A propagao in vitro de plantas.
CULTURA DE TECIDOS O que isso?
Cultura de tecidos vegetais - uma ferramenta fundamental no estudo da biologia moderna de plantas.
L. Pedro Barrueto Cid
Bilogo M.Sc. Ph.D
Embrapa/Cenargen - rea de Biologia Celular
Autor do livro "O mtodo cientfico, o cientista e a
sociedade", pela editora da Universidade do Amazonas.
lpedro@cenargen.embrapa.br
Fotos do autor
Definio
A propagao in vitro de plantas,
Figs.1 e 2, chamada tambm micropro-
pagao, uma tcnica para propagar
plantas dentro de tubos de ensaios ou
similares de vidro (por isso, o termo in
vitro), sob adequadas condies de
assepsia, nutrio e fatores ambientais
como luz, temperatura, 02 e CO2.
uma parte importante de biotec-
nologia, conjuntamente com outras
duas reas: DNA recombinante e fer-
mentao. A cultura in vitro, apresenta
diferentes modalidades conforme os
objetivos de sua aplicao, como por
exemplo, cultura de protoplastos; an-
teras; calos (Fig. 3); clulas em suspen-
so (Fig. 4); sementes (Figs. 5 e 6),etc.
Fig.1: Plntula de caf cv Rubi, crescida in vitro e obtida a partir
16 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
de gema axilar de uma outra plntula similar a ela. Assim por
diante, outros clones podem ser obtidos
Antecedentes histricos
A teoria da totipotencialidade for-
mulada por Matthias Schleiden & The-
odor Schwann, em 1838, pode ser dita
que constitui um dos primeiros funda-
mentos da cultura in vitro, embora
seus formuladores nem tenham imagi-
nado uma metodologia como essa.
A teoria afirma que a clula aut-
noma, portanto, que contm o poten-
cial necessrio para originar um orga-
nismo completo; nesse caso, uma planta
completa. claro que essa capacidade
deve manifestar-se sob especiais con-
dies de estmulo. Em decorrncia plantas de tabaco como modelo expe-
desta teoria, clulas com diferentes
fentipos dentro da planta tm idnti-
co gentipo. Haberlandt, um fisilogo
vegetal austro-hngaro, por volta de
1902, imbudo dessa teoria, foi o pri-
meiro a manipular um sistema de cultu-
ra in vitro de plantas, procurando esta-
belecer e consolidar um sistema de
micropropagao. Infelizmente, por li-
mitaes tcnicas da poca, seus esfor-
os falharam. Contudo, alguns anos
mais tarde a partir dos trabalhos de
Robbin (1922) e White (1934) em ponta
de razes; cultura de embries, por La
Rue (1936); cultura de calos, por Gau-
theret Nobcourt (1939); enriquecimen-
to de meios nutritivos com leite de
coco, por van Overbeek, 1941; uso de
rimental para estudo de morfognese,
por Skoog, desde 1944, e uso de meris-
temas apicais na obteno de plantas
livres de vrus, por Morel & Martin,
1952, abriram-se as estradas que a cul-
tura de tecido de plantas percorreria
triunfalmente ao longo de todo o sculo
XX, com mais e mais descobertas e
aplicaes.
Importncia
A cultura in vitro de plantas, uma
tcnica que no apenas apresenta im-
portncia prtica na rea florestal e
agrcola, mas, tambm na cientfica
bsica.
Dentro do campo da biologia de
plantas talvez seja uma das tcnicas
mais polivalentes. Assim, atravs da
cultura de protoplastos, podem-se hi-
bridizar variedades diferentes, vencen-
do barreiras genticas. Atravs da cultu-
ra de anteras, podem-se obter plantas
haplides, que logo depois podem-se
diploidizar e transformar-se em homo-
zigotos, isto , indivduos que produ-
zem um s tipo de gameta para um
determinado locus. Com a cultura de
clulas em meio lquido, podem-se obter
mutantes, isto , gentipos que ganha-
ram ou perderam alguma caracterstica
especfica. Com a cultura de embries e
meristemas, podem-se fazer trabalhos
de criopreservao para conservar mate-
riais em bancos de germoplasmas, com
economia de espao e dinheiro, espe-
cialmente em espcies de reproduo
assexuada como batata, mandioca, aba-
caxi etc. Com a cultura de meristemas
apicais, pode-se pensar em obter plantas
livres de vrus, e com a cultura de gemas
axilares (Fig.7), propagar milhares de
plantas, com gentipos superiores, por
exemplo resistentes a nematides, Fusa-
rium etc. (Fig.8). Na mesma linha de
raciocnio, a embriognese somtica
(Fig.9), pode fornecer grandes quantida-
des de plntulas que podem servir de
base para plantios no campo, tanto na
rea florestal quanto na agronmica e na
hortigranjeira. Por outro lado, a cultura
de tecidos d suporte tcnico a trabalhos
de transformao na rea da gentica e
na obteno de plantas transgnicas,
hoje, assunto da moda e muito contro-
vertido. No campo da aplicao bsica, a
cultura de tecidos d suporte tcnico
tambm bioqumica, fisiologia vege-
tal, fitopatologia e citogentica. Na
bioqumica, para estudo e dilucidao
de rotas metablicas. Na fisiologia, para
estudos de crescimento e desenvolvi-
mento, efeito de me-
tais pesados etc., na
fitopatologia, para es-
tudos de toxinas; e na
citogentica, para es-
tudos de cromossomos
ou aberraes cromos-
smicas (quebras cro-
mossmicas).
Apesar de toda essa
diversidade de tcni-
cas, a cultura de tecido
uma s, e o denomi-
nador comum de todas
elas : a assepsia, o
explante, o meio nutri-
tivo e os fatores ambi-
entais: luz, temperatu-
ra, C02 e 02.
Assepsia
Ser entendida como um conjunto de
procedimentos para tornar um explante
livre de microrganismos (bactrias, fun-
Fig.2: Plntula de
banana obtida in vitro
e transferida para terra
em casa de vegetao
gos filamentosos, leveduras etc).
A respeito de como evitar micror-
ganismos que possam contaminar o
explante, inevitvel o uso de antis-
spticos, sejam estes bacteriostticos
ou germinicidas. Esses antisspticos
podem ser antibiticos ou de outra
natureza, como lcoois (lcool etlico); trabalho in vitro.
halognios (hipoclorito de sdio); sais
de metais pesados (bicloreto de mer-
crio), fungicidas orgnicos etc. Em
relao vidraria e aos meios de cultu-
ra, estes devem ser esterilizados para
que se destruam todos os microrganis-
mos, por calor seco (forno, ar quente)
ou mido (autoclave). Pinas bisturis e
Fig.3: Calo frivel oriundo de
razes de plntulas de eucalipto
in vitro (Eucalyptus grandis x
E.urophylla)
demais utencilios metlicos para a ma-
nipulao do tecido podem ser esteri-
lizados por flambagem direta, como
por exemplo: lamparina com lcool ou
bico de Bunsen na cmara de fluxo
laminar, ambiente este axnico (livre
de germes) portanto, adequado para o
Explante
Dentro da terminologia da cultura
de tecidos, em geral, explante qual-
quer segmento de tecido oriundo de
uma planta para iniciar uma cultura in
vitro, geralmente com as vistas a esta-
beler um protocolo de
plantas de gentipo supe-
rior. Assim, o explante
pode ser um pice radicu-
lar ou caulinar, uma gema
axilar (Fig.7), um segmen-
to de folha jovem (Fig.
10), uma antera, um ov-
rio, um embrio zigtico,
etc. Esses explantes pode-
ro devir plantas direta-
mente, ou passar por uma
etapa intermediria de
calo, antes de a planta ser
obtida. Um calo uma
massa de clulas no dife-
renciadas do ponto de vis-
ta organognico (brotos,
razes, frutos etc), que est
em contnua proliferao
celular, podendo ser com-
pactos, friveis, esbranqui-
ados ou amarelados Fig. 3, etc.
Podemos realizar induo de pln-
tulas a partir de um calo, com horm-
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 17

Fig.4: Aspecto microscpico
de um conglomerado de
clulas em suspenso, obtidas
a partir de calos friveis de
razes de plntulas de
eucalipto in vitro
nios vegetais ou reguladores do cres-
cimento (estes ltimos de ao hor-
monal, mas de origem sinttica). As-
sim, numa reviravolta espetacular
(morfognese) o calo comea a indu-
zir brotos, mas a base molecular do
fenmeno na clula, ainda no
especificamente conhecida, por isso
tambm a dificuldade de extrapolar
protocolos de micropropagao de
uma espcie para outra, ou de uma
variedade para outra. Contudo, mui-
tas vezes, a incapacidade de induzir
brotos pode estar relacionada com a
poliploidia ou com aberraes cro-
Fig.5: Fruto de mamo
(Carica papaya L. cv
tainung 1) mostrando
aspectos e quantidade de
sementes por fruto
18 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
mossmicas. Por esses? Os estudos da nutrio de plan-
outro lado, discu- tas provenientes do mbito da fisiolo-
te-se muito se a gia vegetal informam que os elementos
obteno de plan- que compem o meio nutritivo da
tas via calo um cultura in vitro devem pertencer
bom sistema para categoria dos essenciais, isto , a planta
clonar plantas no se desenvolve na ausncia deles.
com fins comerci- Existem dois grupos deles: os macro-
ais. Embora a pre- nutrientes e os micronutrientes. Entre
ocupao seja per- os primeiros, podem-se citar: fsforo,
tinente, h tam- magnsio, nitrognio etc.; entre os
bm nessa preo- segundos, boro, mangans, cobre etc.
cupao muita Os primeiros so adicionados em for-
carga especulati- ma de sal, acima de 100 mg/l at o
va. Dentro da bio- mximo de 2.500, como no caso de
logia, clone um KNO3 em B5, enquanto os segundos,
termo de origem na quantidade de frao de miligra-
botnica e repre- mas, uns poucos miligramas por litro
senta a idia de (mximo 27 mg no caso do Fe em
plantas que se originam de uma mes- FeSO4. 7H2O). No sendo o selnio,
ma matriz e, supostamente, possuem o rubdio e outros, essenciais para a
mesmo gentipo. Em cultura de teci- planta, no formam parte dos meios
dos, isso no necessariamente pode nutritivos mais utilizados: tais como
ser verdade, por isso, ento, essa difi- MS, B5, White, Heller.
culdade de aceitar sem suspeitas plan- Embora a manipulao desses mei-
tas via calo. Quando essa variabilidade os constitua um processo de receitu-
morfogentica acontece a denomina- rio, existe muito fundamento fisiolgi-
mos variao somaclonal, embora co na sua utilizao; por exemplo,
ela seja indesejvel para a propagao balano lquido de ctions e nions na
clonal, ela possui muito potencial no soluo; antagonismo inico (o au-
estudos de melhoramento de plantas. mento da absoro de um diminui a do
outro); percentagem crtica de um ele-
Meio nutritivo mento (consumo de luxo); influncia
do pH na disponibilidade dos sais para
a) sais minerais a planta; absoro diferencial de ons
entre tipos de planta, exemplo: rvores
Se uma planta no solo precisa para e gramneas, estas ltimas mais exigen-
crescer de elementos minerais que so tes em bases; transporte ativo de ons
absorvidos pelas razes, quanto mais a nvel celular; enfim, so conhecimen-
um explante, que , por definio, um tos que podem auxiliar de modo im-
pedao de tecido separado da planta portante no estabelecimento de um
me. E que elementos minerais so protocolo de cultura de tecidos para
uma espcie.
b) componentes orgnicos:
sacarose
Um meio nutritivo tambm possui
componentes orgnicos, entre eles, sa-
carose, vitaminas e inositol, para citar
os mais utilizados.
A sacarose importante como fon-
te de carbono para alimentar a gliclise
e o ciclo de Krebs, devido a que,
inicialmente, o tecido, explante, no
suficientemente autotrfico. De um
outro ponto de vista, a sacarose, quan-
do em presena de auxina, pode con-
tribuir para a diferenciao do cmbio
em benefcio de novas formaes de
xilema e floema. Em alho, altas con-
centraes de sacarose (6%) tm melho-
rado ostensivamente sua bulbificao.
Sua concentrao normalmente varia
entre 1% a 3 %, mas, por efeito da
autoclavagem e do pH, sua concentra-
o no meio pode variar, j que hidro-
lizada em glicose e frutose, sendo que
esses limites no so claros e esse pro-
blema pode tornar-se limitante para o
explante ou para a planta.

vitaminas
So substncias requeridas por ani-
mais e plantas, embora estas ltimas
sejam mais autnomas quanto sua Fig.6: Germinao de sementes de mamo sob condies in vitro, aps
sntese. As vitaminas so importantes ter-se retirado a sarcotesta e realizado sua assepsia
fatores catalticos de rotas metablicas
na clula. Nos trabalhos pioneiros da
cultura de tecido, os requerimentos de ser encontrado como pertencente ao mentos variam segundo as plantas, sen-
vitaminas foram satisfeitos mediante su- complexo vitamnico B e necessrio ao do que, no meio de cultura, as monoco-
plementos de composio pouco co- crescimento de leveduras e de clulas tiledneas so muito sensveis sua
nhecidos, como extrato de leveduras, de animais (mamferos) in vitro. falta. No MS, o meio mais universalmen-
leite de cco, hidrolizado de protenas, Na rea de cultura de tecidos vege- te utilizado, sua prescrio 100 mg/
extrato de malte, etc. Hoje, apesar de tais, muitos o consideram uma fonte litro.
essa tendncia no haver desaparecido, complementar de carboidrato, mais
o mais freqente, que, os meios nutri- que um composto vitamnico, e que agentes gelificantes
tivos incorporem vitaminas especficas desempenha um papel importante na So necessrios, considerando que o
como B1 (tiamina), B6 (piridoxina), ci- formao de pectinas e hemicelulose explante e as plantas obtidas devem
do pantotnico, cido nicotnico, cido na parede celular. Seu uso data, apro- ficar sobre um suporte, para no afunda-
ascrbico etc. ximadamente, de 1951, e decorrente rem. Em geral, os meios slidos so
No obstante as plantas se- preferidos aos de cultura lqui-
rem capazes de sintetizar suas da, sendo que estes ltimos so
prprias vitaminas, fica a dvida mais caros pelo fato de exigirem
se a incorporao no meio um agitador para evitar o afoga-
sempre necessria. Contudo, em mento ou a hipoxia do explante.
se tratando de drenos, razes, por O agente gelificante forma
exemplo, a suposio de que com a gua um gel que funde a
nem todos os seus requerimen- 100C e que solidifica por volta
tos nutricionais orgnicos sejam dos 45C; no hidrolizado por
sintetizados ficou evidenciada j enzimas e, aparentemente, no
em 1930, quando pesquisadores reage com o resto de ingredien-
como Bonner, Robbins, White tes do meio.
etc, observaram que, na presena O gar-gar um tipo de
de algumas vitaminas (tiamina, agente gelificante de natureza
Fig.7:
piridoxina, c. nicotnico, etc.), o polissacardica produzido por
crescimento das razes (tomate,
Prvia assepsia, gema caulinar de abacaxi (Ananas algas (Gelidium amansii), sen-
ervilha e rabanete) melhorava comosus L. Merr. Cv Prola) cultivada in vitro do que sua composio em po-
sensivelmente. lisacardeo pode variar de 50% a
Com respeito quantidade a ser do fato de que, em muitos casos, sua 90 %, por isso, a procedncia do mesmo
incorporada, ela varia desde frao de incorporao ao meio de cultura pro- importante. Por outro lado, a autocla-
miligramas at 10 miligramas por litro, moveu diferentes eventos: formao vagem pode hidroliz-lo se o pH do
podendo ser esterilizada por filtrao ou de gemas, crescimento de calos etc. meio est cido, fazendo com que perca
autoclavagem. Convm lembrar que, em algumas plan- firmeza e, dependendo da marca, o
tas, o myo-inositol est conjugado com agente gelificante pode apresentar im-
myo-inositol a auxina, sendo essa uma forma de purezas, como cloro, brio, sulfato etc,
Este composto tambm descrito como estocar ou transportar aquele horm- que podem afetar o crescimento dos
meso-inositol, um ismero do inositol nio, ou, conjugado, em alguns tipos de explantes.
o que, apresenta importncia biolgica, sementes, com o cido fosfrico, for- Gelrite (Merck) um outro tipo de
j que participa da internalizao de mando o cido ftico. agente gelificante. Produzido pela bac-
estmulos externos a partir de receptores A respeito da sua aplicao, a infor- tria Pseudomonas elodea, usado em
de membrana. Na literatura mdica, pode mao disponvel que os requeri- menor quantidade (2,5 g/l); uma vez

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 19

solidificado, transparente, o
que facilita a observao da
raiz e focos de contaminao.
Com ons, como Ca++ e Mg++,
forma um elo mais firme do
que com ctions monovalentes
(K+ e Na+).
Devem-se ter cuidados por-
que, s vezes, os agentes geli-
ficantes, includa a agarose,
podem induzir hiperhidricida-
de (vitrificao) nos brotos ou
plntulas obtidas. A hiperhidri-
cidade uma anomalia do teci-
do, na qual este fica rgido e
quebradio (glassy shoot), ha-
vendo malformao de est-
matos na plntula e dificuldade
para enraizar. um fenmeno
complexo e depende tambm
de outros fatores como umida-
de, amnia, citocinina, pH etc.
hormnios
Estes representam o alma mater da
cultura de tecido, porque so eles que
direcionam o processo morfogentico.
Agrupam-se tradicionalmente em 5 gru-
pos: auxinas, citocininas, giberelinas,
etileno e ac. abscico, sendo, os trs
primeiros os mais usados na micropro-
pagao. Por exemplo, sob condies
in vitro, uma planta de abacaxi pode ser
clonada atravs de uma gema axilar, a
qual, induzida a produzir inmeros
brotos com citocinina, que, depois de
alongados com giberelinas, podem ser
enraizados com auxina e transferidos
para terra em casa de vegetao.
Quando se fala de horm-
nios, sempre oportuno regis-
trar uma diferenciao termi-
nolgica importante. Trata-se
dos chamados reguladores de
crescimento, que so subs-
tncias que tm ao similar
aos hormnios, porm, tm
origem sinttica. Assim, o ci-
do indol actico (AIA) e o
Picloram so duas auxinas, mas,
enquanto o primeira horm-
nio, a segunda um regulador
de crescimento, que, na prti-
ca laboratorial, terminam sen-
do chamados de hormnios.
Em geral, tanto uns como
outros so usados na ordem de
uns poucos M at 40 M. No caso do
meio ter carvo ativado, pode-se au-
mentar a concentrao em at 100 M.
Por outro lado, as auxinas e giberelinas
20 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
Fig.8: Plntula de abacaxi
oriunda de uma gema caulinar.
Por micropropagao milhares
dessas plntulas (clones)
podem ser obtidas
podem ser dissolvidas em NaHO (0,1 -
1 N) e as citocininas em HCl tambm na
faixa de 0,1 - 1 N. Em doses maiores
produzem efeitos txicos ou teratol-
gicos ou ainda inibirem a fotosntese,
como o caso da auxina sinttica 2,4-
D ( cido 2,4-diclorofenoxiactico).
No caso de seu uso em quantidades
pequenas, aconselhvel obt-los de
solues estoques que devem ser man-
Fig.9: Embries somticos
de caf, obtidos a partir de
explantes foliares de cv Rubi
tidas em freezer ou refrigerador.
Fatores ambientais:
luz
Luz e temperatura so dois
fatores importantes nas salas de
cultura, onde devem ser contro-
lados para que as plantas ali
mantidas se desenvolvam ade-
quadamente. So raras as salas
de cultura com iluminao cons-
tante.
A luz importante para a
planta sob trs pontos de vista.
Do ponto de vista da fotossn-
tesse, da fotomorfognese e do
fototropismo; por isso, a sua
incluso numa sala de cultura.
Nessa sala, a luz deve seguir um
determinado fotoperodo, por
exemplo, 16 h luz e 8 de escuro, sendo
que, nas prateleiras a irradincia (densi-
dade de fluxo radiante por superfcie, W
m-2, ou densidade de fluxo de ftons,
mol m-2 s-1)1 pode variar de 8 a 15 W m-
2
. Embora nas salas seja usada luz branca
fluorescente, a composio espectral pode
variar conforme as marcas comerciais
oferecidas. Algumas podem apresentar
mais irradiao na regio do azul / violeta
(perto de 71 kcal/Einstein ); outras, na
regio do laranja / vermelho ( cerca de 43
kcal/Einstein) Essas variaes podem re-
presentar impactos diferentes na cultura
in vitro, segundo a espcie em questo.
Assim, em alguns casos, uma luz mais
rica em vermelho que azul pode, por
exemplo, estimular melhor a induo de
razes adventcias. J em outros
casos, a luz azul pode estimular
mais a brotao de calos que
outros comprimentos de onda,
mas esta tambm pode contri-
buir a quebrar a molcula de
AIA.
De modo geral, a luz branca
estimula a induo de brotos,
porm, tende a inibir a induo
de razes. Entretanto, bom
lembrar que o nvel de irradin-
cia importante na resposta
morfogentica. Sendo assim,
uma irradincia baixa (3 W m-2)
pode ser mais efetiva que uma
irradincia alta (12 W m-2) na
induo de brotos a partir de
calos, ou vice-versa.
Pode-se contornar o problema de se
obterem maiores ou menores irradinci-
as com o nmero de lmpadas por pra-
teleira ou determinando que
altura dever ter a pratelei-
ra.
Para a cultura in vitro,
irradincias maiores que 15
W m-2 podem reduzir a foto-
sntesse das plantas, o que
no necessariamente pode
acontecer em condies de
campo. Irradincias maio-
res na sala de cultura obvi-
amente contribuiro para
elevar a temperatura dos
frascos, embora se saiba que,
em caf, irradincias altas
no reduziram a fotosntes-
se quando a temperatura
foliar permaneceu constan-
te a 25 C.
temperatura
Em geral, nas salas de cultura, a
temperatura a ser usada varia entre 24
e 27C. importantssimo contar com
um sistema de refrigerao acionado
por termostato para manter fixa a tem-
peratura. O fato de os reatores das
lmpadas ficarem fora da sala de cultu-
ra, ajuda, ou seno, o uso de reatores
eletrnicos, que no esquentem. Mes-
mo com todas as precaues de manter
as variaes de temperatura sob con-
trole, sempre temos nas placas ou
tubos de ensaios problemas de con-
densao da gua nas paredes desses
materiais. Existem cmaras ou incuba-
doras que evitam esse problema, mas
seu preo proibitivo. Com respeito
s necessidades eventuais de tempera-
turas alternadas entre o dia e a noite,
prefervel usar incubadoras para lograr
isso.
02 e C02
Existe pouca informao sobre o
microclima gasoso dentro do tubo de
ensaio. De qualquer maneira, a pre-
sena deles importante para a respi-
rao do explante ou para a fotossn-
tesse da plntula. No que diz respeito
respirao aerbica-(gliclise + ciclo irradincia de 60 m m-2 s-1 e aquela
de Kreb), considerando apenas um
tecido heterotrfico, e em se tratando
de tubos de ensaio, podemos supor
que, no volume disponvel acima do
meio slido, existe, inicialmente, uma
concentrao e uma presso parcial do
02 equivalente atmosfrica (25 C e 1
atmosfera); isso :, 8,6 mM e 0,2 atmos-
fera, respectivamente, embora esse
valor, no decorrer do tempo, possa
Fig.10: Explante foliar de caf,
mantido no escuro, insinuan-
do, aps 30 dias, formao de agricultura mais moderna e competi-
calo pela ao de um regula-
dor de crescimento presente
no meio nutritivo
diminuir no interior do tubo e a
respirao anaerbica, supostamen-
te, no comear a operar antes da
repicagem seguinte do material.
provvel que, em nveis de 0,3 mM e
0,07 atmosfera de presso parcial do
02 no espao interior do tecido (ex-
plante, calo etc.) essa respirao rapi-
damente comece a operar e, com isso,
iniciar-se a morte do explante. Isso
levanta a questo sobre a transfern-
cia peridica do material, o volume
do frasco e a permeabilidade ou no
da tampa.
A concentrao de C02 de 350 l /
l no ambiente externo no necessari-
amente reflete a concentrao de C02
no ambiente interno do tubo de en-
saio. Muitas vezes ela pode ser maior
no tubo, devido respirao da pln-
tula no perodo noturno. Por outro
lado, no caso de uma plntula com
580 p.
quantidade de C02 rapidamente deve-
ria ultrapassar o ponto de compensa-
o. Contudo, parece que essas inte-
raes so mais complexas do que
parecem, porque existem evidncias
de que a presena de sacarose no
meio pode deprimir a rubisco, reduzir
a fotosntesse e, conseqentemente, a
utilizao de C02 e, dessa forma, a
plntula no apresentar sinais de
crescimento satisfatrio e
provocar reaes de des-
concerto no observador,
sobre as possveis causas
de seu no crescimento.
Tentou-se aqui apresen-
tar uma viso sinptica do
que seja a cultura de tecido
in vitro e sua importncia
para a biologia de plantas.
No campo econmico, sem
ir muito longe, basta lem-
brar que, atravs dessa tc-
nica, a floricultura movi-
menta milhes de dlares e
de plantas anualmente.
Na Embrapa /Cenargen
(Braslia DF) usamos essa
tcnica em quatro frentes:
na micropropagao , na
criopreservao, na conser-
vao de germoplasma e na transfor-
mao, todas elas, visando a uma
tiva para o pas.
Bibliografia
BARRUETO CID, L.P. (Ed.). Intro-
duo aos hormnios vegetais. Bra-
slia: Embrapa Recursos Genticos e
Biotecnologia,2000. 205 p. No prelo.
BARRUETO CID, L.P.; MACHA-
DO, A. C.G.; CARVALHEIRA, S.B.C.;
BRASILEIRO, A.C.M. Plant regenerati-
on from seedling explants of Eucalyp-
tus grandis x E. urophylla. Plant Cell,
Tissue Organ Culture, v.56:17-23,1999.
BUCHANAN, B.B.; GRUISSEM, W.;
JONES, R.L. Biochemistry & mole-
cular biology of plants. Rockville:
American Society of Plant Physiolo-
gist, 2000. 1367 p.
DODDS,J.H.; ROBERTS, L. Expe-
riment in plant tissue culture. Lon-
don: Cambridge Unv. Press, 1982. 178
p.
FOSKET, D.E. Plant growth and
development. A molecular approa-
ch. San Diego: Academic Press, 1994.
GEORGE, E.F. Plant propagati-
ons by tissue culture. Part 1-2. Eding-
ton: Exegetics Ltd, 1993/1996. 1361 p.
PIERIK, R.L.M. In vitro culture of
higher plants. Drodrecht: Martinus
Nijhoff Pub.,1987. 344 p.
REDLIN, S.C.; CARRIS, L.M. Endo-
phytic fungi in grasses and woody
plants. Minnesota: APS Press, 1996.
223 p.
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 21