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Mrcia Attias
Narcisa Cunha e Silva
Biologia Celular I
Biologia Celular I
Volume 2 - Mdulo 3 Mrcia Attias
Narcisa Cunha e Silva
Apoio:
Fundao Cecierj / Consrcio Cederj
Rua Visconde de Niteri, 1364 Mangueira Rio de Janeiro, RJ CEP 20943-001
Tel.: (21) 2334-1569 Fax: (21) 2568-0725
Presidente
Masako Oya Masuda
Vice-presidente
Mirian Crapez
Material Didtico
ELABORAO DE CONTEDO Departamento de Produo
Mrcia Attias
Narcisa Cunha e Silva EDITORA PROGRAMAO VISUAL
Tereza Queiroz Andra Dias Fies
COORDENAO DE DESENVOLVIMENTO
Yozo Kono
INSTRUCIONAL COORDENAO EDITORIAL
Cristine Costa Barreto Jane Castellani COORDENAO DE
ILUSTRAO
DESENVOLVIMENTO INSTRUCIONAL REVISO TIPOGRFICA
Eduardo Bordoni
E REVISO Carmen Irene Correia de
Alexandre Rodrigues Alves Oliveira ILUSTRAO
Ana Tereza de Andrade Jane Castellani Equipe CEDERJ
Mrcio Paschoal Ktia Ferreira dos Santos CAPA
COORDENAO DE AVALIAO Sandra Valria Oliveira Alexandre d`Oliveira
DO MATERIAL DIDTICO COORDENAO DE PRODUO GRFICA
Dbora Barreiros PRODUO Osias Ferraz
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REVISO TCNICA
Marta Abdala
Copyright 2005, Fundao Cecierj / Consrcio Cederj
Nenhuma parte deste material poder ser reproduzida, transmitida e gravada, por qualquer meio
eletrnico, mecnico, por fotocpia e outros, sem a prvia autorizao, por escrito, da Fundao.
A885b
Attias, Mrcia
Biologia celular 1: v.2. / Mrcia Attias Rio de Janeiro:
Fundao CECIERJ, 2010.
130p.; 19 x 26,5 cm.
ISBN: 85-89200-63-9
Governador
Srgio Cabral Filho
Universidades Consorciadas
UENF - UNIVERSIDADE ESTADUAL DO UFRJ - UNIVERSIDADE FEDERAL DO
NORTE FLUMINENSE DARCY RIBEIRO RIO DE JANEIRO
Reitor: Almy Junior Cordeiro de Carvalho Reitor: Alosio Teixeira
Gabarito _______________________________________121
Receptores de membrana
13
AULA
e princpios de
sinalizao celular I
objetivos
8 CEDERJ
13 MDULO 3
Tipos de sinalizao
De acordo com a meia vida (veja o boxe) da molcula sinalizadora e de quais clulas
AULA
possuem receptores para aquele sinal, podemos classificar os tipos de sinalizao como:
a) Parcrina a molcula sinalizadora tem vida curta e os receptores esto nas clulas
prximas (Figura 13.2.a). Nesse caso, a molcula sinalizadora chamada de mediador local.
b) Autcrina a molcula sinalizadora tem vida curta e o receptor est na prpria clula que
emitiu o sinal. Para voc entender melhor, compare a sinalizao autcrina com algumas coisas
que ns fazemos, como colocar um bilhete para ns mesmos a fim de no esquecer de fazer alguma
coisa, ou anotar um compromisso na agenda, ou colocar o despertador para tocar na hora que queremos
acordar. Todos esses exemplos so sinais que colocamos e ns prprios percebemos; somos, assim,
tanto emissores como alvos dos mesmos sinais, que so, portanto, autcrinos (Figura 13.2.b).
c) Dependente de contato a molcula sinalizadora no secretada, ficando exposta na
superfcie da clula sinalizadora, e a clula-alvo precisa fazer contato para que o receptor possa se
ligar (Figura 13.1).
d) Endcrina a molcula sinalizadora tem vida longa, lanada na corrente sangunea
e vai atingir clulas-alvo em locais distantes. Nesse caso, a molcula sinalizadora chamada de
hormnio (Figura 13.2.d).
e) Neuronal um caso
especial de sinalizao entre clulas
que poderia ser classificado como
parcrino ou endcrino. Nessa
situao, a molcula sinalizadora,
chamada neurotransmissor, viaja
grandes distncias, mas no no
sangue ou no meio extracelular
e sim dentro de prolongamentos
celulares dos neurnios, os
axnios, indo atingir a clula-
alvo longe do corpo celular do
neurnio que emitiu o sinal,
mas prximo do axnio onde
a molcula sinalizadora foi
secretada (Figura 13.2.c).
CEDERJ 9
Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular I
ue
ng
Sa
Figura 13.3: (a) Na corrente sangunea circulam
muitos hormnios, secretados por diferentes
clulas, que atingiro vrias clulas, mas s
Hormnios Vrias clulas-al vo algumas expem o receptor adequado. (b) Do
Vrias clulas sinalizadoras mesmo modo, um neurnio possui diferentes
b prolongamentos para alcanar as clulas que
possuem os receptores capazes de reconhecer
o neurotransmissor.
Vrias clulas-alvo
10 CEDERJ
13 MDULO 3
Clula muscular esqueltica
Figura 13.4: Diferentes
clulas podem responder
de modo diferente
mesma molcula sinali-
AULA
zadora, por apresentarem
Acetilcolina
diferentes receptores,
como as clulas muscula-
Contrao
res esqueltica e cardaca,
ou mesmo apresentando
receptores iguais, como as
clulas cardaca e secretria.
Diminuio
de freqncia
Clula que no se comunica
se trumbica
Clula secretria
CEDERJ 11
Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular I
Morte celular
B
Proliferao
A
F
C G
B
Diferenciao
A
Tipos de receptores
Qual o tipo de receptor mais adequado para receber um determinado sinal? Isso depende
de que tipo de molcula esse sinal for (Figura 13.6):
a) se a molcula sinalizadora for pequena e/ou hidrofbica o suficiente para atravessar a
membrana, o receptor deve ser intracelular;
b) se a molcula sinalizadora no puder atravessar a membrana, o receptor ter de estar
obrigatoriamente na membrana plasmtica, exposto na superfcie celular.
Essas caractersticas de afinidade, isto , permeabilidade entre as molculas sinalizadoras e as
membranas celulares, mais especificamente a bicamada lipdica, j foram abordadas na Aula 8.
Figura 13.6: Os receptores para molculas hidroflicas ficam voltados para o meio extracelular (a) enquanto os
receptores para sinalizadores pequenos e hidrofbicos so intracelulares (b).
12 CEDERJ
13 MDULO 3
Sinalizao por ligantes hidrofbicos
AULA
ntrico (NO). Essa pequena molcula age sobre as clulas musculares
lisas que envolvem os vasos sanguneos, provocando vasodilatao local.
Promovendo o relaxamento dessas clulas musculares, o NO faz com
que o vaso aumente de calibre, deixando o sangue fluir mais facilmente.
O NO produzido nas clulas endoteliais que revestem os vasos, isto
, bem perto das clulas sobre as quais ele age. Quando um impulso
nervoso chega a essas clulas, elas ativam uma enzima, a xido ntrico
sintase (NOS), que produz NO a partir do aminocido arginina. O NO
um gs e, assim como o O2 e o CO2, ele atravessa as membranas por
difuso simples (a Aula 8), saindo da clula na qual foi produzido e se
espalhando rapidamente pelas clulas vizinhas. Nas clulas musculares
lisas, o NO ativa outras enzimas, o que leva vasodilatao. O NO um
mediador local, fazendo sinalizao parcrina.
CEDERJ 13
Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular I
Por isso, precisam associar-se a molculas hidroflicas que tenham um stio capaz de acomod-la.
Essa molcula hidroflica, que chamamos carreadora (Figura 13.6.b), freqentemente a albumina
do soro. Ao chegar bem perto da membrana de uma clula, a molcula sinalizadora (ligante) se
solta da carreadora e se difunde pela bicamada lipdica, entrando na clula. O receptor para este
ligante deve estar no citoplasma e, com a chegada deste, fica ativo, desempenhando suas funes.
muito freqente, porm, que o receptor seja um fator de transcrio, isto , uma molcula
que, com a chegada do ligante, forma um complexo que entra no ncleo e vai ativar a transcrio
de um gen (Figura 13.7).
Claro que essa resposta demora muito mais para aparecer do que aquela que depende
apenas da ativao de uma molcula que j estava pronta. Mas tambm permanece mais tempo,
j que o gen ativado produzir uma protena que no ser degradada de imediato. Alguns
dos hormnios mais conhecidos agem assim, como por exemplo os hormnios esterides
(testosterona, estrognio, cortisol e outros) e os tireoidianos.
Mas e se o ligante no consegue atravessar a membrana? O que voc faria para passar
uma informao para algum que est num lugar onde voc no pode entrar? No vale
telefonar! Acho que o jeito seria mandar um recado por algum que estivesse na porta (ou na
janela!). E recomendar muita ateno para que o recado chegue direitinho.
Quando a molcula sinalizadora hidroflica e/ou grande, no podendo, portanto, atravessar a
bicamada lipdica, o receptor vai ter de funcionar como um verdadeiro garoto de recados, mas sem sair
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13 MDULO 3
da membrana onde tem de estar obrigatoriamente exposto (Figura 13.6.a).
Quando o receptor recebe a molcula sinalizadora, ele invariavelmente muda
AULA
de conformao. A mudana conformacional passa a informao adiante
porque muda o comportamento do receptor. Vamos ver quais so as principais
classes de receptores para ligantes hidroflicos e o que acontece depois da
chegada do ligante a cada um deles, passando a informao adiante.
Existem trs tipos de receptor de sinalizao na membrana
plasmtica: a) os receptores do tipo canal; b) os associados protena
G e c) os receptores enzimticos. Em comum eles possuem o fato de
serem protenas transmembrana e de no entrarem na clula (a no
ser que devam ser degradados), o que os diferencia dos receptores de
endocitose (voc vai conhec-los na Aula 19), que entram na clula
junto com o ligante. Vamos ver as caractersticas bsicas de cada um.
a) Receptores do tipo canal
Esses voc j conhece das Aulas 10 e 11, de transporte. So os
canais controlados por ligante. Esses receptores podem ser os canais
eles prprios ou estar associados a um canal inico, de modo que a
mudana conformacional induzida pelo ligante ativa o canal associado,
que se abre (Figura 13.8). Um bom exemplo o receptor de acetilcolina
em clulas musculares esquelticas.
CEDERJ 15
Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular I
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Enzima
ativa
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13 MDULO 3
As enzimas ativadas por protena G devem funcionar de modo a
passar o sinal adiante. As enzimas que fazem isso so principalmente
AULA
a adenilciclase e a fosfolipase C. Elas tm em comum, alm de serem
ativadas por protena G, claro, o fato de sua ao enzimtica gerar
produtos pequenos e de curta durao, os mensageiros secundrios. Vamos
estudar uma de cada vez na aula seguinte.
RESUMO
Ligantes que entram na clula podem ter vida muito curta e provocar
respostas rpidas, como o xido ntrico, ou ter vida longa e provocar resposta
lenta e duradoura, como os hormnios esterides.
EXERCCIOS
1. Conceitue:
a. Receptor:
b. Ligante:
c. Molcula sinalizadora:
d. Clula-alvo:
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Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular I
Uma molcula sinalizadora pode ser reconhecida por vrios tipos celulares
diferentes. ( )
9. O que so protenas G?
18 CEDERJ
Receptores de
14
AULA
membrana e princpios
de sinalizao celular II
objetivos
Adenilciclase
20 CEDERJ
14 MDULO 3
O AMPc, como todo mensageiro secundrio, normalmente est presente em concentraes
muito baixas no citoplasma das clulas. Assim, quando uma mensagem chega e reconhecida
AULA
por um receptor que ativa protena G, que por sua vez ativa adenilciclase, que produz AMPc,
a elevao sbita da concentrao desse mensageiro prontamente percebida pela clula. Muitas
enzimas citoplasmticas so ativadas por AMPc e reagem a esse pico de concentrao. Para esse
mecanismo funcionar bem, preciso que a concentrao de AMPc baixe to rpido quanto
subiu, assim, a clula poder perceber o prximo sinal. A enzima responsvel por isso a AMPc-
fosfodiesterase, que faz com que a molcula fique linear (passando a se chamar AMP-5monofosfato),
perdendo a funo. Mas ela no vira lixo, no! Pode mais tarde receber outros fosfatos, voltando
a ser o precioso ATP.
O AMPc dispara uma enorme diversidade de eventos, ativando enzimas, abrindo canais
inicos etc. com muitas conseqncias em termos da atividade celular. Uma das enzimas mais
importantes ativadas por AMPc a protena quinase A (PKA). Uma protena quinase uma
enzima que fosforila outras protenas. A protena quinase A ganhou esse nome por causa de seu
modo de ativao, o A de AMPc.
D uma paradinha!
Esse negcio est ficando confuso, no? Tudo aconteceu por causa de um ligante que nem mesmo
entrou na clula! Vamos resumir a seqncia de eventos para que fique mais claro:
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Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular II
22 CEDERJ
14 MDULO 3
Fosfolipase C, outra enzima ativada por protena G
Outra enzima freqentemente ativada por protena G a fosfolipase C. Como seu nome
AULA
est dizendo, essa enzima hidrolisa um fosfolipdio. Uma fosfolipase classificada como A, C ou
D de acordo com o local onde ela corta o fosfolipdio. A fosfolipase C corta entre o fosfato e o
glicerol (para lembrar a estrutura do fosfolipdio, veja a Aula 7). No qualquer fosfolipdio que pode
ser clivado pela fosfolipase C. O alvo da fosfolipase C ativada por protena G um fosfolipdio
da face interna da membrana plasmtica, o fosfatidilinositol 4,5 bifosfato, mais conhecido pela
sigla PIP2. A clivagem gera duas molculas: 1) o diacilglicerol, tambm conhecido como DAG,
um glicerol com duas caudas de cido graxo, que permanece na membrana; e 2) o inositol
trifosfato (IP3), que liberado para o citoplasma (Figura 14.3).
As duas molculas produzidas, DAG e IP3, tero funes diferentes em locais diferentes.
O DAG permanece na bicamada interna da membrana plasmtica, onde se movimenta com
grande velocidade e vai recrutar do citoplasma uma protena quinase ainda no estado inativo.
Ela s ser ativada por clcio depois de recrutada, por isso se chama protena quinase C (PKC).
E de onde vem o clcio que vai ativ-la? Isso funo da outra molcula produzida pela fosfolipase,
o IP3. Ele difunde rpido pelo citoplasma e vai encontrar seu receptor na membrana do retculo
endoplasmtico. Esse receptor do tipo canal, e quando o IP3 se liga ele abre um canal que deixa
vazar clcio para o citoplasma, ativando a PKC e vrias outras protenas (Figura 14.3).
Nesse tipo de cascata de sinalizao, o clcio o mensageiro secundrio e pode afetar
diretamente componentes do citoesqueleto, como os microtbulos, disparar mecanismos de
secreo ou prosseguir a cascata, ativando diretamente enzimas como protena quinase C, que
vai fosforilar outras protenas passando o sinal adiante.
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Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular II
24 CEDERJ
14 MDULO 3
A concentrao de clcio de cerca de 10-7M no citoplasma e
da ordem de 10-3M no meio extracelular. Uma diferena de 10.000
AULA
vezes! Para manter essa diferena, vrios mecanismos funcionam
permanentemente. Na membrana plasmtica, h uma protena
trocadora de clcio por sdio que usa a energia do gradiente de sdio
gerado pela bomba de sdio e potssio para, sem gasto suplementar
de energia, botar clcio para fora. Alm dela, h uma outra bomba de
clcio na membrana plasmtica que hidrolisa ATP para obter a energia
necessria (a sim, transporte ativo) e protenas ligadoras de clcio no
citoplasma que tornam o on indisponvel para outras reaes.
Quando ocorre um pico de clcio proveniente de sinalizao,
a concentrao normal aumenta 100 vezes, chegando a 10-5M. Nessa
situao, alm das bombas na membrana plasmtica, entra em
funcionamento a bomba de clcio do retculo endoplasmtico, que
recolhe de volta o clcio liberado, mas se surgir algum problema,
como uma leso na membrana plasmtica (que logo ser selada), e
a concentrao subir mais, chegando a 10-3M, a mitocndria passa a
bombear clcio para dentro usando a energia do gradiente de prtons,
deixando temporariamente de produzir ATP. Isso um mecanismo de
emergncia, que raramente ocorre.
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Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular II
Protenas-alvo
Receptores enzimticos
26 CEDERJ
14 MDULO 3
outra, reciprocamente (Figura 14.7). Depois que um receptor fosforila o
outro, vrias protenas so recrutadas do citoplasma pelas fosfotirosinas dos
AULA
receptores. Esse fenmeno dura apenas alguns segundos, j que a fosforilao
pelas tirosina quinases logo revertida por protenas tirosina fosfatases.
As protenas recrutadas passam a estar ativas e vo, assim, passar o sinal adiante.
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Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular II
28 CEDERJ
14 MDULO 3
A reao a uma infeco por vrus disparada por tirosina quinases
Existem, porm, mecanismos mediados por receptores enzimticos que modificam a expresso
gnica mais rapidamente. Um dos mais notveis o mecanismo disparado por -interferon (citocina
AULA
secretada por glbulos brancos em resposta infeco viral, principalmente). O -interferon
produzido por clulas infectadas reconhecido por receptores de -interferon que ativam uma via
de tirosina quinases citoplasmticas chamadas Janus quinases (Jaks), em referncia ao deus romano
de duas faces. As Jaks fosforilam uma srie de protenas reguladoras de expresso gnica (as STATS),
que rapidamente entram no ncleo e ativam a transcrio de vrios gens que codificam protenas
que aumentam a resistncia infeco viral. Alm do -interferon, tambm os receptores para -
interferon (que ativa macrfagos), eritropoeitina (que estimula a produo de hemcias), prolactina
(que estimula a produo de leite) e hormnio do crescimento usam a via de Jaks e STATS.
Amplificao de sinais
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Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular II
Integrao de sinais
Como voc j deve ter imaginado, freqentemente as cascatas de sinalizao iniciadas por
diferentes receptores se cruzam na clula, isto , tm componentes em comum. Dois exemplos
bem simples esto esquematizados na Figura 14.10. preciso que estejam presentes os dois
ligantes, A e B, reconhecidos por seus respectivos receptores, para que a sinalizao possa
prosseguir numa via comum.
30 CEDERJ
14 MDULO 3
RESUMO
AULA
A ativao da protena G ativa por sua vez adenilciclase ou fosfolipase C.
EXERCCIOS
2. E os de ligantes hidroflicos?
CEDERJ 31
Biologia Celular I | Receptores de membrana e princpios de sinalizao celular II
32 CEDERJ
15
AULA
Introduo s organelas
celulares
INTRODUO Voc est iniciando uma nova unidade na disciplina Biologia Celular.
At agora, vimos os principais mtodos que permitiram o descobrimento
e o estudo das clulas e a estrutura e principais funes desempenhadas
pelas membranas celulares. A partir de agora, vamos tratar dos principais
compartimentos delimitados por algumas membranas celulares e as
funes desempenhadas por eles.
34 CEDERJ
15 MDULO 3
Os procariontes continuam a existir; so, portanto, um sucesso evolutivo inegvel.
So procariontes as bactrias e os micoplasmas. Os ltimos so seres ainda mais simples que as
AULA
bactrias e, em geral, parasitam outras clulas. As bactrias esto presentes em praticamente todos
os pontos do planeta e em todos os nveis da cadeia alimentar. Existem bactrias fotossintetizantes e
fixadoras de nitrognio (produtores primrios), outras so parasitas, simbiontes ou decompositoras
(ltimo nvel da cadeia alimentar).
Vimos que todas as clulas, inclusive as bactrias, so limitadas por uma bicamada
lipdica na qual se inserem protenas, a membrana plasmtica. Cabe membrana plasmtica
definir os meios intra e extracelular e permitir a troca de informaes e molculas entre eles.
No caso das bactrias (e tambm dos fungos e dos vegetais), alm da membrana plasmtica
existe uma estrutura mais externa, a parede celular. Esta formada por molculas de natureza
glicdica e, entre outras funes, sustenta e define a forma que essas clulas tero (Figura 15.1).
CEDERJ 35
Biologia Celular I | Introduo s organelas celulares
Comparada rea de superfcie dos procariontes, a das clulas eucariontes pode ser mais
de 30 vezes maior (Figura 15.2). Se compararmos o volume, essa diferena pode ser at 10.000
vezes maior! Entretanto, enquanto a vida de um procarionte praticamente se resume em crescer
e multiplicar-se, o aumento de tamanho permitiu a incorporao de uma srie de funes aos
seres eucariontes.
Organizar uma clula como arrumar uma mala ou dobrar um pra-quedas: se as peas estiverem
bem dobradas, vai caber muito mais coisas na sua mala. Quanto ao pra-quedas, ele pode ser comparado
a uma clula em que todas as membranas foram unificadas numa s superfcie. Enquanto estiver dobrado,
ser fcil transport-lo; depois de aberto, aquela enorme superfcie de tecido ser bem difcil de levar.
As figuras A e B ocupam o mesmo volume, mas a B possui uma rea de membrana bem
maior. Se fosse esticada ocuparia o volume da figura C.
36 CEDERJ
15 MDULO 3
O que fazer com tanta membrana? No caso do pra-quedas, claro que o mais prtico
dobr-lo e t-lo acomodado numa bolsa ou mochila prpria. Na evoluo celular deu-se o
AULA
mesmo. A soluo foi a internalizao da maior parte das membranas celulares, dando origem s
organelas e aos compartimentos celulares. A membrana plasmtica corresponde a apenas uma
pequena frao (2 a 5%) do total de membranas de uma clula. Somente ficaram na membrana
plasmtica aquelas protenas necessrias s funes de transporte, comunicao e adeso.
A maior parte das membranas celulares (cerca de 50%) pertence ao retculo endoplasmtico.
Tambm existem evidncias de que, no decorrer do processo evolutivo, algumas das bactrias
ingeridas, em vez de serem digeridas, estabeleceram uma relao simbitica com a clula
predadora (Figura 15.3). Acredita-se que as mitocndrias e os cloroplastos resultam de uma
relao dessa natureza.
Em todas as clulas, podem ser definidos dois compartimentos: o meio intracelular e o meio
extracelular. Na Figura 15.4, esses dois compartimentos esto representados em cores diferentes.
Talvez seja uma surpresa para voc verificar que os espaos internos do retculo endoplasmtico,
do complexo de Golgi e das vesculas que a clula secreta ou ingere so correspondentes ao meio
extracelular. O meio intracelular se restringe quilo que chamamos de citossol.
CEDERJ 37
Biologia Celular I | Introduo s organelas celulares
Figura 15.4: Esquema de uma clula onde esto coloridos em branco o meio extracelular e em cinza o meio
intracelular.
38 CEDERJ
15 MDULO 3
AULA
Figura 15.5: As clulas do epitlio intestinal possuem todas as organelas tpicas de uma clula eucarionte.
O ncleo
o compartimento que contm o genoma e o principal local de sntese de cidos nuclicos
(DNA e RNA). O envoltrio nuclear duplo e a comunicao entre o ncleo e o citoplasma
feita atravs de complexos do poro, complexos proticos que funcionam como comportas,
regulando a passagem de molculas para dentro e para fora do ncleo. As protenas atravessam
o complexo de poro j na sua forma enovelada. Isso quer dizer que a passagem pelo complexo
de poro no depende apenas do tamanho da molcula, mas da existncia de mecanismos de
reconhecimento que funcionam como um passaporte para a entrada no ncleo. Esse um
transporte do tipo 1, atravs de comportas.
CEDERJ 39
Biologia Celular I | Introduo s organelas celulares
O citoplasma
O citoplasma o maior compartimento celular. Corresponde a uma parte lquida, o
citossol, e s organelas que nele se distribuem. No citossol, ocorrem tanto a sntese quanto
a degradao de protenas. A sntese de protenas, voc j sabe, ocorre nos ribossomas. J a
degradao ocorre nos proteassomas, os quais estudaremos nas prximas aulas. Muitas reaes
metablicas (como a gliclise) tambm ocorrem nesse compartimento.
O retculo endoplasmtico
Quase a metade do total de membranas de uma clula pertence ao retculo endoplasmtico.
O retculo forma uma rede contnua de membranas. Na superfcie da membrana do retculo
voltada para o citoplasma, aderem-se os ribossomos que participam da sntese de protenas. Essas
protenas podem ser secretadas pelas clulas ou destinar-se s diversas organelas, e tanto podem ser
solveis quanto inseridas em membranas. Alm das protenas, tambm os lipdeos so sintetizados
no retculo. As regies do retculo nas quais ocorre a sntese de lipdeos so chamadas de retculo
liso. As regies onde os ribossomos podem se ancorar formam o retculo rugoso.
A protena em formao passa para o interior do retculo endoplasmtico por meio de
protenas translocadoras, caractersticas do transporte atravs de membrana. Esse processo
tambm ser detalhado nas aulas seguintes.
O complexo de Golgi
A maioria das protenas precisa passar do retculo para o complexo de Golgi, onde ser
finalizada. Essa passagem feita por vesculas que brotam das cisternas do retculo e se fundem
ao complexo de Golgi. No complexo de Golgi, resduos de acar so incorporados s cadeias
proticas, dando protena uma identidade que equivale a um endereo. Do Golgi, as protenas
partem em vesculas que se fundem membrana das organelas s quais se destinam. Este o tipo
de transporte que chamamos vesicular.
O endereo de uma protena , na verdade, uma determinada seqncia de aminocidos
chamada seqncia sinal. As protenas caractersticas de cada membrana ou compartimento
celular possuem seqncias sinal especficas que garantem o correto direcionamento das
inmeras protenas sintetizadas pela clula.
40 CEDERJ
15 MDULO 3
Na Figura 15.7, esto
representadas as principais vias
AULA
de transporte entre os diversos
compartimentos celulares. Nela,
voc pode observar que vrias
organelas (ncleo, mitocndrias,
peroxissomas, plastos) recebem
protenas sintetizadas no citossol,
isto , protenas que so sinte-
tizadas em ribossomos livres no
RESUMO
CEDERJ 41
Biologia Celular I | Introduo s organelas celulares
EXERCCIOS
1. Quais os dois mtodos pelos quais acredita-se que tenham se formado as organelas
celulares?
4. Agora considere uma clula de dimenses lineares dez vezes maior (15, 20
e 10 m) e repita os clculos. Qual a relao entre a rea e o volume das duas
clulas?
42 CEDERJ
16
AULA
Retculo endoplasmtico
Pr-requisitos
Bioqumica I: conceito de aminocido,
peptdeo, protena.
Biologia Celular I: estrutura de
membrana, transporte ativo.
Biologia Celular I | Retculo endoplasmtico
Figura 16.1: Uma clula de mamfero cujo retculo endoplasmtico teve seu lmen
totalmente preenchido por um corante fluorescente. Na foto da direita, uma regio
da periferia da clula mostrada em maior ampliao.
Foto: Hugh Pelham
44 CEDERJ
16 MDULO 3
O retculo e sua sade
Na membrana do retculo endoplasmtico liso de algumas clulas existem enzimas capazes de catalisar
importantes processos de detoxificao. Elas modificam toxinas lipossolveis, que podem, portanto,
AULA
atravessar membranas, tornando-as solveis em meio aquoso. Elas podem ser ento excretadas pelas
clulas e depois filtradas no rim. As enzimas mais importantes que fazem esse trabalho so as da famlia
do citocromo P450.
Apenas recordando
Sabemos que todas as protenas celulares so sintetizadas a partir de informaes contidas no DNA. Para
cada protena produzido, a partir do DNA, um filamento de RNA-mensageiro (RNAm), que lido pelos
ribossomos (Figura 16.2). Os ribossomos tambm so formados por RNA, mas do tipo ribossomal (RNAr).
Conforme a fita de RNAm passa pelo ribossomo, aminocidos trazidos por RNAt, ou transportador, so
acoplados uns aos outros, formando a cadeia peptdica. A figura a seguir esquematiza as etapas do que
conhecido como Dogma central da biologia molecular.
Figura 16.2: A informao contida no DNA transmitida ao RNA na transcrio, que por sua vez serve de
molde para a sntese de protenas na traduo.
CEDERJ 45
Biologia Celular I | Retculo endoplasmtico
46 CEDERJ
16 MDULO 3
AULA
Figura 16.4: Os aminocidos que compem as protenas so adicionados de acordo com a leitura (traduo)
que os ribossomos fazem ao longo de uma fita de RNA mensageiro. A uma mesma fita podem associar-se
muitos ribossomos (polirribossomo ou polissomo) que vo produzindo vrias cpias da mesma protena.
Ao final da leitura, as subunidades ribossomais se separam e se incorporam ao conjunto de subunidades
ribossomais livres no citossol.
Quando a sntese de uma protena que precisa passar pelo retculo se inicia, os primeiros
aminocidos expostos fora do ribossomo constituem uma seqncia sinal. Essa seqncia ento
se liga a uma partcula reconhecedora do sinal ou SRP (do ingls Signal Recognition Particle). A
membrana do retculo, por sua vez, possui um receptor para o conjunto seqncia de sinal (SRP)
(Figura 16.5). A membrana do retculo possui tambm um receptor que forma uma ncora para
adeso do ribossomo. A SRP interrompe a sntese das protenas endereadas ao retculo at
que o ribossomo esteja acoplado sua membrana. A partir do acoplamento, a cadeia protica
continuar sendo sintetizada para dentro do lmen do retculo.
Como voc sabe, uma cadeia protica, mesmo ainda no enovelada, no pode atravessar
diretamente uma bicamada lipdica. Quando o ribossomo vai se acoplar ao retculo, forma-se um
canal hidroflico transmembrana por onde a protena nascente vai passar. Esse canal formado por
protenas transmembrana que se agrupam apenas quando o ribossomo vai se acoplar. Esse canal
hidroflico recebe o nome de translocon. O ribossomo se ajusta no translocon, de modo que nada
mais atravesse o canal alm da cadeia protica e nada vaze do lmen do retculo para o citossol.
O ribossomo permanecer aderido at terminar de sintetizar a seqncia primria de aminocidos
da protena. No final da sntese, a seqncia sinal cortada por uma enzima especfica. Concluindo,
o que define se um ribossomo ficar livre ou aderido ao retculo o tipo de protena (com ou sem
seqncia de sinal) que ele estiver sintetizando naquele momento.
CEDERJ 47
Biologia Celular I | Retculo endoplasmtico
Figura 16.5: Quando uma protena endereada ao retculo comea a ser sintetizada, ela expe uma seqncia
sinal que ser reconhecida pela SRP. A SRP interrompe a sntese da protena at ligar-se a uma protena
receptora na membrana do retculo. Assim, o ribossomo pode ligar-se ao complexo de translocao, por onde
a cadeia polipeptdica penetrar. Ao fim da sntese da cadeia protica, as duas subunidades do ribossomo se
soltam da membrana do retculo e se separam, voltando ao estoque citoplasmtico de ribossomos.
48 CEDERJ
16 MDULO 3
Que tipos de protena so sintetizadas no retculo?
AULA
na membrana plasmtica, na membrana do complexo de Golgi, de organelas como os lisossomos
ou do prprio retculo. Protenas que ficaro solveis em compartimentos, como as enzimas
lisossomais, e protenas que sero secretadas, como hormnios ou enzimas digestivas tambm
so sintetizadas em ribossomos aderidos ao retculo endoplasmtico.
Como uma protena que est sendo sintetizada chega luz do retculo?
Uma das principais caractersticas da seqncia sinal ser rica em aminocidos hidrof-
bicos, assim como a regio da SRP qual ela se liga. Uma vez que o ribossomo esteja aderido
membrana do retculo (atravs do receptor para SRP), a cadeia polipeptdica em formao se
alinha ao translocon (Figura 16.6). Assim, conforme a protena vai crescendo, vai penetrando
diretamente na luz do retculo. A seqncia sinal hidrofbica, j livre da ligao SRP, mantm
a cadeia protica ancorada parte interna do translocon. Terminada a sntese da protena, a
seqncia sinal cortada enzimaticamente e a protena fica livre no lmen do retculo, a partir
de onde ter incio um processo de acabamento e endereamento ao seu destino final.
Figura 16.6: Mecanismo de translocao de uma protena para o lmen do retculo endoplasmtico.
Para que o esquema fique mais claro, os ribossomos e o RNAm foram omitidos, mas eles esto l!
CEDERJ 49
Biologia Celular I | Retculo endoplasmtico
Problemas e solues:
Como obrigar a cadeia polipeptdica a passar pelo complexo translocador?
A ligao da SRP seqncia sinal de transferncia leva o ribossomo a se ancorar
na membrana, apontando a cadeia polipeptdica na direo do poro do complexo
translocador. Certamente, isso ajuda a direcionar a cadeia para dentro do retculo, mas
o que obriga a cadeia nascente a passar pelo translocon o seu prprio crescimento:
medida que o peptdio vai sendo sintetizado junto ao ribossomo, a outra extremidade vai
sendo translocada pelo poro.
50 CEDERJ
16 MDULO 3
E as protenas multipasso?
AULA
fcil imaginar como uma cadeia peptdica pode atravessar muitas vezes
a bicamada lipdica, como fazem as protenas multipasso (veja na Aula 8).
Essas possuem seqncias de incio e interrupo da transferncia que se
alternam ao longo da cadeia em crescimento (Figura 16.8).
Figura 16.8: As protenas multipasso alteram seqncia de incio (start) e interrupo (stop) da transferncia
que resultam em muitas passagens pela membrana.
Detalhe importante:
Os processos de sntese e insero de protenas no retculo descritos at agora
resultam em insero da protena pela extremidade NH2 (amino), ficando
a terminao COOH (carboxila) sempre voltada para o citossol. No fique
pensando que todas as protenas so assim. Muitas tm a extremidade COOH
voltada para o exterior e outras possuem as duas extremidades da cadeia
voltadas para o mesmo lado da membrana. Isso acontece quando a seqncia
de transferncia est inserida no meio da cadeia peptdica, deixando de fora
do retculo justo a extremidade NH2. A posio em que as seqncias de incio
e interrupo da transferncia ocupam na cadeia em formao far toda a
diferena (Figura16.9).
Figura 16.9: Formao de uma protena duplo passo. Repare que, neste exemplo, a seqncia de iniciao (sinal
inicial) no est na ponta da protena, fazendo com que as duas extremidades da cadeia (amino e carboxila)
fiquem voltadas para o mesmo lado da membrana, no caso, o citossol. O sinal de interromper a transferncia
a segunda seqncia de ancoragem membrana.
CEDERJ 51
Biologia Celular I | Retculo endoplasmtico
52 CEDERJ
16 MDULO 3
Todas as enzimas responsveis por catalisar a sntese de
fosfolipdeos se localizam na membrana do retculo do lado voltado
AULA
para o citossol, onde esto as molculas precursoras colina, glicerol
fosfato e cidos graxos (Figura 16.10). Com isso, todos os lipdeos
sintetizados sero inicialmente adicionados ao lado da bicamada
voltados para o citossol. Se lembrarmos que uma membrana uma
bicamada lipdica em que as quantidades de lipdeo em cada camada
equivalente, assim como as reas ocupadas por eles, no retculo liso
deveria haver um desequilbrio entre as duas camadas (Figura 16.11).
Humor e cincia
Quem acha que os cientistas so pessoas sisudas, que encaram a cincia
como coisa muito sria, com a qual no se brinca, est muito enganado. Um
exemplo de como se pode fazer cincia sria sem perder o senso de humor
a enzima scramblase. Ao ser batizada, seus descobridores compararam sua
atividade do cozinheiro que vira um ovo na chapa para que frite dos dois
lados. So o que chamamos de ovos mexidos, para os pesquisadores de lngua
inglesa: scrambled eggs.
CEDERJ 53
Biologia Celular I | Retculo endoplasmtico
Figura 16.13: Assimetria da bicamada lipdica: a fosfatidilserina (negativa) s existe no lado voltado para o
citossol, e os glicolipdeos (hexgonos), s no lado externo.
54 CEDERJ
16 MDULO 3
Essa assimetria resulta de uma outra classe de enzimas, as flipases. As flipases atuam na
membrana plasmtica e, seletivamente, viram fosfatidilserina e fosfatidiletanolamina do folheto
AULA
externo para o folheto voltado para o citossol. Enquanto as flipases gastam energia para realizar
a transferncia de fosfolipdeos entre os folhetos da bicamada, as scramblases se valem da prpria
energia da sntese.
A incorporao de colesterol membrana tambm ocorre no retculo liso. A maioria do
colesterol vem pronto na dieta e s precisa ser disponibilizado (aguarde a Aula 20). Ele sintetizado
em apenas algumas clulas animais, principalmente hepatcitos. Apenas uma pequena parte
inserida na membrana do retculo liso. A maior parte secretada em associao com molculas
hidroflicas, servindo de precursor para vrios outros esteris. Nessas clulas, o domnio liso do
retculo muito mais abundante.
O retculo tambm responsvel pela sntese de outros lipdeos. Entre os mais importantes
temos as ceramidas, que so depois enviadas para o complexo de Golgi (prxima aula), onde
servem de precursoras de glicoesfingolipdeos e a esfingomielina.
A membrana plasmtica, a dos lisossomos, do complexo de Golgi, dos endossomas e a
prpria membrana do retculo so todas sintetizadas por ele. Alm disso, mitocndrias
e peroxissomos tambm dependem de lipdeos que so inicialmente sintetizados no retculo e
transferidos por protenas transportadoras especficas para as membranas dessas organelas (Figura
16.14). A partir dessa incorporao essas organelas crescem, podendo depois se dividir.
CEDERJ 55
Biologia Celular I | Retculo endoplasmtico
RESUMO
56 CEDERJ
16 MDULO 3
EXERCCIOS
AULA
2. Por que dizemos que o retculo no rugoso e, sim, que est rugoso?
CEDERJ 57
17
AULA
Complexo de Golgi
objetivos
Um pouco de Histria
O complexo de Golgi foi descrito pela primeira vez por Camillo Golgi em 1898, graas
a um novo tipo de colorao histolgica para neurnios usando metais pesados que ele
havia criado. No trabalho original, o complexo de Golgi est esquematizado como uma
rede dentro de um terminal nervoso. Camillo Golgi e Ramn-Cajal, dois neuroanatomistas,
ganharam o prmio Nobel em 1906 pela criao desse mtodo de colorao, conhecido como
mtodo de Cajal, que permitiu mostrar que o sistema nervoso central formado por clulas
individualizadas e no por uma rede contnua. A prpria existncia do complexo de Golgi
foi considerada duvidosa at 1954, quando sua organizao foi descrita por microscopia
eletrnica. Alguns detalhes desta organizao so desconhecidos at hoje.
Camillo Golgi, ( esquerda), Ramn-Cajal (no centro) e um dos esquemas originais do aparato reticolare
observado por Golgi ( direita).
60 CEDERJ
17 MDULO 3
Organizao morfolgica
AULA
por clula. Diferente do retculo endoplasmtico, com sua rede contnua de tbulos, o complexo
de Golgi formado por lamelas (ou cisternas) que no so contnuas (Figura 17.1). No conjunto,
elas se arranjam como uma pilha de pratos ou, comparao ainda melhor, como vrios pes rabes
empilhados. Olhando mais atentamente, h perfuraes nas lamelas, como se os pes tivessem
buracos no alinhados. De cada lado da pilha h uma rede de tbulos. Todas essas informaes
decorrem da observao em microscopia eletrnica de transmisso de muitos cortes da organela
e reconstruo tridimensional a partir desses cortes (relembre a Figura 3.2).
CEDERJ 61
Biologia Celular I | Complexo de Golgi
(B)
(A)
Figura 17.2: Micrografias de complexo de Golgi em uma clula animal (A) e na Euglena
(B). As lamelas esto empilhadas e podemos ver a rede de tbulos cis e trans.
Fotos: Mrcia Attias
Funes
62 CEDERJ
17 MDULO 3
b) adicionar grupamentos sulfato a protenas, participando da
sntese de proteoglicanas;
AULA
c) distribuir as macromolculas provenientes do retculo endo-
plasmtico e que percorreram o complexo de Golgi entre trs possveis
destinos:
1. a membrana plasmtica, onde tais molculas se
incorporaro ou sero secretadas;
2. vesculas de secreo que se acumulam no citoplasma
esperando um sinal para exocitarem seu contedo;
3. lisossomos, onde formaro a prpria membrana da
organela ou tero papel na digesto intracelular.
Voc vai saber mais sobre a funo de distribuio de macro-
molculas nas Aulas 20 e 21, ainda neste mdulo. Nesta aula vamos
nos deter mais na funo de adio de acares.
Glicosilao
CEDERJ 63
Biologia Celular I | Complexo de Golgi
Tipo de glicosilao N O
* Os acares so adicionados enquanto a cadeia de aminocidos que forma a protena ainda est
sendo montada.
** Os acares so adicionados cadeia de aminocidos j completamente montada.
64 CEDERJ
17 MDULO 3
AULA
Figura 17.4: O DNA serve de molde para sua prpria duplicao, assim como para a sntese do RNA.
Este RNA, por sua vez, servir de molde para a adio ordenada de aminocidos numa cadeia protica.
Voc j viu esse esquema na Aula 16.
Como voc notou, ento, os processos de sntese das macromolculas mais importantes seguem
um molde, com o objetivo de conservar a informao, diminuindo ao mximo a ocorrncia de erros.
J na glicosilao, em que uma cadeia ramificada de pelo menos 14 acares (que costumamos chamar
de rvore de acar, por causa das ramificaes) montada, no existem moldes a seguir! Ser que no
to importante evitar a ocorrncia de erros? Se considerarmos que a poro glicdica de glicoprotenas
e glicolipdeos serve de receptor especfico a muitos ligantes importantes, atua na adeso das clulas e
no reconhecimento celular, certamente temos de admitir que importante que essas rvores de acar
estejam montadas sem erros.
Glicosilao do tipo N
Qual ser o mecanismo que garante que a rvore glicdica seja corretamente montada? Para
comear, se a cada vez que uma asparagina aparecer na cadeia protica nascente no lmen do
retculo endoplasmtico, os 14 acares fossem acrescentados um de cada vez, seria uma correria
de enzimas! Da para a ocorrncia de erro um pulo! O que ocorre que a rvore pr-montada
e fica pendurada, como em um cabide, num fosfolipdeo da membrana do retculo, esperando
a asparagina aparecer (Figura 17.5). A pr-montagem da rvore no retculo endoplasmtico
funciona como uma linha de montagem de fbrica: a enzima que acrescenta o primeiro acar
reconhece o fosfolipdeo, a que coloca o segundo acar reconhece o fosfolipdeo mais o primeiro
acar, a enzima que coloca o terceiro s reconhece como substrato o conjunto fosfolipdeo mais
o primeiro e o segundo acares e assim por diante. Dizendo de uma maneira mais elegante, o
mecanismo de copiar um molde usado na replicao, na transcrio e na traduo, nesse caso,
substitudo pelo mecanismo da glicosilao, em que cada enzima s reconhece como substrato
o produto da enzima anterior.
CEDERJ 65
Biologia Celular I | Complexo de Golgi
66 CEDERJ
17 MDULO 3
O processamento da glicoprotena continua no Golgi
AULA
deu tanto trabalho para fazer, vai ser podada! Para que a protena saia do
complexo de Golgi, as trs glicoses terminais sero sucessivamente cortadas
por enzimas, e alm delas uma das manoses tambm ser retirada. Veja na
Figura 17.7 o que acontece com a rvore glicdica. Parece um absurdo?
Durante anos muitos pesquisadores acharam que isso era mesmo um passo
bioqumico intil, mas outros pesquisadores (movidos pela idia de que se a
seleo natural manteve esse mecanismo por milhes de anos, em todos os
eucariotos, desde fungos at mamferos, porque deve haver uma vantagem
importante) resolveram procurar essa razo. E no que acharam h pouco
tempo? Tem a ver com o controle de qualidade da sntese da protena e da
prpria montagem da rvore de acares.
CEDERJ 67
Biologia Celular I | Complexo de Golgi
68 CEDERJ
17 MDULO 3
Na lamela trans, mais acares sero acrescentados, e a a rvore glicdica vai finalmente
crescer de novo. Alm de outra N-acetilglucosamina, sero adicionadas galactoses. A glicoprotena
AULA
continuar percorrendo a lamela trans e atingir a rede trans, onde o ltimo acar da rvore
ser adicionado: o cido silico (ou cido N-acetil-neuramnico, conhecido pela sigla do ingls
NANA). O cido silico tem enorme importncia porque, alm de ser um monmero polar, como
os outros acares, ele tem carga negativa. Assim, ao terminar em cido silico, uma glicoprote-
na passa a ser uma molcula negativa em pH fisiolgico, independente da sua poro protica.
Na Figura 17.10, temos um panorama passo a passo da glicosilao do tipo N.
Figura 17.10: Funcionamento geral da glicosilao do tipo de N. Depois de a rvore pr-montada ser transferida
para o aminocido asparagina, ainda no retculo, trs acares so cortados (passo 1). J no complexo de
Golgi, na rede cis e lamela cis, mais acares so retirados (passo 2). Na lamela medial, mais cortes e o primeiro
acrscimo (passos 3 e 4). Pouco antes de sair do Golgi, so adicionados o penltimo (lamela trans) e depois o
ltimo (na rede trans) acares (passo 5).
CEDERJ 69
Biologia Celular I | Complexo de Golgi
As proteoglicanas
Alm de sintetizar glicoprotenas, o complexo de Golgi tambm o local de formao das proteoglicanas.
Essas molculas tambm tm uma poro protica e uma poro glicdica, mas a proporo entre as duas
diferente: elas tm muito mais acar do que protena (veja Aula 7). Uma de suas caractersticas marcantes
que, diferente das glicoprotenas, a poro glicdica das proteoglicanas no lembra uma rvore
ramificada. Dmeros de acar se repetem, formando molculas muito longas. Muitas proteoglicanas
so sulfatadas, e a adio dos grupamentos sulfato tambm feita por enzimas do complexo de Golgi.
As proteoglicanas so encontradas na superfcie das clulas, onde protegem bastante a membrana
plasmtica e a matriz extracelular, onde formam grandes polmeros que sustentam e conectam as clulas,
como voc vai ver em Biologia Celular II.
Figura 17.11:
Conformao bsica de
uma proteoglicana.
70 CEDERJ
17 MDULO 3
Como se descobriu que a glicosilao funciona assim?
No foi nada fcil! Depois de saber quais enzimas eram responsveis por cada etapa
AULA
em experimentos de Bioqumica, experimentos de fracionamento celular mostraram que tais
enzimas no eram citosslicas, estando confinadas em algum compartimento. O refinamento
desses experimentos mostrou que as primeiras enzimas estavam no retculo e as ltimas no
complexo de Golgi, porque iam parar nas mesmas fraes que enzimas marcadoras dessas
organelas j conhecidas. Depois, adaptando os ensaios bioqumicos de cada uma destas enzimas
para microscopia eletrnica (formando um produto eletrodenso e no colorido, como no
espectrofotmetro usado em Bioqumica), foi possvel demonstrar que as enzimas estavam dentro
de diferentes lamelas do complexo de Golgi (Figura 17.12).
Figura 17.12: Na micrografia A, o complexo de Golgi no est submetido a nenhum tratamento especial.
Na micrografia B, foi feita impregnao com metal pesado (a colorao de Golgi e Cajal), no caso, o smio, que
se acumula preferencialmente na rede e lamela cis. Nas micrografias C e D, ensaios de citoqumica mostraram o
produto final de enzimas de glicosilao na lamela trans (C) e na rede trans (D). Fotos de Daniel Friend.
CEDERJ 71
Biologia Celular I | Complexo de Golgi
CONCLUSO
72 CEDERJ
Figura 17.13: Esquema geral do funcionamento do complexo de Golgi.
17 MDULO 3
AULA
CEDERJ 73
Biologia Celular I | Complexo de Golgi
RESUMO
74 CEDERJ
17 MDULO 3
EXERCCIOS
1. Como o complexo de Golgi pode ser localizado em microscopia ptica? E em
AULA
microscopia eletrnica?
CEDERJ 75
18
AULA
Controle de qualidade da
sntese protica
78 CEDERJ
18 MDULO 3
Auto-radiografia uma tcnica em que se separam protenas por eletroforese e depois, para distinguir
quais das protenas esto marcadas radioativamente, coloca-se o gel em contato com um filme de raios X. S as
AULA
protenas marcadas impressionam o filme. O caso citado no texto chamado incorporao metablica:
fornecemos para a clula um precursor radioativo da molcula que queremos detectar. Se queremos
detectar protenas sintetizadas num dado perodo, fornecemos um aminocido marcado, como a
metionina, que tem o tomo de enxofre radioativo (35S).
Figura 18.1: O modo de ao da chaperona hsp70: ela impede que a cadeia protica
enovele erradamente.
CEDERJ 79
Biologia Celular I | Controle de qualidade da sntese protica
80 CEDERJ
18 MDULO 3
AULA
Figura 18.3: Modo de ao das chaperonas do grupo das hsp60.
Para voc ter uma idia do tamanho, um proteassoma pouco menor que um ribossomo; seu tamanho
tambm medido em s (svedbergs, unidade de sedimentao: expressa a velocidade com que uma
macromolcula vai para o pellet em uma ultracentrifugao em condies padronizadas). As subunidades
do ribossomo tm 40s a menor e 60s a maior, enquanto a poro mediana do proteassoma, que contm as
enzimas, mede 26s, e as pores de reconhecimento, 19s cada uma.
CEDERJ 81
Biologia Celular I | Controle de qualidade da sntese protica
Figura 18.4: Proteassomas vistos por contrastao negativa no microscpio eletrnico (A). Em B, a imagem de um proteassoma
trabalhada em computador, mostrando que cada proteassoma possui uma regio mediana, que o stio de degradao
onde esto as proteases com o stio ativo voltado para dentro e, em cada extremidade, um stio de reconhecimento. Em C,
um desenho esquemtico de um proteassoma onde se v o seu interior.
Fonte: Molecular Biology of the Cell, 3- ed.
82 CEDERJ
18 MDULO 3
Controle de qualidade no retculo endoplasmtico
AULA
podemos responder a uma pergunta que ficou em suspenso na Aula 17:
por que as glicoprotenas do tipo N tm as glicoses da ponta da rvore
de acares cortadas antes de sair do retculo endoplasmtico? Como
j adiantamos na aula passada, esse corte funciona como um sinal de
que a glicoprotena est corretamente sintetizada e enovelada, podendo
prosseguir para o complexo de Golgi. Mas e se ela no estiver perfeita?
As glicoses no so cortadas e ela no sai. O que acontece com ela? Essa
glicoprotena vai ser reconhecida por chaperonas do retculo que vo
hidrolisar ATP para conseguir energia e tentar consert-la. As chaperonas
mais conhecidas que fazem esse trabalho so a calnexina e a calreticulina.
Essas chaperonas so tambm lectinas, j que reconhecem um acar
especfico: uma glicose na ponta de uma rvore N-ligada (Figura 18.5).
CEDERJ 83
Biologia Celular I | Controle de qualidade da sntese protica
84 CEDERJ
18 MDULO 3
Proteassomas e chaperonas mantm a clula com todas
as protenas em ordem
AULA
Alm da vantagem bvia de evitar o acmulo de protenas malfor-
madas e, portanto, inteis, a importncia do trabalho das chaperonas e dos
proteassomas fica mais evidente quando examinamos as conseqncias
do acmulo de protenas malformadas.
comum que protenas malformadas tenham seqncias hidrof-
bicas indevidamente expostas. Esta exposio leva a uma tendncia de
agregao. Os agregados proticos s se formam se o sistema de degra-
dao no funcionar, mas, uma vez iniciada a agregao, a atividade das
proteases fica difcil porque as proteases no tm acesso s protenas e
eles (os agregados) tambm no entram nos proteassomas. Um agregado
protico que cresa muito pode levar a clula morte, ou, se a clula
conseguir expeli-lo, causar enorme prejuzo ao tecido, acumulando-se no
meio extracelular. Um tipo particular de agregado protico formado
quando regies -pregueadas anormalmente expostas em vrias protenas
provocam o empilhamento dessas protenas, formando o que se chama
placa amilide (Figura 18.7). As placas -amilides so marcantes
em algumas doenas neurodegenerativas, como o mal de Alzheimer e a
doena de Huntington, embora no se possa atribuir a essas placas a causa
das doenas.
Figura 18.7: Uma protena globular (A), quando mal enovelada, pode assumir uma
conformao planar (B) que expe folhas -pregueadas. Muitas protenas com essa
configurao formam um agregado conhecido como -amilide (C), altamente
resistente a proteases e muito prejudicial aos tecidos.
CEDERJ 85
Biologia Celular I | Controle de qualidade da sntese protica
Agregados de protenas mal enoveladas tambm esto presentes na doena humana de Creutzfeld-Jacob
e na encefalopatia espongiforme bovina, conhecidas como mal da vaca louca. Nesse caso, a presena da
protena mal enovelada pode induzir a modificao da protena correta, que est presente na superfcie
de clulas nervosas de indivduos normais, e cuja funo ainda no conhecida (Figura 18.8). A protena
defeituosa resistente degradao por proteases e pode ser adquirida quando um indvduo ingere o
tecido que contm a protena defeituosa de outro indivduo, mesmo de outra espcie. Assim, a protena
defeituosa foi considerada infecciosa, j que sozinha era capaz de transmitir uma doena, e ficou
conhecida como prion (encurtamento de protein only).
Figura 18.8: Se uma protena normal (A) se associar a uma protena igual a ela, mas mal enovelada (B), ser
formado um heterodmero (C). A protena defeituosa vai induzir a modificao da protena normal, formando
um homodmero (D). Quando novas protenas normais forem produzidas (E) elas se associaro s defeituosas,
formando um agregado (F), que crescer medida que novas protenas se associarem.
RESUMO
Ubiquitinas
Proteassomas
86 CEDERJ
18 MDULO 3
2) Glicoprotena em processo de sntese no retculo endoplasmtico
AULA
Protena correta Protena defeituosa
Chaperonas (tipo hsp 70) + ATP
+1 glicose
Chaperona (tipo calnexina)
Citoplasma
Glicosidase
Ubiquitinas
Proteassomas
EXERCCIOS
4. O que so proteassomas?
CEDERJ 87
19
AULA
Endocitose
objetivos
90 CEDERJ
19 MDULO 3
E se o nutriente for uma partcula ou molcula grande, como uma prote-
na, por exemplo? As molculas grandes no conseguem atravessar a bicamada
AULA
lipdica da membrana plasmtica (Figura 19.1.c). Tambm no existem transpor-
tadores para molculas muito grandes ou bactrias. Para conseguir capt-las, a
clula faz uma invaginao, ou fossa, na sua membrana, e termina por englobar
a partcula numa vescula (Figura 19.2).
CEDERJ 91
Biologia Celular I | Endocitose
92 CEDERJ
19 MDULO 3
Por que endocitar?
AULA
que no podem ser internalizadas por protenas transportadoras. Algumas
clulas so capazes de endocitar partculas bastante grandes, inclusive
outras clulas, como uma bactria, por exemplo (Figura 19.4).
CEDERJ 93
Biologia Celular I | Endocitose
94 CEDERJ
19 MDULO 3
Tamanho no tudo: endocitose especfica e no especfica
AULA
muito pequenas, a clula pode lidar com ela de duas formas:
a) endocitar junto com o lquido, de maneira no especfica, de modo
que as quantidades captadas sero muito pequenas, quase desprezveis;
b) endocitar de modo especfico, isto , antes de endocitar,
concentrar e separar das demais as molculas de interesse. As clulas
fazem isso expondo para o meio extracelular receptores que reconhecem
e ligam as molculas que a clula precisa endocitar.
a) o mesmo princpio de reconhecimento entre receptor e ligante
que estudamos na Aula 13.
Temos assim dois tipos de endocitose: do tipo (a), chamada
endocitose de fase fluida que inespecfica; e a do tipo (b), que especfica
e foi denominada endocitose mediada por receptor.
CEDERJ 95
Biologia Celular I | Endocitose
96 CEDERJ
19 MDULO 3
AULA
Figura 19.6: Um fagcito profissional pode reconhecer e fagocitar uma bactria tanto
ligando-se a acares especficos da parece celular (a) quanto ligando-se a anticorpos
secretados que se ligaram superfcie bacteriana (b).
Fagocitose especfica
Macropinocitose
Bactria
Pseudpodo
Figura 19.7: Micrografia
eletrnica mostrando uma
bactria sendo fagoci-
tada por um neutrfilo. Membrana
A membrana do fagcito plasmtica
se ajusta em torno da bac-
tria medida que ela
internalizada, lembrando
o fechamento de um zper.
Foto: Dorothy Bainton.
Clula fagoctica
1m
CEDERJ 97
Biologia Celular I | Endocitose
98 CEDERJ
19 MDULO 3
Existe um outro tipo de fagocitose, de descoberta mais recente,
que bastante caracterstico dos fagcitos profissionais. Essas clulas se
AULA
deslocam sempre aderidas ao substrato (a matriz extracelular, in vivo, e
vidro ou plstico, in vitro). Para fazer isso, emitem grandes projees de
membrana plasmtica, que vo estabelecendo conexes com o substrato
(esse assunto ser tratado tambm na aula de Junes, em Biologia
Celular II) e depois puxam o resto da clula, como faz um alpinista.
Quando a clula, por alguma razo (o ambiente no est favorvel, ou
h alguma atrao em outro lugar), decide no seguir naquela direo,
as projees j emitidas so lanadas para o dorso da clula, dando um
aspecto ondulado (ruffles). Eventualmente, as pontas dessas projees
podem se fundir com a membrana dorsal da clula, formando assim
um vacolo de dimenses e caractersticas semelhantes a um vacolo
fagoctico (Figura 19.9).
CEDERJ 99
Biologia Celular I | Endocitose
RESUMO
No-especfica (macropinocitose)
100 CEDERJ
19 MDULO 3
EXERCCIOS
AULA
1. Que tipos de partcula:
5. Na endocitose mediada por receptor, que tipos de molcula atuam como ligante
na clula-alvo?
CEDERJ 101
20
AULA
Compartimentos endocticos
INTRODUO Na ltima aula voc aprendeu que a clula usa a endocitose para captar do meio
extracelular molculas que no atravessam a membrana. A atividade endoctica
sempre envolve a formao de uma vescula que contm o fluido extracelular
e as molculas nele dispersas. Se a endocitose for especfica, isto , mediada
por um receptor, o ligante ser endocitado com muito mais eficincia. bom
relembrar que aqui os termos ligante e receptor tm o mesmo significado que
na Aula 13, com a diferena de que a associao dos dois provoca a endocitose
de ambos e no uma cascata de sinalizao.
104 CEDERJ
20 MDULO 3
Figura 20.1: A formao
AULA
dos complexos receptor-
ligante atrai protenas do
citoplasma, que, em con-
seqncia, polimerizam.
CEDERJ 105
Biologia Celular I | Compartimentos endocticos
Figura 20.3
106 CEDERJ
20 MDULO 3
A vescula endoctica se solta da membrana
AULA
membrana que ele contm j formou uma invaginao profunda, o
estrangulamento da invaginao formar uma vescula revestida por
clatrina. J se conhece o mecanismo molecular responsvel por esse
estrangulamento: uma protena chamada dinamina, que um tipo de
protena G porque liga GTP, forma um colarinho ao redor do pescoo
da invaginao. Quando o revestimento de clatrina est completo,
a dinamina hidrolisa o GTP, o que diminui o tamanho do filamento e
provoca o estrangulamento (Figura 20.4).
A maior importncia do revestimento de clatrina a formao da
vescula com altas concentraes de complexos receptor-ligante. Assim
que a vescula revestida se destaca, por ao da dinamina, o revestimento
de clatrina se desfaz. O resultado uma vescula no revestida, cheia
de complexos receptor-ligante. A nica diferena entre essa vescula e
uma outra resultante de endocitose de fase fluida a concentrao do
contedo, que na vescula formada por fase fluida igual quela em que
as molculas se encontram no meio extracelular.
Figura 20.4: Depois que a invaginao revestida por clatrina se aprofunda, a dinamina
estrangula o seu pescoo, destacando-a da membrana. Por ao de enzimas, assim que
a vescula se destaca o revestimento desmanchado, e seus componentes ficam dispersos
no citossol.
CEDERJ 107
Biologia Celular I | Compartimentos endocticos
Um pouco de histria
108 CEDERJ
20 MDULO 3
Os pacientes menos graves possuam um receptor defeituoso, que ligava LDL em
sua poro extracelular, mas no conseguia interagir com o revestimento de cla-
AULA
trina porque no tinha a poro citoplasmtica (Figura 20.6). Assim, a eficincia
da endocitose era muito menor do que com receptores normais (Figura 20.7).
CEDERJ 109
Biologia Celular I | Compartimentos endocticos
Figura 20.8: Desenho esquemtico da via endoctica mediada por receptor. Os complexos receptor-ligante se
agrupam e, com auxlio do revestimento de clatrina, so endocitados com grande eficincia, passando aos com-
partimentos que formam a via endoctica. O ncleo (N), o retculo endoplasmtico (RE) e o complexo de Golgi
tambm esto representados, apesar de no fazerem parte da via. (Desenho original de Isabel Porto Carreiro.)
110 CEDERJ
20 MDULO 3
Ligantes e receptores nem sempre se separam!
AULA
Alm do colesterol associado a seu transportador, o LDL, outras molculas essenciais para as
clulas tambm so captadas por endocitose mediada por receptor. Uma das mais estudadas
a endocitose da molcula que transporta ferro na corrente sangunea, a transferrina.
A transferrina ligada a ferro chamada holotransferrina e reconhecida por um receptor
presente na maioria das clulas eucariticas. A endocitose se d pelo mecanismo, que voc j
conhece, de formao de vesculas revestidas por clatrina. Depois do revestimento desfeito,
as vesculas se fundem com o endossoma inicial e, no pH 6,5 desse compartimento, a holo-
transferrina libera os tomos de ferro, que so ativamente bombeados para o citoplasma,
tornando-se apotransferrina (transferrina sem ferro). Diferentemente do que ocorre com o
LDL, o receptor tem afinidade por apotransferrina (no por holotransferrina!) em pH cido.
Ainda acoplados, receptor e apotransferrina seguem de volta para a membrana plasmtica.
Ao atingirem a superfcie celular, reencontram o pH do meio extracelular, de 7,2-7,4. Nesse
pH, o receptor no tem afinidade por apotransferrina e o complexo se desfaz. A apotransfer-
rina vai ligar outros tomos de ferro e o receptor livre vai poder ligar holotransferrina, com
quem tem grande afinidade no pH do meio extracelular. Sem dvida nenhuma, bastante
econmico devolver a transferrina ao meio extracelular para que a mesma molcula possa
transportar muitos tomos de ferro, entrando e saindo da clula vrias vezes. Por causa
desse trnsito intracelular peculiar, o complexo receptor-transferrina tem sido considerado
marcador de endossoma inicial em clulas de mamfero (Figura 20.9).
Figura 20.9: Os receptores ligam holotransferrina na superfcie da clula (1) e so agrupados (2)
em vesculas revestidas por clatrina (2-4). Depois que a vescula se destaca (5), o revestimento
despolimeriza (6) e a vescula se funde com o endossoma inicial (Ei). Por causa do pH 6,5 desse
compartimento, o ferro se solta da transferrina (7) e bombeado para o citoplasma. A apotrans-
ferrina e o receptor voltam para a superfcie (8-9), onde se soltam. Note que, nesse mecanismo de
captao de ferro em clulas de mamfero, nem a transferrina, nem o ferro atingem o endossoma
tardio (Et) e muito menos o lisossoma (L). (Desenho original de Flavia Moreira Leite.)
CEDERJ 111
Biologia Celular I | Compartimentos endocticos
O endossoma tardio
112 CEDERJ
20 MDULO 3
AULA
Figura 20.10: As enzimas lisossomais marcadas por manose-6P so reconhecidas
por receptores de manose-6P e levadas ao endossoma tardio acopladas a eles. L
chegando, encontram o pH cido, o que provoca o desacoplamento. O receptor
desocupado retorna ao Golgi, enquanto a enzima tem o fosfato retirado.
CEDERJ 113
Biologia Celular I | Compartimentos endocticos
O lisossoma
114 CEDERJ
20 MDULO 3
Nesse caso, a bomba de prtons vai ser inserida na membrana do
vacolo fagoctico e logo comear a acidificar o lmen do fagossoma. Em
AULA
poucos minutos, lisossomas j formados, ou vesculas transportadoras
de enzimas lisossomais provenientes do Golgi, se fundiro ao vacolo,
descarregando seu contedo. A partir da, o vacolo fagoctico passa
a ser denominado fagolisossoma e ter condies de digerir todos os
componentes da clula que tenha sido fagocitada.
CEDERJ 115
Biologia Celular I | Compartimentos endocticos
Doenas lisossomais
Quando alguma enzima lisossomal no funciona, seu substrato no digerido se acu-
mula. Isso acontece em muitas doenas. Entre as mais conhecidas esto a doena de
Hurler, cujos portadores no digerem glicosaminoglicanas. Os portadores da doena
de Tay-Sachs acumulam um tipo de glicolipdio, os gangliosdeos, enquanto os porta-
dores da doena de Gaucher acumulam outro tipo, os cerebrosdeos. A Sndrome de
Niemann-Pick engloba vrias lipidoses e seus portadores no digerem colesterol ou
esfingomielina. A forma mais grave de doena lisossomal a doena da clula I (o I
se deve ao acmulo de corpos de incluso). Os portadores dessa doena tm apenas
um gene defeituoso (felizmente recessivo!), acarretando a ausncia da enzima que
fosforila a manose no carbono 6. Assim, as enzimas lisossomais no so reconheci-
das pelo receptor de manose-6P no Golgi e no so dirigidas via endoctica, e sim
secretadas. Por isso, os portadores da doena da clula I so diagnosticados pela
presena de vrias enzimas lisossomais na corrente sangunea.
116 CEDERJ
20 MDULO 3
Por que os lisossomos no se autodigerem?
AULA
por que no digerem sua prpria membrana? A resposta est nas
glicoprotenas dessa membrana. As protenas da membrana lisossomal
voltadas para o lmen so fortemente glicosiladas e suas rvores glicdicas
terminam em cido silico. A enzima capaz de retirar o cido silico, a
sialidase (ou neuraminidase) a nica glicosidase que no est presente
no lisossoma. Assim, as outras enzimas, capazes de danificar a membrana
lisossomal, simplesmente no tm acesso a ela (Figura 20.12).
Protena
Enzimas
Glicdio
Membrana
CEDERJ 117
Biologia Celular I | Compartimentos endocticos
118 CEDERJ
20 MDULO 3
RESUMO
AULA
A endocitose mediada por receptor mais eficiente porque os complexos
receptor-ligante ficam concentrados em pequenas vesculas.
Alm dos ligantes, o endossoma tardio recebe as enzimas lisossomais que vieram
do Golgi acopladas ao receptor de manose-6P.
O pH do endossoma tardio mais baixo ainda (6,0), fazendo com que as enzimas
lisossomais e os receptores de manose-6P se soltem. Os receptores voltam para
o Golgi.
CEDERJ 119
Biologia Celular I | Compartimentos endocticos
EXERCCIOS
120 CEDERJ
Biologia Celular I
Gabarito
Aula 13
1.
5. Deve ser uma molcula pequena e hidrofbica para que possa atravessar a
bicamada lipdica.
7.
122 CEDERJ
9. So protenas que ligam GTP, hidrolisando-o a GDP e Pi. Esta alternncia
entre ligao a GTP e GDP funciona como um sinal liga/desliga para a protena,
disparando vrios eventos.
10. GIs atuam inibindo a atividade de outras protenas. GEs atuam estimulando a
atividade de outras protenas.
Aula 14
6. A adenilciclase hidrolisa ATP a AMPc, que por sua vez ativa uma enzima como
a PKA, uma quinase que fosforila outras protenas.
Ao ser ativada pela protena G, a fosfolipase C cliva o PIP2 em IP3 e DAG. O IP3
libera clcio armazenado no retculo endoplasmtico. J o DAG recruta o PKC no
citossol. O PKC se tornar ativo ao combinar-se com o clcio liberado pela IP3.
CEDERJ 123
A grande vantagem a amplificao do sinal inicial, isto , uma molcula ativa
duas, que ativaro quatro, e assim por diante, resultando na ativao final de
muitas molculas a partir de umas poucas inicialmente utilizadas.
Aula 15
3.
2 m
1,5m
1m
Volume: 1,5 x 2 x 1 = 3 m3
Volume: 15 x 20 x 10 = 3000 m3
124 CEDERJ
9. No, de acordo com a protena que est sendo sintetizada eles permanecem
livres ou se aderem ao retculo.
10. uma seqncia de aminocidos que informa o destino de uma protena que
comea a ser sintetizada.
Aula 16
7. enzimaticamente cortada.
CEDERJ 125
Aula 17
Aula 18
126 CEDERJ
3. As hsp60 tm uma forma de barril na qual aprisionam a protena defeituosa
e tentam consert-la. As hsp70 atuam desenovelando e enovelando a protena,
tanto para que ela assuma a conformao certa como para que ela possa passar
pelos complexos translocadores de organelas como a mitocndria.
Aula 19
1.
CEDERJ 127
Aula 20
11. Quando uma mutao faz com que enzimas lisossomais sejam defeituosas
(podem no funcionar, podem no ter seqncia de endereamento correta), os
substratos que elas deveriam digerir acabam se acumulando no citoplasma ou no
meio extracelular.
128 CEDERJ
12. quando a clula digere alguns de seus prprias componentes, como
mitocndrias, que estejam sobrando. O vacolo autofgico se forma a partir de
membranas do retculo, que envolvem a organela que vai ser degradada, criando
um ambiente apropriado ao das enzimas lisossomais.
CEDERJ 129
I SBN 85 - 89200 - 63 - 9
9 788589 200639