
Histologa
Seccin transversal de las races: Presenta una banda
estrecha de sber plegado de color amarillento, con
corteza de tamao moderado y madera ancha. Las c-
lulas suberosas son rectangulares, radialmente aplana-
d~s, no lign1f1cadas y que contienen grnulos de almi-
don y conten1~fo de color marrn rojizo; el cmbium
suberoso consiste en 2-4 hileras difusas de clulas la
cc;irteza secundaria est formada por 20-25 hilera; de
c_elulas pa,renquimticas de paredes delgadas, que con-
t1~nen gra~ulos de a!midn, y en ocasiones presenta
cristales m1croesfeno1dales de oxalato de calcio el
floema consiste en tubos cribosos, clulas acorr'ipaan-
tes y parnquima floemtico; el cmbium vascular
consiste en clulas parenquirnticas Langencialmente
alargadas; los vasos y traqueidas se encuentran en filas
radiales hacia la periferia de la madera; los radios me-
dulares, son uniseriad_os, o de 2 a 3 series, y que contie-
nen granulas de al~1don; vasos dispersos en grupos
1nclu1dos en el parenquima; los vasos presentan engro-
samientos punteados y escalariformes, y las paredes
termin.ales presentan, por lo general, perforaciones;
tamb1en se encuentran dispersas en la madera unas
, cuantas fibras con paredes gruesas lignificadas.
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Raz de Oro-
vale reducida a polvo fino l lose durlnte 3 horas: pierde
no ,ms de l 2,0% de su peso.
ARTICU~OS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No mas de 7,0%, determinado en 1,0 q de Raz de Oro-
vale reducida a polvo - con Soluoon reveladora, calentar durante 5-1 O minu-
Suplementos Diettiu.'' ,! Ornvale 6599
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, txtractos So/uh/es en Al-
cohol, Mtodo 2 ;561 /: ~--Jo
menos de 1O,0%
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO 2021 ;: El recuento to
ldl Je 111ic100rganisn-1os aerobiu~ iiG excede de 1 O') ufc/g;
el recuento total combinado de honJm filamentosos v
levaduras no excede de 10' utc;g; y el recuento de bc-
tenas Gram negativas tolerJntes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requ1s1tos de las pruebas para determinar la au-
sen,oa de Salmonella spp., y Escherichia coli
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Aflatoxinas (561): Cum-
ple con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla]lta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale USP
ER Withanlido A USP
Orovale, Raz en Polvo
DEFINICIN
La Raz en Polvo de Orovale es Raz de Orovale reducida a
polvo fino o a polvo muy fino.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Solucin estndar: Calentar suavemente durante
10-15 minutos, aproximadamente 200 ~g de ER E.x-
tracto en Polvo de Raz de Orovale USP en 1 O mL de
metano!, centrifugar, y usar el sobrenadante. [NOTA-
Reservar el volumen remanente del sobrenadante para
su u~? en la prueba de Con.tenido de Withanlidos.]
Soluc1on muestra: Transferir aproximadamente 5 O g
de Raz en Polvo de Orovale a un matraz de 250 ~L
provisto con un condensador de reflujo. Agregar 50 mL
de metano!, someter a reflujo en un bao de agua du-
rante 1 0-15 minutos, enfriar a temperatura ambiente, y
decantar el sobrenadante. Repetir hasta que el ltimo
extracto se torne incoloro. Combinar los extractos fil-
trar, concentrar al vaco hasta aproximadamente 4o
mL
y ajustar el volumen con metano! hasta 50,0 mL. '
[NOTA-Reservar el volumen remanente de la Solucin
muestra para su uso en la prueba de Contenido de
Withanlidos. J
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa de
0,25 mm
Volumen de aplicacin: 25 pL
Fase mvil: Mezcla de acetato de etilo, tolueno y cido
actico (45:55:3)
Solucin reveladora: Mezclar 0,5 mL de anisaldehdo,
1 O mL de. cido actico glacial, 85 mL de metano! y
5 ml de ac1do sulfunco concentrado en el orden
mencionado
Anlisis
Muestras: Solucin estandar y Soluon muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada
(ver Cromatograf1a (621 )). Usar una cmara saturada.
Desarrollar los crom;itogr;imas hasta que e! frente de
la fase mvil haya recorrido aproximadamente 90%
de la placa; Retirar la placa de la cmara, secar, rociar
tos a 1 00 , y observar bajo luz visible.
6600 Orovale ! Sup!emenlos Dietticos USP 38

Criterios de aceptacin: La Soluc1on muestra presenta aproximados de los glicsidos y aqliconas de witha-
cinco bandJs principJlcs de color azul grisceo con va- nlidos se proveen en la tabla siguiente.
lores R, de aproximadamente O, 12; 0,29; 0,47; 0,67 y ------
0,73 que son sirni!.:ircs en u~icin y color a las bcittd~ Tiempo
principales de la 'in/11ririn ntnndar. Se observan otras ! Analilo
! de Retencin Relativo
bandas de menor intensidad en la Solucin muestra y la
Solucin estndar. W1thanos1do IV --------- ------ -
o 70
B. La Solucin muestra de la prueba de Contenido de Wit- Fisaaulina D o 75
hanlidos presenta picos principales a los tiempos de re- 27 -Hidroxiwithannna ------------- - o 80
tencin correspondientes a los de withanlido A y witha- Withansido V o 89
nsido IV en la Solucin estndar A y la Solucin estndar Withansido VI o 89
B, respectivamente. Identificar otros picos de withanli- Withaferina A o 92
dos en la Solucin muestra por comparacin con la Solu-
cin estndar C y el cromatograma de referencia provisto Withastramonlido o 96
con el lote de ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale Withanlido A 1 00
USP. La Solucin muestra presenta picos adicionales co- _\!Y_itl:@.n oria.. - - 1 01
rrespondientes a algunos de los siguientes withanlidos: Withanlido B 1 14
fisagulina D, 27-hidroxiwithanona, withansido V, witha-
nsido VI, withaferina A, withastramonlido, withanona y Requisitos de aptitud
withanlido B. El cromatograma de la Solucin estndar Ces similar al
cromatograma de referencia provisto con el lote de
COMPOSICIN ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale USP.
CONTENIDO DE WITHANLIDOS Resolucin: No menos de 1,0 para los picos de wit-
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota- hanlido A y withanona, y no menos de 3,0 entre el
sio en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de cido fosf- pico de withaferina A y el pico de los compuestos
rico, diluir con agua hasta 1 000 mL, y mezclar. que coeluyen de withansido V y withansido VI, So-
Solucin B: Acetonitrilo filtrado y desgasificado lucin estandar e
Solucin estndar A: Disolver, usando calor suave, una Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
cantidad de ER Withanlido A USP en metano! para ob- withanlido A, Solucin estndar A
tener una solucin con una concentracin conocida de Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% en
aproximadamente O, 1 mg/mL. inyecciones repetidas, pico de withanlido A, Solucin
Solucin estndar B: Disolver, usando calor suave, una estndar A
cantidad de ER Withansido IV USP en metano! para Anlisis
obtener una solucin con una concentracin conocida Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
de aproximadamente O, 1 mg/ml. lucin estndar C y Solucin muestra
Solucin estndar C: Diluir 5 mL de la Solucin estn- Calcular el porcentaje de agliconas de withanlidos en
dar preparada en la prueba de Identificacin A con me- la porcin de Raz en Polvo de Orovale tomada:
tano! hasta 1O mL y mezclar. Antes de la inyeccin, pa-
sar a travs de un filtro de membrana con un tamao Resultado = 5(r,/rs)(Cs/W)
de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Usar la Solucin muestra preparada r, =suma de las respuestas de los picos de
en la prueba de Identificacin A. Antes de la inyeccin, withaferina A, withastramonolido,
pasar a travs de un filtro de membrana con un tamao withanlido A, withanona y withanlido B de
de poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros la Solucin muestra
mL del filtrado. rs = respuesta del pico de withanlido A de la
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente. Solucin estndar A
Cs = concentracin de ER Withanlido A USP en la
Tiempo Solucin A Solucin B
Solucin estndar A (mg/ml)
min
W = peso de Raz en Polvo de Orovale tomada
lo lo
para preparar la Solucin muestra (g)
o 95 5 Calcular el porcentaje de glicsidos de withanlidos en
__1_8______ 55 45 la porcin de Raz en Polvo de Orovale tomada:
25 .:z.Q.. . -- _ _f)_ __
..l.!L.____ 20 80 Resultado = 5(rr/rs)(Cs/W)
30 95 5
r, = suma de las respuestas de los picos de
40 95 5 withansido IV, withansido V y withansido
VI en la Solucion muestra
Sistema cromatogrfico
rs = respuesta del pico de withansido IV de la
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.) Solucin estndar B
Modo: HPLC
C ~ concentracin de ER Withansido IV USP en la
Detector: UV 227 nm
Solucin estndar B (mg/ml)
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento ex-
W = peso de Raz en Polvo de Orovale tomada
haustivo (end-capped); relleno L1
para preparar la Solucin muestra (g)
Temperatura: 27 l ''
Criterios de aceptacin: La suma de los porcentajes de
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
agliconas de withanlidos y glicsidos de withanlidos
Volumen de inyeccin: 20 pL
es no menos de 0,3% calculado con respecto a la ma-
Aptitud del sistema
teria seca [NOTA-Debido a las variaciones inherentes,
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
algunm ue los withanlidos mencionados en la prueba
Usando el cromatograma de la Solucin estndar C y el anterior pueden presentarse en cantidades menores o
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de pueden e~t ar totalmente ausentes. Se considerar que la
ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale USP, identifi- muestra cumple si la suma de los withanlidos totales
car los tiempos de retencin de los picos correspon- es no menos de 0,3%.]
dientes a los diversos glicsidos y agliconas de witha-
nlidos. Los tiempos de retencin relativos
USP 38
IMPUREZAS
lmpu~ezas Inorgnicas , A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No mas de 1,0%
METALES PESADOS, Mtodo 11 \231\: t'~o mis ele 20 ppm
Impurezas Orgnic~s , .
PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo
General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Cumple con los requisitos
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Polvo blanco o gris oscuro a marrn
claro con un olor caracterstico y un sabor acre, amargo
y mucilaginoso.
Histologa
Examen microscpico: Presenta clulas suberosas co-
lapsadas que contienen grnulos de almidn y conte-
nido de color marrn rojizo; clulas parenquimticas
de la corteza de paredes delgadas que contienen gr-
nulos de almidn y en ocasiones presenta cristales mi-
crosfenoidales de oxalato de calcio; vasos con engrosa-
mientos punteados y escalariformes, y generalmente
con paredes terminales perforadas; unas pocas fibras
con paredes gruesas lignificadas y puntuaciones sim-
ples; grnulos de almidn abundantes, en su mayora
simples, en ocasiones compuestos, esfricos, ovalado
reniformes con hilo centraL
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g a 105" durante 3
horas: pierde no ms de 12,0% de su peso.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 7,0%, determinado en 1,0 g de Raz en Polvo
de Orovale
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo 2 (561): No menos de 10,0%
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
l0 3 ufc/g. , hanlidos presenta picos principales a los tiempos de re-
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
sen,cia de Salmonel/a spp., y Escherichia coli
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Aflatoxinas (561): Cum-
ple con los requisitos
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale USP
ER Withanlido A USP
ER Withansido IV USP
Extracto en Polvo de Raz de Orovale
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Raz de Orovale se prepara a partir
de Raz de Orovale usanrlo metano!, alcohol, agua o mez-
clas de estos disolventes. Contiene no menos de 2,5% de
withanlidos, calculado con respecto al extracto seco
como la suma de agliconas de withanlidos y glicsidos
de withanlidos.
Suplementos Dietticos / Orovale 6601
IDENTIFICACIN
DELGADA (201)
Solucin estndar: CilcntJr suJvcmente durante
1 0-15 minutos aproximarlamente 200 mg de ER Ex-
tracto en Polvo de Ra1z de Orovale USP en l O mL de
metano!, centrifugar, y usar el sobrenadante. [NOTA-
Reservar_ el volumen remanente del sobrenadante fara
su uso en la prueba de Contenido de Withanlidos.
Solucin muestra: Calentar suavemente durante 10-15
minutos aproximadamente 200 mg de Extracto en
Polvo de Raz de Orovale en 1 O mL de metanol, centri-
fugar, y usar el sobrenadante.
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa de
0,25 mm
Volumen de aplicacin: 25 L
Fase mvil: Mezcla de acetato de etilo, tolueno y cido
actico (45:55:3)
Solucin reveladora: Mezclar 0,5 mL de anisaldehdo,
1 O mL de cido actico glacial, 85 mL de metano! y
5 mL de cido sulfrico concentrado en el orden
mencionado.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa adecuada
(ver Cromatografa (621 )). Usar una cmara saturada.
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de
la fase mvil haya recorrido aproximadamente 90%
de la longitud de la placa. Retirar la placa de la c-
mara, secar, rociar con Solucin reveladora, calentar
durante 5-1 O minutos a 100, y observar bajo luz
visible.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
cinco bandas principales de color azul grisceo con va-
lores RF de aproximadamente O, 12; 0,29; 0,47; 0,67 y
0,73 que son similares en posicin y color a las bandas
principales de la Solucin estndar. Se observan otras
bandas de menor intensidad en la Solucin muestra y la
Solucin estndar.
B. La Solucin muestra en la prueba de Contenido de Wit-
tencin correspondientes a los de withanlido A y witha-
nsido IV en la Solucin estndar A y la Solucin estndar
B, respectivamente. Identificar otros picos de withanli-
dos en la Solucin muestra por comparacin con la Solu-
cin estndar C y el cromatograma de referencia provisto
con el lote de ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale
USP usado. La Solucin muestra presenta picos adicionales
correspondientes a algunos de los siguientes withanli-
dos: fisagulina D, 27-hidroxiwithanona, withansido V,
withansido VI, withaferina A, withastramonlido, witha-
nona y withanlido B.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE WITHANLIDOS
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio en 900 mL de agua, agregar 0,5 mL de cido fosf-
rico, diluir con agua hasta 1000 mL, y mezclar.
Solucin B: Acetonitrilo filtrado y desgasificado
Solucin estndar A: Disolver, usando calor suave, una
cantidad de ER Withanlido A USP en metanol para ob-
tener una solucin con una concentracin conocida de
aproximadamente O, 1 mg/mL.
Solucin estndar B: Disolver, usando calor suave, una
cantidad ER Withansido IV USP en metanol para obte-
ner una solucin con una concentracin conocida de
aprox!madarT1ente O, 1 mg/_mL. ._ ,
Solucion estandar C: Diluir 5 mL de la Soluc1on estan-
dar preparada en la prueba de Identificacin A con me-
tanol hasta 1O mL y mezclar. Antes de la inyeccin, pa-
sar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 100 mg
de Extracto en Polvo rle Raz de Orovale, pesado, a un
matraz volumtrico de 1O mL, agregar aproximada-
6602 OrovalP ,1 ~u1/emenlos Dietticos USP 38

mente 7 mL de metanol, calentar suavemente en un r, = suma de las respuestas Je lm picm rlP

bano de vapor durante 15 20 rninutus, diluir con meta- w1thaferina A, withastramonolido,
no! a volumen, y mezclar. Antes de la inyeccin, pasar a withanlido A, withanona v withanlirln B rlP
tr<lv~ de un fi!tro de rnc:nbdl<l con un tarnd1-1u Je la '>oluoon m1wstm
poro de 0,45 pm o mPnnr, desechando !os primeros 1, -::- ! l:::'~f-'Ut'"ild de! pie.: o de \Vithunolid A de Id

rnL del filtrado. Solucin estndar A

Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente. C = concentracin de ER Withanlido A USP en la
Solucin estndar A (mg/mL)
1 --, W = peso de Extracto en Polvo de Raz de Orovale
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) l/o\ 1%) tomado para preparar la Solucin muestra (g)
Calcular el porcentaje de glicsidos de withanlidos en
o 95 5
la porcin de Extracto en Polvo de Raz de Orovale
18 55 45 tomada:
25 20 80
-- 28 20 80 Resultado = (rr/rs)(C/W)
30 - - - - - - -95
- 5
-- -----
rT = suma de las respuestas de los picos de
40 95 5 withansido IV, withansido V y withansido
Sistema cromatogrfico VI de la Solucin muestra
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema,) rs = respuesta del pico de withansido IV de la
Modo: HPLC Solucin estndar B
Detector: UV 227 nm C1 = concentracin de ER Withansido IV USP en la
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento ex- Solucin estndar B (mg/mL)
haustivo (end-capped); relleno L1 W = peso de Extracto en Polvo de Raz de Orovale
Temperatura: 27 1 tomado para preparar la Solucin muestra (g)
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min Criterios de aceptacin: La suma de los porcentajes de
Volumen de inyeccin: 20 pL las agliconas de withanlidos y glicsidos de withanli-
Aptitud del sistema dos es no menos de 2,5%, calculado con respecto al
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C extracto seco. [NOTA-Debido a las variaciones inheren-
Usando el cromatograma de la Solucin estndar C y el tes, algunos de los withanlidos mencionados en esta
Cromatograma de Referencia provisto con el lote de prueba pueden presentarse en cantidades menores o
ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale USP usado, pueden estar totalmente ausentes. Se considerar que la
identificar los tiempos de retencin de los picos co- muestra cumple si la suma de los withanlidos totales
rrespondientes a los diversos glicsidos y agliconas de es no menos de 2,5%.]
withanlidos. Los tiempos de retencin relativos apro- IMPUREZAS
ximados de los glicsidos y agliconas de withanlidos Impurezas Inorgnicas
se proveen en la tabla siguiente.
---- --- -- --- -----
Tiempo Eliminar lo siguiente:
Ana lito de Retencin Relativo
Withansido IV o 70 METALES PESADOS, Mtodo 11 (231 ): No ms de
-
20 ppme (Oficial Ol-dic-2015)
~uliQE_D o 75 Impurezas Orgnic~s ,
27-hidroxiwithanona ----- o 80 -- PROCEDIMIENTO: ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo
Withansido V o 89 General para Anlisis de Residuos de Plaguicidas (561 ):
Withansido VI o 89 Cumple con los requisitos
Withaferina A o 92 PRUEBAS ESPECFICAS
Withastramonlido ----- - -
o 96 PRDIDA POR SECADO (731): Secar 2,0 g a 105" durante 3
Withanlido A 1 00 horas: pierde no ms de 6,0% de su peso.
Withanona 1 01 PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Withanlido B -
1 14 tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
Requisitos de aptitud levaduras no excede de 1 qi ufc/g,
El cromatograma de la Solucin estndar Ces similar al PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
cromatograma de referencia provisto con el lote de SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cumple
ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale USP usado. con los requisitos de las pruebas para determinar la au-
Resolucin: No menos de 1,0 para los picos de wit- sen,cia de Salmonella spp., y Escherichia coli
hanlido A y withanona, y no menos de 3,0 entre el ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Aflatoxinas (561): Cum-
pico de withaterina A y el pico de los compuestos ple con los req,uisitos
que coeluyen de withansido V y withansido VI, So- EXTRACTOS BOTANICOS, Oisolvrntes Rrsiduales (565): Cum-
lucin estandar e ple con los requisitos
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
withanlido A, Solucin estndar A REQUISITOS ADICIONALES
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% en ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
inyecciones repetidas, pico de withanlido A, Solucin cerrados. Proteger de la luL y la humedad, y almacenar a
estndar A temperatura ambiente controlada.
Anlisis ETIQUETADO: La etiriueta indica el nombre cientfico en
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8, So- latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
lucin estndar C y Solucin muestra planta de la que se prepar el artculo, Cumple con otros
Calcular el porcentaje de aglicorias de withanlidos en requisitos de etiquetado en extractos Botnicos (565).
la porcin de Extracto en Polvo de Raz de Orovale
tomada:

Resultado = (r,/r,)(C/W)
USP 38 Suplementos Dietticos / Ortiqa 6603

ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11) estndar interno y diluir con cloroformo hasta 1 O ml.
ER Extracto en Polvo de Raz de Orovale USP Transferir 0,5 ml de esta solucin a u11 n1atraL de fondo
ER Withanlido A USP r~dondo de 1 O ml, evaporar el disolvente a presin re-
ER Withansido IV USP auc1da y agregar 0,5 rnl de Reulilvu de derivatizacin.
Sistema cromato9rfico
(Ver CromatografJO (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la llama
Ortiga Columna: Capilar de slice fundida; de 0,20 mm x 25
m recubierta con una pelcula de fase G2 de 0,35 m
DEFINICIN Temperatura
La Ortiga est constituida por las races y rizomas secos de Inyector: 325'
Urt1ca dioica L. ssp dioica (Fam. Urticaceae) y puede con- Detector: 325
tener como .un componente menor, Urtica urens L., cono- Columna: 300, durante 60 minutos
oda comercialmente como ortiga menor. Contiene no Gas transportador: Helio
menos de 0,8% de aminocidos totales, no menos de Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
0,05% de /3-sitosterol (C79Hso0) y no menos de 3 g/g de Volumen de inyeccin: 1 L
esc.opoletina (C10Hs04), calculado con respecto a la ma- Aptitud del sistema
teria seca. Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
IDENTIFICACIN Factor de asimetra: No ms de 2,0 para cada pico
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA de esterol
DELGADA Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0% de-
Solucin estndar: 0,05 mg/ml de ER Escopoletina terminada a partir de cada pico de esterol
USP y 0,5 mg/ml de ER 3-Sitosterol USP en metano! Anlisis
Solucin muestra: Extraer 1 g de polvo sometiendo a Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
reflujo con 1 O ml de una solucin que contenga to- Calcular el porcentaje de 3-sitosterol en la porcin de
lueno, acetato de etilo y metano! (7:2:1) durante 15 Ortiga tomada:
minutos, enfriar y filtrar. Evaporar el filtrado hasta se-
quedad a presin reducida a menos de 40 y disolver el Resultado= (Ru/Rs) x (Ws/Wu) x 100
residuo en 2 ~L de la mezcla que contenga tolueno,
acetato de etilo y metano!. Ru = cociente de respuesta entre los picos de {3-
Sistema cromato9rfico sitosterol y estndar interno de la Solucin
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del- muestra
gada.) Rs = cociente de respuesta entre los picos de {3-
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro- sitosterol y estndar interno de la Solucin
matografa de 0,50 mm estndar
Volumen de aplicacin: 20 L para la Solucin mues- Ws = peso de ER /3-Sitosterol USP usado para
tra; 1 O L para la Solucin estndar preparar la Solucin estndar (mg)
Fase mvil: Dietil ter y metano! (9: 1) Wu = peso de Ortiga tomado para preparar la
Solucin reveladora: Acido fosfrico al 85%, vainillina Solucin muestra (mg)
al 10% en etanol al 96% y agua (4,5: 1: 4,5) Criterios de aceptacin: No menos de 0,05% con res-
Anlisis pecto a la materia seca
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra CONTENIDO DE ESCOPOLETINA
Desarrollar la placa y observar bajo luz UV a 365 nm. Solucin A: Agua
Rociar la placa con Solucin reveladora, calentar a una Solucin B: Metano!
temperatura entre 1 00 y 1 05 durante 1 O minutos y Fase mvil: Ver la Tabla 1.
observar la placa bajo luz diurna.
Cri!erios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- Tabla 1
c1.on muestra_ presenta una zona rojo violcea correspon-
-~--

Tiempo Solucin A Solucin B

d.1ente a 3-s1tosterol al mismo valor RF que la zona de f3- (min) (O/o) (%)
s1tosterol en la Solucin estndar, zonas dbilmente visi-
bles por encima y por debajo de 3-sitosterol y una zona o 75 25
rojo violcea correspondiente a 3-sitosterol-glucsido. 2 60 40
8 60 40
COMPOSICIN
CONTENIDO DE 3-SITOSTEROL
Reactivo d~ deriv~tizacin: Una solucin que con-
tenga vol u menes iguales (1 :1 :1) de BSTFA [N,0-bis(tri-
10
15
20
---------
----
o
75
--==r=-
--
_J_QQ_____
_ _ lQQ_ _ _
-- 25
metilsilil)trifluoroacetamida], piridina anhidra y una 30 - __ ] j -- 25
mezcla de BSA [N,0-(trimetilsilil)acetamida], TMSI (N-
trimetilsililimidazol) y TMCS (trimetilclorosilano) (3:3:2) Solucin estndar: 0,02 ~tg/mL de ER Escopoletina USP
Solucin de estndar interno: 1 O mg/ml de colesterol en metano!
en cloroformo Solucin madre de la muestra: Extraer 160 mg de Or-
Solucin estndar: Disolver 50,0 mg de ER {3-Sitosterol tiga reducida a polvo fino en cada ml de metano!. Co-
USP en 2 ml de cloroformo, agregar 1,0 ml de Solucin locar en un bao ultrasnico durante 25 minutos y
de estndar interno y diluir con cloroformo hasta 5 ml. centrifugar.
Evaporar 0,5 ml a presin reducida y agregM 1 ml de Solucin muestra: Solucin madre de la muestra diluida
Reactivo de derivatizacin. con metano! 1 en 20
Solucin muestra: Transferir 50,0 g de Ortiga reducida Sistema cromato9rfico
a polvo fino a un aparato Soxhlet, agregar cloroformo y (Ver CromatografJO (621 >, Aptit11rl riPI SistPma.)
extraer durante 6 horas. El volumen de cloroformo Modo: HPLC
usado es por lo menos el doble del volumen del dedal Detector: Fluorescencia; ajustado a una longitud de
con un matraz de tamano adecuado. Evaporar el disol- onda de excitacin de 366 nm y una longitud de
vente a presin reducida, agregar 1,0 ml de Solucin de onda de emisin de 420 nm
6604 Ortiga / 'i11>IP11wr1/m DiPlticos USP 38

Columna: 4,6 mm Y 25 cm; relleno L1 W cantidad de Ortiga tomad<i par<i preparar la

=
Velocidad de flujo: 1 mL/min Solucin muestra (mg)
Volumen de inyeccin: 1O uL F = factor de conversin de unidades
Aplilud del sistema ' 0,001 mg/g '
Muestra: ~nlurin estndw Criterios de aceptacin: No rne11os Je 0,8'10 con res-
Requisitos de aptitud pecto a la materia seca
Factor de capacidad (k'): No menos de 5, determi-
nado a partir del pico de escopoletina CONTAMINANTES
Factor de .asimetna: No ms de 2,0 para el pico de ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Residuos de Plaguicidas
escopolet1na (561 ): Cumple con los requisitos.
Desviacin estndar relativa: No ms de 5 0% PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Anlisis ' tal de microorganismos aerobios no excede de 106 ufc/g,
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra el recuento total combinado de hongos filamentosos y
Medir las respuestas de los picos de escopoletina. levaduras no excede de 10 4 ufc/g, y el recuento de bac-
Calcular el contenido de escopoletina (Cr 0 Hs0 4 ), en terias Gram-negativas tolerantes a la bilis no excede de
pg/g, en la porcin de Ortiga tomada: 10 3 ufc/g .
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
Resultado= (ru/ri) v Ci Y (V/W) x O ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
ru = rea del pico de escopoletina de la Solucin
muestra PRUEBAS ESPECFICAS
r1 = rea del pico de escopoletina de la Solucin CARACTERSTICAS BOTNICAS
estndar Macroscpicas: El rizoma tiene una forma torcida irre-
Cs = concentracin de ER Escopoletina USP en la gular, con un grosor de aproximadamente 3-1 O mm y
Solucin estndar (g/mL) la parte externa es de color marrn grisceo claro; pre-
V = volumen de Solucin madre de la muestra (mL) senta un surco longitudinal con protuberancias tortuo-
W = peso de Ortiga tomado para preparar la sas de las que nacen races finas. En un corte transversal
Solucin muestra (g) del rizoma se observa que es fibroso y de color blanco
O = factor de dilucin para preparar la Solucin amarillento claro, y por lo general tiene una cavidad
muestra, a partir de Solucin madre de la medular pequea. Las races son a menudo muy largas,
muestra por lo general de un grosor de 0,5-2 mm, su parte ex-
Criterios de aceptacin: No menos de 3 g/g con res- terna es de color marrn amarillento claro y tienen al-
pecto a la materia seca gunos surcos longitudinales profundos. En corte trans-
CONTENIDO DE AMINOCIDOS TOTALES versal, la raz presenta un color blanco plido casi puro.
Solucin amortiguadora: Mezclar 5,40 g de acetato de Microscpicas: La seccin transversal del rizoma y la
sodio anhidro, 0,3 mL de cido actico glacial y agua raz presenta las siguientes caractersticas. El rizoma
hasta un volumen final de 100 mL. Ajustar a un pH de tiene un sber estrecho formado por clulas marrones
5,5. de pared delgada, unas pocas hileras de parnquima
Solucin reactivo: Solucin que contenga 1,00 g de cortical alargadas de manera tangencial y una regin
ninhidrina, 150 mg de hidrindantina y 37,5 mL de pro- pericclica con numerosas fibras que se presentan de
pilenglicol. Ajustar con Solucin amortiguadora hasta forma individual o ms frecuentemente, en grupos pe-
50,0 ml. [NoTA~Preparar la Solucin reactivo en el da queos. Las fibras son muy alargadas, con paredes muy
de su uso.] gruesas y lignificadas. Algunas de las clulas del perici-
Solucin estl)dar: 20 g/mL de ER cido Glutmico clo y de la parte externa del floema secundario contie-
USP y de ER Acido Asprtico USP en agua nen grandes cristales compuestos globulares de oxalato
Solucin muestra: Reducir a polvo fino Ortiga y trans- de calcio. La regin cambia! vascular es visible y con-
ferir 1,0 g del artculo a 80 mL de agua. Colocar en un tinua, con grupos radiales estrechos de tejido vascular
bao ultrasnico durante 25 minutos y centrifugar. separado por anchos radios medulares. El floema secun-
Transferir el sobrenadante a un matraz volumtrico de dario es principalmente parenquimatoso con grupos de
100 mL, diluir con agua a volumen y filtrar. tejido criboso de pared delgada. El xilema es denso y
Blanco: Agua totalmente lignificado, contiene vasos dispersos aislados
Condiciones instrumentales o en grupos pequeos y est asociado con clulas de
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).) parnquima xilemtico moderadamente engrosadas y
Modo: Vis numerosas fibras del xilema de paredes gruesas que
Longitud de onda analtica: 570 nm presentan puntuaciones en forma de hendidura. Los va-
Celda: 1 cm sos individuales presentan puntuaciones areoladas bas-
Anlisis tante grandes, muy cercanas entre s, mientras que el
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Blanco parnquima adyacente tiene puntuaciones simples o
Transferir 5,0 mL de Solucin Pstndar, Solucin muestra areoladas. Los radios medulares marcan reas alternadas
y Blanco a sendos matraces volumtricos de 50 mL. de clulas lignificadas y no lignificadas, que se presen-
Agregar 5,0 mL de Solucin reactivo a cada matraz. Ca- tan como bandas tangenciales entre los haces vascula-
lentar en un bao de agua hirviendo durante 30 minu- res, cada una formada por cinco o seis capas de clulas.
tos, enfriar y ajustar con una mezcla de etanol y agua Las clulas lignificadas tienen paredes moderadamente
(1:1) a volumen. engrosadas con puntuaciones simples. La mdula est
Calcular el porcentaje de aminocidos totales en la por- formada por un parnquima redondeado no lignificado
cin de Ortiga tomada: que se colapsa en su parte central para formar una cavi-
dad. Las ra1ces maduras muestran un sber delgado,
Resultado = (A11/ A1) X e X (V/W) X F X 100 una felodermis estrecha y floema y xilema secundarios
con reas alternadas de parnquima lignificado y no lig-
= absorbancia de !a Solucin muestra nificado en los radios medulares anchos, similares a los
= absorbancia de la Solucin estndar yye ~e encuentran en ej rizoma.
= suma de las concentraciones de ER cido ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
Glutmico USP y ER cido Asprtico USP en (561 ): No ms de 2,0%
la Solucin estndar (g/mL) ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, CeniLm Totales (561):
V = volumen de la Solucin muestra, 100 mL No ms de 10%
 Suplementos Dietticos / Ortiga 6605

PRDIDA POR SECADO (731 > Secar 1, o g de Ortiga, redu- de estandnr interno y diluir hasta 5 mL con cloroformo.
cido a polvo tino, a 1O'.:> durante 2 horas: pierde no ms Evaporar 0,5 mL a fJresi11 reducida y agregar 1 ml de
de 12,0% de su peso. Reactivo de derivatizacion.
Suluc.in muestra; Transferir 50,0 g de Ortiga en Polvo
REQUISITOS ADICIONALES a un aparato Soxhlet, agregar cloroformo y extraer du-
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- rante 6 horas. El volumen de cloroformo usado es por
permeables. Proteger de la luz. Almacenar a temperatura lo menos el doble del volumen del dedal con un matraz
ambiente controlada. de tamao adecuado. Evaporar el disolvente a presin
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en reducida, agregar 1,0 ml de Solucin de estndar interno
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de y diluir con cloroformo hasta 1 O mL. Transferir 0,5 mL
la r,lanta contenidas en el artculo. de esta solucin a un matraz de fondo redondo de
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11) 1 O mL, evaporar el disolvente a presin reducida y agre-
ER ,A.cido Asprtico USP gar 0,5 mL de Reactivo de derivatizacin.
ER Acido Glutmico USP Sistema cromato9rfico
ER Escopoletina USP (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
ER /l-Sitosterol USP Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la llama
Columna: Capilar de slice fundida; de 0,20 mm x 25
m recubierta rnn una pelcula de fase G2 de 0,35 m
Temperatura
Ortiga en Polvo Inyector: 325
Detector: 325
DEFINICIN Columna: 300, durante 60 minutos
La Ortiga en Polvo es Ortiga reducida a polvo fino o muy Gas transportador: Helio
fino. Contiene no menos de 0,8% de aminocidos totales, Velocidad de flujo: 0,5 mL/min
no menos de 0,05% de f3-sitosterol (C29HsoO) y no menos Volumen de inyeccin: 1 L
de 3 g/g de escopoletina (CioH804), calculado con res- Aptitud del sistema
pecto a la materia seca. Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
IDENTIFICACIN Factor de asimetra: No ms de 2,0 para cada pico
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA de esterol
DELGADA Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%, de-
Solucin estndar: 0,05 mg/mL de ER Escopoletina terminada a partir de cada pico de esterol
USP y 0,5 mg/mL de ER f3-Sitosterol USP en metanol Anlisis
Solucin muestra: Extraer 1 g de Ortiga en Polvo me- Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
diante reflujo con 1 O mL de una solucin que contenga Calcular el porcentaje de /3-sitosterol en la porcin de
tolueno, acetato de etilo y metanol (7:2:1) durante 15 Ortiga en Polvo tomada:
minutos, enfriar y filtrar. Evaporar el filtrado hasta se-
quedad a presin reducida a menos de 40'' y disolver el Resultado= (Ru!R1) x (W1/Wu) x 100
residuo en 2 mL de la mezcla que contiene tolueno,
acetato de etilo y metano!. Ru = cociente de respuesta entre los picos de f3-
Sistema cromato9rfico sitosterol y estndar interno de la Solucin
(Ver Cromatogmfw (621 ), Cromatografa en Capa Del- muestra
gada.) R, = cociente de respuesta entre los picos de f3-
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro- sitosterol y estndar interno de la Solucin
matografa de 0,50 mm estndar
Volumen de aplicacin: 20 L para la Solucin mues- W1 peso de ER /l-Sitosterol USP usado para
=
tra; 1 O L para la Solucin estndar preparar la Solucin estndar (mg)
Fase mvil: Dietil ter y metanol (9:1) Vv'u = peso de Ortiga en Polvo tomado para
Solucin reveladora: Acido fosfrico al 85%, vainillina preparar la Solucin muestra (mg)
al 10% en etanol al 96% y agua (4,5: 1: 4,5) Criterios de aceptacin: No menos de 0,05% con res-
Anlisis pecto a la materia seca
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra CONTENIDO DE ESCOPOLETINA
Desarrollar la placa y observar bajo luz UV a 365 nm. Solucin A: Agua
Rociar la placa con Solucin reveladora, calentar a una Solucin B: Metanol
temperatura entre 100" y 105" durante 1 O minutos y Fase mvil: Ver la Tabla 7.
observar bajo luz diurna.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- Tabla 1
cin muestra presenta una zona rojo violcea correspon-
diente a f3-sitosterol al mismo valor R1 que el f3-sitosterol Tiempo 1
1
------
Solucin A
... - - - - - - - -
Solucin B
de la Solucin estndar, zonas dbilmente visibles por ti!!!nJ -_("&____
i--- (%)
encima y por debajo de f3-sitosterol y una zona rojo
violcea correspondiente a /3-sitosterol-glucsido.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE /:i-SITOSTEROL
Reactivo de derivatizacin: Una solucin que con-
o
2
8
10
..lL... _
4
--+--- oo
1
75
60
6_Q_ _ ..
i 25
40
40
100
100
tenga volmenes iquales (1 :1 :1) de BSTFA [N,0-bis(tri- 20 l 75 25
metilsilil)trifluoroacetamida], piridina anhidra y una L____ 30 1 75 25
mezcla de BSA [N,0-(trimetilsilil)acetamida], TMSI (N-
trimetilsililimidazol) y TMCS (trimetilclorosilano) (3:3:2) Solucin estndar 0,07 ~rg/ml de ER Escopoletina USP
Solucin de estndar interno: 1 O rng/mL de colesterol en metanol
en cloroformo Solucin madre de la muestra: 160 mg de Ortiga en
Solucin estndar: Disolver 50,0 mg de ER /l-Sitosterol Polvo en cada mL de metanol. Colocar en un bao ul-
USP en 2 mL de cloroformo, agregar 1,0 ml de Solucin trasnico durante 25 minutos y centrifugar.
6606 Ortiga / Suplemento~ OietPticos
Solucin muestra: Solucion madre de la muestra diluid
con metilnoi 1 en 20
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatngrof1n (621 ~> Aptitud del Si~tcrnu.)
Modo: HPLC
Detector: Fluore~cencia; austado a una longitud de
onda de exc1tac1on de 366 nm y una longitud de
onda de emisin de 420 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno Ll
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 10 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de capacidad (k'): No menos de 5 determi-
nado a part~r del pico de es~opoletina ' Criterios de aceptacion: No menos de 0,8% con res-
Factor de _as1rnetna: No mas de 2,0 para el pico de
escopolet1na
Desviacin estndar relativa: No ms de 5 0%
Anlisis ' ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Residuos de Plaguicidas
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las respuestas de los picos de escopoletina.
Calcular el contenido de escopoletina (C ,0 H8 0 4), en
g/g, en la porcin de Ortiga en Polvo tomada:
Resultado = (ru! r1) X e X (V/ W) X o
ru = rea del pico de escopoletina de la Solucin
muestra
r, = rea del pico de escopoletina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Escopoletina USP en la
Solucin estndar (g/mL)
V = volumen de Solucin madre de la muestra (mL)
W = peso de Ortiga en Polvo tomado para
preparar la Solucin madre de la muestra (g)
O = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra, a partir de Solucin madre de la
muestra
Criterios de aceptacin: No menos de 3 ~tg/g con res-
pecto a la materia seca
CONTENIDO DE AMINOCIDOS TOTALES
Solucin amortiguadora: Mezclar 5,40 g de acetato de
sodio anhidro, 0,3 mL de cido actico glacial y agua
hasta un volumen final de 100 mL. Ajustar a un pH de
5,5.
So_lucin reactivo: Solucin que contenga 1,00 g de
n1J1h1d~1na, 1?O mg de hidrindantina y 37,5 mL de pro-
pilengl1col. Ajustar con Solucin amortiguadora hasta
50,0 mL. [NOTA-Preparar la Solucin reactivo en el da
de su uso.]
Solucin estl)dar: 20 g/mL de ER cido Glutmico
USP y de ER Acido Asprtic? USP, en agua
Soluc1on muestra: Transfenr 1,0 g de Ortiga en Polvo a
80 mL de agua. Colocar en un bao ultrasnico durante
25 minutos y centrifugar. Transferir el sobrenadante a
un matraz volumtrico de 100 mL, diluir con agua a
volumen y filtrar.
Blanco: Agua
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851).)
Modo: Vis
Longitud de onda analtica: 570 nm
Celda: 1 cm
Anlisis
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Blanco
Transfenr 5,0 mL de Solucin estndar, Solucin muestra
y Blanco a sendos matraces volumtricos de 50 ml.
Agregar 5,0 mL de Solucin reactivo a cada matraz. Ca-
lentar en un bao de agua hirviendo durante 30 minu-
tos, enfriar y ajustar con l!Jlil mezcla de etanol y agua
(1 :1) a volumen.
usr 38
Calcular el porcentaje de aminocidos totale' en la por-
cin de Urt19a en Polvo tomada:
Re~uilauo = V\11/ A1J x e, x (V/ W) x ~ x 1 00
A11 = absorbancia de la Solucin muestra
A, = ab,orbancia de la SoluC1n estandar
C = suma de las concentraciones de ER cido
Glutrnirn USP y ER cido Asprtico USP en
la Solucion estndar (g/mL)
V = volumen de Solucin muestra, 1 00 mL
W = cantidad de Ortiga en Polvo tomada para
. preparar la Solucin muestra (mg)
f = factor de conversin de unidades,
0,001 mg/9
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO <2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 106 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 104 ufc/g, y el recuento de bac-
tenas Gram-negat1vas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: El polvo es de color amarillento a gris
amarronado.
Microscpicas: Al microscopio, usando solucin de hi-
drato de cloral, presenta varios fragmentos de vasos
punteados y en red de dimetro muy variado, general-
mer;te de 50-150 m. A veces presenta algunas fibras
de liber punteadas. Tambin presenta fibras leosas con
puntuac1on;.:s claras, de 200-800 ~tm de largo y clulas
parenqu1mat1cas. de paredes delgadas, que algunas ve-
ces co~t1enen rnstales de ~xalato de calcio compuestos
y ocasionalmente tienen cristales unitarios y fragmentos
de sber que consisten en clulas aplanadas, de paredes
d~lgadas. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 10%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz y del calor excesivo.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la r;ilanta contenidas en el artculo.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP ( 11)
ER ~cido Asprtico USP
ER Acido Glutmico USP
ER Escopoletina USP
ER /.J-Sitosterol lJSP
Extracto en Polvo de Ortiga
DEFINICIN
El Extracto _en Polvo de Ortiga se prepara a partir de la
Ortiga triturada con alcohol a! 60% u otros disolvente'>
adecuados. Contiene no menos de 5,0% de aminocidos
totales, no menos de O, 1A, de /)-sitosterol (C 29 H50 0) y no
menos de 30 pg/'] de escopolet1na (CoHsO,). La relacin
USP 38 Suplementos Dietticos /Ortiga 6607

entre el material vcqctal crudo inicial y el Extracto en dondo de 1 O ml, evaporar el disolvente a presin
Polvo es de 10:1. reducida y agregar 0,5 ml de Reaclivu de derivaliLulin.
Sistema cromatogrfico
IDENTIFICACIN (Ver Cromatogruf1u \621 ), Aplilud Jd S/)ie1nu.)
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA Modo: Cromatografa de Gases
DELGADA Detector: Ionizacin a la llama
Solucin estndar: 0,05 mgml de ER Escopoletina Columna: Capilar de slice fundida; de 0,20 mm x 25
USP y 0,5 mg/ml de ER f.l-Sitosterol USP en metano! m recubierta con una pelcula de fase G2 de 0,35 m
Solucin muestra: Disolver 0,6 g de Extracto en Polvo, Temperatura
en una mezcla de tolueno, acetato de etilo y metano! Inyector: 325
(7:2:1 ). Filtrar y evaporar a presin reducida a una tem- Detector: 325
peratura inferior a 40. Disolver el residuo en 2,0 ml de Columna: 300", durante 60 minutos
la mezcla que contenga tolueno, acetato de etilo y Gas transportador: Helio
metano!. Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Sistema cromato9rfico Volumen de inyeccin: 1 L
(Ver Cromatograf10 (621 ), Cromatografa en Capa Del- Aptitud del sistema
gada.) Muestra: Solucin estndar
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro- Requisitos de aptitud
matografa de 0,50 mm Factor de asimetra: No ms de 2,0 para cada pico
Volumen de aplicacin: 20 L para la Solucin mues- de esterol
tra; 1 O L para la Solucin estndar Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%, de-
Fase mvil: Dietil ter y metano! (9:1) terminada a partir de cada pico de esterol
Solucin reveladora: Acido fosfrico al 85% y vaini- Anlisis
llina al 10% en etanol al 96% y agua (4,5: 1: 4,5) Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Anlisis Calcular el porcentaje de {3-sitosterol en la porcin de
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra Extracto en Polvo tomada:
Proceder segn se indica en el captulo. Observar las
placas bajo luz UV a 36S nm. Rociar la placa con Resultado= (Ru/Rs) x (Ws/Wu) x 100
1 O ml de Solucin reveladora, calentar a una tempera-
tura entre 1 00 y 105 durante 1 O minutos y observar Ru = cociente de respuesta entre los picos de f.l-
la placa bajo luz diurna. sitosterol y estndar interno de la Solucin
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- muestra
cin muestra presenta una zona rojo violcea correspon- Rs = cociente de respuesta entre los picos de /3
diente a f.l-sitosterol al mismo valor RF que la zona de /3- sitosterol y estndar interno de la Solucin
sitosterol en la Solucin estndar, zonas dbilmente visi- estndar
bles por encima y por debajo de {3-sitosterol y una zona Ws = peso de ER /3-Sitosterol USP usado para
rojo violcea correspon9iente a {3-sitosterol-,91ucsido. preparar la Solucin estndar (mg)
8. PRUEBA DE IDENTIFICACION DE CROMATOGRAFIA DE GASES Wu = peso de Extracto en Polvo en la Solucin
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con- muestra (mc:,)
tenido de f3-Sitosterol. Criterios de aceptacion: No menos de O, 1 %
Criterios de aceptacin: El tiempo de retencin de /3- CONTENIDO DE ESCOPOLETINA
sitosterol de la Solucin muestra corresponde al de la Solucin A: Agua
Solulin e)/ndar. Solucin B: Metano!
C. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Escopoletina. Tabla 1
Criterios de aceptacin: El tiempo de retencin de es- -
copoletina de la Solucin muestra corresponde al de la Tiempo Solucin A Solucin B
Solucin estndar. (min) (%) (%)
o 75 25 - -
COMPOSICIN 2 60 40
CONTENIDO DE {3-SITOSTEROL
8 60 ----------- 40
Reactivo de derivatizacin: Una solucin que con- -~- .
----~

tenga volmenes iguales (1 :1 :1) de BSTFA [N,0-bis(tri- 10 o 100

metilsilil)trifluoroacetamida], piridina anhidra y una 15 -- o 100
mezcla de BSA [N,0-(trimetilsilil)acetamida], TMSI (N- 20 75 25 ----
trimetilsililimidazol) y TMCS (trimetilclorosilano) (3:3:2) 30 ---- __ __lj_ ____[__ ___ __]..i_ ____
Solucin de estndar interno: 1 O mg/ml de colesterol
en cloroformo Solucin estndar: 0,02 g/ml de ER Escopoletina USP
Solucin estndar: Disolver 50,0 mg de ER f.l-Sitosterol en metano!
USP en 2 ml de cloroformo, agregar 1,0 ml de Solucin Solucin madre de la muestra: 8 mg/ml de Extracto
de estndar interno y diluir con cloroformo hasta 5 ml. en Polvo en metano!. Colocar en un bao ultrasnico
Evaporar 0,5 ml a presin reducida y agregar 1 ml de durante 25 minutos y centrifugar.
Reactivo de derivatizacin. Solucin muestra: Solucin madre de la muestra diluida
Solucin muestra: Transferir 20,0 g de Extracto en con metano! 1 en 20
Polvo a un aparato Soxhlet, tratar con cloroformo y ex- Sistema cromato9rfico
traer durante 6 horas. El volumen de cloroformo usado (Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
es por lo menos el doble del volumen del dedal con un Modo: HPLC
matraz de tamao adecuado. Evaporar el disolvente a Detector: Fluorescencia; ajustado a una longitud de
presin reducida, agregar 1,0 ml de Solucin de estn- onda de excitacin de 366 nm y una longitud de
dar interno y diluir con cloroformo hasta 1 O ml. Transfe- onda de emisin de 420 nrn
rir 0,5 ml de esta solucin a un matraz de fondo re-
6608 Ortiqa / Suplementos Diettirns
Columna: 4;6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mUmin
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistemd
Muestra: Solucion estndar
Requisitos de aptitud
Factor de capacidad (k'): No menos de 5, determi-
nado a partir del pico de escopoletina
Factor de asimetna: No ms de 2,0 para el pico de
escopoletina
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las respuestas de los picos de escopoletina.
Calcular el contenido de escopoletina (C10Hs0 4 ), en
g/g, en la porcin de Extracto en Polvo tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu)
ru = rea del pico de escopoletina de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de escopoletina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Escopoletina USP en la
Solucin estndar (g/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de acepta~in: No menos de 30 g/g
CONTENIDO DE AMINOACIDOS TOTALES
Solucin amortiguadora: Mezclar 5,40 g de acetato de
sodio anhidro, 0,3 mL de cido actico glacial y agua
hasta un volumen final de 100 ml. Ajustar a un pH de
5,5.
Solucin reactivo: Solucin que contenga 1,00 g de
ninh1drina, 150 mg de hidrindantina y 37,5 mL de pro-
pilenglicol. Ajustar con Solucin amortiguadora hasta
50,0 mL. [NOTA-Preparar la Solucin reactivo en el da
de su uso.]
Solucin estl)dar: 20 g/mL de ER cido Glutmico Pantenol-ver Pantenol en Monografas
USP y de ER Acido Asprtico USP en agua
Solucin muestra: Disolver 50 mg de Extracto en Polvo
en 80 mL de agua, agitar durante 1 O minutos, diluir
con agua hasta 100 mL y filtrar.
Blanco: Agua
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ) .)
Modo: Vis
Longitud de onda analtica: 570 nm
Celda: 1 cm
Anlisis
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Blanco
Transferir 5,0 mL de Solucin estndar, Solucin muestra
y Blanco a sendos matraces volumtricos de 50 ml.
Agregar 5,0 mL de Solucin reactivo a cada matraz. Ca-
lentar en un bao de agua hirviendo durante 30 minu-
tos, enfriar y ajustar con una mezcla de etanol y agua
(1: 1) a volumen.
Calcular el porcentaje de aminocidos totales en la por-
cin de Extracto en Polvo tomada:
Resultado= (Au/As) x (CdCu) x 100
Au = absorbancia de la Solucin muestra
A1 = absorbancia de la Solucin estndar
C = suma de las concentraciones de ER cido
Glutmico USP y ER cido Asprtico USP en
la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: No menos de 5,0%
CONTAMINANTES
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
usr 38
DETERMINACIN DE ALCOHOL, Mtodo 11 \611): No ms de
1,0%, si estuviera presente.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 >: El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1O 1 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 2 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Extracto en
Polvo a 105 durante 2 horas: pierde no ms de 8,0% de
su peso. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 20,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz. Almacenar a temperatura
ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica la denominacin oficial
del artculo, el nombre cientfico en latn y, despus de la
denominacin oficial, la parte de la planta a partir de la
que se prepar el artculo. Etiquetar indicando el conte-
nido de aminocidos totales, jj-sitosterol, escopoletina, el
disolvente de extraccin usado para prepararlo y la rela-
cin entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto
en Polvo.
ESTl)IDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~cido Asprtico USP
ER Acido Glutmico USP
ER Escopoletina USP
ER /3-Sitosterol USP
Generales
Aceite de Pescado con cidos Omega-3
DEFINICIN
El Aceite de Pescado con cidos Omega-3 es el aceite graso
purificado, desodorizado y winterizado obtenido de los
pescados de las familias Engraulidae, Carangidae, Clupei-
dae, Osmeridae, Scombroidae y Ammodytidae. Los cidos
omega-3 se definen segn se indica a continuacin: cido
alfa linolnico (Cl 8:3 n-3), cido morctico (Cl 8:4 n-3),
cido eicosatetraenoico (C20:4 n-3), cido eicosapentae-
noico (EPA) (C20:5 n-3), cido heneicosapentaenoico
(ql :5 n- 3), cido docosapentaenoico (C22:5 n-3) y
ac1do docosahexaeno1co (DHA) (C22:6 n-3). Contiene no
menos de 28,0% (p/p) de cidos omega-3 totales, expre-
sados como cidos libres, que consisten en no menos de
1 3,0% de EPA y no menos de 9,0% de DHA. Se pueden
agregar antioxidantes adecuados en concentraciones
apropiadas.
IDENTIFICACIN
A. Los tiempos de retencin de los pico~ de docosahe-
xaenoato de metilo y eicosapentaenoato de metilo de la
Solucin de Prueba 7 en Contenido de EPA y DHA corres-
ponden a los de docosahexaenoato de metilo y eicosa-
pentaenoato de metilo de la Solucin Estndar 2a y la
Solucin Estndar 2b, respectivamente, en Grasas y Aceites
Fijm (401 ), Contenido de EPA y DHA. La suma del rea de
los steres metlicos de EPA y DHA es no menos de 22%
del rea total detectada para los steres metlicos, y nin-
gn otro pico tiene un rea superior al 20% del rea
total detectada para los steres metlicos. Adems de los
USP 38
picos de EPA y DHA,. la Solucion de Prueba 7 presen~a al.
menos 15 picos ad1c1onales con tiempos de retenc1on si-
milares a los de la Solucion estandar de aceite de pescado,
segn se obtienen en la prueba de Cuntcnido de U'A y
DHA.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE EPA Y DHA
(V,er Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de
Acidos Grasos Omega-3.)
Solucin Estndar 1a, Solucin Estndar 1b, Solucin Solucin muestra: Para preparar la Solucin muestra,
Estndar 2a, Solucin Estndar 2b, Solucin de
Prueba 1, Solucin de Prueba 2, Solucin de Aptitud
del Sistema 1, Solu~i?n de Aptitud de~ Sistema 2, , .
Sistema cromatografico, Aptitud del sistema y Anah-
sis: Proceder segn se indica en Grasas y Aceites Fijos
(40 l ), Contenido de EPA y DHA para triglicridos. .
Solucin estndar de aceite de pescado: Transferir
300 mg de ER Aceite de Pescado USP a un matraz volu-
mtrico de 1 O mL, y disolver y diluir con Solucin Antio-
xidante a volumen. Proceder segn se indica en Solucin
de Prueba 1 (para triglicridos) en Grasas y Aceites Fijos
(401 ), Contenido de EPA y DHA, comenzando donde
dice "Transferir 2,0 mL".
Identificar los steres metlicos de los cidos grasos per-
tinentes en la Solucin estndar de aceite de pescado,
comparando sus tiempos de retencin con los d.el cro-
matograma de referencia provisto con el ER Aceite de
Pescado USP.
Criterios de aceptacin: No menos de 13,0% (p/p) de
EPA y no meros de 9,0% (p/p) de DHA
CONTENIDO DE ACIDOS OMEGA-3 TOTALES
(V,er Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de
Acidos Grasos Omega-3.) . horno de microondas. Conectar los tubos de vent1laoon
Anlisis: Proceder segn ~e indica en Grasas y Aceites
Fijos (401 /, Contenido de Acidos Omega-3 Totales (para
triglicridos).
Criterios de aceptacin: No menos de 28,,0'.f'o (p/p) de
cidos omega-3 totales, expresados como ac1dos libres
CONTAMINANTES
LMITE DE ARSNICO
[NOTA-Para la preparacin de tod~s ~as solu,ciones ,ac.uo-
sas y para enjuagar los vasos de v1dno, teflon y pl~st1co
antes de su uso, usar agua que se haya pasado primero
a travs de una resina de intercambio inico de lecho
mixto, de cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar to-,
dos los reactivos para que tengan un contenido de arse-
nico tan bajo como sea P?s.ible y alma.ce~ar todas la.s.
soluciones reactivo en rec1p1entes de v1dno de boros1h-
cato. Limpiar los vasos de vidrio, tefln y plstico antes
de su uso empapando en cido ntrico 8 N tibio ~u
rante 30 minutos y enjuagando con agua des1onizada.]
Solucin madre de paladio al 1%: Transferir 1 g de
metal de paladio ultra puro a un vaso de preci~i~ados
de tefln. Agregar 20 mL de agua y 1 O mL de ac1do
ntrico, y entibiar sobre una placa de calent3lm1ento
hasta disolver. Dejar que la soluc1on se enfne a tempe-
ratura ambiente, transferir a un matraz volumtrico de
1 00 mL y diluir con agua desionizada .volumen.
Solucin madre de nitrato de magnesio al 1%: Trans-
ferir 1 g de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de
precipitados de tefln. Agregar 40 mL de agua y 1 mL
de cido ntrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los slidos. Dejar que la solucin
se enfre a temperatura ambiente, transferir un matraz
volumtrico de 100 mL y diluir con agua des1onizada a
volumen.
Solucin modificadora de trabajo: Solucin madre de
paladio al 1 %, Solucin madre de nitrato de magnesio al
1% y cido ntrico al 2% (3:2:5)_. Un volumen de ? L
proporciona 0,015 mg de paladio y 0,01 mg de nitrato
de magnesio.
Suplernentos Dietticos /Aceite de Pescado 6609
Blanco: Acido ntrico y agua (5 en 100)
Solucin madre del estndar: Transferir 10,0 mL de
Solucion Estandar de Arsnico, preparada segn se indica
en Arsnico <211 ;, J un mJtrJi volumtrico de 100 ml.
Aqregar 40 ~L de cHJUil y 5 mL dP cido ntrico, y diluir
con agua a volumen. Esta solucin contiene O, 1 O g/mL
de arsnico.
Soluciones estndar: Diluir la Solucin madre del estn-
dar con el Blanco hasta obtener concentraciones de
0,002; 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/ml de arsnico.
usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrn de 2455 MHz y una potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %,
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimientos internos de tefln de 1 00 mL. Usar
membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
sin excede de 125 psi. Los vasos encajan en un. Rlato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un rec1p1ente
para desbordamiento. Equipar el horno de microondas
con un tubo de ventilacin para permitir el escape de
los humos. [PRECAUCIN-Usar proteccin adecuada
para los ojos adems de ropa y guantes pro~ectores.]
Transferir aproximadamente 500 mg de Aceite de P.es-
cado con Acidos Omega-3, pesados con una aproxima-
cin de O, 1 mg, a un vaso de digestin con recubri-
miento interno de tefln. Preparar las muestras por
duplicado. Agregar 15 ml de cido ntrico y agitar por
rotacin suave. Cubrir los vasos con tapas de1ando fuera
el accesorio de ventilacin. Digerir previamente durante
toda la noche bajo una campana. Colocar la membrana
de ruptura en el accesorio de ventilacin y ajustar la
tapa. Colocar todos los vasos en el plato giratorio .del.,
a la trampa de ventilacin y conectar el sensor de pre-
sin al vaso apropiado. Iniciar un procedimiento .de di-
gestin de dos etapas calentando el horno de microon-
das con una potencia del 15% durante 15 minutos,
seguida de una potencia del 25% durante 45 minuto.s.
Retirar el plato giratorio con los vasos del horno y dejar
que los vasos se enfren a temperatura ambiente.
[NOTA-Se puede usar un bao de agua fresca para
acelerar el proceso de enfriamiento.] Ventilar los vasos
cuando alcancen la temperatura ambiente. Retirar las
tapas y agregar lentamente 2 mL de perxido de hidr-
geno al 30% a cada uno. Dejar que las reacciones ce-
sen y sellar los vasos. Volver a colocar los vasos en el
plato giratorio del hc;ir:io de microondas y ~alentar du-
rante 15 minutos ad1c1onales a una potencia del 30%.
Retirar los vasos del horno y dejar que se enfren a tem-
peratura ambiente. Transferir los digeridos enfriados a
matraces volumtricos de 25 mL y diluir con agua a
volumen.
Anlisis.: Programar el horno de grafito segn se indica
a cont1nuac1on. Secar a 115, usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argn de 300 mL/m1n. Carbonizar
la muestra a 1000'' usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una temperatura de 20 y
un flujo de argn de 300 mL/min. Atomizar a 2400'
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido.
Limpiar a 2600' usando una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por ~eparado
volmenes iguales (20 L) de las Soluoones estandar, de
la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de una inyec-
cin de 5 L de la Solucin modificadora de trabajo para
cada una de las muestras, en el tubo de grafito de un
espectrmetro de absorcin atmi~a con hornC? de gra-
fito adecuado equipado con una lampara de catado
hueco para arsnico. Determinar el rea del pico en la
lnea de emisin de arsnico a 193,7 nrn, corregida por
la absorcin de fondo. Graficar las reas de los picos
661 O Aceite de Pescado I Suplementos Dietticos
correqidas de las Soluciones estndar en funcin de sus
contenidos de arsnico, en g/111L, y calcular la lnea de
regresin que mejor se auste a Jos puntos. Determinar
!a conccntr.:icin, C, en g/mL, de arsnicu et 1 cada mL
de la Solurirn mue5tra interpolando a partir de la lnc.:i
de regresin.
C.:ilcular el contenido de ,arsnico en la porcin de
Aceite de Pescado con Acidos Omega-3 tomada:
Resultado= (C/W) x 25
C = concentracin de arsnico en cada mL de la
Solucin muestra (g/mL) , muestra interpolando a partir de la lnea de regresin.
W = peso de Aceite de Pescado con Acidos
Omega-3 tomado para preparar la Solucin
muestra (g)
~riterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
empapando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solucin de fosfato monobsico de amonio al 10%:
1 O g de fosfato monobsico de amonio ultra puro en
1 mL de cido ntrico y 40 mL de agua para disolver el
fosfato. Diluir con agua desionizada hasta 100 mL.
Solucin de nitrato de magnesio al 1%: Transferir 1 g
de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de precipi-
tados de tefln. Agregar 40 mL de agua y 1 mL de
cido ntrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los slidos. Dejar que la solucin
se enfre a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumtrico de 100 mL y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solucin modificadora de trabajo: Solucin de fosfato
monobsico dP amonio al 70%, Solucin de nitrato de
magnesio al 7% y cido ntrico al 2% (2:1 :2). Un volu-
men de 5 L proporciona 0,2 mg de fosfato ms
0,01 mg ,de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (5 en 100)
Solucin madre del estndar: Transferir 10,0 mL de
Solucin Madre de Nitrato de Plomo, preparada segn se
indica en Metales Pesados (231 ), a un matraz volum-
trico de 100 mL. Agregar 40 mL de agua y 5 mL de
cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Transferir
1,0 mL de esta solucin a un segundo matraz volum-
trico de 100 mL. Agregar 50 mL de agua y 1 mL de
cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Esta solucin
contiene O, 1 O ~tg/mL de plomo.
Soluciones estndar: Diluir la Solucin madre del estn-
dar con el Blanco hasta obtener concentraciones de
0,002; 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/mL de plomo.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Lmite
de Arsnico.
Anlisis: Pro~ramar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera de 55 segundos y un
flujo de argn de 300 ml/min. Carbonizar la muestra a
850 usando una rampa de 1 segundo, un tiempo de
espera de 30 segundos y un flujo de aire de 300 mL/
min. Enfriar y purgar el aire del horno durante 1 O se-
gundos usando una temperatura de 20 y un flujo de
argn de 300 ml/min. Atomizar a 2100 usando una
rampa de O segundos y un tiempo de espera de 5 se-
gundos con el flujo de argn detenido. Limpiar a 2600'
usando una rampa de 1 segundo y un tiempo de es-
pera de 5 segundos. Inyectar por separado volmenes
iguales (20 L) de las Soluciones estandar, de la Solucin
USP 38
muestra y del Blanco, seguidos de una inyeccin de 5 pL
de la So/unan modificadora <fp trabao para cada una de
las muestras, en el tubo de grafito de un espectrmetro
de absorcin atom1ca con horno de grafito adecuado
equiparlo con una !n1par a de ctodo hueco para
plomo. Determinar el area del pico en la lnea de emi-
sin de plomo a 283,3 nm, corregida por la absorcin
de fondo. Graficar las reas de los picos corregidas de
las Soluciones estndar en funcin de sus contenidos de
plomo, en g/mL, y calcular la lnea de regresin que
mejor se ajuste a los puntos. Determinar la concentra-
cin, C, en g/mL, de plomo en cada mL de la Solucin
Calcular el conten[do de plomo en la porcin de Aceite
de Pescado con Acidos Omega-3 tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin de plomo en cada mL de la
Solucin muestra (g/mL) ,
W = peso de Aceite de Pescado con Acidos
Omega-3 tomado para preparar la Solucin
muestra (g)
~riterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
empapando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solucin de fosfato monobsico de amonio al 10%:
1 O g de fosfato monobsico de amonio ultra puro en
40 mL de agua y 1 mL de cido ntrico para disolver el
fosfato. Diluir con agua desionizada hasta 1 00 ml.
Solucin de nitrato de magnesio al 1%: Transferir 1 g
de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de precipi-
tados de tefln. Agregar 40 mL de agua y 1 mL de
cido ntrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los slidos. Dejar que la solucin
se enfre a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumtrico de 100 mL y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solucin modificadora de trabajo: Solucin de fosfato
monobsico de amonio al 70%, Solucin de nitrato de
magnesio al 7% y cido ntrico al 2% (2: 1 :2). Un volu-
men de 5 L proporciona 0,2 mg de fosfato y 0,01 mg
de nitrat9 de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (5 en 1 00)
Solucin madre del estndar A: O, 1 372 mg/mL de ni-
trato de cadmio en agua
Solucin madre del estndar B: Solucin madre del es-
tndar A, cido ntrico y agua (2:1 :97). Esta solucin
contiene O, 1 O g/mL de cadmio. [NOTA-Antes de diluir
a volumen final, disolver en una porcin de agua y
cido ntrico.]
Soluciones estndar: Diluir la Solucin madre del estn-
dar B con el Blanco hasta obtener concentraciones de
0,002; 0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 pg/mL de cadmio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Lmite
de Arsnico.
Anlisis: Programar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 1.?0'' usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera de 55 segundos y un
flujo de argn de 300 ml/min. Carbonizar la muestra a
850' u~ando una rampa de 1 segundo, un tiempo de
espera de 30 segundos y un flujo de aire de 300 mL/
min. Enfriar y purgar el aire del horno durante 1 O se-
gundos usando una temperatura de 20 y un flujo de
argn de 300 ml/min. Atomizar a 2400 usando una

rampa de O segundos y un tiempo de espera de S se-
gundos con el fluo de argn detenido. Limpiar a 2600
usando una rampa de 1 segundo y un tiempo de es-
pera de 5 segundos. inyectar por ~eparado voirnene~
iguale!) (20 ~ l) rlP l<i; c;n/urinnr") rstndar, de la Solucin
muestra y del Blanco, seguidos de una inyeccin de S L
de la Solucion modificadora de trabao para cada una de
las muestras, en el tubo de grafito de un espectrmetro
de absorcin atmica con horno de grafito adecuado
equipado con una lmpara de ctodo hueco para cad-
mio. Determinar el rea del pico en la lnea de emisin
de cadmio a 228,8 nm, corregida por la absorcin de
fondo. Graficar las reas de los picos corregidas de las
Soluciones estndar en funcin de sus contenidos de
cadmio, en g/mL, y calcular la lnea de regresin que
mejor se ajuste a los puntos. Determinar la concentra-
cin, C, en g/mL, de cadmio en cada ml de la Solu-
cin muestra interpolando a partir de la lnea de
regresin.
Calcular el contenido de cadmio en el Aceite de Pes-
cado con cidos Omega-3 tomado:
Resultado = (C/\!V) x 25
C = concentracin de cadmio en cada ml de la
Solucin muestra (g/mL) , C11H,602
W = peso de Aceite de Pescado con Acidos
Omega-3 tomado para preparar la Solucin
muestra (g)
S::riterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE MERCURIO: Proceder segn se indica en Mer-
curio (261 ), Mtodo /Ja, excepto que se debe usar una
Solucin Estndar de Mercurio con el equivalente a O, 1 g/
ml de mercurio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en Lmite de Arsnico combinando los dos dige-
ridos enfriados duplicados en 1,0 mL de Solucin de Per-
manganato de Potasio.
S::riterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE DIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POLICLORADOS
Anlisis: Determinar el contenido de dibenzo-para-dio-
xinas policloradas (PCDD, por sus siglas en ingls) y
dibenzofuranos policlorados (PCDF, por sus siglas en in-
gls) mediante la Revisin B del Mtodo N 1613 de la
Environmental Protection Agency (Agencia de Protec-
cin Ambiental de los Estados Unidos). Determinar el
contenido de bifenilos policlorados (PCB, por sus siglas
en ingls) mediante la Revisin A del Mtodo ~...J 1668
de la Environmental Protection Agency.
Criterios de aceptacin: La suma de PCDD y PCDF es
no ms de 2,0 pg/g de equivalentes txicos de la OMS.
La suma de PCDD, PCDF y PCB tipo dioxina (bifenilos
policlorados, congneres IUPAC no-orto PCB-77, PCB-
81, PCB-126 y PCB-169 y congneres IUPAC mono-orto
PCB-105, PCB-114, PCB-118, PCB-123, PCB-156, PCB-
157, PCB-167 y PCB-189) es no ms de 10,0 pg/g de
equivalentes toxicas de la OMS.
PRUEBAS ESPECFICAS
GRASAS y ACEITES FIJOS, ndice de Acidez (401): No ms
de 3
GRASAS y ACEITES FIJOS, ndiLC de Anisidina (401): No ms
de 20,0 . A.
GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401): No ms
de 5,0
GRASAS Y ACEITES FIJOS, ndice de Oxidacin Total (TOTOX)
(401 >
Anlisis: Calcular el TOTOX segn se indica a
continuacin:
Resultado ~ (2 v P\/) + AV
PV = ndice de perxido
AV ~ ndice de anisidina
Suplrn1cntos Dietticos /Aceite de Pescado 6611
Criterios de aceptacin: No ms de 26
GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lrnupu11ifirnble (401): No
ms de 1,5%
ESTEARINA
Muestra: 1 O mL
Anlisis: Enfriar la Muestra a O' durante 3 horas.
Criterios de aceptacin: La Muestra permanece
transparente.
ABSORBANCIA
Solucin muestra: 0,24 mg/mL, en isooctano
Criterios de aceptacin: La absorbancia es no ms de
0,70, determinada a 233 nm.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente controlada. Se puede embotellar o envasar
en envases de los que se ha expulsado el aire mediante
produccin de vaco o con un gas inerte.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido promedio de
DHA y EPA en mg/g. Tambin indica el nombre y la con-
cerJtracin de cualquier antioxidante agregado.
ESTANDARES DE REFERf.NCIA USP (11)
ER Ester Etlico del Acido Docosahexaenoico USP
Todo cis-4,7, 1O,13,16, 19-docosahexaenoato de etilo.
356,5~
ER Ester Etlico del Acido Eicosapentaenoico USP
Todo cis-5,8, 11, 14, 17-eicosapentaenoato de etilo.
C22H342 330,51
ER Aceite de Pescado USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Tricosanoato de metilo.
C24H4s2 368,64
Aceite de Pescado con cidos Omega-3,
Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Aceite de Pescado con cidos Omega-3
contienen no menos de 95,0% y no ms de 195,0% de la
cantidad declarada de Aceite de Pescado con Acidos
Omega-3, donde el Aceite de Pescado con cidos
Omega-3 es el aceite graso purificado, desodorizado y
winterizado obtenido de los pescados de las familias En-
graulidae, Carangidae, Clupeidae, Osmeridae, Scombroi-
dae y Ammodytidae. Los cidos omega-3 se definen se-
gn se indica a continuacin: cido alfa linolnico (Cl 8:3
n- 3), cido morctico (Cl 8:4 n-3), cido eicosatetrae-
noico (C20:4 n--3), cido eicosapentaenoico (EPA) (C20:5
n-3), cido heneicosapentaenoico (C21 :5 n-3), cido do-
cosapentaenoico (C22:5 n-3) y cido docosahexaenoico
(DHA) (C22:6 n-3). Contiene no menos de 28,0% (p/p)
de cidos omega-3 totales, expresados como cidos libres,
que consisten en 110 menos de 1 3,0% de EPA y no menos
de 9,0% de DHA. Se pueden agregar antioxidantes ade-
cuados en concentraciones apropiadas.
IDENTIFICACIN
El aceite contenido en las Cpsulas cumple con los
requisitos de la siguiente prueba. Los tiempos de reten-
cin de los picm rle rlornsahexaenoato de metilo y eico-
sapentaenoato de metilo de la Solucin de Prueba 7 en
Contenido de EPA y DHA corresponden a los de docosahe-
xaenoato de metilo y eicosapentaenoato de metilo de la
Solucin Estndar 2a y la Solucin Estndar 2b, respectiva-
mente, en Grasas y Aceites Fijos (401 ), Contenido de EPA y
DHA. La suma del rea de los steres metlicos de EPA y
DHA e~ no menos de 22% del rea total detectada para
los steres metlicos, y ningn otro pico en el cromato-
grama tiene un rea superior al 20% del rea total detec-
tada para los steres metlicos. Adems de los picos de
6612 Aeite de Pescado / Suplementos Dietticos
EPA y DHA, la Soluon de Prueba 7 presenta al menos
15 picos adicionales con tiempos de retencin '>irnilares a
los de la Soluon estandar de aceite dP pescado, segn se
obtienen en !J prucbJ de Cvnlcnidu dt rrA y DI /A.
CONTENIDO
CONTENIDO DE ACEITE DE PESCADO
Anlisis: Pesar no menos de 1 O Cpsulas en un frasco
de pesada tarado, abrir cuidadosamente las Clsulas,
sin perder material de la cubierta, y transferir e conte-
nido combinado de las Cpsulas a un vaso de precipita-
dos de 100 ml. Retirar cualquier sustancia adherida a
las cubiertas de las Cpsulas vacas lavando con varias
porciones pequeas de 2,2,4-trimetilpentano. Desechar
los lavados y dejar que las cubiertas de las Cpsulas
vacas se sequen en una corriente de aire seco hasta
que se haya evaporado por completo el 2,2,4-trimetil-
pentano. Pesar las cubiertas de las Cpsulas vacas en el
frasco de pesada tarado original y calcular el peso neto
promedio por Cpsula.
Criterios de aceptacin: 95,0%-105,0% de la cantidad
declarada
CONTENIDO DE EPA Y DHA
(V,er Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de
Acidos Grasos Omega-3.)
Solucin Estndar 1 a, Solucin Estndar 1 b, Solucin
Estndar 2a, Solucin Estndar 2b, Solucin de
Prueba 1, Solucin de Prueba 2, Solucin de Aptitud
del Sistema 1, Solucin de Aptitud del Sistema 2,
Sistema cromatogrfico, Aptitud del sistema y Anli-
sis: Proceder segn se indica en Grasas y Aceites Fijos
(401 ), Contenido de EPA y DHA para triglicridos.
Solucin estndar de aceite de pescado: Transferir
300 mg de ER Aceite de Pescado USP a un matraz vo-
lumtrico de 1 O ml, y disolver y diluir con Solucin
Antioxidante a volumen. Proceder segn se indica en
Solucin de Prueba 7 (para triglicridos) en Grasas y
Aceites Fijos (401), Contenido de EPA y DHA, comen-
zando donde dice "Transferir 2,0 ml".
Identificar los steres metlicos de los cidos grasos
pertinentes en la Solucin estndar de aceite de pes-
cado, comparando sus tiempos de retencin con los
del cromatograma de referencia provisto con el ER
Aceite de Pescado USP.
Calcular el porcentaje de EPA y DHA en la porcin de
aceite de pescado con cidos omega-3 tomada a par-
tir de las Cpsulas.
Criterios de aceptacin: No menos de 13,0% (p/p) de
EPA y no merios de 9,0% (p/p) de DHA
CONTENIDO DE ACIDOS OMEGA-3 TOTALES
(Vfr Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de
Acidos Grosos Omega-3.)
Anlisis: Proceder segn ?e indica en Grasas y Aceites
Fijos (401 ), Contenido de Acidos Omego-3 Totales (para
triglicridos).
Criterios de aceptacin: No menos de 28,0% (p/p) de
cidos omega-3 totales, expresados como cidos libres
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN \2040): Cumplen con los
requisit9s de la Prueba de Ruptura poro Cpsulas Blo_ndas.
VARIACION DE PESO (2091 ): Cumplen con los requ1s1tos.
CONTAMINANTES
LMITE DE ARSNICO
[NOTA-Para la preparacin de todas 1.as solu_ciones acuo-
sas y para enjuagar los va;os de vidrio, teflon y plast1co
antes de su uso, usar agua que se haya pasado primero
a travs de una resina de intercambio inico de lecho
mixto, de cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar to-,
dos los reactivos para que tengan un contenido de arse-
nico tan bajo como sea posible y almacenar todas la.s.
soluciones reactivo en recipientes de vidrio de borosil1-
cato. Limpiar los vasos de vidrio, tefln y plstico antes
de su uso empapndolos en ac1do nitrico 8 N tibio du-
USP 38
rante 30 minutos y enjuagndolos con agua
desionizada. J
Solucin madre de paladio al 1%: Transferir 1 g de
111elai Je paiadio uiLra puro a un vaso de prec1f?1t.ados
de tcfln. Agr('gar 70 mi de agua y l O mL de _ac1do
ntrico, y entibiar sobre una placa de calent:'lm1ento
hasta disolver. Dejar que la solucin se enfrie a tempe-
ratura ambiente, transferir a un matraz volumtrico de
100 ml y diluir con agua desionizada a volumen.
Solucin madre de nitrato de magnesio al 1%: Trans-
ferir 1 g de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de
precipitados de tefln. Agregar 40 mL de agua y 1 ml
de cido ntrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los slidos. Dejar que la solucin
se enfre a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumtrico de 1 00 ml y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solucin modificadora de trabajo: Solucin madre de
paladio al 7%, Solucin madre de nitrato de magnesio al
7% y cido ntrico al 2% (3:2:5). Un volumen de ? L
proporciona 0,015 mg de paladio y 0,01 mg de nitrato
de magnfsio.
Blanco: Acido ntrico y agua (5 en 1 00)
Solucin madre del estndar: Transferir 1 0,0 mL de
Solucin Estndar de Arsnico, preparada segn se indica
en la prueba de Arsnico (211 ), a un matraz volumtrico
de 100 mL. Agregar 40 mL de agua y 5 mL de Acido
ntrico, y diluir con agua a volumen. Esta soluc1on con-
tiene O, l O g/mL de arsnico.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
con Blanco hasta obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/ml de ar_s,nico.
Solucin muestra: Para preparar la Soluc1on muestro,
usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrn de 2455 MHz y una potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %,
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimientos internos de tefln de 100 mL. Usar
membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
sin excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
para desbordamiento. Equipar el horno de microondas
con un tubo de ventilacin para permitir el escape de
los humos. [PRECAUCIN-Usar proteccin adecuada
para los ojos adems de ropa y guantes protect?res.]
Transferir aproximadamente 500 mg del contenido de
Cpsulas, pesados con una aproximacin de O, l mg, a
un vaso de digestin con recubrimiento interno de te-
fln. Preparar las muestras por duplicado. Agregar
15 mL de cido ntrico y agitar por rotacin suave. Cu-
brir los vasos con tapas dejando fuera el accesorio de
ventilacin. Digerir previamente durante toda la noche
bajo una campana. Colocar la membrana de ruptura en
el accesorio de ventilacin y ajustar la tapa. Colocar to-
dos los vasos en el plato giratorio del horno de mi-
croondas. Conectar los tubos de ventilacin a la trampa
de ventilacin y conectar el sensor de presin al vaso
apropiado. Iniciar un procedimiento de digestin de
dos etapas calentando el horno de microondas con una
potencia del 1 5% durante 15 minutos, seg.u ida de una
potencia del 2.5% durante 4.5 minutos. Retirar el plato
giratorio con los vasos del horno y dejar que los vasos
se enfren a temperatura ambiente. [NOTA-Se puede
usar un bao de agua fresca para acelerar el proceso de
enfriamiento.] Ventilar los vasos cuando alcancen la
temperatura dmbiente. Retirar la> lapas y agregar lenta-
mente 2 ml de perxido de hidrgeno al 30% a cada
1mo. [)ejar que las reacciones cesen y sellar los vasos.
Volver a colocar los vasos en el plato giratorio del horno
de microondas y calentar durante 15 minutos adiciona-
les a una potencia del 30%. Ket1rar los vasos del horno
y dejar que se enfren a temperatura ambie~te.- Transfe-
rir los digeridos enfriados a matraces volumetricos de
25 ml y diluir con agua a volumen.
USP 38
Anlisis: Programar el horno de grfilo segn se indica
a cont1nuilcinn. 'iP<il il 11 ') usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
9t1nrlm y 1m fliijo de argn de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 1000 usando una rampa de 1 segundo,
ur1 Liempo de espera de 20 segundos y un tlujo de aire
de 300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una temperatura de 20 y
un flujo de argn de 300 ml/min. Atomizar a 2400''
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido.
Limpiar a 2600 usando una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por separado
volmenes iguales (20 L) de las Soluciones estndar, de
la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de una inyec-
cin de 5 L de la Solucin modificadora de trabajo para
cada una de las muestras, en el tubo de grafito de un
espectrmetro de absorcin atmica con horno de gra-
fito adecuado equipado con una lmpara de ctodo
hueco para arsnico. Determinar el rea del pico en la
lnea de emisin de arsnico a 193,7 nm, corregida por
la absorcin de fondo. Graficar las reas de los picos
corregidas de las Soluciones estndar en funcin de sus
contenidos de arsnico, en g/ml, y calcular la lnea de
regresin que mejor se ajuste a los puntos. Determinar
la concentracin, C, en g/ml, de arsnico en cada ml
de la Solucin muestra interpolando a partir de la lnea
de regresin.
Calcular el contenido de arsnico en la porcin de Cp-
sulas tomada:
Resultado = (C/lN) x 25
C = concentracin de arsnico en cada ml de la
Solucin muestra (g/ml)
W = peso de aceite de pescado con cidos omega-
3 tomado para preparar la Solucin muestra
(g)
S::riterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado primero
a travs de una resina de intercambio inico de lecho
mixto, de cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar to-
dos los reactivos para que tengan un contenido de
plomo tan bajo como sea posible y almacenar todas las
soluciones reactivo en recipientes de vidrio de borosili-
cato. Limpiar los vasos de vidrio, tefln y plstico antes
de su uso empapndolos en cido ntrico 8 N tibio du-
rante 30 minutos y enjuagndolos con agua
desionizada.]
Solucin de fosfato mono bsico de amonio al 10%:
1 O g de fosfato monobsico de amonio ultra puro en
1 ml de cido ntrico y 40 ml de agua para disolver el
fosfato. Diluir con agua desionizada hasta 1 00 ml.
Solucin de nitrato de magnesio al 1%: Transferir 1 g
de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de precipi-
tados de tefln. Agregar 40 ml de agua y 1 ml de
cido ntrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los slidos. Dejar que la solucin
se enfre a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumtrico de 100 ml y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solucin modificadora de trabajo: Solucin de fosfato
monobsico de amonio al 70%, Solucin de nitrato de
magnesio al J % y cido ntrico al 2% (2: 1 :2). Un volu-
men de 5 L proporciona 0,2 mg de fosfato ms
0,01 mg ,de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (5 en 100)
Solucin madre del estndar: Transferir 10,0 ml de
Solucin Madre de Nitrato de Plomo, preparada segn se
indica en la prueba de Metales Pesados (231 ), a un ma-
traz volumtrico de 100 ml. Agregar 40 ml de agua y
5 ml de cido ntrico, y diluir con agua a volumen.
Suplementos Dietticos /Aceite de Pescado 661 3
Transferir 1,0 ml de esta solucin a un segundo matrM
volumtrico de 100 ml. Agregar 50 ml de agua y 1 ml
de cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
cin contiene O, 1 O pq/ml de plomo.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estandar
con Blanco hasta obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/ml de plomo.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Lmite
de Arsnico.
Anlisis: Programar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura de 20 y un flujo
de argn de 300 ml/min. Atomizar a 2100 usando
una rampa de O segundos y un tiempo de espera de 5
segundos con el flujo de argn detenido. Limpiar a
2600 usando una rampa de 1 segundo y un tiempo de
espera de 5 segundos. Inyectar por separado volmenes
iguales (20 L) de las Soluciones estndar, de la Solucin
muestra y del Blanco, seguidos de una inyeccin de 5 L
de la Solucin modificadora de trabajo para cada una de
las muestras, en el tubo de grafito de un espectrmetro
de absorcin atmica con horno de grafito adecuado
equipado con una lmpara de ctodo hueco para
plomo. Determinar el area del pico en la lnea de emi-
sin de plomo a 283,3 nm, corregida por la absorcin
de fondo. Graficar las reas de los picos corregidas de
las Soluciones estndar en funcin de sus contenidos de
plomo, en g/ml, y calcular la lnea de regresin que
mejor se ajuste a los puntos. Determinar la concentra-
cin, C, en g/ml, de plomo en cada ml de la Solucin
muestra interpolando a partir de la lnea de regresin.
Calcular el contenido de plomo en la porcin de Cpsu-
las tomada:
Resultado = (C/ lN) x 25
C = concentracin de plomo en cada ml de la
Solucin muestra (g/ml)
W = peso de aceite de pescado con cidos omega-
3 tomado para preparar la Solucin muestra
(g)
S::riterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado primero
a travs de una resina de intercambio inico de lecho
mixto, de cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar to-
dos los reactivos para que tengan un contenido de cad-
mio tan bajo como sea posible y almacenar todas las
soluciones reactivo en recipientes de vidrio de borosili-
cato. Limpiar los vasos de vidrio, tefln y plstico antes
de su uso empapndolos en cido ntrico 8 N tibio du-
rante 30 minutos y enjuagndolos con agua
desionizada.]
Solucin de fosfato monobsico de amonio al 10%:
1 O g de fosfato monobsico de amonio ultra puro en
40 ml de agua y 1 ml de cido ntrico para disolver el
fosfato. Diluir con agua desionizada hasta 100 ml.
Solucin de nitrato de magnesio al 1%: Transferir 1 g
de nitrato de magnesio ultra puro a un vaso de precipi-
tados de tefln. Agregar 40 ml de agua y 1 ml de
cido ntrico, y entibiar sobre una placa de calenta-
miento hasta disolver los slidos. Dejar que la solucin
se enfre a temperatura ambiente, transferir a un matraz
volumtrico de 100 ml y diluir con agua desionizada a
volumen.
Solucin modificadora de trabajo: Solucin de fosfato
monobsico de amonio al 70%, Solucin de nitrato de
magnesio al 7% y cido r1lrico al 2% a volumen (2: 1 :2).
6614 Aceite de Pescado / Suplementos Dietticos
Un volumen de 5 L proporciona 0,2 mg de fosfato y
0,01 mg de nitriltn de milgnP~io.
Blanco: Acido ntrico y agua (5 en 100)
Solucin madre del estndar A: O, 1177 mg/mL rle ni-
trato de cadmio en agua
Solucin madre del estndar B: Solucin madre del es-
tndar A, cido ntrico y agua (2: 1 :97). Esta solucin
contiene O, 1 O g/mL de cadmio. [NOTA-Antes de diluir
a volumen final, disolver en una porcin de agua y
cido ntrico.]
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
B con Blanco hasta obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/mL de cadmio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Lmite
de Arsnico.
Anlisis: Pro9ramar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120' usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 mL/min. Carbonizar
la muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura de 20 y un flujo
de argn de 300 ml/min. Atomizar a 2400 usando
una rampa de O segundos y un tiempo de espera de 5
segundos con el flujo de argn detenido. Limpiar a
2600 usando una rampa de 1 segundo y un tiempo de
espera de 5 segundos. Inyectar por separado volmenes
iguales (20 L) de las Soluciones estndar, de la Solucin
muestra y del Blanco, seguidos de una inyeccin de 5 L
de la Solucin modificadora de trabajo para cada una de
las muestras, en el tubo de grafito de un espectrmetro
de absorcin atmica con horno de grafito adecuado
equipado con una lmpara de ctodo hueco para cad-
mio. Determinar el rea del pico en la lnea de emisin
de cadmio a 228,8 nm, corregida por la absorcin de
fondo. Graficar las reas de los picos corregidas de las
Soluciones estndar en funcin de sus contenidos de
cadmio, en g/mL, y calcular la lnea de regresin que
mejor se ajuste a los puntos. Determinar la concentra-
cin, C, en g/ml, de cadmio en cada ml de la Solu-
cin muestra interpolando a partir de la lnea de
regresin.
Calcular el contenido de cadmio en la porcin de Cp-
sulas tomada:
Resultado = ( C/ W) x 25
C = concentracin de cadmio en cada mL de la
Solucin muestra (g/ml)
W = peso de aceite de pescado con cidos omega-
3 tomado para preparar la Solucin muestra
(g)
~riterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE MERCURIO
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Lmite
de Arsnico, combinando los dos digeridos enfriados du-
plicados en 1,0 mL de Solucin de Permanganato de Po-
tasio en Mercurio (261 ), Reactivos.
Anlisis: Proceder segn se indica en Mercurio (261 ),
Mtodo /la, excepto que se debe usar una Solucin Es-
tndar de Mercurio con el equivalente a O, 1 g/mL de
mercurio.
~riterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE DIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POLICLORADOS
Anlisis: Determinar el contenido de dibenzo-para-dio-
xinas policloradas (PCDD, por sus siglas en ingls) y
dibenzofuranos policlorados (PCDF, por sus siglas en in-
gls) mediante la Revisin B del Mtodo 1613 de la
Environmental Protection Agency (Agencia de Protec-
cin Ambiental de los Estados Unidos). Determinar el
contenido de bifenilos policlorados (PCB, por sus siglas
en ingls) mediante la Revisin A del Mtodo 1668 de
la Environmental Protection Agency.
USP 38
Criterios de aceptacin: La suma de PCDD y PCDF es
no ms de 2,0 pg/g de equivalentes txicos de la Orga-
nizacin Mundial de la Salud, OMS. La suma de PCDD,
PCDF y PCB tipo d!ox!na (bifeni!os po!ic!orados, cong
neres no-orto de la IUPAC PCB-77, PCB-81, PCB-126 y
PCB-169, y congneres mono-orto de la IUPAC PCB-
105, PCB-114, PCB-118, PCB-123, PCB-156, PCB-157,
PCB-167 y PCB-189) es no ms de 10,0 pg/g de equi-
valentes txicos de la OMS.
PRUEBAS ESPECFICAS
GRASAS y ACEITES FIJOS, ndice de Acidez (401 ): No ms
de 3
GRASAS Y ACEITES FIJOS, ndice de Anisidina (401 ): No ms
de 20,0 ,
GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401): No ms
de 5,0 ,
GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Oxidacin Total (TOTOX)
(401 ): No rns de 26, que se calcula:
Resultado = (2 x PV) + AV
PV = ndice de perxido
AV = ndice de anisidina
(401): No
GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable
ms de 1,5%
ESTEARINA: 1 O mL permanecen transparentes despus de
enfriar a O'' durante 3 horas.
ABSORBANCIA
Solucin muestra: 0,24 mg/ml, en isooctano
Criterios de aceptacin: La absorbancia es no ms de
0,70, determinada a 233 nm.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y almacenar a temperatura ambiente. Prote-
ger de la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de cido do-
cosahexaenoico (DHA) y cido eicosapentaenoico (EPA)
en mg/Cpsula.
ESTNDARES DE REFER~NCIA USP (11)
ER Ester Etlico del Acido Docosahexaenoico USP
Todo cis-4,7, 1O,13, 16, 19-docosahexaenoato de etilo.
C21H i602 356,5?
ER Ester Etlico del Acido Eicosapentaenoico USP
Todo cis-5,8, 11, 14, 1 7-eicosapentaenoato de etilo.
C22H342 330,51
ER Aceite de Pescado USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Tricosanoato de metilo.
C24H4s2 368,64
Aceite de Pescado con cidos Omega-3,
Cpsulas de Liberacin Retardada
DEFINICIN
Las Cr:Jsulas de Liberacin Retardada de Aceite de Pescado
con Acidos Omega-3 son Cpsulas con recubrimiento en-
trico que contienen no menos de 95,0% y no ms de
105,Q% de la cantidad declarada de Aceite de Pescado
c;on Acidos Omega-3, donde el Aceite de Pescado con
Acidos Omega-3 es el aceite graso purificado, desodori-
zado y winterizado obtenido de los pescados de las fami-
lias Engraulidae, Carangidae, Clupeidae, Osmeridae,
Scombroidae y Ammodytidae. Los cidos omega-3 se de-
finen segn se indica a continuacin: cido alfa linolnico
(Cl 8:3 n-3), cido morctico (Cl 8:4 n-3), cido eicosa-
tetraenoico (C20:4 n 3), ;cido cicosapentJenoico (EPA)
(C20:5 n-3), cido heneicosapentaenoico (C21 :5 n-3),
cido docosapentaenoico (C22:5 n-3) y cido docosahe-
xaenoico (DHA) (C22:6 n-3). Contiene no menos de
28,0% (p/p) de cidos omega-3 totales, expresados como
USP 38 Suplementos Dietticos /Aceite de Pescado 661 5

cidm libres, que cons1slen en no menos de 1 3,0% de Criterios de aceptacin: No menos de 28,0% (p/p) de
EPA y no menos de 9,0% ele DHA. Se pueden agregar acidos omega-3 totales, expresados como cidos libres
antioxidantes adecuados en concenlr Jciunes apropiadas.
PRUEBAS DE DESEMPEO
IDENTIFICACIN DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
A. [I Jceile contenido en las l.apsulJs cumple con los requisitos de Desintegracin, Cpsulas Blandas ele Liberu-
requisitos de la siguiente prueba. Los tiempos de reten- cin Retardada (con Recubrimiento Entrico) .
cin de los picos de docosahexaenoato de metilo y eico- VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
sapentaenoato de metilo de la Solucin de Prueba 1 en
Contenido de EPA y DHA corresponden a los de docosahe- CONTAMINANTES
xaenoato de metilo y eicosapentaenoato de metilo de la GRASAS y ACEITES FIJOS, Trazas de Metales (401): No ms
Solucin Estndar 2a y la Solucin Estndar 2b, respectiva- c;le O, 1 ppm de Pb, de Cd, de As y de Hg
mente, er:i Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin y LIMITE DE DIOXINAS, FURANOS Y BIFENILOS POLICLORADOS
Perfil de Acidos Grasos Omega-3, Contenido de EPA y DHA. Anlisis: Determinar el contenido de dibenzo-para-dio-
La suma del rea de los steres metlicos de EPA y DHA xinas policloradas (PCDD, por sus siglas en ingls) y
es no menos de 22% del rea total detectada para los dibenzofuranos policlorados (PCDF, por sus siglas en in-
steres metlicos, y ningn otro pico tiene un area supe- gls) mediante la Revisin B del Mtodo 161 3 de la
rior al 20% del rea total detectada para los steres met- Environmental Protection Agency (Agencia de Protec-
licos. Adems de los picos de EPA y DHA, la Solucin de cin Ambiental de los Estados Unidos). Determinar el
Prueba 1 presenta al menos 15 picos adicionales con contenido de bifenilos policlorados (PCB, por sus siglas
tiempos de retencin similares a los de la Solucin estn- en ingls) mediante la Revisin A del Mtodo 1668 de
dar de aceite de pescado, segn se obtienen en la prueba la Environmental Protection Agency.
de Contenido de EPA y DHA. Criterios de aceptacin: La suma de PCDD y PCDF es
no ms de 2,0 pg/g de equivalentes txicos de la Orga-
CONTENIDO nizacin Mundial de la Salud, OMS. La suma de PCDD,
CONTENIDO DE ACEITE DE PESCADO PCDF y PCB tipo dioxina (bifenilos policlorados, cong-
Anlisis: Pesar no menos de 1 O Cpsulas en un frasco neres no-orto de la IUPAC PCB-77, PCB-81, PCB-126 y
de pesada tarado, abrir cuidadosamente las Cpsulas, PCB-169, y congneres mono-orto de la IUPAC PCB-
sin perder material de la cubierta, y transferir el conte- 105, PCB-114, PCB-118, PCB-123, PCB-156, PCB-157,
nido combinado de las Cpsulas a un vaso de precipita- PCB-167 y PCB-189) es no ms de 10,0 pg/g de equi-
dos de 1 00 mL. Retirar cualquier sustancia adherida a valentes txicos de la OMS.
las cubiertas de las Cpsulas vacas lavando con varias
porciones pequeas de 2,2,4-trimetilpentano. Desechar PRUEBAS ESPECFICAS
los lavados y dejar que las cubiertas de las Cpsulas GRASAS Y ACEITES FIJOS, ndice de Acidez (401): No ms
vacas se sequen en una corriente de aire seco hasta de 3
que se haya evaporado por completo el 2,2,4-trimetil- GRASAS y ACEITES FIJOS, ndice de Anisidina (401): No ms
pentano. Pesar las cubiertas de las Cpsulas vacas en el de 20,0 ,
frasco de pesada tarado original y calcular el peso neto GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401): No ms
promedio por Cpsula. de 5,0 ,
Criterios de aceptacin: 95,0%~ 105,0% de la cantidad GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Oxidacin Total (TOTOX)
declarada (401 ): No ms de 26, que se calcula:
CONTENIDO DE EPA Y DHA
(Vf:r Grasas y Aceites Fijos (401), Determinacin y Perfil de Resultado = (2 x PV) + AV
Acidos Grasos Omega-3.)
Solucin Estndar 1 a, Solucin Estndar 1 b, Solucin PV = ndice de perxido
Estndar 2a, Solucin Estndar 2b, Solucin de AV = ndice de anisidina
Prueba 1, Solucin de Prueba 2, Solucin de Aptitud (401): No
GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable
del Sistema 1, Solucin de Aptitud del Sistema 2, ms de 1,5%
ESTEARINA: 1 O mL permanecen transparentes despus de
Sistema cromatogrfico, Aptitud del sistema y Anli-
sis: Proceder segn se indica en Grasas y Aceites Fijos enfriar a O durante 3 horas.
ABSORBANCIA
(401 ), Contenido de EPA y DHA para triglicridos.
Solucin estndar de aceite de pescado: Transferir Solucin muestra: 0,24 mg/mL, en isooctano
300 mg de ER Aceite de Pescado USP a un matraz volu- Criterios de aceptacin: No ms de O, 70, determinada
mtrico de 1 O mL, y disolver y diluir con Solucin Antio- a 233 nm
xidante a volumen. Proceder segn se indica en Solucin REQUISITOS ADICIONALES
de Prueba 1 (para triglicridos) en Grasas y Aceites Fijos ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
(401 ), Contenido de EPA y DHA, comenzando donde permeables. Almacenar a temperatura ambiente. Proteger
dice "Transferir 2,0 mL". de la luz.
Identificar los steres metlicos de los cidos grasos per- ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de cido do-
tinentes en la Solucin estndar de aceite de pescado, cosahexaenoico (DHA) y cido eicosapentaenoico (EPA)
comparando sus tiempos de retencin con los del cro- en ,mg/Cpsula.
matograma de referencia provisto con el ER Aceite de ESTAl'.'IDARES DE REFER~NCIA USP (11)
Pescado USP. ER Ester Etlico del Acido Docosahexaenoico USP
Calcular el porcentaje de EPA y DHA en la porcin de Todo cis-4,7, 1O,13,16, 19-docosahexaenoato de etilo.
aceite de pescado con cidos omega- 3 tomada a partir C 1H,b02 356,5~
de las Cpsulas. ER Ester Etlico del Acido Eicosapentaenoico USP
Criterios de aceptacin: No menos de 13,0% (p/p) de Todo cis-5,8, 11, 14, 1 7-eicosapentaenoato de etilo.
EPA y no meros de 9,0% (p/p) de DHA C22H342 330,51
CONTENIDO DE ACIDOS OMEGA 3 TOTALES ER Aceite de Pescado USP
(Ver Grasas y Aceites Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de ER Tricosanoato de Metilo USP
Acidos Grasos Omeqa-3.)
Anlisis: Proceder segn se indica en Grasas y Aceites
Fijos (401 ), Contenido de Acidos Omega-3 Totales (para
triglicridos).
6616 Pimienta Negra / Suplementos Dietticos
Pimienta Negra
DEFINICIN
La Pimienta Negra consdc en los frutos c,crm rlr~arroll<irlm
completamente, pero sin madurar de P1per mgrum L..
(Fam. Piperaceae). Contiene no menos. de 2,5% de pipe-
rina, calculado con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. La Pimienta Negra cumple con los requisitos de Prue-
bas Especficas, <;aractersticas Botnicas.
8. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,9 mg/mL de ER Piperina USP en
metano!
Solucin estndar B: 2,0 mg/ml de borneol en
metano!
Solucin estndar C: 5 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de Pimienta Negra USP en metanol. s.ometer a ult~aso
nido durante aproximadamente 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Someter a ultrasonido durante 1 O
minutos aproximadamente 0,5 g de Pimienta N.egra, re-
ducida a polvo fino, en 5 mL de metanol, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLq, ., ,
Volumen de aplicac1on: 15 L de Soluoon estandar C,
7 L de Solucin muestra, y 3 L de Solucin estndar A
y de Solucin estndar B, en bandas . Tabla 1
Fase mvil: Una mezcla de hexanos y acetato de etilo
(5:3)
Reactivo de derivatizacin: Unl mezcla de 17 mL de
metanol enfriado en hielo, 2 ml de cido actico,
1 ml de cido sulfrico y O, 1 mL de anisaldehdo,
mezclados en ese orden.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa p~ra cro-
matografa en capa delgada de alta resoluc1on ade-
cuada (ver Cromatografa (621 )). Usar una cmara sa-
turada y acondicionar la placa a una humedad .
relativa de aproximadamente 33% usando un d1spos1-
tivo adecuado. Desarrollar los cromatogramas hasta
que el frente de la fase mvil haya recorrido aproxi-
madamente 7 cm desde el borde inferior de la placa.
Retirar la placa de la cmara, secar y observar bajo
luz UV a 254 nm. Derivatizar con el Reactivo de deri-
vatizacin, calentar durante 5 minutos a 100 y ob-
servar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: Bajo luz UV a 254 nm, el cro-
matograma de la Solucin muestra presenta. una banda
de extincin intensa a un valor R, de aproximadamente
O, 15 correspondiente al valor Rr de la, band,a de pipe-
rina en el cromatograma de la Soluc/On estandar A, una
banda de extincin a un valor R, de aproximadamente
0,02, y tres bandas de extincin localizadas entre .valo-
res R1 de aproximadamente 0,3 y 0,5. Bajo luz v1s1ble y
despus de la derivatizacin, el cromatograma. de la So-
lucin muestra presenta bandas principales s1m1lares en
posicin y color a l,as ba~das principales del cromato-
grama de la Solucion estandar C. Estas bandas incluyen
una banda de color verde oscuro, del mismo color y
valor Rr que la banda de piperina en la Solucin estn-
dar A (valor Rr de aproximadamente O, 15), una banda
de color violeta dbil a un valor Rr de aprox1madamenle
0,47 debajo de la posicin de la banda debida a bor-
neo! en la Solucin estndar B, y una banda verdosa en
la parle inferior del cromatograma a un valor R, de
USP 38
aproximadamente 0,07. Se pueden observar otras ban-
das menores en los cromatogramas de la Solucin mues-
tra y la Solucin cstandar C . No se det.e_ctan bandas
azules en e! crcmJtogrJmJ de !J So!uc;on mue~lra J v:J-
lores Rr de aproximarlamente O, 1 O y O, 58 (l d1ferenc1l
del P1m1enta Larga).
C. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Piperina.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra obtenido a 343 nm presenta un pico prin-
cipal al tiempo de retencin correspondiente a piperina.
Identificar otros picos de piperamida en el cromato-
grama de la Solucin muestra por comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Pimienta Negra USP usado. El cromato-
qrama de la Solucin muestra presenta un pico adicional
correspondiente a piperilina. El cromatograma de la .so-
lucin muestra obtenido a 270 nm no presenta un pico
debido a (2E,4E)-N-isobutildecadienamida a un .tiempo
de retencin relativo de 1, 14 con respecto al pico de
piperina (a diferencia de Pimienta Larga).
COMPOSICIN
CONTENIDO DE PIPERINA
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua y agregar 0,5 ml de
cido fosfrico. Diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 1.
Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) (%) (%)
~---------------+------ __._9=-5-----+-----~5~-----j
18 55 45
- 2:; - - -- __lQ_ - - --- --- ----~8~0_ _ _,
28 20 80
'--_ _ _3_5_ _ _ _ __,_____ _'.i _____4_i_ __ _
'--_ _ _4_0____--r-_ _ _ _ _9_5_ _ _ _ r---~__~
45 95 5
~------
[NOTA-Proceder bajo luz tenue o usando material de
. vidrio con proteccin actnica.] . .
Solucin estndar A: O, 1 mg/ml de ER Piperina USP en
metano!
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
cin de ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP en
metanol para obtener una solucin con una concentra-
cin de aproximadamente 0,5 mg/mL. Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 ~tm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado: .
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de Pimienta Negra, reducida a polvo fino y pesada con
exactitud, a un matraz de 250 mL equipado con un
condensador de reflujo. Agregar 50 mL de metanol, so-
meter a reflujo en un ba0o de agua. durante aproxima-
damente 20 minutos, dejar que sedimente y decantar el
sobrenadante. Repetir hasta que el ltimo extracto ,sea
incoloro. Combinar los extractos, concentrar al vac10 y
ajustar el volumen hasta 100 mL con metanol. Antes de
la inyecc1on, pasar a traves de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 ~tm o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromatogrfico _ .
(Ver Cromatoqrafa (621), Aot1tud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 343 nm y 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 pm, 100
usr 38
Velocidad dP flujo: 1,5 mUmin
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Mue~lrcb: Sulucin est11dar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Pimienta Negra USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
piperina, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% de-
terminada a partir del pico de piperina en inyecciones
repetidas, Solucin estandar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
[NOTA-LA Solucin estndar A, Solucin estndar By la
Solucin muestra se mantienen estables durante 6 ho-
ras a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
Solucin estndar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Pi-
mienta Negra USP usado, identificar los tiempos de
retencin de los picos correspondientes a piperina y
piperilina en el cromatograma de la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de piperina en la porcin de Pi-
mienta Negra tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = rea del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Solucin muestra a 343
nm
rs = rea del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Solucin estndar A a
343 nm
Cs = concentracin de piperina en la Solucin
estndar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Pimienta Negra usada para preparar
la Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 2,5% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231 ): No ms de 20 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: El fruto es una baya indehiscente de
una sola semilla, globosa, ovoide a oblonga y dura de
3,5-6 mm de dimetro; la superficie es de color negro
grisceo a negro amarronado, spera, con arrugas reti-
culadas elevadas, presenta restos de estigma ssil en la
punta y una cicatriz basal que presenta un punto de
unin con el eje; olor aromtico caracterstico; sabor pi-
cante caractenstico; semilla blanca y hueca.
Microscpicas
Corte transversal: Borde circular con margen corru-
gado; presenta un pericarpio exterior estrecho de color
amarronado; recubrimiento de semilla que encierra un
Supfernentos Dietticos/ Pimienta Negra 6617
perisperma central, ancho, blancuzco y hueco en el
centro; un canal estrecho que corre verticalmente y
que conecta al centro hueco del fruto con un endos-
pemJ pequG1o Jdherido J los restos del estigma; se
encuentra presente un embrin pequeo en el endos-
perma; se presenta un proyeccin corta en la base que
muestra un punto de adhesin al eje.
Seccin transversal: Presenta un pericarpio, testa y
perisperma bien diferenciados; el pericarpio consta de
una capa de epicarpio, un mesocarpio ancho y una
capa de endocarpio; la capa de epicarpio est cubierta
por una cutcula gruesa y contiene unos pocos esto-
mas y prismas pequeos de oxalato de calcio; el meso-
carpio se compone de 2-3 capas de clulas parenqui-
mticas que muestran grupos de esclereidas
lignificadas rectangulares a circulares, una zona ancha
(12-15 capas) de clulas parenquimticas que corren
tangencialmente las cuales contienen granos de almi-
dn y presentan clulas oleosas ovaladas y aisladas,
una zona ancha (10-15 capas) de clulas parenquim-
ticas, dispuestas de forma compacta, ms pequeas
que las de la zona exterior y presentando grupos de
haces fibrovasculares, 1-2 capas de clulas oleosas que
corren tangencialmente y 2-3 caras de clulas paren-
quimticas de paredes gruesas; e endocarpio se com-
pone de una capa de clulas ptreas punteada engro-
sadas de tres lados (clulas en forma de vaso de
precipitados); la testa se compone de una capa de c-
lulas rellenas de pigmento marrn; el perisperma es
muy ancho y se compone de clulas llenas de granos
de almidn, algunos granos de aleurona y clulas
oleosas.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(56,1): No ms de 2,0%,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo I (561): No ms de 10,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo I (561): No ms de 9,0%
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra reducida a polvo
fino
Anlisis: Secar a 105 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin~ No ms _de 12,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cemzas Totales (561 >
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra reducida a polvo
fino
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 5,0% ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra reducida a polvo
fino
Criterios de aceptacin: No ms de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Piperina USP
ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP
Pimienta Negra en Polvo
DEFINICIN
La Pimienta '\Jegrd e11 Polvo e' Pimienta Negra reducida a
polvo o a polvo muy fino. Contiene no menos de 2,5%
de piperina, calculado con respecto a la materia seca.
6618 PimiPnt NNJfil ./ Suplernrntos Dietticos
IDENTIFICACIN
A. l.a Pimienta !'JegrJ en Polvo cumple con los requisitos
de Pruebas Espe~ificas, Caracterfsticas Botnicas.
8. (ROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,9 mg/ml rlP FR PirPrina USP en
metanol
Solucin estndar B: 2,0 mg/mL de borneol en
metanol
Solucin estndar C: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Pimienta Negra USP en metano!. Someter a ultraso-
nido durante aproximadamente 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Someter a ultrasonido durante 1 O
minutos aproximadamente 0,5 g de Pimienta Negra en
Polvo en 5 mL de metano!, centrifugar y usar el
sobrenadante. COMPOSICIN
Sistema cromatogrfico CONTENIDO DE PIPERINA
(Ver Cromatografa (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Achorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
f1a con un tamao promedio de part1cula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 15 L de Solucin estndar C Fase mvil: Ver la Tabla 7.
7 L de Solucin muestra, y 3 L de Solucin estndar
y de Solucin estndar B, en bandas de 8 mm
Fase mvil: Una mezcla de hexanos y acetato de etilo
(5:3)
Reactivo de derivatizacin: Una mezcla de 1 7 mL de
metano! enfriado en hielo, 2 mL de cido actico
1 mL de cido sulfrico y O, 1 mL de anisaldehdo:
mezclados en ese orden.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B So-
lucin estndar C y Solucin muestra '
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada (ver Cromatografa (621 )). Usar una cmara sa-
turada y acondicionar la placa a una humedad
relativa de aproximadamente 33% usando un disposi-
tivo adecuado. Desarrollar los cromatogramas hasta
que el frente de la fase mvil haya recorrido aproxi-
madamente 7 cm desde el borde inferior de la placa.
R0t1rar la placa de la cmara, secar y observar bajo
luz UV a 254 nm. Derivatizar con el Reactivo de deri-
vatizacin, calentar durante 5 minutos a 100 y ob-
servar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: Bajo luz UV a 254 nm, el cro-
matograma de la Solucin muestra presenta una banda
de extincin intensa a un valor R1 de aproximadamente
O, 15 correspondiente al valor R1 de la banda de pipe-
rina en el cromatograma de la Solucin estndar A una
banda de extincin a un valor R1 de aproximadam'ente
0,02, y tres bandas de extincin de intensidades simila-
res, espaciadas a la misma distancia y localizadas entre
valores R1 de aproximadamente 0,3 y 0,5. Bajo luz visi-
ble y despus de la derivatizacin, el cromatograma de
la So/uuon muestra presenta bandas principales similares
en pos1c1on y color a las bandas principales del croma-
tograma de la Solucin estndar C. Estas bandas inclu-
yen una banda de color verde oscuro, del mismo color
y valor R, que la banda de piperina en la Solucin estn- Sistema cromatogrfico
dar A (valor R, de aproximadamente O, 15), una banda
de color violeta dbil a un valor R1 de aproximadamente
0,47 debajo de la posicin de la banda debida a bor-
neo! en la Solucin estndar B, y una banda verdosa en
la parte inferior del cromatograma a un valor Rr de
aproximadamente 0,07. Se pueden observar otras ban-
das menores en los cromatoqramas de la Solucin mues-
tra y la So/ucion estandar C. No se detectan bandas azu-
les en el cromatograma de la Solucin muestra a valores
R, de JproximadJmente O, 1 O y 0,58 (a diferencia de la
Pimienta Larga).
C. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Piperina.
USP 38
Criterios de aceptacin: El nomatograma de la Solu-
c1on mueslru obleniJo a 343 r1rn presenta un pico prin-
cipal-' tiempo de retencin correspondiente a piperina.
ldcnt1f1car otros picos de pipera1r1iJa er1 el uor11alo-
qrama de la Soluc1on muestra por comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Pimienta Negra USP usado. El cromato-
grama de la Solucin muestra presenta un pico adicional
correspondiente a piperilina. El cromatograma de la So-
lucin muestra obtenido a 270 nm no presenta un pico
debido a (2E,4E)-N-isobutildecadienamida a un tiempo
de retencin relativo de 1, 14 con respecto al pico de
piperina (a diferencia de la Pimienta Larga).
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua y agregar 0,5 mL de
cido fosfrico. Diluir con agua hasta 1 000 mL mezclar
filtrar y desgasificar. ' '
Solucion B: Acetonitrilo
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
lmin) (%) (%)
o 95 5
18 55 45
25 20 80
28 20 80
--
35 55 45
40 95 5
45 95 5
[NOTA-Proceder bajo luz tenue o usando material de
vidrio con proteccin actnica.]
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Piperina USP en
metano!
Sol~cin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
c1on de ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP en
metano! para obtener una solucin con una concentra-
cin de aproximadamente 0,5 mg/mL. Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Soluc~n muestra: Transferir aproximadamente 2,0 g
de P1m1enta Negra en Polvo, pesados con exactitud, a
un matraz de 250 mL equipado con un condensador de
reflujo~ Agregar 50 mL de meta~ol, someter a reflujo en
un bano de agua durante aproximadamente 20 minu-
tos, dejar que sedimente y decantar el sobrenadante.
Repetir hasta que el ltimo extracto sea incoloro. Com-
binar los extractos, concentrar al vaco y ajustar el volu-
men hasta rno mL con metano!. Antes de la inyeccin,
pasar a traves de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
mL Jel filtrado.
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 343 nm y 270 nm
Cplumna: 4,6 mm >~ 25 cm; relleno L1 de 5 m, 100
A
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucion estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Pimienta Negra USP usado.
USP 38
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
piperind, Sulucin e:-lndw A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% de-
terminada el parf del pico de piperina en inyecciones
repetidas, Soluc10n estandar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
[NOTA~La Solucin estndar A, Solucin estndar B y la
Solucin muestra se mantienen estables durante 6 ho-
ras a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
Solucin estndar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Pi-
mienta Negra USP usado, identificar los tiempos de
retencin de los picos correspondientes a piperina y
piperilina en el cromatograma de la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de piperina en la porcin de Pi-
mienta Negra en Polvo tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x 100
ru = rea del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Solucin muestra a 343
nm
r1 = rea del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Solucin estndar A a
343 nm
Cs = concentracin de piperina en la Solucin
estndar A (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Pimienta Negra en Polvo usada para
preparar la Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 2,5% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An- IDENTIFICACIN
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , nido durante aproximadamente 1 O minutos, centrifugar
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Polvo de color gris negruzco; olor aro-
mtico caracterstico; sabor picante caracterstico.
Microscpicas: Fragmentos de clulas de epicarpio po-
ligonales, algunas contienen pequeos prismas de oxa-
lato de calcio; clulas parenquimticas que contienen
granos de almidn; clulas oleosas; esclereidas lignifica-
das; clulas ptreas punteadas y engrosadas de tres la-
dos (clulas en forma de vaso de precipitados) vistas
desde la superficie y desde los costados; clulas poligo-
nales de color marrn amarillento de la testa; fragmen-
tos de vasos espiralados; clulas parenquimticas llenas
de granos de almidn; granos de aleurona; gotas de
ac;eite; y granos de alm~dn.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Al-
cohol, Mtodo I (561): No menos de 10,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo I (561): No menos de 9,0%
Sup!ernentos Dietticos / Pimienta Negra 6619
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra en Polvo
Anlisis: Secar a l 05 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin:, ~~o m5:, de 12,0'l
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra en Polvo
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 5,0% ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 1,0 g de Pimienta Negra en Polvo
Criterios de aceptacin: No ms de 1,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta de la que se obtuvo el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Piperina USP
ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP
Extracto en Polvo de Pimienta Negra
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Pimienta Negra se prepara a partir
de Pimienta Negra usando disolventes adecuados tales
como acetato de etilo, metano! o una mezcla de estos
disolventes. La relacin entre el material vegetal y el ex-
tracto es aproximadamente 15:1. Contiene no menos de
90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad declarada de
piperina con respecto a la materia seca. Puede contener
sustancias agregadas adecuadas como vehculos .
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,9 mg/mL de ER Piperina USP en
metano!
Solucin estndar B: 2,0 mg/mL de borneo! en
metano!
Solucin estndar C: 5 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Pimienta Negra USP en metano!. Someter a ultraso-
y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Someter a ultrasonido durante apro-
ximadamente 1 O minutos una cantidad de Extracto en
Polvo, equivalente a aproximadamente 1 O mg de pipe-
rina, en 1 O mL de metano!, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 15 L de Solucin estndar C,
7 pL de Solucin muestra, y 3 pl de Solucin estndar A
y de Solucin estndar B, en bandas de 8 mm
Fase mvil: Una mezcla de hexanos y acetato de etilo
(5:3)
Reactivo de derivatizacin: Una mezcla de 1 7 ml de
metano! enfriado en hielo, 2 ml de cido actico,
1 ml de cido sulfrico y O, 1 ml de anisaldehdo,
mezclados en ese orden .
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las Mueslras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada (ver Cromatografw (621 )). Usar una cmara sa-
turada y acondicionar la placa a una humedad
6620 Pimienta Negra / Suplementos Dietticos
relativa de aproximadamente 33% usando un disposi-
tivo adecuado. Desarrollar los cromatogramas hasta
que el frente de la fase mvil haya recorrido aproxi-
madamente 7 cm desde e! borde inferior de la placa.
Retirar la placa de la cmara, secar y observar bajo
luz UV a 254 nm. Derivatizar con el Reactivo de deri-
vatizacin, calentar durante 5 minutos a 1 00" y ob-
servar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: Bajo luz UV a 254 nm, el cro-
matograma de la Solucin muestra presenta una banda
de extincin intensa a un valor Rr de aproximadamente
O, 15 correspondiente al valor Rr de la banda de pipe-
rina en el cromatograma de la Solucin estndar A, una
banda de extincin a un valor Rr de aproximadamente
0,02, y tres bandas de extincin de intensidades simila-
res, espaciadas a la misma distancia y localizadas entre
valores Rr de aproximadamente 0,3 y 0,5. Bajo luz visi-
ble y despus de la derivatizacin, el cromatograma de
la Solucin muestra presenta bandas principales similares
en posicin y color a las bandas principales del croma-
tograma de la Solucin estndar C. Estas bandas inclu-
yen una banda de color verde oscuro, del mismo color
y valor Rr que la banda de piperina en la Solucin estn-
dar A (valor Rr de aproximadamente O, 15), una banda
de color violeta dbil a un valor Rr de aproximadamente
0,47 debajo de la posicin de la banda debida a bor-
neo! en la Solucin estndar B, y una banda verdosa en
la parte inferior del cromatograma a un valor Rr de
aproximadamente 0,07. Se pueden observar otras ban-
das menores en los cromatogramas de la Solucin mues-
tra y la Solucin estndar C. No se detectan bandas azu-
les en el cromatograma de la Solucin muestra a valores
Rr de aproximadamente O, 1 O y 0,58 (a diferencia de la
Pimienta Larga).
B. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Piperina.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra obtenido a 343 nm presenta un pico prin-
cipal al tiempo de retencin correspondiente a piperina.
Identificar otros picos de piperamida en el cromato-
grama de la Solucin muestra por comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar By el cromato-
grama de referencia provisto con el lote de ER Extracto
en Polvo de Pimienta Negra USP usado. El cromato-
grama de la Solucin muestra presenta un pico adicional
correspondiente a piperilina. El cromatograma de la So-
lucin muestra obtenido a 270 nm no presenta un pico
debido a (2E,4E)-N-isobutildecadienamida a un tiempo
de retencin relativo de 1, 14 con respecto al pico de
piperina (a diferencia de la Pimienta Larga).
COMPOSICIN
CONTENIDO DE PIPERINA
Solucin A: Disolver O, 14 g de fosfato dicido de pota-
sio anhidro en 900 mL de agua y agregar 0,5 mL de
cido fosfrico. Diluir con agua hasta 1000 mL, mezclar,
filtrar y desgasificar.
Solucion B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
Tiempo Solucin A
(min) (%)
____ _Q -- - ---
95 - - --
. ____L _____
18 55
_ _12.__ 20
28 20
--+-
35 - _55
40 95
45 95 1 5
USP 38
[NOTA-Proceder bajo luz tenue o usando material de
vidrio con proteccin actnica.]
Solucin estndar A: O, 1 mg/ml de ER Piperina USP en
metano!
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
cin de ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP en
metano! para obtener una solucin con una concentra-
cin de aproximadamente 0,5 mg/ml. Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir una cantidad pesada con
exactitud de Extracto en Polvo, equivalente a aproxima-
damente 25 mg de piperina, a un matraz volumtrico
de 25 mL, agregar 15 mL de metano! y someter a ultra-
sonido durante 1 O minutos. Enfriar a temperatura am-
biente, diluir con metanol a volumen y mezclar. Diluir
la solucin obtenida en metanol (1 :1 O). Antes de la in-
yeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 343 nm y 270 nm
Cplumna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m, 100
A
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Pimienta Negra USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
piperina, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,5% de-
terminada a partir del pico de piperina en inyecciones
repetidas, Solucin estandar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
[NOTA-La Solucin estndar A, la Solucin estndar By
la Solucin muestra se mantienen estables durante 6
horas a temperatura ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
Solucin estndar By el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Pi-
mienta Negra USP usado, identificar los tiempos de
retencin de los picos correspondientes a piperina y
piperilina en el cromatograma de la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de piperina en la porcin de Ex-
tracto en Polvo tomada:
P = (ru/rs) x (C1/C11) x 100
ru = rea del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Solucin muestra a 343
nm
rs = rea del pico de piperina a partir del
cromatograma de la Solucin estndar A a
Solucin B 343 nm
(%)
Cs = concentracin de piperina en la Solucin
estndar A (mg/ml)
45 Cu = concentracin de Extracto en Polvo en la
8Q ----
Solucin muestra (mg/ml)
80
45
5
1
USP 38
Calcular e! porcentaje de !a cantidad declarada de
piperina en la porcion de txtracto en Polvo tomada:
Re~uitddo = (P/Lj x 100
P = contenido de piperina segn se determin
anteriormente (lXi)
L = cantidad declarada de piperina (%)
Criterios de aceptacin: 90%-11 0% con respecto a la
materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 g/
ge (9ficial 01-dic-2015)
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia co/i.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Extracto en Polvo
Anlisis: Secar a 105 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 7,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artculo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Piperina USP
ER Extracto en Polvo de Pimienta Negra USP
Clorhidrato de Piridoxina-ver
Clorhidrato de Piridoxina en Monografas
Generales
Clorhidrato de Piridoxina, Tabletas-
ver Clorhidrato de Piridoxina, Tabletas en
Monografas Generales
Citrato de Potasio-ver Citrato de Potasio
en Monografas Generales
Citrato de Potasio, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Citrato de Potasio contienen no menos de
90,0% y no m-; rlP 110,0% de la cantidad declarada de
potasio (K).
Suplementos Dietticos /Potasio 6621
IDENTIFICACIN
A. La Solucin muestra en Contenido produce lnea~ de
emisin o absorcin a las longitudes de ondas caracters-
ticas del pota~io .
B. IDENTIFICACION-PRUEBAS GENERALES, Citratos (191 >
Anlisis: Moler una Tableta hasta polvo fino en un mor-
tero. Transferir el polvo a un tubo de centrfuga, agre-
gar 2-5 mL de agua, someter a ultrasonido durante 1
minuto, agitar y centrifugar.
Criterios de aceptacin: El sobrenadante cumple con
los requisitos de la prueba.
CONTENIDO
CONTENIDO DE POTASIO, PROCEDIMIENTO 1
[NOTA-Se encuentra disponible comercialmente una so-
lucin madre del estndar con diferentes concentracio-
nes de potasio, la cual se puede usar para la prepara-
cin de la Solucin madre del estndar. Puede realizarse
el ajuste volumtrico necesario en la Solucin estndar.
Las concentraciones de la Solucin estndar y la Solucin
muestra pueden modificarse para que se adaften al
intervalo lineal o de trabajo del instrumento.
Solucin madre del estndar: Solucin de cloruro de
potasio, previamente secada a 105 durante 2 horas, en
agua que contenga 1000 mg/L de potasio .
Solucin estndar: Agregar 20 mL de agua y 1 mL de
cido ntrico a un matraz volumtrico de 50 mL, y mez-
clar meticulosamente. Pipetear y transferir 10,0 mL de
Solucin madre del estndar a un matraz volumtrico, y
diluir con agua a volumen hasta obtener una solucin
con una concentracin conocida de aproximadamente
200 9/mL de potasio.
Solucion muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porcin, pesada con
exactitud, de las Tabletas reducidas a polvo, equivalente
a aproximadamente O, 1 g de potasio, a un matraz de
50 ml. Agregar 1 O mL de cido ntrico y calentar la so-
lucin a ebullicin suave durante la cual se desprenda
humo. Calentar a ebullicin la solucin durante 30 mi-
nutos adicionales agitando por rotacin suave en forma
constante, periodo durante el cual no debe observarse
desprendimiento de humo. Enfriar la solucin hasta
temperatura ambiente. Transferir cuantitativamente
toda la solucin a un matraz volumtrico de 500 mL,
diluir con agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema de plasma inductivamente acoplado
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Modo: Espectroscopa de emisin atmica
Longitud de onda analtica: 766,49 nm. [NOTA-Las
condiciones operativas pueden desarrollarse y optimi-
zarse basndose en las recomendaciones del fabri-
cante. La configuracin tpica incluye una potencia de
radiofrecuencia (RF) de aproximadamente 1 300 vatios,
un flujo de antorcha de argn de aproximadamente
15 L/min, un flujo auxiliar de argn de aproximada-
mente 0,2 L/min y una velocidad de flujo del nebuliza-
dor de aproximadamente 0,8 L/min.]
Blanco: Solucin de cido ntrico al 2%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Blanco
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pota-
sio (K) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
r,, = respuesta de la Solucin muestra
r1 = respuesta de la Solucin estndar
C = concentracin de potasio en la Solucin
estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de potasio en la
Solucin muestm (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de potasio
6622 Potasio / Suplementos Dictcticos USP 38

CONTENIDO DE POTASIO. PROCEDIMIENTO 2 Solucin muestra: Si se usa el Contenido de Potasio,

Solucin madre del ~~tndar A: 100 g/ml de cloruro
de potasio, previdmente secado a 1 05 durante 2 horas
('; JgJ
Solucin madre del estndar B: l O pg/ml de potasio,
a partir de Solucin madre del estndar A en cido clor-
hdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 1 0,0; 15,0; 20,0 y
25,0 ml de Solucin madre del estndar B a sendos ma-
traces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de
cada matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen
para obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5;
2,0 y 2,5 g/ml de potasio.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir el equivalente a 5 Tabletas a un
crisol de porcelana. Calentar el crisol en una mufla
mantenida a 550' durante 6-12 horas y enfriar. Agre-
gar 60 ml de cido clorhdrico y calentar a ebullicin
suave sobre una placa de calentamiento o en un bao
de vapor durante 30 minutos, enjuagando intermitente-
mente la superficie interior del crisol con cido clorh-
drico 6 N. Enfriar y transferir cuantitativamente el conte-
nido del crisol a un matraz volumtrico de 100 ml.
Enjuagar el crisol con pequeas porciones de cido clor-
hdrico 6 N y agregar los enjuagues al matraz. Diluir
con agua a volumen y filtrar, desechando los primeros
5 mL del filtrado. Diluir esta solucin cuantitativamente
con cido clorhdrico O, 125 N hasta obtener una con-
centracin nominal de 2 g/ml de potasio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: 766,5 nm
Lmpara: Potasio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones, usando el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de la concentracin, en g/ml, y
trazar la recta que mejor se ajuste a los cinco puntos
graficJdos. A partir de la grfica as obtenida, determi-
nar la concentracin, C, en pg/ml de potasio en la
Solucion muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pota-
sio (K) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C concentracin de potasio determinada en la
=
Solucin muestra segn se interpola a partir
de la grfica (f.tg/mL)
(, = concentracin nominal de potasio en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada
PRUEBAS ESPECFICAS
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
Proced1m1ento 1, pipetear y transferir 10,0 ml de la so-
lucin en anlisis combinada y filtrada a un matraz
voiumtrico de _'}U ml y d1lu1r con solucin de cido
ntrico al 2/ci hasta 50 fIIL. Si se usa el Contenido de
Potasio, Procedimiento 2, diluir la solucin en anlisis
combinada y filtrada con cido clorhdrico O, 125 N
hasta una concentracin que se encuentre dentro del
intervalo de las Soluciones estndar.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pota-
sio (K) disuelta:
Resultado= (C x O x V/L) x 100
C = concentracin medida de potasio en la
Solucin muestra (mg/mL)
O = factor de dilucin de la Solucin muestra
V = volumen de Medio, 900 ml
L = cantidad declarada (mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de K
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
ETIQUETADO: La etiqueta indica la cantidad de potasio en
trminos de mg/Tableta.
Gluconato de Potasio-ver Gluconato de
Potasio en Monografas Generales
Gluconato de Potasio, Solucin Oral-
ver Gluconato de Potasio, Solucin Oral en
Monografas Generales
Gluconato de Potasio, Tabletas-ver
Gluconato de Potasio, Tabletas en Monografas
Generales
Prolina-ver Prolina en Monografas
Generales
Quercetina
'.)!t

tal de microorganismos aerobios no excede de 1 Oi ufc/g

y el recuento total combinado de hongos filamentosos y OH 2 H,O
levaduras no excede de 1 0 2 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- OH

plen con los requisitos de las pruebas para determinar la

ausencia de Escherichia coli
C1sH1o01 302,2
PRUEBAS DE DESEMPEO 2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-3,5, 7-trihydroxy-4H- l -benzopyran-
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN (2040) 4-one;
Medio: Agua; 900 ml Quercetina dihidrato 338,2
Aparato 2: 75 rpm [6151 25-3].
Tiempo: 30 min
Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido de Pota-
sio, Procedimiento 7 o Procedimiento 2, en Contenido, re-
alizando los austes volumtricos necesarios.
USP 38 Suplemrntos Dietticos/ Regaliz 6623

DEFINICIN IMPUREZAS
La Quercetina contiene no menos de 98,0% y no mas de RESIDUO DE INCINERACIN (281 ): No rTld'> de O, 1 %
102,0% de quercetina (Ci;H1001), calculado con respecto
a la sustancia anhidra.
Eliminar lo siguiente:
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197K). [NOTA-La sustan- . METALES PESADOS (231): No ms de 20 g/ge (Oficial ol-dic-
cia es un cjihidrato.] 201s1
B. ABSORCION EN EL ULTRAVIOLETA (197U) KAMPFEROL Y OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS
Longitud de onda analtica: 210-450 nm Fase mvil, Solucin de aptitud del sistema, Solucin
Solucin muestra: 1 O g/mL de Quercetina en meta- estndar, Solucin muestra y Aptitud del sistema:
no!. Filtrar si fuera necesario. Proceder segn se indica en la Valoracin.
Criterios de aceptacin: El espectro presenta dos mxi- Sistema cromatogrfico: Proceder segn se indica en
mos de absorcion a 255 nm y 371 nm. La absortividad la Valoracin pero usar deteccin UV a 270 nm.
en el mximo a 371 nm es 75,5-80,0, calculada con Anlisis
respecto a la sustancia srnhidra. Muestra: Solucin muestra
C. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC Calcular el porcentaje de cada impureza individual en la
Anlisis: Proceder segn se indica en la Valoracin. porcin de la Muestra tomada:
Criterios de aceptacion: El tiempo de retencin del
pico principal de la Solucin muestra corresponde al de Resultado = (ru! r,) x 100
la Solucin estndar, segn se obtienen en la Valoracin.
ru = respuesta del pico de cada impureza individual
VALORACIN de la Solucin muestra
PROCEDIMIENTO r, = suma de las respuestas de todos los picos de
Fase mvil: Metano!, agua y cido fosfrico la Solucin muestra
(100:100:1) Criterios de aceptacin
Solucin de aptitud del sistema: 0,02 mg/mL de ER Kampferol: No ms de 0,5%
Quercetina USP, de ER Kampferol USP y de ER lsorham- Impurezas individuales: No ms de O, l %
netina USP en metano! Impurezas totales: No ms de 2,0%
Solucin estndar: Transferir 1 O mg de ER Quercetina
USP a un matraz volumtrico de 50 mL y agregar PRUEBAS ESPECFICAS
20 mL de metano! para disolver. Agregar 20 mL de DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo la (921)
agua, mezclar y diluir con metano! a volumen. Muestra: 100 mg
Solucin muestra: Transferir 1 O mg de Quercetina a un Criterios de aceptacin: No ms de 12,0%
matraz volumtrico de 50 mL y agregar 20 mL de meta- REQUISITOS ADICIONALES
no! para disolver. Agregar 20 mL de agua, mezclar y ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
diluir con metano! a volumen. cerrados, impermeables y resistentes a la luz.
Sistema cromato9rfico ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) ER lsorhamnetina USP
Modo: HPLC ER Kampferol USP
Detector: UV 370 nm ER Quercetina USP
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del Sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin
estndar Regaliz
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para querce-
tina, kaempferol e isorhamnetina son 1,0; 1,8 y 2,0, DEFINICIN
respectivamente.] El Regaliz consiste en las races, rizomas y estolones de Glyc-
Requisitos de aptitud yrrhiza glabra L. o Glycyrrhiza ura/ensis Fish. ex DC. (Fam.
Resolucin: No menos de 1,5 entre kaempferol e Fabaceae). Contiene no menos de 2,5% de cido glicirr-
isorhamnetina, Solucin de aptitud del sistema cico (C2H62016), calculado con respecto a la materia seca.
Eficiencia de la columna: No menos de 2000 platos
IDENTIFICACIN
tericos
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
DELGADA
cin estndar
Anlisis Solucin estndar: 5 mg/mL de ER cido Glicirrcico
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra USP en una mezcla de alcohol y agua (7:3)
Calcular el porcentaje de Quercetina en la porcin de Solucin muestra: 2 g de Regaliz reducido a polvo en
Muestra tomada: 1 O mL de una mezcla de alcohol y agua (7:3). Calentar
agitando en un bario de agua durante 5 minutos, en-
Resultado= (ru/r1) x (CdC11) x 100 friar y filtrar.
Sistema cromato9rfico
ru respuesta del pico de la Solucin muestra
= (Ver Cromatograf1a (621 ). Cromatografa en Capa Del-
r, = respuesta del pico de la Solucin estndar gada.)
C = concentracin de ER Quercetina USP en la Adsorbente: Ca.>a de mezcla de gel de slice para cro-
Solucin estndar (mg/mL) matografa de 0,25 mm
lu = concentracin de Quercetina en la Solucin Volumen de aplicacin: 2 ~tL
muestra (mg/mL) Fase mvil: Alcohol butlico, cido actico glacial y
Criterios de aceptacion: 98,0%-102,0%, con respecto agua (7:1 :2)
a la sustancia anhidra Anlisis
Muestras: Solucion estandar y Solucin muestra
Desarrollar el cromatograma en una cmara no satu-
rada hasta una longitud de 1 O cm. Ob'>ervar la placa
bajo luz a 254 nm.
6624 Regaliz / Suplementos Dietticos
Criterios de aceptacin: Los nomatogramas presentan
una zona de color p1yu1 ct oscura, enlre olras manchas,
debidas a acido glicimcico a un valor R, de 0,4.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDO GLICIRRCICO
Diluyente: Al,cohol y agua (1: 1)
Solucin A: Acido actico diluido (1 en 15)
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin A (2:?)
Solucin estndar: 0,25 mg/mL de ER Acido Glicirrcico
USP en Diluyente
Solucin muestra: Transferir 500 mg de Regaliz, redu-
cido a polvo, a un matraz adecuado. Agregar 70 mL de
Diluyente, agitar durante 15 minutos, centrifugar y de-
cantar el sobrenadante en un matraz volumtrico de
100 mL. Mezclar el residuo con 25 mL de Diluyente, agi-
tar durante 15 minutos, centrifugar y agregar el sobre-
nadante al matraz volumtrico. Diluir con Diluyente a
volumen y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
tericos determinados a partir de cido glicirrcico
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido glicirrcico,
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de cido glicirrcico (C42H62016)
en la porcin de Regaliz tomada:
Resultado= (ru/rs) X e X (V/W) X 100
ru = rea del pico de cido glicirrcico de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cido glicirrcico de la
Solucin estndar
Cs = concentracin de ER cido Glicirrcico USP en
la Solucin estndar (mg/mL)
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Regaliz tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 2,5% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo, 111 (231 ): No ms de 30 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: El tallo terrestre es casi cilndrico, de
0,5-3,0 cm de dimetro y ms de 1 m de longitud; es
de color marrn oscuro a marrn rojizo en el exterior y
arrugado longitudinalmente. A menudo presenta lenti-
celas, yemas pequeas y hojas esacamosas. El corte
transversal presenta un borde bien definido entre el
floema y el xilema, y una estructura radial que frecuen-
temente presenta hendiduras radiadas.
Microscpicas: El corte transversal presenta varias capas
de sber de color marrn amarillento y una capa de
felodermis que tiene 1-3 clulas de espesor. La corteza
presenta radios medulares y se alternan porciones cribo-
sas obliteradas y radiadas. El floema presenta grupos de
fibras de floema rodeados por clulas con cristales, con
paredes gruesas pero no completarnenle lignificadas.
Los vasos estn acompaados por fibras de xilema ro-
USP 38
deadas por clulas con crislales y por clulas parenqui-
mt1cas del xilema. Las clulas parenquimticas contie-
nen granos de almidn y a menudo contienen cristales
individuaies de oxalato de calcio.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Ex/rucios Solubles en Al
cohol, Mtodo 2 (561): No menos de 25,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
Gi61): No ms de 2,0%
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar una muestra a 1 05''
dur,ante 6 horas: pierde }O ms de 12,0% de su peso,.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(56)): No ms de 2,0%,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 7,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar en un lugar fresco y seco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Glicirrcico USP
Regaliz en Polvo
DEFINICIN
El Regaliz en Polvo es Regaliz reducido a polvo fino o a
povo muy fino. Contiene no menos de 2,5% de cido
glicirrcico (C42H62016), calculado con respecto a la materia
seca.
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 5 mg/mL de ER Acido Glicirrcico
USP en una mezcla de alcohol y agua (7:3)
Solucin muestra: 2 g de Regaliz en Polvo en 1O mL de
una mezcla de alcohol y agua (7:3). Calentar agitando
en un bao de agua durante 5 minutos, enfriar y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 2 L
Fase mvil: Alcohol butlico, cido actico glacial y
aQUa (7:1 :2)
Analisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar el cromatograma en una cmara no satu-
rada hasta una longitud de 1 O cm. Observar la placa
bajo luz a 254 nm.
Criterios de aceptacin: Los cromatogramas presentan
una zona de color prpura oscura, entre otras manchas,
debidas a cido glicimcico a un valor RF de 0,4.
COMPOSICIN , ,
CONTENIDO DE ACIDO GLICIRRICICO
Diluyente: Al,cohol y agua (1 :1)
Solucin A: Acido actico diluido (1 en 15)
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin A (2:?)
Solucin estndar: 0,25 mg/mL de ER Acido Glicirrcico
USP en Diluyente
Solucin muestra: Transferir 500 mg de Regaliz en
Polvo a un matraz adecuado. Agregar 70 mL de Dilu-
yente, agitar durante 15 minutos, centrifugar y decantar
el sobrenadan te a un matraz volumtrico de 1 00 mL.
Mezclar el residuo con 25 mL de Diluyente, agitar du-
rante 15 minutos, centrifugar y agregar el sobrenadante
al matraz volumtrico. Diluir con Diluyente a volumen y
filtrar.
USP 38
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mrn .x. 15 un; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
tericos determinados a partir de cido glicirrcico
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido glicirrcico
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0%
Anlisis ' con respecto a la materia seca.
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de cido glicirrcico (C 2 H62 0 16 )
en la porcin de Regaliz en Polvo tomada:
Resultado= (ru/r1) x Cs x (V/W) x 100
ru = rea del pico de cido glicirrcico de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cido glicirrcico de la
Solucin estndar
Cs = concentracin de ER cido Glicirrcico USP en
la Solucin estndar (mg/mL)
V = volumen final de Solucin muestra (mL)
Wu = peso de Regaliz en Polvo tomado para
preparar la Solucin muestra (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 2,5% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS, Mtodo,111 (231): No ms de 30 g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Es de color marrn amarillento claro y
tiene un olor ligero y sabor dulce.
Microsc?picas: Al mi~ro~~opio, el Regaliz en Polvo pre-
sen~a ~el u las. parenqu1_ma~icas que contienen granos de
alm1don y cristales solitarios de oxalato de calcio, frag-
mentos de clulas parenquimticas, teido suberoso ha-
ces d~ fibras esc_lerenquimticas amari las acornpa~dos
por hileras de celulas con cristales y vasos con puntua-
ci9nes reticuladas y escglariformes.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(56,1): No ms de 2,0%,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo 11, Extractos Solu-
f?_les en Alcohol (561): No menos de 25,0%
PERDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 105
du~ante 6 horas: pierde f}O ms de 12,0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 7,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en envases
bien cerrados, en un lugar fresco y seco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta contenida en el artculo.
Suplementos Dietticos / Reqaliz 6625
EST!;'DARES DE REFERENCIA USP f11)
ER Acido Glicirrcico USP
Extracto en Polvo de Regaliz
DEFINICIN
El E~tracto en Polv? de Regaliz se prepara a partir de Regaliz
triturado y extra1do con agua u otros disolventes resi-
duales tales como alcohol, agua o mezclas de estos disol-
ventes. La relacin entre el material vegetal crudo y el
Extracto en Polvo est entre 5:1 y 7:1. Contiene no me-
nos de 6,0% de cido glicirrcico (C2H 62 0 16), calculado
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 5 mg/ml de ER cido Glicirrcico
USP .e,n una mezcla de alcohol y agua (7:3)
Soluoon muestra: 60 mg/mL de Extracto en Polvo de
Regaliz en una mezcla de alcohol y agua (1 :1 ).
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 2 L
Fase mvil: Alcohol butlico, cido actico glacial y
a9,Ua (7:1 :2)
Ana lisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar el cromatograma en una cmara no satu-
rada hasta una longitud de 1 O cm. Observar la placa
bajo luz a 254 nm.
Criterios de aceptaci?n: Los cromatogramas presentan
una zona de color purpura oscura, entre otras manchas
debidas a cido glicimcico a un valor R1 de 0,4. '
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDO GUCIRRCICO
Diluyente: Al,cohol y agua (1 :1)
Solucin A: Acido actico diluido (1 en 1 5)
Fase ~vil: ,Acetonitrilo y Solucin A (2:~)
Soluc1on estandar: 0,25 mg/ml de ER Acido Glicirrcico
USP en Diluyente
Solucin muest_ra: Transferir 150 mg de Extracto en
Polvo de Regaliz a un matraz. Agregar 25 mL de Dilu-
yente, calentar a 50 durante 30 minutos enfriar cen-
trifugar y decantar el sobrenadante en u~ matra~ volu-
mtrico de 100 ml. Mezclar el residuo con 20 mL de
Diluyente, repetir el procedimiento anterior y diluir con
Diluyente a volumen.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 5000 platos
tericos
Factor de asimetra: No ms de 2,0
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0%
Anlisis '
Muestras: Solucin e~inJut y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de cido glicirrcico (C2Ho20 16)
en la porcin de Extracto en Polvo de Regaliz tomada:
Resultado= (r11/r1) X e X (V/W) X 100
6626 Regaliz / Suplementos Dietticos
ru = rea del pico de cido glicirrcico de la
Solucin mue;lr u
r1 rea del pico de cido glicirrcico de la
= Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifuqar
Svlucin t:5tndar
e = rnncentracin de ER Acido G!icirrcico usr en
la Solucin estndar (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra, 100 mL
W = peso de Extracto en Polvo de Regaliz tomado
para preparar la Solucin muestro (mg)
Criterios de aceptacin: No menos de 6,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 30 g/
ge (9ficial Ol-d1c-2015) ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731): Secar una muestra a 105
dur,ante 6 horas: pierde }O ms de 10,0% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 12,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de donde se obtuvo el artculo. La etiqueta tam-
bin indica el contenido de cido glicirrcico, el disol-
vente o mezcla de disolventes de extraccin usados para
la preparacin y la relacin entre el material inicial y el
producto final. La etiqueta presenta la siguiente declara-
cin: "Las cantidades excesivas o el uso durante periodos
prolongados de Regaliz pueden ocasionar hipertensin
arterial o niveles bajos de potasio, las cuales se han rela-
cionado con arritmia y/o debilidad muscular. El Regaliz
puede empeorar los efectos de la insuficiencia cardaca
congestiva, cirrosis o insuficiencia renal. El uso de diurti-
cos puede incrementar el riesgo. Si est embarazada o
lactando, consulte con un profesional de la salud antes
de usar este producto." Cumple con los requisitos en Ex-
tror;tos Botnicos (565), Etiquetado.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Glicirrcico USP
Extracto Fluido de Regaliz-ver Extracto
Fluido de Regaliz, NF
Rhodio/a rosea
DEFINICIN
La Rhodio/o roseo consiste en las races y los rizomas secos
de Rhodiolo rosea L. (Fam. Crassulaceae). Contiene no me-
nos de 0,3% de glicsidos fenilpropenoides calculados
como la suma de rosarina, rosavina y rosina; y no menos
de 0,08% de salidrsido; ambos calculados con respecto a
la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. La Rhodiolo roseo cumple con los requisitos de Pruebas
Especficas, Caror;tersticas Botnicas.
8. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 1,0 mg/ml de ER Rosavina USP
en metano!
USP 38
Solucin estndar B: 50 mq/ml de ER Extracto Seco
de Ra1z y Rizoma de Rhodioa rosea USP en metano!.
y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Sur11ele1 d uilrasonido durante 1 O
minutos aproximadamente 0,5 g de Rhodiola rosea, re-
ducidos a polvo fino, en 5 mL de metano!, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografra (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicacin: 3 L de Solucin estndar A,
5 L de Solucin estndar By de Solucin muestra; en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metano!,
agua y cido frmico (77:13:10:2)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Disolver 1 g de difenila-
mina en 40 mL de acetona, agregar 1 mL de anilina y
mezclar. Agregar cuidadosamente 7,5 ml de cido fos-
frico y mezclar.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para croma-
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada y
secar al aire. Desarrollar los cromatogramas en una c-
mara saturada, retirar la placa de la cmara y secar al
aire. Derivatizar la placa con Reactivo de derivatizacin,
calentar a 120 durante 5 minutos y observar bajo luz
visible.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar B presenta, en la mitad inferior, tres bandas de
color gris y dos bandas de color amarronado, una por
encima y la otra por debajo de las bandas de color gris;
la banda ms intensa en el cromatograma es la banda
de color amarronado, con un valor RF menor que el de
las bandas de color gris; la banda ms intensa de color
gris es la banda inferior a un valor RF correspondiente al
de la banda debida a rosavina en el cromatograma de
la Solucin estndar A; la banda superior gris debida a
rosarina es menos intensa.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una banda de color gris corres-
pondiente a la banda debida a rosavina en el cromato-
grama de la Solucin estndar A y las siguientes bandas
que corresponden a bandas similares en el cromato-
grama de la Solucin estndar B: dos bandas adicionales
de color gris y dos bandas de color amarronado, una
por encima y la otra por debajo de las bandas de color
gris; la banda ms intensa en el cromatograma es la
banda de color amarronado con un valor Rf menor que
el de las bandas de color gris; la banda ms intensa de
color gris es la banda inferior debida a rosavina.
C. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Glicsidos Fenilpropenoides y Salidrsido.
Criterios de aceptacin: E'I cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta picos a los tiempos de retencin
correspondienles a los picos debidos a salidrsido, tiro-
sol, rosarina, rosavina, rosina y rosiridina en el cromato-
grama de la Solucin estndar C. La relacin entre el
contenido de glicsidos fenilpropenoides: rosarina, rosa-
vina y rosina, y el contenido de salidrsido es aproxima-
damente 3:1.
USP 38
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS FENILPROPENOIDES y SALIDRSIDO
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitriio
Fase mvil: Ver la Toblo
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
min' {O/o) (%)
o 94 6 Cs
6 83 17
___7 _____
80 3 19 7
9 80 3 19 7
10 o 100
12 94 6 como la suma de los porcentajes de rosarina, rosavina
17 94 6 y rosina.
Disol':'~nte: ,Metanol al 75% en agua
Soluc1on estandar A: 1,0 mg/mL de ER Rosavina USP
en metanol
Solucin estndar B: 0,3 mg/mL de ER Salidrsido USP
en metanol
Solucin estndar C: 4,0 mg/mL de ER Extracto Seco
de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP en metanol. Si
fuera necesario, someter a ultrasonido hasta disolver.
Antes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 5,0 g
de R~odiola rosea, reducidos a polvo fino y pesados con
exactitud, a un matraz de 25 ml. Agregar 7 mL de Di-
solvente, someter a ultrasonido durante 15 minutos y
filtrar en un matraz volumtrico de 1 O mL. Lavar el resi-
duo dos veces en el papel de filtro, usando cada vez
1 mL de Disolvente; agregar los lavados al matraz volu-
mtrico; ajustar el volumen usando Disolvente y mez-
clar. Antes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o me-
nor, desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromato9rf1co
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV, 205 nm
Columna: 3,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 2,5 m
Temperatura de la columna: 40 1
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido de la Solucin estndar Ces similar al cro-
matograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de rosa-
rina y rosavina, Solucin estndar C
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% deter-
minada a partir del pico de rosavina en inyeciones
repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B So-
lucin estndar C y Solucin muestra ' de los rizomas son gruesas, arrugadas, con restos de
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, la
Solucin estndar B, la Solucin estndar C y el croma-
tograma de referencia provisto con el lote de ER Ex-
tracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
usado, identificar el tiempo de retencin de los picos
correspondientes a salidrsido, tirosol, rosarina rosa-
vina, rosina y rosiridina en la Solucin muestra.'
5uolcmcntos Dietticos / Rhodiola 6627
Cakular por separado los porcentajes de rosarina, rosa-
vina y rosina como ro>avir1a e11 la porcin de Rlwdiula
rosea tomada:
Resu!tado = (r:/r-) X e X (VIW) X 100
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
r, = rea del pico de rosavina de la Solucin
estndar A
= concentracin de rosavina en la Solucin
estndar A (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Rhodiola rosea tomada para preparar
la Solucin muestra (mg)
Calcular el porcentaje de glicsidos fenilpropenoides
Calcular el porcentaje de salidrsido en la porcin de
Rhodiola rosea tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V!W) x 100
ru = rea del pico de salidrsido de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de salidrsido de la Solucin
estndar B
Cs = concentracin de salidrsido en la Solucin
estndar B (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Rhodiola rosea tomada para preparar
la Solucin muestra (g)
Criterio~ de acep~acin: No menos de 0,3% de glicsi-
dos fenilpropeno1des y no menos de 0,08% de salidr-
sido; ambos calculados con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 2,0 g/g
Cadmio: No ms de 1,0 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
1V1ercurio: No ms de ,1,0 g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis eje Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requ1s1tos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0" ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
lev?duras no excede de 10 3 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram-negat1vas tolerantes a la bilis no excede de
1 0 3 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
aus,encia de Salmonel/a sr,p. y Escherichia coli.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Af/atoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Las partes subterrneas consisten en
numerosos rizomas unido~ en su base por una larga raz
primaria. El rizoma y la ra1z presentan crecimiento se-
cundario. El artculo farmacopeico consta de piezas se-
cas de rizomas y races de distintas formas. Las piezas
tallos y escamas, y piezas de races provenientes del ri-
zoma. La superficie del rizoma y de las races es bri-
llante, de color marrn grisceo; despus de pelar el
sber, se revela una capa de color amarillo dorado; la
fractura es de color marrn rosceo o marrn claro.
Microscpicas
Seccin transversal del rizoma: Sber estrecho a an-
cho, dependiendo de la muestra; el color de las clulas
suberosas puede ser marrn o>curo, verdoso o casi in-
coloro; la corteza, con clulas parenquimticas gran-
6628 Rhodiola / Suplementos Dietticos
des, sin compactar, con paredes ligPramente engrosa-
das; el floema secundario, parenyui111aloso, sin
esclereidas; haces vasculares pequeos y estrechos ro-
dean el parnquim<l, formando un a11illu que rodea
una mdula rarenquimatosa ancha; la mdula incluye
haces vasculares dispersos; el parnquima del rizoma
est relleno de granos de almidn simples, esfricos u
ovalados, con un dimetro de 5-20 m; el hilio, si
estuviera presente, aparece como un punto pequeo.
Seccin transversal de la raz: Sber estrecho a an-
cho, dependiendo de la muestra; la corteza, grande
con clulas parenquimticas que pueden contener
conductos de taninos de color marrn anaranjado; los
conductos de taninos tambin se pueden encontrar in-
cluidos en el sber de las races viejas; el floema secun-
dario, parenquimatoso, sin esclereidas; los haces vascu-
lares, pequeos y estrechos rodean el parnquima,
formando un anillo que rodea una mdula parenqui-
matosa estrecha; granos de almidn simples, esfricos
u ovalados, con un dimetro de 5-20 m; el hilio, si
~stuviera presente, apa,rece como un punto pequeo.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(;>61): No ms de 2,0%
PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Rhodiola rosea reducida a polvo fino
Anlisis: Secar a 105 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 1 2i<J
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 2 g de Rhodiola rosea reducida a polvo fino
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 1 2% , Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 2-4 g de Rhodiola rosea reducida a polvo fino
Criterios de aceptacin: No ms de 3%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn, y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
ER Rosavina USP
ER Salidrsido USP
Rhodio/a rosea en Polvo
DEFINICIN
La Rhodiola rosea en Polvo es Rhodiola rosea L. reducida a
polvo o a polvo fino. Contiene no menos de 0,3% de
glicsidos fenilpropenoides, calculados como la suma de
rosarina, rosavina y rosina; y no menos de 0,08% de sali-
drsido, ambos calculados con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. La Rhodiola rosea en Polvo cumple con los requisitos
de Pruebas Espec:;ficas, Caractersticas Botnicas.
B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 1,0 mg/mL de ER Rosavina USP
en metano!
Solucin estndar B: 50 mg/ml de ER Extracto Seco
de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP en metano!.
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Someter a ultrasonido durante 1 O
minutos aproximadamente 0,5 g de Rhodiola rmea en
Polvo en 5 ml de metano!, centrifugar y usar el sobre-
nadante.
usr 38
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografia en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao prorm'uio de partrcuia de 5 m (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicacin: 3 L de Solucin estndar A,
5 L de Solucin estndar By de Solucin muestra; en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metano!,
agua y cido frmico (77: 13:10:2)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Disolver 1 g de difenila-
mina en 40 mL de acetona, agregar 1 mL de anilina y
mezclar. Agregar cuidadosamente 7,5 mL de cido fos-
frico y mezclar.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para croma-
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada y
secar al aire. Desarrollar los cromatogramas en una c-
mara saturada, retirar la placa de la cmara y secar al
aire. Derivatizar la placa con Reactivo de derivatizacin,
calentar a 120 durante 5 minutos y observar bajo luz
visible.
estndar B presenta, en la mitad inferior, tres bandas de
color gris y dos bandas de color amarronado, una por
encima y la otra por debajo de las bandas de color gris;
la banda ms intensa en el cromatograma es la banda
de color amarronado, con un valor RF menor que el de
las bandas de color gris; la banda ms intensa de color
gris es la banda inferior a un valor RF correspondiente al
de la banda debida a rosavina en el cromatograma de
la Solucin estndar A; la banda superior gris debida a
rosarina es menos intensa.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una banda de color gris corres-
pondiente a la banda debida a rosavina en el cromato-
grama de la Solucin estndar A y las siguientes bandas
que corresponden a bandas similares en el cromato-
grama de la Solucin estndar B: dos bandas adicionales
de color gris y dos bandas de color amarronado, una
por encima y la otra por debajo de las bandas de color
gris; la banda ms intensa en el cromatograma es la
banda de color amarronado con un valor RF menor que
el de las bandas de color gris; la banda ms intensa de
color gris es la banda inferior debida a rosavina.
C. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Glicsidos Fenilpropenoides y Salidrsido.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta picos a los tiempos de retencin
correspondientes a los picos debidos a salidrsido, tiro-
sol, rosarina, rosavina, rosina y rosiridina en el cromato-
grama de la Solucin estndar C. La relacin entre el
contenido de glicsidos fenilpropenoides: rosarina, rosa-
vina y rosina, y el contenido de salidrsido es aproxima-
damente 3:1.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS FENILPROPENOIDES y SALIDRSIDO
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
USP 38
Tabla 1
--Ti~-mp~-- T.1 ___ Solucin A Solucin B--.1
l. (min) ---+---~<~Vo~)----r-
n 94
J~
-- ---------- --
6 83 -- 17
7 80 3 19 7
9 80 3 19 7
10 o 100
12 94 6
17 94 6 y rosina.
Disolvente: Metanol al 75% en agua
Solucin estndar A: 1,0 mg/ml de ER Rosavina USP
en metanol
Solucin estndar B: 0,3 mg/ml de ER Salidrsido USP
en metanol
Solucin estndar C: 4,0 mg/ml de ER Extracto Seco
de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP en metanol. Si
fuera necesario, someter a ultrasonido hasta disolver.
Antes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 5,0 g
de Rhodiola rosea en Polvo, pesados con exactitud, a un
matraz de 25 ml. Agregar 7 ml de Disolvente, someter
a ultrasonido durante 15 minutos y filtrar en un matraz
volumtrico de 1 O ml. Lavar el residuo dos veces en el
papel de filtro, usando cada vez 1 ml de Disolvente,
agregar los lavados al matraz volumtrico, diluir con Di-
solvente a volumen y mezclar. Antes de la inyeccin,
pasar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 2,5 m
Temperatura de la columna: 40 1 ''
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido de la Solucin estndar Ces similar al cro-
matograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de rosa-
rina y rosavina, Solucin estndar C
Desviacin estndar relativa: No ms de 2%, deter-
minada a partir del pico de rosavina en inyecciones
repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, la
Solucin estndar B, la Solucin estndar C y el croma-
tograma de referencia provisto con el lote de ER Ex-
tracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
usado, identificar el tiempo de retencin de los picos
correspondientes a salidrsido, tirosol, rosarina, rosa-
vina, rosina y rosiridina en la Solucin muestra.
Calcular por separado los porcentajes de rosarina, rosa-
vina y rosina como rosavina en la porcin de Rhodiola
rosea en Polvo tomada:
Resultado= (r,./r1) X e X (V/IN) X 100
Suplementos Oiettiro~ _/ Rhodiola 6629
r11 = rea del pico del analito pertinente de la
r1
Solucin muestra
= rea del pico de rosavina de la Solucin
_J estndar A
(. - concentracin rlP rosavina en la Solucin
estndar A (mg/ml)
V = volumen de Solucin muestra (ml)
W = peso de la Rhodiola rosea en Polvo tomada
para preparar la Solucin muestra (mg)
Calcular el porcentaje de glicsidos fenilpropenoides
como la suma de los porcentajes de rosarina, rosavina
Calcular el porcentaje de salidrsido en la porcin de
Rhodiola rosea en Polvo tomada:
Resultado= (ru/r1) x Cs x (V/IN) x 100
ru = rea del pico de salidrsido de la Solucin
muestra
r5 = rea del pico de salidrsido de la Solucin
estndar B
C5 = concentracin de salidrsido en la Solucin
estndar B (mg/ml)
V = volumen de Solucin muestra (ml)
W = peso de Rhodiola rosea en Polvo tomada para
preparar la Solucin muestra (g)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,3% de glicsi-
dos fenilpropenoides y no menos de 0,08% de salidr-
sido, ambos calculados con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 2,0 g/g
Cadmio: No ms de 1,0 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 5 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g, y el recuento de bac-
terias Gram-negativas tolerantes a la bilis no excede de
1 0 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
aus,encia de Salmonella sr,p. y Escherichia coli.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Polvo de color marrn rosceo o ma-
rrn claro
Microscpicas: Presenta fragmentos de clulas subero-
sas, subrectangulares o poligonales, que contienen pig-
mentos de color marrn amarillento, con un dimetro
de 1 0-150 m; clulas parenquimticas en la corteza,
subcuadradas o poligonales, que contienen pigmentos
de color marrn rojizo; clulas ptreas, subredondeadas,
subtriangulares, subrectangulares o de forma irregular,
algunas alargadas, principalmente con un dimetro de
14-70 pm, de hasta 270 m de longitud; fibras princi-
palmente dispuestas como haces fusiformes largos, con
extremos oblicum en punta o redondeados, con estria-
ciones cruzadas u oblicuas, con un dimetro de 10-60
m; y vasos reticulados y con puntuaciones, con un
dimetro de hasta 120 m.
6630 Rhodiola I Suplementos nietPticos
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Rhodiola rosca en Polvo
Anlisis: Secar a 1 05 durante 2 horas.
Cri,terim ele aceptacin:, No ms de 12(Yu
ARTICULOS DE ORIC.EN BOTANICO, Cenizas Tola/es (561)
Muestra: 2 g de Rhodiola rosea en Polvo
Cri_terios de aceptacin:_ No ms de 12% , visible .
ARTICULOS DE ORIC.EN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 2-4 g de Rhodiola rosea en Polvo
Criterios de aceptacin: No ms de 3%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn, y despus de la denominacin oficial, las partes de
la ;ilanta de las que se obtuvo el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
ER Rosavina USP
ER Salidrsido USP
Extracto en Polvo de Rhodiola rosea
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Rhodiola rosea se prepara a partir de
Rhodiola rosea mediante extraccin con mezclas hidroalco-
hlicas. La relacin entre el material vegetal y el extracto
est entre 1,5: 1 y 5: l. Contiene no menos de 90,0% y
no ms de 110,0% de la cantidad declarada de glicsidos
fenilpropenoides, calculados como la suma de rosarina,
rosavina y rosina; y no menos de 90,0% y no ms de
11 0,0% de la cantidad declarada de salidrsido, ambos
calculados con respecto a la materia seca. Puede contener
sustancias agregadas adecuadas como vehculos.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELC.ADA
Solucin estndar A: 1,0 mg/mL de ER Rosavina USP
en metanol
Solucin estndar B: 50 mg/mL de ER Extracto Seco
de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP en metano!.
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: 50 mg/mL de Extracto en Polvo de
Rhodiola rosea en metano!. Someter a ultrasonido du-
rante 1 O minutos, centrifugar y usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC)
Volumen de aplicacin: 3 L de Solucin estndar A,
5 L de Solucin estndar By de Solucin muestra; en
bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis-
positivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, melanol,
agua y cido frmico (77:13:10:2)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: Disolver 1 g de difenila-
mina en 40 rnL de acetona, agregar 1 mL de anilina y
mezclar. Agregar cuidadosamente 7,5 mL de cido fos-
frico y me1clar.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
USP 38
Aplicar las muestras en bandas a una placa para croma-
tuyrafa en capa delgada de alta resoluc1on adecuada y
secar al aire. Desarrollar los cromatogramas en una c-
mara :icuraJa, retirar ia piaca de ia cmara y secar al
arre. Derivatizar la olacJ con Rr>ortivo dr> cleri\iatizacin,
calentar a 120 durante 5 minutos y observar bajo luz
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar B presenta, en la mitad inferior, tres bandas de
color gris y dos bandas de color amarronado, una por
encima y la otra por debajo de las bandas de color gris;
la banda ms intensa en el cromatograma es la banda
de color amarronado, con un valor Rr menor que el de
las bandas de color gris; la banda ms intensa de color
gris es la banda inferior a un valor R1 correspondiente al
de la banda debida a rosavina en el cromatograma de
la Solucin estndar A; la banda superior gris debida a
rosarina es menos intensa.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta una banda de color gris corres-
pondiente a la banda debida a rosavina en el cromato-
grama de la Solucin estndar A y las siguientes bandas
que corresponden a bandas similares en el cromato-
grama de la Solucin estndar B: dos bandas adicionales
de color gris y dos bandas de color amarronado, una
por encima y la otra por debajo de las bandas de color
gris; la banda ms intensa en el cromatograma es la
banda de color amarronado con un valor Rr menor que
el de las bandas de color gris; la banda ms intensa de
color gris es la banda inferior debida a rosavina.
B. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Glicsidos Fenifpropenoides y Salidrsido.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta picos a los tiempos de retencin
correspondientes a los picos debidos a salidrsido, tiro-
sol, rosarina, rosavina, rosina y rosiridina en el cromato-
grama de la Solucin estndar C. La relacin entre el
contenido de rosarina, rosavina y rosina es aproximada-
mente 2,5: 6,0: 1,5, respectivamente.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE GucSIDOS FENILPROPENOIDES y SALIDRSIDO
Solucin A: Agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
---
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%)
o 94 6
6 83 17
7 80 3 19 7
9 80 3 ____..IB.Z_ _____
--
10 o ---- 100
-~---
12 94 6
17 94 ------ __Q_____
Solucin estndar A: 1,0 mg/mL de ER Rosavina USP
en metano!
Solucin estndar B: 0,3 mg/mL de ER Salidrsido USP
en metano!
Solucin estndar C: 4,0 mg/rnL de ER Extracto Seco
de Raz y Rizoma de Rhodio/a roseo USP en metano!. Si
fuera necesario, someter a ultrasonido hasta disolver.
Antes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de
rnernl:;rana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Solucin muestra: 4,0 mg/ml de Extracto en Polvo de
Rhodiolo rosea en metano!. Si fuera necesario, someter a
ultrasonido hasta disolver. Antes de la inyeccin, pasar a
travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m o menor.
USP 38
Sistema cromato9rfirn
(Ver CromatografJO (621 ), ApLILuJ Jet Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 11111
Columna: 3,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 2,5 prn
Temperatura de la columna: 40 1 v
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 ~tL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido de la Solucin estndar C es similar al cro-
matograma de referencia provisto con el lote de ER
Extracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de rosa-
rina y rosavina, Solucin estndar C
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% deter-
minada a partir del pico de rosavina en inyeciones
repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B So-
lucin estndar C y Solucin muestra ' /151s d~ Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A la
Solucin estndar B, la Solucin estndar C y el crorr{a-
tograma de referencia provisto con el lote de ER Ex-
tracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
usado, identificar el tiemp~ de r~tencin de los picos
correspondientes a sal1dros1do t1rosol rosarina rosa-
vina, rosina y rosiridina en la Solucin' muestra.'
C~lcular por separado el porcentaje de rosarina, rosa-
vina y rosina como rosavina en la porcin de Extracto
en Polvo de Rhodiola rosea tomada:
P1 = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de rosavina de la Solucin
estndar A
C = concentracin de rosavina en la Solucin
estndar A (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de
Rhodio/a rosea en la Solucin muestra
(mg/mL)
Calcular el porcentaje de glicsidos fenilpropenoides
como la suma de los porcentajes de rosarina, rosavina
y rosina.
Calcular el porcentaje de salidrsido en la porcin de
Extracto en Polvo de Rhodio/a rosea tomada:
P2 = (ru/r1) x (C1/Cu) x 100
ru = rea del pico de salidrsido de la Solucin
muestra
r1 = rea del pico de salidrsido de la Solucin
estndar B
C1 = concentracin de salidrsido en la Solucin
estndar B (mg/mL)
C, = concentracin de Extracto en Polvo de
Rhodio/a rosea en la Solucin muestra
(mg/mL)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
glicsidos fenilpropenoides en la porcin de Extracto
en Polvo de Rhodiola rosea tomada:
Resultado = (P1! L) x 100
p,
= conte,nido de glicsi?os fenilpropenoides,
segun se determino anteriormente (%)
L = cantidad declarada de glicsidos
fenilpropenoides (%)
\uplPmPntm Dirteticos / Rhodiola 6631
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
salidrsido en la porcin de Extracto en Pnlvn cie
Rhodiola roseo tomada:
Resultado = (P) L) :< 1 00
p_, contenido de salidrsido, segn se determin
=
anteriormente (%)
L . . = cantidad dec'.arada de salidrsido (%)
Cn~enos de aceptacion: No menos de 90,0% y no
mas de 110,0% de la cantidad declarada de glicsidos
fenilpropenoides; y no menos de 90,0% y no ms de
110,0% de la cantidad declarada de salidrsido, ambos
calculados con respecto a la materia seca.
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 2,0 g/g
Cadmio: No ms de 1,0 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
M_ercurio: No ms de ,1,0 g/g
A~!ICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
requ1s1tos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos ~erobios no excede de 1 04 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 oi ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
aus,enc1a de Salmonella SP,p. y Escherichia coli.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxinas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 2,0 g de Extracto en Polvo de Rhodio/a rosea
Anlisis: Secar a 105 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn, y despus de la denominacin oficial, la parte de la
plan~a. de la qu~ se obtuvo el artculo. Cumple con otros
requ1s1tos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
ER Rosavina USP
ER Salidrsido USP
Rhodiola rosea, Tintura
DEFINICIN
La Tint_ura de_ Rhodiola rosca se prepara segn se indica a
contlnuac1on.
Rhodiola rosea
Una mezcla de Alcohol y A<Jud (40:0),
cantidad ,uficie_r_it_e__Qil__a ci!Jtener
Preparar la Tintura segn se indica en Extractos Botnicos
(565), Tinturas, Proceso de Maceracin. Contiene no menos
de 0,06% (p/v) de glicsidos fenilpropenoides calculados
como la ~tima cie ros_arina. rosavina y rosina; y no menos
de 0,016% de salidrosido.
6632 Rhodiola / Suplementos DiPtPticos USP 38

IDENTIFICACIN COMPOSICIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA CONTENIDO DE GUCSIDOS fENILPROPENOIDES Y SALIDRSIDO
(Ver Cromatografa \621 /, Cromutografia en Capa Solucin A: Agua
Delgada.) Solucin B: Acetonitriio
Solucin estndar A: 1,0 mq/ml de ER Rosavina USP Fase mvil: Ver la Tabla 1.
en meldnol -
Solucin estndar B: 50 mg/ml de ER Extracto Seco Tabla 1
de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP en metanol.
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar Tiempo Solucin A Solucin B
y usar el sobrenadante. (min) (%) (%)
Solucin muestra: Centrifugar una porcin de Tintura y o 94 6
usar el sobrenadante. 6 83 17
Sistema cromatogrfico 7 80 3 19 7
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un 9 80 3 19 7
tamao promedio de part1cula de 5 m (placas para
HPTLC) 10 o 100
Volumen de aplicacin: 3 L de Solucin estndar A, 12 94 6
5 ~tl de Solucin estndar By 1 O L de Solucin mues- ~-- ----
17 - --- ---- 24_ 6
tra; en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume- Solucin estndar A: 1,0 mg/ml de ER Rosavina USP
dad relativa de aproximadamente 33% usando un dis- en metanol
positivo adecuado. Solucin estndar B: 0,3 mg/ml de ER Salidrsido USP
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, metanol, en metanol
agua y cido frmico (77: 13:10:2) Solucin estndar C: 4,0 mg/ml de ER Extracto Seco
Distancia de desarrollo: 6 cm de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP en metanol. Si
Reactivo de derivatizacin: Disolver 1 g de difenila- fuera necesario, someter a ultrasonido hasta disolver.
m1na en 40 ml de acetona, agregar 1 ml de anilina y Antes de la inyeccin, pasar a travs de un filtro de
mezclar. Agregar cuidadosamente 7,5 ml de cido fos- membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
frico y mezclar. menor.
Anlisis Solucin muestra: Antes de inyectar la Tintura, pasar a
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By travs de un filtro de membrana con un tamao de
Solucin muestra poro de 0,45 m o menor. [NOTA-La muestra puede
Aplicar las muestras en bandas a una placa para croma- pesarse y convertirse a volumen usando la densidad de
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada y la Tintura.]
secar al aire. Desarrollar los cromatogramas en una c- Sistema cromato9rfico
mara saturada, retirar la placa de la cmara y secar al (Ver CromatograflO (621 ), Aptitud del Sistema.)
aire. Derivatizar la placa con Reactivo de derivatizacin, Modo: HPLC
calentar a 120 durante 5 minutos y observar bajo luz Detector: UV 205 nm
visible. Columna: 3,0 mm x 1 O cm; relleno L1 de 2,5 m
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin Temperatura de la columna: 40 1
estndar B presenta, en la mitad inferior, tres bandas de Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
color gris y dos bandas de color amarronado, una por Volumen de inyeccin: 1 L
encima y la ,otra por debajo de las bandas de color gris; Aptitud del sistema
la banda mas intensa en el cromatograma es la banda Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar C
de color amarronado, con un valor RF menor que el de Requisitos de aptitud
las bandas de color gris; la banda ms intensa de color Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
gris es la banda inferior a un valor R; correspondiente al obtenido de la Solucin estndar Ces similar al cro-
de la banda debida a rosavina en el cromatograma de matograma de referencia provisto con el lote de ER
la Solucin estndar A; la banda superior gris debida a Extracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
rosarina es menos intensa. usado.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de rosa-
cin muestra presenta una banda de color gris corres- rina y rosavina, Solucin estndar C
pondiente a la banda debida a rosavina en el cromato- Desviacin estndar relativa: No ms de 2%, deter-
grama de la Solucin estndar A y las siguientes bandas minada a partir del pico de rosavina en inyecciones
que corresponden a bandas similares en el cromato- repetidas, Solucin estndar A
grama de la Solucin estndar B: dos bandas adicionales Anlisis
de color gris y dos bandas de color amarronado, una Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
por encima y la otra por debajo de las bandas de color lucin estndar C y Solucin muestra
gris; la banda ms intensa en el cromatograma es la Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, la
banda de color amarronado con un valor RF menor que Solucin estndar B, la Solucin estndar C y el croma-
el de las bandas de color gris; la banda ms intensa de tograma de referencia provisto con el lote de ER Ex-
color gris es la banda inferior debida a rosavina. tracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP
B. HPLC usado, identificar el tiempo de retencin de los picos
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con- correspondientes a salidrsido, tirosol, rosarina, rosa-
tenido de Glicsidos Fenilpropenoides y Salidrsido. vina, rosina y rosiridina en la Solucin muestra.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- Calcular por separado los porcentajes de rosarina, rosa-
cin muestra presenta picos a los tiempos de retencin vina y rosina como rosavina en la porcin de Tintura
correspondientes a los picos debidos a salidrsido, tiro- tomada:
sol, rosarina, rosavina, rosina y rosiridina en el cromato-
grama de la Solucin estndar C. Resultado = (ru/ r,) C1 x 100
La relacin entre el contenido de rosarim, rosavina y
rosina es aproximadamente 2,5: 6,0: 1,5. ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
r, = rea del pico de rosavina de la Solucin
estndar A
USP 38 Suolernentm V1ete1fcos / Romero 6633

C concentracion de rosavina en la So/ucion

= diterpenos fenlicos, calculado como la suma de cido
eslndar A (g/ml) carnsico y carnoso!; y no menos de 1,2% (v/p) de aceite
Calcular el porcentae de glicsidos fenilpropenoides voltil, ambos calculados con respecto a la materia seca.
Lon1t? la sun-1J de lu'.J pu:-cc:itJjc.s de rosarina, ros2P,1ina
y rosina. IDENTIFICACIN
Calcular el porcentaje de sal1dros1do en la porc1on de A. El romero cumple con los requisitos en Pruebas Espec-
Tintura tomada: ficas, Caractersticas Botnicas.
B. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Resultado ce (r,./r,) X e X 100 Solucin estndar A: 0,5 mg/ml de ER cido Rosmar-
nico USP en metano!
ru = rea del pico de salidrsido de la Solucin Solucin estndar B: 100 mg/ml de ER Extracto Hidro-
muestra flico de Romero en Polvo USP en metanol
rs = rea del pico de salidrsido de la Solucin Solucin muestra: Someter a ultrasonido aproximada-
estndor B mente 1 g de Romero, reducido a polvo fino, en 1 O ml
C = concentracin de salidrsido en la Solucin de metano! durante 1O minutos. Centrifugar y usar el
estndar B (9/ml) sobrenadante.
Criterios de aceptacion: No menos de 0,06% (p/v) de Sistema cromato9rfico
glicsidos fenilpropenoides; y no menos de 0,016% de (Ver Cromatograf/O (621 ), Cromatografa en Capa Del-
salidrsido gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
OTROS COMPONENTES fa con un tamao promedio de part1cula de 5 m
DETERMINACIN DE ALCOHOL, Mtodo I (611): No menos (placas para HPTLC)
de 90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad declarada Volumen de aplicacin: 2 L de Solucin estndar A,
de etanol (C1H,OH) 4 L de Solucin estndar B y 8 L de Solucin muestra,
en bandas de 8 mm
CONTAMINANTES Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An- dad relativa de aproximadamente 33%, usando un dis-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los positivo adecuado.
requisitos. Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, cido fr-
REQUISITOS ADICIONALES mico y agua (15:1:1)
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- Distancia de desarrollo: 6 cm
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera- Reactivo de derivatizacin A: Solucin de 5 mg/ml
tura ambiente. de difenilborinato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
ETIQUETADO: La etiqueta indica la denominacin oficial Reactivo de derivatizacin B: Solucin de 50 mg/ml
del artculo, el nombre cientfico en latn y la parte de la de polietilenglicol 400 en diclorometano
planta de la que se prepar el artculo. Etiquetar indi- Anlisis
cando el contenido de glicsidos fenilpropenoides y sali- Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
drsido, la mezcla de disolventes usada para la extrac- Solucin muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
cin, y la relacin entre el material vegetal crudo inicial y placa para cromatografa en capa delgada de alta reso-
la Tintura. lucin adecuada. Desarrollar los cromatogramas en
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11) una cmara saturada, retirar la placa de la cmara, ca-
ER Extracto Seco de Raz y Rizoma de Rhodiola rosea USP lentar a 1 00 durante 3 minutos, derivatizar la placa
ER Rosavina USP mientras est tibia con el Reactivo de derivatizacin A,
ER Salidrsido USP secar al aire, luego derivatizar con el Reactivo de deriva-
tizacin B, secar al aire y observar bajo luz UV a 366
nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar 8 presenta, en el tercio superior, una banda
fluorescente de color azul que corresponde a la banda
Riboflavina-ver Rboflavna en Monografas debida a cido rosmarnico en el cromatograma de la
Generales Solucin estndar A y una banda menos intensa debida
a cido cafeico directamente por encima de la banda
que corresponde a cido rosmarnico. Las bandas debi-
das a cido rosmarnico y cido cafeico estn clara-
Riboflavina, Tabletas-ver Rboflavna, mente separadas.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
Tabletas en Monografas Generales cin muestra presenta las siguientes bandas principales,
similares en posicin y color a las bandas correspon-
dientes en el cromatograma de la Solucin estndar B:
una banda fluorescente de color azul a un valor RF co-
Riboflavina 5' -Fosfato Sdico-ver rrespondiente a la banda de cido rosmarnico en la
Rboflavna 5' -Fosfato Sdico en Monografas Solucin estndar A; una banda a un valor RF correspon-
Generales diente a cido cafeico; una banda de color verde en
aproximadamente la seccin media del cromatograma y
urra banda intensa de color anaranjado en el tercio infe-
rior del cromatograma; por debajo de la banda de color
verde, el cromatograma de la Solucin muestra presenta
Agregar lo siguiente: un patrn de bandas de baja intensidad con colores
caractersticos (a diferencia de hojas de salvia, hojas de
tomillo, hojas de albahaca santa, hojas de albahaca y
Romero hojas de organo).
El cromatograma de la Solucin muestra no presenta un
DEFINICIN par de bandas principales de color anaranjado en el
El Romero consiste en las hojas secas de Rosmarinus officina- tercio inferior del cromatograma (a diferencia de hojas
lis L. (Fam. Lamiaceae). Contiene no menos de 2,0% de de salvia y hojas de tomillo), una banda de color azul
6634 Romero / Suplementos DiPtPti(m
claro a un valor R1 de aproximadamente un tercio del
cromatograma (a diferencia de hojas de albahaca
santa), una banda de color anaranjado en el tercio in-
ferior del cromatograma y una banda de colorazul
claro a aproximadamente dos tercios del cromato-
grama (a diferencia de hojas de albahaca), o una
banda de color rojo directamente fr encima de la
banda debida a cido cafeico en e tercio superior del
cromatograma (a diferencia de hojas de tomillo y ho-
jas de organo). [NOTA-Esta banda de color rojo se
distingue de la banda de color rojo en el frente de la
fase mvil, presente en Romero y otras hojas, debida a
clorofila.]
C. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Diterpenos Fenlicos.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta el pico principal al tiempo de re-
tencin correspondiente al pico de cido carnsico en
el cromatograma de la Solucin estndar A y un pico
adicional correspondiente a carnoso! a un tiempo de
retencin relativo de aproximadamente 0,64 compa-
rado con el del pico de cido carnsico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE DITERPENOS FENLICOS
Fase mvil: Una mezcla de acetonitrilo y una solucin
de cido fosfrico al 0,5% en agua (65:35)
[NOTA-Proc;der bajo luz tenue.]
Disolvente: Acido fosfrico al 0,5% en metano!
Solucin estndar A: [NOTA-Us9r material de vidrio
transparente.] 0,2 mg/mL de ER Acido Carnsico USP
en Disolvente. Someter a ultrasonido hasta disolver, si
fuera necesario.
Solucin muestra: 1,O g de Romero, reducido a polvo
fino, en 50 mL de metano!. Someter a ultrasonido du-
rante 3 horas. Antes de inyectar, pasar a travs de un
filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV, 230 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar A
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: Entre 0,90 y 1,30 para el pico
de cido carnsico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2%, deter-
minada a partir del pico de cido carnsico en inyec-
ciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A y Solucin muestra
[NOTA-La Solucin estndar A y la Solucin muestra per-
manecen estables durante 12 horas a temperatura
ambiente.]
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
identificar los tiempos de retencin de los picos corres-
pondientes a cido carnsico y carnoso! en el croma-
tograma de la Solucin muestra. [NOTA-Los tiempos
de retencin relativos aproximados para los picos de
carnoso! y cido carnsico son 0,64 y 1,00,
respectivamente.]
Calcular los porcentajes de cido carnsico y carnoso!
en la porcion de Romero tomada:
Resultado= (ru/r1) X e X (V/W) X F X 100
ru = rea del pico del analito pertinente en el
cromatograma de la Solucin muestra
USP 38
rs = rea del pico de cido carnsico en el
cromatograrna de la, Solucin estndar A
C = concentracin de ER Acido Carnsico USP en
IJ Solucin estndar A (mgmL)
V = volumen de la Solucin muestra (mL)
W = peso de Romero tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
F = factor de conversin (1,00 para cido
carnsico y 0, 92 para carnoso!)
Sumar los porcentajes de acido carnsico y carnoso!.
Criterios de aceptacin: No menos de 2,0% con res-
p~cto a la materia seca ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Determinacin de Aceite
Voltil (561 >: Usar 25,0 g de Romero reducido a polvo
grueso. Destilar durante 3 horas a una velocidad de
2-3 mL/min.
Criterios de aceptacin: No menos de 1,2% v/p de
aceite voltil con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233>
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
M_ercurio: No ms de ,1,0 g/g, ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Ana-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561>: Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES V DIETTICOS (2021>: El recuento total de mi-
croorganismos aerobios no excede de 1os ufc/g; el re-
cuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram negativas tolerantes a la bilis no excede de
1Ql ufc/g. ,
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS-SUPLEMENTOS
NUTRICIONALES V DIETTICOS (2022>: Cumple con los re-
quisitos de las pruebas para determinar la ausencia de
Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Las hojas son ssiles, de lineares a lan-
ceoladas lineares, aciculares, de 1-4 cm de longitud y
2-4 mm de ancho, con mrgenes fuertemente revolu-
tos, pice obtuso y base ahusada. La superficie superior
es de color verde oscuro, algo pubescente cuando son
jvenes, glabra en hojas ms maduras, la superficie infe-
rior es de color verde grisceo y densamente tomentosa
con una nervadura central prominente. El artculo far-
macopeico consiste en hojas quebradizas, secas de color
verde grisceo a verde amarillento.
Microscpicas
Corte transversal: En la epidermis superior, las clulas
son tabulares con paredes ligeramente engrosadas y
puntuaciones ocasionales, raros tricomas de recubri-
miento cnicos, ausencia de estomas; una hipodermis
subyacente compuesta de clulas colenquimaticas
grandes, de forma irregularmente redondeada a
ovoide con paredes anticlinales engrosadas, de una a
varias capas de clulas que atraviesan el espesor de la
lmina en forma de cua hacia los haces vasculares;
parnquima en empalizada de dos o ms capas, sin
espacios intercelulares en grandes reas en forma de
media lunas, separadas por el parnquima esponjoso
del mesfilo en grupos de clulas muy irregulares con
grandes espacios intercelulares; a continuacin la epi-
dermis inferior con numerosos estomas, masas de tri-
comas de recubrimiento multicelulares y caractersti-
cos, de pared delgada, uniseriados y ampliamente
ramificados, de hasta 300 m de longitud, que forman
densas masas afelpadas, con cada ramificacin que de-
riva de un nudo ligeramente protuberante y termina
USP 38
en una sola clula ahusada; tricomas glandulares de
dos tipos se encuentran presentes en ambas epidermis,
ms en la epidermis inferior, la mayora con un pedi-
celo unicelular corto y una cabeza radiada compuesta
de ocho clulas, menos abundante con un pedicelo
unicelular y una cabeza esfrica unicelular o bicelular.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 5% de tallos; no ms de 2,0% de
otra materia extraa
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Romero reducido a polvo fino
Anlisis: Secar a 105 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 10%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 2-4 g de Romero reducido a polvo fino
Criterios de aceptacin: No ms de 9,0% , car al aire y observar bajo luz UV a 366 nm.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 2-4 g de Romero reducido a polvo fino
Criterios de aceptacin: No ms de 1,5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER cido Carnsico USP
ER Extracto Hidroflico de Romero en Polvo USP
ER cido Rosmarnico USP
11.U5P38
Agregar lo siguiente:
11.Romero en Polvo
DEFINICIN
El Romero en Polvo es Romero reducido a polvo o a polvo
muy fino. Contiene no menos de 2,0% de diterpenos fe-
nlicos, calculado como la suma de cido carnsico y car-
noso!, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. El Romero en Polvo cumple con los requisitos en Prue-
bas Especficas, <:;aractersticas Botnicas.
B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA ,
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Acido Rosmar-
nico USP en metanol
Solucin estndar B: 100 mg/mL de ER Extracto Hidro-
flico de Romero en Polvo USP en metano!
Solucin muestra: Someter a ultrasonido aproximada-
mente 1 g de Romero en Polvo en 1O mL de metanol
durante 1O minutos. Centrifugar y usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de part1cula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 2 L de Solucin estndar A,
4 L de Solucin estndar B y 8 L de Solucin muestra,
en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hume-
dad relativa de aproximadamente 33%, usando un dis-
positivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, cido fr-
mico y agua (15:1 :1)
Suplt!tnentos Ofett.icus / Rornero 6635
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin A: Solucin de 5 mg/mL
de difenilborinato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Reactivo de derivatizacin B: Solucin de 50 mg/mL
de polietilenglicol 400 en diclorometano
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
placa para cromatografa en capa delgada de alta reso-
lucin adecuada (ver Cromatografa (621)) y secar al
aire. Desarrollar los cromatogramas en una cmara sa-
turada, retirar la placa de la cmara, calentar a 100
durante 3 minutos, derivatizar la placa mientras est
tibia con el Reactivo de derivatizacin A, secar al aire,
luego derivatizar con el Reactivo de derivatizacin B, se-
.,
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Soluc1on
estndar B presenta, en el tercio superior, una banda
fluorescente de color azul que corresponde a la banda
debida a cido rosmarnico en el cromatograma de la
Solucin estndar A y una banda menos intensa debida
a cido cafeico directamente por encima de la banda
que corresponde a cido rosmarnico. Las bandas debi-
das a cido rosmarnico y cido cafeico estn clara-
mente separadas.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas principales,
similares en posicin y color a las bandas correspon-
dientes en el cromatograma de la Solucin estndar B.
Una banda fluorescente de color azul a un valor RF co-
rrespondiente a la banda de cido rosmarnico en la
Solucin estndar A; una banda a un valor RF correspon-
diente a cido cafeico; una banda de color verde en
aproximadamente la seccin media del cromatograma y
una banda intensa de color anaranjado en el tercio infe-
rior del cromatograma; debajo de la banda de color
verde, el cromatograma de la Solucin muestra presenta
un patrn de bandas de baja intensidad con colores
caractersticos (a diferencia de hojas de salvia, hojas de
tomillo, hojas de albahaca santa, hojas de albahaca y
hojas de organo).
El cromatograma de la Solucin muestra no presenta un
par de bandas principales de color anaranjado en el
tercio inferior del cromatograma (a diferencia de hojas
de salvia y hojas de tomillo), una banda de color azul
claro a un valor RF de aproximadamente un tercio del
cromatograma (a diferencia de hojas de albahaca
santa), una banda de color anaranjado en el tercio in-
ferior del cromatograma y una banda de color azul
claro a aproximadamente dos tercios del cromato-
grama (a diferencia de hojas de albahaca), o una
banda de color rojo directamente por encima de la
banda debida a cido cafeico en el tercio superior del
cromatograma (a diferencia de hojas de tomillo y ho-
jas de organo). [NOTA-Esta banda de color rojo se
distingue de la banda de color rojo en el frente de la
fase mvil, presente en Romero y otras hojas, debida a
clorofila.]
C. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Diterpenos Fenlicos.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta el pico principal al tiempo de re-
tencin correspondiente a cido carnsico en el croma-
tograma de la Solucin estndar A_y un pico adici~~al
correspondiente a carnoso! a un tiempo de retenoon
relativo de aproximadamente 0,64 comparado con el
del pico de cido carnsico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE DITERPENOS FENLICOS.
Fase mvil: Una mezcla de acetonitrilo y una solucin
de cido fosfrico al 0,5% en agua (65:35)
66 36 Romero ! Sup!t'rnentos Dietticos
[NOTA-Proc~der bajo luz tenue.]
Disolvente: Acido fosfrico al 0,5% en metanol
Solucin estndar A: [NOTA-Us9r material de vidrio
transparente.] 0,2 mg/ml de ER Acido Carnsico USP
en Disolvente. SomPter a ultrasonido hasta disolver si
fuera necesario. ' quisitos de las pruebas para determinar la ausencia de
Solucin muestra: 1,0 g de Romero en Polvo en 50 ml
de metanol. Someter a ultrasonido durante 3 horas. An-
tes de inyectar, pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 m o menor, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV, 230 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar A
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: Entre 0,90 y 1,30 para el pico
de cido carnsico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2% deter-
minada a partir del pico de cido carnsico e~ inyec-
ciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A y Solucin muestra
[NOTA-La Solucin estndar A y la Solucin muestra per-
manecen estables durante 12 horas a temperatura
ambiente.}
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
identificar el tiempo de retencin de los picos corres-
pondientes a cido carnsico y carnasol en el cromato-
grama de la Solucin muestra. [NOTA-Los tiempos de
retencin relativos aproximados para los picos de car-
noso! y cido carnsico son 0,64 y 1,00,
respectivamente. J
Calcular los porcentajes de cido carnsico y carnasol
en la porcin de Romero en Polvo tomada:
Resultado = (ru! r5) x Cs x (V/W) x F x 100
ru = rea del pico del analito pertinente en el
cromatograma de la Solucin muestra
rs = rea del pico de cido carnsico en el
cromatograma de la Solucin estndar A
Cs =concentracin de cido carnsico en la
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen de la Solucin muestra (mL)
w = peso de Romero en Polvo tomado para
preparar la Solucin muestra (m,q)
F = factor de conversin (1,00 para acido
carnsico y 0,92 para carnosol)
Sumar los porcentajes de acido carnsico y carnoso!.
Criterios de aceptacin: No menos de 2,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
M_ercurio: No ms de) ,O g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES V DIETTICOS (2021 ): El recuento total de mi-
croorganismos aerobios no excede de 105 ufc/g; el re-
cuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
USP 38
terias Gram-negativas tolerantes a la bilis no excede de
1oi ufc/g. _
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS-SUPLEMENTOS
NUTRICIONALES V DIETTICOS (2022): Cumple con los re-
Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS 80TNICAS
Macroscpicas: Polvo de color verde grisceo a verde
amarillento
Microscpicas: Presenta fragmentos de clulas de epi-
dermis superior, poligonales a irregulares, con paredes
ligeramente engrosadas y puntuaciones ocasionales, au-
sencia de estomas; clulas de epidermis inferior, con pa-
redes rectas o ligeramente sinuosas, numerosos estomas
diacticos, masas de tricomas de recubrimiento multice-
lulares caractersticos, de paredes delgadas, uniseriados
y ampliamente ramificados, de hasta 300 m de longi-
tud con cada ramificacin que deriva de un nudo lige-
ramente protuberante y termina en una sola clula ahu-
sada; tricomas glandulares de dos tipos, la mayora con
un pedicelo unicelular corto y una cabeza radiada com-
puesta de ocho clulas, menos abundante con un pedi-
celo unicelular y una cabeza esfrica unicelular o bicelu-
lar; tricomas glandulares que aparecen como un disco
con ocho clulas desde una vista superficial; clulas de
hipodermis con paredes distintivamente en forma de
,rosario; fibras; tejido vascular.
PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Romero en Polvo
Anlisis: Secar a 105 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 10%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 2-4 g de Romero en Polvo
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 9,0% ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561)
Muestra: 2-4 g de Romero en Polvo
Criterios de aceptacin: No ms de 1,5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta de la que se obtuvo el artculo.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Carnsico USP
ER ~xtracto Hidroflico de Romero en Polvo USP
ER Acido Rosmarnico USP
AUSP38
Agregar lo siguiente:
Extracto Acuoso Seco de Hojas de
Romero
DEFINICIN
El Extracto Acuoso Seco de Hojas de Romero se prepara a
partir de Romero mediante extraccin con agua. Contiene
no menos de 90% y no ms de 110% de la cantidad
declarada de cido rosmarnico, con respecto a la materia
seca. Puede contener sustancias agregadas adecuadas
como vehculos.
USP 38
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/ml de ER cido Rosmar-
nico USP en rnelanoi
Solucin estndar B: 100 mg/ml de ER Extracto Hidro-
flico de Romero en Polvo USP en metano!
Solucin muestra: 100 mg/ml de Extracto Acuoso
Seco de Hojas de Romero en metano!
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de part1cula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 2 L de Solucin estndar A y
4 L de Solucin estndar By Solucin muestra, en ban-
das de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, cido fr-
mico y agua (15:1 :1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin A: Solucin de 5 mg/ml
de difenilborinato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Reactivo de derivatizacin B: Solucin de 50 mg/ml
de polietilenglicol 400 en diclorometano
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra. Aplicar las muestras en bandas a una
placa para cromatografa en capa delgada de alta reso-
lucin adecuada y secar al aire. Desarrollar los croma-
togramas en una cmara saturada, retirar la placa de la
cmara, calentar a 100 durante 3 minutos, derivatizar
la placa mientras est tibia con el Reactivo de derivati-
zacin A, secar al aire, luego derivatizar con el Reactivo
de derivatizacin B, secar al aire y observar bajo luz UV
a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar B presenta, en el tercio superior, una banda
fluorescente de color azul que corresponde a la banda
debida a cido rosmarnico en el cromatograma de la
Solucin estndar A y una banda menos intensa debida
a cido cafeico directamente por encima de la banda
que corresponde a cido rosmarnico. Las bandas debi-
das a cido rosmarnico y cido cafeico estn clara-
mente separadas.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas principales,
similares en posicin y color a las bandas correspon-
dientes en el cromatograma de la Solucin estndar B.
Una banda fluorescente de color azul a un valor RF co-
rrespondiente a la banda de cido rosmarnico en la
Solucin estndar A; una banda a un valor RF correspon-
diente a cido cafeico; una banda de color verde en
aproximadamente la seccin media del cromatograma y
una banda intensa de color anaranjado en el tercio infe-
rior del cromatograma; por debajo de la banda de color
verde, el cromatograma de la Solucin muestra presenta
un patrn de bandas de baja intensidad con colores
caractersticos (a diferencia de hojas de salvia, hojas de
tomillo, hojas de albahaca santa, hojas de albahaca y
hojas de organo).
El cromatograma de la Solucin muestra no presenta un
par de bandas principales de color anaranjado en el
tercio inferior del cromatograma (a diferencia de hojas
de salvia y hojas de tomillo), una banda de color azul
claro a un valor Rr de aproximadamente un tercio del
cromatograma (a diferencia de hojas de albahaca
santa), una banda de color anaranjado en el tercio in-
ferior del cromatograma y una banda de color azul
claro a aproximadamente dos tercios del cromato-
grama (a diferencia de hojas de albahaca), o una
banda de color rojo directamente por encima de la
Sup!ernentos Dietticos / Romero 663 7
banda debida a cido cateico en el tercio superior del
cromalo<:Jrama (a diferencia de hojas de tomillo y ho-
Ja.s 9e oregano). [NOTA-Esta banda de color rojo se
d1st1ngue de la banda de color rojo en el frente de la
fase mvil, presente en Romero y otras hojas, debida a
clorofila.)
B. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Acido Rosmarnico.
Cr!!erios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
C/On muestra presenta el pico principal al tiempo de re-
tencin correspondiente al pico de cido rosmarnico en
el cromatograma de la Solucin estndar A. Tambin
presenta un pico menos intenso correspondiente al pico
de luteolina-3-0-glucuronido en el cromato9rama de la
Solucin estndar 81 a un tiempo de retencion relativo
de aproximadamente 0,8, comparado con el pico de
cido rosmarnico.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDO ROSMARNICO
Fase mvil: Una mezcla de acetonitrilo y una solucin
de cido trifluoroactico al O, l % en agua (32:68)
Disolvente: Metano! y agua (1 :1) ,
Solucin estndar A: 0,3 mg/ml de ER Acido Rosmar-
nico USP en Disolvente. Someter a ultrasonido hasta di-
solver, si fuera necesario.
Solucin estndar B: 1O mg/ml de ER Extracto Hidrof-
lico de Romero en Polvo USP en Disolvente. Someter a
ultrasonido hasta disolver, si fuera necesario. Antes de
inyectar, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros ml del filtrado.
Solucin muestra: Someter a ultrasonido durante 5 mi-
nutos una cantidad de Extracto Acuoso Seco de Hojas
de Romero, equivalente a 15 mg de cido rosmarnico,
en 50 ml de Disolvente. Antes de inyectar, pasar a
travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografra (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV, 328 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 20 1
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto Hi-
droflico de Romero en Polvo USP usado.
Factor de asimetra: Entre 0,90 y 1,30 para el pico
de cido rosmarnico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2%, deter-
minada a partir del pico de cido rosmarnico en in-
yecciones repetidas, Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A, la
Solucin estndar B y el cromatograma de referencia
provisto con el lote de ER Extracto Hidroflico de Ro-
mero en Polvo USP usado, identificar el tiempo de re-
tencin del pico correspondiente a cido rosmarnico
en el cromatograma de la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de cido rosmarnico en la por-
cin de Extracto Acuoso Seco de Hojas de Romero
tomada:
P = (r11/r,) x (C/C11) x 100
6638 Romero ./ SuplPmPntm DiE'tticos
ru = rea del pico de cido rosmarnico en el
cromatograma de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de cido rosmarnico en el
cromatograma de la Solucin estndar A
C; = concentracin de cido rosmarnico en la
Solucin estandar A (mg/mL)
Cu = concentracin de Extracto Acuoso Seco de
Hojas de Romero en la Solucin muestra
(mg/mL)
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cido
rosmarnico en la porcin de Extracto Acuoso Seco de
Hojas de Romero tomada:
Resultado = (PI L) x 100
P = porcentaje de cido
rosmarnico segn se
determin anteriormente (%)
L = cantidad declarada de cido rosmarnico (%)
Criterios de aceptacin: 90%-110% con respecto a la
materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO-SUPLEMENTOS NUTRl-
CIONALES y DIETTICOS (2021): El recuento total de mi-
croorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g y el re-
cuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1q3 ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS-SUPLEMENTOS
NUTRICIONALES y DIETTICOS (2022): Cumple con los re-
quisitos de las pruebas para determinar la ausencia de
Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Extracto Acuoso Seco de Hojas de
Romero
Anlisis: Secar a 105 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 8%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz, la humedad y el oxgeno.
Almacenar a temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artculo. Cumple con otros
requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER ~xtracto Hidroflico de Romero en Polvo USP
ER Acido Rosmarnico USP
UIPl8
USP 38
Rutina
llil
/
')H
HO 011
~J~1
CuH;o16 3H20 664,56
3-Rhamnoglucoside of 5, 7,3',4'-tetrahydroxyflavonol;
6-0-a-L-Ramnopiranosil-/3-D-glucsido de 2-(3,4-dihidroxife-
nil)-5, 7-dihidroxi-4H-cromen-4-ona-3-ilo [250249-75-3 ).
DEFINICIN
La Rutina contiene no menos de 95,0% y no ms de
101,0% de rutina (C21Hio16), calculado con respecto a la
sustancia anhidra.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCl9N EN EL INFRARROJO (197K)
8. ABSORCION EN EL ULTRAVIOLETA (197U)
Longitud de onda analtica: 210-450 nm
Solucin muestra: 20 g/mL de Rutina en metanol. Fil-
trar si fuera necesario.
Criterios de aceptacin: El espectro presenta dos mxi-
mos de absorcin a 257 nm y 358 nm. La absortividad
en el mximo a 358 nm es 30,5-33,0, calculada con
resecto a la sustancia anhidra.
C. E tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en la prueba de Quercetina y Otros Com-
puestos Relacionados.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Muestra: 200 mg de Rutina
Blanco: 20 mL de dimetilformamida
Sistema volumtrico
(Ver Volumetra (541 ).)
Modo: Valoracin directa
Solucin volumtrica: Hidrxido de tetrabutilamonio
O, 1 M SV
Deteccin del punto final: Potenciomtrica
Anlisis: Disolver la Muestra en 20 ml de dimetilforma-
mida y valorar con Solucin volumtrica. Realizar una de-
terminacin con el Blanco y hacer las correcciones
necesarias.
Calcular el porcentaje de rutina (C21HJ016) en la por-
cin de la Muestra tomada:
Resultado= {[(V1 - Vs) x M x F]/W} x 100
V1 = volumen de la Solucin volumtrica consumido
por la Muestra (ml)
VR = volumen de la Solucin \lolumtrica consumido
por el Blanco (ml)
M = molaridad real de la Solucin volumtrica
(mmol/mL)
F =factor de equivalencia, 305,3 mg/mmol
W = peso de la Muestra (mg)
Criterios de aceptacin: 95,0%-101,0%, con respecto
a la sustancia anhidra
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de 0,1%
SUSTANCIAS QUE ABSORBEN LA Luz
Longitud de onda analtica: 450 rirn-800 nm
Solucin muestra: Disolver 0,200 g de Rutina en 40 mL
de 2-propanol. Mezclar durante 15 minutos, diluir con
2-propanol hJsta 50,0 ml y filtrar.
 Suplcrncntos DictCtico~ /Rutina 6639

Critcrio5 de aceptacin: La absorbancia de cua!quier Anlisis

sustancia PS no mas de U, 1U. Muestras: Sulucin ol11Jw 8, Sulw iut 1 coLUt 1Ju1 cy
SUSTANCIAS INSOLUBLES EN METANOL Solucin muestra
Muestra: L,'.) g Ccilculd1 el u1ce1dje Je yue1Leli11ci '211 lc1 ~U(Cil de
Andlisb. Agta; la rv1iiP\trn d i1nt0 1 S minuto" en Rutina tomada:
50 ml de metano! a 20 -25 . Filtrar bajo presin redu-
cida a travs de un filtro de vidrio sinterizado previa- Resultado= (ru/r1) ' (C/C) x; 100
mente secado durante 15 minutos a 1 00 -1 OS', en-
friado en un desecador y tarado. Lavar el filtro tres ru = respuesta del pico de quercetina de la Solucin
veces con 20 ml de metano!. Secar el filtro durante 30 muestra
minutos a 105". Dejar que se enfre y pesar. rs = respuesta del pico de quercetina de la Solucin
Criterios de aceptacin: El residuo pesa no ms de estndar c
75 mg (3%). Cs = concentracin de ER Quercetina USP en la
Solucin estndar C (mg/ml)
Cu = concentracin de Rutina en la Solucin muestra
Eliminar lo siguiente: (mg/ml)
Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcin
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de 20 g/ de Rutina tomada: [NOTA---No tornar en cuenta nin-
9 (Oficial Ol-dic-2015) guna impureza menor de O, 1 %.]
QUERCETINA Y OTROS COMPUESTOS RELACIONADOS
Solucin A: Mezclar 50 ml de tetrahidrofurano con Resultado = (ru! rs) x ( C/ Cu) x F x 1 00
950 ml de una solucin de 15,6 mg/ml de fosfato mo-
nobsico de sodio. Ajustar con cido fosfrico a un pH ru = respuesta del pico de cada impur~~za Je la
de 3,0. Solucin muestra
Solucin B: Mezclar 400 ml de tetrahidrofurano con r1 = respuesta del pico de rutina de la Solucin
600 ml de una solucin de 15,6 mg/ml de fosfato mo- estndar B
nobsico de sodio. Ajustar con cido fosfrico a un pH Cs = concentracin de ER Rutina USP en la Solucin
de 3,0. estndar B (mg/rnl)
Fase mvil: Ver la Tabla 7. Cu = concentracin de Rutina en la Solucin muestra
(mg/ml)
F = factor de correccin para cada impureza
Tabla 1
individual (ver la Tabla 2)
Tiempo Solucin A Solucin B Criterios de aceptacin: Ver la Tabla 2.
(min) lo lo
o -- ___2Q_ 50 Tabla 2
t-----1_0_ _ _ _ -t---~-~- 100 Tiempo 1-Criterios de
15 o 100 de Reten- Factor de Aceptacin,
-----~5_0- - - - - -~5~~---1
1
16 cin Correccin No ms de
__1Q_ _____ _ - . -- 20 _______Q_ Nombre Relativo ___fil___ 1 %

1=--1&_~
Kaempferol
Solucin estndar A: Transferir 1 O mg de ER Rutina 3-rutinsido' 11 1
USP a un matraz volumtrico de 1 O ml, agregar 2 ml

~- ~~1
lsoauercitrsido" 12 0.8
de metano! y mezclar hasta disolver. Diluir con Solucin
B a volumen. Ouercetina -
----- ----- ------- -
Solucin estndar B: 20 g/ml de ER Rutina USP en Cualquier otra im-
Solucin B, preparada a partir de la dilucin de Solucin pureza - ----~---
1
estndar A con Solucin B Impurezas totales -
-
-
--- . - --- --------
Solucin estndar C: 20 g/ml de ER Quercetina USP ,, 3-[[ 6-0-( 6-Desoxi-cx-L-mannopiranosil)-/3-o-qlucopiranosil loxi l-5, 7-dihidro-
en Solucin B xi-2-( 4-hidroxifenil)-4H-1 -benzopiran-4-ona.
Solucin muestra: Transferir 100 mg de Rutina a un "2-(3,4-Dihidroxifenil) 3-(/3-o-glucofuranosilox1)-5, 7-dihirlroxi-411-1 -benzo-
matraz volumtrico de 100 ml, agregar 20 ml de meta- piran-4-ona.
no! y mezclar hasta disolver. Diluir con Solucin B a
volumen. PRUEBAS ESPECFICAS
Sistema cromato~;rfico DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo la (921)
(Ver Cromatografia (621 ), Aptitud del Sistema.) Muestra: 1 00 mg
Modo: HPLC Criterios de aceptacin: 7,5%-9,5%
Detector: UV 280 nm REQUISITOS ADICIONALES
Columna: 4 mm x 25 cm; relleno L7 de 5 ~tm ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conwrvar en envases bien
Temperatura de la columna: 30 cerrados, impermeables y resistentes a la luz.
Velocidad de flujo: 1,0 ml/rnin ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
Volumen de inyeccin: 20 pl ER Quercetina USP
Aptitud del Sistema ER Rutina USP
Muestra: Solucin estandar A
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para rutina,
kaempferol 3-rutinsido, 1soquercitrsido y quercetina
son l ,O; 1, l; 1,2 y 2,5, respectivamente.]
Requisitos de aptitud ' 2-(3,4-Dihidroxif enil) 3,5, 7-trihidroxi-4H- l -bciuupiran-4- onci
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el ER Rutina USP usado.
Resolucin: No menos de 1,5, entre los picos de ru-
tina y kaempterol 3-rutinsido
6640 Salvia / Suplementos Dietticos
Salvia China
DEFINICIN
La Salvid Cl1ir1d constJ de IJs rJiccs y los rizomas secos de
Salvia miltiorrhiza Bunge, tambin conocida como Dans-
hen (Fam. Lamiaceae). Contiene no menos de O, 1% de
tanshinona llA; no menos de 0,2% de tanshinonas totales,
cJlculado como la suma de criptotanshinona, tanshinona 1
y tanshinona llA; y no menos de 3,0% de cido salvian-
lico B; todos calculados con respecto a la materia seca. Se
recolecta durante la primavera o el otoo.
IDENTIFICACIN
A. La Salvia China cumple con los requisitos de Pruebas
Especficas, Cara~tersticas Botnicas.
B. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: Una mezcla de aproximadamente
0,5 mg/mL de ER Tanshin9na llA USP y aproximada-
mente 1,5 mg/mL de ER Acido Salvianlico B USP en
alcohol
Solucin estndar B: Aproximadamente 0,25 g de ER
Extracto en Polvo de Salvia China USP en 5,0 mL de
alcohol. Someter a ultrasonido durante 15 minutos,
centrifugar y usar el sobrenadante.
Solucin muestra: Aproximadamente 1,0 g de Salvia
China, reducida a polvo fino, en 5,0 mL de alcohol. So-
meter a ultrasonido durante 15 minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver CromatograflO (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de part1cula de 2-1 O m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L en bandas de 8 mm
Fase mvil A: Una mezcla de acetato de etilo, cloro-
formo, tolueno, cido frmico y metanol (8:6:4:4:1)
Fase mvil B: Una mezcla de eter de petrleo y ace-
tato de etilo (4: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para croma-
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada.
Usar una cmara saturada y acondicionar la placa a
una humedad relativa de aproximadamente 33%
usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los croma-
togramas en la Fase mvil A hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente 40% de la
placa. Retirar la placa y dejar que se seque. Desarrollar
los cromatogramas en una cmara saturada que con-
tenga Fase mvil B hasta que el frente de la fase mvil
haya recorrido aproximadamente tres cuartos de la
placa. Retirar la placa, secar y observar bajo luz visible
y luz UV a 254 nm y 365 nm.
Criterios de aceptacin
Bajo luz visible, el cromatograma de la Solucin muestra
rresenta tres bandas con posiciones y colores similares
a las b9ndas en el cromatograma de la Solucin estn-
dar B. Estas incluyen una banda de color rosado en el
tercio superior del cromatograma, similar en valor RF y
color a la banda de tanshinona llA en el cromatograma
de la Solucin estndar A, una banda de color anaran-
jado amarillento en el tercio superior del cromato-
grama y una banda de color anaranjado aproximada-
mente a la mitad del cromatograma debida a
tanshinona 1 y criptotanshinona, respectivamente.
Bajo luz UV a 365 nm, el cromatograma de la Solucin
muestra presenta tres bandas de color azul con posi-
ciones y colores similares a las baJldas en el cromato-
grama de la Solucin estndar B. Estas incluyen una
banda de color azul intenso en el tercio inferior del
USP 38
cromatograma, correspondiente en valor R, y color a la
banda de cido salvianlico B en el cromatograma de
la Solucin estandar A, y dos bandas menores de color
azul en el tercio interior del cromatograma y por en-
cima de la udr 1dd de dl ido sdivianlico B, debidJs a
cido litosprmico y cido rosmarnico.
Bajo luz UV a 254 nm, el cromatograma de la Solucin
muestra presenta bandas de extincin intensas a valo-
res R1 correspondientes a los de tanshinona llA y cido
salvianlico B en el cromatograma de la Solucin estn-
dar A. El cromatograma de la Solucin muestra tambin
presenta otras bandas de extincin que corresponden
en valores Rr a las bandas en el cromatograma de la
Solucin estndar B.
C. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Tanshinonas.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta el pico ms intenso a un tiempo
de retencin correspondiente al de tanshinona llA en el
cromatograma de la Solucin estndar A. El cromato-
grama de la Solucin muestra presenta dos picos adicio-
nales correspondientes a tanshinona 1 y criptotanshi-
nona, de menor intensidad y que representan
aproximadamente la mitad del contenido total de
tanshinonas.
D. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Acido Salvianlico B.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta un pico a un tiempo de retencin
correspondiente al de cido salvianlico B en el croma-
tograma de la Solucin estndar A.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE TANSHINONAS
Solucin A: cido fosfrico al 0,02% en agua (v/v)
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
-- ----~---
-~
Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) (%) (%)
o 39 61
6 39 61
20 10 90
20 5 39 61
25 39 61
[NOTA-Proceder bajo luz tenue o usar material de vi-
drio con proteccin actnica. La Solucin estndar y la
Solucin muestra se mantienen estables durante 24 ho-
ras a temperatura ambiente.]
Solucin estndar A: 0,02 mg/mL de ER Tanshinona llA
USP en metanol
Solucin estndar B: 2 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Salvia China USP en metanol. Someter a ultrasonido
durante 15 minutos y pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m. Dese-
char los primeros mL del filtrado.
Solucin muestra: Aproximadamente 300 mg de Salvia
China, reducidos a polvo fino y pesados con exactitud,
en 40 mL de metanol. Someter a ultrasonido durante
30 minutos, filtrar en un matraz volumtrico de 50 ml
y lavar el residuo y el papel de filtro con unos pocos mL
de metanol. Ajustar con metano! a volumen, mezclar y
pasar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 ~tm. Desechar los primeros mL del
filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 18
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 20
Velocidad de flujo: 1,0 mL!min
Volumen de inyeccin: 1 O pl
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Salvia China USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
tanshinona llA, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de tanshinona llA en in-
yecciones repetidas, Solucin estndar A
Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de crip-
totanshinona y tanshinona 1, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar y So-
lucin muestra
Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
Solucin estndar B y el cromatograma de referencia
provisto con el Jote de ER Extracto en Polvo de Salvia
China USP usado, identificar los tiempos de retencin
de los picos correspondientes a las diferentes tanshino-
nas en el cromatograma de la Solucin muestra. Los
tiempos de retencin relativos aproximados para los
distintos picos de criptotanshinona, tanshinona 1 y
tanshinona llA son 0,75; 0,79 y 1,00, respectivamente.
Calcular los porcentajes de criptotanshinona, tanshinona
1 y tanshinona llA en la porcion de Salvia China
tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x Fx 100
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de tanshinona llA de la Solucin
estndar A
C, ~ concentracin de ER Tanshinona llA USP en la
Solucin estndar A (mg/ml)
V = volumen de la Solucin muestra (ml)
W = peso tomado de Salvia China para preparar la
Solucin muestra (mg)
F = factor de conversin para analitos (1, 18 para
criptotanshinona, 1,31 para tanshinona 1 y
1,00 para tanshinona llA)
Sumar los porcentajes de criptotanshinona, tanshinona 1
y tanshinona llA.
Criterios de aceptacin: No menos de O, 1 % de tanshi-
nona ll;1 y no menos de 0,2% de tanshinonas totales,
calculados cqn respecto a 19 materia seca
CONTENIDO DE ACIDO SALVIANOLICO 8
Solucin A: cido fosfrico al O, 1 % en agua (v/v)
Fase mvil: Solucin A y acetonitrilo (78:22)
[NOTA-La Solucin estndar y la Solucin muestra se
mantienen estables durante 12 horas a temperatura
ambiente.]
Disolvente: Metanol y agua (8:2) , centrifugar y usar el sobrenadante.]
Solucin estndar: O, 1 mg/ml de ER Acido Salvianlico
B USP en Disolvente
Solucin madre de la muestra: Aproximadamente
150 mg de Salvia China, reducidos a polvo fino y pesa-
dos con exactitud, en 40 ml de Disolvente. Someter a
ultrasonido durante 30 minutos, filtrar en un matraz vo-
lumtrico de 50 ml, y lavar el residuo y el papel de
filtro con unos pocos ml de Disolvente. Ajustar con Di-
solvente a volumen, mezclar y centrifugar una porcin.
Solucin muestra: Diluir una porcin del sobrenadante
de la Solucin madre de la muestra (1 :2) con Disolvente,
mezclar y pasar a travs de un filtro de membrana con
Suplementos Dietticos / Salvia 6641
un tamano de poro de 0,45 pm. Desechar los primeros
2 ml del filtrado.
Sistema cromatogrfico
(Ver Crornatograf1a ;621 )1 Aptitud de! Sf_<;tctna.)
Modo: HPLC
Detector: UV 286 nm
Columna: 4,6 mm x. 25 cm; relleno L1 de 5 ~im
Temperatura de la columna: 20 1
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyeccin: 10 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido salvianlico B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de cido salvianlico B en
inyecciones repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar, identi-
ficar el tiempo de retencin del pico correspondiente a
cido salvianlico B en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de cido salvianlico B en la por-
cin de Salvia China tomada:
Resultado= (ru/rs) X e X (V/W) X D X 100
ru = rea del pico de cido salvianlico B de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cido salvianlico B de la
Solucin estndar
Cs = concentracin de ER cido Salvianlico B USP
en la Solucin estndar (rng/ml)
V = volumen de la Solucin madre de Ja muestra
(ml)
W = peso de Salvia China usada para preparar la
Solucin madre de Ja muestra (mg)
D = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra a partir de la Solucin madre de Ja
muestra, 2
Criterios de aceptacin: No menos de 3,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Para agua desionizada: Usar agua desionizada de al me-
nos 18 megaohmios.
Solucin muestra: Usar Salvia China previamente se-
cada durante 2 horas a 60, molida hasta polvo grueso.
Pesar con exactitud 0,5 g del polvo, transferir a un vaso
para microondas cerrado y agregar 5-1 O ml de cido
ntrico concentrado. [NOTA-En caso de una reaccin
severa, apartar el vaso hasta que la reaccin cese.] Di-
gerir bajo presin siguiendo las recomendaciones del fa-
bricante del instrumento, enfriar a una temperatura me-
nor de 60 y retirar el vaso. Enfriar a temperatura
ambiente, transferir el contenido con ayuda de tres por-
ciones de 1O ml de agua desionizada a un matraz volu-
mtrico de 250 ml, diluir con agua desionizada a volu-
men y mezclar. [NOTA- Si se observan depsitos,
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 2 g/g
Cadmio: No ms de 0,3 g/g
Plomo: No ms de 5 ~19/g
IV!.ercurio: No ms de ,0,2 g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para An-
fi:, de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 oi utc/g; y el recuento de bac-
6647 <)a!via / Sup!etnet7los Dietticos
teria~Gram neaat1vas tolerantes a la bilis no excede de
10' ufc/g. ~ A.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
pl~ ce:: !e;~ rcq;._t~itv~
de ~Js pruebas para deteff11ittdr fa
au~frlC in de \nimnnPlia spp. v Escherichia col!. .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxmas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Rizomas cortos y gruesos, en ocasiones
con restos de tallos en el pice. Races, largas, cilndri-
cas, ligeramente curvadas, algunas ramificadas, con rai-
cillas, de 10-20 cm de largo, 0,3-1,5 cm de dimetro.
Superficie externa de color rojo amarronado y rojo
amarronado oscuro, spera, con arrngas longitudinales.
La corteza de las races, en su mayona de color marrn
purpreo, est suelta y por lo general se descama; la
corteza de las ra1ces 1ovenes se adhiere estrechamente
al leno y no es tacil de descamar. La textura es dura y
frgil, de fractura libre, con cc:irteza. d,e color rojo ,ama-
rronado y leo de color amarillo gnsaceo o marron pur-
preo, que presenta haces vasculares, de color blanco
amarillento, dispuestos radialmente.
Microscpicas
Seccin transversal: Sber, de 4-8 hileras de clulas
con contenido de color marrn; pueden presentarse
tejidos de nt1doma; corteza amplia, clulas parenqui-
mticas que presentan grnulos de color marrn ro-
jizo; floema estrecho, en forma de m.edia lu~a; .c.m-
bium formando un anillo; vasos de x1lema, l1gn1f1cados,
principalmente escalariformes y reticulados, numerosos
cerca del anillo del cmbium y escasos cerca de la m-
dula; fibras de xilema en haces, radialmente dispersos;
mdula en el centro .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
cohpl, Mtodo 7 (561): !';Jo menos de 15,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 2 (561): No menos de 35,0%
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1, O'] de "a!via China reducida a polvo fino
Anlisis: Secar a 105' durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 1 3%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 4,0 g de Salvia China reducida a polvo fino
Criterios de aceptacin: No ms de 10% , dar B. Estas incluyen una banda de color rosado en el
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561/: No ms de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la f?lanta contenida en el artculo.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER [xtract,; d1 Puivu de Saivia China USP
ER cido Salvianl1co B USP
FR Ton<J1inor.a !L Ut;r_)
Salvia China en:__::_P-=o~lv~=---------
oEF1N1c1N
La Salvia China en roivo es Salvia China reducida a polvo o
a polvo rnuv tino. Contiene no menos de O, 1 % de tanshi-
nona 11,; 110 meno; de 0,2% de tanshinonas totales, calcu-
lado como la suma de criptotanshinona, tanshinona 1 y
tansh!nona !!.,; '-' no menos de 3,0% de cido salvianlico
B; todos calcul~dm con respecto a la materia seca.
USP 38
IDENTIFICACIN
La Salvia Lh111a e11 Polvo cumple ron los requisitos de
Pruebas Espeofo;is, Caractenslicas Botamcas .
B. CROMATOGRAFIA EN (APA DELGADA
Solucin estndar .A: Un.; mez~la ele i1pr oxir !laudrnente
0,5 mg/mL de ER Tanshin9na 11,, USP y aproximada-
mente 1,5 mg/mL de ER Acido Salvianlico B USP en
alcohol
Solucin estndar B: Aproximadamente 0,25 g de ER
Extracto en Polvo de Salvia China USP en 5,0 mL de
alcohol. Someter a ultrasonido durante 15 minutos,
centrifugar y usar el sobrenadante. .
Solucin muestra: Aproximadamente 1,0 g de Salvia
China en Polvo en 5,0 mL de alcohol. Someter a ultra-
sonido durante 15 minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cramatografta (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de part1cula de 2-1 O m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 ~tL en bandas de. 8 mm
Fase mvil A: Una mezcla de acetato de etilo, cloro-
formo, tolueno, cido frmico y metanol (?:6:4:4:1)
Fase mvil B: Una mezcla de eter de petroleo y ace-
tato de etilo (4:1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para croma-
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada.
Usar una cmara saturada y acondicionar la placa a
una humedad relativa de aproximadamente 33%
usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los croma-
togramas en la Fase mvil A hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido aproximadamente 40% de la
placa. Retirar la placa y dejar que se seque. Desarrollar
los cromatogramas en una cmara saturada que con-
tenga Fase mvil B hasta que el frente de la fase mvil
haya recorrido aproximadamente tres cuartos de .1~
placa. Retirar la placa, secar y observar ba10 luz v1s1ble
y luz UV a 254 nm y 365 nm.
Criterios de aceptacin
Bajo luz visible, el cromatograma de la Solucin muestra
presenta tres bandas con posiciones y colores .simila!es
a las b9ndas en el cromatograma de la Soluc1on estan-
tercio superior del cromatograma, similar en valor R1 y
color a la banda de tanshinona llA en el cromatograma
de la Solucin estndar A, una banda de color anaran-
jado amarillento en el tercio superior del cromato-
grama y una banda de color anaranjado a aproxima-
damente la mitad del cromatograma debida a
tanshinona 1 y criptotanshinona, respectivamente ..
Bajo luz UV a 365 nm, el cromatograma de la Soluc10n
muestra presenta tres bandas de color azul con posi-
ciones y colores similares a las ba0das en el cromato-
grama de la Solucin estndar B. Estas incluyen una
banda de color azul intenso en el tercio inferior del
cromatoyrama, correspondiente en valor R, y color a la
banda de cido salvianlico B en el cromatograma de
la Solucin estndat A, y dos bandas menores de color
azul en el tercio inferior del cromatograma y por en-
cima de la banda de cido salvianlico B, debidas a
cido litosprmiw y cido rosmarnico. ..
Bajo luz UV a 254 nm, el cromatograma de la Solueton
mtw~tm presenta bandas de extincin intensas a valo-
res R, correspondientes a los de tanshinona 11,, y cido
salvianlico B en el cromatoqrama de la Solucin estn-
dar A. El cromatograma de la Solucin muestra tambin
presenta otras bandas de extincin que corresponden
en valores R, a las bandas en el cromatograma de la
Soluc.n p;cndar B.
USP 38 Suplementos Dietticos/ Salvia 6643

C. HPLC Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-

Anlisis: Proceder wgLr1 '>e i11dic a e11 la .:irueba de Con- terminada a partir del pico de tanshi11011a 11., en in-
tenido de lomhinonm. yecciones re.:ietidas, Solucion estndar A
Criterios de aceptacin: ti u ur 11alug1 a1 llct de ia 'Jiu- Re~oluci11: l"u 111e1 ru) de 1,5 er 1t1 e lo) pi LOS de crip-
ri6n 1'71UP\trn flfC'')C'ntJ C'! pico mJs ntcnso J Un tiempo totanshinona v tanshinona 1, Solucion estndar B
de retencin correspondiente al de tanshinona 11,\ en el Anlisis
cromatograma de la Solucin estndar A. El cromato- Muestras: Solucin estndor A, Solucin estndar B y
grama de la Solucin muestro presenta dos picos adicio- Solucin muestra
nales correspondientes a tanshino11a 1 y criptotanshi- Usando los cromatogramas de la Solucin estndar A,
nona, de menor intensidad y que representan Solucin estndar By el cromatograma de referencia
aproximadamente la mitad del contenido total de provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de Salvia
tanshinonas. China USP usado, identificar los tiempos de retencin
D. HPLC de los picos correspondientes a las diferentes tanshino-
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con- nas en el cromatograma de la Solucin muestra. Los
tenido de Acido Salvian/ico B. tiempos de retencin relativos aproximados para los
Criterios de aceptacin: FI nomatograma de la Solu- distintos picos de criptotanshinona, tanshinona 1 y
cin muestra presenta un pico a un tiempo de retencin tanshinona llA son 0,75; 0,79 y 1,00, respectivamente.
correspondiente al de cido salvianlico B en el croma- Calcular los porcentajes de criptotanshinona, tanshinona
tograma de la Solucin estndor A. 1 y tanshinona 11,, en la porcin de Salvia China en
Polvo tomada:
COMPOSICIN
CONTENIDO DE T ANSHINONAS Resultado = (r11! r,) X e X (V/ W) X F X 100
Solucin A: cido fosfrico al 0,02% en agua (v/v)
Solucin B: Acetonitrilo ru = rea del pico del analito pertinente de la
Fase mvil: Ver la Tabla 7. Solucin muestra
r, = area del pico de tanshinona llA de la Solucin
Tabla 1 estndar A
~-- ------- c, = concentracin de ER Tanshinona llA USP en la
Tiempo Solucin A Solucin B Solucin estndar A (mg/mL)
lmin) (%) (%) V = volumen de la Solucin muestra (mL)
o 39 61 W = peso de Salvia China en Polvo tomada para
6 39 61 preparar la Solucin muestra (mg)
20 10 90 F = factor
de conversin para analitos (1, 18 para
criptotanshinona, 1,31 para tanshinona 1 y
-~

20 5 39 61
25 - 39 61
[NOTA-Proceder bajo luz tenue o usar material de vidrio
con proteccin actnica. La Solucin estndar y la Solu-
cin muestra se mantienen estables durante 24 horas a
temperatura ambiente.]
Solucin estndar A: 0,02 mg/mL de ER Tanshinona llA
USP en metanol
Solucin estndar B: 2 mg/mL de E:K l:xtracto en Polvo
de Salvia China USP en metano!. Someter a ultrasonido
durante 1 5 minutos y pasar a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 pm. Dese-
char los primeros mL del filtrado.
Solucin muestra: Aproximadamente 300 mg de Salvia
China en Polvo, pesados con exactitud, en 40 mL de
metano!. Someter a ultrasonido durante 30 minutos y
filtrar en un matraz volumtrico de 50 mL. Lavar el resi-
duo y el papel de filtro con unos pocos mL de metano!,
a1ustar con metano! a volumen, mezclar y pasar a travs
de un filtro de membrana con un tamao de poro de
0,45 pm. Desechar los primeros mL del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistemo.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno Ll de 5 pm
Temperatura de la columna: 20
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O ~tL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Soluc1on estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndor B es similar a! Gom;itograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Salvia China USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
tanshinona llA, Solucin estndar A
1,00 para tanshinona llA)
Sumar los porcentajes de criptotanshinona, tanshinona 1
y tanshinona llA.
Criterios de aceptacin: No menos de O, 1 % de tanshi-
nona llA y no menos de 0,2% de tanshinonas totales,
calculados cqn respecto a 19 materia seca
CONTENIDO DE ACIDO SALVIANOLICO 8
Solucin A: cido fosfrico al O, 1 % en agua (v/v)
Fase mvil: Solucin A y acetonitrilo (78:22)
[NOTA-La Solucin estndar y la Solucin muestra se
mantienen estables durante 12 horas a temperatura
ambiente.]
Disolvente: Metano! y agua (8:2) ,
Solucin estndar: O, 1 mg/mL de ER Acido Salvianlico
B USP en Disolvente
Solucin madre de la muestra: Aproximadamente
150 mg de Salvia China en Polvo, pesados con exacti-
tud, en 40 mL de Disolvente. Someter a ultrasonido du-
rante 30 minutos y filtrar en un matraz volumtrico de
50 ml. Lavar el residuo y el papel de filtro con unos
pocos mL de Disolvente, ajustar con Disolvente a volu-
men, mezclar y centrifugar una porcin.
Solucin muestra: Diluir una porcin del sobrenadante
de la Solucin madre de la muestra (1 :2) con Disolvente,
mezclar y pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 pm. Desechar los primeros
2 mL del filtrado
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 286 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm.: relleno L1 de 5 flm
Temperatura de la columna: 20 1 u
Velocidad de flujo: 1,2 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O ~tL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin est6nda
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido salvianlico B
6644 Salvia / Suplementos Dietticos
Desviacin estndar relativa: No mil~ rlP /,0% de-
terminada a partir del picu Je <leido sdlvidnlico B en
inyecciones repetidas
Anlisis
Muestras \nlurinn estndar 'i So!uoon muestra
Usando el cromatograma de la Solucin estndar, identi-
ficar el tiempo de retencin del pico correspondiente a
cido salvianlico B en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de cido salvianlico B en la por-
cin de Salvia China en Polvo tomada:
Resultado = (r,,/ 11) X e X (V/ VV) X oX
ru = rea del pico de cido salvianlico B de la
Solucin muestra
rs = rea de pico de cido salvianlico B de la
Solucion estcindar
C =concentracin de ER cido Salvianlico B USP
en la Solucin estcindar (mq/mL)
V = volumen de la Solucin madre de la muestra
(mi)
W = peso de Salvia China en Polvo usada para
preparar la Solucin muestra (mg)
O = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra, a partir de la Solucin madre de la
muestra, 2
Criterios de aceptacin: No menos de 3,0% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Para agua desionizada: Usar agua desionizada de al me-
nos 18 megaohmios.
Solucin muestra: Usar Salvia China en Polvo previa-
mente secada durante 2 horas a 60, pesar con exacti-
tud 0,5 g, transferir a un vaso para microondas cerrado
y agregar 5-10 mL de cido n1trico concentrado.
[NOTA-En caso de una reaccin severa, apartar el vaso
hasta que la reaccin cese.] Digerir bajo presin si-
guiendo las recomendaciones del fabricante del instru-
mento, enfriar a una temperatura menor de 60 , retirar
el vaso, enfriar a temperatura ambiente, transferir el
contenido con ayuda de tres porciones de 1 O mL de
agua desionizada a un matraz volumtrico de 250 mL,
agregar agua desionizada a volumen y mezclar.
[NOTA-Si se observan depsitos, centrifugar y usar el
sobrenadante.]
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 2 pg/g
Cadmio: No ms de 0,3 pg/g
Plomo: No ms de 5 pg/g
Mercurio: No ms de 0,2 pg/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 >:
El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no exCede de 1 0' ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 oi ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram-negativas loleranle'> a ia Liilis 110 excede de
1 0 3 ufc/g. , a ultrasonido durante 20 minutos, centrifugar y usar el
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
aus,encia de Salmonella SP,p. y Escherichia coli . de San juan. Someter a ultrasonido 1 g en 1 O mL de
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxmas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Presenta un color marrn amarillento a
marrn rojizo.
Microscpicas: Presenta fralJrnenlm de clulas subero-
sas, subrectangulares o poligonales, que contienen pig-
mentos de color marrn amarillento, de 10-150 pm de
dimetro; clulas parenqu1mallcas de corteza, subcua-
USP 38
dradas o poligonales, que contienen pigmentos de
color marrun ropzo; celulas petreas, subredondeadas,
subtriangulares, subrectangulares o de forma irregular,
aiyunas eiongadas, en su mayora d.e 14-/U pm d~ d1a-
metro . de h;i,ta 270 pm rle largo; fibras mayoritaria-
mente en haces, fusiformes, con extremos puntiagudos
oblicuos o redondeados y romos, con estras oblicuas o
entrelazadas, de 10-60 pm de dimetro; y vasos reticu-
lados y con puntuaciones, de hasta 120 pm de
dimetro.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Al-
100 coh,ol, Mtodo 7 (561): t)Jo menos de 15,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 2 (561): No menos de 35,0%
PRDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Salvia China en Polvo
Anlisis: Secar a 105 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin~ No ms .de 1 3%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561)
Muestra: 4,0 g de Salvia China en Polvo
Criterios de aceptacin: No ms de 1 0% ,
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
temperatura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la r;>lanta de las que se obtuvo el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Salvia China USP
ER cido Salvianlico B USP
ER Tanshinona llA USP
Hierba de San Juan
DEFINICIN
La Hierba de San juan est compuesta por las partes areas
o sumidades florales desecadas de Hypericum perforatum L.
(Fam. Hypericaceae), recolectadas poco antes o durante. la
floracin. Contiene no menos de 0,04% del total combi-
nado de hipericina (CmH160s) y pseudohipericina
(C30H1009), y no menos de 0,6% de hiperforina
(CisH,204), con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. Cumple con los requisitos en Pruebas Especficas, Ca-
ractersticas Botnicas.
B. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Rutina USP en
metano!
Solucin estndar B: 0,5 mg/mL de ER Hipersido USP
en metano!
Solucin estndar C: 50 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Hierba de San juan USP en metano!. Someter
sobrenadante transparente.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino 50 g de Hierba
metano! durante aproximadamente 20 minutos, centri-
fugar y usar el sobrenadante transparente.
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de partcula de 5 pm
(placas para HPTLC) . .
Volumen de aplicacin: 2 pL, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa hasta una
humedad relativa de aproximadamente 30%, usando
un dispositivo adecuado.
USP 38
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, cido ac-
tico glacial, c:cido frmico, agua y cloruro de metileno
(10: 1,0: 1,0: 1,1: 2,5)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin A: Solucin de 5 mg/mL
de difenilborinato de 2-aminoetlio en acetato de etilo
Reactivo de derivatizacin B: Solucin de 1 O mg/mL
de polietilenglicol 400 en cloruro de metileno
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para croma-
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada y
secar al aire (ver Cromatografa (621 >). Desarrollar los
cromatogramas en una camara saturada, retirar la
placa de la cmara y secar al aire. Calentar la placa a
1 05" durante 3 minutos, derivatizar la placa mientras
est tibia con Reactivo de derivatizacin A y secar al
aire. Luego derivatizar con Reactivo de derivatizacin B,
secar al aire y observar bajo luz UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar e presenta, en el tercio inferior, dos bandas
fluorescentes de color anaranjado amarillento que co-
rresponden a las bandas debidas a rutina e hipersido
en los cromatogramas de la Solucin estndar A y la
Solucin estndar B, respectivamente; una banda fluores-
cente de color azul directamente por debajo de la
banda debida a hipersido, correspondiente a cido
clorognico; y dos bandas fluorescentes de color rojo
debidas a pseudohipericina (RF inferior) e hipericina en
el tercio superior del cromatograma. Las bandas debi-
das a pseudohipericina e hipericina estn claramente
separadas.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas: dos bandas
fluorescentes de color anaranjado amarillento a un RF
correspondiente a las bandas de rutina e hipersido en
los cromatogramas de la Solucin estndar A, la Solucin
estndar By la Solucin estndar C; una banda fluores-
cente de color azul directamente por debajo de la
banda debida a hipersido, correspondiente a la banda
de cido clorognico en el cromatograma de la Solucin
estndar C; dos bandas fluorescentes de color rojo a un
RF correspondiente a las bandas de pseudohipericina e
hipericina en el cromatograma de la Solucin estndar
C; y de dos a tres bandas fluorescentes de color anaran-
jado amarillento en el tercio medio del cromatograma
correspondientes a bandas similares en el cromato-
grama de la Solucin estndar C.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE HIPERICINA Y PSEUDOHIPERICINA
[NOTA-Realizar todas las preparaciones de la muestra
con una exposicin mnima a luz tenue y usar material
de vidrio con proteccin actnica para proteger las solu-
ciones de la luz.]
Disolvente: ry1etanol y acetona (1 :1)
Solucin A: Acido fosfrico y agua (3:997)
Solucin B: Acetonitrilo
Solucin C: Metanol
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A ! Solucin B Solucin C
(min) (%) (O/o) (O/o)
o 100 o o
10 85 15 o pseudohipericina sumando los porcentajes
30 70 20 10
40 10 7'> 15
55 5 r------ -
fill_ 15
56 100 o o
66 100 --- --
o o- -
Suplementos Dietticos / San luan 6645
Solucin estndar A: 2,5 g/mL de ER Oxibenzona
USP en Disolvente
Solucin estndar B: 1 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de Hierba de San juan 1JSP Pn Dirnlvente
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo 1 O g de
Hierba de San juan. Transferir 1 g a un matraz de fondo
redondo equipado con un condensador y protegido de
la luz, agregar 50 mL de Disolvente y una barra mezcla-
dora magnetica, y calentar a 60c durante 2 horas,
mientras se mezcla. Enfriar a temperatura ambiente y
pasar a travs de un papel de filtro a un matraz volu-
mtrico de 50 ml. Lavar el matraz y el residuo en el
filtro con Disolvente y diluir con los lavados a volumen.
Pasar la solucin a travs de un filtro de membrana de
tefln con un tamao de poro de 0,45 m o menor y
usar el filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm y Vis 588 nm
Columnas
Guarda columna: Relleno L1
Columna analtica: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L. [NOTA-Primero, equili-
brar el sistema con Solucin A al 1 00%.]
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A (registrar las respuestas
de los picos a 270 nm) y Solucin estndar B (registrar
las respuestas de los picos a 270 nm y 588 nm)
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: Los cromatogra-
mas de la Solucin estndar B son similares a los cro-
matogramas de referencia respectivos provistos con el
lote de ER Extracto en Polvo de Hierba de San Juan
USP usado.
Eficiencia de la columna: No menos de 1 00 000 pla-
tos tericos para oxibenzona, Solucin estndar A
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para oxiben-
zona, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
cin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A y Solucin muestra
Medir las reas de los picos pertinentes a 270 nm en
el cromatograma de la Solucin muestra.
Calcular por separado el porcentaje de hipericina
(CioH160s) y pseudohipericina (C10H1609) en la por-
cin de Hierba de San Juan tomada:
Resultado= (ru/rs) x Cs x (V/W) x (1 /F) x 100
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
r, = rea del pico de oxibenzona de la Solucin
estndar A
C = concentracin de ER Oxibenzona USP en la
Solucin estndar A (mg/ml)
V = volumen de Solucin muestra (ml)
W = peso de Hierba de San Juan tomada para
preparar la Solucin muestra (mg)
F = factor de respuesta relativa para el analito
pertinente con respecto a oxibenzona,
1, 30 para hipericina y 1,24 para
pseudohipericina
Calcular el total combinado de hipericina y
correspondientes, segn se calcularon anteriormente.
Criterios de aceptacin: No menos de 0,04% con res-
pecto a la materia seca
CONTENIDO DE HIPERFORINA
Anlisis: Usando los cromatogramas obtenidos en la
prueba de Contenido de Hipericina y Pseudohipericina,

calcular el porcPntaje de hiperforina (C \',H',)Od en la
porcin d0 HicrbJ de SJn Juun tomada:
r ( Vi V\!) ( 1/ f) < 100
r,, _ a rea JL'.i picu Je liiperfur ina de la Soiucin
m1wstm
r, = area del pico de oxibenzona de la Solucin
estndar A
C = concentracin de ER Oxibenzona USP en la
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Hierba de San juan tomada para
preparar la Solucin muestra (mg)
F = factor de respuesta relativa para hiperforina
con respecto a oxibenzona, 0,46
Criterios de aceptacin: No menos de 0,6% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 10 4 ufc/g; y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 2 ufc/g. , Muestra: 1,0 g de Hierba de Sa11 juan reducida a polvo
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS EPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas _pa_ra de_terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a coli, y la ausen-
cia de Staphylococcus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: El tallo de borde doble es amarillo ver-
doso, redondeado y posee dos mrgenes laterales que
discurren longitudinalmente e,n _lados opuestos. La
planta tiene hojas opuestas, sesiles, ov01de_s o ala~gadas,
de hasta 3,5 cm de longitud, con bordes lisos y sin pe-
los y con perforaciones translcidas. Las flores s<;in muy
numerosas, amarillas, de pedunculo corto, pentameras
y forman falsas umbelas de forma similar a los racimos
de uva. Los cinco spalos lanceolad_os y con puntos ne-
grm tiene11 ap1oxirnadamente a mitad de la _longitud
de los ptalos. Los ptalos son de color amarillo oscur.o
y tienen forma de valos sesgados y bordes que termi-
nan en glndulas de color rojo oscuro. Los numerosos
estambres se agrupan en tres a seis haces (por lo gene-
ral tres). El ovario est coronado con tr~s estilos ..Algu-
nos ovarios ya se han desarrollado en capsulas triovula-
res ovales alargadas y verdosas con d_iferentes grados de
madurez. Cuando se muele, el material vegetal crudo se
distingue por las numerosas yemas florales de color
amarillo a 1narr11 amarillento y ptalos individuales con
glndulas de color rojo oscuro en los bordes. Los frag-
mentos de hojas de color verde claro a verde amarro-
nado, caracterizados por marcescenc1a plegada, parecen
punteados cuando se observan a trasluz. Los fragmen-
tos del tallo son huecos, de color amarillo verdoso a
marrn roJi?o y se distinguen por dos bordes
longitudinales. , . , .
Microscpicas: Los tallos poseen celulas ep1derm1cas
alargadas con paredes anticlinales de bordes rectos en
forma de rosario; cutcula lisa; frecuentes estomas para-
cticos con dos pequeas clulas epidrmicas adyacen-
tes; corteza de 5-6 hileras de colnquima; la estela (o
cilindro central) con un crecimiento secundario formado
por un anillo compactado de floema, c,on una extensa
rea de xilernri lignificad0 y pequeas areas de floema
intraxilar; mdula parenquimatosa, lignificada y pun- ,
teada en los tallos ms viejos; se pueden presentar glan-
dulas oleosas en la corteza y el tloema.
La superficie superior de la hoja posee clulas poligona-
les con paredes anticlinales, ligerame_nte rebordeadas
e11 lurma Je rosario y sinuosas; las celulas de la super-
USP 18
ficiP inf Prior son ms pequenas, con paredes anticlina-
ie:, rncs 011ciuiada;, co11 frecuentes estomas parac1t1cos
y a veces anomocticos; cutlcula lisa, ms gru~sa en la
>uf.Je' ficie suf..ier 101; ias ceiuias ep1aerm1cas ae _las ner-
vaduras. alargadas y con pc:ir0ci2' rPct~~,. o~r:F>.1onal
mente se disponen en forma de rosario. Lamrna co_n
una capa dorsiventral de clulas en empalizada; glan-
dulas oleosas grandes con la misma profundidad del
mesfilo esponjoso. La nervadura centra_I posee un. solo
haz colateral con un rea pequena de xrlema l1grnf1-
cado. No se encuentran tricomas ni oxalato de calcio.
El spalo de la, flor p~see caract~rst_icas similares a las
de la hoja. Petalo: celulas ep1derm1cas de paredes del-
gadas, alargadas y estrechas con paredes anticlinales
rectas en la superficie externa_y ondulada_s en la super-
ficie interna. Estambre: capa fibrosa l1gn1f1cada en la
pared de la antera; las clulas del fi~amento son alarga-
das, de paredes delgadas y con cut1cula estriada; gra-
nos de polen subprolados de aproximadamente 2~ m
de dimetro, con tres poros y una e~111a lisa. Ovario:
clulas poligonales pequeas con 9,landulas oleosas
subyacentes; testa de la semilla: celulas hexagonales
de color marrn de paredes gruesas .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(561 ): No ms de 2,0%
PRDIDA POR SECADO (731)
fino
Anlisis: Secar a 1 05 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 1 0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES .
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Almacenar en envases im-
permeables. Proteger de _la l~z y la humeda~. , .
ETIQUETADO: La etiqueta 111d1ca el nombre c1ent1f1co en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la glanta contenidas en el artculo.
EHNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Hipersido USP
ER Oxibenzona USP
ER Extracto en Polvo de Hierba de San juan USP
ER Rutina USP
Hierba de San Juan en Polvo
DEFINICIN
La Hierba de San juan en Polvo es Hierba de San juan redu-
cida a polvo fino o muy ino. Contiene no menos de
0,6% de hiperforina (Ci1H1)04) y no menos de 0,04% de
hipericina (C \OH 16 0s) y pseudoh1peric1na (C 10H"''J) com-
binadas, con respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. Cumple con los requi<>itos en PruPhOI hpenficos. Co-
racteristicas Botmcm.
8. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/rnL de ER Rutina USP en
metanol
Solucin estndar B: 0,5 mq/mL de ER Hipersido USP
en metanol
Solucin estndar C: 50 mg/ml de ER Extracto en
Polvo de Hierba de San juan USP en metano!. Someter
a ultrasonido durante 20 minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante transparente. . .
Solucin muestra: Someter a ultrasonido 1 g de Hierba
de San Juar 1 t>11 Polvo en 1O rnL de rnetanol durante
aproximadamente 20 minutos, centrifugar y usar el so-
brenadante transparente.
USP 38 Supll:'tlll:'nto<. [)ietptrm .1 <;an juan 664 7

Sistema cromatogrfico Tabla 1

Adsorbente: Mezcla de gel de silicc para cromatogra- -------,
Tiempo Solucin A Solucin B Solucin C j
fa con un tarnano promedio de particula de 5 pm {%) --1"(tl_
. {.rtlirrL (%) 1
(plJc~ pciJ HPTLC)
Volumen de aplicacin- I !11, Pn hnnrlns rlP R mm o 100 o o
Humedad relativa: Acondicionar la placa hasta una ' 10 ti5 i5 u
humedad relativa de aproximadamente 30%, usando 30 70 20 10
un dispositivo adecuado. . , . , 40 10 ----
75 15
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, ac1do ace- 55 5 80 15
tico glacial, cido frmico, agua y cloruro de metileno 56 100 o o
(1 O: 1,0: 1,0: 1, 1: 2,5)
Distancia de desarrollo: 6 crn 66 100 o o
Reactivo de derivatizacin A: Solucin de 5 rng/rnL Solucin estndar A: 2,5 pg/rnL de ER Oxibenzona
de difenilborinato de 2-arninoetilo en acetato de etilo USP en Disolvente
Reactivo de derivatizacin B: Solucin de 1 O rng/mL Solucin estndar B: 1 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de polietilenglicol 400 en cloruro de metileno de Hierba de San Juan USP en Disolvente
Anlisis Solucin muestra: Pesar 1 g de Hierba de San Juan en
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8, So- Polvo en un matraz de fondo redondo equipado con un
lucin estndar C y Solucin muestra condensador y protegido de la luz, agre~a_r 50 mL de
Aplicar las Muestras en bandas a una plac~ para croma- Disolvente y una barra mezcladora magnet1ca, Y. calentar
tografa en capa delgada de alta resoluc1on adecuada y a 60" durante 2 horas mientras se mezcla. Enfriar a
secar al aire (ver Cromato9raf1a (621 )). Desarrollar los temperatura ambient~ y pa_sar a travs de un papel de
cromatogramas en una camara saturada, retirar la filtro a un matraz volumetnco de 50 mL. Lavar el ma-
placa de la cmara y secar al aire. Calentar la placa a traz y el residuo en el filtro con Disolvente, y diluir con
105 durante 3 minutos, derivatizar la placa mientras los lavados a volumen. Pasar la solucin a travs de un
est tibia con el Reactivo de derivatizacin A y secar al filtro de membrana de tefln con un tamao de poro
aire. Luego derivatizar con el Reactivo de derivatizacin de 0,45 pm o menor y usar el filtrado.
B, secar al aire y observar bajo luz UV a 366 nm .. , Sistema cromato9rfico
Aptitud del sistema: El croma.togra~a de la Soluoon (Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
estndar e presenta, en el tercio inferior, dos bandas Modo: HPLC
fluorescentes de color anaranjado ama.rillento. quE'. ~o Detector: UV 270 nm y Vis 588 nm
rresponden a las bandas debidas a rutina e h1peros1do Columnas
en los cromatogramas de la Solucin estndar A y la Guarda columna: Relleno L1
Solucin estndar B, respectivamente; una ~anda fluores- Columna analtica: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
cente de color azul directamente por debajo de la Temperatura de la columna: 30
banda debida a hipersido, correspondiente a cid~
Velocidad de flujo: 1 mL/min . ..
clorognico; y dos bandas flumesce_ntes de_ col?~ rojo Volumen de inyeccin: 20 pL. [NOTA-Pnrnero, equili-
debidas a pseudohipericina (Rf inferior) e h1penc1na en brar el sistema con Solucin A al 100%.]
el tercio superior del crornatograma. Las bandas debi- Aptitud del sistema . . .
das a pseudohipericina e hipericina estn claramente Muestras: Solucin cstandar A (registrar las respuestas
separadas. de los picos a 270 nm) y Solucin estndar B (registrar
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- las respuestas de los picos a 270 nm y 588 nm)
cin muestra presenta las siguientes bandas: dos bandas Requisitos de aptitud
fluorescentes de color anaranjado amarillento a un Rf Similitud de los cromatogramas: Los cromatogra-
correspondiente a las bandas d~ rutin,a e hipersido ~~ mas de la Solucin estndar B son similares a los cro-
los cromatogramas de la Solucion estandar A, la Soluc1on matogramas de referencia respectivos provistos con el
estndar By la Solucin estndar C; una ba~da fluores- lote de ER Extracto en Polvo de Hierba de San Juan
cente de color azul directamente por debajo de la USP usado.
banda debida a hipersido, correspondiente a la band? Eficiencia de la columna: No menos de 1 00 000 pla-
de cido clorognico en el cromatograma de la ~olucton tos tericos para oxibenzona
estndar C- dos bandas fluorescentes de color rojo a un Factor de asimetra: No ms de 1,5 para oxibenzona
Rf correspndiente a las bandas de pseudohiperic_ina e Desviacin estndar relativa: No mas de 2,0%, Solu-
hipericina en el cromatograma de la Soluoon estandar cin estndar A
C; y de dos a tres bandas fluorescentes de color anaran- Anlisis
jado amarillento en el tercio. medio del cromatograma Muestras: Solucin estndar A y Solucin muestra
correspondientes a bandas similares en el cromato- Medir las reas de los picos pertinentes a 2 70 nm en
grama de la Solucin estndar C. el cromatograma de la Solucin muestra.
COMPOSICIN Calcular por separado el porcentaje de hipericina
CONTENIDO DE HIPERlClNA Y PSEUDOHlPERlCINA (CuH ;,,0 8 ) y pseudohipericina (CoH1 09) en la por-
[NOTA-Realizar todas las preparaciones de la muestra. cin de Hie1 ba ele San Juan en Polvo tornada:
con una exposicin rn~nima ? .luz tenue y usar material
de vidrio con protecc1on act1111ca para proteger las solu- Resultado= (ru/r1) XC X (V/W) X (l/F) X 100
ciones de la luz.]
Disolvente: Metano! y ctcetona (1: 1) ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
Solucin A: cido fosfrico y agua (3:997) ~ rea del pico de oxibenzona de la Solucin
Solucin B: Acetonitrilo estndar A
Solucin C: Metano! = rnncentracin de ER Oxibenzona USP en la
Fase movil: Ver la labia I. Solucin estandar A (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (rnL)
= peso de Hierba de Sdn juctn en Polvu Lorndda
para prepdrdr la Solution muestra (mg)
6648 'lan juan / Suplementos Dietticos
F = factor de respuesta relativa para el analito
pertinente con respecto a 'oxibenzona,
1, 30 para hipericina y l ,24 para
p~cudohipcric.i:~J
Criterios de aceptacin: Nn mPnm rle 0,04% con res-
pecto a la materia seca
CONTENIDO DE HIPERFORINA
Anlisis: Usando los cromatogramas obtenidos en la
prueba de Contenido de Hipericina y Pseudohipericina,
calcular el porcentaje de hiperforina (CisHs24) en la
porcin de Hierba de San Juan en Polvo tomada:
Resultado = (ru! r1) X e X (V/ W) X (1 / F)
ru = rea del pico de hiperforina de la Solucin
muestra
r1 = rea del pico de oxibenzona de la Solucion
estndar A
C = concentracin de ER Ox1benzona USP en la
Solucion estndar A (mg/mL)
V = volumen de Solucin muestra (mL)
W = peso de Hierba de San Juan en Polvo tomada
para preparar la Solucin muestra (mg)
F = factor de respuesta relativa para hiperforina
con respecto a oxibenzona, 0,46
Criterios de aceptacin: No menos de 0,6% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS (231): ,No ms ,de 20 g/g ' Solucin estndar C: 50 mg/mL de ER Extracto en
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Metodo General para Ana-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 10 4 ufc/g y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 2 ufc/g. , transparente.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli, y para la
ausencia de Staphylococcus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Polvo beige a marrn verdoso con olor
aromtico y balsmico
Microscpicas: Clulas epidrmicas alargadas y poligo
nales con paredes anticlinales engrosadas y en forma de
rosario, algunas acompaadas de estomas paracticos
(ocasionalmente, anomocticos); fragmentos de hojas y
spalos con glndulas esquizgenas de pigmento y
aceite; clulas epidrmicas de los ptalos alargadas, an-
gostas y de paredes delgadas, con paredes anticlinales
rectas y onduladas; vasos angostos y lignificados con
engrosamiento anillado o reticulado; traqueidas y vasos
traqueales con engrosamiento lignificado y puntuacio-
nes; fibras lignificadas de paredes gruesas con pices
ahusados y algunas puntuaciones oblicuas; parnquima
lignificado y rectangular con puntuaciones; capa fibrosa
de la pared antera!; granos de polen, de 20 25 m de
dimetro, con una exina lisa.
PRDIDA POR SECADO (731 /
Muestra: 1,0 g de Hierba de San Juan en Polvo
Anlisis: Secar la Muestra a 105' durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin~ No ms de 1 0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 /:
No ms de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz y de la humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta ir1cJica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la planta de las que se obtuvo el artculo.
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP fl l \
ER HiperfoicJo USP
ER Oxibenzona USP
ER [xtractv er 1 Pvlvv Je Hier Ud Je Scill judr l USP
!::R Rutina USP
Extracto en Polvo de Hierba de San
Juan
X 1 00
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Hierba de San Juan se prepara a
partir de Hierba de San Juan triturada, extra1da con meta-
no! al 80% u otros disolventes adecuados. Contiene no
menos de 90,0% y no ms de 110,0% del total combi-
nado declarado de hipericina (CioH16s) y pseudohipe-
ricina (CrnH1G9), y no menos de 90,0% y no ms de
110,0% de hiperforina (CisHs20.1), con respecto a la ma-
teria seca.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Rutina USP en
metanol
Solucin estndar B: 0,5 rng/mL de ER Hipersido USP
en metano!
Polvo de Hierba de San Juan USP en metano!. Someter
a ultrasonido durante 20 minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante transparente.
Solucin muestra: 50 mg/mL de Extracto en Polvo de
Hierba de San Juan en metano!. Someter a ultrasonido
durante 20 minutos, centrifugar y usar el sobrenadante
Sistema cromato9rfico
(Ver CromatograflO (621/, Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao promedio de part1cula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 2 L, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa hasta una
humedad relativa de aproximadamente 30%, usando
un dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, cido ac-
tico glacial, cido frmico, agua y cloruro de metileno
(1 O: 1,0: 1,0: 1, 1: 2,5)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin A: Solucin de 5 mg/mL
de difenilborinato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Reactivo de derivatizacin B: Solucin de 1 O mg/mL
de polietilenglicol 400 en cloruro de metileno
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las muestras en bandas a una placa para croma-
tografa en capa delgada de alta resolucin adecuada y
secar al aire. Desarrollar los cromatogramas en una c-
mara saturada, retirar la placa de la cmara y secar al
aire. Calentar la placa a 105' durante 3 minutos, deri-
vatizar la placa mientras est tibia con Reactivo de deri-
vatizacin A y secar al aire. Luego derivatizar con Reac-
tivo de derivatizacin B, secar al aire y observar bajo luz
UV a 366 nm.
Aptitud del sistema: El cromatograma de la Solucin
estndar c presenta, en el tercio inferior, dos bandas
fluorescentes de color anaranjado amarillento que co-
rresponden a las bandas dehida<> a rutina e hipersido
en los cromatogramas de la Solucin estndar A y la
Solucin estndar B, respectivamente; una banda fluores-
cente de color azul directamente por debajo de la
banda debida a hipersido, correspondiente a cido
 usr 38 Suplementos Dietticos / San juan 6649

cloro9r1iL; y dos bandas fluorescentes de color rojo

debidas a pseudohipericina (Rr inferior) e hipericina en
el tercio superior del cromatoqrama. Las bandas debi-
r-
1
Tiempo 1 Solucin A J
Tabla 1 (Cnnlinuacion)
Solucin B j Solucin C
_ __L___ cr..1 _
J
das a pseudohipericina e hipericina estan claramente
separadas.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
L-
~ ___
(mln)
J_Q.
_1Q __
r <% >
70
10
_ __ , _ _
{%)
."-2"------+1__._:_:l"---___,
l':J ' 15
1

cin muestra presenta las siguientes bandas: dos bandas
fluorescentes de color anaranjado amarillento a un R1
correspondiente a las bandas de rutina e hipersido en
los cromatogramas de la Solucin estndar A, la Solucin
estndar By la Solucin estndar C; una banda fluores-
cente de color azul directamente por debajo de la
banda debida a hipersido, correspondiente a la banda
de cido clorognico en el cromatograma de la Solucin
estndar C; dos bandas fluorescentes de color rojo a un
R, correspondiente a las bandas de pseudohipericina e
hipericina en el cromatograma de la Solucin estndar
C; y de dos a tres bandas fluorescentes de color anaran-
jado amarillento en el tercio medio del cromatograma
correspondientes a bandas similares en el cromato-
grama de la Solucin estndar C. , (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
8. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Presencia de hiperforina
Solucin estndar: 50 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hierba de San juan USP en metano!. Someter a
ultrasonido durante 20 minutos y usar el sobrenadante
transparente.
Solucin muestra: 50 mg/mL de Extracto en Polvo de
Hierba de San juan en metano!. Someter a ultrasonido
durante 20 minutos y usar el sobrenadante
transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para
cromatografa de 0,50 mm
Volumen de !Plicacin: 1 O L
Fase mvil: Eter de petrleo y acetato de etilo (4:1)
Solucin reveladora: Preparar una solucin que con-
tenga 0,38 g de sulfato crico amnico y 3,8 g de
molibdato de amonio en 1 00 mL de cido sulfrico
2 N.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas en una cmara saturada
hasta que el frente de la fase mvil haya recorrido no
menos de 1 8 cm y secar la placa con ayuda de una
corriente de aire. Rociar la placa con Solucin revela-
dora, calentar la placa a 140 durante 15 minutos y
observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: La zona azul debida a hiperfo-
rina a un valor R1 de aproximadamente 0,54 en el cro-
matograma de la Solucin muestra corresponde en color
y valor Rr a la del cromatograma de la Solucin
estndar.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE HIPERICINA Y PSEUDOHIPERICINA
(NOTA-Realizar todas las preparaciones de la muestra
con una exposicin mnima a luz tenue y usar material
de vidrio con proteccin actnica para proteger las solu-
ciones de la luz.]
Disolvente: ty1etanol y acetona (1 :1)
Solucin A: Acido fosfrico y agua (3:997)
Solucin B: Acetonitrilo
Solucin C: Metano!
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
-------------
Tiempo Solucin A Solucin B
lmin) 1/o) 1%)
'
55 5 80 15
56 100 o o
66 100 o o
Solucin estndar A: 2,5 g/mL de ER Oxibenzona
USP en Disolvente
Solucin estndar B: 1 mg/mL de ER Extracto en Polvo
de Hierba de San juan USP en Disolvente
Solucin muestra: 1 mg/mL de Extracto en Polvo en
una mezcla de metano! y agua (9: 1 ). Someter a ultraso-
nido hasta disolver, pasar a travs de un filtro de mem-
brana de tefln con un tamao de poro de 0,45 m o
menor y usar el filtrado.
Sistema cromato9rfico
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm y Vis 588 nm
Columnas
Guarda columna: Relleno L1
Columna analtica: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L. [NOTA-Primero, equili-
brar el sistema con Solucin A al 100%.]
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A (registrar las respuestas
de los picos a 270 nm) y Solucin estndar B (registrar
las respuestas de los picos a 270 y a 588 nm)
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: Los cromatogra-
mas de la Solucin estndar B son similares a los cro-
matogramas de referencia respectivos provistos con el
lote de ER Extracto en Polvo de Hierba de San juan
USP usado.
Eficiencia de la columna: No menos de 100 000 pla-
tos tericos para oxibenzona, Solucin estndar A
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para oxiben-
zona, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
cin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A y Solucin muestra
Medir las reas de los picos pertinentes a 270 nm en
el cromatograma de la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de hi-
pericina (CJOH1r,08) y pseudohipericina (C10H1609) en
la porcin de Extracto en Polvo tomada:
Resultado = (IJur / F,) x (1 / rs) x ( C/ Cu) x 1 00
L.ru, /f. = suma de las reas de los picos de hipericina y
pseudohipericina de la Solucin muestra
dividida por sus factores de respuesta relativa
con respecto a oxibenzona, 1,30 para
hipericina y 1,24 para pseudohipericina
r1 = rea del pico de oxibenzona de la Solucin
estndar A
C1 = concentracin de ER Oxibenzona USP en la
Solucion estandar A (mg/mL)
e ~
concentracin nominal del contenido total de
hipericinas en la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-11 0,0% con respecto
a la materia seca
CONTENIDO DE HIPERFORINA
Anlisis: u~ando los cromatogramas obtenidos en la
Solucin C prueba de Contenido de Hipericina y Pseudohipericina,
{/o\

_________ __ ~~------+- 100 - - f--- o o

10 85 15 o
6650 San ]lliln / Sup!PmPntos Dietticos USP 38

calcular t>I porcentaje de hiperforina (C "H.,,Q4) en la n--3), como el cicio graso poliinsaturado principal. Se
porcin de ExtrJcto en rol~o tomada: uederr agregar antioxidantes adecuados en concentracio-
nes apropiadas.
(r /r 1 (C./C.) (1 .'F) < 100
'. "' ' -'/
IDENTIFICACIN
ru = J1 ea Jel f-JiLo Je liierforina de la Solucin PERFIL DE CIDO GRASO INSATURADO DE CADENA LARGA:
muestra Proceder segn se indica en Composicin, Contenido de
rs = rea del pico de oxibenzona de la Solucin DHA.
Pstndar A Anlisis
C concentracin de ER Oxibenzona USP en la
= Muestras: Solucin Estndar 2 y Solucin de Prueba
Solucin estndar A (mg/mL) Calcular el porcentaje de rea de cada cido graso
Cu = concentracin nominal de hiperforina en la como ster metlico en la Solucin de Prueba 7:
Solucin muestra (mg/mL)
F ~ factor de respuesta relativa para hiperforina Resultado = (ru/r1) x 100
con respecto a oxibenzona, 0,46
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% con respecto ru respuesta del pico de cada cido graso
=
a la matt>ria seca individual como ster metlico
r1 = suma de las respuestas de todos los picos,
CONTAMINANTES excepto los picos del disolvente y butil
hidroxitolueno
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de
Eliminar lo siguiente: los picos de ster metlico del cido docosahexaenoico
y ster metlico del cido eicosapentaenoico de la Solu-
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de 50 g/ cin de Prueba 7 corresponden a los de la Solucin Es-
g (;Jficial Ol-dic-2015) tndar 2, segn se obtienen en la prueba de Contenido
ARTICULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An- de EPA y DHA. El porcentaje de rea para los steres
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los metlicos de los cidos grasos del cromatograma de la
requisitos. Solucin de Prueba 1 en la prueba de Contenido de EPA y
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to- DHA cumple con los requisitos para cada cido graso
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g y el recuento total presentado en la tabla siguiente.
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- Lmite Lmite
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la Tiempo Anota- Infer- Supe-
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli. de cin or rior
cido Retencin Abrevia- (%de (%de
PRUEBAS ESPECFICAS Graso Relativo da rea) rea)
DET~RMINACIN DE AGUA, ryttodo I (921 ): No ms de 5% cido
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561): dihomo-
No ms de 7,0% gamma
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Extractos linolnicu o 71 20:3 n 6 17 28
Botnicos (565), Residuo de Evaporacin y Disolventes cido araqui-
Residuales. _QLL_ - -
20:4 ____M_ ___ ~_l_,]_
_ dnico_____ --- - n-6
--
Acido eicosa-
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- pentaenoico
permeables. Proteger de la luz y de la humedad. (EPA) o 79 20:5 n-3 13 39
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en cido docosa-
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la pentaenoico
planta a partir de la que se prepar el artculo. La eti- (DPA n-6) _______Q,_'!1_ 22:5 n-6 1o 5 16 5
queta tambin indica el contenido de hipericina, pseudo- cido docosa-
hipericina e hiperforina; el disolvente o mezcla de disol- hexaenoico
ventes de extraccin usados para la preparacin; y la (DHA) 1 00 22:6 n-3 30 o 40 o
relacin entre el material vegetal crudo inicial y el Ex-
tracto en Polvo. La etiqueta lleva una leyenda que indica
COMPOSICIN
que "Se conocen algunos casos poco comunes de reac-
CONTENIDO DE DHA
ciones alrgicas y fotosensibilidad con el uso de la Hierba
de San juan. La Hierba de San juan interacciona con nu- Anlisis: Proceder segn se indica en,_ Grasas y Aceites
Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de Acidos Grasos
merosos medicamentos. Consultar con un profesional de
la salud antes de usar." Omega-3.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP 11)
Criterios de aceptacin: No menos de 30,0% (p/p) de
ER Hipersido USP cido docosahexaenoico (DHA)
tR Oxibenzona USP IMPUREZAS
ER Extracto en Polvo de Hierba de San juan USP Impurezas Inorgnicas
ER Rutina USP LIMITE DE ARSENICO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
Aceite de Schizochytrium cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de arsnico tan
DEFINICIN ba10 como sea posible y almacenar todas las soluciones
El Aceite de Schizochytrium se obtiene mediante la fermen- reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
tacin y extraccin de algas del gnero Schizochytrium y los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
contiene no menos de 30,0% (p/p) de cido docosahe-
xaenoico (DHA, por sus siglas en ingls, C22Hi22) (C22:6
USP 38
rPmoj;rnrlo Pn cirlo ntrico 8 N tibio durantp 30 minu-
l'> y enjUdlJdllU Ll1 dlJUd Je;io11iLdUd.]
Solucin A: Transferir 1 g de metal de paladio ultra
fJUIO d un vaso de precipitados de tefln. Agregd1
20 ml de agua y 1 O ml de ac1do nitrico, " entibiar
sobre una placa de calentamiento hasta disolver. Dejar
que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumetrico de 100 ml, y diluir
con ~$lua desionizad.a a volumen.
Soluc1on B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de cido ntrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
Dejar q~e la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumtrico de 100 ml, y diluir
con $JU desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin B y cido ntrico al 2%
(3:2:5). Un volumen de 5 L proporciona 0,015 mg de
paladio y, 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1 :19)
Solucin madre del estndar: Transferir 10,0 ml de
Solucin Estndar de Arsnico, preparada se$)n se in-
dica en Arsnico (211 ), a un matraz volumetrico de
1 00 ml. Agregar 40 ml. de agua y 5 ml. de cido n-
trico, y diluir con agua a volumen. Esta solucin con-
tiene O, 1 O g/ml de arsnico.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/ml. de arsnico.
Solucin muestra: Para preparar la Solucin muestra,
usar un horno de microondas con una frecuencia del
magnetrn de 2455 MHz y una potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %,
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimientos internos de tefln de 100 ml. Usar
membranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
sin excede de 125 psi. Los vasos encajan en un plato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
de desbordamiento. Equipar el horno de microondas
con un tubo de es,cape para permit; el escape de los
humos. [PRECAUCION-Usar proteccion adecuada para
los ojos adems de ropa y guantes protectores.] Trans-
ferir aproximadamente 500 mg de Aceite de Schizochy-
trium, pesados con una aproximacin de O, 1 mg, a un
vaso de digestin con recubrimiento interno de tefln.
Preparar las muestras por duplicado. Agregar 15 ml de
cido ntrico y agitar por rotacin suave. Cubrir los va-
sos con tapas dejando fuera el accesorio de ventilacin.
Digerir previamente durante toda la noche bajo una
campana. Colocar la membrana de ruptura en el acce-
sorio de ventilacin y ajustar la tapa. Colocar todos los
vasos en el plato giratorio del horno de microondas.
Conectar los tubos de escape a la trampa de ventila-
cin y conectar la lnea del sensor de presin al vaso
apropiado. Iniciar un procedimiento de digestin de
dos etapas calentando el microondas con una potencia
del 15% durante 1 5 minutos, seguida de una potencia
del 25% durante 45 minutos. Retirar el plato giratorio
con los vasos del horno y dejar que los vasos se enfren
a temperatura ambiente. [NOTA-Se puede usar un
bao de agua fresca para acelerar el proceso de enfria-
miento.] Ventilar los vasos cuando alcancen la tempera-
tura ambiente. Retirar las tapas y agregar lentamente
2 ml de perxido de hidrgeno al 30% a cada uno.
Dejar que las reacciones cesen y sellar los vasos. Volver
a colocar los vasos en el plato giratorio del horno de
microondas y calentar durante 1 5 minutos adicionales
a una potencia del 30%. Retirar los vasos del horno y
dejar que se enfren a temperatura ambiente. Transferir
los digeridos enfriados a matraces volumtricos de
25 ml y diluir con agua a volumen.
Anlisis: Programar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 115 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argn de 300 ml/min. Carbonizar
Suplcrncntos Dietticos / Schizochytrium 6651
la m11Pstra a l 000 usando una rampa de 1 segundo,
u11 lie111po de e>fJeld de 20 >elJU!luos y un flujo de aire
de 300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una tempEatura ajustada a
20 y un flujo de arqn de 300 ml/min. Atomizar a
2400 usando una rampa de O segundos y un tiempo
de espera de 5 segundos con el flujo de argn dete-
nido, y limpiar a 2600 con una rampa de 1 segundo y
un tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 L) de las Soluciones estan-
dar, de la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 L de la Solucin C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para arsnico. Determinar el rea del pico en la lnea
de emisin de arsnico a 193,7 nm, corregida por la
absorcin de fondo. Graficar las reas de los picos co-
rregidas de las Soluciones estndar en funcin de sus
contenidos de arsnico, en g/ml, y calcular la lnea
de regresin que mejor se ajuste a los puntos. Determi-
nar la concentracin, C, en g/ml, de arsnico en cada
ml de la Solucin muestra interpolando a partir de la
lnea de regresin.
Calcular el contenido de arsnico en la porcin de
Aceite de Schizochytrium tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin segn se obtuvo anteriormente
W = peso de Aceite de Schizochytrium tomado
para preparar la Solucin muestra (g)
,Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los ~e
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solucin A: 1 O g de fosfato monobsico de amonio ul-
tra puro en 1 ml de cido ntrico y 40 ml de agua
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 ml.
Solucin B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
40 ml de agua y 1 ml de cido ntrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumtrico de 1 00 ml, y diluir
con il$)Ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin By cido ntrico al 2%
(2:1 :2). Un volumen de 5 L. proporciona 0,2 mg de
fosfato m,s 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1: 19)
Solucin madre del estndar: Transferir 1 0,0 ml de
Solucin Madre de Nitrato de Plomo, preparada segn se
indica en Metales Pesados (231 ), a un matraz volum-
trico de 1 00 ml, agregar 40 ml de agua y 5 ml de
cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Transferir
1,0 ml. de esta solucin a un segundo matraz volum-
trico de 100 ml, agregar 50 ml de agua y 1 ml de
cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
cin contiene O, 1 O g/ml de plomo.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/ml de plomo.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lrnite de Arsnico.
6652 Schi7ochytrium / Suplementos Dietticos
Anlisis: Proqramar el horno de grafito segn se indica
a continuacin. Sec.ir J 120 usando una rampa de 1
'egundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un f!ujo de argn de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20 y
un flujo de argn de 300 mL/min. Atomizar a 2100
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido, y
limpiar a 2600n con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 L) de las Soluciones estn-
dar, de la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 L de la Solucin C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para plomo. Determinar el rea del pico en la lnea de
emisin de plomo a 283,3 nm, corregida por la absor-
cin de fondo. Graficar las reas de los picos corregidas
de las Soluciones estndar en funcin de sus contenidos
de plomo, en ~g/mL, y calcular la lnea d.e regresin
que me1or se a1uste a los puntos. Determinar la con-
centracin, C, en g/mL, de plomo en cada mL de la
Solucin muestra interpolando a partir de la lnea de
regresin.
Calcular el contenido de plomo en la porcin de
Aceite de Schizochytrium tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin, segn se obtuvo
anteriormente
W = peso de Aceite de Schizochytrium tomado
para preparar la Solucin muestra (g)
,Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inirn de lecho mixto, de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solucin A: 1 O g de fosfato monobsico de amonio ul-
tra puro en 40 mL de agua y 1 mL de cido ntrico
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 1 00 mL.
Solucin B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
40 mL de agua y 1 mL de cido ntrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumtrico de 100 ml, y diluir
con a~ua desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin By cido ntrico al 2%
a volumen (2:1 :2). Un volumen de 5 L proporciona
0,2 mg d,e fosfato y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1 :19)
Solucin madre del estndar A: O, 1 372 mg/mL de ni-
trato de cadmio
Solucin madre del estndar B: Solucin madre del es-
lndw A, cido ntrico y agua (2: 1 :97). Esta solucin
contiene O, 1 O ~tg/mL de cadmio. [NOTA-Antes de lle-
var a volumen final, disolver en una porcin de agua y
cido ntrico.]
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
B con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/mL de cadmio.
USP 38
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
rnue;lru en la prueba de Lmite de Arsnico.
Anlisis_: Programar el horno de grafito segn se indica
a cont1nuduu11. Seca1 a 120 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 mL/min. Carbonizar
la muestra a 850n usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20 y
un flujo de argn de 300 ml/min. Atomizar a 2400
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido, y
limpiar a 2600 con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 L) de las Soluciones estn-
dar, de la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 L de la Solucin C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para cadmio. Determinar el rea del pico en la lnea de
emisin de cadmio a 228,8 nm, corregida por la absor-
cin de fondo. Graficar las reas de los picos corregidas
de las Soluciones estndar en funcin de sus contenidos
de cadmio, en g/mL, y calcular la lnea de regresin
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con-
centracin, C, en pg/mL, de cadmio en cada ml de la
Solucin muestra interpolando a partir de la lnea de
regresin.
Calcular el contenido de cadmio en la porcin de
Aceite de Schizochytrium tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin, segn se obtuvo
anteriormente
W = peso de Aceite de Schizochytrium tomado
para preparar la Solucin muestra (g)
,Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE MERCURIO
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico, combi-
nando los dos digeridos enfriados duplicados en 1,0 mL
de Solucin de Perman9anato de Potasio (ver Mercurio
(261 ), Mtodo /la y Metodo /lb, Reactivos).
Anlisis: Proceder segn se indica en Mercurio (261),
Mtodo /la y Mtodo /lb, excepto que se debe usar una
Solucin Estndar de Mercurio con el equivalente a
O, 1 g/mL de mercurio.
Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
PRUEBAS ESPECFICAS
GRASAS y ACEITES FIJOS, ndice de Anisidina (401): No ms
de 20,0 ,
GRASAS y ACEITES FIJOS, Acidos Grasos Libres (401 ): Los
cidos grasos libres en 1 O g requieren para su neutraliza-
cin no ms de 1,42 m~ de hidrxido de sodio O, 1 N.
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401): No ms
de 5,0 ,
GRASAS Y ACEITES FIJOS, Indice de Oxidacin Total (TOTOX)
(401): No ms de 26, calculado:
Resultado = (2 x PV) + AV
PV = ndice de perxido
AV = indice de anisidina
GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401 ): No
ms de 4,5%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y evitar la exposicin al
calor excesivo.
USP 38 )u 1lt->1nt"ntm Dit"tt'tf(OS / Schizochytrium 665 3

ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de cido do-
cosahexaenoico en mg/g. Tambin indica el nombre y la
CO)Centracin de cualquier antioxidante agregado.
ESTA~DARES DE REFER~NCIA USP \ 11)
ER bter Etlico del Acidu Ducu,dhexaenoico USP
ER ster Etlico del cido Eicosapentaenoico USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Aceite de Schizochytrium, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Aceite de Schizochytrium se preparan a par-
tir de Aceite de Schizochytrium y contienen no menos de
95,0% y no ms de 105,0% de la cantidad declarada de
cido docosahexaenoico (DHA, por sus siglas en ingls;
C22Hi202) (C22:6 n-3).
IDENTIFICACIN
PERFIL DE CIDO GRASO INSATURADO DE CADENA LARGA:
Proceder segn se indica en Contenido, Contenido de
DHA.
Anlisis
Muestras: Solucin Estndar 2 y Solucin de Prueba 7
Calcular el porcentaje de rea de cada cido graso
como ster metlico en la Solucin de Prueba 7:
terial de la cubierta, y transferir el contenido
combinado de las Lapsulas a un vaso de precipitados
de 1 00 mL. Retirar cualquier sustancia adherida a las cu-
biertas de ias Cpsulas vacas iavando con v<lrids purciu-
ne' pequea5 de isooctano. DP5Pchar los lavados y de-
jar que las cubiertas de las Cpsulas se sequen en una
corriente de aire seco hasta que se haya evaporado por
completo el isooctano. Pesar las cubiertas de las Cpsu-
las vacas en el frasco de pesada tarado original y calcu-
lar el peso de llenado promedio (AFW, por sus siglas en
ingls) de aceite de schizochytrium en cada Cpsula.
Proceder con el contenido de las Cpsulas segun se in-
dica en el Anlisis.
Anlisis: Proceder segn se indica el) Grasas y Aceites
Fijos (401 ), Determinacin y Perfil de Acidos Grasos
Omega-3, Contenido de EPA y DHA.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cido
docosahexaenoico (DHA) en las Cpsulas tomadas:
Resultado= R x AFW/L
R = porcentaje de DHA en la porcin de aceite
tomada de las Cpsulas
AFW = peso de llenado promedio de las Cpsulas
tomadas (mg)
L = cantidad declarada de DHA (mg/Cpsula)
Criterios de aceptacin: No menos de 95,0% y no
ms de 1 05,0% de la cantidad declarada de DHA

Resultado = (ru/rT) x 1 00 PRUEBAS DE DESEMPEO

DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
ru = respuesta del pico de cada cido graso (2040): Cumplen con los requisitos de la Prueba de Rup-
individual como ster metlico tura para Cpsulas Blandas. ,
rT = suma de las respuesta de todos los picos, VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
excepto por los picos del disolvente y butil Cumplen con los requisitos.
hidroxitolueno IMPUREZAS
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de
los picos de ster metlico del cido docosahexaenoico
Impurezas Inorgnicas
LIMITE DE ARSENICO
y del ster metlico del cido eicosapentaenoico de la [NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
Solucin de Prueba 7 corresponden a los de la Solucin
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
Estndar 2, segn se obtienen en la prueba de Conte-
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
nido de EPA y DHA. El porcentaje de rea para los ste-
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
res metlicos de los cidos grasos del cromatograma de cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
la Solucin de Prueba 7 en la prueba de Contenido de activos para que tengan un contenido de arsnico tan
EPA y DHA cumplen con los requisitos para cada cido
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
graso presentado en la tabla siguiente. reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
Tiempo remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
de Anota- Lmite Lmite tos y enjuagando con agua desionizada.]
Reten- cin Inferior Superior Solucin A: Transferir 1 g de metal de paladio ultra
cido cin Abrevia- (%de (%de puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
Graso Relativo da rea) rea) 20 ml de agua y 1 O mL de cido ntrico, y entibiar
cido diho- sobre una placa de calentamiento hasta disolver. Dejar
mogamma que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
linolnico o 71 20:3 n-6 1 7 28 transferirla a un matraz volumetrico de 100 ml, y diluir
cido araqui- con agua desionizada a volumen.
dnico __Q,_u___ ___ 20:4 n-6 06 1 3 Solucion B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
cido eirosa- puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
40 mL de agua y 1 ml de cido ntrico, y entibiar sobre
pentaeno~
!EPA) _ _()_2')___ ~:5 n-3 1 3 39 una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,

A"do dom>~t-:
pentaeno1co
IDPA n-6) _(L94 - -
_22_5_n-6 _ JQL5 . _1,_.5___
transferirla a un matraz volumtrico de 100 ml, y diluir
con agua desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin B y cido ntrico al 2%
Ac1do docosa (3:2:5). Un volumen de 5 ~tl proporciona 0,015 mg de
hexaeno1co paladio y, 0,01 mg de nitrato de magnesio.
IDHA) 1 00 22.6 11 3 30 o 40 o Blanco: Acido ntrico y agua (1: 19)
Solucin madre del estndar: Transferir 1 0,0 mL de
CONTENIDO Solucin Estndar de Arsnico, preparada segn se in-
CONTENIDO DE DHA rlica Pn la prueba de Arsnico (211 ). a un matraz volu-
Solucin de Prueba 1 y Solucin de Prueba 2: Pesar mtrico de 100 ml. Agregar 40 ml de agua y 5 ml de
no menos de 1 O Cpsulas en un frasco de pesada ta- cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Esta solu-
rado. Con una cuchilla afilada u otros medios apropia- cin contiene O, 1O ~tg/mL de arsnico.
dos, abrir cuidadosamente las Cpsulas, sin perder ma-
6654 Schizochytrium / Sup/Pmfnlu n;,.,,;<m
Soluciones estndar: Di!uir Solucin madre del estndar
cor1 Blanco para obtener concentraciones de O 002
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 pg/mL de arsnic'o. '
Solm.i11 mue~tra: Para preparar ia Soiuon muestra,
usar un horno rlr mirrnondn; ron unl frecuencia del
magnetrn de 2455 MHz y una potencia de salida se-
leccionable de 0-950 vatios en incrementos del 1 %
equipado con vasos de material compuesto avanzado
con recubrimientos internos de tefln de 100 ml. Usar
m~mbranas de ruptura para ventilar los vasos si la pre-
s1on excede de 125 psr. Los vasos encajan en un plato
giratorio y cada vaso puede ventilarse en un recipiente
de desbordamiento. Equipar el horno de microondas
con un tubo de es,cape para permitir el escape de los
humos. [PRECAUCION-Usar proteccin adecuada para
los ojos arlems rle ropa y guantes protectores.]
Transferir aproximadamente 500 mg de aceite de schi-
10chytrium, a partir de las Cpsulas, pesados con una
aproximacin de O, 1 mg, a un vaso de digestin con
recubrimiento interno de tefln. Preparar las muestras
por duplicado. Agregar 15 mL de cido ntrico y agi-
!r por rotacin suave. Cubrir los vasos con tapas de-
1ando fuera el accesorio de ventilacin. Digerir previa-
mente durante toda la noche bajo una campana.
Colocar la membrana de ruptura en el accesorio de
ventilacin y ajustar la tapa. Colocar todos los vasos
Pn el plato giratorio del horno de microondas. Co-
nectar los tubos de escape a la trampa de ventilacin
y conectar la lnea del sensor de presin al vaso apro-
piado. lnrc1ar un procedimiento de digestin de dos
etapas calentando el microondas con una potencia
d_el 15% durante 15 minutos, seguida de una poten-
cia. del 25% durante 45 minutos. Retirar el plato gira-
torio con los vasos del horno y dejar que los vasos se
enfren a temperatura ambiente. [NOTA-Se puede
usar un bao de agua fresca para acelerar el proceso
de enfriamiento.] Ventilar los vasos cuando alcancen
la temperatura ambiente. Retirar las tapas y agregar
lentamente 2 mL de perxido de hidrogeno al 30% a
cada uno. Dejar que las reacciones cesen y sellar los
vasos. Volver a colocar los vasos en el plato giratorio
del horno de microondas y calentar durante 15 minu-
lu:, cJJicionale~ a una potencia del 30%. Retirar los
vasos del horno y dejar que se enfren a temperatura
ambiente. Transferir los digeridos enfriados a un ma-
traz volumtrico de 25 mL y diluir con agua a
volumen.
Anlisis_: Programar el horno de grafito segn se indica
a cont1nuac1on. Secar a 115 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 65 se-
gundos y un flujo de argn de 300 ml/min. Carbonizar
la m_uestra a 1000 usando una rampa de 1 segundo,
un tiempo de espera de 20 segundos y un flujo de aire
de 300 mL/min. Enfriar y purgar el aire del horno du-
rante 1 O segundos usando una temperatura ajustada a
20' y un flujo de argn de 300 mL/min. Atomizar a
2400" usando una rampa de O segundos y un tiempo
de espera de 5 segundos con el flujo de argn dete-
nido_, y limpiar a 2600'' con una rampa de 1 segundo y
un tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volumenes iguales (20 pL) de las Soluoones estan-
dar, de la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 ~tL de la Solucin C para cada una
de las muestras, .~n el !ub_o de grafito de un espectr-
metro de absorc1on atomrca con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para arsnico. Determinar el rea del pico en la lnea
de emisin de arsnico a 1 G3,7 nm, corregida por la
absorcin de fondo. Graficar las reas de los picos co-
rregidas de las Soluciones estndar en funcin de sus
contenidos de arsnico, en ,Ltg/mL, y calcular la lnea
de regresin que meior se ajuste a los puntos. Determi-
nar la concentracin, C, en pg/mL, de arsnico en cada
mL de la Solucin rnuesira interpoiando a partir de la
lnea de regresin.
USP 38
Calcular el contenido de arsnico en la porcin de
Capsulas tomada:
Kesultado = (L/W) x 25
C = concentracin, segn se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cpsulas tomado
para preparar la Solucin muestra (g)
,Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 pg/g
LIMITE DE PLOMO
[NOTA-Para Ja preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los ~e
activos para que tengan un contenido de plomo tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solucin A: 1 O g de fosfato monobsico de amonio ul-
tra pu~o en 1 mL de cido ntrico y 40 mL de agua
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 1 00 ml.
Solucin B: 1 g de nitrato de magnesio ultra puro a un
vaso de precipitados de tefln. Agregar 40 mL de agua
y 1 mL de cido ntrico, y entibiar sobre una placa de
calentamiento hasta disolver los slidos. Dejar que la
solucin se enfre a temperatura ambiente, transferirla a
un matraz volumtrico de 100 mL, y diluir con agua
desionizada a volumen.
Solucin C: Solucin A, Solucin B y cido ntrico al 2%
(2:1 :2). Un volumen de 5 pL proporciona 0,2 mg de
fosfato fT!s 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1: 19)
Solucin madre del estndar: Transferir 10,0 mL de
Solucin Madre de Nitrato de Plomo, preparada segn se
indica en la prueba de Metales Pesados (231 ), a un ma-
traz volumtrico de 100 ml. Agregar 40 mL de agua y
5 mL de cido ntrico, y diluir con agua a volumen.
Transferir 1,0 mL de esta solucin a un segundo matraz
volumtrico de 100 mL, agregar 50 mL de agua y 1 mL
de cido ntrico, y diluir con agua a volumen. Esta so-
lucin contiene O, 1 O pg/mL de plomo.
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 pg/mL de plomo.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico.
Anlisis: Programar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120" usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 mL/min. Carbonizar
I~ muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20 y
un flujo de argn de 300 ml/min. Atomizar a 2100"
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido, y
limpiar a 2600'' con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 pl) de las Soluciones estn-
dar, de la Solucin muestra y del Blanco, seguidos de
una inyeccin de 5 pL de la Solucin C para cada una
de las m11estras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para plomo. Determinar el rea del pico en la lnea de
emisin de plomo a 283,3 nm, corregida por la absor-
cin de fondo. Graficar las reas de los picos corregidas
de la~ Soluciones estndar en funcin de sus contenidos
de plomo, en pg/mL, y calcular la lnea de regresin
USP 38
que mejO se ajuste a los puntos. Determinar la con-
centracin, C, en pg/mL, de plomo en cada mL de la
Solucin muestra interpolando a partir de la lnea de
regresin.
Calculcir ei contenido de Jio1110 e11 la porcin de Cp-
sulas tomada:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin, segn se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cpsulas tomado
para preparar la Solucin muestra (g)
,Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE CADMIO
[NOTA-Para la preparacin de todas las soluciones acuo-
sas y para enjuagar los vasos de vidrio, tefln y plstico
antes de su uso, usar agua que se haya pasado a travs
de una resina de intercambio inico de lecho mixto, de
cido fuerte y de base fuerte. Seleccionar todos los re-
activos para que tengan un contenido de cadmio tan
bajo como sea posible y almacenar todas las soluciones
reactivo en recipientes de vidrio de borosilicato. Limpiar
los vasos de vidrio, tefln y plstico antes de su uso
remojando en cido ntrico 8 N tibio durante 30 minu-
tos y enjuagando con agua desionizada.]
Solucin A: 1 O g de fosfato monobsico de amonio ul-
tra puro en 40 ml de agua y 1 mL de cido ntrico
para disolver el fosfato. Diluir con agua desionizada
hasta 100 mL.
Solucin B: Transferir 1 g de nitrato de magnesio ultra
puro a un vaso de precipitados de tefln. Agregar
40 mL de agua y 1 ml de cido ntrico, y entibiar sobre
una placa de calentamiento hasta disolver los slidos.
Dejar que la solucin se enfre a temperatura ambiente,
transferirla a un matraz volumtrico de 100 mL, y diluir
con $-lua desionizada a volumen.
Solucion C: Solucin A, Solucin By cido ntrico al 2%
a volumen (2:1 :2). Un volumen de 5 L proporciona
0,2 mg d,e fosfato y 0,01 mg de nitrato de magnesio.
Blanco: Acido ntrico y agua (1 :19)
Solucin madre del estndar A: O, 1372 mg/ml de ni-
trato de cadmio
Solucin madre del estndar B: Solucin madre del es-
tndar A, cido ntrico y agua (2:1 :97). Esta solucin
contiene O, 1 O g/ml de cadmio. [NOTA-Antes de lle-
var a volumen final, disolver en una porcin de agua y
cido ntrico.]
Soluciones estndar: Diluir Solucin madre del estndar
B con Blanco para obtener concentraciones de 0,002;
0,005; 0,01 O; 0,025 y 0,050 g/mL de cadmio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico.
Anlisis: Pro9ramar el horno de grafito segn se indica
a continuacion. Secar a 120 usando una rampa de 1
segundo, un tiempo de espera (hold time) de 55 se-
gundos y un flujo de argn de 300 ml/min. Carbonizar
la muestra a 850 usando una rampa de 1 segundo, un
tiempo de espera de 30 segundos y un flujo de aire de
300 ml/min. Enfriar y purgar el aire del horno durante
1 O segundos usando una temperatura ajustada a 20 y
un flujo de argn de 300 ml/min. Atomizar a 2400
usando una rampa de O segundos y un tiempo de es-
pera de 5 segundos con el flujo de argn detenido, y
limpiar a 2600 con una rampa de 1 segundo y un
tiempo de espera de 5 segundos. Inyectar por sepa-
rado volmenes iguales (20 L) de las Soluciones estn-
dar, de la Solucin muestm y del Blanrn, seguidos de
una inyeccin de 5 L de la Solucin C para cada una
de las muestras, en el tubo de grafito de un espectr-
metro de absorcin atmica con horno de grafito ade-
cuado, equipado con una lmpara de ctodo hueco
para cadmio. Determinar el rea del pico en la lnea de
emisin de cadmio a 228,8 11111, corregida por la absor-
cin de fondo. Graficar las reas de los picos corregidas
SuplP111p11iu1 Dit>f Plic m / SPlenometionina 6655
de las Soluciones estndar en funcin de sus contenidos
de cadmio, en g/rnl, y calcular la linea de regresin
que mejor se ajuste a los puntos. Determinar la con-
centracin, C, en ~tg/ml, de cadmio en cada rnL de ia
'lolucin mut'stro interpolando a partir dP la lnea de
regresin. Calcular el contenido de cadmio en las Cp-
sulas tomadas:
Resultado = (C/W) x 25
C = concentracin, segn se obtuvo
anteriormente
W = peso del contenido de las Cpsulas tomado
para preparar la Solucin muestra (g)
,Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
LIMITE DE MERCURIO
Proceder segn se indica en Mercurio (261 ), Mtodo Ita y
Mtodo /lb, excepto que se debe usar una Solucin Estn-
dar de Mercurio con el equivalente a O, 1 g/ml de
mercurio.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Solucin
muestra en la prueba de Lmite de Arsnico, combi-
nando los dos digeridos enfriados duplicados en 1,0 ml
de Solucin de Permanganato de Potasio.
Criterios de aceptacin: No ms de O, 1 g/g
PRUEBAS ESPECFICAS
GRASAS y ACEITES FIJOS, ndice de Anrsidina (401 ): No ms
de 20,0, determinado e~ el contenido de las Cpsulas
GRASAS y ACEITES FIJOS, Acidos Grasos Libres (401 ): Los
cidos grasos libres en 1 O g requieren para su neutraliza-
cin no ms de 1,42 m~ de hidrxido de sodio O, 1 N.
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Perxido (401): No ms
de 5,0, determinado en, el contenido de las Cpsulas
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Oxidacin Total (TOTOX)
(401): No ms de 26 (determinado en el contenido de
las Cpsulas), calculado como:
Resultado = (2 x PV) +AV
PV = ndice de perxido
AV = ndice de anisidina
GRASAS y ACEITES FIJOS, Materia lnsaponificable (401): No
ms de 4,5%, determinado en el contenido de las
Cpsulas
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y evitar la exposicin al
calor excesivo.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el contenido de cido do-
cosahexaenoico en mg/Cpsula. Tambin indica el nom-
bre y la concentracin de cualquier antioxidante
ag~egado.
ESTA~DARES DE REFER~NCIA USP (11)
ER Ester Etlico del Acido Docosahexaenoico USP
ER ster Etlico del cido Eicosapentaenoico USP
ER Tricosanoato de Metilo USP
Selenometionina
"'
CsH11N02Se 196,11
Butanoic arirl 2-amino-4-( methvheleno )-. ( S)-;
cido ( S)-2-amino-4-( metifseleni)butric [1464-42-2].
DEFINICIN
La Selenometionina contiene no menos de 97,0% y no ms
de 103,0% de selenometionina (CsH 11 NO)Se) y contiene
6656 Selenometionim / Suplementos Dietticos
no menos de 39,0% y no mi<> de 41,0% de selenio (Se),
calculado con re,edo d Id susldncid lal como se
encuentra.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN El INFRARROJO ( l 97K)
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Fase mvil: 6,8 g/L de fosfato monobsico de potasio
en agua. Ajustar con cido fosfrico a un pH de 2,75
0,25.
Solucin de aptitud del sistema: O, 16 mg/mL de ER
Selenometionina USP y 0,8 mg/mL de ER L-Metionina
USP en Fase mvil
Solucin estndar: O, 1 6 mg/mL de ER Selenometionina
USP en Fase mvil
Solucin muestra: O, 16 mg/mL de Selenometionina en
Fase mvil disueltos con ultrasonido. Pasar a travs de
un filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 220 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 con recubri-
miento polar (polar end-capping)
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para metio-
nina y selenometionina son 0,8 y 1,0,
respectiva mente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 3,0 entre metionina y
selenometionina
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
selenometionina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de selenometionina
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de selenometionina
(CsH 11 N02Se) en la porcin de Selenometionina
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
r1 = respuesta del pico de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Selenometionina USP en
la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin de Selenometionina en la
Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 97,0%-103,0% con respecto
a la sustancia tal como se encuentra
IMPUREZAS
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo I (231): No ms de
29 ppme (Oficial Ol-dic-2015)
LIMITE DE SODIO
Solucin madre del estndar: 1 O g/mL de sodio, a
partir de cloruro de sodio, secado previamente a 1 05
durante dos horas.
Soluciones estndar: 0,2; 0,5 y 1,0 g/mL de sodio.
Pipetear y transferir 2,0; 5,0 y 10,0 mL de Solucin ma-
dre del estndar a sendos matraces volumtricos de
1 00 ml. Agregar a cada matraz 2,0 mL de solucin de
cloruro de potasio (1 en 5) y 1,0 mL de cido clorh-
drico, y diluir con agua a volumen.
USP 38
Solucin muestra: Transferir 1 00 mg de Selenometio-
nina a un matraz volumtrico de 1 00 mL, agregar
2,0 mL de solucin de cloruro de potasio (1 en 5) y
t , ml de ac1do clorh1drico, y diluir con agua a
volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: 589 nm
Lmpara: Sodio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones. Graficar
las absorbancias de las Soluciones estndar en funcin
de sus concentraciones (g/mL de sodio) y trazar la
recta que mejor se ajuste a los puntos graficados. A
partir de la grfica as obtenida, determinar la con-
centracin de sodio, CNa (g/mL), en la Solucin
muestra.
Calcular el porcentaje de sodio en la porcin de Sele-
nometionina tomada:
Resultado = (CNa!CsA) x F x 100
CNa = concentracin de sodio en la Solucin muestra
(~tg/mL), determinada a partir de la lnea de
regresin
CsA = concentracin de Selenometionina en la
Solucin muestra (mg/mL)
F = factor de conversin, 0,001 mg/g
Criterios de acept~cin: No ms de O, 1%
PUREZA CROMATOGRAFICA
Solucin estndar A: Transferir 50 mg de ER Selenome-
tionina USP a un matraz volumtrico de 1 O mL, agregar
2 mL de agua, calentar hasta disolver, si fuera necesario,
y diluir con metano! a volumen.
Solucin estndar B: Transferir 1,0 mL de Solucin es-
tndar A a un matraz volumtrico de 100 mL y diluir
con metano! a volumen.
Solucin muestra: Transferir 50 mg de Selenometionina
a un matraz volumtrico de 1O mL, agregar 2 mL de
agua, calentar hasta disolver, si fuera necesario, y diluir
con metano! a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: TLC
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para
cromatografa de 0,25 mm
Volumen de aplicacin: 1O L
Fase mvil: Butano!, cido actico glacial y agua
(4:1:1)
Solucin reveladora: 2 mg/mL de ninhidrina en
alcohol
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Proceder segn se indica en Cromatografa (621 ), Cro-
matografa en Capa Delgada. Dejar que se sequen las
aplicaciones y desarrollar el cromatograma en la Fase
mvil hasta que el frente de la fase mvil haya reco-
rrido tres cuartos de la longitud de la placa. Retirar la
placa de la cmara de desarrollo, marcar el frente de
la fase mvil y dejar que la fase mvil se evapore.
Localizar las manchas en la placa rociando con Solu-
cin reveladora y secando a 110 durante 1 O minutos.
Criterios de aceptacin: No ms de 1,0%. El valor Rr
de la mancha principal de la Solucin muestra corres-
ponde al de la Solucin estndar A; y ningun~ mancha,
diferente de la mancha principal de la Solucion muestra
es de mayor tamano o intensidad que la mancha princi-
pal de la Solucin estndar B.
USP 38
PRUEBA~ ES,PECFICAS
ROTACION OPTICA, Rotacion Especd1ca (781 S)
Solucin muestra: 1 O mg/mL en cido clorhdrico 1 N
Criterios de aceptacin: +1/,0" a +19,5'
CONTENIDO DE SELENIO
[PRECAUCIN-El selenio es txico; manipular con cuidado.]
Solucin madre del estndar: Disolver 1 g de selenio
metlico en un volumen mnimo de cido ntrico. Eva-
porar hasta sequedad, agregar 2 ml de agua y evaporar
hasta sequedad. Repetir tres veces la adicin de agua y
la evaporacin hasta sequedad. Disolver el residuo en
cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz volumtrico
de 1 000 ml y diluir con cido clorhdrico 3 N a volu-
men. Esta solucin contiene 1 000 g/ml de selenio.
Soluciones estndar: 20, 50 y 1 00 g/ml de selenio.
Pipetear y transferir 2,0; 5,0 y 10,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar a sendos matraces volumtricos de
100 ml. Diluir el contenido de cada matraz con agua a
volumen.
Solucin muestra: 0, 125 mg/ml de Selenometionina
en a<;Jua
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: 196 nm
Lmpara: Selenio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Agua
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones. Graficar
las absorbancias de las Soluciones estndar en funcin
de sus concentraciones (g/ml de selenio) y trazar la
recta que mejor se ajuste a los puntos graficados. A
partir de la grfica as obtenida, determinar la con-
centracin de selenio, Cse (g/ml), en la Solucin
muestra.
Calcular el porcentaje de selenio en la porcin de Sele-
nometionina tomada:
Resultado = (Cse!CsA) x F x 100
Cs,, concentracin de selenio en la Solucin
= xi)etil]amina y 1,0 ml de Solucin reactivo. Colocar la
muestra (g/ml), determinada a partir de la
lnea de re_gresin
CsA = concentracion de Selenometionina en la
Solucin muestra (mg/ml)
F = factor de conversin, 0,001 mg/g
Criterios de aceptacin: 39,0%-41,0% con respecto a
la sustancia tal como se encuentra
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER L-Metionina USP
ER Selenometionina USP
Serenoa
DEFINICIN
El Serenoa es el fruto maduro, parcialmente secado, de Sere-
noa repens (W. Bartram) Small (Fam. Arecaceae) [Serenoa
serrulatum Schult.; Soba/ serrulata (Michx.) Nutt. ex
Schult. & Schult. f.]. Contiene no menos de 2% (v/p) de
aceite voltil, no menos de 7% de extracto lipoflico y no
menos de 9,0% de cidos grasos totales.
Suplementos Dietticos / Serenoa 665 7
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
[~...JOTA-Realizar la siguiente prueba biljo una luz tenue.]
Solucin reactivo: 3,7 mq/ml de 4-bromometil-7-me-
toxicoumarina en acetona. Almacenar esta solucin en
un lugar oscuro.
Solucion estndar: 5,0 g de estearato de magnesio en
un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con
un condensador de reflujo. Agregar 50 ml de ter,
20 ml de cido ntrico al 12,5% y 20 ml de agua y
calentar hasta disolver completamente. Enfriar, transferir
el contenido del matraz a un embudo de separacin y
retirar la fase acuosa inferior. Extraer dos veces la fase
etrea usando cada vez 4 ml de agua y separar las fases
acuosas. Extraer las fases acuosas combinadas con
15 ml de ter combinando los extractos etreos. Evapo-
rar hasta sequedad y secar el residuo a 105. Transferir
1 mg del residuo a un vial de vidrio mbar con una
tapa de goma con abrazadera metlica. Agregar 1 O mg
de carbonato de litio, 3 L de tris-[2-(2-metoxietoxi)eti-
l]amina y 1,0 mg de Solucin reactivo. Colocar la tapa
de goma con la abrazadera metlica, secar a 1 05 du-
rante 2 horas y enfriar.
Solucin muestra: 10,0 g de Serenoa reducida a polvo
fino en un matraz de fondo redondo de 250 ml equi-
pado con un condensador de reflujo. Agregar 150 ml
de alcohol y calentar bajo reflujo en un bao de vapor
durante 1 hora. Enfriar, filtrar, lavar el residuo con al-
cohol y diluir los lavados y el filtrado combinados con
alcohol hasta 200,0 ml. Transferir 0,6 ml de esta solu-
cin a un matraz adecuado y evaporar hasta sequedad.
Agregar al residuo 1,0 ml de Solucin reactivo. Transferir
esta solucin con ayuda de una pipeta a un vial de
vidrio mbar con una tapa de goma con abrazadera
metlica. Agregar 3 L de tris-[2-(2-metoxietoxi)etil]a-
mina y 1 O mg de carbonato de litio al vial. Colocar la
tapa de goma con abrazadera metlica, secar a 1 05
durante 2 horas y enfriar.
Solucin blanco: Agregar a 1 O mg de carbonato de li-
tio en un vial de vidrio mbar con un tapn de goma
con abrazadera metlica, 3 L de tris-[2-(2-metoxieto-
tapa de goma con la abrazadera metlica, secar a 105
durante 2 horas y enfriar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografm (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
matografa de 0,25 mm, generalmente de 20 cm de
longitud (placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 2 L
Fase mvil: Ciclohexano, acetato de etilo y cido ac-
tico (70:30:1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Solu-
cin blanco
Desarrollar los cromatogramas en la fase mvil hasta
que el frente de la fase mvil haya recorrido tres cuar-
tos de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cmara cromatogrfica, marcar el frente de la fase m-
vil y dejar que la placa se seque al aire. Observar la
placa bajo luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta al menos dos zonas de fluores-
cencia azul, cuyos valores R; corresponden a zonas simi-
lares presentes en la Solucin estndar. Las zonas de
fluorescencia azul de la Solucin muestra aparecen por
encima de las zonas de fluorescencia azul presentes en
la Solucin blanco.
COMPOSICIN
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Determinacin de Aceite
Voltil (561): No menos de 2% (v/p) de un aceite que
solidifica en un slido blanco a temperatura ambiente
6658 ~erenoa I SuplPmPntns Dietlicos USP 38

CONTENIDO DE EXTRACTO LIPOFLICO trar la solucin y, si fuera necesario, diluir un volumen

Anlisis: 1ransterir 10 g de Scrcnoa reducido a polvo del filtrado con hexanos para obtener un volumen co-
un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con nocido. [NoT A-Almacenar esta solucin en un refriqe-
un rnnrlPnqrlnr de reflujo y agregar 150 rnl de al- 1ctdo1 f~lil ei momento de su uso.j
cohol. Cilentar el matraz en un bao rlP agua hirviendo Sistema cromato9rfico
uao reflujo durante l hora. cntriar, filtrar y lavar el resi- (Ver Cromatografla (621), Aptitud del Sistema.)
duo con pequeas porciones de alcohol. Recoger el fil- Modo: Cromatografa de Gases
trado y los lavados en un matraz volumtrico de Detector: Ionizacin a la llama
200 ml y diluir con alcohol a volumen. Evaporar Columna: Capilar de slice fundida, de 0,25 mm x 30
l 00,0 ml de esta solucin hasta sequedad en un evapo- m, recubierta con una pelcula de fase G 16 de 0,25
rador rotatorio al vaco. Agregar 40 ml de n-hexano al m
residuo, mezclar durante 5 minutos, filtrar y recoger el Temperatura
filtrado en un matraz de fondo redondo. Repetir la ope- Inyector: 250
racin de lavildo anterior con n-hexano dos veces mas y Detector: 300
recoger todos los filtrados en el mismo matraz. Usando Columna: Ver la Tabla 2.
un evaporador rotatorio, evaporar el disolvente org-
nico hasta sequedad. Secar el residuo obtenido a 105 Tabla 2
durante 2 horas. - - --

T
---~-----

Criterios de aceptacin: El peso del residuo es no me- Tiempo de

nos de 0,35 g (no menos de 7%). Espera
CONTENIDO DE ACIDOS GRASOS (Hold Time)
Solucin de estndar interno: 12 rng/ml de nonade- a
cano en hexanos Temperatura Rampa de Temperatura Temperatura
Solucin madre del estndar: Disolver cantidades de Inicial Temperatura Final Final
ER Laurato de Metilo USP, ER Oleato de Metilo USP, ER () (/min) () (min)
Miristato de Metilo USP, ER Palmitato de Metilo USP, ER 120 o 120 3
Linoleato de Metilo USP, ER Caproato de Metilo USP, 120 50 220 12
ER Caprilato de Metilo USP, ER Caprato de Metilo USP,
ER Palmitoleato de Metilo USP, ER Estearato de Metilo Gas transportador: Helio
USP y ER Linolenato de Metilo USP en hexanos hasta Velocidad de flujo: 1 ml/min
obtener concentraciones de cada ster metlico segn Volumen de inyeccin: 1 L
se indica en la Tabla 1. Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Tabla 1 [NOTA-Ver la Tabla 3 para los tiempos de retencin
relativos.]
ster Metlico Concentracin lmo/ml)
Laurato de metilo 5 Tabla 3
Oleato de _metilo 5
-------~

Tiempo de
Miristato de metilo 2
Retencin
Palmitato de metilo 2 ster Metlico Relativo
Linoleato de metilo 1 Caoroato de metilo o 39
Caoroato de metJly 04 Caorilato de metilo o 56
Caorilato de metilo 04 Caorato de metilo o 76
Caorato de metilo 04 Laurato de metilo o 94
Palmitoleato de metilo 04 Nonadecano (estndar interno) 1o
Estearato de metilo 04 Miristato de metilo 11
Linolenato de metilo -- 04 Palmitato de metilo 13
Solucin estndar: Transferir 1,0 ml de Solucin de es- Palmitoleato de metilo 1 35
tndar interno a 5,0 ml de la Solucin madre del Estearato de metilo 1 65
estndar. Oleato de metilo --------- ----- ---- 17
Solucin muestra: Reducir a polvo moderadamente Linoleato de metilo - 18
grueso 50 g de Serenoa seco. Transferir 1 g de polvo a Linolenato de metilo 20
un matraz de fondo redondo de 1 00 ml equipado con
un condensador de reflujo enfriado con agua y una ba- Requisitos de aptitud
rra magntica. Agregar 1 O ml de solucin de hidrxido Resolucin: No menos de 1,5 entre estearato de me-
de sodio metanlico 0,5 N (20 mg/ml de hidrxido de tilo y oleato de metilo
sodio en metano!) y calentar el matraz mezclando bajo Factor de asimetra: No ms de 2,0 para cada uno
condiciones de reflujo durante 15 minutos. Pipetear y de los picos de steres metlicos
transferir 5 ml de una solucin de trifluoruro de boro Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0% para
en metanol (140 mg/ml de trifluoruro de boro en me- cada uno de los picos de steres metlicos
tano!) a travs del condensador de reflujo en el matraz Anlisis
y continuar la ebullicin durante 2 minutos ms. Agre- Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
gar 5,0 ml de hexanos a travs del condensador y con- Calcular el porcentaje de cada cido graso en la porcin
tinuar la ebullicin durante 1 minuto adicional. Enfriar de Serenoa tomada:
el matraz, retirar el condensador, agregar 15 ml de so-
lucin saturada de cloruro de sodio y agregar 1,0 ml Re~ultJo = (Ru/Rs) x (Cs x V) x (l/W) x (Mc1/M2) x
de Solucin de estndar interno. Mientras la solucin 100
est tibia, tapar el matraz y agitar viqorosamente. Pipe-
tear y transferir 1,0 ml de la capa superior de hexanos Ru = cociente de respuesta entre los picos del ster
a un tubo de ensayo con tapn de vidrio que contenga metlico pertinente y estndar interno
una pequea cantidad de sulfato de sodio anhidro. Fil- obtenido de la Solucin muestra
USP 38 Suplementos Dietticos / Serenoa 6659

R1 cociente de respuesta entre los picos del ster

= mano bastante punteadas, con paredes gruesas y lumen
metlico perti1iente y estndar 'interno
obtenido de la Soluuon estandar
- concentlcin del {stc metlico respectivo en
!a Solucin madre del estandar (mq/mL)
V = volumen de la Solucion madre del estndar
usado para preparar la Solucin estndar (mL)
w = peso de Serenoa tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Me) = peso molecular del cido graso pertinente
M,2 = peso molecular del ster metlico del cido
graso pertinente
Criterios de aceptacin: No menos de 9,0% para la
suma de los porcentajes de todos los cidos grasos. Ver
la Tabla 4 para cidos grasos individuales.
Tabla 4
cidos Grasos Porcentajes
Individuales (%)
cido oleico No menos de 3 O
cido lurico No menos de 2 O
cido mirstica No menos de 1 2
cido oalmtico No menos de 1 O
cido linoleico No menos de O 4
cido caoroico No menos de O 2
cido caorlico No menos de O 2
cido corico No menos de O 2
cido esterico No menos de O 1
cido linolnico No menos de O 05
cido oalmitoleico No menos de O 01
CONTAMINANTES
o
MET,ALES PESADOS (231 ): ,No ms de 1 g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 1 0 4 ufc/g y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 1 02 ufc/g. , ER Linoleato de Metilo USP
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de la prueba para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia co/i y la ausen-
cia de Staphylococcus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Drupas subesfricas a ovoides, de apro-
ximadamente 2-3 cm de longitud y aproximadamente
1,5 cm de espesor, de color marrn oscuro a negro con
una superficie lisa y opaca y con grandes depresiones y
crestas irregulares causados por la contraccion al se-
carse; remanentes del estilo en la cspide, la base pre-
senta una pequea depresin con la cicatriz del pedi-
celo; el epicarpio y el sarcocarpio subyacente forman
una capa frgil que se desprende parcialmente y revela
la capa dura de color marrn plido del endocarpio que
rodea la semilla. Semilla irregularmente esfrica a
ovoide de hasta aproximadamente 1,2 cm de longitud
y 1 cm de ancho, dura, superficie finamente punteada
de color marrn rojizo con un rea ms plida, elevada
y membranosa sobre el rafe y el micrpilo; cuando se
corta transversalmente, presenta una testa delgada, un
perisperma estrecho y un rea grande de endosperma
denso, crneo y de color blanco grisceo.
Microscpicas: La pulpa est cubierta por una epider-
mis de clulas pequeas y paredes delgadas y consta
principalmente de un parnquima de clulas muy gran-
des y de f-Jdredes gener alrnente delgadas. Las capas ms
externas contienen sustancias de color marrn; hacia el
interior, slo se presentan clulas individuales con con-
tenidos marrones dispersas en el tejido; tambin se en-
cuentran ocasionalmente clulas petreas de gran ta-
amplio. Los haces vasculares estn acompaados de fi-
bras con clulas cobertoras (estigmas) que contienen
::,lidos silceos Jdjuntos. LJs cap~s rTt<ls intcrnJs de IJ
pared de la pulpa contiPnen clula5 ptreas (astroesrlP-
reidas) casi completamente engrosadas, bastante pun-
teadas y de forma muy irregular. Las capas externas de
la cubierta de la semilla presentan clulas grandes de
paredes gruesas; las capas intermedias son de paredes
delgadas y las clulas son ms pequeas; las capas ms
internas son de clulas pequeas aplanadas. Todas las
clulas estn llenas de una sustancia de color marrn.
En el exterior, el endosperma presenta clulas de pare-
des gruesas, sin puntuaciones y alargadas radialmente;
en las capas ms profundas, las clulas son ms gran-
des, de paredes gruesas y con puntuaciones bastante
gruesas. La laminilla media es claramente reconocible.
Las clulas contienen aleurona con cristaloides de
p~otena. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Serenoa redu-
cido a polvo fino a 105 durante 2 horas: pierde no ms
de ,12,0% de su peso. ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 5,0%, determinado en 1,0 g de Serenoa re-
duc;ido a polvo fino , .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): Nomsdel,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Proteger de la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta contenida en el artculo .
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Caprato de Metilo USP
ER Caproato de Metilo USP
ER Caprilato de Metilo USP
ER Laurato de Metilo USP
ER Linolenato de Metilo USP
ER Miristato de Metilo USP
ER Oleato de Metilo USP
ER Palmitato de Metilo USP
ER Palmitoleato de Metilo USP
ER Estearato de Metilo USP
Serenoa, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Serenoa contienen Extracto de Serenoa. Las
Cpsulas contienen no menos de 22,0% y no ms de
34,0% de cido !urico en la cantidad declarada de Ex-
tracto de Serenoa. El cociente entre las concentraciones
de cido !urico y cido caprlico es no menos de 8,5 y
no ms de 1 7,5. El cociente entre las concentraciones de
cido !urico y cido mirstico es no menos de 2,2 y no
ms de 2,8.
IDENTIFICACIN
A. Los tiempos dP retencin de los picm de caprato de
metilo, caproato de metilo, caprilato de metilo, laurato
de metilo, linoleato de metilo, linolenato de metilo, miris-
tato de metilo, oleato de metilo, palmitato de metilo,
palmitoleato de metilo y estearato de metilo de laSolu-
cin muestra corresponden a los de !a Solucin cst9ndar,
segn se obtienen en la prueba de Contenido de Acjdo
Lurico y l9s Cocientes entre las C9ncentraciones eje Acido
Lurico y Acido Capr!ico, y entre Acido /.urico y Acido
Miristico.
6660 Serenoa I SurlPmf'ntns Dietticos
8. PRESENCIA DE ESTEROLES
Solucin madre de derivatizacin: N, 0-bis(trimetilsilil)-
acetamida, trimetibililimidazol y trimetilclorosilano
(332)
Solucin de derivatizacin: Solucin mndrP de derivati-
Lucin, bis(trimetilsilil)-trifluoroacetamida y piridina
(1:1:1)
Solucin de estndar interno: 1 O mg/ml de eicosanol
y 5 m_g/ml de colesterol en cloroformo
Solucion madre del estndar: 0,75 mg/ml de ER He-
xacosanol USP y 1,4 mg/ml de ER {3-Sitosterol USP en
cloroformo
Solucin estndar: Mezclar 5,0 ml de Solucin madre
del estndar con 1,0 ml de Solucin de estndar interno.
Evaporar 0,75 ml de esta solucin hasta sequedad
usando una corriente de nitrgeno. Disolver el residuo
en 1,0 ml de Solucin de derivatizacin y dejar en re-
poso durante no menos de 15 minutos a temperatura
ambiente.
Solucin madre de aptitud del sistema A: 2 mg/ml
de tetracosanol, de octacosanol, de ER Hexacosanol USP
y de triacontanol en cloroformo
Solucin de aptitud del sistema A: Mezclar 5,0 ml de
Solucin madre de aptitud del sistema A con 1,0 ml de
Solucin de estndar interno. Evaporar 0,75 ml de esta
solucin hasta sequedad usando una corriente de nitr-
geno. Disolver el residuo en 1,0 ml de Solucin de deri-
vatizacin y dejar en reposo durante no menos de 15
minutos a temperatura ambiente.
Solucin madre de aptitud del sistema B: 2 mg/ml
de campesterol, de estigmasterol y de ER {3-Sitosterol
USP y 0,37 mg/ml de estigmastanol
Solucin de aptitud del sistema B: Mezclar 5,0 ml de
Solucin madre de aptitud del sistema B con 1,0 ml de
Solucin de estndar interno. Evaporar 0,75 ml de esta
solucin hasta sequedad usando una corriente de nitr-
geno. Disolver el residuo en 1,0 ml de Solucin de deri-
vatizacin y dejar en reposo durante no menos de 15
minutos a temperatura ambiente.
Solucin de {3-colestanol: {3-colestanol en cloroformo
(1 en 100)
Solucin muestra
Muestra: Un nmero de Cpsulas, equivalente a 1O g
de Extracto de Serenoa.
Abrir las Cpsulas y transferir las cubiertas y el conte-
nido a un recipiente adecuado.
Transferir 5 g de la Muestra a un matraz de fondo re-
dondo de 250 ml, y evaporar al vaco a una tempe-
ratura de no ms de 50''. Agregar 50 ml de una solu-
cin que se prepara disolviendo 130 mg/ml de
hidrxido de potasio en metano! y agua (4: 1). Aco-
plar un condensador y someter a reflujo en un bao
a 1 00 hasta obtener una solucin transparente. So-
meter a reflujo durante 1O minutos adicionales y en-
friar agregando 50 ml de agua a travs del condensa-
dor. Transferir a un embudo de separacin,
enjuagando el matraz con un total de 50 ml de agua
en pequeas porciones. Extraer con 80 ml de ter,
agitando durante 30 segundos y repetir dos veces.
[NOTA-Si se forma una emulsion, se puede eliminar
agregando pequeas cantidades de metano!. Transfe-
rir las capas etereas combinadas a un embudo de se-
paracin y lavar con porciones sucesivas de 50 ml de
agua hasta obtener un lavado neutro.] [NOTA-Si se
forma una emulsin, se puede eliminar agregando
pequeas cantidades de metano!.] Pasar el extracto
etreo a travs de papel de filtro que contenga sul-
fato de sodio anhidro, lavar el filtro con 30 ml de
ter, y evaporar hasta sequedad al vaco. Disolver el
residuo en 2,0 ml de cloroformo. Extraer los esteroles
usando el siguiente sistemJ cromatogrfico.
Sistema cromatogrfico de extraccin
Modo: TLC
Adsorbente: Placa para cromatografa recubierta con
gel de slice de 0,25 mm con una zona de aplicacin
LJSP 18
previamente sumergida en 3 cm de una solucin que
)e JJrepara disolviendo 1 3 mg/ml de hidrxido de
potasio en metano! y agua (49: 1)
Fase mvil: Hexa11u) y ter (7:3)
Volmenes de aplicacin: 200 pl de solucin de clo-
roformo gue contenga residuos de Cpsulas y 20 pl
de Solucion de /3-colestanol
Despus de que se hayan aplicado las manchas, dejar
que la placa se seque y calentar a 100 durante 1 hora
antes de usar. La placa se puede almacenar en un de-
secador que contenga cloruro de calcio hasta el mo-
mento de su uso. Desarrollar las placas hasta que el
frente de la fase mvil haya recorrido 1 7-19 cm. Man-
tener la cmara a una temperatura entre 15 y 20.
Secar la placa en una corriente de aire tibio, luego
rociar con una solucin alcalina de 2,7-diclorofluores-
cena en alcohol (0,2 en 100). Observar la placa bajo
luz de longitud de onda de 366 nm e identificar las
bandas correspondientes a los esteroles refirindose a
la mancha de {3-colestanol. Raspar estas bandas y
transferirlas a un tubo de ensayo. Agregar 1O ml de
cloroformo tibio y agitar durante 2 minutos con ayuda
de varias perlas de vidrio. Filtrar la solucin clorofr-
mica, lavar el filtro con cloroformo, y evaporar el fil-
trado y los lavados combinados hasta sequedad al va-
co. Disolver el residuo con algunas gotas de acetona
anhidra y evaporar al vaco. Secar el residuo en un
horno a 105 durante 15 minutos. Disolver el residuo
en 0,2 ml de Solucin de derivatizacin. Usar la solu-
cin resultante como la Solucin muestra para el anli-
sis mediante Cromatografa de Gases.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la llama
Columna: Capilar, de 0,2 mm x 25 m, recubierta con
fase Gl de 0,33 pm de espesor
Temperatura
Detector: 325
Inyector: 325
Columna: Ver la tabla de programa de temperatura
siguiente.
-- ,----------.-.----- ------------
Tiempo de
Espera (Hold
Time)
Temperatura Rampa de Temperatura a Tempera-
Inicial Temperatura Final tura Final
() (/min) () lmin)
200 o 200 3
200 10 300 35
Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Velocidad del gas de compensacin: 25 ml/min
Relacin de particin: 1 :40
Volumen de inyeccin: 1 ~tl
Tipo de inyeccin: Sistema de inyeccin dividida
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema A y Solucin
de aptitud del sistema B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para tetraco-
sanol, octacosanol, hexacosanol y triacontanol son
0,89; 1,00; 1, 1 5 y l, 36, respectivamente, Solucin de
aptitud del sistema A; y los tiemfos de retencin relati-
vos fara colesterol, campestero, estigmasterol, {3-sitos-
tero y estigmastanol son 0,85; 0,92; 0,95; 1,00 y
1,01, 1e)fJellivamenle, Solucin de aptitud del sistema
B.]
Requisitos rle aptitud
Resolucin: No menos de 2 entre /)-sistosterol y es-
tigmastanol, Solucin de aptitud del sistema B
Eficiencia de la columna: No menos de 200 000 pla-
tos tericos para el pico de eicosanol, Solucin de ap-
USP 38 Suplementos Oietticn~ / <;erenoa 6661

tit1;1d del sistema A; y no menos de 1 50 000 platos Temperatura

teoncos para el pico de colesterol, Solucin de aptitud Detector: 300
del sistema B Inyector: 250
Factor de asimetr~a: No ms de 2,0 para cada pico Columna: VC la lcJblJ de pmgrama de temperatura
perl1nenle, Soluc;on cJp aptitud cJpf mtPm? A; y no ms siguiente.
de 2,0 para cada pico pertinente, SoluC1on de aptitud
del sistema B ---
Tiempo de
Anlisis Espera (Hold
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestro Time)
Identificar las seales correspondientes a los analitos Temperatura Rampa de Temperatura a Tempera-
pertin~ntes por comparacin con los cromatogramas Inicial Temperatura Final tura Final
obtenidos con las Soluciones de aptitud del sistema A y (') ( /min) n (min)
B.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestro presenta 120 o 120 3
picos_ para campesterol, /3-sitosterol y estigmasterol, 120 50 220 12
1dent1ficados por sus tiempos de retencin relativos con
respecto al pico de {3-sitosterol en la Solucin estndar. Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 1 mL/min
CONTENIDO Volumen de inyeccin: 1 pL
CONTENIDO DE CIDO LURICO Y LOS COCIENTES ENTRE LAS Aptitud del sistema
CONCENTRACIONES DE CIDO LURICO Y CIDO CAPRUCO Y Muestra: Solucin estndar
/ [NOTA-Los tiempos de retencin relativos para ca-
ENTRE CIDO LURICO Y CIDO MIRSTICO
Solucin de estndar interno: 12 mg/mL de nonade- proato de metilo, caprilato de metilo, caprato de me-
cano en hexanos til?,. laurato de n:ietilo, nonadecano (estndar interno),
Solucin madre del estndar: Disolver cantidades de m1nstat_o de metilo, palmita~o de metilo, palmitoleato
ER Laurato de Metilo USP, ER Oleato de Metilo USP ER de metilo, estearato de metilo, oleato de metilo lino-
Miristato de Metilo USP, ER Palmitato de Metilo USP ER leato de metilo y linolenato de metilo son apro~imada
Linoleat? de Metilo USP, ER Caproato de Metilo usP, mente 0,39; 0,56; 0,76; 0,94; 1,0; 1, 1; 1,3; 1,35;
1,65; 1,7; 1,8 y 2,0, respectivamente.]
ER Capr~lato de Metilo USP, ER Caprato de Metilo USP,
ER Palm1toleato de Metilo USP, ER Estearato de Metilo Requisitos de aptitud
USP y ER Linolenato de Metilo USP en hexanos para Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de es-
ob!ener una concentr?cin de cada ster metlico segn tearato de metilo y oleato de metilo
se 1nd1ca en la tabla siguiente. Factor de asimetna: No ms de 2,0 para los picos de
cada ster metlico
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0% para
ster Metlico Concentracin (mo/ml\
los picos de cada ster metlico
Laurato de metilo 5 Anlisis
Oleato de metilo 5 Muestras: Solucin estndar y Solucin muestro
Miristato de metilo 2 Calcular los porcentajes de cido !urico, cido mirs-
Palmitato de metilo 2 tico y cido caprlico en la cantidad declarada de Ex-
Linoleato de metilo 1 tracto de Serenoa en la porcin de Cpsulas tomada:
Caoroato de metilo 04 Resultado= (Ru/Rs) x (Cs x V/W) x (Mr/Mr 2) X Aw/LL x
Caorilato de metilo 04 100
Caorato de metilo 04
Palmitoleato de metilo 04 Ru = cociente de respuesta entre los picos del ster
Estearato de metilo 04
metlico pertinente y el estndar interno de
la Solucion muestro
Linolenato de metilo 04 Rs = cociente de respuesta entre los picos del ster
Solucin estndar: Agregar 1,0 mL de Solucin de es- metlico pertinente y el estndar interno de
tndar interno a 5,0 mL de la Solucin madre del la Solucion estndar
estndar. Cs = concentracin del ster metlico
Solu~in muestra: Tomar un nmero de Cpsulas, correspondiente en la Solucin madre del
equ1val~nte a 1 O_ g de Extracto, abrir las Cpsulas, y estndar (mg/mL)
transferir las cubiertas y el contenido a un recipiente V = volumen de la Solucin madre del estndar
adecuado. Transferir 100 mg a un vial con tapa de tomado para preparar la Solucin estndar
rosca a prueba de presin y agregar 3,0 mL de una (5,0 mL)
W = peso de muestra usado para preparar la
solucin de cido sulfrico en metano! (5 en 100). Ca-
lentar en un bao de aceite a 100 durante 2 horas Solucin muestro (mg)
agitando eventualmente. Dejar que se enfre y agregar M1 = peso molecular del cido graso pertinente
1,0 mL de Solucin de estndar interno, 10,0 mL de M2 = peso molecular del ster metlico del cido
agua, 1 g de cloruro de sodio y 5 mL de hexanos. Agi- graso pertinente
tar bien y dejar que las capas se separen completa- Aw = peso promedio del contenido de Cpsula
mente. Usar la capa de hexanos. [NOTA-Almacenar (mg/Cpsula)
esta solucin en un refrigerador antes su uso.] Lr = cantidad declarada de Extracto de Serenoa por
Sistema cromato!;jrfico
Cpsula (mg/Cpsula)
(Ver Cromatogrofta (621 ), Aptitud del Sistema.) Usando estos porcentajes, calcular los cocientes
Modo: Cromatografa de Gases
individuales entre la concentracin de cido !urico y
Detector: Ionizacin a la llama
cido caprlico, y entre cido !urico y cido mirstica
Columna: Capilar de slice fundida, de 0,25 mm x 30
en la porcin de Cpsulas tomada.
Criterios de aceptacin: 22,0%-34,0% de cido !u-
m, recubierta con una pelcula de fase Gl 6 de 0,25
pm rico en la cantidad deciarada de Extracto de Serenoa. El
cociente entre cido !urico y cido caprlico es
8,5-1 7,5. El cociente entre acido !urico y cido mirs-
t1co es 2,2-2,8.
6662 Serenoa / SuplPmPntns DiPtPtirns U SP 38

PRUEBAS DE DESEMPEO de goma con la abrazadera metlica, secar a 105' du-

DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS ranle 2 horas y enfriar.
(2040): Cumplen con los requisitos de Prueba de Rup- Solucin muestra: 10,0 g de Serenoa en Polvo en un
tum nnro r nrmlos Blandas matraz de fo11Jo 1eJ011Jo de 250 ml equipado con un
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS <2091 ); condensador de reflujo. AgrPgar 1 50 mL de alcohol y
Cumplen con los requisitos calentar bajo reflujo en un bao de vapor durante 1
hora. Enfriar, filtrar, lavar el residuo con alcohol y diluir
CONTAMINANTES los lavados y el filtrado combinados con alcohol hasta
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to- 200,0 ml. Transferir 0,6 mL de esta solucin a un ma-
tal bacteriano no excede de 1 0 4 ufc/g, el recuento total traz adecuado y evaporar hasta sequedad. Agregar al
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex- residuo 1,0 ml de Solucin reactivo. Transferir esta solu-
cede de 1 000 ufc/g, el recuento de coliformes no excede cin con ayuda de una pipeta a un vial de vidrio mbar
de 1 00 ufc/g, y el recuento de enterobacterias no excede con una tapa de goma con abrazadera metlica. Agre-
de 1 00 ufc/g. , gar 3 L de tris-[2-(2-metoxietoxi)etil]amina y 1 O mg de
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU- carbonato de litio al vial. Colocar la tapa de goma con
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Las abrazadera metlica, secar a 105 durante 2 horas y
Cpsulas cumplen con los requisitos de las pruebas para enfriar. Usar la solucin enfriada.
determinar la ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli Solucin blanco: Agregar a 1 O mg de carbonato de li-
y Staphylowccus aureus. tio en un vial de vidrio mbar con una tapa de goma
con abrazadera metlica, 3 L de tris-[2-(2-metoxieto-
REQUISITOS ADICIONALES
xi)etil]amina y 1,0 ml de Solucin reactivo. Colocar la
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- tapa de goma con la abrazadera metlica, secar a 105
permeables y resistentes a la luz. durante 2 horas y enfriar.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
Sistema cromato9rfico
latn y despus de la denominacin oficial, el nombre del (Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
artculo a partir del que se prepararon las Cpsulas. Eti- gada.)
qu~tar indicando la cantidad de Extracto en mg/Cpsula.
Adsorbente: Capa de mezcla de gel de slice para cro-
ESTANDARES DE REFERENCIA USP(l l)
matografa de 0,25 mm, generalmente de 20 cm de
ER Hexaconasol USP longitud (placas para TLC)
ER Caprato de Metilo USP Volumen de aplicacin: 2 L
ER Caproato de Metilo USP Fase mvil: Ciclohexano, acetato de etilo y cido ac-
ER Caprilato de Metilo USP tico (70:30:1)
ER Laurato de Metilo USP Anlisis
ER Linoleato de Metilo USP Muestras: Solucin estndar, Solucin muestra y Solu-
ER Linolenato de Metilo USP cin blanco
ER Miristato de Metilo USP Desarrollar los cromatogramas en la fase mvil hasta
ER Oleato de Metilo USP que el frente de la fase mvil haya recorrido tres cuar-
ER Palmitato de Metilo USP tos de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
ER Palmitoleato de Metilo USP cmara cromatogrfica, marcar el frente de la fase m-
ER Estearato de Metilo USP vil y dejar que la placa se seque al aire. Observar la
ER /J-Sitosterol USP placa bajo luz UV de longitud de onda larga.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta al menos dos zonas de fluores-
cencia azul, cuyos valores RF corresponden a zonas simi-
lares presentes en la Solucin estndar. Las zonas de
Serenoa en Polvo fluorescencia azul de la Solucin muestra aparecen por
encima de las zonas de fluorescencia azul presentes en
DEFINICIN la Solucin blanco.
El Serenoa en Polvo es Serenoa reducido a polvo fino o muy
fino. Contiene no menos de 2% (v/p) de aceite voltil, no COMPOSICIN
menos de 7% de extracto lipoflico y no menos de 9,0% ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO,Determinacin de Aceite
de cidos grasos totales. Voltil (561): No menos de 2 ml/100 g de un aceite
que solidifica en un slido blanco a temperatura
IDENTIFICACIN ambiente
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA CONTENIDO DE EXTRACTO LIPOFLICO
DELGADA Anlisis: Transferir 1 O g de Serenoa en Polvo a un ma-
[NOTA~Realizar la siguiente prueba bajo una luz tenue.] traz de fondo redondo de 250 ml equipado con un
Solucin reactivo: 3,7 mg/mL de 4-bromometil-7-me- condensador de reflujo y agregar 150 ml de alcohol.
toxicoumarina en acetona. Almacenar esta solucin en Calentar el matraz en un bao de agua hirviendo bajo
un lugar oscuro. reflujo durante 1 hora. Enfriar, filtrar y lavar el residuo
Solucion estndar: 5,0 g de estearato de magnesio en con pequeas porciones de alcohol. Recoger el filtrado
un matraz de fondo redondo de 1 00 mL equipado con y los lavados en un matraz volumtrico de 200 ml y
un condensador de reflujo. Agregar 50 mL de ter, diluir con alcohol a volumen. Evaporar 100,0 ml de
20 mL de cido ntrico al 12,5% y 20 mL de agua y esta solucin hasta sequedad en un evaporador rotato-
calentar hasta disolver completamente. Enfriar, transferir rio al vaco. Agregar 40 ml de n-hexano al residuo,
el contenido del matraz a un embudo de separacin y mezclar durante 5 minutos, filtrar y recoger el filtrado
retirar la fase acuosa inferior. Extraer dos veces la fase en un matraz de fondo redondo. Repetir la operacin
etrea usando cada vez 4 mL de agua y separar las fases de lavado anterior con n-hexano dos veces ms y reco-
acuosas. Extraer las fases acuosas combinadas con ger todos los filtrados en el mismo matraz. Usando un
15 ml de ter combinando los extractos etreos. Evapo- evaporador rotatorio, evaporar el disolvente orgnico
rar hasta sequedad y secar el residuo a 105. Transferir hasta sequedad. Secar el residuo obtenido a 105' du-
1 mg del residuo a un vial de vidrio mbar con una rante 2 horas.
tapa de goma con abrazadera metlica. Agregar 1 O mg Criterios de aceptacin: El peso del residuo es no me-
de carbonato de litio, 3 L de tris-[2-(2-metoxietoxi)eti- nos de 0,35 g (no menos de 7%).
l]amina y 1,0 mg de Solucin reactivo. Colocar la tapa
USP 38 Suplementos [JiptPtirm / '\PrPnna 6663

CONTENIDO DE CIDOS GRASOS Tabla 2

Solucin de e~tnddr interno; 12 rng/ml de nonade- - -----------,
Tiempo de 1
cano en hexanos
Espera
Soludn madre del estndar: Disolver cantidades de
(Hold Time) j
ER Laurato de Metilo USP, ER Oleato cie Metilo USP, ER
Miristato de Metilo USP, ER Palmitato de Metilo USP ER ' a '
Temperatura Rampa de ! Temperatura Temperatura
Linoleato de Metilo USP, ER Caproato de Metilo usP,
1

ER Caprilato de Metilo USP, ER Caprato de Metilo USP,

ER Palmitoleato de Metilo USP, ER Estearato de Metilo
~ ln;c;al m --~:7~:~:~ra .. - F~-1 -- t - t~~~~
USP y ER Linolenato de Metilo USP en hexanos hasta
obtener concentraciones de cada ster metlico segn
~ ~~ 50 ----- - ~~~--- t i 32

se indica en la Tabla 7.
Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Tabla 1 Volumen de inyeccin: 1 L
- - - - --------
ster Metlico Concentracin (ma/ml) Aptitud del sistema
Laurato de metilo 5 Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Ver la Tabla 3 para los tiempos de retencin
Oleato de metilo 5
relativm.]
Miristato de metilo 2
_E<iLmita_to de metilo 2
Tabla 3
Linoleato de metilo 1
Caoroato de metilo 04 Tiempo de
Retencin
Caorilato de metilo 04
ster Metlico Relativo
Caorato de metilo 04
- --1--
Canroato de metilo o 39
Palmitoleato de metilo 04 Canrilato de metilo __Q,_?_(j_ -
- - ------ --------- ------ ___ ' " _____
Estearato de metilo 04 Canrato de metilo o 76
Linolenato de metilo 04
Laurato de metilo o 94
Solucin estndar: Transferir 1,0 ml de Solucin de es- Nonadecano (estndar internQ)___ - - - - 1o
tndar interno a 5,0 ml de Solucin madre del estndar. Miristato de metilo 11
Solucin muestra: Transferir 1 g de Serenoa en Polvo a Palmitato de metilo 13
un matraz de fondo redondo de 100 ml equipado con Palmitoleato de metilo 1 35
un condensador de reflujo enfriado con agua y una ba- Estearato de metilo 1 65
rra magntica. Agregar 1 O ml de solucin de hidrxido
Oleato de metilo 17
de sodio metanlico 0,5 N (20 mg/ml de hidrxido de
sodio. en metano\) Y. calentar el matraz mezclando bajo Linoleato de metilo 18
cond1c1ones de reflujo durante 15 minutos. Pipetear y Linolenato de metilo ____________ _1,Q__
transferir 5 ml de una solucin de trifluoruro de boro
en metano! (140 mg/ml de trifluoruro de boro en me- Requisitos de aptitud
tano!) a travs del condensador de reflujo en el matraz Resolucin: No menos de 1,5 entre estearato de me-
y continuar la ebullicin durante 2 minutos ms. Agre- tilo y oleato de metilo
gar 5,0 ml de. h~xanos a travs del condensador y con- Factor de asimetra: No ms de 2,0 para cada uno
tinuar la ebull1c1on durante 1 minuto adicional. Enfriar de los picos de steres metlicos
el matraz, retirar el condensador, agregar 15 ml de so- Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0% para
lucin saturada de cloruro de sodio y agregar 1,0 ml cada uno de los picos de steres metlicos
de Solucin de estndar interno. Mientras la solucin Anlisis
est tibia, tapar el matraz y agitar vigorosamente. Pipe- Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
tear y transferir 1,0 ml de la capa superior de hexanos Calcular el porcentaje de cada cido graso en la porcin
a un tubo de ensayo con tapn de vidrio que contenga de Serenoa en Polvo tornada:
una pequea cantidad de sulfato de sodio anhidro. Fil-
trar la solucin y, si fuera necesario, diluir un volumen Resultado= (R11/R1) x (C x V) x (1 /W) x (M, 1/M,2) x
del filtrado con hexanos para obtener un volumen co- 100
nocido. [NOTA-Almacenar esta solucin en un refrige-
rador hasta el momento de su uso.] Ru = cociente de respuesta entre los picos del ster
Sistema cromato9rfico metlico pertinente y estndar interno
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) obtenido de la Solucin muestra
Modo: Cromatografa de Gases R1 = cociente de respuesta entre los picos del ster
Detector: Ionizacin a la llama metlico pertinente y estndar interno
Columna: Capilar de slice fundida, de 0,25 mm x 30 obtenido de la Solucin estndar
C, = concentracin del ster metlico respectivo en
m, recubierta con una pelcula de fase G 1 6 de 0,25
m la Solucin madre del estndar (mg/ml)
Temperatura
V = volumen de la Solucin madre del estndar
Inyector: 250'' usado para preparar la Solucin estndar (ml)
Detector: 300 W = peso de Serenoa en Polvo tomado para
Columna: Ver la Tabla 2. preparar la Solucin muestra (mg)
M, 1 = peso molecular del cido graso pertinente
M2 = peso molecular del ster meti'lico del cido
graso pertinente
Criterios de aceptacin: No menos de 9,0% para la
suma de los porcentajes de todos los cidos grasos. Ver
la Tabla 4 de cidos grasos individuales.
6664 Serenoa / Suplementos Dietticos USP 18

Tabla 4 /3-sitosterol, todos con respecto a la materia anhidra. El

11~--- cidos Grasos 1 Porcentajes Extracto lipoflic.o Lonliene no menos de O, 15% y no ms
r---~l=n=d=iv~i=d=u=al=e=s_ _ _ _ j_______~<-~~)____
j uJo uieiLu No menos de 3,0
J de 0,35% de alcoholes de cadena larga. El Extracto hi-
dro..:lcohlico contiene no 111e11us Je 0,01 % y no ms de
1 O, 1 5% de alcoholes de cadena larga. No contiene sustan-
'
(id<) 1.:wic<J No 111e11m ele 2 O cias agregadas.
_cid()__/'Tlirsti<;ci_ ---------- No 111e11os de 1 2
cido oalmtico No menos de 1 o IDENTIFICACIN
cido linoleico
A. CROMATOGRAFA DE GASES
No menm de O 4
Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido de ci-
cido caoroico No menos de O 2 dos Grasos.
cido caorlico 1---
No menos de O 2 Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de
cido corico No menos de O 2 los 11 picos principales de la Solucin muestra corres-
cido esterico No menos de O 1 ponden a los del cromatograma de la Solucin estndar.
cido linolnico No menos de O 05 Los intervalos de relacin entre la concentracin de
cido oalmitoleico
cido !urico y la concentracin del cido graso respec-
N_QJ!lenos de O 01
~

tivo en el Extracto preparado usando mezclas hidroalc-

holicas o ter de petroleo se indican en la Tabla 7. Los
CONTAMINANTES intervalos de relacin entre la concentracin de cido
MET,ALES PESADOS (231 ): ,No ms de 1 o g/g !urico y la concentracin del cido graso respectivo en
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas el Extracto preparado mediante extraccin supercrtica
(561 ): Cumple con los requisitos . con dixido de carbono se indican en la Tabla 2.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 10 4 ufc/g y el recuento total Tabla 1
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 1 0 2 ufc/g. , Relacin Relacin
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- cidos Grasos Mnima Mxima
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la Corico 90 16
ausencia de Salmonel/a spp. y Estherichia coli y la ausen- Caoroico 85 24
cia de Staphylococcus aureus. Caorlico 85 17 5
Linoleico 50 16
PRUEBAS ESPECFICAS
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa Linolnico 31 5 55
(561): No ms de 2% Mirstica 22 28
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Serenoa en Oleico o 60 1 15
Polvo a 105 durante 2 horas: pierde no ms de 12,0% Pal mtico 28 39
de ,su peso. , Esterico 14 26
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 5,0%, determinado en 1,0 g de Serenoa en
Polvo
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido Tabla 2
(561): No ms de 1,0% Relacin Relacin
-----~-~-
cidos Grasos Mnima Mxima
REQUISITOS ADICIONALES
Corico 90 16
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Caoroico 90 40
permeables. Proteger de la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en Caorlico 85 17 5
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la Linoleico 40 80
pla,nta de donde se obtuvo el artculo. Linolnico 35 60
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11) Mirstica 22 _ljl__
ER Caprato de Metilo USP Oleico o 60 1 15
ER Caproato de Metilo USP
ER Caprilato de Metilo USP Pal mtico 28 39
ER Laurato de Metilo USP Esterico 13 20
ER Linoleato de Metilo USP
ER Linolenato de Metilo USP COMPOSICIN
ER Miristato de Metilo USP CONTENIDO DE CIDOS GRASOS
ER Oleato de Metilo USP Solucin de estndar interno: 12 mg/mL de nonade-
ER Palmitato de Metilo USP cano en hexanos
ER Palmitoleato de Metilo USP Solucin madre del estndar: Disolver cantidades de
ER Estearato de Metilo USP ER Laurato de Metilo USP, ER Oleato de Metilo USP, ER
Miristato de Metilo USP, ER Palmitato de Metilo USP, ER
Linoleato de Metilo USP, ER Caproato de Metilo USP,
ER Caprilato de Metilo USP, ER Caprato de Metilo USP,
ER Palmitoleato de Metilo USP, ER l:stearato de Metilo
Extracto de Serenoa USP y ER Linolenato de Metilo USP en hexanos hasta
obtener concentraciones de cada ster metlico segn
DEFINICIN se indican en la Tabla 3.
E! Extracto de Serenoa se obtiene a partir de Serenod tritu-
rada mediante extraccin con mezclas hidroalcohlicas o Tabla 3
ter de petrleo, o mediante extraccin supercrtica con
dixido de carbono. La relacin entre el material vegetal
crudo inicial y el Extracto est entre 8,0:1 y 14,3:1. El
Extracto contiene no menos de 80,0% de cidos grasos,
ster Metlico_.
Laurato rlC' mPtilo
.....-
~--+ _____ Concentracin
fulq/ml)
5
no menos de 0,2% de esteroles y no menos de O, 1% de Oleato de metilo 1 5
usr 38 Suplementos Dieleticos / Serenoa 6665

Tabla 3 (Contmuac1on)
Concentracin
ster Metlico (m_gimli
---- --
~ ster Metilico

- -- 'ti'_---
Mirista_to de metilo 2 1
, ,
Palmitato de metilo 2 ' Estccl,l\O de metiio
Linoleato de metilo 1 Oleato de metilo
Caoroato de metilo 04 Linoleato de metilo
Caorilato de metilo 04 Linolmato dernetilQ__ _ _ _ _ ~_ _
Caorato de metilo 04
Requisitos de aptitud
Palmitoleato de metilo 04 Resolucin: No menos de 1,5 entre los picos de es-
Estearato de metilo 04 tearato de metilo y oleato de metilo
Linolenato de metilo 04 Factor de asimetna: No ms de 2,0 para cada uno
de los picos de steres metlicos
Solucin estndar: Transferir 1,0 ml de Solucin de es- Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0% para
tndar interno a 5,0 ml de Solucin madre del estndar. cada uno de los picos de steres metlicos
Solucin muestra: Transferir 1 00 mg de Extracto a un Anlisis
vial con tapa de rosca a prueba de presin y agregar Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
3,0 ml de una solucin de cido sulfrico en metano! Calcular el porcentaje de cada cido graso en la porcin
(5 en 100). Calentar a 1 00 en un bao de aceite du- de Extracto tomada:
rante 2 horas, agitando ocasionalmente. Dejar que se
enfre y agregar 1,0 ml de Solucin de estndar interno, Resultado= (Ru/Rs) x (Cs x \!) x (l/W) x (M,,/M,,;) x
10,0 ml de agua, 1 g de cloruro de sodio y 5 ml de 100
hexanos. Agitar bien, dejar que las capas se separen
completamente y usar la capa de hexanos. [NOTA-Al- Ru = cociente de respuesta entre los picos del ster
macenar en un refrigerador hasta el momento de su metlico pertinente y estndar interno de la
uso.] Solucin muestra
Sistema cromato9rfico Rs = cociente de respuesta entre los picos del ster
(Ver Cromatografto (621 ), Aptitud del Sistema.) metlico pertinente y estndar interno de la
Modo: Cromatografa de Gases Solucin estndar
Detector: Ionizacin a la llama Cs = concentracin del ster metlico respectivo en
Columna: Capilar de slice fundida, de 0,25 mm x 30 la Solucin madre del estndar (mg/ml)
m; recubierta con una pelcula de fase Gl 6 de 0,25 V = volumen de la Solucin madre del estndar
m usado para preparar la Solucin estndar (ml)
Temperaturas W = peso de Extracto tomado para preparar la
Inyector: 250 Solucin muestra (mg)
Detector: 300 M,1 = peso molecular del cido graso pertinente
Columna: Ver la Tabla 4. M,2 = peso molecular del ster metlico del cido
graso pertinente
Tabla 4 Criterios de aceptacin: No menos de 80,0% para la
suma de los porcentajes de todos los cidos grasos, con
Tiempo de respecto a la materia anhidra
Espera
(Hold Time)
a la Cambio en la redaccin:
Temperatura Rampa de Temperatura Temperatura
Inicial Temperatura Final Final CONTENIDO DE ALCOHOLES DE CADENA LARGA Y ESTEROLES
n l/min) _Ll_ lmin) Solucin de derivatizacin A: Bis(trimetilsilil)aceta-
~-11.Q___ ~ o 120 3 mida, trimetilsililimidazol y trimetilclorosilano (3:3:2)
Solucin de derivatizacin B: Solucin de derivatizacin
120 50 220 12
A, bis(trimetilsilil)trifluoroacetamida y piridina (1 :1 :1)
Gas transportador: Helio Solucin de estndar interno: 1 O mg/ml de eicosanol
Velocidad de flujo: 1 ml/min y 5 m_g/ml de colesterol en cloroformo
Volumen de inyeccin: 1 pl Solucion madre de aptitud del sistema A: 2 mg/ml
Aptitud del sistema de tetracosanol, de octacosanol, de ER Hexacosanol USP
Muestra: Solucin e>tndar y de triacontanol en cloroformo
[NOTA-Ver la Tabla 5 para los tiempos de retencin Solucin de aptitud del sistema A: Mezclar 5,0 ml de
relativos.] Solucin madre de aptitud del sistema A con 1,0 ml de
Solucin de estndar interno. Evaporar 0,75 ml de esta
solucin hasta sequedad usando una corriente de nitr-
Tabla 5 geno. Disolver el residuo en 1,0 ml de Solucin de deri-
-----~----- - ---- .......-----------
Tiempo de vatizacin By dejar en reposo durante no menos de 15
Retencin minutos a temperatura ambiente.
ster Metlico _ Relativo Solucin madre de aptitud del sistema B: 2 mg/ml
~Q&Q demetilQ_____ _ _ _ O_,]'!_ de campesterol, de estigmasterol y de ER 3-Sitosterol
Caorilato de metilo O 56
USP, y 0,37 mg/ml de estigmastanol
Solucin de aptitud del sistema B: Mezclar 5,0 ml de
CaorMo de metilo 0~ _ _ _ _ _____,
0_,7_6
Solucin madre de aptitud del sistema B con 1,0 ml de
Laurato de metilo O 94 Solucin de estndar interno. Evaporar 0,75 ml de esta
i'Jon_ac:Jecano (est._ndariD_te_r110) 1O solucin hasta sequedad usando una corriente de nitr-
r--M_i_ri~st~at~o_d~e~m~e=til=------+---------J_J_ ____---; geno. Disolver el residuo en 1,0 rnl de Solucin de deri-
,_Ealmitato de metilo 1 3 vatizacin By dejar en reposo durante no menos de 15
Palmitolc;ito de metilo 1 35
minutos a temperatura ambiente.
1
6666 Serenoa / Suplementos Oietritirns
Solucin madre del estndar: O, 75 mq/mL de ER He-
xacosanol USP y 1,4 mg/mL de ER /3-Sitosterol USP en
cloroformo
Solucin estndar Me1clar 5,0 mL de Solucin madre
del estndar con 1,0 mL de Solucin de e1trndnr interno.
lvaporar 0,75 mL de esta solucin hasta sequedad
usando una corriente de nitrgeno. Disolver el residuo
en 1,0 mL de Solucin de derivatizacin By dejar en re-
poso durante no menos de 15 minutos a temperatura
ambiente.
Solucin muestra: Transferir 3, 35 g de Extracto a un
matraz de fondo redondo de 50 ml. Agregar 1,0 mL de
Solucin de estndar interno y evaporar al vaco a una
temperatura que no exceda los 50. Agregar 20 mL de
una solucin preparada disolviendo 1 30 g de hidrxido
de potasio en 200 mL de agua en un matraz volum-
trico de 1000 mL y diluir con metano! a volumen. Co-
nectar un condensador y someter a reflujo en un bao
a 100 durante 2 horas. Transferir cuantitativamente
esta solucin a un matraz volumtrico de 25 mL y diluir
con agua a volumen. Transferir una porcin de 3 mL a
un cartucho 1 que contenga tierra de diatomeas capaz
de retener 3 mL de fase acuosa.
Absorber la solucin en la columna al vaco durante 20
minutos hasta que la columna deje de estar fra. Eluir
los analitos de la columna con 90 mL de cloruro de
metileno y evaporar el eluato hasta sequedad. Disolver
el residuo en 1,0 mL de Solucin de derivatizacin By
dejar en reposo durante no menos de 15 minutos a
temperatura ambiente.
Sistema cromato9rfico
(Ver CromatograflO (621 /, Aptitud del Sistema.)
Modo: Cromatografa de Gases
Detector: Ionizacin a la llama
Columna: Capilar, de 0,2 mm x 25 m; recubierta con
una capa de fase Gl de 0,33 m
Temperaturas
Inyector: 325
Detector: 325
Columna: Ver la Tabla 6.
Tabla 6
------------- ---
Temperatura Rampa de Temperatura
Inicial Temperatura Final
(') (/min) n lmin)
200 __ _Q____ 200
200
~
300
10
Gas transportador: Helio
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Flujo del gas de compensacin: 25 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 L
Tipo de inyeccin: Dividida; relacin de particin,
1:40
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud di>/ sistema A y Solucin
de aptitud del sistema B
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para tetraco-
sanol, hexacosanol, octacosanol y triacontanol son
0,89; 1,00; 1, 15 y 1,36, respectivamente, Solucin de
aptitud del sistema A. Los tiempos de retencin relati-
vos para colesterol, campesterol, estigmasterol, /3-sitos-
terol y estigmastanol son 0,85; 0,92; 0,95; 1,00 y
1,01, respectivamente, So/uoon de aptitud del sistema
B.]
' Un cartucho adecuado es el extrelut NT3, o un cartucho eciuivalenle.
USP 38
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 2 entre los picos de tl-
sistosterol y estigmastanol, Soluoon di> aptitud di>/ sis-
te111u B
Eficiencia de la columna: ~~n rnPnos dt' 200 000 pla-
tos tericos para Pi pico de eicosanol, Solucin de ap-
titud del sistema A; y no menos de 150 000 platos
tericos para el pico de colesterol, Solucin de aptitud
del sistema B
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para cada pico
pertinente, Solucin de aptitud del sistema A; y no ms
de 2,0 para cada pico pertinente, Solucin de aptitud
del sistema B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Identificar las seales correspondientes a los analitos
pertinentes comparndolos con los cromatogramas ob-
tenidm con la Solucin de aptitud del sistema A y la
Solucin de aplitud del sistema B.
Calcular por separado los porcentajes de tetracosanol,
hexacosanol, octacosanol y triacontanol, respectiva-
mente, en la porcin de Extracto tomada:
Resultado = (Ru! Rs) x (Cs x \/) x (1 /W) x 100
Ru = cociente de respuesta entre los picos del
alcohol de cadena larga pertinente y
estndar interno de la Solucin muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
hexacosanol y estndar interno de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de hexacosanol en la Solucin
madre del estndar (mg/mL)
V = volumen de Solucin madre del estndar usada
para preparar la Solucin estndar (mL)
W = peso de Extracto tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Calcular el contenido total de alcoholes de cadena larga
como porcentaje sumando los porcentajes individuales.
Calcular por separado los porcentajes de campesterol,
estigmasterol, f.l-sitosterol y estigmastanol,
respectivamente, en la porcin de Extracto tomada:
---
- -- de 1
Tiempo Resultado= (Ru!Rs) x (C1 x \/) x (l/W) x 100
Espera
(Hold Time) Ru = cociente de respuesta entre los picos del
a la esterol pertinente y estndar interno de la
Temperatura Solucin muestra
Final Rs = cociente de respuesta entre los picos de f.l-
sitosterol y estndar interno de la Solucin
3 -- estndar
35
C = concentracin de f.l-sitosterol en la Solucin
madre del estndar (mg/mL)
V = volumen de Solucin madri> del estndar usada
para preparar la Solucin estndar (mL)
W = peso de Extracto tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
Calcular el contenido total de esteroles como porcentaje
sumando los porcentajes individuales.
Criterios de aceptacin: No menos de 0,2/ri para la
suma de los porcentajes de todos los esteroles y no
menos de O, 1 % de ~-sitosterol, ambos con respecto a
la materia anhidra. El Extracto lipoflico contiene
O, 15%-0, 35% de alcoholes de cadena larga, el Extracto
hidroalcohlico contiene 0,01%-0,15% de alcoholes de
cadena larga con respecto a la materia anhidra e ERR coi-dic-
2014)
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231/: No ms de 40 g/
ge (Oficial 01-dic-201 S)
usr 38
EXTRACTO\ BOTNICOS, RPsirlum rfp Plaguirirlm (565):
Cu111ple cor1 im requi>ilo>.
PRUEBAS ESPECFICAS
DETERMINACIN DE ALCOHOL, Metodo 11 611) (si estuviera
presente): No mas de ) %
GRASAS y ACEITES FIJOS, lpdice de Yodo (401): 40--50
GRASAS y ACEITES FIJOS, Indice de Saponificacin (401):
21 o 250
DETERMINACIN DE AC.UA, Mtodo I (921 ): Se encuentra
no ms de 3% en el Extracto hidroalcohlico.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Cumple con los requisitos
en Extractos Botnicos (565), Envasado y Almacenamiento
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominaci~ ofici~I, la parle de la
planta a partir de I_~ que se preparo el ?rtrculo. La eti-
queta indica tamb1en el contenido de ac1dos grasos Y..
esteroles y la relacin entre el material _v~getal crudo 1111-
cial y el Extracto. Cumple con los requ1s1tos de Extractos
Botanicos, (565) Etiquetado.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Hexacosanol USP
ER Caprato de Metilo USP
ER Caproato de Metilo USP
ER Caprilato de Metilo USP
ER Laurato de Metilo USP
ER Linoleato de Metilo USP
ER Linolenato de Metilo USP
ER Miristato de Metilo USP
ER Oleato de Metilo USP
ER Palmitato de Metilo USP
ER Palmitoleato de Metilo USP
ER Estearato de Metilo USP
ER '3-Sitosterol USP
Serina-ver Serina en Monografas Generales
Ascorbato de Sodio-ver Ascorbato de
Sodio en Monografas Generales
lsoflavonas de Soja, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de lsoflavonas de Soja ccmtienen Extracto en
Polvo de lsoflavonas de Soa. Las Capsulas contienen no
menos de 90,0% y no ms de 1 10,0% de la cantidad
declarada del Extracto, representados por _la suma del_
contenido de las isoflavonas daidzina, gl1c1t1na, gen1st1na y
una o ms de las siguientes isoflavonas: malonil daidzina,
malon1I gl1c1trna, malonrl genisti~a, ac~til ~aidzina, ace~il
glicitina, acetil genistina, daidze1na, gl1c1te1na y ger11ste1na.
IDENTIFICACIN
Los tiempos de retencin de los picos de daidzina, glici-
tina y genistina en el cromatograma de la Soluoon mues-
tra corresponden a los de las Soluciones estndar A-E,
segn se obtienen en Contenido de lsoflavonas.
CONTENIDO
CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
Diluyente: Acetonitrilo y agua (2:3) . interno de polietileno.
Solucin de estndar interno: 2,0 mg/mL de ER Ap1-
genina USP en dimetil sulfxido. [NOTA-Esta solucin
es estable durante 6 meses cuando se almacena a tem-
Suplctncntcs Dietticos / SojJ 6667
peratura ambiente en un envase de vidrio resistente a la
luL cerrado lierrnlica111enle.J
Solucin de verificacin de los tiempos de retencin
de acetiln-1alonil isoflavonas 1. Caie11La1 1 g Je CR
Soa en Polvo Desgrasada USP en una Cipsula de porce-
lana poco profunda a l 20c durante 1 2_0 minutos y
transferir a un tubo de centrifuga, equipado con una
tapa de rosca de PTFE o_ con recubrimi~nto interno de
polielileno. Agregar lo s1gu1ente en volumenes exactos:
O 5 mL de Solucin de estndar interno, 1O mL de aceto-
nitrilo (mezclar por rotacin suave hasta dispersar) y
6,0 mL de agua. Tapar, agitar en_ un agitador orbital o
de movimiento tipo mueca (wrist-act1on) durante_ 60
minutos, agregar 8,5 mL de agua, mezclar, y c~ntrifu
gar. Pasar una porcin del sobrenadante a traves de
una membrana de propileno hidrfilo o de PVDF con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros 5 mL del filtrado. .,
Solucin de verificacin de los tiempos de retenc1on
de acetil/malonil isoflavonas 2: Transferir 1 g d~ ER
Soja en Polvo Desgrasada USP a un tubo de centrifuga!
equipado con una tap_a de rosca de PTFE o c~n recubri-
miento interno de pol1etileno. Agreg.~r lo s1gu~ente en
volmenes exactos: O 5 mL de Soluoon de estandar
interno, 1O mL de acetonitrilo (mezclar por rotaci~
suave hasta dispersar) y 6,0 mL de .agua. Tapar, a_g1tar
en un agitador orbital o de mov1m1ento tipo muneca
(wrist-action) durante 60 minutos, agregar 8,5 mL de
agua, mezclar, y centrifugar. Pasar una porcin .del so-.
brenadante a travs de una membrana de propileno hi-
drfilo o de PVDF con un tamao de poro de 0,45 m
o menor, desechando los prim.eros 5 mL del filtrado.
[NOTA-Todas las Soluciones estandar y la Soluoon madre
del estndar son estables durante 2 meses cuando se
almacenan a temperatura ambiente en un envase de
vidrio resistente a la luz cerrado hermticamente.]
Solucin madre del estndar: Contiene lo siguiente en
dimetil sulfxido: 2,0 mg/mL de ER Daidzina USP,
0,5 mg/mL de ER Glicitina USP, 2!0 rn_g/mL de ER Ge-
nistina USP, 0,2 mg/mL de ER Da1dze1na USP, 0,2 m91
mL de ER Glicitena USP y 0,2 mg/mL de ER Gen1ste1na
USP
Solucin estndar A: Agregar 0,5 rnL de Solucin ma-
dre del estndar y 0,5 mL de Solucion de estndar mterno
a un matraz volumtrico de 25 mL, y diluir con D//u-
yente a volumen. .,
Solucin estndar B: Agregar 1,0 mL de Soluoon madre
del estndar y 0,5 mL de Solucin de estndar int_erno a
un matraz volumtrico de 25 mL, y diluir con Diluyente
a volumen.
Solucin estndar C: Agregar 1,5 mL de Solucin ma-
dre del estndar y 0,5 mL de Solucin de estndar i_nterno
a un matraz volumtrico de 25 mL, y diluir con Dilu-
yente a volumen. . .,
Solucin estndar D: Agregar 2,0 mL de Soluc1on ma-
dre del estndar y 0,5 rnL de Solucin de estndar interno
a un matraz volumtrico de 25 mi. y diluir con Dilu-
yente a volumen. .,
Solucin estndar E: Agregar 2.5 mL de Soluc1on madre
del estndar y 0,5 mL de Solucin de estndar int_erno a
un matraz volumtrico de 25 ml, y diluir con D//uyente
a volumen.
Solucin muestra
Cpsulas de gelatina dura: Pe~ar y reducir a polvo
tino el contenido de no menos de 20 Capsulas. Trans-
ferir una cantidad, pesada con exactitud, del polvo
equivalente a no ms de 5 mg de isoflavonas, a un
tubo de centrfuga de vidrio adecuado, equipado con
una tapa de rosca de PTFE o con recubrimiento
.
Cpsulas de gelatina l..ilanda: Pe:-ar y l101TrOl:Jr11zar no
menos de 20 Cpsulas. Transferir una cantidad, pesada
con exactitud, de la mezcla equivalente ? no mas _de_
5 mg de isoflavonas, a un tubo de centrifuga de v1dno
6668 Soja / Suplementos Dietticos
adecuado, equipado con una tilpa dP rosca de PTFE o
con recubrimiento interno de polietileno.
Agregar lo siguiente en volmenes exactos al tubo de
centrfuga: 0,5 mL de Solucin J.: e;,lu11Jw inlerno,
1O mi. rlP acetonitrilo (mezclar por rotacin suave
hasta dispersar) y 6,0 mL de agua. Tapar, agitar en un
agitador orbital o de movimiento tipo mueca (wrist-
action) durante 60 minutos, agregar 8,5 mL de agua,
mezclar, y centrifugar. Pasar una porcin del sobrena-
dante a travs de una membrana de propileno hidr-
filo o de PVDF con un tamao de poro de 0,45 m o
menor, desechando los primeros 5 mL del filtrado.
[NOTA-No usar filtros de nailon. Analizar muestras
que contengan cantidades significativas de acetil y/o
malonil isoflavonas dentro de las 4 horas de su
preparacin.J
Solucin A: Acido fosfrico al 0,05% en agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) (%) (%)
o 90 10
60 70 30
- 60 5 10 90
~
IUd._ 10 90
64 90 10
74 90 10
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 260 nm
Columna: 3,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 0,65 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar C, Solucin de verificacin
de los tiempos de retencin de acetil/malonil isoflavonas
7 y Solucion de verificacin de los tiempos de retencin
de acetil/malonil isoflavonas 2
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: Los cromato9ra-
mas obtenidos de la Solucin estndar C, Solucion de
verificacin de Jos tiempos de retencin de acetil/malonil
isof/avonas 7 y Solucion de verificacin de Jos tiempos
de retencin de acetil/malonil isof/avonas 2 son simila-
res a los Cromatogramas de Referencia provistos con
el ER Soja en Polvo Desgrasada USP.
Factor de asimetra: No menos de 0,8 y no ms de
1,2 para el pico de daidzina, Solucin estndar C
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de genistina en inyecciones repetidas, Solucin
estndar e
Resolucin: No menos de 1,0 entre acetil glicitina y
malonil genistina, y no menos de 2,0 entre cualquier
otro par consecutivo de picos de isoflavonas, Solucin
de verificacin de los tiempos de retencin de acetil/
malonil isoflavonas 2
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O, Solucin estn-
dar E, Solucin de verificacin de los tiempos de retencin
de acetil/malonil isoflavonas 7, Solucin de verificacin
de los tiempos de retencin de acetil/malonil isoflavonas
2 y Solucion muestra
Identificar los picos de daidzina, glicitina, genistina,
daidzena, glicitena y genistena en los cromatogra-
mas de las Soluciones estandar A-E comparando el
Cromatograma de Referencia provisto con el Estndar
de Referencia USP usado. Medir las reas de los picos
de los analitos y el estndar interno. Determinar el
USP 38
cociente entre las reas de los picos de cada analito y
el estndar interno. Graficar los cocientes de los picos
pertinentes en funcin de las concentraciones, en
mg/mL, de cada analito obtenido a partir de las So/u-
riones t'S!r1Clw A-E y determinar la iinea de regresin
mediante un anlisis de cuadrados mnimos. El coefi-
ciente de correlacin para cada lnea de regresin es
no menos de 0,999. A partir de las grficas obteni-
das, determinar la concentracin, C, en mg/mL, de
daidzina, glicitina y genistina, adems de daidzena,
glicitena y genistena, si estuvieran presentes, en la
Solucin muestra. Identificar los picos de malonil daid-
zina, malonil glicitina, acetil daidzina, acetil glicitina,
malonil genistina y acetil genistina en los cromatogra-
mas de las Soluciones de verificacin de Jos tiempos de
retencin de acetil/malonil isof/avonas comparando los
Cromatogramas de Referencia provistos con el ER
Soja en Polvo Desgrasada USP. A partir de las grficas
obtenidas de daidzina, glicitina y genistina, determi-
nar la concentracin, C, en mg/mL, de los derivados
de malonil y acetil correspondientes, si estuvieran
presentes, en la Solucin muestra:
Resultado = Co x F
C0 = concentracin obtenida a partir de la grfica
pertinente (mg/mL)
F = factor de conversin de cada analito
(1,207 para malonil daidzina; 1, 101 para
acetil daidzina; 1, 193 para malonil glicitina;
1,094 para acetil glicitina; 1, 199 para malonil
genistina y 1,097 para acetil genistina)
Calcular la cantidad, T, en mg, de isoflavonas totales
en la porcin del contenido de Cpsulas tomada:
Resultado =V x CT
V = volumen final de la Solucin muestra (mL)
C1 = suma de las concentraciones (C) (mg/mL) de
todas las isoflavonas pertinentes
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo de
lsoflavonas de Soja con respecto a la cantidad
declarada:
Resultado = T x (Awr/W) x (1 00/LE) x (1 00/L)
T = contenido de isoflavonas totales en la porcin
del contenido de Cpsulas tomada (mg)
Awr = peso promedio del contenido de Cpsulas
(mg/Cpsula)
W = peso de la porcin del contenido de Cpsulas
tomada (mg)
LE = contenido de isoflavonas totales, mg, en
100 mg del Extracto usado para preparar las
Cpsulas
L = cantidad de Extracto por Cpsula segn la
cantidad declarada (mg/Capsula)
Criterios de aceptacin: No menos de 90,0% y no
ms de 110,0% de la cantidad declarada de Extracto,
representados por la suma del contenido de las isoflavo-
nas daidzina, glicitina, genistina y una o ms de las si-
guientes isoflavonas: malonil daidzina, malonil glicitina,
malonil genistina, acetil daidzina, acetil 9licitina, acetil
genistina, daidzena, glicitena y geniste1na
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos depesintegracin
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g.
El recuenlo total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 1 ufc/g.
USP 38
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS <2022): Las
Cpsulas cumplen con los reyuisilos de las pruebas para
determinar la ausencia de Salmonella spp. y Escherichia
wli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del cul se prepararon las Cpsulas. Etiguetar indi-
cando la cantidad de Extracto, en mg, por Capsula. Eti-
quetar indicando el porcentaje de isoflavonas en el Ex-
tras:to usado para preparar las Cpsulas.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Apigenina USP
ER Daidzena USP
ER Daidzina USP
ER Soja en Polvo Desgrasada USP
ER Genistena USP
ER Genistina USP
ER Glicitena USP
ER Glicitina USP
Extracto en Polvo de lsoflavonas de
Soja
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de lsoflavonas de Soja se prepara a
partir de las semillas de Glycine max Merr. (Fam. Faba-
ceae) mediante extraccin con agua o mezclas hidroalco-
hlicas. Contiene no menos de 90,0% y no ms de
11 0,0% de la cantidad declarada de isoflavonas, calculado
con respecto al extracto seco corno la suma de daidzina,
glicitina, genistina y una o ms de las siguientes isoflavo-
nas: malonil daidzina, malonil glicitina, malonil genistina,
acetil daidzina, acetil glicitina, acetil genistina, daidzena,
glicitena y genistena.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de lsoflavonas.
Criterios de aceptacin: Los tiempos de retencin de
los picos de la daidzina, glicitina y genistina de la Solu-
cin muestra corresponden con los de las Soluciones es-
tndar A-E.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
Diluyente: Acetonitrilo y agua (2:3)
Solucin de estndar interno: 2,0 rng/rnL de ER Api-
genina USP en dirnetil sulfxido. [NOTA-Esta solucin
se mantiene estable durante 6 meses cuando se alma-
cena a temperatura ambiente en un envase de vidrio,
hermticamente cerrado y resistente a la luz.]
Solucin de aptitud del sistema 1: Transferir 1 g de ER
Soja en Polvo Desgrasada USP a un tubo de centrfuga,
equipado con una tapa de rosca de PTFE o con recubri-
miento interno de polietileno. Agregar lo siguiente en
volmenes exactos: 0,5 rnL de Solucin de estndar
interno, 1 O rnL de acetonitrilo (agitar por rotacin suave
para dispersar) y 6,0 rnl de agua. Tapar, agitar en un
agitador orbital o de movimiento tipo mueca (wrist
action) durante 60 minutos, agregar 8,5 ml de agua y
centrifugar. Pasar una porcin del sobrenadante a travs
de una membrana de PVDF o de propileno hidrfilo
con un tamao de poro de 0,45 m o menor, dese-
chando los primeros 5 ml del filtrado.
Solucin de aptitud del sistema 2: Calentar 1 g de ER
Soja en Polvo Desgrasada USP en una cpsula de porce-
Suplementos OietPti<n' .1 Soja 6669
lana de poca profundidad a 1 20 durante 120 minutos
y transferir a un tubo de centrfuga, equipado con una
tapa de rosca de PTFE o con recubrimiento interno de
polictileno. Agregar lo siguiente en volmenes exactos:
0,5 ml de Snlurin dP P<;tndnr interno, 1 O ml de aceto-
nitrilo (agitar por rotacin suave para dispersar) y
6,0 ml de agua. Tapar, agitar en un agitador orbital o
de movimiento tipo mueca (wrist action) durante 60
minutos, agregar 8,5 ml de agua y centrifugar. Pasar
una porcin del sobrenadante a travs de una mem-
brana de PVDF o de propileno hidrfilo con un tamao
de poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
5 ml del filtrado.
[NOTA-La Solucin madre del estndar y las Soluciones
estndar A-E se mantienen estables durante 2 meses
cuando se almacenan a temperatura ambiente en un
envase de vidrio, hermticamente cerrado y resistente
a la luz.]
Solucin madre del estndar: Contiene lo siguiente en
dimetil sulfxido: 2,0 mg/ml de ER Daidzina USP,
0,5 mg/ml de ER Glicitina USP, 2,0 mg/ml de ER Ge-
nistina USP, 0,2 mg/ml de ER Daidzena USP, 0,2 m~/
ml de ER Glicitena USP y 0,2 mg/ml de ER Geniste1na
USP.
Solucin estndar A: Agregar 0,5 ml de Solucin ma-
dre del estndar y 0,5 ml de Solucin de estndar interno
a un matraz volumtrico de 25 ml, y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Solucin estndar B: Agregar 1,0 ml de Solucin madre
del estndar y 0,5 ml de Solucin de estndar interno a
un matraz volumtrico de 25 ml, y diluir con Diluyente
a volumen.
Solucin estndar C: Agregar 1,5 ml de Solucin ma-
dre del estndar y 0,5 ml de Solucin de estndar interno
a un matraz volumtrico de 25 ml, y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Solucin estndar D: Agregar 2,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar y 0,5 ml de Solucin de estndar interno
a un matraz volumtrico de 25 ml, y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Solucin estndar E: Agregar 2,5 ml de Solucin madre
del estndar y 0,5 ml de Solucin de estndar interno a
un matraz volumtrico de 25 ml, y diluir con Diluyente
a volumen.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Extracto
en Polvo de lsoflavonas de Soja, equivalente a no ms
de 5 mg de isoflavonas, a un tubo de centrfuga de
30 ml de vidrio, equipado con una tapa de rosca de
PTFE o con recubrimiento interno de polietileno. Agre-
gar lo siguiente en volmenes exactos: 0,5 ml de Solu-
cin de estndar interno, 1 O ml de acetonitrilo (agitar
por rotacin suave para dispersar) y 6,0 ml de agua.
Tapar, agitar en un agitador orbital o de movimiento
tipo mueca (wrist action) durante 60 minutos, agregar
8,5 ml de agua y centrifugar. Pasar una porcin del
sobrenadante a travs de una membrana de PVDF o de
propileno hidrfilo con un tamao de poro de 0,45 m
o menor, desechando los primeros 5 ml del filtrado.
[NOTA-No usar filtros de nailon. Analizar las muestras
que contengan cantidades significativas de acetil y/o
malonil isoflavonas dentro de las 4 horas de su
preparacin.],
Solucin A: Acido fosfrico al 0,05% en agua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la Tabla 1.
Tabla 1
r----
Tiempo Solucin A Solucin B
min lo lo
1 o 1 'ZQ_ ____1_0__
~ l
60 70 30
6(),2_ 10 90
63,5 10 __L ___ 90
6670 Soja / Suplemrntns Dirti?ti<n~
_ _ _T_a_b_la_l (Contmu_a_c_m_n_J- - - - - - - -
LT~=:~ Sol~~= A Sol~~)~~" ~--J
f-------- 64 90 1o
/4 90 __J_ --~]~---
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografia (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 260 nm
Columna: 3,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 40'
Velocidad de flujo: 0,65 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
[NOTA-Se debe cumplir con las pruebas de Aptitud del
sistema 7 y 2.]
Aptitud del sistema 1
Muestra: Solucin estndar C
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar C es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de estndar de refe-
rencia USP usado para las isoflavonas mencionadas.
Factor de asimetra: No menos de 0,8 y no ms de
1,2 para el pico de daidzina
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de genistina
Aptitud del sistema 2
Muestras: Solucin de aptitud del sistema 7 y Solucin
de aptitud del sistema 2
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: Los cromatogra-
mas de la Solucin de aptitud del sistema 7 y la Solu-
cin de aptitud del sistema 2 son similares a los provis-
tos con el lote de ER Soja en Polvo Desgrasada USP
usado.
Resolucin: No menos de 1,0 entre los picos de ace-
til glicitina y malonil genistina, y no menos de 2,0
entre cualquier otro par consecutivo de picos de
isoflavonas
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar A-E y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de los analitos y del estn-
dar interno. Determinar el cociente entre las reas de
los picos de cada analito y del estndar interno. Grafi-
car los cocientes de los picos pertinentes en funcin
de las concentraciones, en mg/ml, de cada analito ob-
tenido de las Soluciones estndar A-E y determinar la
lnea de regresin mediante un anlisis de cuadrados
mnimos. El coeficiente de correlacin para cada lnea
de regresin es no menos de 0,999. A partir de las
grficas as obtenidas, determinar la concentracin, C,
en mg/ml, del analito pertinente en la Solucin
muestra.
Calcular por separado los porcentajes de daidzina, glici-
tina y genistina, y de daidzena, glicitena y genistena,
si estuvieran presentes, en la porcin de Extracto en
Polvo de lsoflavonas de Soja tomada:
Resultado= (C/W) x V x 100
C = concentracin de cada isoflavona, segn se
determin anteriormente, para la Solucin
muestra (mg/ml)
W = peso de Extracto en Polvo de lsoflavonas de
Soja tomado para preparar la Solucin
muestra (mg)
V = volumen de sol1 irin final de la Solucin
muestra (ml)
Identificar los picos de malonil daidzina, malonil
glicitina, acetil daidzina, acetll glc1t1na, malonil
genistina y acetil genistina, por comparacin con los
cromatogramas de referencia provistos con ER Soja en
Polvo Desgr;isada USP y por la diferencia en nmero
de picos enlre lcJ Suluciun Je aplilud del s1slema 1 y la
Solucion de apliluJ del 1istema 2. [NoJA--Los derivados
de malonilo ,e LUI 1vie1le11 e11 der 1vadm de acetiio por
calentamiento. Los derivado~ de malonilo ;nn ms
abundantes en la Soluin de aptitud del sistema 7 y los
derivados de acetilo son ms abundantes en la Solu-
cin de aptitud del sistema 2.] A partir de las grficas
as obtenidas para dadzina, glicitina y genistina, deter-
minar la concentracin correspondiente, C, en mg/ml,
de los derivados de malonilo y de acetilo, si estuvieran
presentes, en la Solucin muestra. . .
Calcular por separado los porcentajes de malon1I dard-
zina, acetil daidzina, malonil glicitina, acetil glicitina,
malonil genistina y acetil genistina en la porcin de
Extracto en Polvo de lsoflavonas de Soja tomada:
Resultado= (C/W) x V x F x 100
C = concentracin de cada isoflavona, segn se
determin anteriormente, para la Solucin
muestra (mg/ml)
W = peso de Extracto en Polvo de lsoflavonas de
Soja tomado para preparar la Solucin
muestra (mg)
V = volumen de solucin final de Solucin muestra
(ml)
F = factor de conversin: malonil daidzina, 1,207;
acetil daidzina, 1, 101; malonil glicitina,
1, 193; acetil glicitina, 1,094; malonil
genistina, 1, 199 y acetil genistina, 1,097
Calcular el porcentaje de isoflavonas en la porcin de
Extracto en Polvo de lsoflavonas de Soja tomada (P),
sumando los porcentajes calculados para los analitos
presentes.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
isoflavonas en la porcin de Extracto en Polvo de
lsoflavonas de Soja tomada:
Resultado = (PI L) x 100
P = suma de los porcentajes individuales de cada
isoflavona en el Extracto en Polvo de
lsoflavonas de Soja tomada, segn se calcul
anteriormente (%)
L = cantidad declarada de isoflavonas en el
Extracto en Polvo de lsoflavonas de Soja (%)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% con respecto
al extracto seco
CONTAMINANTES
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231 ): No ms de 1o g/
ge (9ficial 01-dic-2015) , .
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Prueba de Aflatoxmas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO <2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 oi ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022):
Cumple con los requisitos de las pruebas para .determinar
la ausencia de Salmonella spp. y [5chench10 ca/!.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g a 1 30 durante 2
horas: pierde no ms de 7,0% de su peso.
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos en Disolven-
tes Residuales y Residuos de f'laguicidas en Extn1cluo Bul-
nicos (565).
lJSP rn
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Comervdr en envdses im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente conlruidlia.
ETIQUETADO: l n ctillurt inrlicJ e! nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta a partir de la que se prepar el artculo. La eti-
queta tambin indica el contenido de isoflavonas. Cum-
ple con los otros requisitos de etiquetado en Extractos
Botnicos (565).
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Apigenina USP
ER Daidzena USP
ER Daidzina USP
ER Soja en Polvo Desgrasada USP
ER Genistena LJSP
ER Genistina USP
ER Glicitena USP
ER Glicitina USP
lsoflavonas de Soja, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de lsoflavonas de Soja contienen Extracto en
Polvo de lsoflavonas de Soja. Las Tabletas contienen no
menos de 90,0% y no ms de 11 0,0% de la cantidad
declarada del Extracto, representados por la suma del
contenido de las isoflavonas daidzina, glicitina, genistina y
una o ms de las siguientes isoflavonas: malonil daidzina,
malonil glicitina, malonil genistina, acetil daidzina, acetil
glicitina, acetil genistina, daidzena, glicitena y genistena.
IDENTIFICACIN
Los tiempos de retencin de los picos de daidzina, glici-
tina y genistina en el cromatograma de la Solucin mues-
tra corresponden a los de las Soluciones estndar A-E,
segn se obtienen en Contenido de lsoflavonas.
CONTENIDO
CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
Diluyente: Acetonitrilo y agua (2:3)
Solucin de estndar interno: 2,0 mg/mL de ER Api-
genina USP en dimetil sulfxido. [NOTA-Esta solucin
es estable durante 6 meses cuando se almacena a tem-
peratura ambiente en un recipiente de vidrio resistente
a la luz cerrado hermticamente.]
Solucin de verificacin de los tiempos de retencin
de acetil/malonil isoflavonas 1: Calentar 1 g de ER
Soja en Polvo Desgrasada USP en una cpsula de porce-
lana poco profunda a 120 durante 120 minutos y
transferir a un tubo de centrfuga, equipado con una
tapa de rosca de PTFE o con recubrimiento interno de
polietileno. Agregar lo siguiente en volmenes exactos:
0,5 mL de Solucin de estndar interno, 1 O mL de aceto-
nitrilo (mezclar por rotacin suave hasta dispersar) y
6,0 ml de agua. Tapar, agitar en un agitador orbital o
de movimiento tipo mueca (wrist-action) durante 60
minutos, agregar 8,5 mL de agua, mezclar, y centrifu-
gar. Pasar una porcin del sobrenadante a travs de
una membrana de propileno hidrfilo o de PVDF con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
los primeros 5 ml del tiltrado.
Solucin de verificacin de los tiempos de retencin
de acetil/malonil isoflavonas 2: Transferir 1 g de ER
Soja Pn Polvo DPsgrasada USP a un tubo de centrfuga,
equipado con una tapa de rosca de PTFE o con recubri-
miento interno de polietileno. Agregar lo siguiente en
volmenes exactm: 0,5 rnl de Sulucin ut' t'stndar
interno, 1 O ml de acetonitrilo (mezclar por rotacin
suave hasta dispersar) y 6,0 mL de agua. Tapar, agitar
Sup!erncntos OielUco~ / Sujd 6671
en un agitador orbital o de mov1m1ento tipo rnuneca
(wrisl-dllio11) du1d11te 60 rni11utos, agregar 8,5 ml de
agua, mezclar, y centrifugar. Pasar una porcin del so-
brenadante a lavs de una rTtL:iTibJilJ de prvpilcnc hi
drfilo o de PVDF con un tamano de poro de 0,45 1m
o menor, desechando los primeros 5 ml del filtrado.
[NOTA-Todas las Soluciones estnJur y la Solucin madre
del estndar son estables durante 2 meses cuando se
almacenan a temperatura ambiente en un recipiente de
vidrio resistente a la luz cerrado hermticamente.]
Solucin madre del estndar: Contiene lo siguiente en
dimetil sulfxido: 2,0 mg/ml de ER Daidzina USP,
0,5 mg/ml de ER Glicitina USP, 2,0 mg/ml de ER Ge-
nistina USP, 0,2 mg/mL de ER Daidzena USP, 0,2 mg/
mL de ER Glicitena USP y 0,2 mg/ml de ER Geniste1na
USP
Solucin estndar A: Agregar 0,5 ml de Solucin ma-
dre del estndar y 0,5 ml de Solucin de estndar interno
a un matraz volumtrico de 25 mL, y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Solucin estndar B: Agregar 1,0 ml de Solucin madre
del estndar y 0,5 ml de Solucin de estndar interno a
un matraz volumtrico de 25 ml, y diluir con Diluyente
a volumen.
Solucin estndar C: Agregar 1,5 mL de Solucin ma-
dre del estndar y 0,5 mL de Solucin de estandar interno
a un matraz volumtrico de 25 ml, y diluir con Dilu-
yente a volumen. -
Solucin estndar D: Agregar 2,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar y 0,5 mL de Solucin de estndar interno
a un matraz volumtrico de 25 mL, y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Solucin estndar E: Agregar 2,5 mL de Solucin madre
del estndar y 0,5 ml de Solucin de estndar interno a
un matraz volumtrico de 25 mL, y diluir con Diluyente
a volumen.
Solucin muestra: Pesar con exactitud y reducir a
polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una can-
tidad, pesada con exactitud, del polvo equivalente a no
ms de 5 mg de isoflavonas, a un tubo de centrtuga de
vidrio de 30 mL, equipado con una tapa de rosca de
PTFE o con recubrimiento interno de polietileno. Agre-
gar lo siguiente en volmenes exactos: 0,5 ml de Solu-
cin de estndar interno, 1 O mL de acetonitrilo (mezclar
por rotacin suave hasta dispersar) y 6,0 ml de agua.
Tapar, agitar en un agitador orbital o de movimiento
tipo mueca (wrist-action) durante 60 minutos, agregar
8,5 ml de agua, mezclar, y centrifugar. Pasar una por-
cin del sobrenadante a travs de una membrana de
propileno hidrfilo o de PVDF con un tamao de poro
de 0,45 m o menor, desechando los primeros 5 mL
del filtrado. [NOTA-No usar filtros de nailon. Analizar
muestras que contengan cantidades significativas de
acetil y/o malonil isoflavonas dentro de las 4 horas de
su preparaci,n.]
Solucin A: Acido fosfrico al O,OYYo en Jgua
Solucin B: Acetonitrilo
Fase mvil: Ver la tabla de gradiente~ siguiente.
---T
Tiempo
(min) ___ _
o
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf10 \b2 /, 11pwud del S111Pmu_)
6672 Soja /Suplementos Dietticos
Modo: HPLC
Detector: UV 260 nm
Columna: 3,0 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 0,65 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar C, Solucin de verificacin
de los tiempos de retencin de acetil/malonil isoflavonas
7 y Solucion de verificacin de los tiempos de retencin
de acetil/malonil isoflavonas 2
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: Los cromato9ra-
mas obtenidos de la Solucin estndar C, Solucion de
verificacin de los tiempos de retencin de acetil/malonil
isof/avonas 7 y Solucion de verificacin de los tiempos
de retencin de acetil/malonil isoflavonas 2 son simila-
res a los Cromatogramas de Referencia provistos con
el ER Soja en Polvo Desgrasada USP.
Factor de asimetra: No menos de 0,8 y no ms de
1,2 para el pico de daidzina, Solucin estndar C
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de genistina en inyecciones repetidas, Solucin
estndar e Awr
Resolucin: No menos de 1,0 entre acetil glicitina y
malonil genistina, y no menos de 2,0 entre cualquier
otro par consecutivo de picos de isoflavonas, Solucin
de verificacin de los tiempos de retencin de acetil/
malonil isoflavonas 2
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B, So-
lucin estndar C, Solucin estndar O, Solucin estn-
dar E, Solucin de verificacin de los tiempos de retencin
de acetil/malonil isoflavonas 1, Solucin de verificacin
de los tiempos de retencin de acetil/malonil isoflavonas
2 y Solucion muestra
Identificar los picos de daidzina, glicitina, genistina,
daidzena, glicitena y genistena en los cromatogra-
mas de las Soluciones estndar A-E comparando con
el Cromatograma de Referencia provisto con el Estn-
dar de Referencia USP usado. Medir las reas de los
picos de los analitos y el estndar interno. Determinar
el cociente entre las reas de los picos de cada ana-
lito y el estndar interno. Graficar los cocientes de los
picos pertinentes en funcin de las concentraciones,
en mg/mL, de cada analito obtenido a partir de las
Soluciones estndar A-E y determinar la lnea de regre-
sin mediante un anlisis de cuadrados mnimos. El
coeficiente de correlacin para cada lnea de regre-
sin es no menos de 0,999. A partir de las grficas
obtenidas, determinar la concentracin, C, en
mg/mL, de daidzina, glicitina y genistina, adems de
daidzena, glicitena y genistena, si estuvieran presen-
tes, en la Solucin muestra. Identificar los picos de
malonil daidzina, malonil glicitina, acetil daidzina,
acetil glicitina, malonil genistina y acetil genistina en
los cromatogramas de las Soluciones de verificacin de
los tiempos de retencin de acetil/malonil isoflavonas
comparando con los Cromatogramas de Referencia
provistos con el ER Soja en Polvo Desgrasada USP. A
partir de las grficas obtenidas de daidzina, glicitina y
genistina, determinar la concentracin, C, en mg/mL,
de los derivados de malonil y acetil correspondientes,
si estuvieran presentes, en la Solucin muestra:
Resultado = e, X F
USP 38
C. =concentracin obtenida a partir de la grfica
pertinente (mg/ml)
F = factor de conversin de cada analito
( 1,207 para malon1I da1dz1na; 1, 101 para
acetil daidzina; 1, 193 para rnalonil glicilina;
1,094 para acetil glicitina; 1, 199 para malonil
genistina y 1,097 para acetil genistina)
Calcular la cantidad, T, en mg, de isoflavonas totales en la
porcin de Tabletas tomada:
Resultado = V x C1
V = volumen final de la Solucin muestra (ml)
Cr = suma de las concentraciones (C) (mg/mL) de
todas las isoflavonas pertinentes
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo de
lsoflavonas de Soja con respecto a la cantidad
declarada:
Resultado = T X (Awr/W) X (1 00/LE) X (1 00/L)
T = contenido de isoflavonas totales en la porcin
de Tabletas tomada (mg)
= peso promedio de Tabletas (mg/Tableta)
W = peso de la porcin de Tabletas tomada (mg)
LE = contenido de isoflavonas totales, mg, en
1 00 mg del Extracto usado para preparar las
Tabletas
L = cantidad de Extracto por Tableta segn la
cantidad declarada (mg/Tableta)
Criterios de aceptacin: No menos de 90,0% y no
ms de 110,0% de la cantidad declarada de Extracto,
representados por la suma del contenido de las isoflavo-
nas daidzina, glicitina, genistina y una o ms de las si-
guientes isoflavonas: malonil daidzina, malonil glicitina,
malonil genistina, acetil daidzina, acetil ,91icitina, acetil
genistina, daidzena, glicitena y geniste1na
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Desintegracin
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Las
Tabletas cumplen con los requisitos de las pruebas para
determinar la ausencia de Salmonella spp. y Escherichia
coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz y almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del cul se prepararon las Tabletas. Etiquetar indi-
cando la cantidad de Extracto, en mg, por Tableta. Eti-
quetar indicando el contenido, como porcentaje, de iso-
flavonas en el Extracto usado para preparar las Tabletas.
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP !11 \
ER Apigenina USP ' '
ER Daidzena USP
ER Da1dzina USP
ER SojJ en Polvo DcsgrJsJdJ USP
ER Genistena USP
ER Genistina USP
ER Glicitena USP
ER Glicitina USP
Tanaceto
DEFINICIN
El Tanaceto consis~e en las hojas secas de Tanacetum parthe-
mum (L.) Sch. B1p. (Fam. Asteraceae), recogidas cuando la
planta est en floracin.
IDENTIFICACIN
A. El -~iempo de retencin del pico de partenolida de la
SoluCton muestra corresponde al de la Solucin estndar
segn se obtienen en la prueba de Contenido de ' Solucin madre de la muestra: Reducir 1 00 g de Tana-
Partenolida.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1,0 mg/ml de ER Partenolida USP
en metano!
Solucin muestra: Transferir 1,0 g de Tanaceto redu-
cido a polvo fino a un matraz adecuado. Agregar 20 ml
de metano!, calentar el matraz sobre un bao de agua
~ 60 dura_nte 15_ !llinutos,_ enfriar y filtrar. Evaporar el
filtrado bajo pres1on reducida hasta sequedad y disolver
el residuo en 2,0 ml de metano!.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,5 mm, por lo regular de 20 cm de longitud
Volumen de aplicacin: 20 L
Fase mvil: Tolueno y acetona (85: 15)
Solucin reveladora: Solucin al 0,5% de vainillina en
un,a. r;iezcla de cido sulfrico y alcohol (4:1)
Anahs1s
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatogramas hasta que el frente de la
fase mvil haya recorrido tres cuartos de la longitud
de la placa. Retirar la placa de la cmara cromatogr-
f1ca, marcar el frente de la fase mvil y dejar que se
seque al aire. Rociar la placa con Solucin reveladora.
D_espus de 5 minutos, observar la placa bajo luz
diurna.
Criterios de aceptacin: Una mancha azul en la parte
media del cromatograma de la Solucin muestra que co-
rresponde en color y valor RF a la mancha principal ob-
tenida en el cromatograma de la Solucin estndar in-
dica la presencia de partenolida. El tercio inferior del
cromatograma de la Solucin muestra puede presentar
dos manchas rosadas y el tercio superior puede presen-
tar una mancha rosada.
C. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,25 mg/ml de ER Rutina USP en
metano!
Solucin muestra: Agregar 1 O ml de metano! a 1 g de
Tanaceto reducido a polvo fino y calentar en un bao
de agua a 60 durante 15 minutos. Enfriar y filtrar.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 L
Fase mvil: Acetato de etilo, cido frmico anhidro
cido actico glacial y agua (1 O: 1, 1: 1, 1: 2, 7) '
Solucin reveladora A: Solucin al 1 % de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en metano!
Solucin reveladora B: Solucin al 5% (p/v) de polieti-
lenglicol 4000 en alcohol
Suplementos Dietticos / Tlnlceto 6673
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin mue!>tra
Desarrollar el cromatograma hasta que el frente de la
fase mvii haya recorrido lre' cuar lo' de ia lo119ilud
~e la placJ. RctirJr IJ plJcJ de IJ cmara cromatogr-
f1ca y dejar que se seque al aire. Rociar la placa con
Solucin reveladora A seguida de Solucin reveladora B
y observar la placa bajo luz UV a 366 nm.
Criterios de aceptacin: En relacin con el valor Rr de
la mancha principal de la Solucin estndar, el cromato-
grama de la Solucin muestra no presenta una mancha
azul a un Rr de 1, 1 (a diferencia de la manzanilla ro-
mana) pero presenta una mancha verde a un Rr de 2 3
(a diferencia de la manzanilla alemana) y las manchas' de
colores a valores Rr indicados son las siguientes: 1,5
(anaranjado amarillento), 1,65 (verde amarillento), 2,0
(azul verdoso) y 2,25 (azul blanquecino).
COMPOSICIN
CONTENIDO DE PARTENOLIDA
Fase mvil: Acetonitrilo y agua (9:11)
Solucin estndar: 0,04 mg/ml de ER Partenolida USP
en metano!
ceto a polvo fino. Transferir _aproximadamente 1,0 g de
Tanaceto reduodo a polvo fino, pesados con exactitud,
a un matraz adecuado. Agregar 1 00 ml de metano! y
calentar en un bao de agua a 60 durante 1 O minutos.
Retirar el matraz del bao de agua, enfriar y filtrar. En-
jua_gar el matraz con tres porciones de 5 ml de metano!
y f1_ltrar, agregando los enjuagues al filtrado. Transferir el
residuo remanente en el interior del filtro al mismo ma-
traz. Agregar 50 ml de metano! y continuar el procedi-
miento de enjuague segn se describi anteriormente.
Evaporar los filtrados combinados bajo presin reducida
hasta sequedad y disolver el residuo en 20,0 ml de
metano!.
Solucin muestra: Transferir 1 O ml de Solucin madre
de la muestra a un matraz volumtrico de 25 ml y diluir
con metano! a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
partenolida
Desv!acin estnda_r relativa: No ms de 2,0% para
el pico de partenol1da, en inyecciones repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de partenolida en la porcin de
Tanaceto tomada para preparar la Solucin muestra:
Resultado = (ru! r1) X [e, X (V/ W)] X oX 1 00
ru = rea del pico de partenolida de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de partenolida de la Solucin
estndar
= concentracin de ER Partenolida USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
V = volumen final de la Solucin madre de la
muestra (ml)
w = peso del polvo usado para preparar la Solucin
madre de la muestra (mg)
o = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra a partir de la Solucin madre de la
murstra
667 tJ T;_in;:iccto / Suofcrnentos Dir>t?ti<o\
Criterio~ rfp ilrPpt;idn: No menos de 0,2% con res-
fJtLlu d lci rnciterid Wld
CONTAMINANTES
METALES PESADOS <n 1 ): No rn' de 20 ppm
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 1 0 1 ufc/g, y el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 2 ufc/g. , Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para d_eterminar la
ausencia de Salmonella spp., Eschench1a col1 y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Hoias de color verde amari_llento, pe-
cioladas, por lo general de 2-5 cm de longitud, aunque
en ocasiones de hasta 1 O cm, ovadas, marcadamente
divididas en 5 o, en ocasiones, 7 segmentos, cada uno
con un margen crenado grueso y pice obtuso; ambas
superficies son pubescentes y la !lervadura central es
prominente en la superf1c1e 111fenor. . diurna.
Histologa: Clulas epidrmicas superiores e inferiores
con paredes anticlinales onduladas, cutcula est:iada y
estomas anomocticos, mas frecuentes en la ep1derm1s
inferior tricomas, ms abundantes en la epidermis infe-
rior, de' dos tipos; tricomas de recubrimiento uniseria-
dos con hasta 6 clulas basales isodiamtricas pequeas
y clulas apicales alargadas y ahusadas, por lo, general
en ngulos rectos con respecto al eie de las. celulas ba-
sales; tricomas glandulares levemente hundidos, com-
puestos de un pedicelo corto, biseriado de 2 o 4 clulas
y una cabeza biseriada d~ 4 clulas, ~ cuyo ~!rededor la
cutcula forma un recubrimiento de tipo vesicular
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(561 \: No ms de 10,0%, incluyendo el pedicelo
1
ARTC ULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 2 (561): No menos de 15,0%
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Tanaceto re-
ducido a polvo fino a 1 os durante 1 hora: pierde no
ms de 10,0% de su peso.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 12,0% , cido actico glacial y agua (1 O: 1, 1: 1, 1: 2,7) .
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar en un lugar seco. Proteger de la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despues de la denominacin oficial, la parte de la
planta contenida en el artculo.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Partenolida USP
ER Rutina USP
Tanaceto en Polvo
DEFINICIN
El Tanaceto en Polvo e<; Tanaceto reducido a polvo fino o a
polvo muy fino.
IDENTIFICACIN
A. El tiempo de retencin del pico de parte~olida, de la
Soluc i6n muP1tro corre<;ponde al de la So/uoon estandar,
segn se obtienen en la prueba de Contenido de
Partenolida.
U'.:.P 38
B. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1,0 rrn.i/ml de ER Partenolida USP
en metanol
Soludn muestra: Trcmsfcrir 1,0 g de TJnJceto en
Polvo a un matraz adecuado. Agregar 20 ml de meta-
no! calentar el matraz sobre un bao de agua a 60'
du(ante 15 minutos, enfriar y filtrar. Evaporar el filtrad_o
bajo presin reducida hasta sequedad y disolver el resi-
duo en 2,0 ml de metanol.
de 0,5 mm, por lo regular de 20 cm de longitud
Volumen de aplicacin: 20 L
Fase mvil: Tolueno y acetona (85:15)
Solucin reveladora: Solucin al 0,5% de vainillina en
una mezcla de cido sulfrico y alcohol ( 4: 1)
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar los cromatograrnas hasta que el frente_ de la
fase mvil haya recorrido tres cuar~os de la longitud,
de la placa. Retirar la placa de la c;ai:nara crnmatogra-
fica mJrcar el frente de la fase movil y dejar que se
seq~e al aire. Rociar la placa con Solucin re.veladora.
Despus de 5 minutos, observar la placa baio luz
Criterios de aceptacin: Una manch~ azul en la parte
media del cromatograma de la Soluuon muestra que co-
rresponde en color y valor Rr a la man~~a pri~cipai. ob-
tenida en el cromatograma de la Soluoon estandar in-
dica la presencia de partenoiida. El tercio inferior del
cromatograma de la Solucin muestra puede presentar
dos manchas rosadas y el tercio superior puede presen-
tar una mancha rosada. ,
C. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 0,25 mg/ml de ER Rutina USP en
metano!
Solucin muestra: Agregar 1 O ml de metano! a 1 g de
Tanaceto en Polvo y calentar en un bao de agua a 60
durante 15 minutos. Enfriar y filtrar.
Adsorbente: Capa de gel de slice para cromatografa
de 0,25 mm, por lo regular de 20 cm de longitud (pla-
cas para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 L
Fase mvil: Acetato de etilo, cido frmico anhidro,
.
Solucin reveladora A: Soluc1on al 1% de d1tenlibon-
nato de 2-aminoetilo en metanol
Solucin reveladora B: Solucin al 5% (p/v) de polieti-
lenglicol 4000 en alcohol
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar el cromatograma hasta que el frente de la
fase mvil haya_ recorrido tres cuar~os de la longitud,
de la placa. Retirar la placa de la camara cromatogra-
fica y dejar que se seque al aire. Rociar. la placa con
Solucin reveladora A seguida de SoluC1on reveladora B
y observar la placa bajo luz UV a 366 nm.
Criterios de aceptacin: En relacin con el valor R1 de
la mancha principal de la Solucin estndar, el cromato-
grama de la Solucion muestra no presenta una mancha
azul a un Rr de 1, 1 (a diferencia de la manzanilla ro-
mana) pero presenta una mancha verde a un R1 de 2,3
(a diferencia de la rnanzanilla alemana)_ y l_as manchas de
colores a valores R1 indicados son las s1gu1entes: 1,5
(anaranjado amarillento), 1,65 (verde amarillento), 2,0
(azul verdoso) y 2,25 (azul blanquecino).
COMPOSICIN
CONTENIDO DE PARTENOLIDA
Fase mvil: Aceton1tnlo y agua (9: 11)
Solucin estndar: 0,04 mg/ml de ER Partenolida USP
en metanol
Solucin madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 1,0 g de Tanaceto en Polvo, pesados con exacti-
USP 38
tud, a un mataZ adecuado. Aqrcqar 100 ml de metJ-
nol y calentar en un baro rle agua a 60 durante 1 O
minutos. Retirar el matraz del baro de agua, enfriar y
filtrar. Enuagar el matraz con tres porciones de 5 ml de
melar1oi y iilra_r, at:Jret:Ja11do io~ e11juat:Jue~ al filtrado.
Transferir el residuo remanente en el interior del filtro al
mismo matraz. Agregar 50 ml de metanol y continuar
e_I procedimiento de enjuague segn se describi ante-
n<?rmente .. Evaporar los filtrados combinados bajo pre-
s1on reducida hasta sequedad y disolver el residuo en
20,0 ml de metano!.
Solucin muestra: Transferir 1 O ml de Solucin madre
de la muestra a un matraz volumtrico de 25 ml y diluir
con metano! a volumen.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
partenolida
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de partenolida, en inyecciones repetidas
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de partenolida en la porcin de
Tanaceto en Polvo tomada para preparar la Solucin
muestra:
Resultado= (ru!rs) x [Cs x (V/W)] x O x 100
ru = rea del pico de partenolida de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de parlenolida de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Partenolida USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
\i = volumen final de la Solucin rnuJre de la
muestra (ml)
W "" peso de Tanaceto en Polvo usado para
preparar la Solucin madre de la muestra
(mg)
O = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra a partir de la Solucin madre de la
muestra
Criterios de aceptacin: No menos de 0,2% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
MET,ALES PESADOS (231): ,No ms de 20 ppm
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 2 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS <)022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmone/la spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Agua,
A;Jetodo 2 \561): No menos de 15,0%
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1,0 g de Tanaceto en
Polvo a 1 os durante 1 hora: pierde no ms de 10,0%
de ,su peso. , oon muestra presenta bandas similares en posicin y
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No ms de 12,0%
)ui!Ptrwnlm JiPIPlic <J\ /T Verde 6675
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Ceni1os Insolubles en Acido
(561): No mas de 3,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Partenolida USP
ER Rutina USP
Extracto en Polvo de T Verde
Descafeinado
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de T Verde Descafeinado se prepara a
partir de brotes de hojas y hojas jvenes sin fermentar de
Camellia sinensis (L.) Kuntze (Fam. Theaceae), tambin co-
nocida como Thea sinensis L., usando disolventes adecua-
dos tales como alcohol, metanol, acetona o agua o mez-
clas de estos disolventes; la cafena ha sido extrada. La
relacin entre el material vegetal crudo inicial y el Ex-
tracto en Polvo es 6: 1-1O:1 . Contiene no menos de
60~0% de polifenoles, calculados como (-)-epigalocate-
quin-3-0-galato, no menos de 40,0% de (-)-epigalocate-
quin-3-0-galato y no ms de O, 1 % de cafena, calculados
con respecto a la materia anhidra.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 4 mg/ml de ER Extracto en Polvo
de T Verde Descafeinado USP en una mezcla de al-
cohol y agua (4:1 ), someter a ultrasonido durante 1 O
minutos y centrifugar. Usar el sobrenadante transpa-
rente. [NOTA-Preparar en el momento de su uso. Si
requiere almacenamiento, almacenar a una temperatura
por debajo de -20 .]
Solucin muestra: 4 mg/ml de Extracto en Polvo de
T Verde Descafeinado en una mezcla de alcohol y
agua (4:1 ), someter a ultrasonido durante 1 O minutos y
centrifugar. Usar el sobrenadante transparente.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografta (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Usar una mezcla de gel de slice para
cromatografa con un tamao promedio de partcula
de 5 m (placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 1 L
Fase mvil: Tolueno, acetona y cido frmico (9:9:2)
Reactivo de sumersin: Disolver 140 mg de sal de
fast blue B en 1 O mL de agua y agregar 140 ml de
metano! y 50 mL de diclorometano. lNTA-Preparar
semanalmente y almacenar a 4 en la oscuridad.]
Anlisis
Muestras: Solucion estndar y Solucin muestra
Usar una cmara no_ saturada y acondicionar la placa a
una humedad relativa de 30% usando un dispositivo
adecuado. Desarrollar los cromatogramas, secar la
placa a 100 , sumergir en el Reactivo de sumersin, se-
car y observar la placa inmediatamente bajo luz visible .
(NOTA-El cromatograma se mantiene estable hasta 30
minutos; despus de dicho periodo, el fondo de la
placa se oscurece significativamente.]
Criterios de aceptacion: El cromatograma de la Solu-
color a las bandas principales en el cromatograma de la
Solucin estandar. El cromatograma de la Solucin mues-
tra presenta cuatro bandas principales de color anaran-
6676 T Verde /Suplementos Diett5ti11 USP 38

jado <imarronC1cio con vC1lores R: de aproximadamente Descafeinado USP, identificar los tiempos de retencin
0,38; 0,48; 0,52 y 0,62 correspondientes C1 (-)-epigalo- de los picos correspondientes a los diversos polifeno-
catequin-3-0-galato, (-)-epigalocatequina, les. Los tiempos de retencin relativos aproximados
(-)-eicalequir i-3-U-yaialo y (-)-epicatequina, respecti- para los politenoles se proveen en la Tabla 2.
vamente. La banda m;s intensa rs la correspondiente a
(-)-epigalocatequin-3-0-galato. La banda menos intensa Tabla 2
es la correspondiente a ,(-)-epicatequina.
B. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC Tiempo de
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con- Retencin
tenido de Politeno/es. Ana lito Relativo
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- (-)-Eoiaalacateauina o 56
cin muestra presenta picos de (-)-epigalocatequina, !+l-Cateauina o 68
( +)-catequina, (-)-epicatequina, (-)-epigalocatequin-3-0- (-)-Eoicateauina o 98
galato, (-)-galocatequin-3-0-galato, (-)-epigalocatequin- (-l-Eoiaalocateau i n-3-0-aa lato 1 00
3-0-(3' -0-metil)-galato y (-)-epicatequin-3-0-galato a
(-)-Ga lacateaui n-_l:O-aalato 1 09
tiempos de retencin correspondientes a los del croma-
tograma de la Solucin estndar B. (-)-Eoiaalocatea u in- 3-0-13 '-0-metill-oalato 1 19
(- )-Eoicatcauin-3-0-aalato 1 27
COMPOSICIN
CONTENIDO DE POLIFENOLES Calcular por separado los porcentajes de (-)-epigaloca-
Solucin A: Metano!, cido fosfrico al 85% y agua tequina, (+)-catequina, (-)-epicatequina, (-)-epigaloca-
(50: 3,5: 946,5) tequin-3-0-galato, (-)-galocatequin-3-0-galato, (-)-epi-
Solucin B: Acetonitrilo y metano! (95:5) galocatequin-3-0-(3' -0-metil)-galato y (-)-epicatequin-
Fase mvil: Ver la Tabla 7. 3-0-galato como (-)-epigalocatequin-3-0-galato en la
porcin de Extracto en Polvo tomada:
Tabla 1
Resultado= (ru!r1) x (Cs/Cu) x 100
Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) (%) (%) ru = rea del pico de cada polifenol de la Solucin
o 94 6 muestra
20 94 6
rs = rea del pico de (-)-epigalocatequin-3-0-
galato de la Solucin estndar A
50 78 22
Cs = concentracin de ER (-)- Epigalocatequin-3-0-
70 38 62 galato USP en la Solucin estndar A
75 94 6 (mg/ml)
90 94 6 Cu = concentracin de Extracto en Polvo de T
Verde Descafeinado en la Solucin muestra
Solucin estndar A: O, 1 mg/ml de ER (-)-Epi- (mg/ml)
galocatequin-3-0-galato USP en Solucin A Sumar los porcentajes calculados para los polifenoles
Solucin estndar B: 0,4 mg/ml de ER Extracto en individuales.
Polvo de T Verde Descafeinado USP en Solucin A. Criterios de aceptacin: No menos de 40,0% de
Mezclar y centrifugar. (-)-epigalocatequin-3-0-galato y no menos de 60,0%
Solucin muestra: 0,4 mq/ml de Extracto en Polvo de de polifenoles, calculados como (-)-epigalocatequin-
T Verde Descafeinado en- Solucin A. Mezclar y 3-0-galato con respecto a la materia anhidra
centrifugar.
Sistema cromato9rfico CONTAMINANTES
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 278 nm
Eliminar lo siguiente:
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 25 1 ' . METALES PESADOS, Mtodo JI (231): No ms de 20 g/
Velocidad de flujo: 0,8 ml/min g (pficial 01-dic-2015) ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema (561): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de T Verde Descafeinado USP usado. ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
Resolucin: No menos de l entre el pico de (-)-epi- ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
galocatequin-3-0-galato y el pico precedente, Solu- PRUEBAS ESPECFICAS
cin estndar B
Factor de asimetra: 0,8-2,0 para el pico de (-)-epi-
galocatequin-3-0-galato, Solucin estndar A Cambio en la redaccin:
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de (-)-epigalocatequin-3-0-galato, So/ucion es- LMITE DE CIDO GLICO
tndar A Solucin A, Solucin B, Fase mvil y Sistema cromato-
Anlisis grfico: Proceder segn se indica en la prueba de
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By Contenido de Politeno/es.
Solucin muestra Solucin estndar: 0,2 mg/ml de cido glico en Solu-
Registrar los cromatogramas y medir las reas de los cin A
picos de analitos. Usando el cromatograma de la Solu- Solucin muestra: 20 mg/ml de Extracto en Polvo en
cin estndar By el cromatograma de referencia pro- Solucin A. Mezclar y centrifugar.
visto con el lote de ER Extracto en Polvo de T Verde
USP 38 '\uplPmPntos DiPtt'tirns I Trbol Rojo 6677

Anlisis Criterios d~ aceptacin:No ms de O, 1 %

Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra DETERMINACION DE AGUA, Mtodo la (921): No ms de
Registrar los cromatogramas y medir las reas de los 6,0%, determinado er 0,5 g -
picos de ;leido glico. RESIDUO DE INCINERACION (281): No mas de 0,5%, deter-
Calcular el porcentaje. ERR co1 un 2014) de cido glico en minado en 1,0 g
la porcin de Extracto en Polvo tomada: OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botnicos
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) x 100 (565), Requisitos Farmacopeicos Generales.
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra REQUISITOS ADICIONALES
rs = respuesta del pico de la Solucin estndar ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
C = concentracin de cido glico en la Solucin cerrados. Proteger de la luz y la humedad. Almacenar a
estndar (mg/ml) temperatura ambiente controlada.
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de T ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
Verde Descafeinado en la Solucin muestra latn y despus de la denominacin oficial, la parte de la
(mg/ml) planta de donde se obtuvo el artculo. Cumple con otros
Criterios de aceptacin: No ms de 1, 0% requisitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Cafena USP
Cambio en la redaccin: ER (-)-Epigalocatequin-3-0-galato USP
ER Extracto en Polvo de T Verde Descafeinado USP
LMITE DE CAFENA
Solucin A: Metanol, tetrahidrofurano, cido fosfrico
al 85% y agua (50:10:3,5:936,5)
Solucin B: Acetonitrilo, metano! y cido fosfrico al
85% (946,5: 50: 3,5)
Fase mvil: Ver la Tabla 3. Clorhidrato de Tiamina-ver Clorhidrato
de Tiamina en Monografas Generales
Tabla 3
Tiempo Solucin A Solucin B
Cmin) (%) (%)
Clorhidrato de Tiamina, Solucin
o 100 o
30 100 o Oral-ver Clorhidrato de Tiamina, Solucin
35 o 100 Oral en Monografas Generales
40 o 100
45 100 o
55 100 o Clorhidrato de Tiamina, Tabletas-ver
Solucin estndar: 1 g/ml de ER Cafena USP en Clorhidrato de Tiamina, Tabletas en
metanol Monografas Generales
Solucin muestra: 1 mg/ml de Extracto en Polvo en
metanol
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf/G (621 ), Aptitud del Sistema.) Mononitrato de Tiamina-ver
Modo: HPLC
Detector: UV 272 nm Mononitrato de Tiamina en Monografas
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L60 1 de 5 m Generales
Temperatura de la columna: 25 1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema Mononitrato de Tiamina, Solucin
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud Oral-ver Mononitrato de Tiamina, Solucin
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de- Oral en Monografas Generales
terminada a partir del pico de cafena.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Registrar los cromatogramas y medir las reas de los Tirosina-ver Tirosina en Monografas
picos de cafena.
Calcular el porcentaje. ERR (01.un-2014) de cafena en la
Generales
porcin de Extracto en Polvo tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
Trbol Rojo
= respuesta del pico de la Solucin muestra
= respuesta del pico de la Solucin estndar DEFINICIN
= concentracin de ER Cafena USP en la El Trbol Rojo consiste en las partes areas de Trifolium pra-
Solucion estandar (mg/ml) tense L. (Fam. Fabaceae). Contiene no menos de 0,5% de
Cu = concentracin de Extracto en Polvo de T isoflavonas, calculado con respecto a la materia seca
Verde Descafeinado en la Solucin muestra como la suma de rlairl1ena, genistena, formononetina y
(mg/ml) biocanina A.
1 En esta prueba tambin se pueden usar columnas con relleno L 1 con recu-

brimiento exhaustivo (end-capped)

6678 Trbol Rojo /Suplementos Dietticos
IDENTIFICACIN
A. El Trbol Rojo cumple LOll im requisitos en 1-webas
Especificas, Caras lcm liws Bolanicas.
8. CROMATO(;RAflA E.N CAPA DELGADA
PrP~Pnciil de biocanina A y formononetina
Disolvente A: Metanol y agua (7:3)
Disolvente B: Metariol y agua (6:4)
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Biocanina A
USP en metano!
Solucin estndar B: 0,5 mg/mL de ER Formonone-
tina USP en metano!
Solucin estndar C: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Trbol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta
dispersar, calentar en un bao de agua a 60-80 du-
rante 1 O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
sobrenadan te.
Solucin muestra: Transferir 0,5 g de Trbol Rojo re-
ducido a polvo fino a un tubo de centrfuga, agregar
5 mL de Disolvente B, agitar hasta dispersar, calentar
en un bao de agua a 60-80'' durante 1 O minutos,
enfriar, centrifugar y usar el sobrenadante. [NOTA-Re-
servar una porcin del sobrenadante para la prueba de
ldentificacion C.]
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 4 L de Solucin estndar A,
de Solucin estndar B y de Solucin muestra, y 3 L
de Solucin estndar C, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, tolueno
y cido frmico (30:70:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B,
Solucin c:;tndar C y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogramas
en una cmara saturada. Retirar la placa de la c-
mara, calentar a 100 durante 5 minutos, derivatizar
la placa mientras est tibia con el Reactivo de derivat-
zacin, secar al aire y observar bajo luz UV a 365 nm.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar C presenta
una banda verdosa, aproximadamente en la parte
media del cromatograma, correspondiente a la banda
de_bida a biocanina A en el cromatograma de la Solu-
cion estandar A, y una banda azulada, aproximada-
mente en un tercio del cromatograma, correspon-
diente a tormononetina en el cromatograma de la
Solucin estndar B. Por debajo de la banda debida a
forn1ono11etina, el cromatograma de la Solucin estn-
dar ( presenta una banda roja en el tercio inferior del
cromatograma.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas principa-
les similares en posicin y color a las bandas corres-
pondientes en el cromatograma de la Solucin
P~tndor C: dos bandas verdosas aproximadamente
en la parte media del cromatograma (a diferencia del
trbol blanco, la soja y la alfalfa), una de estas bandas
verdosas corresponde a la banda azul debida a bioca-
nina A en el cromatograma de la Solucin estndar A;
y una bar ida aLuladd aproximadamente en un tercio
del cromatograma, correspondiente a la banda de-
bida a formononetina en el cromatograma de la Solu-
cin c:,tndar B; por debajo de la banda debida a for-
mononetina, el cromatograma de la Solucin muestra
USP 38
presenta una banda roja en el tercio inferior del
cromatograrria.
C. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Presencia de glicsidos de tlavonas
Disolvente A: Mt-tc111ul y agua (7:3)
Disolvente B: Metanol y agua (6:4)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Hipersido
USP en metanol
Solucin estndar B: 25 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Trbol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta
dispersar, calentar en un bao de agua a 60-80 du-
rante 1 O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solucin muestra: Usar la solucin segn se prepar
en la prueba de Identificacin B.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromotografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 4 L de Solucin estndar A,
8 L de Solucin estndar By 2 L de Solucin mues-
tra, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad realtiva de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, cido
frmico, cido actico glacial y agua (100:11 :11 :27)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogramas
en una cmara saturada. Retirar la placa de la c-
mara, calentar a 1 00 durante 5 minutos, derivatizar
la placa mientras est tibia con el Reactivo de derivati-
zocin, secar al aire y observar bajo luz UV a 365 nm.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar B presenta
dos bandas amarillas, aproximadamente en la parte
media del cromatograma, la banda inferior corres-
ponde en color y valor R1 a la banda debida a hiper-
sido en el cromatograma de la Solucin estndar A, la
banda superior amarilla se debe a isoquercitrina; dos
bandas de color verde o una banda ancha de color
verde, por encima de las bandas amarillas; y una
banda azul en el tercio superior del cromatograma.
Las bandas amarillas debidas a hipersido e isoquerci-
trina estn claramente separadas.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas similares
en posicin y color a las bandas correspondientes en
el cromatograrna de la Solucin estndar B: una
banda amarilla, aproximadamente en la parte media
del cromatograma correspondiente a la banda debida
a hipersido en el cromatograma de la Solucin estn-
dar A; otra banda de color amarillo, a un valor R1
ligeramente superior al de hipersido; dos bandas de
color verde, o una banda ancha de color verde, por
encima de las banda5 de color amarillo; y una banda
de color azul en el te~cio superior del cromatograma.
D. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido de
lsoflovonos.
Usando los valores obtenidos en la prueba de Contenido
de lsof!avonas, calcular el cociente entre 5J-dihidroxii-
soflavonas y 7-hidroxiisotlavonas:
Resultado = (B + G)/(D + F)
B = porcentaje de biocanina A
USP 38
G = oorrentaie
de aenisteina
o ~UILllldje Je JdiULelld
= (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
F porcentaje de formononetina
= Modo: HPLC
Criterios de aceptacin: [i uon1atograma dE la 5olu-
nn muestra presenta picos para daidzena, genistena,
formononetina y biocanina A a tiempos de retencin
que corresponden a los del cromatograma de la Solu-
cin estndar A y el cociente entre 5,7-dihidroxiisoflavo-
nas y 7-hidroxiisoflavonas est entre O, 1 y 1 O.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
Solucin A: Acetonitrilo y agua (1 :3) que contenga
cido trifluoroactico al 0,05%.
Solucin B: Acetonitrilo que contenga cido trifluoroa-
ctico al 0,05%.
Fase mvil: Ver la labia 1.
Tabla 1
Tiempo Solucin A
lmin) l/o)
o 100
2 100
'----------
_1,5_______ + - - - - 87
-- --- 1 - - - - - -
75 80
78 73
80 55
11 o 50
13 o 40
15 o 26
16 o o 100
18 1 100
23 o 100
Disolv~nte: Alcohol y a9ua (1 :1) . .
Solucion madre del estandar A: Transferir una canti-
dad de ER Extracto en Polvo de Trbol Rojo USP, equi-
valente a 30 mg del contenido declarado de isoflavonas,
a un matraz volumtrico de 250 ml. Agregar 15 ml de
alcohol deshidratado, someter a ultrasonido hasta disol-
ver y diluir con Disolvente a volumen.
Solucin estndar A: Evaporar 50 ml de Solucin ma-
dre del estndar A hasta sequedad al vaco. Agregar
15 ml de cido clorhdrico 2 N y calentar en un bao
de agua durante 30 minutos. Transferir cuantitativa-
mente la solucin resultante, con ayuda de 15 ml de
alcohol, a un matraz volumtrico de 50 ml y diluir con
Disolvente a volumen. Centrifugar o filtrar a travs de
una membrana con un tamao de poro de 0,45 m o
menor.
Solucin estndar B: O, 1 mg/ml de ER Formononetina
USP, 0,02 mg/ml de ER Genistena USP, 0,02 mg/ml
de ER Daidzena USP y O, 1 mg/ml de ER Biocanina A
USP en una mezcla de npropanol y agua (1 :1 ). Some-
ter a ultrasonido y filtrar a travs de una membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 2,5 g de Trbol Rojo molido, pesados con exacti-
tud, a un matraz de 120 ml con tapn. Agregar exacta-
mente 1 00 ml de Disolvente, cerrar el matraz y agitar
en un agitador orbital o de movimiento tipo mueca
(wrist-action) durante no menos de 12 horas.
Solucin muestra: Evaporar 50 ml de Solucin madre
de la muestra hasta sequedad al vaco a 40 -. Agregar
1 5 ml de cido clorhdrico 2 N y calentar en un bao
de agua durante 30 minutos. Transferir cuantitativa-
mente esta solucin, con ayuda de 15 ml de alcohol, a
un matraz volumtrico de 50 ml y diluir con Disolvente
a volumen. Filtrar a travs de una membrana con un
tamao de poro de 0,45 pm o menor, desechando los
primeros 4 ml del filtrado.
Suplemento) Dietticos /Trbol Rojo 6679
Sistema cromatogrfico
Detector: U\! 251 nm
Columna 4 6 mm x /S rm relleno l l de 5 um ron
-recubrimiento exhaustivo (~nd-c~pped) - '
Temperatura de la columna: 45'
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Trbol Rojo USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
formononetina, Solucin estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de formononetina en in-
Solucin B
yecciones repetidas, Solucin estndar B
{%)
Anlisis
o Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
o Solucin muestra
13 Identificar los picos correspondientes a daidzena, genis-
20 tena, formononetina y biocanina A en el cromato-
27 grama de la Solucin muestra por comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar A y el cromato-
45
grama de referencia. Medir las reas de los picos de
50 los analitos.
60 Calcular por separado los porcentajes de daidzena, ge-
74 nistena, formononetina y biocanina A en la porcin de
Trbol Rojo tomada:
o Resultado = (ru!rs) x Cs x (V/W) x D x 100
o
ru = respuesta del pico de cada isoflavona
pertinente de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de daidzena, genistena,
formononetina o biocanina A de la Solucin
estndar B
=concentracin de daidzena, genistena,
formononetina o biocanina A en la Solucin
estndar B (mg/ml)
V = volumen de Solucin madre de la muestra (ml)
w = peso de Trbol Rojo usado para preparar la
Solucin muestra (mg)
D = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra, a partir de la Solucin madre de la
muestra, 1
Criterios de aceptacin: Sumar los porcentajes de
daidzena, genistena, formononetina y biocanina A. No
menos de 0,5% de isoflavonas con respecto a la ma-
teria seca.
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 ~tg/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
IV!ercurio: No ms de ,1,0 g/g ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Mtodo General para Ana-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 6 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 4 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias es no ms de 1 0 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas .pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench10 colt.
6680 Trbol Rojo / Suplementos Dietticos
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Las inflorescencias del Trbol Rojo son
ovoide; con una cspide redu11uedud, e11 ~u 111ayora de
1 ?-34 mm de !argo v de ancho, habitualmente sobre
un pednculo corto, arrugadas, purpreas y ms o me-
nos de color marrn cuando se secan, constan de mu-
chas flores papilionceas, arracimadas y unidas en la
base por estpulas ciliadas, anchas y puntiagudas, de
color verde plido con nervaduras ms oscuras. Las flo-
res son de hasta 15 mm de largo y presentan lo si-
guiente: cliz con cinco dientes subulados verdes y pu-
bescentes, uno ms largo que los otros cuatro; ptalos
unidos en un tubo ms o menos campanulado, algo
doblado hacia atrs e incoloro con venas de color pr-
pura rosado; estambres diadelfos; estilo delgado; leve
olor aromtico parecido al t; y sabor dulce que se
vuelve ligeramente amargo. Hojas trifolioladas, eciola-
das, estipuladas, con estpulas fusionadas con e pecolo;
fololos peciolulados, de obovadas a oblongas-obovadas
o ampliamente elpticas.
Microscpicas
Flor: La epidermis del cliz est compuesta por clulas
poligonales con cutcula ligeramente estriada y esto-
mas anomocticos ocasionaies nicamente en la epi-
dermis externa; tricomas abundantes, uniseriados de
recubrimiento con dos clulas basales pequeas, y de
paredes delgadas y una clula apical ahusada de pare-
des gruesas de hasta 1 mm de largo con una cut1cula
rugosa; tricomas glandulares, particularmente en la
epidermis inferior, cada uno con un pedicelo de una o
dos clulas y una cabeza formada por varias clulas
dispuestas en dos filas; las clulas epidrmicas de la
corola, papilosas en la punta, son alargadas con pare-
des ligeramente onduladas y una cutcula fuertemente
estriada; los haces vasculares de la corola y el cliz
estn rodeados por una capa de cristales que contiene
cristales prismticos de oxalato de calcio; capa fibrosa
de anteras; granos de polen subesfricos, de 20-48
m de dimetro con exina lisa, tres poros bien diferen-
ciados y tres surcos.
Seccin transversal de la hoja: Dorsiventral; de una a
tres filas de clulas en empalizada bajo la epidermis
superior; mesfilo de clulas de parnquima espon-
joso; epidermis inferior; los tricomas de recubrimiento
en ambas epidermis son similares a los encontrados en
las flores; los tricomas glandulares, ms prximos a las
venas en la epidermis inferior, son similares a los en-
contrados en las flores; haces vasculares colaterales, ro-
deados por una capa de cristales que contiene cristales
prismticos de oxalato de calcio.
Seccin transversal del tallo: Presenta crestas a lo
lar~o de la superficie, con grupos de clulas colenqui-
maticas bajo la capa epidrmica de las crestas; la epi-
dermis est seguida por unas pocas capas de clulas
parenquimticas; una mdula central parenquimatosa
ancha, rodeada de grupos de haces vasculares separa-
dos por clulas parenquimticas lignificadas de paredes
gruesas.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Materia Orgnica Extraa
(56,1): No ms de 2,0%,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Extractos Solubles en Agua,
Mtodo 2 (561): No menos de 15,0%
PRDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar 1 g a 105' durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 12,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561 ):
No,ms de 10,0% , ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en un envase
bien cerrado y rrsistente a la luz. Proteger de la
humedad.
USP 38
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despues de la denom1nac1on oficial, las partes de
la r;>lanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11 >
FR Bioc;mina A USP
FR Daidzena USP
ER Formononetina USP
ER Genistena USP
ER Hipersido USP
ER Extracto en Polvo de Trbol Rojo USP
Trbol Rojo en Polvo
DEFINICIN
El Trbol Rojo en Polvo es Trbol Rojo reducido a polvo o a
polvo muy fino. Contiene no menos de 0,5% de isoflavo-
nas, calculado con respecto a la materia seca como la
suma de daidzena, genistena, formononetina y biocanina
A.
IDENTIFICACIN
A. El Trbol Rojo en Polvo cumple con los requisitos en
Pruebas Especfic9s, Caractersticas Botnicas.
B. (ROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Presencia de biocanina A y formononetina
Disolvente A: Metanol y agua (7:3)
Disolvente B: Metanol y agua (6:4)
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Biocanina A
USP en metanol
Solucin estndar B: 0,5 mg/mL de ER Formonone-
tina USP en metanol
Solucin estndar C: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Trbol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta
dispersar, calentar en un bao de agua a 60-80 du-
rante 1 O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solucin muestra: Transferir 0,5 g de Trbol Rojo en
Polvo a un tubo de centrfuga, agregar 5 mL de Disol-
vente B. Agitar hasta dispersar, calentar en un bao de
agua a 60-80 durante 1 O minutos, enfriar, centrifu-
gar y usar el sobrenadante. [NOTA~Reservar una por-
cin del sobrenadante para la prueba de Identificacin
C]
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Cromatografa en Capa Del-
gada.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 4 L de Solucin estndar A,
de Solucin estndar 8 y de Solucin muestra, y 3 L
de Solucin estndar C, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, tolueno
y cido frmico (30:70:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8,
Solucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para HPLTC
adecuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogra-
mas en una cmara saturada. Retirar la placa de la
cmara, calentar a 100 durante 5 minutos, derivati-
zar la placa mientras est tibia con el Reactivo de deri-
vatizacin, secar al aire y observar bajo luz UV a 365
nm.
Aptitud del sistema: La Solucion estandar C presenta
una banda verdosa, aproximadamente en la parte
USP 38 Suplementos Dieteticos / Trbol Rojo 6681

media del cromatograma, correspondiente a la banda a hipersido e isoquercitrina estn claramente

debida a biocanina A en el cromatograma de la Solu- separadas
cin estndar A, y una banda azulada, aproximada- Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
mente en un tercio del crnrniltn<Jrilmil, correspon- rin muP\tra presenta las siguientes bandas similares
diente a formononetina en el cromatoqrama de la en posicin y color a las bandas correspondientes en
Solucin estndar B. Por debajo de la banda debida a el cromatograma de la Solucin estandar B: una
formononetina, el cromatograma de la Solucin estn- banda amarilla, aproximadamente en la parte media
dar C presenta una banda roja en el tercio inferior del del cromatograma correspondiente a la banda debida
cromatograma. a hipersido en el cromatograma de la Solucin estn-
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu- dar A; otra banda de color amarillo, a un valor Rr
cin muestra presenta las siguientes bandas principa- ligeramente superior al de hipersido; dos bandas de
les similares en posicin y color a las bandas corres- color verde, o una banda ancha de color verde, por
pondientes en el cromatograma de la Solucin encima de las bandas de color amarillo; y una banda
estndar C: dos bandas verdosas aproximadamente de color azul en el te~cio superior del cromatograma.
en la parte media del cromatograma (a diferencia del D. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
trbol blanco, la soja y la alfalfa), una de estas bandas Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido de
verdosas corresponde a la banda debida a biocanina lsoflavonas.
A en el cromatograma de la Solucin estndar A; y Usando los valores obtenidos en la prueba de Contenido
una banda azulada aproximadamente en un tercio de lsof/avonas, calcular el cociente entre 5,7-dihidroxii-
del cromatograma, correspondiente a la banda de- soflavonas y 7-hidroxiisoflavonas:
bida a formononetina en el cromatograma de la Solu-
cin estndar B; por debajo de la banda debida a for- Resultado = (B + G)/(D + F)
mononetina, el cromatograma de la Solucin muestra
presenta una banda roja en el tercio inferior del B porcentaje de biocanina A
=
cromatograrria. G porcentaje de genistena
=
C. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA D porcentaje de daidzena
=
Presencia de gliesidos de flavonas F = porcentaje de formononetina
Disolvente A: Metano! y agua (7:3) Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
Disolvente B: Metano! y agua (6:4) cin muestra presenta picos para daidzena, genistena,
Solucin estndar A: 0, 1 mg/mL de ER Hipersido formononetina y biocanina A a tiempos de retencin
USP en metano! que corresponden a los del cromatograma de la Solu-
Solucin estndar B: 25 mg/mL de ER Extracto en cin estndar A y el cociente entre 5,7-dihidroxiisoflavo-
Polvo de Trbol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta nas y 7-hidroxiisoflavonas est entre 0, 1 y 1 O.
dispersar, calentar en un bao de agua a 60-80 du-
COMPOSICIN
rante 1O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
sobrenadante.
Solucin muestra: Usar la solucin segn se prepar Solucin A: Acetonitrilo y agua (1 :3) que contenga
en la prueba de Identificacin B. cido trifluoroactico al 0,05%.
Sistema cromato9rfico Solucin B: Acetonitrilo que contenga cido trifluoroa-
(Ver Cromatograf/O (621 ), Cromatografa en Capa Del- ctico al 0,05%.
gada.)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m Tabla 1
(placas para HPTLC) Tiempo Solucin A Solucin B
Volumen de aplicacin: 4 L de Solucin estndar A, (min) (%) 1/o)
8 L de Solucin estndar By 2 L de Solucin mues-
tra, en bandas de 8 mm
o - ~--
100 o
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu- 2 100 o
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un ~--2,_L_ -----1---
87 13
dispositivo adecuado. 75 80 20
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, cido 78 73 27
-
frmico, cido actico glacial y agua (100:11 :11 :27) 80 55 45
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori- 11 o 50 50
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo 13 o -
40 60
Anlisis ~ ___JjJ)__ ___ ~
26 74
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By ~ __ _l_J)_~ o 100
Solucin muestra 18 1 100 o
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para HPTLC lOQ o
~--- __ __1]LQ_ --- -- .. -
adecuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogra- --~-- ~--~--~

mas en una cmara saturada. Retirar la placa de la
cmara, calentar a 100 durante 5 minutos, derivati-
zar la placa mientras est tibia con el Reactivo de deri-
vatizacin, secar al aire y observar bajo luz UV a 365
nm.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar B presenta
dos bandas amarillas, aproximadamente en la parte
media del cromatograma. La banda inferior corres-
ponde en color y valor R1 a la banda debida a hiper-
sido en el cromatograma de la Solucin estndar A, la
banda superior amarilla se debe a isoquercitrina. La
solucin tambin presenta dos bandas de color verde
o una banda ancha de color verde, por encima de las
bandas amarillas, y una banda azul en el tercio supe-
rior del cromatograma. Las bandas amarillas debidas
Disolvente: Alcohol y agua (1: 1)
Solucin madre del estandar A: Transferir una canti-
dad de ER Extracto en Polvo de Trbol Rojo USP, equi-
valente a 30 mg del contenido declarado de isoflavonas,
a un matraz volumtrico de 250 mL. Agregar 15 mL de
alcohol deshidratado, someter a ultrasonido hasta disol-
ver y diluir con Disolvente a volumen.
Solucin estndar A: Evaporar 50 mL de Solucin ma-
dre del estandar A hasta sequedad al vaco. Agregar
15 mL de cido clorhdrico 2 N y calentar en un bao
de agua durante 30 minutos. Transferir cuantitativa-
mente la solucin resultante, con ayuda de 15 mL de
alcohol, a un matraz volumtrico de 50 mL y diluir con
Disolvente a volumen. Centrifugar o filtrar a travs de
6682 Trbol Rojo / Suplementos Dietticos
una membrana con un tamaho de poro de 0,45 m o
menor.
Solucin estndar B: O, 1 mg/mL de ER Formononetina
USP, 0,02 mq/mL de ER Genistena USP, 0,02 mg/ml
de ER Da1dze1na USP y O, 1 mg/mL de ER Biocanina A
USP en una mczcia de n-propanol y agua (1: 1 ). Some-
ter a ultrasonido y filtrar a travs de una membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin madre de la muestra: Transferir aproximada-
mente 2,5 g de Trbol Rojo en Polvo, pesados con
exactitud, a un matraz de 120 mL con tapn. Agregar
exactamente 100 mL de Disolvente, cerrar el matraz y
agitar en un agitador orbital o de movimiento tipo mu-
eca (wrist-action) durante no menos de 12 horas.
Solucin muestra: Evaporar 50 mL de Solucin madre
de la mues~ra hasta s~quedad al vaco a 40. Agregar
15 mL de ac1do clorh1dnco 2 N y calentar en un bao
de agua durante 30 minutos. Transferir cuantitativa-
mente esta solucin, con ayuda de 15 mL de alcohol, a
un matraz volumtrico de 50 mL y diluir con Disolvente
a volumen. Filtrar a travs de una membrana con un
tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando los
primeros 4 mL del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Temperatura de la columna: 45
Velocidad de flujo: 1,0 mL/min
Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Trbol Rojo USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
formononetina, Solucin estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2 0% de-
terminada a partir del pico de formononetin'a e~ in-
yecciones repetidas, Solucin estndar B
Analisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Identificar los picos correspondientes a daidzena, genis-
tena, formononetina y biocanina A en el cromato-
grama de la Solucin muestra por comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar A y el cromato-
grama de referencia. Medir las reas de los picos de
los analitos.
Cakul,ar por separado los porcentajes de daidzena, ge-
n1ste1na, formononetina y biocanina A en la porcin de
Trbol Rojo en Polvo tornada:
Resultado= (ru/r1) X e X (V/W) X D X 100
= respuesta del pico de cada isoflavona
pertinente de la Solucin muestra
= respuesta del pico de daidzena, genistena,
formononetina o biocanina A de la Solucin
estndar B
= concentracin de daidzena, genistena,
formononetina o biocanina A en la Solucin
estndar B (mg/mL)
V = volumen de Solucin madre de la muestra (mL)
USP 38
w = peso de Trbol Rojo en Polvo usado para
preparar la Solucin muestra (mg)
D = factor de dilucin para preparar la Solucion
muestra, a partir de !a So1ucin :nadrc de fa
muestra. 1
Criterios de aceptacin: '.:iumar los porcentaes de
daidzena, genistena, formononetina y biocanina A No
menos de 0,5/ci de isoflavonas con respecto a la ma-
teria seca.
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
l'vJ.ercurio: No ms de) ,O g/g
ARTICULOS DE ORIGEN BoT.ANICO, Mtodo General para An-
llSIS de Residuos de Plagwetdas (561 ): Cumple con los
requ1s1tos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 106 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 4 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias es no ms de 103 ufc/g .
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CA~ACTER~~ICAS ~OTNICAS: Los fragr;ientos de la epider-
mis del cahz estan compuestos por celulas poligonales
con una cutcula ligeramente estriada y estomas anomo-
ctic.os ocasionales; las clulas epidrmicas de la corola,
papilosas en la punta, son alargadas con paredes ligera-
mente onduladas y una cutcula fuertemente estriada las
c.lulas epid~rr:iicas superiores de los fololos con par~des
sinuosas ant1clinales y ligeramente en forma de rosario;
las clulas epidrmicas inferiores de los fololos con pare-
des de sinuosas a onduladas; ambas clulas epidrmicas
presentan estomas anomocticos, tricomas de recubri-
miento y tricomas glandulares; tricomas de recubri-
miento, uniseriados con dos clulas basales pequeas de
paredes delgadas y una clula apical ahusada de paredes
g~uesas de hasta 1 mm de largo con una cutcula rugosa;
tncornas glandulares, cada uno con un pedicelo de una o
dos clulas y una cabeza formada por varias clulas dis-
puestas en dos filas; gra.r;os de p~len lisos casi e,sferoida-
les de 20 a 48 .im de d1ametro; fibras de ~sclerenquima
con capa de cristales adherentes que contienen prismas
de oxalato de calcio.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Extractos Solubles en Agua
f\,jtodo 2 (561): No menos de 15,0% '
PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1 g
Anlisis: Secar la Muestra a 1 05 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 1 2,0%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 10,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz. Proteger de la humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta de la que se obtuvo el artculo.
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP ( 11)
ER Btocantna A U'iP
ER Daidzena USP
ER Formononptin<1 l l<;P
ER Genistena USP
ER Hipersido USP
ER Extracto en Polvo de Trbol Rojo USP
Extracto en Polvo de Trbol Rojo
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Trbol Rojo se prepara a partir de
Trbol Rojo mediante extraccin con mezclas hidroalcoh-
licas u otros disolventes adecuados. Contiene no menos
de 90,0% y no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada
de isof\avonas, calculado con respecto a la materia seca
como la suma de daidzena, genistena, formononetina y
biocanina A. Puede contener sustancias agregadas
adecuadas.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Presencia de biocanina A y formononetina
Disolvente A: Metano\ y agua (7:3)
Disolvente B: Metano\ y agua (6:4)
Solucin estndar A: 0,5 mg/mL de ER Biocanina A
USP en metano\
Solucin estndar B: 0,5 mg/mL de ER Formonone-
tina USP en metano!
Solucin estndar C: 1 O mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Trbol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta
dispersar, calentar en un bao de agua a 60-80 du-
rante 1 O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solucin muestra: 1 O mg/mL de Extracto en Polvo en
Disolvente A. Agitar hasta dispersar, calentar en un
bao de agua a 60-80 durante 1 O minutos, enfriar,
centrifugar y usar el sobrenadante. [NOTA-Reservar
una porcin del sobrenadante para la prueba de Identi-
ficacin B.]
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw <621 ), Aptitud del Sistema.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 4 L de Solucin estndar A,
Solucin estndar By Solucin muestra, y 3 L de Solu-
cin estndar C, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, tolueno
y cido frmico (30:70:1)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B,
Solucin estndar C y Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogramas
en una cmara saturada. Retirar la placa de la c-
mara, calentar a 100 durante 5 minutos, derivatizar
la placa mientras est tibia con el Reactivo de derivati-
zacin, secar al aire y observar bajo luz UV a 365 nm.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar C presenta
una banda verdosa, aproximadamente en la parte
media del cromatograma, correspondiente a la banda
debida a biocanina A en el cromatograma de la Solu-
cin estndar A, y una banda azulada, aproximada-
mente en un tercio del cromatograma, correspon-
Suplementos Dieteticos /Trbol Rojo 6683
diente a lormo11onetina en el cromatograma de la
Snlwin P\lndar B. Por debajo de la banda debida a
formononetina, el cromatograma de la Solucin estan-
dar C presenta una banda roja en el tercio inferior del
cromatograma.
Criterios de aceptacin: Ei cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas principa-
les similares en posicin y color a las bandas corres-
pondientes en el cromatograma de la Solucin
estndar C: dos bandas verdosas aproximadamente
en la parte media del cromatograma (a diferencia del
trbol blanco, la soja y la alfalfa), una de estas bandas
verdosas corresponde a la banda azul debida a bioca-
nina A en el cromatograma de la Solucin estndar A;
y una banda azulada aproximadamente en un tercio
del cromatograma, correspondiente a la banda de-
bida a formononetina en el cromatograma de la Solu-
cin estndar B; por debajo de la banda debida a for-
mononetina, el cromatograma de la Solucin muestra
presenta una banda roja en el tercio inferior del
cromatograr;ia.
8. CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA
Presencia de glicsidos de flavonas
Disolvente A: Metano\ y agua (7:3)
Disolvente B: Metano\ y agua (6:4)
Solucin estndar A: O, 1 mg/mL de ER Hipersido
USP en metano\
Solucin estndar B: 25 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Trbol Rojo USP en Disolvente A. Agitar hasta
dispersar, calentar en un bao de agua a 60-80 du-
rante 1 O minutos, enfriar, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solucin muestra: Usar la solucin segn se prepar
en la prueba de Identificacin A.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a <621 ), Aptitud del Sistema.)
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromato-
grafa con un tamao promedio de partcula de 5 m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 4 L de Solucin estndar A,
8 L de Solucin estndar By 2 L de Solucin mues-
tra, en bandas de 8 mm
Humedad relativa: Acondicionar la placa a una hu-
medad relativa de aproximadamente 33%, usando un
dispositivo adecuado.
Fase mvil: Una mezcla de acetato de etilo, cido
frmico, cido actico glacial y agua (100:11 :11 :27)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Reactivo de derivatizacin: 5 mg/mL de difenilbori-
nato de 2-aminoetilo en acetato de etilo
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada y secar al aire. Desarrollar los cromatogramas
en una cmara saturada. Retirar la placa de la c-
mara, calentar a 100' durante 5 minutos, derivatizar
la placa mientras est tibia con el Reactivo de derivati-
zacin, secar al aire y observar bajo luz UV a 365 nm.
Aptitud del sistema: La Solucin estndar B presenta
dos bandas amarillas, aproximadamente en la parte
media del cromatograma, la banda inferior corres-
ponde en color y valor R1 a la banda debida a hiper-
sido en el cromatograma de la Solucin estndar A, la
banda superior amarilla se debe a isoquercitrina; dos
bandas de color verde o una banda ancha de color
verde, por encima de las bandas amarillas; y una
banda azul en el tercio superior del cromatograma.
Las bandas amarillas debidas a hipersido e isoquerci-
trina estn claramente separadas.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta las siguientes bandas similares
en posicin y color a las bandas correspondientes en
el cromatograma de la Solucin estndar B: una
6684 Trbol Rojo / Suplementos Dietticos
banda amarilla, aproximadamente en la parte media
del cromatoqrama correspondiente a la banda debida
a hipersido en el cromatograma de la Solucin estn-
dar A; otra banda de color amarillo, a un valor R1
ligeramente superior al de hipersido; dos bandas de
color verde, o una banda Jncha de color verde, por
encima de las bandas de color amarillo; y una banda
de color azul en el tercio superior del cromatograma.
C. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de lsof/avonas.
Usando los valores obtenidos en la prueba de Contenido
de lsoflavonas, calcular el cociente entre 5,7-dihidroxii-
soflavonas y 7-hidroxiisoflavonas:
Resultado = (B + G)/(D + F)
B = porcentaje de biocanina A
G =porcentaje de genistena
D =porcentaje de daidzena
F =porcentaje de formononetina
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta picos para daidzena, genistena,
formononetina y biocanina A a tiempos de retencin
que corresponden a los del cromatograma de la Solu-
cin estndar A. El cociente entre 5,7-dihidroxiisoflavo-
nas y 7-hidroxiisoflavonas est entre O, 1 y 10,0.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
Solucin A: Acetonitrilo y agua (1 :3) que contenga
cido trifluoroactico al 0,05%.
Solucin B: Acetonitrilo que contenga cido trifluoroa-
ctico al 0,05%.
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A
Cmin) (%)
----- -
100
2 100
25 ---~ -
87
75 80
78 73
80 55
11 o 50
13 o 40
15 o 26
__l_Q,_Q__ - - ---- ---
o 100
18 1 100
23,_Q_ 100
Disolvente: Alcohol y a9ua (1 :1)
Solucin madre del estandar A: Transferir una canti-
dad de ER Extracto en Polvo de Trbol Rojo USP, equi-
valente a 30 mg del contenido declarado de isoflavonas,
a un matraz volumtrico de 250 ml. Agregar 15 ml de
alcohol deshidratado, someter a ultrasonido hasta disol-
ver y diluir con Disolvente a volumen.
Solucin estndar A: Evaporar 50 ml de Solucin ma-
dre del estndar A hasta sequedad al vaco. Agregar
15 ml de cido clorhdrico 2 N y calentar en un bao
de agua durante 30 minutos. Transferir cuantitativa-
mente la solucin resultante, con ayuda de 15 ml de
alcohol, a un matraz volumtrico de 50 ml y diluir con
Disolvente a volumen. Centrifugar o filtrar a travs de
una membrana con un lamao de poro de 0,45 m o
menor.
Solucin estndar B: O, 1 mg/ml de ER Formononetina
USP, 0,02 mg/ml de ER Genistena USP, 0,02 mg/ml
de ER Daidzena USP y O, 1 mg/ml de ER Biocanina A
USP en una mezcla de n-propanol y agua (1 :1 ). Sorne-
USP 38
ter a ultrasonido y filtrar a travs de una membrana con
u11 tamao de poro de 0,45 m o menor
Solucin madre de la muestra: Transferir una cantidad
de Extracto en Polvo. equivalente a 30 mg del conte-
nido declarado de isoflavonas, a un matraz volumtrico
de 2.'.>U mL. Agregar 15 ml de alcohol deshidratado, so-
meter a ultrasonido hasta disolver y diluir con Disolvente
a volumen.
Solucin muestra: Evaporar 50,0 ml de Solucin madre
de Ja muestra hasta sequedad al vaco. Agregar 15 ml
de cido clorhdrico 2 N y calentar en un bao de agua
durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente la so-
lucin resultante, con ayuda de 15 ml de alcohol, a un
matraz volumtrico de 50 ml y diluir con Disolvente a
volumen. Centrifugar o pasar a travs de un filtro con
un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Temperatura de la columna: 45
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Trbol Rojo USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
formononetina, Solucin estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, de-
terminada a partir del pico de formononetina en in-
yecciones repetidas, Solucin estndar B
Solucin B Anlisis
(%) Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
o Identificar los picos correspondientes a daidzena, ge-
o nistena, formononetina y biocanina A en el cromato-
13 grama de la Solucin muestra por comparacin con el
20 cromatograma de la Solucin estndar A y el cromato-
27 grama de referencia. Medir las reas de los picos de
45 los analitos.
Calcular por separado el porcentaje de cada isoflavona
50
en la porcin de Extracto en Polvo tomada:
60
74 Resultado = (ru! rs) X eX 100
o ru = respuesta del pico de cada isoflavona
pertinente de la Solucin muestra
o r5 = respuesta del pico de daidzena, genistena,
formononetina o biocanina A de la Solucin
estndar B
C1 concentracin de daidzena, genistena,
=
formononetina o biocanina A en la Solucin
estndar B (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de isoflavonas como la suma de daidzena,
genistena, formononetina y biocanina A, calculado con
respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 1,0 g/g
Cadmio: No ms de 0,5 pg/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de 1,0 g/g
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO <)021 >= El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
USP 38 Suplementos Dietti(OS .1 Trbol Rojo 6685

levaduras no excede de 10' ufc/g, y el recuento de ente- Tabla 1

robacterias es no ms de 103 ufc/g. , Tiempo Solucin A Solucin B
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- {%) (%)
(lninL
- ---- -
ple con los requisito:, de l.i~ prueb.is pJrJ determin.ir l.i ----- --

ausencia de Salmonella spp. y F~rhPrirhia co/i. o 1 100 1 o

2
1
iOO o 1

PRUEBAS ESPECFICAS
PRDIDA POR SECADO (731)
Anlisis: Secar 1 g a 105 durante 2 horas.
Criterios de aceptacin: No ms de 5,0%
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Enva-
sado y Almacenamiento, Disolventes Residuales y Residuos
de Plaguicidas en Extractos Botnicos (565).
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz en un lugar fresco.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn, y despus de la denominacin oficial, la parte de la
planta a partir de la que se prepar el artculo. La eti-
queta tambin indica el contenido de isoflavonas, el di-
solvente o mezcla de disolventes de extraccin usados
para la preparacin y la relacin entre el material vegetal
crudo inicial y el Extracto en Polvo. Cumple con los re-
qu~sitos de etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Biocanina A USP
ER Daidzena USP
ER Formononetina USP
ER Genistena USP
ER Hipersido USP
ER Extracto en Polvo de Trbol Rojo USP
Trbol Rojo, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Trbol Rojo contienen Extracto en Polvo de
Trbol Rojo. Las Tabletas contienen no menos de 90,0% y
no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de Extracto
en Polvo, calculado como isoflavonas.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en Contenido de
lsof/avonas.
Usando los valores obtenidos en la prueba de Contenido
de lsoflavonas, calcular el cociente entre 5,7-dihidroxii-
soflavonas y 7-hidroxiisoflavonas:
Resultado = (B + G)/(D + F)
B = porcentaje de biocanina A
G = porcentaje de genistena
D = porcentaje de daidzena
F = porcentaje de formononetina
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta picos para daidzena, genistena,
formononetina y biocanina A a tiempos de retencin
que corresponden a los del cromatograma de la Solu-
cin estndar A y el cociente entre 5)-dihidroxiisoflavo-
nas y 7-hidroxiisoflavonas est entre O, 1 y 10.
CONTENIDO
CONTENIDO DE ISOFLAVONAS
Solucin A: Acetonitrilo y agua (1: 3) que contenga
cido trifluoroactico al 0,05%.
Solucin B: Acetonitrilo que contenga cido trifluoroa-
ctico al 0,05%.
Fase mvil: Ver la Tabla 1.
25 87 13
75 80 20
78 73 27
80 55 45
11 o 50 50
13 o 40 60
15 o 26 74
~---l_Q,Q______ - o 100
18 1 100 o
23 o 100 o
Disolvente: Alcohol y .9ua (1 :1)
Solucin madre del estandar: Transferir una cantidad
de ER Extracto en Polvo de Trbol Rojo USP, equivalente
a 30 mg del contenido declarado de isoflavonas, a un
matraz volumtrico de 250 mL. Agregar 15 mL de al-
cohol deshidratado, someter a ultrasonido hasta disolver
y diluir con Disolvente a volumen.
Solucin estndar A: Evaporar 50 mL de Solucin ma-
dre del estndar hasta sequedad al vaco. Agregar 15 ml
de cido clorhdrico 2 N y calentar en un bao de agua
durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente la so-
lucin resultante, con ayuda de 15 mL de alcohol, a un
matraz volumtrico de 50 mL y diluir con Disolvente a
volumen. Centrifugar o filtrar a travs de una mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin estndar B: O, 1 mg/mL de ER Formononetina
USP, 0,02 mg/mL de ER Genistena USP, 0,02 mg/mL
de ER Daidzena USP y O, 1 mg/mL de ER Biocanina A
USP en una mezcla de n-propanol y agua (1 :1 ). Some-
ter a ultrasonido y filtrar a travs de una membrana con
un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin madre de la muestra: Pesar no menos de 20
Tabletas y reducirlas a polvo. Transferir el equivalente a
40 mg de la cantidad declarada de isoflavonas a un ma-
traz volumtrico de 250 mL. Agregar 15 mL de agua,
agitar hasta dispersar el polvo, agregar 15 mL de al-
cohol deshidratado y 200 mL de Disolvente y someter a
ultrasonido durante 30 minutos. Si se presentan partcu-
las de color oscuro en el fondo del matraz, someter
nuevamente a ultrasonido durante 1 O minutos adiciona-
les o hasta que desaparezcan. Enfriar a temperatura am-
biente, diluir con Disolvente a volumen y filtrar.
Solucin muestra: Transferir 50,0 mL de la solucin re-
sultante a un matraz de fondo redondo y evaporar
hasta sequedad al vaco. Agregar 15 mL de cido clorh-
drico 2 N y calentar en un bao de agua durante 30
minutos. Transferir cuantitativamente esta solucin, con
ayuda de 15 mL de alcohol, a un matraz volumtrico de
50 mL y diluir con Disolvente a volumen. Pasar 5 mL de
la solucin a travs de un filtro con un tamao de poro
de 0,45 m, desechando los primeros 4 mL del filtrado.
Recoger el mL remanente de filtrado para su anlisis.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Temperatura de la columna: 45
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estcndar A y Soiucin escndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar A es similar al cromatograma
6686 Trbol Rojo / SuplPmPntos Dietticos
de referencia 1xov1slo con el lote de ER Extracto en
Poivo de lrbol Rojo USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
formnnnriPtinl, Solucin estndar B
Desviacin estndar relativa: No ms rlP 7,0%, de-
terminada a partir del pico de tormononetina en in-
yecciones repetidas, Solucin estndar 8
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar 8 y
Solucin muestra
Identificar los picos correspondientes a daidzena, genis-
tena, formononetina y biocanina A en el cromato-
grama de la Solucin muestra por comparacin con el
cromatograma de la Solucin estndar A y el cromato-
grama de referencia. Medir las reas de los picos de
los analitos.
Calcular el contenido de cada isotlavona, en mg, en la
porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (ru! rs) x Cs x V x O
ru = respuesta del pico de cada isoflavona
pertinente de la Solucin muestra
= respuesta del pico de daidzena, genistena,
formononetina o biocanina A de la Solucin
estndar 8
Cs = concentracin de daidzena, genistena,
forrnononetina o biocanina A en la Solucin
estndar 8 (mg/mL)
V = volumen de Solucin madre de Ja muestra (mL)
o = factor de dilucin para preparar la Solucin
muestra, a partir de la Solucin madre de la
muestra, 1
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
Extracto en Polvo de Trbol Rojo tomado:
Resultado= C X (Awr/W) X (100/LE) X (100/L)
e = suma del contenido de isoflavonas en la
porcin de Tabletas tomada (mg)
Aw1 = peso promedio de las Tabletas (mg)
W = peso de las Tabletas reducidas a polvo
tomadas (rng)
Li = porcentaje declarado de isoflavonas en el
Extracto en Polvo usado para preparar las
Tabletas
L = cantidad declarada de Extracto en Polvo
(mg/Tableta)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% como
isoflavonas
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos de desintegracin en Formas Farmacuticas
Botnicas .
VARIACIN DE PESO (2091 ): Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 1 ufc/g, y el recuento de ente-
robacterias es no ms de 1 O' ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y tscherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del cual se prepararon las Tabletas. La etiqueta in-
dica tambin la cantidad, en mg, de Extracto en Polvo
por Tableta. Etiquetar las tahlPtas indicando el contenido,
en mg, de isoflavonas por 1 00 mg de Extracto en Polvo.
USP 38
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
[R Biocanina A USP
ER Daidzena USP
rn ormononetina USP
ER Genisteina USP
ER Extracto en Polvo de Trbol Rojo USP
Treonina-ver Treonina en Monografas
Generales
Triptfano-ver Triptfano en Monografas
Generales
Ubidecarenona
CH,
H:iCO
1
:
H ,CO CH
Cs9H904 863,34
2,5-Cyclohexadiene-1,4-dione, 2-
~2~6~10~ l 4~ l 8~22~26~30~34~-
3,7, 11, 15, 19,23,27,31,35,39-decamethyl-
2,6, 10, 14, 18,22,26,30,34,38-tetracontadecaenyl]-5,6-di-
methoxy-3-methyl;
2-[(todo-~-3,7, 11, 15, 19,23,27,31, 35,39-Decametil-
2,6, 1O,14, 18,22,26,30,34,38-tetracontadecaenil)-5,6-di-
metoxi-3-metil-p-benzoquinona [303-98-0].
DEFINICIN
La Ubidecarenona (Coenzima 010) contiene no menos de
98,0% y no ms de 101,0% de ubidecarenona
(Cs9H 90 0 4), calculado con respecto a la sustancia anhidra.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO (197K)
B.
Anlisis: Disolver 50 mg de Ubidecarenona en 1 mL de
ter etlico y agregar 1 O mL de alcohol deshidratado. A
2 mL de esta solucin, agregar 3 mL de alcohol deshi-
dratado y 2 mL de malonato de dimetilo. Agregar 1 mL
de solucin de hidrxido de potasio (1 en 5), gota a
gota.
Criterios de aceptacin: Aparece un color azul.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Fase mvil: Metano! y alcohol deshidratado (65:35)
Solucin de aptitud del sistema: 0,5 mg/mL de ER
Ubidecarenona USP y de ER Compuesto Relacionado A
de Ubidecarenona USP en alcohol deshidratado. Calen-
tar a 50u durante 2 minutos, si fuera necesario, para
obtener una disolucin completa.
Solucin estndar: 1,0 mg/ml de ER Ubidecarenona
USP en alcohol deshidratado. Calentar a 50 durante 2
minutos, si fuera necesario, para obtener una disolucin
completa .
Solucin muestra: 1,0 mg/mL de Ubidecarenona en al-
cohol deshidratado. Calentar a 50 durante 2 minutos,
si fuera necesario, para obtener una disolucin
completa.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 275 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 35'
Velocidad de flujo: Ajustar pi!ril ohtener un tiempo de
retencin de aproximadamente 11 minutos para
ubidecarenona.
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para com-
puesto relacionado A de ubidecarenona y ubidecare-
nona son aproximadamente 0,75 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 4 entre compuesto relacio-
nado A de ubidecarenona y ubidecarenona
Desviacin estndar relativa: No ms de 0,8% para
ubidecarenona
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de ubidecarenona (Cs9H904) en
la porcin de Ubidecarenona tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Ubidecarenona USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin de Ubidecarenona en la
Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 98,0%-101,0% con respecto
a la sustancia anhidra
IMPUREZAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281 ): No ms de O, 1 %
Eliminar lo siguiente:
METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
20 ppme (Oficial Ol-dic-20)5)
PUREZA CROMATOGRAFICA
Procedimiento 1: Coenzimas Q1,Qs, Q91 Q11 e Impure-
zas Relacionadas
Fase mvil, Solucin de aptitud del sistema, Solucin
muestra, Sistema cromatogrfico y Aptitud del sis-
tema: Proceder segn se indica en la Valoracin.
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Calcular el porcentaje de impurezas en la porcin de
Ubidecarenona tomada:
Resultado= (ru!r12) x 100
rn = suma de las respuestas de todos los picos,
diferente del de ubidecarenona
r12 = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptacin: No ms de 1,0%
Procedimiento 2: Ismero (2Z) de Ubidecarenona e
Impurezas Relacionadas
Fase mvil: n-Hexano y acetato de etilo (97:3)
Solucin de aptitud del sistema: 1 mg/mL de ER Ubi-
decarenona para Aptitud del Sistema USP en n-hexano
Solucin muestra: 1 mg/mL de Ubidecarenona en n-
hexano
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
<i11rlPmPntos DiPtticos I Ubidecarenona 6687
Modo: HPLC
Detector: UV 275 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L3
Velocidad de flujo: 2 ml/miri
Volumen de inyeccin: 20 ~iL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para el is-
mero (2Z) de ubidecarenona y ubidecarenona son
aproximadamente 0,85 y 1,0, respectivamente,]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,5 entre el ismero (2Z)
de ubidecarenona y ubidecarenona
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Calcular el porcentaje de impurezas en la porcin de
Ubidecarenona tomada:
Resultado= (r,,/r12) x 100
r,, = suma de las respuestas de todos los picos,
diferente del de ubidecarenona
r12 = suma de las respuestas de todos los picos
Criterios de aceptacin: No ms de 1,0%
Impurezas totales: No ms de 1,5%, obtenidas de
los Procedimientos 7 y 2 de Pureza Cromatrogrfica
PRUEBAS ESPECFICAS
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo I (921 ): No ms de
0,2%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados y resistentes a la luz.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ubidecarenona USP
ER Compuesto Relacionado A de Ubidecarenona USP
[coenzima Q9)
ER Ubidecarenona para Aptitud del Sistema USP
Ubidecarenona, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Ubidecarenona contienen no menos de
90,0% y no ms de 115,0% de la cantidad declarada de
ubidecarenona (Cs9H904).
IDENTIFICACIN
A. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra 7 o de la Solucin muestra 2 corresponde al
de la Solucin estndar, segn se obtienen en el Procedi-
miento, en Contenido.
CONTENIDO
PROCEDIMIENTO
[NOTA-Realizar esta prueba rpidamente con un mnimo
de exposicin a la luz actnica.]
Disolvente: n-Hexano y alcohol deshidratado (5:2)
Fase mvil: Acetonitrilo, tetrahidrofurano y agua
(55:40:5)
Solucin madre del estndar: 1,0 mg/mL de ER Ubide-
carenona USP en Disolvente
Solucin estndar: 40 ~tg/ml en alcohol deshidratado,
a partir de Solucin madre del estndar
Solucin madre de aptitud del sistema: 1,0 mg/mL
de ER Compuesto Relacionado A de Ubidecarenona USP
en Disolvente. Diluir una porcin de esta solucin con
alcohol deshidratado hasta obtener una concentracin
de 40 py/1 nL.
Solucin de aptitud del sistema: Solucin estndar y
Solucin madre de aptitud del sistema (1: 1)
6688 Ubidecarenona / Suplementos Dietticos
Solucin muestra 1 (para Cpsulas de gelatina blanda):
Abrir un ni'imPro dP Cipsulas equivalente a 200 mg de
ubidecarcnona, transferir cuantitativamente las cubiertas
y el contenido a un recipiPntP, ;i~regar 100 mL de Di-
solvente y agitar mecnicamente durante 30 minutos.
Usando peque1as porcione~ de Disolvente, transferir
cuantitativamente esta mezcla a un matraz volumtrico
de 200 mL y diluir con Disolvente a volumen. Centrifu-
gar una porcin de esta solucin, transferir 1,0 mL del
sobrenadante a un matraz volumtrico de 25 mL, agre-
gar 2,5 mL de una solucin de cloruro frrico anhidro al
O, 1 % en alcohol y diluir con alcohol a volumen.
Solucin muestra 2 (para Cpsulas de gelatina dura):
Vaciar y mezclar minuciosamente el contenido de no
menos de 20 Cpsulas. Transferir una porcin del polvo,
equivalente a 1 00 mg de ubidecarenona, a un matraz
volumtrico de 1 00 mL, agregar 60 mL de Disolvente y
agitar mecnicamente durante 30 minutos. Diluir con
Disolvente a volumen. Centrifugar una porcin de esta
solucin, transferir 1,0 mL del sobrenadante a un ma-
traz volumtrico de 25 mL, agregar 2,5 mL de una solu-
cin de cloruro frrico anhidro al O, l % en alcohol y
diluir con alcohol a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 8 mm x 1O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 2,5 entre ubidecarenona y
compuesto relacionado A de ubidecarenona, Solucin
de aptitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 1,5, Solucin
estndar
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
ubidecarenona, Solucin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin muestra 7 o Solucin muestra 2 y
Solucin estndar
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ubi-
decarenona (Cs9H904) en la porcin de Cpsulas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de ubidecarenona de la Solucin
muestra 7 o la Solucin muestra 2
rs = rea del pico de ubidecarenona de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Ubidecarenona USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de ubidecarenona en
la Solucin muestra 7 o la Solucin muestra 2
(mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-115,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos de la prueba de Desintegracin, excepto
cuando el producto declara contener la forma hidrosolu-
ble de ubidecarenona. Las Cpsulas que declaran conte-
ner la forma hidrosoluble de ubidecarenona cumplen con
los requisitos de la prueba de Disolucin, segn se indica
a continllacin
Medio: Agua; 500 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Solucin estndar: Disolver 25 mg de ER Ubidecare-
nona USP en 1 mL de ter etlico y diluir con alcohol
hasta oblener una concentracin de 2,5 g/mL.
USP 38
[NOTA-Usar slo una solucin preparada
recientemente.]
Solucin muestra: Diluir con alcohol un volumen de la
solucin en anlisis, previ.::mente pasado a travs de un
filtro adecuado con lln tamao de poro de 0,45 pm,
hasta obtener una concentracin de 2,5 g/mL de
ubidecarenona.
Fase mvil y Sistema cromatogrfico: Proceder segn
se indica en el Procedimiento, en Contenido, excepto el
Volumen de inyeccin.
Volumen de inyeccin: 100 L
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ubi-
decarenona (Cs9H901) disuelta:
Resultado = (ru/ rs) x (Cs x V x DI L) x 100
ru = rea del pico de ubidecarenona de la Solucin
muestra
r1 = rea del pico de ubidecarenona de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Ubidecarenona USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
V =volumen de Medio, 500 mL
D = factor de dilucin para la Solucin muestra
L = cantidad declarada (mg/Cpsula)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de ubidecarenona (Cs9H904)
PRUEBAS ESPECFICAS
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: Cuando el producto contiene la forma hi-
drqsoluble de ubidecarenona, la etiqueta as lo indica.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ubidecarenona USP
ER Compuesto Relacionado A de Ubidecarenona USP
Coenzima Q9.
Ubidecarenona, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Ubidecarenona contienen no menos de
90,0% y no ms de 115,0% de la cantidad declarada de
ubidecarenona (Cs9H904).
IDENTIFICACIN
A. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al de la Solucin estndar, se-
gn se obtienen en el Procedimiento, en Contenido.
CONTENIDO
PROCEDIMIENTO
[NOTA-Realizar esta prueba rpidamente con un mnimo
de exposicin a la luz actnica.]
Disolvente: n-Hexano y alcohol deshidratado (5:2)
Fase mvil: Acetonitrilo, tetrahidrofurano y agua
(11:8:1)
Solucin madre del estndar: 1,0 mg/mL de ER Ubide-
carenona USP en Disolvente
Solucin estndar: 40 ~tg/mL, a partir de Solucin ma-
dre del estndar en alcohol deshidratado
Solucin madre de aptitud del sistema: 1,0 mg/mL
de ER Compuesto Relacionado A de Ubidecarenona USP
en Disolvente. Diluir una porcin de esta solucin con
alcohol deshidratado hasta obtener una concentracin
de 40 pg/mL.
USP 38
Solucin de aptitud del sistema: Solucin estndar y
Solucin madre de aptitud del sistema ( 1 : 1)
Solucin madre de la muestra: Pesar y reducir a polvo
fino no menos de 20 Tabletas. Transtem una cantidad
de polvo, equivalente aproxillldUdrrn~nle a 100 rng de
ubidecarenona, a un matraz volumtrico de 1 00 mL,
agregar 60 mL de Disolvente y agitar mecnicamente
durante 30 minutos. Diluir con Disolvente a volumen y
mezclar. Centrifugar una porcin de esta solucin,
transferir 1,0 mL del sobrenadante a un matraz volum-
trico de 25 mL y agregar 2,5 mL de una solucin de
cloruro frrico anhidro al O, 1 % en alcohol. Diluir con
alcohol a volumen y mezclar.
Solucin muestra: Centrifugar una porcin de Solucin
madre de la muestra, transferir 1,0 mL del sobrenadante
a un matraz volumtrico de 25 mL, agregar 2,5 mL de
una solucin de cloruro frrico anhidro al O, 1 % en al-
cohol y diluir con alcohol a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 2,5 entre ubidecarenona y
compuesto relacionado A de ubidecarenona, Solucin
de aptitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 1,5, Solucin
estndar
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
ubidecarenona, Solucin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ubi-
decarenona (Cs9H904) en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado= (ru!rs) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de ubidecarenona de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de ubidecarenona de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Ubidecarenona USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de ubidecarenona en
la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-115,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos de la prueba de Desintegracin, excepto
cuando el producto declara contener la forma hidrosolu-
ble de ubidecarenona. Las Tabletas que declaran conte-
ner la forma hidrosoluble de ubidecarenona cumplen con
los requisitos de Disolucin, segn se indica a
continuacin.
Medio: Agua; 500 mL
Aparato 2: 75 rpm
Tiempo: 60 min
Solucin estndar: Disolver 25 mg de ER Ubidecare-
nona USP en 1 mL de ter etlico y diluir con alcohol
hasta obtener una concentracin de 2,5 q/mL.
[NOTA-Usar slo una solucin preparada
recientemente.]
Solucin muestra: Diluir con alcohol un volumen de la
solucin en anlisis, previamente pasado a travs de un
filtro adecuado con un tamao de poro de 0,45 m,
hasta obtener una concentracin de 2,5 g/mL de
ubidecarenona.
Suplementos Dieteticos / Ua de Gato 6689
Fase mvil y Sistema cromatogrfico: Proceder segn
se indrca en el Procedimiento, en Cuntenidu, excepto el
Volumen de inyeccin.
Volumen de inyeccin: 100 ~1L
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ubi-
decarenona (Cs9H904) disuelta:
Resultado= (r11/r1) x (C1 x Vx D/L) x 100
ru = rea del pico de ubidecarenona de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de ubidecarenona de la Solucin
estndar
C1 = concentracin de ER Ubidecarenona USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
V = volumen de Medio, 500 mL
D = factor de dilucin para la Solucin muestra
L = cantidad declarada (mg/Tableta)
Tolerancias: No menos de 75% de la cantidad decla-
rada de ubidecarenona (Cs9H904)
PRUEBAS ESPECFICAS
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: Cuando el producto contiene la forma hi-
drqsoluble de ubidecarenona, la etiqueta as lo indica.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Ubidecarenona USP
ER Compuesto Relacionado A de Ubidecarenona USP
Coenzima Q9.
Ua de Gato
DEFINICIN
La Ua de Gato consiste en la corteza interna de los tallos
de Uncaria tomentosa (Willd.) OC. (Fam. Rubiaceae). Con-
tiene no menos de 0,3% de alcaloides oxindlicos penta-
cclicos como isopteropodina, calculado con respecto a la
materia seca, como la suma de especiofilina, uncarina F,
mitrafilina, isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1 00 mg de ER Extracto en Polvo de
Ua de Gato USP en 2 mL de metano!. Someter a ultra-
sonido durante 5 minutos, agitando ocasionalmente .
Calentar en un bao de agua a 60 durante 15 minu-
tos, enfriar y centrifugar.
Solucin muestra: 5 g de Ua de Gato en polvo en
1 O mL de metanol. Someter a ultrasonido durante 5 mi-
nutos, agitando ocasionalmente. Calentar la mezcla en
un bao de agua a 60 durante 15 minutos, enfriar y
filtrar.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao de partcula promedio de 10-15 m
(p1acas para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 L, en bandas de 1 cm de
longitud
Fase mvil: Acetato de etilo y hexano (95:5)
Solucin reveladora A: Di~olver calentando 0,85 g de
nitrato bsico de bismuto en 1 O mL de cido actico
glacial y 40 ml de agua Filtrar si fuera necesario (Solu-
cin A). Disolver 8 g de yoduro de potasio en 30 mL de
agua (Solucin B). Mezclar Solucin A y Solucin B (1 :1)
para obtener una solucin madre. Diluir 1 ml de la so-
lucin madre con 2 ml de cido actico glacial y 1 O mL
6690 Ua de Gato /Suplementos Dietticos USP 38

de aqua. [NOTA-Usar Solucion A y 'inlurirn B mezcladas Tabla 1 (Cont_in_u_a_ci_o1_1)_ _~------.

recientemente.] - . ----...
r Tiempo
--- Solucin A Solucin B Solucin C
Solucin reveladora B: Usar una solucin de nitrito de (min) {%) (%) (%)
sodio J! 1Of!'G en J~U<l. ~-~--2-5~--+-- ~;;
Anlisis ,--
sn- 1 o
--~--~~-~-

Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra ~--_]Q 50 50 o

Desarrollar el cromatograma hasta una longitud de no
menos de 12 cm y secar la placa en una corriente de
aire.
Criterios de aceptacin: Observar la placa bajo luz UV
de longitud de onda corta. El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta mltiples zonas que corresponden
en valores R1 a las observadas en el cromatograma de la
Solucin estndar. Se pueden observar otras zonas de
intensidades variables en la Solucin muestra. Rociar la
placa con Solucin reveladora A seguida de Solucin reve-
ladora B, y observar la placa bajo luz diurna; El croma-
tograma de la Solucin muestra presenta mult1ples zonas
mrrn anaranjadas que corresponden en color y valo-
res R1 a las observadas en el cromatograma de la Solu-
cin estndar. Se pueden observar otras zonas colorea-
das de intensidades variables en la Solucin muestra.
B. El cromatograma de la Solucin muestra presenta picos
de especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilin.~, pte-
ropodina e isopteropodina a los tiempos de retenc1on
que corresponden a los del cromatograma de la Solucin
estndar A, segn se obtienen en la prueba de Contemdo
de Alcaloides Oxindlicos Pentacclicos y Lmite de Oxindoles
Tetracclicos.
COMPOSICIN , , ,
CONTENIDO DE ALCALOIDES OXINDOLICOS PENTACICLICOS Y LI-
MITE DE OXINDOLES TETRACCLICOS
Solucin estndar A: Disolver en metano! una canti-
dad, pesada con exactitud, de ER Extract? en Pol~o. de
Ua de Gato USP, agitando durante 1 minuto. Diluir
con metano! hasta obtener una solucin con una con-
centracin conocida de aproximadamente 0,5 mg/ml
de la cantidad declarada de alcaloides oxindlicos tota-
les. Pasar a travs de un filtro con un tamao de poro
de 0,45 m o menor. . con el lote del ER Extracto en Polvo de Ua de Gato
Solucin estndar B: O, 1 mg/ml de ER lsopteropod1na
USP en metano!. Pasar a travs de un filtro de nailon
con un tamao de poro 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Pesar con exactitud aproximada-
mente 750 mg de Ua de Gato molida y colocar en un
tubo de centrifuga de 1 O ml. Someter a ultrasonido
con 2 5 ml de metano! durante 1 O minutos. Centrifu-
gar y 'transferir e~ta solucin.? un matraz vol~mtrico_
de 1 O ml. Repetir la extracc1on tres veces mas, combi-
nando los extractos en el matraz volumtrico de 1 O ml
y diluir con metano! a volumen. Transferir aproximada-
mente 3 ml de la solucin a un tubo de ensayo que
contenga 300 mg de polvo <;Je poliamida y agita.r du-
rante 1 minuto. Pasar a traves de un filtro de nailon con
un tamao de poro de 0,45 m o menor, desechando
la primera parte del filtrado. . muestra (mg/ml)
Solucin A: Preparar una solucin amortiguadora de
fosfato 1O mM de pH 7,0 filtrada y desgasificada mez-
clando 6 ml de hidrxido de sodio 1 N, 1 O ml de fos-
fato monobsico de potasio 1 M y agua en cantidad
suficiente para obtener 1 000 ml. Ajustar a un pH de
7,0 O, 1, agregando ms de cualquiera de las
soluciones.
Solucin B: Acetonitrilo
Solucin C: Metano! y cido actico glacial (99:1)
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
---
Tiempo 1 Solucin A 1 Solucin B 1 Solucin C
(min) -
(%) (%) (%)
o 65 35
17 65 1
35 1
31 o o 100
~---]__ o o 100
39 65 35 o
49 65 35 o
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 j, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 245 nm
Columna: 4,6 mm x 1 O cm; relleno L1 de 3 m con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Velocidad de flujo: 0,75 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido usando la Solucin estndar A es similar al
Cromatograma de Referencia provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Ua de Gato USP.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
isopteropodina, Solucin estndar B
Desviacion estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de isopteropodina en inyecciones repetidas,
Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Medir las reas de los picos del analito. ldentifi~ar los
tiempos de retencin de lo~ pi~c;is c~rrespon~1.entes. a
especiofilina, uncarina F, m1traf1!ina, 1~om1trafilina'. nn-
cofilina, isorincofilina, pteropodina e 1sopteropo9!na
por comparacin del cromatograma de la S_oluoon_ es-
tndar A con el Cromatograma de Referencia provisto
USP usado.
Calcular por separado los porcentajes de especiofilina,
uncarina F mitrafilina, isomitrafilina, rincofilina, isorin-
cofilina, pteropodina e isopteropodina, como isopte-
ropodina, en la porcin de Ua de Gato tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = respuesta del pico de cada alcaloide
pertinente de la Solucin muestra
r5 = respuesta del pico de isopteropodina de la
Solucin estndar B
Cs = concentracin de ER lsopteropodina USP en la
Solucin estndar B (mg/ml)
Cu = concentracin de Ua de Gato en la Solucin
Calcular el contenido de alcaloides oxindlicos
pentacclicos sumando los porcentajes de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina,
pteropodina e isopteropodina: . , .
Calcular el contenido de alcaloides oxindol1cos
tetracclicos sumando los porcentajes individuales de
rincofilina e isorincofilina.
Criterios de aceptacin
Alcaloides oxindlicos pentacclicos: No menos de
0,3%
Alcaloides oxindlicos tetracclicos: No ms de
0,05%
1
1 CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231 ): No ms de 20 ppm
o ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
o 1
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
USP 18
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): FI rernento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 o ufc/y;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 o~ u fe/y; y d 1ecue11lu Je bac-
terias Grarn-mgativJs to!erJntes a la bilis no excede de
10 3 ufc/g. , latn y, despus de la denominacion oficial, las partes de
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
[NOTA-El artculo farrnacopeico est constituido slo por
la corteza interna del tallo de U. tomentosa (Willd). DC.
Se proporcionan descripciones de otras partes de la
planta para ayudar a la recoleccin de la especie co-
rrecta. Debe determinarse el cumplimiento con los re-
quisitos utilizando toda la monografa y no nicamente
la descripcin botnica.]
Macroscopicas: La Ua de Gato es una planta trepa-
dora leosa con un tallo principal de hasta 20 cm de
dimetro y hasta 30 m de longitud. Las ramas son ob-
tusamente cuadrangulares y generalmente pubescentes.
Las estpulas de las yemas son densamente tomentosas
en la parte superior (a diferencia de la U. guianensis, en
la cual las estipulas son glabras) y sus pelos, a menudo
con puntas curvadas, estn enredados con los pelos
ms largos de la hoja, conectando el par de estpulas
por los mrgenes, pero se separan cuando son ms
adultas (a diferencia de la U. guianensis, en la cual las
estpulas se separan temprano en el desarrollo de la
yema). Las espinas son rectas o en forma de hoz, no
giradas en espiral (a diferencia de la U. guianensis), muy
punzantes y leosas, de 8 a 20 mm de longitud y de 3
a 6 mm de ancho. Recin cortada, el color de la corteza
interna puede ser gris blancuzco, marrn amarillento o
rojo oscuro, con fisuras longitudinales y ritidoma persis-
tente. La parte interna tiene una textura fibrosa y lami-
nar ligeramente pulverulenta con un polvo ferruginoso
caracterstico y un sabor extremadamente astringente.
Las ramas terminales tienen una seccin cuadrangular y
una mdula interna verde amarillenta.
Microscpicas: La peridermis con sber (felema) est
constituida por 6-8 hileras de clulas que tienen pare-
des uniformemente engrosadas, un felgeno compri-
mido y una felodermis con 1-7 hileras de esclereidas.
[NOTA-La peridermis y el felgeno deberan estar au-
sentes del artculo farmacopeico.] La corteza secundaria
presenta anillos concntricos de fibras separados por
anillos de parnquima; los anillos de fibras estn fre-
cuentemente interrumpidos por hileras radiales de clu-
las parenquimticas (predominantemente de 1 clula de
ancho) o radios medulares estrechos (pocas clulas de
ancho) y forman haces de fibras rectangulares en una
red regular. En la vista longitudinal, las fibras aparecen
con numerosas puntuaciones visibles; son abundantes
en el parnquima los microcristales de oxalato de calcio
(de aspecto arenoso), pero generalmente no se encuen-
tran corno cristales polidricos grandes ni en forma de
estiloides con extremos bifurcados. Estas ltimas formas
estn presentes en general en el parnquima de la U.
guianensis. Una sustancia marrn est dispersa en las
clulas parenquimticas; el almidn es abundante y los
grnulos son simples (de forma circular de hasta 1 O m
de dimetro) o compuestos (de 2-3 componentes de
hasta 15 ~tm de dimetro).
ARTCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar a 1 05' durante 2 ho-
ras:, pierde no ms de 7,Q% de su peso.
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No,ms de 8,0% ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 2,0%
Suplementos Dietticos / Ua de Gat0 6691
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im
permeables y resistentes a la lu1. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indira el nomhre rientfico en
la P,lanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (1 'I)
ER lsopteropodina USP
ER Extracto en Polvo de Ua de Gato USP
Ua de Gato, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Ua de Gato contienen Extracto en Polvo
de Ua de Gato. Las Cpsulas contienen no menos de
90,0% y no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de
Extracto en Polvo, calculado como alcaloides oxindlicos
pentacclicos.
IDENTIFICACIN
El cromatograma de la Solucin muestra presenta picos de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, ptero-
podina e isopteropodina a tiempos de retencin que co-
rresponden a los de la Solucin estndar A, segn se ob-
tienen en la prueba de Contenido de Alcaloides
Oxindlicos Pentacc/icos y Lmite de Alcaloides Oxindlicos
Tetracc/icos. El contenido de alcaloides oxindlicos tetra-
cclicos, calculado como la suma de rincofilina e isorrin-
cofilina, es no ms de 25% de la cantidad declarada de
alcaloides oxindlicos pentacclicos.
CONTENIDO
CONTENIDO DE ALCALOIDES OXINDLICOS PENTACCLICOS Y L-
MITE DE ALCALOIDES OXINDLICOS TETRACCLICOS
Solucin A: Preparar una solucin amortiguadora de
fosfato 1 O mM de pH 7,0 mezclando hidrxido de so-
dio 1 N, fosfato monobsico de potasio 1 M y agua
(3:5:492) y ajustar a un pH de 7,0 O, 1 agregando
ms de cualquiera de las soluciones.
Solucin B: Acetonitrilo
Solucin C: Metano! y cido actico glacial (99:1)
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B Solucin C
>---~m=in~--+--____(fil_____ (%) %
__...Q___ __ ___,i----~65~ 35 o
f---1---1~7---+----6~5_ _-+_ _ _3_5__ o
25 50 50 -- _Q__
f----~31------t- __..2.Q_____ - ___5_Q_ -~~--'
___
31___ o__________o___,___lQQ_
____
- l_Q_Q_
o
-------o
Solucin estndar A: Disolver una cantidad, pesada
con exactitud, de ER Extracto en Polvo de Ua de Gato
USP en metano!, agitar durante 1 minuto, y diluir con
metano! para obtener una solucin con una concentra-
cin conocida de aproximadamente 0,5 mg/mL de la
cantidad declarada de alcaloides oxindlicos totales. Pa-
sar a travs de un filtro con un tamao de poro de 0,45
m o menor.
Solucin estndar B: O, 1 mg/mL de ER lsopteropodina
USP en metano!. Pasar a travs de un filtro de nailon
con un tamao de poro de 0,45 m o menor .
Solucin muestra: Pesar con exactitud el contenido de
no menos de 20 Cpsulas y reducir a polvo. Transferir
una cantidad, pesada con exactitud, del polvo equiva-
lente a 20 mg de ia cantidad declarada de alcaloides
6692 lJa de Gato / Suplementos Dietticos
oxindlicos pentacclicos, a un tubo de centrfuga de
50 mL. Someter a ultrasonido con 1O mL de metanol
durante 1O minutos. Centrifugar y transferir esta solu-
cin a un matraz volumtrico de 50 rnl. Repetir la ex-
traccin anterior tres vece\ mi-; rnmhinanrlo los extrac-
tos en el matraz volumetrico de 50 mL y diluir con
metanol a volumen. Transferir 3 mL de la solucin a un
tubo de ensayo que contenga 300 mg de poliamida en
polvo y agitar durante 1 minuto. Pasar a travs de un
filtro de nailon con un tamao de poro de 0,45 m o
menor y desechar la primera parte del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 245 nm
Columna: 4,6 mm x 1 O cm; relleno L1 de 3 m con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Velocidad de flujo: 0,75 mL/min
Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido usando la Solucin estndar A es similar al
Cromatograma de Referencia provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Ua de Gato USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
isopteropodina, Solucin estndar B
Desviacion estndar relativa: No ms de 2,0%, a
partir del pico de isopteropodina en inyecciones repe-
tidas, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Medir las reas de los picos de los analitos. Identificar
los tiempos de retencin de los picos correspondien-
tes a especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafi-
lina, pteropodina, isopteropodina, rincofilina e isorrin-
cofilina por comparacin del cromatograma de la
Solucin estndar A con el Cromatograma de Referen-
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Ua de Gato USP usado.
Calcular el contenido, en mg, de especiofilina, unca-
rina F, mitrafilina, isomitrafilina, pteropodina e isopte-
ropodina, como isopteropodina, en la porcin de
Capsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x Cs x V
ru = respuesta del pico de cada alcaloide
pertinente de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de isopteropodina de la
Solucin estndar B
Cs = concentracin de ER lsopteropodina USP en la
Solucin estndar B (mg/mL)
V = volumen de dilucin final de la Solucin
muestra (mL)
Calcular el contenido, en mg, de alcaloides oxindlicos
pentacclicos totales (Ce) en la porcin de Cpsulas
tomada sumando los contenidos individuales de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina,
pteropodina e isopteropodina.
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo de Ua de
Gato con respecto a la cantidad declarada:
Resultado = Ce x (Awc /W) x (100/Lr) x (1 00/L)
= contenido de alcaloides oxindlicos
pentacclicos totales en la porcin de
Cpsulas tomada (mg)
= peso promedio del contenido de Cpsulas
Awc
(mg/Cpsula)
w = peso de la porcin de Cpsulas tomada (mg)
USP 38
Lr = contenido de alcaloides oxindlicos
pentac1clicos totales, mg, en 100 mg del
Extracto usado para preparar las Cpsulas
L = cantidad de Extracto por Cpsula segn la
cantidad declarada (mg/Capsula)
Calcular el porcentaje de alcaloides oxindlicos
tetracclicos con respecto al contenido de alcaloides
oxindlicos pentacclicos en la porcin de Cpsulas
tomada:
Resultado = (rT/rr) x 100
rr = suma de las respuestas de los picos de
rincofilina e isorrincotilina en el
cromatograma de la Solucin muestra
rr = suma de las respuestas de los picos de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina,
isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina
en el cromatograma de la Solucin muestra
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de Extracto en Polvo calculado como alcaloi-
des oxindlicos pentacclicos; se encuentra no ms de
25% de alcaloides oxindlicos tetracclicos con respecto
a la cantidad de alcaloides oxindlicos pentacclicos.
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Desintegracin
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 104 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz, y almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del cual se prepararon las Cpsulas. Si se preparan
con Extracto, la etiqueta tambin indica la cantidad, en
mg, de Extracto por Cpsula y el contenido, en mg, de
alcaloides oxindlicos pentac1clicos por 1 00 mg de Ex-
tracto en Polvo.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER lsopteropodina USP
ER Extracto en Polvo de Ua de Gato USP
Ua de Gato en Polvo
DEFINICIN
La Ua de Gato en Polvo es Ua de Gato reducida a polvo
o polvo muy fino. Contiene no menos de 0,3% de alcaloi-
des oxindlicos pentacclicos como isopteropodina, calcu-
lado con respecto a la materia seca, como la suma de
especiofilina, uncarina F, mitratilina, isomitrafilina, ptero-
podina e isopteropodina.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1 00 mg de ER Extracto en Polvo de
Ua de Gato USP en 2 mL de metano!. Someter a ultra-
sonido durante 5 minutos, agitando ocasionalmente,
USP 38 Suplementos Dieteticos / Ua de Gato 6693

calentar en un bdf1u Je dgua a 60; durante 15 minutos, un tamano de poro de 0,45 pm o menor, desechando
enfriar y centrifugar. la primera parte del filtrado.
Solucin muestra: 5 q de Una de Gato en Polvo en Solucin A: Preparar una solucin amortiguadora de
1 O ml de metano!. So.meter a ultrasonido durante 5 mi- fosfato 1 O mfVi de pH 7,0, fillrddd y Jesgasificada, mez-
nutos, agitando ocasionalmente. Calentar la meLcid en clando 6 ml dr hidrxido de sodio 1 N, 1 O ml de fos-
un bailo de agua a 60" durante 1 5 minutos, enfriar y fato monobsico de potasio 1 M y agua en cantidad
filtrar. suficiente para obtener 1000 ml. Ajustar a un pH de
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa 7,0 O, 1 agregando ms de cualquiera de las
con un tamano de partcula promedio de 10-1 5 m soluciones.
(placas para TLC) Solucin B: Acetonitrilo
Volumen de aplicacin: 20 L, en bandas de 1 cm de Solucin C: Metanol y cido actico glacial (99:1)
longitud Fase mvil: Ver la Tabla 1.
Fase mvil: Acetato de etilo y hexano (95:5)
Solucin reveladora A: Disolver calentando 0,85 g de Tabla 1
nitrato bsico de bismuto en 1 O ml de cido actico
glacial y 40 ml de agua. Filtrar si fuera necesario (Solu- Tiempo Solucin A Solucin B Solucin C
cin A). Disolver 8 g de yoduro de potasio en 30 ml de Cmin) (%) (%) t 0 /o)
agua (Solucin B). Mezclar la Solucin A y la Solucin B o 65 35 -~--
_Q ____
(1 :1) para obtener una solucin madre. Diluir 1 ml de 17 65 35 o
la solucin madre con 2 ml de cido actico glacial y 25 50 50 o
1 O ml de agua. [NOTA-Usar Solucin A y Solucin B
mezcladas recientemente.]
30 50 50 o
Solucin reveladora B: Usar una solucin de nitrito de 31 o o 100
sodio al 10% en agua. 36 o o 100
Anlisis 39 65 -- 35 o
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra 49 65 35 o
Desarrollar el cromatograma hasta una longitud de no
menos de 12 cm y secar la placa en una corriente de Sistema cromato9rfico
aire. (Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Criterios de aceptacin: Observar la placa bajo luz UV Modo: HPLC
de longitud de onda corta. El cromatograma de la Solu- Detector: UV 245 nm
cin muestra presenta mltiples zonas que corresponden Columna: 4,6 mm x 1 O cm; relleno L1 de 3 m con
en valores RF a las observadas en el cromatograma de la recubrimiento exhaustivo ( end-capped)
Solucin estndar. Se pueden observar otras zonas de Velocidad de flujo: 0,75 ml/min
intensidades variables en la Solucin muestra. Rociar la Volumen de inyeccin: 1 O L
placa con Solucin reveladora A seguida de Solucin reve- Aptitud del sistema
ladora By observar la placa bajo luz diurna. El cromato- Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
grama de la Solucin muestra presenta mltiples zonas Requisitos de aptitud
marrn anaranjadas que corresponden en color y valo- Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
res RF a las observadas en el cromatograma de la Solu- obtenido usando la Solucin estndar A es similar al
cin estndar. Se pueden observar otras zonas colorea- Cromatograma de Referencia provisto con el ER Ex-
das de intensidades variables en la Solucin muestra. tracto en Polvo de Una de Gato USP.
B. El cromatograma de la Solucin muestra presenta picos Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
de especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, pte- isopteropodina, Solucin estndar B
ropodina e isopteropodina a tiempos de retencin que Desviacion estndar relativa: No ms de 2,0% para
corresponden a los del cromatograma de la Solucin es- el pico de isopteropodina en inyecciones repetidas,
tndar A, segn se obtienen en la prueba de Contenido Solucin estndar B
de Alcaloides Oxindlicos Pentacclicos y Lmite de Oxindoles Anlisis
Tetracclicos. Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
COMPOSICIN Medir las reas de los picos del analito. Identificar los
CONTENIDO DE ALCALOIDES OXINDUCOS PENTACCUCOS Y L- tiempos de retencin de los picos correspondientes a
MITE DE OXINDOLES TETRACCLICOS especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, rin-
Solucin estndar A: Disolver en metanol una canti- cofilina, isorincofilina, pteropodina e isopteropodina
dad, pesada con exactitud, de ER Extracto en Polvo de por comparacin del cromatograma de la Solucin es-
Una de Gato USP, agitando durante 1 minuto. Diluir tndar A con el Cromatograma de Referencia provisto
con metanol hasta obtener una solucin con una con- con el lote del ER Extracto en Polvo de Una de Gato
centracin conocida de aproximadamente 0,5 mg/ml USP usado.
de la cantidad declarada de alcaloides oxindlicos tota- Calcular por separado los porcentajes de especiofilina,
les. Pasar a travs de un filtro con un tamano de poro uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, rincofilina, isorin-
de 0,45 m o menor. cofilina, pteropodina e isopteropodina, como isoptero-
Solucin estndar B: O, 1 mg/ml de ER lsopteropodina podina, en la porcin de Una de Gato en Polvo
USP en metanol. Pasar a travs de un filtro de nailon tomada:
con un tamano de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Pesar con exactitud aproximada- Resultado== (ru/r,) x (Cs/Cu) x 100
mente 750 mg de Una de Gato en Polvo y colocar en
un tubo de centrfuga de 1 O ml. Someter a ultrasonido ru = respuesta del pico de cada alcaloide
con 2,5 ml de metanol durante 1 O minutos. Centrifu- pertinente de la Solucin muestra
gar y transferir esta solucin a un matraz volumtrico rs = respuesta del pico de isopteropodina de la
de 1 O ml. Repetir la extraccin tres veces ms, combi- Solucin estndar B
nando los extractos en el matraz volumtrico de 1 O ml Cs == concentracin de ER lsopteropodina USP en la
y diluir con metanol a volumen. Transferir aproximada- Solucin estndar B (mg/ml)
mente 3 ml de la solucin a un tubo de ensayo que Cu = concentracin de Una de Gato en Polvo en la
contenga 300 mg de polvo de poliarnida y agitar du- Solucin muestra (mg/ml)
rante 1 minuto. Pasar a travs de un filtro de nailon con
6694 Ua de Gato ! Suplementos Dietticos
Calcular el contenido de alcaloides oxindlirns
pcntacclicos sumando los porcentaje' de e'peciofilina,
uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, pteropodina e
isopteropodina.
Calcular el rnn!Pnidn de alcaloides oxindlicos
tetrac1cl1cos sumando porcentajes individuales de
rincofilina e isorincofilina.
Criterios de aceptacin
Alcaloides oxindlicos pentacclicos: No menos de
0,3%
Alcaloides oxindlicos tetracclicos: No ms de
0,05%
CONTAMINANTES
METALES PESADOS, Mtodo 111 (231): No ms de 20 ppm
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 5 ufc/g;
el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10 3 ufc/g; y el recuento de bac-
terias Gram-negativas tolerantes a la bilis no excede de
1oi ufc/g. , agua (Solucin B). Mezclar Solucin A y Solucin B (1: 1)
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS: Presencia de fragmentos de
sber y clulas suberizadas, con paredes celulares unifor-
memente engrosadas. Presencia de esclereidas en la felo-
dermis. Los fragmentos de fibras cruzadas por radios vas-
culares estn oscurecidos debido a la presencia de
microcristales de oxalato de calcio de aspecto arenoso.
Granos de almidn simples o compuestos dobles o triples
de hasta 15 m de dimetro. Ausencia de estiloides, ge-
1eralmente presentes en U. guianensis
PERDIDA POR SECADO (731 ): Secar a 105 durante 2 ho-
ras: pierde no ms de 7,0% de su peso.
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 8,0% , placa con Solucin reveladora A seguida de Solucin reve-
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 2,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
pla,nta de donde se obtuvo el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER lsopteropodina USP
ER Extracto en Polvo de Ua de Gato USP
Extracto en Polvo de Ua de Gato
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Ua de Gato se prepara a partir de
Ua de Gato mediante extraccin con mezclas hidroalco-
hlicas u otros disolventes adecuados. La relacin entre el
material vegetal y el extracto est entre 4:1 y 6:1. Con-
tiene no menos de 90,0% y no ms de 11 0,0% de la
cantidad declarada de alcaloides oxindlicos pentacclicos
como isopteropodina, calculado con respecto a la materia
seca, como la suma de especiofilina, uncarina F, mitrafi-
lina, isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina. Puede
contener sustancias agregadas adecuadas.
USP 38
IDENTIFICACIN , ,
A. PRUEBA DE IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA
DELGADA
Solucin estndar: 1 mg de E:R Extracto en Polvo de
Ua de Gato USP en 2 mL de metano!. Someter a ultra-
sonido durante 5 minutos, agitando ocasionalmente.
Calentar en un bao de agua a 60 durante 15 minu-
tos, enfriar y centrifugar.
Solucin muestra: Agitar una cantidad de Extracto en
Polvo, equivalente a aproximadamente 25 mg de la
cantidad declarada de alcaloides oxindlicos pentaccli-
cos, en 20 mL de metanol. Dejar en reposo durante 15
minutos antes de usar.
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatografa
con un tamao de partcula promedio de 1 0-15 m
(placas para TLC)
Volumen de aplicacin: 20 L, en bandas de 1 cm de
longitud
Fase mvil: Acetato de etilo y hexano (95:5)
Solucin reveladora A: Disolver calentando 0,85 g de
nitrato bsico de bismuto en 1 O mL de cido actico
glacial y 40 mL de agua. Filtrar si fuera necesario (Solu-
cin A). Disolver 8 g de yoduro de potasio en 30 mL de
para obtener una solucin madre. Diluir 1 mL de la so-
lucin madre con 2 mL de cido actico $Jlacial y 1O mL
de agua. [NOTA--Usar Solucin A y Solucion B mezcladas
recientemente.]
Solucin reveladora B: Usar una solucin de nitrito de
sodio al 10% en agua.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Desarrollar el cromatograma hasta una longitud de no
menos de 1 2 cm y secar la placa en una corriente de
aire.
Criterios de aceptacin: Observar la placa bajo luz UV
de longitud de onda corta. El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta mltiples zonas que corresponden
en valores RF a las observados en el cromatograma de la
Solucin estndar. Se pueden observar otras zonas de
intensidades variables en la Solucin muestra. Rociar la
ladora B, y observar la placa bajo luz diurna. El croma-
tograma de la Solucin muestra presenta mltiples zonas
marrn anaranjadas que corresponden en color y valo-
res RF a las observadas en el cromatograma de la Solu-
cin estndar. Se pueden observar otras zonas colorea-
das de intensidades variables en la Solucin muestra.
B. El cromatograma de la Solucin muestra presenta picos
de especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, pte-
ropodina e isopteropodina a los tiempos de retencin
que corresponden a los del cromatograma de la Solucin
estndar A, segn se obtienen en la prueba de Contenido
de Alcaloides Oxindlicos Pentacclicos y Lmite de Oxindoles
Tetracclicos. La suma de las reas de los picos de los alca-
loides oxindlicos tetracclicos rincofilina e isorincofilina
es menos de 25% de las reas totales de los picos detec-
tados para alcaloides oxindlicos pentacclicos.
COMPOSICIN , , ,
CONTENIDO DE ALCALOIDES 0XINDOLICOS PENTACICLICOS Y LI-
MITE DE 0XINDOLES TETRACCLICOS
Solucin estndar A: Disolver en metano! una canti-
dad, pesada con exactitud, de ER Extracto en Polvo de
Ua de Gato USP, agitando durante 1 minuto. Diluir
con metanol hasta obtener una solucin con una con-
centracin conocida de aproximadamente 0,5 mg/mL
de la cantidad declarada de alcaloides oxindlicos tota-
les. Pasar a travs de un filtro con un tamao de poro
de 0,45 m o menor.
Solucin estndar B: O, 1 mg/mL de ER lsopteropod1na
USP en metanol. Pasar a travs de un filtro de nailon
con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Transferir una cantidad, pesada con
exactitud, de Extracto en Polvo equivalente a aproxima-
USP 38 Suplementos Dietticos/ Ua de Gato 6695

damente S mg de lo contidod declarada de olcaloide-; cofilina, pteropodina e isopteropodina, como isoptero-

oxindlicos pentacclicos a un tubo de centrfuga de podina, en la porcin de Extracto en Polvo tomada:
1 O mL. Agregar 2,5 mL de metano\ y someter a ultraso-
nido durante 1 O mtnulm. CenlriU(:Jdt y l1ame1i1 el so- Resultado= (ru/r,) .< (C,/C.) > 100
brcnJd;rntc J un matrJ7 volumtrico de 1 O mL. Repetir
la extraccin tres veces ms, combinando los extractos ru = respuesta del pico de cada alcaloide
en el matraz volumtrico de 1 O mL y diluir con metano\ pertinente de la Solucin muestra
a volumen. Transferir aproximadamente 3 mL de la so- r1 = respuesta del pico de isopteropodina de la
lucin a un tubo de ensayo que contenga 300 mg de Solucin estndar B
polvo de poliamida y agitar durante 1 minuto. Pasar a C = concentracin de ER lsopteropodina USP en la
travs de un filtro de nailon con un tamao de poro de Solucin estndar B (mg/mL)
0,45 m o menor, desechando la primera parte del Cu = concentracin de Extracto en Polvo en la
filtrado. Solucin muestra (mg/mL)
Solucin A: Preparar una solucin amortiguadora de Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
fosfato 1 O mM de pH 7,0 filtrada y desgasificada, mez- alcaloides oxindlicos pentacclicos en el Extracto en
clando 6 mL de hidrxido de sodio 1 N, 1 O mL de fos- Polvo:
fato monobsico de potasio 1 M y agua en cantidad
suficiente para obtener 1 000 mL. Ajustar a un pH de Resultado = (IPA/ L) x 1 00
7,0 O, 1, agregando ms de cualquiera de las
soluciones. I,PA =suma de los percentajes de especiofilina,
Solucin B: Acetonitrilo uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina,
Solucin C: Metano\ y cido actico glacial (99:1) pteropodina e isopteropodina (%)
Fase mvil: Ver la Tabla 1. L = cantidad declarada de alcaloides pentacclicos
como isopteropodina (%)
Calcular el contenido de alcaloides oxindlicos
Tabla 1 tetracclicos, sumando los porcentajes individuales de
Tiempo Solucin A Solucin B Solucin C rincofilina e isorincofilina.
(min) (%) (%) (%) Criterios de aceptacin
o 65 35 o Alcaloides oxindlicos pentacclicos: 90,0%-110,0%
de la cantidad declarada con respecto a la materia
17 65 35 o seca
25 50 50 o Alcaloides oxindlicos tetracclicos: No ms de 25%
30 50 50 o de la cantidad declarada de alcaloides oxindlicos pen-
31 o o 100 tacclicos con respecto a la materia seca
36 o o 100
CONTAMINANTES
39 65 35 o
49 65 35 o
Eliminar lo siguiente:
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.) METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
Modo: HPLC 1O ppme (Oficial Ol-dic-2015)
Detector: UV 245 nm PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
Columna: 4,6 mm x 1O cm; relleno L1 de 3 m con tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g,
recubrimiento exhaustivo (end-capped) y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
Velocidad de flujo: 0,75 mL/min levaduras no excede de 10 3 ufc/g. ,
Volumen de inyeccin: 1 O L AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
Aptitud del sistema ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B ausencia de Salmonel/a spp. y Escherichia coli.
Requisitos de aptitud OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de Extractos
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma Botnicos (565), Disolventes Residuales y Residuos de
obtenido usando la Solucin estndar A es similar al Plaguicidas.
Cromatograma de Referencia provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Ua de Gato USP. PRUEBAS ESPECFICAS
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de PRDIDA POR SECADO (731 ): Secar 1 g a 1 05 durante 2
isopteropodina, Solucin estndar B horas: pierde no ms de 10,0% de su peso.
Desviacion estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de isopteropodina en inyecciones repetidas, REQUISITOS ADICIONALES
Solucin estndar B ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
Anlisis permeables y resistentes a la luz. Almacenar a tempera-
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By tura ambiente.
Solucin muestra ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
Medir las reas de los picos del analito. Identificar los latn y, despus de la denominacin oficial, la parte de la
tiempos de retencin de los picos correspondientes a planta a partir de la que se prepar el artculo. La eti-
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, rin- queta tambin indica el contenido de alcaloides oxindli-
cofilina, isorincofilina, pteropodina e isopteropodina cos pentacclicos, el disolvente o mezcla de disolventes
por comparacin del cromatograma de la Solucin es- de extraccin utilizados para la preparacin y la relacin
tndar A con el Cromatograma de Referencia provisto entre el material vegetal crudo inicial y el Extracto en
con el lote ciel rn Extracto en Polvo de Ua de Gato Polvo. Cumple con los requisitos en Extractos Botnicos
USP usado. (565), Etiquetado.
Calcular por separado los porcentajes de especiofilina,
uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, rintofilina, isorin-
6696 Una de Gato ./ SurlemPntos Dietticos
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
FR impteropodina USP
ER Extracto en Polvo de Una de Gato USP
Ua de Gato, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Ua de Gato contienen Extracto en Polvo de
Ua de Gato. Las Tabletas contienen no menos de 90,0%
y no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de Extracto
en Polvo, calculado como alcaloides oxindlicos
pentacclicos.
IDENTIFICACIN
El cromatograma de la Solucin muestra presenta picos de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina, ptero-
podina e isopteropodina a tiempos de retencin que co-
rresponden a los de la Solucin estndar A, segn se ob-
tienen en la prueba de Contenido de Alcaloides
Oxindlicos Pentacc/icos y Lmite de Alcaloides Oxindlicos
Tetracclicos. El contenido de alcaloides oxindlicos tetra-
cclicos, calculado como la suma de rincofilina e isorrin-
cofilina, es no ms de 25% de la cantidad declarada de
alcaloides oxindlicos pentacclicos.
CONTENIDO
CONTENIDO DE ALCALOIDES OXINDLICOS PENTACCLICOS Y L-
MITE DE ALCALOIDES OXINDUCOS TETRACCLICOS
Solucin A: Preparar una solucin amortiguadora de
fosfato 1O mM de pH 7,0 que se prepara mezclando
hidrxido de sodio 1 N, fosfato monobsico de potasio
1 M y agua (3:5:492), y ajustar a un pH de 7,0O,1
agregando ms de cualquiera de las soluciones.
Solucin B: Acetonitrilo
Solucin C: Metano! y cido actico glacial (99:1)
Fase mvil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
Tiempo Solucin A Solucin B Solucin C
lmin) (O/o) (%) (%)
----
o 65 35 o ru
17 65 35 o pertinente de la Solucin muestra
25 50 50 o rs
30 50 50 o Solucin estndar B
31 o o 100
36 o o 100
39 65 35 o muestra (mL)
49 65 35 o Calcular el contenido, en mg, de alcaloides oxindlicos
Solucin estndar A: Disolver una cantidad, pesada
con exactitud, de ER Extracto en Polvo de Ua de Gato
USP en metano!, agitar durante 1 minuto, y diluir con
metano! para obtener una solucin con una concentra-
cin conocida de aproximadamente 0,5 mg/mL de la
cantidad declarada de alcaloides oxindlicos totales. Pa-
sar a travs de un filtro con un tamao de poro de 0,45
m o menor.
Solucin estndar B: O, 1 mg/mL de ER lsopteropodina
USP en metano!. Pasar a travs de un filtro de nailon
con un tamao de poro de 0,45 m o menor.
Solucin muestra: Pesar con exactitud no menos de 20
Tabletas y reducir a polvo. Transferir una cantidad, pe-
sada con exactitud, del polvo equivalente a 20 mg de la
cantidad declarada de alcaloides oxindlicos pentaccli-
cos a un tubo de centrfuga de 50 mL. Someter a ultra-
sonido con 1O mL de metanol durante 1O minutos.
Centrifugar y transferir esta solucin a un matraz volu-
mtrico de 50 mL. Repetir la extraccin anterior tres ve-
ces ms combinando los extractos en el matraz volum-
trico de 50 mL y diluir con metanol a volumen.
USP 38
Transferir 3 mL de la solucin a un tubo de ensayo que
contenga 300 mg de poliamida en polvo y agitar du-
rante 1 minuto. Pasar a travs de un filtro de nailon con
u11 tamao de poro de U,4.'> ~1m o menor y desechar la
primera rarte del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 245 nm
Columna: 4,6 mm x 1O cm; relleno L1 de 3 m con
recubrimiento exhaustivo (end-capped)
Velocidad de flujo: 0,75 ml/min
Volumen de inyeccin: 1O ~1L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
obtenido usando la Solucin estndar A es similar al
Cromatograma de Referencia provisto con el ER Ex-
tracto en Polvo de Ua de Gato USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
isopteropodina, Solucin estndar B
Desviacion estndar relativa: No ms de 2,0%, a
partir del pico de isopteropodina en inyecciones repe-
tidas, Solucin estndar B
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Medir las reas de los picos de los analitos. Identificar
los tiempos de retencin de los picos correspondien-
tes a especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafi-
lina, pteropodina, isopteropodina, rincofilina e isorrin-
cofilina por comparacin del cromatograma de la
Solucin estndar A con el Cromatograma de Referen-
cia provisto con el lote de ER Extracto en Polvo de
Ua de Gato USP usado.
Calcular el contenido, en mg, de especiofilina, unca-
rina F, mitrafilina, isomitrafilina, pteropodina e isopte-
ropodina, como isopteropodina, en la porcin de Ta-
bletas tomada:
Resultado = (ru/r1) x Cs x V
= respuesta del pico de cada alcaloide
= respuesta del pico de isopteropodina de la
Cs = concentracin de ER lsopteropodina USP en la
Solucin estndar B (mg/mL)
V = volumen de dilucin final de la Solucin
pentacclicos totales (C1) en la porcin de Tabletas
tomada sumando los contenidos individuales de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina, isomitrafilina,
pteropodina e isopteropodina.
Calcular el porcentaje de Extracto en Polvo de Ua de
Gato con respecto a la cantidad declarada:
Resultado = C x (Awi/W) x (100/Li) x (100/L)
C1 = contenido de alcaloides oxindlicos
pentacclicos totales en la porcin de
Tabletas tomada (mg)
Aw1 = peso promedio de Tabletas (mg/lableta)
W = peso de la porcin de Tabletas tomada (mg)
LF = contenido de alcaloides oxindlicos
pentacclicos totales, mg, en 100 mg del
Extracto usado para preparar las Tabletas
L = cantidad de Extracto por Tableta segn la
cantidad declarada (mg/Tableta)
Calcular el porcentaje de alcaloides oxindlicos
tetracclicos con respecto al contenido de alcaloides
USP 38
oxindlicos pentacc!icos en ll rorcin de Tabletas
tomada:
Resultado - (,/r,.) " l 00
r, = suma de las respuestas de los picos de
rincofilina e isorrincofilina en el
cromatograma de la Solucin muestra
r,, = suma de las respuestas de los picos de
especiofilina, uncarina F, mitrafilina,
isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina
en el cromatograma de la Solucin muestra
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0% de la cantidad
declarada de Extracto en Polvo calculado como alcaloi-
des oxindlicos pentacclicos; se encuentra no ms de
25% de alcaloides oxindlicos tetracclicos con respecto
a la cantidad de alcaloides oxindlicos pentacclicos.
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Desintegracin
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 10' ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz, y almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del cual se prepararon las Tabletas. La etiqueta
tambin indica la cantidad de Extracto en Polvo por Ta-
bleta, en mg. Etiquetar las Tabletas indicando el conte-
nido, en mg, de alcaloides oxindlicos pentacclicos por
1 09 mg de Extracto en Polvo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER lsopteropodina USP
ER Extracto en Polvo de Ua de Gato USP
Proantocianidinas Oligomricas de
Semillas de Uva
DEFINICIN
Las Proantocianidinas Oligomricas de Semillas de Uva son
una fraccin de un extracto de las semillas maduras de
Vitis vinfera L. (Fam. Vitaceae). Contiene no menos de
75,0% de proantocianidinas oligomricas, calculado con
respecto a la materia anhidra. El extracto se prepara
usando disolventes adecuados tales como alcohol, meta-
no!, acetona, acetato de etilo, agua o mezclas de estos
disolventes, donde la relacin entre el material vegetal ini-
cial y el extracto est entre 70:1 y 10:1. El extracto se
enriquece adicionalmente en proantocianidinas oligomri-
cas mediante fraccionamiento con acetato de etilo u otros
medios.
IDENTIFICACIN
A. PRUEBA DE IDENTIFICACIN POR CROMATOGRAFA EN CAPA
DELGADA (201)
Adsorbente: Gel de slice para cromatografa con un
tamao de partcula promedio de 5 m y un espesor
de capa de aproximadamente 0,2 mm (placas para
HPTLC)
Suplementos Dietticos/ Semilla<> rle Uva 6697
Solucin estndar A: Disolver una cantidad de ER
Proantocianidinas Oligomric:is de Semillas de Uva Puri-
ficadas USP en metanol, sometiendo a ultrasonido, para
obtener u11J solucin con unJ concentracin de aproxi-
macfamente ') mglml CPnlrifugar si fuera necesario y
usar el sobrenadante transparente. [NOTA-Preparar en
el momento de su uso]
Solucin estndar B: Disolver una cantidad de ER (+)-
Catequina USP en metano!, sometiendo a ultrasonido,
para obtener una solucin con una concentracin de
aproximadamente 1 mg/mL.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
estndar A, excepto que se deben usar Proantocianidi-
nas Oli,gomricas de Semillas de Uva.
Fase movil: Una mezcla de acetona, tolueno y cido
frmico (15: 15:5)
Solucin reveladora: Disolver aproximadamente
100 mg de vainillina en 3 mL de metano! sometiendo a
ultrasonido. Agregar aproximadamente 3 mL de cido
clorhdrico, diluir con metano! hasta 1 O mL, y mezclar
cuidadosamente bajo agua fra. [NOTA-Recientemente
preparada]
Volumen de aplicacin: 15 L, en bandas de 5-1 O mm
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada adecuada (ver Cromato-
grafa (621 )). Usar una cmara saturada. Desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente de la fase m-
vil haya recorrido aproximadamente 90% de la placa.
Retirar la placa de la cmara, secar, rociar con la Solu-
cin reveladora, secar, y observar bajo luz visible.
Criterios de aceptacin: El cromatograma de la Solu-
cin muestra presenta bandas de color violeta rosado,
que corresponden en color y valor RF a las del cromato-
grama de la Solucin estndar A, a los siguientes valores
R, aproximados: un par de bandas entre 0,20 y 0,23
(proantocianidinas trimricas), una banda a 0,28
(proantocianidina-Br3'-0-galato), una banda a 0,31
(proantocianidinas dimricas tipo B) y una banda a 0,43
((-)-epicatequin-3-0-galato). El cromatograma de la So-
lucin muestra puede presentar una banda de color vio-
leta rosado a un valor Rr aproximado de 0,49 (mon-
meros de flavan-3-ol residuales y/o cido glico) que
corresponde a la banda en el cromatograma de la Solu-
cin estndar B. Tambin se pueden observar otras ban-
das de color violeta rosado.
B. El cromatograma de la Solucin muestra obtenido en
la prueba de Lmite de Catequina y Epicatequina presenta
picos debidos al dmero B, de proantocianidina, dmero
B; de proantocianidina, ( )-epicatequin-3-0-galato y un
pico ancho debido a otras proantocianidinas oligomricas
a los tiempos de retencin correspondientes a los del
cromatograma de la Solucin estandar B.
COMPOSICIN
CONTENIDO DE PROANTOCIANIDINAS OLIGOMRICAS
Solucin de estndar interno: Preparar una solucin
de butil hidroxitolueno en Fase mvil que contenga
aproximadamente 0,3 mg/mL.
Solucin estndar A: Disolver una cantidad pesada de
ER Proantocianidinas Oligomricas de Semillas de Uva
Purificadas USP en Solucin de estndar interno para ob-
tener una solucin con una concentracin conocida de
aproximadamente 1,0 mg/mL.
Solucin estndar B: Disolver una porcin de ER (+)-
Catequina USP en Solucin de estndar interno para ob-
tener una solucin con una concentracin conocida de
aproximadamente 0,2 mg/mL.
Solucin muestra: Disolver una cantidad pesada de
Proantocianidinas Oligomricas de Semillas de Uva en
Solucin de estndar interno para obtener una solucin
con 1in;i ronrentracin conocida de aproximadamente
6698 Semillas rle 1 lva ,1 \up!ernentos Dietticos USP 38

1,0 my/ml. Centrifuqar y usi:lr el sobrenadante PRUEBAS ESPECFICAS

transpMentc. LMITE DE CATEQUINA Y EPICATEQUINA
Fase mvil: Prep<ir<ir una mezcla tiltrJda y desgasificada Solucin A: Usar acetonitrilo.
rl0 tetrahid:ofurano y unJ ~c!~~cin (.~c_uv:>tJ Je brornuru Solucin B: Usar una soluc1on acuosa al 0,3% de cido
de litio (aproximadamenlP 1 mrml) (q5:5). fosfrico <11 8 50{1
Sistema cromato9ratico Disolvente: Preparar una mezcla de Solucin A y Solu-
(Ver Cromatogrofw (621 ), Aptitud del Sis temo.) cin B (1 :9).
Modo: HPLC Solucin estndar A: Disolver, sometiendo a ultraso-
Detector: UV 280 nm nido, una cantidad pesada de ER ( +)-Calequina USP en
Columna: 7,5 mm x 30 cm; relleno L21 de 5 m, 500 Disolvente para obtener una solucin con una concen-
A tracin conocida de aproximadamente 0,5 mg/ml.
Temperatura de la columna: 25 :t: 1 Solucin estndar B: Disolver, sometiendo a ultraso-
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min nido, una cantidad pesada de ER Proantocianidinas Oli-
Volumen de inyeccin: 1O L gomricas de Semillas de Uva USP en Disolvente para
Aptitud del sistema obtener una solucin con una concentracin conocida
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B de aproximadamente 5 mg/ml. Centrifugar y usar el
Requisitos de aptitud: Medir las respuestas segn se sobrenadante transparente.
determina en Anlisis. Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% de- estndar B, excepto que se deben usJr Proantocianidi-
terminada a partir del cociente entre las reas de los nas Oli..9omricas de Semillas de Uva.
picos de proantocianidinas oligomricas y el estndar Fase movil: Ver la tabla de gradientes siguiente.
interno en inyecciones repetidas, Solucin estndar A
Resolucin: No menos de 3,0 entre los picos de mo- Tiempo Solucin A Solucin B
nmeros y el estndar interno, Solucin estndar B lmin) (%) (%)
Anlisis
Muestras: Solucin estandar A, Solucion estndar By ,_____________o____ ----
10 90
Solucin muestra 45 20 80
Cromatografiar la Solucin estndar A y determinar el 65 --
60 40
comienzo y el final del intervalo del tiempo de reten- 66 10 90
cin para la integracin de las proantocianidinas oli- 85 10 90
gomricas, a los puntos donde la respuesta del pico
principal es aproximadamente 0,5% de su mximo. Sistema cromatogrfico
Registrar el cociente entre las reas de los picos de (Ver Cromatografa (621), Aptitud del Sistema.)
proantocianidinas oligomricas y el estndar interno. Modo: HPLC
Cromatografiar la Solucin estndar By la Solucin Detector: UV 278 nm
muestra e identificar la ubicacin de los monmeros. Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Integrar las reas de los picos principales dentro del Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
intervalo del tiempo de retencin determinado con la Volumen de inyeccin: 1 O L
Solucin estndar A, excluyendo el rea arriba del pico Aptitud del sistema
principal, en el sitio identificado para los monmeros, Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
usando un mtodo de integracin apropiado. Requisitos de aptitud
Calcular el porcentaje de las proantocianidinas oligo- El cromatograma de la Solucin estndar B es similar al
mrir:as en la porcin de Proantocianidinas Oligomri- Cromalograma de Referencia provisto con el lote de
cas de Semillas de Uva tomada: ER Proantocianidinas Oligomricas de Semillas de Uva
USP usado.
Resultado = (Ru/Rs) x (Cs/Cu) x 100 Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
catequina, Solucin estndar A
Ru = cociente de respuesta entre los picos de Desviacin estndar relativa: No ms de 2% deter-
proantocianidinas oligomricas y estndar minada a partir del pico de catequina en inyecciones
interno de la Solucin muestra repetidas, Solucin estndar A
Rs = cociente de respuesta entre los picos de Anlisis
proantocianidinas oligomricas y estndar Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
interno de la Solucin estndar A Solucin muestra
C = concentracin de ER Proantocianidinas Usando el cromatograma de la Solucin estndar A, de
Oligomricas de Semillas de Uva Purificadas la Solucin estndar By el Cromatograma de Referen-
USP en la Solucin estndar A (mg/ml) cia provisto con el iote de ER Proantocianidinas Oli-
C1 -- concentracin de Proanlocianidinas gomricas de Semillas de Uva USP usado, identificar
Oligomricas de Semillas de Uva en la los tiempos de retencin de los picos correspondien-
Solucin muestra (mg/ml) tes a ( +)-catequina y ( )-epicatequina. Los tiempos de
Criterios de aceptacin: No menos de 75,0% con res- retencin relativos aproximados de los picos son 1,0
pecto a la materia anhidra y 1,43 para (+)-catequina y (-)-epicatequina,
respectivamente.
IMPUREZAS
Calcular la suma de los porcentajes de (+ )-catequina y
Impurezas Inorgnicas (-)-epicatequina en la porcin dP Proantocianidinas
OligornriC<is de Semillas de Uva tomada:
Eliminar lo siguiente:
(r,/rs) x. (C1 x. V/W) x 100
. METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
1 O ppm (Oficial 01-dic-2015)
ru = suma de las respuestas de los picos de ( +)-
catequina y (-)-epicatequina de la Solucin
lmpu~ezas Orgnicas , nJul!~lru
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, ivletodo General para Ana-
~ respuesta del pico de ( +)-catequina de la
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos Solucin estndar A
e) = concentracin de ER ( +)-Catequina USP en la
Solucin estndar A (mg/ml)
USP 38
V = volumen fina! de la Solucin muestra (rnL)
W = peso de Proantocian1dinas Ol1gomericas de
Semillas de Uva tomado para preparar la
~oluoon muestra (mg)
Crilerim de aceptacin: ~-Jo ms de 19,0% con res-
pecto a la materia anhidra
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 1 0 4 ufc/g.
El recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 oi ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Fscherichia coli.
RESIDUO DE INCINERACIN (281): No ms de 0,5%, deter-
minado sobre 5,0 g
AGUA, Jvltodo la (921): No ms de 8,0%
FRACCION INSOLUBLE EN AGUA
Anlisis: Transferir aproximadamente 1 g a un matraz
adecuado. Agregar 1 00 mL de agua y agitar vigorosa-
mente durante 15 minutos. Pasar la solucin a travs de
un filtro de vidrio sinterizado previamente tarado, lavar
el matraz con 30 mL de agua, y transferir los lavados al
filtro. Lavar el filtro con 30 mL de agua en porciones de
5 ml. Secar el filtro durante 2 horas a 1 05, enfriar en
un desecador, y pesar. Calcular el porcentaje de la frac-
cin insoluble en agua.
Criterios de aceptacin: No ms de 2%
OTROS REQUISITOS: Cumple con los requisitos de la
prueba de Disolventes Residuales en Extractos Botnicos
(565).
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Proteger de la luz y la humedad, y almacenar a
temperatura ambiente controlada.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, la leyenda
"Proantocianidinas Oligomricas de Semillas de Uva".
Cumple con otros requisitos de etiquetado en Extractos
Bot,nicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER (+)-Catequina USP
ER Proantocianidinas Oligornricas de Semillas de Uva
USP
ER Proantocianidinas Oligomricas de Semillas de Uva
Purificadas USP
Valeriana
DEFINICIN
La Valeriana est compuesta por las partes subterrneas de
Valeriana officinalis L. (Fam. Valerianaceae), incluidos el ri-
zoma, las races y los estolones. Contiene no menos de
0,5% de aceite voltil, no menos de 0,05% de cido vale-
rnico (C1 sH2202) y no menos de O, 17% de cidos valer-
nicos totales, calculados como la suma de cido hidroxi-
valernico, cido acetoxivalernico y cido valernico, con
respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. Cumple con los requisitos en Pruebas Especficas, Ca-
ractersticas Botnicas
B.
Solucin muestra: 0,2 g de Valeriana, reducida a polvo
recientemente, en 5 ml. de cloruro dP metileno. Agitar
varias veces y dejar en reposo durante 5 minutos. Fil-
trar, lavar el filtro con 2 mL de cloruro de metileno,
combinar el filtrado y los lavados, y evaporar hasta se-
quedad. Disolver el residuo en 0,2 mL de cloruro de
metileno.
Anlisis: Agregar 3 mL de una rneLcla ue volmenes
iguales de cido actico glacial y cido clorhdrico al
Suplementos Dieteticos / \'Jlcri;ma 6699
25% a O, 1 mL de la Solucin muestra, y agitil varias
veces.
Criterios de aceptacin: Se desarrolla un color aLUI
dentro de los 15 rninulm.
C. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,25 mg/mL de ER Acido Valer-
nico USP en metano!
Solucin estndar B: 40 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP en metano!. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solucin muestra: Aproximadamente 0,5 g de Vale-
riana, reducida a polvo fino, en 5 mL de metano!. So-
meter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar y
usar el sobrenadante.
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao de partcula promPdio de 2-1 O p m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 pL, en bandas de 8 mm
Fase mvil: Una mezcla de ciclohexano, acetato de
etilo y cido actico (60:38:2)
Reactivo de derivatizacin A: Una mezcla de cido
actico glacial y cido clorhdrico (1 :4)
Reactivo de derivatizacin B: 0,5 mL de p-anisalde-
hdo, 1 O mL de cido actico y 5 mL de cido sul-
frico. Agregar a 85 mL de metano\ helado y mezclar.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada. Usar una cmara saturada y acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
33%, usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los
cromatogramas sobre una distancia de 6 cm. Retirar
la placa de la cmara, secar, derivatizar con Reactivo
de derivatizacin A, calentar a 120 durante 5 minutos
y observar bajo luz blanca. Derivatizar con Reactivo de
derivatizacin B, calentar a 100'' durante 3 minutos y
observar bajo luz blanca.
Criterios de aceptacin: Despus de derivatizar con Re-
activo de derivatizacin A y calentar, la Solucin muestra
no presenta una banda de color azul intenso a aproxi-
madamente la mitad del cromatograma ni otras bandas
significativas [a diferencia de la Valeriana mexicana (Va-
leriana edulis)], aunque pueden observarse otras bandas
menores.
Despus de derivatizar con Reactivo de derivatizacin B y
calentar, la Solucin muestra presenta tres bandas de
color violeta en posiciones y colores similares a los de
las bandas de la Solucin estndar B. Estas bandas in-
cluyen una banda menor en el tercio inferior del cro-
matograma, debida a cido hidroxivalernico, una
banda principal a aproximadamente la mitad del cro-
matograma debida a cido acetoxivalernico [a dife-
rencia de la valeriana de Scouler (Valeriana wallichil)] y
una banda principal a un RF correspondiente a la
banda de cido valernico de la Solucin estndar A v
la Solucin estndar B. Pueden observarse otras bandas
menores en la Solucin muestra y en la Solucin estn-
dar B.
D. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Valernicos.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
un pico a un tiempo de retencin correspondiente al
pico del cido valernico de la Solucin estndar A. La
Solucin muestra presenta picos adicionales correspon-
dientes al cido hidroxivalernico y al cido
acetoxivaiernico.
6700 Vllerilna / SurJIPllJPlllO\ nif'ti'ticm
COMPOSICIN
CONTENIDO DE CIDOS V ALERNICOS
Solucin A: Mezclar 6 ml de cido fosfrico al 85%
co11 900 mL de agua, d1iu1r con agua hasta 1000 ml,
mc1clar, filtrar y desgasificar
Solucin B: Mezclar 6 ml de cido fosfrico al 85%
con 900 ml de metanol, diluir con metanol hasta
1 000 ml, mezclar, filtrar y desgasificar.
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
lmin) (%) (%)
o 40 60
15 5 95
- - 25 5 95
30 40 60
Disolvente: Una mezcla de metanol y una solucin de
cido fosfrico al O, 1% en agua (3: 1) , valernicos totales, calculados como la suma de cido
Solucin estndar A: 0,02 mg/ml de ER Acido Valer-
nico USP en metanol. Someter a ultrasonido, si fuera
necesario.
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
cin de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP en Disol-
vente para obtener una solucin con una concentracin
de aproximadamente 20 mg/ml. Antes de inyectar, pa-
sar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Valeriana, reducido a polvo fino y pesado con exacti-
tud, a un matraz volumtrico de 50 ml, agregar
1 0,0 ml de agua y agitar durante 2 minutos mientras
se calienta en un bao de agua mantenido a aproxima-
damente 50. Someter a ultrasonido durante 15 minu-
tos, agregar 35 ml de metanol y someter a ultrasonido
durante 15 minutos. Enfriar, diluir con metanol a volu-
men y mezclar. Antes de inyectar, pasar a travs de un
filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m o menor, desechando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento e:>;<-
haustivo (end-capped); relleno L1 de 5 m, 100 A
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido valernico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de cido valernico en inyecciones repetidas,
Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Identificar los cidos valernicos en el cromatograma de
la Solucin muestra por comparacin con los cromato-
gramas de la Solucin estndar A, la Solucin estndar B
y el cromatograma de referencia provisto con el lote
de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP usado.
USP 38
Calcular lm porcentajes de cido hidroxivalernico,
cido acetoxivalernico y cido valernico en la por-
cin de Valeriana tomada:
Resultado = (rj r,; >: e A (V/ vV) A FA 1 00
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
r_~ = rea del pico del cido valernico de la
Solucin estndar A
= concentracin de cido valernico en la
Solucin estndar A (mg/ml)
V = volumen de la Solucin muestra (ml)
w = peso de Valeriana tomado para preparar la
Solucin muestra (mg)
F = factor de conversin para cada analito
(1, 1 O para cido hidroxivalernico, 1,25 para
cido acetoxivalernico y 1,00 para cido
valernico)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,05% de cido
valernico (C,,H2202) y no menos de O, 1 7% de cidos
hidroxivalernico, cido acetoxivalernico y cido vale-
rnico, con respecto a la materia seca
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Determinacin de Aceite
Voltil (561)
Muestra: 100 g, triturados recientemente en forma de
polvo grueso
Criterios de aceptacin: No menos de 0,5% con res-
pecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 0,5 g/g
Cadmio: No ms de 1,0 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de O, 1 g/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 1 0 5 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 1 0 3 ufc/g, y las bacterias Gram negativas tole-
rantes a la bilis no exceden de 10 3 uJc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Macroscpicas: Rizomas: de color gris amarillento a
marrn grisceo plido; enteros o cortados en sentido
longitudinal; de hasta 5 cm de largo y hasta 3 cm de
dimetro; base alargada o comprimida, cubierta y fusio-
nada con numerosas races; los pices presentan gene-
ralmente una cicatriz en forma de copa originada por
las partes areas, rara vez se encuentra la base del tallo,
la fractura revela la mdula con una cavidad central, se
observa tabique transversal en la seccin longitudinal.
Races: de color gris amarillento a marrn grisceo p-
lido con rayas longitudinales, numerosas, cilndricas,
delgadas, de aproximadamente 1 O cm de longitud y
hasta 3 mm de dimetro, unas pocas races secundarias
filiformes y frgiles, de fractura corta. Estolones: de
color gris amarillento plido, presenta nudos prominen-
tes separados por entrenudos estriados longitudinal-
mente, cada uno de 2-5 cm de longitud, fractura
fibrosa.
Microscpicas: Races: epidermis, capa pilfera con clu-
las papilosas, algunas desarrolladas en forma de pelos
radiculares y exodermis que consiste en una capa sim-
ple de clulas cuadrangulares a poligonales con paredes
suberizadas; glbulos de aceite dispersos a travs de la
LJSP 18
epidermis y !a corteza; la corteza, ocup<1 l<1 m<1yor pMte
de la raz, la parte externa con>ta de 2-4 capas de clu-
las resinosas, la parte interna est compuesta por nume-
rosas capas de ciuias poliyonaies a >uuredortdeadas lle-
nas de grnulos de .:ilmidn, con hendiduras; la
endodermis formada por una capa simple de clulas le-
vemente lignificadas, con puntos de Caspary diferencia-
dos; el periciclo formado por 1-2 capas de clulas tan-
gencialmente alargadas, a veces no diferenciadas; el
f\oema, con haces vasculares que forman un anillo in-
terrumpido; el cmbium frecuentemente no diferen-
ciado; el xilema, continuamente distribuido, con vasos
poligonales, rodeando la mdula central; la mdula pre-
senta clulas con paredes levemente engrosadas que
contienen grnulos de almidn; los grnulos de almi-
dn, simples, hilio punteado, radiado o hendido, de
5-15 m en dimetro; grnulos de almidn compues-
tos por 2-6 componentes. Los rizomas: similares a las
races excepto en la epidermis y la exodermis, reempla-
zadas parcialmente por una peridermis poco desarro-
llada; presencia de numerosos haces vasculares; mdula
central ms ancha, incluye hendiduras de diversos ta-
maos, las ms grandes separadas por grupos de clu-
la} ptreas. , fa con un tamao de partcula promedio de 2-1 O m
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Materia Orgnica Extraa
(561): No ms de 2,0%
SUSTANCIAS EXTRABLES
Muestra: 2 g, secados cuidadosamente a 40 y reduci-
dos a polvo grueso
Anlisis: Mezclar la Muestra con 20 mL de alcohol al
70% y dejar en reposo durante 2 horas, agitando fre-
cuentemente. Filtrar, evaporar 5 mL del filtrado en un
bao de agua hasta sequedad y secar el residuo a 105.
<;:riterios de aceptacin: No menos de 20%
PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Valeriana reducida a polvo fino
Anlisis: Secar a 1 05 durante 2 horas.
Cri,terios de aceptacin:, No ms de 1 2%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561):
No ms de 12,0%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Insolubles en cido
(561): No ms de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar a temperatura ambiente. Proteger
de la luz y la humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la ;ilanta contenidas en el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Valeriana USP
ER cido Valernico USP
Valeriana en Polvo
DEFINICIN
La Valeriana en Polvo es Valeriana reducida a polvo fino o
muy fino. No contiene cristales de oxalato de calcio ni
grnulos de almidn extram. Contiene no menos de
O, 3% de aceite voltil, no menos de 0,04% de cido vale-
rnico (C,,H 77 02) y no menos de O, 1 % de cidos valerni-
cos totales, calculados como la suma de cido hidroxivale-
rnico, cido acetoxivalernico y cido valernico, con
respecto a la materia seca.
IDENTIFICACIN
A. Cumple con los requi>itos en Pruebm f:-,ptfirns, Ca-
ractersticas Botnicas.
B.
Solucin muestra: 0,2 g de Valeriana en Polvo en 5 mL
de cloruro de rnetileno. Agitar varias veces y dejar en
Suplementos Dietticos /Valeriana 6701
reposo durante 5 minutos. Filtrar, lavar el filtro con
2 mL de cloruro d<c metilenu, combinar el filtrado y los
lavados, y evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo
en 0,2 rnL de cloruro de metileno.
Anlisis: Agregar 3 mL de una mezcla de volmenes
iguales de cido actico glacial y cido clorhdrico al
25% a O, 1 mL de la Solucin muestra, y agitar varias
veces.
Criterios de aceptacin: Se desarrolla un color azul
dentro de los 15 minutos.
C. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,25 mg/mL de ER cido Valer-
nico USP en metano\
Solucin estndar B: 40 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP en metano\. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solucin muestra: Aproximadamente 0,5 g de Vale-
riana en Polvo en 5 mL de metano\. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L, en bandas de 8 mm
Fase mvil: Una mezcla de ciclohexano, acetato de
etilo y cido actico (60:38:2)
Reactivo de derivatizacin A: Una mezcla de cido
actico glacial y cido clorhdrico (1 :4)
Reactivo de derivatizacin B: 0,5 mL de p-anisalde-
hdo, 1 O mL de cido actico y 5 mL de cido sul-
frico. Agregar a 85 mL de metano\ helado y mezclar.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada. Usar una cmara saturada y acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
33%, usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los
cromatogramas sobre una distancia de 6 cm. Retirar
la placa de la cmara, secar, derivatizar con Reactivo
de derivatizacin A, calentar a 120 durante 5 minutos
y observar bajo luz blanca. Derivatizar con Reactivo de
derivatizacin B, calentar a 100 durante 3 minutos y
observar bajo luz blanca.
'::riterios de aceptacin: Despus de derivatizar con Re-
activo de derivatizacin A y calentar, la Solucin muestra
no presenta una banda de color azul intenso a aproxi-
madamente la mitad del cromatograma ni otras bandas
significativas [a diferencia de la Valeriana mexicana (Va-
leriana edulis)], aunque pueden observarse otras bandas
menores.
Despus de derivatizar con Reactivo de derivatizacin B y
calentar, la Solucin muestra presenta tres bandas de
color violeta en posiciones y colores similares a los de
las bandas de la Solucin estndar B. Estas bandas in-
cluyen una banda menor en el tercio inferior del cro-
matograma debida a cido hidroxivalernico, una
banda principal a aproximadamente la mitad del cro-
rnatograrna debida a cido acetoxivalernico [a dife-
rencia de la valeriana de Scouler (Valeriana wal/ichi1)] y
una banda principal a un Rf correspondiente a la
banda del cido valerenico de la Solucin estndar A y
la Solucin cstcndar B. Pueden observarse otras bandas
menores en la Solucin muestra y en la Solucin estn-
dar B.
D. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido " Acidrn Volernico).
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
un pico a un tiempo de retencin correspondiente al
pico de cido valernico de la Solucin estndar A. La
Solucion muestra presenta picos adicionales correspon-
6702 Va!Priana I \uf11PmPntos Dielliws
dientes al audo h1droxivaler11ico v al cido
acetox1valerenico.
COMPOSICIN .. , ciLiJu acelox1vaierenico y acido valeren1co en la por-
CONTENIDO DE ACIDOS VALERENICOS
Solucin A: Mezclar 6 rnL Je ciciJo osfrico ai 85%
con 900 ml de agua, rliluir con agua hasta 1000 ml,
mezclar, filtrar y desgasificar.
Solucin B: Mezclar 6 mL de cido fosfrico al 85%
con 900 ml de metano!, diluir con metano! hasta
1 000 ml, mezclar, filtrar y desgasificar.
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
.------------
1
Tiempo Solucin A
(min) --~----_J_~
1
1--------
o 40 ----- -- ------
15 5 _95_
25 5 95
30 40
Disolvente: Una mezcla de metano! y una solucin de
cido fosfrico al O, 1 % en agua (3:1) , valernicos totales, calculados como la suma de ac1do
Solucin estndar A: 0,02 rr1g/ml de ER Acido Valer-
nico USP en metano!. Someter a ultrasonido, si fuera
necesario.
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
cin de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP en Disol-
vente para obtener una solucin con una concentracin
de aproximadamente 20 mg/ml. Antes de inyectar, pa-
sar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir aproximadamente 1,0 g
de Valeriana en Polvo, pesado con exactitud, a un ma-
traz volumtrico de 50 ml, agregar 10,0 ml de agua y
agitar durante 2 minutos mientras se calienta en un
bano de agua mantenido a aproximadamente 50. So-
meter a ultrasonido durante 15 minutos, agregar 35 ml
de metano! y someter a ultrasonido durante 15 minu-
tos. Enfriar, diluir con metano! a volumen y mezclar.
Antes de inyectar, pasar J travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 pm o menor,
desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento e~-
haustivo (end-capped); relleno L1 de 5 pm, 100 A
Temperatura de la columna: 40"
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 pl
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido valernico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de cido valernico en inyecciones repetidas,
Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Soluoon muestra
Identificar los cidos valernicos en el cromatograma de
la Solucin muestra por cornaraci11 Lu11 los cromato-
gramas de la Solucin estndar A, la Solucin estndar B
USP 38
y el cromatograma de referencia provisto con el lote
de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP usado.
Calcular los porcentajes de cido hidroxivalernico,
cin de VJ!criJnu en PohJo tomilda.
Resultado= (ru/r,) X e X (V!W) X f- X 100
r,1 = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico del cido valernico de la
Solucin estndar A
e concentracin de cido valernico en la
=
Solucin estndar A (mg/ml)
---- V = volumen de la Solucin muestra (ml)
Solucin B W = peso de Valeriana en Polvo tomado para
(%) preparar la Solucin muestra (mg)
60 F = factor de conversin para cada analito
--
(1, 1 O para cido hidroxivalernico, 1,25 para
cido acetoxivalernico y 1,00 para cido
valernico)
60
Criterios de aceptacin: No menos de 0,04% ,d~ cido
valernico (C1sH2202) y no menos de O, 1 % de ac!d.os
hidroxivalernico, cido acetoxivalernico y cido vale-
rnico con respecto a la materia seca
ARTCULS DE ORIGEN BOTNICO, Determinarin de Aceite
Voltil (561)
Muestra: 100 g de Valeriana en Polvo
Criterios de aceptacin: No menos de 0,3%
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 0,5 g/g
Cadmio: No ms de 1,0 g/g
Plomo: No ms de 5,0 g/g
Mercurio: No ms de O, 1 ~Lg/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 10 5 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 101 ufc/g, y las bacterias Gram negativas tole-
rantes a la bilis no exceden de 1 0 3 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas .Pa.ra de.terminar la
ausencia de Salmonella spp. y Eschench1a col!.
PRUEBAS ESPECFICAS
CARACTERSTICAS BOTNICAS
Microscpicas: Numerosos grnulos de almidn, sim-
ples, hilio punteado, radial o hendido, de 5-15 pm en
dimetro grnulos de almidn compuestos por 2-6
compon~ntes; negros, en forma de cruz bajo el micros-
copio de polarizacin. Clulas ptreas dispersas, solas o
agregadas, con clulas de lmenes de varios tam.aos,
de color blanco amarillento brillante o blanco brillante
bajo un microscopio de polarizacin; numer<?sos frag~
mentos de clulas parenquimticas que contienen glo-
bulos de aceite voltil y grnulos de almidn; fragmen-
tos de fibras lignificadas de color amarillo plido, .
dispersas, solas o agregadas; fragmentos d~ vasos, ret1-
culados, con pu,ntuacioncs areoladas y esp1raladas.
SUSTANCIAS EXTRAIBLES
Muestra: 2 g de Valeriana en Polvo, secados cuidadosa-
mente a 40'
Anlisis: Mezclar la tvlut>slta e.un 20 ml de alcohol al
70% y dejar en reposo durante 2 horas, ?gitando fre-
cuentemente. Filtrar. evaoorar 'i mi. del filtrado en un
bao de agua hasta seqJedad y secar el residuo a 105.
USP 38
<;:riterios de aceptacin: No menos de 20%
PERDIDA POR SECADO (731)
Muestra: 1,0 g de Valeriana en Polvo
Anlisis: Secar a 1OY' durante L horas.
Cri,terio~ de <H.eplddn:, No ms de 12%
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Totales (561 ):
No,ms de 12,0% , ,
ARTICULOS DE ORIGEN BOTANICO, Cenizas Insolubles en Acido
(561): No ms de 5,0%
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
cerrados. Almacenar a temperatura ambiente. Proteger
de la luz y de la humedad.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y, despus de la denominacin oficial, las partes de
la glanta a partir de la que se prepar el artculo.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Valeriana USP
ER cido Valernico USP
Extracto en Polvo de Valeriana
DEFINICIN
El Extracto en Polvo de Valeriana se prepara a partir de Vale-
riana triturada usando mezclas hidroalcohlicas. Contiene
no menos de 0,3% de cido valernico (CisH2202) y no
menos de 0,6% de cidos valernicos totales, calculados
como la suma de cido hidroxivalernico, cido acetoxiva-
lernico y cido valernico, con respecto a la materia
seca. La relacin entre el material vegetal crudo inicial y el
Extracto est entre 4:1 y 7:1.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA , Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Solucin estndar A: 0,25 mg/mL de ER Acido Valer-
nico USP en metano!
Solucin estndar B: 40 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP en metano!. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solucin muestra: 40 mg/mL de Extracto en metano!.
Someter a ultrasonido durante 1 O minutos, centrifugar
y usar el sobrenadante.
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao de partcula promedio de 2-1 O m
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 L, en bandas de 8 mm
Fase mvil: Una mezcla de ciclohexano, acetato de
etilo y cido actico (60:38:2)
Reactivo de derivatizacin A: Una mezcla de cido
actico glacial y cido clorhdrico (1 :4)
Reactivo de derivatizacin B: 0,5 mL de p-anisalde-
hdo, 1 O ml de cido actico y 5 ml de cido sul-
frico. Agregar a 85 mL de metanol helado y mezclar.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada. Usar una cmara saturada y acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
33%, usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los
cromatogramas sobre una distancia de 6 cm. Retirar
la placa de la cmara, secar, derivatizar con Reactivo
de derivatizacin A, calentar a 120 durante 5 minutos
y observar bajo luz blanca. Derivatizar con Reactivo de
derivatizacin B, calentar a 100 durante 3 minutos y
observar bajo luz blanca.
Criterios de aceptacin: Despus de derivalizar con Re-
activo de derivatizacin A y calentar, la Solucin muestra
Sup!Pmentos D1etPticos / ValcriJnJ 6703
no presenta una banda de color azul intenso a aproxi-
madamente la mitad del cromatograma ni otras bandas
significativas [a diferencia de la Valeriana mexicana (Va-
leriana eduiis;j, aunque pueden observarse otras l.Januas
menores.
Despus de derivatizar con Reactivo de derivatizacin By
calentar, la Solucin muestra presenta tres bandas de
color violeta en posiciones y colores similares a los de
las bandas de la Solucin estndar B. Estas bandas in-
cluyen una banda menor en el tercio inferior del cro-
matograma debida a cido hidroxivalernico, una
banda principal a aproximadamente la mitad del cro-
matograma debida a cido acetoxivalernico [a dife-
rencia de la valeriana de Scouler (Valeriana wallichi1)] y
una banda principal a un Rf correspondiente a la
banda del acido valernico de la Solucin estndar A y
la Solucin estndar B. Pueden observarse otras bandas
menores en la Solucin muestra y en la Solucin estn-
dar B.
B. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Valernicos.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
un pico a un tiempo de retencin correspondiente al
pico del cido valernico de la Solucin estndar A. La
Solucin muestra presenta picos adicionales correspon-
dientes al cido hidroxivalernirn y al cido
acetoxivalernico.
COMPOSICIN , ,
CONTENIDO DE ACIDOS VALERENICOS
Solucin A: Mezclar 6 mL de cido fosfrico al 85%
con 900 mL de agua, diluir con agua hasta 1 000 mL,
mezclar, filtrar y desgasificar.
Solucin B: Mezclar 6 mL de cido fosfrico al 85%
con 900 mL de metano!, diluir con metano! hasta
1 000 mL, mezclar, filtrar y desgasificar.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
fmin) (O/o) llo'
o - ~----~-----. .L-~---
60
15 5 95
25 5 95
30 40 60
Disolvente: Una mezcla de metanol y una solucin de
cido fosfrico al O, 1 % en agua (3:1) ,
Solucin estndar A: 0,05 mg/mL de ER Acido Valer-
nico USP en metano!. Someter a ultrasonido, si fuera
necesario.
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
cin de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP en Disol-
vente para obtener una solucin con una concentracin
de aproximadamente 20 mg/mL. Antes de inyectar, pa-
sar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Solucin muestra: Someter a ultrasonido una porcin
de Extracto en Disolvente para obtener una solucin con
una concentracin de aproximadamente 20 mg/mL.
Antes de inyectar, pasar a travs de un filtro de mem-
brana con un tamao de poro de 0,45 m o menor,
desechando los primeros mL del filtrado.
Sistema cromatowfico
(Ver Cromatograf!O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 2'.) cm, con recubrimiento e0-
haustivo (end-capped); relleno Ll de 5 pm, 100 A
6704 Valeriana /Suplementos Dietticos
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 1,0 mlimin
Volumen de inyeccin: 25 pL
Aptitud del ~i~Lemd
Muestras: Solucin estndar A y folurin P>tndor B
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido valernico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de cido valernico en inyecciones repetidas,
Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Identificar los cidos valernicos en el cromatograma de
la Solucin muestra por comparacin con los cromato-
gramas de la Solucin estndar A, la Solucin estndar B
y el cromatograma de referencia provisto con el lote
de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP usado.
Calcular los porcentajes de cido hidroxivalernico,
cido acetoxivalernico y cido valernico en la por-
cin de Extracto tomada:
Resultado = (ru!rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = rea del pico del analito pertinente de la
Solucin muestra
rs = rea del pico del cido valernico de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de cido valernico en la
Solucin estndar A (mg/mL)
Cu concentracin del Extracto en la Solucin
= sobrenadante.
muestra (mg/mL)
F = factor de conversin para cada analito
(l, l O para cido hidroxivalernico, 1,25 para
cido acetoxivalernico y 1,00 para cido
valernico)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,3% de cido
valernico (Ci 5 H2202) y no menos de 0,6% de cidos
valernicos totales, calculados como la suma de cido
hidroxivalernico, cido acetoxivalernico y cido vale-
rnico, con respecto a la materia seca
CONTAMINANTES
IMPUREZAS ELEMENTALES-PROCEDIMIENTOS (233)
Criterios de aceptacin
Arsnico: No ms de 0,5 pg/g
Cadmio: No ms de 1,0 pg/g
Plomo: No ms de 5,0 pg/g
Mercurio: No ms de ,O, 1 pg/g
ARTCULOS DE ORIGEN BOTANICO, Residuos de Plaguicidas
(561 ): Cumple con los requisitos.
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal bacteriano no excede de 104 ufc/g, el recuento total
combinado de hongos filamentosos y levaduras no ex-
cede de 10 3 ufc/g, el recuento de coliformes no excede
de 10 1 ufc/g y el recuento de Enterobacteriaceae no ex-
cede de 10 1 ufc/g. , frico. Agregar a 85 mL de metano! helado y mezclar.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmone/la spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
PRUEBAS ESPECFICAS
DETERMINACIN DE AGUA, Mtodo la \921): No ms de
5%
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Cenizas Totale' (561):
No ms de 7,0%
USP 38
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables. Almacenar a temperatura ambiente contro-
lada. Proteger de la humeda_d Y. la luz. . ., ..
ETIQUETADO: La etiqueta indica la dcnominac1on of1c1al
del artculo, el nombre cientfico en latn y la parte de la
planta a partir de la que se prepar el artculo. Etiquetar
indicando el contenido de cido valernico y cidos vale-
rnicos totales, y la relacin entre el material vegetal
crudo inicial y el Extracto. Cumple con otros requisitos
de ,etiquetado en Extractos Botnicos (565).
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Extracto en Polvo de Valeriana USP
ER cido Valernico USP
Valeriana, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Valeriana contienen Extracto en Polvo de
Valeriana. Las Tabletas contienen no menos de 90,0% y
no ms de 120,0% de la cantidad declarada de Extracto
en Polvo de Valeriana, calculados como cidos valernicos,
equivalentes a la suma del cido hidroxivalernico, cido
acetoxivalernico y cido valernico.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA ,
Solucin estndar A: 0,25 mg/mL de ER Acido Valer-
nico USP en metano!
Solucin estndar B: 40 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP en metano!. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
1 O Tabletas. Transferir una cantidad del polvo, equiva-
lente a 1 00 mg de Extracto en Polvo de Valeriana a un
matraz adecuado. Agregar 5 mL de agua y 3 mL de una
solucin acuousa al 10% de hidrxido de potasio, ex-
traer con dos porciones de 5 mL de cloruro de metileno
y desechar la fase orgnica. Calentar la fase acuosa en
un bao de agua a 40 durante 1 O minutos, enfriar,
acidificar con cido clorhdrico al 7% y extraer con dos
porciones de 5 mL de cloruro de metileno. Secar la fase
orgnica sobre sulfato de sodio anhidro, filtrar, evaporar
el filtrado hasta sequedad y disolver el residuo en
2,0 mL de cloruro de metileno.
Sistema cromatogrfico
Adsorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
fa con un tamao de partcula promedio de 2-1 O pm
(placas para HPTLC)
Volumen de aplicacin: 5 pL, en bandas de 8 mm
Fase mvil: Una mezcla de ciclohexano, acetato de
etilo y cido actico (60:38:2)
Reactivo de derivatizacin A: Una mezcla de cido
actico glacial y cido clorhdrico (1 :4)
Reactivo de derivatizacin B: 0,5 mL de p-anisalde-
hdo, 1O mL de cido actico y 5 mL de cido sul-
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar By
Solucin muestra
Aplicar las Muestras en bandas a una placa para cro-
matografa en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada. Usar una cmara saturada y acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
33% usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los
cromatoaramas sobre una ciistancia de 6 cm. Retirar
la placa de la cmara, secar, derivatizar con Reactivo
de derivatizacin A, calentar a 120 durante 5 minutos
y observar bajo luz blanca. Derivatizar con Reactivo de
derivatizacin 8, calentar a 1 00' durante 3 minutos y
examinar bajo luz blanca.
USP 38
Criterios de aceptacin: Despus del tratamiento con
Reactivo de dcrivatizacin A y cJlor, IJ Solucin muestra
no presenta una banda de color azul intenso a aproxi-
madamente !a mitad de! cromatograma ni otras bandas
significativas [a diferencia de la Valeriana mexicana (Va-
leriana edu/is)j, aunque pueden observarse otras bandas
menores.
Despus del tratamiento con Reactivo de derivatizacin B
y calor, la Solucin muestra presenta tres bandas de
color violeta en posiciones y colores similares a Jos de
las bandas de la Solucin estndar B. Estas bandas in-
cluyen una banda menor en el tercio inferior del cro-
matograma debida a cido hidroxivalernico, una
banda principal a aproximadamente la mitad del cro-
matograma debida a cido acetoxivalernico [a dife-
rencia de la valeriana de Scouler (Valeriana wallichi1)] y
una banda principal a un R1 correspondiente a la
banda de cido valernico de la Solucin estndar A y
la Solucin estndar B. Pueden observarse otras bandas
menores en la Solucin muestra y en la Solucin estn-
dar B.
B. HPLC
Anlisis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Valernicos.
Criterios de aceptacin: La Solucin muestra presenta
un pico a un tiempo de retencin correspondiente al
pico de cido valernico de Ja Solucin estndar A. La
Solucin muestra presenta picos adicionales correspon-
dientes a cido hidroxivalernico y a cido
acetoxivalernico.
CONTENIDO
CONTENIDO DE EXTRACTO DE VALERIANA
Solucin A: Mezclar 6 mL de cido fosfrico al 85%
con 900 mL de agua, diluir con agua hasta 1 000 mL,
mezclar, filtrar y desgasificar.
Solucin B: Mezclar 6 mL de cido fosfrico al 85%
con 900 mL de metano!, diluir con metano! hasta
1 000 mL, mezclar, filtrar y desgasificar.
Fase mvil: Ver Ja Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
(min) (%) (%)
o 40 60
15 5 95
25 5 95
40 60
30
Disolvente: Una mezcla de metano! y solucin de cido
fosfrico al O, 1 % en agua (3:1) , Valeriana por Tableta (mg/Tableta)
Solucin estndar A: 0,02 mg/mL de ER Acido Valer-
nico USP en metano!. Someter a ultrasonido, si fuera
necesario.
Solucin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
cin de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP en Disol-
vente para obtener una solucin con una concentracin
de aproximadamente 20 mg/ml. Antes de la inyeccin,
pasar a travs de un filtro de membrana con un tamao
de poro de 0,45 m o menor, desechando los primeros
mL del filtrado.
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Tabletas y
reducir a polvo. Transferir una porcin del polvo, nomi-
nalmente equivalente a aproximadamente 3,0 mg de
cidos valerenicos, a un matraz adecuado. Agregar
25,0 mL de Disolvente, agitar hasta dispersar el polvo,
someter a ultrasonido durante 1 O minutos y centrifugar.
Usar el sobrenadante transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a \621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm, con recubrimiento e~
haustivo (end-capped); relleno L1 de 5 m, 100 A
'\urlemmtm DietPtiros /Valeriana 6705
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A v Solucin estndar B
Requisitos de aptitud ,
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin estndar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con el lote de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP usado.
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
cido valernico, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de cido valernico en inyecciones repetidas,
Solucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Identificar los cidos valernicos en el cromatograma de
la Solucin muestra por comparacin con los cromato-
gramas de la Solucin estndar A, la Solucin estndar B
y el cromatograma de referencia provisto con el lote
de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP usado.
Calcular el porcentaje de Ja cantidad declarada de Ex-
tracto en Polvo de Valeriana, como cidos valernicos
(suma de cido hidroxivalernico, cido acetoxivaler-
nico y cido valernico), en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado= {[(ru x f)]!rs} x (Cs x V/W) x (100/LE) x (Aw
X 100/L)
ru = reas de los picos de Jos analitos pertinentes
de Ja Solucin muestra
F = factor de conversin para cada analito
(1, 1O para cido hidroxivalernico, 1,25 para
cido acetoxivalernico y 1,00 para cido
valernico)
rs = rea del pico del cido valernico de la
Solucin estndar A
e = concentracin de cido valernico en la
Solucin estndar A (mg/mL)
V = volumen de la Solucin muestra (mL)
W = peso de la muestra de Tabletas reducidas a
polvo usada para preparar la Solucin
muestra (mg)
Aw = peso promedio de las Tabletas (mg/Tableta)
L1 = cantidad declarada de cidos valernicos en
100 mg del Extracto en Polvo de Valeriana
usado para preparar las Tabletas (mg)
L = cantidad declarada de Extracto en Polvo de
Criterios de aceptacin: 90,0%--120,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN V DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Desintegracin.
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 10 4 ufc/g,
y el recuento total combinado de hongos filamentosos y
levaduras no excede de 1 0 3 ufc/g. ,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con Jos requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables, resistentes a la luz. Almacenar a temperatura
ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre cientfico en
latn y despus de la denominacin oficial, el artculo a
partir del que se prepararon las Tabletas. La etiqueta tam-
6706 Valeriana / Suplementos Diettico~
bien md1ca la cantidad, en mg, de Extracto en Polvo de
VillPnana por 1ableta y el contenido, como porcentaje
dP ,cidos valernicos en el Extracto. ' matograma debida a cido hidroxivalernico, una
ESTANDARFS OE REFERENCIA USP f1 l\
ER ~xtracto en Polvo de Valeria'na 'usP
ER Acido Valernico USP
Valeriana, Tintura
DEFINICIN
La Tintura de Valeriana se prepara segn se indica a
continuacin.
1 Valeda_~-~--~~--~~~--~~~~-+~~--'2~0~0~n"---~---l
1 Und meLc.la de Alcohol y Agua (6:4) a (8:2),
i und cantidad sut1c1ente oara obtener 1000 ml
Preparar la Tintura segn se indica en Extractos Botnicos
(565), Tinturas, Proceso de Maceracin. La Tintura de Vale-
riana contiene no menos de 0,015% de cidos valerni-
cos, calculado como la suma de cido hidroxivalernico
cido acetoxivalernico y cido valernico. ' mezclar, filtrar y desgasificar.
IDENTIFICACIN
A. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Solucin estndar A: 0,25 mg/mL de ER cido Valer-
nico USP en metanol
Solucin estndar B: 40 mg/mL de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP en metano!. Someter a ultraso-
nido durante 1 O minutos, centrifugar y usar el
sobrenadante.
Solucin muestra: Centrifugar la Tintura y usar el
sobrenadante.
Sistema cromatogrfico
A9sorbente: Mezcla de gel de slice para cromatogra-
f1a con un tamao promedio de part1cula de 2-1 O m
(placas para HPTLC)
Volum.t;n de ,aplicacin: 5 L de Solu~in estndar A y
Soluoon estandar B, y 1 O L de Solucion muestra, en
bandas ele 8 rrnn
Fase mvil: Una mezcla de ciclohexano acetato de
etilo y cido actico (60:38:2) ' necesario.
Reactivo de derivatizacin A: Una mezcla de cido
actico glacial y cido clorhdrico (1 :4)
Re?ctivo de derivatizacin B: 0,5 mL de p-anisalde-
h1do, 1 O mL de cido actico y 5 mL de cido sul-
frico. Agregar a 85 mL de metano! helado y mezclar.
Anlisis
Muest.r_as: Solucin estndar A, Solucin estndar B y
Soluuon muestra
Aplicar las, Muestras en bandas a una placa para cro-
matograf1a en capa delgada de alta resolucin ade-
cuada. Usar una cmara saturada y acondicionar la
placa a una humedad relativa de aproximadamente
33/r, usando un dispositivo adecuado. Desarrollar los
cromatogramas hasta una distancia de 6 cm. Retirar
la placa de la cmara, secar y derivatizar con Reactivo
de derivatizacin A, calentar a 120 durante 5 minutos
y observar bajo luz blanca. Derivatizar con Reactivo de
derivatizacin B, calentar a 100 durante 3 minutos y
observar bajo luz blanca.
Criterios de aceptacin: Despus de tratarla con el Re-
activo de derivatizacin A y del calentamiento, la Solu-
uon muestra no presenta una banda de color azul in-
tpmo arroximadamente a la mitad del cromatograma
ni otras bandas significativas [a diferencia de la vale-
riana mexicana (Valeriana edulis)], aunque se pueden
observar bandas menores.
Despus de tratarla con el Reactivo de derivatizacin By
del calentamiento, la Solucin muestra presenta tres
uar1ci:ls de color violeta en posiciones y colores simila-
USP 38
res a las bandas de la Solucion estandar B. Estas bandas
incluyen una banda menor en el tercio inferior clel cro-
bandJ princ.ipJ! JpoximJdamente a la mjtad del cro-
rnatograrna rlebicla l ciclo acetoxiva!ernico [a dife-
rencia de la va lena na de Scouler (Valeriana wallichi1)], y
una banda principal a un valor R correspondiente a la
banda de ~ido v~lernico de la Solucin estndar A y
de la Soluoon estandar B. Se pueden observar otras
bandas menores en la Solucion muestra y en la Solucin
estndar B.
B. HPLC
Anl_isis: Proceder segn se indica en la prueba de Con-
tenido de Acidos Valernicos.
Criterios de aceptacin: La Solucin muesta presenta
un pico a un tiempo de retencin correspondiente al
pico de cido valernico de la Solucin estndar A. La
Solucin muestra presenta picos adicionales correspon-
dientes a cido hidroxivalernico y a cido
acetoxiva lern ico.
CONTENIDO
CONTENIDO DE CIDOS VALERNICOS
Solucin A: Mezclar 6 mL de cido fosfrico al 85%
con 900 mL de agua, diluir con agua hasta 1000 mL,
Solucin B: Mezclar 6 mL de cido fosfrico al 85%
con 900 mL de metanol, diluir con metano! hasta
1 000 mL, mezclar, filtrar y desgasificar.
Fase mvil: Ver la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo Solucin A Solucin B
(min\ (%\ (%\
o 40 60
15 5 95
25 5 95
30 40 60
Disolvente: Una mezcla de metanol y una solucin de
cido fosfrico al O, 1 % en agua (3:1)
So.lucin estndar A: 0,02 mg/mL de ER cido Valer-
nico USP en metanol. Someter a ultrasonido si fuera
'
S~l!-lcin estndar B: Someter a ultrasonido una por-
c1on de ER Extracto en Polvo de Valeriana USP en Disol-
vente hasta obtener una solucin con una concentra-
cin de aproximadamente 20 mg/mL. Antes de la
inyeccin, pasar a travs de un filtro de membrana con
un tamao de poro de 0,45 ~tm o menor, desechando
los primeros mL del filtrado.
So.1!-lcin muestra:, Usar la Tintura. Antes de la inyec-
c1on, pasar a traves de un filtro de membrana con un
tamao de poro de 0,45 Ltm o menor desechando los
primeros mL del filtrado. ' '
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm >. 25 cm; con recubrimiento ex-
haustivo (end-capped), relleno L1 de 5 m, 100 A
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar A y Solucin estndar B
Requisitos de aptitud
Similitud de _los c~omatogramas: El cromatograma
de la Soluoon estandar B es similar al cromatograma
de referencia provisto con ei iote de ER Extracto en
Polvo de Valeriana USP usado.
F~ctor de a~imetra: No ms de 2,0 para el pico de
ac1do valeren1co, Solucion estandar A
USP 38
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de cido valernico en inyecciones repelidas,
Solucion es/andar A
Anlisis
Muestrns: Solucin Pstnr/nr A, Solucin estndar B y
Solucin muestra
Identificar los cidos valernicos en el crornatograma de
la Solucin muestra por comparacin con los cromato-
gramas de la Solucin estndar A, Solucin estndar By
el cromatograma de referencia provisto con el lote de
ER Extracto en Polvo de Valeriana USP usado.
Calcular el porcentaje de cidos valernicos (la suma de
cido hidroxivalernico, cido acetoxivalernico y
cido valernico) en la porcin de Tintura tomada:
Resultado= {lI(r11 X F)J/r1} X e X O, 1
ru = reas de los picos de los analitos pertinentes
de la Solucin muestra
f = tactor de conversin para cada analito
(1, 1O para cido hidroxivalernico, 1,25 para
cido acetoxivalernico y 1,00 para cido
valernico)
= rea del pico de cido valernico de la
Solucin estndar A
Cs = concentracin de cido valernico en la
Solucin estndar A (mg/mL)
Criterios de aceptacin: No menos de 0,015% de ci-
dos valernicos, calculado como la suma de hidrxido
valernico, cido acetoxivalernico y cido valernico
OTROS COMPONENTES
DETERMINACIN DE ALCOHOL, Mtodo I (611): No menos
de 90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad declarada
de alcohol (C2HsOH)
CONTAMINANTES
ARTCULOS DE ORIGEN BOTNICO, Mtodo General para An-
lisis de Residuos de Plaguicidas (561 ): Cumple con los
requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luL. Almacenar a tempera-
tura ambiente.
ETIQUETADO: La etiqueta indica el nombre oficial del art-
culo, el nombre cientfico en latn y la parte de la planta
de la que se prepar el artculo. Etiquetar indicando el
contenido de cidos valernicos, la mezcla de disolventes
usada para la extraccin y la relacin entre el material
vegetal crudo inicial y la Tintura.
ESTA~DARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Acido Valernico USP
ER Extracto en Polvo de Valeriana USP
Valina-ver Valina en Monografas Generales
Vinpocetina
N
H
C22H2"N202 350,45
Eburnamenine-14-carboxylic acid, ethyl ester, (3u, l 6r1.)-;
Apovincamin-22-oato de etilo [ 42971-09-5].
Supfctncnto~ Diettico.~ / \'inpocetina 6707
DEFINICIN
La Vinpou:li11ci Lu11lie11e 11u 111c11us Je 98,0'/ii y 11u rn.:s Je
102,0% de vrnpocetrna (C;H;,N)O;), calculado con res-
pecto a ld .H_i)lcH1cjJ )f:'Cd.
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL INFRARROJO ( l 97K)
B. El tiempo de retencin del pico principal de la Solu-
cin muestra corresponde al del pico principal de la Solu-
cion estndar 4, segn se obtienen en la Valoracin.
VALORACIN
PROCEDIMIENTO
Solucin A: 15,4 g/L de acetato de amonio en agua
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin A (55:45)
Solucin estndar 1: 0,02 rng/ml de ER Vinpocetina
USP en Fase mvil
Solucin estndar 2: O, 12 mg/ml de ER Compuesto
Relacionado A de Vinpocetina USP y O, 1O rng/ml de ER
Compuesto Relacionado B de Vinpocetina USP, de ER
Compuesto Relacionado C de Vinpocetina USP y de ER
Co,mpuesto Relacionado D de Vinpocetina USP en Fase
mu vil
Solucin estndar 3: Diluir 1,0 mL de Solucin estndar
7 y 1,0 mL de Solucin estndar 2 con Fase mvil hasta
20,0 ml.
Solucin estndar 4: 0,2 mg/mL de ER Vinpocetina
USP en Fase mvil
Solucin muestra: 0,2 rng/ml de Vinpocetina en Fase
mvil
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatografw (621), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estondar 3
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para vinpo-
cetina y sus compuestos relacionados se muestran en
la Tabla 7.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 2,0 entre compuesto rela-
cionado B de vinpocetina y compuesto relacionado D
de vinpocetina
Desviacin estndar relativa: No rns de 2,orvo, Solu-
cin estndar 4
Anlisis
Muestras: Solucion estandor 4 y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de vinpocetina (CnHJ6N20J) en la
porcin de Vinpocetina tornada:
Resultado= (r,,/r1) x (C/C11) x 100
r,, respuesta del pico de la Solucion muestra
r respuesta del pico de la Solucion es/andar 4
~
C - concentracin de ER Vinpoceti11a USP en la
Solucin estndar 4 (rng/rnL)
C = concentracin de Vinpocetina en la Solucin
muestra (rng/rnl)
Criterios de aceptacin: 98,0%-102,0% con respecto
a la sustancia seca
IMPURElAS
RESIDUO DE INCINERACIN (281 ): No ms de O, 1 %
Eliminar lo siguiente:
. METALES PESADOS, Mtodo 11 (231): No ms de
o
1 ppme (/Jfir1a1 (l~-Oi(-2()i)'J
IMPUREZAS 0RGANICAS
Solucin A, Fase mvil, Solucin estndar 1, Solucin
estndar 2, Solucin estndar 3, Sistema cromato-
6708 Vinpocetina / SuplPmentos Diellicos USP 38

grfico y Aptitud del sistema: Proceder segn se in- Tabla 1 (cDntinuocion)

dica en la Valoracin. I~------ Criterios de -
Tiempo de
Solucin muestra: 1 mg/mL de V1npocetina en Fase Retencin Aceptacin,
mvil
Anlisis ! Nombre Relativo No ms de(%) j
lrnpun:Ld indivrdudi
Muestras: Solucton estandar 3 y Solucion muestra
Registrar los cromatogramas durante hasta un mnimo no es ecificada o1
de tres veces el tiempo de retencin de vinpocetina. lm urezas totales 1o
No tomar en cuenta los picos con un rea menor de '(l 2R5, 13a5R,1 3b.\R) l 3a-Etil- l 2-h1drox1-2, 3,5,6, 12, 13, l 3a, l 3b-octahidro-
0,5 veces el rea del pico debido a vinpocetina en la l H-indolo[3,2, l-dc]piridol3,2, l -1][1,5 ]nattiridina-12-carboxilato de etilo
(vincaminato de etilo).
Solucin estndar 3.
"(13a5,1 3b5)- l 3a-Etil-9-metoxi-2, 3,5,6, 13a,13b-hexahidro-l11-indolo
Calcular el porcentaje de los compuestos relacionados l3,2, l -de]pirido[3,2, 1-ij][ l ,5 ]nattrrrdina-12-carboxilato de metilo (apovinca-
A, B, C y D de vinpocetina en la porcin de Vinpoce- mina).
tina tomada: '(l 3a5, l 3b5)-l 3a-Uil-l O-metoxi-2,3,5,6, l 3a, l 3b-hexahidro-l H-indolo
[3,2, l -dejpirido[3,2, 1-iJ][l ,5 Jnaftiridina-12-carboxilato de etilo (metoxivin-
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x 100 pocetina).
" ( 12RS, 13a/i5,1 3bR5)- l 3a-Etil-2, 3,5,6, 12, 13,13a,1 3b-octahidro-1 H-indolo
[3,2, l-de]pirido[3,2, l-iiJ[l ,5 lnaftiridina-12-carboxilato de etilo (dihidrovin-
ru = respuesta del pico de cada una de las pocetina).
impurezas conocidas de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico del Estndar PRUEBAS ESPECFICAS
correspondiente para cada una de las PRDIDA POR SECADO (731)
impurezas conocidas de la Solucin estndar Anlisis: Secar una muestra al vaco a 1 00 durante 3
3 horas.
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP Criter!os sJe aceptacin: No ms de 0,5%
correspondiente para cada una de las ROTACION OPTICA, Rotacin Especfica (781 S)
impurezas conocidas en la Solucin estndar Solucin muestra: 1 O mg/mL en dimetilformamida
3 (mg/mL) Criterios de aceptacin: De + 127,0 a + 1 34,0, deter-
Cu = concentracin de Vinpocetina en la Solucin minada a 20.
muestra (mg/mL)
Calcular el porcentaje de cualquier impureza individual REQUISITOS ADICIONALES
no especificada, como vinpocetina, en la porcin de ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases bien
Vinpocetina tomada: cerrados y almacenar a temperatura ambiente
controlada.
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100 ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Vinpocetina USP
ru = respuesta del pico de cada una de las ER Compuesto Relacionado A de Vinpocetina USP
impurezas no especificadas de la Solucin ER Compuesto Relacionado B de Vinpocetina USP
muestra ER Compuesto Relacionado C de Vinpocetina USP
rs = respuesta del pico de vinpocetina de la ER Compuesto Relacionado D de Vinpocetina USP
Solucin estndar 3
Cs = concentracin de ER Vinpocetina USP en la
Solucin estndar 3 (mg/mL)
Cu = concentracin de Vinpocetina en la Solucin
muestra (m9/mL) Vinpocetina, Cpsulas
Criterios de aceptacion: Ver la Tabla 7.
DEFINICIN
Tabla 1 Las Cpsulas de Vinpocetina contienen no menos de 90,0%
Tiempo de Criterios de
y no ms de 11 0,0% de la cantidad declarada de vinpo-
Retencin Aceptacin, cetina (C22H20N202).
Nombre Relativo No ms de(%) IDENTIFICACIN
Vinoocetina 1 00 --- A. ABSORCIN EN EL ULTRAVIOLETA (197U)
Compuesto relacionado Medio: Alcohol
A de vinnocetina" o 40 06 Solucin estndar: 15 g/mL de ER Vinpocetina USP
Compuesto relacionado en Medio
B de vinoocelina" o 75 05 Solucin muestra: Equivalente a 15 g/mL de vinpoce-
Compuesto relacionado tina, a partir del contenido de Cpsulas en Medio
cde vinpocetina o 83 o3 Criterios de aceptacin: Los espectros de la Solucin
muestra y la Solucin estndar presentan mximos y m-
Compuesto relacionado
nimos a las mismas longitudes de onda.
D de vinoocetina" o 68 05
B. HPLC: El tiempo de retencin del pico principal de la
' (12R5, l 3a5R, l 3b5R)- l 3a-Etil-l 2-hidroxi 2,3,5.6, 12, 13, l 3a, l 3b-octahidro- Solucin muestra corresponde al de la Solucin estndar,
l H-indolol3,2, l-dejpiridol3,2, 1-ijJl l ,5jnaftiridina- l 2-carboxilato de etilo segn se obtienen en Contenido.
(vincaminato de etilo).
"(l 3a5, l 3b5)-13a-Etil-9-metoxi-2,3,5,6, l 3a, 13b-hexahidro-l H-indolo
[3,2, l -dejpirido[3,2, 1-ijj[l ,5 jnaftiridina-12-carboxilato de metilo (apovrnca- CONTENIDO
mina). PROCEDIMIENTO
(l 3a5, l 3b5)- l 3a-Etil-l 0-metoxi-2,3,5,6, l 3a, 13b-hexahidro-l H-indolo Solucin A: 15,4 g/L de acetato de amonio en agua
[3,2, 1-dejpirido[3,2, 1-i][l ,5jnaftiridina- l 2-carboxilato de etilo (metoxivin- Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin A (55:45)
pocetina). Solucin estndar: 0,2 mg/rnL de ER Vinpocetina USP
"(12R5, l 3aR5, 13bR5)- l 3a-Etil-2,3,5,6, 12, 13, 13a, 1 3b-octahidro- l H-indolo en Fase mvil
[3,2, l -dcjpirido[3,2, l -i][l ,5jnaftiridina-12-carboxilato de etilo (dihidrovin-
pocetina) Solucin muestra: Pesar no mPno<> ciP 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un vaso de precipitados adecuado. Retirar cualquier
USP 38
contenido adherido a las cubiertas de las cpsulas vacas
lavando, ~i fuera 11ece~ariu, LOn varias porciones de ter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cpsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba el olor a ter. Pesar las cubiertas de las
Capsulas vac1ls en ei frilsco de peslda tarado y cllcuiar
el peso neto promedio por Cpsula. Disolver una por-
cin del contenido de Cpsulas en acetonitrilo, some-
tiendo a ultrasonido durante 5 minutos. Dejar que la
solucin se enfre a temperatura ambiente, diluir con
acetonitrilo hasta obtener una solucin con una con-
centracin nominal de 0,2 mg/mL de vinpocetina y
filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vin-
pocetina (C22H26N202) en la porcin de Cpsulas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de la Solucin estndar
C5 = concentracin de ER Vinpocetina USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de vinpocetina en la
Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisit9s de Desintegracin.
VARIACION DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
pe~meables y resistentes a la luz.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Vinpocetina USP
Vinpocetina, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Vinpocetina contienen no menos de 90,0%
y no ms de 110,0% de la cantidad declarada de vinpo-
cetina (C22H26N202).
IDENTIFICACIN
A. ABSORCIN EN EL ULTRAVIOLETA (197U)
Medio: Alcohol
Solucin estndar: 15 g/ml de ER Vinpocetina USP
en Medio
Solucin muestra: Equivalente a 15 pg/mL de vinpoce-
tina, a partir de Tabletas reducidas a polvo fino en
Medio
Criterios de aceptacin: Los espectros de la Solucin
muestra y la Solucin estndar presentan mximos y m-
nimos a las mismas longitudes de onda.
B. HPLC: El tiempo de retencin del pico principal de la
Solucin muestra corresponde al de la Solucin estndar,
segn se obtienen en Contenido.
Suplementm Dietetiws / Vinpocetina 6709
CONTENIDO
PROCEDIMIENTO
Solucin A: 15,4 g/L de acetato de amonio en agua
Fase mvil: Acetonitrilo y Solucin A (55:45)
Solucin estndar: 0,2 mg/ml de l:.R V111pocet1na LJ)P
en Fase mvil
Solucin muestra: Disolver una porcin, a partir de no
menos de 20 Tabletas reducidas a polvo fino en aceto-
nitrilo, agitando meticulosamente y sometiendo a ultra-
sonido durante 5 minutos. Dejar que la solucin se en-
fre a temperatura ambiente, diluir con acetonitrilo
hasta obtener una solucin nominalmente equivalente a
0,2 mg/ml de vinpocetina y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 pm
Velocidad de flujo: 1,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vin-
pocetina (C22H26N202) en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C1/Cu) x 100
ru = respuesta del pico de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Vinpocetina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de vinpocetina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-110,0%
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040): Cumplen con los
requisitos pe Disolucin.
Medio: Acido clorhdrico O, 1 N; 900 ml
Aparato 1: 1 00 rpm
Tiempo: 30 min
Solucin muestra: Retirar una porcin de la solucin
en anlisis, pasar a travs de un filtro adecuado y usar
la muestra combinada como la muestra de prueba.
Solucin estndar: Disolver una cantidad adecuada de
ER Vinpocetina USP en Medio para obtener una concen-
tracin similar a la de la Solucin muestra.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectroscopa de absorcin UV
Longitud de onda analtica: UV 268 nm
Blanco: Medio
Anlisis
Muestras: Solucin muestra y Solucin estndar
Calcular la cantidad disuelta de vinpocetina
(C22H 26 N202), como porcentaje de la cantidad
declarada:
Resultado= (A1,/A1) x [Cs x (VIL)] x 100
Au = absorbancia de vinpocetina de la Solucin
muestra
A1 = absorbancia de vinpocetina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Vinpocetina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
V "' volumen de Medio, 900 ml
L = cantidad declarada de vinpocetina
(mg/Tableta)
671 O Vinpocetina / Suplementos Dietticos
Tolerancias: No rnenm de 75% de la cantidad decla-
rada cje vinpoceti1 Id (C nH nhLO,)
VARIACION DE PESO (2091 ): Cumplen con los requisitos.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Cu11::,erVd en envases im-
pe~meables y resistentes a la luz.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Vinpocetina USP
Vitamina A-ver Vitamina A en Monografas
Generales
Vitamina A, Cpsulas-ver Vitamina A,
Cpsulas en Monografas Generales
Vitamina A, Preparacin Oral Lquida-
ver Preparacin Oral Lquida de Vitamina A, en
Monografas Generales
Vitamina 86, Tabletas-ver Clorhidrato de
Piridoxina, Tabletas en Monografas Generales
Vitamina C, Tabletas-ver cido Ascrbico,
Tabletas, en Monografas Generales
Vitamina E-ver Vitamina E en Monografas
Generales
Vitamina E, Cpsulas-ver Vitamina E,
Cpsulas en Monografas Generales
Vitamina E, Preparacin-ver Vitamina E,
Preparacin en Monografas Generales
Succinato de Vitamina E y
Polietilenglicol-ver Succinato de Vitamina
E y Polietilenglicol en NF
Vitaminas Hidrosolubles, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Vitaminas Hidrosolubles contiene,n dos o
ms de las siguientes vitaminas hidrosolubles: Acido As-
crb1co o su equivalente como Ascorbato de <;::alcio o As-
corbato de Sodio, Biotina, Cianocobalamina, Acid9 Flico,
Dexpantenol o Pantenol, Niacina o Niacinamida, Acido
Pantotnico (como Pantotenato de Calcio o Pantotenato
USP 38
de Calcio Racrnico), Clorhidrato de Pirdoxina, Ribofla-
vina y C..lorhirlrato de Tiarnina o f\1ononitrato de Tiamina.
Las Cpsulas contienen no rnenos de 90,0% y no ms de
1 SO, 0% rlP !;is r1ntidadns dec!a:adas de cido ascrbico
(C,HxOo), biotina (C10H1"N,01S). pantotenato de calcio
(C 1HH 12CciN2010), cianocobaiarnina (L61HRHC0N1414P),
cido flico (C1,1H1CJN10,,), dexpantenol (C,H1YN04) o pan-
tenol (C9H 19NQ4), niacina (C.HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CHH 11 NO, HCI), ri-
boflavina (C 11H20N406) y tia mina (C 12H17CIN40S) como
clorhidrato de tiamina o mononitrato de tiamina.
No contienen ninguna forma de Beta Caroteno o Vitamina
A, D, E o K. No contienen minerales para los que se de-
clare un valor nutrimental. Pueden contener otras sustan-
cias agregadas declaradas en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione rns de un mtodo de valoracin para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los mtodos especificados, declarando el mtodo
usado en el etiquetado nicamente si no se usa el Mtodo
7L ,
ACIDO ASCORBICO
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cpsulas vacas
lavando, si fuera necesario, con varias porciones de ter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cpsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a ter. Pesar las cubiertas de las
Cpsulas vacas en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto promedio por Cpsula. Transferir una
porcion del contenido de las Cpsulas, equivalente a
una cantidad nominal de 100 mg de cido ascrbico, a
un matraz volumtrico de 200 ml y agregar 75 ml de
cido metafosfrico-cido actico SR. Tapar el matraz y
agitar mecnicamente durante 30 minutos. Diluir con
agua a volumen. Transferir una porcin de la solucin a
un tubo de centrfuga y centrifugar hasta obtener un
sobrenadante transparente. Pipetear y transferir 4,0 ml
de esta solucin a un matraz Erlenmeyer de 50 ml y
agregar 5 ml de cido metafosfrico-cido actico SR.
Anlisis: Valorar con solucin estndar de dicloro-
fenol-indofenol SV hasta un color rosado que persista
durante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen
de solucin estndar de diclorofenol-indofenol consu-
mido por una mezcla de 5,5 ml de cido metafosfri-
co-cido actico SR y 15 rnl de agua. A partir del equi-
valente de cido ascrbico de la solucin estndar de
diclorofenol-indofenol, calcular el contenido de cido
ascrbico en cada Cpsula.
Criterios de aceptacion: 90,0'~'-150,0% de la cantidad
declarada de cido ascrbico (C6H806) .
ASCORBATO DE CALCIO: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (Ci2H14Ca012 2f-!20)
ASCORBATO DE SODIO: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
BIOTINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Mezclar 85 rnl de acetonitrlo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 ml de ccido fosfrico, y diluir con
agua hasta 1000 ml.
Solucin madre del estndar: O, 3 3 3 mg/ml de ER Bio-
tina USP en dimetil sulfxido
Solucin estndar: 5 fig/ml de ER Biotina USP que se
prepara diluyendo Solucin madre del estndar en agua.
USP 38
Solucin muestra: Proceder segun se indica en Acido
A1rrbico, hil\lil "rairniar Pi re'n neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas. equivalente a una cantirlarl nominal rlP 1 m<J
de biotina, a un matraz volumtrico de 200 ml. Agre-
gar 3 ml de dirnetil sulfxidu y agilar por rotacin
suave para humedecer el contenido. Colocar el matraz
en un bao de agua a 60' --70' durante 5 minutos. So-
meter a ultrasonido durante 5 minutos, diluir con agua
a volumen y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 1 5 cm; relleno L7 de 3 pm
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de biotina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de biotina
(C 10H 16N201S) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru!r1) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de biotina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de biotina de la Solucin
estndar
C1 = concentracin de ER Biotina USP en la Solucin
estndar (pg/ml)
Cu = concentracin nominal de biotina en la
Solucin muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N201S)
BIOTINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan segn
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados segn se describe en este
procedimiento.
Solucin madre del estndar: 50 pg/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solucin en un
refrigerador.
Solucin estndar: O, 1 ng/ml de ER Biotina USP en
agua, que se prepara diluyendo Solucin madre del es-
tandar con agua el da de la valoracin. ,
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 1 00 pg de biotina, a un matraz
volumtrico de 200 ml. Agregar 3 ml de alcohol al
50% y agitar por rotacin suave hasta humedecer el
contenido. Calentar el matraz en un bao de agua a
60'-70' durante 5 minutos. Someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos, diluir con alcohol al 50% a volumen y
filtrar. Diluir cuantitativamente un volumen del filtrado,
y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con agua
para obtener una solucin con una concentracin de
O, 1 ng/ml.
Solucion de hidrolizado cido de casena: Mezclar
100 g de casena exenta de vitaminas con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
5uplcmrntm {)1etetico<> I Vit;imin;i-; Hirlrmol11hJp<; 6711
agua hasta 1 000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
me?Ciar durante l hora y filtrJr. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo Lolueno en un lu-
<_J-lr frr,c-0 :1 un~ tt'rnporJturJ de no menos de lo. F!!-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamier1Lo.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 ml de agua. Calentar a
70 -80 y agregar cido clorhdrico diluido (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los slidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 o
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de pantotenato de calcio: 1 O pg/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
pg/ml de riboflavina y 1 O pg/ml de clorhidrato de tia-
mina en cido actico 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un retngerador y proteger de la luz.
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O pg/ml de cido p-aminoben-
zoico, 50 pg/ml de niacina y 40 pg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1: 3). Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 7 y ajustar
con hidrxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 1
----~-- - - - - ------------ --- --- --- -- --------
Solucin de h1droli?ado cido de caSf.itl_il_ _ _ __ 25 mL __
Solucin de cistina tri tfa110 25 ml
Soluc1on de pol1sorl;l_ato 80 ____ _ __ 0~25
ml
Dextrosa anhidra ________
Acetato de sodio anhidro
Soluc1Qn de ade111r1a qua111na ur,icilo
Solurniri ~E<J.nloten_qto <lE'..c:aluo__ __
Soluc1on de riboflav111a e lorh1drato de llam1na
=f'
__
__!Q_g__
5
5 ml
5 ml
5 ml
Soluc1on de acido p-dn11r1ohe1vo1t o n1d( 11\il-
clorhi_dralQ~do>(lflci_ _ _
Solucin salina A
. ______ ---+-- !\ n1l
~ ml
Solucin '~-- _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _"_ ___c_ _~S'-n'-'-1""L__,
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en l 00 ml de agua.
Agregar 500 mg de DPxtro10 onhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un bano de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar" Agregar porciones de 1 O ml de la
solulil11 caliente a tubm de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfren en posicin
vertical. Inocular tres o ms de los tubos, sembrando
6712 Vitaminas Hidrosolubles I Surlpmpnto<> Dietticos
por puncin un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30 y 3 7 mantenida termostticamente con un
mil<JPn dP +(), S . Alrn21ccnar en un refrigerador. Prepa
rar un cultivo reciente por puncin del cultivo madre
Ulld ve por semana y no usarlo para preparar el Inoculo
si el cultivo tiene ms de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que conten-
gan 0,5 ng de biotina a cada una de las series de tubos
de ensayo que contengan 5,0 mL de Solucin madre de
medio basal. Tapar los tubos con algodn, esterilizar en
un autoclave a 121 durante 15 minutos y enfriar.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir clulas del
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum a un tubo est-
ril que contenga 1 O mL de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30" y 37" mantenida termostticamente con un
margen de :t0,5. La suspensin de clulas as obtenida
es el lnculo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solucin
estndar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacos
similares 5,0 mL de Solucin madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volmenes de la Solucin muestra correspondien-
tes a tres o ms de los niveles especificados para la
Solucin estndar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucin madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estndar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o seccin de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la contami-
nacin y esterilizar en un autoclave a 121 durante 5
minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de lnculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro que no contienen
Solucin estndar (los blancos no inoculados). Incubar
los tubos a una temperatura entre 30 y 37 mante-
nida termostticamente con un margen de 0,5 hasta
que, despus de 16-24 horas de incubacin, no se
presente un aumento significativo de turbidez en los
tubos que contengan el nivel ms alto de Estndar du-
rante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a una celda de espectrofotmetro. Colocar la celda en
un espectrofotmetro ajustado a una longitud de onda
especfica de 540-660 nm y leer la transmitancia
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos despus
de la agitacin cuando la lectura del galvanmetro se
mantenga constante durante 30 segundos o ms. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
cin con un microorganismo extrao, no tomar en
cuenta el resultado de la valoracin.
Clculo: Preparar una curva estandar de concentracion-
respuesta, segn se indica a continuacin. Para cada ni-
vel del Estndar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de la transmitancia (:L1)
1 ATCC N 8014 es adecuado. Esta rep.i 5e conoca anteriormente corno lac-
tobocilius orobi1wsu) l /-5.
USP 38
como la diferencia, y= 2,00 - 2.1. Graficar esta res-
puesta en la ordenada del papel milimetrado en funcin
del logaritmo de los ml de la Solucin estndar por
tubo sobre la abscsa, usando para !J ordenada una es
cala aritmtica o logartmica, la que proporcione la me-
or aprox1mac1on a una linea recta. Trazar la recta o la
curva de regresin que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y = 2,00 - :Lu, sumando las dos
transmitancias (:Lu) para cada nivel de la Solucin mues-
tra. Leer a partir de la curva estndar el logaritmo del
volumen de la Solucin estndar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo de los puntos extremos graficados para el Es-
tndar. Restar de cada logaritmo as obtenido el loga-
ritmo del volumen, en mL, de la Solucin muestra para
obtener la diferencia, X, para cada nivel de dosifica-
cin. Promediar los valores de X para cada uno de tres
o ms niveles de dosificacin para obtener X, que es
igual al logaritmo de la potencia relativa, M', de la
Solucin muestra. Determinar la cantidad, en g, de
biotina (CioH16N203S) en la porcin de Cpsulas
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de g de biotina que se supuso
estaban presentes en la porcin de Cpsulas
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
biotina (C10H16N20,S) en la porcin de Cpsulas
tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 100
N = cantidad nominal de biotina en la porcin de
Cpsulas tomada (g)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
cin por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Valoraciones
Biolgicas ("111 ), El Intervalo de Confianza y los Lmites de
la Potencia). Si las dos determinaciones difieren en ms
de 0,08, realizar una o ms determinaciones adiciona-
les. A partir de la media de dos o ms valores de M que
no difieran en ms de O, 15, calcular la potencia media
de la preparacin que se est valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N20iS)
CIANOCOBALAMINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metano! y agua (7:1 3)
Solucin madre del estndar: 1 O g/mL de ER Ciano-
cobalamina USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
cin madre en un lugar oscuro y desechar despus de 1
semana.]
Solucin estndar: 1 g/mL de ER Cianocobalamina
USP, a partir de Solucin madre del estndar diluida con
agua
Solucin muestra: Pesar no menos de 30 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un vaso de precipitados de 1 00 mL. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas de las cpsulas vacas
lavando, si fuera necesario, con varias porciones de ter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cpsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a ter. Pesar las cubiertas de las
Cpsulas vacas en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto promedio por Cpsula. Transferir una
porcion del contenido de las Cpsulas, equivalente a
1 00 g de cianocobalamina, a un matraz de 250 mL.
USP 38
AgrPgil rnantitativamente 100,0 ml de agua y extraer
cuidadmame11le duranle 2 minutos. Filtrar 1 O ml del
exlraclo y usar el filtrado transparente.
Sbtemd oomatogrfico
(Ver Cromatografw (621), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 200 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de cianocobalamina. Cal-
cular el porcentaje de la cantidad declarada de ciano-
cobalamina (C6iH88CoN,,014P) en la porcin de Cp-
sulas tomada:
Resultado= (r11/r1) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de cianocobalamina de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cianocobalamina de la
Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Cianocobalamina USP en
la Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de cianocobalamina en
la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C61HssCoN1414P)
CIANOCOBALAMINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin madre del estndar: 1,0 g/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en alcohol al 25%. Almacenar en un
refrigerador.
Solucin estndar: Diluir un volumen adecuado de So-
lucin madre del estndar con agua hasta un volumen
medido tal que, despus del periodo de incubacin se-
gn se describe en Anlisis, la diferencia en la transmi-
tancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 ml de
la Solucin estndar sea no menor que la correspon-
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
clulas. Esta concentracin por lo general est entre
0,01 y 0,04 ng/ml de la Solucin estndar. Preparar
esta solucin en el momento de su uso para cada
valoracin. _
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 1,0 g de cianocobalamina, a
un vaso apropiado que contenga, por cada g del conte-
nido de las Cpsulas tomado, 25 ml de una solucin de
extraccin acuosa preparada justo antes de su uso que
contiene 12, 9 m<,i/ml de fosfato di bsico de sodio,
11,0 mg/ml de acido ctrico anhidro y 1 O mg/ml de
metabisulfito de sodio. Autoclavar la mezcla a 121 du-
rante 1 O minutos. Dejar que sedimente cualquier part-
cula del extracto sin disolver y filtrar o centrifugar, si
fuera necesario. Diluir una alcuota de la solucion trans-
parente con agua hasta obtener una solucin final que
contenga una actividad de vitamina B12 equivalente
aproximadamente a la de la Solucin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Preparar se-
gn se indica en Pantotenato de Calcio, Mtodo 2.
Solucin de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Preparar segn
se indica en Pantotenato de Calcio, Mtodo 2.
Solucin de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70, agregar 6,0 ml de
Suplementos Dietticos /Vitamina~ Hirlrosolubles 671 3
hidrxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar ba10 tolueno en un refrigerador. _.
Solucin salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobas1co
rJp rot~io V 10 C.J rJp fosfa\O dibsico de potasio en
agua para btener 200 ml, y agregar 2 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar esta solucin bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre9ar 2 gotas de cido clorhdrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solucin de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solucin vitamnica A: Disolver 1 O mg de riboflavina,
1 O mg de clorhidrato de tiamina, 100 g de biotina y
20 mg de niacina en cido actico 0,02 N para obtener
400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
proteger de la luz.
Solucion vitamnica B: Disolver 20 mg de cido p-ami-
nobenzoico, 1O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de piri-
doxal, 8 m.9. de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
de cido folico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3: 1) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz.
Solucin madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente frmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga l<?s
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya segn se indica en el etiquetado, produzca un me-
dio comparable al obtenido de la frmula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado en la Tabla
2, disolviendo cuidadosamente Cistina y Triptfano en
el cido clorhdrico antes de agregar las siguientes ocho
soluciones a la solucin resultante. Agregar 1,00 ml de
agua y disolver Dextrosa, Acetato de sodio y Acido as-
crbico. Filtrar, si fuera necesario. Agregar Solucin de
polisorbato 80, ajustar con hidrxido de sodio 1 N a un
pH entre 5,5-6,0 y agregar Agua Purificada hasta
250 ml.
Tabla 2
L-Cistiri_a_____________ _ _ __ _____ _ _ _ _ _ _ _ ____ _ _--c0,_,1-'n"--___,
L-Trintfano O 05 a
cido clorhdrico 1 N 10 ml
Solucin de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solucin de xantina ---------------------'-----"-5-'-m'-"Lo___
Solucin vitamr_~1i=c,a~A--------~-------1--l-'-'O"---'-'m"'L'-----'
Solucin vitamnica B ___ _________ 1 O ml
Solucin salina_--'-A-'-----------------1---'5"---'-'m"'L'-----'
~QILJ_ciQ_n__s_ajill_<l__-______ _----------------1---'5"---'-'m"'L'-----'
Solucin de asoaraaina 5 ml
Solucin de h igi:_gl izado ic .i~d._000__od._-,e--'ccea~se"r,..1a.___ _ _--1-~2""'5"---'-'m"'L'-----'
Dextrosa anhidra 1O a
AcetatQ_<;Je sodio_<!rilli_cjrQ 5 a
cido ascorb1co 1a
Solucin de oolisorbato 80 5 ml
Preparacin de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
cin analtico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presin reducida, a travs de una capa del coadyuvante
de filtracin. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: [NOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos ingredientes
siempre que, cuando se reconstituya segn se indica en
6714 Vitamina'\ HirlrmoluhlP<> ./ '\uplt>n?Pntos Dietticos
e etiquetado, ruduLca un medio equivalente al obte-
nido de !a tormu!a provist;i en este procedimiento.] Di-
>olwr O, 75 lJ de exlr delo de levadura, 0,75 g de pep-
trm.1 <.pr:i, 1,n 'J de ci0vtrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobsico de potasio en 60-70 mL de agua. Agregar
1O rnL de Preparacin de ugo de tomate y 1 mL de Solu-
cin de polisorbato 80. Austar con hidrxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua hasta 100 mL.
Colocar porciones de 1 O mL de la solucin en tubos de
ensayo y tapar con algodn. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 durante 15 minutos.
Enfriar tan rpido como sea posible para evitar la for-
macin de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensin: Diluir un volumen medido de
Solucin madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Coiocar porciones de l O mL del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar segn se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacil/us leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 1 00 mL de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un bao de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de 1 O mL de
la solucin caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15 mi-
nutos y dejar que los tubos se enfren en posicin verti-
cal. Inocular tres o ms de los tubos, sembrando por
puncion un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii. 2
lNOTA-Antes de usar por primera vez en esta valora-
cin un cultivo recientemente preparado, realizar no
menos de 1 O transferencias sucesivas del cultivo en un
periodo de 2 semanas.]
Incubar durante 16-24 horas a una temperatura entre
30 y 40 mantenida termostticamente con un mar-
gen de 0,5. Almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por puncin al menos tres
veces por semana y no usarlos para preparar el lnculo
si tienen ms de 4 das de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias diarias o dos veces al da del cultivo por pun-
cin, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el tnculo lquido 2-4 horas des-
p115 de l.i inoculacin. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados errticos.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacillus leichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de clulas del Cultivo madre de Lactobacillus leich-
mannii a dos tubos estriles que contengan 1 O mL de
Medio de cultivo cada uno. Incubar estos cultivos du-
rante 16-24 horas a una temperatura entre 30 y 40
mantenida termostticamente con un margen de 0,5.
Centrifugar los cultivos en condiciones aspticas y de-
cantar el sobrenadante. Suspender las clulas del cultivo
en 5 mL de Medio de suspensin estril y combinar.
Usando Medio de suspensin estril, ajustar el volumen
de manera que una dilucin 1 en 20 en solucin salina
SR produzca una transmitanc1a del 70'Yo cuando se lee
en un espectrofotmetro adecuado ajustado a una lon-
gitud de onda de 530 nm, equipado con una celda de
1 O mm, y leda contra solucin salina SR ajustada a una
transmitancia del 100%. Preparar una dilucin 1 en 400
de la suspemin ajustada usando Solucin madre de me-
dio basal estril. [NOTA-Esta dilucin se puede alterar,
cuando sea necesario, para obtener la respuesta de
prueba deseada.] La suspensin de clulas as obtenida
es el Inoculo.
Calibracin del espectrofotmetro: Revisar peridica-
mente la longitud de ondil del espectrofotmetro,
usando una celda de longitud de onda estndar u otro
2 Se puede11 obtener cultivm purm de Luc lubucillus /e1chmannii (listados como
LadolJai:.if/u_~ dt,fbrw'ku) lu1r1u N 7830 t-'r1 ATCC, 10801 Urliversity Blvd., Ma-
nassas, VA 201 10-2209 (www.dlcc.orq).
USP 38
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
Cillibrar el espectrofotmetro con agua para fijar el 0%
y el 100'Yo de transmitancia, y con la longitud de onda
aju~tadJ J 530 n.
Anlisis
Muestras: Soluoon estandar y Soluoon muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba a
diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y a
trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y dems
material de vidrio necesario se deben limpiar meticulo-
samente, usando mtodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250' durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solucin estndar.
Agregar a cada uno de estos tubos y a cuatro tubos
vacos similares 5,0 mL de Solucin madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solucin mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucin madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O mL. Co-
locar un set completo de tubos de Estndar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado en
una segunda gradilla o seccin de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminacin bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no ms de 1 O minutos, precalentando el autoclave, si
fuera necesario. Enfriar tan rpido como sea posible
para evitar la formacin de color que resulta del sobre-
calentamiento del medio. Tomar precauciones para
mantener la uniformidad de las condiciones de esterili-
zacin y enfriamiento durante toda la valoracin,
puesto que colocar los tubos demasiado cerca o sobre-
cargar el autoclave puede ocasionar variaciones en la
velocidad de calentamiento.
Agregar aspticamente 0,5 mL de lnculo a cada tubo
as preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solucin estndar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y
40 mantenida termostticamente con un margen de
0,5, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80 durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Despus de agitar su contenido,
leer la transmitancia a 530 nm cuando se alcance un
estado estacionario. Este estado estacionario se observa
unos pocos segundos despus de la agitacin cuando
la lectura se mantenga constante durante 30 segundos
o ms. Permitir aproximadamente el mismo intervalo
de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferencia es mayor de 5% o si hay evidencia de
contaminacin con un microorganismo extrao, no to-
mar en cuenta los resultados de la valoracin.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoracin si la pendiente de la curva estndar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Clculo: Preparar una curva estndar de concentracin-
respuesta mediante el siguiente procedimiento. Deter-
minar y reemplazar cualquier transmitancia individual
aberrante. Para cada nivel del Estndar, calcular la res-
puesta a partir de la suma de los valores duplicados de
las transmitancias (I1) como la diferencia, y= 2,00 - I1.
Graficar esta respuesta en la u1der1ada del apel rnilirne-
trado en funcin del logaritmo de los mL de la Solucin
estndar por tubo sobre la abscisa, usando una escala
aritmtica o logilrtmicil pilrJ lil ordenada, la que pro-
porcione la mejor aproximacin a una lnea recta. Tra-
USP 38
zar la recta o la curva de reqresin que mejor se ajuste
a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y = 2,00 - Iu, sumando las dos
transmitancias (I,,) para cada nivel de la Solucin mues-
tra. Leer a partir de la curva estndar el logaritmo del
volumen de la Solucion estandar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo entre los puntos extremos graficados para el
Estndar. Restar de cada logaritmo as obtenido el lo-
garitmo del volumen, en mL, de la Solucin muestra
para obtener la diferencia, X, para cada nivel de dosifi-
cacin. Promediar los valores de X para cada uno de
los tres o ms niveles de dosificacin para obtener X,
que es igual al logaritmo de la potencia relativa, M',
de la Solucin muestra. Determinar la cantidad, en g,
de cianocobalamina (C61HssCoN1414P) en la porcin
de Cpsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de g de cianocobalamina que se
supuso estaban presentes en la porcin de
Capsulas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina (C6iH,aCoN1414P) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado = [(antilog M)/N] x 100
N = cantidad nominal de cianocobalamina en la
porcin de Cpsulas tomada (g)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
cin por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Actividad de Vitamina 812 en Di-
seo y Anlisis de Valoraciones Biolgicas (111 ), El Inter-
valo de Confianza y los Lmites de la Potencia). Si las dos
determinaciones difieren en ms de 0,08, realizar una o
ms determinaciones adicionales. A partir de la media
de dos o ms valores de M que no difieran en ms de
O, 15, calcular la potencia media de la preparacin que
se est valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C6iHsaCoN1414P)
c100 Fuco, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solucin de hidrxido de tetrabutilamonio
en metano! al 25%
Reactivo B: Transferir 5,0 g de cido penttico a un
matraz volumtrico de 50 ml. Disolver y diluir con hi-
drxido de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase mvil: 2 g de fosfato monobsico de potasio en
650 mL de agua. Agregar 12,0 mL de Reactivo A,
7,0 mL de cido fosfrico 3 N y 240 mL de metano!.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con cido fosf-
rico o amonaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1 000 mL y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso, agregando agua o metanol a la Fase mvil pre-
parada, para obtener una separacin de la lnea base
entre el cido flico y el estandar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separacin. [NOTA-El contenido de metanol y agua se
puede variar (entre 1 % y 3%).]
Solucin de estndar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumtrico de 1000 mL y
agregar 220 mL de metanol para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobsico de potasio en 300 mL de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solucin al matraz que contenga la solu-
cin de metilparabeno y agregar 300 ml adicionales de
agua. Agregar 19 mL de Reactivo A, 7 ml de cido fos-
Suplementos Dietticos /Vitaminas Hidrosolubles 6715
frico 3 N y 30 mL de Reactivo B. Ajustar con amonaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrgeno a trav' de la
solucin durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. ,
Solucin estndar: 0,016 mg/mL de ER Acido Flico
USP en Solucin de estndar interno .
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una cantidad del contenido de las
Cpsulas a un tubo de centrfuga adecuado y agregar
un volumen de Solucin de estandar interno para obte-
ner una concentracin nominal de 0,016 mg/mL de
cido flico. Agitar mecnicamente durante 1 O minutos
y centrifugar. Filtrar una porcin del sobrenadante
transparente y usar el filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para cido
flico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de cido flico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de cido flico (C19H19N106) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado= (Ru!Rs) x (CdCu) x 100
Ru = cociente entre las reas de los picos de cido
flico y metilparabeno de la Solucin muestra
Rs = cociente entre las reas de los picos de cido
flico y metilparabeno de la Solucin
estndar ,
Cs = concentracin de ER Acido Flico USP en la
Solucin estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de cido flico en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cido flico (Ci9H19N106)
CIDO Fuco, Mtodo 2
(NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: 60 g/mL de hidrxido de amonio
Fase mvil: Transferir 0,4 mL de trietilamina, 15,0 mL
de cido actico glacial y 350 mL de metanol a un ma-
traz volumtrico de 2000 ml, y diluir con 1-hexanosul-
fonato de sodio 0,008 M a volumen. .
Solucin madre del estndar: 60 g/mL de ER Acido
Flico USP en Diluyente. Preparar esta solucin en el da
de su uso.
Solucin estndar: Mezclar 5,0 mL de Solucin madre
del estndar con 1 0,0 ml de una mezcla de metanol y
cido actico glacial (9:1 ), y 30,0 mL de una mezcla de
metano! y etilenglicol (1 :1 ). Agitar durante 15 minutos
en un bao de agua mantenido a 60 y enfriar. Filtrar,
desechando los primeros mL del filtrado. .
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 0,3 mg de cido flico, a un
matraz de 125 mL con tapn. Agregar 10,0 mL de una
mezcla de metanol y cido actico glacial (9:1 ), y
30,0 mL de una mezcla de metanol y etilenglicol (1 :1 ).
Agitar durante 15 minutos en un bao de agua mante-
6716 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos DiPtticos
nido a 60 y enfriar. Filtrar, desechando los primeros
ml Jel fiilrarin
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatoarafw 1671: Artit11ri rir>I \i,tr>ma)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 n111
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de cido flico
(C19H10N106) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (r11/ r1) x ( C/ C11) x 100
ru = rea del pico de cido flico de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de cido flico de la Solucin
pstndar
C = concentracin de ER cido Flico USP en la
Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de cido flico en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cido flico (C19H19N106)
DEXPANTENOL o PANTENOL
[NOTA-El siguiente procedimiento tambin se aplica a la
determinacin del componente dextrgiro de pantenol
racmico en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan segn
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados segn se describe en este
procedimiento.
Solucin madre del estndar: 800 g/ml de ER Dex-
pantenol USP o 1600 g/ml de ER Pantenol Racmico
USP en agua. Almacenar en un refrigerador, proteger
de la luz y usar dentro de los 30 das.
Solucin estndar: En el da de la valoracin, preparar
una dilucin de 1,2 g/ml de dexpantenol o 2,4 g/ml
de pantenol, a partir de Solucin madre del estndar di-
luida con agua.
Solucin muestra: Pesar no menos de 30 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir, tanto como sea
posible, el contenido a un vaso de precipitados. Retirar
cualquier contenido adherido a las cubiertas de las Cp-
sulas vacas lavando con varias porciones de ter. Dese-
char los lavados y secar las cubiertas de las Cpsulas
con ayuda de una corriente de aire seco hasta que ya
no se perciba olor a ter. Pesar las cubiertas de las Cp-
sulas vacas en un frasco de pesada tarado y calcular el
peso neto promedio por Cpsula. Disolver una porcin
del contenido de las Cpsulas, nominalmente equiva-
lente a 1,2 mg de dexpantenol o 2,4 mg de pantenol,
en 1 00,0 ml. de agua. Diluir cuantitativamente una por-
cin de esta solucin con agua para obtener una con-
centracin de 1,2 g/ml de dexpantenol o 2,4 g/ml
de pantenol.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
100 g de casena exenta de vitaminas con 500 n:L de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin a presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 ml de agua,
USP 38
ajustar la solucin con hidrxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 O, 1 y diluir con agua hasta 1 000 rnl. Agregar
20 g de carbn activado, mezclar durante 1 hora y fil-
trar. Repetir el trJt<imicnto con carbn activado. Alma-
cenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tempera
tura de no menos de 1 O". Filtrar la solucin si se forma
un precipitado durante el almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 ml de agua, calentar a
75 5u y agregar solucin de cido clorhdrico (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los slidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1 000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 O.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 g/ml de riboflavina, 1 O g/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 g/ml de biotina en cido actico
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O g/ml de cido p-aminoben-
zoico, 50 g/ml de niacina y 40 g/ml de clorhidrato
de piridoxina en alcohol neutralizado al 25%. Almace-
nar en un refrigerador.
Solucin salina A: 50 mg/ml de fosfato monobsico de
potasio y 50 mg/ml de fosfato dibsico de potasio en
agua. Agregar 1 O gotas de cido clorhdrico por L de
solucin. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: 20 mg/ml de sulfato de magnesio,
1 mg/ml de cloruro de sodio, 1 mg/ml de sulfato fe-
rroso y 1 mg/ml de sulfato de manganeso en agua.
Agregar 1 O gotas de cido clorhdrico por L de la solu-
cin. Almacenar bajo tolueno.
Solucin de piridoxal-pantotenato de calcio: 200 g/
ml de clorhidrato de piridoxal y 1,875 g/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 1 0%. Almacenar en un
refrigerador y usar dentro de los 30 das.
Solucin de polisorbato 40-cido oleico: 50 mg/ml
de polisorbato 40 y 0,5 mg/ml de cido oleico en al-
cohol al 20%. Almacenar en un refrigerador y usar den-
tro de los 30 das.
Medio de pantotenato modificado: Disolver dextrosa
anhidra y acetato de sodio anhidro en las soluciones
previamente mezcladas de acuerdo con la Tabla 3 y
ajustar con hidrxido de sodio 1 N a un pH de 6,8.
Diluir con agua hasta 250 ml.
Tabla 3
Solucin de hidrolizado cido de casena 25 ml
Solucin de cistina-triotfano 25 ml
Solucin de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 (]
--M----
Acetato de sodio anhidro 5 (]
Solucin de adenina-auanna-uracilo 5 ml
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-brotr-
~----- ----------
5 ml
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina --------------- 5 ml
Solucin salina A - 5 ml
Solucin salina B --l-------- .c'l..rr1L_
Solucin de oiridoxal-pantotenato de calcio 5 ml
Solucin de nolisorbato 40-cido oleico 5 ml
USP )8
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tracin: Preparar segn se indica en Medio de pantote-
nato modd1cado, excepto que se debe realizar la dilu-
cin finai hasta i 25 mL en iugar de 250 mL. Preparar
Pn el momento cie >li ;<;o
Cultivo madre de Pediococcus acidi/actici: Disolver en
800 ml de agua, con ayuda de calor, 6,0 g de peptona,
4,0 g de digerido pancretico de casena, 3,0 g de ex-
tracto de levadura, 1,5 g de extracto de carne, 1,0 g de
dextrosa y 15,0 g de agar. Ajustar con hidrxido de so-
dio_ 0,_1 N o cido clorhdrico O, 1 N a un pH de 6,5-6,6
y diluir con agua hasta 1 000 ml. Agregar porciones de
1 O ml _de la solucin a tubos de cultivo, tapar los tubos
y esterilizar en un autoclave a 121 durante 15 minutos.
Enfriar _los tubos en un plano inclinado y almacenar en
un refrigerador. Preparar un cultivo madre de Pediococ-
cus acidilactici 3 en un tubo con este medio. Incubar a
35" durante 20-24 horas y almacenar en un refrigera-
dor. Mantener el cultivo madre mediante transferencias
mensuales a tubos con medio inclinado preparado re-
cientemente.
lnculo: Inocular tres porciones de 250 ml de Medio de
pantotenato modificado estril, a partir de un cultivo ma-
dre en medio inclinado e incubar a 35 durante 20-24
horas. Centrifugar la suspensin a partir de las porcio-
nes combinadas y lavar las clulas con Medio de panto-
tenato modificado estril. Resuspender las clulas en sufi-
ciente Medio de pantotennto modificado estril de
manera que una dilucin 1 en 50, cuando se analiza en
un tubo de ensayo de 1 3 mm de dimetro, proporcione
80% de transmisin de luz a 530 nm. Transferir porcio-
nes de 1,2 ml de esta suspensin madre a ampollas de
vidrio estriles, sellar, congelar en nitrgeno lquido y
almacenar en un congelador. En el da de la valoracin
dejar que las ampollas alcancen la temperatura am-
biente, mezclar el contenido y diluir 1 ml de cultivo
descongelado con solucin salina estril SR hasta
1 50 ml. [NOTA-Esta dilucin se puede alterar, cuando
sea necesario, para obtener la respuesta de prueba
deseada.]
Anlisis: Preparar por triplicado una serie de ocho tu-
bos de cultivo agregando las siguientes cantidades de
agua a los Lubm dentro de un sel: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3,0; 2,0; 1,0 y 0,0 ml. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solucin estndar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 ml de la Solucin
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 ml de Medio de pantotenato modificado de
doble concentracin a cada tubo. Tapar los tubos con
tapas de metal y esterilizar en un autoclave a 121
durante 5 minutos. Enfriar a temperatura ambiente en
un bao de agua fra e inocular cada tubo con 0,5 ml
del lnculo. Dejar que se incube a 37 durante 16 ho-
ras. Detener el crec.imiento calentando a una tempera-
tura de no menos de so, por ejemplo mediante la
aplicacin de vapor a presin atmosfrica en un esteri-
lizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y determinar la
transmitancia porcentual de las suspensiones, en celdas
de igual longitud de paso, en un espectrofotmetro
adecuado, a una longitud de onda de 530 nm.
Clculo: Trazar una curva de dosis-respuesta en papel
para grficos aritmticos, graficando la respuesta pro-
medio, como porcentaje de transmitancia, para cada set
de tubos de In curvil estndm en funcin de las concen-
traciones del nivel del Estndar. La curva se traza conec-
tando cada par adyacente de puntos con una lnea
recta. A partir de esta curva estndar, determinar me-
diante interpolacin la potencia de cada tubo que con-
tenga porciones de Solucin muestra. Para obtener las
'ATCC N 8042 es adecuado.
SuplPrrJt"liO\ DiPtPtiro'i /Vitaminas Hidrosolubles 6717
respuestils individuales, dividir la potencia de cada tubo
por la cantidad de Soluuon muestra que se le agreg.
Ca!cular l_a respuesta media promediando las respuestas
1nd1v1aua1es que vanan de su media en no ms de 15%,
tViJndo no m0nm de 10 mitaci ciel m'1mero total de tu-
bos. Calcular la potencia de la porcin del material to-
mado para la valoracin, multiplicando la respuesta me-
dia por el factor de dilucin apropiado.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de dex-
pantenol o pantenol (C1H19N4) en la porcin de Cp-
sulas tomada:
Resultado= (PIN) x 100
P = potencia de dexpantenol o pantenol en la
porcin de Cpsulas tomada (mg)
N = cantidad nominal de dexpantenol o pantenol
en la porcin de Cpsulas tomada (mg)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C 9 H19 N0 4 )
PANTOTENATO D,E CALCIO, Mtodo 1
Fase mvil: Acido fosfrico y agua (1:1000)
Solucin de estndar interno: 80 mg de cido p-hi-
droxibenzoico en 3 ml de alcohol. Agregar 50 ml de
agua y 7, 1 g de fosfato dibsico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 ml. Ajustar con cido fosfrico a un
pH de 6,7.
Solucin estndar: 0,6 mg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solucin de estndar interno
Solucin muestra: Proceder segn se indica en cido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una cantidad del contenido de las
Cpsulas mezclado y un volumen de Solucin de estn-
dar interno a un tubo de centrfuga para obtener una
' concentracin nominal de 0,6 mg/ml en la Solucin
muestra.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a <621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 3,9 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para pantote-
nato de calcio y cido p-hidroxibenzoico son aproxi-
madamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3 0%
Anlisis '
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de pantotenato de calcio y
el estndar interno. Calcular el porcentaje de la canti-
dad declarada de pantotenato de calcio
(CrnHi2CaN210) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (R11/R1) x (C1/C11) x 100
Ru = cociente entre las reas de los picos de
pantotenato de calcio y cido p-
hidroxibenzoico de la Solucin muestra
R, = cociente entre las reas de los picos de
pantotenato de calcio y cido p-
hidroxibenzoico de la Solucin estndar
C = concentracin cie ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-1 50,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C 8 H32 CaN 2 Q 0 )
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 2
Solucin madre del estndar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de (lcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentxido de fsforo y
6718 Vitan1inas Hidrosolubles /Suplementos Dietticos
proteqido de la absorcion de humPrlaci mientras se
pesa, en 500 rnl de aguJ en u11 111alraL volumtrico de
1000 ml. Agregar 1O rnL de cido actico 0,2 N y
100 rnL de '.)Oh.Alin de tJcctato de ::,oJiu (1 e11 60), y
'
diluir con <HJI a volumen para obtener una concentra-
cron de 50 g/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin estndar: En el da de la valoracin, diluir un
volumen de Solucin madre del estndar con agua hasta
obtener una concentracin de 0,01-0,04 g/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentracin exacta
es tal que las respuestas obtenidas segn se indica en el
Anlisis, usando 2,0 y 4,0 ml de la Solucin estndar,
estn dentro de la porcin lineal de la curva de res-
puesta del logaritmo de la concentracin. _ Solucin de adenina-nuanina-ur;ic:Jlo -
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de 50 mg
de pantotenato de calcio, a un matraz volumtrico de
1 000 ml que contenga 500 ml de agua. Agregar
1 O rnl de cido actico 0,2 N y 100 ml de solucin de
acetato de sodio (1 en 60), diluir con a9ua a volumen y
filtrar. Diluir un volumen de esta solucion hasta obtener
una solucin con aproximadamente la misma concen-
tracin que la de la Solucin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
1 00 g de casena exenta de vitaminas con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin a presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1O. Fil-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L triptfano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70"-80 y agregar cido clorhdrico diluido (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los slidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 O".
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 mL. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 1 00 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-
biotina: 20 g/mL de riboflavina, 1 O g/mL de clorhi-
drato de tiamina y 0,04 pg/ml de biotina en cido ac-
tico 0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador
y protpger cie la luz.
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O g/ml de cido p-aminoben-
zoico, 50 ,ug/ml de niacina y 40 pg/mL de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1: 3). Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico. Almace-
nar bajo tolucno.
USP 38
Solucin madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
t11dra y AcE'tato dP rnd10 anhidro en las soluciones previa-
mente meLcladas de acuerdo con la Tabla 4, y ajustar
con hrdroxrdo de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
a0ua hasta 250 r' 1L.
Tabla 4
- - - -
Soluc1on de h1drolizado acido de casena 25 rnl
Solucin de cistina-trintfano 25 rnl
Solucin de nolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10"
5
Acetato de sodio anhidro (1
--
5 ml
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiarnina bioti-
na 5 ml
Solucin de cido p-arninobcnzoico-niaci11a-
clorhidrato de niridoxina 5 ml
Solucin salina A -------- 5 rnl
Solucin salina B 5 rnl
Cultivo madre de Lactobacil/us plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de dextrosa anhidra, 500 mg de ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la
mezcla en un bao de vapor, mezclando, hasta que se
disuelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la solu-
cin caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15 mi-
nutos y dejar que los tubos se enfren en posicin
vertical. Inocular tres o ms de los tubos, sembrando
por puncin un cultivo puro de Lactobacillus plantarum 1 ,
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30 y 37 mantenida termostticamente con un
margen de 0,5. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por puncin del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lncu/o
si el cultivo tiene ms de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,2 g de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 ml de
Solucin madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godn, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15
minutos y enfriar.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacil/us plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lncu/o comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir clulas del
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum a un tubo est-
ril que contenga 1 O mL de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30' y 37'' mantenida termostticamente con un
margen de 0,5''. La suspensin de clulas as obtenida
es el lnculo.
Anlisis
Muestras: Sulucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-,
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Soluoon
estndar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacos
similares 5,0 mL de Solucion madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volmenes de la Solucin muestra correspondien-
tes a tres o ms de los niveles especificados de la Solu-
cion estandar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucin madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estndar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o seccin de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minacin y esterilizar en un autoclave a 121 durante
LJSP 18
5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no con-
tienen Solucin estndar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y 37
mantenida termostticamente con un margen de
0,5 hasta que, despus de 16-24 horas de incuba-
cin, no se presente un aumento significativo de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel ms alto de
Estndar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a un recipiente apto para lectura ptica si fuera nece-
sario. Leer la transmitancia entre 540 y 660 nm
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos despus
de la agitacin cuando la lectura del galvanmetro se
mantenga constante durante 30 segundos o ms. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
cin con un microorganismo extrao, no tomar en
cuenta el resultado de la valoracin.
Clculo: Preparar una curva estndar de concentracin-
respuesta segn se indica a continuacin. Para cada ni-
vel del Estndar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de la transmitancia (Ls),
como la diferencia, y= 2,00 - Ls. Graficar esta res-
puesta en la ordenada del papel milimetrado en funcin
del logaritmo de los mL de la Solucin estndar por
tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada una es-
cala aritmtica o logartmica, la que proporcione la me-
jor aproximacin a una lnea recta. Trazar la recta o la
curva de regresin que mejor se ajuste a los puntos
g raficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solucin muestra
(Lu). Leer, a partir de la curva estndar, el logaritmo
del volumen de la Solucin estndar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo entre los puntos extremos graficados para el
Estndar. Restar de cada logaritmo as obtenido, el lo-
garitmo del volumen, en mL, de la Solucin muestra
para obtener la diferencia, X, para cada nivel de dosifi-
cacin. Promediar los valores de X para cada uno d~
los tres o ms niveles de dosificacin para obtener X,
que es igual al logaritmo de la potencia relativa, M',
de la Solucin muestra. Determinar la cantidad, en mg,
de pantotenato de calcio (CrnH12CaN2010) en la por-
cin de Cpsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + lag R)
R = nmero de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porcin de
Cpsulas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C18H12CaN2010) en la porcin
de Cpsulas tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 100
N = cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porcin de Cpsulas tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
cin por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Va/oraciones
Biolgicas (111 ), El Intervalo de Confian1a y los Lmites de
la Potencia). Si las dos determinaciones difieren en ms
Suplementos Dietticos /Vitaminas Hidrosolubles 6719
de 0,08, realizar una o ms determinaciones adiciona-
les. A parlir de la media de dos o ms valores de M que
no difieran en ms de O, 15, calcular la potencia media
de la !-'reparacin que se est valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantirlarl
declarada de pantotenato de calcio (CrnH12CaN2010)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 3
Solucin amortiguadora: Disolver 1 0,0 g de fosfato
monobsico de potasio en 2000 mL de agua y ajustar
con cido fosfrico a un pH de 3,5.
Fase mvil: Metanol y Solucin amortiguadora (1 :9)
Solucin madre del estndar: 0,25 mg/mL de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar nuevamente
cada 4 semanas. Almacenar en un refrigerador.
Solucin estndar: 40 g/mL de ER Pantotenato de
Calcio USP, a partir de Solucin madre del estndar di-
luida con agua ,
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de 1 O mg
de pantotenato de calcio, a un matraz volumtrico de
250 ml. A51regar 1 O mL de metano! y agitar el matraz
por rotacion suave hasta dispersar el contenido de las
Cpsulas. Diluir con agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C18H12CaN2010) en la porcin
de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de pantotenato de calcio de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de pantotenato de calcio de la
Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C18H12CaN210)
NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo, cido actico glacial y agua
(5:1 :94)
Fase mvil: Una mezcla de metanol, cido actico gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 mL.
Solucin estndar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
contengan niacina.] Transferir 80 mg de ER Niacinamida
USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina USP, 20 mg
de ER Riboflavina USP y 20 mg de ER Clorhidrato de
Tiamina USP a un matraz volumtrico de 200 mL, y
agregar 180 mL de Diluyente. Sumergir el matraz en un
bao de agua caliente mantenido a 65''-70 durante 1 O
minutos, agitando regularmente o usando un mezcla-
dor de vrtice, hasta que se disuelvan todos los mate-
6720 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietticos
ri~les slidos. Enfriar rpidamente en un bao de agua
fria durante 1 O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen. . Cu
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrhirn. ha~ta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 1 O mg de niacinamida y 2,5 mg
de clorhidrato de piridoxina, de riboflavina y de clorhi-
drato de tiamina, a un tubo de centrfuga de 50 ml.
Agregar 25,0 ml de Diluyente y mezclar usando un
mezclador de vrtice durante 30 segundos para sus-
pender por completo el polvo. Sumergir el tubo de
centrfuga en un bao de agua caliente mantenido a
65"-70, calentar durante 5 minutos y mezclar en un
mezclador de vrtice durante 30 segundos. Devolver el
tubo al bao de agua caliente, calentar durante 5 minu-
tos ms y mezclar en un mezclador de vrtice durante
30 segundos. Filtrar una porcin de la solucin, enfriar
a temperatura ambiente y usar el filtrado transparente.
[NOTA-Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la
filtracin.]
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf/O (621 >, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado - (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
r11 = rea del pico de niacinamida de la Solucin
muestra
r1 = rea del pico de niacinamida de la Solucin
estndar
C1 = concentracin de ER Niacinamida USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacinamida en la
Solucin muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contienen niacina:
Resultado= (rulr1) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacina de la Solucin muestra
r.1 = rea del pico de niacina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Niacina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH 11 NOi
HCI), riboflavina (C 17H20N406) y clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S HCI) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (CdCu) x 100
ru = area del pico _de la vitamina correspondiente
de la Solucion muestra
r1 = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin estndar
USP 38
C = concentracin del Estndar de Referencia USP
pertinente en la Solucin estandar (mg/ml)
= concentracin nominal de la vitamina
corre~pomJienle en la Solucin muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (Ci2H11Ns04S)
en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,i/M,2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
Mc1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20) o niacina
(C6HsN02), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 HCI),
riboflavina (C 11H20N406) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C1 2H17 CIN40S HCI) o mononitrato de tiamina
(Ci2H11Ns04S)
NIACINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Transferir 1 ml de cido actico glacial y
2,5 g de edetato disdico a un matraz volumtrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extraccin: Solucin A y metanol (3:1)
Fase mvil: Solucin de acetato de sodio O, 1 M
(1 3,6 mg/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
cido actico a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
un volumen pequeo de metanol (hasta 1 %) a la Fase
mvil para mejorar la resolucin.]
Solucion madre del estndar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de extraccin
Solucin estndar: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz volumtrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extraccin a volumen.
Solucin muestra: [NOTA--Esta preparacin es ade-
cuada para la determinacin de niacina o niacinamida,
piridoxina y riboflavina, cuando se encuentran presentes
en la formulacin.] Pesar no menos de 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un vaso de precipitados. Retirar cualquier contenido ad-
herido a las cubiertas lavando con varias porciones de
ter. Desechar los lavados y secar las cubiertas de las
Cpsulas con ayuda de una corriente de aire seco. Pesar
las cubiertas de las Cpsulas vacas en un frasco de pe-
sada tarado y calcular el peso neto del contenido de las
Cpsulas. Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de 2 mg
de riboflavina, a un matraz volumtrico de 200 ml. Si la
riboflavina no se encuentra presente en la formulacin,
usar una porcin equivalente a una cantidad nominal
de 2 mg de piridoxina. Si la piridoxina no se encuentra
presente en la formulacin, usar una porcin equiva-
lente a una cantidad nominal de 20 mg de niacina o
niacinamida. Agregar 100,0 ml de Disolvente de extrac-
cin y mezclar durante 20 minutos, usando un agitador
de movimiento tipo mueca (wrist-action). Sumergir el
matraz en un bao de agua mantenido a 70-75 y
calentar durante 20 minutos. Mezclar en un mezclador
de vrtice durante 30 segundos, enfriar a temperatura
ambiente y filtrar. Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 >, Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no! entre cada inyeccin.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C6HsN02) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de niacina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Niacina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6Hs02)
NIACINAMIDA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin, Fase mvil, Solucin madre
del estndar, Solucin estndar, Solucin muestra y
Sistema cromatogrfico: Usando ER Niacinamida USP
en lugar de ER Niacina USP, proceder segn se indica
en Niacina, Mtodo 2.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacinamida. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
ru = rea del pico de niacinamida de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de niacinamida de la Solucin
estndar
C1 = concentracin de ER Niacinamida USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacinamida en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin, Fase mvil y Solucin mues-
tra: Preparar segn se indica en Niacina, Mtodo 2.
Solucin madre del estndar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extraccin
Solucin estndar: 20 g/ml de ER Clorhidrato de Piri-
doxina USP, a partir de Solucin madre del estndar di-
luida con Disolvente de extraccin
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
SuplPnwnfos Oietf'ticos /Vitaminas Hidrosolublcs 6721
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 rnL/min
Volumen de inyeccin: 20 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (CRH11 N03 HCI) en la porcin de Cpsulas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de piridoxina de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de piridoxina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 HCI)
RIBOFLAVINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin y Solucin muestra: Preparar
segn se indica en Niacina, Mtodo 2.
Solucin A: 6,8 mg/ml de acetato de sodio en agua
Fase mvil: Preparar una mezcla de Solucin A y meta-
no! (13:7). Agregar 2 ml de trietilamina por L de la
mezcla y ajustar con cido actico glacial a un pH de
5,2.
Solucin madre del estndar: Transferir 20 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumtrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Disolvente de extraccin. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un bao de agua mante-
nido a 65-75. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rpidamente en un bao de agua
fra a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extraccin a volumen.
Solucin estndar: Diluir 5,0 ml de Solucin madre del
estndar con Disolvente de extraccin hasta 25,0 ml.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografa (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de riboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C17H20N406) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (r,,/r1) x (C/C,,) x 100
ru = rea del pico de riboflavina de la Solucin
muestra
r5 = rea del pico de riboflavina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Riboflavina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de riboflavina en la
Solucin muestra (mg/ml)
6722 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietticos
Criterios de aceptacin: 90,0%-1.50,0% rle la cantidad
declJrada de riboflavina (C 11H20N4o)
TIAMINA, Metodo 2
[!'JOTA U:;.ir m.itcrial de vidrio con protecci11 ctclnicct
rlur;inte tndo este procedimiento.]
Solucin A: 1,88 mg/ml de 1-hexanosulfonato de so-
dio en cido fosfrico al O, 1%
Fase mvil: Solucin A y acetonitrilo (46:9)
Solucin madre del estndar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en cido clorhdrico 0,2 N
Solucin estndar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con cido clorhdrico 0,2 N , flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Mezclar una porcin del contenido de las
Cpsulas con un volumen de cido clorhdrico 0,2 N
para obtener una concentracin nominal de 0,02 mg/
ml de tiamina. Agitar durante 15 minutos con un agi-
tador de movimiento tipo mueca (wrist action) y ca-
lentar a ebullicin durante 30 minutos. Enfriar a tempe-
ratura ambiente y filtrar. Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
x
Columna: 4,6 mm 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Para productos
que contengan clorhidrato de tiamina, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN405 HCI) en la porcin de Cpsu-
las tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns4S)
en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C1/Cu) x (M,1/M,2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
r, = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
M1 ~ peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,1 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H11CIN.,OS HCI) o mononitrato de tiamina
(Cl)H17N10.1S)
USP 38
NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Metodo 3
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este proced1m1ento.j
Reactivo: 25 mg/ml de edetato di~dic.o en agua
Fase mvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de cido actico glacial y 350 ml de metano! a un ma-
traz volumtrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solucin madre del estndar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solucin estndar: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz de 125 ml con tapn. Agregar
1 0,0 ml de una mezcla de metano! y cido actico gla-
cial (9:1) y 30,0 ml de una mezcla de metano! y etilen-
glicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
bao de agua mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado. ,
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 7,5 mg de niacina o niacina-
mida, 1,2 mg de clorhidrato de piridoxina, 0,4 mg de
riboflavina y 1,2 mg de clorhidrato de tiamina, a un
matraz de 125 ml con tapn. Agregar 10,0 ml de una
mezcla de metano! y cido actico glacial (9:1 ), y
30,0 ml de una mezcla de metano! y etilenglicol (1 :1 ).
Tapar, agitar durante 15 minutos en un bao de agua
mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina o niacinamida.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
niacina (C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20) en la
porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 100
ru = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin estndar
C = concentracin de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina o
niacinamida en la Solucin muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03
HCI), riboflavina (( 1H2uN406) y clorhidrato de
tiamina (CPH11CIN4QS HCI) (para productos que
contengan clorhidrato de tiamina) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado= (rc-/11) x. (Cs/Cu) .x. 100
ru = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin muestra

r, - rea de! pico cie la v!tilmin;i corrPsponrliPntp
de la Soiucin estndar
C = concentracin del Estndar de Referencia USP
penineme e11 ia Suuuu11 e;lndw (1n9/111L)
c. - concrntracin nomina! de !a vitamina
correspondiente en la Solucin muestra
(mg/mL)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H17Ns04S)
en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (r11/r1) x (C/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
r, = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/mL)
Cu == concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/mL)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 == peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C,,HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 NOi HCI),
riboflavina (C 11H20N40o) y tia mina como clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN40S HCI) o mononitrato de tiamina
(C 12H17Ns04S)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Disolucin.
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 1,0 2 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmone/la spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Cp-
sulas de Vitaminas Hidrosolubles. La etiqueta tambin in-
dica la cantidad de cada vitamina en trminos de unida-
des mtricas por unidad de dosificacin y, cuando sea
necesario, la forma salina presente. Cuando se propor-
ciona ms de un mtodo de valoracin para una vita-
mina en particular, el etiquetado indica el mtodo de
valoracin usado nicamente si no se usa el Mtodo 7.
Cuando los productos declaran contener pantenol, la eti-
qu~ta indica el contenido equivalente de dexpantenol.
ESTANDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Biotina USP
cido (3aS,4S,6aR)-hexahidro-2-oxo- l li-tieno[3,4-d]imi-
dazol-4-valrico.
C10H16N201S 244,31
ER Pantotenato de Calcio USP
D-Pantotenato de calcio (2:1 ).
C,,H,1CaN201,, 476,53
ER Cianocobalamina USP
Vitamina B12.
C61H88CoN1414P 1355,37
ER Dexpantenol USP
o-(+ )-2,4-Dihidroxi-N-( 3-hidroxipropil)-3, 3-
dimetilbutiramida.
C9H19N4 205,25
Suplementos Dietticos / Vitarnini1" Hictrmolubles 6723
ER Acido Folico USP
cido N-[ 4-[[(2-lmino-1,4-dihidro '1 oxo 6 pteridinil)me-
til ]amino Jbenzoil]-L-glutmico.
C1~1H1'Jr'~10b -111,10
ER Niacina USP
cido nicotnico.
C,,HsN0 2 123, 11
ER Niacinamida USP
Nicotinamida.
C,H6N20 1 22, 1 2
ER Pantenol Racmico USP
()-2, 4-Di hidroxi-N-( 3-hid ro xi pro pi 1)- 3, 3-d i me ti 1-butana-
m ida.
C9H 19N4 205,25
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
Clorhidrato de piridoxol.
C8H11NOi HCI 205,64
ER Riboflavina USP
Riboflavina.
C17H20N406 376,36
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Monoclorhidrato de tiamina.
C12H17CIN40S HCI 337,27
Vitaminas Hidrosolubles, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Vitaminas Hidrosolubles contienen dos o
ms de las siguientes vitaminas hidrosolubles: cido As-
crbico o su equivalente como Ascorbato de Calcio o As-
corbato de Sodio, Biotin;;i, Cianocobalamina, cido Flico,
Niacina o Niacinamida, Acido Pantotnico (como Pantote-
nato de Calcio o Pantotenato de Calcio Racmico), Clorhi-
drato de Piridoxina, Riboflavina y Clorhidrato de Tiamina
o Mononitrato de Tiamina. Las Tabletas contienen no me-
nos de 90,0% y no ms de 150,0% de las cantidades
declaradas de cido ascrbico (C6Hs06) o su equivalente
como ascorbato de sodio o ascorbato de calcio, biotina
(CuH16N20iS), pantotenato de calcio (C1sHi2CaN2010),
cianocobalamina (C63HssCoN1414P), cido flico
(C1qH19N106), niacina (C6H1N02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH 11 NO, HCI), ri-
boflavina (C11H20N406) y tiamina (C12H11CIN4QS) como
clorhidrato de tiamina o mononitrato de tiamina.
No contienen ninguna forma de Beta Caroteno o Vitamina
A, D, E o K. No contienen minerales para los que se de-
clare un valor nutrimental. Pueden contener otras sustan-
cias agregadas declaradas en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione ms de un mtodo de valoracin para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los mtodos especificados, declarando el mtodo
usado en el etiquetado nicamente si no se usa el Mtodo
7.], ,
ACIDO ASCORBICO
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1 00 mg de cido as-
crbico, a un matraz volumtrico de 200 mL y agregar
75 mL de cido metafosfrico-cido actico SR. Tapar el
matraz y agitar mecnicamente durante 30 minutos. Di-
luir con agua a volumen. Transferir una porcin de la
solucin a un tubo de centrfuga y centrifugar hasta
obtener un sobrenadante transparente. Pipetear y trans-
ferir 4,0 mL de esta solucin a un matraz Erlenmeyer de
50 ml, y agregar 5 ml de cido metafosfrico~cido
actico SR.
Anlisis: Valorar con solucin estndar de diclorofe-
nol-indofenol SV hasta un color rosado que persista du-
rante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen de
6724 Vitaminas HirlrmnlublPs / Suplementos Dietticos
solucion estndar de diclorofenol-indofenol consumido
por una mezcla de 5,5 ml de 5cido metafosfrico-cido
actico SR y 15 ml de agua. A partir del equivalente de
cirln .1~crhico de !a solucin cst5ndJr de diclorofe-
nol-indofenol SV. calcular el rnntPnirlo dP cido ascr-
birn en cada Tableta.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cido ascrbico (C"Hs06) . rotacin suave hasta humedecer el contenido. Calentar
ASCORBATO DE CALCIO: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 21-]20)
ASCORBATO DE SODIO: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
BIOTINA, Mtodo 1
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Mezclar 85 ml de acetonitrilo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 ml de cido fosfrico, y diluir con
agua hasta 1000 ml.
Solucin madre del estndar: 0,333 mg/ml de ER Bio-
tina USP en dimetil sulfxido
Solucin estndar: 5 g/ml de ER Biotina USP que se
prepara diluyendo Solucin madre del estndar en agua.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1 mg de biotina, a un
matraz volumtrico de 200 ml. Agregar 3 ml de dime-
til sulfxido y agitar por rotacin suave hasta humede-
cer el contenido. Colocar el matraz en un bao de agua
a 60-70 durante 5 minutos. Someter a ultrasonido
durante 5 minutos, diluir con agua a volumen y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 de 3 m
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de biotina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de biotina
(C10H16N201S) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs!Cu) x 100
ru = rea del pico de biotina de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de biotina de la Solucin
estndar
( 1 = concentracin de ER Biotina USP en la Solucin
estndar (g/ml)
e,, = concentracin nominal de biotina en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N20JS)
BIOTINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan segn
se indica, tengan Jropiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados segn SP describe en este
procedimiento.
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solucin en un
refrigerador.
USP 38
Solucin estndar: O, 1 ng/ml de ER Biotina USP en
agua, que se prepara diluyendo Solucion madre del es-
/andar en agua en el da de la valoracin.
Solu<.in muestra: Reducir a polvo tino no menos de
30 Tableta~. Tran<;ferir una porcin del Jolvo, equiva-
lente a 1 00 g de biotina, a un matraz volumtrico de
200 ml. Agregar 3 ml de alcohol al 50% y agitar por
el matraz en un bao de agua a 60 -70' durante 5
minutos. Someter a ultrasonido durante 5 minutos, di-
luir con alcohol al 50% a volumen y filtrar. Diluir un
volumen del filtrado cuantitativamente, y si fuera nece-
sario en diluciones sucesivas, con agua hasta obtener
una solucin con una concentracin de O, 1 ng/ml.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
100 g de casena exenta de vitamina con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 O. Fil-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 ml de agua. Calentar a
70-80 y agregar cido clorhdrico diluido (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los slidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 O.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de pantotenato de calcio: 1 O g/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
g/ml de riboflavina y 1 O g/ml de clorhidrato de tia-
mina en cido actico 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O g/ml de cido p-aminoben-
zoico, 50 g/ml de niacina y 40 g/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 7 y ajustar
con hidrxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 1
Solu~-~-hid~;-;:;~;=d;- de_cas_e__n__ _____________==r
_~ 25 ml
Solucin Je ci,Lina-tri tano __=::I
--~-~2~5~m~L~
USP 38
Tabla 1 (Continuacin)
Solucin de pol1sorbato 80 ---~-0-,_2_S_m_Ll
Dexlro>d dnl 11d1 d
(e )Ol:lICJ an hi
' Act>ldto 111.. ro ------- -------- ----
~Q_n_de adenina-auanina-uracilo
Solucin de oantotenato de calcio
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina
Solucin salina A
Solucin salina B
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en .100 mL de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la m.ez-
cla en un bao de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O mL de la
solucin caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos esterilizar en un autoclave a 121 durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfren en posicin
vertical. Inocular tres o ms de los tubos, sembrando
por puncin un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubando durante 1 6-24 horas a una temperatura en-
tre 30 y 37 mantenida termostticamente con un
margen de 0,5: Almacenar en. ~n refriger?dor. Prepa-
rar un cultivo reciente por punc1on del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnculo
si el cultivo tiene ms de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que conten-
gan O 5 ng de biotina a cada una de las series de tubos
de en~ayo que contengan 5,0 mL de SoJucin m_~dre de
medio basal. Tapar los tubos con algodon, esterilizar en
un autoclave a 121 durante 15 minutos y enfriar.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacil/us plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo compara_ble ,al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir celulas de~
Cultivo madre de LactobaC1/lus plantarum a un tubo este-
ril que contenga 1 O mL de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30 y 37 mantenida term?stticai;iente c~:>n un .
margen de 0,5. La suspension de celulas as1 obtenida
es el lnculo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solu~in
estndar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vac1os
similares 5,0 mL de Solucin madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volmenes de la Solucin muestra correspondien-
tes a tres o ms niveles de los especificados de la Solu-
cin estndar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucin madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estndar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o seccin de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minacin y esterilizar en un autoclave a ~ 21 durante
5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de Inoculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro tubos .que no con-
tienen Solucin estndar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y 37
mantenida termostticamente con un margen de
0,5 hasta que, despus de 16-24 h<;>ras ?e incuba- .
cin, no se presente un aumento s1gn1f1cat1vo de turb1-
1 ATCC N" 8014 es adecuado. Esta cepa se conoca anteriormente como Lac-
tobacillus arabinosus 17-5.
Suplemvntos Dietticos /Vitaminas Hidrosolublcs 6725
dez en los tubos que contengan el nivel ms alto de
E:standar durante un periodo de 2 horas. . .
Determinar la transmitancia de los tubos de la s1gu1ente
1O g manera. Mezciar el contenido de calla lubo y transferir
- Sg- ----
1 a una celdil de cspectrofotmctro. Colocar la celda en
S ml un espectrofotmetro ajustado a una longi.tud de onda
S ml especfica de 540-660 nm y leer la transm1tanc1a
S ml cuando se alcance un estado estacionario. El estado
estacionario se observa unos pocos segundos despus
S ml
de la agitacin cuando la lectura del galvanmetro se
mantenga constante durante. 30 segundos o ms. Per-
S ml
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
S ml para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
cin con un microorganismo extrao, no tomar en
cuenta el resultado de la valoracin.
Clculos: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta segn se indica a continuacin. Par~
cada nivel del Estndar, calcular la respuesta a partir de
la suma de los valores duplicados de la transmitancia
(L 1) como la diferencia, y= 2,00 - Ls. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milin:i~trad~ en fun-
cin del logaritmo de los mL de la Soluc1on estandar por
tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada una es-
cala aritmtica o logartmica, la que proporcione la me-
jor aproximacin a una lnea recta. Trazar la recta o la
curva de regresin que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - Lu, suman.~o las dos
transmitancias para cada nivel de la Soluc1on muestra
(Lu). Leer a partir de la curva estndar el logaritmo del
volumen de la Solucin estndar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo de los puntos extremos graficados para el Es-
tndar. Restar de cada logaritmo as obtenido el loga-
ritmo del volumen en mL, de la Solucin muestra para
obtener la diferenia, X, de cada nivel de dosificacin.
Promediar los valores de X para cada uno_de los tres o
ms niveles de dosificacin para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
cin muestra.
Determinar la cantidad, en g, de biotina (C10H16N203S)
en la porcin de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de ~tg de biotina que se supuso
estaban presentes en la porcin de Tabletas
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
biotina (C10H16N201S) en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado= [(antilog M)!N] x 100
N =cantidad nominal de biotina en la porcin de
Tabletas tomada (g)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
cin por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08, su
media, 7VI, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Valo;aciones
Biolgicas (111 ), El Intervalo de Cor:f1anza y los L1m1tes ,de
la Potencia). Si las dos determ1nac1ones d1f1eren en mas
de O 08 realizar una o ms determinaciones adiciona-
les. p~rtir de la media de dos o ms valores .de M gup
no difieran en ms de O, 15, calcular la potencia media
de la preparacin que se est valorando. .
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H1bN20iS)
6726 Vitaminas Hirlrmolubles / Suplementos Dietticos
BIOTINA, Metodo 3
[NoTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Soludn A: Transferir 800 rnL de agua y 100 111L de
trietilamina a un matra? volumtrico de 1000 mL. Agre-
gar 80 mL de ac1do toslrico al 85% y diluir con agua a
volumen.
Fase mvil: Transferir 80 mL de acetonitrilo y 1 O mL de
Solucin A a un matraz volumtrico de 1000 ml. Diluir
con a9ua a volumen.
Solucion estndar: 0,6 g/mL de ER Biotina USP en
agua. [NOTA-Se usar una porcin de la Solucin estn-
dar para determinar la recuperacin porcentual de bio-
t1na a partir del procedimiento de Extraccin en fase
slida.]
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una cantidad de Tabletas reduci-
das a polvo a un matraz volumtrico para obtener una
concentracin nominal de 0,6 g/mL de biotina. Agre-
gar agua hasta el 80% de la capacidad del matraz y
someter a ultrasonido durante 30-40 minutos, mez-
clando ocasionalmente, para disolver. Diluir con agua a
volumen y filtrar. Ajustar el pH de la solucin con cido
actico diluido o hidrxido de sodio O, 1 N a un valor
entre 6,0-7,0.
Extraccin en fase slida: [NOTA-Acondicionar la co-
lumna _de_ extraccin especificada en este procedimiento
d_e_ la s1gu1ente manera. Lavar la columna con una por-
c1on de 2 mL de metano!. Equilibrar con una porcin de
2 mL de agua.]
Pipetear y transferir por separado 5,0 mL de la Solucin
muestra y de la Solucin estndar a columnas de ex-
traccin en fase slida recientemente acondicionadas
que consistan en un relleno de modo mixto con una
masa de sorbente de 60 mg. [NOTA-El relleno de
modo mixto consiste en sorbentes de intercambio
aninico y de fase reversa. El componente de fase re-
versa es un copolmero de N-vinilpirrolidona y divinil-
benceno. La unidad de intercambio aninico es un
grupo trialquilamino.2]
Lavar la columna con 1 O mL de metano! al 30% (v/v)
en agua. Aplicar un volumen apropiado (4,9 mL) de
metano! al 30% (v/v) en cido clorhdrico O, 1 N a la
columna. Recoger el eluato en un matraz volumtrico
de 5 mL, que contenga 100 L de acetato de sodio al
40% (p/v) en agua, y diluir con metano! al 30% (v/v)
en cido clorhdrico O, 1 N a volumen.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografw (621), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y una porcin de Solucin
estndar que se haya sometido a la Extraccin en fase
slida.
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 1,5, Solucin
estndar
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
cin estndar y la Solucin estndar que se haya so-
metido a la Extraccin en fase slida
Recuperacin: 95%-100%, Solucion estndar que se
haya sometido a la Extraccin en fase slida
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra que se
haya sometido a la t.xtraccin en fase slida
'Un cartucho adecuado es el cartucho Wate" Oasis MAX Vac RC. ron ta-
lllao de fJdtlcua de 30 pm. parte 186000371.
USP 38
Medir las reas de los picos de biotina. Calrular el por-
centaje de la cantidad declarada de biotina
(C10H11,N201S) en la porcin de Tabletas tomada
Resultado~ (r:/r;) ". (C,/C) x 100
ru = rea del pico de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la Solucin estndar
C = concentracin de ER Biotina USP en la Solucin
estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de biotina en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N203S)
CIANOCOBALAMINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metano! y agua (7:13)
Solucin madre del estndar: 1 O g/mL de ER Ciano-
cobalamina USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
cin madre en un lugar oscuro y desechar despus de 1
semana.]
Solucin estndar: 1 g/mL de ER Cianocobalamina
USP, a partir de Solucin madre del estndar diluida con
agua
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a 100 g de cianocobalamina, a un matraz de
250 ml. Agregar cuantitativamente 1 00,0 mL de agua y
extraer cuidadosamente durante 2 minutos. Filtrar
1O mL del extracto Y. usar el filtrado.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 0,5 mL/min
Volumen de inyeccin: 200 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de cianocobalamina. Cal-
cular el porcentaje de la cantidad declarada de ciano-
cobalamina (CiHssCoN1414P) en la porcin de Ta-
bletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de cianocobalamina de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de cianocobalamina de la
Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Cianocobalamina USP en
la Solucin estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de cianocobalamina en
la Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C6iHssCoN 140 14 P)
CIANOCOBALAMINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin madre del estndar: 1,0 g/mL de ER Ciano-
cobalamina USP en alcohol al 25%. Almacenar en un
refrigerador.
Solucin estndar: Diluir un volumen adecuado de So-
lucin madre del estndar con agua hasta un volumen
m,edido tal que despus del periodo de incubacin se-
gun se describe en el Anl1",1\ la diferencia en la trans-
mitancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 mL
de la Solucin estndar sea no menor que la correspon-
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
clulas. Esta concentracin por lo general est entre
USP 18
0,01 y 0,04 ng/mL de !a So!ucion estndar. Preparar
esta solucin en ei momento de su uso para cada
valoracin.
Solucin muestra: Reducir a poivo fino 110 menm de
20 T<1hleta). Trln~frrir tin<l norcin de IJs TJblctJs rcdu
a
cidas a polvo, equivalente 1,0 pg de cianocobalamina,
a un vaso apropiado que contenga, por cada g de Ta-
bletas reducidas a polvo tomado, 25 ml de una solu-
cin de extraccin acuosa preparada justo antes de su
uso, q_ue contiene, en cada 1 00 m L, 1 ,29 g de fosfato
d1bas1co de sodio, 1, 1 g de cido ctrico anhidro y 1,0 g
de metabisulfito de sodio. Autoclavar la mezcla a 121
dyrante 1 O minutos. Dejar que sedimente cualquier par-
t1cula del extracto. sin disolve,r y filtrar o centrifugar, si
fuera necesario. Diluir una al1cuota de la solucin trans-
parente ron ilgua hasta obtener una solucin final que
contenga una actividad de vitamina B12 equivalente
aproximadamente a la de la Solucin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Preparar se-
gn se indica en Biotina, Mtodo 2.
Solucin de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua p_ara obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Preparar segn
se indica en Biotina, Mtodo 2.
Solucin de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
3~-~0_ml de agua,_ calentar a 70', agregar 6,0 ml de
h1drox1do de amonio 6 N y mezclar hasta que los sli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Alm~~enar ~ajo tolue_no en un refrigerador.
Soluc1on salma A: Disolver 1 O g de fosfato monobsico
de potasio y 1 O g de fosfato di bsico de potasio en
agua ,P~ra obtener 200 ml, y agr~gar 2 gotas de cido
clorh1drico. Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre9ar 2 gotas de cido clorhdrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solucin de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solucin vitamnica A: Disolver 1 O mg de riboflavina,
1 O mg de clorhidrato de tiamina, 1 00 pg de biotina y
20 mg de niacina en cido actico 0,02 N para obtener
400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prot~9er <;Je la )u.z. . ,
Soluc1on v1tam1rnca B: Disolver 20 mg de acido p-ami-
nobe_nzo1co, 1 o rng d~ pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de p1ridox111a, 40 mg de clorhidrato de piri-
doxal, 8 m.9. de d1clorh1drato de piridoxamina y 2 mg
de cido folico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3:1) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz.
Solucin madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente frmula e instrucciones. Se
puede usar un~ mezcla deshidratada que contenga los
mismos 1ngred1entes siempre que, cuando se reconsti-
tuya segCm se indicil en el etiquetado, produzca un me-
dio comparable al obtenido de la frmula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado en la Tabla
2_, _disolvie~do cuidadosamente Cistina y Triptfano en
Ac1do c/orh1dnco antes de agregar las siguientes ocho
soluciones a la solucin resultante. Agregar 1,00 ml de
agua y d1_solver Dextrosa, Acetato de sodio y Acido a,s-
corb1co. Filtrar, s1 fuera necesario. Agregar la Solucion
de po/!sorhatn R0, ;ijust;ir rnn hidrxido rle sodio 1 N a
un pH de 5,5-6,0 y diluir con Agua Purificadaz hasta
250 ml.
Suplcrncntos Dietticos/ \/itJminas Hidroso!uble~ 6727
Tabla 2
~ L C1>lin~1 ---------- - -1- OJJ g_
1
1
r':-'-'-T:..:Jnr2t:.:.:n.'. .'.h~n.'. .'.n_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ .,~.Q l
~1rln_c:lnh1rlricn__l[\j__ ____ __ j 1O ml l
Solucin de ad_E'.Qina guanina-uracilo j _____2~
Soluc1on de xantina 5 ml
Solucin vitam1nica A 1O ml
- - - - - - - - - --- --~~-
Solucion vitamlnica B 1O rnl
i--=-==........:.c=:.c==~-- ------- ------- ----~-----+---~~---"
Solucin salina A 5 ml
i--=-S=ol"'u""ci-"-,_.n-=.s,,,al.:.:.in"'a--'B'------------ .. . ----~---?_mL_
Solucin de asparagina 5 ml
Solucin de hidrolizado cido de caselna 25 ml
Dextrosa anhidra 1O o
Acetato de sodio anhidro s1 g
cido ascrbico g
Preparacin de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
cin analtico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presin reducida, a travs de una capa del coadyuvante
de filtracin. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: lNOTA-Se puede usar una mezcla
d_eshidratada que contenga los mismos ingredientes
siempre que, cuando se reconstituya segn se indica en
el_ etiquetad9, produzca. un medio equivalente al obte-
nido de la formula provista en este procedimiento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobsico de potasio en 60-70 ml de agua. Agregar
1 O ml de Preparacin de jugo de tomate y 1 ml de Solu-
cin de polisorbato 80. Ajustar con hidrxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua hasta 1 00 ml.
Colocar porciones de 1 O ml de la solucin en tubos de
ensayo_y tapar con algodn. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 durante 15 minutos.
Enfri_a,r tan rpido como sea posible para evitar la for-
mac1on de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensin: Diluir un volumen medido de
Solucin madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O ml del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar segn se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacllus leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 1 0_9 ml de Medio de cultivo y calen-
tar la me_zcla en un bano de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de 1 O ml de
la soluci~. caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121' durante 15 mi-
nutos y dejar que los tubos se enfren en posicin verti-
cal. ln?cular tres o ms de los tubos sembrando por
punc1on un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii.3
lNOTA-Antes de usar un cultivo recientemente prepa-
rado por primera vez en esta valoracin, realizar no me-
nos de 1 O transferencias sucesivas del cultivo en un pe-
riodo de 2 semanas.] Incubar durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30 y 40 mantenida termostti-
camente con un margen de 0,5' . Almacenar en un
refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por puncin al menos tres
veces por s~mana y ~o usarlos para preparar el lnculo
s1 tienen mas de 4 d1as de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
fe~encias diarias O dos vecro5 al dil dPI rnltivo ror run-
c1on, hasta el punto en que se pueda observar una
' Se pueden obtener cultivos puros de Lactobacillus /eichmannii (listados como
Loctobocil!u1 C:c/brucck11) como N 78 30 de ATCC, 10801 Uni'.er>ily Blvd., Md-
11a5'as, VA 2011 0-2209 (www.atcc.org).
6728 Vitamina~ Hirlrmoluhles / Suplementos Dietticos
turbideL evidente en el /ncu/o lquido 2-4 horas des-
pues de la inoculacin. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
.irlecuadl y puede conducir 3 rcsultJdo~ errticos.
lnculo: [NOTA-Se puede u\iir un; \11\rPmin conge-
lada de Laclobaol/us le1chmanmi como cultivo madre,
siempre que produzca un /ncu/o comparable al de un
cultivo recientemente preparado.]
Realizar una transferencia de clulas del Cultivo madre
de Lactobacillus leichmannii a dos tubos estriles que
contengan 1 O mL de Medio de cultivo cada uno. Incu-
bar estos cultivos durante 16-24 horas a una tempera-
tura entre 30'' y 40 mantenida termostticamente con
un margen de 0,5'. Centrifugar los cultivos bajo con-
diciones aspticas y decantar el sobrenadante. Sus-
pender las clulas del cultivo en 5 mL de Medio de
suspensin y mezclar. Usando Medio de suspensin est-
ril, ajustar el volumen de manera que una dilucin 1
en 20 en solucin salina SR produzca una transmitan-
cia del 70% cuando se lee en un espectrofotmetro
adecuado ajustado a una longitud de onda de 530
nm, equipado con una celda de 1O mm, y leer contra
el set de solucin salina SR a una transmitancia del
100%. Preparar una dilucin 1 en 400 de la suspen-
sin ajustada usando Solucin madre de medio basal
estril. [NOTA-Esta dilucin se puede alterar, cuando
sea necesario, para obtener la respuesta de prueba de-
seada.] La suspensin de clulas as obtenida es el ln-
culo.
Calibracin del espectrofotmetro: Revisar peridica-
mente la longitud de onda del espectrofotmetro,
usando una celda de longitud de onda estndar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotmetro con agua para fijar el 0%
y el 100% de transmitancia, con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba a
diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y a
trazas de muchos agentes de limpieza, Jos tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y dems
material de vidrio necesario se deben limpiar meticulo-
samente, usando mtodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250 durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solucin estndar.
Agregar a cada uno de estos tubos y a cuatro tubos
vacos similares 5,0 mL de Solucin madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solucin mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucin madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O mL. Co-
locar un set completo de tubos de Estndar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado en
una segunda gradilla o seccin de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminacin bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121" durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no ms de 1 O minutos precalentando el autoclave si
fuera necesario. Enfriar tan rpido como sea posible
para evitar la formacin de color que resulta del sobre-
calentamiento del medio. Tomar precauciones para
mantener la uniformidad de las condiciones de esterili-
zacin y enfriamiento durante toda la valoracin, de-
bido a que colocar los tubos demasiado cerca o sobre-
cargar el autoclave puede ocasionar variaciones en la
velocidad de calentamiento.
Agregar aspticamente 0,5 mL de lnculo a cada tubo
as preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solucin estndar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y
USP 38
40 mantenida termostticamente con un margen de
l0,5 , durante l 6-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de 110 111enm de 80 durante 5 minutos. l::ntnar a tem-
peratura ambiente Oesru'> de agitar su contenido,
leer la transmitancia a 5 30 nm cuando se alcance un
estado estacionario. El estado estacionario se observa
unos pocos segundos despus de la agitacin cuando
la lectura se mantenga constante durante 30 segundos
o ms. Permitir aproximadamente el mismo intervalo
de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferencia es mayor de 5% o si hay evidencia de
contaminacin con un microorganismo extrao, no to-
mar en cuenta el resultado de la valoracin.
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoracin si la pendiente de la curva estndar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Clculos: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cualquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estndar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transmitancias (I:s) como la diferencia, y=
2,00 - L;. Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en funcin del logaritmo de los mL
de la Solucin estndar por tubo sobre la abscisa,
usando para la ordenada una escala aritmtica o loga-
rtmica, la que proporcione la mejor aproximacin a
una lnea recta. Trazar la recta o la curva de regresin
que mejor se ajuste a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - I:u, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solucin muestra
(I:u). Leer a partir de la curva estndar el logaritmo
del volumen de la Solucin estndar correspondiente
a cada uno de los valores de y comprendidos dentro
del intervalo entre los puntos extremos graficados
para el Estndar. Restar de cada logaritmo as obte-
nido el logaritmo del volumen, en mL, de la Solucin
muestra para obtener la diferencia, X, de cada nivel
de dosificacin. Promediar los valores de X para cada
uno de IQ_s tres o ms niveles de dosificacin para
obtener X, que es igual al logaritmo de potencia rela-
tiva, M', de la Solucin muestra.
Determinar la cantidad, en g, de cianocobalamina
(C>lHssCoN 1414P) en la porcin de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de g de cianocobalamina que se
supuso estaban presentes en la porcin de
Tabletas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina (CiH88CoN141.1P) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado = [(antilog M)/N] x 1 00
N =cantidad nominal de cianocobalamina en la
porcin de Tabletas tomada (g)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nacin por lo menos una vez, u~ariJo Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material Je prueba (ver Actividad de Vitamina 812
en Diseo y Anlisis de Valoraciones Biolgicas (111 ), El
lntPrvalo dP Confianza y los Lmites de la Potencia). Si
las dos determinaciones difieren en ms de 0,08, reali-
zar una o ms determinaciones adicionales. A partir de
la media de dos o ms v;ilores de M que no difieran
USP 38
en ms de O, 15, C(lirular \;i rotencia media de la pre-
paracin que se esl vaiorar1do.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar ~HJa de uar 1ocol.Jaia111i1td (C,, d lxxCoN 14014P)
Acmo Fouco, Mtodo J
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solucin de hidrxido de tetrabutilamonio
al 25% en metano!
Reactivo B: Transferir 5,0 g de cido penttico a un
matraz volumtrico de 50 ml. Disolver y diluir con hi-
drxido de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase mvil: 2 g de fosfato monobsico de potasio en
650 ml de agua. Agregar 12,0 ml de Reactivo A,
7,0 ml de cido fosfrico 3 N y 240 ml de metano!.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con cido fosf-
rico o amonaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1000 ml y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso, agregando agua o metano! a la Fase mvil pre-
parada para obtener una separacin de la lnea base
entre el cido flico y el estndar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separacin. [NOTA-El contenido de metano! y agua se
puede variar (entre 1 % y 3%).]
Solucin de estndar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumtrico de 1000 ml y
agregar 220 ml de metano! para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobsico de potasio en 300 ml de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solucin al matraz que contenga la solu-
cin de metilparabeno y agregar 300 ml adicionales de
a9ua. Agregar 19 ml de Reactivo A, 7 ml de cido fos-
forico 3 N y 30 ml de Reactivo B. Ajustar con amonaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrgeno a travs de la
solucin durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. , Temperatura de la columna: 50
Solucin estndar: 0,016 mg/ml de ER Acido Flico
USP en Solucin de estndar interno
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a 0,4 mg de cido flico, a un tubo de centrfuga
color mbar de 50 ml. Agre9ar 25,0 ml de Solucin de
estndar interno. Agitar mecanicamente durante 1 O mi-
nutos y centrifugar. Filtrar una porcin del sobrena-
dante transparente Y. usar el filtrado.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 ~tl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para cido
flico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estandar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de cido flico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de cido flico (C10H19N106) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado= (Ru/R1) x (C1/C11) x 100
R11 = cociente entre las reas de los picos de cido
flico y metilparabeno de la Solucin muestra
Rs = cociente entre las reas de los picos de cido
flico y metilparabeno de la Solucin
estndar
Sup/ernentm niPtPtirm .1 Vitaminas Hidrosolubles 6729
= concentracin de ER Acido Flico USP en la
Solucin estandar (pg/ml)
= concentracin nominal de cido flico en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar?da de acido lico (C19H19N106)
ACIDO Fouco, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: 60 g/ml de hidrxido de amonio
Fase mvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de cido actico glacial y 350 ml de metano! a un ma-
traz volumtrico de 2000 ml y diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen. ,
Solucin madre del estndar: 60 g/ml de ER Acido
Flico USP en Diluyente. Preparar esta solucin en el da
de su uso.
Solucin estndar: Mezclar 5,0 ml de Solucin madre
del estndar con 10,0 ml de una mezcla de metanol y
cido actico glacial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de
metano! y etilenglicol (1 :1 ). Agitar durante 15 minutos
en un bao de agua mantenido a 60 y enfriar. Filtrar,
desechando los primeros ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir una porcin de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a 0,3 mg de cido
flico, a un matraz de 125 ml con tapn. Agregar
1 0,0 ml de una mezcla de metano! y cido actico gla-
cial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de metano! y etilen-
glicol (1: 1 ). Agitar durante 15 minutos en un bao de
agua mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, desechando los
primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de cido flico
((9H19N106) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de cido flico de la Solucin
muestra
r.1 = rea del pico de cido tlico de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER cido Flico USP en la
Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de cido flico en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cido flico (C 19H 19N106)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 1
Fase mvil: cido fosfrico y agua (1:1000)
Solucin de estndar interno: 80 mg de cido p-hi-
droxibenzoico en 3 ml de alcohol. Agregar 50 ml de
agua y 7, 1 g de fosfato di bsico de sodio, y diluir con
agua hasta 1 000 ml. Ajustar con cido fosfrico a un
pH de 6,7.
Solucin estndar: 0,6 mg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solucin de estndar interno
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a 1 5 mg de pantotenato de calcio, a un tubo de
centrfuga. Agregar 25,0 ml de la Solucin de estndar
6730 Vitamina<. flirlrmnl11hles / Sulernentm Dietticos
1nle1110 y Jy1tJr viqorosJmente durante l O minutos.
(,entrftu~F~r, fi!~rJr y usJr el filtado transpare:nte.
Sistema cromatogrfico
(\/ror rn.ti-:~otDgrc.i.f/c ~621 u /\;ti:!uo) del Si:,tcnili.)
Modo: fiPLC
Detector: LJv 1 U nm
Columna: 3, 9 mm l S e m; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estandar
[NOTA--Los tiempos de retencin relativos para pantote-
nato de calcio y cido p-hidroxibenzoico son aproxi-
mJdamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las areas de los picos de pantotenato de calcio y
el estndar interno. Calcular el porcentaje de la canti-
dad declarada de pantotenato de calcio
(ClBH i2CaN2010) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (Ru!R1) x (C/Cu) x 100
Ru = cociente entre las reas de los picos de
pantotenato de calcio y cido p-
hidroxibenzoico de la Solucion muestra
R1 = cociente entre las reas de los picos de
pantotenato de calcio y cido p-
hidroxibenzoico de la Solucin estndar
C = concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN20rn)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 2
Solucin madre del estndar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentxido de fsforo y
protegido de la absorcin de humedad durante la pe-
sada, en 500 mL dP agua en un matra? volumtrico de
1000 ml. Agregar 1 O ml de cido actico 0,2 N y
100 ml de solucin de acetato de sodio (1 en 60), y
diluir con agua a volumen para obtener una concentra-
cin de 50 pg/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin estndar: En el da de la valoracin, diluir un
volumen de Solucion madre del estandar con agua hasta
obtener una concentracin de 0,01-0,04 pg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentracin exacta
es tal que las respuestas obtenidas segn se indica en el
Anlisis, usando 2,0 y 4,0 ml de la Solucin estndar,
estn dentro de la porcin lineal de la curva de res-
puesta en funcin del lcJc~aritmo de la concentracin.
Solucin muestra: Reducir ..i polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 50 mg de pantotenato
de calcio, a uri 111atrct1 volumtrico de 1000 ml que
contenga SOO mL de agua. Agregar 1 O ml de cido
actico- 0.2 N v 100 mi. de soluci11 de acetato de sodio
(1 en 60), diluir con agua a volumen y filtrar. Diluir un
volumen de esta solucin hasta obtener una solucin
con aproximadamente la misma concentrJcin que IJ
de la Solucin estandar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
1 00 g de c.Jsena exentJ de vitaminas con 500 ml de
cido clorl 1d1icu f-J y someter ia mezcia a retlujo du-
rante 8-12 horas Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla me(f1nte rleqilacin ba10 presin reducida hastJ
que se forme una pasta espesJ. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de ); ') + O; 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
USP 38
rne7clar durante 1 hora y filtrar. Repetir el trJtamiento
cun cJrbon act1vJdo. AlmaCE'11ar haio tolueno en un lu-
gc1r rresco a una temperatura de no menos de 1 O . Fil-
l1 ar ic1 '>uiuciort s1 se orma un prec1p1tado durante el
3!mJcC'nJmicnt0
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70 80 , y agregar cido clorhdrico diluido (1 en 2),
gota a gota, mezclando, hasta que los slidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1 000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 o .
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 pg/ml de riboflavina, 1 O pg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 pg/ml de biotina en cido actico
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
proteger de la luz.
Solucion de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina:. 1 O pg/ml de cido p-aminoben-
zoico, 50 pg/ml de rnacrna y 40 pg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal: Disolver la Dextrosa
anhidra y el Acetato de sodio anhidro en las soluciones
previamente mezcladas de acuerdo con la Tabla 3 y
ajustar co11 hidrxido de sodio 1 N a un pH de 6,8.
Diluir con agua hasta 250 ml.
Tabla 3
Solucin de hidrolizado cigQ._Q~c.<Jl_;!<:i1J<l_ ___ ------ 25 ml
Solucin de ustina [rig_t_oJQ_il_Q. ______ ~- -------4----"2"'-5-'-m'-"L"---I
Solucin de olisorbato 80 _~--- _ O 25 ml
Dextrosa anhig_@_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _>----'-1"-0-"'-----1
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extrc1cto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg rlP DPKtmrn anhidra, 500 mg de Ace
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un bano de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la
solucin calien~e a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfren en posicin
vertical. Inocular tres o m'> de los tubos, sembrando
por punc1011 un cultivo puro de Lactobacillus plantarum 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30 y 3/ mantenida termostticamente con un
USP 38
marqen de 1:0,5 . A!1T1accnar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por puncron del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnculo
si el cultivo tiene mas de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: .A.01e<:Jc1! ),0 n1L dP aguil que contcn
gan 0,2 pg de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 mL de
Solucin madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godn, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15
minutos y enfriar.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacil/us plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnwlo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir clulas del
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum a un tubo est-
ril que contenga 1 O mL de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 1 6-24 horas a una temperatura en-
tre 30G y 37 mantenida termostticamente con un
margen de 0,5'. La suspensin de clulas as obtenida
es el lnculo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solucin
estndar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacos
similares 5,0 mL de Solucin madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volmenes de la Solucin muestra correspondien-
tes a tres o ms de los niveles especificados para la
Solucin estndar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solucin madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estndar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o seccin de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minacin y esterilizar en un autoclave a 121 durante
5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no con-
tienen Solucin estndar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30'" y 37
mantenida termostticamente con un margen de
0,Y' hasta que, despus de 16-24 horas de incuba-
cin, no se presente un aumento significativo de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel ms alto de
Estndar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a un recipiente apto para lectura ptica si fuera nece-
sario. Leer la transmitancia entre 540 y 660 nm
cuando se alcance un estado estacionario. Este estado
estacionario se observa unos pocos segundos despus
de la agitacin cuando la lectura del galvanmetro se
mantenga constante durante 30 segundos o ms. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
cin con un microorganismo extrao, no tomar en
cuenta el resultado de la valoracin.
Clculos: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta segn se indica a continuacin. Para
cada nivel del Estndar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (2:1) como la diferencia, y = 2,00 - 2.:1. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel mrlrmetrado en
Suplementos Dietticos / Vit:iminas Hidroso!ubles 6731
funcin del logaritmo de los ml de la So/ucion estn-
dar por luuo >our e la aU>Ci>J, usando para la ordenada
una ese.ala aritmtica o logarrtmica, la que proporcione
Id 111eju1 cif)lAln1acin a una linea rcctu. TrJZJr !J recta
o !a curva de regresin que mejor se ajuste a los pim-
tos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - 2.:,,, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solucin muestra
(L.u). Leer a partir de la curva estndar el logaritmo
del volumen de la Solucin estndar correspondiente
a cada uno de los valores de y comprendidos dentro
del intervalo entre los puntos extremos graficados
para el Estndar. Restar de cada logaritmo as obte-
nido el logaritmo del volumen, en mL, de la Solucin
muestra para obtener la diferencia, X, de cada nivel
de dosificacin. Promediar los valores de X para cada
uno de los tres o ms niveles de dosificacin para
obtener X, que es igual al logaritmo de potencia rela-
tiva, M', de la Solucin muestra.
Determinar la cantidad, en mg, de pantotenato de cal-
cio (C1sH32CaN2010) en la porcin de Tabletas
tomada:
antilog M = antilog (M' + lag R)
R = nmero de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porcin de
Tabletas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C18Hi2CaN2010) en la porcin
de Tabletas tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 100
N cantidad nominal de pantotenato de calcio en
=
la porcin de Tabletas tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nacin por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Valora-
ciones Biolgicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Lmites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en ms de 0,08, realizar una o ms determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o ms
valores de M que no difieran en ms de O, 15, calcular
la potencia media de la preparacin que se est
valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C18H12CaN;010)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 3
Solucin amortiguadora: Disolver 1 0,0 g de fosfato
monobsico de potasio en 2000 mL de agua y ajustar
con cido fosfrico a un pH de 3,5.
Fase mvil: Metano\ y Solucin amortiguadora (1 :9)
Solucin madre del estndar: 0,25 mg/mL de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar cada 4 sema-
nas. Almacenar en un refrigerador.
Solucin estndar: 40 g/mL de ER Pantotenato de
Calcio USP, a partir de Solucin madre del estndar di-
luida con agua
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1 O mg de pantotenato
de calcio, a un matraz volumtrico de 250 mL. Agregar
1 O mL de metano\ y agitar el matraz por rotacin suave
hasta dispersar. Diluir con agua a volumen, mezclar y
filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Crnmatograf1a <6211 Aptitud del Sistema.)
6732 Vitaminas Hidrosolubles / 511/prnpn/O\ nietticos
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nrn
Columna: 3,9 rnrn x 30 crn; relleno L1 de 5 ~trn
Temperdlurn de la columna: 50"
Velocidad de flujo: 2 mL/rnin
Volumen de inyeccin: 25 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (CrnH32CaN2010) en la porcin
de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/r,) x (C1/Cu) x 100
ru = rea del pico de pantotenato de calcio de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de pantetonato de calcio de la
Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Ci = concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (ClBH32CaN2010)
NIACINA O NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo, cido actico glacial y agua
(5:1 :94)
Fase mvil: Una mezcla de metano!, cido actico gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 ml.
Solucin estndar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
contengan niacina.] Transferir 80 mg de ER Niacinamida
USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina USP, 20 mg
de ER Riboflavina USP y 20 mg de ER Clorhidrato de
Tiamina USP a un matraz volumtrico de 200 ml, y
agregar 180 mL de Diluyente. Sumergir el matraz en un
bao de agua caliente mantenido a 65-70 durante 1 O
minutos agitando regularmente o usando un mezclador
de vrtice, hasta que se disuelvan todos los materiales
slidos. Enfriar rpidamente en un bao de agua fra
durante 1 O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a 1 O mg de niacinamida y 2,5 mg de clorhidrato
de piridoxina, de riboflavina y de clorhidrato de tia-
mina, a un tubo de centrfuga de 50 ml. Agregar
25,0 ml de Diluyente y mezclar usando un mezclador
de vrtice durante 30 segundos para suspender por
completo el polvo. Sumergir el tubo de centrfuga en
un bao de agua caliente mantenido a 65-70, calen-
tar durante 5 minutos y mezclar en un mezclador de
vrtice durante 30 segundos. Devolver el tubo al bao
de agua caliente, calentar durante 5 minutos ms y
mezclar en un mezclador de vrtice durante 30 segun-
dos. Filtrar una porcin de la solucin, enfriar a tempe-
ratura ambiente y usar el filtrado transparente. [NOTA-
Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la filtracin.]
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacinamida de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de niacinamida de la Solucin
estndar
= concentracin de ER Niacinamida USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacinamida en la
Solucin muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contengan niacina:
Resultado = (ru/ rs) x ( Csl Cu) x 100
ru = rea del pico de niacina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de niacina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Niacina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH 11 N03
HCI), de riboflavina (C 11H20N406) y de clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN4QS HCI) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
pertinente en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la vitamina
correspondiente en la Solucin muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru!r1) x (Cs/Cu) x (M1/M,2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
usr 38
Criterios dt> u-pptacion: 90;0%-1 50,0% de la cantidad
declarada de niacir1ar11ida (CH"N;O) u r1iacina
(C6H1NO;), clorhidrato de piridoxina (CxH11NOi HCI),
ribuflavi11a (C11lboN4r,) y tian 1iria como clorhidrato de
tiamina (C;;H;,Clr>-LOS HC!) o mononitrato de tiamina
(C 12H11Ns04S)
NIACINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Transferir 1 ml de cido actico glacial y
2,5 g de edetato disdico a un matraz volumtrico de
1 00 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extraccin: Solucin A y metanol (3:1)
Fase mvil: Solucin de acetato de sodio O, 1 M
(1 3,6 mg/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
cido actico a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
una pequea cantidad de metanol (hasta 1 %) a la Fase
mvil para mejorar la resolucin.]
Solucion madre del estndar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de extraccin
Solucin estndar: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz volumtrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extraccin a volumen.
Solucin muestra: [NOTA-Esta preparacin es ade-
cuada para la determinacin de niacina o niacinamida,
piridoxina y riboflavina, cuando se encuentran presentes
en la formulacin.] Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 2 mg de riboflavina, a
un matraz volumtrico de 200 ml. Si la riboflavina no
se encuentra presente en la formulacin, transferir una
porcin del polvo, equivalente a una cantidad nominal
de 2 mg de piridoxina. Si la piridoxina no se encuentra
presente en la formulacin, usar una porcin del polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 20 mg de nia-
cina o niacinamida. Agregar 100,0 ml de Disolvente de
extraccin y mezclar durante 20 minutos, usando un
agitador de movimiento tipo mueca (wrist-action). Su-
mergir el matraz en un bao de agua mantenido a
70-75 y calentar durante 20 minutos. Mezclar en un
mezclador de vrtice durante 30 segundos, enfriar a
temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no! entre cada inyeccin.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C6H1N02) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/Clj) x 100
ru = rea del pico de niacina de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de niacina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Niacina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C,H1N02)
Suplementos Dietticos /Vitaminas Hidrosolubles 6733
NIACINAMIDA, Metodo 2
[NOTA--Usar material Je vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin A, Disolvente de extraccin, Fase mvil, So-
lucin madre del estndar, Solucin estndar, Solu-
c!n muestra, Sistema cromatogrfico y Aptitud del
mte_ma: Usando ER Niacinamida USP en lugar de ER
N1ac1na USP, proceder segn se indica en Niacina, M-
todo 2.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacinamida. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacinamida de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de niacinamida de la Solucion
estndar
Cs = concentracin de ER Niacinamida USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacinamida en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin, Fase mvil y Solucin mues-
tra: Preparar segn se indica en Niacina, Mtodo 2.
Solucin madre del estndar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extraccin
Solucin estndar: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz volumtrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extraccin a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (CsH11 NO, HCI) en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado= (r,Jr,) x (C1/Cu) x 100
ru = rea del pico de piridoxina de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de piridoxina de la Solucin
estandar
C, = concentracin de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11N01 HCI)
RIBOFLAVINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin y Solucin muestra: Preparar
segn se indica en Niacina, Mtodo 2.
Solucin A: 6,8 mg/ml de acetato de sodio en agua
Fase mvil: Preparar una mezcla de Solucin A y meta-
no! (13:7). Agregar 2 ml de trietilamina por L de la
6734 Vilarninas HidrosoltJhlP<; .1 \11p!enwntm Dietticos
'.ll~LclJ y Justar con acido acetico qlacial a un pH de
'>,!
So.lucin madre del estndar: TrJnsferir 20 mg de ER
R1boflav1na ! J<;p .1 "n matraz '.'O!urntricc de 200 mL y
agregar 180 ml de Disolvente dt> t>xlmrririn <;1m1erqir e!
mattJL. Ju1ar1le 5 minutos en un bano de agua mante-
nido a 65 -75 . Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rpidamente en un bao de agua
fra a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extraccin a volumen.
Solucin estndar: Diluir 5,0 ml de Solucin madre del
estndar con Disolvente de extraccin hasta 25 O ml.
Sistema cromato9r~fico. . .. ' tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
(Ver Cromulogrufw \621 ;, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x. 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solurin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de riboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C 11H10N406) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de riboflavina de la Solucin
muestra
r1 = rea del pico de riboflavina de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Riboflavina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de riboflavina en la
Solucin muestra (rng/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C 11H20N40o)
TIAMINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnira
durante todo este procedimiento.]
Solucin A: 1,88 mg/ml de 1-hexanosulfonato de so-
dio en cido fosfrico al O, 1 %
Fase mvil: Solucin A y acetonitrilo (46:9)
Solucin madre del estndar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en cido clorhdrico O 2 N
Solucin estndar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con cido clorhdrico 0,2 N
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Mezclar una porcin de las Tabletas
reducidas a polvo con un volumen de cido clorhdrico
0,2 N para obtener una concentracin de 0,02 mg/ml
de tiamina. Agitar durante 15 minutos con un agitador
de movimiento tipo rnueca (wrist action) y calentar a
ebullicin durante 30 minutos. Enfriar a temperatura
ambiente y filtrar. Usdr el fillt Jdo transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromntografra !621 \ Aptitud dl'i Sistema)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm v 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: So/ucf;1 esl!lu c111
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: Nn rn' dP 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las rPilS dP los picos de principales. Para pro-
ductos que contengan clorhidrato de tiamina, calcu-
USP 38
lar el porcenlilje de la cantidad declarada de clorhi-
drato de tian1ifla ( C, ;H 1 7'...IN,OS HCI) en la porcin
de Tabletas tomada:
Resu!tadc = ( r, : (C./C.) A 100
r, ~ irea del pico de tiamina de la Solucin muestra
r, = rea del pico de tiamina de la Solucin
e1tndur
C = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
e, = concentracin nominal de clorhidrato de
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C 12 H11Ns04S)
en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r,) x (C/C,) x (MilM:>) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
r, = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
M, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H11CIN40S HCI) o mononitrato de tiamina
(Ci2H11Ns04S)
NIACINA O NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Mtodo 3
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/ml de edetato disdico en agua
Fase mvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de cido actico glacial y 350 ml de metanol a un ma-
traz volumtrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solucin madre del estndar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solucin estndar: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz de 125 ml con tapn. Agregar
1.0,0 ml de una mezcla de metanol y cido actico gla-
cial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de metanol y etilen-
glicol (1: 1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
bao de agua mantenido a 60' y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml. del filtrado.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo,
equivalente a 7,5 mg de niacina o niacinamida, 1,2 mg
de clorhidrato de piridoxina, 0,4 mg de riboflavina y
1,2 mg de clorhidrato de tiamina, a un matraz de
125 ml con tapn. Agregar 10,0 ml de una mezcla de
metano! y cido actico glacial (9: 1 ), y 30,0 ml de una
mezcla de metano! y etilenglicol (1: 1 ). Tapar, agitar du-
rante .15 minutos en Ufl bar1o de agua mantenido a 60
y enfriar. Filtrar, deSPchando lm prirneros ml del
filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Crornutograf1a \621 ), Aptitud del Sistema.)

Modo: HPLC
Detector: UV 2/0 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
femperatura de ia coiumna: so-
Velocidad de flujo: 2,0 mi /rnin
Volumen de inyeccin: 5 ,uL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina y niacinamida.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
niacina (C6HsN02) o niacinamida (C6H 6 N20) en la
porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (rt!rs) x (C/C) x 100
ru = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solucin estndar
(mg/mL)
Cu = concentracin nominal de niacina o
niacinamida en la Solucin muestra (mg/mL)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CaH11 N03
HCI), de riboflavina (C11H20N406) y de clorhidrato de
tiamina (C12H17CIN40S HCI) (para productos que
contengan clorhidrato de tiamina) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
ru = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin muestra
r, = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
pertinente en la Solucin estndar (mg/ml)
C1 = concentracin nominal de la vitamina
correspondiente en la Solucin muestra
(mg/mL)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H17Ns04S)
en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
r.1 = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
liamina en la Solucin muestra (mg/mL)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 HCI),
riboflavina (C11H20N406) y tia mina como clorhidrato de
tiamina (C, 2H17CIN40S HCI) o mo11011ilralo de tiamina
(C 12H: 1Ns04S)
PRUEBAS DE DESEMPENO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de,Disolucin.
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS <2091 ):
Cumplen con los requisitos.
Suplementos DietCticos / Vit;iminas Hidrosolubles 6735
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO \2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobim no excede de 3 x 10 1
uc/y, y ei recue11lu lulai cornbinaJo de hongos filamen-
tosos y levaduras no exceqe de 3 v 101 ufc/g.
PROCEDIMIENTOS MICROBIOLOGICOS PARA COMPROBAR LA AU-
SENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., EschPrirhia ro/i y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Vitaminas Hidrosolubles. La etiqueta tambin in-
dica la cantidad de cada vitamina en trminos de unida-
des mtricas por unidad de dosificacin y, cuando sea
necesario, la forma salina presente. Cuando se propor-
ciona ms de un mtodo de valoracin para una vita-
mina en particular, el etiquetado indica el mtodo de
valoracin usado nicamente si no se usa el Mtodo 7.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Biotina USP
ER Pantotenato de Calcio USP
ER Cianocobalamina USP
ER cido Flico USP
ER Niacina USP
ER Niacinamida USP
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
ER Riboflavina USP
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Vitaminas Hidrosolubles con Minerales,
Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales con-
tienen, una o ms de las siguientes vitaminas hidrosolu-
bles: Acido Ascrbico o su equivalente como Ascorbato de
<;alcio o Ascorbato de Sodio, Biotina, Cianocobalamina,
Acido slico, Dexpantenol o Pantenol, Niacina o Niacina-
mida, Acido Pantotnico (como Pantotenato de Calcio o
Pantotenato de Calcio Racmico), Clorhidrato de Pirido-
xina, Riboflavina y Clorhidrato de Tiamina o Mononitrato
de Tiamina; y uno o ms minerales, derivados de sustan-
cias generalmente reconocidas como seguras, que propor-
cionan uno o ms de los siguientes elementos en forma
ionizable: boro, calcio, cromo, cobre, flor, yodo, hierro,
magnesio, manganeso, molibdeno, nquel, fsforo, pota-
sio, selenio, estao, vanadio y cinc. Las Cpsulas contie-
nen no menos de 90,0% y no ms de 150,0% de las
cantidades declaradas de cido ascrbico (C6Hll0o) o sus
sales como ascorbato de calcio (C12H14Ca012 2H,O) o as-
corbato de sodio (C6H1Na06), biotina (C10H16N203S), cia-
nocobalarnina (C61Hs8CoN1414P), cido flico
(Ci9H19N106), dexpantenol o pantenol (C9H19N4), panto-
tenato de calcio (C1sHi2CaN2010), niacina (C6HsN02) o
niacinamida (C6H6N20), clorhidrato de piridoxina
(CsH11 NOi HCI), riboflavina (C11H20N406) y tia mina
(Ci 1H, 1CIN40S) como clorhidrato de tia mina o mono ni-
trato de tiamina; no menos de 90,0% y no ms de
125,0% de las cantidades declaradas de calcio (Ca), cobre
(Cu), hierro (Fe), magnesio (Mg), manganeso (Mn), fs-
oro (P), potasio (K) y cinc (Zn); y no menos de 90,0% y
no ms de 160,0% de las cantidades declaradas de boro
(R), cromo (Cr), flor (F), yodo (1), molibdeno (Mo), n-
quel (Ni), selenio (Se), estao (Sn) y vanadio (V).
No contienen ninguna forma de Beta Caroteno o Vitamina
A. D, E o K. Pueden contener otras sustancias declaradas
6736 Vitaminas Hidrosolublcs ! Suplempntos Diettic m
agregadas generalmente rernnncidas como seguras, en
cantidades ir rubjelabies.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valorarione'; ruando 5e propor-
cione ms de un metodo de valoracin para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los mtodos especificados, declarando el mtodo
usado en el etiquetado nicamente si no se usa el Mtodo
7.J, ' Anlisis
ACIDO ASCORBICO
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cpsulas vacas
lavando, si fuera necesario, con varias porciones de ter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cpsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a ter. Pesar las cubiertas de las
Cpsulas vacas en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto promedio por Cpsula. Transferir una
porcion del contenido de las Cpsulas, equivalente a
una cantidad nominal de 100 mg de cido ascrbico, a
un matraz volumtrico de 200 ml y agregar 75 ml de
cido metafosfrico-cido actico SR. Tapar el matraz y
agitar por medios mecnicos durante 30 minutos. Diluir
con agua a volumen. Transferir una porcin de la solu-
cin a un tubo de centrfuga y centrifugar hasta obte-
ner un sobrenadante transparente. Pipetear y transferir
4,0 ml de esta solucin a un matraz Erlenmeyer de
50 ml y agregar 5 ml de cido metafosfrico-cido
actico SR.
Anlisis: Valorar con solucin estndar de diclorofeno-
1-indofenol SV hasta un color rosado que persista du-
rante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen de
solucin estndar de diclorofenol-indofenol SV consu-
mido por una mezcla de 5,5 ml. de cido metafosfri-
co-cido actico SR y 15 ml de agua. A partir del cido
ascrbico equivalente de la solucion estndar de diclo-
rofenol-indofenol SV, calcular el contenido de cido as-
crbico en cada Cpsula.
Criterios de aceptacin: 90,0% 150,0% de la cantidad
declarada de cido ascrbico (C6Hs06) , Cpsula." Transferir una porcin de contenido de las
ASCORBATO DE CALCIO: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 21-jJO)
ASCORBATO DE SODIO: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
BIOTINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.J
Fase mvil: Mezclar 85 ml de acetonitrilo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 ml de cido fosfrico, y diluir con
agua hasta 1000 ml.
Solucin madre del estndar: 0,333 mg/ml de ER Bio-
tina USP en dimetil sulfxido
Solucin estndar: 5 g/ml de ER Biotina USP que se
prepara diluyendo Solucin madre del estndar con
agua.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en cido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula." Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de 1 mg
de biotina, a un matraz volumtrico de 200 ml. Agre-
gar 3 ml de dimetil sulfxido y agitar por rotacin
suave para humedecer el contenido. Colocar el matraz
en un bao de agua a 60'-70 durante 5 minutos. So-
meter a ultrasonido durante 5 minutos, diluir con agua
a volumen y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 de 3 m
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 ~tl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las respuestas de los picos de biotina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de biotina
(C10H16N20 3 S) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru! r1) x ( C/ Cu) x 1 00
r1, respuesta del pico de la Solucin muestra
=
r\ respuesta del pico de la Solucin estndar
=
Cs concentracin de ER Biotina USP en la Solucin
=
estndar (g/ml)
Cu = roncentracin nominal de biotina en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10H16N20,S)
BIOTINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan segn
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados segn se describe en este
procedimiento.
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solucin en un
refrigerador.
Solucin estndar: En el da de la valoracin, diluir la
Solucin madre del estndar con agua hasta una concen-
tracin de O, 1 ng/ml de ER Biotina USP. ,
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de
100 g de biotina, a un matraz volumtrico de 200 ml.
Agregar 3 ml de alcohol al 50% y agitar por rotacin
suave hasta humedecer el contenido. Calentar el matraz
en un bao de agua a 60-70 durante 5 minutos. So-
meter a ultrasonido durante 5 minutos, diluir con al-
cohol diluido a volumen y filtrar. Diluir un volumen del
filtrado cuantitativamente, y si fuera necesario en dilu-
ciones sucesivas, con agua para obtener una solucin
con una concentracin de O, 1 ng/ml.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
100 g de casena exenta de vitamina con 500 ml. de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 O. Fil-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g de D,L-tript-
fano) en 700-800 ml de agua. Calentar a 70-80 y
agregar cido clorhdrico diluido (1 en 2) gota a gota,
mezclando, hasta que los slidos se disuelvan. Enfriar y
diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar bajo tolueno
usr 38
pn 11n lugar fresco a una temperatura de no menos de
1o .
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 rng de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O mL de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 mL. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/mL de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de pantotenato de calcio: 1 O g/mL de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
~tg/mL de riboflavina y 1 O g/mL de clorhidrato de tia-
mina en cido actico 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O g/mL de cido p-aminoben-
zoico, 50 pg/mL de niacina y 40 ~tg/mL de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 500 mL. Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 mL. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal:
Disolver Dextrosa anhidra y Acetato de sodio anhidro en
las soluciones previamente mezcladas segn la Tabla 7
y ajustar con hidrxido de sodio 1 N a un pH de 6,8.
Diluir con agua hasta 250 ml.
Tabla 1
Solucin de hidrolizado cido de casena 25 ml
Solucin de cistina-triotfano 25 ml
Solucin de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 q
Acetato de sodio anhidro 5 q
Solucin de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solucin de oantotenato de calcio 5 ml
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina 5 ml
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina 5 ml
Solucin salina A 5 ml
Solucin salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacllus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 mL de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un bao de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O mL de la
solucin caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 y dejar que los
tubos se enfren en posicin vertical. Inocular tres o ms
de los tubos, sembrando por puncin un cultivo puro
de Lactobacillus plantarum, 1 incubando durante 16-24
horas a una temperatura entre 30 y 37 mantenida
termostticamente con un margen de 0,5. Almacenar
en un refrigerador. Preparar un cultivo reciente por
puncin del cultivo madre una vez por semana y no
usarlo para preparar el lnculo si el cultivo tiene ms de
1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Aqregar 5,0 mL de agua que con-
tenga 0,5 ng de biotlna a cada una de las series de
tubos de ensayo que contengan 5,0 mL de Solucin
1 ATCC N. 8014 es ddecuado. Esta cepd se conoca anteriormente como 1ar-
lobacillus arabinosus 1 7-5.
Suplementos Dietticos/ Vitaminas Hidrosolubles 6737
madre de medio basal. Tapar los tubos con algodn,
esteriliLar e11 un autoclave a 121 y enfriar.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobaci/lus planlam corno cultivo m.:idrc,
siempre que produzca un !nriculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado. j Realizar una transfe-
rencia de clulas del Cultivo madre de Lactobacillus
plantarum a un tubo estril que contenga 1 O mL de
Medio de cultivo. Incubar este cultivo durante 1 6-24
horas a una temperatura entre 30 y 37 mantenida
termostticamente con un margen de 0,5. La sus-
pensin de clulas as obtenida es el lnculo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por du-
plicado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la
Solucin estndar. Agregar a cada tubo y a cuatro
tubos vacos similares 5,0 mL de Solucion madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agre9ar a tubos de ensayo similares, por duplicado,
volumenes de la Solucion muestra correspondientes a
tres o ms niveles especificados de la Solucin estn-
dar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y 4,0 ml.
Agregar a cada tubo 5,0 mL de la Solucin madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estndar y
muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilla o seccin de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la conta-
minacin y esterilizar en un autoclave a 121 du-
rante 5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de lnculo a
cada tubo, excepto dos de los cuatro tubos que no
contengan Solucin estndar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30
y 37 mantenida termostticamente con un margen
de 0,5 hasta que, despus de 16-24 horas de in-
cubacin, no se presente un aumento significativo
de turbidez en los tubos que contengan el nivel ms
alto de Estndar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la si-
guiente manera. Mezclar el contenido de cada tubo
y transferir a una celda de espectrofotmetro. Colo-
car la celda en un espectrofotmetro ajustado a una
longitud de onda especfica de 540-660 nm y leer
la transmitancia cuando se alcance un estado esta-
cionario. Este estado estacionario se observa unos
pocos segundos despus de la agitacin cuando la
lectura del galvanmetro se mantenga constante du-
rante 30 segundos o ms. Permitir aproximada-
mente el mismo intervalo de tiempo para la lectura
de cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
no inoculado, leer la transmitancia del blanco inocu-
lado. Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el
blanco inoculado, leer la transmitancia de cada uno
de los tubos restantes. Si hay evidencia de contami-
nacin con un microorganismo extrao, no tomar
en cuenta el resultado de la valoracin.
Clculos: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta segn se indica a continuacin. Para
cada nivel del Estndar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (L) como la diferencia, y= 2,00 - L. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
funcin del logaritmo de los mL de la Solucin estn-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmtica o logartmica, la que proporcione
la mejor aproximacin a una lnea recta. Trazar la lnea
recta o la curva de regresin que mejor se ajuste a los
puntos graficados.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias para cada nivel de la Solucin muestra. Leer, a
partir de l.:i curva estndar, el logaritmo del volumen
de la Solucin estndar correspondiente a cada uno
6738 Vitaminas Hidroso!ub!es / Suplementos Dietticos
de lm valores de y comprendidos dentro del i,ntervillo
de :os puntos extremos graf;cados para el Eslandar.
Hestar de cada logaritmo as obtenido el logaritmo
del \/lun1cn, en rnL, de la Solucin ;nuestra para uU-
f PnPr lit diff'rl:'ncia, X, de cada nivel de dosificacin.
Promediar los valores de X para cada uno d~ los tres
o ms niveles de dosificacin para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
cin muestra.
Determinar la cantidad, en g, de ER Biotina USP co-
rrespondiente a la biotina en cada mg de la porcin
de Cpsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R =nmero de g de biotina que se supuso
estaba presente en cada mg de la porcin de
Cpsulas tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nacin por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Va/ora-
ciones Biolgicas <111 ), El Intervalo de Confianza y los
Lmites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en ms de 0,08, realizar una o ms determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o ms
valores de M que no difieran en ms de O, 15, calcular
la potencia media de la preparacin que se est
valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (CioH16N203S)
CtANOCOBALAMINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metano! y agua (7:13)
Solucin madre del estndar: 1 O g/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
cin madre en un lugar oscuro y desechar despus de 1
semana.]
Solucin estndar: 1 g/ml de ER Cianocobalamina
USP, a partir de folucin madre del estndar diluida con
agl ua,, p d , . d" A, .d
So uoon muestra: roce er segun se in 1ca en C/ o
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula." Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de
100 g de cianocobalamina, a un matraz de 250 ml.
Agregar cuantitativamente 100,0 ml de agua y extraer
cuidadosamente durante 2 minutos. Filtrar 1 O ml del
extracto y usar el filtrado transparente.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografta (621>, Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Vis 550 nrn
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 200 L
Aptitud del sistema
Muestra: '\o/ucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin eslndur y Solucin muestra
Medir las rPspuestas de los picos de cianocobalamina.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina (C63HssCoN 1414P) en la porcin de
Cpsuias tomada:
Resultado= (rjr) v (C,/C) x 100
ru = respuesta del pico de cianocobalamina de la
Solucin muestra
USP 18
r, = respuesta del pico de cianocobalamina de la
Solucin estundor
C = concentracin de ER Cianocobalamina USP en
id )oiuuon eswndar (gmL)
CI, = concentracin nominal cie riann(nhi11amina en
la Solucin muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (CiH88CoN 1414P)
CIANOCOBALAMINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin madre del estndar de cianocobalamina:
1,0 g/ml de ER Cianocobalamina USP en alcohol al
25%. Almacenar en un refrigerador.
Solucin estndar: Diluir un volumen adecuado de So-
lucin madre del estndar de cianocobalamina con agua
hasta un volumen medido tal que despus del periodo
de incubacin segn se describe en el Anlisis, la dife-
rencia en !a transmitancia entre el blanco inoculado y el
nivel de 5,0 ml de la Solucin estndar sea no menor
que la correspondiente a una diferencia de 1,25 mg en
peso seco de las clulas. Esta concentracin por lo ge-
neral est entre 0,01 y 0,04 ng/ml de la Solucin estn-
dar. Preparar esta solucin en el momento de su uso
para cada valoracin. ,
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula." Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de 1,0 g
de cianocobalamina, a un vaso apropiado que con-
tenga, por cada g de contenido de las Cpsulas to-
mado, 25 ml de una solucin de extraccin acuosa pre-
parada justo antes de su uso que contiene 12, 9 mg/ml
de fosfato dibsico de sodio, 11,0 mg/ml de cido c-
trico anhidro y 1 O mg/ml de metabisulfito de sodio.
Autoclavar Ja mezcla a 121 durante 1 O minutos. Dejar
que sedimente cualquier partcula del extracto sin disol-
ver y filtrar o centrifugar, si fuera necesario. Diluir una
alcuota de la solucin transparente con agua hasta ob-
tener una solucin final que contenga una actividad de
vitamina B12 equivalente aproximadamente a la de la
Solucin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Preparar se-
gn se indica en Pantotenato de Calcio, Mtodo 2.
Solucin de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Preparar segn
se indica en Pantotenato de Calcio, Mtodo 2.
Solucin de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70, agregar 6,0 ml de
hidrxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobsico
de potasio y 1 O g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 200 ml, y agregar 2 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar esta solucin bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre9ar 2 gotas de cido clorhdrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solucin de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solucin vitamnica A: Disolver 1O mg de riboflavina,
1 O mg de clorhirlrato rle tia mina, 100 g de biotina y
20 mg de niacina en cido actico glacial 0,02 N para
obtener 400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrige-
rador y proteger de la luz.
Solucion vitamnica B: Disolver 20 mg de cido p-ami-
nobenzoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de f->iridoxi11a, 40 mg de clorhidrato de piri-
doxal, 8 mg de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
USP )8
de cido t!ico en una mezc!a de agua y alcohol neu-
tralizado (3: i) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luL.
Solucin madre de medio ba~al: Pieparar ei medio de
;irurrrlo con !u siguirntr frmuta r instrurcion0;. Sr
puede usar una mezcla deshidratada que contenga los
mismos 111gredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya segn se indica en el etiquetado, produzca un me-
dio comparable al obtenido de la frmula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado segn la
Tabla 2, disolviendo cuidadosamente cistina y tript-
fano en cido clorh1drico antes de agregar las siguien-
tes ocho soluciones a la solucin resultante. Agregar
1 00 ml de agua y disolver dextrosa, acetato de sodio
y cido ascrbico Filtrar, si fuera necesario. Agregar la
Solucin de polisorbato 80, ajustar con hidrxido de so-
dio 1 N a un pH entre 5,5 y 6,0, y diluir con Agua
Purificada hasta 250 ml.
Tabla 2
L-Cistina o 1 (]
L-Triottano o 05 q
cido clorhdrico 1 N 10 ml
Solucin de adenina-gl!an'!l~::!J!il~HQ. 5 ml
,,.,,
--------
Solucin de xantina S ml
Solucin vitamnica A 10 ml
Solucin vitamnica B 10 ml
Solucin salina A 5 ml
Solucin salina B 5 ml
Solucin de asnaranina 5 ml
Solucin de hidrolizado cido de casena 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
cido ascrbico 1a
Solucin de nolisorbato 80 S ml
Preparacin de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para extraer la mayor parte
de la pulpa. Susper1de1 5 g/L de LOadyuvanle de filtra-
cin analtico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presin reducida, a travs de una capa del coadyuvante
de filtracin. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: [NOTA--Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismm ingredientes
siempre que, cuando se reconstituya segn se indica en
el etiquetado, produzca un medio equivalente al obte-
nido de la frmula provista en este procedimiento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobsico de potasio en 60-70 ml de agua. Agregar
1 O ml de Preparacin de jugo de tomate y 1 ml de Solu-
cin de polisorbato 80. Ajustar con hidrxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua hasta 100 ml.
Colocar porciones de 1 O ml de la solucin en tubos de
ensayo y tapar con algodn. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 durante 15 minutos.
Enfriar tan rpido como sea posible para evitar la for-
macin de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de fspensin: Diluir un volumen medido de
Solucin madre de medio basal con un volumen igual de
agua Colocar porciones de 1 O mL del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar segn se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacil/us Jechmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 1 00 ml de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un bao de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de 1 O ml de
la solucin caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15 mi
nulm (temperatura de Id l11wc1 tle '>dl1dd de vapor) y
dejar que los tubos se entr1en 0n pos1c1on vertical. lno-
cuiar tres o mas de ios tubos sembrando por puncin
tln ctdtivn ntiG dr ! n1~tnhth-ilfr::. !ei<-hrnonnii _i fr"~rnA-
Antes de usar un cultivo recientemente prepa~ado por
primera vez en esta Vdloracin, realiLar no menos de 1 O
transferencias sucesivas del cultivo en un periodo de 2
semanas.] Incubar durante 16 24 horas a una tempera-
tura entre 30 y 40 mantenida termostticamente con
un margen de 0,S''. Almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por puncin al menos tres
veces por semana y no usarlos para preparar el lnculo
si tienen ms de 4 das de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias de una o dos veces al da del cultivo por
puncin, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el Inoculo lquido 24 horas des
pus de la inoculacin. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados errticos.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacillus leichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de clulas del Cultivo madre de Lactobacillus leich-
mannii a dos tubos estriles que contengan 1 O ml de
Medio de cultivo. Incubar estos cultivos durante 1 6-24
horas a una temperatura entre 30 y 40u mantenida
termostticamente con un margen de 0,5. Centrifu-
gar los cultivos bajo condiciones aspticas y decantar el
sobrenadante. Suspender las clulas del cultivo en 5 ml
de Medio de suspensin estril y mezclar. Usando Medio
de suspensin estril, ajustar el volumen de manera que
una dilucin 1 en 20 en solucin salina SR produzca
una transmitancia del 70% cuando se lee en un espec-
trofotmetro adecuado ajustado a una longitud de
onda de 530 nrn, equipado con una celda de 1 O mm, y
leer contra el set de solucion salina SR a una transmi-
tancia del 100%. Preparc11 una dilucin 1 en 400 de la
suspensin ajustada usando Solucin madre de medio
basal. [NOTA---Esta dilucin se puede alterar, cuando sea
nece;c1rio, para obtener ia respuesta de prueba de-
seada.] La suspensin de clulas as obtenida es el ln-
culo.
Calibracin del espectrofotmetro: Revisar peridica-
mente la longitud de onda del espectrofotrnetro,
usando una celda de longitud de onda estndar u otro
dispositivo adecuado. Ar1tes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotmetro con agua para fijar el 0%
y el 1 OOAi de transmitancid, y con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Anlisis
Muestras: Solucin e1tndur y Solucin muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba
a diminutc1s ca1itid,Hle> de dctividad de vitamina B11 y
d trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm ' 150 mm de vidrio duro y dems
materia! de vidrio necesario, se deben limpiar meticu-
losamente usando mtodos adecuados, preferente-
mente sequidos por ( alentdmiento a 250 durante 2
horas. -
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1.5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5.0 ml de la Solucin estndar.
Agregar l cada tubo y l cultro tubos vacos similares
5,0 ml de Solucin 1nuJ1c ut' 111t'Jo uusa/ y agua sufi-
ciente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solucin mues
tra. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solucin madre de
med!O basal y agua sut1c1ente para obtener 1O ml. Co-
locar un set completo de tubos de Estandar y muestra
'Se puc~2n nbtrrwr ClJlt1vn\ puro\ de 1,x!o!wc1/lu'> /el( hmm.ni (listados como
1octobcu1//111 clelhr:wk11) rnmo N nno 1k ATCC, 10801 LJ111vPr"IY Blvd. Md
nassas. VA 2011 02209 (www.otcc .orq).
6740 VitaminJs Hidrosolublcs / Suplrn1mtos Dietticos
juntos Pn 1m;i gr;irlill;i r;ir;i tubos y el set duplicado en
urld '>eyundd grddilld o wccin de ur1d gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tulio'> f.Jdfd ev1ld1 td LOttldflttttdUOft Odcteriana
y esterilizar en un autoclave a 121 durante 5 minutos,
ajustando para alcanzar esta temperatura en no ms
de 1 O minutos precalentando el autoclave si fuera ne-
cesario. Enfriar tan rpido como sea posible para evitar
la formacin de color que resulta del sobrecalenta-
miento del medio. Tomar precauciones para mantener
la uniformidad de las condiciones de esterilizacin y
enfriamiento durante toda la valoracin, debido a que
colocar los tubos demasiado cerca o sobrecargar el au-
toclave puede ocasionar variaciones en la velocidad de
calentamiento.
Agregar aspticamente 0,5 mL de lnrulo a cada tubo
as preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solucin estndar (los blancos no inocula-
dos). Incubar estos tubos a una temperatura entre 30
y 40 mantenida termostticamente con un margen
de 0,5, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80 durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Despus de agitar su contenido,
colocar el recipiente en un espectrofotmetro ajustado
a una longitud de onda de 530 nm y leer la transmi-
tancia cuando se alcance un estado estacionario. Este
estado estacionario se observa unos pocos segundos
despus de la agitacin cuando la lectura se mantenga
constante durante 30 segundos o ms. Permitir aproxi-
madamente el mismo intervalo de tiempo para la lec-
tura de cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferencia es mayor de 5% o si se presenta evi-
dencia de contaminacin con un microorganismo ex-
trao, no tomar en cuenta el resultado de la
valoracin.
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoracin si la pendiente de la curva estndar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Clculos: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cualquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estndar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transmitancias (2::) como la diferencia, y=
2,00 - L. Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en funcin del logaritmo de los mL
de la Solucin estndar por tubo sobre la abscisa,
usando para la ordenada una escala aritmtica o loga-
rtmica, la que proporcione la mejor aproximacin a
una lnea recta. Trazar la lnea recta o la curva de re-
gresin que mejor se ajuste a Jos puntos graficados.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias para cada nivel de la Solucin muestra. Leer, a
partir de la curva estndar, el logaritmo del volumen
de la Solucin estndar correspondiente a cada uno
de los valores de .v comprendidos dentro del intervalo
enlre los punlos exlremos graficados para el Estndar.
Restar de cada logaritmo as obtenido el logaritmo
del volumen, en mL, de la Solucin muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificacin.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
o ms niveles de dosificacin para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
cin muestra.
Determinar la cantidad, en pg, de ER Cianocobalamina
USP correspondiente a la cianocobalamina en cada
mg de la porcin de Cp5ulas tomada:
antilog ,1\,1 = anlilog (M' + log R)
USP 38
R ~
nmero de pg de cianocobalamina que se
supuso estaba presente en cada mg de la
porcin de Cpsulas tomada
Determinaciones repetidas: kepet1r toda la determi-
nacin por lo n1en()S una ve1, usando Soluciones rnues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Va/ora-
ciones Biolgicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Lmites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en ms de 0,08, realizar una o ms determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o ms
valores de M que no difieran en ms de O, 15, calcular
la potencia media de la preparacin que se est
valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar9da de cianocobalamina (Co,HosCoN 14014P)
ACIDO Fouco, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solucin de hidrxido de tetrabutilamonio
al 25% en metanol
Reactivo B: Transferir 5,0 g de cido penttico a un
matraz volumtrico de 50 ml. Disolver y diluir con hi-
drxido de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase mvil: 2 g de fosfato monobsico de potasio en
650 mL de agua. Agregar 12,0 mL de Reactivo A,
7,0 mL de cido fosfrico 3 N y 240 mL de metanol.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con cido fosf-
rico o amonaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1 000 mL y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso agregando agua o metano! a la Fase mvil pre-
parada para obtener una separacin de la lnea base
entre el cido flico y el estndar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separacin. [NOTA-El contenido de metanol y agua se
puede variar (entre 1 % y 3%).]
Solucin de estndar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumtrico de 1000 mL y
agregar 220 mL de metanol para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobsico de potasio en 300 mL de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solucin al matraz que contenga la solu-
cin de metilparabeno y agregar 300 mL adicionales de
a9ua. Agregar 19 mL de Reactivo A, 7 mL de cido fos-
forico 3 N y 30 mL de Reactivo B. Ajustar con amonaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrgeno a travs de la
solucin durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. ,
Solucin estndar: 0,016 mg/mL de ER Acido Flico
USP en Solucin de estndar interno
Solucin muestra: Proceder segn se indica en cido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula." Transferir una cantidad de contenido de las
Cpsulas a un tubo de centrfu9a adecuado y agregar
un volumen de Solucin de estandar interno para obte-
ner una concentracin nominal de 0,016 mg/mL de
cido flico. Agitar mecnicamente durante 1 O minutos
y centrifugar. Filtrar una porcin del sobrenadante
transparente y usar el filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm >< 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 pL
Aptitud del sistema
Muestra: )o/uoon estandar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para cido
flico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
USP 38
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin Pstnrior y Solucin muntro
Medir las reas de los picos de cido flico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de cido flico (C19H10N106) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado= (Ru!Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente entre las reas de los picos de cido
flico y metilparabeno de la Solucin muestra
R, = cociente entre las reas de los picos de cido
flico y metilparabeno de la Solucin
estndar , dios preparados segn se describe en este
Cs = concentracin de ER Acido Flico USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de cido flico en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cido flico (C19H19N106)
CIDO Fuco, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: Disolver 7,5 g de edetato disdico, mez-
clando, en 500 ml de agua que contenga 1 O ml de
hidrxido de amonio.
Diluyente: 60 g/ml de hidrxido de amonio
Fase mvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15 ml de
cido actico glacial y 350 ml de metano! a un matraz
volumtrico de 2000 ml, y diluir con 1-hexanosulfonato
de sodio 0,008 M a volumen. , sulas vacas en un frasco de pesada tarado y calcular el
Solucin madre del estndar: 60 g/ml de ER Acido
Flico USP en Diluyente. Preparar esta solucin en el da
de su uso.
Solucin estndar: Mezclar 5,0 ml de Solucin madre
del estndar con 1 0,0 ml de metanol y 35,0 ml de Re-
activo. Agitar durante 15 minutos en un bao de agua
mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros ml del filtrado. , Solucion de hidrolizado cido de casena: Mezclar
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin de contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de
0,3 mg de cido flico, a un matraz de 125 ml con
tapn. Agregar 10,0 ml de metanol y 35,0 ml de Reac-
tivo. Agitar durante 15 minutos en un bao de agua
mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de cido flico
(C19H10N106) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/r,) x (C,/Cu) x 100
ru = rea del pico de cido flico de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de cido flico de la Solucin
estndar
Suplementos Dicteticos /Vitaminas Hidrosolubles 6741
Cs = concentracin de ER Acido ~olico USP en la
So/11cln estndar (pg/ml)
e,, ~concentracin nominal de cido flico en la
'\n/11rinn m11Pstrn (~1g/m1 )
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cido flico (C10H1"N10,,)
DEXPANTENOL O PANTENOL
[NOTA-El siguiente procedimiento tambin se aplica a la
determinacin del componente dextrgiro de pantenol
racmico en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan segn
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
procedimiento.
Solucin madre del estndar: 800 g/ml de ER Dex-
pantenol USP en agua. Almacenar en un refrigerador,
prote9er de la luz y usar dentro de los 30 das.
Solucion estndar: En el da de la valoracin, preparar
una dilucin de 1,2 g/ml de dexpantenol, a partir de
Solucin madre del estndar diluida con agua.
Solucin muestra: Pesar no menos de 30 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un vaso de precipitados, tanto como sea posible. Retirar
cualquier contenido adherido a las cubiertas de las Cp-
sulas vacas lavando con varias porciones de ter. Dese-
char los lavados y secar las cubiertas de las Cpsulas
con ayuda de una corriente de aire seco hasta que ya
no se perciba olor a ter. Pesar las cubiertas de las Cp-
peso neto promedio por Cpsula. Disolver una porcin
del contenido de las Cpsulas, nominalmente equiva-
lente a 1,2 mg de dexpantenol o 2,4 mg de pantenol,
en 100,0 ml de agua. Diluir cuantitativamente una por-
cin de esta solucin con agua hasta obtener una con-
centracin nominal de 1,2 g/ml de dexpantenol o
2,4 ~/ml de pantenol.
100 g de casena exenta de vitamina con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 ml de agua,
ajustar la solucin con hidrxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 O, 1 y diluir con agua hasta 1 000 ml. Agregar
20 g de carbn activado, mezclar durante 1 hora y fil-
trar. Repetir el tratamiento con carbn activado. Alma-
cenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tempera-
tura de no menos de 1 O. Filtrar la solucin si se forma
un precipitado durante el almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina y 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g de D,L-triptfano)
en 700-800 ml de agua, calentar a 75 Y y agregar
solucin de cido clorhdrico (1 en 2) gota a gota, mez-
clando, hasta que los slidos se disuelvan. Enfriar y di-
luir con agua hasta 1 000 ml. Almacenar bajo tolueno
en un lugar fresco a una temperatura de no menos de
1 O".
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 1 00 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 g/ml de riboflavina, 1 O g/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 g/ml de biotina en cido actico
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
proteger de la lu1.
6742 Vitamina<> HirlrmollihlP<> / )up/pmpntm [)iptticos
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O pg/ml de 5cido p Jminoben-
zoicu, 50 pgml de 11iacina y 40 pg/ml de clorhidrato
rlP riridnxin.1 'rl illcoho! neutralizado a! 25%. Almace
nar en un refriqerador.
Solucin salina A: Disolver 50 mg;mL de fosfato mono-
bsico de potasio y 50 mg/ml de fosfato dibsico de
potasio en agua. Agregar 1 O gotas de cido clorhdrico
por L de solucin. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 20 mg/ml de sulfato de
magnesio, 1 mg/ml de cloruro de sodio, 1 mg/ml de
sulfato ferroso y 1 mg/ml de sulfato de manganeso en
agua. Agregar 1 O gotas de cido clorhdrico por L de la
solucin. Almacenar bajo tolueno.
Solucin de piridoxal-pantotenato de calcio: Disolver
200 ~tg/ml de clorhidrato de piridoxal y 1,875 g/ml
de pantotenato de calcio en alcohol al 10%. Almacenar
en un refrigerador y usar dentro de los 30 das.
Solucin de polisorbato 40-cido oleico: Disolver
50 mg/ml de polisorbato 40 y 0,5 mg/ml de cido
oleico en alcohol al 20%. Almacenar en un refrigerador
y usar dentro de los 30 das.
Medio de pantotenato modificado: Disolver Dextrosa
anhidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones pre-
viamente mezcladas segn la Tabla 3 y ajustar con hi-
drxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Finalmente, diluir
con agua hasta 250 ml.
Tabla 3
----- ------
Solucin de hidrolizado cido de casena 25 ml
Solucin de cistina-triotfano 25 ml
Solucin de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solucin de adenina-auanina-uracilo 5 ml
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-biotina 5 ml
Solucin de irido p-aminobenzoico-niacina-clorhidra- 5 ml
to de oiridoxina
Solucin salina A 5 ml
Solucin salina B 5 ml
Soluctr.!__de prrrciol<_qi_c:pantotenato de calero 5 ml
Solucin de polisorbato 40-cido oleico 5 ml
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tracin: Preparar segn se indica en Medio de pantote-
nato modificado, excepto que se debe realizar la dilu-
cin final hasta 125 ml en lugar de 250 ml. Preparar
en el momento de su uso.
Cultivo madre de Pediococcus acidilactici: Disolver en
800 ml de agua, con ayuda de calor, 6,0 g de peptona,
4,0 g de digerido pancretico de casena, 3,0 g de ex-
tracto de levadura, 1,5 g de extracto de carne, 1,0 g de
dextrosa y 15,0 g de agar. Ajustar con hidrxido de so-
dio O, 1 N o cido clorhdrico O, 1 N a un pH de 6,5-6,6
y diluir con agua hasta 1 000 ml. Agregar porciones de
1 O ml de la solucin a tubos de cultivo, tapar los tubos,
y esterilizar en un autoclave a 121 durante 15 minutos.
Enfriar en pendiente y almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo madre de Pediococcus acidilactici 3 en
un tubo conteniendo este medio. Incubar a 35 durante
20-24 horas y almacenar en un refrigerador. Mantener
el cultivo madre mediante transferencias mensuales a
tubos con medio inclinado preparado recientemente.
lnculo: lnornlar tres porciones de 250 ml de Medio de
pantotenato modificado con el cultivo madre en medio
inclinado e incubar a 35'' durante 20-24 horas. Centri-
fugar la suspensin a partir de las porciones combina-
das y lavar las clulas con Medio de pantotenato modifi-
cado estenl. Resuspender las clulas en suficiente Medio
de pantotenato modificado de manera que una dilucin
USP 38
1 en 50, cuando se analiza en un tubo de ensayo de
1 3 mm de ditmetro, proporcione 80% de tr<msmisin
de luz a 530 nm. Trzrnsferir porciones de 1,2 mL de esta
suspensin n1Jdrc J J:--r1po!IJ~ de \i'icfr:o C'.>til, sella,
congelar en nitrgeno l1q11irlo y almarenar en un con-
gelador. C.n el d1a de la valoracion, dejar que las ampo-
llas alcancen la temperatura ambiente, mezclar el con-
tenido y diluir 1 ml de cultivo descongelado con
solucin salina estril SR hasta 150 ml. [NOTA-Esta di-
lucin se puede alterar, cuando sea necesario, para ob-
tener la respuesta de prueba deseada.]
Anlisis: Preparar por triplicado una serie de ocho tu-
bos de cultivo agregando las siguientes cantidades de
agua a los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3,0; 2,0; 1,0 y 0,0 ml. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solucin estndar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 ml de la Solucin
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 ml de Medio de pantotenato modificado de
doble concentracin a cada tubo. Tapar los tubos con
tapas de metal y esterilizar en un autoclave a 121
durante 5 minutos. Enfriar a temperatura ambiente en
un bao de agua fra e inocular cada tubo con 0,5 ml
del lnculo. Dejar que se incube a 37 durante 16 ho-
ras. Detener el crecimiento calentando a una tempera-
tura de no menos de 80, por ejemplo mediante la
aplicacin de vapor a presin atmosfrica en un esteri-
lizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y determinar la
transmitancia porcentual de las suspensiones, en celdas
de igual longitud de paso, en un espectrofotmetro
adecuado, a una longitud de onda de 530 nm.
Clculos: Trazar una curva de dosis-respuesta en papel
milimetrado graficando la respuesta promedio, como
porcentaje de transmitancia, para cada set de tubos de
la curva estndar en funcin de las concentraciones
del nivel del Estndar. La curva se traza conectando
cada par de puntos adyacentes con una lnea recta. A
partir de esta curva estndar, determinar mediante
interpolacin la potencia, en trminos de dexpantenol,
de cada tubo que contenga porciones de la Solucin
muestra. Dividir la potencia de cada tubo por la canti-
dad de la Solucin muestra que se le agreg, para ob-
tener las respuestas individuales. Calcular la respuesta
media promediando las respuestas individuales que va-
ran de su media en no ms de 15%, usando no me-
nos de la mitad del nmero total de tubos. Calcular la
potencia de la porcin del material tomado para la
valoracin, en trminos de dexpantenol, multiplicando
la respuesta media por el factor de dilucin apropiado.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C1H19N4)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 1
Fase mvil: Acido fosfrico y agua (1: 1 000)
Solucin de estndar interno: 80 mg de cido p-hi-
droxibenzoico en 3 ml de alcohol. Agregar 50 ml de
agua y 7, 1 g de fosfato dibsico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 ml. Ajustar con cido fosfrico a un
pH de 6,7.
Solucin estndar: 0,6 mg/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solucin de estndar interno
Solucin muestra: Proceder segn se indica en odo
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula." Transferir el equivalente a 0,6 mg/ml de pan-
totenato de calcio, a partir del contenido mezclado de
las Cpsulas en Solucin de estndar interno y agitar vi-
gorosamente durante 1 O minutos. Centrifugar, filtrar y
usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 3, 9 mm /: 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 mL/r.;in
Volumen ele inyeccin: 1 O p L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucion estndor
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para pantote-
nato de calcio y cido p-hidroxibenzoico son aproxi-
madamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estandar y Solucin muestra
Medir las respuestas de los picos de pantotenato de
calcio y el estndar interno. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de pantotenato de calcio
(C rnH i7CaN;010) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (Ru!Rs) x (Cs/Cu) x 100
Ru = cociente de respuesta entre los picos de
pantotenato de calcio y cido p-
hidroxibenzoico de la Solucin muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
pantotenato de calcio y cido p-
hidroxibenzoico de la Solucin estndar
= concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
= concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (CrnHi2CaN2010)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 2
Solucin madre del estndar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentxido de fsforo y
protegido de la humedad durante la pesada, en 500 ml
de agua en un matraz volumtrico de 1000 ml. Agre-
gar 1 O ml de cido actico 0,2 N y 100 ml de solucin
de acetato de sodio (1 en 60), y diluir con agua a volu-
men para obtener una concentracin de 50 g/ml de
ER Pantotenato de Calcio USP. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solucin estndar: En el da de la valoracin, diluir un Solucio11
volumen de Solucin madre del estndar con agua hasta
obtener una concentracin de 0,01-0,04 g/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentracin exacta
es tal que las respuestas obtenidas se9n se indica en el
Anlisis, usando 2,0-4,0 ml de Solucion estndar, estn
dentro de la porcin lineal de la curva de respuesta del
logaritmo de la concentracin. , Solucin de ribotlavina clorhidrato de liamina broti-
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula." Transferir una porcin de contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de 50 mg
de pantotenato de calcio, a un matraz volumtrico de
1000 ml que contenga 500 ml de agua. Agregar
1 O ml de cido actico 0,2 N y 100 ml de solucin de
acetato de sodio (16,66 mg/ml), diluir con agua a volu-
men y filtrar. Diluir un volumen de esta solucin hasta
obtener una solucin con aproximadamente la misma
concentracin que la de la Solucin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
1 00 g de casena exenta de vitamina con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a refluo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1 000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn artivado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 O . Fil-
\uplpmpntn' /Jptet(m /Vitaminas Hidrosolubles 6743
trar la soluc1011 01 >e torma un precipitado durante el
J!metccnJrni0ntn.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cic,tina y 1,0 g ele '- triptnfinn (n 7,l 'J rlP ri, 1-tnrtnfann)
en 700-800 ml de aqua, calentar J 70-80 y aqreqar
ac1do clorl11dm_o uiiudo ( i er 1 2) yma a yo ta, 1r1eL-
clando, hasta que los solrdos se disuelvan. E.nfriar y di-
luir con agua hasta 1000 ml. Almacenar bajo tolueno
en un lugar fresco a una temperatura de no menos de
1o .
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de >ulfato de Jdenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfridr y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 1 00 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 ~tg/ml de ribotlavrna, 1 O pg/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 g/rnl de biotrna en acrdo acetrco
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
proteger de la luz.
Solucion de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O g/ml de cido p-ami~oben
zoico, 50 ~tg/ml de niacina y 40 g/ml de clorhidrato
de piridoxina en una meLcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador. .
Solucin salina A: Disolver 25 g de tostato monobasrco
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas '>Pgn la Tah/a 4, y ajustar con hidr-
xido de sodio 1 N il un pH de 6,8. Diluir con agua
hasta 250 ml.
Tabla 4
de hidroliLado acido d,,.e~ca""s"'e""n_,,_a------+--~2=5~m=L--
Solucin de cisti na--tri ptfp_llQ _________.__._ ______.2=5'-'m"-""L___j
Solucin de olisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra ________ _ ____ _l.Q__g__ __ _
Acetato de sodio anhidro ..__ 2_g__._
Soluciri_ge_.g(211i_r1<1::-Q[J.Jti_jri_a-u1Jcilo_____________ _
- D.9 - - ---- -- ____ ____
Solucron de acrdo p-amrnobenzorco nracrna-dorhr-
drato de iridoxina ----------- t
1 5 rnl
~
)
~::~:~:~~ ::::~: ~-========-~ - - ----==-=-~__~--~:~~
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidro, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 y de agar, y calentar la meL-
cla en un bao de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la
mlucrn caliente a tubm de ensayo, cerrar o tapar los
! ubos, esterilizar en un autoclave a 121 ~ y dejar que lm
tubos se enfren en posicin vertical. Inocular tres o ms
de los tubos, sembrando por puncin un cultivo puro
de Lactobac/lus plantarum 1 incubando durante 16-24
horas a una temperatura entre 30 y 3 7 mantenida
terrno'>taticamente con un margen de 0,5 . AlmacenJr
en un refrigerador-. PreparJr un cultivo reciente por
puncin del cultivo madre una vez por semana y no
6744 Vitaminas Hidrosolubles ! Suplementos Dietticos
usarlo para preparar el lnculo si el cultivo tiene ms de
1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,2 g de pantotcnato de calcio a cada una de las
s_eries de tubos de ensayo ci11e contPnqnn 5,0 ml de
::.otuoon madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godn, esterilizar en un autoclave a 121 y enfriar.
lnculo: [NOTA~Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacil/us plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir clulas del
CultlVo madre de Lactobacil/us plantarum a un tubo est-
ril que contenga 1 O ml de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30 y 37 mantenida termostticamente con un
margen de 0,5. La suspensin de clulas as obtenida
es el lnculo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solu-
cin estndar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos
vacos similares 5,0 ml de Solucin madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volmenes de la Solucin muestra correspondien-
tes a tres o ms niveles especificados de la Solucin
estndar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y 4,0 ml.
Agregar a cada tubo 5,0 ml de la Solucin madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml. Co-
locar un set completo de tubos de Estndar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado en
una segunda gradilla o seccin de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la contami-
nacin y esterilizar en un autoclave a 121 durante 5
minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnculo a cada
tubo, excepto dos de los cuatro tubos que no conten-
gan Solucin estndar (los blancos no inoculados). In-
cubar los tubos a una temperatura entre 30 y 37
mantenida termostticamente con un margen de
0,5 hasta que, despus de 16-24 horas de incuba-
cin, no se presente un aumento significativo de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel ms alto de
Estndar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a un recipiente apto para lectura ptica si fuera nece-
sario. Colocar el recipiente en un espectrofotmetro
ajustado a una longitud de onda especfica entre 540
y 660 nm y leer la transmitancia cuando se alcance un
estado estacionario. Este estado estacionario se observa
unos pocos segundos despus de la agitacin cuando
la lectura del galvanmetro se mantenga constante
durante 30 segundos o ms. Permitir aproximada-
mente el mismo intervalo de tiempo para la lectura de
cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
cin con un microorganismo extrao, no tomar en
cuenta el resultado de la valoracin.
Clculos: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta segn se indica a continuacin. Para
cada nivel del Estndar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia O:) como la diferencia, y= 2,00 - L. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
funcin del logaritmo de los ml de la Solucin estn-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmtica o logartmica, la que proporcione
la mejor aproximacin a una lnea recta. Trazar la lnea
USP 38
recta o la curva de regresin que mejor se ajuste a los
pu11lo> graficadm.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias pa1 a l.aJa 11ivei Je ia Solucion mues Ira. Leer, a
partir de !a curva estndar, el logaritmo del volumen
de la Solucin estndar correspondiente a cada uno
de los valores de y comprendidos dentro del intervalo
enlre los puntos extremos graficados para el Estndar.
Restar de cada logaritmo as obtenido el logaritmo
del volumen, en ml, de la Solucin muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificacin.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
o ms niveles de dosificacin para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
cin muestra.
Deter_minar la cantidad, en mg, de ER Pantotenato de
Calcio USP correspondiente al pantotenato de calcio
en cada mg de la porcin de Cpsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaba presente en cada mg de la
porcin de Cpsulas tomada
Dete_r_minaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nac1on por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Va/ora-
ciones Biolgicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Lmites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en ms de 0,08, realizar una o ms determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o ms
valores de M que no difieran en ms de O, 15, calcular
la potencia media de la preparacin que se est
valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (CisH32CaN2010)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 3
Solucin amortiguadora: Disolver 10,0 g de fosfato
monobsico de potasio en 2000 ml de agua y ajustar
con cido fosfrico a un pH de 3,5.
Fase mvil: Metano! y Solucin amortiguadora (1 :9)
Solucin madre del estndar: 0,25 mg/ml de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar cada 4 sema-
nas. Almacenar en un refrigerador.
Solucin estndar: 40 g/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP, a partir de Solucin madre del estndar di-
luida con agua
Solucin muestra: Proceder segn se indica en cido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de 1 O mg
de pantotenato de calcio, a un matraz volumtrico de
250 ml. Agregar 1 O ml de metanol y agitar el matraz
por rotac1on suave hasta dispersar el contenido de las
Cpsulas. Diluir con agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ),. Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2 mL;min
Volumen de inyeccin: 25 pL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
USP 38
pantotenato de calcio (CrnH,,CaN,Orn) en la porcin
de C<lJsulds tomada:
Resultado= (r,Jr,) .. (C,/C,) :. 100
ru = rea del pico de la Solucin muestra
r, = rea del pico de la Solucin estndar
C, = concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1 8 H 32 CaN 2 0 10)
NIACINA O NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Mtodo 7 I estndar
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo, cido actico glacial y agua
(5:1 :94)
Fase mvil: Una mezcla de metanol cido actico gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 40 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 ml.
Solucin estndar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
contengan Niacina.] Transferir 80 mg de ER Niacina-
m1da USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina USP
20 mg de ER Riboflavina USP y 20 mg de ER Clorhidrato
de Tiamina USP a un matraz volumtrico de 200 ml, y
agregar 180 ml de Diluyente. Sumergir el matraz en un
bao de agua caliente mantenido a 65-70 durante 1O
minutos agitando regularmente o usando un mezclador
de vrtice, hasta que se disuelvan todos los materiales
slidos. Enfriar rpidamente en un bao de agua fra
durante 1 O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en cido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula." Transferir una porcin de contenido de las
Cpsulas, equivalente a 1O mg de niacinamida y 2,5 mg
de clorhidrato de piridoxina, de riboflavina y de clorhi-
drato de tiamina, a un tubo de centrfuga de 50 ml.
Agregar 25,0 ml de Diluyente y mezclar usando un
mezclador de vrtice durante 30 segundos para sus-
pend~r por completo el polvo. Sumergir el tubo de
centrifuga en un bao de agua caliente mantenido a
65-70, calentar durante 5 minutos y mezclar en un
mezclador de vrtice durante 30 segundos. Devolver el
tubo al bao de agua caliente, calentar durante 5 minu-
tos ms y mezclar en un mezclador de vrtice durante
30 segundos. Filtrar una porcin de la solucin, enfriar
a temperatura ambiente y usar el filtrado transparente.
[NOTA-Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la
filtracin.]
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3, 9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Soluoon muestra
Medir las reas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6H6N20) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/ r,) x ( C/ Cu) x 100
Suplementos Dietticos/ Vitaminas Hidrosolubles 6745
r11 = rea del pico de niacinamida de la Solucin
muestra
r1 = area del pico de niacinamida de la Solucion
estndar
C - concentracin de ER Niacinamida USP en la
Solucin estandar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacinamida en la
Solucin muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contengan niacina:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de niacina de la Solucin
Cs = concentracin de ER Niacina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (C 8 H 11 N0 3
HCI), riboflavina (C11H20N45) y clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN4QS HCI) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
pertinente en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la vitamina
correspondiente en la Solucin muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C 12 H 17 N 5 0 4 S)
en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs!Cu) x (M,1/M,2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
Mr1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20), niacina
(C6HsN02), clorhidrato de piridoxina (CRH11 N0 3 HCI),
riboflavina (C 11H20N406) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C,2H17CIN40S HCI) o mononitrato de tiamina
(C 12H11Ns04S)
NIACINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Transferir 1 ml de cido actico glacial y
2,5 g de edetato disdico a un matraz volumtrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extraccin: Solucin A y metano! (3:1)
Fase mvil: Solucin de acetato de sodio O, 1 M
(1 ?,6
mg_/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
ac1do acet1co a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
una pequea cantidad de metanol (hasta 1 %) a la Fase
mvi! para mejorar la re~olucin.J
Soluc1on madre del estandar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de extraccin
6746 Vitamina<> Hirlrn<;nluhlP<; .1 Suplementos Dietticos
Solucin estndar: Trdnsferir 5,0 ml de Solucin madre
clr! r'tnnclnr a un matraz volumtrico de 25 ml y diluir
e_on D1-,ulvenlc de cxlruccion a volumen.
Solucin muestra: [!'Jo: . -.. Esta preparacin es ade-
cuada para la determinacin de niacina o niacinamida,
clorhidrato de p1ridox1na y ribotlav1na, cuando se en-
cuentran presentes en la formulacin.] Pesar no menos
de 20 Cpsulas en un frasco de pesada tarado. Abrir las
Cpsulas, sin perder material de la cubierta, y transferir
el contenido a un vaso de precipitados. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas lavando con varias
porciones de ter. Desechar los lavados y secar las cu-
biertas de las Cpsulas con ayuda de una corriente de
aire seco. Pesar las cubiertas de las Cpsulas vacas en
un frasco de pesada tarado y calcular el peso neto del
contenido de las Cpsulas. Transferir una porcin de
contenido de las Cpsulas, equivalente a 0,02 mg/ml
de riboflavina. Si la riboflavina no se encuentra presente
en la formulacin, usar una porcin, equivalente a
0,02 mg/ml de piridoxina. Si la piridoxina no se en-
cuentra presente en la formulacin, usar una porcin
equivalente a 0,2 mg/ml de niacina o niacinamida en
Disolvente de extraccin y mezclar durante 20 minutos,
usando un agitador de movimiento tipo mueca (wrist-
action). Sumergir el matraz en un bao de agua mante-
nida a 70 -75" y calentar durante 20 minutos. Mezclar
en un mezclador de vrtice durante 30 segundos, en-
friar a temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no! entre cada inyeccin.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C,H1N02) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C1/C11) x 100
ru = rea del pico de niacina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de niacina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Niacina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
C11 = concentracin nominal de niacina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (Cc.HsN07)
NIACINAMIDA, Mtodo 2
[NOTA--Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin, Fase mvil, Solucin madre
del estndar, Solucin estndar, Solucin muestra y
Sistema cromatogrfico: Usando ER Niacinamida USP
en lugar de ER Niacina USP, proceder segn se indica
en Niacina, Mtodo 2.
Anlisis
Muestras: Solucin e'>lunciur y Soiucin muestra
Medir las reas de los picos de niacinamida. Calcular el
rorcentaje rle la cantidad declarada de niacinamida
(C,H,N,Q) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (rjr.) Y (C1/C) x 100
USP 38
r,, = rea del pico de niacinamida de la Solucion
muestra
r, = area del pico de niacinamida de la Solucion
cstnda;
r. = 0ncentrilcin de ER Niilcinilmida USP en !a
Solucion estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacinamida en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin y Fase mvil: Preparar segn
se indica en Niacina, Mtodo 2.
Solucin madre del estndar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extraccin
Solucin estndar: 20 g/ml de ER Clorhidrato de Piri-
doxina USP, a partir de Solucin madre del estndar di-
luida con Disolvente de extraccin
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Niacina,
Mtodo 2.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm: relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (C8H 11 NO, HCI) en la porcin de Cpsulas
tomada:
Resultado= (rulr1) x (C,/Cu) x 100
ru = rea del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solucin muestra
r1 = rea del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solucin estndar
C = concentracin de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11N3 HCI)
RIBOFLAVINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin: Preparar segn se indica en
Niacina, Mtodo 2.
Solucin A: 6,8 mg/ml de acetato de sodio en agua
Fase mvil: Preparar una mezcla de Solucin A y meta-
no! (1 3:7). Agregar 2 ml de trietilamina Fr L de la
mezcla y ajustar con cido actico glacia a un pH de
5,2.
Solucin madre del estndar: Transferir 20 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumtrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Di;olwnte de extruccin. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un bao de agua mante-
nido a 65"-75. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rpidamente en un bao de agua
fra a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extraccin a volumen.
Solucin estndar: Diluir 5,0 ml de Solucin madre del
estndar con Disolvente de extraccin hasta 25,0 ml.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Niacina,
Mtodo)
USP 38
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 25'1 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de riboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C11H20N406) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de riboflavina de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de riboflavina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Riboflavina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de riboflavina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
TIAMINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin A: 1,88 mg/ml de 1-hexanosulfonato de so-
dio en cido fosfrico al O, 1 %
Fase mvil: Solucin A y acetonitrilo (46:9)
Solucin madre del estndar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en cido clorhdrico 0,2 N
Solucin estndar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con cido clorhdrico 0,2 N , del estndar a un matraz de 125 ml con tapn. Agregar
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Mezclar una porcin de contenido de las
Cpsulas con un volumen de cido clorhdrico 0,2 N
para obtener una concentracin nominal de 0,02 mg/
ml de tiamina. Agitar durante 15 minutos con un agi-
tador de movimiento tipo mueca (wrist action) y ca-
lentar a ebullicin durante 30 minutos. Enfriar a tempe-
ratura ambiente y filtrar. Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Para productos
que contengan clorhidrato de tiamina, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (CpH11CIN4QS HCI) en la porcin de Cpsu-
las tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
r,, = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Suplementos Oieti'tim .1 Vitaminas Hirlrosoluhles 6747
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, ca!cular e! porcentaje de !a cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C,,H,,N,OaS)
en la porc1on de Capsulas tomada: .
Resultado= (ru/r,) x (C/C,,) x (Mr1/Mc") x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
Mc1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H11CIN4QS HCI) o mononitrato de tiamina
(C 12H11Ns04S)
NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Mtodo 3
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/ml de edetato disdico en agua
Fase mvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de cido actico glacial y 350 ml de metano! a un ma-
traz volumtrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solucin madre del estndar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solucin estndar: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
10,0 ml de una mezcla de metano! y cido actico gla-
cial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de metano! y etilen-
glicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
bao de agua mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado. .
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin de contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de
7,5 mg de niacina o niacinamida, 1,2 mg de clorhidrato
de piridoxina, 0,4 mg de riboflavina y 1,2 mg de clorhi-
drato de tiamina, a un matraz de 125 ml con tapn.
Agregar 10,0 ml de una mezcla de metano! y cido
actico glacial (9:1 ), y 30,0 ml de una mezcla de meta-
no! y etilenglicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minu-
tos en un bao de agua mantenido a 60 y enfriar.
Filtrar, desechando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de las respuestas de los picos. Calcular
el porcentaje de la cantidad declarada de niacina
6748 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos OietPtiros
(C 0 H5 N02) o niacinamida (CH6N;O) en la porcin de
Cp,ula<> tornada:
Resultado= (r,/r.)' (C/C) v 100
= rea del pico de niacina o n1ac1nam1da de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin estndar
= concentracin de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina o
niacinamida en la Solucin muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 NQ3
HCI), riboflavina (Ci 1H 20N4Q,,) y tiamina
(C12H 17 CIN40S) (para productos que contengan
clorhidrato de tiamina) en la porcin de Cpsulas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
pertinente en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal del analito
correspondiente en la Solucin muestra
(mg/ml)
Para productos que contenga_n mononitra_to de
tiamina, calcular el porcentae de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x (M,,/Md x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
Mc1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27 . Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Criterios de aceptacin: 90,0%-15_0,~% d~ la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o n1acinam1da
(C 6 H6 N20), clorhidrato de pirid_oxina (CsH11 NC?3 HCI),
riboflavina (( 7 H20N406) y t1am1na com_o clorh1dr?to _de
tiamina (C1 2H17 CIN405 HCI) o mononitrato de t1amina
(Ci 2H 11Ns04S)
[NOTA-Se pueden usar soluciones estndar de absor-.
cin atmica comercialmente disponibles para los mi-
nerales cuando sea pertinente, cuando se describa la
prepar~cin de una Solucin madre del es~ndar en las
siguientes valoraciones. Usar agua des1on1zada cuando
se especifica agua; Cua,ndo se espec1f1ca espectrofoto-
metna de absorc1on atom1ca en la valorac1on, se pue-
den diluir cuantitativamente las Soluciones estndar y la
Solucin muestra con el disolvente especificado, si fuera
necesario, para producir soluciones con concentracio-
nes adecuadas adaptables al intervalo lineal o de tra-
bajo del instrumento.]
CALCIO, Mtodo 7
Solucin de cloruro de lantano: 267 mg/ml de clo-
ruro de lantano heptahidrato en cido clorhdrico O, 125
N de polietileno.
Solucin estndar de calcio: 400 g/ml de calcio. Di-
solver 1,001 g de carbonato de calcio, previamente se-
cado a 300 durante 3 horas y enfriado en un deseca-
USP 38
dor durante 2 horas, en 25 ml de cido clorhdrico 1 N.
Calentar a ebullicin para expulsar el dixido de car-
bono y diluir con agua hasta 1000 ml.
Solucion madre del estndar: 1 00 g/ml de calcio, a
partir de Solucin estndar de calcio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos
matraces volumtricos de 100 ml. Agregar a cada ma-
traz 1 O ml de Solucin de cloruro de lantano y diluir
con agua a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 g/ml ~e _calci?
Solucin de polisorbato 80: Diluir Pohsorbato 80 con
alcohol (1 en 1 O).
Solucin muestra: Transferir 5 Cpsulas a un matraz
volumtrico de 1 00 ml. [NOTA-Para Cpsulas de gela-
tina dura, pesar no menos de 20 Cps~las. Abrir las .
Cpsulas, sin perder material de la cubierta_ y transferir
el contenido a un rec1p1ente adecuado. Ret~rar cualqu1,er
contenido adherido a las cubiertas de las capsulas vaC1as
lavando con varias porciones de ter. Desechar los lava-
dos y dejar que las cubiertas de las Cpsulas se sequen.
Pesar las cubiertas de las Cpsulas vac1as, calcular el
peso neto del contenido de las Cpsulas y transferir una
porcin de contenido de las <:;:psulas, equivalente a 5
Cpsulas a un matraz volumetnco de 100 mL.] Agregar
15 ml d~ agua, 1 O ml de cido clorhdrico 6 N y 1 ml
de Solucin de polisorbato 80 al matraz. Calentar ~obre
una placa de calentamiento o bao de vapor, agitando
por rotacin suave intermitentemente, hasta que las
Cpsulas se desintegren por completo o que el conte-
nido se disuelva. Calentar a ebullicin suave durante 15
minutos adicionales. Enfriar, diluir con agua a volumen
y filtrar, desechando los primeros 5 ml del filtrado. Di-
luir esta solucin con cido clorhdrico O, 125 N hasta
obtener una concentracin de 2 g/ml de calcio, agre-
gando 1 mL de Solucin de cloruro de lantano por
100 ml del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara:, Calcio, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cal-
cio a 422,,7 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solucin de cloruro de lantano por 100 ml.
Anlisis
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de calcio y trazar la recta que r:iejor se aj~~te a i?s
cinco puntos graficados. A partir de la graf1ca as1 ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
calcio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (C!Cu) x 100
C = concentracin medida de calcio en la Solucin
muestra ($J/ml) .,
Cu = concentracion nominal de calcio en la Soluoon
muestra (g/mL) .
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
CROMO, Mtodo 7
Solucin estndar de cromo: 1000 g/mL de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secado a
120 durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
Solucin madre del estndar: 1 O g/ml de cromo, a
partir de Solucin estndar de cromo diluida con cido
clorhdrico 6 N y agua (1 en 20)
USP 38
Soluciones estndar: Transferir 10,0 y 20,0 mL de Solu-
cion madre del estandar a sendos matraces volumtricos
de 100 mL, y transferir 15,0 mL y 20,0 mL de Solucin
madre del estandar a sendos matraces volumtricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 g/mL
de cromo.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 1 g/mL de cromo y omitir
el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cromo, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
cromo a ,357,9 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/mL
de cromo en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C =concentracin medida de cromo en la Solucin
muestra (9/mL)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
COBRE, Mtodo 7
Solucin estndar de cobre: Disolver 1,00 g de lmina
de cobre en un volumen mnimo de una solucin de
cido ntrico al 50% (v/v) y diluir con una solucin de
cido ntrico al 1 % (v/v) hasta 1000 mL. Esta solucin
contiene 1 000 g/mL de cobre.
Solucin madre del estndar: 100 g/mL de cobre, a
partir de Solucin estndar de cobre diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 200 mL. Diluir con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y
4,0 ~/mL de cobre.
Solucion muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 2 g/mL de cobre y omitir
el uso de Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cobre, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de co-
bre a 324,7 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar v Solucin muestra
Determinar las absorbancias d las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
cobre en la Solucin muestra.
Suplemrntos OictCticos /Vitaminas Hidrosolubles 6749
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de co-
bre (Cu) en la porcin de Cp~ulc1~ lornadc1:
ResultJdo - (C!Cu)" 100
C = concentrac1on medida de cobre en la Solucin
muestra (9/mL)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solucin
muestra (~tg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
FLUORURO, Mtodo 7
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en recipientes de
plstico.]
Solucin de acetato de sodio 3 M: 408 mg/mL de
acetato de sodio en agua. Ajustar con unas pocas gotas
de cido actico a un pH de 7,0. [NOTA-Disolver en
una porcin de agua y dejar que la solucin se equilibre
a temperatura ambiente, luego diluir con agua a volu-
men y ajustar el pH.]
Solucin de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 mL de agua en un matraz volumtrico
de 1 000 ml. Agregar 28 mL de cido perclrico y diluir
con agua a volumen.
Solucion madre del estndar de fluoruro: 500 g/mL
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio previamente secado a 1 00 durante 4 horas y en-
friado en un desecador, en agua
Solucin madre intermedia A: 100 g/mL de fluoruro,
a partir de Solucin madre del estndar de fluoruro di-
luida con agua
Solucin madre intermedia B: 1 O g/mL de fluoruro, a
partir de Solucin madre del estndar de f/uoruro diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 3,0; 5,0 y 10,0 mL de
Solucin madre intermedia By 5,0 y 10,0 mL de Solucin
madre intermedia A a sendos matraces volumtricos de
100 ml. Agregar a cada matraz 10,0 mL de cido clor-
hdrico 1 N, 25 mL de Solucin de acetato de sodio 3 M
y 25,0 mL de Solucin de citrato de sodio. Diluir el con-
tenido de cada matraz con agua a volumen para obte-
ner concentraciones de 0,3; 0,5; 1,0; 5,0 y 10,0 g/mL
de fluoruro.
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas
cortando para abrir las Cpsulas. Mezclar y determinar
el peso de los contenidos. Transferir una cantidad de
contenido de las Cpsulas mezclado, equivalente a una
cantidad nominal de 200 mg de fluoruro, a un matraz
volumtrico de 100 ml. Agregar 10,0 mL de cido clor-
hdrico 1 N, 25,0 mL de Solucin de acetato de sodio
3 M y 25,0 mL de Solucin de citrato de sodio y diluir
con agua a volumen.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Transferir a sendos vasos de precipitados de plstico
que contengan una barra mezcladora recubierta de
plstico, 50,0 mL de cada una de las Soluciones estn-
dar y de la Solucin muestra. Medir los potenciales
(ver pH (791 )), en mV, de las Soluciones estndar y la
Solucin muestra, con un medidor de pH capaz de
una reproducibilidad mnima de 0,2 mV y equipado
con un electrodo indicador especfico para in fluo-
ruro y un electrodo de referencia de calomel. [NOTA-
Al tomar las mediciones, sumergir los electrodos en la
solucin, mezclar en un agitador magntico con su
parte superior aislada hasta que se logre el equilibrio
(1-2 minutos) y registrar el potencial. Enjuagar y se-
car los electrodos entre mediciones, procurando evi-
tar el dao del cristal del electrodo especfico para
in fluoruro.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en g/mL, de las Soluciones estndar en funcin
del potencial, en mV. A partir de la curva de la res-
puesta estndar y el potencial medido de la Solucin
6750 VitJminJs Hidrosolublcs /Suplementos Diettirn'
muP\tm, rlPtPrminar la concentracin, C, en g/ml,
de fiuur uro er1 la Solucin mw",tra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
flu1 (~J e11 td Ju1ciu11 Je C<l~ula~ tornada:
Resultado= (C/C11) x 100
C = concentracin medida de fluoruro en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
FLUORURO, Metodo 2
[NOTA-Usar recipientes de plstico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
Solucin amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidrxido de sodio O, 1 N a 1000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase mvil: Alcohol, cido sulfrico O, 1 N y agua
(20:5:1 75)
Solucin madre del estndar: 220 g/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solucin contiene
100 9/ml de fluoruro.
Solucion estndar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extraccin de fase slida especificada para su uso en la
Solucin estndar y la Solucin muestra de la siguiente
manera. Usando vaco a una presin que no exceda de
5 mm de mercurio, lavar la columna con 1 volumen de
columna de metano! seguido de 1 volumen de columna
de Solucin amortiguadora de pH 70,0. No dejar que la
parte superior de la columna se seque. Si la parte supe-
rior de la columna se seca, reacondicionar la columna.]
Transferir 10,0 rnl de Solucin madre del estndar a un
matraz volumtrico de 100 ml. Agregar 75 ml de agua
y ajustar con hidrxido de sodio O, 1 N a un pH de 10,4
O, 1. Diluir con agua a volumen. Filtrar, desechando
los primeros 15 ml del filtrado. Transferir 25,0 ml del
filtrado a un matraz volumtrico de 50 ml, agregar
15,0 ml de agua y ajustar con hidrxido de sodio O, 1
N a un pH de 1 0,0. Diluir con Solucin amortiguadora
de pH 7O, O a volumen. El u ir una porcin de esta solu-
cin a travs de una columna de extraccin de fase
slida de 3 ml que contenga relleno L1 que se conecta
a travs de un adaptador a una segunda columna de
extraccin de fase slida que contenga relleno de inter-
cambio catinico fuerte de sulfonilpropilo. Desechar los
primeros 3 ml del eluato y recoger el resto del eluato
en un matraz adecuado para inyectar en el
cromatgrafo.
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un recipiente de 1 00 ml. Si fuera necesario, retirar cual-
quier contenido adherido a las cubiertas de las cpsulas
vacas lavando con varias porciones de ter. Desechar
los lavados y secar las cubiertas de las Cpsulas con
ayuda de una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas
de las Cpsulas vacas en un frasco de pesada tarado y
calcular el peso neto del contenido de las Cpsulas.
Transferir una porcin de contenido de las Capsulas,
equivalente a una cantidad nominal de 1 mg de flor, a
un matraz volumtrico de 100 ml. Agregar 15 ml de
agua y agitar vigorosamente. Enjuagar las paredes del
matraz con 15 rnl de agua y dejar en reposo durante
1O minutos. Diluir con agua hasta 85 ml, ajustar con
hidrxido de sodio 1 N a un pH de 10,4 O, 1 y diluir
con agua hasta 1 00 ml. Proceder segn se indica en
Solucin estndar, comenzando donde dice "Filtrar, des-
echando los primeros 15 ml del filtrado."
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
IJSP 38
Modo: HPLC
Detector: Conduct1v1dad
Columnas
Guarda coiumna: 4,b mm x :$cm; relleno L1 7
Columna analtica: 7,8 rn111 , 30 ur1; re!ie110 Ll 7
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de fluoruro. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de flor (F) en la
porcin de Cpsulas tomada:
Resultado~ (ru/rs) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de la Solucin muestra
r, ~ rea del pico de la Solucin estndar
C = concentracin de fluoruro en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
YODURO
Agua de bromo: Bromo y agua (1 :5). Agitar. Dejar en
reposo durante 30 minutos y usar el sobrenadante.
Anlisis
Muestra: Cpsulas
Retirar el contenido de las Cpsulas cortando para abrir
las Cpsulas. Mezclar y determinar el peso de los con-
tenidos. Transferir una cantidad de contenido, equiva-
lente a 3 mg de yodo, a un crisol de nquel. Agregar
5 g de carbonato de sodio, 5 ml de solucin de hidr-
xido de sodio al 50% (p/v) y 1 O ml de alcohol, procu-
rando humedecer toda la muestra. Calentar el crisol en
un bao de vapor para evaporar el alcohol, luego se-
car el crisol a 100 durante 30 minutos para evitar
salpicaduras durante el calentamiento subsiguiente.
Transferir el crisol con su contenido a un horno calen-
tado a 500u y calentar el crisol durante 15 minutos.
[NOTA-Es necesario calentar a 500 para carbonizar
toda la materia orgnica presente; se puede usar una
temperatura ms alta, si fuera necesario, para asegurar
la carbonizacin completa de la materia orgnica.J
Enfriar el crisol, agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol
con un vidrio de reloj y calentar a ebullicin suave
durante 1 O minutos. Filtrar la solucin y lavar el crisol
con agua hirviendo, recogiendo el filtrado y los lava-
dos en un vaso de precipitados. Agregar cido fosf-
rico hasta que la solucin sea neutra frente al anaran-
jado de metilo y luego agregar 1 ml de cido fosfrico
en exceso. Agregar un exceso de Agua de bromo y
calentar la solucin a ebullicin suave hasta que se
torne incolora, y luego durante 5 minutos ms. Agre-
gar unos pocos cristales de cido saliclico y enfriar la
solucin a 20. Agregar 1 ml de cido fosfrico y
0,5 g de yoduro de potasio, y valorar el yodo liberado
con tiosulfato de sodio 0,005 N SV, agregando almi-
dn SR cuando el color del yodo liberado haya desa-
parecido casi por completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= V X NA X F X lnw X (Aw!lN) x (100/L)
V = volumen de tiosulfato de sodio consumido
(ml)
NA = normalidad real de la solucin de tiosulfato de
sodio usada (mEq/mL)
F factor de correccin para convertir mg a g,
1000 g/mg
usr 38
l,,c = rniliequivalente de 1, 21, 16 mg/mEq
Aw =peso promedio del contenido de las Cpsulas
W =peso de la muestra del contenido de las
Cc;ulct> lornctdo
L = cantidad declarada de yodo (g/Cpsula)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
HIERRO, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de hierro: Transferir
1 00 mg de polvo de hierro a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en 25 ml de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solucin madre del estndar de hierro a sen-
dos matraces volumtricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con agua a volumen para obtener
concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y 8,0 g/ml de
hierro.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 5 g/ml de hierro y omitir el uso de Solucin de
cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Hierro; de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
hierro a ,?48,3 nm
Blanco: Acido clorhdrico 0, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
hierro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de hierro en la Solucin
muestra ($)/ml)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
MAGNESIO, Mtodo 7
Solucin de cloruro de lantano: Preparar segn se in-
dica en Calcio, Mtodo 7.
Solucin madre del estndar de magnesio: 1 000 g/
ml de magnesio, a partir de cinta de magnesio en
cido clorhdrico 6 N y agua (1: 19)
Solucin madre del estndar: 20 ~Lg/ml de magnesio,
a partir de Solucin madre del estndar de magnesio di-
luida con cido clorhdrico 0, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 1 00 ml. Agregar a cada matraz
1,0 ml de Solucin de cloruro de lantano y diluir con
cido clorhdrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 q/ml de
magnesio.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una cantidad nominal de
0,4 g/ml de magnesio.
Suplementos Dieteticos /Vitaminas Hidrosolubles 6751
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometria y Dispernon de Luz \851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Magnesio, de ctodo hueco
Llama: Aiw acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
magnesiq a 285,2 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solucin de cloruro de lantano por 1 00 ml.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/ml,
de magnesio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de magnesio en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de magnesio en la
Solucin muestra (.g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
MANGANESO, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de manganeso: 1 000
9/ml de manganeso en cido clorhdrico 6 N y cido
n1trico (49:1 ). [NOTA-Disolver el manqaneso en cido
ntrico y diluir con cido clorhdrico 6 hasta el volu-
men final.]
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de manga-
neso, a partir de Solucin madre del estndar de manga-
neso diluida con cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones de 0,5; 0,75;
1,0; 1,5 y 2,0 g/ml de manganeso.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 1 .g/ml de manganeso y omitir el uso de Solucin
de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Manganeso; de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
mangane,so a 279,5 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de manganeso y trazar la recta que meor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/ml,
de manganeso en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de manganeso en la
Solucin muestra (g/ml)
6752 Vitaminas Hirlrosoluhles /Suplementos Dietticos
e,, = concentracin nominal de manganeso en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0(Yci-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
MOLIBDENO. Mtodo 7
Diluyente: 20 mg/ml de cloruro de amonio en agua
Solucin estndar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumtrico de
1 000 ml y disolver en 50 ml de cido ntrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1 000 g/ml de molibdeno.
Solucin madre del estndar: 1 00 ~tg/ml de molib-
deno, a partir de Solucin estndar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 1 0,0 y 25,0 ml de
la Solucion madre del estndar a sendos matraces volu-
mtricos de 100 ml, y agregar 5,0 ml de cido percl-
rico a cada matraz. Calentar a ebullicin suave las solu-
ciones en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y diluir cada una con Diluyente a
volumen para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 g/ml de molibdeno.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe tomar un nmero de
Cpsulas o una porcin de contenido de las Cpsulas
nominalmente equivalente a 1000 g de molibdeno y
realizar diluciones apropiadas hasta obtener una con-
centracin final de 1 O g/ml de molibdeno, omitiendo
la adicin de Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara:, Molibdeno; de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de mo-
libdeno a 313,3 nm
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20:1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/ml,
de molibdeno en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentracin medida de molibdeno en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de molibdeno en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
MOLIBDENO, Mtodo 2
Solucin de fluoruro de sodio: Agregar 200 rnl de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solucin se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solucin de sulfato ferroso: 4, 98 mg/ml de sulfato fe-
rroso en agua
Solucin de tiocianato de potasio: 200 mg/ml de tio-
cianalo de potasio en agua
Solucin de cloruro estannoso al 20%: 400 mg/ml de
cloruro estannoso en solucin de cido clorhdrico 6,5
N y agua (1 :4). [NOTA--Disolver primero en cido clor-
hdrico 6,5 N y calentar la solucin hasta que se di-
suelva el cloruro estannoso. Luego, diluir con agua a
volumen.]
USP 38
Solucin de cloruro estannoso diluida: Solucin de clo-
ruro eslunnrnu al 20% y agua (l :24). Preparar esta solu-
cin en el momento de su uso.
Solucin e~tndM: 20 g/rnl de rnoiibdeno, a partir de
molibdato de amonio en agua
Muestra: Retirar el contenido de un nmero contado
de Cpsulas cortando para abrir las Cpsulas. Mezclar y
determinar el peso de los contenidos. Transferir una
cantidad de contenido de las Cpsulas, equivalente a
una cantidad nominal de 40 mg de molibdeno, a un
vaso de precipitados de 200 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometria y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analtica: 465 nm
Blanco: Alcohol amlico
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 ml de Solucin estndar a
sendos vasos de precipitados de 200 ml. Agregar
20 ml de cido ntrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de reloj
y calentar a ebullicin lentamente sobre una placa de
calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente. Agregar 6 ml de cido perclrico, cu-
brir los vasos de precipitados con un vidrio de reloj y
continuar el calentamiento hasta que la digestin sea
completa, lo cual se indica cuando el lquido se torna
incoloro o amarillo plido. Evaporar las soluciones en
los vasos de precipitados hasta sequedad. Enjuagar las
paredes de los vasos de precipitados y los vidrios de
reloj con agua, y agregar ms agua para completar
50 ml en cada vaso de precipitados. Calentar a ebulli-
cin suave la solucin acuosa durante unos pocos mi-
nutos. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar 2 gotas
de anaranjado de metilo SR y neutralizar con hidroxido
de amonio. Agregar 8,2 ml de cido clorhdrico.
Transferir cuantitativamente el contenido de los vasos
de precipitados a sendos matraces volumtricos de
100 ml, enjuagar los vasos de precipitados con agua,
transferir los enjuagues a los matraces volumtricos co-
rrespondientes y diluir con agua a volumen. Transferir
50,0 ml de cada solucin a embudos de separacin.
Agregar a cada embudo de separacin 1,0 ml de Solu-
cin de f/uoruro de sodio, 0,5 ml de Solucin de sulfato
ferroso, 4,0 ml de Solucin de tiocianato de potasio,
1,5 ml de Solucin de cloruro estannoso al 20% y
15,0 ml de alcohol amlico, y agitar los embudos de
separacin durante 1 minuto. Dejar que las capas se
separen y desechar las capas acuosas. Agregar 25 ml
de Solucin de cloruro estannoso diluida a cada embudo
de separacin y agitar suavemente durante 15 segun-
dos. Dejar que las capas se separen y desechar las ca-
pas acuosas. Transferir la capa orgnica de cada em-
budo de separacin a un lubo de centrfuga y
centrifugar a 2000 rpm durante 1 O minutos. Determi-
nar las absorbancias de las fases orgnicas de la Solu-
cin estndar y la Muestra, y corregir con el Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado ce (Au/ A1) X [(V X Cs)/ Mu] X 100
Au = absorbancia de la solucin a partir de la
Muestra
A1 = absorbancia de la solucin a partir de la
Solucin estndar
V = volumen de la Solucin estndar analizada,
2,0 ml
C = concentracin de molibdeno en la Solucin
estndar (g/ml)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(pg)
USP 38
Criterios de aceptacin: 90,0% 160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
FSFORO, Mtodo 7
Solucin de cido sulfrico: Agregar cU1dadosamente
cido ~ulfrico al agua (37,5.100) y mezclar.
Solucin de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solucin de cido sulfrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solucin de cido sulfrico a volumen.]
Solucin de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar 1 gota de cido sulfrico por 100 ml
de solucin.
Solucin de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solucin madre del estndar de fsforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobsico de potasio, previamente
secado a 105 durante 2 horas y almacenado en un
desecador, y transferir a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en agua, agregar 6 ml de cido sul-
frico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1000 g/ml de fsforo.
Solucin estndar: 20 g/ml de fsforo, a partir de So-
lucin madre del estndar de fsforo diluida con agua
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas
cortando para abrir las Cpsulas. Mezclar y determinar
el peso de los contenidos. Transferir una cantidad de
contenido de las Cpsulas, equivalente a una cantidad
nominal de 100 mg de fsforo a 25 ml de cido ntrico
y digerir sobre una placa de calentamiento durante 30
minutos. Agregar 15 ml de cido clorhdrico y conti-
nuar la digestin hasta que cese la produccin de hu-
mos marrones. Enfriar y transferir el contenido del ma-
traz a un matraz volumtrico de 500 ml con ayuda de
pequeas porciones de agua. Diluir con agua a volu-
men. Transferir 10,0 ml de esta solucin a un matraz
volumtrico de 100 ml y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analtica: 650 nm
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Transferir a tres matraces volumtricos diferentes de
25 ml, 5,0 ml de la Solucin estndar, de la Solucin
muestra y de agua para proporcionar el blanco. Agre-
gar a cada uno de los tres matraces 1,0 ml de Solu-
cin de molibdato de amonio, de Solucin de hidroqui-
nona y de Solucin de bisulfito de sodio, y agitar por
rotacin suave hasta mezclar. Diluir el contenido de
cada matraz con agua a volumen y dejar los matraces
en reposo durante 30 minutos. Determinar las absor-
bancias de las soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fs-
foro (P) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (Au/A1) x (Cs/Cu) x 100
Au = absorbancia de la Solucin muestra
A1 = absorbancia de la Solucin estndar
Cs = concentracin de fsforo en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de fsforo en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0% 125,0% de la cantidad
declarada de fsforo (P)
POTASIO
Solucin estndar de potasio: 100 g/ml de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
1 ose durante 2 horas, en agua.
Solucin madre del estndar: 1 O ~tg/ml de potasio, a
partir de Solucin estndar de potasio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Suplt"mPnto\ DiPtticos /Vitaminas Hidrosolubles 6753
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 ml de Soluun madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 1 00 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 r~ a volumen para
obtener >oluciones que contengan 0,5; 1 ,O; 1,5; 2,0 y
2,5 ~/ml de potasio.
Solucion de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 1.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 1, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una cantidad nominal de
1 g/ml de potasio y omitir el uso de Solucin de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Potasio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de po-
tasio a 766,5 nm
Blanco: Agua
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
potasio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de po-
tasio (K) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de potasio en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de potasio en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
SELENIO, Mtodo 1
Diluyente: Preparar segn se indica en Molibdeno, M-
todo 1.
Solucin estndar de selenio: [PRECAUCIN-El selenio
es txico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1000 ml y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una concentracin de 1000
g/ml de selenio.
Solucin madre del estndar: 100 g/ml de selenio, a
partir de Solucin estndar de selenio diluida con agua
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 ml de
Solucin madre del estndar a sendos matraces volum-
tricos de 100 ml, y agregar 5,0 ml de cido perclrico
a cada matraz. Calentar a ebullicin suave las soluciones
durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada una con Diluyente a volumen para obtener
soluciones que contengan 5,0; 10,0 y 25,0 g/ml de
selenio.
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas
cortando para abrir las Cpsulas. Mezclar y determinar
el peso de los contenidos. Transferir una cantidad de
contenido de las Cpsulas, equivalente a una cantidad
nominal de 1000 g de selenio, a un matraz adecuado
y agregar 12 ml de cido ntrico. [NOTA-Se puede va-
riar el volumen de cido ntrico para asegurar que el
polvo se disperse uniformemente.] Agitar el matraz por
rotacin suave cuidadosamente hasta dispersar la mues-
tra de prueba. Someter a ultrasonido durante 1 O minu-
tos o hasta que la muestra de prueba se disuelva por
6754 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietticos
completo. Calentar a ebullicin suave la solucin du-
rante 15 minutos y enfriar a temperatura ambiente.
Agregar cuidadosamente 8 ml de cido perclrico al
matraz, calentar e! matr.:u hJsta que aparezcan humos
de cido perclrirn y agitar el matraz por rotacin
suave para d1s1par los humos. Repetir el calentamiento y
la agitacin por rotacin suave hasta que los humos
aparezcan de nuevo. Enfriar a temperatura ambiente.
Transferir el contenido del matraz a un matraz volum-
trico de 50 ml con ayuda de Diluyente y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Selenio, de ctodo hueco
llama: Aire-acetileno
longitud de onda analtica: Lnea de emisin de sele-
nio a 196,0 nm
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20:1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, e en g/ml, de
selenio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de selenio en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de selenio en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
SELENIO, Mtodo 2
Solucin de cido clorhdrico: cido clorhdrico diluido
con a_gua (1 en 1 O)
Solucion de hidrxido de amonio al 50%: Hidrxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/ml de edetato disdico y 25 mg/ml
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disdico en una porcin de agua,
agregar clorhidrato de hidroxilamina y luego diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diaminonaftaleno
a un embudo de separacin de 250 ml y agregar
200 ml de cido clorhdrico O, l N. Lavar la solucin
con tres porciones de 40 ml de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solucin en un frasco
marrn y cubrir la solucin con una capa de 1 cm de
ciclohexano. Esta solucin permanece estable durante 1
semana si se almacena en un refrigerador,
Solucin madre del estndar: [PRECAUCION-EI selenio
es txico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1000 ml y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una solucin con una concen-
tracin de 1000 g/ml de selenio. Diluir un volumen
de la solucin con cido clorhdrico O, 125 N hasta ob-
tener una concentracin de 2,0 g/ml de selenio.
Solucin estndar: Transferir 10,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz con tapn de vidrio. Agre-
gar 1 mL de cido perclrico y 1 ml de Solucin de
cido clorhdrico, y diluir con agua hasta 20 ml.
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas
cortando para abrir las Cpsulas. Mezclar y determinar
USP 38
el peso de los contenidos. Transferir una cantidad de
contenido de las Cpsulas, equivalente a una cantidad
nominal de 20 g de selenio, a un matraz adecuado.
Ay1t::ydr 1 O ml de cido ntrico y entibiar suavemente
sobre una placa de calentamiento Continuar calen-
tando hasta que la reaccin inicial de cido ntrico haya
desaparec~do y luego agregar 3 ml de cido perclrico.
[PRECAUCION-Tener cuidado en esta etapa debido a
que la reaccin del cido perclrico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparicin de humos blancos de cido perclrico
o hasta que la digestin comience a tornarse oscura.
Agregar 0,5 ml de cido ntrico y continuar el calenta-
miento, agregando cantidades adicionales de cido n-
trico si se presenta un oscurecimiento adicional. Digerir
durante 1 O minutos despus de la primera aparicin de
humos de cido perclrico o hasta que la digestin se
torne incolora. Enfriar el matraz. Agregar 2,5 ml de So-
lucin de cido clorhdrico y devolver el matraz a la placa
de calentamiento para expulsar los residuos de cido
ntrico. Calentar la mezcla durante 3 minutos despus
de que comience a hervir. Enfriar el matraz a tempera-
tura ambiente y diluir con agua hasta 20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV
Celda: 1 cm
longitud de onda analtica: 380 nm
Blanco: 1 ml de cido perclrico y 1 ml de Solucin
de cido clorhdrico, diluido con agua hasta 20 ml
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Tratar la Solucin muestra, la Solucin estndar y el
Blanco segn se indica a continuacin. Agregar 5 ml
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotacin
suave para mezclar. Ajustar la solucin en cada ma-
traz con Solucin de hidrxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 0, 1. Agregar 5 ml de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotacin suave para mezclar. Co-
locar los matraces en un bao de agua mantenido a
50 y equilibrar durante 30 minutos, teniendo cui-
dado de cubrir los matraces para protegerlos de la
luz. Enfriar a temperatura ambiente y transferir el
contenido de cada matraz a sendos embudos de se-
paracin. Transferir 10,0 ml de ciclohexano a cada
embudo de separacin y extraer vigorosamente du-
rante 1 minuto. Desechar la capa acuosa. Transferir la
capa de ciclohexano a un tubo de centrfuga y centri-
fugar a 1 000 rpm durante 1 minuto para eliminar el
agua remanente. Determinar las absorbancias de las
soluciones a partir de las Muestras contra la solucin
obtenida a partir del Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (Au! A1) x [(V x C1)/ M11] x 100
Au = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solucin muestra
As = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solucin estndar
V = volumen de la Solucin madre del estndar
usado para preparar la Solucin estndar,
10 ml
Cs = concentracin de selenio en la Solucin madre
del estndar (g/ml)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solucin
muestra (g)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
CINC, Mtodo 1
Solucin estndar de cinc: 1000 g/ml de cinc, a par-
tir de xido de cinc disuelto en cido clorhdrico 5 M
(3,89 mg/ml) y diluida con agua hasta el volumen fi-
usr 38
nal. [NOTA--Disolver en cido clorhdrico 5 M enti-
bidr1du, '>i Ueld 11LeSario, enfriar, j luego diluir hasta CI
volumen inal.J
Solucin madre del estndar: 50 w/mL de cinc, a
partir de Solucin estndar de ciw rli[;rirla ron rirlo
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 1 00 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 1 25 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 g/
mL de cinc.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 2 g/mL de cinc y omitir el uso de Solucin de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cinc, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cinc
a 21 3,8 IJm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
cinc en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/C11) x 100
C = concentracin medida de cinc en la Solucin
muestra (~/mL)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
BORO, NQUEL, ESTAO y VANADIO, Mtodo 7; CALc19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, fOSFORO
y CINC, Mtodo 2; MOLIBDENO y SELENIO, Mtodo 3
Solucin madre de agua regia: Preparar una mezcla
de cido clorhdrico y cido ntrico (3: 1) agregando el
cido ntrico al cido clorhdrico. [NOTA-Ventilar peri-
dicamente la solucin en una campana de extraccin
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solucin madre de
agua regia y agua (1 :9) agregando un volumen de Solu-
cin madre de agua regia a dos volmenes de agua.
Diluir con ms agua a volumen y mezclar bien.
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1 000 mg/L de itrio en solucin de cido ntrico al
5% (v/v) y 1000 mg/L de escandia en solucin de cido
ntrico al 5% (v/v) con Diluyente (1 :1 :198), y mezclar.
Solucin madre del estndar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [No r A-Slo es necesario incluir los minerales
de inters en la solucin.] Usando soluciones estndar
de elementos (individuales o combinados) disponibles
comercialmente en solucin de cido ntrico al 5% (v/
v), pipetear y transtenr la cantidad apropiada de solu-
cin estndar de elementos a un matraz volumtrico y
diluir con solucin de cido ntrico al 5% (v/v) hasta
obtener una solucin con concentraciones finales de
aproximadamente 1 000 mg/L de calcio, 100 mg/L de
cobre, 250 mg/L de hierro, 500 mg/I de magnesio,
Suplemento' ()1ptPtirm I Vitnminas Hidrosolubles 6755
100 mg/L de manganeso, 800 mg/L de fsforo y
250 mg/L de cinc.
Solucin madre del estndar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTi, Slo es necesari0 incl1 rir lm miner;ile<; rle
inters en la solucin.] Usando soluciones estndar de
elementos (1nd1v1duaies o combinados) disponibles Lu-
mercialmente en solucin de cido clorhdrico al 20%
(v/v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de so-
lucin estndar de elementos a un matraz volumtrico
y diluir con solucin de cido clorhdrico al 20% (v/v)
hasta obtener una solucin con concentraciones finales
de aproximadamente 200 mg/L de boro y 1 00 mg/L de
cromo, de molibdeno, de nquel, de selenio, de estao
y de vanadio.
Soluciones estndar: Preparar una mezcla de Solucin
madre del estndar 7 y Solucin madre del estndar 2,
segn se requiera, en Diluyente para preparar una curva
de calibracin de seis puntos que abarque el intervalo
de concentracin de cada mineral de inters.
Solucin muestra: Pesar, luego transferir 5 Cpsulas a
un matraz volumtrico de 250 ml, y calentar suave-
mente sobre una placa de calentamiento hasta que el
contenido empiece a liberarse. Agregar cuidadosamente
25 mL de Solucin madre de agua regia en incrementos
de 5 mL y agitar por rotacin suave. Calentar, continuar
agitando por rotacin suave hasta que las Cpsulas se
disuelvan en el cido, retirar inmediatamente de la
fuente de calor y agregar 150 mL de agua. Enfriar y
diluir con agua a volumen. Filtrar aproximadamente
30 mL en un tubo de centrfuga usando un filtro de
nailon para jeringa con un tamao de poro de 5 m.
Realizar los ajustes necesarios usando Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometra de emisin de plasma inducti-
vamente acoplado, usando un espectrmetro ajustado
para medir la emisin de cada mineral de inters apro-
ximadamente a la longitud de onda correspondiente.
[NOTA-Las condiciones operativas se pueden desarro-
llar y optimizar basndose en las recomendaciones del
fabricante. Se debe demostrar mediante experimentos
que las longitudes de onda seleccionadas proporcio-
nan la especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud
y precision suficientes.]
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solucin de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta segn se indica en el Anlisis.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar la emisin de cada mineral de inters en las
Soluciones estndar y la Solucin muestra con un sis-
tema de plasma inductivamente acoplado usando Dilu-
yente como blanco. Graficar la emisin de las Solucio-
nes estndar en funcin de las concentraciones, en
mg/L, de los minerales de inters y trazar la recta que
mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir de la
grfica as obtenida, determinar la concentracin, C,
en mg/L, de cada mineral de inters en la Solucin
muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cada
mineral:
Resultado= c >< (V/W) X F X (Cw/L) X 100
C = concentracin medida del elemento pertinente
en la Solucin muestra (mg/L)
V = volumen de la Solucin muestra (L)
w = reso rle la muestra (mg)
F = factor de dilucin de la Solucin muPstra
Cw = peso promedio por Cpsula (mg)
L = cantidad declarada del elemento
pertinente/Cpsula (mg/Cpsula)
6756 Vitaminas Hidrosoluhles ! Suplernentos Dietticos
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de las canti-
rfaries declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fsforo (P), potasio
(K) y rinr (7n); y qo, 00/0-160,0% de !as cantidades de-
claradas de boro (B), cromo (Cr), flor (F),. yodo (1),
mulibde110 (Mo), nquel (Ni), selenro (Se), estao (Sn) y
vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS,
Disolucin (2040): Cumplen con los requisitos de
Disolucin.
VARIACIN DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETTICOS (2091 ): [NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 102 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmone!la spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Cp-
sulas de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales. La eti-
queta tambin indica la cantidad de cada vitamina y mi-
neral en trminos de unidades mtricas por unidad de
dosificacin y, cuando sea necesario, la forma qumica de
vitamina presente, e indica adems la forma salina del
mineral usado como la fuente de cada elemento. Cuando
se proporciona ms de un mtodo de valoracin para
una vitamina o mineral en particular, el etiquetado indica
el mtodo de valoracin con el que cumple el producto
nicamente si no se usa el Mtodo 7.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Biotina USP
ER Pantotenato de Calcio USP
ER Cianocobalamina USP
ER Qexpantenol USP
ER Acido Flico USP
ER Niacina USP
ER Niacinamida USP
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
ER Riboflavina USP
ER Fluoruro de Sodio USP
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Vitaminas Hidrosolubles con Minerales,
Solucin Oral
DEFINICIN
La Solucin Oral de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales
contiene una o ms de las siguientes vitaminas hidrosolu-
bles: Cianocobal9mina, Niacina o Niacinamida, Dexpante-
nol o Pantenol, Acido Pantotnico (como Pantotenato de
Calcio o Pantotenato de Calcio Racmico), Clorhidrato de
Piridoxina, Riboflavina o Riboflavina-5'-Fosfato Sdico y
Clorhidrato de Tiamina o Mononitrato de Tiamina; y uno
o ms minerales derivados de sustancias generalmente re-
conocidas como seguras, presentando uno o ms de los
siguientes elementos en forma ionizable: yodo, hierro,
magnesio, manganeso y cinc. La Solucin Oral contiene
no menos de 90,0% y no ms de 250,0% de la cantidad
declarada de tiamina (C 12H11CIN40S) como clorhidrato de
tiamina o mononitrato de tiamina; no menos de 90,0% y
no ms de 1 50,0% de las cantidades declaradas de pan-
totenato de calcio (C1sH12CaN2010), dexpantenol o pante-
USP 38
nol (CQH1,,NO,), niacina (C,H"NO;) o niacinamida
(C,H,,N;O), clorhidrato de pirrdoxrna (CxH11N01 HCI) y ri-
boflavina (C 11H2uN.,O,,) o riboflavina-5'-fosfato sdico
(C11H2ohi4NctgP); 110 menos de 90,0% y no mas de
450,0% de la cantidad d0clarada de cianocobalamina
(C"1Hx8CoN14014P); no menos de 90,0% y no ms de
160,0% de la cantidad declarada de yodo (I); y no menos
de 90,0% y no ms de 125,0% de las cantidades declara-
das de hierro (Fe), magnesio (Mg), manganeso (Mn) y
cinc (Zn).
CONTENIDO
cione ms de un mtodo de valoracin para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los mtodos especificados, declarando el mtodo
usado en el etiquetado nicamente si no se usa el Mtodo
7.]
CIANOCOBALAMINA
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este rrocedimiento.]
Solucin madre de estndar: 1,0 g/mL, a partir de
ER Cianocobalamina USP en alcohol al 25%. Almacenar
en un refrigerador.
Solucin estndar: Diluir un volumen adecuado de So-
lucin madre del estndar con agua hasta un volumen
medido tal que despus del periodo de incubacin se-
gn se describe en el Anlisis, la diferencia en la trans-
mitancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 mL
de la Solucin estndar sea no menor que la correspon-
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
clulas. Esta concentracin por lo general est entre
0,01 ng/mL y 0,04 ng/mL de la Solucin estndar. Pre-
parar esta solucin en el momento de su uso para cada
valoracin.
Solucin muestra: Transferir a un vaso apropiado un
volumen medido con exactitud de Solucin Oral que se
supone contiene 1,0 g de cianocobalamina por cada
mL de la Solucin Oral tomada y 25 mL de una solu-
cin de extraccin acuosa preparada justo antes de su
uso que contiene, por cada 1 00 mL, 1,29 g de fosfato
di bsico de sodio, 1, 1 g de cido ctrico anhidro y 1,0 g
de metabisulfito de sodio. Autoclavar la mezcla a 121
durante 1 O minutos. Dejar que sedimente cualquier par-
tcula del extracto sin disolver y filtrar o centrifugar, si
fuera necesario. Diluir una alcuota de la solucin trans-
parente con agua hasta obtener una solucin final que
contenga una actividad de vitamina B12 equivalente
aproximadamente a la de la Solucin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
100 g de casena exenta de vitaminas con 500 mL de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 -t O, 1, y diluir con
agua hasta 1 000 mL. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 O. Fil-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O mL de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolue110 en un refrigerador.
Solucin de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70, agregar 6,0 mL de
hidrxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sli-
USP 38
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 mL.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobsico
de potasio y 1O g de fostato d1bsico de potasio en
agua par d ublener 200 mL, y agregar 2 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar esta solucin bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 mL, y agregar 2 gotas de cido clorhdrico.
Almacenar esta solucin bajo tolueno.
Solucin de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solucin vitamnica A: Disolver 1 O mg de riboflavina,
1 O mg de clorhidrato de tiamina, 1 00 pg de biotina y
20 mg de niacina en cido actico 0,02 N para obtener
400 mL. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion vitamnica B: Disolver 20 mg de cido p-ami-
nobenzoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de piri-
doxal, 8 m,9, de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
de cido folico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3:1) para obtener 400 mL. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz.
Solucin madre del medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente frmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga los
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya segn se indica en el etiquetado, produzca un me-
dio comparable al obtenido de la frmula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado en la Tabla
1, disolviendo cuidadosamente Cistina y Triptfano en
cido clorhdrico antes de agregar las siguientes ocho
soluciones. Agregar 100 mL de agua a la soluciqn re-
sultante y disolver Dextrosa, Acetato de sodio y Acido
ascrbico. Filtrar, si fuera necesario. Agregar Solucin de
polisorbato 80, ajustar con hidrxido de sodio 1 N a un
pH de 5,5-6,0 y diluir con Agua Purificada hasta
250 mL.
Tabla 1
L-Cistina o 1 (]
L-Triptfano o 05 (]
cido clohdrico 1 N 10 ml
Solucin de adenina-nuanina-uracilo 5 ml
Solucin de xantina 5 ml
Solucin vitamnica A 10 ml
Solucin vitamnica B 10 ml
Solucin salina A 5 ml
Solucin salina B 5 ml
Solucin de asoaraaina 5 ml
25 ml
Solucin de hidrolizado cido de casena
Dextrosa anhidra ----------------
10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
cido ascrbico 1a
Solucin de oolisorbato 80 5 ml
Preparacin de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
cin analtico en el sobrenadante y filtrar, con ayuda de
presin reducida, a travs de una capa del coadyuvante
de filtracin. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: [NOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos ingredientes
siempre que, cuando se reconstituya segn se indica en
el etiquetado, produzca un medio equivalente al obte-
Suplementos O;etticos /Vitaminas Hidrosolubles 6757
nido de la frmula provista en este procedimiento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadurd, 0,75 y de pep-
tona seca, 1,0 g de Dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monob)ilo cie pold)iu e11 0-70 mL de agua. Agregar
1 O ml de Preparacin de jugo de tomate y 1 mL de Solu-
cin de polisorbato 80. Ajustar con hidrxido de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua hasta 100 mL.
Colocar porciones de 1 O mL de la solucin en tubos de
ensayo y tapar con algodn. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 durante 15 minutos.
Enfriar tan rpido como sea posible para evitar la for-
macin de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensin: Diluir un volumen medido de
Solucin madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O mL del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar segn se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacillus /eichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 mL de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un bao de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de 1 O mL de
la solucin caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15 mi-
nutos y dejar que los tubos se enfren en posicin verti-
cal. Inocular tres o ms de los tubos, sembrando por
puncin un cultivo puro de Lactobaci/lus leichmannii. 1
lNOTA-Antes de usar un cultivo recientemente prepa-
rado por primera vez en esta valoracin, realizar no me-
nos de 1 O transferencias sucesivas del cultivo en un pe-
riodo de 2 semanas.]
Incubar durante 16-24 horas a una temperatura entre
30 y 40 mantenida termostticamente con un mar-
gen de 0,5. Almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por puncin al menos tres
veces por semana y no usarlos para preparar el lnculo
si tienen ms de 4 das de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias de una o dos veces al da, del cultivo por
puncin, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el lnculo lquido 2-4 horas des-
pus de la inoculacin. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados errticos.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobaci/lus leichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de clulas del Cultivo madre de Lactobacillus leich-
mannii a dos tubos estriles que contengan cada uno
1 O mL de Medio de cultivo. Incubar estos cultivos du-
rante 16-24 horas a una temperatura entre 30 y 40
mantenida termostticamente con un margen de 0,5.
Centrifugar los cultivos bajo condiciones aspticas y de-
cantar el sobrenadante. Suspender las clulas del cultivo
en 5 mL de Medio de suspensin estril y mezclar.
Usando Medio de suspensin estril, ajustar el volumen
de manera que una dilucin 1 en 20 en solucin salina
SR produzca una transmitancia del 70% cuando se lee
en un espectrofotmetro adecuado ajustado a una lon-
gitud de onda de 530 nm, equipado con una celda de
1 O mm, y leer contra el set de solucin salina SR a una
transmitancia del 1 00%. Preparar una dilucin 1 en 400
de la suspensin ajustada usando Solucin madre de me-
dio basal estril. [NOTA-Esta dilucin se puede alterar,
cuando sea necesario, para obtener la respuesta de
prueba deseada.] La suspensin de clulas as obtenida
e5 el fnculo.
Calibracin del espectrofotmetro: Revisar peridica-
mente la longitud de onda del espectrofotmetro,
usando una ceida de longitud de onda estndar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
' Se pueden obtener cultivos puros de /.actobocillus ieichmoni1 (listados como
Loctohociiius dPihrueki1) como N 7830 en ATCC, 10801 University Blvd., lv1a-
nassas, VA 20110-2209 (www.atcc.orci).
6758 Vitamina<; Hirlrmoluhles / Suplementos Dietticos
calibrar el especlrofotrnetro con agua para fijar el 0%
Y. el 100% de tr ..rnsrnitzmcia, y con la longitud de onda
aJU'>tada a 530 nrn.
Anlisis
Muestras Solucin e.1/Inlor v 'nlurinn rn11estra
Debi.do a la alta sensibilidad' del organis~o de prueba
a diminutas cantidades de actividad de vitamina 8 12 y
a trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20. m.m x 150 mm de vidrio duro y dems
material de v1dno necesario, se deben limpiar meticu-
losamente ~sando mtodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250 durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solucin estndar.
Agr~gar. a .cada uno de estos tubos y a cuatro tubos
vac1os similares 5,0 ml de Solucin madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 ml de la Solucin mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solucin madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml. Co-
!ocar un set compl~to de tubos de Estndar y muestra
Juntos en una gra~1lla para ~~bos y el set duplicado en
una segunda gradilla o secc1on de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminacin bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 durante 5
minut?s, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no mas de 1 O minutos precalentando el autoclave si
fuera necesario. Enfriar tan rpido como sea posible
para evitar la formacin de color que resulta del sobre-
calentamiento ~el medio. Tomar precauciones para
mantener la uniformidad de las condiciones de esterili-
zacin y enfriamiento durante toda la valoracin de-
bido a que colocar los tubos demasiado cerca o 'si se
sobrecarga el autoclave puede ocasionar variaciones en
la velocidad de calentamiento.
Agregar aspticamente 0,5 ml de lnculo a cada tubo
as p_reparado, e.~cepto, a dos de los cuatro que no
contienen Soluoon estandar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y
40u mantenida termostticamente con un margen de
0,5, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80 durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura amb~ente: Despus de agitar su contenido,
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 7
leer la transm1tanc1a a 530 nm cuando se alcance un
estado estacionario. El estado estacionario se observa
unos pocos segundos despus de la agitacin cuando
la lestura se .rr:ianteng~ constante durante 30 segundos
o mas. Perm1t1r aproximadamente el mismo intervalo
de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la diferen_c}a es mayor de 5% o si hay evidencia de
contaminac1on con un microorganismo extrao, no to-
mar en cuenta el resultado de la valoracin.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoracin si la pendiente de la curva estndar in-
dica un problema con la sensibilidad.
Clculo: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cualquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estndar calcular
la respuesta a partir de la suma de los valore; duplica-
dos de las transmitancias CI:s) como la diferencia y=
2,00 - I:,. Graficar esta respuesta en la ordenad~ del
papel milimetrado en funcin del logaritmo de los ml
de la Solucin estndar por tubo sobre la abscisa
u,sa~do para la ordenada una escala aritmtica e{ loga-
ntm1ca, la que proporcione la mejor aproximacin a
USP 38
una lne_a recta. Trazar la recta o la curva de regresin
que rne1or se auste a los puntos graticados.
Calcular la respuesta, y = 2,00 - Lu, sumando las dos
lrammitancias (2-11) para cada nivel de la Solucin
muestra. Leer, a partir de la curva e'>lindar, el loga-
ritmo del volumen de la Solucin estndar correspon-
diente a cada uno de los valores de y comprendidos
dentro del intervalo entre los puntos extremos grafi-
cados para el Estndar. Restar de cada logaritmo as
obtenido el logaritmo del volumen, en ml, de la So-
lucin muestra para obtener la diferencia, X, de cada
nivel de dosificacin. Promediar los valores de X para
cada uno de los tres o ms niveles de dosificacin
para obtener X, que es i$Jual al logaritmo de potencia
relativa, M', de la Solucion muestra.
Determinar la cantidad, en g, de cianocobalamina
(C63HssCoN 14014P) en la porcin de Solucin Oral
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = g de cianocobalamina que se supuso estaban
presentes en la porcin de Solucin Oral
tornada
Cakular el porcentaje de la cantidad declarada de
c1anocobalamina en la porcin de Solucin Oral
tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 100
N = cantidad nominal de cianocobalarnina en la
porcin de Solucin Oral tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nacin por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos log~rit_i:!!os de las potencias M es no ms de 0,08,
su media,_ M, es el logaritmo de la potencia valorada
d~I maten~! de prueba (ver Diseo y Anlisis de Valora-
o,on.es 810log1cas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
L1m1tes de la Potencia, Actividad de Vitamina 81 2). Si las
dos determinaciones difieren en ms de 0,08, realizar
una o ms determinaciones adicionales. A partir de la
m~dia de dos o ms valores de M que no difieran en
rr:i?s de O, 15, c~lcular la potencia media de la prepara-
oon que se esta valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-450,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C61HssCoN 1401 4 P)
Fase mvil: Metanol y fosfato monobsico de sodio O 2
M (3:97). Ajustar con cido fosfrico 1,7 M a un pH de
3,2O,1.
Solucin estndar: 80 g/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Fase mvil
Solucin de aptitud del sistema: 80 g/ml de ER Pan-
tenol Racmico USP en Fase mvil. Mezclar la solucin
resultante y Solucin estndar (1: 1 ).
Solucin muestra: Equivalente a 80 g/ml de pantote-
nato de calcio, a partir de Solucin Oral, en Fase mvil
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 4 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 rnl/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,5 entre pantenol y pan-
totenato de calcio, Solucin de aptitud del sistema
Factor de asimetra:. No ms de 2,0 para los picos de
pantotenato de calcio y de pantenol Solucin de apti-
tud del sistrma '
lJSP 38
Desviacin estlndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
cin estndw
Anlisis
Muestra~: Suiuuu11 <'C>iu11Jw y 5oluc.n mu2stra
CalrulJr e! porcentaje de !a cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C 1sH pCaN;O ,,,) en la porcin
de Solucin Oral tomada:
Resultado = (ru/r1) >< (C/C,) x 100
ru = rea del pico de pantotenato de calcio de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de pantotenato de calcio de la
So/uoon estndar
C1 = concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la Solucin muestra
(mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (CrnH,2CaN2010)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 2
Solucin madre del estndar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentxido de fsforo y
protegido de la absorcin de humedad durante la pe-
sada, en 500 ml de agua en un matraz volumtrico de
1000 ml. Agregar 1 O ml de cido actico 0,2 N y
1 00 ml de solucin de acetato de sodio (1 en 60), y
diluir con agua a volumen para obtener una concentra-
cin de 50 g/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin estndar: En el da de la valoracin, diluir un
volumen de Solucin madre del estndar con agua hasta
obtener una concentracin de 0,01-0,04 g/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentracin exacta
es tal que las respuestas obtenidas segn se indica en el
Anlisis, usando 2,0 y 4,0 ml de Solucin estndar, estn
dentro de la porcin lineal de la curva de respuesta en
funcin del logaritmo de la concentracin.
Solucin muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solucin Oral, equivalente a 50 mg de
pantotenato de calcio, a un matraz volumtrico de
1000 ml que contenga 500 ml de agua. Agregar
1 O ml de cido actico 0,2 N y 100 ml de solucin de
acetato de sodio (1 en 60), diluir con agua a volumen,
y filtrar. Diluir un volumen m_edido de esta so_lucin
cuantitativamente, y en diluciones sucesivas s1 fuera ne-
cesario, con agua hasta obtener una solucin con apro-
ximadamente la misma concentracin que la de la Solu-
cin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
1 00 g de casena exenta de vitaminas con 500 ~L de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin _co_n hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un re-
frigerador a una temperatura de no menos de 1O. Fil-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70-80" y aqreqar cido clorhdrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los solidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un refrigerador a una temperatura de
no menos de 1 O
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
Suplemente>' {)iptptirm .1 Vit<lrninas Hidrosolubles 6759
cido clorh1drico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar b<:ijo tolucno en un retrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bJto 80 en Jlcoho1
Soludn ele riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 g/ml de riboflav1na.' _O g;m,L_de clo;hidralu
de tiamina y 0,04 pg/ml de b1ot1na en ac1do acet1co
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
proteger de la luz.
Solucion de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O g/ml de cido p-ami~oben
zoico, 50 g/ml de niacina y 40 g/ml de clor~1drato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador. , .
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobas1co
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio, en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de ac1do
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sultato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
O 5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
ment mezcladas, segn la Tabla 2 y ajustar con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con agua
hasta 250 ml.
Tabla 2
Solucin de hidrolizado cido de casena 25 mL
Solucin de cistina-lriotfano 25 ml
Solucin de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 q
Acetato de sodio anhidro 5 q
Solucin de adenina-guanina-uracilo
Solucin de riboflavina clorhidrato de tiam1na-bioti-
na ----- - -----------
---
---- -
l 5 ml
__ __21Tl_l___
Solucin de cido p-arninobenzoico-niacina-
,__.Qg rh icJ.rJcCJ_{]_e_girj<jgxi na __ __ _ --- -- -------- --------- 1 5 rnl
-----~--
Solucin ;alina A 5 rnl
Solucin salina B 5 rnl
1 1
Cultivo madre de Lactobaci/lus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 1 00 ml de agua; agre-
gar 500 mg de dextrosa anhidra, 500 mg de acetato de
sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mezcla en
un bao de vapor, mezclando, hasta que se di,suelva el
agar. Agregar porciones de 1 O ml de la soluc1on ca-
liente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los tubos, este-
rilizar en un autoclave a 121 ,, durante 15 minutos y
dejar que los tubos se enfren en posicin vertical. Ino-
cular tres o ms de los tubos, sembrando por puncin
un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 2 incubando
durante 16-24 horas a una temperatura entre 30 y 3 7
mantenida termostticamente con un margen de 0,5u.
Almacenar en un refrigerador. Preparar un cultivo re-
ciente por puncin del cultivo madre~ una v_ez por se-
mana y no usarlo para preparar el Inoculo s1 el cultivo
tiene r1as de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,2 ~tg de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos dr ensayo que contengan 5,0 ml de
Solucin madre d!' medio buso/. Tapar los tubos rnn al-
godn, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15
minutos y enfriar. .
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspens1on conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
,iernpr t" que produzca un lncu/o comi?arable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
_, ATCC N' 8014 Ps adecuado Eslci e epa se con oda anteriormente como 1oc-
toboci/fu\ arabmosus
1 /-).
6760 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementm Dietticos
rencia de clula) del Cultivo madre de Laclobacillus plan-
tarum a u11 luoo e\trii que contenga 1 O mL de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30 y 1 T mantenida termostti
ca mente con un margen de 0,5 '. La suspensin de
ciuias as obtenida es el Inoculo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solu-
cin, est~ndar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos
vac1os similares 5,0 ml de Solucin madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volmenes de la Solucin muestra correspon-
dientes a tres o ms niveles especificados de la Solu-
cin estndar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucin ma-
dre de medio basal y agua suficiente para obtener
1 O mL. Colocar un set completo de tubos de Estndar
y ml!estra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplrcado en una segunda gradilla o seccin de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la con-
taminacin y esterilizar en un autoclave a 121 du-
rante 5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnculo a
cada_ tubo, excepto a 9os de los cuatro tubos que no
contrenen Soluoon estandar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y
37 mantenida termostticamente con un margen de
_0,,5 hasta que, despus de 16-24 horas de incuba-
cr_on, no se presente un aumento significativo de tur-
brdez en los tubos que contengan el nivel ms alto
de Estndar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la si-
guiente. manera. ~~zclar el contenido de cada tubo y
transferrr a un rec1prente apto para lectura ptica si
fuera necesarro. Leer la transmitancia entre 540 y 660
nm cuando se alcance un estado estacionario. El es-
tado estacionario se observa unos pocos segundos
d~spus de la agitacin cuando la lectura del galva-
nometro, se mante_nga constante durante 30 segun-
dos o mas. Permrtrr aproxrmadamente el mismo inter-
valo de tiempo para la lectura en cada tubo.
C:on la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
rnoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contami-
nacin con un microorganismo extrao, no tomar en
cuenta el resultado de la valoracin.
Clculo: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta segn se indica a continuacin. Para
cada nivel del Estndar, calcular la respuesta a partir
d_e la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cra (I:1) como la diferencia, y= 2,00 - 2: 1. Graficar esta
respu~sta en la ordenada del papel milimetrado en
func1on del logarrtmo de los mL de la Solucin estn-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmtica o logartmica, la que proporcione
la meor aproximacin a una lnea recta. Trazar la recta
o la curva de regresin que mejor se ajuste a los pun-
tos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - 2.:u, sumando las dos
transmitancias (2.:u) para cada nivel de la Solucin
muestra. Leer, a partir de la curva estndar, el loga-
rr~mo del volumen de la Solucin estndar correspon-
drente a ca~a uno de los valores de y comprendidos
dentro del rnterv~lo entre los puntos extremos grafi-
cados para el Estandar. Restar de cada logaritmo as
obtenido el logaritmo del volumen en mL de la So-
lucin muestra para obtener la dife~encia X de cada
nivel de dosificacin. Promediar los valo~es de X para
1
cada uno de los tres o ms niveles de dosificacin
USP 38
para. obte~er X, que es igual al logaritmo de potencia
relativa, M, de la Soluoon muestra.
Determinar la cantidad, en mg, de ER Pantotenato de
Calcio USP cu11e~JJonJ1ente a pantotenato de calero
(CrnH~;-CaN;O,,,) en la porcin de Solucin Oral
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porcin de
Solucin Oral tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1sH12CaN2010) en la porcin
de Solucin Oral tomada:
Resultado = [(antilog M)!N] x 100
N = cantidad nominal de pantotenato de calcio en
. la r;iorcin de ~olucin Ora~ tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repet1r toda la determi-
nacin por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos log~ritmos de las potencias M es no ms de 0,08,
su medra,_ M, es el logaritmo de la potencia valorada
del materr~I de prueba (ver Diseo y Anlisis de Valora-
o,on_es 81olog1cas (11_ l ), El Intervalo de Confianza y los
Limites de la Potenoa). Si las dos determinaciones difie-
ren en ms de 0,08, realizar una o ms determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o ms
valores de M que no difieran en ms de O, 15, calcular
la potencia media de la preparacin que se est
valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN20 10)
DEXPANTENOL o PANTENOL, Mtodo 7
FasE'. m_vil y Sistema c~omatogrifco: Proceder segn
se 1nd1ca en la valoracron de Pantotenato de Calcio M-
~~ 7. I
Solucin estndar: 80 g/mL de ER Dexpantenol USP o
ER Pantenol Racmico USP en Fase mvil. [NOTA-Usar
ER D_expantenol USP para analizar la Solucin Oral que
contiene ?expanteno~ y usar ER Pantenol Racmico USP
para analizar la Solucron Oral que contiene pantenol.]
Solucin de aptitud del sistema: 80 g/mL de ER Pan-
totenato de Calcio USP en Fase mvil. Mezclar la solu-
cin resultante y la Solucin estndar (1 :1).
Solucin muestra: Equivalente a 80 g/ml de dexpan-
tenol o pantenol, a partir de Solucin Oral en Fase
mvil
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
dexpantenol o pantenol (C9H1 9 N0 4) en la porcin de
Solucin Oral tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de dexpantenol o pantenol de la
Solucin muestra
r.1 = rea del pico de dexpantenol o pantenol de la
Solucin estndar
Cs concentracin de ER Dexpantenol USP o ER
=
Pantenol Racmico USP en la Solucin
Pstndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de la Solucin muestra
(mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H 19N0 4 )
DEXPANTENOL o PANTENOL, Mtodo 2
[NOTA-El sig~iente procedimiento tambin ~e aplica a la
det~rm1nac1on del componente dextrgiro de pantenol
racemrco en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
USP 38
cedirniPnto siempre que. cuando se reconstituyan seqn
se indica Le11LJa11 propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dio~ fJ1eparados segun se de~cnbe en este
procedimiento.
Solucin madre del estndar: 800 g/ml de ER Dex-
pantenol USP o 1600 g/ml de ER Pantenol Racmico
USP en agua. Almacenar en un refrigerador, proteger
de la luz y usar dentro de los 30 das. [NOTA-Usar ER
Dexpantenol USP para analizar la Solucin Or.al que
contiene dexpantenol y usar ER Panten.ol Racem1co USP
para analizar la Solucion Oral que contiene pantenol.]
Solucin estndar: En el da de la valoracin, preparar
1,2 g/ml de dexpantenol o 2,4 g/ml d~ pantenol ra-
cmico, a partir de Solucin madre del estandar con
agua.
Solucin muestra: 1,2 g/ml de dexpantenol o 2,4 g/
ml de pantenol, a partir de Solucin Oral en agua
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
1 00 g de casena exenta de vitaminas con 500 n:L de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 ml de agua,
ajustar la solucin con hidrxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 t O, 1, y diluir con agua hasta 1000 ml. Agregar
20 g de carbn activado, mezclar durante 1 hora y fil-
trar. Repetir el tratamiento co.n carbn activado. Alma-
cenar bajo tolueno en un refrigerador a una tempera-
tura de no menos de 10''. Filtrar la solucin si se forma
un precipitado durante el almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 ml de agua, calentar a
75 5 y agregar cido clorhdrico 6 M gota a gota,
mezclando, hasta que los slidos se disuelvan. Enfriar,
diluir con agua hasta 1000 ml y mezclar. Almacenar
bajo tolueno en un refrigerador a una temperatura de
no menos de 1 O.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar, diluir con agua hasta
200 ml y mezclar. Almacenar bajo tolueno en un
refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: Preparar una solucin de riboflavina, clorhidrato
de tiamina y biotina en cido actico 0,02 N que ~on
tenga 20 g/ml de riboflavina! 1.0 g/ml de clorh1.drato
de tiamina y 0,04 g/ml de b1otina. Almacenar ba10 to-
lueno en un refrigerador y proteger de la luz. . pantotenato modificado estril_ de manera que una dilu-
Solucin de cido p-aminobenzoico-niaci11a-clorh1-
drato de piridoxina: Preparar una soluc1on en alcohol
neutro al 25% que contenga 1 O ~tg/ml de cido p-ami.-
nobenzoico, 50 g/ml de niacina y 40 g./ml de clorhi-
drato de piridoxina. Almacenar en un refrigerador ...
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobas1co
de potasio y 25 g de fosfato di bsico de potasio. en
agua para obtener 500 ml. Agregar. 5 gotas de ac1do
clorhdrico y mezclar. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
O 5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno. . .
Solucin de piridoxal-pantotenato de calcio: Disolver
40 mg de clorhidrato de piridoxal y 375 ~tg de pantote-
nalo de calcio en alcohol al 10% para obtener 200 ml
y mezclar. Almacenar en un refrigerador y usar dentro
de los 30 das.
Solucin de polisorbato 40-cido o~eko: Disolver
25 g de polisorbato 40 y 0,25 g de ac1do oleico en al-
SuplPmPntns Oietetcos /Vitaminas Hidrosolubles 6761
cohol al 20'Y<i para obtener 500 ml y mezclar. Almace-
nar en un retngerador y usar dentro de los 30 das.
Medio de pantotenato modificado: . .
Diso!ver [lp~/rmn nnhirirn y ArPtato de sodio. anhidro en
las soluciones previamente mezcladas, segun la Tabla 3
y ajustar co11 hidrxido de sodio 1 N a un pH de 6,8.
Finalmente, diluir con agua hasta 250 ml y mezclar.
Tabla 3
Solucin de hidrolizado cido de casena 25 ml
Solucin de cistina triptfano 25 ml
Solucin de polisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solucin de adenina-auanina--uracilo 5 ml
Solucin de ribaflavina clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solucin de cido p-aminobenzoico-n1acina-
clorhidrato de piridoxina 5 ml
_SolucJ.<}_ri_salina 1 5 ml
Solucin salina 2 5 ml
Solucin de oiridoxal-nantotenato de calcio 5 ml
Solucin de oolisorbato 40-cido oleico 5 ml
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tracin: Preparar segn se indica en Me~io de pa.ntote-
nato modificado, excepto que se debe realizar la dilu-
cin final hasta 125 ml en lugar de 250 ml. Preparar
en el momento de su uso.
Cultivo madre de Pediococcus acidilactici: Disolver en
800 ml de agua, con ayuda de calor, _6,0 g de peptona,
4 O g de digerido pancretico de caseina, 3,0 g de ex-
t(acto de levadura, 1,5 g de extracto de carne, 1,0 g de
dextrosa y 15,0 g de agar. Ajustar con hidrxido de so-
dio O, 1 N o cido clorhdrico O, 1 N a un pH entre 6,5 y
6,6, diluir con agua hasta 1000. ~L y mezclar. Agr~gar
porciones de 1 O ml de la soluc1on a tubos de cultivo,
tapar los tubos y esterHizar en un ?utoclave a 121 du-
rante 15 minutos. Enfriar en pendiente y almacenar en
un refrigerador. Preparar un cultivo madre de Pedi~coc
cus acidilacticil en un tubo que contenga este medio.
Incubar a 35 durante 20-24 horas y almacenar en un
refrigerador. Mantener el cultivo mad:e .me~iante trans-
ferencias mensuales a tubos con medio inclinado prepa-
rado recientemente.
lnculo: Inocular tres porciones de 250 ml de Med~ de
pantotenato modificado con el cultivo madre en med1~
inclinado e incubar a 35 durante 20-24 horas. Centri-
fugar la suspensin a partir de las porciones combin~-.
das y lavar las clulas con Medio de pantotenato modd1-
wdo. Resuspender las clulas en suficiente Medio de.
cin 1 en 50 cuando se analiza en un tubo de ensayo
de 1 3 mm d~ dimetro, proporcione 80% de transmi-
sin de luz a 530 nm. Transferir porciones de 1,2 ml de
esta suspensin madre a ampollas de vidrio estril, se-
llar, congelar en nitrgeno liquido X almacenar en un
congelador. En el da de la valorac1on, de1ar que las
ampollas alcancen la temperatura ambiente, mezclar el
contenido y diluir 1 rnl de cultivo descongelado con .
solucin salina estril SR hasta 150 ml. [NOTA-Esta di-
lucin se puede alterar, cuando sea necesario, para ob-
tener la respuesta de prueba deseada.] .
Anlisis: Prepara por triplicado u_na sene de. ocho tu-
bos de cultivo agregando las s1gu1entes cantidades de
agua a los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3,0; 2,0; 1,0 y 0,0 ml. Agregar 0,0;_ 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solucin estandar a estos mismos
tubos y en ei mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las s1gu1entes cantidades de agua a los
'ATCC N" 8042 es adecuado.
6762 Vitaminas Hdrosolubles / SuplrmPntm 0iPtPticos
lubos denlro de un sel: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
AyieLJdr 1,0; 1,S; 7,0.: i,O y 4,0 ml de la Solucin
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Aqregar 5.0 mL de Medio de rnntntf'nrtn modificado de
doble concentracin a cada tubo y mezclar. Tapar lm
tubos con tapas de metdl y eslerilizdr en un a'utoclave
a_ 121 durante 5 minutos. Enfriar a temperatura am-
biente en un bailo de agua fra e inocular cada tubo
con 0,5 ml del lnculo. Dejar que se incube a 37" du-
rante 16 horas. Detener el crecimiento calentando a
una temperatura de no menos de 80, por ejemplo
mediante la aplicacin de vapor a presin atmosfrica
en un esterilizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y de-
terminar concomitantemente la transmitancia porcen-
tual de las suspensiones, en celdas de igual longitud
de paso, en un espectrofotmetro adecuado, a una
longitud de ondd de 530 nm.
Ck_ulos: Trazar una curva de dosis-respuesta en papel
rrnl1metrddo graftcando la respuesta promedio, como
porcentaje de transmitancia, para cada set de tubos de
la curva estndar en funcin de las concentraciones
del nivel del estndar. La curva se traza conectando
cada par de puntos adyacentes con una lnea recta. A
partir de esta curva estndar, determinar mediante
interpolacin la potencia, en trminos de dexpantenol,
de cada tubo que contenga porciones de la Solucin
muestra. Dividir la potencia de cada tubo por la canti-
dad de la Solucin muestra que se le agreg, para ob-
tener las respuestas individuales. Calcular la respuesta
media promediando las respuestas individuales que va-
ran de su media en no ms de 15%, usando no me-
nos de la mitad del nmero total de tubos. Calcular la
potencia de la porcin de la Solucin Oral tomada
para la valoracin multiplicando la respuesta media
por el factor de dilucin apropiado.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de dex-
pantenol o pantenol en la porcin de Solucin Oral
tomada:
Resultado = (PIN) x 100
P = potencia calculada de dexpantenol o pantenol
en la porcin de Solucin Oral tomada (mg)
N = cantidad nominal de dexpantenol o pantenol
en la porcin de Solucion Oral tomada (mg)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19N0 4 )
NIACINA o NIACINAMIDA
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: 25 mg/ml de edetato disdico en agua
Fase mvil: Metanol, cido actico glacial, trietilamina
y 1-hexanosulfonato de sodio 0,008 M (350: 15: 0,4:
1634,6)
Solucin estndar: O, 1O mg/mL de ER Niacina USP o
ER Niacinamida USP en Diluyente. [NOTA-Usar ER Nia-
cina USP para Solucin Oral que contenga niacina y
usar ER Niacinamida USP para Solucin Oral que con-
tenga niacinamida.]
Solucin muestra: Diluir un volumen de Solucin Oral,
medido con exdctitud, con Diluyente hasta obtener una
solucin con una concentracin de O, 1 mg/mL de nia-
cina o niacinamida.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromntograftn (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 11111
Columna: 4,6 mm x. 25 cm relleno L7
Velocidad de flujo; 2 111L; 11 n
Volumen de inyeccin: 5 ,u
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de nia-
cina (C6HsN02) o niacinamida (Cr,HoN70) en la por-
cin de Solucin Oral tomada:
Resultado= (ru/r,) x (C/C,,) x 100
ru = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucion muestra
r, = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin estndar
C, = concentracin de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina o
niacinamida en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN0 2) o niacinamida
(C6H6N20)
CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA
Diluyente, Fase mvil y Sistema cromatogrfico: Pro-
ceder segn se indica en Niacina o Niacinamida.
Solucin estndar: Equivalente a 24 g/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Dilyuente
Solucin muestra: Equivalente a 24 g/mL de clorhi-
drato de piridoxina, a partir de Solucion Oral en
Diluyente
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de clor-
hidrato de piridoxina (CsH11 NOi HCI) en la porcin
de Solucin Oral tomada:
Resultado= (r,,/r,) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solucin muestra
r, = rea del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solucin estndar
C = concentracin de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solucin estndar (mg/mL)
C1 = concentracin nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina,(CsH 11 N0 3 HCI)
RIBOFLAVINA o RIBOFLAVINA-5'-FOSFATO SODICO, Mtodo 7
[NOTA-Riboflavina-5'-fosfato sdico se cuantifica contra
el ER Riboflavina USP en este procedimiento. En el cro-
matograma de la Solucin muestra, el pico de ribofla-
vina-5' -fosfato e'> el nico pico medido para clculos.]
Diluyente, Fase mvil y Sistema cromatogrfico: Pro-
ceder segn se indica en Niacina o Niacinamida.
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para ribofla-
vina-5'-fosfato y riboflavina son aproximadamente O, 18
y 1,0, respectivamente.]
Solucin estndar: Equivalente a 8 pg/mL de ER Ribo-
flavina USP en Diluyente, calentando si fuera necesario.
Solucin muestra: Equivalente a 8 g/mL de ribofla-
vina, a partir Je Solucin Oral en Diluyente
USP 3B
Anlisis
Muestras: Solucin es1ndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ri-
bofiavina (Ci7H20N4,;j e11 ict fJUtLi11 Je S0luLi11 Oral
tomrl;i:
Resultado= (r:)r,) x (C,/Cu) "' F x 100
r,, = rea del pico de riboflavina-5'-tosfato de la
Solucin muestra
r.1 = rea del pico de riboflavina de la Solucin
estndar
C1 = concentracin de ER Riboflavina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de riboflavina en la
Solucin muestra (mg/ml)
F = factor para convertir la respuesta obtenida
para riboflavina-5'-tosfato a riboflavina, 1,493
[NOTA-La Riboflavina Fosfato Sdico es una
mezcla de monofosfatos y difosfatos isomri-
cos que contienen una cantidad promedio
de 67% de riboflavina-5'-monofosfato, que
se separa en este sistema cromatogrfico. El
factor 1,493 asume 67% de riboflavina-5'-
monofosfato.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
RIBOFLAVINA o RIBOFLAVINA-5'-FOSFATO SDICO, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante lodo este procecjimiento.]
Blanco de disolventes: Acido clorhdrico 1 N, acetato
de sodio 2,5 M y agua (1 :2:97)
Solucin madre de riboflavina: O, 16 mg/ml de ER Ri-
boflavina USP en cido clorhdrico 1 N, acetato de so-
dio 2,5 M y agua (1 :2:97). Mezclar la solucin resul-
tante y agua (1 :9).
Solucion estndar: Solucin madre de riboflavina, cido
clorhdrico 1 N, acetato de sodio 2,5 M y agua
(1: 1 :2:96)
Solucin muestra: Transferir el equivalente a 0,8 mg de
riboflavina, a partir de Solucin Oral a un matraz volu-
mtrico de 100 ml, y diluir con agua a volumen. Mez-
clar la solucin resultante, cido clorhdrico 1 N, acetato
de sodio 2,5 M y agua (2:1 :2:95).
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Fluorescencia
Longitudes de onda analtica
Excitacin: 440 nm
Emisin: 530 nm
Blanco: Blanco de disolventes
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Determinar las intensidades de fluorescencia mximas, Is
e lu, de la Solucin estndar y la Solucin muestra, res-
pectivamente. Calcular el porcentaje de la cantidad de-
clarada de ribotlavina (C, 1H10N406) en la porcin de
Solucin Oral tomada:
Resultado = (/u! 11) x (C/ Cu) x 100
/, intensidad de la fluorescencia de la Solucin
muestra
11 = intensidad de la fluorescencia de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Riboflavina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de riboflavina en la
Solucion muestra (mg/rnl)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C; /H20N.10c)
TIAMINA
Diluyente, Fase mvil y Sistema cromatogrfico: Pro-
ceder seglin se indica en Niacina o Niacinamida.
Suplementos Oie!tiw~ /Vitaminas Hirlrmoluhles 6763
Solucin estndar: Equivalente a 24 pg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en Diluyente
Solucin muestra: Equivalente a 24 pg/ml de clorhi-
drato de tiJninJ, o pJrtir de Solucin OrJ! en Oituvente
Anlisis
Muestras: Solucion estandar y Soluoon muestra
Para productos que contengan clorhidrato de tiamina,
calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
clorhidrato de tia mina (C 12H 11CIN10S HCI) en la por-
cin de Solucin Oral tomada:
Resultado= (r11/r1) x (C/C) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
C5 = concentracin de ER Clorhidrato de Tiarnina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de tiamina (C 12H11CIN40S
HCI)
YODURO
Fase mvil: Disolver 5, 15 g de bromuro de tetrabutila-
monio en 320 ml de acetonitrilo. Diluir con agua hasta
2000 ml.
Solucin madre del estndar: 1,3 mg/ml de yoduro
de potasio en Fase mvil. Esta solucin tiene una con-
centracin de 1 mg/ml de yoduro.
Solucin estndar: 2,5 g/ml de yoduro, a partir de
Solucin madre del estndar en Fase mvil
Solucin de aptitud del sistema: Transferir O, 1 3 g de
yoduro de potasio y 0,5 g de yodato de potasio a un
matraz volumtrico de 100 ml. Disolver en Fase mvil,
usando ultrasonido, si fuera necesario, diluir con Fase
mvil a volumen y mezclar. Transferir 1,0 ml de esta
solucin a un matraz volumtrico de 100 ml, diluir con
Fase mvil a volumen y mezclar. Transferir 25,0 ml de
esta solucin a un matraz volumtrico de 100 ml y di-
luir con Fase mvil a volumen.
Solucin muestra: Diluir un volumen, medido con
exactitud, de Solucin Oral para obtener una solucin
con una concentracin de 2,5 g/ml de yodo en Fase
mvil
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromato9raft0 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 30 pl
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para yodato
y yoduro son aproximadamente 0,32 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 2,5 entre yodalo y yoduro,
Solucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No rns de 2,0% para
el pico de yoduro, Solucin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
yodo (1) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Re~ultado = (1u/rs) A (Cs/Cu) "" 100
r,, = rea del pico de voduro de la Solucin muestra
rs = rea del pico de yoduro de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de yoduro en la Solucin
estndar (pg/ml)
6764 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Diettico\
Cu = concentracin nominal dP yodo en la Solucin
muestra (~ig/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (i)
HIERRO
Solucin madre del estndar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumtrico de
1000 ml, disolver en cido clorhdrico 6 N y diluir con
agua a volumen.
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solucin madre del estndar de hierro a sen-
dos matraces volumtricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con cido clorhdrico O, 125 N a
volumen para obtener concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0;
6,0 y 8,0 g/ml de hierro.
Solucin muestra: 6 q/ml de hierro, a partir de Solu-
cin Oral en cido clorhdrico O, 125 N
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Hierro, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud ,de onda analtica: 248,3 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
hierro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C concentracin de hierro en la Solucin muestra
= Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
a partir de la grfica (g/mL)
Cu = concentracin nominal de hierro en Ja Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
MAGNESIO
Solucin estndar de magnesio: Transferir 1,00 g de
cinta de magnesio a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en 50 mL de cido clorhdrico 6 N y
diluir con agua a volumen.
Solucin madre del estndar: 20 g/ml de magnesio,
a partir de Solucin estndar de magnesio en cido clor-
hdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 7,5; 1 0,0; 12,5 y
15,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 mL. Diluir con cido clorhdrico
O, 125 N a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 g/ml de magnesio.
Solucin muestra: 2,5 g/ml de magnesio, a partir de
Solucin Oral en cido clorhdrico O, 125 N
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotmetro de absorcin atmica
Lmpara: Magnesio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud ,de onda analtica: 285,2 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
magnesio en la Solucin muestra.
usr 38
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mag-
nesio (Mg) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Kesultado = (UC11) x 100
C = concentracin de magnesio en la Solucin
muestra a partir de la grfica (g/ml)
Cu = concentracin nominal de magnesio en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
MANGANESO
Solucin madre del estndar de manganeso: Transfe-
rir 1,0 g de manganeso a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en 20 ml de cido ntrico y diluir
con cido clorhdrico 6 N a volumen.
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de manga-
neso, a partir de Solucin madre del estndar de manga-
neso en cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones conocidas de
0,5; 0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 g/ml de manganeso.
Solucin muestra: Diluir un volumen, medido con
exactitud, de Solucin Oral para obtener una solucin
con una concentracin de 1,5 g/ml de manganeso en
cido clorhdrico O, 125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotmetro de absorcin atmica
Lmpara: Manganeso, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud ,de onda analtica: 279,5 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de Ja grfica as
obtenida, determinar Ja concentracin, C, en g/ml,
de manganeso en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porcin de Solucin Oral
tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin de manganeso en la Solucin
muestra a partir de la grfica (g/ml)
Cu = concentracin nominal de manganeso en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
CINC
Solucin estndar de cinc: Transferir 311 mg de xido
de cinc a un matraz volumtrico de 250 ml y agregar
80 ml de cido clorhdrico 6 N, entibiando si fuera ne-
cesario para disolver. Enfriar, diluir con agua a volumen
y mezclar para obtener una solucin con una concen-
tracin conocida de 1 000 g/ml de cinc.
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de cinc, a
partir de Solucin estndar de cinc en cido clorhdrico
O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 g/
ml de cinc.
Solucin muestra: Diluir un volumen, medido con
exactitud, de la Solucin Oral para obtener una solu-
USP 38
cin con una rnncPntracin de 1 g/mL de cinc en
cido clorhdrico O, 125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver E~petlru(ulumetria y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorrin atmica
Lmpara: Cinc, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud ,de onda analtica: 21 3,8 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
cinc en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin de cinc en la Solucin muestra a
partir de la grfica (g/mL)
Cu = concentracin nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
OTROS COMPONENTES
DETERMINACIN DE ALCOHOL, Mtodo 1 (611) (si estuviera
presente): 90,0%-120,0% de la cantidad declarada
de alcohol (CzHsOH)
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 1 0 3
ufc/ml, y el recuento total combinado de hongos fila-
mentosos y levaduras no excede de ,3 x 10 2 ufc/ml.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz bajo gas inerte o con
una cmara gaseosa superior mnima.
ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Solu-
cin Oral de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales. La
etiqueta indica la cantidad de cada vitamina y mineral
presente en trminos de unidades mtricas en un volu-
men dado de Solucin Oral y, cuando sea necesario, la
forma qumica de vitamina presente, e indica adems la
forma salina del mineral usado como la fuente de cada
elemento. Cuando los productos declaran contener pan-
tenol, la etiqueta indica el contenido equivalente de dex-
pantenol. Cuando se proporciona ms de un mtodo de
valoracin para una vitamina o mineral en particular, el
etiquetado indica el mtodo de valoracin con el que
cumple el producto nicamente si no se usa el Mtodo 1.
'\uplPmPntns Oieteticos /Vitaminas Hidrosolubles 6765
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Pantotenato de Calcio USP
ER Cianocobalamina USP
ER Dexpantenol l J<;P
ER Niacina USP
ER Niacinamida USP
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
ER Pantenol Racmico USP
ER Riboflavina USP
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Vitaminas Hidrosolubles con Minerales,
Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Vitaminas Hidrosolubles con Minerales con-
tienen, una o ms de las siguientes vitaminas hidrosolu-
bles: Acido Ascrbico o su equivalente como Ascorbato de
~alcio o Ascorbato de Sodio, Biotina, panocobalamina,
Acido Flico, Niacina o Niacinamida, Acido Pantotnico
(como Pantotenato de Calcio o Pantotenato de Calcio Ra-
cmico), Clorhidrato de Piridoxina, Riboflavina y Clorhi-
drato de Tiamina o Mononitrato de Tiamina; y uno o ms
minerales derivados de sustancias generalmente reconoci-
das como seguras, que proporcionan uno o ms de los
siguientes elementos en forma ionizable: boro, calcio,
cromo, cobre, flor, yodo, hierro, magnesio, manganeso,
molibdeno, nquel, fsforo, potasio, selenio, estao, vana-
dio y cinc. Las Tabletas contienen no menos de 90,0% y
no ms de 150,0% de las cantidades declaradas de cido
ascrbico (C6Hs06) o sus sales como ascorbato de calcio
(C12H14Ca012 2Hz0) o ascorbato de sodio (C6H1Na06),
biotina (CioH16N203S), cianocobalamina (C63HssCo-
N140,4P), cido flico (C19H19N106), pantotenato de calcio
(CisH32CaN2010), niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11N03 HCI), ri-
boflavina (C17H20N406) y tiamina (Ci2H11CIN40S) como
clorhidrato de tiamina o mononitrato de tiamina; no me-
nos de 90,0% y no ms de 125,0% de las cantidades
declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), magne-
sio (Mg), manganeso (Mn), fsforo (P), potasio (K) y cinc
(Zn); y no menos de 90,0% y no ms de 160,0% de las
cantidades declaradas de boro (B), cromo (Cr), flor (F),
yodo (1), molibdeno (Mo), nquel (Ni), selenio (Se), estao
(Sn) y vanadio (V).
No contienen ninguna forma de Beta Caroteno o Vitamina
A, D, E o K. Pueden contener otras sustancias declaradas
agregadas generalmente reconocidas como seguras, en
cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione ms de un mtodo de valoracin para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los mtodos especificados, declarando el mtodo
usado en el etiquetado nicamente si no se usa el Mtodo
7.], ,
ACIDO ASCORBICO
[NOTA-Reducir a polvo fino no menos de 20 Tabletas.]
Solucin muestra: Transferir una porcin de Tabletas
reducidas a polvo, equivalente a una cantidad nominal
de 1 00 mg de cido ascrbico, a un matraz volumtrico
de 200 mL y agregar 75 mL de cido metafosfrico--
cido actico SR. Tapar el matraz y agitar mecnica-
mente durante 30 minutos. Diluir con agua a volumen.
Transferir una porcin de la solucin a un tubo de cen-
trfuga y centrifugar hasta obtener un sobrenadante
transparente. Pipetear y transferir 4,0 mL de esta solu-
cin a un matraz Erlenmeyer de 50 mL, y agregar 5 mL
de cido metafosfrico-cido ctico SR.
6766 Vildminas H1cfrmolubles /Suplementos DiPtPticos
Anlisis: Valorc11 co11 ::,olucion estndar de diclorofeno-
1-indofenol sv rld'.>id llfl roinr rmado que persista du
rante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen de
solucin P<;Lndar de diclorof0nol inrlofPnnl SV consu-
mido por una mezcla de 5,5 ml de cido metafosfri-
co ,cido Jccuco '.iR y 1'..> ml de dgua. A pc11tir del cido
ascrbico equivalente de la solucion estndar de diclo-
rofenol-indofenol SV, calcular el contenido de cido as-
crbico en cada Tableta.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cido ascrbico (C 6 H8 0 6 ) , cohol al 50% y agitar por rotacin suave hasta hume-
ASCORBATO DE CALCIO: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 21-bO)
ASCORBATO DE Somo: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
BIOTINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Mezclar 85 ml de acetonitrilo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 ml de cido fosfrico, y diluir con
agua hasta 1000 ml.
Solucin madre del estndar: 0,333 mg/ml de ER Bio-
tina USP en dimetil sulfxido
Solucin estndar: 5 g/ml de ER Biotina USP que se
prepara diluyendo la Solucin madre del estndar en
agua.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1 mg de biotina, a un
matraz volumtrico de 200 ml. Agregar 3 ml de dime-
til sulfxido y agitar por rotacin suave hasta humede-
cer el contenido. Colocar el matraz en un bao de agua
a 60-70u durante 5 minutos. Someter a ultrasonido
durante 5 minutos, diluir con agua a volumen y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 rnm x 15 cm; relleno l 7 de 3 pm
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las respuestas de los picos de biotina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de biotina
(CoH 15N;O ,S) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado ~ (ru/r,) x (C/C,,) x 100
ru e_ respuesta del pico de la Solucin muestra
r1 == respuesla del pico de la Solucin estndar
C. ~ concentracin de ER Biotina USP en la Solucin
estndar (g/mL)
C11 = concentracin nominal de biotina en la
.Solucion muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotinil (C10H10N20:S)
BIOTINA, Mtodo 2
[NOTA--Usar rnateriai de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezc!as de~hidratad<Js que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan segn
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados segn se describe en este
procedimiento.
USP 38
Solucin madre del estndar: 50 pg/ml de ER Biotina
USP en Jlcohol al 50%. Almace11dl e::,la solucin en un
refrigerador.
So!ucin estJnda; E;1 c1 diJ de la valoraci11, Jiluir Id
So/ucirn mnrirP riPI pctrinrlnr con aqua hasta una conccn-
tracron de O, 1 ng;mL de ER Biotiria USP.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1 00 pg de biotina, a
un matraz volumtrico de 200 mL. Agregar 3 mL de al-
decer el contenido. Calentar el matraz en un bao de
agua a 60-70 durante 5 minutos. Someter a ultraso-
nido durante 5 minutos, diluir con alcohol diluido a vo-
lumen y filtrar. Diluir un volumen del filtrado cuantitati-
vamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas,
con agua hasta obtener una solucin con una concen-
tracin de O, 1 ng/ml.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
100 g de casena exenta de vitamina con 500 mL de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 mL. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 10. Fil-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina y 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g de D,L-triptfano)
en 700-800 mL de agua. Calentar a 70-80 y agregar
cido clorhdrico diluido (1 en 2) gota a gota, mez-
clando, hasta que los slidos se disuelvan. Enfriar y di-
luir con agua hasta 1 000 mL. Almacenar bajo tolueno
en un lugar fresco a una temperatura de no menos de
1O.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O mL de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 mL. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/mL de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de pantotenato de calcio: 1O g/mL de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
g/mL de riboflavina y 1O g/ml de clorhidrato de tia-
mina en cido actico 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1O g/mL de cido p-aminoben-
zoico, 50 pg/mL de niacina y 40 pg/mL de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de pota'>io y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua pilra obtener 500 mL. Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezclada<. seg Cm la Tuu!u i, y ajustar con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con agua
hasta 250 ml.
USP 18
Tabla 1
Solucin de hidroli1,Hlu ,;, id() ele casrna 1 25 ml
I ~olucinJe c::.t:ru t::pt6fJ:-:0 _ __ ___ ----t---;;-;-~-
~g_J_~cin d_e po!isor_Q_ato jiQ ____________ ~--.------1 0.25 ml
J2_extroscJ_nhidra ________ _ __l_Q_g_
Acetato_ de sodio anhidro 5 a
Solucin de adenin_il_-::91Jani_ni=uracilg__ __________ __2__111_1___
Solucin de oantotenato de calcio 5 ml
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina 5 ml
Solucin de cido p-am1nobenzoico--niacina-
- clorhidrato de oiridoxina 5 mL
Solucin salina A 5 mL
Solucin salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacil/us plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 rnL de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un bao de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O mL de la
solucin caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 y dejar que los
tubos se enfren en posicin vertical. Inocular tres o ms
de los tubos, sembrando por puncin un cultivo puro
de Lactobacillus plantarum, 1 incubando durante 16-24
horas a una temperatura entre 30 y 37 mantenida
termostticamente con un margen de 0,5. Almacenar
en un refrigerador. Preparar un cultivo reciente por
puncin del cultivo madre una vez por semana y no
usarlo para preparar el lnculo si el cultivo tiene ms de
1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que con-
tenga 0,5 ng de biotina a cada una de las series de
tubos de ensayo que contengan 5,0 mL de Solucin ma-
dre de medio basal. Tapar los tubos con algodn, esteri-
lizar en un autoclave a 1 21 y enfriar.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de clulas del Cultivo madre de Lactobacil/us plan-
tarum a un tubo estril que contenga 1 O mL de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30 y 37 mantenida termostti-
camente con un margen de 0,5. La suspensin de
clulas as obtenida es el lncu/o.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solu-
cin estndar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos
vacos similares 5,0 mL de Solucin madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Agre9ar a tubos de ensayo similares, por duplicado,
volumenes de la So/ucion muestra correspondientes a
tres o ms niveles especificados de la Solucin estn-
dar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y 4,0 mL.
Agregar a cada tubo 5,0 mL de la Solucin madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Colocar un set completo de tubos de Estndar y
muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilla o seccin de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la conta-
minacin y esterilizar en un autoclave a 121 durante
5 minutm Enfriar. Agregar 1 gota de lnculo a cada
tubo, excepto dos de los cuatro tubos que no con-
tengan Solucin estndar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperalura e11lre 30 y 37
mantenida termostticamente con un margen de
' ATCC N 8014 es adecuado. A esta cepa se le conona anteriormente como
Luctobucilfw oru/Jino1us 17-5.
Suplementos Die!tiws / Vitarninac; Hicirosolubles 6767
0,5 hasta que, despus de 16-24 horas de incuba-
cin, no se presente un Jumento significativo de tur-
bidez en los tubos que contengan el nivel ms alto
de EJt:lndJr durante un periodo de 2 horas.
DPtPrrninar l;i t r;immitancia de los tubos segn se in-
dica a continuac1on. Mezclar el contenido de cada
tubo y transferir a una celda de cspectrofotmetro.
Colocar la celda en un espectrofotmetro ajustado a
una longitud de onda especfica de 540-660 nm y
leer la transmitancia cuando se alcance un estado es-
tacionario. El estado estacionario se observa unos po-
cos segundos despus de la agitacin cuando la lec-
tura del galvanmetro se mantenga constante
durante 30 segundos o ms. Permitir aproximada-
mente el mismo intervalo de tiempo para la lectura
de cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si hay evidencia de contaminacin
con un microorganismo extrao, no tomar en cuenta
el resultado de la valoracin.
Clculos: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta segn se indica a continuacin. Para
cada nivel del Estndar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (:L) como la diferencia, y= 2,00 - 2.. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
funcin del logaritmo de los mL de la Solucin estn-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmtica o logartmica, la que proporcione
la mejor aproximacin a una lnea recta. Trazar la lnea
recta o la curva de regresin que mejor se ajuste los
puntos graficados.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias para cada nivel de la Solucin muestra. Leer, a
partir de la curva estndar, el logaritmo del volumen
de la Solucin estndar correspondiente a cada uno
de los valores de y comprendidos dentro del intervalo
de los puntos extremos graficados para el Estndar.
Restar de cada logaritmo as obtenido el logaritmo
del volumen, en mL, de la So/ucion muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificacin.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
o ms niveles de dosificacin para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
cin muestra.
Determinar la cantidad, en ~tg, de ER Biotina USP co-
rrespondiente a la biotina en cada mg de la porcin
de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de g de biotina que se supuso
estaba presente en cada mg en la porcin de
Tabletas tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nacin por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Va/ora-
ciones Biolgicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Umites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en ms de 0,08, realizar una o ms determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o ms
valores de M que no difieran en ms de O, 15, calcular
la potencia media de la preparacin que se est
valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (CnH11N701S)
BIOTINA, Mtodo 3
[NOTA- Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
6768 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietticos
Solucin A: Transferir 800 mL de agua y 100 ml de
trictilamin.:i J un matraz volumtrico de 1 000 ml. Agre-
gar 80 ml de cido fosfrico al 85'YcJ y diluir con agua a
vo!umen.
Fase mvil: Transf Prir 80 ml de acetonitri!o v 1 O mL de
Soluoon A a un matraz volumtrico de 1 000, ml. Diluir
con a9ua a volumen.
Solucion estndar: 0,6 g/ml de ER Botina USP en
agua. [NOTA-Se usar una porcin de la Solucin estn-
dar para determinar la recuperacin porcentual de bio-
tina a partir del procedimiento de Extraccin en fase
slida.]
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una cantidad de Tabletas reduci-
das a polvo a un matraz volumtrico para obtener una
concentracin nominal de 0,6 g/mL de botna. Agre-
gar agua hasta el 80% de la capacidad del matraz y
someter a ultrasonido durante 30-40 minutos, mez-
clando ocasionalmente, para disolver. Diluir con agua a
volumen y filtrar. Ajustar el pH de la solucin con cido
actico diluido o hidrxido de sodio O, 1 N a 6,0-7,0.
Extraccin en fase slida: [NOTA-Acondicionar la co-
lumna de extraccin especificada en este procedimiento
segn se ndica a continuacin. Lavar la columna con
una porcin de 2 mL de metano!. Equilibrar con una
porcin de 2 mL de agua.] Pipetear y transferir por se-
parado 5,0 mL de la Solucin muestra y la Solucin es-
tndar a columnas de extraccin en fase slida reciente-
mente acondicionadas que consistan en un relleno de
modo mixto con una masa de sorbente de 60 mg.
[NOTA-El relleno de modo mixto consiste en sorbentes
de intercambio annco y de fase reversa. El compo-
nente de fase reversa es un copolmero de N-vnlprrol-
dona y divinlbenzeno. La unidad de intercambio ani-
nco es un grupo tralqulamno. 2 ]
Lavar la columna con 1O ml de metano! al 30% (v/v)
en agua. Aplicar un volumen apropiado (4,9 ml) de
metano! al 30% (v/v) en cido clorhdrico O, 1 N a la
columna. Recoger el eluato en un matraz volumtrico
de 5 mL, que contenga 100 L de acetato de sodio al
40% (p/v) en agua, y diluir con metano! al 30% (v/v)
en cido clorhdrico O, 1 N a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografia (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/mn
Volumen de inyeccin: 1 00 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y una porcin de la Solu-
cin estndar que se haya sometido a una Extraccin en
fase slida.
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 1,5, Solucin
estndar
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
cin estndar y Solucin estndar que se haya some-
tido a una Extraccin en fase slida.
Recuperacin: 95%-100%, Solucin estndar que se
haya sometido a una Extraccin en fase slida.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra que se
hayan sometido a una Extraccin en fase slida.
Medir las respuestas del pico de biotna. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de biotna
(C10H16N201S) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
re = respuesta del pico de la Solucin muestra
rs = respuesta del pico de la Solucin estndar
1Un cartucho Jdecuado es el cartucho Waters, Oasis MAX Vac RC, con ta-
mafo de parlicula de 30 pm, parle 186000371.
USP 38
C. = concentracin de ER Botna USP en la Solucin
estandar (pg/ml)
Cu = concentracin nominal de botina en la
Soiucion muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0'?'o de ia c.:intdad
declarada de biotna (C10H1,,N20iS)
CIANOCOBALAMINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metano! y agua (7:13)
Solucin madre del estndar: 1 O g/ml de ER Cano-
cobalamna USP en agua. [NOTA-Almacenar esta solu-
cin madre en un lugar oscuro y desechar despus de 1
semana.]
Solucin estndar: 1 g/ml de ER Canocobalamna
USP, a partir de Solucin madre del estndar diluida con
agua
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 100 g de canocoba-
Jamna, a un matraz de 250 ml. Agregar cuantitativa-
mente 100,0 mL de agua y extraer cuidadosamente
durante 2 minutos. Filtrar 1 O ml del extracto y usar el
filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 0,5 ml/mn
Volumen de inyeccin: 200 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las respuestas de Jos picos de cianocobalamna.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
canocobalamna (CoiH88CoN1414P) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (C./Cu) x 100
ru = respuesta del pico de canocobalamna de la
Solucin muestra
rs = respuesta del pico de canocobalamna de la
Solucin estndar
C1 = concentracin de ER Canocobalamna USP en
la Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de cianocobalamna en
la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C6iHssCoN1414P)
CIANOCOBALAMINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin madre del estndar de cianocobalamina:
1,0 g/ml de ER Canocobalamna USP en alcohol al
25%. Almacenar en un refrigerador.
Solucin estndar: Diluir un volumen adecuado de So-
lucin madre del estndar de cianocobalamina con agua
hasta un volumen medido tal que despus del perodo
de incubacin segn se ndica en el Anlisis, la diferen-
cia en la transmtanca entre el blanco inoculado y el
nivel de 5,0 mL de la Solucin estndar sea no menor
que la correspondiente a una diferencia de 1,25 mg en
peso seco de las clulas. Esta concentracin por lo ge-
neral est entre 0,01 y 0,04 ng/ml de la Solucin estn-
dar. Preparar esta solucin en el momento de su uso
para cada valoracin.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin de Tabletas reduci-
das a polvo, equivalente a una cantidad nominal de
1,0 g de canocobalamna, a un vaso apropiado que
USP 38
rnntenga, por cada g de Ta?letas reducid~s a polvo to-
111ddo 25 111L Je una soluuon de extraccron acuosa pre-
pardd~ justo dnles de su uso que contenga, cada
1 00 ml, 1,29 g de fosfato dibsico de sodi.o, 1, 1 g de
cido ctrico anhidro y 1,0 g de metab1sulf1to de sodio.
a
Autoclavar la mezcla 121 u durante 1 O minutos. Dejar
que sedimente cudlquier partcula del extractc;i ~in disol-
ver y filtrar o centrifugar si fuera necesario. Dtlurr una
alcuota de la solucin transparente con agua ~~sta ob-
tener una solucin final que contenga una act1v1dad de
vitamina 8 12 equivalente a la actividad nominal de la
Solucin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Preparar se-
gn se indica en Pantotenato de Calcio, Mtodo 2. . de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
Solucin de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagrna
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Preparar segun
se indica en Pantotenato de Calcio, Mtodo 2.
Solucin de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70, agregar 6,0 ml 9~
hidrxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los soli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador. , .
Solucin salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobas1co
de potasio y 1 O g de fosfato di bsico de potasio, e~
agua para obtener 200 ml. Agreg,ar 2 gotas de ac1do
clorhdrico. Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y O 20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre9ar 2 gotas de cido clorhdrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno. . contenido en un autoclave a 121 durante 15 minutos.
Solucin de polisorbato 80: Disolver 20 g de pohsor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador. . .
Solucin vitamnica A: Disolver 1 O mg de riboflav1na,
1 O mg de clorhidrato de tia mina, 100 g de biotina y
20 mg de niacina en cido actico glacial 0,02 N para
obtener 400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrige-
rador y proteger de la luz. , .
Solucion vitamnica B: Disolver 20 mg de acrdo p-amr-
nobenzoico, 1 O mg de pantotcnato de cakio, 40 mg. ?e
clorhidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de pm-
doxal, 8 m.9. de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
de cido folico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3: 1) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz. . nut~s (temperatura de la l;iea de sal.da, de vapor), y
Solucin madre de medio basal: Preparar el medro de
acuerdo con la siguiente frmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga los
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya segn se indica en ~I etiqueta<;Jo, produzc? un me-
dio comparable al obtenido de la formula provista en
este procedimiento. . ,
Agregar los ingredientes en el orden l1st?d.o segu~ I~
Tabla 2 disolviendo cuidadosamente c1strna y tripto-
fano e~ cido clorhdrico antes de agregar las siguien-
tes ocho soluciones a la solucin resultante. Agregar
1 00 ml de agua y disolver dextrosa, acet.ato de sodio
y cido ascrbico. Filtrar, si fuera necesario; Agregar
Solucin de polisorbato 80, ajustar co~ h1drox1do de so-
dio 1 N a un pH entre 5,5 y 6,0, y d1lu1r con Agua
Purificada hasta 250 ml.
Tabla 2
L-Cistina O1
L-Triptfano O 05
cido clorhdrico 1 N 10 ml
Solucin de adenina-quanind-Urdcilo ------- 5 ml
Solucin de xantina 5 ml
Solucin vitamnica A 10 ml
Solucin vitamnica B 10 ml
Suplementos Dietticos /Vitaminas Hidrosolubles 6769
Tabla 2 (Continuacion)
-----------f-~-s_--;~1
1
l291ucin salina A
S ml
1 Solucin salina B
f Solucin de asparagind [ ~rT1_L_J
Solucin de hidrol1zado acido de caserna
'
25 ml
Dextrosa anhidra 10 q
Acetato de sodio anhidro 5q
cido ascrbico 1q
Solucin de oolisorbato 80 5 ml
Preparacin de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para extraer la mayor parte
cin analtico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presin reducida, a travs de una capa del coadyuvante
, de filtracin. Repetir, si fuera necesa.'.10, hasta obtener.
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: [NOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos ir;gredi~nt~s
siempre que, cuando se reconst1~uya segun se 1nd1ca en
el etiquetado, produzca un medro equ1vale.nte al obte~
nido de la frmula provista en este proced1m1ento.] Di-
solver O 75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona sea, 1,0 g de dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobsico de potasio en 60-70 ml de agua. Agregar
1 O ml de Preparacin de jugo de ton:at~ y 1 ml de ~olu
cin de polisorbato 80. Ajustar con h1drox1do de sodio
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua h?;;ta 1 00 ml.
Colocar porciones de 1 O ml de la soluc1on en tubos de
ensayo y tapar con algodn. Esterilizar los tubos y su
Enfriar tan rpido como sea posible para evitar. la for-
macin de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensin: Diluir un volumen medic;Jo de
Solucin madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O ml del medio ?ilu.ido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar segn se 1nd1ca en
. Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacil/us leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 1 00 ml de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un bao de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de. 1 O ml de
la solucin caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos esterilizar en un autoclave a 121 durante 15 mi-
dear que los tubos se enfrien en pos1c1on vertical. .1~0-
cu ar tres o ms de los tubos sembrando por punc1on
un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii. 3 [NOTA-
Antes de usar un cultivo recientemente preparado por
primera vez en esta valoracin,. realizar no m.enos de 1 O
transferencias sucesivas del cultivo en un periodo de 2
semanas.] Incubar durante 16-24 horas a una tempera-
tura entre 30 y 40 mantenida termostticamente con
un margen de 0,5". ~lmacenar en un, refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por punc1on al menos tres
veces por semana y no usarlo para prepara'. ~I lnculo
si tiene ms de 4 das de preparado. La act1v1dad del
microorganismo se puede increm~ntar mediante trans-
ferencias de una o dos veces al d1a del cultivo por
puncin, hasta el punto e~ que ,se pueda observar una
turbidez evidente en el Inoculo l1qu1do 2-4 horas des-
pus de la inoculacin. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva d~ respuesta
a adecuada y puede conducir a resultados err~t1cos.
lnculo: [NOTA--Se puede usar una suspens1on conge-
a lada de Lactobacil/us leichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
' Se pueden obtener cultivos puros de Lactobacillus leichmannii (listado como
Lactobacillus delbrueki/) como N 7830 en ATCC, 10801 Un1vers1ty Blvd., Ma-
nassas, VA 2011 0-2209 (www.atcc.org).
6770 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietticos
rencia de clulas del Cultivo madrP dP Lactohacillus leich-
mannii dos tubos estriles que cu11le11gar1 1 O mL de
Medio de culttvo cada uno. Incubar estos cultivos du-
rante 16 21 hu a~ J ur1J temperatura entre 30 y 40
m;rntPnirl;i tPrrnnstticamente con un margen de 0,5.
Centrifugar los cultivos bajo condiciones aspticas y de-
cantar el sobrenadante. Suspender las clulas del cultivo
en 5 mL de Medio de suspensin estril y mezclar.
Usando Medio de suspensin estril, ajustar el volumen
de manera que una dilucin 1 en 20 en solucin salina
SR produzca una transmitancia del 70% cuando se lee
en un espectrofotmetro adecuado ajustado a una lon-
gitud de onda de 530 nm, equipado con una celda de
1O mm, y leer contra el set de solucin salina SR a una
transmitancia del 1 00%. Preparar una dilucin 1 en 400
de la suspensin ajustada usando Solucin madre de me-
dio basal. [NOTA--Esta dilucin se puede alterar, cuando
sea necesario, para obtener la respuesta de prueba de-
seada.] La suspensin de clulas as obtenida es el ln-
culo.
Calibracin del espectrofotmetro: Revisar peridica-
mente la longitud de onda del espectrofotmetro,
usando una celda de longitud de onda estndar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotmetro con agua para fijar el 0%
y el 1 00% de transmitancia, y con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba
a diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y
a trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y dems
material de vidrio necesario, se deben limpiar meticu-
losamente usando mtodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250 durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solucin estndar.
Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacos similares
5,0 mL de Solucin madre de medio basal y agua sufi-
ciente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solucin mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucin madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O mL.
Colocar un set completo de tubos de Estndar y
muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilla o seccin de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para evitar la contaminacin bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no ms de 1 O minutos precalentando el autoclave si
fuera necesario. Enfriar tan rpido como sea posible
para evitar la formacin de color que resulta del so-
brecalentamiento del medio. Tomar precauciones
para mantener la uniformidad de las condiciones de
esterilizacin y enfriamiento durante toda la valora-
cin, debido a que colocar los tubos demasiado cerca
o sobrecargar el autoclave puede ocasionar variacio-
nes en la velocidad de calentamiento.
Agregar aspticamente 0,5 mL de !nculo a cada tubo
as preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solucin estandar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y
40" mantenida termostticamente con un margen de
::0,5', durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80 durante 5 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente. De>pu> de agitar su conte-
nido, colocar el recipiente en un espectrofotmetro
ajustado a una longitud de onda de 530 nm y leer la
lramrnitancia cuando se alcance un estado estaciona-
rio. El estado estacionario se observa unos pocos se-
USP 38
gundos despus de la agitacin cuando la lectura se
mantiene constante durante 30 segundos o ms. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
fJdra ia lectura de cada tubo.
Con !J tran)mitoncu ju,tida a 1 001:1 Jara el bid neo
no inoculado, leer la transmitancia de blanco inocu-
lado. Si la diferencia es mayor de 5'Jlo o si hay eviden-
cia de contaminacin con un microorganismo ex-
trao, no tomar en cuenta el resultado de la
valoracin.
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para el blanco
no inoculado, leer la transmitancia de cada uno de
los tubos restantes. No tomar en cuenta los resulta-
dos de la valoracin si la pendiente de la curva estn-
dar indica un problema con la sensibilidad.
Clculos: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cualquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estndar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transmitancias (2.:) como la diferencia, y =
2,00 - I. Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en funcin del logaritmo de los mL
de la Solucin estndar por tubo sobre la abscisa,
usando para la ordenada una escala aritmtica o loga-
rtmica, la que proporcione la mejor aproximacin a
una lnea recta. Trazar la lnea recta o la curva de re-
gresin que mejor se ajuste los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
cias para cada nivel de la Solucin muestra. Leer, a
partir de la curva estndar, el logaritmo del volumen
de la Solucin estndar correspondiente a cada uno
de los valores de y comprendidos dentro del intervalo
entre los puntos extremos graficados para el Estndar.
Restar de cada logaritmo as obtenido el logaritmo
del volumen, en mL, de la Solucin muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificacin.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
o ms niveles de dosificacin para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
cin muestra.
Determinar la cantidad, en g, de ER Cianocobalamina
USP correspondiente a la cianocobalamina en cada
mg de la porcin de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de g de cianocobalamina que se
supuso estaba presente en cada mg en la
porcin de Tabletas tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nacin por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Va/ora-
ciones Biolgicas (11 1), El Intervalo de Confianza y los
Lmites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en ms de 0,08, realizar una o ms determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o ms
valores de M que no difieran en ms de O, 15, calcular
la potencia media de la preparacin que se est
valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar~da de cianocobalamina (C6,HssCoN1414P)
Acmo Fouco, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solucin de hidrxido de tetrabutilamonio
al 25% en metano!
Reactivo B: Transfe1i1 5,0 g ue cido penttico a un
matraz volumtrico de 50 rnL. Disolver y diluir con hi-
drxido de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
USP i8
Fase mvil: 2 g de fosfato monobsico de potasio en
650 ml dP agua AgrPgar 12,0 ml de Reactivo A,
7,0 ml de acido fosfrico 3 N y 240 ml de metanol.
l::ntnar a temperatura ambiente, austar con cido fosf-
1 icu u d1nonaco SR a un :ol I de 7,0, diluir con agua
hasta 1 000 ml y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso, agregando agua o metanol a la Fase mvil pre-
parada para obtener una separacin de la lnea base
entre el cido flico y el estndar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 15 para obtener una mejor
separacin. [NOTA-El contenido de metano! y agua se
puede variar (entre 1 % y 3%).]
Solucin de estndar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumtrico de 1000 ml y
agregar 220 ml de metanol para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobsico de potasio en 300 ml de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solucin al matraz que contenga la solu-
cin de metilparabeno y agregar 300 ml adicionales de
agua. Agregar 19 ml de Reactivo A, 7 ml de cido fos-
forico 3 N y 30 ml de Reactivo B. Ajustar con amonaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrgeno a travs de la
solucin durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. , Detector: UV 270 nm
Solucin estndar: 0,016 mg/ml de ER Acido Flico
USP en Solucin de estndar interno
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin de polvo equivalente
a una cantidad nominal de 0,4 mg de cido flico, a un
tubo de centrfuga color mbar de 50 ml. Agregar
25,0 ml de Solucin de estndar interno, agitar mecni-
camente durante 1 O minutos y centrifugar. Filtrar una
porcin del sobrenadante transparente y usar el filtrado.
Sistema cromato!;Jrfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para cido
flico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de cido flico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de cido flico (C1"H19N106) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado= (R,)R1) x (Cs/C11) x 100
R,, = cociente entre las reas de los picos de cido
flico y metilparabeno de la Solucin muestra
R, = cociente entre las reas de los picos de cido
flico y metilparabeno de la Solucin
estndar
C concentracin de ER cido ~lico USP en la
oc
Solucin estndar (pg/ml)
Cu = concentracin nominal de cido flico en la
Solucin muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%--150,0% de la cantidad
, declar~da de cido flico (C1"H19N706)
ACIDO Fouco, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: Disolver 7,5 g de edetalu di~dirn, mez-
clando, en 500 ml de agua que contenga 1 O ml de
hidrxido de amonio.
Suplemento'> [);eti:ticns / Vitmins Hidrosolublcs 6771
Diluyente: 60 pg/ml de hidrxido de amonio
Fase mvil: Tramferir 0,4 ml de trietii<J111i11a, 15 rnL de
cido actico glacial y 350 ml de metanol a un matraz
volumtrico Je 2000 111L, y Jiiui1 cu11 1-i 1eMnO>ulfo11ato
dr sodio 0:008 ~"1 a vo!umcn.
Solucin madre del estndar: 60 pg/ml de ER Acido
Flico USP en Diluyente. Preparar esta solucin en el da
de su uso.
Solucin estndar: Mezclar 5,0 ml de Solucin madre
del estndar con 10,0 ml de metano! y 35,0 ml de Re-
activo, agitar durante 1 5 minutos en un bao de agua
mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros ml del filtrado.
Solucin muestra: Transferir una porcin de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a una cantidad no-
minal de 0,3 mg de cido flico, a un matraz de
125 ml con tapn. Agregar 10,0 ml de metano! y
35,0 ml de Reactivo. Agitar durante 1 5 minutos en un
bao de agua mantenido a 60 y enfriar Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato!;Jrfico
(Ver Cromatografta (621 ), Artitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyeccin: 5 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de cido flico
(C1<JH19N106) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de cido flico de la Solucin
muestra
r, = rea del pico de c.ido flico de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER cido Flico USP en la
Solucin estndar (pg/ml)
Cu = concentracin nominal de cido flico en la
Solucin muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cido flico (C19H19N10b)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 7
Fase mvil: Acido fosfrico y agua (1: 1 000)
Solucin de estndar interno: 80 mg de cido p-hi-
droxibenzoico en 3 ml de alcohol. Agregar 50 ml de
agua y 7, 1 g de fosfato di bsico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 ml. Ajustar con cido fosfrico a un
pH de 6,7.
Solucin estndar: 0,6 mg/ml de ER Pantotenato de
Calc.io USP en Solucin de estndar interno
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 15 mg de pantotenato
de calcio, a un tubo de centrfuga. Agregar 25,0 ml de
Solucin de estndar interno y agitar vigorosamente du-
rante 1 O minutos. Centrifugar, filtrar y usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato!;Jrfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
6772 Vitaminas Hidrosolubles /Suplementos Dietticos
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O 11111
Columna: 3,9 mm "" 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
VolumPn de inyeccin: 1O p L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para pantote-
nato de calcio y cido p-hidroxibenzoico son aproxi-
madamente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las respuestas de los picos de pantotenato .de
calcio y el estndar interno. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de pantotenato de calcio
(C 18 H ,1 CaN?010) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (Ru!Rs) x (Cs/Cu) x 100
R11 = cociente de respuesta entre los picos de
pantotenato de calcio y cido p-
hidroxibenzoico de la Solucin muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
pantotenato de calcio y cido p-
hidroxibenzoico de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estandar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C18H32CaN2010)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 2
Solucin madre del estndar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentxido de fsforo y
protegido de la humedad durante la pesada, en 500 ml
de agua en un matraz volumtrico de 1 000 ml. Agre-
gar 1 O ml de cido actico 0,2 N y 100 ml de solucin
de acetato de sodio (1 en 60), y diluir con agua a volu-
men para obtener una concentracin de 50 g/ml de
ER Pantotenato de Calcio USP. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solucin estndar: En el da de la valoracin, diluir un Solucin de hidrolizado cido de casena
volumen de Solucin madre del estndar con agua para
obtener una concentracin de 0,01-0,04 ~tg/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentracin exacta
es tal que las respuestas obtenidas segn se indica en el
Anlisis, usando 2,0-4,0 ml de la Solucin estndar, es-
tn dentro de la porcin lineal de la curva de respuesta
del lo_garitmo de la concentracin.
Solucion muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 50 mg de pantotenato
de calcio, a un matraz volumtrico de 1000 ml que
contenga 500 ml de agua. Agregar 1O ml de cido
actico 0,2 N y 100 ml de solucin de acetato de sodio
(16,66 mg/ml), diluir con agua a volumen y filtrar. Di-
luir un volumen de esta solucin hasta obtener una so-
lucin con aproximadamente la misma concentracin
que la de la Solucin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
1 00 g de casena exenta de vitamina con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y sorneter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, aiustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1 000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 O. Fil
USP 38
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina y 1,0 g de L-triptofano (o 2,0 g de D,L-triptfano)
en 700-800 inl Je ac:iua, calentar a 70- 80 y agregar
cido clorhdrico diluido (1 en 2) gota a gota, mez-
clando, hasta que los slidos se disuelvan. Enfriar y di-
luir con agua hasta 1 000 ml. Almacenar bajo tolueno
en un lugar fresco a una temperatura de no menos de
10.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 g/ml de riboflavina, 1 O g/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 g/ml de biotina en cido actico
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote<;er de la luz.
Solucion de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O g/ml de cido p-aminoben-
zoico, 50 g/ml de niacina y 40 g/ml de clor~idrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas segn la Tabla 3, y ajustar con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con agua
hasta 250 ml.
Tabla 3
25 ml
Solucin de cistina-triotfano 25 ml
Solucin de oolisorbato 80 O 25 ml
10 (]
Dextrosa anhidra
Acetato de sodio anhidro 5 (]
Solucin de adenina-auanina--uracilo 5 ml
Solucin de riboflavina--clorhidrato de tiamina-bioti- 5 ml
na
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina- 5 ml
clorhidrato de oiridoxina
Solucin salina A 5 ml
Solucin salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacil/us plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 ml de agua; agre-
gar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Acetato de
sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mezcla en
un bao de vapor, mezclando, hasta que se disuelva el
agar. Agregar porciones de 1 O ml de la solucin ca-
liente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los tubos, este-
rilizar en un autoclave a 121 , y dejar que los tubos se
enfren en posicin vertical. Inocular tres o ms de los
tubos, sembrando por puncin un cultivo puro de Lac-
tobacillus plantarum 1 incubando durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30' y 3 T mantenida termostti-
camente con un margen de 0,5 . Almacenar en un
refrigerador. Preparar un cultivo reciente por puncin
del cultivo madre una vez por semana y no usarlo para
USP 38
preparar el Inoculo si el cultivo tiene ms de 1 semana
de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que conten-
gan 0,2 itg cir plntotrnato rlP rakin a rada una rlP las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 ml de
Solucin madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godn, esterilizar en un autoclave a 121" y enfriar.
lnculo: [NOTA~Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de clulas del Cultivo madre de Lactobacillus plan-
tarum a un tubo estril que contenga 1 O ml de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30 y 37 mantenida termostti-
camente con un margen de 0,5. La suspensin de
clulas as obtenida es el lnculo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solu-
cin estndar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos
vacos similares 5,0 ml de Solucin madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volmenes de la Solucin muestra correspon-
dientes a tres o ms niveles especificados de la Solu-
cin estndar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solucin ma-
dre de medio basal y agua suficiente para obtener
1 O ml. Colocar un set completo de tubos de Estndar
y muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilla o seccin de una
gradilla, preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para evitar la conta-
minacin y esterilizar en un autoclave a 121 durante
5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lncu/o a cada
tubo, excepto dos de los cuatro tubos que no con-
tengan Solucin estndar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y 37
mantenida termostticamente con un margen de
0,5 hasta que, despus de 16-24 horas de incuba-
cin, no se presente un aumento significativo de tur-
bidez en los tubos que contengan el nivel ms alto
de Estndar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos segn se in-
dica a continuacin. Mezclar el contenido de cada
t~bo y transferir a u_n recipiente apto para lectura p-
tica s1 fuera necesario. Colocar el recipiente en un
espectrofotmetro ajustado a una longitud de onda
especfica entre 540 y 660 nm, y leer la transmitancia
cuando se alcance un estado estacionario. El estado
estacionario se observa unos pocos segundos despus
de la agitacin cuando la lectura del galvanmetro se
mantenga constante durante 30 segundos o ms.
Permitir aproximadamente el mismo intervalo de
tiempo para la lectura de cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contami-
nacin con un microorganismo extrao, no tomar en
cuenta el resultado de la valoracin.
Clculos: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta segn se indica a continuacin. Para
cada nivel del Estndar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (l.) como la diferencia, y= 2,00 - 2.:. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
funcin del logaritmo de los ml de la Solucin estn-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmtica o logartmica, la que proporcione
la mejor aproximarin a una lnea recta. Trazar la lnea
Suplementos Dietticos /Vitaminas Hidrosolubles 6773
recta o la curva de regresin que me1or se a1uste los
puntos grafiradm
Calcular la respuesta, y, sumando las dos transmitan-
rias para rada nivel de la Solucin muestra. Leer, a
partir de la curva estndar, el logaritmo del volumen
de la Solucin estandar correspondiente a cada uno
de los valores de y comprendidos dentro del intervalo
entre los puntos extremos graficados para el Estndar.
Restar de cada logaritmo as obtenido el logaritmo
del volumen, en ml, de la Solucin muestra para ob-
tener la diferencia, X, de cada nivel de dosificacin.
Promediar los valores de X para cada uno de los tres
? ms niveles de dosificacin para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
cin muestra.
Determinar la cantidad, en mg, de ER Pantotenato de
Calcio USP correspondiente al pantotenato de calcio
en cada mg de la porcin de Tabletas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaba presente en cada mg en la
porcin de Tabletas tomada
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nacin por lo menos una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dos logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Va/ora-
ciones Biolgicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Lmites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en ms de 0,08, realizar una o ms determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o ms
valores de M que no difieran en ms de O, 15, calcular
la potencia media de la preparacin que se est
valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C 18H i2CaN2010)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 3
Solucin amortiguadora: 5,0 mg/ml de fosfato mono-
bsico de potasio en agua. Ajustar con cido fosfrico a
un pH de 3,5.
Fase mvil: Metano! y Solucin amortiguadora (1 :9)
Solucin madre del estndar: 0,25 mg/ml de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar cada 4 sema-
nas. Almacenar en un refrigerador.
Solucin estndar: 40 g/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP, a partir de Solucin madre del estndar di-
luida con agua
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1 O mg de pantotenato
de calcio, a un matraz volumtrico de 250 ml. Agregar
1 O ml de metano! y agitar el matraz por rotacin suave
hasta dispersar. Diluir con agua a volumen, mezclar y
filtrar.
Sistema cromato~;rfico
(Ver Cromatografia (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno Ll de 5 m
Temperatura de la columna: 50'"
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 ul
Aptitud del sistema '
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
6774 Vitaminas Hidrosolubles I Suplpmpntm DiPtticos
pan_!o.tenato de calcio (C,8Hi;CaN2010) en la porcin
rlP1nhlPtas tornafla:
Resultado~ (r Ir) v ( \ .. / ( ) x 100
r.. -rca dci pico de ia Soiuc;on muestra
= )o/ucion estandar (mg/ml)
r. = rea del pico de la Solucin estndar
C1 = concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1sH32CaN201o)
NIACINA o NIACINAMIDA! CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Metodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo, cido actico glacial y agua
(5:1 :94)
Fase mvil: Una meLcla de metano!, cido actico gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 1 00 ml.
Solucin estndar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
contengan niacina.] Transferir 80 mg de ER Niacinamida
USP, 20. mg de ER Clorhidrato de Piridoxina USP, 20 mg
de ER R1boflav1na USP y 20 mg de ER Clorhidrato de
Tiamina USP a un matraz volumtrico de 200 ml, y
agregar 180 ml de Diluyente. Sumergir el matraz en un
bao de agua caliente mantenido a 65-70 durante 1 O
minutos agitando regularmente o usando un mezclador
de vrtice, hasta que se disuelvan todos los materiales
slidos. Enfriar rpidamente en un bao de agua fra
durante 1O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
30 Tabletas. Transferir una porcin de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 1 O mg de niacinamida
y 2,5 mg de clorhidrato de piridoxina, de riboflavina y
de clorhidrato de tiamina, a un tubo de centrfuga de
50 ml. Agregar 25,0 ml de Diluyente y mezclar usando
un mezclador de vrtice durante 30 segundos para sus-
pender por completo el polvo. Sumergir el tubo de
centrfuga en un bao de agua caliente mantenido a
65-70, calentar durante 5 minutos y mezclar en un
mezclador de vrtice durante 30 segundos. Devolver el
tubo al bao de agua caliente, calentar durante 5 minu-
tos ms y mezclar en un mezclador de vrtice durante
30 segundos. Filtrar una porcin de la solucin, enfriar
a temperatura ambiente y usar el filtrado transparente.
[NOTA-Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la
filtracin.]
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3, 9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1O ul
Aptitud del sistema ' (C12H17N,,,S)
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(C,,H6N,O) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (r,,/r,) x (C/C,) x 100
USP 38
ru = rea del pico de niac1nam1da de la Solucin
rnuestra
= rea del pico de n1acinam1da de la Solucion
C!.;tr;do:
= <on<Pntrn<ihn rle FR Niacinamida USP en !a
= concentracin nominal de niacinamida en la
Solucin muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contengan niacina:
Resultado= (ru!r1) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacina de la Solucin muestra
rs = rea del pie.o de niacina de la Solucin
estndar
C1 = concentracin de ER Niacina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (C 8 H,, N0 3
HCI), de riboflavina (C11H20N406) y de clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S HCI) en la porcin de
Tabletas tomada:
Res u Ita do = ( ru! r1) x ( Cs/ Cu) x 100
ru =rea del pie.o de la vilarnina correspondiente
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
pertinente en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la vitamina
correspondiente en la Solucin muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C 12 H17 N5 0 4 S)
en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C,H6N20), niacina
(C6HsN02), clorhidrato de piridoxina (CsH 11 NO, HCI),
riboflavina (Ci 1H1uN40o) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN,10S HCI) o mononitrato de tiamina
NIACINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Transferir 1 rnl de cido actico glacial y
2,5 g de edetato disdico a un matra1 volumtrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Disolvente de extraccin: Solucin A y metano! (3: 1)
Fase mvil: Solucin de acetato de sodio O, 1 M
(1 ?,6 mg_/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
ac1do acet1co a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
una pequea cantidad de metano! (hasta 1%) a la Fase
mvil para me1orar la resolucin.]
Solucion madre del estndar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de extraccin
USP 38
Solucin estndar: Transferir .'.>,O ml de Solucin madre
Je/ estndar a un matraz volumtrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extraccion a volumen.
Solucin mucstrn: l !'40TA E:.tu prcp.:ir .:icin es adc
cuada para la ciPtPrrninil<inn lP ni;irin;i o ni;irin;irnil;i,
piridoxina y riboflavina, cuando se encuentran presentes
en la formulacin.] Reducir a polvo tino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin de polvo, equiva-
lente a una cantidad nominal de 2 mg de riboflavina, a
un matraz volumtrico de 200 ml. Si la riboflavina no
se encuentra presente en la formulacin, usar una por-
cin de polvo, equivalente a una cantidad nominal de
2 mg de piridoxina. Si la piridoxina no se encuentra
presente en la formulacin, usar una porcin de polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 20 mg de nia-
cina o niacinamida. Agregar 1 00,0 ml de Disolvente de
extraccin y mezclar durante 20 minutos, usando un
agitador de movimiento tipo mueca (wrist-action). Su-
mergir el matraz en un bao de agua mantenido a
70-75" y calentar durante 20 minutos. Mezclar en un
mezclador de vrtice durante 30 segundos, enfriar a
temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
no! entre cada inyeccin.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C6H,N02) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado~ (rjr,) v (C/Cu) v 100
r11 = rea del pico de niacina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de niacina de la Solucin
estndar
C1 = concentracin de ER Niacina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la canti-
dad declarada de niacina (C6HsN7)
NIACINAMIDA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin, Fase mvil, Solucin madre
del estndar, Solucin estndar, Solucin muestra y
Sistema cromatogrfico: Usando ER Niacinamida USP
en lugar de ER Niac1na USP, proceder segn se indica
en Nacna, Mtodo 2.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacinamida. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamida
(C 6 H6 N,O) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs/C1) x 100
r,, = rea del pico de niacinamida de la Solucin
mw-'stm
r1 = rea del pico de niacinamida de la Solucin
estndar
Sup!Prner!/us D!Ptr'ticnc; /Vitamina' Hidro<;oluh!e<; 677')
= concentracin de ER Niacinamida USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
e = concentracin nominal de niacinamida en la
So!:JciOn rnucstrc (mg/mL)
Criterim de aceptacin: 90,.00,ici- l .50,0% de la cantidad
declarada de 111ac1nam1da (C6H6N2)
CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.
Disolvente de extraccin, Fase mvil y Solucin mues-
tra: Preparar segn se indica en Niacina, Mtodo 2.
Solucin madre del estndar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extraccin
Solucin estndar: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz volumtrico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extraccin a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 2.54 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (CsH 11 NO, HCI) en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de piridoxina de la Solucin
muestra
r1 = rea del pico de piridoxina de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
(, = concentracin nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 NOi HCI)
RIBOFLAVINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin: Preparar segn se indica en
Niacina, Mtodo 2.
Solucin A: 6,8 g/L de acetato de sodio en agua
Fase mvil: Preparar una mezcla de Solucin A y meta-
no! (13:7). Agregar 2 ml de trietilamina fr L de la
mezcla y ajustar con cido actico glacia a un pH de
.5,2.
Solucin madre del estndar: Transferir 20 mg de ER
Ribotlavina USP a un matraz volumtrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Disolvente de extraccin. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un bao de agua mante-
nido a 65'-7.5'. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rpidamente en un bao de agua
fra a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extraccin a volumen.
Solucin estndar: Diluir .5,0 ml de Solucin madre del
estndar con Disolvente de extraccin hasta 25,0 ml.
Solucin muestra: Preparar segn se indica en Niacina,
Mtodo 2.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta <621 ), Aptitud del Sistema.)
6776 Vitaminas Hirlrmoluhles / Suplementos Dietticos
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno Ll
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: .?O pi
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de riboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C, 7H20N406) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (ru! r1) x ( C/ Cu) x 1 00
ru = rea del pico de riboflavina de la Solucin
muestra
r1 = rea del pico de riboflavina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Riboflavina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de riboflavina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C17H20N406)
TIAMINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin A: 1,88 mg/ml de 1-hexanosulfonato de so-
dio en cido fosfrico al O, 1 %
Fase mvil: Solucin A y acetonitrilo (46:9)
Solucin madre del estndar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en cido clorhdrico 0,2 N
Solucin estndar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con cido clorhdrico 0,2 N
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Mezclar una porcin de Tabletas
reducidas a polvo con un volumen de cido clorhdrico
0,2 N para obtener una concentracin nominal de
0,02 mg/ml de tiamina. Agitar durante 1 5 minutos con
un agitador de movimiento tipo mueca (wrist action)
y calentar a ebullicin durante 30 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y filtrar. Usar el filtrado
transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Para productos
que contengan clorhidrato de tiamina, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (C17H17CJN40$ HCI) en la porcin de Table-
tas tomada:
Resultado= (r11/r1) x (C/Cu) x 100
ru ~ rea del pico de tiilmina de la Solucin muestra
r5 = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
t1am1na en la Solucin muestra (mg/ml)
USP 38
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tia mina (Cr ;H11Ns04S)
en id porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (r,,/r,) x (C./Cu) x (M,1/M2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
r, = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
C5 = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
M,i = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C12H11CIN40S HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Mtodo 3
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/ml de edetato disdico en agua
Fase mvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de cido actico glacial y 350 ml de metanol a un ma-
traz volumtrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solucin madre del estndar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
Solucin estndar: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz de 125 ml con tapn. Agregar
1 0,0 ml de una mezcla de metanol y cido actico gla-
cial (9:1) y 30,0 ml de una mezcla de metanol y etien-
glicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
bao de agua mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Solucin muestra: Pesar y reducir a polvo fino no me-
nos de 20 Tabletas. Transferir una porcin de polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 7,5 mg de nia-
cina o niacinamida, 1,2 mg de clorhidrato de pirido-
xina, 0,4 mg de riboflavina y 1,2 mg de clorhidrato de
tiamina, a un matraz de 125 ml con tapn. Agregar
1 0,0 ml de una mezcla de metanol y cido actico gla-
cial (9:1) y 30,0 ml de una mezcla de metano! y etilen-
glicol (1: 1). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
bao de agua mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solurin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de niacina (CGHsN02) o niacina-
mida (C6H6N 2 0) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( C/ Cu) x 1 00
USP 38
r,, = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de niacina o niacinamida de la
5uluuon eslndur
C = conccntrJcin de ER NiJcinJ USP o ER
Niacinamida USP en la Solucin estndar
(mg/mL)
C11 = concentracin nominal de niacina o
niacinamida en la Solucin muestra (mg/mL)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CHH11 NOi
HCI), riboflavina (C 11H20N406) y clorhidrato de
tiamina (Ci1H11CIN40S HCI) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado= (r11/r1) x (C/C11) x 100
ru = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
pertinente en la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de la vitamina
correspondiente en la Solucin muestra
(mg/mL)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x (Mc1/M,2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
r5 = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/mL)
Mc1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,? = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la canti-
dad declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03
HCI), riboflavina (C11H20N406) y tiamina como clorhi-
drato de tiamina (C12H11CIN40S HCI) o mononitrato
de tiamina (C12H11Ns04S)
[NOTA-Se pueden usar soluciones estndar para absor-
cin atmica disponibles comercialmente para los mi-
nerales, cuando sea pertinente, donde se describe la
preparacin de una Solucin madre del estndar en las
siguientes valoraciones. Usar agua desionizada cuando
se especifica agua. Cuando se especifica espectrofoto-
metna de absorcin atmica en la valoracin, se pue-
den diluir cuantitativamente las Soluciones estndar y la
Solucin muestra con el disolvente especificado, si fuera
necesario, para producir soluciones con concentracio-
nes adecuadas adaptables al intervalo lineal o de tra-
bajo del instrumento.]
CALCIO, Mtodo 1
Solucin de cloruro de lantano: 267 mg/mL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en cido clorhdrico O, 125
N 50 mL. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
Solucin estndar de calcio: 400 g/mL de calcio. Di-
solver 1,001 g de carbonato de calcio, previamente se-
cado a 300~ durante 3 horas y enfriado en un deseca-
dor durante 2 horas, en 25 mL de cido clorhdrico 1 N.
Calentar a ebullicin para expulsar el dixido de car-
bono y diluir con agua ~asta 1000 mL. . muestra para que contenga 1 g/mL de cromo y om1t1r
Solucion madre del estandar: 1 00 g/mL de calcio, a
partir de Solucin estndar de calcio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Suplementos Oiet2ticos /Vitaminas Hidrosolubles 6777
Soluciones estndar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 mL de Solucin madre del estandar a sendos
matraces volumtricos de 100 mL. Agregar a cada ma-
lraL 1,0 mL de Solucion de cloruro de lantano y diluir
con ;iguJ J volumrn para obtrm'r concrntraciones dr
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 pg/mL de calcio.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin de polvo, equiva-
lente a 5 Tabletas, a un crisol de porcelana. Calentar el
crisol en una mufla mantenida a 550 durante 6-12
horas y enfriar. Agregar 60 mL de cido clorhdrico y
calentar a ebullicin suave sobre una placa de calenta-
miento o en un bao de vapor durante 30 minutos,
enjuagando intermitentemente la superficie interior del
crisol con cido clorhdrico 6 N. Enfriar y transferir
cuantitativamente el contenido del crisol a un matraz
volumtrico de 1 00 ml. Enjuagar el crisol con pequeas
porciones de cido clorhdrico 6 N y agregar l?s enjua-
gues al matraz. Diluir con agua a volumen y filtrar, des-
echando los primeros 5 mL del filtrado. Diluir esta solu-
cin cuantitativamente con cido clorhdrico O, 125 N
para obtener una concentracin nominal de 2 pg/mL
de calcio, agregando 1 mL de Solucin de cloruro de lan-
tano por 100 mL del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz \851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara:, Calcio, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cal-
cio a 42~,7 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solucin de cloruro de lantano por 100 ml.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en pg/mL de
calcio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cal-
cio (Ca) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de calcio en la Solucin
muestra (p9/mL)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solucin
muestra (pg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
CROMO, Mtodo 1
Solucin estndar de cromo: 1000 g/mL de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secado a
120" durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
de polietileno.
Solucin madre del estndar: 1 O pg/mL de cromo, a
partir de Solucin estndar de cromo diluida con cido
clorhdrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estndar: Transferir 1 0,0 y 20,0 mL de Solu-
cin madre del estndar a sendos matraces volumtricos
de 100 mL, y transferir 15,0 y 20,0 mL de, Solucin ma-
dre del estndar a sendos matraces volumetricos de
matraces con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 g/mL
de cromo.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin ..
el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz \851 ).)
6778 Vitaminas Hidrosolubles / Suplementos Dietticos
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cromo, de c5todo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Linc.i de cmi~in de
cromo a 357.9 nm
Blanco: c1d~ clorh1dnco O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/mL
de cromo en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/C11) x 100
C =concentracin medida de cromo en la Solucin
muestra (g/mL)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
COBRE, Mtodo 7
Solucin estndar de cobre: Disolver 1,00 g de lmina
de cobre en un volumen mnimo de una solucin de
cido ntrico al 50% (v/v) y diluir con una solucin de
cido ntrico al 1 % (v/v) hasta 1000 mL. Esta solucin
contiene 1 000 g/mL de cobre.
Solucin madre del estndar: 100 g/mL de cobre, a
partir de Solucin estndar de cobre diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 200 mL. Diluir con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y
4,0 ~/mL de cobre. , . . . que contengan una barra mezcladora recubierta de
Solucion muestra: Proceder segun se 1nd1ca en Calcm,
Mtodo 1, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 2 g/mL de cobre y omitir
el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cobre, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de co-
bre a 324,7 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
cobre en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de co-
bre (Cu) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de cobre en la Solucin
muestra (g/mL)
Cu - concentracion nominal de cobre en la Solucin
muestra (~1g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
FLUORURO, Mtodo 1
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en envases de
plstico.]
USP 38
Solucin de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de ~uuiu e11 600 mL Lle dlJUd en u11 matraz vo-
lumtrico de l 000 ml. Dejar que la solucin se equili-
bre a temperatura an1biente y diluir COi) J.ua a, volu-
men ..Ajustar con unas pocas gotas de ac1~0 acet1co a
un pH de 7,0.
Solucin de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 mL de agua en un matraz volumtrico
de 1000 ml. Agregar 28 ml de cido perclrico y diluir
con agua a volumen.
Solucion madre del estndar de fluoruro: 500 g/mL
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio previamente secado a 100 durante 4 horas y en-
friado en un desecador, en agua
Solucin madre intermedia A: 100 g/mL de fluoruro,
a partir de Solucin madre del estndar de fluoruro di-
luida con agua
Solucin madre intermedia B: 1 O pg/ml de fluoruro, a
partir de Solucin madre del Pstndar dP flunruro diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 3,0; 5,0 y 10,0 mL de
Solucin madre intermedia B, y 5,0 y 1 0,0 mL de Solucin
madre intermedia A a sendos matraces volumtricos de
100 ml. Agregar a cada matraz 10,0 ml de cido clor-
hdrico 1 N, 25 mL de Solucin de acetato de sodio 3 M
y 25,0 mL de Solucin de citrato de sodio. Diluir el con-
tenido de cada matraz con agua a volumen para obte-
ner concentraciones de O, 3; 0,5; 1,0; 5,0 y 10,0 g/mL
de fluoruro.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de las Table-
tas reducidas a polvo fino, equivalente a una cantidad
nominal de 200 g de fluoruro, a un matraz volum-
trico de 1 00 mL. Agregar 1 0,0 mL de cido clorhdrico
1 N, 25,0 mL de Solucin de acetato de sodio 3 M y
25,0 mL de Solucin de citrato de sodio, y diluir con
agua hasta 100 ml.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Transferir a sendos vasos de precipitados de plstico
plstico 50,0 mL de cada una de las Soluciones estn-
dar y de la Solucin muestra. Medir los potenciales
(ver pH (791 )), en mV, de las Soluciones estndar y la
Solucin muestra, con un medidor de pH capaz de
una reproducibilidad mnima de 0,2 mV y equipado
con un electrodo indicador especfico para in fluo-
ruro y un electrodo de referencia de calomel. [NOTA-
Al tomar las mediciones, sumergir los electrodos en la
solucin, mezclar en un agitador magntico con su
parte superior aislada hasta que se logre el equilibrio
(1-2 minutos) y registrar el potencial. Enjuagar y se-
car los electrodos entre mediciones, teniendo cuidado
de evitar el dao del cristal del electrodo especfico
para in fluoruro.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en g/mL, de las Soluciones estndar en funcin
del potencial, en mV. A partir de la curva de la res-
puesta estndar as obtenida y el potencial medido
de la Solucin muestra, determinar la concentracin,
C, en pg/mL, de fluoruro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
flor (F) en la porcin de Tableta~ tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de fluoruro en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
FLUORURO, Mtodo 2
[NOTA-Usar recipientes de plstico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
USP 38
Solucin amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidrxido de sodio O, 1 N a 1 000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase mvil: Alcohol, cido sulfrico O, 1 N y agua
(20:5:175)
Solucin madre del estndar: 220 g/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solucin contiene
1 00 9/ml de fluoruro.
Solucion estndar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extraccin en fase slida especificada para su uso en la
Solucin estndar y la Solucin muestra segn se indica a
continuacin. Usando vaco a una presin que no ex-
ceda de 5 mm de mercurio, lavar la columna con un
volumen de columna de metano! seguido de un volu-
men de columna de Solucin amortiguadora de pH 70,0.
No dejar que la parte superior de la columna se seque.
Si la parte superior de la columna se seca, reacondicio-
nar la columna.] Transferir 10,0 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz volumtrico de 100 ml. Agre-
gar 75 ml de agua y ajustar con hidrxido de sodio O, 1
N a un pH de 10,4 0, 1. Diluir con agua a volumen.
Filtrar, desechando los primeros 15 ml del filtrado.
Transferir 25,0 ml del filtrado a un matraz volumtrico
de 50 ml, agregar 15,0 ml de agua y ajustar con hidr-
xido de sodio O, 1 N a un pH de 10,0. Diluir con Solu-
cin amortiguadora de pH 7O, O a volumen. El u ir una
porcin de esta solucion a travs de una columna de
extraccin en fase slida de 3 ml que contenga relleno
L1 que se conecta a travs de un adaptador a una se-
gunda columna de extraccin en fase slida que con-
tenga relleno de intercambio catinico fuerte de sulfo-
nilpropilo. Desechar los primeros 3 ml del eluato y
recoger el resto del eluato en un matraz adecuado para
inyectar en el cromatgrafo.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin de Tabletas reduci-
das a polvo, equivalente a una cantidad nominal de
1 mg de flor, a un matraz volumtrico de 100 ml.
Agregar 15 ml de agua y agitar vigorosamente. Enjua-
gar las paredes del matraz con 15 ml de agua y dejar
en reposo durante 1 O minutos. Diluir con agua hasta
85 ml, ajustar con hidrxido de sodio 1 N a un pH de
10,4 O, 1 y diluir con agua hasta 1 00 ml. Proceder
segn se indica en Solucin estndar, comenzando
donde dice "Filtrar, desechando los primeros 15 ml del
filtrado."
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L1 7
Columna analtica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L1 7
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucion muestra
Medir las reas de los picos de fluoruro. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de flor (F) en la
porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
r,, = rea del pico de flor de la Solucin muestra
rs = rea del pico de flor de la Solucin estndar
Cs = concentracin de fluoruro en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
Suplementos Dietticos / Vitarninc1~ Hidrmoliibles 6779
YODURO
Agua de bromo: Agregar 1 00 ml de agua a 20 ml de
bromo en un frasco con tapn de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en reposo durante 30 minutos y usar ei
~obrendddnle.
Anlisis
Muestra: Tabletas
Transferir una porcin de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a una cantidad nominal de 3 mg de
yoduro, a un crisol de nquel. Agregar 5 9 de carbo-
nato de sodio, 5 ml de solucin de hidroxido de sodio
al 50% (p/v) y 1 O ml de alcohol, teniendo cuidado de
humedecer toda la muestra. Calentar el crisol en un
bao de vapor para evaporar el alcohol, luego secar el
crisol a 100 durante 30 minutos para evitar salpicadu-
ras durante el calentamiento subsiguiente. Transferir el
crisol con su contenido a un horno calentado a 500 y
calentar el crisol durante 15 minutos. [NOTA--Es nece-
sario calentar a 500 para carbonizar toda la materia
orgnica presente; se puede usar una temperatura ms
alta, si fuera necesario, para asegurar la carbonizacin
completa de la materia orgnica.] Enfriar el crisol,
agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol con un vidrio
de reloj y calentar a ebullicin suave durante 1 O minu-
tos. Filtrar la solucin y lavar el crisol con agua hir-
viendo, recogiendo el filtrado y los lavados en un vaso
de precipitados. Agregar cido fosfrico hasta que la
solucin sea neutra frente al anaranjado de metilo y
luego agregar 1 ml de cido fosfrico en exceso.
Agregar un exceso de Agua de bromo y calentar la so-
lucin a ebullicin suave hasta que se torne incolora y
luego durante 5 minutos ms. Agregar unos pocos
cristales de cido saliclico y enfriar la solucin a 20.
Agregar 1 ml de cido fosfrico y 0,5 g de yoduro de
potasio, y valorar el yodo liberado con tiosulfato de
sodio 0,005 N SV, agregando almidn SR cuando el
color del yodo liberado haya desaparecido casi por
completo.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = V x NA x F x 1,,,, x (Aw! W) x (1 00/ L)
V = volumen de tiosulfato de sodio consumido
(ml)
NA = normalidad real de la solucin de tiosulfato de
sodio usada (mEq/mL)
F = factor de correccin para convertir mg a g,
1000 g/mg
lme = miliequivalente de 1, 21 mg/mEq
Aw = peso promedio de las Tabletas
W = peso de la porcin de Tabletas tomada
L = cantidad declarada de yodo (g/Tableta)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
HIERRO, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en 25 ml de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solucin madre del estndar de hierro a sen-
dos matraces volumtricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con agua a volumen para obtener
concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y 8,0 g/ml de
hierro.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
MPtodo 1, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 5 ~tg/ml de hierro y omitir el uso de Solucin de
cioruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
6780 Vitamin<h l lidrmoluhle~ / '\ur'IPrnPntm nietticos
Modo: Espectrofotometria de absorcin atmica
Lmpara: Hierro, de catodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Linea de em1s1n de
hierro n ?48 :1 nm
1 MANGANESO, MluJu 1
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
hierro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de hierro en la Solucin
muestra (~/ml)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
MAGNESIO, Mtodo 1
Solucin de cloruro de lantano: Preparar segn se in-
dica en Calcio, Mtodo 1.
Solucin estndar de magnesio: Transferir 1,0 g de
cinta de magnesio a un matraz volumtrico de
1000 ml, disolver en 50 ml de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar para obtener una
solucin con una concentracin de 1000 g/ml de
magnesio.
Solucin madre del estndar: 20 g/ml de magnesio,
a partir de Solucin estndar de magnesio diluida con
cido clorhdrico O, 1 25 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 1 00 ml. Agregar a cada matraz
1,0 ml de Solucin de cloruro de lantano y diluir con
cido clorhdrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 g/ml de
magnesio.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 0,4 g/ml de magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Magnesio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
magnesiq a 285,2 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solucin de cloruro de lantano por 100 ml.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graticados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/ml,
de magnesio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
magnesio (Mg) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado - (C/C11) x 100
C = concentracin medida de magnesio en la
Solucin muestra (~tg/ml)
USP 38
Cu = concentracin nominal de maqnesio en la
SoluC1on muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
Solucin madre del estndar de manganeso: Transfe-
rir una cantidad pesada de 1,00 g de manganeso a un
matraz volumtrico de 1 000 ml. Disolver en 20 ml de
cido ntrico, diluir con cido clorhdrico 6 N a volumen
y mezclar para obtener una solucin con una concen-
tracin de 1000 g/ml de manganeso.
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de manga-
neso, a partir de Solucin madre del estndar de manga-
neso diluida con cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones de 0,5; 0,75;
1,0; 1,5 y 2,0 g/ml de manganeso.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 1 g/ml de manganeso y omitir el uso de Solucin
de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Manganeso, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
mangane,so a 279,5 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 1 25 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/ml,
de manganeso (Mn) en la Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
manganeso (Mn) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de manganeso en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de manganeso en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
MOLIBDENO, Mtodo 7
Diluyente: 20 mg/ml de cloruro de amonio en agua
Solucin estndar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumtrico de
1000 ml y disolver en 50 ml de cido ntrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1000 g/ml de molibdeno.
Solucin madre del estndar: 1 00 g/ml de molib-
deno, a partir de Solucin estndar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 ml de
Solucin madre del estndar a sendos matraces volum-
tricos de 100 ml, y agregar 5,0 ml de cido perclrico
a cada matraz. Calentar a ebullicin suave las soluciones
en cada matraz durante 15 minutos, enfriar a tempera-
tura ambiente y diluir cada una con Diluyente a volu-
men para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 g/ml de molibdeno.
Solucin muestra: Transferir una porcin de polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 1 000 g de mo-
libdeno, a un matraz adecuado y agregar 12 ml de
USP 38
cido ntrico. [NOTA Se puede variar el volumen de
cido ntrico para asegurar que el polvo se disperse uni-
formemente.] Agitar el matraz por rotacin suave cuida-
dosamente hasta dispersar ta muestra de prueba. Some-
ter d ullr asuniuu uur cifile 1O minutos u licisld que la
muestra de prueba se disuelva por completo. Calentar a
ebullicin suave la solucin durante 15 minutos y en-
friar a temperatura ambiente. Agregar cuidadosamente
8 ml de cido perclrico, calentar hasta que aparezcan
humos de cido perclrico y agitar el matraz por rota-
cin suave para disipar los humos. Repetir el calenta-
miento y la agitacin por rotacin suave hasta que los
humos desaparezcan. Enfriar a temperatura ambiente.
Transferir cuantitativamente el contenido del matraz a
un matraz volumtrico de 1 00 ml con ayuda de Dilu-
yente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara:, Molibdeno; de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de mo-
libdeno a 313,3 nm
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20:1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/ml,
de molibdeno en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de molibdeno en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de molibdeno en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
MOLIBDENO, Mtodo 2
Solucin de fluoruro de sodio: Agregar 200 ml de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solucin se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solucin de sulfato ferroso: 4,98 mg/ml de sulfato fe-
rroso en agua
Solucin de tiocianato de potasio: 200 mg/ml de tio-
cianato de potasio en agua
Solucin de cloruro estannoso al 20%: Transferir 40 g
de cloruro estannoso a un vaso de precipitados, agre9ar
20 ml de cido clorhdrico 6,5 N y calentar la solucion
hasta que el cloruro estannoso se disuelva. Enfriar y di-
luir con agua hasta 100 ml.
Solucin de cloruro estannoso diluida: Solucin de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solucin en el momento de su uso.
Solucin estndar: 20 g/ml de molibdeno en agua
Muestra: Una porcin de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a 40 g de molibdeno
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analtica: 465 nm
Blanco: Alcohol amlico
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 ml de Solucin estndar a
sendos vasos de precipitados de 200 ml. Agregar
20 ml de cido ntrico a cada vaso de precipitados.
Suplememos Dietticos/ Vitaminas Hidrosolubles 6781
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de
relo y calentar a ebullicin lentamente sobre una
placa de calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente. Agregar 6 ml de cido percl-
1icu, cubrir lm vasos de precipitados con un vidrio de
reloj y continuar el calentamiento hasta que la diges-
tin sea completa, lo cual se indica cuando el lquido
se torna incoloro o amarillo plido. Evaporar las solu-
ciones en los vasos de precipitados hasta sequedad.
Enjuagar las paredes de los vasos de precipitados y
los vidrios de reloj con agua, y agregar ms agua
para completar 50 ml en cada vaso de precipitados.
Calentar a ebullicin suave la solucin acuosa durante
unos pocos minutos. Enfriar a temperatura ambiente.
Agregar 2 gotas de anaranjado de metilo SR y neutra-
lizar con hidrxido de amonio. Agregar 8,2 ml de
cido clorhdrico. Transferir cuantitativamente el con-
tenido de los vasos de precipitados a sendos matraces
volumtricos de 1 00 ml, enjuagar los vasos de preci-
pitados con agua, transferir los enjuagues a los matra-
ces volumtricos correspondientes y diluir con agua a
volumen. Transferir 50,0 ml de cada solucin a em-
budos de separacin. Agregar a cada embudo de se-
paracin 1,0 ml de Solucin de f/uoruro de sodio,
0,5 ml de Solucin de sulfato ferroso, 4,0 ml de Solu-
cin de tiocianato de potasio, 1,5 ml de Solucin de
cloruro estannoso al 20% y 15,0 ml de alcohol am-
lico, y agitar los embudos de separacin durante 1
minuto. Dejar que las capas se separen y desechar las
capas acuosas. Agregar 25 ml de Solucin de cloruro
estannoso diluida a cada embudo de separacin y agi-
tar suavemente durante 15 segundos. Dejar que las
capas se separen y desechar las capas acuosas. Trans-
ferir la capa orgnica de cada embudo de separacin
a un tubo de centrfuga y centrifugar a 2000 rpm
durante 1 O minutos. Determinar las absorbancias de
las fases orgnicas de la Solucin estndar y la Mues-
tra, y corregir con el Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (Au/A1) x [(V x Cs)!Mu] x 100
Au = absorbancia de la solucin a partir de las
Tabletas
A1 = absorbancia de la solucin a partir de la
Solucin estndar
V = volumen de la Solucin estndar analizada,
2,0 ml
C1 = concentracin de molibdeno en la Solucin
estndar (g/ml)
M 11 = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(g)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
FSFORO, Mtodo 7
Solucin de cido sulfrico: Agregar cuidadosamente
cido sulfrico al agua (37,5:100) y mezclar.
Solucin de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solucin de cido sulfrico y agua
(2:3). [NOTA--Disolver primero en agua y luego diluir
con Solucin de cido sulfrico a volumen.)
Solucin de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en ;gua. Agregar 1 qota de cido sulfrico por 100 ml
de solucin.
Solucin de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solucin madre del estndar de fsforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobsico de potasio, previamente
secado a 1 05 durante 2 horas y almacenado en un
desecador, y transferir a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en agua, agregar 6 ml de cido sul-
frico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1000 g/ml de fsforo.
6782 VitJminas lfidrosolubles / uf!IPrrw11/m DiPt1'ticos
Solucin estndar: 20 g/mL de fsforo, a partir de So-
lucin 1nadrt' dei eslndar de fosforo diluida con agua
Solucin muestra: [Norn--Reducir a polvo fino y pesar
u11 11111ew co11lddo de Tabietas.j Transferir una porcin
de po!vo, cquivJ!cntr u un<l cnntirllci nominal de
1 00 mg de fsforo, a 25 mL de cido ntrico y digerir
sobre una placa de calentamiento durante 30 minutos.
Agregar 15 mL de cido clorhdrico y continuar la di-
gestion hasta que cese la produccin de humos marro-
nes. Enfriar y transferir el contenido del matraz a un
matraz volumtrico de 500 mL con ayuda de pequeas
porciones de agua. Diluir con agua a volumen. Transfe-
rir 10,0 mL de esta solucin a un matraz volumtrico de
100 mL y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espertrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Celda: 1 cm
Longitud de onda analtica: 650 nm
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Transferir a tres matraces volumtricos diferentes de
25 mL, 5,0 mL de la Solucin estndar, de la Solucin
muestra y de agua para proporcionar el blanco. Agre-
gar a cada uno de los tres matraces 1,0 mL de Solu-
cin de molibdato de amonio, de Solucin de hidroqui-
nona y de Solucin de bisulfito de sodio, y agitar por
rotacin suave hasta mezclar. Diluir el contenido de
cada matraz con agua a volumen y dejar los matraces
en reposo durante 30 minutos. Determinar las absor-
bancias de las soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fs-
foro (P) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (Au/As) x (Cs/Cu) x 100
Au = absorbancia de la Solucin muestra
As absorbancia de la Solucin estndar
= 10,0 y 25,0 ~tg/mL de selenio.
Cs = concentracin de fsforo en la Solucin
estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de fsforo en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90%-125% de la cantidad de-
clarada de fsforo (P)
POTASIO
Solucin estndar de potasio: 100 g/mL de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
105 durante 2 horas, en agua
Solucin madre del estndar: 1 O g/mL de potasio, a
partir de Solucin estndar de potasio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 1 0,0; 15,0; 20,0 y
25,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 1 00 mL. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 g/mL de potasio.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una cantidad nominal de
1 pg/mL de potasio y omitir el uso de Solucin de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometna de absorcin atmica
Lmpara: Potasio, de ctodo hueco
Llama: Aire--acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de po-
tasio a 766,5 nm
Blanco: Agua
Anlisis
Muestras: So1ucionc~ estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Gr Jficar las absorb;mcias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
USP 38
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en ug/mL. de
potasio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de ia cantidad declarada de po-
tasio (K) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/C11) x 100
C = concentracin medida de potasio en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de potasio en la
Solucin muestra (pg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
SELENIO, Mtodo 7
Diluyente: Preparar segn se indica en Molibdeno, M-
todo 7.
Solucin estndar de selenio: [PRECAUCIN-El selenio
es txico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1000 mL y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una concentracin de 1000
g/mL de selenio.
Solucin madre del estndar: 100 g/mL de selenio, a
partir de Solucin estndar de selenio diluida con agua
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 mL de
la Solucin madre del estndar a sendos matraces volu-
mtricos de 1 00 mL, y agregar 5,0 mL de cido percl-
rico a cada matraz. Calentar a ebullicin suave las solu-
ciones durante 15 minutos, enfriar a temperatura
ambiente y diluir cada una con Diluyente a volumen
para obtener soluciones con concentraciones de 5,0;
Solucin muestra: Transferir una porcin de polvo,
equivalente a una cantidad nominal de 1000 g de se-
lenio, a un matraz adecuado y agregar 12 mL de cido
ntrico. [NOTA-Se puede variar el volumen de cido n-
trico para asegurar que el polvo se disperse uniforme-
mente.] Agitar el matraz por rotacin suave cuidadosa-
mente hasta dispersar la muestra de prueba. Someter a
ultrasonido durante 1 O minutos o hasta que la muestra
de prueba se disuelva por completo. Calentar a ebulli-
cin suave la solucin durante 15 minutos y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar cuidadosamente 8 mL
de acido perclrico al matraz, calentar el matraz hasta
que aparezcan humos de cido perclrico y agitar el
matraz por rotacin suave para disipar los humos. Repe-
tir el calentamiento y la agitacin por rotacin suave
hasta que los humos aparezcan de nuevo. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Transferir el contenido del matraz a
un matraz volumtrico de 50 mL con ayuda de Dilu-
yente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Selenio, de ctodo hueco
Llama: Aire--acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de sele-
nio a 196,0 nm
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20: 1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determin<1r las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
selenio en la Solucin muestra.
USP 38
Calcular el porcentae de !a cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C =concentracin medida de selenio en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de selenio en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
SELENIO, Mtodo 2 traz con Solucin de hidrxido de amonio al 5 0% a un
Solucin de cido clorhdrico: cido clorhdrico diluido
con agua (1 en 1O)
Solucion de hidrxido de amonio al 50%: Hidrxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/mL de edetato disdico y 25 mg/mL
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disdico en una porcin de agua,
agregar clorhidrato de hidroxilamina y luego diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diaminonaftaleno
a un embudo de separacin de 250 mL y agregar
200 mL de cido clorhdrico O, 1 N. Lavar la solucin
con tres porciones de 40 mL de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solucin en un frasco
marrn y cubrir la solucin con una capa de 1 cm de
ciclohexano. Esta solucin permanece estable durante 1
semana si se almacena en un refrigerador~
Solucin madre del estndar: [PRECAUCION-EI selenio
es txico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad. Agregar 2 mL de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1000 mL y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una solucin con una concen-
tracin de 1000 g/mL de selenio. Diluir un volumen
de la solucin con cido clorhdrico O, 1 25 N para obte-
ner una concentracin de 2,0 g/mL de selenio.
Solucin estndar: Transferir 10,0 mL de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz con tapn de vidrio. Agre-
gar 1 mL de cido perclrico y 1 mL de Solucin de
cido clorhdrico, y diluir con agua hasta 20 ml.
Solucin muestra: Transferir una porcin de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a una cantidad no-
minal de 20 g de selenio, a un matraz adecuado.
Agregar 1O mL de cido ntrico y entibiar suavemente
sobre una placa de calentamiento. Continuar calen-
tando hasta que la reaccin inicial de cido ntrico haya
desaparecLdo y luego agregar 3 mL de cido perclrico.
[PRECAUCION-Tener cuidado en esta etapa debido a
que la reaccin del cido perclrico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparicin de humos blancos de cido perclrico
o hasta que la digestin comience a tornarse oscura.
Agregar 0,5 mL de cido ntrico y continuar el calenta-
miento, agregando cantidades adicionales de cido n-
trico si se presenta an ms oscurecimiento. Digerir du-
rante 1 O minutos despus de la primera aparicin de
humos de cido perclrico o hasta que la digestin se
torne incolora. Enfriar el matraz. Agregar 2,5 mL de So-
lucin de cido clorhdrico y volver a colocar el matraz
sobre la placa de calentamiento para expulsar los resi-
duos de cido ntrico. Calentar la mezcla durante 3 mi-
nutos despus de que comience a hervir. Enfriar el ma-
traz a temperatura ambiente y diluir con agua hasta
20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Suplementos Dietticos /Vitaminas l lidrosolubles 6783
Modo: UV
Celda: 1 cm
longitud de onda analtica: )80 nm
Blanco: 1 mL de cido perclrico y 1 mL de Solucin
de <-ido Liorhdrico diluida rnn agua hasta 20 mL
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Tratar la Solucin muestra, la Solucin estndar y el
Blanco segn se indica a continuacin. Agregar 5 mL
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotacin
suave para mezclar. Ajustar la solucin en cada ma-
pH de 1, 1 O, 1. Agregar 5 mL de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotacin suave para mezclar. Co-
locar los matraces en un bao de agua mantenido a
50" y equilibrar durante 30 minutos, teniendo cui-
dado de cubrir los matraces para protegerlos de la
luz. Enfriar a temperatura ambiente y transferir el
contenido de cada matraz a sendos embudos de se-
paracin. Transferir 10,0 mL de ciclohexano a cada
embudo de separacin y extraer vigorosamente du-
rante 1 minuto. Desechar la capa acuosa. Transferir la
capa de ciclohexano a un tubo de centrfuga y centri-
fugar a 1000 rpm durante 1 minuto para eliminar el
agua remanente. Determinar las absorbancias de las
soluciones a partir de las Muestras contra la solucin
a partir del Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (Au/ As) x [(V x Cs)/ Mu] x 100
Au = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solucin muestra
As = absorbancia de la capa de ciclohexano de la
Solucin estndar
V = volumen de la Solucin madre del estndar
usada para preparar la Solucin estndar,
10 mL
Cs = concentracin de selenio en la Solucin madre
del estndar (g/mL)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solucin
muestra (g)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
CINC, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de cinc: 1000 g/mL de
cinc, a partir de xido de cinc disuelto en cido clorh-
drico 5 M (3,89 mg/mL) y diluida con agua hasta el
volumen final. [NOTA-Disolver en cido clorhdrico 5 M
entibiando, si fuera necesario, enfriar y luego diluir a
volumen final.]
Solucin madre del estndar: 50 g/mL de cinc, a
partir de Solucin madre del estndar de cinc diluida con
cido clorhdrico 0, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico 0, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 g/
mL de cinc.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga una concentracin nominal
de 2 ~1g/mL de cinc y omitir el uso de Solucin de clo-
ruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cinc, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cinc
a 213,8 nm
6784 \/ilaminas Hidroso!ub!es / ':,uplcmcntos Dietticos
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Solucionrs rstndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias d las soluciones contra el
Blunw. Graficar ias absorbanc1as de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
cinc en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/C11) x 100
C = concentracin medida de cinc en Ja Solucin
muestra (9/ml)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
BORO, NQUEL, ESTAO y VANADIO, Mtodo 7; CALC19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, fOSFORO
y CINC, Mtodo 2; MOLIBDENO y SELENIO, Mtodo 3
Solucin madre de agua regia: Preparar una mezcla
de cido clorhdrico y cido ntrico (3:1) agregando el
cido ntrico al cido clorhdrico. [NOTA-Ventilar peri- selenio, digerir durante no ms de 15 minutos.]_ Retirar
dicamente la solucin en una campana de extraccin
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solucin madre de
agua regia y agua (1 :9) agregando un volumen de Solu-
cin madre de agua regia a dos volmenes de agua.
Diluir con ms agua a volumen y mezclar bien.
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1000 mg/L de itrio en solucin de cido ntrico al
5% (v/v) y 1000 mg/L de escandia en solucin de cido
ntrico al 5% (v/v) con Diluyente (1 :1 :198), y mezclar.
Solucin madre del estndar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Slo es necesario incluir Jos minerales
de inters en la solucin.] Usando soluciones estndar
de elementos (individuales o combinados) disponibles
comercialmente en solucin de cido ntrico al 5% (vi
v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de solu-
cin estndar de elementos a un matraz volumtrico y
diluir con solucin de cido ntrico al 5% (v/v) hasta
obtener una solucin con concentraciones finales de
aproximadamente 1 000 mg/L de calcio, 100 mg/L de
cobre, 250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio,
1 00 mg/L de manganeso, 800 mg/L de fsforo y
250 mg/ml de cinc.
Solucin madre del estndar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Slo es necesario incluir los minerales de
inters en la solucin.] Usando soluciones estndar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solucin de cido clorhdrico al 20%
(v/v), pipetear y transferir la cantidad apropiada de so-
lucin estndar de elementos a un matraz volumtrico
y diluir con solucin de cido clorhdrico al 20% (v/v)
hasta obtener una solucin con concentraciones finales
de aproximadamente 200 mg/L de boro y 1 00 mg/L de
cromo, de molibdeno, de nquel, de selenio, de estao
y de vanadio.
Soluciones estndar: Preparar una mezcla de Solucin
madre del estndar 7 y Solucin madre del estndar 2,
segn se requiera, en Diluyente para preparar _una curva
de calibracin de seis puntos que abarque el intervalo
de concentracin de cada mineral de inters.
Solucin muestra 1 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados en la Solucin madre del estndar
7 y Solucin madre del estndar 2): Pesar y reducir a
polvo fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una por-
cin igual a 3,5 veces el peso promedio por Tableta a
un matraz volumtrico de 250 ml. Agregar lentamente
25 ml de Solucin mudre de agua regia en incrementos
USP 38
de 5 ml seguidos de mezclado. [NOTA Si la muestra
contiene carbonato, se producir burbujeo. Esperar
ha<>ta que cese el burbujeo para proceder.] Cilentar IJ
solucin a ebullicin sobre una placa de cJentamiento
Continuar calentando suavemente hasta que cese la
produccin de humos (aproximadamente 1 hora).
[NOTA-Si la muestra contiene selenio, digerir durante
no ms de 15 minutos.] Retirar del calor, enfriar y diluir
con agua a volumen. Filtrar aproximadamente 30 ml
en un tubo de centrfuga usando un filtro de nailon
para jeringa con un tamao de poro de 5 m. Si fuera
necesario, realizar diluciones adicionales usando
Diluyente.
Solucin muestra 2 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados nicamente en Ja Solucin madre
del estndar 2): Pesar y reducir a polvo fino no menos
de 20 Tabletas. Transferir una porcin igual a 3,5 veces
el peso promedio por Tableta a un matraz volumtrico
de 250 ml. Agregar lentamente 25 ml de Solucin ma-
dre de agua regia en incrementos de 5 ml seguidos de
mezclado. [NOTA-Si la muestra contiene carbonato, se
producir burbujeo. Esperar hasta que cese el burbujeo
para proceder.] Calentar la solucin a ebullicin sobre
una placa de calentamiento. Continuar calentando sua-
vemente hasta que cese la produccin de humos (apro-
ximadamente 1 hora). [NOTA-Si la muestra contiene
del calor, enfriar y diluir con agua a volumen. ,Filtrar
aproximadamente 30 i:nL en un .tu_bo de centnfuga _
usando un filtro de naJion para iennga con un tamano
de poro de 5 m. Si fuera necesario, realizar diluciones
adicionales usando Diluyente.
Solucin muestra 3 (para Tabletas que contengan los
minerales encontrados nicamente en la Solucin madre
del estndar 7): Pesar y reducir a polvo fino no menos
de 20 Tabletas. Transferir una porcin igual al peso pro-
medio por Tableta a un matraz volumtrico de 250 ml.
Agregar lentamente 25 ml de Solucin madre de agua
regia en incrementos de 5_ml seguidos de mezclado:,
[NOTA-Si la muestra contiene carbonato, se produc1ra
burbujeo. Esperar hasta que cese el burbujeo para pro-
ceder.] Calentar la solucin a ebullicin sobre una placa
de calentamiento. Continuar calentando suavemente
(aproximadamente 1 hora) hasta que cese la produc-
cin de humos. Retirar del calor, enfriar y diluir con
agua a volumen. Filtrar aproximadamente 30 ml en un
tubo de centrfuga usando un filtro de nailon para je-
ringa con un tamao de poro de 5 m. Si f_uera necesa-
rio, realizar diluciones adicionales usando Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometra de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrmetro ajustado para medir
la emisin de cada mineral de inters aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente. [NOTA-
Las condiciones operativas se pueden desarrollar y .op-
timizar basndose en las recomendaciones del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solucin de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta segn se indica en el Anlisis.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar la emisin de cada mineral de inters en
las Soluciones estndar y la Solucin muestra con un
sistema de plasma inductivamente acoplado usando
Diluyentr como blanco. Graficar la emisin de las So-
luciones estndar en funcin de sus concentraciones,
en mg/L, de los minerales de inters y trazar la recta
USP 38
rue mejor se ajuste a los p1mtos graficados. A partir
de la grfica as oblenida, determinar la concenlra-
cin, C, en mg/L, de cada mineral de inters en la
Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de !a cantidad declarada de
cada mineral:
Resultado= eX (V/W) X Fx (Cw/L) X 100
C = concentracin medida del elemento pertinente
en la Solucin muestra (mg/L)
V = volumen de la Solucin muestra (L)
W = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilucin de la Solucin muestra
Cw = peso promedio por Tableta (mg)
L = cantidad declarada/Tableta (mg)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de las canti-
dades declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fsforo (P) y cinc
(Zn); y 90,0%-160,0% de las cantidades declaradas de
boro (B), cromo (Cr), molibdeno (Mo), nquel (Ni), se-
lenio (Se), estao (Sn) y vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Disolucin.
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
PRUEBAS ESPECFICAS
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 103
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 102 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp., Escherichia co/i y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Table-
tas de Vitaminas Hidrosolubles c.on Minerales. La etiqueta
tambin indica la cantidad de cada vitamina y mineral en
trminos de unidades mtricas por unidad de dosifica-
cin y, cuando sea necesario, la forma qumica de vita-
mina presente, e indica adems la forma salina del mine-
ral usado como la fuente de cada elemento. Cuando se
proporciona ms de un mtodo de valoracin para una
vitamina en particular, el etiquetado indica el mtodo de
valoracin con el que cumple el producto nicamente si
no se usa el Mtodo 7.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Biotina USP
ER Pantotenato de Calcio USP
ER Cianocobalamina USP
ER cido Flico USP
ER Niacina USP
ER Niacinamida USP
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
ER Riboflavina USP
ER Fluoruro de Sodio USP
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Vitaminas Oleosolubles, Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Vitaminas Oleosolubles contienen dos o ms
de las siguientes vitaminas oleosolubles: Vitamina A, Vita-
Suplementos DictCticos / VitJminJs Olcosolublcs 6785
mina D como Ergocalciferol (Vitamina D;) o Colecalciferol
(Vitamina D,), Vitamina E, Fitonadiona (Vitamina K1) y
Beta Caroteno. Las Cpsulas contienen no menos de
90,0% y 110 111cs Je 165,0% Je icts cctr1liJaJes Jec.laracJas
de vitamina A (C;.,H ;,,O) como retino! o steres de retino!
en la forma de acetato de retinilo (CnH i;;) o palmitato
de retinilo (Ci6Hoo2); vitamina D como colecalciferol
(C21H44) o ergocalciferol (C2sH44); vitamina E como alfa
tocoferol (C29Hso2), acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs23),
o succinato cido de alfa tocoferilo (CnHs4s); fitonadiona
(C31 H4602); y beta caroteno (C40Hs6).
Las Cpsulas de Vitaminas Oleosolubles no contienen otras
vitaminas o minerales. Pueden contener otras sustancias
agregadas declaradas generalmente reconocidas como se-
guras, en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione ms de un mtodo de valoracin para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los mtodos especificados, declarando el mtodo
usado en el etiquetado nicamente si no se usa el Mtodo
7.]
VITAMINA A, Mtodo 7
[NOTA-Cuando se especifica el uso de un ster de vita-
mina A (acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el
procedimiento siguiente, usar la forma qumica presente
en la formulacin. ER Vitamina A USP es acetato de
retinilo. Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina
A USP. Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano
Solucin estndar: 15 g/mL de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en n-hexano
Solucin madre de aptitud del sistema: 15 g/mL de
palmitato de retinilo en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
iguales de Solucin madre de aptitud del sistema y Solu-
cin estndar para obtener concentraciones de 7,5 g/
mL de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo .
Solucin muestra: Transferir el contenido de no menos
de 20 Cpsulas a un recipiente adecuado, mezclar, y
pesar. Transferir una porcin de la mezcla, equivalente a
5 Cpsulas, a un recipiente con tapa de rosca con recu-
brimiento interno de tefln. [NOTA-Para Cpsulas de
gelatina dura, retirar, tanto como sea posible, el conte-
nido de no menos de 20 Cpsulas cortando para abrir
las cubiertas de las Cpsulas, transfiriendo las cubiertas
y su contenido a un recipiente adecuado, y triturando
hasta obtener una masa homognea. Transferir una por-
cin de la masa, equivalente a 5 Cpsulas, a un reci-
piente con tapa de rosca con recubrimiento interno de
tefln.] Agregar 1O mL de dimetil sulfxido y 15 mL de
n-hexano, y agitar durante 45 minutos en un agitador
de movimiento tipo mueca (wrist-action) en un bao
de agua mantenido a 60". [NOTA--Ajustar el agitador
de movimiento tipo mueca para asegurar que el con-
tenido del recipiente se mezcle vigorosa y completa-
mente.] Centrifugar a 3000 rpm durante 1 O minutos y
transferir la capa de hexano con una pipeta a un ma-
traz volumtrico de 100 mL. Agregar 1 5 mL de n-he-
xano a la capa de dimetil sulfxido, agitar bien durante
5 minutos, y transferir la capa de hexano con una pi-
peta a un matraz volumtrico de 1 00 ml. Repetir esta
extraccin con tres porciones adicionales de 15 mL de
n-hexano. Diluir los extractos en el matraz volumtrico
con n-hexano a volumen. Diluir un volumen de esta
solucin con n-hexano para obtener una solucin con
una concentracin de 15 g/mL de vitamina A como
retino! (C20HioO).
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
6786 Vitamina~ Olemolubles / Suplementos Dietticos
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: l mL/min
Volumen de inyeccin: 40 pi
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir el rea del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solucin estndar y el rea del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
cin muestra. Para productos que contengan acetato
de vitamina A o palmitato de vitamina A, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de vitamina A,
como retino! (C20HioO), en la porcin de Cpsulas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin estndar
C1 = concentracin de acetato de retino! (C22Hi202)
de ER Vitamina A USP en la Solucin estndar
(g/ml)
Cu = concentracin nominal de vitamina A, como
retino! (C20HioO) en la Solucin muestra
(g/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
[NOTA-Las respuestas molares de acetato de retinilo y
palmitato de retinilo son equivalentes.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C20HioO)
VITAMINA A, Mtodo 2
[NOTA-Cuando se especifica un ster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento siguiente, usar la forma qumica presente en la
formulacin. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con proteccin actnica durante
todo este procedimiento.]
Solucin de cido sulfrico metanlico 3 N: Agregar
cuidadosamente 9 ml de cido sulfrico a 80 ml de
metano! en un matraz volumtrico de 100 ml. Enfriar y
diluir con metano! a volumen.
Solucin de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1 O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumtrico de 100 ml, y agregar suficiente
agua para disolver. Agregar 1,7 ml de cido sulfrico y
diluir con agua a volumen.
Solucin de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Fase mvil: n-Hexano y acetato de etilo (99,7:0,3)
Solucin estndar: 1 5 g/ml de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solucin madre de aptitud del sistema: 15 g/ml de
palmitato de retinilo en 2,2,4-trimetilpentano
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
iguales de Solucin madre de aptitud del sistema y Solu-
cin estndar para obtener concentraciones de 7,5 g/
ml de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solucin muestra: [NOTA-Esta preparacin es ade-
cuada para la determinacin de vitamina A, vitamina D
y vitamina E, cuando se encuentran presentes en la for-
USP 38
mulacin.J Pesar no menos de 20 Cpsulas en un frasco
de pesadd ldrddu. Li>dndu una cuchilla dfildda si fuera
necesario, abrir cuidadosamente las Cpsulas, sin perder
material de la cubierta, y tra1bferi1 ei cu11le11idu d u11
vaso de precipitados de 100 mL. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cpsulas vacas
lavando con varias porciones de ter. Desechar los lava-
dos y secar las cubiertas de las Cpsulas con ayuda de
una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cpsulas vacas en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto del contenido de las Cpsulas. Transferir
una porcin del contenido de las Cpsulas, equivalente
a 30 g de la cantidad declarada de colecalciferol o er-
gocalciferol (vitamina D), a un recipiente con tapa de
rosca con recubrimiento interno de tefln. Si la vita-
mina D no se encuentra presente en la formulacin,
usar una porcin, equivalente a 90 mg de la cantidad
declarada de vitamina E. Si la vitamina E no se encuen-
tra presente en la formulacin, usar una porcin, equi-
valente a 2,5 mg de la cantidad declarada de vitamina
A, como retino!. Agregar 0,5 g de bicarbonato de sodio,
1,5 ml de Solucin de lecitina y 12,5 ml de 2,2,4-trime-
tilpentano, y dispersar en un mezclador de vrtice.
Agregar 6 ml de Solucin de ascorbato de sodio-piroga-
lol, agitar lentamente, y dejar que la solucin se desga-
sifique. Continuar agitando hasta que haya cesado la
emisin de gases y luego agitar durante 12 minutos
adicionales. Agregar 6 ml de dimetil sulfxido, mezclar
en un mezclador de vrtice hasta formar una suspen-
sin, y agitar durante 12 minutos. Agregar 6 ml de So-
lucin de cido sulfrico metanlico 3 N, mezclar en un
mezclador de vrtice para formar una suspensin, y agi-
tar durante 12 minutos. Agregar 12,5 ml de 2,2,4-tri-
metilpentano, mezclar en un mezclador de vrtice hasta
formar una suspensin, y agitar durante 1 O minutos.
Centrifugar durante 1 O minutos para romper la emul-
sin y para que el sobrenadante se torne transparente.
[NOTA-El sobrenadante se usa para la determinacin
de vitamina A, as como para vitamina D y vitamina E,
si se encuentran presentes en la formulacin.] Si fuera
necesario, diluir cuantitativamente un volumen del so-
brenadante con 2,2,4-trimetilpentano para obtener una
concentracin cercana a la de la Solucin estndar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 8,0 entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir el rea del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solucin estndar y el rea del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
cin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retino! (CuH wO), en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
r,; - rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin estndar
USP 38
C; = conccntr,Kin de acetato de retini!o
(C,}H 1}0z) de ER Vitamina A USP en la
Solucion estandar (pg/mL)
C, = concentrac1on nominal de vitamina A, como
1etinoi (C,:iH ;uO) en la Solucin mut'stro
(pg/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extraccin ini-
cial de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano para calcular
la concentracin nominal. Las respuestas molares de
acetato de retinilo y palmitato de retinilo son
equivalentes.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C 20 H10 0)
VITAMINA A, Mtodo 3
[NOTA-Cuando se especifica un ster de vitamina A
(acetato de rctinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento siguiente, usar la forma qumica presente en la
formulacin. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con proteccin actnica durante
todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin: n-Hexano y cloruro de meti-
leno (3:1)
Soll;lc~n de hidrxido de potasio: 800 mg/mL de hi-
drox1do de potasio en agua. [NOTA-Agregar cuidadosa-
mente el hidrxido de potasio al agua. Mezclar y
enfriar.]
Diluyente: 1 O mg/mL de pirogalol en alcohol
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (92:8)
Solucin madre del estndar: 30 g/mL de acetato de
retinilo, a partir de ER Vitamina A USP en Diluyente.
[NOTA-Esta solucin se puede almacenar en un refrige-
rador durante 1 semana.]
Solucin estndar: Diluir un volumen de Solucin ma-
dre del estndar con Diluyente para obtener una concen-
tracin de 1 g/mL de acetato de retinilo a partir de ER
Vitamina A USP. Transferir 10,0 mL de esta solucin a
un matraz de 125 mL con tapn y agregar 5 ml de
agua, 5 mL de Diluyente y 3 mL de Solucin de hidrxido
de potasio. Tapar hermticamente, agitar durante 15
minutos sobre un bao de agua mantenido a 60 5, y
enfriar a temperatura ambiente. Agregar 7 mL de agua
y 25,0 mL de Disolvente de extraccin. Tapar hermtica-
mente y agitar vigorosamente durante 60 segundos.
Enjuagar las paredes del matraz con 60 mL de agua y
dejar en reposo durante 1 O minutos para que las capas
se separen. Retirar una porcin de la capa orgnica para
inyectarla en el cromatografo. Esta Solucin estndar
contiene 0,34 g/ml de retinol.
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un vaso de precipitados de 1 00 mL. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas de las cpsulas vacas
lavando con varias porciones de ter. Desechar los lava-
dos y secar las cubiertas de las Cpsulas con ayuda de
una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cpsulas vacas en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso, neto del con.tenido de la~ Cpsulas. Transferir
una porc1on del contenido de las Capsulas, equivalente
a 1,5 m<; de acetato de retinilo, a un matraz de 125 mL
con tapon. Agregar 5 mL de agua, 15 mL de Diluyente y
3 mL de Solucin de hidrxido de potasio. Tapar hermti-
camente, agitar durante 15 minutos sobre un bao de
agua mantenido a 60 5, y enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 7 ml de agua y 25,0 mL de Disolvente
de extraccin. Tapar hermticamente y agitar vigorosa-
mente durante 60 segundos o ms, s1 tuera necesario,
para completar la extraccin. Enjuagar las paredes del
matraz con 60 mL de agua y dejar en reposo durante
l O minutos hasta que las capas se separen. [NOTA-No
agitar porque podra formarse una emulsin.] Retirar
SuplPrnP11/()\ Dit>tt?ticos /Vitaminas Oleosolubles 6787
una porcin de la capa orgnica y diluir cuantitativa-
mente, y en d1iuciones sucesivas si fuera necesario, con
Disolvente de extraccin para obtener una concentracin
de 0,34 ~tg/mL de retino!.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cramatograf1a <621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: LJV 335 nm
Columna: 6,2 mm x 8 cm; relleno L3
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 4 mL/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para 1 3-cis-
retinol y todo trans retinol son aproximadamente O, 92
y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de todo trans retinol y
1 3-cis-retinol. Calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H30), en
la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (rTilr12) x (Cs/C\I) x F x 1 00
rn = suma de las reas de los picos de todo trans
retinol y 1 3-cis-retinol de la Solucin muestra
rT2 = suma de las reas de los picos de todo trans
retinol y 1 3-cis-retinol de la Solucin estndar
e = concentracin de acetato de retinilo
(C23H322) de ER Vitamina A USP en la
Solucin estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de vitamina A, como
retinol (C20H30) en la Solucin muestra
(pg/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H 3o0)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia LJSP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin act1nica durante todo este
procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (99:1)
Solucin estndar: 2 g/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de la Solucin estndar a 60 durante 1 hora para iso-
merizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o er-
gocalciferol) a su precursor correspondiente.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 7. Transferir no menos
de 20 mL de la solucin reservada segn se especifica
en las instrucciones de la Solucin muestra en Vitamina
A, Mtodo 7 a un recipiente adecuado y evaporar, si
fuera necesario, al vaco a temperatura ambiente para
obtener una solucin con una concentracin de 2 g/
mL de colecalciterol o ergocalciferol.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cramatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 100 pL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
6788 Vitaminas Oleosolubles /Suplementos Diett>tico\
Requisitos dP aptitud
Resolucin: No rnenm de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lucin J ap1i1uJ Je/ "'l<'t11U
Desviacin estndar relativa: i'Jo m.~ dP 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C 27 H440) o ergocalciferol (C2RH440) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(g/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
F = factor de correccin que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la Solucin
muestra, 1,09
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Q)
o ergocalciferol (C2sH44)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actnica durante todo este
procedimiento.]
Solucin de cido sulfrico metanlico 3 N, Solucin
de ascorbato de sodio-pirogalol, Solucin de lecitina
y Solucin muestra: Proceder segn se indica en Vita-
mina A, Mtodo 2.
Fase mvil: n-Hexano y alcohol butlico terciario
(98,75:1,25)
Solucin estndar: 1 g/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de la Solucin estndar a 60 durante 1 hora para iso-
merizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o er-
gocalciferol) a su precursor correspondiente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 4,0 entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las areas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C2iH440) o ergocalciferol (C.,8H14) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado = (rc;/r1) v (Cs/Cu) x 100
USP 38
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
e, ~ concentracin de ER Coiecaiciferoi USP o LR
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(g/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44Q)
o ergocalciferol (C2RH440)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin act1nica durante todo este
,procedimiento.]
Acido actico diluido: Solucin de cido actico glacial
(1 en 1 O) en agua
Solucin de fenolftalena: 1 O mg/ml de fenolftalena
en alcohol
Solucin de hidrxido de potasio: Disolver lentamente
14 g de hidrxido de potasio en una mezcla de 31 ml
de alcohol deshidratado y 5 ml de agua. Preparar en el
da de su uso.
Disolvente de extraccin: Cloruro de metileno y al-
cohol isoproplico (99,8:0,2)
Fase mvil: Acetonitrilo y metanol (91 :9)
Solucin madre del estndar: 0,2 mg/ml de ER Cole-
calciferol USP o ER Ergocalciferol USP en alcohol deshi-
dratado. [NOTA-Preparar cada 4 semanas. Almacenar
en un congelador.]
Solucin estndar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extraccin de fase slida especificada para su uso en la
Solucin estndar y la Solucin muestra lavando la co-
lumna inicialmente con 4,0 ml de una mezcla de clo-
ruro de metileno y alcohol isoproplico (4:1), seguida de
5,0 ml de Disolvente de extraccin. No dejar que la co-
lumna se seque.]
Diluir un volumen de Solucin madre del estndar con
alcohol deshidratado para obtener una concentracin
de 5 g/ml de ER Colecalciferol USP o ER Ergocalcife-
rol USP. Preparar esta solucin en el da de su uso.
Transferir 2,0 ml de esta solucin a un matraz de
125 ml con tapn. Agregar 15,0 ml de agua y
15,0 ml de Solucin de hidrxido de potasio, tapar, y
agitar durante 30 minutos en un bao de agua mante-
nido a 60. Dejar que se enfre a temperatura am-
biente y transferir el contenido del matraz a un em-
budo de separacin de 250 ml. Agregar 15,0 ml de
agua al matraz, tapar, agitar vigorosamente, y transfe-
rir esta solucin al embudo de separacin. Enjuagar el
matraz con 60 ml de n-hexano y transferir el enjuague
al embudo de separacin. Tapar, agitar vigorosamente
durante 90 segundos, y dejar en reposo durante 15
minutos hasta que las capas se separen. Escurrir y de-
sechar la capa acuosa. Agregar 15,0 ml de agua a la
capa de hexano en el embudo de separacin, tapar, y
agitar vigorosamente. Dejar en reposo durante 1 O mi-
nutos hasta que las capas se separen y desechar la
capa acuosa. Agregar 1 gota de Solucin de fenolfta-
lema y 15,,0 ml de agua al embudo de separacin.
Agregar Acido actico diluido gota a gota, agitando,
hasta que el lavado sea neutro. Dejar en reposo du-
rante 1 O minutos hasta que las capas se separen. Escu-
rrir y desechar la capa acuosa. Filtrar la capa de he-
xano a travs de sulfato de sodio anhidro, colocado en
un pequeo trozo de algodn, en un matraz de fondo
redondo de 100 ml. Enjuagar el embudo y el sulfato
de sodio con unos pocos ml de n-hexano y recoger
los enjuagues en el mismo matraz. Evaporar el hexano
en el matraz en un evaporador rotatorio a 50 hasta
sequedad. Agregar inmediatamente 2,0 ml de Disol-
lJSP 38
vente de extraccin para disolver el residuo. Transferir
esta solucin a una columna de extraccin de fase s-
lida recientemente acondicionada que contenga re-
lieno de slice con una relacin enlre ia ma~a de ~u1-
bente y FI volumen de la columna de 500 mg a
2,8 ml o equivalente, enjuagar el matraz de fondo re-
dondo con 1,0 ml de Disolvente de extraccin, y trans-
ferir a la columna. Eluir la columna con 2,0 ml de Di-
solvente de extraccin y desechar esta fraccin. Eluir la
columna con 7,0 ml de Disolvente de extraccin y reco-
ger el eluato en un matraz adecuado. Colocar el ma-
traz en un bao de agua tibia mantenido a 42 y eva-
porar el disolvente con ayuda de una corriente de
nitrgeno. Agregar inmediatamente 2,0 ml de aceto-
nitrilo al residuo y usar la solucin para inyectarla en el
cromatgrafo.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 3, hasta "calcular el
peso neto del contenido de las Cpsulas." Transferir una
porcin del contenido de las Cpsulas, equivalente a
1 O g de ergocalciferol o colecalciferol, a un matraz de
125 ml con tapn y proceder segn se indica en Solu-
cin estndar, comenzando donde dice "Agregar
15,0 ml de agua y 15,0 ml de Solucin de hidrxido de
potasio".
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf/O <621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 27
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 4,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44) o ergocalciferol (C2sH44) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(g/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44)
o ergocalciferol (C23H44)
VITAMINA E, Mtodo 7 acetato de alfa tocoferilo (Ci1 Hs20,) o succinato cido
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Solucin de cido fosfrico (1 en 100) en
agua
Fase mvil: Metano! y Solucin A (19:1)
Solucin estndar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una solucin
de 0,65 mg/ml de ER Ergocalciferol USP en metano!.
Transferir 1,0 ml de esta solucin a un matraz volum-
trico de 100 ml que contenga 100 mg de ER Acetato
Suplementos Dietticos /Vitaminas Oleosolubles 6789
de Alfa Tocoterilo USP. Disolver en 30 ml de metano!,
con ayuda de ultrasonido si fuera necesario, y diluir con
metano! a volumen. Almacenar esta solucin en un
1efrigerador.
Solucin muestra: Proceder ~eg1'm ~e indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 1. Transferir no menos
de 20 ml de esta solucin reservada segn se especifica
en las instrucciones de la Solucin muestra en Vitamina
A, Mtodo 1 a un recipiente adecuado y evaporar, si
fuera necesario, al vaco a temperatura ambiente hasta
sequedad. Transferir el contenido del matraz a un ma-
traz volumtrico adecuado con ayuda de metano! y di-
luir con metano! a volumen para obtener una concen-
tracin de 2 mg/ml de alfa tocoterol, acetato de alfa
tocoferilo o succinato cido de alfa tocoferilo.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf/O <621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1O cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para ergocal-
ciferol y acetato de alfa tocoferilo son aproximada-
mente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 2 entre ergocalciferol y
acetato de alfa tocoferilo, Solucin de aptitud del
sistema
Factor de asimetra: Entre 0,8 y 1,2, Solucin de apti-
tud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hsa02),
acetato de alfa tocoferilo (Ci1 Hs201) o succinato cido
de alfa tocoferilo (C nHs4s) en la porcin de Cpsu-
las tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 1 00
ru = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solucin
muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C 29 Hs 0 02),
de alfa tocoferilo (CiiHs4s)
VITAMINA E, Mtodo 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Mezclar 240 ml de metano! con 1 O ml de
agua, seguidos de 0,5 ml de cido fosfrico al 50%, y
diluir con acetonitrilo hasta 1 000 ml.
Solucin de aptitud del sistema: 2 mg/ml de ER Alfa
Tocoferol USP, de. ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP y
de ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP en
metano!
6790 Vitaminas Oleosoluhles ./ Suplementos Dietticos
Solucin estndar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol.USP,
FR .Acetato de .A.Ita Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solucin de cido sulfrico metanlico 3 N: Mezclar
cuidadosamente cid.o sulfrico y metano! (9 en 100)
en un matraz volumetrico de l 00 ml. [NOTA-Disolver
en una porcin de metano!, enfriar, y luego diluir a
volumen final.]
Solucin de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
l O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumtrico de 100 ml. Agregar suficiente agua
para disolver. Agregar 1,7 ml de acido sulfrico y diluir
con a9ua a volumen.
Solucion de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Metodo 2, hasta "calcular el
peso neto del contenido de las Cpsulas." Transferir una
porcin del .contenido de las Cpsulas, equivalente a
55 mg de vitamina E, a un recipiente con tapa de rosca
con recubrimiento interno de tefln. Agregar 0,5 g de
bicarbonato de sodio, 1,5 ml de Solucin de lecitina y
12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano, y dispersar en un
mezclador de vrtice. Agregar 6 ml de Solucin de as-
corbato de sodio-pirogalol, agitar lentamente, y dejar
que la solucin se desgasifique. Continuar agitando
hasta que haya cesado la emisin de gases y luego agi-
tar du.rante _l 2 minutos adicionales. Agregar 6 ml de
d1met1I sulfox1do, mezclar en un mezclador de vrtice
hasta formar una suspensin, y agitar durante 12 minu-
tos. Agregar 6 ml de Solucin de cido sulfrico metan-
lico 3 N, mezclar en un mezclador de vrtice para for-
mar una suspensin, y agitar durante 12 minutos.
Agregar 12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano, mezclar en
un. mezclador de vrtice hasta formar una suspensin, y
agitar durante 1 O minutos. Centrifugar durante 1 O mi-
nutos para romper la emulsin y para que la capa de
sobrenadante se torne transparente. Transferir un volu-
men de la capa sobrenadante de 2,2,4-trimetilpentano
a un matraz volumtrico adecuado, donde el volumen
de la muestra retirada de la capa de 2,2,4-trimetilpen-
tano y el tamao del matraz volumtrico sean tales que
la concentracin final de la Solucin muestra equivalga a
la de la Soli:cin estndar. Evaporar casi hasta sequedad,
agregar vanos ml de metano!, y evaporar el 2,2,4-tri-
metilpentano remanente. Diluir con metano! a
volumen.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para succi-
nato cido de alfa tocoferilo, alfa tocoferol y acetato
de alfa .tocoferilo son aproximadamente 0,6; 0,8 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 4,0 entre succinato cido
de alfa tocoferilo y alfa tocoferol y no menos de 3,0
entre alfa tocoferol y acetato de alfa tocoferilo, Solu-
cin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso2),
USP 38
acetato de alfa tocoferilo (C i H110i) o succinato cido
1
de alfa locoferilo (CiiHs41) en la porcin de Cpsu-
las tomada:
Resultado = (ru/r1) v (C/C,) v 1 00
ru = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solucin
muestra (mg/ml)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extraccin ini-
cial de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano y el factor de
dilucin para cambiar el disolvente de 2,2,4-trimetil-
pentano a metano! para calcular la concentracin
nominal.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs23) o succinato cido
de alfa tocoferilo (C13Hs4s)
VITAMINA E, Mtodo 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1)
Fase mvil: Metano!, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solucin estndar: 0,3 mg/ml de ER Alfa Tocoferol
USP en metano!
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 3, hasta "calcular el
peso neto del contenido de las Cpsulas." Transferir una
porcin del contenido de las Cpsulas, equivalente a
8,0 mg de alfa tocoferol, a un matraz Erlenmeyer con
tapn de vidrio. Agregar 25,0 ml de agua, 25,0 ml de
alcohol deshidratado y 3,5 g de pellets de hidrxido de
potasio. Agitar durante 1 hora en un bao mantenido a
55, enfriar, y transferir con ayuda de un volumen m-
nimo de agua a un embudo de separacin de 125 ml.
Enjuagar el matraz con 50 ml de n-hexano y agregar el
enjuague al embudo de separacin. Tapar, agitar vigo-
rosamente durante 60 segundos, y dejar que las capas
se separen. Escurrir la capa acuosa en un segundo em-
budo de separacin de 250 ml y repetir la extraccin
con 50 ml de n-hexano. Desechar la capa acuosa y
combinar los extractos de hexano. Lavar los extractos
combinados con 25 ml de agua, dejar que las capas se
~eparen, X desechar la capa .acuosa. Awegar 3 gotas de
ac1do acet1co glacial y repetir el procedimiento de la-
vado dos veces ms. Filtrar la capa de hexano lavada a
travs de sulfato de sodio anhidro en un matraz de
fondo redondo de 250 ml. Enjuagar el embudo y el
sulfato de sodio con unos pocos ml de n-hexano y
agregar el enjuague a la solucin de hexano en el ma-
traz. Colocar el matraz en un bao de agua mantenido
a 50 y evaporar la solucin de hexano con ayuda de
U'.J evaporador rotatorio hasta sequedad. Agregar inme-
diatamente 25,0 mL de Diluyente y agitar por rotacin
suave hasta disolver el residuo.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 3 ml/rnin
Volumen de inyeccin: 20 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina E como alfa tocoferol (C29Hso0 2 ) en la porcin
de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/CJ) x 100
ru = rea del pico de alfa tocoferol de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de alfa locoferol de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de alfa tocoferol en la Solucin
estndar (mg,iml)
Cu = concentracinnominal de alfa tocoferol en la
Solucin muestra (mg/ml)
[NOT A--Calcular el contenido de acetato de alfa tocofe-
rilo (C11 Hs201) o succinato cido de alfa tocoferilo
(C11Hs4s) dividiendo el contenido, en mg/Cpsula de
vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02), por el factor
O, 91 0,81, respectivamente.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C11 Hs201) o succinato de alfa
tocoferilo (C11Hs4s)
FITONADIONA
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metanol y agua (19:1)
Solucin madre del estndar: 200 pg/ml de ER Fito-
nadiona USP en metanol. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solucin estndar: 20 pg/ml de ER Filonadiona USP, a
partir de Solucin madre del estndar diluida con
metanol
Solucin de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 g/ml de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con metanol. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porcin de metanol, agregar la
Solucin madre del estndar, y luego diluir con metanol
a volumen.]
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 7. Transferir no menos
de 20 ml de esta solucin reservada segn se especifica
en las instrucciones de la Solucin muestra en Vitamina
A, Mtodo 7 a un recipiente adecuado y evaporar, si
fuera necesario, al vaco a temperatura ambiente hasta
sequedad. Transferir el contenido del matraz a un ma-
traz volumtrico adecuado con ayuda de metanol y di-
luir con metanol a volumen para obtener una concen-
tracin de 20 pg/ml de fitonadiona.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 pm
Velocidad de flujo: 2 mL/min
Volumen de inyeccin: 100 pl
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para acetato
de alfa tocoferilo y fitonadiona son aproximadamente
0,68 y 1,0, respectivamente.]
SuplPrnPnfo;; Di2teticos /Vitaminas Olcosolubles 6791
Requisitos de aptitud
Resolucin: No meno'.> de 5 entre acelalo Je alfa to-
cofe.ril~ y fiton31diona, ~ol:1cion ~.e aptitu~ d;I s~~ter~w
Desv1ac1on estandar re1at1va: t'lu r r 1ci> oe _,,01u, JOlu-
rin pr:.tndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de fitonadiona (C 11 H1002), en la
porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 1 00
ru = rea del pico de fitonadiona de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de fitonadiona de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Fitonadiona USP en la
Solucin estndar (pg/ml)
Cu = concentracin nominal de fitonadiona en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C11 H4602)
BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin de hidrxido de potasio: Disolver 58,8 g de
hidrxido de potasio en 50 ml de agua.
Solucin de yodo: Transferir 1 O mg de yodo a un ma-
traz volumtrico de 100 ml. Disolver en ciclohexano y
diluir con ciclohexano a volumen. Diluir 1 O ml de esta
solucin con ciclohexano hasta 100 ml. [NOTA-Prepa-
rar esta solucin en el da de su uso.]
Solucin muestra A (para preparaciones que conten~an
beta caroteno en soluciones oleosas): Proceder segun
se indica en Vitamina A, Mtodo 7, excepto que se debe
usar ciclohexano en lugar de n-hexano como disolvente
de extraccin, y diluir los extractos filtrados con ciclohe-
xano, para obtener una concentracin de 2 pg/ml de
beta caroteno.
Solucin muestra B (para preparaciones que contengan
beta caroteno en polvo seco): Retirar el contenido de
no menos de 20 Cpsulas cortando para abrir las Cp-
sulas. Mezclar y determinar el peso del contenido.
Transferir una cantidad del contenido de las Cpsulas,
equivalente a 2 mg de beta caroteno, a un matraz de
saponificacin de 500 ml. Agregar 100 ml de alcohol,
6 ml de Solucin de hidrxido de potasio y una barra
mezcladora magntica. Acoplar un condensador de aire
al matraz y calentar bajo reflujo durante 45 minutos
mezclando constantemente. Enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 1 70 ml de ter de petrleo y mezclar
durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente el con-
tenido del matraz a un embudo de separacin de
500 ml con porciones de ter de petrleo. Dejar que
las capas se separen durante 5-1 O minutos y transferir
la capa orgnica superior a un matraz volumtrico de
500 ml. Transferir la capa acuosa inferior al matraz de
saponificacin. Agregar 1 70 ml de ter de petrleo y
mezclar durante 20 minutos adicionales. Transferir
cuantitativamente el contenido del matraz de saponifi-
cacin al embudo de separacin con ayuda de porcio-
nes de ter de petrleo. Dejar que las capas se separen
durante 1 O minutos. Escurrir la capa acuosa inferior y
desechar. Transferir la capa orgnica al matraz volum-
trico que contenga la capa orgnica previamente reco-
gida. Enjuagar el embudo de separacin con porciones
pequeas de ter de petrleo y transferir los lavados al
matraz volumtrico. Diluir los extractos etreos con ter
de petrleo a volumen. Agregar 3 g de sulfato de sodio
anhidro, agitar, y dejar que sedimente. Transferir cuanti-
tativamente un volumen de esta solucin, equivalente a
1 00 pg de beta caroteno, a un matraz volumtrico de
50 ml. Evaporar bajo una corriente de nitrgeno hasta
sequedad y agregar ciclohexano inmediatamente. Agre-
6792 Vitaminas Oleosolublcs / Suplementos Diettico\ USP 38

qar 2 ml de Solucin dP yndn y calentar durante 15 mi- ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
nutos en un ba11o de dlJUd mantenido a 65 . Enfriar ER Alfa Tocoferol USP
rpidamente y diluir con ciclohexano a volumen. ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP
Condiciones espectrorntricd~ l:R ~uccinato cido de Alfa Tocoferilo USP
(VPr F~rprtrnfotometn y Dispersin de Lu7 <851 \.) ER Culecdlcifcrol USP
Modo: Vis 9, 1O-Secocolesta-5,7,10(19)-trien-3-ol, (3f),5Z,7E)-.
Longitud de onda analtica: 452 nm Colecalciferol.
Blanco: Ciclohexano CnH440 384,64
Anlisis ER Ergocalciferol USP
Muestra: Solucin muestra A o Solucin muestra B 9, 1O-Secoergosta-5,7,1 O (19),22-tetraen-3-ol,
Determinar la absorbancia contra el Blanco. Calcular el (3(3,5Z, 7 E,22E)-.
porcentaje de la cantidad declarada de beta caroteno Ergocalciferol.
(CoHs6), en la porcin de Cpsulas tomada: C28H440 396,65
ER Fitonadiona USP
Resultado = (Au/F) x (1 00/Cu) 1,4-Naftalendiona, 2-metil-3-(3,7, 11, 15-tetrametil-2-he-
xadecenil)-, [R-[R*,R*-(E)]]-.
Au = absorbancia de la Solucin muestra A o Filooquinona.
Solucin muestra B C;1H4bO 450,70
F = absortividad de beta caroteno a 452 nm, 223 ER Vitamina A USP
Cu concentracin nominal de beta caroteno en la
=
Solucin muestra A o Solucin muestra B
(mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (C40Hs6) Vitaminas Oleosolubles, Solucin Oral
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS DEFINICIN
(2040):, Cumplen con los requisitos , La Solucin Oral de Vitaminas Oleosolubles contiene dos o
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091): ms de las siguientes vitaminas oleosolubles: Vitamina A,
Cumplen con los requisitos como retino! o steres de retino! en forma de acetato de
retinilo o palmitato de retinilo; Vitamina D, como ergocal-
CONTAMINANTES ciferol (Vitamina D2) o colecalciferol (Vitamina 03); Vita-
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to- mina E, como alfa tocoferol, acetato de alfa tocoferilo o
tal de microorganismos aerobios no excede de 3000 ufc/ succinato cido de alfa tocoferilo; Fitonadiona (Vitamina
g, y el recuento total combinado de hongos filamentosos K1); y beta caroteno. Contiene no menos de 90,0% y no
y levaduras no excede de 300 ufc/g., ms de 150,0% de las cantidades declaradas de vitamina
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum- A, como equivalente de retino! (C20H300); vitamina D,
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la como colecalciferol (C27H440) o ergocalciferol (C2sH440);
ausencia de Salmonella spp., Eschercha col y Staphylococ- vitamina E, como alfa tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa
cus aureus. tocoferilo (C31 Hs203), o succinato cido de alfa tocoferilo
(C33Hs40,); fitonadiona (C31 H4602); y beta caroteno
REQUISITOS ADICIONALES (CoHs6) .
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a Id luL CONTENIDO
ETIQUETADO': Etiquetar las Cpsulas indicando que el pro- VITAMINA A
ducto es Cpsulas de Vitaminas Oleosolubles. La etiqueta [NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
tambin indica la cantidad de cada vitamina/unidad de durante todo este procedimiento.]
dosificacin y, cuando sea necesario, la forma qumica Fase mvil: n-Hexano
presente. Cuando el producto contiene vitamina E, la eti- Solucin estndar 1: 1 3 g/ml de retino!, a partir de
queta tambin indica si se trata de la forma do di. ER Acetato de Retinilo USP en n-hexano
Cuando se proporciona ms de un mtodo de valoracin Solucin estndar 2: 13 g/ml de retino!, a partir de
para una vitamina en particular, el etiquetado indica el ER Palmitato de Retinilo USP en n-hexano
mtodo de valoracin usado slo si no se usa el Mtodo Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
7. iguales de Solucin estndar 7 y Solucin estndar 2.
1 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
Solucin muestra: Equivalente a 1 3 g/ml de retino!, a
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes, partir de un volumen medido con exactitud de Solucin
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para Oral en n-hexano
Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami- Sistema cromato9rfico
nas tambin se han discontinuado; no obstante, contina el uso de UI en las
etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los artculos se etiquetan en
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
trminos de Unidarles ademis del etiquetado requerido, la relacin de las Modo: HPLC
Unidades USP o lJI rnn respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP Detector: UV 325 nm
de Vitamina A = O, 3 pg de todo trans retinol (vitamina A alcohol) o 0,344 g Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8
de todo trans acetato de retinilo (ac elato de vitamina A) o 0,55 g de todo
trans palmitato de retinilo (palmilalo de vitamina A) y 1 g de retinol (3,3 Velocidad de flujo: 1 ml/min
Unidades USP de Vitamina A) - 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de beta Volumen de inyeccin: 40 L
caroteno = 0,6 g de todo trans beta caroteno; 1 Unid~d USP de Vitamina D Aptitud del sistema
= 0,025 ftg de ergocalciferol o cole< ale iferol; y 1 mg de di-alfa tocoferol = 1, 1 Muestra: Solucin de aptitud del sstpma
antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo =
1 antigua Unidad USP de Vitamina e, l mg de succinato cido de di-alfa Requisitos de aptitud
tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa toco- Resolucin: No menos de 1O entre la forma todo
terol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de acetato de d- trans de aceldto de retinilo y la forma todo trans de
aifa tocoferilo - 1,36 ct11LiLJUds Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de succi-
nato cido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E. palmitato de retinilo
En trminos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
tocoferilo ~ 0,91, 1 1119 de succinato cicido de d-alla tocoferilo = 0,81, 1 mg Anlisis
de di-alfa tocoterol 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo 0,67, y
1 mg de succinato cido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
2
Muestras: Solucin estndar 7 o Solucin estndar 2 y
Solucin muestra
USP 38
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retino\ (C;oH rnO), en la porcin de Solu-
cin Oral tomada:
ru = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de la forna todo trans de ster
de retinilo de la Solucin estndar
correspondiente
Cs = concentracin de retino! en la Solucin
estndar correspondiente (g/ml)
Cu = concentracin nominal de Vitamina A, como
retino!, en la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina A como equivalente de retino!
(C20H100)
VITAMINA D
[NOTA-Cuando se especifique vitamina D (colecalciferol
o ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actinica durante todo este
procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (99:1)
Solucin estndar: 2 g/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solucion de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de la Solucin estndar a 60 durante 1 hora hasta iso-
merizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o er-
gocalciferol) en su precursor correspondiente.
Solucin madre de la muestra: Equivalente a 20 g/
ml de colecalciferol o ergocalciferol, a partir de un vo-
lumen medido con exactitud de Solucin Oral en n-
hexano
Solucin muestra: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
de la muestra a un recipiente con tapa de rosca con
recubrimiento interno de tefln y calentar, agitando
constantemente, durante 1 hora en un bao de agua
mantenido a 60 para obtener una solucin que con-
tenga vitamina D (colecalciferol o ergocalciferol) y su
precursor correspondiente. Enfriar y diluir con n-hexano
hasta obtener una solucin que contenga 2 g/ml de
colecalciferol o ergocalciferol.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 p.L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma presente
de vitamina D y su precursor correspondiente
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C 21H440) o ergocalciferol (C28H440) en la porcin de
Solucin Oral tomada:
Resultado= (ru/r1) x (CdC:) v F v 100
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
C1 = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(g/ml)
Suplementos Dietticos /Vitaminas Oleosolubles 6793
C = concentracin nominal de colecalciferol o
ersocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
F = factor de correccin que se debe tomar en
cuenta para la cantidJd promedio de pre-
vitamina D presente en la Solucin muestra,
1,09
Criterios de aceptacin: 90,0/ii-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H440)
o ergocalciferol (CnH4.,0)
VITAMINA E
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Solucin de cido fosfrico en agua (1 en
100)
Fase mvil: Metano! y Solucin A (19:1)
Solucin estndar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solucin muestra: Equivalente a 2,0 mg/ml de alfa to-
coferol, acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de
alfa tocoferilo, a partir de un volumen medido con
exactitud de Solucin Oral en metano!
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 1,5
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de alfa
tocoferol (C7"H1007), acetato de alfa tocoferilo
(Ci1 Hs20,) o succinato cido de alfa tocoferilo
(C33H1401) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( Cs/ Cu) x 100
ru = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la forma
correspondiente de Vitamina E en la Solucin
muestra (mci/ml) .
Criterios de aceptacion: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
FITONADIONA (VITAMINA K,)
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metano! y agua (19:1)
Solucin madre del estndar: 200 g/ml de ER Fito-
nadiona USP en metano!. Disolver con ayuda de ultra-
sonido -;i fuera necesario.
Solucin estndar: 20 g/ml de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solucin madre del estndar diluida con
metano!
Solucin de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de _ER
Acet;ito de Alfa Tocoferilo USP y 20 g/rnL de ER F1to-
nadiona USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con metano!. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porcin de metano!, agregar la
6794 Vitaminas Olcosolublcs / Suplementos Diettico1

Solucin madre del estndar y luego diluir con metano! a
volumen.]
Solucin muestra: Equivalente a 20 g/mL de fitona-
dion;:i, J p;:irtir de un volumen 111euiuu cu11 eXdctitud de
)olucin Oral en metano!
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solucin de aptitud del sistema
Desviacion estndar relativa: No ms de 3,0% Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (C,,H4602), en la porcin de Solucin Oral
tomada:
Resultado = (r11/r1) x (C/C11) x 100
ru rea del pico de la Solucin muestra
= Solucin muestra: Diluir un volumen de la Solucin ma-
r1 rea del pico de la Solucin estndar
= dre de la muestra con una mezcla de cloruro de meti-
Cs = concentracin de ER Fitonadiona USP en la
Solucin estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de fitonadiona en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C11 H4602)
8ETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica.]
Fase mvil: Transferir 50 mg de butil hidroxitolueno a
un matraz volumtrico de 1 L y disolver con 20 mL de
2-propanol. Agregar 0,2 mL de N-etildiisopropilamina,
25 mL de solucin de acetato de amonio al 0,2%,
455 mL de acetonitrilo y aproximadamente 450 mL de
metano!. Dejar que la solucin alcance la temperatura
ambiente y diluir con metano! a volumen.
Diluyente: 50 g/mL de butil hidroxitolueno en alcohol
Solucin de aptitud del sistema: Transferir 20 mg de
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP a un ma-
traz volumtrico de 50 ml. Agregar 1 mL de agua, 4 mL
de tetrahidrofurano y someter a ultrasonido durante 5
minutos. Diluir con Diluyente a volumen y someter a
r - - - - - - - ---
Longitud de onda analtica: 457 nm
Longitud de paso de celda: 1 cm
Blanco: Ciclohexano
Anlisis
Muestra. Suhni<_)u e)tcnciur B
Calcular la concentracin de beta caroteno total
(mg/mL) corno la forma todo lrans de beta caroteno
(C10H,6) en la Solucin estndar B. [NOTA-La concen-
tracin de Solucin estndar B es igual a la concentra-
cin de la Solucin estndar A.]
Resultado = Al F
A absorbancia promedio de las tres
=
preparaciones de Solucin estndar B
F = absortividad de la forma todo trans de beta
caroteno puro en ciclohexano, 250
Solucin madre de la muestra: Transferir un volumen
medido ron exactitud de Solucin Oral, equivalente a
20 mg de beta caroteno, a un matraz volumtrico de
250 ml. Agregar 250 mg de butil hidroxitolueno,
120 mL de cloruro de metileno y 100 mL de alcohol.
Agitar el matraz hasta que la muestra se haya disuelto o
suspendido completamente. Dejar la mezcla en reposo
en la oscuridad hasta que alcance la temperatura am-
biente (aproximadamente 2 horas). Agregar cloruro de
metileno a volumen y agitar nuevamente de manera
vigorosa.
leno y Diluyente (1 :1) hasta obtener una concentracin
final de beta caroteno de 3 g/mL. Pasar a travs de un
filtro de membrana con un tamao de poro de 0,45
m.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 448 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L68 de 5 m
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin es-
tndar A
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
de los componentes en la Solucin de aptitud del sis-
tema se presentan en la Tabla 7.]
Tabla 1
r
--- -'- ----- -- - - -

ultrasonido durante 5 minutos. Enfriar a temperatura Tiempo de Factor de

ambiente, pasar la suspensin a travs de un filtro de Retencin Respuesta
membrana con un tamao de poro de 0,45 m y usar Nombre i Relativo Relativa

J-Ll~--
el filtrado transparente. Forma todo trom de alfd
1
Solucin madre del estndar: 60 g/mL de ER Beta caroteno ------ - - j -'2-2- --
Caroteno USP en tetrahidrofurano Forma todo lram de be 1

Solucin estndar A: Transferir 5,0 ml de la Solucin

madre del estndar a un matraz volumtrico de 100 mL,
ta caroteno
9-cis-Beta caroteno_. - 1
L 1 00
_.LQZ ___ -+---
______ ] _ _ _

agregar 5,0 mL de tetrahidrofurano y diluir con Dilu- +- --- 1

yente a volumen.
Determinar la concentracin de Solucin estndar A a
1 3-cis-Beta carqteno
15-cis-Beta Cdruteno
--~
1
--------

7~~ -----+- ___ .11_~

partir de la concentracin de Solucin estndar B segn
se describe a continuacin.
Solucin estndar B: Transferir 5,0 mL de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 100 mL y
diluir con ciclohexano a volumen. Preparar por
triplicado.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
l 4
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin de aptitud del sistema es similar al cro-
matograrna de referencia provisto con el lote de ER
Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP usado.
Resolucin: No menm de 1,5 entre beta caroteno y
alfa caroteno y entre beta caroteno y 9-cis-beta caro-
teno. Solucin dP artitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
beta caroteno, Solucin estndar A
USP 38
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de beld Ldrole110 e11 i11yecciones repetidas, So-
lucin estndar A
Anlhh
Muestras: Solucion estandar A y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la forma todo trans de beta
caroteno en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (ru/r") x (C\Cu) x 100
ru = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solucin estndar A
Cs = concentracin de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solucin estndar A segn se
determina mediante el procedimiento
espectro mtrico
Cu = concentracin nominal de beta caroteno en la
Solucin muestra
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (C40Hs6)
OTROS COMPONENTES
DETERMINACIN DE ALCOHOL, Mtodo I (611 > (si estuviera
presente): 90,0%-120,0% de la cantidad declarada de
C2HsOH
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/mL, y el recuento total combinado de hongos fila-
mentosos y levaduras no excede de} x 10 2 ufc/mL.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
ple con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz bajo gas inerte o con
una cmara gaseosa superior mnima.
ETIQUETADO:' La etiqueta indica que el producto es So-
lucin Oral de Vitaminas Oleosolubles. La etiqueta indica
la cantidad de cada vitamina rresente en un volumen
determinado de Solucin Ora y, cuando sea necesario, la
forma qumica de vitamina presente. Cuando el producto
contiene vitamina E, la etiqueta indica si se trata de la
formad o di.
1 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes,
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami-
nas se han discontinuado; no obstante, contina el uso de UI en las etiquetas
de los productos de vitaminas. Cuando los artculos se etiquetan en trminos
de Unidades adems dl etiquetado requerido, la relacin de las Unidades
USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP de Vitamina
A= 0,3 >tg de todo trans retinol (alcohol de vitamina A) o 0,344 pg de todo
trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 >t9 de todo trans
palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 ftg de retinol (3,3 Unida-
des USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de beta caroteno
= 0,6 pg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vitamina D =
0,025 ,ug de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocoferol = 1, 1
antiguas Unidades USP de Vita11ii11a E, 1 1119 de acetato de di-alfa tocoferilo =
1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato cido de di-alfa
tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa toco-
ferol ~ 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 1, 36 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de succinato
cido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E. En
trminos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa toco-
ferilo = O, 91, 1 mg de succinato cido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg de di-
alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67, y 1 mg de
succinato cido de di-alta "tocoferilo = 0,60.
Suplementos OiPtPtcn' / Vitnminn<; Oleosolubles 6795
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocofcroi USP
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP
ER SuccinJto cido de Alfa Tocotcri!o USP
FR RPtil C;iroteno USP
ER Aptitud del Sistema de Betd Cdroteno USP
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
ER Fitonadiona USP
ER Acetato de Retinilo USP
ER Palmitato de Retinilo USP
Vitaminas Oleosolubles, Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Vitaminas Oleosolubles contienPn dos o ms
de las siguientes vitaminas oleosolubles: Vitamina A, Vita-
mina D como Ergocalciferol (Vitamina D2) o Colecalciferol
(Vitamina Di), Vitamina E, Fitonadiona (Vitamina K1) y
Beta Caroteno. Las Tabletas contienen no menos de
90,0% y no ms de 165,0% de las cantidades declaradas
de vitamina A (C20HioO) como retinol o steres de retinol
en la forma de acetato de retinilo (C22Hi202) o palmitato
de retinilo (C36H4602); vitamina D como colecalciferol
(C21H440) o ergocalciferol (C2sH440); vitamina E como alfa
tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs20i),
o succinato cido de alfa tocoferilo (Ci3Hs40s); fitonadiona
(Ci1 H4602); y beta ca roten o (C40Hs6).
Las Tabletas de Vitaminas Oleosolubles no contienen otras
vitaminas o minerales. Pueden contener otras sustancias
agregadas declaradas generalmente reconocidas como se-
guras, en cantidades inobjetables.
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione ms de un mtodo de valoracin para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los mtodos especificados, declarando el mtodo
usado en el etiquetado nicamente si no se usa el Mtodo
7.]
VITAMINA A, Mtodo 7
[NOTA-Cuando se especifica el uso de un ster de vita-
mina A (acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el
procedimiento siguiente, usar la forma qumica presente
en la formulacin. ER Vitamina A USP es acetato de
retinilo. Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina
A USP. Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano
Solucin estndar: 15 g/mL de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en n-hexano
Solucin madre de aptitud del sistema: 15 g/mL de
palmitato de retinilo en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
iguales de Solucin madre de aptitud del sistema y Solu-
cin estndar para obtener concentraciones de 7,5 g/
mL de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a 5 Tabletas; a un recipiente con tapa de rosca
con recubrimiento interno de tefln. Agregar 1 O mL de
d1metil sulfxido y 15 mL de n-hexano, y agitar durante
45 minutos en un agitador de movimiento tipo mueca
(wrist-action) en un bao de agua mantenido a 60.
[NOTA-Ajustar el agitador de movimiento tipo mueca
para asegurar que el contenido del recipiente se mezcle
vigorosa y completamente.] Centrifugar a 3000 rpm
durante 1 O minutos y transferir la capa de hexano con
una pipeta a un matraz volumtrico de 100 mL. Agre-
gar 15 mL de n-hexano a la capa de dimetil sulfxido,
agitJr bien durante 5 minutos, y transferir la capa de
hexano con una pipeta a un matraz volumtrico de
6796 Vitaminas Oleosolubles /Suplementos Dietticos
1 00 rnl. Repetir esta extraccin con trP\ porciones adi-
cionJles de 15 ml de n-hexanu. Diluir lm extractos en
el matraz volumtrico con n-hexano a volumen. Diluir
un volumen de 1 O mL de estJ solucin cor 1 11-l 1exano
para obtPnPr 11na <>nlucin con una concentracin de
15 g/ml de vitamina A corno retino! (C;oH rnO).
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: 1 ml/rnin
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palrnitato de retinilo
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir el rea del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solucin estndar y el rea del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo en el cro-
matograma de la Solucin muestra. Para productos
que contengan acetato de vitamina A o palmitato de
vitamina A, calcular el porcentaje de la cantidad de-
clarada de vitamina A, como retino! (C20H300), en la
porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin estndar
Cs = concentracin de acetato de retinilo
(C22H322) de ER Vitamina A USP en la
Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de vitamina A, como
retino! (CoH30) en la Solucin muestra
(g/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
[NOTA-Las respuestas molares de acetato de retinilo y
palmitato de retinilo son equivalentes.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C20HJOO)
VITAMINA A, Mtodo 2
[NOTA-Cuando se especifica un ster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento siguiente, usar la forma qumica presente en la
formulacin. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con proteccin actnica durante
todo este procedimiento.]
Solucin de cido sulfrico metanlico 3 N: Agregar
cuidadosamente 9 ml de cido sulfrico a 80 ml de
metano! en un matraz volumtrico de 1 00 ml. Enfriar y
diluir con metano! a volumen.
Solucin de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1 O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumtrico de 100 ml, y agregar suficiente
agua para disolver. Agregar 1,7 ml de cido sulfrico y
diluir con agua a volumen.
Solucin de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Fase mvil: n-Hexano y acetato de etilo (99,7:0,3)
Solucin estndar: 15 1g/ml de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solucin madre de aptitud del sistema: 15 tg/ml de
palmitato de retinilo en 2,2,4-trimetilpentano
USP 38
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
iguales de Soluoon madre de aptitud del sistema y Solu-
cin estndar para obtener concentraciones de 7,5 q/
ml de acetato de ret1111lo y de palmitato de retinilo.
Solucin muestra: [~-.JOTA-bla preparacin es ade-
cuada para la determinacin de vitamina A, vitamina D
y vitamina E, cuando se encuentran presentes en la for-
mulacin.] Reducir a polvo fino no menos de 20 Table-
tas. Si la vitamina D se encuentra presente en la formu-
lacin, transferir una porcin del polvo, equivalente a
30 g de la cantidad declarada de colecalciferol o ergo-
calciferol, a un recipiente con tapa de rosca con recu-
brimiento interno de tefln. Si la vitamina D no se en-
cuentra presente en la formulacin, usar una porcin
del polvo, equivalente a 90 mg de la cantidad declarada
de vitamina E (como alfa tocoferol, acetato de alfa to-
coferilo o hemisuccinato de alfa tocoferilo). Si la vita-
mina E no se encuentra presente en la formulacin,
usar una porcin del polvo, equivalente a 2,5 mg de la
cantidad declarada de acetato de retinilo o palmitato de
retinilo. Agregar 0,5 g de bicarbonato de sodio, 1,5 ml
de Solucin de lecitina y 12,5 ml de 2,2,4-trimetilpen-
tano, y dispersar en un mezclador de vrtice. Agregar
6 ml de Solucin de ascorbato de sodio-pirogalol, agitar
lentamente, y dejar que la solucin se desgasifique.
Continuar agitando hasta que haya cesado la emisin
de gases y luego agitar durante 12 minutos adicionales.
Agregar 6 ml de dimetil sulfxido, mezclar en un mez-
clador de vrtice hasta formar una suspensin, y agitar
durante 12 minutos. Agregar 6 ml de Solucin de cido
sulfrico metanlico 3 N, mezclar en un mezclador de
vrtice para formar una suspensin, y agitar durante 12
minutos. Agregar 12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano,
mezclar en un mezclador de vrtice hasta formar una
suspensin, y agitar durante 1 O minutos. Centrifugar
durante 1 O minutos para romper la emulsin y para
que el sobrenadante se torne transparente. [NOTA-El
sobrenadante se usa para la determinacin de vitamina
A, as como para vitamina D y vitamina E, si se encuen-
tran presentes en la formulacin.] Si fuera necesario, di-
luir cuantitativamente un volumen del sobrenadante
con 2,2,4-trimetilpentano para obtener una concentra-
cin cercana a la de la Solucin estndar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 8,0 entre todo trans de
acetato de retinilo y todo trans de palmitato de
retinilo
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir el rea del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solucin estndar y el rea del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
cin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retino! (C20H,oO), en la porcin de Ta-
bletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/C1) x F x 1 00
ru = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinolo de la Solucin e;lndar
USP 38
(, - concentracin de JCCtJtO de retinilo
(C22Hi202) de ER Vitamina A USP en la
Solucin estndar (ftg/mL)
Cu = concentracion nominal de vitamina A, como
relinol (C20H10) e11 la Solucin muestro
(f1g/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extraccin ini-
cial de 26,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano para calcular
la concentracin nominal. Las respuestas molares de
acetato de retinilo y palmitato de retinilo son
equivalentes.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C 20 H30 0)
VITAMINA A, Mtodo 3
[NOTA-Cuando se especifica un ster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento siguiente, usar la forma qumica presente en la
formulacin. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con proteccin actnica durante
todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin: n-Hexano y cloruro de meti-
leno (3:1)
Solucin de hidrxido de potasio: 800 mg/mL de hi-
drxido de potasio en agua. [NOTA-Agregar cuidadosa-
mente el hidrxido de potasio al agua. Mezclar y
enfriar.]
Diluyente: 1 O mg/mL de pirogalol en alcohol
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (92:8)
Solucin madre del estndar: 30 g/mL de acetato de
retinilo, a partir de ER Vitamina A USP en Diluyente.
[NOTA-Esta solucin se puede almacenar en un refrige-
rador durante 1 semana.]
Solucin estndar: Diluir un volumen de Solucin ma-
dre del estndar con Diluyente para obtener una concen-
tracin de 1 g/mL de ER Vitamina A USP. Transferir
10,0 mL de esta solucin a un matraz de 125 mL con
tapn y agregar 5 mL de agua, 5 mL de Diluyente y
3 mL de Solucin de hidrxido de potasio. Tapar hermti-
camente, agitar durante 15 minutos sobre un bao de
agua mantenido a 60 5, y enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 7 mL de agua y 25,0 mL de Disolvente
de extraccin. Tapar hermticamente y agitar vigorosa-
mente durante 60 segundos. Enjuagar las paredes del
matraz con 60 mL de agua y dejar en reposo durante
1 O minutos para que las capas se separen. Retirar una
porcin de la capa orgnica para inyectarla en el cro-
matgrafo. Esta Solucin estndar contiene 0,34 g/mL
de retino!.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino un nmero
contado de Tabletas. Transferir una porcin del polvo,
equivalente a 1,5 mg de acetato de retinilo, a un ma-
traz de 125 mL con tapn. Agregar 5 mL de a9ua,
15 mL de Diluyente y 3 mL de Solucin de hidroxido de
potasio. Tapar hermticamente, agitar durante 15 minu-
tos sobre un bao de agua mantenido a 60 5, y en-
friar a temperatura ambiente. Agregar 7 mL de agua y
25,0 mL de Disolvente de extraccin. Tapar hermtica-
mente y agitar vigorosamente durante 60 segundos o
ms, si fuera necesario, para completar la extraccin.
Enjuagar las paredes del matraz con 60 mL de agua y
dejar en reposo durante 1 O minutos hasta que las capas
se separen. [NOTA-No agitar porque podra formarse
una emulsin.] Retirar una porcin de la capa orgnica
y diluir con Disolvente de extraccin para obtener una
concentracin de O, 34 g/mL de retino l.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Suplementos Dieticos / VitaminJs Oleosolubles 6797
Modo: HPLC
Detector: UV 335 nm
Columna: 6,2 mm x 8 cm; relleno L3
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: '1 ml/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para 1 3-cis-
retinol y todo trans retino! son 0,92 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de todo trans retino! y
1 3-cis-retinol. Calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C70H10), en
la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (r11/r12) x (Cs/Cu) x F x 100
rT1 = suma de las reas de los picos de la forma
todo trans de retino! y 1 3-cis-retinol de la
Solucin muestra
r12 = suma de las reas de los picos de la forma
todo trans de retino! y 13-cis-retinol de la
Solucin estndar
Cs concentracin de acetato de retinilo
=
(CnH322) de ER Vitamina A USP en la
Solucin estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de vitamina A, como
retino! (C20H100) en la Solucin muestra
(g/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C20H30)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 1
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actinica durante todo este
procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (99:1)
Solucin estndar: 2 g/mL de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de la Solucin estndar a 60 durante 1 hora para iso-
merizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o er-
gocalciferol) a su precursor correspondiente.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 1. Transferir no menos
de 20 mL de esta solucin a un recipiente adecuado y
evaporar, si fuera necesario, al vaco a temperatura am-
biente para obtener una concentracin de 2 g/mL de
colecalciferol o ergocalciferol.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
6798 Vitaminas Oleosolublcs / Suplementos Dietticos
Anlisis
Muestras: Solucin t'j/11Jur y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porccnt<ljc de ia cantidad decla1 aua Je colecalciferoi
(C 77H 110) o ergoca!cifero! (C;;H.;.;) en !;i porcin de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/r1) x (Cs/Cu) x F x 100
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(g/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
F = factor de correccin que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina O presente en la Solucin
muestra, 1,09
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (CnH44)
o ergocalciferol (C2sH44)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin act1nica durante todo este
procedimiento.]
Solucin de cido sulfrico metanlico 3 N, Solucin
de ascorbato de sodio-pirogalol, Solucin de lecitina
y Solucin muestra: Proceder segn se indica en Vita-
mina A, Mtodo 2.
Fase mvil: n-Hexano y alcohol butlico terciario
(98,75:1,25)
Solucin estndar 1 g/ml de ER Colecalciterol USP o
ER Ergocalciferol USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volu-
men de la Solucin estndar a 60 durante 1 hora para
isomerizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) a su Rrecursor correspondiente.
Sistema cromato!;;irafico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 4,0 entre la forma de vita-
mina O presente y su precursor correspondiente, So-
lucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C 27 H440) o ergocalciferol (C28H440) en la porc1on de
Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 1 00
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
USP 38
C ~ concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalc1terol USP en la Solucion estndar
(pq/ml)
e, = concentrac1on nominal de colecalciterol o
t=:-rgeicalcift((,1! ef! Id Sofu(6n rnuesiru (pg/rTll)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extraccin inicial
de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano para calcular la
concentracin nominal.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44)
o ergocalciferol (C28H440)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina O (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actnica durante todo este
procedimiento.]
cido actico diluido: Solucin de cido actico glacial
(1 en 1 O) en agua
Solucin de fenolftalena: l O mg/ml de fenolftalena
en alcohol
Solucin de hidrxido de potasio: Disolver lentamente
14 g de hidrxido de potasio en una mezcla de 31 ml
de alcohol deshidratado y 5 ml de agua. Preparar en el
da de su uso.
Disolvente de extraccin: Cloruro de metileno y al-
cohol isoproplico (99,8:0,2)
Fase mvil: Acetonitrilo y metano! (91 :9)
Solucin madre del estndar: 0,2 mg/ml de ER Cole-
calciferol USP o ER Ergocalciferol USP en alcohol deshi-
dratado. [NOTA-Preparar cada 4 semanas. Almacenar
en un congelador.]
Solucin estndar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extraccin de fase slida especificada para su uso en la
Solucin estndar y la Solucin muestra lavando la co-
lumna inicialmente con 4,0 ml de una mezcla de clo-
ruro de metileno y alcohol isoproplico ( 4: 1), seguida de
5,0 ml de Disolvente de extraccin. No dejar que la co-
lumna se seque.] Diluir un volumen de Solucin madre
del estndar con alcohol deshidratado para obtener una
concentracin de 5 g/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP. Preparar esta solucin en el da
de su uso. Transferir 2,0 mL de esta solucin a un ma-
traz de 125 ml con tapn. Agregar 15,0 ml de agua y
15,0 ml de Solucin de hidrxido de potasio, tapar, y
agitar durante 30 minutos en un bao de agua mante-
nido a 60. Dejar que se enfre a temperatura ambiente
y transferir el contenido del matraz a un embudo de
separacin de 250 ml. Agregar 15,0 ml de agua al ma-
traz, tapar, agitar vigorosamente, y transferir esta solu-
cin al embudo de separacin. Enjuagar el matraz con
60 ml de n-hexano y transferir el enjuague al embudo
de separacin. Tapar, agitar vigorosamente durante 90
segundos, y dejar en reposo durante 15 minutos hasta
que las capas se separen. Escurrir y desechar la capa
acuosa. Agregar 15,0 ml de agua a la capa de hexano
en el embudo de separacin, tapar, y agitar vigorosa-
mente. Dejar en reposo durante 1 O minutos hasta que
las capas se separen y desechar la capa acuosa. Agregar
1 gota de Solucin de fenolftalena,y 15,0 i:nL de_ agua al
embudo de separacin. Agregar Aodo acetico dilwdo
gota a gota, agitando, hasta que el lavado sea neutro.
Dejar en reposo durante 1 O minlltos hasta que las ca-
pas se separen. Escurrir y desechar la capa acuosa. Fil-
trar la capa de hexano a travs de sulfato de sodio an-
hidro, colocado en un pequeo trozo de algodn, en
un matraz de fondo redondo de 100 ml. Enjuagar el
embudo y el sulfato de sodio con unos pocos ml de n-
hexano y recoger los enjuagues en el mismo matraz.
Evaporar el hexano en el matraz en un evaporador rota-
torio a 50 hasta sequedad. Agregar inmediatamente
2,0 ml de Disolvente de extraccin para disolver el resi-
duo. Transferir esta solucin a una columna de extrac-
cin de fase slida recientemente acondicionada que
USP 38
contenga relleno de slice con una relacin entre la
masa de sorber1le y el vulumen de la columna de
500 mg a 2,8 ml o equivalente, enjuagar el matraz de
ur1uu reuo1ido con 1,0 mL de Disolvrnte de extraccin,
y transferir a la columna. Elu!r !a co!umna con 2,0 rnl
de Disolvente de extraccion y desechar esta fraccin.
Eluir la columna con 7,0 ml de Disolvente de extraccin
y recoger el eluato en un matraz adecuado. Colocar el
matraz en un bao de agua tibia mantenido a 42 y
evaporar el disolvente con ayuda de una corriente de
nitrgeno. Agregar inmediatamente 2,0 ml de acetoni-
trilo al residuo y usar la solucin para inyectarla en el
cromatgrafo.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a 1O g de colecalciferol o ergocalciferol, a un
matraz de 125 ml con tapn y proceder segn se in-
dica en Solucin estndar, comenzando donde dice
"Agregar 15,0 ml de agua y 15,0 ml de Solucin de
hidrxido de potasio".
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 27
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 4,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44) o ergocalciferol (C23H44) en la porcin de
Tabletas tomada:
Resultado = (rli/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestro
rs = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(g/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%~ 165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H 44)
o ergocalciferol (C2sH44)
VITAMINA E, Mtodo 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Solucin de cido fosfrico (1 en 100) en
agua
Fase mvil: Metano! y Solucin A (19:1)
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una solucin
de 0,65 mg/ml de ER Ergocalciferol USP en metano!.
Transferir 1,0 ml de esta solucin a un matraz volum-
trico de 100 ml que contenga 1 00 mg de ER Acetato
de Alfa Tocoferilo USP. Disolver en 30 ml de metano!,
con ayuda de ultrasonido s1 fuera necesario, y diluir con
metano! a volumen. Almacenar esta solucin en un
refrigerador.
Solucin estndar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol ,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Suplementos Oiet'tiros / Vitcirnina<> Olemolubles 6799
Solucin muestra: Proceder seqCm se indica en Suluoon
muestra en Vitam111a A, Mhodo 7. Transferir no menos
de 20 ml de esta solucin a un recipiente adecuado y
cvaporJr a! '/Jefe J tcn1pcrJtur3 an1biente hasta seque-
rlad Tramferir el re<;irluo ron avuda de metano! a un
y
matraz volumetrrco adecuado d1iu1r con metano! a vo-
lumen para obtener una concentracin de 2 mg/ml de
alfa tocoferol, acetato de alfa tocoferilo o succinato
cido de alfa tocoferilo.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: LJV 254 nm
Columna: 8 mm x 1O cm; relleno L1 de 5 ~tm
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin
estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para ergocal-
ciferol y acetato de alfa tocoferilo son aproximada-
mente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 12 entre ergocalciferol y
acetato de alfa tocoferilo, Solucin de aptitud del
sistema
Factor de asimetra: Entre 0,8 y 1,2, Solucin de apti-
tud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs23) o succinato cido
de alfa tocoferilo (C11Hs4s) en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (C1/C1) x 100
ru = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin muestra
r, = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la forma de
vitamina E correspondiente en la Solucin
muestra (m9/ml)
Criterios de aceptacion: 90,00,ii- l 65,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C i1 Hs2i) o succinato cido
de alfa tocoferilo (C3iHs4s)
VITAMINA E, Mtodo 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. u,ar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Mezclar 240 ml de metano! con 1 O ml de
agua, seguidos de 0,5 ml de cido fosfrico al 50%, y
diluir con acetonitrilo hasta 1000 ml.
Solucin de aptitud del sistema: 2 mg/ml de ER Alfa
Tocoferol USP, de ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP y
de ER Succinato Acido de Alfa Tocoterilo USP en
metano!
Solucin estndar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succianto Acido
de Alfa Tocoferilo lJ<;p en metano!
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 2. Transferir un volumen
del sobrenadante de 2,2,4-trimetilpentano a un matraz
volumtrico adecuado, donde el volumen de la muestra
6800 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietticos
retirada de 2,2,4-trimetilpentano y el tamano del ma-
traz volumtrico sean tales que la concentracin final de
la Solucion muestra equivalga a la de la Solucin estn-
dar. Evaporar casi hasta sequed.:id, agregcJr varios ml de
metanol. y evaporar el 2,2,4-trimPtilpentano remanente.
Diluir con metanol a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin
estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para succi-
nato cido de alfa tocoferilo, alfa tocoferol y acetato
de alta tocoferilo son aproximadamente 0,6; 0,8 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 4,0 entre succinato cido
de alfa tocoferilo y alfa tocoferol; no menos de 3,0
entre alfa tocoferol y acetato de alfa tocoferilo, Solu-
cin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (Ci1 Hs20i) o succinato cido
de alfa tocoferilo (Ci3Hs4s) en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solucin
muestra (mg/ml)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extraccin ini-
cial de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano y el factor de
dilucin para cambiar el disolvente de 2,2,4-trimetil-
pentano a metanol para calcular la concentracin
nominal.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C31 Hs20i) o succinato cido
de alfa tocoferilo (C ,,Hs41)
VITAMINA E, Mtodo 3
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1)
Fase mvil: Metano!, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solucin estndar: 0,3 mg/ml de ER Alfa Tocoferol
USP en metanol
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a 8 mg de alfa tocoferol, a un matraz de 125 ml
equipado con una junta de vidrio esmerilado. Agregar
25,0 ml de agua, 25,0 ml de alcohol deshidratado y
3,5 g de pellets de hidrxido de potasio. Agitar durante
1 hora en un bano de agua mantenido a 55',. Enfriar y
transferir con ayuda de un volumen mnimo de agua a
un embudo de separacin de 125 ml. Enjuagar el ma-
traz con 50 ml de n-hexano y agregar el enjuague al
embudo de separacin. Tapar, agitar vigorosamente du-
rante 60 segundos, y dejar que las capas se separen.
Escurrir la capa acuosa en un segundo embudo de se-
USP 38
paracin de 250 ml y repetir la extraccin con 50 ml
Je 11-hexano. Desechar la capa acuosa y combinar los
extractos de hexano. Lavar los extractos combinados
con 25 rnl Je cHJUd, Jejar que ias capas se separen, y
desechar la capa acuosa. Agregar 3 gotas de cido ac-
tico glacial y repetir el procedimiento de lavado dos
veces ms. Filtrar la capa de hexano lavada a travs de
sulfato de sodio anhidro en un matraz de fondo re-
dondo de 250 ml. Enjuagar el embudo y el sulfato de
sodio con unos pocos ml de n-hexano y agregar el
enjuague a la solucin de hexano en el matraz. Colocar
el matraz en un bano de agua mantenido a 50 y eva-
porar la solucin de hexano con ayuda de un evapora-
dor rotatorio hasta sequedad. Agregar inmediatamente
25,0 ml de Diluyente y agitar por rotacin suave hasta
disolver el residuo.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 3 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de vitamina E, como alfa toco-
ferol (C29Hso02), en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de alfa tocoferol de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de alfa tocoferol de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de alfa tocoferol en la Solucin
estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de vitamina E como
alfa tocoferol en la Solucin muestra (mg/ml)
[NOTA-Calcular el contenido de acetato de alfa tocofe-
rilo (Ci1 Hs201) o succinato cido de alfa tocoferilo
(CllHs40s) dividiendo el contenido, en mg/Tableta de
vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02), por el factor
0,91 0,81, respectivamente.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C1 Hs20i) o succinato cido
de alfa tocoferilo (C llH'40s)
FITONADIONA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metanol y agua (19:1)
Solucin madre del estndar: 200 g/ml de ER Fito-
nadiona USP en metanol. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solucin estndar: 20 g/ml de ER Fitonadiona USP, a
partir de la Solucin madre del estndar diluida con
metanol
Solucin de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 g/ml de ER Fito-
nadiona USP, a partir de la Solucin madre del estndar
diluida con metano!. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porcin de metanol, agregar la
Solucin madre del estndar, y luego diluir con metano!
a volumen.]
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solucin reservada segn se especifica en las instruccio-
nes de la Solucin muestra en Vitamina A, Mtodo 7 a un
recipiente adecuado y evaporar al vaco a temperatura
ambiente hasta sequedad. Transferir el residuo con
usr 38
ayuda de rnelanol a un 111atraL volumtrico adecuado y
diluir con rnetanol a volumen para obtener una concen-
tracin de 20 ua/rnL de fitonadiona.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatogratw \621 ), Aptitud del ~1stema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nrn
Columna: 8 rnrn x 1O crn; relleno L1 de 5 pm
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 pL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para acetato
de alfa tocoferilo y fitonadiona son 0,68 y 1,0,
respectiva mente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de fitonadiona (C1 H4602), en la
porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de fitonadiona de la Solucin
muestra
r1 = rea del pico de fitonadiona de la Solucin
estndar
Cs concentracin de ER Fitonadiona USP en la
= dar interno y fitonadiona son 1,0 y 1,4,
Solucin estndar (pg/mL)
Cu = concentracin nominal de fitonadiona en la
Solucin muestra (pg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C11 H4602)
FITONADIONA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente: Metanol y alcohol isoproplico (19: 1)
Fase mvil: Mezclar 800 mL de metano!, 200 mL de
cloruro de metileno, O, 1 mL de cido actico glacial,
1,36 CJ de cloruro de cinc y 0,41 g de acetato de sodio.
Solucion de estndar interno: 5 pg/mL de menaqui-
nona 4 (vitamina K2) en Disolvente. [NOTA-Una solu-
cin madre concentrada de menaquinona 4 (100 pg/
mL) puede almacenarse durante 2 meses en un
refrigerador.]
Solucin madre del estndar: 5 pg/mL de ER Fitona-
diona USP, preparada disolviendo en cloruro de meti-
leno con ayuda de ultrasonido y diluyendo con Disol-
vente a volumen final
Solucin estndar: Transferir 1,0 mL de la Solucin ma-
dre del estndar y 1,0 mL de la Solucin de estndar
interno a un matraz adecuado y diluir con Disolvente
hasta 5 mL. Pasar a travs de un filtro de membrana
con un tamao de poro de 0,45 pm o menor.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una cantidad de polvo, que no
exceda de 800 mg, y equivalente a una cantidad de
fitonadiona que no exceda de 50 pg, a un tubo de cen-
trfuga con tapn. Agregar 4 mL de agua. Tapar y mez-
clar usando un mezclador de vrtice hasta que la mues-
tra se disperse. Colocar el tubo en un bao de agua a
60c durante 5 minutos. Retirar del bao y agitar de
nuevo o mezclar usando un mezclador de vrtice du-
rante 1 minuto mientras la preparacin an est ca-
liente. Agregar 8 mL de alcohol y agitar el contenido
por rotacin suave hasta mezclar. Colocar el tubo en un
bao de agua a 60 durante 5 minutos. Retirar del
bailo y agitar de nuevo o mezclar usando un mezclador
de vrtice durante 2 minutos mientras la preparacin
Suplementos U1ctct1cos / Vitam:nas Oleosolubles 6801
an est caliente. Enfriar a temperatura ambiente. Agre-
gar un volumen de Solucin de estndar interno, equiva-
lente a 1.0 ml por cada 5 ug de la cantidad esperada
de fitonadiona en la alcuota tornada. Agregar 20,0 mL
de eter de petroleo y tapar ei tubo hermticamente.
Agitar o me1clar usando un mezclador de vrtice du-
rante 15 minutos para mezclar bien el contenido. Cen-
trifugar para separar las dos capas. Transferir un volu-
men de la capa superior de ter de petrleo,
equivalente a 5-50 pg de la cantidad nominal de fitona-
diona, a un matraz apropiado. Colocar el matraz en un
bao de agua a 35-45 y evaporar el disolvente bajo
una corriente de nitrgeno hasta que nicamente
quede un residuo oleoso. Disolver el residuo en un vo-
lumen de Disolvente para obtener una concentracin de
1 pg/mL de fitonadiona.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 /, Aplilud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: Detector fluorometrico ajustado a 320 nm
para excitacin y 420 nm para emisin
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno exhaustivo (end-
capped) L1 de 5 pm, y un reactor postcolumna consti-
tuido por una columna PEEK, de 4,6 mm x 3 cm, con
relleno bien apretado de polvo de cinc. [NOTA-Prepa-
rar el reactor postcolumna a diario, o segn sea nece-
sario, para cumplir con los requisitm de aptitud del
sistema.]
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 25 pL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para el estn-
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Eficiencia de la columna: No menos de 2500 platos
tericos para el pico de fitonadiona
Factor de asimetra: No ms de 1,5 para el pico de
fitonadiona
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (C 3 1H46 2) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (Ru/R1) x (Cs/Cu) x 1 00
Ru = cociente de respuesta entre los picos de
fitonadiona y estndar interno de la Solucin
muestra
Rs = cociente de respuesta entre los picos de
fitonadiona y estndar interno de la Solucin
estndar
e, = concentracin de ER Fitonadiona USP en la
Solucin estndar tg/mL)
Cu = concentracin nominal de fitonadiona en la
Solucin muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (Ci1 H4602)
BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin de hidrxido de potasio: Disolver 58,8 g de
hidrxido de potasio en 50 mL de agua.
Solucin de yodo: 0,01 mg/mL de yodo en ciclohe-
xano. [NOTA-Preparar esta solucin en el da de su
uso.]
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Tabletas. Mo-
ler las Tabletas a polvo fino y transferir una cantidad del
polvo, equivalente a 2 mg de beta caroteno, a un ma-
traz de saponificacin de 500 mL. Agregar 1 00 mL de
alcohol, 6 mL de Solucin de hidrxido de potasio y una
barra mezcladora magntica. Acoplar un condensador
de aire al matraz y calentar bajo reflujo durante 45 mi-
6802 Vitaminas O!coso!ub!cs / Supl2m2ntos Di2tticos
nutos rneLLid11uo comidntemente. Fnfriar a temperatura
ambiente, agregar 1 70 ml de ter de petrleo, y mez-
clar durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente el
contenido del matraz a un embudo de separacin de
500 ml con porciones de ter de petrleo. Dejar que
las capas se separen durante 5-1 O minutos y transferir
la capa orgnica superior a un matraz volumtrico de
500 ml. Transferir la capa acuosa inferior al matraz de
saponificacin, agregar 1 70 ml de ter de petrleo, y
mezclar durante 20 minutos adicionales. Transferir
cuantitativamente el contenido del matraz de saponifi-
cacin al embudo de separacin con ayuda de porcio-
nes de ter de petrleo. Dejar que las capas se separen
durante 1 O minutos. Escurrir la capa acuosa inferior y
desechar. Transferir la capa orgnica al matraz volum-
trico que contenga la capa orgnica previamente reco-
gida. Enjuagar el embudo de separacin con porciones
pequeas de ter de petrleo y transferir los lavados al
matraz volumtrico. Diluir los extractos etreos con ter
de petrleo a volumen, agregar 3 g de sulfato de sodio
anhidro, agitar, y dejar que sedimente. Transferir cuanti-
tativamente un volumen de esta solucin, equivalente a
100 ~tg de beta caroteno, a un matraz volumtrico de
50 ml. Evaporar bajo una corriente de nitrgeno hasta
sequedad y agregar ciclohexano inmediatamente. Agre-
gar 2 ml de Solucin de yodo y calentar durante 15 mi-
nutos en un bao de agua mantenido a 65. Enfriar
rpidamente y diluir con ciclohexano a volumen.
Condiciones espectromtricas
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analtica: 452 nm
Blanco: Ciclohexano
Anlisis
Muestra: Solucin muestra
Determinar la absorbancia contra el Blanco. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de beta caroteno
(CoHsn), en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (Au/F) x (100/Cu)
Au ~ absorbancia de la Solucin muestra
F = absortividad de beta caroteno a 452 nm, 223
Cu = concentracin nominal de beta caroteno en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (C40Hs6)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN Y DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Desintegracin
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091 ):
Cumplen con los requisitos
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3000 ufc/
g, y el recuento total combinado de hongos filamentosos
y levaduras no excede de 300 ufc/g,
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
USP 38
ETIQUETADO': Etiquetar las Tabletas indicando que el pro-
ducto es Tabletas de Vitaminas Oleosolubles. La etiqueta
tamhiPn indica !l cantidad de cada 1itamina/unidad de
dosificacin y. cuando sea necesario, la forma qumica
presente. Cuando el producto contiene vitamina E, la eti-
queta indica si se trata de la forma d o di. Cuando se
proporciona ms de un mtodo de valoracin para una
vitamina en particular, el etiquetado indica el mtodo de
valoracin usado slo si no se usa el Mtodo 1.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato cido de Alfa Tocoferilo USP
ER Colecalciferol USP
9, 1O-Secocolesta-5,7,10(19)-trien-3-ol, (3/3,5Z,7E)-.
Colecalciferol.
C21H44Q 384,64
ER Ergocalciferol USP
9, 1O-Secoergosta-5,7,1 O (19),22-tetraen-3-ol,
(3f3,5Z, 7 E,22E)-.
Ergocalciferol.
C2sH44 396,65
ER Fitonadiona USP
1,4-Naftalendiona, 2-metil-3-(3,7, 11, 15-tetrametil-2-he-
xadecenil)-, [R-[R*,R*-(E)]]-.
Filoquinona.
C31 H4602 450,70
ER Vitamina A USP
Vitaminas Oleosolubles con Minerales,
Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Vitaminas Oleosolubles con Minerales con-
tienen dos o ms de las siguientes vitaminas oleosolubles:
Vitamina A, como retino! o steres de retino! en forma de
acetato de retinilo o palmitato de retinilo; Vitamina D,
como ergocalciferol (Vitamina D2) o colecalciferol (Vita-
mina D3); Vitamina E, como alfa tocoferol, acetato de alfa
tocoferilo o succinato cido de alfa tocoferilo; Fitonadiona
(Vitamina K1); beta caroteno; y uno o ms minerales deri-
vados de sustancias generalmente reconocidas como se-
guras, que proporcionan uno o ms de los siguientes ele-
mentos en su forma ionizable: boro, calcio, cromo, cobre,
flor, yodo, hierro, magnesio, manganeso, molibdeno, n-
quel, fsforo, potasio, selenio, estao, vanadio y cinc. Las
Cpsulas contienen no menos de 90,0% y no ms de
165,0% de las cantidades declaradas de vitamina A, como
equivalente de retino! (C20H100); vitamina D, como cole-
calciferol (C21H44) o ergocalciferol (C28H440); vitamina E,
como alfa tocoferol (C29H102), acetato de alfa tocoferilo
(C11 Hs201), o succinato cido de alfa tocoferilo (CnHs4s);
1 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes,
siempre que tales unidade' hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina E se ha discontiriuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami-
nas tambin se han discontinuado; no obstante, contina el uso de UI en las
etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los art1culos se etiquetan en
trminos de Unidades adems del etiquetado requerido, la relacin de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP
de Vitamina A= 0,3 q de todo trans retinol (alcohol de vitamina A) o
0,344 g de todo trans acetato rle retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 >'9
de todo trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 ,ug de reti-
no! (3,3 Unidades USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retino! (RE); 1 UI de
beta caroteno = 0,6 ftg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vita-
mina D = 0,025 .uq de erqocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocofe-
rol = 1, 1 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa
tocoferilo ~ 1 anliljtlil Uniddd USP de Vila111ina E, 1 mg de sucrniato cido de
di-alfa tocoferilo ~ 0,89 antiquas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa
tocoteroi = l ,4Y antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de acetato de
d-alfa tocoferilo ~ 1, 36 ant1gua1 Unidades USI' de Vitamina E, 1 mg de succi-
nato cido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiquas Unidades USP de Vitamina E.
En trminos de equivalPntes rle d-alfa tocoferol, 1 mq de acetato de d-alfa
tocoterilo = 0,91, 1 lllCJ rle succ1nato acido de d-alfa tocoferrlo = 0,81, 1 mg
de di-alfa tocoferol ~ 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo ~ 0,67, y
1 mg de sucC1nato ac1do de di-alfa tocoferilo ~ 0,60.
USP 38
fitonadiona (C~H~00,); y beta caroteno (C1c,H,0); no me-
nos de 90,0% y no ms de 1:,,o% de las cantidades
declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), magne-
sio (MgJ, manganeso (fvln), fsforo (f-' ), potasio (K) y cinc
(7n); y no m2nos rl2 90,0'X, y no ms de 160,0% de las
cantidades declaradas de boro (B), cromo (Cr), flor (F),
yodo (1), molibdeno (Mo), n1quel (Ni), selenio (Se), estao
(Sn) y vanadio (V).
Pueden contener otras sustancias agregadas declaradas ge-
neralmente reconocidas como seguras, en cantidades
inobjetables.
CONTENIDO
VITAMINA A
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano
Solucin estndar 1: 1 3 pg/ml de retinol, a partir de
ER Acetato de Retinilo USP en n-hexano
Solucin estndar 2: 1 3 g/ml de retino!, a partir de
ER Palmitato de Retinilo USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
iguales de Solucin estndar 7 y Solucin estndar 2.
Solucin muestra: Transferir el contenido de no menos
de 20 Cpsulas a un recipiente adecuado, mezclar y
pesar. Transferir una porcin de la mezcla, equivalente a
5 Cpsulas, a un recipiente con tapa de rosca con recu-
brimiento interno de tefln. [NOTA-Para Cpsulas de
gelatina dura, retirar, tanto como sea posible, el conte-
nido de no menos de 20 Cpsulas, cortando para abrir
las cubiertas de las Cpsulas, transfiriendo las cubiertas
y sus contenidos a un recipiente adecuado y triturando
para obtener una masa homognea. Transferir una por-
cin de la masa, equivalente a 5 Cpsulas, a un reci-
piente con tapa de rosca con recubrimiento interno de
tefln.] Agregar 1O ml de dimetil sulfxido y 15 ml de
n-hexano, y agitar durante 45 minutos en un bao de
agua mantenido a 60. Centrifugar a 3000 rpm durante
1O minutos y transferir la capa de hexano con una pi-
peta a un matraz volumtrico de 100 ml. Agregar
15 ml de n-hexano a la capa de dimetil sulfxido, agi-
tar minuciosamente durante 5 minutos y transferir la
capa de hexano con una pipeta a un matraz volum-
trico de 100 ml. Repetir esta extraccin con tres porcio-
nes adicionales de 15 ml de n-hexano. Diluir los extrac-
tos en el matraz volumtrico con n-hexano a volumen.
Diluir adicionalmente esta solucin con n-hexano hasta
obtener una solucin con una concentracin de 1 3 g/
ml de vitamina A como retino! (C20HioO).
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a <621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar 7 o Solucin estndar 2 y
Soiucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A como retino! (CmH<r,O), en la porcin ele Cp-
sulas tomada:
Resultado ~ (r11r1) x (C/C,) x 100
r11 = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
Suplementos Dietticos/ Vitaminas Oleosolubles 6803
r, - rea del pico de la forna todo trans de ster
de retinilo de la Solucin estndar
correspondiente
C = concentracin de retino! en la Solucin
cs1ndar correspondiente (g/ml)
C = concentracin nominal de Vitamina A, como
retino!, en la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A como equivalente de retino!
(C20HioO)
VITAMINA D
[NOTA-Cuando se especifique vitamina D (colecalciferol
o ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin act1nica durante todo este
procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (99: 1)
Solucin estndar: 2 g/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solucin estndar a 60 durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 ml de
una solucin preparada segn se indica en Solucin
muestra, en Vitamina A, a un recipiente adecuado y
concentrar, si fuera necesario, al vaco a temperatura
ambiente hasta obtener una solucin con una concen-
tracin esperada de 2 g/ml de colecalciferol o
ergocalciferol.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma presente
de vitamina D y su precursor correspondiente
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cole-
calciferol (C21H44) o ergocalciferol (C2sH44) en la
porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( Cs/ Cu) x F x 1 00
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
C = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(pg/ml)
(, = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
F = factor de correccin que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de pre-
vitamina D presente en la Solucin muestra,
1,09
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44)
o ergocalciferol (C2sH.,.,O)
VITAMINA E
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocofenlo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
6804 Vitaminas Oleosolubles ! Suplr>;11pn/o\ OiPfticos
Solucin A: Solucin de cido fosfrico (1 en 1 00) en
agua
Fase mvil: Metano! y Solucin A (19: 1)
Solucin estndar: 2 rm/ml de ER Aia Tocoferof,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo uc;r o rR Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solucin preparada segn se indica en Solucin muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vaco a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metano! a un matraz volu-
mtrico adecuado y diluir con metano! a volumen para
obtener una concentracin de 2 mg/ml de alfa tocofe-
rol, acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa
tocoferilo.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 1,5
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de alfa
tocoferol (C29Hso2), acetato de alfa tocoferilo
(C31 Hs23) o succinato cido de alfa tocoferilo
(C33Hs4s) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
r11 = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin muestra
ru = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la forma
correspondiente de Vitamina E en la Solucin
muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
FITONADIONA (VITAMINA K,)
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metano! y agua (19: 1)
Solucin madre del estndar: 200 g/ml de ER Fito-
nadiona USP en metano!. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solucin estndar: 20 g/ml de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solucin madre del estndar diluida con
metano!
Solucin de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 ~tg/ml de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con metanol. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porcin de metano!, agregar la
Solucin madre del estndar y luego diluir con metano! a
volumen.]
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solucin preparada segn se indica en Solucin muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vaco a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metano! a un matraz volu-
mtrico adecuado y diluir con metano! a volumen para
obtener una concentracin de 20 g/ml de
fitonadiona.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 .um
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solucin de aptitud del sistema
Desviacion estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (C11H4602) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/r,) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la Solucin estndar
C1 = concentracin de ER Fitonadiona USP en la
Solucin estndar (g/ml)
C11 = concentracin nominal de fitonadiona en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C11 H4602)
BETA CAROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica.]
Fase mvil: Transferir 50 mg de butil hidroxitolueno a
un matraz volumtrico de 1 L y disolver con 20 ml de
2-propanol. Agregar 0,2 ml de N-etildiisopropilamina,
25 ml de solucin de acetato de amonio al 0,2%,
455 ml de acetonitrilo y aproximadamente 450 ml de
metano!. Dejar que la solucin alcance la temperatura
ambiente y diluir con metano! a volumen.
Diluyente: 50 g/ml de butil hidroxitolueno en alcohol
Solucin de aptitud del sistema: Transferir 20 mg de
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP a un ma-
traz volumtrico de 50 ml. Agregar 1 ml de agua, 4 ml
de tetrahidrofurano y someter a ultrasonido durante 5
minutos. Diluir con Diluyente a volumen y someter a
ultrasonido durante 5 minutos. Enfriar a temperatura
ambiente, pasar la suspensin a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 m y usar
el filtrado transparente.
Solucin madre del estndar: 60 g/ml de ER Beta
Caroteno USP en tetrahidrofurano
Solucin estndar A: Transferir 5,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 100 ml,
agregar 5,0 ml de tetrahidrofurano y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Determinar la concentracin de la Solucin estndar A a
partir de la concentracin de la Solucin estndar B,
segn se describe a continuacin.
Solucin estndar B: Transferir 5,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 100 ml y
diluir con ciclohexano a volumen. Preparar por
triplicado.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Longitud de onda analtica: 457 nm
Longitud de paso de celda: 1 cm
Blanco: Ciclohexano
Anlisis
Muestra: Solucin estndar B
Calcular la concentracin de beta caroteno total
(mg/ml) como la forma todo trans de beta caroteno
(CoHs6) en la Solucin estndar B. [NOTA-La concen-
tracin de ia Solucin estandar B es igual a la concen-
tracin de la Solucin estndar A.]
Resultado = Al F
USP 38
A - absorbancia promedio de las tres
preparaciones de Solucin estndar B
F = absortividad de la forma todo trans de beta
caroteno puro en ciclohexano, 250
Solucin muestra: Transferir no mC'nos de 20 ml de !<J
solucin preparada segn se indica en Solucin muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vaco a temperatura ambiente hasta sequedad. Disolver
el residuo en una mezcla de cloruro de metileno y Dilu-
yente (1 :1 ), y diluir con la misma mezcla hasta obtener
una concentracin de 3 g/mL de beta caroteno. Pasar
a travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m, si fuera necesario.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 448 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L68 de 5 m
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin es-
tndar A
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
de los componentes en la Solucin de aptitud del sis-
tema se presentan en la Tabla 7.]
Tabla 1
Tiempo de Factor de
Retencin Respuesta
Nombre Relativo Relativa
Forma todo trans de alfa caroteno o 93 11
Forma todo trans de beta caroteno 1 00 1 15 mL de agua, 1 O mL de cido clorhdrico 6 N y 1 mL
9-cis-Beta caroteno 1 07 1 de Solucin de polisorbato 80 al matraz. Calentar sobre
1 3-cis-Beta caroteno 1 17 12
15-cis-Beta caroteno 1 21 14
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin de aptitud del sistema es similar al cro-
matograma de referencia provisto con el lote de ER
Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre beta caroteno y
alfa caroteno; y entre beta caroteno y 9-cis-beta caro-
teno, Solucin de aptitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
beta caroteno, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de beta caroteno en inyecciones repetidas, So-
lucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la forma todo trans de beta
caroteno en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solucin estndar A
Cs ~ concentracin de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solucin estndar A, segn se
determina mediante el procedimiento
espectro mtrico
Cu = concentracin nominal de beta caroteno en la
Solucin muestra
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (C40Hs6)
Suplementos Oieteticos / Vitaminc:is Olcosolublcs 6805
CALCIO, Mtodo 7
Solucin de cloruro de lantano: 267 rng/rnL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en cido clorhdrico O, 125
i\J
Solucin estndar de calcio: 400 g/ml de ca!cio. Di
solver 1,001 g de carbonato de calcio, previamente se-
cados a 300" durante 3 horas y enfriados en un deseca-
dor durante 2 horas, en 25 mL de cido clorhdrico 1 N.
Calentar a ebullicin para expulsar el dixido de car-
bono y diluir con agua hasta 1000 mL.
Solucion madre del estndar: 100 g/mL de calcio, a
partir de Solucin estndar de calcio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; 2,0;
2,5 y 3,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos
matraces volumtricos de 100 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 mL de Solucin de cloruro de lantano y diluir
con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para obtener
concentraciones de 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 g/mL de
calcio.
Solucin de polisorbato 80: Polisorbato 80 y alcohol
(1 :10)
Solucin muestra: Transferir 5 Cpsulas a un matraz
volumtrico de 1 00 ml. [NOTA-Para Cpsulas de gela-
tina dura, pesar no menos de 20 Cpsulas. Abrir las
Cpsulas, sin perder material de la cubierta, y transferir
el contenido a un recipiente adecuado. Retirar cualquier
contenido adherido a las cubiertas de las cpsulas vacas
lavando con varias porciones de ter. Desechar los lava-
dos y dejar que las cubiertas de las Cpsulas se sequen.
Pesar las cubiertas de las Cpsulas vac1as, calcular el
peso neto del contenido de las Cpsulas y transferir una
porcin del contenido de las Cpsulas, equivalente a 5
Cpsulas, a un matraz volumtrico de 1 00 mL.] Agregar
una placa de calentamiento o bao de vapor, agitando
por rotacin suave intermitentemente, hasta que las
Cpsulas se desintegren por completo o que el conte-
nido se disuelva. Calentar a ebullicin suave durante 15
minutos adicionales. Enfriar, diluir con agua a volumen
y filtrar, desechando los primeros 5 mL del filtrado. Di-
luir esta solucin con cido clorhdrico 0, 125 N hasta
obtener una concentracin de 2 g/mL de calcio, agre-
gando 1 mL de Solucin de cloruro de lantano por
100 mL del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cal-
cio a 422,7 nm
Lmpara:, Calcio, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solucin de cloruro de lantano por 100 mL
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en mg/mL, de
calcio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de calcio
(Ca) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de calcio en la Solucin
muestra (9/mL)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solucin
muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0% 125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
 (ROMO, Mtodo l
Solucion estandar de cromo: 1000 ,ug/ml de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secados a
120 durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
rlP rnlietilenn
Solucin madre del estndar: 1 O pg/ml de cromo, a
partir de Solucion estndar de cromo diluida con cido
clorhdrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estndar: Transferir 1 0,0 y 20,0 ml de Solu-
cin madre del estndar a sendos matraces volumtricos
de 100 ml, y transferir 15,0 y 20,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar a sendos matraces volumtricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 pg/ml
de cromo.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra fara que contenga 2,5 pg/ml de cromo y omi-
tiendo e uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
cromo a 357,9 nm
Lmpara: Cromo, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
cromo en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
C ~ concentracin medida de cromo en la Solucin
muestra (p9/ml)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solucin muestra (r1g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
(OBRE, Mtodo 1
Solucin estndar de cobre: Disolver 1,00 g de lmina
de cobre en un volumen mnimo de una solucin de
cido ntrico al 50% y diluir con una solucin de cido
ntrico al 1 % hasta 1 000 ml. Esta solucin contiene
1000 pg/ml de cobre.
Solucin madre del estndar: 100 ftg/ml de cobre, a
partir de Solucin estndar de cobre diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 200 ml. Diluir con cido clorhdrico
O, 1 25 N a volumen para obtener concentraciones de
0,5; 1,0, 2,0; 3,0 y 4,0 pg/rnl de cobre.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 2 pg/ml de cobre y omi-
tiendo el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de co-
bre a 324,7 11111
Lmpara: Cobre, de ctodo hueco
Llama: Aire--acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 1 25 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y 5oiuc;on muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en pg/ml,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en pg/ml, de
cobre en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cobre
(Cu) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/C1) x 100
C = concentracin medida de cobre en la Solucin
muestra (9/ml)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solucin
muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
FLUORURO Mtodo 1
[NOTA-Almacenar todas las soluciones en envases de
plstico.]
Solucin de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de sodio en 600 ml de agua contenida en un
matraz volumtrico de 1000 ml. Dejar que la solucin
se equilibre a temperatura ambiente y diluir con agua a
volumen. Ajustar con unas pocas gotas de cido actico
a un pH de 7,0.
Solucin de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 ml de agua en un matraz volumtrico
de 1000 ml. Agregar 28 ml de cido perclrico y diluir
con a9ua a volumen.
Solucion madre del estndar de fluoruro: 500 g/ml
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio en agua, previamente secados a 100 durante 4
noras y enfriados en un desecador
Solucin madre intermedia A: 100 pg/ml de fluoruro,
a partir de Solucin madre del estndar de fluoruro di-
luida con agua
Solucin madre intermedia B: 1 O pg/ml de fluoruro, a
partir de Solucin madre del estndar de f/uoruro diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 3,0; 5,0 y 10,0 ml de
Solucin madre intermedia B, y 5,0 y 10,0 ml de Solucin
madre intermedia A a cinco matraces volumtricos de
100 ml distintos. Agregar a cada matraz 10,0 ml de
cido clorhdrico l N, 25 ml de Solucin de acetato de
sodio 3 M y 25,0 ml de Solucin de citrato de sodio. Di-
luir el contenido de cada matraz con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,3; 0,5; 1,0; 5,0 y
10,0 g/ml de fluoruro.
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas,
cortando para abrir las Cpsulas. Mezclar y determinar
el peso del contenido. Transferir una cantidad del con-
tenido de las Cpsulas mezclado, equivalente a 200 pg
de fluoruro, a un matraz volumtrico de 100 ml. Agre
gar 10,0 ml de cido clorhdrico 1 N, 25,0 ml de Solu-
cin de acetato de sodio 3 M y 25,0 ml de Solucin de
citrato de sodio. Diluir con agua a volumen.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Transferir 50,0 ml de las Suluciunes e:>tndar y de la So-
lucin muestra a sendos vasos de precipitados de pls-
tico, que contengan una barra mezcladora recubierta
de plstico. Medir los potenciales (ver pH (791 )), en
mV, de las Soluciones estndar y la Solucin muestra,
con un medidor de pH capaz de una reproducibilidad
mnima de 0,2 mV y equipado con un electrodo
indicador especfico para in fluoruro y un electrodo
de 1efererKia de caiornei. [NorA-AI tomar las medicio-
nes, sumergir los electrodos en la solucin, mezclar en
USP 38
un agitador magntico con su parte superior aislada
hasta que se logre el equilibrio (1 2 minutos) y regis-
trar el potencial. Enuagar y secar los electrodos entre
mcJiciom::,, .;rocur ,mdo evitar que :,e dJe el cristal
del elertrnrln p<;r)Prficn rilril inn flunruro.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en pg/ml, de las Soluciones estndar en funcin
del potencial, en mV. A partir de la curva de respuesta
estndar as obtenida y el potencial medido de la Solu-
cin muestra, determinar la concentracin, C, en
pg/ml, de fluoruro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de flor
(F) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/C11) x 100
C = concentracin medida de fluoruro en la
Solucin muestra (pg/ml)
Cu = concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (P<;i/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
FLUORURO Mtodo 2
[NOTA-Usar recipientes de plstico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
Solucin amortiguadora de pH 10,0: Agregar 214 ml
de hidrxido de sodio O, 1 N a 1000 mL de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase mvil: Alcohol, cido sulfrico O, 1 N y agua
(20:5:1 75)
Solucin madre del estndar: 220 pg/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solucin contiene
100 p9/ml de fluoruro.
Solucion estndar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extraccin de fase slida especificada para su uso en la
Solucin estndar y la Solucin muestra de la siguiente
manera. Usando vaco a una presin que no exceda de
5 mm de mercurio, lavar la columna con un volumen
de columna de metano! seguido de un volumen de co-
lumna de Solucin amortiguadora de pH 70,0. No dejar
que la parte superior de la columna se seque. Si la
parte superior de la columna se seca, reacondicionar la
columna] Transferir 10,0 ml de Solucin madre del es-
tndar a un matraz volumtrico de 100 ml. Agregar
75 ml de agua y ajustar con hidrxido de sodio O, 1 N
a un pH de 10,4 O, 1. Diluir con agua a volumen.
Filtrar, desechando los primeros 15 ml del filtrado.
Transferir 25,0 ml del filtrado a un matraz volumtrico
de 50 ml, agregar 15,0 ml de agua y ajustar con hidr-
xido de sodio O, 1 N a un pH de 10,0. Diluir con Solu-
cin amortiguadora de pH 10,0 a volumen. Eluir una
porcin de esta solucion a travs de una columna de
extraccin de fase slida de 3 ml, que contenga relleno
L1, la cual se conecta a travs de un adaptador a una
segunda columna de extraccin de fase slida que con-
tenga relleno de intercambio catinico fuerte de sulfo-
nilpropilo. Desechar los primeros 3 ml del eluato y re-
coger el resto del eluato en un matraz adecuado para
inyectar en el cromatgrafo.
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta, y transferir el contenido a
un recipiente de 100 ml. Si fuera necesario, retirar cual-
quier contenido adherido a las cubiertas de las cpsulas
vacas lavando con varias porciones de ter. Desechar
los lavados y secar las cubiertas de las Cpsulas con
ayuda de una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas
de las Cpsulas vacas en un frasco de pesada tarado y
calcular el peso neto del contenido de las Cpsulas.
Transferir una porcin del contenido de las Cpsulas,
equivalente a 1 mg de flor, a un matraz volumtrico
de 1 00 ml. Agregar 15 ml de agua y agitar vigorosa-
mente. Enjuagar las paredes del matraz con 15 ml de
agua y dejar en reposo durante 1 O minutos. Diluir con
Suplementos Dietticos /Vitaminas Oleosolubles 6807
agua hasta 85 ml, ajustar con hidrxido de sodio 1 N a
un pi l de 1 0,4 _:_ O, 1 y diluir con agua hasta 100 ml.
Proceder segun se indica en Solucion estndar, comen-
ZJndo donde dice "Filtrar, dcscchzmdo los primeros
1 ') mi riel filtrarlo"
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: De conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L17
Columna analtica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L1 7
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de fluoruro. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de flor (F) en la por-
cin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la Solucin estndar
Cs = concentracin de fluoruro en la Solucin
estndar (pg/ml)
Cu = concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
YODURO, Mtodo 1
Agua de bromo: Agregar 100 ml de agua a 20 ml de
bromo en un frasco con tapn de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en reposo durante 30 minutos y usar el
sobrenadante.
Anlisis
Muestra: Cpsulas
Retirar el contenido de las Cpsulas, cortando para abrir
las Cpsulas. Mezclar y determinar el peso del conte-
nido. Transferir una cantidad del contenido, equiva-
lente a 3 mg de yodo, a un crisol de nquel. Agregar
5 g de carbonato de sodio, 5 ml de solucin de hidr-
xido de sodio al 50% (p/v) y 1O ml de alcohol, procu-
rando humedecer toda la muestra. Calentar el crisol en
un bao de vapor hasta evaporar el alcohol, luego se-
car el crisol a 100 durante 30 minutos para evitar
salpicaduras durante el calentamiento subsiguiente.
Transferir el crisol con su contenido a un horno calen-
tado a 500 y calentar el crisol durante 15 minutos.
[NOTA-Es necesario calentar a 500 para carbonizar
toda la materia orgnica presente; se puede usar una
temperatura ms alta, si fuera necesario, para asegurar
la carbonizacin completa de toda la materia
orgnica.]
Enfriar el crisol, agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol
con un vidrio de reloj y calentar a ebullicin suave
durante 1 O minutos. Filtrar la solucin y lavar el crisol
con agua hirviendo, recogiendo el filtrado y los lava-
dos en un vaso de precipitados. Agregar cido fosf-
rico hasta que la solucin sea neutra frente al anaran-
jado de metilo y luego agregar 1 ml de cido fosfrico
en exceso. Agregar un exceso de Agua de bromo y
calentar la solucin a ebullicin suave hasta que se
torne incolora y luego durante 5 minutos ms. Agre-
gar unos pocos cristales de cido saliclico y enfriar la
solucin a 20. Agregar 1 ml de cido fosfrico y
0,5 g de yoduro de potasio, y valorar el yodo liberado
con tiosulfato de sodio 0,005 N SV, agregando almi-
dn SR cuando el color del yodo liberado haya desa-
parerirlo r<1si por completo.
6808 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietticos
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porcin de Cpsulas tomdt.ld:
V = volumen de liosulfato de sodio consumido
(mL)
NA = normalidad real de la solucin de tiosulfato de
sodio usada
F = factor de correccin para convertir mg en g,
1000 g/mL
1,,,,. = miliequivalente de 1; 21, 16 mg/meq
Aw = peso promedio del contenido de las Cpsulas
W = peso de Id muestra de contenido de las
Cpsulas tomado
L = cantidad declarada de yodo (g/Cpsula)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
YODURO, Mtodo 2
Anlisis: Proceder segn se indica en Mtodos Automati-
zados de Anlisis (1 6), Valoracin de Yoduro.
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
HIERRO, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver eh 25 mL de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 mL de Solucin madre del estndar de hierro a sen-
dos matraces volumtricos de 100 mL. Diluir el conte-
nido de cada matraz con cido clorhdrico O, 125 N a
volumen para obtener concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0;
6,0 y 8,0 g/mL de hierro.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 5 g/mL de hierro y omi-
tiendo el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
hierro a 248,3 nm
Lmpara: Hierro, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
hierro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/C,1) x 100
C = concentracin medida de hierro en la Solucin
muestra (~/ml)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solucin
muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
MAGNESIO Mtodo 7
Solucin de cloruro de lantano: Preparar segn se in-
dica en Calcio, Mtodo 7.
Solucin estndar de magnesio: Transferir 1,0 g de
cinta de magnesio a un matraz volumtrico de
1000 ml, disolver en 50 ml de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar para obtener una
USP 38
mlucin con una concentracin conocida de 1 000 g/
mL de magnesio.
Solucin madre del estndar: 20 g/mL de magnesio,
d fJcillr Je Suluuun estndar de magnesio diluida con
cido clorhdrico O, 1 25 ~~
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 1 00 mL. Agregar a cada matraz
1,0 mL de Solucin de cloruro de lantano y diluir con
cido clorhdrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 g/ml de
magnesio.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Soluci~n
muestra para que contenga 0,4 g/mL de magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
magnesio a 285,2 nm
Lmpara: Magnesio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico 0, 125 N que contenga 1 ml
de Solucin de cloruro de lantano por 1 00 mL
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
magnesio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mag-
nesio (Mg) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de magnesio en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu ~ concentracin nominal de magnesio en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
MANGANESO Mtodo 7
Solucin madre del estndar de manganeso: Transfe-
rir 1,00 g de manganeso a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en 20 ml de cido ntrico, diluir con
cido clorhdrico 6 N a volumen y mezclar para obtener
una solucin con una concentracin de 1 000 g/ml de
manganeso.
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de manga-
neso, a partir de Solucin madre del estndar de manga-
neso diluida con cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matra1 con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones conocidas de
0,5; 0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 g/ml de manganeso.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 1 g/ml de manganeso y
omitiendo el uso de la Solucin de cloruro de lantano .
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
manganeso a 279,5 nm
USP 38
Lmpara: Manganeso, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar la> absorbancias de ias soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en pg/ml,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en pg/ml,
de manganeso en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de man-
ganeso (Mn) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de manganeso en la
Solucin muestra (pg/ml)
Cu = concentracin nominal de manganeso en la
Solucin muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
MOLIBDENO, Mtodo 7
Diluyente: 20 mg/ml de cloruro de amonio en agua
Solucin estndar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumtrico de
1000 ml y disolver en 50 ml de cido ntrico, enti-
biando, si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1 000 pg/ml de molibdeno.
Solucin madre del estndar: 100 pg/ml de molib-
deno, a partir de Solucin estndar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 10,0 y 25,0 ml de
la Solucin madre del estndar a sendos matraces volu-
mtricos de 1 00 ml y agregar 5,0 ml de cido percl-
rico a cada matraz. Calentar a ebullicin suave las solu-
ciones en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y diluir cada una con Diluyente a
volumen para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 pg/ml de molibdeno.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe tomar un nmero de
Cpsulas o una porcin del co.ntenido de la.s Cpsulas
equivalente a 1000 pg de molibdeno y realizar dilucio-
nes apropiadas para obtener una concentracin final de
1 O pg/ml de molibdeno, omitiendo la adicin de Solu-
cin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de mo-
libdeno a 313,3 nm
Lmpara:, Molibdeno, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20: 1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en pg/ml,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en pg/ml,
de molibdeno en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentracin medida de molibdeno en la
Solucin muestra (pg/ml)
Suplementos Oietet1cos /Vitaminas Oleosolubles 6809
Cu ~ concentracin nominal de molibdeno en la
\nlucin muestro (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-1 60,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
MOLIBDENO, Mtodo 2
Solucin de fluoruro de sodio: Agregar 200 mL de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solucin se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solucin de sulfato ferroso: 4, 98 mg/ml de sulfato fe-
rroso en agua .
Solucin de tiocianato de potasio: 200 mg/ml de t10-
cianato de potasio en agua
Solucin de cloruro estannoso al 20%: Transferir
40 mg de cloruro estannoso a un vaso de precipitados,
agregar 20 ml de solucin de cido clorhdrico 6,5 N y
calentar la solucin hasta que el cloruro estannoso se
disuelva. Enfriar y diluir con agua hasta 100 ml.
Solucin de cloruro estannoso diluida: Solucin de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solucin en el momento de su uso.
Solucin estndar: 20 pg/ml de molibdeno en agua
Muestra: Retirar el contenido de un nmero contado
de Cpsulas, cortando para a~rir las Cpsulas. M.ezclar y
determinar el peso del contenido. Usar una cantidad
del contenido de las Cpsulas, equivalente a 40 pg de
molibdeno.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ) .)
Modo: UV-Vis
Longitud de onda analtica: 465 nm
Celda: 1 cm
Blanco: Alcohol amlico
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 ml de Solucin estndar a
sendos vasos de precipitados de 200 ml. Agregar
20 ml de cido ntrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de reloj
y calentar a ebullicin lentamente sobre una placa de
calentamiento durante 45 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente. Agregar 6 ml de cido perclrico, cu-
brir los vasos de precipitados con vidrios de reloj y
continuar el calentamiento hasta que la digestin sea
completa, lo cual se indica cuando el lquido. se torna
incoloro o amarillo plido. Evaporar las soluciones en
los vasos de precipitados hasta sequedad. Enjuagar las
paredes de los vasos de precipitados y los vidrios de
reloj con agua, y agregar ms agua hasta completar
50 ml en cada vaso de precipitados. Calentar a ebulli-
cin suave la solucin acuosa durante unos pocos mi-
nutos. Enfriar a temperatura ambient~. Agregar. 2 90.tas
de anaranjado de metilo SR y neutralizar con h1drox1do
de amonio. Agregar 8,2 ml de cido clorhdrico.
Transferir cuantitativamente el contenido de los vasos
de precipitados a sendos matraces ~olumtricos de
100 ml, enjuagar los vasos de prec1p1tados e<;>n. agua,
transferir los enjuagues a los matraces volumetncos co-
rrespondientes y diluir con agua a volumen. Transferir
50,0 ml de cada solucin a sendos embudos de sepa-
racin. Agregar a cada embudo de separacin 1 ~9 ml
de Solucion de fluoruro de sodio, 0,5 ml de Solucton de
sulfato ferroso, 4,0 ml de Solucin de tiocianato de po-
tasio, 1,5 ml de Solucin de cloruro estannoso al 20% y
15;0 ml de alcohol amlico, y agitar los embudos de
separacin durante 1 minuto. Dejar que las capas se
separen y desechar las capas acuosas. Agregar 25 ml
de Solucin de cloruro estannoso diluida a cada embudo
de separacin y agitar suavemente durante 15 segun-
dos. Dejar que las fases se separen y desechar las ca-
' acuosa<; Transferir la capa orgnica de cada em-
budo de separacin a un tubo de centrfuga y .
centrifugar a 2000 rpm durante 1 O minutos. Determi-
nar las absorbancias de las fases orgnicas de la Solu-
cin estndar y la Muestra, y corregir con el Blanco.
681 O Vitaminas Oiemolubles / Suplementos Dietticos
Calcular el porcentaje de la Cdntidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Crm1ld> lomdda:
Resultado = (A,J A,) [(V x C)/ M"] x 100
A, = uh;nrh<lncia dP la 1\,11 if5tf(1
A', = absorbancia de la Solucin estndar
V = volumen de la Solucin estndar analizada,
2,0 ml
C = concentracin de molibdeno en la Solucin
estndar (g/ml)
Mu = cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(g)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
FSFORO, Mtodo 7
Solucin de cido sulfrico: Agregar cuidadosamente
cido sulfrico al agua (37,5: 100) y mezclar.
Solucin de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solucin de cido sulfrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solucin de cido sulfrico a volumen.]
Solucin de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar una gota de cido sulfrico por
100 ml de solucin.
Solucin de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solucin madre del estndar de fsforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobsico de potasio, previamente
secados a 105 durante 2 horas y almacenados en un
desecador, y transferir a un matraz volumtrico de
1000 mL. Disolver en agua, agregar 6 ml de cido sul-
frico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1 000 g/ml de fsforo.
Solucin estndar: 20 g/ml de fsforo, a partir de So-
lucin madre del estndar de fsforo diluida con agua
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas,
cortando para abrir las Cpsulas. Mezclar y determinar
el peso del contenido. Transferir una cantidad del con-
tenido de las Cpsulas, equivalente a 100 mg de fs-
foro, a 25 ml de cido ntrico y digerir sobre una placa
de calentamiento durante 30 minutos. Agregar 15 ml
de cido clorhdrico y continuar ia digestin hasta que
cese la produccin de humos marrones. Enfriar y trans-
ferir el contenido del matraz a un matraz volumtrico
de 500 ml con ayuda de pequeas porciones de agua.
Diluir con agua a volumen. Transferir 10,0 ml de esta
solucin a un matraz volumtrico de 100 ml y diluir
con agua a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analtica: 650 nm
Celda: 1 cm
Anlisis
Muestras: Solucin Pstndar y Solucin muestra
Transferir 5,0 ml de la Solucin estndar, de la Solucin
muestra y de agua a sendos matraces volumtricos de
25 ml para proporcionar el blanco. Agregar a cada
uno de los tres matraces 1,0 ml de Solucin de molib-
dato de amonio, de Solucin de hidroquinona y de Solu-
cin de bisulfito de sodio, y agitar por rotacin suave
hasta mezclar. Diluir el contenido de cada matraz con
agua a volumen y dejar los matraces en reposo du-
rante 30 minutos. Determinar las absorbancias de las
;oluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fs-
foro (P) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (A/A) x (C/C) .x 100
Au = absorbancia de la Solucin muestra
A1 = absorbancia de la Solucin estndar
USP 38
e = co11ce11tracio11 de fosforo en la SolUC/017
P1trnrinr (p<Jlrnl)
C = concentracin nominal de fsforo en la
Solucion miwstm (.ug/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0% 125,0% de la cantidad
declarada de f;furu (P)
POTASIO
Solucin estndar de potasio: 1 00 g/ml de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
105' durante 2 horas, en agua
Solucin madre del estndar: 1 O g/ml de potasio, a
partir de Solucin estndar de potasio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 y
25,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 ~/ml de potasio.
Solucion de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 1,5 g/ml de potasio y
omitiendo el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de po-
tasio a 766,5 nm
Lmpara: Potasio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Agua
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
potasio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pota-
sio (K) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de potasio en la
Solucin muestra (pg/ml)
Cu = concentracin nominal de potasio en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
SELENIO, Mtodo I
Diluyente: Preparar segn se indica en Molibdeno, M-
todo 7. ,
Solucin estndar de selenio: [PRECAUCION-EI selenio
es txico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1 000 ml y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una concentracin de 1 000
g/ml de selenio.
Solucin madre del estndar: 100 g/ml de selenio, a
partir de Solucin estndar de selenio diluida con agua
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 ml de
Solucin madre del estndar a sendos matraces volum-
tricos de 100 ml, y aqreqar 5,0 ml de cido perclrico
a
a cada matraz. Calentar ebullicin suave las soluciones
durante 1 5 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada una con Diluyente a volumen para obtener
USP 38
soluciones con conce11traciones de 5,0; 10,0 y 25,0 g/
ml de selenio.
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas,
cortando para abrir las Cpsulas. Mezclar y determinar
f>I peso del contenido. Transff>rir una cantidad del con-
tenido de las Cpsulas, equivalente a 1000 g de sele-
nio, a un matraz adecuado y agregar 12 ml de cido
ntrico. [NOTA-Se puede variar el volumen de cido n-
trico para asegurar que el polvo se disperse uniforme-
mente.] Agitar el matraz por rotacin suave cuidadosa-
mente hasta dispersar la muestra de prueba. Someter a
ultrasonido durante 1 O minutos o hasta que la muestra
de prueba se disuelva por completo. Calentar a ebulli-
cin suave la solucin durante 15 minutos y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar cuidadosamente 8 ml
de acido perclrico al matraz, calentar el matraz hasta
que aparezcan humos de cido perclrico y agitar el
matraz por rotacin suave para disipar los humos. Repe-
tir el calentamiento y la agitacin por rotacin suave
hasta que los humos aparezcan de nuevo. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Transferir el contenido del matraz a
un matraz volumtrico de 50 ml con ayuda de Dilu-
yente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de sele-
nio a 196,0 nm
Lmpara: Selenio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20:1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de selenio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
selenio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de selenio en la
Solucin muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de selenio en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
SELENIO, Mtodo 2
Solucin de cido clorhdrico: cido clorhdrico diluido
con agua (1 en 1 O)
Solucion de hidrxido de amonio al 50%: Hidrxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/ml de edetato disdico y 25 mg/ml
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disdico en una porcin de agua,
luego agregar clorhidrato de hidroxilamina y diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2,3-diaminonaftaleno
a un embudo de separacin de 250 ml y agregar
200 mL de cido clorhdrico O, 1 N. Lavar la solucin
con tres porciones de 40 ml de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solucin en un frasco
marrn y cubrir la solucin con una capa de 1 cm de
ciclohexano. Esta solucin permanece estable durante 1
semana si se almacena en un refrigerador.
Solucin madre del estndar: [PRECAUCIN-El selenio
es txico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
Suplementos Dietticos /Vitaminas Oleosolubles 6811
evaporacion hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1000 ml y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una :.o!ucin con una concen
!racin rle 1 000 pg/rnL de Sf>lenio Diluir un volumen
de la solucion con cido clorhdrico O, 125 N hasta ob-
tener una concentracin de 2,0 g/ml de selenio.
Solucin estndar: Transferir 1 O ml de Solucin madre
del estndar a un matraz con tapn de vidrio. Agregar
1 ml de cido perclrico y 1 ml de Solucin de cido
clorhdrico y diluir con agua hasta 20 ml.
Solucin muestra: Retirar el contenido de las Cpsulas,
cortando para abrir las Cpsulas. Mezclar y determinar
el peso del contenido. Transferir una cantidad del con-
tenido de las Cpsulas, equivalente a 20 g de selenio,
a un matraz adecuado. Agregar 1 O ml de cido ntrico
y entibiar suavemente sobre una placa de calenta-
miento. Continuar calentando hasta que la reaccin ini-
cial de cido ntrico haya desaparecido y luego agregar
3 ml d,e cido perclrico.
[PRECAUCION-Tener cuidado en esta etapa debido a que la
reaccin del cido perclrico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparicin de humos blancos de cido percl-
rico o hasta que la digestin comience a tornarse os-
cura. Agregar 0,5 ml de cido ntrico y continuar el
calentamiento, agregando cantidades adicionales de
cido ntrico si se observa un oscurecimiento mayor.
Digerir durante 1 O minutos despus de la primera apa-
ricin de humos de cido perclrico o hasta que la
digestin se torne incolora. Enfriar el matraz. Agregar
2,5 ml de Solucin de cido clorhdrico y devolver el
matraz a la placa de calentamiento para expulsar los
residuos de cido ntrico. Calentar la mezcla durante 3
minutos despus de que comience a hervir. Enfriar el
matraz a temperatura ambiente y diluir con agua hasta
20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: UV
Longitud de onda analtica: 380 nm
Celda: 1 cm
Blanco: 1 ml de cido perclrico y 1 ml de Solucin
de cido clorhdrico, diluido con agua hasta 20 ml
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Tratar la Solucin muestra, la Solucin estndar y el
Blanco, segn se indica a continuacin. Agregar 5 ml
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotacin
suave hasta mezclar. Ajustar la solucin en cada ma-
traz con Solucin de hidrxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 O, 1. Agregar 5 ml de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotacin suave hasta mezclar. Co-
locar los matraces en un bao de agua mantenido a
50 y equilibrar durante 30 minutos, procurando cu-
brir los matraces para protegerlos de la luz. Enfriar a
temperatura ambiente y transferir el contenido de
cada matraz a sendos embudos de separacin. Transfe-
rir 1 0,0 ml de ciclohexano a cada embudo de separa-
cin y extraer vigorosamente durante 1 minuto. Dese-
char la capa acuosa. Transferir la capa de ciclohexano
a un tubo de centrfuga y centrifugar a 1000 rpm du-
rante 1 minuto para eliminar el agua remanente. De-
terminar las absorbancias de las soluciones a partir de
las Muestras contra la solucin a partir del Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (Au! As) x [(V x Cs)/ Mu] x 100
Au - absorbancias de la capa de ciclohexano de la
Solucin muestra
A1 = absorbancias de la capa de ciclohexano de la
Solucin Pstndar
6812 Vitaminas Oleosolubles / SuplPmPntos Dietticos
V = volumen de la 5olucion madre del estndar
usado para preparar la 5olucion estndar,
10 ml
(. ~ <nn<Pnlrlrin rlP ~P/enio en !a Solucin madre
del estndar (q/ml)
Mu = ca11tidaJ 11orni11al de selenio en la Soluoon
muestra (g)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
CINC, Mtodo 1
Solucin estndar de cinc: 1000 g/mL de cinc, a par-
tir de xido de cinc en cido clorhdrico 5 M (3,89 mg/
mL) y diluida con agua a volumen final. [NOTA-Disol-
ver en cido clorhdrico 5 M, entibiando, si fuera nece-
sario, enfriar y luego diluir a volumen final.]
Solucin madre del estndar: 50 g/mL de cinc, a
partir de Solucin estndar de cinc, diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 mL de Solucion madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 mL. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 g/
mL de cinc.
Solucin de polisorbato 80: Preparar segn se indica
en Calcio, Mtodo 7.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 2 g/mL de cinc y omi-
tiendo el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cinc
a 213,8 nm
Lmpara: Cinc, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los cinco
puntos graficados. A partir de la grfica as obtenida,
determinar la concentracin, C, en g/mL, de cinc en
la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de cinc en la Solucin
muestra ($]/mL)
Cu = concentracion nominal de cinc en la Solucin
muestra (9/mL)
Criterios de aceptacion: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
BORO, NQUEL, ESTAO y VANADIO, Mtodo 7; (ALc19,
(ROMO, (OBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, FOSFORO
y CINC, Mtodo 2; MOLIBDENO y SELENIO, Mtodo 3
Solucin madre de agua regia: Preparar una mezcla
de cido clorhdrico y cido ntrico (3:1 ), agregando el
cido ntrico al cido clorhdrico. [NOTA-Ventilar peri-
dicamente la solucin en una campana de extraccin
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solucin madre de
agua regia y agua (1 :9), agregando un volumen de So-
lucin madre de agua regia a dos volmenes de agua.
Diluir con ms agua a volumen y mezclar bien.
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1000 mg/L de itrio en solucin de cido ntrico al
5% y 1 000 mg/L de escandia en solucin de cido n-
trico al 5% y Diluyente (1: 1: 198), y mezclar.
USP 38
Solucin madre del estndar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Slo es necesario incluir los minerales
de inters en la solucin.] Usando soluciones estndar
de elementos (individuJlc; o combinados) disponibles
comercialmentP en ~olucin de cido ntrico al 5%, pi-
petear y transferir la cantidad apropiada de solucin es-
tndar de elementos a un matraz volumtrico, y diluir
con solucin de cido ntrico al 5% hasta obtener una
solucin con concentraciones finales de aproximada-
mente 1 000 mg/L de calcio, 1 00 mg/L de cobre,
250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio, 100 mg/L
de manganeso, 800 mg/L de fsforo y 250 mg/L de
cinc.
Solucin madre del estndar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Slo es necesario incluir los minerales de
inters en la solucin.] Usando soluciones estndar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solucin de cido clorhdrico al 20%,
pipetear y transferir la cantidad apropiada de solucin
estndar de elementos a un matraz volumtrico y diluir
con solucin de cido clorhdrico al 20% hasta obtener
una solucin con concentraciones finales de aproxima-
damente 200 mg/L de boro y 1 00 mg/L de cromo, de
molibdeno, de nquel, de selenio, de estao y de
vanadio.
Soluciones estndar: Preparar una mezcla de Solucin
madre del estndar 7 y Solucin madre del estndar 2,
segn se requiera, en Diluyente, para preparar una curva
de calibracin de seis puntos que abarque el intervalo
de concentracin de cada mineral de inters.
Solucin muestra: Pesar, luego transferir 5 Cpsulas a
un matraz volumtrico de 250 ml y calentar suave-
mente sobre una placa de calentamiento hasta que el
contenido empiece a liberarse. Agregar, cuidadosa-
mente, 25 mL de Solucin madre de agua regia en incre-
mentos de 5 mL y agitar por rotacin suave. Calentar,
continuar agitando por rotacin suave hasta que las
Cpsulas se disuelvan en el cido, retirar inmediata-
mente de la fuente de calor y agregar 150 mL de agua.
Enfriar y diluir con agua a volumen. Filtrar aproximada-
mente 30 ml en un tubo de centrfuga usando un filtro
de nailon para jeringa con un tamao de poro de 5
m. Realizar los ajustes necesarios usando Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometra de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrmetro ajustado para medir
la emisin de cada mineral de inters aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente. [NOTA-
Las condiciones operativas se pueden desarrollar y op-
timizar basndose en las recomendaciones del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solucin de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta, segn se indica en el Anlisis.J
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar la emisin de cada mineral de inters en las
Soluciones estndar y la Solucin muestra con un sis-
tema de plasma inductivamente acoplado, usando Di-
luyente como blanco. Graficar la emisin de las Solucio-
nes estndar en funcin de las concentraciones, en
mg/L, de los minerales de inters y trazar la recta que
mejor se ajuste a los puntos graficados. A partir de la
grfica as obtenida, determinar la concentracin, C,
en mg/L, de cada mineral de inters en la Solucin
muestra.
USP 38
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cada
mineral tomado:
Resultado= ( x (V/VV) x F x (C,)/) x 100
C = concentracin medida de la ~oluoon muestra
(mg/mL)
V = volumen de la Solucin muestra (L)
W = peso de la mu~~tra (mg) ..
F = factor de diluc1on de la Soluoon muestra
Cw = peso promedio de las Cpsulas (mg)
L = cantidad declarada por Cpsula (mg) . ER
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de las canti-
dades declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fsforo (P) y cinc
(Zn); y 90,0%-160,0% de las cantidades .declaradas de
boro (B), cromo (Cr), molibdeno (Mo), niquel (Ni), se-
lenio (Se), estao (Sn) y vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040/: Cumplen con los
requisit9s de Disolucin.
VARIACION DE PESO (2091/: Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 /: El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 1 0 3
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 10 2 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022/: Cum-
plen con los requisitos de las prueb.as para .determinar la
ausencia de Salmonella spp., Eschench1a col1 y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES . tiene no menos de 90,0% y no mas de 150,0% de las
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO:' La etiqueta indica que e~ producto es .cap-
sulas de Vitaminas Oleosolubles con Minerales. La eti-
queta tambin indica la cantidad de cada vitamina y mi-
neral por u~idad de dosifi~acin y, cuand? s~a necesa~io,
la forma qu1mica de vitamina presente, e indica ademas
la forma salina del mineral usado como fuente de cada
elemento. Cuando el producto contiene vitamina E, la
etiqueta indica .si se trata ~e la forma do ~I~ Cuando se
proporciona mas de un metodo de v~lorac1on par~ una
vitamina o mineral en particular, el etiquetado 1nd1ca el
mtodo de valoracin con el que cumple el producto
nicamente si no se usa el Mtodo 7.
' Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan
existido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspon-
dientes, siempre que tales unidades hayan existido previ_amente . La Unidad
USP para Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades _1nternac1onales (UI)
para vitaminas se han discontinuad_o; no obstante, continu~ el uso de _UI en
las etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los_ art1culos se. ~t1quetan
en trminos de Unidades adems del etiquetado requerido, la relac1on de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. _Una. Unidad USP
de Vitamina A= 0,3 g de todo trans ret1nol (alcohol de vitamina A) o
O, 344 g de todo trans acetato de retinilo (acetato. de vitamina A) o 0,55 llg
de todo trans palmitato de retinilo (palm1tato de vitamina A)_y 1 ~tg de ret1-
nol (3,3 Unidades USP de Vitamina A)= 1 equivalente de retmol (RE); 1 UI de
beta caroteno = 0,6 g de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vita-
mina D = 0,025 y de eryocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocofe-
rol = 1, 1 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa
tocoferilo = 1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succ1nato ac1do de
di-alfa tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa
tocoferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de acetato de_ d-
aifa tocoferlo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 m'l de succ1-
nato cido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de V1tam1na E.
En trminos de equivalentes de d-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa
tornferilo = O, 91, 1 mg de succinato cido de d-alfa tocoferilo = 0.81, 1 mg
de di-alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67, y
1 mg de succinato cido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
Suplementos Oietcticos /Vitaminas Oleosolubles 6813
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP
ER Surrinatn rido rlP Alfil TnrnfPriln lJSP
ER Beta Caroteno USP
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroleno USP
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
ER Fitonadiona USP
ER Palmitato de Retinilo USP
ER Fluoruro de Sodio USP
Acetato de Retinilo USP
Vitaminas Oleosolubles con Minerales,
Solucin Oral
DEFINICIN
La Solucin Oral de Vitaminas Oleosolubles con Minerales
contiene dos o ms de las siguientes vitaminas oleosolu-
bles: Vitamina A, como retinol o steres de retinol en
forma de acetato de retinilo o palmitato de retinilo; Vita-
mina D, como ergocalciferol (Vitamina D2) o colecalciferol
(Vitamina D3); Vitamina E, como alfa tocoferol,. acet?to de
alfa tocoferilo o succinato cido de alfa tocofenlo; F1tona-
diona (Vitamina K1); beta caroteno; y uno o ms r:riinera-
les derivados de sustancias generalmente reconocidas
como seguras, que presentan uno o ms de los siguientes
elementos en su forma ionizable: cromo, flor, yodo,
hierro, magnesio, manganeso, mo~ibdeno y cinc. Con-
cantidades declaradas de vitamina A, como equivalente
de retinol (C20H300); vitamina D, como colecalciferol
(C 27 H44 0) o ergocalciferol (C2aH440); vitamina E, como
alfa tocoferol (C29H5002), acetato de alfa tocoferilo
(C,1 Hs201), o succinato cido de alfa tocoferilo (C33Hs40s);
fitonadiona (C31 H4602); y beta ca roten o (CoHs6); no me-
nos de 90,0% y no ms de 160,0% de las cantida?es
declaradas de cromo (Cr), flor (F), yodo (1) y molibdeno
(Mo); y no menos de 90,0% y no ms de 125,0% de las
cantidades declaradas de hierro (Fe), magnesio (Mg),
manganeso (Mn) y cinc (Zn).
CONTENIDO
VITAMINA A
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano
Solucin estndar 1: 1 3 g/mL de retinol, a partir de
ER Acetato de Retinilo USP en n-hexano
Solucin estndar 2: 1 3 g/mL de retinol, a partir de
ER Palmitato de Retinilo USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
iguales de Solucin estndar 7 y Solucin estndar 2.
Solucin muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solucin Oral, equivalente a 3,25 mg de
retinol, a un embudo de separacin que contenga
1 O mL de agua y 20 mL de alcohol deshidratado. Agre-
gar 1 00 mL de n-hexano, tapar y agitar durante 1 mi-
nuto. Dejar que las capas se separen1 drenar I~ capa
acuosa en otro embudo de separac1on y repetir la ex-
traccin con 1 00 mL de n-hexano. Desechar la capa
acuosa y combinar los extractos de hexano. Lavar los
extr"actos combinados con 25 mL de agua, de1ar que las
capas se separen y desechar la capa acuosa. Filtrar la
capa de hexano lavada a avs de sulfato de sodio an-
hidro en un matraz volumetnco de 250 mL. En1uagar el
embudo y el sulfato de sodio con n-hexano y agregar el
enjuague a la solucin de hexan() en el rnatraL Diluir
los extractos en el matraz volumetnco con n-hexano a
volumen para obtener una solucin con una concentra-
6814 Vitaminas Oleosoluble~ / Suplementos Diettirns
cin de 13 g/rnl de vitarrnna A como retinol
(CmHrnO).
Sistema cromato9rfico
(Ver Crornatoarof10 1621 \. Aptitud rJp/ 'listPmn)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 ~tl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar 7 o Solucin estndar 2 y
Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C70H300), en la porcin de Solu-
cin Oral tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
ru = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
r, = rea del pico de la forna todo trans de ster
de retinilo de la Solucin estndar
correspondiente
Cs = concentracin de retinol en la Solucin
estndar correspondiente (g/ml)
Cu = concentracin nominal de Vitamina A, como
retino!, en la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina A como equivalente de retino!
(C20H300)
VITAMINA D
[NOTA-Cuando se especifique vitamina D (colecalciferol
o ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actinica durante todo este
procedimiento.J
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (99:1)
Solucin estndar: 2 g/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solucin estndar a 60 durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) en su precursor correspondiente.
Solucin madre de la muestra: Usando un volumen
medido con exactitud de Solucin Oral, equivalente a
5,0 mg de colecalciferol o ergocalciferol, proceder se-
gn se indica en Solucin muestra, en Vitamina A, para
obtener una solucin con una concentracin de 20 g/
ml de colecalciferol o ergocalciferol en n-hexano.
Solucin muestra: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
de la muestra a un recipiente con tapa de rosca con
recubrimiento interno de tefln. Calentar, agitando
constantemente, durante 1 hora en un bao de agua
mantenido a 60 para obtener una solucin que con-
tenga vitamina D (colecalciferol o ergocalciferol) y su
precursor correspondiente. Enfriar y diuir con n-hexano
hasta obtener una solucin que contenga 2 g/ml de
colecalciferol o ergocalciferol.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
USP 38
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mrn v 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucion de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma presente
de vitamina D y su precursor correspondiente
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cole-
calciferol (C21H440) o ergocalciferol (C28H440) en la
porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (ru/ r1) x ( Cs/ Cu) x F x 100
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(pg/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
F = factor de correccin que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de pre-
vitamina D presente en la Solucin muestra,
1,09
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44)
o ergocalciferol (CzsH440)
VITAMINA E
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Solucin de cido fosfrico (1 en 100) en
agua
Fase mvil: Metanol y Solucin A (19:1)
Solucin estndar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metanol
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solucin preparada segn se indica en Solucin muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vaco a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metanol a un matraz volu-
mtrico adecuado y diluir con metanol a volumen para
obtener una concentracin de 2 mg/ml de alfa tocofe-
rol, acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa
tocoferilo.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm < 15 cm; relleno Ll de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 1,5
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: 'lolurirn Pstndar y 'lolwin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de alfa
tocoferol (CNHso02), acetato de alfa tocoferilo
USP 38
(C 0 :Hs2i) o succinato cido de alfa tocoferilo
(C nHs40s) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado - (u/ r,) ,:_ ( C/ Cu) ,:_ 100
ru = rea del pico de la torma pertinente de
vitamina E de la Solucin muestra
ru = rea del pico de la forma pertinente de
vitamina E de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la forma
correspondiente de Vitamina E en la Solucin
muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
flTONADIONA (VITAMINA K,)
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metano! y agua (19:1)
Solucin madre del estndar: 200 g/ml de ER Fito-
nadiona USP en metanol. Disolver con ayuda de ultra-
sonido, si fuera necesario.
Solucin estndar: 20 g/ml de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solucin madre del estndar diluida con
metanol
Solucin de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 g/ml de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con metanol. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porcin de metanol, agregar la
Solucin madre del estndar y luego diluir con metanol a
volumen.]
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solucin preparada segn se indica en Solucin muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vaco a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metanol a un matraz volu-
mtrico adecuado y diluir con metanol a volumen para
obtener una concentracin de 20 g/ml de
fitonadiona.
Sistema cromato!;Jrfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solucin de aptitud del sistema
Desviacion estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (C11H4602) en la porcin de Solucin Oral
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
r,, = rea del pico de la Solucin muestra
rs rea del pico de la Solucin estndar
= Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
C5 = concentracin de ER Fitonadiona USP en la
Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de fitonadiona en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-1 50,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (Ci1 H4602)
Suplementos Dietticos /Vitaminas Oleosolubles 6815
BETA CAROTENO
[Nu r A-Usar material de vidrio con proteccin actnica.]
Fase mvil: Transferir 50 mg de butil hidroxitolueno a
Ufl fllalraL vulurnlricu Je l L y ui>ulver con 20 ml de
2 propano!. Agregar 0.2 ml de N etildiisopropilamina,
25 ml de solucin de acetato de amonio al 0,2%,
455 ml de acetonitrilo y aproximadamente 450 ml de
metano!. Dejar que la solucin alcance la temperatura
ambiente y diluir con metano! a volumen.
Diluyente: 50 g/ml de butil hidroxitolueno en alcohol
Solucin de aptitud del sistema: Transferir 20 mg de
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP a un ma-
traz volumtrico de 50 ml. Agregar 1 ml de agua, 4 ml
de tetrahidrofurano y someter a ultrasonido durante 5
minutos. Diluir con Diluyente a volumen y someter a
ultrasonido durante 5 minutos. Enfriar a temperatura
ambiente, pasar la suspensin a travs de un filtro de
membrana con un tamao de poro de 0,45 pm y usar
el filtrado transparente.
Solucin madre del estndar: 60 g/ml de ER Beta
Caroteno USP en tetrahidrofurano
Solucin estndar A: Transferir 5,0 ml de Solurin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 100 ml,
agregar 5,0 ml de tetrahidrofurano y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Determinar la concentracin de la Solucin estndar A a
partir de la concentracin de la Solucin estndar B,
segn se describe a continuacin.
Solucin estndar B: Transferir 5,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 100 ml y
diluir con ciclohexano a volumen. Preparar por
triplicado.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Longitud de onda analtica: 457 nm
Longitud de paso de celda: 1 cm
Blanco: Ciclohexano
Anlisis
Muestra: Solucin estndar B
Calcular la concentracin de beta caroteno total
(mg/ml) como la forma todo trans de beta caroteno
(C40Hs6) en la Solucin estndar B. [NOTA-La concen-
tracin de la Solucin estndar B es igual a la concen-
tracin de la Solucin estndar A.]
Resultado= A/F
A = absorbancia promedio de las tres
preparaciones de Solucin estndar B
F = absortividad de la forma todo trans de beta
caroteno puro en ciclohexano, 250
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solucin preparada segn se indica en Solucin muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vaco a temperatura ambiente hasta sequedad. Disolver
el residuo en una mezcla de cloruro de metileno y Dilu-
yente (1 :1 ), y diluir con la misma mezcla hasta obtener
una concentracin de 3 g/ml de beta caroteno. Pasar
a travs de un filtro de membrana con un tamao de
poro de 0,45 m, si fuera necesario.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 448 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L68 de 5 m
Temperatura de la columna: 30
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin es-
tndar A
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos aproximados
de los componentes en la Solucin de aptitud del sis-
tema se presentan en la Tabla 7.]
6816 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietticos
Tabla 1
Tiempo de Factor de
Retencin Respuesta
Relativo
Relativa
1
Forma todo 1rans de alta 0,93 1,1
caroteno - - --
Forma todo trans de be- 1,00 1 Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
ta caroteno
9-cis-Beta caroteno 1 07 1 tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
1 3-cis-Beta caroteno 1 17 12
15-cis-Beta caroteno 1 21 14
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin de aptitud del sistema es similar al cro-
matograma de referencia provisto con el lote de ER
Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre beta caroteno y
alfa caroteno; y entre beta caroteno y 9-cis-beta caro-
teno, Solucin de aptitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
beta caroteno, Solucin estndar A
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de beta caroteno en inyecciones repetidas, So-
lucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la forma todo trans de beta
caroteno en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solucin estndar A
Cs = concentracin de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solucin estndar A, segn se
determina mediante el procedimiento
espectromtrico
Cu = concentracin nominal de beta caroteno en la
Solucin muestra
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (CoHs6)
CROMO
Solucin estndar de cromo: 1000 g/ml de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secado a
120 durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
de polietileno.
Solucin madre del estndar: 1O g/ml de cromo, a
partir de Solucin estndar de cromo diluida con cido
clorhdrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estndar: Transferir 10,0 y 20,0 ml de Solu-
cin madre del estndar a sendos matraces volumtricos
de 100 ml, y transferir 1 5,0 y 20,0 ml de Solucin ma-
dre del estndar a sendos matraces volumtricos de
50 ml. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 g/ml
de cromo.
Solucin muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solucin Oral para obtener una solucin equi-
valente a 2,5 g/ml de cromo en cido clorhdrico
0,125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
USP 38
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Cromo, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Longitud _de onda analtica: Y::i/,9 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/ml de
cromo en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin de cromo en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de cromo en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
FLUORURO
[NOTA-Usar recipientes de plstico durante todo este
procedimiento.]
Solucin de cido ascrbico: 70 mg/ml de cido as-
crbico en agua
Fase mvil: Alcohol, agua y cido sulfrico 1 N
(50:449: 1)
Solucin madre del estndar: 220 g/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solucin contiene
100 9/ml de fluoruro.
Solucion estndar: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
del estndar a un matraz volumtrico de 100 ml. Agre-
gar 2 ml de Solucin de cido ascrbico, 1O ml de al-
cohol y aproximadamente 70 ml de agua, y mezclar.
Ajustar con hidrxido de sodio 1 N a un pH de 4,25
0,05. Diluir con agua a volumen y mezclar para obtener
una solucin de fluoruro de 5 g/ml.
Solucin muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solucin Oral, equivalente a 0,5 mg de
fluoruro, a un matraz volumtrico de 100 ml. Agregar
1 gota de cido clorhdrico, 1O ml de alcohol y aproxi-
madamente 75 ml de agua, y mezclar. Ajustar con hi-
drxido de sodio 1 N a un pH de 4,25 0,05. Diluir
con agua a volumen.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: De conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L1 7
Columna analtica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L1 7
Velocidad de flujo: 0,6 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de fluoruro. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de flor (F) en la por-
cin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( Cs/ Cu) x 100
ru = rea del pico de f!uoruro de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de fluoruro de la Solucin
'stndar
USP 38
C = ronrentracin de tluoruro en la Solucin
otnJur (~tg/rnl)
C,, = concentracin nominal de flor en la Solucin
11iue;tra (g/rnl)
Criterios de aceptacin: 90,oc?10- l 60,0% de la cantidad
declarada de fluor (F)
YODURO, Mtodo 7
Fase mvil: Disolver 5, 15 g de bromuro de tetrabutila-
monio en 320 ml de acetonitrilo. Diluir con agua hasta
2000 ml.
Solucin de aptitud del sistema: Transferir O, 1 3 g de
yoduro de potasio y 0,5 g de yodato de potasio a un
matraz volumtrico de 100 ml. Disolver en Fase mvil,
usando ultrasonido si fuera necesario, diluir con Fase
mvil a volumen y mezclar. Transferir 1,0 ml de esta
solucin a un matraz volumtrico de 100 ml, diluir con
Fase mvil a volumen y mezclar. Transferir 25,0 ml de
esta solucin a un matraz volumtrico de 100 ml y di-
luir con Fase mvil a volumen.
Solucin madre del estndar: 1, 3 mg/ml de yoduro
de potasio en Fase mvil. Esta solucin tiene una con-
centracin 1 mg/ml de yoduro.
Solucin estndar: 2,5 g/ml de yoduro, a partir de
Solucin madre del estndar en Fase mvil
Solucin muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solucin Oral para obtener una solucin con
una concentracin de 2,5 g/ml de yodo en Fase mvil.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 225 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno Ll
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 30 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin
estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para yodato
y yoduro son aproximadamente O, 32 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 2,5 entre yodato y yoduro,
Solucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de yoduro, Solucin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C1/Cu) x 100
ru = rea del pico de yoduro de la Solucin muestra
rs = rea del pico de yoduro de la Solucin
estndar
C = concentracin de yoduro en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de yodo en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
YODURO, Mtodo 2
Anlisis: Proceder segn se indica en Mtodos Automati-
zados de Anlisis (1 6), Valoracin de Yoduro.
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
HIERRO
Solucin madre del estndar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumtrico de
1 000 ml. Disolver en cido clorhdrico 6 N y diluir con
agua a volumen.
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solucin madre del estndar de hierro a sen-
dos matraces volumtricos de 100 ml. Diluir el conte-
Suplementos Oietticn~ / Vit;imina<; Oleosolubles 6817
nido de cada matraz con cido clorhdrico O, 125 N a
volumen para obtener concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0;
6,0 y 8,0 g/ml de hierro.
Solucin muestra: 6 g/ml de hierro, a partir de Solu-
cin Or;I en cido clorhdrico 0.125 N
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometria y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Lmpara: Hierro, de ctodo hueco
llama: Aire-acetileno
longitud ,de onda analtica: 248,3 nm
Blanco: Acido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
hierro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin de hierro en la Solucin muestra
a partir de la grfica (g/mL)
Cu = concentracin nominal de hierro en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%--125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
MAGNESIO
Solucin estndar de magnesio: Transferir 1,00 g de
cinta de magnesio a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en 50 ml de cido clorhdrico 6 N y
diluir con agua a volumen.
Solucin madre del estndar: 20 g/ml de magnesio,
a partir de Solucin estndar de magnesio en cido clor-
hdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 7,5; 1 0,0; 12,5 y
15,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir con cido clorhdrico
O, 125 N a volumen para obtener concentraciones de
1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 g/ml de magnesio.
Solucin muestra: 2,5 g/ml de magnesio, a partir de
Solucin Oral en cido clorhdrico O, 125 N
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: 285,2 nm
Lmpara: Magnesio, de ctodo hueco
llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
magnesio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mag-
nesio (Mg) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin de magnesio en la Solucin
muestra a partir de la grfica (g/ml)
e,, = concentracin nominal de magnesio en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de magnesio (Mg)
6818 Vitaminas Oleosolubles / Supfpmmtns Dietticos
MANGANESO
Solucin e~tndar de manganeso: Transferir 1,0 g de
manganeso a un matraz volumtrico de 1000 ml. Di-
solver en 20 mi rlP rirln ntrico y diluir con cido clor
hdrico 6 N a volumen.
Solucion madre del e~tndar: 50 g/ml de manga-
ne~o, a partir de Solucin madre del estndar de manga-
neso en cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones conocidas de
0,5; 0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 g/ml de manganeso.
Solucin muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de la Solucin Oral para obtener 1,5 g/ml de
manganeso en cido clorhdrico O, 125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: 279,5 nm
Lmpara: Manganeso, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 1 25 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/ml,
de manganeso en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de man-
ganeso (Mn) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin de manganeso en la Solucin
muestra a partir de la grfica (g/ml)
Cu = concentracin nominal de manganeso en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
MOLIBDENO
Solucin estndar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumtrico de
1000 ml y disolver en 50 ml de cido ntrico, enti-
biando si fuera necesario. Diluir con agua a volumen.
Solucin madre del estndar: 1 00 g/ml de molib-
deno, a partir de Solucin estndar de molibdeno en
agua
Soluciones estndar: Transferir 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
3,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Agregar cido clorhdrico
O, 125 N a volumen y mezclar para obtener soluciones
con concentraciones conocidas de aproximadamente
0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 3,0 g/ml de molibdeno.
Solucin muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solucin Oral hasta obtener 1,5 g/ml de mo-
libdeno, a partir de Solucin Oral, en cido clorhdrico
O, 125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: 313,3 nm
Lmpara:, Molibdeno, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
USP 38
los cinco puntos graficados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la LOIJCenlrclCn, C, en g/ml,
de molibdeno en la Solucion muestra.
CalculJr el porcentaje de la cantiddd ueciarada de mo-
lihrleno (Mo) en !a porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentracin de molibdeno en la Solucin
muestra a partir de la grfica (g/ml)
Cu = concentracin nominal de molibdeno en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
CINC
Solucin estndar de cinc: Transferir 311 mg de xido
de cinc a un matraz volumtrico de 250 ml y agregar
80 ml de cido clorhdrico 6 N, entibiando, si fuera ne-
cesario hasta disolver. Enfriar, diluir con agua a volumen
y mezclar para obtener una solucin con una concen-
tracin conocida de 1 000 g/ml de cinc.
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de cinc, a
partir de Solucin estndar de cinc en cido clorhdrico
O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 1 00 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico 0, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 g/
ml de cinc.
Solucin muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solucin Oral hasta obtener 1,5 g/ml de cinc
en cido clorhdrico O, 125 N.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: 21 3,8 nm
Lmpara: Cinc, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 1 25 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los cinco
puntos graficados. A partir de la grfica as obtenida,
determinar la concentracin, C, en g/ml, de cinc en
la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin de cinc en la Solucin muestra a
partir de la grfica (g/ml)
Cu = concentracin nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
OTROS COMPONENTES
DETERMINACIN DE ALCOHOL, Mtodo I (611) (si estuviera
presente): 90,0%-120,0% de la cantidad declarada de
C2HsOH
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/ml, y el recuento total combinado de hongos fila-
mentosos y levaduras no excede de 3 x 10 2 ufc/ml.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECFICOS \2022):
Cumple con los requisitos de las pruebas para determinar
la ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli.
lJSP ')8
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Comervar en envases im-
permeables y resistentes a la luz, bajo gas inerte o con
una cmara gaseosa superior mnima.
ETIQUETADO:' 1a PtiqtiPta inrliril que el prorlurto es So!u
cin Oral de Vitaminas Oleosolubles con Minerales. La
etiqueta indica la cantidad de cada vitamina y mineral en
un volumen dado de Solucin Oral y, cuando sea necesa-
rio, la forma qumica de vitamina presente e indica ade-
ms la forma salina del mineral usado como la fuente de
cada elemento. Cuando el producto contiene vitamina E,
la etiqueta indica si se trata de la forma do di. Cuando
se proporciona ms de un mtodo de valoracin para un
mineral en particular, el etiquetado indica el mtodo de
valoracin con el que cumple el producto, nicamente si
no se usa el Mtodo 7.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato cido de Alfa Tocoferilo USP
ER Beta Caroteno USP
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
ER Fitonadiona USP
ER Acetato de Retinilo USP
ER Palmitato de Retinilo USP
ER Fluoruro de Sodio USP
Vitaminas Oleosolubles con Minerales,
Tabletas
DEFINICIN
Las Tabletas de Vitaminas Oleosolubles con Minerales contie-
nen dos o ms de las siguientes vitaminas oleosolubles:
Vitamina A, como retino! o steres de retinol en forma de
acetato de retinilo o palmitato de retinilo; Vitamina D,
como ergocalciferol (Vitamina D2) o colecalciferol (Vita-
mina D 3); Vitamina E, como alfa tocoferol, acetato de alfa
tocoferilo o succinato cido de alfa tocoferilo; Fitonadiona
(Vitamina K,); beta caroteno; y uno o ms minerales deri-
vados de sustancias generalmente reconocidas como se-
guras, que proporcionan uno o ms de los siguientes ele-
mentos en su forma ionizable: boro, calcio, cromo, cobre,
flor, yodo, hierro, magnesio, manganeso, molibdeno, n-
quel, fsforo, potasio, selenio, estao, vanadio y cinc. Las
Tabletas contienen no menos de 90,0% y no ms de
165,0% de las cantidades declaradas de vitamina A, como
equivalente de retinol (C20H100); vitamina D, como cole-
calciferol (C21H440) o ergocalciferol (C28H440); vitamina E,
como alfa tocoferol (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo
(C11Hs20,), o succinato cido de alfa tocoferilo (C33Hs40s);
1 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes,
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina t se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami-
nas se han discontinuado; no obstante, cont1mia el uso de UI en las etiquetas
de los productos de vitaminas. Cuando los artculos se etiquetan en trminos
de Unidades adems del etiquetado requerido, la 1elacion de las Unidades
USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP de Vitamina
A= 0,3 rg de todo trans retinol (alcohol de vitamina A) o 0,344 g de todo
tram acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 r1g de todo trans
palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 rg de retino! (3,3 Unida-
des USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retinol (RE); 1 LJI de beta caroteno
= 0,6 ,ug de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vitamina O =
0,025 r1g de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocoferol = 1, 1
antiguas Unidades USP de Vitamina F, 1 mg rle acetato rle di-alfa tornferilo =
1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato cido de di-alfa
tocoferilo ~ 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina e, 1 mg de d-alfa toco-
ferol = 1,49 antiguas Unidades USP rle Vitamina E, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitarnin<1 e y 1 rng de succinato
cido de el-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina L en
trminos de equivalentes de el-alfa tocoferol, 1 mg de acetato de d-alfa toco-
ferilo = O, 91, 1 mg de succinato cido de d-alfa tocoferilo = 0,81, 1 mg de el/-
alfa tocoferol = 0,74, 1 mg de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67, y 1 mg de
succinato cido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
Suplementos Dictcticos / Vit.:imin.:is Olcosolublcs 6819
fitonadiona (C1H ,,,O,); y beta caroteno (C,,,Hsb); no me-
nos de 90,0% y no ms de 125,0% Lle lds cd11tiudc.les
declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe), magne-
sio (Ms), flld11ya11esu (iv111), fsu1u (P), potasio (K) y cinc
(Zn); y no menos de 90.0% v no ms de 160,0'Yo de las
cantidades declaradas de boro (B), cromo (Cr), flor (F),
yodo (1), molibdeno (Mo), nquel (Ni), selenio (Se), estao
(Sn) y vanadio (V).
Pueden contener otras sustancias agregadas declaradas ge-
neralmente reconocidas como seguras, en cantidades
inobjetables.
CONTENIDO
VITAMINA A
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano
Solucin estndar 1: 1 3 g/mL de retinol, a partir de
ER Acetato de Retinilo USP en n-hexano
Solucin estndar 2: 1 3 g/mL de retinol, a partir de
ER Palmitato de Retinilo USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
iguales de Solucin estndar 7 y Solucin estandar 2.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Agregar 15 mL de agua a una porcin del
polvo, equivalente a 5 Tabletas, y someter a ultrasonido
durante 5 minutos. Agregar 15 mL de n-hexano y agitar
durante 15 minutos en un bao de agua mantenido a
60. Agregar 1 O mL de dimetil sulfxido y agitar du-
rante 30 minutos adicionales en un bao de agua man-
tenido a 60. Centrifugar a 3000 rpm durante 1 O minu-
tos y transferir la capa de hexano con una pipeta a un
matraz volumtrico de 100 mL. Agregar 15 mL de n-
hexano a la capa de dimetil sulfxido, agitar minuciosa-
mente durante 5 minutos y transferir la capa de hexano
con una pipeta a un matraz volumtrico de 1 00 ml.
Repetir esta extraccin con tres porciones adicionales de
15 mL de n-hexano. Diluir los extractos en el matraz
volumtrico con n-hexano a volumen. Diluir adicional-
mente esta solucin con n-hexano hasta obtener una
solucin con una concentracin equivalente a 1 3 g/mL
de retinol (C20H100).
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Si:,tema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar 7 o Solucin estndar 2 y
Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C20HrnO), en la porcin de Ta-
bletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) x 100
r,, = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
r, = rea del pico de la forna todo trans de ster
de retinilo de ia Solucin estndar
correspondiente
C. = concentracin rle retinol en la Solucin
estndar correspondiente (g/mL)
Cu = concentracin nominal de Vitamina A, como
retinol, en la Solucin muestra (g/mL)
6820 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietticos
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitJminJ A como equivalente Je retino!
(C?oHioO)
VITAMINA D
fNOTA-Cuando 5f' P\pPrifirp1P vitamina D (co!ecalciferol
o ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actnica durante todo este
procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (99:1)
Solucin estndar: 2 g/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solucin estndar a 60 durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solucin preparada segn se indica en Solucin muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar, si
fuera necesario, al vaco a temperatura ambiente hasta
obtener una concentracin de 2 g/ml de colecalciferol
o ergocalciferol.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno LB de 3 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma presente
de vitamina D y su precursor correspondiente
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cole-
calciferol (C21H44) o ergocalciferol (C2sH44) en la
porcin de Tabletas tomada:
Resultado~ (ru/rJ (C/C,) x Fx 100
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
C1 = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(g/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
F = factor de correccin que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de pre-
vitamina D presente en la Solucin muestra,
1,09
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44)
o ergocalciferol (C2sH44)
VITAMINA E
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Solucin de cido fosfrico en agua (1 en
100)
Fase mvil: Metano! y Solucin A (19: 1)
Solucin estndar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metanol
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solucin preparada segn se indica en Solucin muestra,
USP 38
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vaco a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metano! a un matraz volu-
mtrico adecuado y dduir con metano! a volumen para
obtener una concentracin Je 2 rng/mL de alfa tocofe-
rol, acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa
tocoferilo.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 50 ~tl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Factor de asimetra: No ms de 1,5
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de alfa
tocoferol (C29H:,o02), acetato de alfa tocoferilo
(Ci1 Hs20i) o succinato cido de alfa tocoferilo
(Ci1Hs4s) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin muestra
ru = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin estndar
Cs = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la forma
correspondiente de Vitamina E en la Solucin
muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E
FITONADIONA (VITAMINA K,)
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metano! y agua (19: 1)
Solucin madre del estndar: 200 g/ml de ER Fito-
nadiona USP en metano!. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solucin estndar: 20 g/ml de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solucin madre del estndar diluida con
metanol
Solucin de aptitud del sistema: 0,65 mg/ml de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 g/ml de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con metano!. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una porcin de metanol, agregar la
Solucin madre del estndar y luego diluir con metanol a
volumen.]
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 ml de la
solucin preparada segn se indica en Solucin muestra,
en Vitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vaco a temperatura ambiente hasta sequedad. Transfe-
rir el residuo con ayuda de metano! a un matraz volu-
mtrico adecuado y diluir con metanol a volumen para
obtener una concentracin de 20 g/ml de
fitonadiona.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
USP 38
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 5 entre ;:icetato de alfa to-
coferilo y fiton;:idiona, Solucin de aptitud del sistema
Desviacion estndar relativa: No ms de 3 0% Solu-
cin estndar ' '
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fito-
nadiona (Ci1H4602) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la Solucin estndar
C = concentracin de ER Fitonadiona USP en la
Solucin estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de fitonadiona en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C31 H4602)
BETA (AROTENO
[NOTA-,Usar material de vidrio con proteccin actnica.]
Fase movil: Transferir 50 mg de butil hidroxitolueno a
un matraz volumtrico de 1 L y disolver con 20 mL de
2-propanol. Agregar 0,2 mL de N-etildiisopropilamina
25 mL de solucin de acetato de amonio al 0,2%, ' Forma todo trans de alfa caroteno
455 mL de acetonitrilo y aproximadamente 450 mL de
metanol. Dejar que la solucin alcance la temperatura
ambiente y diluir con metanol a volumen.
Diluyente: 50 g/mL de butil hidroxitolueno en alcohol
Solucin de aptitud del sistema: Transferir 20 mg de
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP a un ma-
traz volumtrico de 50 ml. Agregar 1 mL de agua, 4 mL
de tetrahidrofurano y someter a ultrasonido durante 5
minutos.- Diluir con Diluyente a volumen y someter a
ultrasonido durante 5 minutos. Enfriar a temperatura
ambiente, pasar la suspensin a travs de un filtro de
me~brana con un tamao de poro de 0,45 m y usar
el filtrado transparente.
Solucin madre del estndar: 60 g/mL de ER Beta
Caroteno USP en tetrahidrofurano
Solucin estndar A: Transferir 5,0 mL de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 100 mL,
agregar 5,0 mL de tetrahidrofurano y diluir con Dilu-
yente a volumen.
Determinar la concentracin de la Solucin estndar A a
partir de la concentracin de la Solucin estndar 8,
segn se indica a continuacin.
Solucin estndar B: Transferir 5,0 mL de Solucin ma-
dre del estndar a un matraz volumtrico de 100 mL y
diluir con ciclohexano a volumen. Preparar por
triplicado.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Longitud de onda analtica: 457 nm
Longitud de paso de celda: 1 cm
Blanco: Ciclohexano
Anlisis
Muestra: Solucin estndar B
Calcular la concentracin de beta caroteno total
(mg/mL) como la forma todo trans de beta caroteno
(C40Hs6) en la Solucin estndar B. [NOTA-La concen-
tracin de la Solucin estndar B es igual a la concen-
tracin de la Solucin estndar A.]
Resultado = Al F
A = absorbancia promedio de las tres
preparaciones de Solucin estndar B
F = absortividad de la forma todo trans de beta
caroteno puro en ciclohexano, 250
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 mL de la
solucin preparada segn se indica en Solucin muestra,
en Yitamina A, a un recipiente adecuado y evaporar al
vac10 a temperatura ambiente hasta sequedad. Disolver
SuplPmPntos Dieteticos /Vitaminas Oleosolubles 6821
el residuo en una mezcla de cloruro de metileno y Dilu-
yente (1 :1 ), y diluir con la misma me?Cla hasta obtener
una concentracin de 3 ~tg/mL de beta caroteno. Pasar
a travs de un filtro rle nlPmhrana ron un tamao de
poro de 0,45 m, si fuera necesario.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV-Vis 448 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L68 de 5 m
Temperatura de la columna: 30
Velocidad de flujo: 0,6 mL/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin es-
tndar A
Los tiempos de retencin relativos aproximados de los
componentes en la Solucin de aptitud del sistema se
presentan en la Tabla 7.
Tabla 1
Tiempo de Factor de
Retencin Respuesta
Nombre Relativo Relativa
o 93 11
__l9rma todo trans de beta caroteno 1 00 1
1
9-cis-Beta caroteno 1 07
1 3-cis-Beta caroteno 1 17 12
15-cis-Beta caroteno 1 21 14
Requisitos de aptitud
Similitud de los cromatogramas: El cromatograma
de la Solucin de aptitud del sistema es similar al cro-
matograma de referencia provisto con el ER Aptitud
del Sistema de Beta Caroteno USP usado.
Resolucin: No menos de 1,5 entre beta caroteno y
alfa caroteno; y entre beta caroteno y 9-cis-beta caro-
teno, Solucin de aptitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para el pico de
beta caroteno, Solucin estndar A
Desv.iacin estndar relativa: No ms de 2,0% para
el pico de beta caroteno en inyecciones repetidas, So-
lucin estndar A
Anlisis
Muestras: Solucin estndar A y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la forma todo trans de beta
caroteno en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (ru! rs) x ( C/ Cu) x 1 00
ru = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de beta
caroteno de la Solucin estndar A
e = concentracin de la forma todo trans de beta
caroteno en la Solucin estndar A, segn se
determina mediante el procedimiento
espectromtrico
Cu = concentracin nominal de beta caroteno en la
Solucin muestra
Criterios de aceptacin: 90,0%-1 65,0% de la cantidad
declarada de beta caroteno (CoHs,,)
CALCIO, Mtodo 7
Solucin de cloruro de lantano: 267 mg/mL de clo-
ruro de lantano heptahidrato en cido clorhdrico O, 125
N
Solucin estndar de calcio: 400 g/mL de calcio. Di-
solver 1,001 g de carbonato de calcio, previamente se-
cados a 300' durante 3 horas y enfriados en un deseca-
dor durante 2 horas, en 25 ml de cido clorhdrico 1 N.
Calentar a ebullicin hasta expulsar el dixido de car-
bono y diluir con agua hasta 1 000 mL.
6822 Vitaminas Olemolubles / Suplementos Dietticos
Solucin madre del estndar: 100 g/mL de calcio, a
partir de Solucin estndar de wlcio diluida con cido
clorh1drico O, 125 N
Soluciones estndar: Pipetear y transferir 1,0; 1,5; ?,O;
2,5 y 3,0 mi de Solucin madre del estndar a sendos
111JlrdU:'~ voiumtricos de i 00 ml. Agregar a cada ma-
traz 1,0 mL de Solucin de cloruro de lantano y diluir
con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para obtener
concentraciones de 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y 3,0 g/mL de
calcio.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
lente a 5 Tabletas, a un crisol de porcelana. Calentar el
crisol en una mufla mantenida a 550 durante 6-12
horas y enfriar. Agregar 60 mL de cido clorhdrico y
calentar a ebullicin suave sobre una placa de calenta-
miento o un bao de vapor durante 30 minutos, enjua-
gando intermitentemente la superficie interna del crisol
con cido clorhdrico 6 N. Enfriar y transferir cuantitati-
vamente el contenido del crisol a un matraz volum-
trico de 100 mL. Enjuagar el crisol con porciones pe-
queas de cido clorhdrico 6 N y agregar los enjuagues
al matraz. Diluir con agua a volumen y filtrar, dese-
chando los primeros 5 mL del filtrado. Diluir esta solu-
cin cuantitativamente con cido clorhdrico O, 125 N
para obtener una concentracin de 2 g/mL de calcio,
agregando 1 mL de Solucin de cloruro de lantano por
100 mL del volumen final.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cal-
cio a 422,7 nm
Lmpara:, Calcio, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 mL
de Solucin de cloruro de lantano por 1 00 mL
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de calcio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/ml, de
calcio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de calcio
(Ca) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de calcio en la Solucin
muestra (9/mL)
Cu = concentracion nominal de calcio en la Solucin
muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de calcio (Ca)
CROMO, Mtodo 7
Solucin estndar de cromo: 1000 g/ml de cromo, a
partir de dicromato de potasio, previamente secados a
120" durante 4 horas, en agua. Almacenar en un frasco
de polietileno.
Solucin madre del estndar: 1 O g/mL de cromo, a
partir de Solucin estndar de cromo diluida con cido
clorhdrico 6 N y agua (1 en 20)
Soluciones estndar: Transferir 10,0 y 20,0 mL de Solu-
cin rnadre del estndar a sendos matraces volumtricos
de 100 mL, y transferir 15,0 y 20,0 mL de Solucin ma-
dre del e'itiinrlar n sendos matraces volumtricos de
50 mL. Diluir el contenido de cada uno de los cuatro
matraces con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 g/mL
de cromo.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
lv1todo 1, excepto que se debe preparar la Solucin
USP 38
muestra para que contenga 2,5 g/mL de cromo y omi-
tiendo el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotomctra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: EspectrofotomPtra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
cromo a 357,9 nm
Lmpara: Cromo, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cromo y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cuatro puntos graficados. A partir de la grfica as ob-
tenida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
cromo en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cromo (Cr) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentracin medida de cromo en la Solucin
muestra (9/mL)
Cu = concentracion nominal de cromo en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de cromo (Cr)
COBRE, Mtodo 7
Solucin estndar de cobre: Disolver 1,00 g de lmina
de cobre en un volumen mnimo de una solucin de
cido ntrico al 50% y diluir con una solucin de cido
ntrico al 1 % hasta 1000 mL. Esta solucin contiene
1000 g/mL de cobre.
Solucin madre del estndar: 100 g/mL de cobre, a
partir de Solucin estndar de cobre diluida con cido
clorhdrico 0, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 4,0; 6,0 y
8,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 200 ml. Diluir con cido clorhdrico
O, 125 N a volumen para obtener concentraciones de
0,5; 1,0; 2,0; 3,0 y 4,0 g/mL de cobre.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 2 g/mL de cobre y omi-
tiendo el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de co-
bre a 324,7 nm
Lmpara: Cobre, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de cobre y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en g/mL, de
cobre en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cobre
(Cu) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (C/Cu) x 100
c = concentracin medida de cobre en la Solu<in
muestra (9/mL)
Cu = concentracion nominal de cobre en la Solucin
muestra (g/mL)
USP 38
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cobre (Cu)
FLUORURO Metodo 7
[Nu1A-AlmctLe1tct1 Ludct> lct> :>uluciones en envases de
rl<stico.]
Solucin de acetato de sodio 3 M: Disolver 408 g de
acetato de sodio en 600 ml de agua contenida en un
matraz volumtrico de 1000 ml. Dejar que la solucin
se equilibre ct temperatura ambiente y diluir con agua a
volumen. Ajustar con unas pocas gotas de cido actico
a un pH de 7,0.
Solucin de citrato de sodio: Disolver 222 g de citrato
de sodio en 250 ml de agua en un matraz volumtrico
de 1 000 ml. Agregar 28 ml de cido perclrico y diluir
con agua a volumen.
Solucion madre del estndar de fluoruro: 500 g/ml
de fluoruro, a partir de una cantidad de fluoruro de
sodio en agua, previamente secados a 1 00 durante 4
horas y enfriados en un desecador
Solucin madre intermedia A: 1 00 g/ml de fluoruro,
a partir de Solucin madre del estndar de fluoruro di-
luida con agua
Solucin madre intermedia B: 1 O g/ml de fluoruro, a
partir de Solucin madre del estndar de fluoruro diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 3,0; 5,0 y 1 0,0 ml de
Solucin madre intermedia B, y 5,0 y 10,0 ml de Solucin
madre intermedia A a cinco matraces volumtricos de
100 ml distintos. Agregar a cada matraz 10,0 ml de
cido clorhdrico 1 N, 25 ml de Solucin de acetato de
sodio 3 M y 25,0 ml de Solucin de citrato de sodio. Di-
luir el contenido de cada matraz con agua a volumen
para obtener concentraciones de 0,3; 0,5; 1,0; 5,0 y
1 0,0 g/ml de fluoruro.
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a 200 g de fluo-
ruro, a un matraz volumtrico de 1 00 ml. Agregar
1 0,0 ml de cido clorhdrico 1 N, 25,0 ml de Solucin
de acetato de sodio 3 M y 25,0 ml de Solucin de citrato
de sodio, y diluir con agua a volumen.
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Transferir 50,0 ml de las Soluciones estndar y de la So-
lucin muestra a sendos vasos de precipitados de pls-
tico, que contengan una barra mezcladora recubierta
de plstico. Medir los potenciales (ver pH (791 )), en
mV, de las Soluciones estndar y la Solucin muestra,
con un medidor de pH capaz de una reproducibilidad
mnima de 0,2 mV y equipado con un electrodo
indicador especfico para in fluoruro y un electrodo
de referencia de calomel. [NOTA-Al tomar las medicio-
nes, sumergir los electrodos en la solucin, mezclar en
un agitador magntico con su parte superior aislada
hasta que se logre el equilibrio (1-2 minutos) y regis-
trar el potencial. Enjuagar y secar los electrodos entre
mediciones, procurando evitar que se dae el cristal
del electrodo especfico para in fluoruro.]
Graficar los logaritmos de las concentraciones de fluo-
ruro, en pg/ml, de las Soluciones estndar en funcin
del potencial, en mV. A partir de la curva de respuesta
estndar as obtenida y el potencial medido de la Solu-
cin muestra, determinar la concentracin, C, en
~tg/ml, de fluoruro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de flor
(F) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de tluoruro en la
Solucin muestra (g/ml)
e,, ~ concentr.:icin nominal de flor en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,00Jri de la cantidad
declarada de fluor (F)
Suplementos [Jfpteticm .1 Vitamina<; Oleosolubles 6823
fLUORURO Metodo 2
[NOTA- Usar recipientes de pl<stico y agua desionizada
durante todo este procedimiento.]
Solucin amortiguadora de pH 10,0: .Agregar 214 mi
rle hidrxirlo de sodio 0.1 N a 1 000 ml de bicarbonato
de sodio 0,05 M.
Fase mvil: Alcohol, cido sulfrico O, 1 N y agua
(20:5:1 75)
Solucin madre del estndar: 220 g/ml de ER Fluo-
ruro de Sodio USP en agua. Esta solucin contiene
1 00 9/ml de fluoruro.
Solucion estndar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extraccin de fase slida especificada para su uso en la
Solucin estndar y la Solucin muestra de la siguiente
manera. Usando vaco a una presin que no exceda de
5 mm de mercurio, lavar la columna con un volumen
de columna de metano! seguido de un volumen de co-
lumna de Solucin amortiguadora de pH 7O, O. No dejar
que la parte superior de la columna se seque. Si la
parte superior de la columna se seca, reacondictonar la
columna.] Transferir 1 0,0 ml de Solucin madre del es-
tndar a un matraz volumtrico de 100 ml. Agregar
75 ml de agua y ajustar con hidrxido de sodio O, l N
a un pH de 1 0,4 O, 1. Diluir con agua a volumen.
Filtrar, desechando los primeros 15 ml del filtrado.
Transferir 25,0 ml del filtrado a un matraz volumtrico
de 50 ml, agregar 15,0 ml de agua y ajustar con hidr-
xido de sodio 0, l N a un pH de 1 0,0. Diluir con Solu-
cin amortiguadora de pH 70,0 a volumen. Eluir una
porcin de esta solucion a travs de una columna de
extraccin de fase slida de 3 ml, que contenga relleno
L1, la cual se conecta a travs de un adaptador a una
segunda columna de extraccin de fase slida que con-
tenga relleno de intercambio catinico fuerte de sulfo-
nilpropilo. Desechar los primeros 3 ml del eluato y re-
coger el resto del eluato en un matraz adecuado para
inyectar en el cromatgrafo.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
20 Tabletas. Transferir una porcin de Tabletas reduci-
das a polvo, equivalente a 1 mg de flor, a 15 ml de
agua y agitar vigorosamente. Enjuagar las paredes del
matraz con 1 5 ml de agua y dejar en reposo durante
1 O minutos. Diluir con agua hasta 85 mL, ajustar con
hidrxido de sodio 1 N a un pH de 10,4 O, l y diluir
con agua hasta 1 00 ml. Proceder segn se indica en
Solucin estndar, comenzando donde dice "Filtrar, des-
echando los primeros 15 mL del filtrado".
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: De conductividad
Columnas
Guarda columna: 4,6 mm x 3 cm; relleno L1 7
Columna analtica: 7,8 mm x 30 cm; relleno L1 7
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 p l_
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Soluuon estndur y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de fluoruro. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de flor (F) en la por-
cin de Tabletas tornadct:
Resultado= (r,,/r'-) x (C/C,,) x 100
= rea del pico de la Solucin muestra
= rea del pico de la Solucin estndar
= concpntr;icin rle fltmruro en la Solucin
estandar (pg/ml)
= concentracin nominal de flor en la Solucin
muestra (~tg/ml)
6824 Vitaminas Oleosolubles ./ SuplPmPntos Oiptticos
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
rlPriararia rie fluor (~)
YODURO, Mtodo 7
Agua de bromo: A<JrP<J<ir 1 00 mL de Jgua a 20 ml de
bromo en un frasco con tapn de vidrio. Tapar el frasco
y agitar. Dejar en repmo durante 30 minutos y usar el
sobrenadante.
Anlisis
Muestra: Tabletas
Transferir una cantidad de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a 3 mg de yoduro, a un crisol de
nquel. Agregar 5 g de carbonato de sodio, 5 ml de
solucin de hidrxido de sodio al 50% (p/v) y 1 O ml
de alcohol, procurando humedecer toda la muestra.
Calentar el crisol en un bao de vapor hasta evaporar
el alcohol, luego secar el crisol a 100 durante 30 mi-
nutos para evitar salpicaduras durante el calentamiento
subsiguiente. Transferir el crisol con su contenido a un
horno calentado a 500 y calentar el crisol durante 15
minutos. [NOTA-Es necesario calentar a 500 para car-
bonizar toda la materia orgnica presente; se puede
usar una temperatura ms alta, si fuera necesario, para
asegurar la carbonizacin completa de toda la materia
orgnica.]
Enfriar el crisol, agregar 25 ml de agua, cubrir el crisol
con un vidrio de reloj y calentar a ebullicin suave
durante 1 O minutos. Filtrar la solucin y lavar el crisol
con agua hirviendo, recogiendo el filtrado y los lava-
dos en un vaso de precipitados. Agregar cido fosf-
rico hasta que la solucin sea neutra frente al anaran-
jado de metilo y luego agregar 1 ml de cido fosfrico
en exceso. Agregar un exceso de Agua de bromo y
calentar la solucin a ebullicin suave hasta que se
torne incolora y luego durante 5 minutos ms. Agre-
gar unos pocos cristales de cido saliclico y enfriar la
solucin a 20. Agregar 1 ml de cido fosfrico y
0,5 g de yoduro de potasio, y valorar el yodo liberado
con tiosulfato de sodio 0,005 N SV, agregando almi-
dn SR cuando el color del yodo liberado haya desa-
parecido casi por complet:i.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de yodo
(1) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= V x NA x F x I,,"' x (Aw!\!V) x (100/L)
V = volumen de tiosulfato de sodio consumido
(ml)
NA = normalidad real de la solucin de tiosulfato de
sodio usada
F = factor de correccin para convertir mg en g,
1000 g/ml
lmc = miliequivalente de 1; 21, 16 mg/meq
Aw = peso promedio de las Tabletas
W = peso de la porcin de Tabletas tomado
L = cantidad declarada de yodo (g/Tableta)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
YODURO, Mtodo 2
Anlisis: Proceder segn se indica en Mtodos Automati-
zados de Anlisis (16), Valoracin de Yoduro.
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de yodo (1)
HIERRO, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de hierro: Transferir
100 mg de polvo de hierro a un matraz volumtrico de
1000 mL. Disolver en 25 ml de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen y mezclar.
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 4,0; 5,0; 6,0 y
8,0 ml de Solucin madre del estndar de hierro a sen-
dos matraces volumtricos de 100 ml. Diluir el conte-
nido de cada matraz con cido clorhdrirn O, 125 N a
volumen para obtener concentraciones de 2,0; 4,0; 5,0;
6,0 y 8,0 pg/ml de hierro.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
USP 38
muestra para que contenga 5 pg/ml de hierro y omi-
tiendo el uso de la Sulucin de cloruro de lantano .
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometia y Dispe1sH.J11 de LuL (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
hierro a 248, 3 nrn
Lmpara: Hierro, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en .ug/rnl,
de hierro y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, C, en pg/ml, de
hierro en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
hierro (Fe) en la porcin de Tabletas tornada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de hierro en la Solucin
muestra (9/ml)
Cu = concentracion nominal de hierro en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de hierro (Fe)
MAGNESIO Mtodo 7
Solucin de cloruro de lantano: Preparar segn se in-
dica en Calcio, Mtodo 7.
Solucin estndar de magnesio: Transferir 1,0 g de
cinta de magnesio a un matraz volumtrico de
1000 ml, disolver en 50 ml de cido clorhdrico 6 N,
diluir con agua a volumen, y mezclar para obtener una
solucin con una concentracin conocida de 1000 pg/
rnl de magnesio.
Solucin madre del estndar: 20 pg/ml de magnesio,
a partir de Solucin estndar de magnesio diluida con
cido clorhdrico 0, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 y
3,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 1 00 ml. Agregar a cada matraz
1,0 ml de Solucin de cloruro de lantano y diluir con
cido clorhdrico O, 125 N a volumen para obtener con-
centraciones de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 y 0,6 g/ml de
magnesio.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 0,4 g/ml de magnesio.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotornetra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
magnesio a 285,2 nm
Lmpara: Magnesio, de ctodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N que contenga 1 ml
de Solucin de cloruro de lantano por 100 ml
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin dP sus concentraciones, en g/ml,
de magnesio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, determinar la concentracin, e, en g/ml, de
magnesio en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mag-
nesio (Mg) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = ((/(,,) x 100
USP 38
C = concentracin medida de magnesio en la
Solucin muestra (rig/mL)
Cu = concentracin nominal de magnesio en la
Solucin muestrn (g/mL)
Criterios de aceptacin: G0,00/n- 12\0% de la ranticfarl
declarada de magnesio (Mg)
MANGANESO Mtodo 7
Solucin madre del estndar de manganeso: Transfe-
rir 1,00 g de manganeso a un matraz volumtrico de
1000 ml. Disolver en 20 mL de cido ntrico, diluir con
cido clorhdrico 6 N a volumen y mezclar para obtener
una solucin con una concentracin de 1 000 g/mL de
manganeso.
Solucin madre del estndar: 50 g/mL de manga-
neso, a partir de Solucin madre del estndar de manga-
neso diluida con cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y
4,0 mL de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 1 00 mL. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones con concentraciones conocidas de
0,5; 0,75; 1,0; 1,5 y 2,0 g/mL de manganeso.
Solucin muestra: Proceder segn se ndica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 1 g/mL de manganeso y
omitiendo el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de
manganeso a 279,5 nm
Lmpara: Manganeso, de ctodo hueco
Llama: Ajre-acetleno
Blanco: Acdo clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancas de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/mL,
de manganeso y trazar la recta que mejor se ajuste a
los cinco puntos grafcados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/mL,
de manganeso en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de man-
ganeso (Mn) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C!Cu) x 100
C = concentracin medida de manganeso en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de manganeso en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de manganeso (Mn)
MOLIBDENO, Mtodo 7
Diluyente: 20 mg/mL de cloruro de amonio en agua
Solucin estndar de molibdeno: Transferir 1,0 g de
alambre de molibdeno a un matraz volumtrico de
1000 mL y disolver en 50 mL de cido ntrico, enti-
biando, si fuera necesario. Diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1 000 g/mL de molibdeno.
Solucin madre del estndar: 1 00 g/mL de molib-
deno, a partir de Solucin estndar de molibdeno diluida
con agua
Soluciones estndar: Transferir 2,0; 1 0,0 y 25,0 mL de
la Solucin madre del estndar a sendos matraces volu-
mtricos de 1 00 mL y agregar 5,0 mL de cido percl-
rco a cada matraz. Calentar a ebullicin suave las solu-
ciones en cada matraz durante 15 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente y diluir cada una con Diluyente a
volumen para obtener concentraciones de 5,0; 10,0 y
25,0 g/mL de molibdeno.
Solucin muestra: Transferir una porcin de Tabletas
reducidas a polvo, equivalente a 1 000 rig de molib-
Sup!ernentos OiPtPtirns /Vitaminas Oleosolubles 6825
deno, a un matraz adecuado y agregar 12 mL de cido
ntrico. [NOTA Se puede variar el volumen de cido n-
trico para asegurar que el polvo se disperse uniforme-
mente.] Agitar cuidadosamente e! matraz por rotacin
'>uave para dispersar la muestra de prueba. Someter a
ultrasonido durante 1 O minutos o hasta que la muestra
de prueba se disuelva completamente. Calentar la solu-
cin a ebullicin suave durante 15 minutos y enfriar a
temperatura ambiente. Agregar con cuidado 8 mL de
cido perclrico, calentar hasta que aparezcan humos
de cido perclrico y agitar el matraz por rotacin
suave hasta disipar los humos. Repetir el calentamiento
y la agitacin por rotacin suave hasta que los humos
aparezcan de nuevo. Enfriar a temperatura ambiente.
Transferir cuantitativamente el contenido del matraz a
un matraz volumtrico de 1 00 mL con ayuda de Dilu-
yente y diluir con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 j.)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de mo-
libdeno a 313,3 nm
Lmpara:_ Molibdeno, de ctodo hueco
Llama: Oxido nitroso-acetileno
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20:1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancas de las soluciones contra el
Blanco. Grafcar las absorbancas de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de molibdeno y trazar la recta que mejor se ajuste a
los tres puntos grafcados. A partir de la grfica as
obtenida, determinar la concentracin, C, en g/mL,
de molibdeno en la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de molibdeno en la
Solucin muestra (g/mL)
Cu = concentracin nominal de molibdeno en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
MOLIBDENO, Mtodo 2
Solucin de fluoruro de sodio: Agregar 200 mL de
agua a 1 O g de fluoruro de sodio, mezclar hasta que la
solucin se sature y filtrar. Almacenar en un frasco de
polietileno.
Solucin de sulfato ferroso: 4, 98 mg/mL de sulfato fe-
rroso en agua
Solucin de tiocianato de potasio: 200 mg/mL de to-
cianato de potasio en agua
Solucin de cloruro estannoso al 20%: Transferir
40 mg de cloruro estannoso a un vaso de precipitados,
agregar 20 mL de solucin de cido clorhdrico 6,5 N y
calentar la solucin hasta que el cloruro estannoso se
disuelva. Enfriar y diluir con agua hasta 100 mL.
Solucin de cloruro estannoso diluida: Solucin de clo-
ruro estannoso al 20% diluida con agua (1 en 25). Pre-
parar esta solucin en el momento de su uso.
Solucin estndar: 20 g/ml de molibdeno en agua
Muestra: Una porcin de Tabletas reducidas a polvo
fino, equivalente a 40 g de molibdeno
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometna y Dispersion de Luz (851 ).)
Modo: UV-Vis
Longitud de onda analtica: 465 nm
Celda: 1 cm
Blanco Alrnhol amlico
Anlisis
Muestras: Solucion estndar y Muestra
Transferir la Muestra y 2,0 mL de Solucin estndar a
sendos vasos de precipitados de 200 mL. Agregar
6826 Vitaminas Olemollihles .1 S11r!ementos Dietticos
20 ml de acido n1lrico a cada vaso de precipitados.
Cubrir cada vaso de precipitados con un vidrio de reloj
y calentar a ebullicin lenlamente sobre una placa de
1;ilent;rn1iPritn riurantc 45 minutos. Enfriar a tempera-
tura ambiente. Agregar 6 ml de cido perrlrirn, cu-
brir los vasos de precipitados con un vidrio de reloj y
continuar el calentamiento hasta que la digestin sea
completa, lo cual se indica cuando el lquido se torna
incoloro o amarillo plido. Evaporar las soluciones en
los vasos de precipitados hasta sequedad. Enjuagar las
paredes de los vasos de precipitados y los vidrios de
reloj con agua, y agregar ms agua hasta completar
50 ml en cada vaso de precipitados. Calentar a ebulli-
cin suave la solucin acuosa durante unos pocos mi-
nutos. Enfriar a temperatura ambiente. Agregar 2 9otas
de anaranjado de metilo SR y neutralizar con hidroxido
de amonio. Agregar 8,2 ml de cido clorhdrico.
Transferir cuantitativamente el contenido de los vasos
de precipitados a sendos matraces volumtricos de
100 ml, enjuagar los vasos de precipitados con agua,
transferir los enjuagues a los matraces volumtricos co-
rrespondientes y diluir con agua a volumen. Transferir
50,0 ml de cada solucin a embudos de separacin.
Agregar a cada embudo de separacin 1,0 ml de Solu-
cin de fluoruro de sodio, O,S ml de Solucin de sulfato
ferroso, 4,0 ml de Solucin de tiocianato de potasio,
1,5 ml de Solucin de cloruro estannoso al 20% y
15,0 ml de alcohol amlico, y agitar los embudos de
separacin durante 1 minuto. Dejar que las capas se
separen y desechar las capas acuosas. Agregar 25 ml
de Solucin de cloruro estannoso diluida a cada embudo
de separacin y agitar suavemente durante 15 segun-
dos. Dejar que las fases se separen y desechar las ca-
pas acuosas. Transferir la capa orgnica de cada em-
budo de separacin a un tubo de centrfuga y
centrifugar a 2000 rpm durante 1 O minutos. Determi-
nar las absorbancias de las fases orgnicas de la Solu-
cin estndar y la Muestra, y corregir con el Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de mo-
libdeno (Mo) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (Au!A1) x [(V x C)/Mu] x 100
Au = absorbancia de la Muestra
A1 = absorbancia de la Solucin estndar
V = volumen de la Solucin estndar analizada,
2,0 ml
Cs = concentracin de molibdeno en la Solucin
estndar (pg/ml)
Mu ~ cantidad nominal de molibdeno en la Muestra
(pg)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de molibdeno (Mo)
FSFORO, Mtodo 7
Solucin de cido sulfrico: Agregar cuidadosamente
cido sulfrico al agua (37,5: 100) y mezclar.
Solucin de molibdato de amonio: 50 mg/ml de mo-
libdato de amonio en Solucin de cido sulfrico y agua
(2:3). [NOTA-Disolver primero en agua y luego diluir
con Solucin de cido sulfrico a volumen.]
Solucin de hidroquinona: 5 mg/ml de hidroquinona
en agua. Agregar una gota de cido sulfrico por
100 ml de solucin.
Solucin de bisulfito de sodio: 200 mg/ml de bisulfito
de sodio en agua
Solucin madre del estndar de fsforo: Pesar
4,395 g de fosfato monobsico de potasio, previamente
secados a 1 05 durante 2 horas y almacenados en un
desecudor, y transferir a un rnalraL volumtrico de
1000 ml. Disolver en agua, agregar 6 ml de cido sul-
frico como conservante, diluir con agua a volumen y
mezclar para obtener una solucin con una concentra-
cin de 1 000 pg/ml de fsforo.
Solucin estndar: 20 pg/ml de fsforo. a partir de So-
lucin madre del estndar de fsforo diluida con agua
lJSP 38
Solucin muestra: [NOT.A-Reducir a polvo fino y pesar
t.m 11111ero contado de Tabletas.] Transferir una porc1on
del polvo, equivalenle a 1 00 mg de fsforo, a 25 ml de
5cido ntJicu y Ji1je111 suLne ur1a fJlaca de calentamiento
durante 30 minutos. /\arcaJr 1 5 ml rl0 Jcido clorh-
drico y continuar la dig.estTn hasta que cese la produc-
cin de humos marrones. Enfriar y transferir el conte-
nido del matraz a un matraz volumtrico de 500 ml
con ayuda de pequenas porciones de agua. Diluir con
agua a volumen. Transferir 10,0 ml de esta solucin a
un matraz volumtrico de 100 ml y diluir con agua a
volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analtica: 650 nm
Celda: 1 cm
Anlisis
Muestras: '\olucn estndar y Solucin muestra
Transferir 5,0 ml de la Solucin estndar, de la Solucin
muestra y de agua a sendos matraces volumtricos de
25 ml para proporcionar el blanco. Agregar a cada
uno de los tres matraces 1,0 ml de Solucin de molib-
dato de amonio, de Solucin de hidroquinona y de Solu-
cin de bisulfito de sodio, y agitar por rotacin suave
hasta mezclar. Diluir el contenido de cada matraz con
agua a volumen y dejar !os matraces en reposo du-
rante 30 minutos. Determinar las absorbancias de las
soluciones contra el blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de fs-
foro (P) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (Au! As) x ( C/ Cu) x 1 00
Au = absorbancia de la Solucin muestra
A1 = absorbancia de la Solucin estndar
Cs = concentracin de fsforo en la Solucin
estndar (pg/ml)
Cu = concentracin nominal de fsforo en la
Solucin muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de fsforo (P)
POTASIO
Solucin estndar de potasio: 1 00 pg/ml de potasio,
a partir de cloruro de potasio, previamente secado a
105 durante 2 horas, en agua
Solucin madre del estndar: 1 O pg/ml de potasio, a
partir de Solucin estndar de potasio diluida con cido
clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 1 0,0; 15,0; 20,0 y
25,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 1 00 ml. Diluir el contenido de cada
matraz rnn cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener soluciones que contengan 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y
2,5 pg/ml de potasio.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Calcio,
Mtodo 7, excepto que se debe preparar la Solucin
muestra para que contenga 1,5 pg/ml de potasio y
omitiendo el uso de la Solucin de cloruro de lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotomelno y Dispersin de Luz (851).)
Modo: Espectrofolornetria de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de po-
tasio a 766,5 nm
Lmpara: Potasio, de catodo hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Agua
Anlisis
Muestras: ::,oluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Craficar !as absorblncias de las Solucione'> es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en pg/ml,
de potasio y trazar la recta que mejor se ajuste a los
cinco puntos graficados. A fJdrtir de la grfica as obte-
LJSP 38
nida, determinar la concenlrac1on, C, en ~tg/ml, de
potasio en IJ 'lolurion murstra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de pota-
sio (K) en !a porcin de TJb!12tJs tomadJ:
Re;uitaJo ~ (C/C11)" 100
C = concentracin medida de potasio en la
Solucin muestra (g/ml)
C11 = concentracin nominal de potasio en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de potasio (K)
SELENIO, Mtodo 1
Diluyente: Preparar segn se indica en Molibdeno, M-
todo 1.
Solucin estndar de selenio: [PRECAUCIN-El selenio
es txico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1 000 ml y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una concentracin de 1000
g/ml de selenio.
Solucin madre del estndar: 100 g/ml de selenio, a
partir de Solucin estndar de selenio diluida con agua
Soluciones estndar: Transferir 5,0; 10,0 y 25,0 ml de
Solucin madre del estndar a sendos matraces volum-
tricos de 1 00 ml, y agregar 5,0 ml de cido perclrico
a cada matraz. Calentar a ebullicin suave las soluciones
durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente y
diluir cada una con Diluyente a volumen para obtener
soluciones con concentraciones de 5,0; 1 0,0 y 25,0 g/
ml de selenio.
Solucin muestra: Transferir una porcin del polvo,
equivalente a 1 000 g de selenio, a un matraz ade-
cuado y agregar 12 ml de cido ntrico. [NOTA-Se
puede variar el volumen de cido ntrico para asegurar
que el polvo se disperse uniformemente.] Agitar el ma-
traz por rotacin suave, cuidadosamente, hasta disper-
sar la muestra de pruebn. Someter a ultrasonido du-
rante 1 O minutos o hasta que la muestra de prueba se
disuelva por completo. Calentar a ebullicin suave la
solucin durante 15 minutos y enfriar a temperatura
ambiente. Agregar cuidadosamente 8 ml de cido per-
clrico al matraz, calentar el matraz hasta que aparez-
can humos de cido perclrico y agitar el matraz por
rotacin suave hasta disipar los humos. Repetir el calen-
tamiento y la agitacin por rotacin suave hasta que los
humos aparezcan de nuevo. Enfriar a temperatura am-
biente. Transferir el contenido del matraz a un matraz
volumtrico de 50 ml con ayuda de Diluyente y diluir
con Diluyente a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de sele-
nio a 196,0 nm
Lmpara: Selenio, de catado hueco
Llama: Aire-acetileno
Blanco: Diluyente y cido perclrico (20: 1)
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar las absorbancias de las soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de su; concentraciones, en g/ml,
Je '>eler1io y traLal la reda que mejor se ajuste a los
tres puntos graficados. A partir de la grfica as obte-
nida, dP\Prminar la cnncPntracin. C. en g/ml, de
~elenio en la Soluoon muestra.
Suplementos Dictcticos /Vitaminas Oleosolubles 6827
Calcular el porcentae de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Table1as tomilrlil
Resultado= (C/Cl > 100
l - concentracin medida de )Cicnio ~n !a
Solucin muestra (rig/ml)
Cu = concentracin nominal de selenio en la
Solucin muestra (pg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
SELENIO, Mtodo 2 ,
Solucin de cido clorhdrico: Acido clorhdrico diluido
con agua (1 en 1 O)
Solucion de hidrxido de amonio al 50%: Hidrxido
de amonio diluido con agua (1 en 2)
Reactivo A: 9 mg/ml de edetato disdico y 25 mg/ml
de clorhidrato de hidroxilamina en agua. [NOTA-Disol-
ver primero edetato disdico en una porcin de agua,
luego agregar clorhidrato de hidroxilamina y diluir con
agua a volumen.]
Reactivo B: Transferir 200 mg de 2, 3-diaminonaftaleno
a un embudo de separacin de 250 ml y agregar
200 ml de cido clorhdrico O, 1 N. Lavar la solucin
con tres porciones de 40 ml de ciclohexano y desechar
la capa de ciclohexano. Filtrar la solucin en un frasco
marrn y cubrir la solucin con una capa de 1 cm de
ciclohexano. Esta solucin permanece estable durante 1
semana si se almacena en un refrigerador~
Solucin madre del estndar: [PRECAUCION-EI selenio
es txico; manipularlo con cuidado.] Disolver 1 g de se-
lenio metlico en un volumen mnimo de cido ntrico.
Evaporar hasta sequedad, agregar 2 ml de agua y eva-
porar hasta sequedad. Repetir la adicin de agua y la
evaporacin hasta sequedad tres veces. Disolver el resi-
duo en cido clorhdrico 3 N, transferir a un matraz vo-
lumtrico de 1000 ml y diluir con cido clorhdrico 3 N
a volumen para obtener una solucin con una concen-
tracin de 1000 pg/ml de selenio. Diluir un volumen
de la solucin con cido clorhdrico O, 125 N hasta ob-
tener una concentracin de 2,0 g/ml de selenio.
Solucin estndar: Transferir 1 O ml de Solucin madre
del estndar a un matraz con tapn de vidrio. Agregar
1 ml de cido perclrico y 1 ml de Solucin de cido
clorhdrico, y diluir con agua hasta 20 ml.
Solucin muestra: Transferir una porcin de Tabletas
reducidas a polvo fino, equivalente a 20 g de selenio,
a un matraz adecuado. Agregar 1 O ml de cido ntrico
y entibiar suavemente sobre una placa de calenta-
miento. Continuar calentando hasta que la reaccin ini-
cial de cido ntrico haya desaparecido y luego agregar
3 ml d,e cido perclrico.
[PRECAUCION-Tener cuidado en esta etapa debido a que la
reaccin del cido perclrico se torna vigorosa.]
Continuar calentando sobre la placa de calentamiento
hasta la aparicin de humos blancos de cido percl-
rico o hasta que la digestin comience a tornarse os-
cura. Agregar 0,5 ml de cido ntrico y continuar el
calentamiento, agregando cantidades adicionales de
cido ntrico si se observa un oscurecimiento mayor.
Digerir durante 1 O minutos despus de la primera apa-
ricin de humos de cido perclrirn o hasta que la
digestin se torne incolora. Enfriar el matraz, agregar
2,5 ml de Solucin de acido clorh1drico y devolver el
matraz a la placa de calentamiento para expulsar los
residuos de cido ntrico. Calenlar la mezcla durante 3
minutos despues de que comience a hervir. Enfriar el
matraz a temperatura ambiente y diluir con agua hasta
20 ml.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra v Dispersin de Luz (851 ).)
6828 Vitaminas Oleosolubles / Suplementos Dietticos
Modo: UV
Longitud de onda analtica: 380 nm
Celda: 1 cm
Blanco: l ml de cido perclrico y 1 mL de Solucin
de cido clorhdrico. diluido con agua ha\ta 20 ml
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Tratar la Solucin muestra, la Solucin estndar y el
Blanco segn se indica a continuacin. Agregar 5 ml
de Reactivo A a cada matraz y agitar por rotacin
suave hasta mezclar. Ajustar la solucin en cada ma-
traz con Solucin de hidrxido de amonio al 50% a un
pH de 1, 1 O, 1. Agregar 5 ml de Reactivo B a cada
matraz y agitar por rotacin suave hasta mezclar. Co-
locar los matraces en un bao de agua mantenido a
50 y equilibrar durante 30 minutos, procurando cu-
brir los matraces para protegerlos de la luz. Enfriar a
temperatura ambiente y transferir el contenido de
cada matraz a sendos embudos de separacin. Transfe-
rir 1 0,0 ml de ciclohexano a cada embudo de separa-
cin y extraer vigorosamente durante 1 minuto. Dese-
char la capa acuosa. Transferir la capa de ciclohexano
a un tubo de centrfuga y centrifugar a 1 000 rpm du-
rante 1 minuto para eliminar el agua remanente. De-
terminar las absorbancias de las soluciones a partir de
las Muestras contra la solucin a partir del Blanco.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de sele-
nio (Se) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (Au!As) x [(V x C)/Mu] x 100
Au = absorbancias de la capa de ciclohexano de la
Solucin muestra
As = absorbancias de la capa de ciclohexano de la
Solucin estndar
V =volumen de la Solucin madre del estndar
usado para preparar la Solucin estndar,
10 ml
C = concentracin de selenio en la Solucin madre
del estndar (g/ml)
Mu = cantidad nominal de selenio en la Solucin
muestra (g)
Criterios de aceptacin: 90,0%-160,0% de la cantidad
declarada de selenio (Se)
CINC, Mtodo 7
Solucin madre del estndar de cinc: 1000 g/ml de
cinc, a partir de xido de cinc en cido clorhdrico 5 M
(3,89 mg/ml) y diluida con agua a volumen final.
[NOTA-Disolver en cido clorhdrico 5 M, entibiando, si
fuera necesario, enfriar y luego diluir a volumen final.]
Solucin madre del estndar: 50 ~tg/ml de cinc, a
partir de Solucin madre del estndar de cinc diluida con
cido clorhdrico O, 125 N
Soluciones estndar: Transferir 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 y
5,0 ml de Solucin madre del estndar a sendos matra-
ces volumtricos de 100 ml. Diluir el contenido de cada
matraz con cido clorhdrico O, 125 N a volumen para
obtener concentraciones de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 y 2,5 g/
ml de cinc.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra, en Calcio, Mtodo 7, excepto que se debe pre-
parar la Solucin muestra para que contenga 2 g/ml
de cinc y omitiendo el uso de la Solucin de cloruro de
lantano.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Espectrofotometra de absorcin atmica
Longitud de onda analtica: Lnea de emisin de cinc
a 213,8 nm
USP 38
Lmpara: Cinc, de ctodo hueco
Llama: Ai1e-acetile110
Blanco: cido clorhdrico O, 125 N
Anlisis
Muestras: Soluciones estandar v Solucin muestra
Determinar las absorbancias de hs soluciones contra el
Blanco. Graficar las absorbancias de las Soluciones es-
tndar en funcin de sus concentraciones, en g/ml,
de cinc y trazar la recta que mejor se ajuste a los cinco
puntos graficados. A partir de la grfica as obtenida,
determinar la concentracin, C, en g/ml, de cinc en
la Solucin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cinc
(Zn) en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado = (C/Cu) x 100
C = concentracin medida de cinc en la Solucin
muestra (g/ml)
Cu = concentracin nominal de cinc en la Solucin
muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de la cantidad
declarada de cinc (Zn)
BORO, NQUEL, ESTAO y VANADIO, Mtodo 7; CALC19,
CROMO, COBRE, HIERRO, MAGNESIO, MANGANESO, fOSFORO
y CINC, Mtodo 2; MOLIBDENO y SELENIO, Mtodo 3
Solucin madre de agua regia: Preparar una mezcla
de cido clorhdrico y cido ntrico (3: 1 ), agregando el
cido ntrico al cido clorhdrico. [NOTA-Ventilar peri-
dicamente la solucin en una campana de extraccin
apropiada.]
Diluyente: Preparar una mezcla de Solucin madre de
agua regia y agua (1 :9), agregando un volumen de So-
lucin madre de agua regia a dos volmenes de agua.
Diluir con ms agua a volumen y mezclar bien.
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una mezcla
de 1000 mg/L de itrio en solucin de cido ntrico al
5% y 1000 mg/L de escandio en solucin de cido n-
trico al 5% y Diluyente (1 :1 :198), y mezclar.
Solucin madre del estndar 1 (Ca, Cu, Fe, Mg, Mn, P
y Zn): [NOTA-Slo es necesario incluir los minerales
de inters en la solucin.] Usando soluciones estndar
de elementos (individuales o combinados) disponibles
comercialmente en solucin de cido ntrico al 5%, pi-
petear y transferir la cantidad apropiada de solucin es-
tndar de elementos a un matraz volumtrico, y diluir
con solucin de cido ntrico al 5% hasta obtener una
solucin con concentraciones finales de aproximada-
mente 1 000 mg/L de calcio, 100 mg/L de cobre,
250 mg/L de hierro, 500 mg/L de magnesio, 1 00 mg/L
de manganeso, 800 mg/L de fsforo y 250 mg/L de
cinc.
Solucin madre del estndar 2 (B, Cr, Mo, Ni, Se, Sn y
V): [NOTA-Slo es necesario incluir los minerales de
inters en la solucin.] Usando soluciones estndar de
elementos (individuales o combinados) disponibles co-
mercialmente en solucin de cido clorhdrico al 20%,
pipetear y transferir la cantidad apropiada de solucin
estndar de elementos a un matraz volumtrico, y diluir
con solucin de cido clorhdrico al 20% hasta obtener
una solucin con concentraciones finales de aproxima-
damente 200 mg/L de boro y 1 00 mg/L de cromo, de
molibdeno, de nquel, de selenio, de estao y de
vanadio.
Soluciones estndar: Preparar una mezcla de Solucin
madre del estndar 7 y Solurin madre del estndar 2,
segn se requiera, en Diluyente para preparar una curva
de calibracin de seis puntos que abarque el intervalo
de concentrac1on de cada mineral de inters.
Solucin muestra 1 (para Tabletas que contienen mine-
rales encontrados en la Solucin madre del estndar 7 y
Solucin madre del estndar 2): Pesar y reducir a polvo
fino no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcin,
igual a 3, 5 veces el peso promedio por Tableta, a un
matraz volumtrico de 250 ml. Agregar lentamente
USP 38
25 ml de Solucin madre de agua regia en incrementos
de 5 ml, seguidos de mezclado. [Nl A-~1 la muestra
contiene un carbonato, se presentar burbujeo. Esperar
hasta que cese el burbujeo para proseguir.] Calentar id
solucin a ebuliic..i11 er1 ur1d placa de calentamiento.
Continuar calentando suavemente hasta que cesen los
humos (aproximadamente 1 hora). [NOTA-Si la mues-
tra contiene selenio, digerir durante no ms de 15 mi-
nutos.) Retirar del calor, enfriar y diluir con agua a volu-
men. Filtrar aproximadamente 30 ml en un tubo de
centrfuga usando un filtro de nailon para jeringa con
un tamao de poro de 5 m. Si fuera necesario, realizar
las diluciones adicionales usando Diluyente.
Solucin muestra 2 (para Tabletas que contienen mine-
rales encontrados slo en la Solucin madre del estndar
2): Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Table-
tas. Transferir una porcin, igual a 3,5 veces el peso
promedio por Tableta, a un matraz volumtrico de
250 ml. Agregar lentamente 25 ml de Solucin madre
de agua regia en incrementos de 5 ml, seguidos de
mezclado. [NOTA-Si la muestra contiene un carbonato,
se presentar burbujeo. Esperar hasta que cese el bur-
bujeo para proseguir.] Calentar la solucin a ebullicin
en una placa de calentamiento. Continuar calentando
suavemente hasta que cesen los humos (aproximada-
mente 1 hora). [NOTA-Si la muestra contiene selenio,
digerir durante no ms de 15 minutos.] Retirar del
calor, enfriar y diluir con agua a volumen. Filtrar aproxi-
madamente 30 ml en un tubo de centrfuga usando un
filtro de nailon para jeringa con un tamao de poro de
5 m. Si fuera necesario, realizar las diluciones adiciona-
les usando Diluyente.
Solucin muestra 3 (para Tabletas que contienen mine-
rales encontrados slo en la Solucin madre del estndar
7): Pesar y reducir a polvo fino no menos de 20 Table-
tas. Transferir una porcin, i51ual al peso promedio por
Tableta, a un matraz volumetrico de 250 ml. Agregar
lentamente 25 ml de Solucin madre de agua regia en
incrementos de 5 ml, seguidos de mezclado. [NOTA-Si
la muestra contiene un carbonato, se presentar burbu-
jeo. Esperar hasta que cese el burbujeo para proseguir.]
Calentar la solucin a ebullicin en una placa de calen-
tamiento. Continuar calentando suavemente hasta que
cesen los humos (aproximadamente 1 hora). Retirar del
calor, enfriar y diluir con agua a volumen. Filtrar aproxi-
madamente 30 ml en un tubo de centrfuga usando un
filtro de nailon para jeringa con un tamao de poro de
5 m. Si fuera necesario, realizar las diluciones adiciona-
les usando Diluyente.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectroqumica de Plasma (730).)
Modo: Espectrometra de plasma inductivamente aco-
plado, usando un espectrmetro ajustado para medir
la emisin de cada mineral de inters aproximada-
mente a la longitud de onda correspondiente. [NOTA-
Las condiciones operativas se pueden desarrollar y op-
timizar basndose en las recomendaciones del fabri-
cante. Se debe demostrar mediante experimentos que
las longitudes de onda seleccionadas proporcionan la
especificidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y preci-
sion suficientes.]
Aptitud del sistema
[NOTA-Analizar la Solucin de aptitud del sistema y ob-
tener la respuesta segn se indica en el Anlisis.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Soluciones estndar y Solucin muestra
Determinar la emisin de cada mineral de inters en las
Soluciones estndar y la Solucin muestra con un sis-
tema de plasma inductivamente acoplado, usando Di-
luyente como blanco. Graficar la emisin de las Solucio-
nes estndar en funcin de las concentraciones, en
Suplementos Dietticos /Vitaminas Oleosolubles 6829
mg/L, de los minerales de inters y trazar la recta que
mejor se dju>Le d lu> puntos graficados. A partir de la
grfica dS obtenidd, determinar la concentracin, (,
er 1 r 1ilJ/L, Je Lcida mineral de inters en la Solucin
rnuestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de cada
mineral tomado:
Resultado= eX (V/W) X Fx (Cw/L) X 100
C concentracin medida del elemento pertinente
=
en la Solucin muestra (mg/L)
V = volumen de la Solucin muestra (L)
W = peso de la muestra (mg)
F = factor de dilucin de la Solucin muestra
Cw = peso promedio (mg/Tableta)
L = cantidad declarada (mg/Tableta)
Criterios de aceptacin: 90,0%-125,0% de las canti-
dades declaradas de calcio (Ca), cobre (Cu), hierro (Fe),
magnesio (Mg), manganeso (Mn), fsforo (P) y cinc
(Zn); y 90,0%-160,0% de las cantidades declaradas de
boro (B), cromo (Cr), molibdeno (Mo), nquel (Ni), se-
lenio (Se), estao (Sn) y vanadio (V)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN y DISOLUCIN (2040):Cumplen con los
requisitos de Disolucin.
VARIACIN DE PESO (2091): Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021 ): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/g, y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x 1,0 2 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonella spp., Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO:' La etiqueta indica que el producto es Ta-
bletas de Vitaminas Oleosolubles con Minerales. La eti-
queta tambin indica la cantidad de cada vitamina y mi-
neral por unidad de dosificacin y, cuando sea necesario,
la forma qumica de vitamina presente, e indica adems
la forma salina del mineral usado como la fuente de cada
elemento. Cuando el producto contiene vitamina E, la
etiqueta indica si se trata de la forma d o di. Cuando se
proporciona ms de un mtodo de valoracin para un
mineral en particular, el etiquetado indica el mtodo de
valoracin con el que cumple el producto, nicamente si
no se usa el Mtodo 7.
1 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan
existido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspon-
dientes, siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad
USP para Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI)
para vitaminas se han discontinuado; no obstante, contina el uso de UI en
las etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los artculos se etiquetan
en trminos de Unid<ldes adems del etiquetarlo requerido, la relacin de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP
de Vitamina A '- 3 pg de todo trnm retino! (alcohol de vitamina A) o
0,344 pg de !orlo acelcito de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 r1g
de todo trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 g de reti-
no! (3,3 UnidatJes USP de Vitamina A)~ 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de
beta caroteno 0,6 pg de todo trans beta caroteno; 1 Unidad USP de Vita-
mina D -, 0,02'> .ll'l de ergmalcife1ul o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocofe-
rol = 1, l antiquas Unidades USP rle Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa
tocotenlo ,, 1- antigua Unidad USr' de Vitamina E, l mg de succinato cido de
di-alfa Jocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa
tocoferol = 1,49 antiguas Unidades USP de Vitamina E: y 1 mg de acetato de
d-alta tocotenlo = 1,36 antiguas Unidade USP de Vitamina E, 1 mg de succi-
nato cido de d alfa tocoferilo e 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E.
En trminos de equivalentes de d-alta locoferol, l mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = 0 91, 1 11HJ de )LlLLi11dto aLi1.Jo de d-a!fJ tocoferilo ,.:. 0,81, 1 mg
1
de di-alfa tucuferol ,74, 1 mg ele acelato de di-alfa tocoferilo = 0,67, y
l mg de sucunato cido de di-alfa tocoterilo _e 0,60.
68 30 Vit<iminas Oleosolubles /Suplementos Dietticos
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER /\!fa Tocofcro/ USP
ER Acetato de Alfa Tocofenlo USP
ER Succinato cido de Alfa Toc.ofeiilo USP
ER Beta Caroteno LJSP
ER Aptitud del Sistema de Beta Caroteno USP
ER Colecalciferol USP
ER Ergocalciferol USP
ER Fitonadiona USP
ER Acetato de Retinilo USP
ER Palmitato de Retinilo USP
ER Fluoruro de Sodio USP
Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles,
Cpsulas
DEFINICIN
Las Cpsulas de Vitaminas Oleoso/ubles e Hidrosolubles con-
tienen una o ms de las siguientes vitaminas oleosolubles:
Vitamina A, Vitamina D como Ergocalcifero/ (Vitan:ina D2~
o Colecalcifero/ (Vitamina D3), Vitamina E, Fitonad1ona (Vi-
tamina K 1) y Beta Caroter;io; y una o ms de las siguientes
vitaminas hidrosolubles: Acido Ascrbico o su equivalente
como Ascorbato de Calcio o Ascorbato de Sodio, Biotina,
Cianocobalamina, cido F<;)lico, Niacina o Niacinamida,
Dexpantenol o Pantenol, Acido Pantot~ico (c,omo Panto-
tenato de Calcio o Pantotenato de Calcio Racem1co), Clor-
hidrato de Piridoxin~, R!boflavina y Clorhidrat_o de Tiamina
o Mononitrato de T1am1na. Las Capsulas contienen no
menos de 90,0% y no ms de 165,0% de las cantidades
declaradas de vitamina A (C20H30) como retino! o steres
de retino/ en la forma de acetato de retinilo (C22H322) o
palmitato de retinilo (C36H6?02); vitamina D ~om~ colecal-
ciferol (C21H44) o ergocalc1fero/ (C2sH44Q); v1tam1na E
como alfa tocofero/ (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo
(C 31 H520,), o succinato cido de alfa tocoferilo (C33Hs4s);
fitonadiona (Ci1 H4602) y beta ca roten o (CoHs6); y no me-
nos de 90,0% y no ms de 150,0% de las cantidades
declaradas de cido ascrbico (C6HR06) o sus sales como
ascorbato de calcio (C12H14Ca012 2H20) o ascorbato de
sodio (C6H1Na06), biotina (CioH16N203S), cianocobala-
mina (C63HssCoN 1414P), cido flico (C19H19N106), nia-
cina (C 6 H 5 N0 2 ) o niacinamida (C6H6N20), dexpantenol
(C 9 H19N04) o pantenol (C9H19N4), pantotenato de calcio
(C 18H 32CaN2010), clorhidrato de piridoxina (CsH11NOi
HCI), riboflavina (C11H20N406) y tiamina (C12H11C/N4QS)
como clorhidrato de tiamina o mononitrato de tiamina.
No contienen minerales. Pueden contener otras sustancias
agregadas declaradas generalmente reconocidas como se-
guras, en cantidades inobjetab/es.
CONTENIDO
VITAMINA A, Mtodo 7
[NOTA-Cuando se especifica el uso de un ster de vita-
mina A (acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el
procedimiento siguiente, usar la forma qumica presente
en la formulacin. ER Vitamina A USP es acetato de
retinilo. Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina
A USP. Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano
Solucin estndar: 15 g/mL de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en n-hexano
Solucin madre de aptitud del sistema: 15 g/mL de
palmitato de retinilo en n-hexano , USP, a retino!, 0,872
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volumenes
iguales de Solucin madre de aptitud del sistema y Solu-
cin estndar para obtener concentraciones de 7,5 g/
mL de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solucin muestra: Transferir el contenido de no menos
de 20 Cpsulas a un recipiente adecuado, mezclar y
USP 38
pesar. Transferir una porcin de la mezcla, equivalente a
5 Cpsulas, a un recipiente con tapa de ros~a con recu-
brimiento interno de tetln. [NOTA-Para Capsulas de
gelatina dura, retirar, tanto como sea posible, el conte-
nirlo OP no menos dt" 20 Cpsulas cortndolas para
abrir las cubiertas de las Cpsulas, transfiriendo las cu-
biertas y su contenido a un recipiente adecuado, y tritu-
rando hasta obtener una masa homognea. Transferir
una porcin de la masa, equivalente a 5_ Cpsulas, a un
recipiente con tapa de rosca con recubrimiento interno
de tefln.] Agregar 1 O mL de dimetil sulfxido y 15 mL
de n-hexano y agitar durante 45 minutos en un agita-
dor de movimiento tipo mueca (wrist-action) en un
bao de agua mantenido a 60. [NOTA-Ajustar el agi-
tador de movimiento tipo mueca para asegurar que el
contenido del recipiente se mezcle vigorosa y completa-
mente.] Centrifugar a 3000 rpm durante 1O minutos y
transferir la capa de hexano con una pipeta a un ma-
traz volumtrico de 100 mL. Agregar 15 mL de n-he-
xano a la capa de dimetil sulfxido, agitar minuciosa-
mente durante 5 minutos y transferir la capa de hexano
con una pipeta a un matraz volumtrico de 1 00 mL.
Repetir esta extraccin con tres porciones adicionales de
15 mL de n-hexano. Diluir los extractos en el matraz
volumtrico con n-hexano a volumen. Diluir un volu-
men de esta solucin con n-hexano hasta obtener una
solucin con una concentracin de 15 g/mL de vita-
mina A como retino/ (C20HioO).
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf/O (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir el rea del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo obtenido de la Solucin estndar y el
rea del pico de la forma todo trans de acetato de
retinilo o todo trans de palmitato de retinilo en el
cromatograma de la Solucin muestra. Para productos
que contengan acetato de vitamina A o palmitato de
vitamina A, calcular el porcenta1e de la cantidad de-
clarada de vitamina A, como retino! (CoH30), en la
porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (r1r/r1) x (Cs/Cu) x F x 100
r 1, = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin estndar
Cs = concentracin de acetato de retinilo
(C22H322) de ER Vitamina A USP en la
Solucin estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de vitamina A, como
retino! (C20H1 0 0), en la Solucin muestra
(g/mL) ..
F = factor usado para convertir acetato de retinllo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
[NOTA-Las respuestas molares de acetato de retinilo y
palmitatu de retinilo son equivaientes.j .
Criterios de aceptacin: 90,0'Yo-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C20H rnO)
USP 38 Suplementos Dietticos / \/itaminn' Oleo,nl! 1hle<; e Hirlrosoluhles 6831
VITAMINA A, Metodo 2
fhiC1TA---Cua11Jo se especificJ u11 ster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el procc-
di1-i-1iento siguiente, usJ1 J fmmJ qumicJ pre>cntc en la
formulacin. ER Vitamina A. USP e~ ;iretato de retinilo
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con proteccin actnica durante
todo este procedimiento.]
Solucin de cido sulfrico metanlico 3 N: Agregar
cuidadosamente 9 ml de cido sulfrico a 80 ml de
metanol en un matraz volumtrico de 100 ml. Enfriar y
diluir con metanol a volumen.
Solucin de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1 O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumtrico de 100 ml y agregar agua sufi-
ciente para disolver. Agregar 1,7 ml de cido sulfrico y
diluir con agua a volumen.
Solucin de lecitina: 5 mq/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano - pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
Fase mvil: n-Hexano y acetato de etilo (99,7:0, 3)
Solucin estndar: 15 g/ml de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solucin madre de aptitud del sistema: 15 g/ml de
palmitato de retinilo en 2,2,4-trimetilpentano
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
iguales de Solucin madre de aptitud del sistema y Solu-
cin estndar hasta obtener concentraciones de 7,5 g/
ml de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solucin muestra: [NOTA-Esta preparacin es ade-
cuada para la determinacin de vitamina A, vitamina D
y vitamina E, cuando se encuentran presentes en la for-
mulacin.] Pesar no menos de 20 Capsulas en un frasco
de pesada tarado. Usando una cuchilla afilada si fuera
necesario, abrir cuidadosamente las Cpsulas, sin perder
material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cpsulas vacas
lavando con varias porciones de ter. Desechar los lava-
dos y secar las cubiertas de las Cpsulas con ayuda de
una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cpsulas vacas en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso, neto del con_tenido de la;; Cpsulas. "Transferir
unJ porc:on del contenido de las Capsulas, equivalente
a 30 g de la cantidad declarada de colecalciferol o er-
gocalciferol (vitamina D), a un recipiente con tapa de
rosca con recubrimiento interno de tefln. Si la vita-
mina D no se encuentra presente en la formulacin,
usar una porcin, equivalente a 90 mg de la cantidad
declarada de vitamina E. Si la vitamina E no se encuen-
tra presente en la formulacin, usar una porcin, equi-
valente a 2,5 mg de la cantidad declarada de vitamina
A, como retinol. Agregar 0,5 g de bicarbonato de sodio,
1,5 ml de Solucin de lecitina y 12,5 ml de 2,2,4-trime-
tilpentano y dispersar en un mezclador de vrtice. Agre-
gar 6 ml de Solucin de ascorbato de sodio-pirogalol,
agitar lentamente y dejar que la solucin se desgasifi-
que. Continuar agitando hasta que haya cesado la emi-
sin de gases y luego agitar durante 12 minutos adicio-
nales. Agregar 6 ml de dimetil sulfxido, mezclar en un
mezclador de vrtice hasta formar una suspensin y
agitar durante 12 minutos. Agregar 6 ml de Solucin de
cido sulfrico metonlico 3 N, mezclar en un mezclador
de vrtice para formar una suspensin y agitar durante
12 minutos. Agregar 12,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano,
mezclar en un mezclador de vrtice hasta formar una
suspensin y agitar durante 1 O minutos. Centrifugar du-
rante 1 O minutos para romper la emulsin y para que el
sobrenadante se torne transparente. fNOTA-El sobrena-
dante se usa para la determinacin de vitamina A, as
como para vitamina D y vitamina E, si se encuentran
resentes en la formulacin.] Si fuera necesario, diluir
cuantitativamente un volumen del sobrenadante con
2,2,4-trimetilpentano hasta obtener una concentracin
ccrcJna a !J de !a Solucin estndar.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromotogrofw (621 ), Aptitud del Sistemo.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm: relleno L24 de 5 ltm
Velocidad de flujo: 1,5 mL; m111
Volumen de inyeccin: 40 pl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de optitud del sistemo
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 8,0 entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir el rea del pico de la forma todo trons de ace-
tato de retinilo de la Solucin estndor y el rea del
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
cin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retinol (C20H30), en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x F x 1 00
ru = rea del pico de la forma todo tram de ster
de retinilo de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin estndar
Cs = concentracin de acetato de retinilo
(C22Hi202) de ER Vitamina A USP en la
Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de vitamina A, como
retinol (C20HioO), en la Solucin muestra
(g/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extraccin ini-
cial de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano para calcular
la concentracin nominal. Las respuestas molares de
acetato de retinilo y palmitato de retinilo son
equivalentes.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H,oO)
VITAMINA A, Mtodo 3
[NOTA-Cuando se especifica un ster de vitamina A
(acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el proce-
dimiento siguiente, usar la forma qumica presente en la
formulacin. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo.
Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina A USP.
Usar material de vidrio con proteccin actnica durante
todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin: n-Hexano y cloruro de meti-
leno (3:1)
Solucin de hidrxido de potasio: 800 mg/ml de hi-
drxido de potasio en agua. [NOTA-Agregar cuidadosa-
mente el hidrxido de polasio al agua. Mezclar y
enfriar.]
Diluyente: 1 O mg/ml de pirogalol en alcohol
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (92:8)
Solucin madre del estndar: 30 g/mL de acetato de
retinilo, a partir de ER Vitamina A USP en Diluyente.
[NOTA-Esta solucin se puede almacenar en un refrige-
rador durante 1 semana.]
Solucin estndar: Diluir un volumen de Solucin ma-
dre del e~lndar con Diluyente hasta obtener una con-
centracin de 1 pg/mL de acetato de retinilo, a partir
de ER Vitamina A lJSP. Trrn~ferir 1 O.O ml de esta solu-
cin a un matraz de 125 mL con tapn y agregar 5 ml
de agua, 5 ml de Diluyente y 3 ml de Solucin de hidr-
xido de potosio. Tapar hermeticamente, agitar durante
15 minutos sobre un bao de agua mantenido a
6832 Vitamina~ Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dietticos
60 J_ 5 y enfriar a temperatura ambiente. Agregar 7 ml
de agua y 25,0 ml de Disolvente de extraccion. Tapar
hermticamente y agitar vigorosamente durante 60 se-
'Jllncim Enjuagar !as paredes de! matraz con 60 ml de
agua y dejar en reposo dura11tP 1 O min11tos para que
las capas se separen. Retirar una porcin de la capa
or;:nica para inyectarla en el cromatgrafo. Esta Solu-
cion estndar contiene O, 34 g/ml de retino!.
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cpsulas vacas
lavando con varias porciones de ter. Desechar los lava-
dos y secar las cubiertas de las Cpsulas con ayuda de
una corriente de aire seco. Pesar las cubiertas de las
Cpsulas vaC!as en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto del contenido de las Cpsulas. Transferir
una porcion del contenido de las Cpsulas, equivalente
a 1,5 mg de acetato de retinilo, a un matraz de 125 ml
con tapan. Agregar 5 ml de agua, 15 ml de Diluyente y
3 ml de Solucin de hidrxido de potasio. Tapar hermti-
camente, agitar durante 15 minutos sobre un bao de
agua mantenido a 60 5 y enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 7 ml de agua y 25,0 ml de Disolvente
de extraccin. Tapar hermticamente y agitar vigorosa-
mente durante 60 segundos o ms, si fuera necesario,
para completar la extraccin. Enjuagar las paredes del
matraz con 60 ml de agua y dejar en reposo durante
1 O minutos hasta que las capas se separen. [NOTA-No
agitar porque podra formarse una emulsin.] Retirar
una porcin de la capa orgnica y diluir cuantitativa-
mente y en diluciones sucesivas, si fuera necesario, con
Disolvente de extraccin hasta obtener una concentra-
cin de 0,34 g/ml de retino!.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 335 nm
Columna: 6,2 mm x 8 cm; relleno L3
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 4 ml/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para 1 3-cis-
retinol y la forma todo trans de retino! son aproxima-
damente 0,92 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de la forma todo trans de
retino! y 1 3-cis-retinol. Calcular el porcentaje de la
cantidad declarada de vitamina A, como retino!
(C20H rnO), en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (r11/r1;) x (Cs/Cu) x F x 100
rr 1 = suma de las reas de los picos de la forma
todo trans de retino! y 1 3-cis-retinol de la
Solucin muestra
r12 = suma de las reas de los picos de la forma
todo trans de retino! y 1 3-cis-retinol de la
Solucin estndar
C1 = concentracin de acetato de retinilo
(C21H1202) de ER Vitamina A USP en la
Solucin estndar (g/ml)
Cu = co11ce11traci11 nominal de vitamina A, como
retino! (C20H rnO) en la Solucin muestra
(pg/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
USP 38
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C70H100)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 7
[NOlA-Cuando se especificci vita111ir1a D (coiecalciferol o
erqocalciferol) en e! siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actinica durante todo este
procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (99: 1)
Solucin estndar: 2 g/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solucin estndar a 60 durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 7. Transferir no menos
de 20 ml de esta solucin a un recipiente adecuado y
evaporar, si fuera necesario, al vaco a temperatura am-
biente para obtener una concentracin de 2 g/ml de
colecalciferol o ergocalciferol.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44) o ergocalciferol (C2sH44) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/rs) x (C1/Cu) x F x 100
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(g/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
F = factor de correccin que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la Solucin
muestra, 1,09
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C 27 H44)
o ergocalciferol (C7sH44)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actnica durante todo este
procedimiento.]
Solucin de cido sulfrico metanlico 3 N, Solucin
de ascorbato de sodio-pirogalol, Solucin de lecitina
y Solucin muestra: Proceder segn se indica en Vita-
mina A, Mtodo 2.
USP 38 Suplementos Dietticos/ Vitilminils Olcosolublcs e Hidrosolublcs 6833
Fase mvil: n-Hexano v alcohol butlico terciario
(98,75:1,25) , u ER Erguc.alc.iferul USP. Preparar e)La >oluc.in en el da
Solucin estndar l g/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USf' en 2,2,4-trimetilpentano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volu-
men de Solucin estandar a 60u durante 1 hora para
isomerizar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) a su P.recursor correspondiente.
Sistema cromato9rafico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 m
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 4,0 entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(CnH44) o ergocalciferol (C28H44) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 1 00
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(~tg/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (CnH44)
o ergocalciferol (C2sH44)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actnica durante todo este
,procedimiento.]
Acido actico diluido: Solucin de cido actico glacial
(1 en 1 O) en agua
Solucin de fenolftalena: 1 O mg/ml de fenolftalena
en alcohol
Solucin de hidrxido de potasio: Disolver lentamente
14 g de hidrxido de potasio en una mezcla de 31 ml
de alcohol deshidratado y 5 ml de agua. Preparar en el
da de su uso.
Disolvente de extraccin: Cloruro de metileno y al-
cohol isoproplico (99,8:0,2)
Fase mvil: Acetonitrilo y metanol (91 :9)
Solucin madre del estndar: 0,2 mg/ml de ER Cole-
calciferol USP o ER Ergocalciferol USP en alcohol deshi-
dratado. [NOTA-Preparar cada 4 semanas. Almacenar
en un congelador.]
Solucin estndar: [NOTA-Acondicionar la columna de
extraccin en fase slida especificada para su uso en la
Solucin estndar y la Solucin muestra lavando la co-
lumna inicialmente con 4,0 ml de una mezcla de clo-
ruro de metileno y alcohol isoproplico (4:1 ), seguida de
5,0 ml de Disolvente de extraccin. No dejar que la co-
lumna se seque.] Diluir un volumen de Solucin madre
del estndar con alcohol deshidratado hasta obtener
una concentracin de 5 pg/ml de ER Colecalciferol USP
de su uso. Transferir 2,0 ml de esta solucin a un ma-
traz de 125 rnL con Lap11. Ay1ega1 15,0 ml de agua y
15,0 ml de So!ucion de hidrxido de potasio, tapar y agi-
tar durante 30 minutos en un bao de agua mantenido
a 60 . Dejar que se enfre a temperatura ambiente y
transferir el contenido del matraz a un embudo de se-
paracin de 250 ml. Agregar 15,0 mL de agua al ma-
traz, tapar, agitar vigorosamente y transferir esta solu-
cin al embudo de separacin. Enjuagar el matraz con
60 ml de n-hexano y transferir el enjuague al embudo
de separacin. Tapar, agitar vigorosamente durante 90
segundos y dejar en reposo durante 15 minutos para
que las capas se separen. Escurrir y desechar la capa
acuosa. Agregar 15,0 mL de agua a la capa de hexano
en el embudo de separacin, tapar y agitar vigorosa-
mente. Dejar en reposo durante 1 O minutos para que
las capas se separen y desechar la capa acuosa. Agregar
1 gota de Solucin de fenolftalena,y 15,0 ml de agua al
embudo de separacin. Agregar Acido actico diluido
gota a gota, agitando, hasta que el lavado sea neutro.
Dejar en reposo durante 1 O minutos para que las capas
se separen. Escurrir y desechar la capa acuosa. Filtrar la
capa de hexano a travs de sulfato de sodio anhidro,
colocado en un pequeo trozo de algodn, en un ma-
traz de fondo redondo de 100 mL. Enjuagar el embudo
y el sulfato de sodio con unos pocos ml de n-hexano y
recoger los enjuagues en el mismo matraz. Evaporar el
hexano en el matraz en un evaporador rotatorio a 50
hasta sequedad. Agregar inmediatamente 2,0 ml de Di-
solvente de extraccin para disolver el residuo. Transferir
esta solucin a una columna de extraccin en fase s-
lida recientemente acondicionada que contenga relleno
de slice con una relacin entre la masa de sorbente y el
volumen de la columna de 500 mg a 2,8 ml o equiva-
lente, enjuagar el matraz de fondo redondo con 1,0 ml
de Disolvente de extraccin y transferir a la columna.
Eluir la columna con 2,0 ml de Disolvente de extraccin
y desechar esta fraccin. Eluir la columna con 7,0 ml
de Disolvente de extraccin y recoger el eluato en un
matraz adecuado. Colocar el matraz en un bao de
agua tibia mantenido a 42 y evaporar el disolvente con
ayuda de una corriente de nitrgeno. Agregar inmedia-
tamente 2,0 ml de acetonitrilo al residuo y usar la solu-
cin para inyectarla en el cromatgrafo.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Vita-
mina A, Mtodo 3, hasta "calcular el peso neto del con-
tenido de las Cpsulas". Transferir una porcin del con-
tenido de las Cpsulas, equivalente a 1 O g de
colecalciferol o ergocalciferol, a un matraz de 125 ml
con tapn y proceder segn se indica en Solucin estn-
dar, comenzando donde dice "Agregar 15,0 ml de
agua y 15,0 mL de Solucin de hidrxido de potasio."
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1 de 5 pm
Temperatura de la columna: 27"
Velocidad de flujo: 0,7 ml/min
Volumen de inyeccin: 15 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 4,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H.14) u ergoc.akiferol (C2sH110) e11 la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado= (r,./r,) x (C/Cu) x. 100
6834 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietticos
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de IJ So/ucion n1ucstra
r, = rea del pico de colecalc1ferol o ergocalciferol
a~ _-
::,:._;/ut.ion c:>trJa
C = e oncentracin rle FR Coleca!cifero! USP o ER
hgocalc1terol USP en la Solucion estndar
(,ug/ml)
C = concentracin nominal de coiecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44)
o ergocalciferol (C,8H440)
VITAMINA E, Mtodo 7
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Solucin de cido fosfrico (1 en 100) en
agua
Fase mvil: Metano! y Solucin A (19:1)
Solucin de aptitud del sistema: Preparar una solucin
de 0,65 mg/ml de ER Ergocalciferol USP en metanol.
Transferir 1,0 ml de esta solucin a un matraz volum-
trico de 100 ml que contenga 100 mg de ER Acetato
de Alfa Tocoferilo USP. Disolver en 30 ml de metano!,
con ayuda de ultrasonido si fuera necesario y diluir con
metanol a volumen. Almacenar esta solucin en un
refrigerador.
Solucin estndar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metanol
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 7. Transferir no menos
de 20 ml de esta solucin a un recipiente adecuado y
evaporar, si fuera necesario, al vaco a temperatura am-
biente hasta sequedad. Transferir el contenido del ma-
traz a un matraz volumtrico adecuado con ayuda de
metano! y diluir con metano! a volumen para obtener
una concentracin de 2 mg/ml de alfa tocoferol, ace-
tato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa
tocoferi!o.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin
estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para ergocal-
ciferol y acetato de alfa tocoferilo son aproximada-
mente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 12 entre ergocalciferol y
acetato de alta tocoferilo, Solucin de aptitud del
sistema
Factor de asimetra: Entre 0,8 y 1,2, Solucin de apti-
tud del s1stcrna
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndor y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (CnH10J ),
acetato de alfa tocoferilo (C 31 H123) o succinato cido
de alfa tocoferilo (CnH141) en la porcin de Cpsu-
las tomada.
Resultado = (rulr1) x (C/C,) x 100
lJSP 38
r" = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Soiuoon muestrn
11 = rea del pico de la forma de vitamina E
f.H:rl1nente de ia Soiuoon estondor
CI = conccntrJ(in rl0I f;ti1nrlf1r de Rpfprpncia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solucin
muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacion: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso2),
acetato de alfa tocoferilo (C1 Hs23) o succinato cido
de alfa tocoferilo (C nH141)
VITAMINA E, Mtodo 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina E (alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o succinato cido de alfa toco-
ferilo) en el procedimiento siguiente, usar la forma qu-
mica presente en la formulacin y el Estndar de Refe-
rencia USP pertinente. Usar material de vidrio con
proteccin actnica durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Mezclar 240 ml de metano! con 1 O ml de
agua, seguidos de 0,5 ml de cido fosfrico al 50% y
diluir con acetonitrilo hasta 1000 ml.
Solucin de aptitud del sistema: 2 mg/mL de ER Alfa
Tocoferol USP, dE; ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP y
de ER Succinato Acido de Alfa Tocoferilo USP en
metano!
Solucin estndar: 2 mg/ml de ER Alfa Tocoferol,USP,
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP o ER Succinato Acido
de Alfa Tocoferilo USP en metano!
Solucin de cido sulfrico metanlico 3 N: Mezclar
cuidadosamente cido sulfrico y metanol (9 en 100)
en un matraz volumtrico de 1 00 ml. [NOTA-Disolver
en una porcin de metanol, enfriar y luego diluir a vo-
lumen final.]
Solucin de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
1 O g de ascorbato de sodio y 5 g de pirogalol a un
matraz volumtrico de 1 00 mL. Agregar agua suficiente
para disolver. Agregar 1,7 ml de acido sulfrico y diluir
con a~ua a volumen.
Solucion de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 2, hasta "calcular el
peso neto del contenido de las Cpsulas." Transferir una
porcin del contenido de las Cpsulas, equivalente a
55 mg de vitamina E, a un recipiente con tapa de rosca
con recubrimiento interno de tefln. Agregar 0,5 g de
bicarbonato de sodio, 1,5 ml de Solucin de lecitina y
12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano, y dispersar en un
mezclador de vrtice. Agregar 6 mL de Solucin de as-
corbato de sodio-pirogalo!, agitar lentamente y dejar que
la solucin se desgasifique. Continuar agitando hasta
que haya cesado la emisin de gases y luego agitar
durante 12 minutm adicionales. Agregar 6 ml de dime-
til sulfxido, mezclar en un mezclador de vrtice hasta
formar una suspensin y agitar durante 12 minutos.
Agregar 6 ml de Solucin de cido sulfrico metanlico
3 N, mezclar en un mezclador de vrtice para formar
una suspensin y agitar durante 12 minutos. Agregar
12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano, mezclar en un mez-
clador de vrtice hasta formar una suspensin y agitar
durante 1 O minutos. Centrifugar durante 1 O minutos
para romper la emulsin y para que la capa de sobrena-
dante se torne transparente. Transferir un volumen de la
capa sobrenadante de 2,2,4-trimetilpentano a un ma-
traz volumPtricn ndecuado, donde el volumen de la
muestra retirada de la capa de 2,2,4-trimetilpentano y
el tamano del matraz volumtrico sean tales que la con-
centracin final de la )o/uoon muestra equivalga a la de
la Solucin estandar. Evaporar casi hasta sequedad, agre-
gar varios ml de metano! y evaporar el 2,2,4-trimetil-
pentano 1e111anente. Diluir con metano! a volumen.
USP 38 Suplemmtm
Sistema cromatogrfic.o
(Ver Cromatografo (621 ;, /\ptitud del Sis temo.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 4.6 mm x 25 cm: relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,5 mL;mm
Volumen de inyeccin: 25 ,LLL
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin
estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para succi-
nato cido de alfa tocoferilo, alfa tocoferol y acetato
de alfa tocoferilo son aproximadamente 0,6; 0,8 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 4,0 entre succinato cido
de alfa tocoterilo y alfa tocoferol; y no menos de 3,0
entre alfa tocoferol y acetato de alfa tocoferilo, Solu-
cin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C11Hs23) o succinato cido
de alfa tocoferilo (C,3Hs4s) en la porcin de Cpsu-
las tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma de vitamina E
pertinente de la Solucin estndar
C1 = concentracin del Estndar de Referencia USP
correspondiente en la Solucin estndar
(mg/mL)
Cu = concentracin nominal de la forma
correspondiente de vitamina E en la Solucin
muestra (mg/mL)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extraccin ini-
cial de 26,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano y el factor de
dilucin para cambiar el disolvente de 2,2,4-trimetil-
pentano a metanol para calcular la concentracin
nominal.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29H 5a02),
acetato de alfa tocoferilo (Ci1 Hs70,) o succinato cido
de alfa tocoferilo (C33Hs41)
VITAMINA E, Mtodo 3
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 : 1)
Fase mvil: Metanol, acetonitrilo y n-hexano (46,5:
46,5: 7,0)
Solucin estndar: 0,3 mg/mL de ER Alfa Tocoferol
USP en metanol
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Vita-
mina A, Mtodo 3, hasta "calcular el peso neto del con-
tenido de las Cpsulas." Transferir una porcin del con-
tenido de las Cpsulas, equivalente a 8,0 mg de alfa
tocoferol, a un matraz Erlenmeyer con tapn de vidrio.
Agregar 25,0 mL de agua, 25,0 mL de alcohol deshidra-
tado y 3,5 g de pellets de hidrxido de potasio. Agitar
durante 1 hora en un bao de agua mantenido a 55.
Enfriar y transferir con ayuda de un volumen mnimo de
agua a un embudo de separacin de 125 ml. Enjuagar
el matraz con 50 mL de n-hexano y agregar el enjuague
al embudo de separacin. Tapar, agitar vigorosamente
durante 60 segundm y dejdr que las CdJ..laS se separen.
Escurrir la capa acuosa en un segundo embudo de se-
paracin de 250 mL y repetir la extraccin rnn 50 mL
de n-hexano. Desechar la capa acuosa y combinar los
extractos de hexano. Lavar los extractos combinados
con 25 mL de agua, dejar que las capas se separen y
desechar la capa acuosa. Agregar 3 gotas de cido ac-
Diettico~ /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6835
tico glacictl y repetir el procedimiento de lavado dos
veces ms. Filtrar la capa de hexano lavada a travs de
sulfato de sodio anhidro en un matraz de fondo re-
dondo de 250 rnL. Enjuagar e! crnbudn y PI sulfatn dP
sodio con unos pocos mL de n-hexano y aqreqar el
enjuague a la solucin de hexano en el rnatrai. Colocar
el matraz en un bao de agua mantenido a so y eva-
porar la solucin de hexano con ayuda de un evapora-
dor rotatorio hasta sequedad. Agregar inmediatamente
25,0 mL de Diluyente y agitar por rotacin suave hasta
disolver el residuo.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf10 (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Temperatura de la columna: 40u
Velocidad de flujo: 3 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de vitamina E, como alfa toco-
ferol (CnHso02), en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de alfa tocoferol de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de alfa tocoferol de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de alfa tocoferol en la Solucin
estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de vitamina E como
alfa tocoferol en la Solucin muestra (mg/mL)
[NOTA-Calcular la cantidad nominal de vitamina E
como alfa tocoferol (C29Hso2), multiplicando el conte-
nido de acetato de alfa tocoferilo (C31Hs23) o succi-
nato cido de alfa tocoferilo (CnH141), en mg/Cp-
sula, por el factor 0,91 0,81, respectivamente.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina E como alfa tocoferol (C29Hso02),
acetato de alfa tocoferilo (C11 Hs2i) o succinato cido
de alfa tocoferilo (C33Hs4s)
FITONADIONA
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metanol y agua (19:1)
Solucin madre del estndar: 200 g/mL de ER Fito-
nadiona USP en metano!. Disolver con ayuda de ultra-
sonido si fuera necesario.
Solucin de aptitud del sistema: 0,65 mg/mL de ER
Acetato de Alfa Tocoferilo USP y 20 g/mL de ER Fito-
nadiona USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con metanol. [NOTA-Disolver ER Acetato de Alfa
Tocoferilo USP en una pmcin de metanol, agregar la
Solucin madre del estndar y luego diluir con metanol a
volumen.]
Solucin estndar: 20 g/mL de ER Fitonadiona USP, a
partir de Solucin madre del estndar diluida con
metano!
Solucin muestra: Transferir no menos de 20 mL de la
solucin reservada segn se especifica en las instruccio-
nes de la Solucin muestra en Vitamina A, Mtodo 7 a un
recipiente adecuado y evaporar al vaco, si fuera necesa-
rio, a temperatura ambiente hasta sequedad. Transferir
el contenido del matraz a un matraz volumtrico ade-
cuado con ayuda de metano! y diluir con metano! a
volumen para obtener una concentracin de 20 g/mL
de fitonadiona.
6836 Vitaminas Oleosolubles e Hidrmoluhles / '\uplementos Oipti?ticos
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromntogmfw 162 l ), Aptitud di'! Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: lJV 254 nm
Columna: 8 mm x 1 O cm; relleno L1 de 5 m
Velocidad de flujo: 2 ml/rnin
Volumen de inyeccin: 100 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin de aptitud del sistema y Solucin
estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para acetato
de alfa tocoferilo y fitonadiona son aproximadamente
0,68 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 5 entre acetato de alfa to-
coferilo y fitonadiona, Solucin de aptitud del sistema
Desviacion estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y ~olucion muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de fitonadiona (C31H 4602), en la
porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de fitonadiona de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de fitonadiona de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Fitonadiona USP en la
Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de fitonadiona en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de fitonadiona (C31 H4602)
BETA (AROTENO
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin de hidrxido de potasio: Disolver 58,8 g de
hidrxido de potasio en 50 ml de agua.
Solucin de yodo: Transferir 1 O mg de yodo a un ma-
traz volumtrico de 100 ml. Disolver en ciclohexano y
diluir con ciclohexano a volumen. Diluir 1 O ml de esta
solucin con ciclohexano hasta 100 ml. [NOTA-Prepa-
rar esta solucin en el da de su uso.]
Solucin muestra A (para preparaciones que contengan
beta caroteno en soluciones oleosas): Proceder segn
se indica en Vitamina A, Mtodo 7, excepto que se debe
usar ciclohexano en lugar de n-hexano como disolvente
de extraccin y diluir los extractos filtrados con ciclohe-
xano, hasta obtener una concentracin de 2 g/ml de
beta caroteno.
Solucin muestra B (para preparaciones que contengan
beta caroteno en polvo seco): Retirar el contenido de
no menos de 20 Cpsulas cortando para abrir las Cp-
sulas. Mezclar y determinar el peso del contenido.
Transferir una cantidad del contenido de las Cpsulas,
equivalente a 2 mg de beta caroteno, a un matraz de
saponificacin de 500 ml. Agregar 100 ml de alcohol,
6 ml de Solucin de hidrxido de potasio y una barra
mezcladora magntica. Acoplar un condensador de aire
al matraz y calentar bajo reflujo durante 45 minutos
mezclando constantemente. Enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 1 70 ml de ter de petrleo y mezclar
durante 30 minutos. Transferir cuantitativamente el con-
tenido del matraz a un embudo de separacin de
500 ml con porciones de ter de petrleo. Dejar que
las capas se separen durante 5-1 O minutos y transferir
la capa orgnica superior a un matraz volumtrico de
500 ml. Transferir la capa acuosa inferior al matraz de
saponificacin. Agregar 1 70 ml de ter de petrleo y
mezclar durante 20 minutos adicionales. Transferir
cuantitativamente el contenido del matraz de saponifi-
cacin al embudo de separacin con ayuda de porcio-
USP 38
nes de ter de petrleo. Dejar que las capas se separen
dur<:mte 1 O minutos. Escurrir la capa acuosa inferior y
desechar. Transferir la capa orgnica al matraz volum-
trico que contc11gu iu capa orgnica previamente reco-
gida. Fnju<HJilr PI embudo de separacin con porciones
pequenas de eter de petrleo y transferir los lavados al
matraz volumtrico. Diluir los extractos etreos con ter
de petrleo a volumen. Agregar 3 g de sulfato de sodio
anhidro, agitar y dejar que sedimente. Transferir cuanti-
tativamente un volumen de esta solucin, equivalente a
1 00 g de beta caroteno, a un matraz volumtrico de
50 ml. Evaporar bajo una corriente de nitrgeno hasta
sequedad y agregar ciclohexano inmediatamente. Agre-
gar 2 ml de Solucin de yodo y calentar durante 15 mi-
nutos en un bao de agua mantenido a 65. Enfriar
rpidamente y diluir con ciclohexano a volumen.
Condiciones instrumentales
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Vis
Longitud de onda analtica: 452 nm
Blanco: Ciclohexano
Anlisis
Muestras: Solucin muestra A o Solucin muestra B
Determinar la absorbancia contra el Blanco. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de beta caroteno
(CoHs6), en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (Au!F) x (100/Cu)
Au = absorbancia de la Solucin muestra A o la
Solucin muestra B
F = absortividad de beta caroteno a 452 nm, 223
Cu = concentracin nominal de beta caroteno en la
Solucin muestra A o la Solucin muestra B
(mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
, declarad9 de beta caroteno (CoH16)
ACIDO ASCORBICO
Solucin muestra: Pesar no menos de 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir el contenido a un
vaso de precipitados de 100 ml. Retirar cualquier con-
tenido adherido a las cubiertas de las cpsulas vacas
lavando, si fuera necesario, con varias porciones de ter.
Desechar los lavados y secar las cubiertas de las Cpsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a ter. Pesar las cubiertas de las
Cpsulas vacas en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto promedio por Cpsula. Transferir una
porcion del contenido de las Cpsulas, equivalente a
100 mg de cido ascrbico, a un matraz volumtrico de
200 ml y agregar 75 ml de cido metafosfrico-cido
actico SR. Tapar el matraz y agitar mecnicamente du-
rarite 30 minutos. Diluir con agua a volumen. Transferir
una porcin de la solucin a un tubo de centrfuga y
centrifugar hasta obtener un sobrenadante transpa-
rente. Pipetear y transferir 4,0 ml de esta solucion a un
matraz Erlenmeyer de 50 ml, y agregar 5 ml de cido
metafosfrico-cido actico SR.
Anlisis: Valorar con solucin estndar de diclorofeno-
1-indofenol SV hasta un color rosado que persista du-
rante al menos 5 segundos. Corregir por el volumen de
solucin estndar de diclorofenol-indofenol consumido
por una mezcla de 5,5 ml de cido metafosfrico-cido
actico SR y 15 ml de agua. A partir del equivalente de
cido ascrbico de la solucin estndar de diclorofeno-
1-indofenol, calcular el contenido de cido ascrbico en
cada Cpsula.
Criterio5 de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cido ascrbico (CHs06) ,
ASCORBATO DE CALCIO: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C .. H ,.,Ca012 2H 20)
USP 38 SuplemPntos Dietticos /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6837
AscORBATO DE SODIO: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (CH. !'Ja O,:,)
BtOTINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Mezclar 85 ml de acetonitrilo, 1 g de per-
clorato de sodio y 1 ml de cido fosfrico, y diluir con
agua hasta 1 000 mL
Solucin madre del estndar: 0,333 mg/ml de ER Bio-
tina USP en dimetil sulfxido
Solucin estndar: 5 g/ml de ER Biotina USP, que se
prepara diluyendo Solucin madre del estndar en, agua
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 1 mg de biotina, a un matraz
volumtrico de 200 mL Agregar 3 ml de dimetil sulf-
xido y agitar por rotacin suave para humedecer el
contenido. Colocar el matraz en un bao de agua a
60-70 durante 5 minutos. Someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos, diluir con agua a volumen y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 200 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L7 de 3 m
Velocidad de flujo: 1,2 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 00 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de biotina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de biotina
(C10H16N203S) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = (ru! r1) x ( Cs/ Cu) x 100
ru = rea del pico de biotina de la Solucin muestra
r, = rea del pico de biotina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Biotina USP en la Solucin
estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de biotina en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (CioH16N203S)
BIOTINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan segn
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados segn se describe en este
procedimiento.
Solucin madre del estndar: 50 g/ml de ER Biotina
USP en alcohol al 50%. Almacenar esta solucin en un
refrigerador.
Solucin estndar: O, 1 ng/ml de ER Biotina USP en
agua, que se prepara diluyendo Solucin madre del es-
tandar en agua en el da de la valoracin. , ----------------
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "c.alc.ular el peso neto ..iromedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 1 00 g de biotina, a un matraz
volumtrico de 200 ml. Agregar 3 ml de alcohol al
50% y agitar por rotacin suave hasta humedecer el
contenido. Calentar el matraz en un bao de agua a
60-70 durante 5 minutos. Someter a ultrasonido du-
rante 5 minutos, diluir con alcohol al 50(Yo a volumen y
filtrar. Diluir un volumen del filtrado cuantitativamente
y, si fuera necesario en diluciones sucesivas, con agua
hasta obtenu una ~nlurin rnn 11nil ronrentrarin rle
O, 1 ng/ml.
Solucion de hidrolizado cido de casena: MeLclar
1 00 g de casena exenta de vitamina con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1 000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 O. Fil-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 ml de agua. Calentar a
70u-80 y agregar cido clorhdrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los slidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 O.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 1 00 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de pantotenato de calcio: 1 O g/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 50%. Almacenar en un
refrigerador.
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina: 20
g/ml de riboflavina y 1 O g/ml de clorhidrato de tia-
mina en cido actico 0,02 N. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador y proteger de la luz.
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O g/ml de cido p-aminoben-
zoico, 50 g/ml de niacina y 40 g/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 500 mL Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 mL Agregar 5 gotas de cido clorhdrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 7 y ajustar
con hidrxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 1
Solucin de hidrolizado cido de casena -------- 25 ml
Solucin de cislind-lr iptldno 25 ml ~
Solucin de polisorbato 8Q_______ ___ _QL25 ml __
--
Dextrosa anhidra ------------------------------ _}Q_g_ __
Acetato de sodio anhidro 5 a
Solucin de adenina-auanina---uracilo
~~--
5 ml
Solucin de pantotenato d(.>~l.tcici 5 ml
Solucin de riboflavina clorhidrato de tiamina 5 ml 1
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina- 5 ml
clorhidrato de piridoxi11d
6838 Vitaminas OIPmnlt1hlPs P HidrosnlublPs /Suplementos Dietticos
Tabla 1 (Cunl!nuacion)
~-:-----------~-~--~----
()luc1011. >dl111d A
----~-
1 Solucron '"lrna ~
Cultivo madn' de Lactobadllus pfantarum. Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 mL de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio onhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un bailo de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O mL de la
solucin caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121" durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfren en posicin
vertical. Inocular tres o ms de los tubos, sembrando
por puncin un cultivo puro de Lactobacillus plantarum, 1
incubanrlo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30 y 37'" mantenida termostticamente con un
margen de 0,Y. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por puncin del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el /ncu/o
si el cultivo tiene ms de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que conten-
gan 0,5 ng de biotina a cada una de las series de tubos
de ensayo que contengan 5,0 mL de Solucin madre de
medio basal. Tapar los tubos con algodn, esterilizar en
un autoclave a 121 durante 15 minutos y enfriar.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de clulas del Cultivo madre de Lactobacillus plan-
tarum a un tubo estril que contenga 1 O mL de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30 y 37 mantenida termostti-
camente con un margen de 0,5. La suspensin de
clulas as obtenida es el !nculo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solucin
estndar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos vacos
similares 5,0 mL de Solucin madre de medio basal y
dlJUd ~uficier1le para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volmenes de la Solucin muestra correspondien-
tes a tres o ms de los niveles especificados para la
Solucin estndar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucin madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estndar y mues-
tra juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o seccin de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la conta-
minacin y esterilizar en un autoclave a 121 durante
5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de lnculo a cada
tubo, excepto a dos de los cuatro que no contienen
Solucin estndar (los blancos no inoculados). Incubar
los tubm a una temperatura entre 30 y 37 mante-
nida termostticamente con un margen de 0,5 hasta
que, despus de 16-24 horas de incubacin, no se
presente un aumento significativo de turbidez en los
tubos que contengan el nivel ms alto de Estndar du-
rante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
rnar1era. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a una celda de espectrofotmetro. Colocar la celda en
1rn e~pertrofotmetro ajustado a una longitud de onda
especfica de 540-660 nm y leer la transmitancia
cuando se alcance un estado estacionario. El estado
estacionario se observa unos pocos segundos despus
de la agitacin cuando la lectura del galvanmetro se
; ATCC N 8014 f'<; Jrlccuarlo Fc:;tJ c0p;1 .:;;p rnnnra antPrinrmente como Lac-
tobaci//11\ urohit1(!)U\ 1 7-5
USP 38
mantenga constante durante 30 segundos o ms. Per-
5 rnl
mitir aproximadamenk el 111i-,111u i11tervalo Je tiempo
para la lectura en cada tubo.
5 rnl Con !J trJn~rr1tt.HH__d aju:'.>tJdtJ a 1,00 para el blanco no
inor1 il;irlo IPPr lri tr;insmitincia del blanco inoculado.
Con la tra'nsrnitanc1a ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de c.aJa uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
cin con un microorganismo extrao, no tornar en
cuenta el resultado de la valoracin.
Clculo: Preparar una curva estndar de concentracin-
respuesta segn se indica a continuacin. Para cada ni-
vel del Estndar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de la transrnitancia (L:s)
corno la diferencia, y= 2,00 - L:1. Graficar esta res-
puesta en la ordenada del papel rnilimetrado en funcin
del logaritmo de los mL de la Solucin estndar por
tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada una es-
cala aritmtica o logartmica, la que proporcione la me-
jor aproximacin a una lnea recta. Trazar la recta o la
curva o de regresin que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - L:u, sumando las dos
transrnitancias (L:u) para cada nivel de la Solucin mues-
tra. Leer, a partir de la curva estndar, el logaritmo del
volumen de la Solucin estndar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo de los puntos extremos graficados para el Es-
tndar. Restar de cada logaritmo as obtenido el loga-
ritmo del volumen, en rnL, de la Solucin muestra para
obtener la diferencia, X, de cada nivel de dosificacin.
Promediar los valores de X para cada uno_de los tres o
ms niveles de dosificacin para obtener X, que es
igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la Solu-
cin muestra. Determinar la cantidad, en g, de biotina
(C10H1GN201S) en la porcin de Cpsulas tornada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de g de biotina que se supuso
estaban presentes en la porcin de Cpsulas
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
biotina (C10H,"N10iS) en la porcin de Cpsulas
tornada:
Resultado= rcantilog M)/NJ X 100
N = cantidad nominal de biotina en la porcin de
Cpsulas tornada (~tg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
cin por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Va/oraciones
Biolgicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los Lmites de
la Potencia). Si las dos determinaciones difieren en ms
de 0,08, realizar una o ms determinaciones adiciona-
les. A partir de la media de dm o ms valores de M que
no difieran en ms de O, 15, calcular la potencia media
de la preparacin que se est valorando. .
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de biotina (C10Hr,,N201S)
CIANOCOBALAMINA, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Fase mvil: Metano! y agua (7.1 3) .
Solucin madre del estndar: 1 O g/rnL de ER Ciano-
cobalarnina USP en agua. [NOTA--Almacenar esta, solu-
cin madre en un lugar oscuro y desechar despues de 1
semana.] .
Solucin estndar: 1 g/mL de ER Cia,nocob~la~ina
USP, a partir de Solucin madre del estandar diluida con
agua
USP 38 Suplementos Diellicos / V1lamina-, Olemolubles e Hidrosolubles 6839
Solucin muestra: Pesar no meno'.> de 30 Cpsulas en
un frasco de pes0ria tilrario Ahrir l;is Cpsulas, sin per-
der material de lil rnhierta y transferir el contenido a un
vaso de precipit;idm de 100 ml. Retirar, cualquier ~on
tenido adherido J las cubiertas de las capsulas vac1as
lavando '.>i fuera 11ece>ario, Lll varias porciones de eter.
Desech~r los lavadm y secar las cubiertas de las Cpsu-
las con ayuda de una corriente de aire seco hasta que
ya no se perciba olor a ter. Pesar las cubiertas de las
Cpsulas vaclas en un frasco de pesada tarado y calcu-
lar el peso neto promedio por S:psula. Transferir una
porcion del contenido de las Capsulas, equivalente a
100 g de cianocobalamina, a un matraz de 250 ml.
Agregar cuantitativamente 100,0 ml de agua y extraer
cuidadosamente durante 2 minutos. Filtrar 1 O ml del
extracto y u'.>ar el filtrado transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: 550 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L1 de 5 ~tm
Velocidad de flujo: 0,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 200 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de cianocobalamina. Cal-
cular el porcentaje de la cantidad declarada de ciano-
cobalamina (C6iHssCoN1414P) en la porcin de Cp-
sulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de cianocobalamina de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de cianocobalamina de la
Solucin estndar
C = concentracin de ER Cianocobalamina USP en
la Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de cianocobalamina en
la Solucon muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-1 50,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C63HssCoN1414P)
CIANOCOBALAMINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin madre del estndar: 1,0 g/ml de ER Ciano-
cobalamina USP en alcohol al 25%. Almacenar en un
refrigerador.
Solucin estndar: Diluir un volumen adecuado de So-
lucin madre del estndar con agua hasta un volumen
medido tal que, despus del periodo de incubacin se-
gn se describe en el Anlisis, la diferencia en la trans-
mitancia entre el blanco inoculado y el nivel de 5,0 ml
de Solucin estndar sea no menos que la correspon-
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
clulas. Esta concentrJcin por lo general est entre
0,01 y 0,04 ng/mL de la Solucin estndar. Preparar
esta solucin en el momento de su uso para cada
valoracin.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en cido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 1,0 g de cianocobalamina, a
un vaso apropiado que contenga, por cada g del conte-
nido de las Cpsulas tomado, 25 ml de una solucin de
extraccin acuosa preparada justo antes de su uso que
contiene 12, 9 m9/ml de fosfato dibsico de sodio,
11,0 mg/ml de acido ctrico anhidro y 1 O rng/rnl de
metabisulfito de sodio. Autoclavar la mezcla a 121 du-
rante 1 O minutos. Dejar que sedimente cualquier part-
cula del extracto sin disolver y filtrar o centrifugar, si
fuera 11ec.e'.>ar10. LJilu1r una al1c.uota de la solucin trans-
[Jarente con ayua hasta obtener una solucin final que
contenga una actividad de vitamina Bu equivalente
aproxirnadamPnte a la de la Solucin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Preparar se-
gn se 1nd1ca en f'antotenato de Calcio, Mtodo 2.
Solucin de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Preparar segn
se indica en Pantotenato de Calcio, Mtodo 2.
Solucin de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 rnl de agua, calentar a 70, agregar 6,0 ml de
hidrxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobsico
de potasio y 1 O g de fosfato di bsico de potasio en
agua para obtener 200 rnl, y agregar 2 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar esta solucin bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml. Agre_gar 2 gotas de cido clorhdrico.
Almacenar esta solucion bajo tolueno.
Solucin de polisorbato 80: Disolver 20 g de polisor-
bato 80 en alcohol para obtener 200 ml. Almacenar en
un refrigerador.
Solucin vitamnica A: Disolver 1 O mg de riboflavina,
1 O mg de clorhidrato de tiamina, 100 g de biotina y
20 mg de niacina en cido actico 0,02 N para obtener
400 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion vitamnica B: Disolver 20 mg de cido p-ami-
nobenzoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de
clorhidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de piri-
doxal, 8 m9. de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg
de cido folico en una mezcla de agua y alcohol neu-
tralizado (3:1) para obtener 400 ml. Almacenar en un
refrigerador y proteger de la luz.
Solucin madre de medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente frmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga los
mismos ingredientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya segn se indica en el etiquetado, produzca un me-
dio comparable al obtenido de la frmula provista en
este procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado en la Tabla
;:, disolviendo cuidadosamente Cistina y Triptfano en
Acido clorhdrico antes de agregar las siguientes ocho
soluciones a la solucin resultante. Agregar 1,00 ml de
agua y disolver Dextrosa, Acetato de sodio y Acido as-
crbico. Filtrar, si fuera necesario. Agregar la Solucin
de polisorbato 80, ajustar con hidrxido de sodio 1 N a
un pH de 5,5-6,0 y diluir con Agua Purificada hasta
250 ml.
Tabla 2
~--------------- ------------------ - -------
>--L-~C_is~ti_n_a- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - ---~-~0~1~=----'
L-Triotfano O OS a
cido clohdrico 1 N 1 O ml
~i.911_de _a_~11_ir1-guanin_a-
__L_ir_ac_il_o________ +---~S~m~L~---1
Solucin de xantina S mL
Solucin vitamnica A 10 ml
Soluuo11 v1tam1n1ca B 10 ml
Solucin salina A S ml
Soiuc1on salina B S ml
Solucin de aspdraqina S ml
25 ml
Dextrosa anhidra 10 n
~~_ta_l_()_cJe sodio anhigrQ__ so
6840 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dieteticm
Tabla 2 (Con11nuuuon)
Solucion de poltsorbdto 80
Preparacin de jugo de tomate: CentrifugJr jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
cin analtico en el sobrenadante y pasar, con ayuda de
presin reducida, a travs de una capa del coadyuvante
de filtracin. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener.
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bao
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo: [NOTA-Se puede usar una mezcla
deshidratada que contenga los mismos i~gredient~s
siempre que, cuando se reconstituya s~gun se rndrca en
el etiquetado, produzca un medro equrvale.nt~ al obte~
nido de la frmula provista en este procedrmrento.] Di-
solver 0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de pep-
tona seca, 1,0 g de rlextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato
monobsico de potasio en 60-70 mL de agua. Agregar
1 O mL de Preparacin de)ugo de ton:at~ }'. 1 mL de Solu-
cin de polisorbato 80. Austar con hrdroxrdo de sodro
1 N a un pH de 6,8 y diluir con agua h~;;ta 100 ml.
Colocar porciones de 1 O mL de la solucron en tubos de
ensayo y tapar con algodn. Esterilizar los tubos y su
contenido en un autoclave a 121 durante 15 mrnutos.
Enfriar tan rpido como sea posible para evitar. la for-
macin de color que resulta del sobrecalentamiento del
medio.
Medio de suspensin: Diluir un volumen medi~o de
Solucin madre de medio basal con un volumen rgual de
agua. Colocar porciones de 1 O mL del medio dilu.ido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar segn se rndrca en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobaci/fus Jeichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 100 mL de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un bao de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de. 1 O mL de
la solucin caliente en tubos de ensayo, cubrrr los tu~
bos esterilizar en un autoclave a 121 durante 15 mr-
nut~s y dejar que los tubos se enfren en posicin verti-
cal. Inocular tres o ms de los tubos, sembrando por
puncin un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii.2
[NOTA-Antes de usar un cultivo reci~~teme~te prepa-
rado por primera vez en esta valoracron, realizar no me-
nos de 1 O transferencias sucesivas del cultrvo en un pe-
riodo de 2 semanas.] Incubar durante 16-24 horas a, .
una temperatura entre 30'' y 40 mantenida termostatr-
camente con un margen de 0,5. Almacenar en un
refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por puncin al menos ~res
veces por semana y no usarlos para preparar el. Inoculo
si tienen ms de 4 das de preparados. La a~trvrdad del
microorganismo se puede increm~ntar med~ante trans-
ferencias de una o dos veces al dra, del cultrvo por
puncin, hasta el punto en que _se pueda observar una
turbidez evidente en el Inoculo lrqurdo 2-4 horas des-
pus de la inoculacin. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva d~ '.espuesta
adecuada y puede conducir a resultados err~trcos.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensron conge-
lada de Lactobacillus leichmannii como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una. transf.e-
rencia de clulas del Cultivo madre de Lactobaollus le1ch-
mannii a dos tubos estriles que contengan 1 O mL de
Medio de cultivo cada uno. Incubar estos cultivos du-
rante 16-24 horas a una temperatura entre 30 y 40
mantenida termostticamente con un margen de 0,5.
Centrifugar los cultivos bajo condiciones aspticas y de-
cantar el sobrenada11te. Suspender las clulas del cultivo
1Se pueden obtener cullivm puros de luc tobaullus le1chmannii (listados como
Lactobacillus delbrueck11) como N" 7830 e11 Al CC. 10801 Univers1ty Blvd., Ma-
nassas, VA 201 l 0-2209 (wvvvv.dtcc .urq)
USP 38
en 5 mL de Medio de ;uspensin estril y mezclar.
U<>ando Medio de suspensin estril, ajustar el v?lumen
de manera que una dilucion 1 en 20 en soluc1on salrna
SR produzca una t;ansmitancia de! 70% cuando se lee
en un espectrofotometro adecuado austarlo a una lon-
gitud de onda de 530 nm, equipado. ~on u.na celda de
1 O mm y ledo contra el set de solucron. salr.f'.a SR a una
transmitancia del 1 00%. Preparar una drlucron 1 en 400
de la suspensin ajustada usando ~plucin madre de me-
dio basal estril. [NOTA--Esta drlucron se puede alterar,
cuando sea necesario, para obtener I~ respue,sta de .
prueba deseada.] La suspensin de celulas asr obtenida
es el lnculo.
Calibracin del espectrofotmetro: Revis~r peridica-
mente la longitud de onda del espectrofotometro,
usando una celda de longitud de onda est~ndar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier .Prueba 0
calibrar el espectrofotmetro con agua ~ara frar el O Yo
y el 100% de transmitancia, con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba a
diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y a
trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de,
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio .dur? y ciernas
material de vidrio necesario, se deben lrmprar metrcu-
losamente usando mtodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250 durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solucin estndar.
Agregar a cada uno de estos tut;>?s y a cuatro tubos
vacos similares 5,0 mL de Soluoon madre de med/O
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml. .
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solllcin mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 mL de Soluc1on madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O mL. Co-
locar un set completo de tubos de Estndar y .muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplrcado en
una segunda gradilla o seccin de una gradilla, prefe-
rentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminacin bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura ~n
no ms de 1 O minutos precalentando el autocla':'e sr
fuera necesario. Enfriar tan rpido como sea posrble
para evitar la formacin de color que resulta del sobre-
calentamiento del medio. Tomar precauciones para
mantener la uniformidad de las condiciones de esterili-
zacin y enfriamiento durante toda .la valoracin, de-
bido a que colocar los tubos demasiado cerca o sobre-
cargar el autoclave puede ocasionar variaciones en la
velocidad de calentamiento.
Agregar aspticamente 0,5 mL de lnculo a cada tubo
as preparado, excepto a dos de los cuatro gue no
contienen Solucin estndar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos? .una temperatura entre 30 y
40'~ mantenida termostat1camente con un margen de
0,5 , durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80 durante 5 minutos. Enfriar a tem-
peratura ambiente. Despus de agitar su contenido,
leer la trans.rnitancia a 530 r1m cuando se alcance un
estado estacionario. El estado estacionario se observa
unos pocos segundos despus de la agitacin cuando
la lectura se mantenga constante duran.te 30. segundos
o ms. Permitir aproximadamente el mrsmo intervalo
de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para ~I blanco no
inoculado leer la transmitancia del blanco inoculado.
Si la difer~ncia es mayor de 5% o si hay evid~ncia de
contaminacin con un microorganismo e~trano, no to-
mar en cuenta el resultado de la valoracron.
USP 38 Suplementos Dietticos / Vitaminl\ OIPomlublP~ P Hidrosolubles 6841
Con la transmitancia ajustada a 1 00% para el blanco no
inoculado, leer la transmitmcia de cada uno de los
tubos restantes. No tomar en cuenta los resultados de
la valoracin si la pendiente de la curvJ estndar in
dica un problema ron la -;en-;ibilirfaci
Clculo: Preparar una curva estndar de concentracin-
respuesta mediante el siguiente procedimiento. Deter-
minar y reemplazar cualquier transmitancia individual
aberrante. Para cada nivel del Estndar, calcular la res-
puesta a partir de la suma de los valores duplicados de
las transmitancias (Es) como la diferencia, y = 2,00 - 2:s.
Graficar esta respuesta en la ordenada del papel milime-
trado en funcin del logaritmo de los mL de la Solucin
estndar por tubo sobre la abscisa, usando para la orde-
nada una escala aritmtica o logartmica, la que propor-
cione la mejor aproximacin a una lnea recta. Trazar la
recta o la curva de regresin que mejor se ajuste a los
puntos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - L11, sumando las dos
transmitancias (Lu) para cada nivel de la Solucin mues-
tra. Leer, a partir de la curva estndar, el logaritmo del
volumen de la Solucin estndar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo entre los puntos extremos graficados para el
Estndar. Restar de cada logaritmo as obtenido el lo-
garitmo del volumen, en mL, de la Solucin muestra
para obtener la diferencia, X, de cada nivel de dosifica-
cin. Promediar los valores de X para cada uno de los
tres o ms niveles de dosificacin para obtener X, que
es igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la
Solucin muestra.
Determinar la cantidad, en g, de cianocobalamina
(C6,HssCoN1414P) en la porcin de Cpsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de g de cianocobalamina que se
supuso estaban presentes en la porcin de
Capsulas tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalamina (C6,HssCoN1414P) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 1 00
N = cantidad nominal de cianocobalamina en la
porcin de Cpsulas tomada (g)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
cin por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritm_s:is de las potencias M es no ms de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Actividad de Vitamina 812 en Di-
seo y Anlisis de Va/oraciones Biolgicas (111 ), El Inter-
valo de Confianza y los Lmites de la Potencia). Si las dos
determinaciones difieren en ms de 0,08, realizar una o
ms determinaciones adicionales. A partir de la media
de dos o ms valores de M que no difieran en ms de
O, 15, calcular la potencia media de la preparacin que
se est valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-1 50,0% de la cantidad
, declar9da de cianocobalamina (C,;HssCoN1414P)
ACIDO Fouco, Mtodo 7
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo A: Solucin de hidrxido de tetrabutilamonio
al 25% en metano!
Reactivo B: Transferir 5,0 g de cido pentlico a un
matraz volumtrico de 50 mL. Disolver y diluir con hi-
drxido de sodio 1 N a volumen, usando ultrasonido si
fuera necesario.
Fase mvil: 2 g de fosfato monobsico de potasio en
650 mL de agua. Agregar 12,0 mL de Reactivo A,
7,0 mL de cido fosfrico 3 N y 240 mL de metanol.
Enfriar a temperatura ambiente, ajustar con cido fosf-
rico o amonaco SR a un pH de 7,0, diluir con agua
hasta 1000 mL y filtrar. Volver a revisar el pH antes de
su uso agregando agua o metanol a la Fase mvil pre-
parada para obtener una separacin de la lnea base
entre el cido flico y el estndar interno. El pH se
puede incrementar hasta 7, 1S para obtener una mejor
separacin. [NOTA-El contenido de metanol y agua se
puede variar (entre 1 % y 3%).]
Solucin de estndar interno: Transferir 40 mg de me-
tilparabeno a un matraz volumtrico de 1000 mL y
agregar 220 mL de metanol para disolver. Disolver
2,0 g de fosfato monobsico de potasio en 300 mL de
agua en otro vaso de precipitados, transferir cuantitati-
vamente esta solucin al matraz que contenga la solu-
cin de metilparabeno y agregar 300 mL adicionales de
a~ua. Agregar 19 mL de Reactivo A, 7 mL de cido fos-
forico 3 N y 30 mL de Reactivo B. Ajustar con amonaco
SR a un pH de 9,8, burbujear nitrgeno a travs de la
solucin durante 30 minutos, diluir con agua a volumen
y mezclar. ,
Solucin estndar: 0,016 mg/mL de ER Acido Flico
USP en Solucin de estndar interno ,
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una cantidad del contenido de las
Cpsulas a un tubo de centrfu~a adecuado y agregar
un volumen de Solucin de estandar interno hasta obte-
ner una concentracin nominal de 0,016 mg/mL de
cido flico. Agitar mecnicamente durante 1 O minutos
y centrifugar. Filtrar una porcin del sobrenadante
transparente y usar el filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Volumen de inyeccin: 15 .L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para cido
flico y metilparabeno son aproximadamente 0,8 y
1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de cido flico y metilpa-
rabeno. Calcular el porcentaje de la cantidad decla-
rada de cido flico (C19H19N106) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Res u Ita do = ( R11! R1) x ( Cs/ Cu) x 1 00
Ru = cociente entre las reas de los picos de cido
flico y metilparabeno de la Solucin muestra
Rs = cociente entre las reas de los picos de cido
flico y metilparabeno de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER cido Flico USP en la
Solucin estndar (g/mL)
C = concentracin nominal de cido flico en la
Solucin muestra (g/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
, declar9da de cido flico (CcH 19N10o)
ACIDO FOLICO, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: 60 g/mL de hidrxido de amonio
Fase mvil: Transferir 0,4 mL de trietilamina, 15,0 mL
de cido actirn glarial y 3 50 mi cie metano! a un ma-
traz volumtrico de 2000 ml, y diluir con 1-hexanosul-
fonato de sodio 0,008 M a volumen.
6842 Vitaminas OIPosoluhle<; P Hirlrmoliihle5 / Suplementos Dietr:'tirns
Solucin madre del estndar: 60 g/ml de ER cido
~ol1co U':>P en [)1/uyPnte. Preparar esta solucin en el da
de su U'>.
Sol11dn estndar: f\i10zclJr 5,0 ml de Solucin madre
del estndar con 10,0 ml de una mezcla de metano! v
cido actico glacial (9: 1), y 30,0 ml de una mezcla de
metano! y etilenglicol (1: 1). Agitar durante 15 minutos
en un bao de agua mantenido a 60' y enfriar. Filtrar,
desechando los primeros ml del filtrado. . cin de esta solucin con agua hasta obtener una con-
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a O, 3 mg de cido flico, a un
matraL de 125 rnl con tapn. Agregar 10,0 ml de una
mezcla de metano! y cido actico glacial (9:1 ), y
30,0 ml de una mezcla de metano! y etilenglicol (1 :1 ).
Agitar durante 15 minutos en un bao de agua mante-
nido a 60 y enfriar. Filtrar, desechando los primeros
ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografla (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 ~tl
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de cido flico
(C19H19N106) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru!r1) x (C,/Cu) x 100
ru = rea del pico de cido flico de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de cido flico de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Acido Flico USP en la
Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de cido flico en la
Solucin muestra (g/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de cido flico (C10H19N106)
DEXPANTENOL o PANTENOL
[NOTA-El siguiente procedimiento tambin se aplica a la
determinacin del componente dextrgiro de pantenol
racmico en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan segn
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados segn se describe en este
procedimiento.
Solucin madre del estndar: 800 g/ml de ER Dex-
pantenol USP o 1600 pg/ml de ER Pantenol Racmico
USP en agua. Almacenar en un refrigerador, proteger
de la luz y usar dentro de los 30 das.
Solucin estndar: En el da de la valoracin, preparar
una dilucin de 1,2 g/ml de dexpantenol o 2,4 g/ml
de pantenol, a partir de Solucin madre del estndar di-
luida con agua.
Solucin muestra; PescJr 110 rnenos de 30 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der material de la cubierta y transferir tanto como sea
posible el contenido a un vaso de precipitados. Retirar
cualquier contenido adherido a las cubiertas de las Cp-
sulas vacas lavando con varias porciones de ter. Dese-
USP 38
char los lavados y secar las cubiertas de las Capsulas
con ayuda de una corriente de aire seco hasta que ya
no se perciba olor a ter. Pesar las cubiertas de las Cp-
sulas vacas en un fra~co de pc:.JdJ tarado y culcular el
peso neto promedio por Cp<;1da f)i,olvPr 1ina porcin
del contenido de las Capsulas, nominalmente equiva-
lente a 1,2 mg de dexpantenol o 2,4 mg de pantenol,
en 100,0 ml de agua. Diluir cuantitativamente una por-
centracin de 1,2 g/ml de dexpantenol o 2,4 g/ml
de pantenol.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
100 g de casena exenta de vitamina con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 ml de agua,
ajustar la solucin con hidrxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 O, 1 y diluir con agua hasta 1000 ml. Agregar
20 g de carbn activado, mezclar durante 1 hora y fil-
trar. Repetir el tratamiento con carbn activado. Alma-
cenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tempera-
tura de no menos de 1 O. Filtrar la solucin si se forma
un precipitado durante el almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 ml de agua, calentar a
75 5 y agregar solucin de cido clorhdrico (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los slidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 O.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 g/ml de riboflavina, 1 O g/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 g/ml de biotina en cido actico
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote~er de la luz.
Solucion de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O g/ml de cido p-aminoben-
zoico, 50 g/ml de niacina y 40 g/ml de clorhidrato
de piridoxina en alcohol neutralizado al 25%. Almace-
nar en un refrigerador.
Solucin salina A: 50 mg/ml de fosfato monobsico de
potasio y 50 mg/ml de fosfato dibsico de potasio en
agua. Agregar 1 O gotas de cido clorhdrico por L de
solucin. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: 20 mg/ml de sulfato de magnesio,
1 mg/ml de cloruro de sodio, 1 mg/ml de sulfato fe-
rroso y 1 mg/ml de sulfato de manganeso en agua.
Agregar 1 O gotas de cido clorhdrico por L de la solu-
cin. Almacenar bajo tolueno.
Solucin de piridoxal-pantotenato de calcio: 200 g/
ml de clorhidrato de piridoxal y 1,875 g/ml de pan-
totenato de calcio en alcohol al 1 0%. Almacenar en un
refrigerador y usar dentro de los 30 das.
Solucin de polisorbato 40-cido oleico: 50 mg/ml
de polisorbato 40 y 0,5 mg/ml de cido oleico en al-
cohol al 20%. Almacenar en un refrigerador y usar den-
tro de los 30 das.
Medio de pantotenato de calcio modificado: Disolver
Dextrosa anhidra y Acetato de sodio anhidro en las solu-
ciones previamente mezcladas de acuerdo con la Tabla
3, y ajustar con hidrxido de sodio 1 N a un pH de 6,8.
Finalmente, diluir con agua hasta 250 ml.
USP 38
Tabla 3
Soluc1on de h1drolizado Jc1do de cJsc1nJ
Solucin de nolisorhato 80
--------------- ------- --
Dextrosa anhidra
Acetato de sodio anhidro
Solucin de adenina-auanina-uracilo
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de oiridoxina
Solucin salina A
Solucin salina B
Solucin de niridoxdl-ndnlolendl de calcio
Solucin de oolisorbato 40-cido oleico
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tracin: Freparar segn se indica en Medio de pantote-
nato modtftcado, excepto que se debe realizar la dilu-
cin final hasta 125 mL en lugar de 250 mL. Preparar
en el momento de su uso.
Cultivo madre de Pediococcus acidilactici: Disolver en
800 mL de agua, con ayuda de calor, 6,0 g de peptona,
4,0 g de digerido pancretico de casena, 3,0 g de ex-
tracto de levadura, 1,5 g de extracto de carne, 1,0 g de
dextrosa y 15,0 g de agar. Ajustar con hidrxido de so-
dio_ 0,_1 N o cido clorhdrico O, 1 N a un pH de 6,5-6,6
y diluir con agua hasta 1000 ml. Agregar porciones de
1 O mL _de la solucin a tubos de cultivo, tapar los tubos
y esterilizar en un autoclave a 121 durante 15 minutos.
Enfriar en pendiente y almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo madre de Pediococcus acidilactici3 en
un tubo conteniendo este medio. Incubar a 35 durante
20-24 horas y almacenar en un refrigerador. Mantener
el cultivo madre mediante transferencias mensuales a
tubos con medio inclinado preparado recientemente.
lnculo: Inocular tres porciones de 250 mL de Medio de
pantotenato modificado estril con el cultivo madre en
medio inclinado e incubar a 35 durante 20-24 horas.
Centrifugar la suspensin a partir de las porciones com-
binadas y lavar las clulas con Medio de pantotenato mo-
dificado estril. Resuspender las clulas en suficiente Me-
dio de pantotenato modificado de manera que una
dilucin 1 en 50, cuando se analiza en un tubo de en-
sayo d~ _1) mm de dimetro, proporcione 80% de
transm1s1on de luz a 530 nm. Transferir porciones de
1,2 mL de esta suspensin madre a ampollas de vidrio
estril, sellar, congelar en nitrgeno lquido y almacenar
en un congelador. En el da de la valoracin, dejar que
las ampollas alcancen la temperatura ambiente, mezclar
el co~~enido y dilu,ir_ 1 mL de cultivo descongelado con
soluc1on salina estenl SR hasta 150 mL. [NOTA-Esta di-
lucin se puede alterar, cuando sea necesario, para ob-
tener la respuesta de prueba deseada.]
Anlisis: Preparar por triplicado una serie de ocho tu-
bos de cultivo agregando las siguientes cantidades de
agua a los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3,0; 2,0; 1,0 y 0,0 mL. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solucin estndar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 mL de la Solucin
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 mL de Medio de panlotenato modificado de
calcio de doble concentracin a cada tubo. Tapar los
tubos con tapas de metal y esterilizar en un autoclave
a 121 durante 5 minutos. Enfriar a temperatura am-
biente en un bao de agua fra e inocular cada tubo
con 0,5 mL del lnculo. Dejar que se incube a 37 du-
' ATCC N 8042 es adecuado.
Suplementos Dietticos/ Vitaminas Oleoso!ubles e Hidrosolubles 6843
rante 16 horas. Detener el crecimiento calentando a
25 ml
una temperatura de no menos de 80", por ejemplo
mediante la aplicacin de vapor a presin atmosfrica
25 111L en un esterilizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y de-
O 2.5 ml terminar ia transmitancia porcentual de las suspemio-
1O a nes, en celdas de igual longitud de paso, en un espec-
5 a trofotmetro adecuado, a una longitud de onda de
5 ml 530 nm.
Ck_ulo: Trazar u_na curva de dosis-respuesta en papel
5 ml
mil1metrado graf1cando la respuesta promedio, como
porcentaje de transmitancia, para cada set de tubos de
la curva estndar en funcin de las concentraciones del
5 ml
nivel del estndar. La curva se traza conectando cada
5 ml par de puntos adyacentes con una lnea recta. A partir
5 ml d_e, esta curva estandar, determinar mediante interpola-
5 ml c1on la potencia de cada tubo que contenga porciones
5 ml de la Solucin muestra. Dividir la potencia de cada tubo
por la cantidad de la Solucin muestra que se le agreg,
para obtener las respuestas individuales. Calcular la res-
puesta media promediando las respuestas individuales
que varan de su media en no ms de 1 5%, usando no
menos de la mitad del nmero total de tubos. Calcular
la potencia de la porcin del material tomado para la
valoracin multiplicando la respuesta media por el fac-
tor de dilucin apropiado.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de dex-
pantenol o pantenol (C9H1yN4) en la porcin de Cp-
sulas tomada:
Resultado = (PIN) x 1 00
P = potencia de dexpantenol o pantenol en la
porcin tomada (mg)
N = cantidad nominal de dexpantenol o pantenol
en la porcin tomada (mg)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H1yN04)
PANTOTENATO DJ CALCIO, Mtodo 7
Fase mvil: Acido fosfrico y agua (1:1000)
Solucin de estndar interno: 80 mg de cido p-hi-
droxibenzoico en 3 mL de alcohol. Agregar 50 mL de
agua y 7, 1 g de fosfato di bsico de sodio, y diluir con
agua hasta 1000 ml. Ajustar con cido fosfrico a un
pH de 6,7.
Solucin estndar: 0,6 mg/mL de ER Pantotenato de
Calcio USP en Solucin de estndar interno
Solucin muestra: Proceder segn se indica en cido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una cantidad del contenido de las
Cpsulas mezclado a un tubo de centrfuga y un volu-
men de Solucin de estndar interno hasta obtener una
concentracin de 0,6 mg/mL en la Solucin muestra.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nrn
Columna: 3, 9 mm x 15 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O pL
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para pantote-
nato de calcio y cido p-hidroxibenzoico son aproxi-
madmente 0,5 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir ~as reas de los picos de pantotena_to de calcio y
el estandar interno. Calcular el porcentaje de la canti-
dad declarada de pantotenato de calcio
(C1sHi2CaN201) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado~ (Ru!R1) / (C/Cu) :x: 100
6844 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles /Suplementos Dietticos
Ru = cociente entre las reas de los picos de
pantotcnato de calcio y cido p-
hidroxibenzoico de la Solucin muestro
o = cociente entre la:, .Jrcas de los picos de
"'
printof Pnrito rlP ralcio y cido p-
hidroxibenzoico de la Solucin estndar
= concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
(, = concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestro (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (CisHi2CaN210)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 2
Solucin madre del estndar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secados y al-
macenados en la oscuridad sobre pentxido de fosforo
y protegidos de la absorcin de humedad durante la
pesada, en 500 ml de agua en un matraz volumtrico
de 1000 ml. Agregar 1 O ml de cido actico 0,2 N y
100 ml de solucin de acetato de sodio (1 en 60), y
diluir con agua a volumen para obtener una concentra-
cin de 50 g/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin estndar: En el da de la valoracin, diluir un
volumen de Solucin madre del estndar con agua hasta
obtener una concentracin de 0,01-0,04 g/ml de
pantotenato de calcio, donde la concentracin exacta
es tal que las respuestas obtenidas segn se indica en el
Anlisis, usando 2,0 y 4,0 ml de Solucin estndar, estn
dentro de la porcin lineal de la curva de respuesta en
funcin del logaritmo de la concentracin. ,
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 50 mg de pantotenato de cal-
cio, a un matraz volumtrico de 1000 ml que contenga
500 ml de agua. Ac;regar 1O ml de cido actico 0,2 N
y 1 00 ml de solucion de acetato de sodio (16,66 mg/
ml), diluir con agua a volumen y filtrar. Diluir un volu-
men de esta solucin hasta obtener una solucin con
aproximadamente la misma concentracin que la de la
Solucin estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
100 g de casena exenta de vitaminas con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 O. Fil-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70-80 y agregar cido clorhdrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los slidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1 000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 O.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 pg/ml de riboflavina, 1 O pg/ml de clorhidrato
USP 38
de tiamina y 0,04 pg/ml de biotina en cido actico
0,02 N. Almacenar bajo Loluer10 en un refrigerador y
prot~c;er de ! _
Iuz. . . . . .
Soluoon de ac1do p-am1nobenzo1eo-niacma-clorh1-
drato de piridoxina: 1 O g/ml de cido p-aminoben-
zoico, 50 pg/ml de niacina y 40 pg/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua hasta obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua hasta obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 4 y ajustar
con hidrxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
Tabla 4
Solucin de hidrolizado cido de casena 25 ml
Solucin de cistina-triotfano 25 ml
Solucin de oolisorbato 80 O 25 ml
Dextrosa anhidra 10 o
Acetato de sodio anhidro So
Solucin de adenina-quanina-uracilo 5 ml
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bioti-
na 5 ml
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de ~iridoxina 5 ml
Solucin salina A 5 ml
Solucin salina B 5 ml
Cultivo madre de Lactobacil/us plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 1 00 ml de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un bao de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O ml de la
solucin caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfren en posicin
vertical. Inocular tres o ms de los tubos, sembrando
por puncin un cultivo puro de Lactobacillus plantarum 1
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30 y 37 mantenida termostticamente con un
margen de 0,5. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por puncin del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnculo
si el cultivo tiene ms de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 ml de agua que con-
tenga 0,2 g de pantotenato de calcio a cada una de
las series de tubos de ensayo que contengan 5,0 ml de
Solucin madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godn, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15
minutos y enfriar.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Realizar una transfe-
rencia de clulas del Cultivo madre de Lactobacillus plan-
tarum a un tubo estril que contenga 1O ml de Medio
de cultivo. Incubar este cultivo durante 16-24 horas a
una temperatura entre 30" y 37' mantenida ter,mostti-
camente con un margen de 0,Y. La suspens1on de
clulas as obtenida es el lnculo.
USP 38 Suplementos Dietticos /Vitaminas Olcosolublcs e Hidrosolubles 6845
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin mue1,lra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solucin
Pstndar. Agrrgar a cada tubo y a cuatro tubos vacos
similares 5,0 mL de Solucin madre de medio basal y
agua suficiente para obtener 1O mL.
Agregar a ~endos tubos de en~ayo similares, por dupli-
cado, volumenes de la Soluoon muestra correspondien-
tes a tres o ms de los niveles especificados para la
Solucin estndar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y
4,0 ml. Agregar a cada tubo 5,0 ml de Solucin madre
de medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estndar y mues-
tra iuntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o seccin de una gradilla, pre-
ferentemente en orden aleatorio.
Cubrir l_~s tubos ~e ambas series para prevenir la conta-
minac1on y esterilizar en un autoclave a 121 durante
5 minutos. Enfriar y agregar 1 gota de lnculo a cada
t~bo, excep~() a do,s de los cuatro tubos que no con-
tienen Soluc1on estandar (los blancos no inoculados).
Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y 37
mantenida termostticamente con un margen de
0,5 hasta que, despus de 16-24 horas de incuba-
cin, no se presente un aumento significativo de turbi-
dez en los tubos que contengan el nivel ms alto de
Estndar durante un periodo de 2 horas.
Determinar la transmitancia de los tubos de la siguiente
manera. Mezclar el contenido de cada tubo y transferir
a un recipiente apto para lectura ptica si fuera nece-
sario. Leer la transmitancia entre 540 y 660 nm
cuando se alcance un estado estacionario. El estado
estacionario se observa unos pocos segundos despus
de la agitacin cuando la lectura del galvanmetro se
mantenga constante durante 30 segundos o ms. Per-
mitir aproximadamente el mismo intervalo de tiempo
para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contamina-
cin con un microorganismo extrao, no tomar en
cuenta el resultado de la valoracin.
Clculo: Preparar una curva estndar de concentracin-
respuesta segn se indica a continuacin. Para cada ni-
vel del Estndar, calcular la respuesta a partir de la
suma de los valores duplicados de la transmitancia (L:s)
como la diferencia, y= 2,00 - L:s. Graficar esta res-
puesta en la ordenada del papel milimetrado en funcin
del logaritmo de los mL de Solucin estndar por tubo
sobre la abscisa, usando para la ordenada una escala
aritmtica o logartmica, la que proporcione la mejor
aproximacin a una lnea recta. Trazar la recta o la
curva de regresin que mejor se ajuste a los puntos
graficados.
Calcular la respuesta, y = 2,00 - Iu, sumando las dos
transmitancias para cada nivel de la Solucin muestra
(L:u). Leer, a partir de la curva estndar, el logaritmo
del volumen de la Solucin estndar correspondiente a
cada uno de los valores de y comprendidos dentro del
intervalo entre los puntos extremos graficados para el
Estndar. Restar de cada logaritmo as obtenido el lo-
garitmo del volumen, en mL, de la Solucin muestra
para obtener la diferencia, X, de cada nivel de dosifica-
cin. Promediar los valores de X para cada uno de los
tres o ms niveles de dosificacin para obtener X, que
es igual al logaritmo de potencia relativa, M', de la
Solucin muestra. Determinar la cantidad, en mg, de
pantotenato de calcio (Ci8Hi2CaN201u) en la porcin
de Cpsulas tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de mg de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porcin de
Cpsulas tomada
Calcular ei porcentaje Je pantuler1atu de cakiu
(C"HuCa!'~,Q",) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado = [(antilog M)/ N] x 1 00
N = cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porcin de Cpsulas tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determina-
cin por lo menos una vez, usando Soluciones muestra
preparadas por separado. Si la diferencia entre los dos
logaritmos de las potencias M es no ms de 0,08, su
media, M, es el logaritmo de la potencia valorada del
material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Valoraciones
Biolgicas (111 ), El Intervalo de Confianza y los Lmites de
la Potencia). Si las dos determinaciones difieren en ms
de 0,08, realizar una o ms determinaciones adiciona-
les. A partir de la media de dos o ms valores de M que
no difieran en ms de O, 15, calcular la potencia media
de la preparacin que se est valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (C1aH32CaN2010)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 3
Solucin amortiguadora: Disolver 10,0 g de fosfato
monobsico de potasio en 2000 mL de agua y ajustar
con cido fosfrico a un pH de 3,5.
Fase mvil: Metanol y Solucin amortiguadora (1 :9)
Solucin madre del estndar: 0,25 mg/mL de ER Pan-
totenato de Calcio USP en agua. Preparar cada 4 sema-
nas. Almacenar en un refrigerador.
Solucin estndar: 40 g/mL de ER Pantotenat.o de
Calcio USP, a partir de Solucin madre del estndar di-
luida con agua
Solucin muestra: Proceder segn se indica en cido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a una cantidad nominal de 1 O mg
de pantotenato de calcio, a un matraz volumtrico de
250 ml. A9regar 1O mL de metanol y agitar el matraz
por rotacion suave hasta dispersar el contenido de las
Cpsulas. Diluir con agua a volumen, mezclar y filtrar.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 205 nm
Columna: 3, 9 mm x 30 cm; relleno L1 de 5 m
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 25 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C18H;2CaN20 10) en la porcin
de Cpsulas tomada:
Resultado= (r11/r1) x (C1/C11) x 100
ru = rea del pico de pantotenato de calcio de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de pantotenato de calcio de la
Solucin estndar
C = concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/mL)
e - concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (Ci"H11CaN10rn)
6846 Vitaminas O!eosolubles e Hidrnsolubles / Suplnrwntm nif'f Pliro~
NIACINA O NIACINAMIDA 0 CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Meluuu 7
[NOTA-- Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este pr0cedi111ie11lo.]
Diluyente: A.cetonitri!o, cido actico glacial y agua
(5:1 :94)
Fa.se mvil: Una meLcla de metano!, cido actico gla-
cial y agua (27:1 :73) que contenga 140 mg de 1-hexa-
nosulfonato de sodio por 100 ml.
Solucin estndar: [NOTA-Usar ER Niacina USP en lu-
gar de ER Niacinamida USP para formulaciones que
contengan niac1r1a.] Transferir 80 mg de ER Niacinamida
USP, 20 mg de ER Clorhidrato de Piridoxina USP, 20 mg
de ER R1boflav1na USP y 20 mg de ER Clorhidrato de
Tiamina USP a un matraz volumtrico de 200 ml, y
agregar 180 ml de Diluyente. Sumergir el matraz en un
bao de agua caliente mantenido a 65-70 durante 1 O
minutos agitando regularmente o usando un mezclador
de vrtice, hasta que se disuelvan todos los materiales
slidos. Enfriar rpidamente en un bao de agua fra
durante 1 O minutos a temperatura ambiente y diluir
con Diluyente a volumen.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en cido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Capsulas, equivalente a 1 O mg de niacinamida y 2,5 mg
de clorhidrato de piridoxina, de riboflavina y de clorhi-
drato de tiamina, a un tubo de centrfuga de 50 ml.
Agregar 25,0 ml de Diluyente y mezclar usando un
mezclador de vrtice durante 30 segundos para sus-
pender por completo el polvo. Sumergir el tubo de
centrfuga en un bao de agua caliente mantenido a
65-70, calentar durante 5 minutos y mezclar en un
mezclador de vrtice durante 30 segundos. Devolver el
tubo al bao de agua caliente, calentar durante 5 minu-
tos ms y mezclar en un mezclador de vrtice durante
30 segundos. Filtrar una porcin de la solucin, enfriar
a temperatura ambiente y usar el filtrado transparente.
[NOTA-Usar el filtrado dentro de las 3 horas de la
filtracin.]
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 280 nm
Columna: 3,9 mm x 30 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 1 O L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para niacina-
mida, piridoxina, riboflavina y tiamina son aproxima-
damente 0,3; 0,5; 0,8 y 1,0, respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3 0%
Anlisis ' Disolvente de extraccin: Solucin A y metanol (3: 1)
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina o niacinamida,
piridoxina, riboflavina y tiamina. Calcular el porcen-
taje de la cantidad declarada de niacinamida
(CGHcN20) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (r,/11) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacinamida de la Solucin
mue;,tra
r, = rea del pico de niacinamida de la Solucin
estndar
C1 = concentracin de ER Niacinamida USP en la
::iotuc1on estndar (mg/ml)
C = concentracin nominal de niacinamida en la
Solucin muestra (mg/ml)
Para formulaciones que contengan niacina:
Result;irln = (r/r,) v (C/C) ~- 100
usr 38
r,; = rea del pico de niacina de la Sulucin muestra
r, = rea del pico de niacina de la Solucin
estandar
<-1 = concentracin de ER Niacina USP en la
SuluLn e1ndar (mg/mL)
C, = concentracin nominal de niacina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CHH11 NO,
HCI), de riboflavina (C11H20N406) y de clorhidrato de
tiamina (CuH11CIN40S HCI) en la porcin de
Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
= rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin muestra
= rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin estndar
Cs concentracin del Estndar de Referencia USP
pertinente en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la vitamina
correspondiente en la Solucin muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C 12 H 11 N,0 4 S)
en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) x (Mr1/M2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C 6 HsN02) o niacinamida
(~6H6N~O), clorhidrato de piridoxina (CsH1, N0 3 HCI),
nboflav1na (C11H20N406) y tia mina como clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
NIACINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin A: Transferir 1 ml de cido actico glacial y
2,5 g de edetato disdico a un matraz volumtrico de
100 ml. Disolver y diluir con agua a volumen.
Fase mvil: Solucin de acetato de sodio O, 1 M
(13,6 mg/ml de acetato de sodio en agua). Ajustar con
cido actico a un pH de 5,4. [NOTA-Se puede agregar
una pequea cantidad de metano! (hasta 1 %) a la Fase
mvil para mejorar la resolucin.]
Solucion madre del estndar: 1 mg/ml de ER Niacina
USP en Disolvente de exlraccion
Solucin estndar: Transferir 5 O ml de Solucin madre
del estndar a un matraz volum'trico de 25 ml y diluir
con Disolvente de extraccin a volumen. ,
Solucin muestra: [NOTA -Esta preparacin es ade-
cuada para la determinacin de niacina o niacinamida,
piridoxina y riboflavina, cuando se encuentran presentes
en la formulacin.] Pesar no menos de 20 Cpsulas en
un frasco de pesada tarado. Abrir las Cpsulas, sin per-
der mater;al de la rnbierta y transferir el contenido a un
v.aso de precipitados. Retirar cualquier contenido adhe-
~1do a las cubiertas lavando con varias porciones de
eter. Desechar los lavados y secar las cubiertas de las
Cpsulas con ayuda de una corriente de aire seco. Pesar
USP 38 Suplementos Dietticos/ Vitaminas O!eosolubles e Hidrosolubles 6847
lds cubierlds Je lds CfJsulas vacas en un frasco de pe-
sada tarado y calcular el peso neto del contenido de las
Cpsulas. Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 2 mg de riboflavina, a un ma-
traz volumetnco de 200 ml. Si la riboflavina no se en-
cuentra presente en la formulacin, usar una porcin,
equivalente a 2 mg de piridoxina. Si la piridoxina no se
encuentra presente en la formulacin, usar una porcin
equivalente a 20 mg de niacina o niacinamida. Agregar
100,0 ml de Disolvente de extraccin y mezclar durante
20 minutos, usando un agitador de movimiento tipo
mueca (wrist-action). Sumergir el matraz en un bao
de agua mantenido a 70-75 y calentar durante 20
minutos. Mezclar en un mezclador de vrtice durante
30 segundos, enfriar a temperatura ambiente y filtrar.
Usar el filtrado transparente.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
[NOTA-Si fuera necesario, purgar la columna con meta-
nol entre cada inyeccin.]
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de niacina
(C6HsN02) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de niacina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Niacina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
C11 = concentracin nominal de niacina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02)
NIACINAMIDA, Mtodo 2 5,2.
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin, Fase mvil, Solucin madre
del estndar, Solucin estndar, Solucin muestra y
Sistema cromatogrfico: Usando ER Niacinamida USP
en lugar de ER Niacina USP, proceder segn se indica
en Niacina, Mtodo 2.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacinamida. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de niacinamida
(C6HoN20) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (r11/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacinamida de la Solucin
muestra
r5 = rea del pico de niacinamida de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Niacinamida USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
C11 = concentracin nominal de niacinamida en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacinamida (C6H6N20)
CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin, Fase mvil y Solucin mues-
tra: Preparar segn se indica en Niaclna, Mtodo 2.
Solucin madre del estndar: O, 1 mq/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Disolvente de extraccin
Solucin estndar: Transferir 20 g/ml de ER Clorhi-
drato de Piridoxina USP, a partir de Solucin madre del
estndar y diluir con Disolvente de extraccin a volumen.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de piridoxina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
piridoxina (CsH11 N01 HCI) en la porcin de Cpsulas
tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de piridoxina de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de piridoxina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH11 N01 HCI)
RIBOFLAVINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Disolvente de extraccin y Solucin muestra: Preparar
segn se indica en Niacina, Mtodo 2.
Solucin A: 6,8 g/L de acetato de sodio en agua
Fase mvil: Preparar una mezcla de Solucin A y meta-
nol (1 3:7). Agregar 2 ml de trietilamina por L de la
mezcla y ajustar con cido actico glacia a un pH de
Solucin madre del estndar: Transferir 20 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumtrico de 200 ml y
agregar 180 ml de Disolvente de extraccin. Sumergir el
matraz durante 5 minutos en un bao de agua mante-
nido a 65-75. Mezclar bien y repetir si fuera necesario
hasta disolver. Enfriar rpidamente en un bao de agua
fra a temperatura ambiente y diluir con Disolvente de
extraccin a volumen.
Solucin estndar: Diluir 5,0 ml de Solucin madre del
estndar con Disolvente de extraccin hasta 25,0 ml.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las areas de los picos de nboflavina. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de riboflavina
(C 11H20N40 6 ) en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/C11) x 100
6848 Vitaminas Oleosoluble\ P Hidrmoluhle<> / Suplementos Dietticos
r:: = rea del pico de riboflavina de la Solucin
muestra
r, = rea del pico de riboflavina de la Solucin
e~tandur
C = conrcntr;i<in de IR Rihoflavina USP en la
Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de ribotlavina en la
Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
TIAMINA, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin A: 1,88 g/L de 1-hexanosulfonato de sodio en
cido fosfrico al O, 1 %
Fase mvil: Solucin A y acetonitrilo (46:9)
Solucin madre del estndar: O, 1 mg/ml de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en cido clorhdrico 0,2 N
Solucin estndar: 0,02 mg/ml de ER Clorhidrato de
Tiamina USP, a partir de Solucin madre del estndar
diluida con cido clorhdrico 0,2 N , Solucin estndar: Transferir 5,0 ml de Solucin madre
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Mezclar una porcin del contenido de las
Cpsulas con un volumen de cido clorhdrico 0,2 N
hasta obtener una concentracin de 0,02 mg/ml de tia-
mina. Agitar durante 15 minutos con un agitador de
movimiento tipo mueca (wrist action) y calentar a
ebullicin durante 30 minutos. Enfriar a temperatura
ambiente y filtrar. Usar el filtrado transparente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 254 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Para productos
que contengan clorhidrato de tiamina, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN40S HCI) en la porcin de Cpsu-
las tomada:
Resultado= (ru/r1) x (Cs!Cu) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
C1 = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H17Ns04S)
en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) x (M,,/M,z) x 100
r,, = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
C = concentrac1on de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
C = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
M, 1 = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
USP 38
Mc = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-1 50,0% de la cantidad
declarada de tiamina como clorhidrato de tiamina
(C:H:7Clr~.,OS HC!) o mononitrato de tiamina
(C 12H 17Ns04S)
NIACINA o NIACINAMIDA, CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA, RIBO-
FLAVINA y TIAMINA, Mtodo 3
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Reactivo: 25 mg/ml de edetato disdico en agua
Fase mvil: Transferir 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml
de cido actico glacial y 350 ml de metano! a un ma-
traz volumtrico de 2000 ml. Diluir con 1-hexanosulfo-
nato de sodio 0,008 M a volumen.
Solucin madre del estndar: 1,5 mg/ml de ER Nia-
cina USP o ER Niacinamida USP, 0,24 mg/ml de ER
Clorhidrato de Piridoxina USP, 0,08 mg/ml de ER Ribo-
flavina USP y 0,24 mg/ml de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en Reactivo, calentando si fuera necesario.
del estndar a un matraz de 125 ml con tapn. Agregar
10,0 ml de una mezcla de metano! y cido actico gla-
cial (9:1) y 30,0 ml de una mezcla de metanol y etilen-
glicol (1 :1 ). Tapar, agitar durante 15 minutos en un
bao de agua mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, dese-
chando los primeros ml del filtrado. ,
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico, hasta "calcular el peso neto promedio por
Cpsula". Transferir una porcin del contenido de las
Cpsulas, equivalente a 7,5 mg de niacina o niacina-
mida, 1,2 mg de clorhidrato de piridoxina, 0,4 mg de
riboflavina y 1,2 mg de clorhidrato de tiamina, a un
matraz de 125 ml con tapn. Agregar 10,0 ml de una
mezcla de metano! y cido actico glacial (9:1) y
30,0 ml de una mezcla de metano! y etilenglicol (1 :1 ).
Tapar, agitar durante 15 minutos en un bao de agua
mantenido a 60 y enfriar. Filtrar, desechando los pri-
meros ml del filtrado.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Temperatura de la columna: 50
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de niacina o niacinamida.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
niacina (C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20) en la
porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (C/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin estndar
Cs = concentracin de ER Niacina USP o ER
Niacinamida USP en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina o
niacinamida en la Solucin muestra (mg/ml)
Calcular por separado el porcentaje de la cantidad
declarada de clorhidrato de p1ridoxina (C8H11 N03
HCI), de riboflavina (C 11H20N406) y de clorhidrato de
tiamina (C 12 H17 CIN40S HCI) (para productos que
USP 38 Suplementos Diettirn<; /Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6849
rnntPngan clorhidrato de tiamina) en la porcin de
Cp;ula; lomada:
Re:,ultJdo = (r,./r,) >< (C;/C.);. 100
ru = area del pico de la vitamina correspondienle
de la Solucin muestra
rs =rea del pico de la vitamina correspondiente
de la Solucin estndar
Cs concentracin del Estndar de Referencia USP
pertinente en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de la vitamina
correspondiente en la Solucin muestra
(mg/ml)
Para productos que contengan mononitrato de
tiamina, calcular el porcentaje de la cantidad
declarada de mononitrato de tiamina (C12H11Ns04S)
en la porcin de Cpsulas tomada:
Resultado= (ru!rs) x (Cs/Cu) x (M,,/M,2) x 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
rs = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de mononitrato de
tiamina en la Solucin muestra (mg/ml)
M,, = peso molecular de mononitrato de tiamina,
327,36
M,2 = peso molecular de clorhidrato de tiamina,
337,27
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH11 N03 HCI),
riboflavina (C11H20N406) y tiamina como clorhidrato de
tiamina (C12H11CIN4QS HCI) o mononitrato de tiamina
(C12H11Ns04S)
PRUEBAS DE DESEMPEO
DESINTEGRACIN V DISOLUCIN DE SUPLEMENTOS DIETTICOS
(2040):, Cumplen con los requisitos de ,Disolucin.
VARIACION DE PESO DE SUPLEMENTOS DIETETICOS (2091):
Cumplen con los requisitos.
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 1 0 3
ufc/g y el recuento total combinado de hongos filamen-
tosos y levaduras no excede de 3 x ~0 2 ufc/g.
AUSENCIA DE MICROORGANISMOS ESPECIFICOS (2022): Cum-
plen con los requisitos de las pruebas para determinar la
ausencia de Salmonel/a spp, Escherichia coli y Staphylococ-
cus aureus.
REQUISITOS ADICIONALES
ENVASADO V ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im-
permeables y resistentes a la luz.
ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto e; Cp-
sulas de Vitaminas Hidrosolubles y OleosolublPs la eti-
queta tambin indica la cantidad de cada vitamina por
unidad de dosificacin y, cuandn <;ea nPrPsario, la forma
qumica presente. Cuando el producto contiene vitamina
E, ia etiqueta indica si se trata de la forma d o di.
Cuando se proporciona ms de un mtodo de valoracin
para una vitamina en particular, el etiquetado indica el
mtodo de valoracin con el que cumple el producto
nicamente si no se usa el Mtodo 7.
ESTNDARES DE REFERENCIA USP (11)
ER Alfa Tocoferol USP
ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP
ER Succinato cido de Alfa Tocoferilo USP
ER Biotina USP
cido hexahidro-2-oxo-3aS-[(3au,43,6aa)]- l H-tieno[3,4-
,djimidazol-4-pentanoico;
Acido (3aS,4S,6aR)-hexahidro-2-oxo- l H-tieno[3,4-d]imi-
dazol-4-valrico.
C10H16N203S 244,31
ER Pantotenato de Calcio USP
Sal clcica (1 :2) de 3-alanina, N-(2,4-dihidroxi-3,3-dime-
til- l-oxobutil)-, (R)-;
o-Pantotenato de calcio (2:1 ).
C1sH32CaN2010 476,53
ER Colecalciferol USP
9, 1O-Secocolesta-5,7,10(19)-trien-3-ol, (3/3,5Z,7E)-;
Colecalciferol.
C21H44Q 384,64
ER Cianocobalamina USP
Vitamina B12.
C63HssCoN1414P 1 355,37
ER Dexpantenol USP
Butanamida, 2,4-dihidroxi-N-(3-hidroxipropil)-3,3-dime-
til-, (R)-;
D-( +)-2,4-Dihidroxi-N-(3-hidroxipropil)-3, 3-
dimetilbutiramida.
C9H19NQ4 205,25
ER Ergocalciferol USP
9, 1O-Secoergosta-5,7,1 O (19),22-tetraen-3-ol,
(33,5Z,7E,22E)-;
Ergocalciferol.
C2~H41 396,65
ER Acido Flico USP
cido L-glutmico, N-[4-[[(2-amino- l ,4-dihidro-4-oxo-
, 6-pteridin il)metil]am i no ]benzoi I]-;
~cido flico;
Acido N-[p-[[(2-amino-4-hidroxi-6-pteridinil)metil]a-
mino ]-benzoi l]-L-g 1ut mico.
(9H19N106 441,40
ER Niacina USP
cido 3-piridincarboxlico;
Acido nicotnico.
C6HsN02 123, 11
4 Las Unidades USP de actividad para vitaminas, cuando existan o hayan exis-
tido anteriormente, equivalen a las unidades internacionales correspondientes,
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para
Vitamina E se ha discontinuado. Las unidades internacionales (UI) para vitami-
nas tambin se han discontinuado; no obstante, contina el uso de UI en las
etiquetas de los productos de vitaminas. Cuando los artculos se etiquetan en
trminos de Unidades adems del etiquetado requerido, la relacin de las
Unidades USP o UI con respecto a la masa es la siguiente. Una Unidad USP
de Vitamina A~ 0,3 pg de todo trans retinol (vitamina A alcohol) o 0,344 ig
de todo trans acetato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 g de todo
trans palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 pg de retino! (3, 3
Unidades USP de Vitamina A) = 1 equivalente de retinol (RE); 1 UI de beta
caroteno ~ 0,6 g de todo lrans beta carotcno; 1 Unidad USP de Vitamina D
= 0,025 ftg de ergocalciferol o colecalciferol; y 1 mg de di-alfa tocoferol ~ 1, l
antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 1119 de acetato de di-alfa tocoferilo ~
1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato cido de di-alfa
tocoferilo = 0,89 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa toco-
ferul = 1,49 aritiguas Unidades USP de Vitamina E y 1 mg de acetato de d-
aifa tocoferilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de succi-
nato cido de d-alfa tocoferilo = 1,21 antiguas Unidades USP de Vitamina E.
En trminos de equivalentes de d alfJ tocofcrol, 1 mg de acetato de d-alfa
tocoferilo = O, 91, 1 mg de succinato ac1do de d-alta tocoferilo = 0,81, l mg
de di-alta tocoferol = 0,74, 1 111g de acetato de di-alfa tocoferilo = 0,67 y
1 mg de succinato cido de di-alfa tocoferilo = 0,60.
6850 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles / Suplementos Dieteticos
ER Niacinarnida USP
3-Piridincarboxilmida;
Nicotinamida.
CH,N,O 122.12
ER Fitonadiona USP
1,4-Nattalendiona, 2-metil-3-(3,7, 11, 15-tetrametil-2-he-
xadecenil)-, [R-[R*,R*-(E)]]-;
Filoquinona.
Ci1 H4n02 450,70
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
Clorhidrato de 3,4-piridindimetanol, 5-hidroxi-6-metil-;
Clorhidrato de piridoxol.
C8H11NO, HCI 205,64
ER Pantenol Racmico USP
ER Riboflavina USP
Riboflavina.
C1+boN406 376,36
ER Clorhidrato de Tiamina USP
Monoclorhidrato de tiazol, 3-[(4-amino-2-metil-5-pirimi-
dinil)metil]-5-(2-hidroxietil)-4-metil-, cloruro;
Monoclorhidrato de tiamina.
C12H11CIN40S HCI 337,27
ER Vitamina A USP
Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles,
Solucin Oral
DEFINICIN
La Solucin Oral de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles
contiene una o ms de las siguientes vitaminas oleosolu-
bles: Vitamina A, Vitamina D como Ergocalciferol (Vita-
mina D2) o Colecalciferol (Vitamina 03) y Vitamin,a E; una
o ms de las siguientes vitaminas hidrosolubles: Acido As-
crbico o su equivalente como Ascorbato de Calcio o As-
corbato de Sodio, Cianocobalam)na, Niacina o Niacina-
mida, Dexpantenol o Pantenol, Acido Pantotnico (como
Pantotenato de Calcio o Pantotenato de Calcio Racmico),
Clorhidrato de Piridoxina, Riboflavina o Rivoflavina-5'-Fos-
fato Sdico y Clorhidrato de Tiamina o Mononitrato de
Tiamina. Contiene no menos de 90,0% y no ms de
250,0% de las cantidades declaradas de vitamina A
(C20HioO) como retino! o steres de retino! en forma de
acetato de retinilo (C22Hi202) o palmitato de retinilo
(Ci6H6002); vitamina D como ergocalciferol (C2sH44) o
colecalciferol (C21H44), vitamina E como alfa tocoferol
(C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo (Ci1 Hs23) o succi-
nato cido de alfa tocoferilo (CiiHs4s); cido ascrbico
(C6Hs06) o sus sales como ascorbato de calcio
(C12H14Ca012 2H20) o ascorbato de sodio (C6H1Na06); y
tiamina (C12H11CIN4QS) como clorhidrato de tiamina o
mononitrato de tiamina; no menos de 90,0% y no ms
de 150,0% de las cantidades declaradas de pantotenato
de calcio (ClBHJ2CaN2010), dexpantenol (C9H19NQ4) o
pantenol (C9H19N4), niacina (C6HsN02) o niacinamida
(C6H6N20), clorhidrato de piridoxina (CsH1, NOi HCI) y ri-
boflavina (C17H20N406) o riboflavina-5'-fosfato sdico
(C11H20N4NaOyP); y no menos de 90,0% y no ms de
450,0% de la cantidad declarada de cianocobalamina
(CniHssCoN 1414P).
CONTENIDO
[NOTA-En las siguientes valoraciones, cuando se propor-
cione ms de un mtodo de valoracin para un ingrediente
individual, los requisitos se pueden cumplir siguiendo cual-
quiera de los mtodos especificados, declarando el mtodo
usado en el etiquetado nicamente si no se usa el Mtodo
7.]
VITAMINA A
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
USP 38
Diluyente: Tetrahidrofurano y acetonitrilo (1: 1)
Fase mvil: Metano!, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solucin estndar: O, 33 mg/ml de retino! (C2uH mO), a
partir de ER Vitamina A USP en Diluyente. [NOTA.-ER
Vitamina A USP es acetato de retinilo. Usarlo para anali-
zar Solucin Oral que contenga vitamina A como reti-
no!, acetato de retinilo o palmitato de retinilo.]
Solucin muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solucin Oral, equivalente a 3, 3 mg de
retino!, a un embudo de separacin de 500 ml que
contenga 1O ml de agua y 20 ml de alcohol deshidra-
tado. Agregar 150 ml de ter de petrleo, tapar y agi-
tar durante 1 minuto. Agregar otros 150 ml de ter de
petrleo, tapar, agitar y dejar que las capas se separen.
Desechar la capa acuosa y filtrar el extracto de ter de
petrleo a travs de sulfato de sodio anhidro en un ma-
traz de fondo redondo de 500 ml. Evaporar la solucin
hasta sequedad con ayuda de un evaporador rotatorio
sobre un bao de agua mantenida a aproximadamente
65. Agregar inmediatamente 10,0 ml de Diluyente, agi-
tar por rotacin suave hasta disolver el residuo y filtrar.
Sistema cromato~rfico
(Ver Cromatografm (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 50 cm (preparada a partir de dos
columnas concatenadas de 4,6 mm x 25 cm); relleno
Ll
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A como retino! (C20HioO) en la porcin de Solu-
cin Oral tomada:
Resultado= (ru/ri) x (Cs/Cu) x Fx 100
ru = rea del pico de retino! o ster de retinilo de
la Solucin muestra
r5 = rea del pico de acetato de retinilo de la
Solucin estndar
Cs = concentracin de acetato de retinilo
(C22Hi202) en la Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de vitamina A, como
retino! (C20HioO), en la Solucin muestra
(g/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
Criterios de aceptacin: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de vitamina A como retino! (C20H30)
COLECALCIFEROL O ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D)
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actnica durante todo este
procedimiento.]
Diluyente y Fase mvil: Preparar segn se indica en
Vitamina A.
Solucin estndar: 5 g/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Er~ocalciferol USP en Diluyente
Solucion muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solucin Oral, equivalente a 50 g de co-
lecalciferol o ergocalciferol, a un embudo de separacin
de 500 ml que contenga 1 O ml de agua y 20 ml de
alcohol deshidratado. Agregar 150 ml de ter de petr-
leo, tapar y agitar durante 1 minuto. Agregar otros
USP 38 Suplementos Dietticos /Vitaminas O!eoso!ubles e Hirlro<>nluhlP'> 6851
1 50 mi rlP 'tPr rlP rPtrIPo, tapar, agitar y dejar que las
capas se separen. DesedicH la capa acuusa. Escurrir el
extracto etreo a travs de sulfato de sodio anhidro en
ur1 malraL Je fu11Jv 1eJu11Ju de 500 ml. Evaporar la
solucin hasta sequedad con ayuda de un evaporador
rotatorio sobre un bao de agua mantenida a aproxi-
madamente 65. Agregar inmediatamente 10,0 ml de
Diluyente, agitar por rotacin suave hasta disolver el re-
siduo y filtrar.
Sistema cromatogrfico: Preparar segn se indica en
Vitamina A.
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H440) o ergocalciferol (C28H440) en la porcin de
Solucin Oral tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x F x 1 00
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
rs = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
Cs = concentracin de l::R Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(g/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (g/ml)
F = factor de correccin que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la formulacin,
1,09
Criterios de aceptacin: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H440)
o ergocalciferol (C2sH440)
VITAMINA E
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: Acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1)
Solucin de hidrxido de potasio: Transferir 90 g de
pellets de hidrxido de potasio a un matraz volumtrico
de 100 ml que contenga 60 ml de agua. Mezclar hasta
disolver, enfriar y diluir con agua a volumen.
Fase mvil: Metano!, acetonitrilo y n-hexano
(46,5:46,5:7,0)
Solucin estndar: 0,3 mg/ml de ER Alfa Tocoferol
USP en Diluyente
Solucin muestra: Transferir una cantidad de Solucin
Oral, equivalente a 1,5 mg de alfa tocoferol, a un ma-
traz Erlenmeyer de 125 ml provisto de una junta de
vidrio esmerilado y agregar 25,0 ml de alcohol deshi-
dratado. Acoplar un condensador de reflujo y someter a
reflujo en un bao de agua en ebullicin durante 1 mi-
nuto. Agregar cuidadosamente 3 ml de Solucin de hi-
drxido de potasio a travs del condensador y continuar
sometiendo a reflujo durante 30 minutos. Retirar el ma-
traz del bao y enjuagar el condensador con aproxima-
damente 15 ml de agua. Enfriar y transferir con un vo-
lumen mnimo de agua a un embudo de separacin de
250 ml. Enjuagar el matraz con 50 ml de n-hexano y
agregar los enjuagues al embudo de separacin. Tapar,
agitar vigorosamente durante 1 minuto y dejar que las
capas se separen. Escurrir la capa acuosa en un se-
gundo embudo de separacin de 250 ml y repetir la
extraccin con 50 ml de n-hexano. Desechar la capa
acuosa y combinar los extractos de hexano. Lavar los
extractos combinados con 25 ml de agua, dejar que las
capas se separen y desechar la capa acuosa. Agregar
3 gotas de cido actico glacial y repetir el procedi-
miento de lavado dos veces ms. Filtrar la capa de he-
xano lavada a travs de sulfato de sodio anhidro en un
matraz de fondo redondo de 250 ml. Enjuag;:ir el cm
budo y el sulfato de sodio con n-hcxano y agregar el
enjuague a la :,oluc.i11 de hexJ110 en el matraz. Evapo-
rar la solucin rlP hPxann h;ista sPrn1edad con avuda de
un evaporador r~tato~io sobre un baro de agu mante-
nido a aproximadamente 50 '. Agregar inmediatamente
5,0 ml de Diluyente y agitar por rotacin suave hasta
disolver el residuo.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 291 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno Ll
Temperatura de la columna: 40'
Velocidad de flujo: 3,0 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos. Calcular el porcentaje de
la cantidad declarada de vitamina E como alfa tocofe-
rol (C29Hso02) en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (ru/ rs) x ( Cs/ Cu) x 100
ru = rea del pico de alfa tocoferol de la Solucin
muestra
rs = rea del pico de alfa tocoterol de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de alfa tocoferol en la Solucin
estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de vitamina E, como
alfa tocoferol, en la Solucin muestra
(mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-250,0% de la cantidad
, declaradg de vitamina E
ACIDO ASCORBICO
Solucin muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solucin Oral, equivalente a 80 mg de
cido ascrbico, a un matraz Erlenmeyer. Agregar
50 ml de agua, 1 00 ml de cido sulfrico O, 1 N SV y
15,0 ml de yodo O, 1 N SV. Mezclar el contenido du-
rante 30 segundos y agregar 5 ml de almidn SR.
Anlisis: Valorar inmediatamente con tiosulfato de sodio
O, 1 N SV hasta la desaparicin del color. Cada ml de
yodo O, 1 N equivale a 8,806 mg de cido ascrbico
(C6Hs06).
Criterios de aceptacin: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de cido ascrbico (C6Hs0")
A~CORBATO DE CALCIO : Proceder segn se indica en
Acido Ascrbico. Cada ml de yodo O, 1 N equivale a
10,66 mg de ascorbato de calcio (C1;H14Ca017 2H20).
Criterios de aceptacin: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de calcio (C12H14Ca012 2HO)
ASCORBATO DE SODIO : Proceder segn se indica en Acido
Ascrbico. Cada ml de yodo O, 1 N equivale a 9,905 mg
de ascorbato de sodio (CoH1NaO).
Criterios de aceptacin: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de ascorbato de sodio (C6H1Na06)
CIANOCOBALAMINA
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Solucin madre del estndar: 1,0 ~ig/ml de cianoco-
balamina, a partir de ER Cianocobalamina USP en al-
cohol al 25%. Almacenar en un refrigerador.
Solucin estndar: Diluir un volumen adecuado de So-
lucin madre del estndar con agua hasta un volumen
medido tal que despus del periodo de incubacin, se-
gn se describe en el Anlisis, la diferencia en la trans-
mitancia PntrP el blanco inoculado y el nivel de 5,0 ml
de Solucin estndar sea no menor que la correspon-
6852 Vitaminas Oleosoluhles e Hidrosolubles /Suplementos Dietticos
diente a una diferencia de 1,25 mg en peso seco de las
clulas. !::sta concentracin por lo general est entre
0,01 y 0,04 ng/ml de la Solucin estndar. Preparar
f'sta <;ol1icin Pn 0! momento de su uso para cada
valoracin.
Solucin muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solucin Oral que se supone contiene
1,0 pg de cianocobalamina, a un vaso apropiado que
contenga, por cada ml de la Solucin Oral tomada,
25 ml de una solucin de extraccin acuosa, preparada
justo antes de su uso, que contiene, en cada 100 ml,
1,29 g de fosfato di bsico de sodio, 1, 1 g de cido c-
trico anhidro y 1,0 g de metabisulfito de sodio. Autocla-
var la mezcla a 121 durante 1O minutos. Dejar que
sedimente cualquier partcula del extracto sin disolver y
filtrar o centrifugar, si fuera necesario. Diluir una al-
cuota de la solucin transparente con agua hasta obte-
ner una solucin final que contenga una actividad de
vitamina B12 equivalente aproximadamente a la de la
Solucin estandar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
100 g de casena exenta de vitamina con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1 000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1O. Fil-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de asparagina: Disolver 2,0 g de L-asparagina
en agua para obtener 200 ml. Almacenar bajo tolueno
en un refrigerador.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de xantina: Suspender 0,20 g de xantina en
30-40 ml de agua, calentar a 70, agregar 6,0 ml de
hidrxido de amonio 6 N y mezclar hasta que los sli-
dos se disuelvan. Enfriar y diluir con agua hasta 200 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 1 O g de fosfato monobsico
de potasio y 1 O g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 200 ml, y agregar 2 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar esta solucin bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 4,0 g de sulfato de magne-
sio, 0,20 g de cloruro de sodio, 0,20 g de sulfato fe-
rroso y 0,20 g de sulfato de manganeso en agua para
obtener 200 ml, y agregar 2 gotas de cido clorhdrico.
Almacenar esta solucin bajo tolueno.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol. Almacenar en un refrigerador.
Solucin vitamnica A: 1 O mg de riboflavina, 1 O mg de
clorhidrato de tia mina, 1 00 pg de biotina y 20 mg de
niacina en cido actico 0,02 N para obtener 400 ml.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y proteger
de la luz.
Solucin vitamnica B: 20 mg de cido p-aminoben-
zoico, 1 O mg de pantotenato de calcio, 40 mg de clor-
hidrato de piridoxina, 40 mg de clorhidrato de pirido-
xal, 8 mg de diclorhidrato de piridoxamina y 2 mg de
cido flico en una mezcla de agua y alcohol neutrali-
zado (3: l) para obtener 400 ml. Almacenar en un refri-
gerador y proteger de la luz.
Solucin madre del medio basal: Preparar el medio de
acuerdo con la siguiente frmula e instrucciones. Se
puede usar una mezcla deshidratada que contenga los
mismm ingrf'dientes siempre que, cuando se reconsti-
tuya segn se indica en el etiquetado, produzca un me-
USP 38
dio comparable al obtenido de la frmula provista en
e'te procedimiento.
Agregar los ingredientes en el orden listado en la Tabla
l_, cJi,olviendo cuidadosamente Ustma y Triptofano en
Acido clorhdrirn ante-s de agregar las siguientes ocho
soluciones a la solucin resultante. A la solucin resul-
tante, agregar 100 Jlll de agua y disolver Dextrosa,
Acetato de sodio y Acido ascrbico. Filtrar, si fuera nece-
sario. Agregar Solucin de polisorbato 80, ajustar con
hidrxido de sodio 1 N a un pH de 5,5-6,0 y diluir
con Agua Purificada hasta 250 ml.
Tabla 1
L-Cistina o1 a
L-Triotlano O 05 a
cido clorhdrico 1 N 10 ml
Solucin de <ldenina-uuanina-uracilo 5 ml
Solucin de xanlina 5 ml
Solucin vitamnica A 10 ml
SolucinviJiJn:nica_ B_ 10 ml
Solucin salina A 5 ml
Solucin salina B 5 ml
Solucin de asoaraaina 5 ml
Solucin de hidrolizado cido de casena 25 ml
Dextrosa anhidra 10 a
Acetato de sodio anhidro 5 a
cido ascrbico 1a
Solucin de polisorbato 80 5 ml
Preparacin de jugo de tomate: Centrifugar jugo de
tomate enlatado comercial para retirar la mayor parte
de la pulpa. Suspender 5 g/L de coadyuvante de filtra-
cin analtico en el sobrenadante y filtrar, con ayuda de
presin reducida, a travs de una capa del coadyuvante
de filtracin. Repetir, si fuera necesario, hasta obtener
un filtrado transparente de color pajizo. Almacenar bajo
tolueno en un refrigerador.
Medio de cultivo:[NOTA-Se puede usar una mezcla des-
hidratada que contenga los mismos ingredientes siem-
pre que, cuando se reconstituya segn se indica en el
etiquetado, produzca un medio equivalente al obtenido
de la frmula provista en este procedimiento.] Disolver
0,75 g de extracto de levadura, 0,75 g de peptona seca,
1,0 g de Dextrosa anhidra y 0,20 g de fosfato monob-
sico de potasio en 60-70 ml de agua. Agregar 1 O ml
de Preparacin de jugo de tomate y 1 ml de Solucin de
polisorbato 80. Ajustar con hidrxido de sodio 1 N a un
pH de 6,8 y diluir con agua hasta 100 ml. Colocar por-
ciones de 1 O ml de la solucin en tubos de ensayo y
tapar con algodn. Esterilizar los tubos y su contenido
en un autoclave a 121 durante 15 minutos. Enfriar tan
rpido como sea posible para evitar la formacin de
color que resulta del sobrecalentamiento del medio.
Medio de suspensin: Diluir un volumen medido de
Solucin madre de medio basal con un volumen igual de
agua. Colocar porciones de 1 O ml del medio diluido en
tubos de ensayo. Esterilizar y enfriar segn se indica en
Medio de cultivo.
Cultivo madre de Lactobacillus leichmannii: Agregar
1,0-1,5 g de agar a 1 00 ml de Medio de cultivo y calen-
tar la mezcla en un bao de vapor, mezclando, hasta
que se disuelva el agar. Colocar porciones de 1 O ml de
la solucin caliente en tubos de ensayo, cubrir los tu-
bos, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15 mi-
nutos y dejar que los tubos se enfren en posicin verti-
cal. Inocular tres o ms de los tubos, sembrando por
puncin un cultivo puro de Lactobacillus leichmannii. 1
[NOTA-Antes de usar un cultivo recientemente prepa-
rado por primera vez en esta valoracin, realizar no me-
'Se pueden obtener cultivos puros de lnrtnhnri/1111 leichmannii (listados como
l.actobaci/lus delbruecki1) rnmo N 7830 en ATCC, 10801 University Blvd., Ma-
nassas, VA 20110-2209 (www.atcc.org).
USP 38 Suplementos Dietticos/ Vitamina' Olensoluhles e Hidrosolubles 6853
nos de 1 O transferencias sucesivas dPI cultivo en un pe-
riodo de 2 semanas.]
Incubar durante 16-24 horas a una temperatura entre
30" y 40" mantenida termmtalica111e11te con un mar-
gen de .1 0,5. Almacenar en un refrigerador.
Preparar un cultivo reciente por puncin al menos tres
veces por semana y no usarlos para preparar el Jnculo
si tienen ms de 4 das de preparados. La actividad del
microorganismo se puede incrementar mediante trans-
ferencias de una o dos veces al da, del cultivo por
puncin, hasta el punto en que se pueda observar una
turbidez evidente en el lnculo lquido 2-4 horas des-
pus de la inoculacin. Un cultivo de crecimiento lento
en raras ocasiones proporciona una curva de respuesta
adecuada y puede conducir a resultados errticos.
lnculo: [NOTA-Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacil/us leichmannii corno cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir clulas del
Cultivo madre de Lactobacil/us leichmannii a dos tubos
estriles que contengan 1O mL de Medio de cultivo cada
uno. Incubar estos cultivos durante 16-24 horas a una
temperatura entre 30 y 40 mantenida termosttica-
mente con un margen de 0,5. Centrifugar los cultivos
bajo condiciones aspticas y decantar el sobrenadante.
Suspender las clulas del cultivo en 5 mL de Medio de
suspensin estril y mezclar. Usando Medio de suspensin
estril, ajustar el volumen de manera que una dilucin
1 en 20 en solucin salina SR produzca una transrnitan-
cia del 70% cuando se lee en un espectrofotrnetro
adecuado ajustado a una longitud de onda de 530 nm,
equipado con una celda de 1 O mm y leer contra el set
de solucin salina SR a una transrnitancia del 100%.
Preparar una dilucin 1 en 400 de la suspensin ajus-
tada usando Solucin madre de medio basal estril.
[NOTA-Esta dilucin se puede alterar, cuando sea nece-
sario, para obtener la respuesta de prueba deseada.] La
suspensin de clulas as obtenida es el Jnculo.
Calibracin del espectrofotrnetro: Revisar peridica-
mente la longitud de onda del espectrofotmetro,
usando una celda de longitud de onda estndar u otro
dispositivo adecuado. Antes de leer cualquier prueba,
calibrar el espectrofotrnetro con agua para fijar el 0%
y el 100% de transrnitancia, con la longitud de onda
ajustada a 530 nm.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Debido a la alta sensibilidad del organismo de prueba
a diminutas cantidades de actividad de vitamina B12 y
a trazas de muchos agentes de limpieza, los tubos de
ensayo de 20 mm x 150 mm de vidrio duro y dems
material de vidrio necesario se deben limpiar meticu-
losamente usando mtodos adecuados, preferente-
mente seguidos por calentamiento a 250 durante 2
horas.
Agregar a sendos tubos de ensayo, por duplicado, 1,0;
1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solucin estndar.
Agregar a cada uno de estos tubos y a cuatro tubos
vacos similares 5,0 mL de Solucin madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1O rnl.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 rnL de la Solucin mues-
tra. Agregar a cada tubo 5,0 rnL de Solucin madre de
medio basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Colocar un set completo de tubos de Estndar y
muestra juntos en una gradilla para tubos y el set
duplicado en una segunda gradilla o seccin de una
gradilla, preferentemente E'n orden aleatorio.
Cubrir los tubos para prevenir la contaminacin bacte-
riana y esterilizar en un autoclave a 121 durante 5
minutos, ajustando para alcanzar esta temperatura en
no ms de 1O minutos, precalentando el autoclave si
fuera necesario. Enfriar tan rpido corno sea posible
para evitar la formacin de color que resulta del so-
brecalentamiento del medio. Tomar precauciones
para mantener la uniformidad de las condiciones de
esterilizacin y enfriamiento durante tocia la valora-
cin, debido a que colocar los tubos demasiado cerca
o sobrecargar el autoclave puede or;i,ionar variacio-
nE'' E'n l;i velocidad de calentamiento.
Agregar asept1camente 0,5 ml de lnculu a cada tubo
as preparado, excepto a dos de los cuatro que no
contienen Solucin estndar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y
40 mantenida termostticamente con un margen de
0,5, durante 16-24 horas.
Detener el crecimiento calentando a una temperatura
de no menos de 80 durante 5 minutos. Enfriar a
temperatura ambiente. Despus de agitar el conte-
nido, leer la transrnitancia a 530 nm cuando se al-
cance un estado estacionario. El estado estacionario
se observa unos pocos segundos despus de la agita-
cin cuando la lectura se mantenga constante du-
rante 30 segundos o ms. Permitir aproximadamente
el mismo intervalo de tiempo para la lectura en cada
tubo.
Con la transmitancia ajustada a 100% ara el blanco
no inoculado, leer la transrnitancia de blanco inocu-
lado. Si la diferencia es mayor de 5% o si hay eviden-
cia de contaminacin con un microorganismo ex-
trao, no tomar en cuenta el resultado de la
valoracin.
Con la transmitancia ajustada a 100% para el blanco
no inoculado, leer la transmitancia de cada uno de
los tubos restantes. No tornar en cuenta los resulta-
dos de la valoracin si la pendiente de la curva estn-
dar indica un problema con la sensibilidad.
Clculo: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta mediante el siguiente procedimiento.
Determinar y reemplazar cualquier transmitancia indi-
vidual aberrante. Para cada nivel del Estndar, calcular
la respuesta a partir de la suma de los valores duplica-
dos de las transrnitancias (Ls) como la diferencia, y=
2,00 - L:,. Graficar esta respuesta en la ordenada del
papel milimetrado en funcin del logaritmo de los mL
de la Solucin estndar por tubo sobre la abscisa,
usando para la ordenada una escala aritmtica o loga-
rtmica, la que proporcione la mejor aproximacin a
una lnea recta. Trazar la recta o la curva de regresin
que mejor se ajuste a los puntos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 -L:u, sumando las dos
transrnitancias (L:u) para cada nivel de la Solucin
muestra. Leer, a partir de la curva estndar, el loga-
ritmo del volumen de la Solucin estndar correspon-
diente a cada uno de los valores de y comprendidos
dentro del intervalo entre los puntos extremos grafi-
cados para el Estndar. Restar de cada logaritmo as
obtenido el logaritmo del volumen, en rnL, de la So-
lucin muestra para obtener la diferencia, X, para
cada nivel de dosificacin. Promediar los valores de X
para cada uno de los tres o ms niveles de dosifica-
cin para obtener X, que es igual al logaritmo de
potencia relativa, M', de la Solucin muestra.
Determinar la cantidad, en ~1g, de cianocobalarnina
(CiH88CoN 14014P), en la porcin de Solucin Oral
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R ~ pg de cianocobalamina que se supuso estaban
presentes en la porcin de Solucin Oral
tomada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
cianocobalarnina (C"iHssCoN1.,014P) en la porcin de
Solucin Oral tornada:
Resultado= [(antilog M)/N] x 100
N = cantidad nominal de cianocobalarnina en la
porcion de Solucin Oral tornada
6854 Vitaminas Oleosolubles e Hidrosoluhles / Suplementos Dietticos
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nctci11 por lo mPnm una vez, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dm logaritmos de la~ potPncia~ M es no ms de 0,08,
su media, M, es el loqaritmo de la potencia valorada
del mateml de prudJd (ver Diseno y Anlisis de Valora-
ciones Biolgicos (111 ), El Intervalo de Confianza y los
Lmites de la Potencia, Actividad de Vitamina 812). Si las
dos determinaciones difieren en ms de 0,08, realizar
una o ms determinaciones adicionales. A partir de la
media de dos o ms valores de M que no difieran en
ms de O, 15, calcular la potencia media de la prepara-
cin que se est valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%-450,0% de la cantidad
declarada de cianocobalamina (C61HssCoN1414P)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 7
Fase mvil: Fosfctlo monobsico de sodio 0,2 M y me-
tano! (97: 3). Ajustar con cido fosfrico 1,7 M a un pH
de 3,2 O, l.
Solucin estndar: 80 g/ml de ER Pantotenato de
Calcio USP en Fase mvil
Solucin de aptitud del sistema: 80 g/ml de ER Pan-
tenol Racmico USP en Fase mvil. Mezclar la solucin
resultante y la Solucin estndar (1 :1).
Solucin muestra: Equivalente a 80 g/ml de pantote-
nato de calcio, a partir de Solucin Oral en Fase mvil
Sistema cromato9rfico
(Ver Cromatografw (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 21 O nm
Columna: 4,0 mm x 1 O cm; relleno L1
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 20 L
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1,5 entre pantenol y pan-
totenato de calcio, Solucin de aptitud del sistema
Factor de asimetra: No ms de 2,0 para los picos de
pantotenato de calcio y pantenol, Solucin estndar
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%, Solu-
cin estndar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de pantotenato de calcio.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C18H12CaN2010) en la porcin
de Solucin Oral tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C1/Cu) x 100
ru = rea del pico de pantotenato de calcio de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de pantotenato de calcio de la
Solucin estndar
C = concentracin de ER Pantotenato de Calcio
USP en la Solucin estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de pantotenato de
calcio en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de pantotenato de calcio (CisH12CaN2010)
PANTOTENATO DE CALCIO, Mtodo 2
Solucin madre del estndar: Disolver 50 mg de ER
Pantotenato de Calcio USP, previamente secado y alma-
cenado en la oscuridad sobre pentxido de fsforo y
protegido de la absorcion de humedad durante la pe-
sada, en 500 ml de agua en un matraz volumtrico de
1000 ml. Agregar 1 O mL de cido actico 0,2 N y
1 00 ml de solucin de acetato de sodio (1 en 60), y
diluir con agua a volumen para obtener una concentra-
cin de 50 g/ml de ER Pantotenato de Calcio USP.
Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin estndar: En el da de la valoracin, diluir un
volumen de Soluc1on madre del estndar con agua hasta
LJSP 38
obtener una concentracin de 0,01-0,04 g/ml de
pantotenato de cctkio, donde la concentracin exacta
es tal que las respuestas obtenidas segn se indica en el
linlisis, usando 2,0 y 4,0 rnl de Soiucion estndar, estn
dentro de la porcin lineal de la curva de respuesta en
tuncin del logaritmo de la concentracin.
Solucin muestra: Transferir un volumen medido con
exactitud de Solucin Oral, equivalente a 50 mg de
pantotenato de calcio, a un matraz volumtrico de
1000 ml que contenga 500 ml de agua. Agregar
1 O ml de cido actico 0,2 N y 100 ml de solucin de
acetato de sodio (1 en 60), diluir con agua a volumen y
filtrar. Diluir un volumen medido de esta solucin cuan-
titativamente y en diluciones sucesivas, si fuera necesa-
rio, con agua hasta obtener una solucin con aproxima-
damente la misma concentracin que la de la Solucin
estndar.
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
1 00 g de casena exenta de vitaminas con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en agua, ajustar la solucin con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 3,5 O, 1 y diluir con
agua hasta 1 000 ml. Agregar 20 g de carbn activado,
mezclar durante 1 hora y filtrar. Repetir el tratamiento
con carbn activado. Almacenar bajo tolueno en un lu-
gar fresco a una temperatura de no menos de 1 O. Fil-
trar la solucin si se forma un precipitado durante el
almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina en una solucin de 1,0 g de L-triptfano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 ml de agua, calentar a
70-80 y agregar cido clorhdrico diluido (1 en 2)
gota a gota, mezclando, hasta que los slidos se disuel-
van. Enfriar y diluir con agua hasta 1000 ml. Almacenar
bajo tolueno en un lugar fresco a una temperatura de
no menos de 1 O.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O ml de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar y diluir con agua hasta
200 ml. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: 20 g/ml de riboflavina, 1 O g/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 g/ml de biotina en cido actico
0,02 N. Almacenar bajo tolueno en un refrigerador y
prote9er de la luz.
Solucion de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: 1 O g/ml de cido p-aminoben-
zoico, 50 ~tg/ml de niacina y 40 g/ml de clorhidrato
de piridoxina en una mezcla de alcohol neutralizado y
agua (1 :3). Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 500 mL. Agregar 5 gotas de cido
clorhdrico. Almacenar bajo tolueno.
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico. Almace-
nar bajo tolueno.
Solucin madre de medio basal: Disolver Dextrosa an-
hidra y Acetato de sodio anhidro en las soluciones previa-
mente mezcladas de acuerdo con la Tabla 2 y ajustar
con hidrxido de sodio 1 N a un pH de 6,8. Diluir con
agua hasta 250 ml.
U<;P 18 Suplementos Dietticos /Vitaminas O!eosolubles e Hirlrmoluhles 6855
Tabla 2
Solucior1 de hidroli1Mlo ,c ido de c.i1r11a
! So!ucin Je ci~linJ tript6fan0
<::ni r'An dt::i
..... v,u.__iv e
nr.li<r.rbatn
!''-'''-=-:::-'_e_
Hn O /'i ml
----------.-~-----
Dextrosa anhidra 10 fl
Acetato de sodio anhidro s fl
Solucin de adeninll::9_uanina-uracilo ___ s ml __
Solucin de riboflavina-clorhidrato de t1amina-bioti-
na S ml
Solucin de <leido p-aminobe11zoico-niaci11a-
clorhidrato de niridoxina S ml
Solucin salina A S ml
Solucin salina B _?~
Cultivo madre de Lactobacillus plantarum: Disolver
2,0 g de extracto de levadura en 100 mL de agua.
Agregar 500 mg de Dextrosa anhidra, 500 mg de Ace-
tato de sodio anhidro y 1,5 g de agar, y calentar la mez-
cla en un bao de vapor, mezclando, hasta que se di-
suelva el agar. Agregar porciones de 1 O mL de la
solucin caliente a tubos de ensayo, cerrar o tapar los
tubos, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15
minutos y dejar que los tubos se enfren en posicin
vertical. Inocular tres o ms de los tubos, sembrando
por puncin un cultivo puro de Lactobaci/lus plantarum, 2
incubando durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30 y 37 mantenida termostticamente con un
margen de 0,5. Almacenar en un refrigerador. Prepa-
rar un cultivo reciente por puncin del cultivo madre
una vez por semana y no usarlo para preparar el lnculo
si el cultivo tiene ms de 1 semana de preparado.
Medio de cultivo: Agregar 5,0 mL de agua que conten-
gan 0,2 g de pantotenato de calcio a cada una de las
series de tubos de ensayo que contengan 5,0 mL de
Solucin madre de medio basal. Tapar los tubos con al-
godn, esterilizar en un autoclave a 121 durante 15
minutos y enfriar.
lnculo: [NOTA~Se puede usar una suspensin conge-
lada de Lactobacillus plantarum como cultivo madre,
siempre que produzca un lnculo comparable al de un
cultivo recientemente preparado.] Transferir clulas del
Cultivo madre de Lactobaci/lus plantarum a un tubo est-
ril que contenga 1 O mL de Medio de cultivo. Incubar
este cultivo durante 16-24 horas a una temperatura en-
tre 30 y 37 mantenida termostticamente con un
margen de 0,5. La suspensin de clulas as obtenida
es el lnculo.
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, 1,0 y/o 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 y 5,0 mL de la Solu-
cin estndar. Agregar a cada tubo y a cuatro tubos
vacos similares 5,0 mL de Solucin madre de medio
basal y agua suficiente para obtener 1 O ml.
Agregar a sendos tubos de ensayo similares, por dupli-
cado, volmenes de la Solucin muestra correspon-
dientes a tres o ms niveles especificados de Solucin
estndar, incluyendo los niveles de 2,0; 3,0 y 4,0 mL.
Agregar a cada tubo 5,0 mL de Solucin madre de me-
dio basal y agua suficiente para obtener 1 O mL. Colo-
car un set completo de tubos de Estndar y muestra
juntos en una gradilla para tubos y el set duplicado
en una segunda gradilla o seccin de una gradilla,
preferentemente en orden aleatorio.
Cubrir los tubos de ambas series para prevenir la con-
taminacin y esterilizar en un autoclave a 121 du-
rante 5 minutos. Enfriar. Agregar 1 gota de lnculo a
cada tubo, excepto a dos de los cuatro tubos que no
co11Liene11 Solucin estndar (los blancos no inocula-
dos). Incubar los tubos a una temperatura entre 30 y
37' mantenida termostticamente con un margen de
. ATCC N" 8014 es ddecuado. E\ld ct'pa se conoca anteriormente como Lac-
toborillus arobinosus 17-5.
0,5 hasta que, despus de 16-24 horas de incuba-
cin, no se presente un aumento significativo de tur-
bidez en los tubos que contengan el nivel ms alto
de Estndar durJnte un periodo de 2 horas.
1
Determinar la trnnsmitanriil rle los tubos de la si-
guiente manera. Mezclar el contenido de cada tubo y
transferir a un recipiente apto para lectura ptica si
fuera necesario. Leer la transmitancia entre 540 y 660
nm cuando se alcance un estado estacionario. El es-
tado estacionario se observa unos pocos segundos
despus de la agitacin cuando la lectura del galva-
nmetro se mantenga constante durante 30 segun-
dos o ms. Permitir aproximadamente el mismo inter-
valo de tiempo para la lectura en cada tubo.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco no
inoculado, leer la transmitancia del blanco inoculado.
Con la transmitancia ajustada a 1,00 para el blanco
inoculado, leer la transmitancia de cada uno de los
tubos restantes. Si se presenta evidencia de contami-
nacin con un microorganismo extrao, no tomar en
cuenta el resultado de la valoracin.
Clculo: Preparar una curva estndar de concentra-
cin-respuesta segn se indica a continuacin. Para
cada nivel del Estndar, calcular la respuesta a partir
de la suma de los valores duplicados de la transmitan-
cia (Ls) como la diferencia, y= 2,00 - .Ls. Graficar esta
respuesta en la ordenada del papel milimetrado en
funcin del logaritmo de los mL de la 5olucion estan-
dar por tubo sobre la abscisa, usando para la ordenada
una escala aritmtica o logartmica, la que proporcione
la mejor aproximacin a una lnea recta. Trazar la recta
o la curva de regresin que mejor se ajuste a los pun-
tos graficados.
Calcular la respuesta, y= 2,00 - .Lu, sumando las dos
transmitancias (Lu) para cada nivel de la Solucin
muestra. Leer a partir de la curva estndar el loga-
ritmo del volumen de la Solucin estndar correspon-
diente a cada uno de los valores de y comprendidos
dentro del intervalo entre los puntos extremos grafi-
cados para el Estndar. Restar de cada logaritmo as
obtenido el logaritmo del volumen, en mL, de la So-
lucin muestra para obtener la diferencia, X, para
cada nivel de dosificacin. Promediar los valores de X
para cada uno de los tres o ms niveles de dosifica-
cin para obtener X, que es igual al logaritmo de
potencia relativa, M', de la Solucin muestra.
Determinar la cantidad, en mg, de ER Pantotenato de
Calcio USP correspondiente a pantotenato de calcio
(C1sHi2CaN201u) en la porcin de Solucin Oral
tomada:
antilog M = antilog (M' + log R)
R = nmero de rng de pantotenato de calcio que
se supuso estaban presentes en la porcin de
Solucin Oral tornada
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de
pantotenato de calcio (C1 8 H 32CaN 2010) en la porcin
de Solucin Oral tomada:
Resultado [(antilog M)iN] x 100
N =cantidad nominal de pantotenato de calcio en
la porcin de Solucin Oral tomada (mg)
Determinaciones repetidas: Repetir toda la determi-
nacin por lo menos una veL, usando Soluciones mues-
tra preparadas por separado. Si la diferencia entre los
dm logaritmos de las potencias Mes no ms de 0,08,
su media, M, es el logaritmo de la potencia valorada
del material de prueba (ver Diseo y Anlisis de Valora-
ciones Biolaicas (111 i, El Intervalo de Confianza y los
Limites de la Potencia). Si las dos determinaciones difie-
ren en ms de 0,08, realizar una o ms determinacio-
nes adicionales. A partir de la media de dos o ms
valores de M que no difieran en mas de O, 1 5, calcular
6856 Vitaminas O!Pmoluhles e Hidrosolubles / Suplementos Dietticos
la potencia media de la preparacin que se est
valorando.
Criterios de aceptacin: 90,0%--150,0% de la cantidad
rleclararla de pantotenato de calcio (CoH,,CaN,0, 0 )
DEXPANTENOL O PANTENOL. Mtodo 7
Fase mvil y Sistema cromatogrfico: Proceder segn
se indica en la valoracin de Pantotenato de Calcio, M-
todo 7.
Solucin estndar: 80 g/ml de ER Dexpantenol USP o
ER Pantenol Racmico USP en Fase mvil. [NOTA-Usar
ER Dexpantenol USP para analizar la Solucin Oral que
contiene dexpantenol y usar ER Pantenol Racmico USP
para analizar la Solucion Oral que contiene pantenol.]
Solucin de aptitud del sistema: 80 g/ml de ER Pan-
totenato de Calcio USP en Fase mvil. Mezclar la solu-
cin resultante y la Solucin estndar (1: 1 ).
Solucin muestra: Equivalente a 80 g/ml de dexpan-
tenol o pantenol, a partir de Solucin Oral en Fase
mvil
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de pantenol. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de dexpantenol o
pantenol (C9H19N04) en la porcin de Solucin Oral
tomada:
Resultado = (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de dexpantenol o pantenol de la
Solucin muestra
rs = rea del pico de dexpantenol o pantenol de la
Solucin estndar
Cs concentracin de ER Dexpantenol USP o ER
= clorhdrico y mezclar. Almacenar bajo tolueno.
Pantenol Racmico USP en la Solucin
estndar (mg/ml)
Cu = concentracin nominal de dexpantenol o
pantenol en la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19N04)
DEXPANTENOL o PANTENOL, Mtodo 2
[NOTA-El siguiente procedimiento tambin se aplica a la
determinacin del componente dextrgiro de pantenol
racmico en preparaciones que contengan pantenol.]
Se pueden usar mezclas deshidratadas que presenten for-
mulaciones similares a los medios descritos en este pro-
cedimiento siempre que, cuando se reconstituyan segn
se indica, tengan propiedades promotoras de creci-
miento iguales o superiores a las obtenidas con los me-
dios preparados segn se describe en este
procedimiento.
Solucin madre del estndar: 800 ~tg/ml de ER Dex-
pantenol USP o 1600 g/ml de ER Pantenol Racmico
USP en agua. Almacenar en un refrigerador, proteger
de la luz y usar dentro de los 30 das. [NOTA-Usar ER
Dexpantenol USP para analizar la Solucin Oral que
contiene dexpantenol y usar ER Pantenol Racmico USP
para analizar la Solucion Oral que contiene pantenol.]
Solucin estndar: En el da de la valoracin, preparar
1,2 g/ml de dexpantenol o 2,4 g/ml de pantenol ra-
cmico, a partir de la Solucin madre del estndar en
agua.
Solucin muestra: 1,2 pg/ml de dexpantenol o 2,4 g/
ml de pantenol, a partir de la Solucion Oral en agua
Solucin de hidrolizado cido de casena: Mezclar
100 g de casena exenta de vitamina con 500 ml de
cido clorhdrico 6 N y someter la mezcla a reflujo du-
rante 8-12 horas. Eliminar el cido clorhdrico de la
mezcla mediante destilacin bajo presin reducida hasta
que se forme una pasta espesa. Disolver nuevamente la
pasta resultante en aproximadamente 500 ml de agua,
ajustar la solucin con hidrxido de sodio 1 N a un pH
de 3,5 O, 1 y diluir con agua hasta 1 000 ml. Agregar
20 g de carbn activado, mezclar durante 1 hora y fil-
trar. Repetir el tratamiento con carbn activado. Alma-
cenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tempera-
USP 38
tura de no menos de 1 O'. Filtrar la solucin si se forma
ur1 precipitado durante el almacenamiento.
Solucin de cistina-triptfano: Suspender 4,0 g de L-
cistina E:11 u11a solucin de 1,0 g de L-triptofano (o 2,0 g
de D,L-triptfano) en 700-800 mL de agua, calentar a
75 5 y agregar solucin de cido clorhdrico 6 M
gota a gota, mezclando, hasta que los slidos se disuel-
van. Enfriar, diluir con agua hasta 1 000 ml y mezclar.
Almacenar bajo tolueno en un lugar fresco a una tem-
peratura de no menos de 1 O'.
Solucin de adenina-guanina-uracilo: Disolver
200 mg de sulfato de adenina, de clorhidrato de gua-
nina y de uracilo, con ayuda de calor, en 1 O mL de
cido clorhdrico 4 N. Enfriar, diluir con agua hasta
200 ml y mezclar. Almacenar bajo tolueno en un
refrigerador.
Solucin de polisorbato 80: 100 mg/ml de polisor-
bato 80 en alcohol
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina-bio-
tina: Preparar una solucin de riboflavina, clorhidrato
de tiamina y biotina en cido actico 0,02 N que con-
tenga 20 pg/mL de riboflavina, 1 O g/ml de clorhidrato
de tiamina y 0,04 g/ml de biotina. Almacenar bajo to-
lueno en un refrigerador y proteger de la luz.
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-clorhi-
drato de piridoxina: Preparar una solucin en alcohol
neutralizado al 25% que contenga 1 O g/ml de cido
p-aminobenzoico, 50 pg/ml de niacina y 40 g/ml de
clorhidrato de piridoxina. Almacenar en un refrigerador.
Solucin salina A: Disolver 25 g de fosfato monobsico
de potasio y 25 g de fosfato dibsico de potasio en
agua para obtener 500 ml. Agregar 5 gotas de cido
Solucin salina B: Disolver 1 O g de sulfato de magne-
sio, 0,5 g de cloruro de sodio, 0,5 g de sulfato ferroso y
0,5 g de sulfato de manganeso en agua para obtener
500 ml. Agregar 5 gotas de cido clorhdrico y mezclar.
Almacenar bajo tolueno.
Solucin de piridoxal-pantotenato de calcio: Disolver
40 mg de clorhidrato de piridoxal y 375 g de pantote-
nato de calcio en alcohol al 10% para obtener 200 ml
y mezclar. Almacenar en un refrigerador y usar dentro
de los 30 das.
Solucin de polisorbato 40-cido oleico: Disolver
25 g de polisorbato 40 y 0,25 g de cido oleico en al-
cohol al 20% para obtener 500 ml, y mezclar. Almace-
nar en un refrigerador y usar dentro de los 30 das.
Medio de pantotenato modificado: Disolver Dextrosa
anhidra y Acetato de sodio en las soluciones previamente
mezcladas de acuerdo con la Tabla 3, ajustar con hidr-
xido de sodio 1 N a un pH de 6,8, diluir con agua hasta
250 ml y mezclar.
Tabla 3
Solucin de hidrolizado cido de casena 25 ml
Solucin de cistina-tri[Jtfano 25 ml
Solucin de oolisorbato 80 O 25 ml
----
10 (]
Dextrosa anhidra
Acetato de sodio anhidro 5 (]
Solucin de adenina--auanina-uracilo 5 ml
Solucin de riboflavina-clorhidrato de tiamina--bioti-
na 5 ml
Solucin de cido p-aminobenzoico-niacina-
clorhidrato de piridoxina 5 ml
Solucin salina A 5 ml
Solucin salina B 5 ml
Solucin de oiridoxal panlotenato de calcio 5 ml
Solucin de po!isorbato 40 ;icido _1.<::l<:Q 5 ml
'
Medio de pantotenato modificado de doble concen-
tracin: Preparar segn se indica en Medio de pantote-
 Suplementos Dietticos/ Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles 6857
nato modificado, pero disolVPr hasta 125 ml en lugar de
250 ml. Preparar en el momento ue :,u uso.
Cultivo madre de Pediococcus acidilactici: Disolver
6,0 g de peptona, 4,0 y de diyerido pancretico de ca-
sena, 3,0 g de extracto de levadura, 1,5 g de extracto
de carne, 1,0 g de dextrosa y 15,0 g de agar en 800 ml
de agua, con ayuda de calor. Ajustar con hidrxido de
sodio O, 1 N o cido clorhdrico O, 1 N a un pH entre
6,5 y 6,6, diluir con agua hasta 1 000 ml y mezclar.
Agregar porciones de 1 O ml de la solucin a tubos de
cultivo, tapar los tubos y esterilizar en un autoclave a
121 durante 15 minutos. Enfriar en pendiente y alma-
cenar en un refrigerador. Preparar un cultivo madre de
Pediococcus acidilactici 3 en un tubo que contenga este
medio. Incubar a 35 durante 20-24 horas y almacenar
en un refrigerador. Mantener el cultivo madre mediante
transferencias mensuales a tubos con medio inclinado
preparado recientemente.
lnculo: Inocular tres porciones de 250 ml de Medio de
pantotenato modificado con el cultivo madre en medio
inclinado e incubar a 35 durante 20-24 horas. Centri-
fugar la suspensin a partir de las porciones combina-
das y lavar las clulas con Medio de pantotenato modifi-
cado estril. Resuspender las clulas en suficiente Medio
de pantotenato modificado de manera que una dilucin
1 en 50, cuando se analiza en un tubo de ensayo de
1 3 mm de dimetro, proporcione 80% de transmisin
de luz a 530 nm. Transferir porciones de 1,2 ml de esta
suspensin madre a ampollas de vidrio, sellar, congelar
en nitrgeno lquido y almacenar en un congelador. En
el da de la valoracin, dejar que las ampollas alcancen
la temperatu_ra ambiente, mezclar el contenido y diluir
1 ml de cultivo descongelado con solucin salina estril
SR hasta 150 ml. [NOTA-Esta dilucin se puede alterar,
cuando sea necesario, para obtener la respuesta de
prueba deseada.]
Anlisis: Preparar por triplicado una serie de ocho tu-
bos de cultivo agregando las siguientes cantidades de
agua a los tubos dentro de un set: 5,0; 4,5; 4,0; 3,5;
3,0; 2,0; 1,0 y 0,0 ml. Agregar 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0;
3,0; 4,0 y 5,0 ml de la Solucin estndar a estos mismos
tubos y en el mismo orden.
Preparar por duplicado una serie de cinco tubos de cul-
tivo agregando las siguientes cantidades de agua a los
tubos dentro de un set: 4,0; 3,5; 3,0; 2,0 y 1,0 ml.
Agregar 1,0; 1,5; 2,0; 3,0 y 4,0 ml de la Solucin
muestra a estos mismos tubos y en el mismo orden.
Agregar 5,0 ml de Medio de pantotenato modificado de
doble concentracin a cada tubo y mezclar. Tapar los
tubos con tapas de metal y esterilizar en un autoclave
a 121 durante 5 minutos. Enfriar a temperatura am-
biente en un bao de agua fra, e inocular cada tubo
con 0,5 ml del lnculo. Dejar que se incube a 37 du-
rante 16 horas. Detener el crecimiento calentando a
una ~emperatura de no menos de 80, por ejemplo
mediante la aplicacin de vapor a presin atmosfrica
en un esterilizador durante 5-1 O minutos. Enfriar y de-
terminar concomitantemente la transmitancia porcen-
tual de las suspensiones, en celdas de igual longitud
de paso, en un espectrofotmetro adecuado, a una
longitud de onda de 530 nm.
Cl.c.ulo: Trazar u_na curva de dosis-respuesta en papel
mil1metrado graf1cando la respuesta promedio, como
porcentaje de transmitancia, para cada set de tubos de
la curva estndar en funcin de las concentraciones
del nivel del estndar. La curva se traza conectando
cada par adyacente de puntos con una lnea recta. A
partir de esta curva estandar, determinar mediante
interpolacin la potencia, en trminos de dexpantenol,
de cada tubo que contenga porciones de la Solucin
muestra. Dividir la potencia de cada tubo por la canti-
dad de la Solucin muestra que se le agreg, para ob-
' ATCC N" 8042 es adecuado. Esta cepa se conoca anteriormente como Lac-
tobacil/us arabinosu1 17-5.
tener las respuestas individuales. Calcular la respuesta
n:iedici promediando las respuestas individuales que va-
nan de su media en no ms de 1 5%, usando no me-
nos de !a mitad del nmero total de ttJhos.
Calcular la potencia de la porcin del material tomado
para la valoracin multiplicando la respuesta media
por el factor de dilucin apropiado. Calcular el por-
centaje de la cantidad declarada de dexpantenol o
pantenol en la porcin de Solucin Oral tomada:
Resultado = (PIN) x 100
P = potencia calculada de dexpantenol o pantenol
en la porcin de Solucin Oral tomada (mg)
N = cantidad nominal de dexpantenol o pantenol
en la porcin de Solucion Oral tomada (mg)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de dexpantenol o pantenol (C9H19N04)
NIACINA o NIACINAMIDA
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este procedimiento.]
Diluyente: 25 mg/ml de edetato disdico en agua
Fase mvil: Mezclar 0,4 ml de trietilamina, 15,0 ml de
cido actico glacial y 350 ml de metano!, y diluir con
1-hexanosulfonato de sodio 0,008 M hasta 2000 ml.
Solucin estndar: O, 1 O mg/ml de ER Niacina USP o
ER Niacinamida USP en Diluyente. [NOTA-Usar ER Nia-
cina USP para Solucin Oral que contiene niacina y usar
ER Niacinamida USP para Solucin Oral que contiene
niacinamida.]
Solucin muestra: Diluir un volumen medido con exac-
titud de Solucin Oral con Diluyente hasta obtener una
solucin con una concentracin de O, 1 mg/ml de nia-
cina o niacinamida.
Sistema cromato!;.Jrfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 270 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L7
Velocidad de flujo: 2 ml/min
Volumen de inyeccin: 5 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 2,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de nia-
cina (C6HsN02) o niacinamida (C 6 H6N 20) en la por-
cin de Solucin Oral tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs/Cu) x 100
ru = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin muestra
r, = rea del pico de niacina o niacinamida de la
Solucin estndar
C, concentracin de ER Niacina USP o ER
=
Niacinamida USP en la Solucin estndar
(mg/ml)
Cu = concentracin nominal de niacina o
niacinamida en la Solucin muestra (mg/ml)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de niacina (C6HsN02) o niacinamida
(CGHGN20)
CLORHIDRATO DE PIRIDOXINA
Diluyente, Fase mvil y Sistema crornatogrfico: Pro-
ceder segn se indica en Niacina o Niacinamida.
Solucin estndar: Equivalente a 24 pg/ml de ER Clor-
hidrato de Piridoxina USP en Diluyente
Solucin m_u_estra: Equivalente a 24 [lg/ml de Clorhi-
drato de P1ndox1na, a partir de Soluc1on Oral en
Diluyente
6858 Vitaminas OleosoluhlP~ P Hirlroso!ubles / Suplementos Dietticos
Anlisis
Muestras: \o!uoon Pstandar y Solucin muestra
Calcular el porce11taje de la cantidad declarada de clor-
hidrato rle piridnxin;i (CH:: f'JO, HC!) en IJ orcin
de Solucin Oral tomada:
Re~ultado = (r,/r.) v (C/C) x 100
ru = rea del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solucin muestra
r1 = rea del pico de clorhidrato de piridoxina de
la Solucin estndar
C1 = concentracin de ER Clorhidrato de Piridoxina
USP en la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
piridoxina en la Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de piridoxina (CsH 11 NO, HCI)
RIBOFLAVINA-5'-FOSFATO SDICO, Mtodo 7
[NOTA-La riboflavina-5' -fosfato sdico se cuantifica con-
tra el ER Riboflavina USP en este procedimiento. En el
cromatograma de la Solucin muestra, el pico de ribof/a-
vina-5' -fosfato es el nico pico medido para el clculo.]
Diluyente, Fase mvil y Sistema cromatogrfico: Pro-
ceder segn se indica en Niacina o Niacinamida.
Solucin estndar: Equivalente a 8 g/mL de ER Ribo-
flavina USP en Diluyente, calentando si tuera necesario.
Solucin muestra: Equivalente a 8 g/mL de ribot/a-
vina, a partir de Solucin Oral en Diluyente
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para ribofla-
vina-5'-fosfato sdico y riboflavina son aproximada-
mente O, 18 y 1,0, respectivamente.]
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de ri-
boflavina (C, 1H20N406) en la porcin de Solucin Oral
tomada:
Resultado = (r11/ r1) x ( C/ Cu) x F x 100
ru = rea del pico de riboflavina-5'-fosfato de la
Solucin muestra
r1 = rea del pico de riboflavina de la Solucin
esindar
C = concentracin de ER Ribof/avina USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de riboflavina en la
Solucin muestra (mg/mL)
F = factor para convertir la respuesta obtenida de
ribof/avina-5'-fosfato a ribof/avina, 1,493.
[NOTA-La riboflavina fosfato sdico es una
mezcla de monofosfatos isomricos y difosfa-
tos que contienen una cantidad promedio de
67% de riboflavina-5'-monofosfato, la cual se
separa en este sistema cromatogrfico. El fac-
tor 1,493 asume 67% de riboflavina-5'-mo-
nofosfato.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C 11H20N40o)
RIBOFLAVINA o RIBOFLAVINA-5'-FOSFATO SDICO, Mtodo 2
[NOTA-Usar material de vidrio con proteccin actnica
durante todo este proceqimiento. I
Blanco de disolventes: Acido clorhdrico 1 N, acetato
de sodio 2,5 M y agua (1 :2:97)
Solucin madre del estndar: Tramferir 16 mg de ER
Riboflavina USP a un matraz volumtrico de 100 mL,
disolver en 1,0 mL de cido c/orh1drico 1 N y 2,0 mL de
acetato de sodio 2,5 M, y diluir con agua a volumen.
Transferir l 0,0 mL de esta solucin a un matraz volum-
trico de 100 mL y diluir con agua a volumen.
Solucin estndar: Transferir 5,0 mL de Solucin madre
del estandar a un matraz volumtrico de 500 mL, agre-
gar 5,0 mL de cido clorh1drico 1 N y 10,0 mL de ace-
tato de sodio 2,5 M, y diluir con agua a volumen.
USP 38
Solucin muestra: Tramferir un volumen medido con
exactitud de ~oluuon Oral, equivalente a 0,8 mg de ri-
bof/avina, a un matraz volumetrico de 100 mL y diluir
LVI 1 ayua a voiumen. franstem 10,0 ml de la solucin
resu!tJntc J tin rnat1a1 \10!_1rntr!c_ u dt~ 500 rnL, agregar
5,0 ml de cido clorhdrico 1 N y 10,0 mL de acetato
de sodio 2,5 M, y diluir con agua a volumen.
Condiciones instrumenta/es
(Ver Espectrofotometra y Dispersin de Luz (851 ).)
Modo: Fluorescencia
Longitudes de onda analticas
Excitacin: 440 nm
Emisin: 530 nm
Blanco: Disolvente
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Determinar las intensidades de fluorescencia mximas, 11
e /,,, rle la Solucin estndar y la Solucin muestra, res-
pectivamente. Calcular el porcentaje de la cantidad de-
clarada de riboflavina (C11H20N406) en la porcin de
Solucin Oral tomada:
Resultado= (/u/11) x (Cs/Cu) x 100
lu = intensidad de fluorescencia de la Solucin
muestra
11 = intensidad de fluorescencia de la Solucin
estndar
Cs = concentracin de ER Riboflavina USP en la
Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de riboflavina en la
Solucin muestra (mg/mL)
Criterios de aceptacin: 90,0%-150,0% de la cantidad
declarada de riboflavina (C11H20N406)
TIAMINA
Diluyente, Fase mvil y Sistema cromatogrfico: Pro-
ceder segn se indica en Niacina o Niacinamida.
Solucin estndar: Equivalente a 24 g/mL de ER Clor-
hidrato de Tiamina USP en Diluyente
Solucin muestra: Equivalente a 24 g/mL de clorhi-
drato de tiamina, a partir de Solucin Oral en Diluyente
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos principales. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de
tiamina (C12H11C/N40S HCI) o mononitrato de tia-
mina (C12H1/N10"S) en la porcin de Solucin Oral
tomada:
Resultado= (r11/r1) x (C/Cu) x Fx 100
ru = rea del pico de tiamina de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de tiamina de la Solucin
estndar
C = concentracin de ER Clorhidrato de Tiamina
USP en la Solucin estndar (mg/mL)
Cu = concentracin nominal de clorhidrato de
tiamina o mononitrato de tiamina en la
Solucion muestra (mg/mL)
F - l (para productos que contienen clorhidrato
de tiamina) y 0,97 (para productos que
contienen rnononilrato de tiarnina)
Criterios de aceptacin: 90,0%-250,0% de la cantidad
declarada de clorhidrato de tiamina (C12H11C/N40S
HCI) o mononilrato de tiamina (C2H, 1Ns01S)
OTROS COMPONENTES
DETERMINACIN DE ALCOHOL, Mtodo I (611 > (si estuviera
presente): 90,0%-120,0% de la cantidad declarada de
C2H10H
CONTAMINANTES
PRUEBAS DE RECUENTO MICROBIANO (2021): El recuento to-
tal de microorganismos aerobios no excede de 3 x 10 3
ufc/mL y el recuento total combinado de hongos fila-
mentosos y levaduras no excede de 3 x 10 2 ufc/mL.
USP 38 Suplementos Diettiros ,1 Vit<irnin<'l<; OIPmnlt1hlP<; e Hidrosolubles 6859

PROCEDIMIENTOS MICROBIOLGICOS PARA COMPROBAR LA AU- ER Clorhidrato de Tiamina USP

SENCIA DE MICROORGANISMOS \2022): Cumple con los re- Monoclorhidrato de tiazol, 3 [( 4-amino-2-met1l-S-p1rimi-
quisitos de las pruebas para determinar la ausencia de di nil)meti 1)-5-( 2-h id roxieti 1)-4-meti 1-, cloruro.
5a/1nonella spp., [~Lhcrichiu u_;/i y Staphy!ococcus aurcus. (;IJ,,C!t'J.,OS HC! 337,27
ER Vitamina A USP
REQUISITOS ADICIONALES Acetato de 3, /-d1met11-9-(2,6,6-tnmetii- i -ciciohexen-
ENVASADO y ALMACENAMIENTO: Conservar en envases im- 1-il) 2,4,6,8-nonatetraen- l -ol (acetato de vitamina A),
permeables y resistentes a la luz bajo gas inerte o con
una cmara gaseosa superior mnima,
ETIQUETADO: La etiqueta indica que el producto es Solu-
cin Oral de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles. La
etiqueta indica la cantidad de cada vitamina presente en
un volumen dado de Solucin Oral y, cuando sea necesa-
Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles,
rio, la forma qumica de vitamina presente, Cuando el Tabletas
producto contiene vitamina E, la etiqueta indica si se
trata de la forma d o di, Cuando el producto declara DEFINICIN
contener pantenol, la etiqueta indica el contenido equi- Las Tabletas de Vitaminas Oleosolubles e Hidrosolubles con-
valente de dexpantenol. Cuando se proporciona ms de tienen una o ms de las siguientes vitaminas oleosolubles:
un mtodo de valoracion para una vitamina en particu- Vitamina A, Vitamina D como Ergocalciferol (Vitamina D2)
lar, el etiquetado indica el mtodo de valoracin con el o Colecalciferol (Vitamina D3), Vitamina E, Fitonadiona (Vi-
que cumple el producto nicamente si no se usa el M- tamina Ki) y Beta Caroter:io; y una o ms de las siguientes
todo l, vitaminas hidrosolubles: Acido Ascrbico o su equivalente
ESTNDARES DE REFERENCIA USP <11) como Ascorbato de_ Calcio o Ascorbato de Sodio, Biotina,
ER Alfa Tocoferol USP <;:ianocobalamina, Acido Flico, Niacina o Niacinamida,
ER Pantotenato de Calcio USP Acido Pantotnico (como Pantotenato de Calcio o Panto-
Sal clcica (1 :2) de '.J-alanina, N-(2,4-dihidroxi-3,3-dime- tenato de Calcio Racmico), Clorhidrato de Piridoxina, Ri-
til-1-oxobutil)-, (R)-, botlavina y Clorhidrato de Tiamina o Mononitrato de Tia-
C18H12CaN2010 476,53 mina. Las Tabletas contienen no menos de 90,0% y no
ER Colecalciferol USP ms de 165,0% de las cantidades declaradas de vitamina
9, 1O-Secocolesta-5,7,10(19)-trien-3-ol, (3'.J,5Z,7f)-. A (C20H100) como retino! o steres de retinol en la forma
C21H440 384,64 de acetato de retinilo (C22H322) o palmitato de retinilo
ER Cianocobalamina USP (C36H6o02), vitamina D como colecalciferol (C21H440) o er-
Vitamina B12, gocalciferol (C23H4 40); vitamina E como alfa tocoferol
C6iH88CoN14014P 1355,37 (C29Hso02), acetato de alfa tocoferilo (C11 Hs20,) o succi-
ER Dexpantenol USP nato cido de alfa tocoferilo (Ci3Hs40s), fitonadiona
D-( +)-2,4-Dihidroxi-N-(3-hidroxipropil)-3, 3- (C31 H4602) y beta caroteno (C.oHs6); y no menos de
dimetilbutiramida, 90,0% y no ms de 150,0% de las cantidades declaradas
C9H 19N04 205,25 de cido ascrbico (C6Hs06) o sus sales, como ascorbato
ER Ergocalciterol USP de calcio (C 12H 14Ca012 2H20) o ascorbato de sodio
9, 1O-Secoergosta-5,7,1 O (19),22-tetraen-3-ol, (C6H1Na06); biotina (C10H16N203S); cianocobalamina
(3'.J,5Z, 7 E,22[)-. (C63HssCoN1414P); cido flico (C19H19N106); niacina
C78H440 396,65 (C6HsN02) o niacinamida (C6H6N20); pantotenato de cal-
FR Niacina lJSP cio (C rnHi2CaN2010); clorhidrato de piridoxina (CsH1 i NOi
cido 3-piridincarboxlico. HCI); ribotlavina (C11H20N406) y tiamina (C12H11CIN40S)
C6HsN02 123, 11 como clorhidrato de tiamina o mononitrato de tiamina.
ER Niacinamida USP No contienen minerales. Pueden contener otras sustancias
3-Piridincarboxamida. agregadas declaradas generalmente reconocidas como se-
C6H6N20 122,1 2 guras, en cantidades inobjetables.
ER Clorhidrato de Piridoxina USP
Clorhidrato de 3,4-piridindimetanol, 5-hidroxi-6-metil-. CONTENIDO
C8H11NOi HCI 205,64 [NOTA--Cuando se proporcione ms de un mtodo de valo-
ER Pantenol Racmico USP racin para un ingrediente individual, los requisitos se pue-
ER Riboflavina USP den cumplir siguiendo cualquiera de los mtodos especifica-
Riboflavina. dos, declarando el mtodo usado en el etiquetado
C!/H20N4 6 376,36 nicamente si no se usa el Mtodo 1.]
VITAMINA A, Mtodo 1
4 Las LJnidades LISP de actividad para vitarrnna;, cuando existan o hayan exis- [NOTA-Cuando se especifica el uso de un ster de vita-
tido anteriormente, equ1valen a las unidades 1nternac1onales correspondientes 1
siempre que tales unidades hayan existido previamente. La Unidad USP para mina A (acetato de retinilo o palmitato de retinilo) en el
Vitamina F se ha disrontinuado. las unidades irlternacionales (UI) para vitami- procedimiento siguiente, usar la forma qumica presente
nas tambin se han disconhnu.ido; no obstante, continua el uso de UI en las en la formulacin. ER Vitamina A USP es acetato de
etiquet<Js de los productos de v1tam1nas. Cuando los artculos se etiquetan en retinilo. Se debe usar cuando se especifique ER Vitamina
trminos de Unidades adems del etiquetado requerido, la relacin de las
Unid.ades usr o UI _con rP~pt->clO r1 la flld'H1 (-') Id siguiente. Una Unidad USP A USP. Usar material de vidrio con proteccin actnica
de V1tam1na A= 0,3 pg de todo uans retino! (alcohol de vitamina A) o durante todo este procedimiento.]
O, 344 ,ug de todo lrum Jcelato de retinilo (acetato de vitamina A) o 0,55 g Fase mvil: n-Hexano
de todo lrum palmitato de retinilo (palmitato de vitamina A) y 1 >t9 de reti-
no! (3,3 Un1dade' USP de Vitamina A)= 1 equivalente de retino! (RE); 1 Lll de
Solucin estndar: 15 g/mL de acetato de retinilo, a
beta caroteno = 0,6 g de todo lrons beta caroteno; 1 Unidad USP de Vita- partir de ER Vitamina A USP en n-hexano
m1n<l D = 0,025 pg de ergocalc1terol o colecaluterol; y 1 mg de di-alfa tocofe- Solucin madre de aptitud del sistema: 15 g/mL de
rol = 1, 1 antigr r.is Unidades 1JW de Vitamina E, 1 mg de acetato de di-alfa palmitato de retinilo en n-hexano
tocoferilo = 1 antigua Unidad USP de Vitamina E, 1 mg de succinato cido de
dl-altJ tocotenlo ~ ,8Y antiguas Unidades uSP de Vitamina E, 1 mg de d-alfa Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
tocoferol "' 1,49 antiguas Unid<Jdes USP de Vitamina r y 1 mg de acetato de iguales de Solucin madre de aptitud del sistema y Solu-
d-alfa tocofcrilo = 1,36 antiguas Unidades USP de Vitamina E, 1 mg de succi- cin estndar para obtener concentraciones de 7,5 pg/
nato dc1do Ue et-alta ioLoleido -~ !,21 <1r1t1~lld'l lJ111dddt-\ lJSP dt-' Vitamina E.
En trn1ino'l de equivalentes de (/dita tocofero1, 1 mg de acetato de d-zilfa mL de acetato de ret1nilo y de palmitato de retinilo.
tocoferilo = 0,91, 1 mg de succinato cido de d-alfa tocoterilo = 0,81, 1 mg Solucin muestra: Reducir a polvo fino no menos de
de di-alfa tocoferol = 0,74, 1 mq de acetato de di-alta tocoferilo = 0,67 y 20 Tabletas. Transferir una porcin del polvo, equiva-
1 n1<J de \tJC illdlo (ic_ ido de 1J/-c1i(1 loculer ilu ~ 0,60.
<._
lente a 5 Tabletas, a un recipiente con tapa de rosca
6860 Vitaminas Oleosoltibles e Hidrosolubles I Suplementos Dietticos
con recubrimiento interno de tefln. Agregar 1 O ml de
d1metil sultxido y 15 ml de n-hexano, y agitar durante
45 minutos en un agitador de movimiento tipo mueca
(wrist-21ction) en un bano de Jgu.i mJnlenido a 60 .
f NOTA-Austar el agitador dP mnvimierito tipo mueca
para asegurar que el contenido del recipiente se mezcle
vigorosa y meticulosamente.] Centrifugar a 3000 rpm
durante 1 O minutos y transferir la capa de hexano con
una pipeta a un matraz volumtrico de 100 ml. Agre-
gar 15 ml de n-hexano a la capa de dimetil sulfxido,
agitar meticulosamente durante 5 minutos y transferir la
capa de hexano con una pipeta a un matraz volum-
trico de 1 00 ml. Repetir esta extraccin con tres porcio-
nes adicionales de 15 ml de n-hexano. Diluir los extrac-
tos en el matraz volumtrico con n-hexano a volumen.
Diluir un volumen de 1 O ml de esta solucin con n-
hexano hasta obtener una solucin con una concentra-
cin de 15 g/ml de vitamina A como retinol
(C20H30).
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 15 cm; relleno L8 de 3 m
Velocidad de flujo: 1 ml/rnin
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir el rea del pico de la forma todo trans de ace-
tato de retinilo de la Solucin estndar y el rea del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
cin muestra. Para productos que contengan acetato
de vitamina A o palmitato de vitamina A, calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de vitamina A,
como retinol (C20HiuO), en la porcin de Tabletas
tomada:
Resultado = (ru! r1) x ( C1/ Cu) x F x 1 00
ru = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin estndar
C; = concentracin de acetato de retinilo
(C22H1202) de ER Vitamina A USP en la
Solucin estndar (g/ml)
Cu = concentracin nominal de vitamina A como
retinol (C20HioO) en la Solucin muestra
(g/ml)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retinol, 0,872
[NOTA--Las respuestas molares de acetato de retinilo y
palmitato de retinilo son equivalentes.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retinol (C20H30)
VITAMINA A, Mtodo 2
[NOTA-Cuando se indica un ster de vitamina A (acetato
de retinilo o palmitato de retinilo) en el procedimiento
siguiente, usar la forma qumica presente en la formula-
cin. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo. Se debe
usar cuando se especifique ER Vitamina A USP. Usar ma-
terial de vidrio con proteccin actnicJ durante todo
este procedimiento.j
Solucin de cido sulfrico metanlico 3 N: Agregar
cuidadosamente 9 ml de cido s1ilfC1rico 21 80 ml de
USP 38
metanol en un matraz volumtrico de 100 ml. Enfriar y
diluir con rnetanol a volumPn.
Solucin de ascorbato de sodio-pirogalol: Transferir
i O g de ascorbato de sodio y ) g de p1rogalol a un
matraz volumtrico de 1 00 ml, y agregd agua sufi-
ciente para disolver. Agregar 1,7 ml de cido sulfrico y
diluir con agua a volumen.
Solucin de lecitina: 5 mg/ml de lecitina en
2,2,4-trimetilpentano
Fase mvil: n-Hexano y acetato de etilo (99,7: 0,3)
Solucin estndar: 15 ~tg/ml de acetato de retinilo, a
partir de ER Vitamina A USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solucin madre de aptitud del sistema: 15 g/ml de
palmitato de retinilo en 2,2,4-trimetilpentano
Solucin de aptitud del sistema: Mezclar volmenes
iguales de Solucin madre de aptitud del sistema y Solu-
cin estndar para obtener concentraciones de 7,5 g/
ml de acetato de retinilo y de palmitato de retinilo.
Solucin muestra: [NOTA-Esta preparacin es ade-
cuada para la determinacin de vitamina A, vitamina D
y vitamina E, cuando se encuentran presentes en la for-
mulacin.] Reducir a polvo fino no menos de 20 Table-
tas. Si la vitamina D se encuentra presente en la formu-
lacin, transferir una porcin del polvo, equivalente a
30 g de la cantidad declarada de colecalciferol o ergo-
calciferol (vitamina D), a un recipiente con tapa de
rosca con recubrimiento interno de tefln. Si la vita-
mina D no se encuentra presente en la formulacin,
usar una porcin del polvo, equivalente a 90 mg de la
cantidad declarada de vitamina E (como alfa tocoferol,
acetato de alfa tocoferilo o hemisuccinato de alfa toco-
ferilo). Si la vitamina E no se encuentra presente en la
formulacin, usar una porcin del polvo, equivalente a
2,5 mg de la cantidad declarada de vitamina A, como
acetato de retinilo o palmitato de retinilo. Agregar 0,5 g
de bicarbonato de sodio, 1,5 ml de Solucin de lecitina
y 12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano, y dispersar en un
mezclador de vrtice. Agregar 6 ml de Solucin de as-
corbato de sodio-pirogalol, agitar lentamente y dejar que
la solucin se desgasifique. Continuar agitando hasta
que haya cesado la emisin de gases y luego agitar
durante 12 minutos adicionales. Agregar 6 ml de dime-
til sulfxido, mezclar en un mezclador de vrtice hasta
formar una suspensin y agitar durante 12 minutos.
Agregar 6 ml de Solucin de cido sulfrico metanlico
3 N, mezclar en un mezclador de vrtice para formar
una suspensin y agitar durante 12 minutos. Agregar
12,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano, mezclar en un mez-
clador de vrtice hasta formar una suspensin y agitar
durante 1 O minutos. Centrifugar durante 1 O minutos
para romper la emulsin y para que el sobrenadante se
torne transparente. [NOTA-El sobrenadante se usa para
la determinacin de vitamina A, as como para vitamina
D y vitamina E, si se encuentran presentes en la formu-
lacin.] Si fuera necesario, diluir cuantitativamente un
volumen del sobrenadante con 2,2,4-trimetilpentano
hasta obtener una concentracin cercana a la de la So-
lucin estndar.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatografta (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 325 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 m
Velocidad de flujo: 1,5 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin de aptitud del sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 8,0 entre la forma todo
trans de acetato de retinilo y la forma todo trans de
palmitato de retinilo
USP 38 Suplementos Dietticos /Vitaminas Oleosoluble' e Hidrosolubles 6861
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%
Anlisis
Muestras: . Solucin estndar y Solucin muestra
Medir ei red del f.Jtco de td u1111a ludo trans de ace-
tato de retinilo de !J Solucin estndar v e! rea del
pico de la forma todo trans de acetato de retinilo o la
forma todo trans de palmitato de retinilo de la Solu-
cin muestra.
Calcular el porcentaje de la cantidad declarada de vita-
mina A, como retino! (C70H100), en la porcin de Ta-
bletas tomada:
Resultado= (ru/rs) x (Cs!Cu) x F x 100
ru = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin muestra
rs = rea del pico de la forma todo trans de ster
de retinilo de la Solucin estndar
e = concentracin de acetato de retinilo
(C22H122), a partir de ER Vitamina A USP en
la Solucin estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de vitamina A como
retino! (C20H100) en la Solucin muestra
(g/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extraccin ini-
cial de 26,5 mL de 2,2,4-trimetilpentano para calcular
la concentracin nominal. Las respuestas molares de
acetato de retinilo y palmitato de retinilo son
equivalentes.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C20H100)
VITAMINA A, Mtodo 3
[NOTA-Cuando se indica un ster de vitamina A (acetato
de retinilo o palmitato de retinilo) en el procedimiento
siguiente, usar la forma qumica presente en la formula-
cin. ER Vitamina A USP es acetato de retinilo. Se debe
usar cuando se especifique ER Vitamina A USP. Usar ma-
terial de vidrio con proteccin actnica durante todo
este procedimiento.]
Disolvente de extraccin: n-Hexano y cloruro de meti-
leno (3:1)
Solucin de hidrxido de potasio: 800 mg/mL de hi-
drxido de potasio en agua. [NOTA-Agregar cuidadosa-
mente el hidrxido de potasio al agua. Mezclar y
enfriar.]
Diluyente: 1 O mg/mL de pirogalol en alcohol
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (92:8)
Solucin madre del estndar: 30 g/mL de acetato de
retinilo, a partir de ER Vitamina A USP en Diluyente.
[NOTA-Esta solucin se puede almacenar en un refrige-
rador durante 1 semana.]
Solucin estndar: Diluir un volumen de Solucin ma-
dre del estndar con Diluyente hasta obtener una con-
centracin de 1 g/mL de ER Vitamina A USP. Transferir
10,0 mL de esta solucin a un matraz de 125 mL con
tapn y agregar 5 mL de agua, 5 mL de Diluyente y
3 mL de Solucin de hidrxido de potasio. Tapar hermti-
camente, agitar durante 15 minutos sobre un bao de
agua mantenido a 60 5' y enfriar a temperatura am-
biente. Agregar 7 mL de agua y 25,0 mL de Disolvente
de extraccin. Tapar hermticamente y agitar vigorosa-
mente durante 60 segundos. Enjuagar las paredes del
matraz con 60 mL de agua y dejar en reposo durante
1 O minutos para que las capas se separen. Retirar una
porcin de la capa orgnica para inyectarla en el cro-
matgrafo. Esta Solucin estndar contiene 0,34 g/mL
de retino!.
Solucin muestra: Reducir a polvo fino un nmero
contado de Tabletas. Transferir una porcin del polvo,
equivalente a 1,5 mg de acetato de retinilo, a un ma-
traz de 125 mL con tapn. Agregar 5 mL de agua,
15 mL de Diluyente y 3 mL de Solucin de hidroxido de
potasio. Tapar hermticamente, agitar durante 1 5 minu-
tos sobre un bao de agu;:i mantenido a 60 5 ~ y en-
friar a temperatura ambiente. Agregar 7 mL de agua y
25,0 mL de Disolvente de extraccin. Tapar hermtica-
rnPnte y agitar vigorosamente durante 60 segundos o
ms, si fuera necesario, para completar la extraccin.
Enjuagar las paredes del matraz con 60 mL de agua y
dejar en reposo durante 1 O minutos hasta que las capas
se separen. [NOTA-No agitar porque podra formarse
una emulsin.] Retirar una porcin de la capa orgnica
y diluir con Disolvente de extraccin hasta obtener una
concentracin de O, 34 ~tg/mL de retino l.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf1a (621 ), Aptitud del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 335 nm
Columna: 6,2 mm x 8 cm; relleno L3
Temperatura de la columna: 40
Velocidad de flujo: 4 ml/min
Volumen de inyeccin: 50 L
Aptitud del sistema
Muestra: Solucin estndar
[NOTA-Los tiempos de retencin relativos para 1 3-cis-
retinol y la forma todo trans de retino! son 0,92 y 1,0,
respectivamente.]
Requisitos de aptitud
Desviacin estndar relativa: No ms de 5,0%
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de la forma todo trans de
retino! y 1 3-cis-retinol. Calcular el porcentaje de la
cantidad declarada de vitamina A, como retino!
(C20H 3o0), en la porcin de Tabletas tomada:
Resultado= (rn/rr2) x (Cs/Cu) x Fx 100
ru = suma de las reas de los picos de la forma
todo trans de retino! y 1 3-cis-retinol de la
Solucin muestra
rr2 = suma de las reas de los picos de la forma
todo trans de retino! y 13-cis-retinol de la
Solucin estndar
e = concentracin de acetato de retinilo
(C23Hi202) de ER Vitamina A USP en la
Solucin estndar (g/mL)
Cu = concentracin nominal de vitamina A, como
retino! (C20H10) en la Solucin muestra
(g/mL)
F = factor usado para convertir acetato de retinilo,
la forma ster presente en ER Vitamina A
USP, a retino!, 0,872
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina A, como retino! (C20H100)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 1
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actinica durante todo este
procedimiento.]
Fase mvil: n-Hexano y alcohol isoproplico (99: 1)
Solucin estndar: 2 g/mL de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en n-hexano
Solucin de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de solucin estndar a 60 durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Solucin muestra: Proceder segn se indica en Solucin
muestra en Vitamina A, Mtodo 1. Transferir no menos
de 20 mL de esta solucin a un recipiente adecuado y
evaporar, si fuera necesario, al vaco a temperatura am-
biente hasta obtener una concentracin de 2 ~tg/mL de
colecalciferol o ergocalciferol.
Sistema cromatogrfico
(Ver Cromatograf1a <621 ), Aptitud del Sistema.)
6862 Vitaminas OleosoluhlPs e Hirlroso!ub!es / Suplementos Dietticos
Modo: HPLC
Detector: UV 16S nm
Columna: 4,6 1nrn , 15 un; relleno L8 de 3 pm
Vt>locirfarl rlt> flujo: 1 mL/mi1:
Volumen de inyeccin: 100 ul
Aptitud del ~i~tema
Muestras: Solucin estandar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 1 O entre la forma de vita-
mina D presente y su precursor correspondiente, So-
lucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin e-,lnclar
Anlisis
Muestras: Solucin estndar y Solucin muestra
Medir las reas de los picos de vitamina D. Calcular el
porcentaje de la cantidad declarada de colecalciferol
(C21H44) o ergocalciterol (C28H440) en la porcin de
l abletas tomada:
Resultado= (ru/r1) x (C/Cu) x Fx 100
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
C, = concentracin de ER Colecalciferol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(pg/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (pg/ml)
F = factor de correccin que se debe tomar en
cuenta para la cantidad promedio de
previtamina D presente en la Solucin
muestra, 1,09
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44)
o ergocalciferol (C2sH44)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 2
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actnica durante todo este
procedimiento.]
Solucin de cido sulfrico metanlico 3 N, Solucin
de ascorbato de sodio-pirogalol, Solucin de lecitina
y Solucin muestra: Proceder segn se indica en Vita-
mina A, Mtodo 2.
Fase mvil: n-Hexano y alcohol butlico terciario
(98,75: 1,25)
Solucin estndar: 1 pg/ml de ER Colecalciferol USP o
ER Ergocalciferol USP en 2,2,4-trimetilpentano
Solucion de aptitud del sistema: Calentar un volumen
de Solucin estndar a 60" durante 1 hora para isomeri-
zar parcialmente la vitamina D (colecalciferol o ergocal-
ciferol) a su precursor correspondiente.
Sistema cromato9rfico
(Ver Cmmatografw \621 ), Aplitucl del Sistema.)
Modo: HPLC
Detector: UV 265 nm
Columna: 4,6 mm x 25 cm; relleno L24 de 5 pm
Velocidad de flujo: 1 ml/min
Volumen de inyeccin: 40 pl
Aptitud del sistema
Muestras: Solucin estndar y Solucin de aptitud del
sistema
Requisitos de aptitud
Resolucin: No menos de 4,0 entre la forma de vita-
mina D presente y st1 prPrtir5or correspondiente, So-
lucin de aptitud del sistema
Desviacin estndar relativa: No ms de 3,0%, Solu-
cin ntndar
USP 38
Anlisis
Muestras: Su/uci11 eol11dar y Solucin muestra
Medir la'> reas de los picm de vitamina D. Calcular el
pocentaje de ia Ldl 1liudd JeLiar a Ja Je Luiecaiciferol
(C ;H.;.+0) o ergoca!citero! (C .-xH.; . 0) en !J porcin de
Tabletas tomada:
Resultado= (ri!r1) x (C1/Cu) x 100
ru = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin muestra
r1 = rea del pico de colecalciferol o ergocalciferol
de la Solucin estndar
C = concentracin de ER Colecalciterol USP o ER
Ergocalciferol USP en la Solucin estndar
(pg/ml)
Cu = concentracin nominal de colecalciferol o
ergocalciferol en la Solucin muestra (pg/ml)
[NOTA-Tomar en cuenta el volumen de extraccin inicial
de 26,5 ml de 2,2,4-trimetilpentano para calcular la
concentracin nominal.]
Criterios de aceptacin: 90,0%-165,0% de la cantidad
declarada de vitamina D como colecalciferol (C21H44)
o ergocalciferol (C28H440)
COLECALCIFEROL o ERGOCALCIFEROL (VITAMINA D), Mtodo 3
[NOTA-Cuando se especifica vitamina D (colecalciferol o
ergocalciferol) en el siguiente procedimiento, usar la
forma qumica presente en la formulacin y el Estndar
de Referencia USP pertinente. Usar material de vidrio
con proteccin actnica durante todo este
,procedimiento.]
Acido actico diluido: Solucin de cido actico glacial
(1 en 1 O) en agua
Solucin de fenolftalena: 1 O mg/ml de fenolftalena
en alcohol
Solucin de hidrxido de potasio: Disolver lentamente
14 g de hidrxido de potasio en una mezcla de 31 ml
de alcohol deshidratado y 5 ml de agua. Preparar a
diario.
Disolvente de extraccin: Cloruro de metileno y al-
cohol isoproplico (99,8: 0,2)
Fase mvil: Acetonitrilo y metanol (91 :9)
Solucin madre del estndar: 0,2 mg/ml de ER Cole-
calciferol USP o de ER Ergocalciferol USP en alcohol des-
hidratado. [NOTA-Preparar nuevamente cada 4 sema-
nas. Almacenar en un congelador.]
Solucin estndar: [NOTA~-Acondicionar la columna de
extraccin en fase slida especificada para su uso en la
Solucin estndar y la Solucin muestra lavando la co-
lumna inicialmente con 4,0 ml de una mezcla de clo-
ruro de metileno y alcohol isoproplico (4: 1 ), seguida de
5,0 ml de Disolvente de extraccin. No dejar que la co-
lumna se seque.] Diluir un volumen de Solucin madre
del estndar con alcohol deshidratado hasta obtener
una concentracin de 5 pg/ml de ER Colecalciferol USP
o de ER Ergocalciferol USP. Preparar esta solucin en el
da de su uso. Transferir 2,0 ml de esta solucin a un
matraz de 125 ml con tapn. Agregar 15,0 ml de agua
y 15,0 ml de Solucin de hidrxido de potasio, tapar y
agitar durante 30 minutos en un bao de agua mante-
nido a 60 . Dejar que se enfre a temperatura ambiente
y transferir el contenido del matraz a un embudo de
separacin de 250 ml. Agregar 15,0 ml de agua al ma-
traz, tapar, agitar vigorosamente y transferir esta solu-
cin al embudo de separacin. Enjuagar el matraz con
60 ml de n-hexano y transferir el enjuague al embudo
de separacin. Tapar, agitar vigorosamente durante 90
segundos y dejar en reposo durante 15 minutos hasta
que las capas se separen. Escurrir y desechar la capa
acuosa. Agregar 15,0 ml de agua a la capa de hexano
en el embudo de separacin, tapar y agitar vigorosa-
mente. Dejar en reposo durante 1 O minutos hasta que
las capas se separen y desechar la capa acuosa. Agregar
1 gota de Solucin de fenolftalena,y 15,0 ml de agua al
embudo de separacin. Agregar Acido actico diluido
USP 38 Suplementos Dil?tPticm .1 Vitaminas Olcosolublcs e H1drosolubles 6863

gota a gota, agitando, hasta que el lavado sea neutro.
Dejar en reposo durante 1 O minutos hasta que las ca-
pas se separen. Escurrir y desechar la capa acuosa. Fil-
l c1r !.i cap.i de hex.:rno a travs de sulfato de sodio an-
hidro, roJorado Pn IHl fWqlJPflO troto de algodn, en
un matraz de tondo redondo de 100 ml. Enjuagar el
embudo y
Fase mvil: Metano! y :ioluuo11 A (19: 1)
Solucin de aptitud del sistema: Prepnrar t1na <;oluc1on
de 0,65 mg/ml de ER Ergocalliferol USP en metnnol.
Transferir 1,0 ml de esta solucinn il 1in m;it ril; vol11rnf>-
trico de 100 ml que contenga 100 mq de ER Acetato
de Alfa Tocoferilo USP. Disolver en 30 ml de rnel,mol,