Demanda bioqumica

de oxgeno
DBO - 5 das

Repblica de Colombia. Ministerio del Medio Ambiente

Instituto de Hidrologa, Meteorologa y Estudios Ambientales, IDEAM

Temas
ambientales
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SUMARIO Y APLICACIONES
1.1. La demanda bioqumica de oxgeno (DBO) es una prueba usada para la determinacin
de los requerimientos de oxgeno para la degradacin bioqumica de la materia orgnica
en las aguas municipales, industriales y en general residuales; su aplicacin permite
calcular los efectos de las descargas de los efluentes domsticos e industriales sobre la
calidad de las aguas de los cuerpos receptores. Los datos de la prueba de la DBO se
utilizan en ingeniera para disear las plantas de tratamiento de aguas residuales.

1.2. La prueba de la DBO es un procedimiento experimental, tipo bioensayo, que mide el

oxgeno requerido por los organismos en sus procesos metablicos al consumir la mate-
ria orgnica presente en las aguas residuales o naturales. Las condiciones estndar del
ensayo incluyen incubacin en la oscuridad a 20C por un tiempo determinado, general-
mente cinco das. Las condiciones naturales de temperatura, poblacin biolgica, movi-
miento del agua, luz solar y la concentracin de oxgeno no pueden ser reproducidas en
el laboratorio. Los resultados obtenidos deben tomar en cuenta los factores anteriores
para lograr una adecuada interpretacin.

1.3. Las muestras de agua residual o una dilucin conveniente de las mismas, se incuban por
cinco das a 20C en la oscuridad. La disminucin de la concentracin de oxgeno disuel-
to (OD), medida por el mtodo Winkler o una modificacin del mismo, durante el periodo
de incubacin, produce una medida de la DBO.

2. LIMITACIONES E INTERFERENCIAS
2.1. Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relacin de la
materia orgnica soluble a la materia orgnica suspendida, los slidos sedimentables,
los flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la presencia de
compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas. Al momento no existe una forma
de corregir o ajustar los efectos de estos factores.

2.2. DBO carboncea contra nitrogencea. La oxidacin de las formas reducidas del nitrge-
no como amoniaco y nitrgeno orgnico, mediada por los microorganismos, ejercen una
demanda nitrogencea, que ha sido considerada como una interferencia en la prueba;
sin embargo, esta puede ser eliminada con la adicin de inhibidores qumicos. Cuando
se inhiba la demanda nitrogencea de oxgeno, reportar los resultados como demanda
bioqumica de oxgeno carboncea (DBOC5); cuando no se inhiba, reportar los resulta-
dos como DBO5.

2.3. Requerimientos de dilucin. Si el agua de dilucin es de baja calidad, su DBO aparecer

como DBO de la muestra, efecto que ser amplificado por el factor de dilucin, y el
resultado tendr una desviacin positiva. El mtodo de anlisis debe incluir agua de
dilucin de verificacin y agua de dilucin como blanco para establecer su calidad, me-

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diante la medicin del consumo de oxgeno con una mezcla orgnica conocida, general-
mente glucosa y cido glutmico. La fuente del agua de dilucin puede ser: destilada a
partir del agua de grifo, o agua libre de sustancias orgnicas biodegradables o
bioinhibitorias tales como cloro o metales pesados. El agua destilada puede contener
amoniaco o compuestos orgnicos voltiles; el agua desionizada tambin puede estar
contaminada con compuestos orgnicos solubles lixiviados del lecho de la resina; el uso
de destiladores con conductos o accesorios de cobre en las lneas de agua destilada
pueden producir agua con cantidades excesivas de cobre, que acta como biocida.

3. TOMA Y PRESERVACIN DE MUESTRAS

3.1. Las muestras para determinacin de la DBO se deben analizar con prontitud; si no es
posible, refrigerarlas a una temperatura cercana al punto de congelacin, ya que se
pueden degradar durante el almacenamiento, dando como resultado valores bajos. Sin
embargo, es necesario mantenerlas el mnimo tiempo posible en almacenamiento, inclu-
so si se llevan a bajas temperaturas. Antes del anlisis calentarlas a 20C.

3.2. Muestras simples. Si el anlisis se emprende en el intervalo de 2 h despus de la reco-

leccin no es necesario refrigerarlas; de lo contrario, guardar la muestra a 4C o menos;
reportar junto con los resultados el tiempo y la temperatura de almacenamiento. Bajo
ningn concepto iniciar el anlisis despus de 24 h de haber tomado la muestra; las
muestras empleadas en la evaluacin de las tasas retributivas o en otros instrumentos
normativos, deben ser analizadas antes de que transcurran 6 h a partir del momento de
la toma.

3.3. Muestras compuestas. Mantener las muestras a 4C o menos durante el proceso de

composicin, que se debe limitar a 24 h. Aplicar los mismos criterios que para las mues-
tras sencillas, contando el tiempo transcurrido desde el final del perodo de composicin.
Especificar el tiempo y las condiciones de almacenamiento como parte de los resulta-
dos.

4. APARATOS
4.1. Botellas de incubacin para la DBO, de 250 a 300 mL de capacidad. Lavarlas con deter-
gente, enjuagarlas varias veces, y escurrirlas antes de su uso. Para evitar la entrada de
aire en la botella de dilucin durante la incubacin, se debe utilizar un sello de agua, que
se puede lograr satisfactoriamente invirtiendo las botellas en un bao de agua o adicio-
nando agua en el reborde cncavo de la boca de las botellas especiales para la DBO.
Colocar una copa de papel o plstica o un capuchn metlico sobre la boca de la botella
para reducir la evaporacin del sello de agua durante la incubacin.

4.2. Incubadora de aire o bao de agua, controlada termostticamente a 20 1C; excluir

cualquier fuente luminosa para eliminar el proceso de produccin fotosinttica de OD.

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5. REACTIVOS
5.1. Solucin tampn de fosfato: Disolver 8,5 g de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g de
Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g de NH4Cl en aproximadamente 500 mL de agua destilada y diluir
a 1 L. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si se presenta alguna seal de creci-
miento biolgico, descartar este o cualquiera de los otros reactivos.

5.2. Solucin de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g de MgSO4.7H2O en agua destilada y

diluir a 1 L.

5.3. Solucin de cloruro de calcio: Disolver 27,5 g de CaCl2 en agua destilada y diluir a 1L.

5.4. Solucin de cloruro frrico: Disolver 0,25g de FeCl3.6H2O en agua destilada, diluir a 1L

5.5. Soluciones cida y alcalina, 1 N, para neutralizacin de muestras custicas o cidas. 1)

Acido. A un volumen apropiado de agua destilada agregar muy lentamente y mientras se
agita, 28 mL de cido sulfrico concentrado; diluir a 1 L. 2) Alcali. Disolver 40 g de hi-
drxido de sodio en agua destilada y diluir a 1 L.

5.6. Solucin de sulfito de sodio: Disolver 1,575 g de Na2SO3 en 1000 mL de agua destilada.
Esta solucin no es estable y se debe preparar diariamente.

5.7. Inhibidor de nitrificacin: 2-cloro-6-(triclorometil)piridina.

5.8. Solucin de glucosa-cido glutmico: Secar a 103C por 1 h glucosa y cido glutmico
grado reactivo. Disolver 150 mg de glucosa y 150 mg de cido glutmico en agua desti-
lada y diluir a 1 L. Preparar inmediatamente antes de su uso.

5.9. Solucin de cloruro de amonio: Disolver 1,15 g de NH4Cl en 500 mL de agua destilada,
ajustar el pH a 7,2 con solucin de NaOH, y diluir a 1 L. La solucin contiene 0,3 mg de
N/mL.

6. PROCEDIMIENTO
6.1. Preparacin del agua de dilucin. Colocar la cantidad de agua necesaria en una botella
y agregar por cada litro, 1 mL de cada una de las siguientes soluciones: tampn fosfato,
MgSO4, CaCl2, y FeCl3. El agua de dilucin se puede inocular como se describe en 6.4;
chequear y guardar como se describe en 6.2 y 6.3, de tal manera que siempre se tenga
disponible.

Llevar el agua de dilucin a una temperatura de 20C antes de su uso; saturarla con OD
por agitacin en una botella parcialmente llena, por burbujeo de aire filtrado libre de
materia orgnica, o guardarla en botellas lo suficientemente grandes con tapn de algo-

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dn, para permitir su saturacin. Emplear material de vidrio bien limpio para proteger la
calidad del agua.

Verificacin del agua de dilucin. Aplicar este procedimiento como una forma de verifica-
cin bsica de la calidad del agua de dilucin.

Si el agua consume ms de 0,2 mg de oxgeno/L se debe mejorar su purificacin o

emplear agua de otra fuente; si se usa el procedimiento de inhibicin de la nitrificacin,
el agua de dilucin inolculada, se debe guardar en un sitio oscuro a temperatura
ambiente hasta que el consumo de oxgeno se reduzca lo suficiente para cumplir el
criterio de verificacin. Confirmar la calidad del agua de dilucin almacenada que
est en uso, pero no agregar semilla para mejorar su calidad. El almacenamiento no
es recomendable cuando se va a determinar la DBO sin inhibicin de nitrificacin, ya
que los organismos nitrificantes se pueden desarrollar en este perodo. Revisar el
agua de dilucin para determinar la concentracin de amonio, y si es suficiente des-
pus del almacenamiento; de lo contrario, agregar solucin de cloruro de amonio
para asegurar un total de 0,45 mg de amonio como nitrgeno/L. Si el agua de dilu-
cin no ha sido almacenada para mejorar su calidad, agregar la cantidad suficiente
de semilla para producir un consumo de OD de 0,05 a 0,1 mg/L en cinco das a 20C.
Llenar una botella de DBO con agua de dilucin, determinar el OD inicial, incubar a
20C por 5 das y determinar el OD final como se describe en 6.8 y 6.10. El OD
consumido en este lapso no debe ser mayor de 0,2 mg/L y preferiblemente menor de
0,1 mg/L.

Chequeo con glucosa-cido glutmico. Debido a que la prueba de la DBO es un

bioensayo, sus resultados pueden estar muy influenciados por la presencia de sustan-
cias txicas o por el uso de semillas de mala calidad. Muchas veces el agua destilada
puede estar contaminada con cobre, o algunos inculos de aguas residuales pueden
ser relativamente inactivos, y si se emplean tales aguas o inculos siempre se van a
obtener bajos resultados. Controlar peridicamente la calidad del agua de dilucin, la
efectividad de las semillas y la tcnica analtica, por mediciones de la DBO para com-
puestos orgnicos puros y muestras con adiciones conocidas. En general, para deter-
minaciones de la DBO que no requieran una semilla adaptada, usar como solucin
estndar de chequeo una mezcla de 150 mg de glucosa/L y 150 mg de cido glutmico/
L. La glucosa tiene una velocidad de oxidacin excepcionalmente alta y variable, pero
cuando es empleada con cido glutmico se estabiliza, y es similar a la obtenida con
aguas residuales municipales. Si un agua residual contiene un constituyente mayorita-
rio identificable, que contribuye a la DBO, usar este compuesto en remplazo de la
mezcla de glucosa-cido glutmico.

Determinar la DBO5 a 20C de una dilucin al 2% de la solucin estndar de chequeo

glucosa-cido glutmico mediante las tcnicas descritas en los numerales 6.4 a 6.10.
Evaluar los datos como se describe en la seccin de Precisin.

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Inoculacin.

6.4.1. Origen de las semillas o inculo. Es necesario que en la muestra est presente una
poblacin de microorganismos capaces de oxidar la materia orgnica biodegradable.
Las aguas residuales domsticas no cloradas, los efluentes no desinfectados de plantas
de tratamiento biolgico, y las aguas superficiales que reciben descargas residuales
contienen poblaciones satisfactorias de microorganismos. Algunas muestras no contie-
nen una poblacin microbiana suficiente (por ejemplo, efluentes industriales sin trata-
miento, aguas desinfectadas, efluentes con elevada temperatura o con valores extremos
de pH), por tanto deben inocularse por adicin de una poblacin adecuada de
microorganismos. La semilla o inculo preferible es el efluente de un sistema de trata-
miento biolgico, en su defecto, el sobrenadante de aguas residuales domsticas des-
pus de dejarlas decantar a temperatura ambiente por lo menos 1 h pero no ms de 36
h. Cuando se emplee el efluente de un proceso de tratamiento biolgico, se recomienda
aplicar el procedimiento de inhibicin de la nitrificacin.

Algunas muestras pueden contener materiales no degradables a las tasas normales de trabajo
de los microorganismos; inocular tales muestras con una poblacin microbiana adapta-
da, obtenida a partir de efluentes sin desinfectar de un proceso de tratamiento biolgico
de aguas residuales. Tambin se puede obtener la semilla en el cuerpo de agua receptor
del vertimiento, preferiblemente de 3 a 8 km despus del punto de descarga. Cuando no
se disponga de ninguna de dichas fuentes del inculo, desarrollar en el laboratorio una
semilla adaptada, por aireamiento continuo de una muestra clarificada de agua residual
domstica y adicin de pequeos incrementos diarios de aguas residuales. Para obtener
la poblacin microbiana inicial, usar una suspensin de suelo, un lodo activado, o una
preparacin a partir de semilla comercial. Ensayar el rendimiento de la semilla haciendo
pruebas de la DBO en las muestras hasta obtener una poblacin satisfactoria. Si los
valores de la DBO aumentan con el tiempo hasta un valor constante, se consideran
como un indicio de la adaptacin sucesiva de la semilla o inculo.

6.4.2. Control de inculos. Determinar la DBO del material inoculante como si se tratara de
una muestra. De este valor y del conocimiento del dato del agua de dilucin determinar
el OD consumido. Hacer las diluciones necesarias hasta obtener una disminucin de
por lo menos el 50% del OD. La grfica de la disminucin de OD expresada en miligramos
por litro contra los mililitros de inculo, origina una recta cuya pendiente debe
interpretarse como la disminucin de OD por mililitro de inculo. La intercepcin de la
recta con el eje de los valores de reduccin del OD representa la disminucin del
oxgeno provocada por el agua de dilucin, valor que debe ser inferior a 0,1 mg/L (ver
6.8). Con el objeto de corregir el valor de OD consumido por una muestra, se debe
restar a ste el consumido por el inculo. El consumo de OD del agua de dilucin ms
el inculo puede estar en el intervalo de 0,6 a 1,0 mg/L. En el numeral 6.6 se describen
las tcnicas para adicin de material inoculante al agua de dilucin, para dos mtodos
de dilucin de muestras.

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Blanco de agua de dilucin. Con el objeto de verificar la calidad del agua de dilucin sin inculo
y la limpieza de los materiales, usar una porcin de la misma y llevarla junto con las
muestras a travs de todo el procedimiento. El OD consumido por el agua de dilucin
debe ser menor de 0,2 mg/L y preferiblemente no mayor de 0,1 mg/L.

Pretratamiento de la muestra.

6.6.1. Muestras con alcalinidad custica o acidez. Neutralizar las muestras a pH entre 6,5
y 7,5 con una solucin de cido sulfrico (H2SO4) o hidrxido de sodio (NaOH) de
concentracin tal que la cantidad de reactivo no diluya la muestra en ms de 0,5%.
La menor dilucin de muestra no debe afectar el pH dado por el agua de dilucin
inoculada.

6.6.2. Muestras con compuestos residuales de cloro. Evitar las muestras que contengan
cloro residual; tomarlas antes del proceso de cloracin; si la muestra ha sido clorada
pero no presenta cloro residual detectable, inocular el agua de dilucin; si hay cloro
residual, declorar la muestra e inocular el agua de dilucin (ver 6.7). No ensayar las
muestras que han sido decloradas, sin inocular el agua de dilucin. En algunas
muestras, el cloro se elimina si se dejan 1 o 2 h a la luz, lo cual puede suceder
durante el transporte y manejo de la muestra. Para muestras en las cuales el cloro
residual no se disipa en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro residual
por adicin de solucin de Na2SO3. El volumen de Na2SO3 requerido se determina
en una porcin de 100 a 1 000 mL de la muestra, previamente neutralizada, por la
adicin de 10 mL de cido actico 1 + 1 o H2SO4 1 + 50, 10 mL de solucin de
yoduro de potasio (10 g KI/100 mL), por cada 1000 mL de muestra; el volumen
resultante se titula con solucin de Na2SO3 hasta su punto final, determinado por el
indicador almidn-yodo. Se agrega a la muestra neutralizada, el volumen relativo
de solucin de Na2SO3 determinado, se mezcla bien y se deja en reposo cerca de
10 a 20 minutos. Ensayar la muestra para determinar el cloro residual. (Nota: Un
exceso de Na2SO3 en la muestra, consume oxgeno y reacciona con ciertas
cloraminas orgnicas que pueden estar presentes en muestras tratadas).

6.6.3. Muestras contaminadas con sustancias txicas. Las muestras de aguas residuales
provenientes de industrias, por ejemplo electroqumicas, contienen metales txi-
cos. Estas muestras requieren de estudios especiales y deben ser tratadas antes
de medirles la DBO.

6.6.4. Muestras sobresaturadas con OD. En muestras procedentes de aguas muy fras o
de aguas en que la produccin primaria es alta, los valores de OD a 20C suelen
ser mayores de 9 mg de OD/L. Para prevenir prdidas de oxgeno durante la
incubacin, llevar la temperatura de la muestra a 20C en una botella parcialmente
llena, mientras se sacude fuertemente o se burbujea aire comprimido filtrado y
limpio.

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6.6.5. Ajuste de temperatura de la muestra. Llevar las muestras a 20 1C antes de hacer

las diluciones.

6.6.6. Inhibicin de la nitrificacin. A las muestras contenidas en botellas de 300 mL se

agregan 3 mg de 2-cloro-6-(triclorometil)-piridina (TCMP) o se puede agregar direc-
tamente al agua de dilucin para lograr una concentracin final de aproximada-
mente 10 mg de TCMP/L. (Nota: Es posible que la TCMP se disuelva lentamente y
permanezca flotando en la superficie de la muestra; algunas formulaciones comer-
ciales se disuelven ms fcilmente pero no son 100% puras, por lo que se debe
ajustar la dosificacin). Las muestras que requieren el procedimiento de inhibicin
de la nitrificacin incluyen: efluentes tratados biolgicamente, muestras inoculadas
con efluentes tratados biolgicamente, y aguas de ro, pero no se limitan necesa-
riamente a estas. En el reporte de los resultados registrar el uso del procedimiento
de inhibicin de la nitrificacin.

Tcnica de dilucin. Los resultados ms acertados se obtienen con diluciones de

muestra en las que los valores de OD residual son por lo menos 1 mg/L y un consu-
mo de OD de por lo menos 2 mg/L despus de los 5 das de incubacin. La expe-
riencia con muestras de diferente origen permiten optimizar el nmero de dilucio-
nes requeridas; la correlacin de la DQO con la DBO puede constituir una gua
efectiva para la seleccin de las diluciones ms convenientes. Si no se dispone de
esta metodologa, se pueden emplear las diluciones de 0,0 a 1,0 % para efluentes
lquidos industriales, 1 a 5 % para efluentes industriales no tratados y decantados,
5 a 25 % para efluentes con tratamiento secundario o biolgico, y 25 a 100 % para
corrientes contaminadas.

Las diluciones se efectan en probetas y luego se transfieren a las botellas de

DBO, o se preparan directamente en las botellas. Cualquiera de los dos mtodos
de dilucin puede combinarse con cualquier tcnica para medicin de OD. El n-
mero de botellas a ser preparadas para cada dilucin depende de la tcnica de
anlisis del OD y del nmero de rplicas deseadas. Cuando sea necesaria la inocu-
lacin, agregar la semilla directamente al agua de dilucin o a cada probeta o bote-
lla de DBO antes de la dilucin. La inoculacin en las probetas evita la disminucin
de la relacin semilla:muestra cuando se hace un incremento en las diluciones.

6.7.1. Diluciones preparadas en probeta. Si se emplea el mtodo modificado de la azida

para la medicin de OD, transvasar cuidadosamente el agua de dilucin -inoculada si
es necesario-, hasta llenar la mitad de una probeta de 1 a 2 L de capacidad por medio
de sifn para evitar la entrada de aire. Agregar la cantidad deseada de muestra cui-
dadosamente mezclada y diluir al nivel apropiado con agua de dilucin; mezclar bien
con una varilla tipo mbolo y evitar la entrada de aire. Trasvasar la dilucin a dos
botellas de DBO por medio de sifn. Determinar el OD inicial en una de estas bote-
llas. Tapar hermticamente la segunda botella, con sello de agua, e incubar por 5 d a

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20C. Si se determina el OD por el mtodo de electrodo de membrana, transvasar la

mezcla de dilucin a una botella DBO por medio de sifn. Determinar el OD inicial en
esta botella, descartar el residuo y llenar nuevamente la botella con la muestra dilui-
da. Tapar hermticamente la botella, con sello de agua, e incubar por 5 d a 20C.

6.7.2. Diluciones preparadas directamente en botellas DBO. Con una pipeta de boca ancha
agregar el volumen de muestra deseado a diferentes botellas para DBO de volumen
conocido. Agregar, a cada botella o al agua de dilucin, las cantidades apropiadas de
semilla; llenar las botellas con suficiente agua de dilucin, inoculada si es necesario,
de tal manera que al insertar el tapn se desplace todo el aire, sin dejar burbujas.
Para diluciones mayores de 1:100 hacer una dilucin preliminar en una probeta antes
de hacer la dilucin final. Preparar dos botellas de cada dilucin cuando se empleen
los mtodos yodomtricos de volumetra para la medicin del OD; determinar el OD
inicial en una de las dos botellas, tapar hermticamente la segunda botella, con sello
de agua, e incubar por 5 d a 20C. Si se emplea el mtodo de electrodo de membrana
para la medicin de OD, preparar solamente una botella de DBO por cada dilucin;
determinar el OD inicial en esta botella y remplazar cualquier contenido desplazado
con agua de dilucin para llenar la botella. Tapar hermticamente, con sello de agua,
e incubar por 5 d a 20C. Enjuagar el electrodo de OD entre determinaciones para
prevenir la contaminacin cruzada de las muestras.

Determinacin del OD inicial. Si la muestra contiene sustancias que reaccionan

fcilmente con el OD, es necesario determinar el OD antes de llenar la botella de
DBO con la muestra diluida. Si el consumo de OD inicial es insignificante, el pero-
do entre la preparacin de la dilucin y la medida del OD inicial no es crtico. Em-
plear el mtodo modificado de la azida (mtodo yodomtrico) o el mtodo de elec-
trodo de membrana, para determinar el OD inicial en todas las muestras diluidas,
testigos y, si se considera necesario, en los controles de semilla.

Incubacin. Incubar a 20 1C las botellas que contienen las diluciones, los contro-
les de semilla, los blancos de agua de dilucin y los patrones de glucosa-cido
glutmico. Hacer un sello de agua como se describe en 6.7.

Determinacin del OD final. Determinar el OD en las muestras diluidas, los blancos

y los patrones despus de 5 das de incubacin como se describe en 6.8.

7. CLCULOS
7.1. Cuando el agua de dilucin no ha sido inoculada:

D1 D 2
DBO 5 , mg / L =
P

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7.2. Cuando el agua de dilucin ha sido inoculada:

(D1 D 2 ) ( B1 B2 ) f
DBO 5 , mg / L =
P
donde:

D1 = OD de la muestra diluida inmediatamente despus de la preparacin, mg/L,

D2 = OD de la muestra diluida despus de 5 d de incubacin a 20C, mg/L,

P = fraccin volumtrica decimal de la muestra empleada,

B1 = OD del control de semilla antes de la incubacin, mg/L (seccin 6.1.4),

B2 = OD del control de semilla despus de la incubacin, mg/L (seccin 6.1.4), y

f = proporcin de semilla en la muestra diluida a la semilla en el control de semilla = (% de

semilla en la muestra diluida)/(% de semilla en el control de semilla).

7.3. Si el material inoculante se agrega directamente a la muestra o a las botellas de control:

f=(volumen de semilla en la muestra diluida)/(volumen de semilla en el control de semilla)

7.4. Si se ha inhibido la nitrificacin, reportar los resultados como DBO5.

7.5. Los resultados obtenidos para las diferentes diluciones pueden ser promediados si se
cumple con los requisitos de valores de OD residual de mnimo 1 mg/L y un consumo de OD de
por lo menos 2 mg/L. Este promedio se puede hacer si no hay evidencia de toxicidad en las
muestras menos diluidas o de alguna alteracin detectable.

7.6. En estos clculos no se hace correccin por el OD consumido por el blanco de agua de
dilucin durante la incubacin. Esta correccin no es necesaria si el agua de dilucin cumple el
criterio de blanco estipulado en el procedimiento. Si el agua de dilucin no cumple este criterio,
la correccin es difcil y los resultados sern cuestionables.

8. PRECISIN
8.1. No existe un procedimiento aceptable para establecer la precisin y exactitud de la prue-
ba de la DBO. El control de glucosa-cido glutmico prescrito est proyectado como un
punto de referencia para la evaluacin de la calidad del agua de dilucin, la efectividad
de la semilla, y la tcnica analtica.

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8.2. Ochenta y seis analistas, pertenecientes a 58 laboratorios analizaron muestras de aguas natu-
rales dosificadas con incrementos exactos de compuestos orgnicos, con valores promedios
de DBO de 2,1 y 175 mg/L; su desviacin estndar fue de 0,7 y 26 mg/L, respectivamente.

8.3. Las pruebas realizadas en un laboratorio con una solucin de glucosa-cido glutmico
de 300 mg/L, produjeron los siguientes resultados:

Nmero de meses: 14

Nmero de triplicados: 421

Promedio recuperado mensualmente: 204 mg/L

Desviacin estndar promedio mensual: 10,4 mg/L

8.4. Los estudios estadsticos de precisin y exactitud de las determinaciones de la DBO,

realizados en ejercicios de intercalibracin que involucraron de 2 a 112 laboratorios, con
diferentes analistas y semillas, en muestras sintticas que contenan glucosa y cido
glutmico en proporcin 1:1 en el intervalo de concentraciones de 3,3 a 231 mg/L, pro-
porcionaron el promedio, X, y la desviacin estndar, S, a travs de las ecuaciones de
regresin correspondientes:

X = 0,658 (nivel agregado, mg/l) + 0,280 mg/L

S = 0,100 (nivel agregado, mg/l) + 0,547 mg/L

Para el estndar primario de 300 mg/L, el promedio de DBO 5-d fue de 198 mg/L con una
desviacin estndar de 30,5 mg/L.

8.5. Valores lmites de control: Debido a la gran variedad de factores que afectan las
pruebas de la DBO en los estudios multilaboratorios y la consecuente disparidad
en los resultados, se recomienda como valor lmite de control para laboratorios
individuales una desviacin estndar ( 1S), la determinada en las pruebas
interlaboratorios. Para cada laboratorio, establecer los valores lmites de control
efectuando un mnimo de 25 anlisis de glucosa-cido glutmico (ver 6.3) en un
perodo de algunas semanas o meses y calcular la media y la desviacin estndar.
Emplear como valor lmite de control para futuros chequeos de glucosa-cido
glutmico la media 3 desviaciones estndar; comparar los valores calculados
para los ensayos de un solo laboratorio, presentados anteriormente, con los resul-
tados interlaboratorios. Reevaluar los valores lmites de control si estos se ubican
fuera del intervalo de 198 30,5 e investigar el origen del problema. Si la DBO
medida para un patrn de glucosa-cido glutmico est fuera del intervalo acepta-
do, rechazar las pruebas hechas con tales semilla y agua de dilucin.

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Temas ambientales Demanda bioqumica de oxgeno

8.6. Iintervalo de trabajo: es igual a la diferencia entre el mximo OD inicial (7 a 9 mg/L)

y el mnimo OD residual de 1 mg/L multiplicado por el factor de dilucin. Un lmite
de deteccin ms bajo de 2 mg/L se establece para una disminucin del OD mni-
ma de 2 mg/L.

9. QUMICO RESPONSABLE
Elaboracin del protocolo: Laboratorio de Qumica Ambiental Ideam Estandarizacin de la tc-
nica: Laboratorio de Qumica Ambiental Ideam

10. FECHAS
Elaboracin del protocolo: julio 1997 Montaje de la tcnica: Calibracin: Revisin: julio de 1997

11. REFERENCIAS
Standard methods for the examination of water and wastewater. American Public Health
Association, American Water Works Association, Water Pollution Control Federation. 19 ed.,
New York, 1995. pp 5-2 5-12 Methods for chemical analysis of water and wastes. United
States Environmental Protection Agency. Cincinnati, 1983

12. BIBLIOGRAFA
RODIER, J. Anlisis de aguas: aguas naturales, aguas residuales, agua de mar. Omega, Bar-
celona, 1981 SAWYER, C y McCARTY, P. Chemistry for environmental engineering. McGraw
Hill, New York, 1996 GARAY, J, PANIZZO, L, LESMES, L, RAMIREZ, G y SANCHEZ, J.
Manual de tcnicas analticas de parmetros fsico-qumicos y contaminantes marinos. 3
ed. Centro de Investigaciones Oceanogrficas e Hidrogrficas. Cartagena, 1993

T12 INSTITUTO DE HIDROLOGA, METEOROLOGA Y ESTUDIOS AMBIENTALES, IDEAM

 Demanda bioqumica de oxgeno Temas ambientales

DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO, DIAGRAMA DE FLUJO

1. Preparacin del Agua de Dilucin

8,5g KH2PO4 + 21,75g

0,25g
K2HPO4 + 33,4g 22,5g MgSO47H2O 27,5g CaCl2 diluir a
FeCl36H2O
Na2HPO47H2O + 1,7g NH4Cl; diluir a 1 L con H2O 1 L con H2O
diluir a 1 L con H2O
diluir a 1 L con H2O

1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL

1,0 mL tampn
solucin solucin solucin
fosfato pH 7,2
MgSO4 FeCl3 CaCl2
Agua
destilada Inocular Saturar
(adiciones por Chequear con OD1;
cada L) Guardar llevar a 20C

2. Verificacin del Agua de Dilucin y Blanco2

Llenar botellas de DBO de 250-300 mL con: Consumo de OD < 0,2 mg/L,

Agua de dilucin inoculada (Verificacin); Paso 6
preferiblemente < 0,1 mg/L

3. Chequeo con Glucosa-cido Glutmico

Solucin estndar: Evaluar calidad del agua de

Dilucin
150 mg glucosa + Paso 6 dilucin y efectividad de la
al 2%
150 mg cido glutmico/L semilla3

4. Preparacin de la semilla4

Efluente planta de tratamiento biolgico; Hacer diluciones Consumo de OD de la

sobrenadante agua residual domstica Paso 6 hasta disminucin semilla + agua dilucin
decantada por 1- 36 h del OD de 50% entre 0,6 a 1,0 mg/L

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Temas ambientales Demanda bioqumica de oxgeno

5. Pretratamiento de las muestras

Ajuste de Temperatura: Muestras con alcalinidad o acidez: Muestras con sustancias txicas:
Llevar las muestras y el agua de dilucin Neutralizar a pH 6,5-7,5 requieren de estudio y
a 201C antes de hacer las diluciones con H2SO4 NaOH5 tratamiento especiales

Muestras con Inhibicin de la nitrificacin: Muestras sobresaturadas con OD:

cloro residual6 A las muestras en botellas de DBO, llevar T a 20 C y agitar en botella
neutralizar y agregar 3 mg de 2-cloro-6-(triclorometil)-piridina parcialmente llena o burbujearle aire limpio1

10 mL Acido 10 mL
Solucin
actico 1+1, solucin
de Na2SO3
H2SO4 1+50 KI 10%

Mezclar y
Alcuota de Valorar con Agregar volumen dejar en
100 a 1000 mL indicador de relativo de reposo de
de muestra Adiciones por cada 1000 mL de muestra almidn Na2SO3 10 a 20 min

Volumen necesario para los ensayos de la DBO

6. Tcnica de dilucin (Preparar en Probetas en Botellas de DBO)5

Agua de dilucin Alcuota de

(inoculada si es muestra a
necesario) 20 1C7

Probetas Llenar hasta la Diluir al Mezclar con Transvasar a

Dos de mitad por medio volumen varilla tipo dos botellas de
1o2L de sifn apropiado mbolo DBO

Alcuota de Muestra a Agua de dilucin Dos botellas

20 1oC (medida con (inoculada si es de DBO
pipeta de boca ancha) necesario) llenas

Botellas de DBO Agregar semilla

(si no se ha Llenar las
Dos de Determinar Tapar hermticamente
inoculado el agua) botellas
250-300 mL OD inicial8 con sello de agua

Determinar Incubar a 20C

OD final8 por 5 das

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 Demanda bioqumica de oxgeno Temas ambientales

1
Se puede agitar en una botella parcialmente llena, burbujear aire filtrado libre de materia orgnica, o almacenar en una botella con tapn de
algodn.
2
Si el agua consume ms de 0,2 mg de oxgeno/L se debe mejorar su purificacin; si se usa el procedimiento de inhibicin de la nitrificacin,
el agua de dilucin inoculada se debe guardar en un sitio oscuro a temperatura ambiente hasta que el consumo de oxgeno se reduzca lo
suficiente; no agregar semilla para mejorar su calidad. El almacenamiento no es recomendable cuando se va a determinar la DBO sin
inhibicin de nitrificacin. Determinar si permanece la concentracin de amonio suficiente despus del almacenamiento; de lo contrario,
agregar solucin de cloruro de amonio para asegurar un total de 0,45 mg de amonio como nitrgeno/L. Si el agua de dilucin no ha sido
guardada para mejorar su calidad, agregar la cantidad suficiente de semilla para producir un consumo de OD de 0,05 a 0,1 mg/L en cinco
das a 20C.
3
Controlar peridicamente la calidad del agua de dilucin, la efectividad de las semillas y la tcnica analtica. Si un agua residual contiene un
constituyente mayoritario identificable, que contribuye a la DBO, usar este compuesto en remplazo de la mezcla de glucosa-cido glutmico.

4
Cuando se emplee el efluente de un proceso de tratamiento biolgico, se recomienda aplicar el procedimiento de inhibicin de la nitrificacin.
Ensayar el rendimiento de la semilla haciendo pruebas de la DBO en las muestras hasta obtener una poblacin satisfactoria.

5
El H2SO4 y el NaOH deben tener una concentracin tal que la cantidad adicionada no diluya la muestra en ms de 0,5 %, y sin que se afecte
el pH dado por el agua de dilucin.

6
Evitar las muestras que contengan cloro residual; en algunas muestras se elimina si se deja 1 o 2 h a la luz.
7
Cualquiera de los dos mtodos de dilucin puede combinarse con cualquier tcnica para medicin de OD. El nmero de botellas a ser
preparadas para cada dilucin depende de la tcnica de anlisis del OD y del nmero de replicas deseadas. Los resultados ms acertados
se obtienen con diluciones en las que los valores de OD residual son por lo menos 1 mg/L y un consumo de OD de por lo menos 2 mg/L. Se
pueden emplear las diluciones de 0,0 a 1,0 % para efluentes lquidos industriales, 1 a 5 % para efluentes industriales no tratados y decan-
tados, 5 a 25 % para efluentes con tratamiento secundario o biolgico, y 25 a 100 % para corrientes contaminadas.

8
Si la muestra contiene sustancias que reaccionan fcilmente con el OD, es necesario determinar el OD antes de llenar la botella de DBO
con la muestra diluida. Si el consumo de OD inicial es insignificante, el periodo entre la preparacin de la dilucin y la medida del OD inicial
no es crtico. Emplear el mtodo modificado de la azida (mtodo yodomtrico) o el mtodo de electrodo de membrana, para determinar el
OD inicial en todas las muestras diluidas, testigos y, si se considera necesario, en los controles de semilla.

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