INTRODUCCIN

La unidad bsica de informacin en los seres vivos es el gen, definido en

clulas eucariotas como un segmento de ADN que lleva la informacin
necesaria para la sntesis de una protena o de un ARN. La cantidad,
tamao y distribucin de los genes vara segn la especie analizada. En
el hombre, el nmero de genes que codifican protenas se calcula que es
tan slo el 3 % del ADN; siendo el resto, secuencias reguladoras y
estructurales. La comprensin de los mecanismos de almacenamiento y
de las formas de utilizacin de la informacin ha servido para poder
aclarar muchas de las incgnitas planteadas sobre la estructura y la
funcin celular. La clula realiza esta actividad a travs de las rutas de la
informacin gentica; estas vas constituyen el principio fundamental de
la gentica molecular. Son tres procesos denominados:
a) Replicacin o copia del ADN paterno para formar molculas de ADN
hijas idnticas a su progenitor, e idnticas entre s.
b) Transcripcin o copia de la informacin de una parte del ADN a
molculas de ARN.
c) Traduccin o copia de la informacin gentica del ARN a la secuencia
aminoacdica especfica de una protena.
REPLICACIN DEL ADN
Las propiedades de la replicacin son bsicamente iguales en todos los
seres vivos, y siendo as que la mayora de los estudios se han realizado
en Escherichia coli, se describir el proceso a nivel del organismo
bacteriano; y a continuacin, se indicarn algunas caractersticas
propias de organismos eucariotas.
Principales caractersticas de la replicacin 1)
La replicacin es un proceso semiconservador. Cada cadena de la
molcula de ADN parental acta de molde para la sntesis de una nueva
cadena producindose dos nuevas molculas de ADN, cada molcula
nueva posee una cadena vieja y una nueva.
2) La replicacin comienza en un punto del ADN.

Las dos cadenas de ADN se replican al mismo tiempo y comienzan en un

punto denominado origen. En dicho punto el ADN parental se desenrolla
y forma una estructura de lazo cuyos extremos se denominan horquillas
de replicacin. En el caso del cromosoma circular bacteriano, el punto
inicial de la replicacin es un gen denominado oriC.
3) La replicacin es bidireccional. Comenzada en un punto de la
molcula de ADN el proceso se desarrolla hacia los dos extremos de la
cadena; en cada lazo, los extremos u horquillas de replicacin avanzan
en el proceso de sntesis hasta completar la copia.
4) La sntesis de ADN se desarrolla en direccin 5' 3'. La direccin en
que actan las enzimas es fija y nica de 5' a 3'. Esto determina que la
cadena molde ha de tener la direccin 3'5', para que la nueva cadena
en formacin, complementaria y antiparalela tenga la direccin 5' 3'
coincidente con el sistema de trabajo de la enzima. Al ser la horquilla de
replicacin bidireccional, el sistema descrito implicara que la otra
cadena parental 5'3' debera estar siendo copiada en direccin 3'5',
situacin imposible debido a la limitacin de las enzimas sintticas. Este
problema es obviado debido a que,
5) La sntesis de ADN es semidiscontinua.

En una cadena, la inicialmente comentada en el punto anterior, la

replicacin es continua y en la segunda la sntesis es discontinua. Esta
solucin fue descrita por Reiji Okazaki quien encontr que en el
procedimiento de copia de las dos cadenas del ADN parental, se formaba
una cadena nueva continua (tambin denominada conductora) en la que
la sntesis se desarrolla en la misma direccin de la enzima o de la
horquilla de replicacin; mientras que la otra cadena nueva era
discontinua (tambin denominada cadena rezagada o retrasada) ya que
su sntesis se realizaba en contra de la direccin de la horquilla mediante
fragmentos, los fragmentos de Okazaki, secuencias formadas por unos
centenares o miles de nucletidos dependiendo de la clula.

ENZIMAS QUE PARTICIPAN EN LA REPLICACIN

ADN polimerasas
La reaccin bsica que tiene lugar en la replicacin es una reaccin de
polimerizacin, de formacin de un enlace fosfodister entre
nucletidos. En una cadena de ADN en crecimiento se incorpora un
nucletido cuya base es la complementaria a la de la cadena molde. Los
nucletidos que se incorporan han de hacerlo en su forma activada o
uncletido trifosfatados (dNTP). La reaccin que tiene lugar es la
siguiente:
ADN (n nucletidos) + dNTP ADN (n+1 nucletidos) + PPi
La reaccin de polimerizacin es termodinmicamente favorable por la
hidrlisis del pirofosfato; pero no slo por el desdoblamiento del
pirofosfato, sino tambin por las interacciones
no covalentes que se establecen entre las
bases. Esta reaccin es catalizada por varias
enzimas, las ADNpolimerasas, cada una con un
tipo de actividad muy especfica pero con una
serie de requisitos de funcionamiento comunes,
que son:
1) Necesitan una cadena de ADN molde, el
proceso de replicacin es dirigido por la cadena
de ADN molde, y sigue el principio de
complementariedad de bases fijando el
nucletido que debe incorporarse a la cadena
en formacin segn tal regla.

2) Necesitan un cebador, la
polimerizacin que realizan estas
enzimas requiere que exista una
cadena previa inicial (cebador) ya
que son incapaces de coger sobre su
centro activo dos nucletidos
individuales y comenzar la sntesis.
Uno de los sustratos necesarios de la
reaccin es, por tanto, una cadena
preexistente, y ninguna de estas
enzimas es capaz de iniciar la
sntesis de una cadena nueva desde
su primer nucletido.

3) Su direccin de sntesis es fija de 5' 3', esto significa que adicionan

nucletidos a la cadena siempre por un extremo fijo, el extremo 3'. O
bien, que de los dos extremos del nucletido libre que se va a
incorporar, utilizan su grupo fosfato o extremo 5' para aadirlo a la
cadena en crecimiento.
4) La velocidad con que adicionan nucletidos, o procesividad, se mide
como el nmero de nucletidos incorporados en la unidad de tiempo y
es una caracterstica propia de cada polimerasa.
Una cualidad de todas las ADN-polimerasas es la precisin con que
realizan la replicacin, estimndose en Escherichia coli que se comete un
error en uno de cada 109 a 1010 nucletidos, lo cual en el cromosoma
de Escherichia coli supone un error cada 1.000 a 10.000 replicaciones.
Estos errores son corregidos por las mismas polimerasas mediante una
actividad enzimtica independiente, la actividad exonucleasa 3'-5'; esta
actividad les permite eliminar el ltimo nucletido incorporado si ste es
errneo, para a continuacin, seguir con la polimerizacin. Esta
capacidad de correccin, mediante la discriminacin entre bases
correctas e incorrectas, mejora la precisin de la replicacin. Si se aade
el hecho de que, adems, existen otros sistemas de correccin que
actan despus de acabada la replicacin, puede observarse la fidelidad
y garanta del proceso.
Existen tres polimerasas denominadas ADN polimerasa I (la primera que
se describi), ADN polimerasa II y ADN polimerasa III. Si se comparan
algunas caractersticas diferenciales entre ellas, se puede observar que
la ADN polimerasa III es la ms compleja. Est formada por diez
subunidades diferentes y tiene una capacidad de polimerizacin
infinitamente superior a cualquiera de las otras dos, siendo, por tanto, la
principal enzima de la replicacin.
La ADN polimerasa I es importante por su tarea de correccin, capaz de
realizarla tanto en la direccin descrita como en la direccin contraria,
debido a que posee la actividad exonucleasa 5'3', careciendo de la
misma el resto de polimerasas.
Otros enzimas que participan en el proceso de replicacin:
Para la replicacin se necesitan, aparte de las ADN polimerasas
descritas, alrededor de 20 protenas diferentes, el conjunto de las
mismas se denomina sistema ADN replicasa o replisoma ya que aunque
no formen una unidad fsica, constituyen una unidad funcional. Dentro
de las enzimas que participan estn:
1) Helicasas, enzimas que separan las dos cadenas de la molcula de
ADN parental. Desplazndose a lo largo de la molcula de ADN eliminan
los enlaces entre las cadenas consumiendo en el proceso ATP.
2) Topoisomerasas, enzimas que desenrollan el ADN y lo relajan.
Existen cuatro topoisomerasas (I a IV) que actan eliminando
superenrollamientos negativos; o bien inducindolos, dependiendo del
grado de plegamiento que tenga el ADN en su estado natural.
3) Protenas fijadoras de ADN, protenas que estabilizan las cadenas
separadas unindose a ellas.
4) Primasas, enzimas que sintetizan el cebador, ste suele ser un corto
fragmento de ARN, necesario para que pueda comenzar la ADN
polimerasa III, y que posteriormente ser eliminado y sustituido por un
fragmento de ADN por la ADN polimerasa I.
5) ADN ligasas, enzimas que se encargan de unir trozos formados de
cadenas, realizando un enlace fosfodister entre los nucletidos
pertenecientes a dos segmentos de una cadena.
Todas estas enzimas participan en el proceso de la replicacin de forma
coordinada, permitiendo que se desarrolle de una manera secuencial y
organizada.

FASES DE LA REPLICACIN
Se pueden distinguir tres fases segn las enzimas que participan en las
mismas:
1. Fase de inicio.
El origen de la replicacin es una porcin de ADN que contiene una
secuencia caracterstica de bases. Este segmento es reconocido por una
protena denominada ADN-A.
2. Fase de elongacin.
La elongacin consiste en la formacin del cebador y la sntesis de la
cadena de ADN. El proceso se caracteriza por no desarrollarse de forma
idntica en ambas hebras. La sntesis en la cadena conductora o
continua requiere nicamente que acte la primasa formando un
cebador de ARN de unos 10 a 60 nucletidos, para a continuacin
penetrar la ADN polimerasa III y realizar la polimerizacin de
desoxirribonucletidos. En la cadena retrasada se forma un conjunto
proteico en el que se localizan siete protenas distintas adems de la
primasa (primosoma). Este grupo se desplaza a lo largo del molde de la
hebra retrasada en direccin 5' 3' sintetizando a intervalos un corto
cebador de ARN, al que se unir ADN formado por la ADN polimerasa
III. El hecho de que las direcciones de trabajo de la primasa y la
polimerasa sean contrarias a la direccin de crecimiento de la hebra, y
de que el proceso sea uniforme en ambas hebras, viene justificado por
el hecho de que la ADN polimerasa III es una protena dimrica. Esta
enzima obliga a la cadena molde de la hebra retrasada a formar un
bucle sobre la misma. De esta forma, la direccin de sntesis es la
misma en ambas hebras. Al ir desarrollndose la polimerizacin el bucle
aumenta hasta contactar con el fragmento de Okazaki previo, forzando
a la polimerasa a separarse o disociarse y a recomenzar de nuevo el
proceso dnde se ha formado el nuevo cebador y ella crear el nuevo
bucle. En una fase posterior se eliminan los segmentos de ARN cebador,
por accin de la actividad exonucleasa 5'3' de la ADN polimerasa I,
quien tambin se encarga de rellenar los trozos ocupados por el
cebador. Por ltimo, la ADN ligasa une los segmentos catalizando la
formacin de un enlace fosfodister.
3. Fase de terminacin.
En el caso de Escherichia coli con un cromosoma circular, las dos
horquillas de la replicacin se encuentran en el extremo contrario al
origen terminando as la replicacin y necesitando, nicamente, la
presencia de una topoisomerasa para la separacin de las dos
molculas.

REPLICACIN EN CLULAS EUCARIOTAS.

Las molculas de ADN en clulas eucariotas son mucho mayores y ms
complejas ya que el proceso de la replicacin es bastante ms
complicado. Los orgenes de la replicacin son secuencias mayores, en
levaduras de unos 400 pares de bases, que se presentan en varios
puntos de los cromosomas. La velocidad de desplazamiento de la
horquilla de replicacin es de unos 50 nucletidos por segundo, una
velocidad relativamente baja si se compara con la de los procariotas (10
veces mayor). Para incrementar la velocidad global del proceso, en
eucariotas existen varios puntos de origen sobre la misma molcula de
ADN, estando separados entre 30.000 y 300.000 pares de bases. La
presencia de mltiples horquillas de replicacin acelera el proceso, y
permite que la replicacin en eucariotas se desarrolle a velocidades
mayores que en los procariotas. Los fragmentos de Okazaki en el ADN
eucariota son ms cortos, generalmente contienen 135 nucletidos,
debido a que la horquilla de replicacin se mueve ms despacio.
Tambin se han descrito diferencias respecto a las ADN polimerasas en
eucariotas, la ADN polimerasa es una protena oligomrica, en la que
una de sus subunidades tiene accin primasa. Por ltimo, el ADN
eucariota est unido a las histonas y empaquetado en los nucleosomas.
El proceso de replicacin ha de ir acompaado por el proceso de sntesis
de histonas, ya que en cada ciclo de replicacin no slo se ha de
duplicar el ADN sino tambin las histonas. Las enzimas que desarrollan
ambos procesos son distintas pero han de ir coordinadas, ya que la
velocidad debe ser igual. Las histonas recin sintetizadas se incorporan
a la molcula de ADN que lleva la hebra retrasada, mientras que las
viejas histonas permanecen en el dplex que lleva la hebra conductora.
MECANISMOS DE REPARACIN DEL ADN
El mantenimiento de la informacin
codificada en el ADN es absolutamente
imprescindible para la clula, ya que stas
son molculas insustituibles. Una alteracin
en la molcula de ADN produce un cambio
en la secuencia de bases, que en el caso de
que la molcula se replique se transmite a
las generaciones futuras. Los cambios
permanentes se denominan mutaciones. Si
la mutacin se produce sobre ADN que no
es relevante, o bien tiene un efecto
pequeo sobre un gen, la mutacin se
denomina silenciosa, por carecer de
efectos aparentes. Si la mutacin es
favorable aporta ventajas adaptativas a las
clulas o al organismo que la desarrolla, y
si bien estas mutaciones son raras, por lo
estables que son las molculas de ADN y
por los mecanismos de reparacin existentes, su existencia ha permitido
la variacin necesaria para el desarrollo de la evolucin de las especies.
Sin embargo, la mayora de las mutaciones son deletreas para la
clula, y en los mamferos est comprobada una estrecha correlacin
entre la acumulacin de mutaciones y el cncer.
A lo largo de tan solo un da se acumulan gran cantidad de lesiones
sobre el genoma celular; se estima que cada veinticuatro horas se
pierden alrededor de 5000 bases pricas por destruccin de sus enlaces
glicosdicos con la desoxirribosa. Sin embargo, gracias a los mecanismos
de reparacin, estas lesiones son eliminadas prcticamente en su
totalidad, las que no lo son se convierten en mutaciones. Existen varios
tipos de mutaciones, clasificadas segn el tipo de cambio que se
produce sobre la molcula de ADN:
1) Sustitucin de una base por otra:
a) Transicin si el cambio es de una base por otra del mismo grupo,
base prica por base prica o pirimidnica por pirimidnica.
b) Transversin, si el cambio es de base prica a pirimidnica, o a la
inversa.
2) Insercin de un par de bases, o adicin de nucletidos.
3) Deleccin de un par de bases o eliminacin de nucletidos.

La reparacin del ADN es posible debido a la existencia de hebras dobles

que funcionan como moldes ya que en caso de que una de ellas sufra
algn tipo de lesin, puede eliminarse y sustituirse por una correcta,
utilizando la informacin de la hebra complementaria.
a) Reparacin de apareamientos incorrectos.
b) Reparacin por corte de base.
c) Reparacin de grandes lesiones.
d) Reparacin directa.
e) Reparacin por rcombinacin.