Se establece el papel de la leptina en el pathomechanism de ateroesclerosis,

a travs de su capacidad de generacin de radicales libres. Su efecto sin

embargo, en la regulacin de la sntesis del colesterol intracelular no ha sido
estudiado. El objetivo del presente estudio fue dilucidar si la leptina influye en
la sntesis de colesterol endgeno en monocitos. Adems, se compararon
leptina sealizacin de HMG CoA reductasa en el control y monocitos
hipercolesterolmicos. Se estudi el efecto in vitro de la leptina en monocitos
humanos recin aislados obtenidos de pacientes con hipercolesterolemia y
voluntarios sanos del control. Nuestros resultados se pueden resumir como
sigue: (1) leptina es capaz de aumentar la sntesis de colesterol endgeno en
monocitos humanos in vitro. (2) la sntesis de colesterol incrementando el
efecto de la hormona es ms pronunciada en monocitos
hipercolesterolmicos con la biosntesis de colesterol basal. (3) la leptina
inducida por Ca2 seal estuvo implicada en la mejora de la activacin de
HMG CoA reductasa en monocitos de controles y de pacientes
hipercolesterolmicos. (4) en monocitos de control la seal de Ca2 se origin
de piscinas intracelulares, mientras que en los pacientes, Ca2 -activacin de
afluencia y de la protena quinasa C fueron encontrados para ser
responsable del efecto de la leptina. Ciclo de mevalonato inhibe fluvastatina y
25-hidroxicolesterol redujo la produccin de colesterol en monocitos
estimulados por la leptina. Nuestro actual estudio proporciona la primera
prueba de la sntesis de colesterol, mejora el efecto de la leptina a travs de
una va de sensible a la estatina en monocitos circulantes. Adems, nuestros
resultados sugieren que la leptina puede estar implicada en el
pathomechanism de formacin de placa aterosclertica tambin a travs de
su efecto sobre la biosntesis del colesterol en monocitos.

Recientemente, se ha demostrado que la leptina est implicada en el

pathomechanism de formacin de la placa de ateroma a travs de sus radicales
libres generando capacidad (Dong, Zhang y Ren, 2006; Konukoglu, Serin y Turhan,
2006; Luo, Zhang y Chen, 2005). Receptores de leptina de tipo largo (LpRL) estn
implicados en la va de activacin de la NADPH oxidasa. Estos receptores de leptina
se llaman despus de su regin intracelular largo, que como en otros receptores
del cytokine-est acoplado al transductor de janus cinasa de seal y activador de la
transcripcin (JAK/STAT), fosfatidil inositol-3-quinasa (PI3) y mitgeno-activada
protena quinasa/extracelulares quinasa regulada por seal (mapa quinasa/ERK).
Adems, diferentes isoformas de la protena quinasa C (PKC) y sealizacin de Ca2
estn tambin implicados en la transduccin de la seal inducida por la leptina
(Fruhbeck, 2006; Sweeney, 2002). A travs de estas seales caminos leptina ejerce
muchos efectos fisiolgicos y patolgicos en sus clulas diana, en su citoplasma y a
travs de la regulacin de la expresin gnica en el ncleo (Greenberg y Obin,
2006; Materese, Moschos y Mantzoros, 2005; Meier & Gressner, 2004; Ronti,
Lupatelli y Mannarino, 2006).

El conjunto de regulacin ofNADPHoxidase en monocitos depende del tipo de

estmulo; sin embargo, la seal de Ca2 y de la PKC son los reguladores ms
pronunciados de la generacin de anin superxido (Quinn, Ammons y
DeLeo, 2006). Isoprenilacin va el ciclo de mevalonato activa pequea
GTPasa Rac1 en monocitos, que permite la translocacin de la citoslica
p47PHOX, la subunidad reguladora de NADPH, en la membrana y por lo
tanto lleva a la activacin de la NADPH (Bokoch y Diebold, 2000; Diebold,
Bhagavan y Guillory, 1994; Kim, Diebold, Kim, Kim y Lee, 2004). En nuestros
estudios anteriores se encontr que la induccin de la generacin de anin
superxido por angiotensina II y la leptina en neutrfilos humanos y
monocitos de pacientes con hipercolesterolemia (HC) fue ms intensa que la
de voluntarios de control. Adems, generacin de radicales libres con
estatinas-inhibitable fue mayor en HC que en leucocitos control (Kosztaczky
et al., 2006; Seres et al., 2005). Adems, la diferencia ms significativa entre
el control y leucocito HC sealizacin despus de angiotensina II y tambin
estmulos de formil-Met-Leu-Phe fue el origen de la seal de Ca2 (Paragh et
al., 1999, 2002). En las clulas el Ca2 seal origin de las piscinas
intracelulares, mientras que en HC clulas Ca2 afluencia a travs de los
canales Ca2 verapamilo-sensible dio lugar a la aparicin de la seal de Ca2 .
Adems, la basal [Ca2 ] i nivel fue elevado en reposo las clulas HC,
mientras que la seal de pico de Ca2 fue ms baja en HC de control.

La nocin de que la leptina-estimulacin conduciendo a la generacin de radicales

libres en el sistema monocito/macrfago participa en la formacin de la clula de la
espuma a travs de la oxidacin de partculas de LDL est ampliamente aceptado
(Cathcart, 2003; SWIRSKI et al., 2006). El ciclo de estatina-sensible y mevalonato
activacin dependiente de NADPH oxidasa a travs de la isoprenilacin de Rac1 es
conocida. A pesar de que puede ser presumido que la mayor intensidad del
mevalonate ciclo podra no slo ser responsable de la activacin de NAPPH, pero
tambin podra conducir a la sntesis de colesterol mayor, nunca ha estudiado la
sntesis del colesterol endgeno inducida por la leptina en monocitos.

El objetivo de nuestros estudios fue determinar la biosntesis de colesterol que

influyen en el efecto de la leptina en monocitos, que las clulas estn intensamente
involucradas en la formacin de placa aterosclertica (Swirski et al., 2006). Adems
pretende dilucidar si similar a la angiotensina II sealizacin de leptina es
tambin diferente en control y monocitos HC. Por otra parte, intentamos analizar si
la sealizacin alterada de la leptina en monocitos HC resulta en la sntesis de
colesterol endgeno modificado. Para clarificar las vas de seal de la leptina y
analizar su papel en monocitos en un sistema in vitro se estudi el efecto de
diferentes frmacos inhibidores de la biosntesis de colesterol inducida por la leptina.

2. materiales y mtodos 2.1. El estudio se llev a cabo en monocitos de

individuos sanos y recin los pacientes diagnostican de pacientes HC. Estos
pacientes no haban sido tratados con medicamentos antes de la hora de
nuestros experimentos. Terapia de fluvastatina se inici slo en pacientes
despus del final de las 3 4 semanas largos experimentos primarios.
Despus de la 4 semana largo 40 mg/da Zocor mono-terapia, se
excluyeron 4 de los 31 pacientes HC desde el experimento de debido a la
insensibilidad del statin. Los 27 pacientes del resto respondieron bien al
tratamiento de la fluvastatina. En su sera disminuir el nivel de colesterol total
disminuy en 30.65.1%, mientras que el LDL-C mostr 39.86.1%.

En este grupo de pacientes con HC, disfuncin de los receptores LDL haba sido
excluida segn el mtodo de Goldstein y Brown (1974). Otros criterios en la
seleccin de los pacientes incluyen nivel de sntesis de colesterol basal en reposo
monocitos y disminucin de LDL inducida por inhibicin de la sntesis de colesterol.
En consecuencia, adems de pacientes con resistencia de fluvastatina, tambin
pacientes con disfuncin del receptor de LDL y la biosntesis de colesterol normales
(< 13.11.8 pmol/107 clulas/60 min) en reposo monocitos fueron excluidos del
estudio. Adems de experimentos tambin se omitieron los pacientes con ms alto
que 45.27.8% de inhibicin de la sntesis de colesterol LDL de 6 mmol/l. En base a
estos criterios se excluyeron a seis pacientes adicionales. Datos demogrficos de
control voluntarios y pacientes en el grupo HC se ilustran en la tabla 1. La sangre
venosa se tomaron muestras (10-15 mL) a intervalos de 4 5 das de 6 a 8 nuevos
pacientes diagnosticados y de 3 a 4 voluntarios de control para cada conjunto de
experimexperiments. El coeficiente de inter no superar el 15%.

2.2. separacin de lipoprotenas (LDL) baja densidad la separacin de LDL y la

determinacin de su efecto inhibidor sobre la sntesis de colesterol endgeno fueron
llevadas a cabo como se describi anteriormente (Paragh et al., 2003).
2.3. monocitos monocitos de aislamiento fueron aislados de la sangre
venosa, segn los mtodos de Boyum (1968). Las suspensiones de clulas
mononucleares fueron colocadas en Nunc Petri platos (90mm de dimetro)
pretratados con suero de ternera fetal y adems separados por el mtodo de
Kumagai, Itoh, Hinuma y Tada (1979), para obtener un 93-96% monocitos
que contienen poblacin mostrando 90 95% viabilidad celular.

2.4. In vitro condiciones experimentales monocitos fueron suspendidos en

tampn HEPES Hanks equilibrada solucin de sal (HBSS). Para la estimulacin
de monocitos leptina (Sigma) fue administrada a una concentracin final de 100
ng/mL, encontraron una dosis para ser eficaces en nuestros experimentos
anteriores. Diferentes tipos de inhibidores fueron aplicados sobre la base de
estudios anteriores como sigue: para fosfolipasa neomicina de 5 M de inhibicin
C (PLC) (Sigma) de 60 minutos, para Gi protenas inhibicin 100 ng/mL toxina
del pertussis (PTX, Sigma) durante 120 min, por la inhibicin de intracelular Ca2
desplazamiento 15 M thapsigargin (Sigma) por 2 min, por inhibicin de la Ca2
-celular de afluencia fueron plateadas en medio V (verapamilo de 10 M (Sigma)
3 mmol/L EGTA en Ca2 -medio libre) durante 60 min , para la inhibicin de la
PKC 1,0 M H-7 (Sigma) de 60 minutos, por PI3 quinasa inhibicin 20nM
wortmannin (Sigma) durante 30 minutos, para la inhibicin del kinase del mapa
50 M PD98059 (Sigma) durante 30 minutos, para la inhibicin de la 3-hidroxi-3-
metilglutaril coenzima A (HMG-CoA) reductasa 5 M fluvastatina (Merck) de 60
minutos y para la inhibicin de la esterol regulador escote de protena (SREBP)
elemento (Mexico) enlace activando protenas (SCAP) el M25 25-
hidroxicolesterol (25-HC Sigma) complexed con metil - - ciclodextrina segn el
mtodo de Adams et al., 2004, 120 min. Todos los grupos de monocitos se
incubaron en HBSS por 120 min antes de leptina tratamiento esto era el tiempo
de incubacin ms largo de inhibidor. Se administraron inhibidores diferentes en
varios puntos del tiempo para permitir para las longitudes mencionadas de
incubacin antes de la estimulacin de la leptina. Dentro de las 6 h de
aislamiento de clulas se realizaron experimentos en monocitos. Leptina fue
agregada a las suspensiones de la clula que contiene las drogas inhibidores
despus de la preincubacin apropiado. El curso del tiempo de la estimulacin
de la leptina era dependiente en el tipo de los parmetros estudiados: a Ins
(1,4,5) P3 determinacin 20 s, en el [Ca2 ] i medicin 6 minutos, y en la
incorporacin de acetato [14C] h. 4 clulas se incubaron en una incubadora de
CO2 humidificada a 37 C (CO2 5%, 95%, 95% de humedad del aire).

2.5. determinacin de inositoltrisphosphate (P3was de Ins(1,4,5)P3)

determinacin de Ins (1,4,5) llev a cabo segn el mtodo de Shyman y BeMeut
(1988), modificado por Patthy, Balla y Aranyi (1990). Brevemente, se incub una
alcuota de la suspensin de monocitos (107 clulas/mL) en HBSS por 4 h a 37
C en presencia de 100 200 Ci [3 H] de myo-inositol (Amersham) y LiCl,
utilizando una incubadora de CO2 equipada con un agitador de 10 nmol/L. Las
concentraciones apropiadas de frmacos inhibidores se aadieron a las
porciones de este antes de 30-120 min la mezcla final de preincubacin de
inositol de myo-[3H]. Tras lavado vigoroso celular determinada radiactividad fue
determinado. El inositolwas incorporado myo-[3H] al menos el 50% de la
radiactividad total aplicada aun cuando drogas inhibidoras estaban presentes en
las muestras. Los inhibidores fueron nuevamente administrados a los monocitos,
y eran estimulados con 100 ng/mL leptina. Despus de 20 s, la reaccin fue
terminada con el cido perclrico helado, que fue neutralizado con KHCO3
saturado. Ins (1,4,5) P3 fueron aislados por cromatografa de fase inversa ion-
pair, utilizando Ins (1,4,5) P3 como estndar interno (Amersham). La cantidad de
produccin Ins (1,4,5) P3 fue expresada como un cociente de pmol Ins (1,4,5)
P3/mg de protena total.

2.6. determinacin de la [Ca2 ] i [Ca2 ] estaba determinado segn lo descrito por

McCormach y Cobbold (1990). Brevemente, los monocitos se incubaron en
volumen de 1mL que contiene 5 106 clulas ms 20 L Indo 1 / AM
(Calbiochem) durante 30 min a 37 C en una coctelera Boston. Las clulas
entonces se lavaron vigorosamente y alcuotas se resuspendi en HBSS.
Inhibidores se aadieron a las clulas en indicado anteriormente veces previo a
la estimulacin de la leptina. Los inhibidores aplicados no influenciado la
capacidad de contenido de medida la libre citoslico Ca2 Indo1/pago. La
determinacin de [Ca2 ] i me realiz a 405 y 485 nm en un espectrofluormetro
(Hitachi, F-4500), bajo agitacin constante en 37 C. La mezcla final que consta
de 106 monocitos en 2,0 mL HBSS fue colocada en una cubeta y las clulas
fueron estimuladas con leptina en concentracin final de 100 ng/mL a 0 minutos
de la medicin de 6 min de duracin. Niveles de la [Ca2 ] se calcula segn la
ecuacin dada. Las seales de Ca2 se calcularon como la leptina estimula
menos basal [Ca2 ] nivel. Se calcularon las reas bajo las curvas (AUC) de Ca2
seales medidas durante las curvas de tiempo de 6 min.

2.7. determinacin de la sntesis de colesterol la assaywas realizada segn

McNamara, Boch, Botha y Mendelsohn (1985). Monocitos (106 clulas) en 1,0
mL HBSS conteniendo acetato nmol/L [2-14C] 2.5 con actividad especfica de
1,8 GBq/mmol (istopo Instituto de la Academia Hngara de Ciencias) se
incubaron con 100 ng/mL leptina y tambin con las mencionadas drogas
inhibidores. La reaccin fue terminada con 0,5 mL de 1,0 mol/L de KOH en el
final de la incubacin de 4 h de duracin, y las muestras eran saponificadas por
90 min a 70 C. Como una referencia interna, [1, 2-3 H] colesterol (1480
GBq/mmol) fue utilizado. Los lpidos unsaponified se extrajeron con hexano. Los
extractos fueron colocados en columnas de xido de aluminio, y la fraccin
esteroides eluy con una mezcla 1:1 de acetona / diethylether. Despus del
secado eluidos se midi su radiactividad, y valores se expresan en picomoles de
sintetizados colesterol/h/107 monocitos.
2.8. estadstico anlisis los resultados se expresan como meansS.D. y fueron
visualizados por la versin 9.0 del programa SPSS (SPSS, Chicago, IL). Anlisis
estadstico se realiz utilizando el mismo programa. Datos se analizaron mediante
anlisis de varianza (ANOVA) seguido de comparaciones mltiples entre los valores
promedios mediante la prueba de menos significantdifference. Para evaluar el grado
de inhibicin de las seales de Ca2 , se calcularon las reas bajo las curvas (AUC),
que se caracterizaba por la estadstica descriptiva. Fueron analizados por ANOVA
de una va y prueba de Newman-Keuls. Valores que representan el total menos
basal [Ca2 ] i, fueron expresados como AUC (nmol/L min de Ca2 ).

3. resultados en la primera serie de los experimentos, nuestro objetivo era

analizar la dependencia de la sntesis de colesterol endgeno en el contenido
de C-LDL del medio extracelular y su cintica de tiempo (Fig. 1). Por lo tanto,
en estos preliminares experimentos los monocitos de cinco voluntarios sanos
y cinco pacientes con HC se incuba en HBSS conteniendo 2-6 mmol/L, LDL-C
por 6 h. Los resultados sugieren que en reposo monocitos HC sntesis de
colesterol endgeno fue elevado en comparacin con controles. Por otra
parte, este aumento en la sntesis de colesterol endgeno de monocitos HC
fue fallecido ni a altos niveles de LDL-C medianos, ni despus de la
incubacin de 6 h de duracin. Por el contrario, monocitos del control
respondieron a altos niveles de LDL-C con una sntesis de colesterol
endgeno significativamente inhibido, como seal de regulacin posterior
alimentacin negativa. Datos en la figura 1 sugieren que la sntesis del
colesterol endgeno elevada en monocitos HC es independiente del
contenido de C-LDL del medio externo y tambin muestran que la actividad
de sntesis de colesterol no cambiaron significativamente en el control o
clulas HC durante el perodo de incubacin de 6 h de duracin. En los
experimentos posteriores, se estudi el tratamiento de la seal de la leptina
en el control y monocitos HC. Determinamos la seal de Ins (1,4,5) P3
inducida por la leptina y su inhibicin con distintos frmacos (tabla 2). Leptina
fue capaces de aumentar notablemente produccin Ins (1,4,5) P3 en control y
monocitos HC con niveles de Ins (1,4,5) P3 mxima similares en los dos tipos
de clulas diferentes. Sin embargo, como consecuencia del mayor nivel basal de
Ins (1,4,5) P3 en clulas HC, leptina slo fue capaz de aumentar los niveles de Ins
(1,4,5) P3 por 71,1%, mientras que la elevacin de 167,4% se observ en las
clulas del control. El hallazgo que solo neomicina y wortmannin inhibicin Ins
(1,4,5) P3 seales en ambos cellgroups, mientras que PTX y PD98059 eran
ineficaces, sugiere que PTX-resistente Ins (1,4,5) P3 en C y HC monocitos se
produce a travs de una va alternativa sensible wortmannin, y que kinase del mapa
no involucrados en la sealizacin de Ins (1,4,5) P3. Los resultados anteriores
dirigen nuestra atencin a Ca2 activa la leptina en monocitos (Fig. 2). Encontramos
que [Ca2 ] niveles en monocitos de HC de reclinacin pacientes eran ms altos que
en las clulas control, mientras que los picos de Ca2 curvas de tiempo fueron
inferiores y apareci a retrasarse con respecto a los monocitos del control. En la
figura 2, las seales de Ca2 , la [Ca2 ] i nivel de leptina estimula en comparacin
con el descanso monocitos, tambin son representados. Con el fin de permitir la
comparacin de la magnitud total de las dos seales independientemente de la
evidente demora en los valores mximos en las zonas HC bajo la curva (AUC) de
los tiempos se calcularon. En la tabla 3, el AUC de Ca2 seales aparecen despus
del tratamiento de leptina con o sin la presencia de diferentes frmacos inhibidores.
Principalmente nos encontramos con que la seal Ca2 inducida por la leptina fue
ms pronunciada en HC que en monocitos del control segn theAUCvalues.
Entre los inhibidores utilizados, neomicina, thapsigargin y wortmannin

significativamente (P < 0.001) inhibida la inducida por la leptina Ca2 seal en

monocitos de C, mientras que en las clulas HC estos inhibidores muestran

significativa (P 0.01) pero menor efecto inhibidor. Por el contrario, la inhibicin

inducida por la leptina Ca2 afluencia por medio V dio lugar a un casi 80% de
inhibicin de la seal de Ca en monocitos HC, mientras que la disminucin de la
seal de Ca2 en las mismas circunstancias en C monocitos fue apenas superior al
10% y fue encontrada para ser menos significativo (P < 0.05). Preincubacin con
PTX no tuvo efecto sobre la leptina activa Ca2 seales, considerando que el efecto
de PI3 quinasa inhibidor de la wortmannin fue ms pronunciado en C que en
monocitos HC. Estos resultados sugieren que puede haber dos caminos separados
responsables de leptina inducida por Ca2 seales en monocitos: 1. PI3 quinasa
divide Ins (3,4,5) P3 que activa la PLC, y la seal inducida por el PLC Ins (1,4,5) P3
resulta en la movilizacin de Ca2 de piscinas intracelulares.

Esta va es sensible al tratamiento in vitro por wortmannin, neomicina y thapsigargin

2. La otra fuente potencial de la seal de Ca2 es la afluencia de Ca2 del medio
extracelular despus de la apertura de los canales de verapamilo-sensible al Ca2 de
la membrana plasmtica. Segn nuestros resultados ambas vas trabajan en
monocitos C y HC; sin embargo, se pronuncia hacia el mecanismo de este ltimo en
monocitos HC. Por ltimo, se estudi el efecto de la leptina en la biosntesis del
colesterol en control y monocitos HC para aclarar el significado de los caminos de
seal previamente definida en el aumento de leptina sacados de la sntesis de
colesterol. Datos de la figura 3 indican que la sntesis de colesterol inducida por la
leptina en monocitos HC fue mayor que en las clulas del control. Figura 3 tambin
muestra que PLC, PI3 quinasa, quinasa, HMG CoA reductasa y SCAP estn
implicados en el aumento de leptina activa de sntesis del colesterol en control y
monocitos HC. Es notable que en el control de thapsigargin y monocitos neomicina
tuvieron efecto significativo de inhibicin, mientras que el canal de Ca2 bloqueo V
medio y PKC inhibe H-7 no fueron capaces de influir en la sntesis de colesterol. Por
el contrario, medio V y H-7 inhibieron significativamente inHCmonocytes de sntesis
de colesterol.

El significativo efecto inhibitorio de la fluvastatina en ambos grupos celulares

destaca la reductasa de ofHMGCoA papel evidente en la sntesis de colesterol,
mientras que el efecto de 25 HC proporciona la evidencia para el papel regulador de
ofSCAP en ambos grupos de clulas. Nuestros resultados recientes sugieren que
leptinstimulation afecta a control humano y monocitos HC a travs de dos distintas
vas bien definidas. En el control de clulas probablemente PI3 la cinasa via PLC y
Ins (1,4,5) P3 impulsa la movilizacin de Ca2 y desencadena la activacin de la
cinasa de mapa. Sin embargo, a pesar inducida por la leptina incremento de IP3
quinasa, PLC-dependiente Ins (1,4,5) P3 produccin y thapsigargin-sensible a Ca2
movilizacin, la inhibicin de esta va en monocitos HC no dio lugar a la sntesis del
colesterol disminuida. En cambio en HC monocyts medio V H-7 exhiben y sntesis
del colesterol pronunciada inhibicin de efecto sugiriendo que en estas clulas un
Ca2 -seal de entrada impulsado por Ca2 y activacin de la PKC juegan papel en la
activacin del ciclo de mevalonato y sntesis del colesterol.

Resumiendo nuestros resultados, encontramos que la leptina era capaz de estimular

la sntesis de colesterol en la circulacin de monocitos humanos. El nivel basal de la
sntesis de colesterol en la reclinacin de monocitos HC fue mayor, por otra parte el
aumento en la sntesis de colesterol inducida por la leptina fue tambin ms
pronunciado en HC que en las clulas del control. PI3 cinasa, MAP quinasa, las
seales de Ca2 y en parte el sistema PKC fueron encontrados para ser implicado en
la sntesis de colesterol produce leptina en monocitos, adems de la mevalonato
ciclo.

4. discusin de acuerdo a nuestra ltimos resultados la leptina puede desempear

un papel en la formacin de placa aterosclertica no slo a travs de su regulacin
del sistema NADPH oxidasa, pero tambin por su capacidad para aumentar la
sntesis de colesterol endgeno en monocitos humanos. Sntesis de colesterol basal
fue encontrado para ser elevado en monocitos de un grupo de pacientes afectos de
HC. Adems, el aumento extremadamente alto de colesterol inducida por la leptina
synthesiswas asociada a nivel basal elevado de monocitos en reposo. Anteriormente
se demostr que en obeso HC sntesis de colesterol basal de los pacientes es
elevado y activada por la LDL, inhibicin de la regeneracin de la sntesis de
colesterol endgeno es ineficaz (Paragh et al., 2003). Para el presente estudio,
criterios de inclusin pacientes tuvieron xito con estatinas tratamiento, aumento de
colesterol biosntesis en monocitos descanso y perturbado regulacin del equilibrio
de colesterol intracelular. Durante el procesamiento de la seal inducida por la
leptina, en el control de monocitos el Ins (1,4,5) P3 seal dependa probablemente
PI3 quinasa, como pretratamiento wortmannin conducen a una inhibicin acertada
del Ins (1,4,5) P3 y Ca2 de la seal de la piscina intracelular. El Ins (3,4,5) P3
escote, que PLC se activa y conduce a la seal del Ins (1,4,5) P3 es un mecanismo
de sealizacin bien conocido (Keqiang y Snyder, 2004; Wu, Huang y Jiang, 2000).
Resultados obtenidos en experimentos con thapsigargin sugieren que la leptina
puede movilizar Ca2 de las piscinas de cido no Ca2 va el camino de la PTX-
resistente Ins (1,4,5) P3 en control y tambin moderado en monocitos HC
(Gerasimenko, Sherwood, Tepikin, Petersen y Gerasimenko, 2006). Sin embargo, la
neomicina y thapsigargin tenan ningn efecto inhibidor en monocitos HC en la
sntesis de colesterol. Nuestros resultados sugieren que en monocitos HC inducida
por la leptina aumento en [Ca2 ] i de piscinas intracelulares es pobre, as este
aumento no es suficiente para influir en la actividad de la reductasa de HMG CoA. El
hallazgo que H-7 haba inhibida slo inHCmonocytes de la sntesis de colesterol,
puede explicarse por nuestros anteriores resultados (Foris et al., 1998).
Previamente se encontr que la actividad PKC unida a la membrana sensible a H-7
fue extremadamente alta en leucocitos de pacientes HC con no insulina dependiente
diabetes mellitus de reclinacin. Hemos comprobado el papel de la PKC sensible H-
7 en la regulacin de la sntesis de colesterol endgeno, porque, igual que otros
autores, podemos llegar con el uso de PKC activacin de forbol 12-miristato-13-
acetato de un LDL-como efecto de bloqueo en la sntesis de colesterol y este efecto
fue suprimido por pretratamiento H-7 en monocitos (Seres et al., 2007). Por lo tanto,
el procesamiento de seales corriente abajo de la leptina puede fusionarse con
otras vas de citoquinas (Fruhbeck, 2006; Sweeney, 2002), y sealizacin de leptina
puede converger en comn genes diana de citocina en el ncleo. TNF-alfa de
manera similar a la leptina se ha demostrado para inducir el sistema de oxidasa de
NADPH ( Frey, Rahman, Kelfer, Minshall y Malik, 2002 ) por otra parte tambin se ha
demostrado para inducir la transcripcin de la SCAP que resulta en la
sobreproduccin de la SCAP en la membrana del retculo endoplasmtico de las
clulas HepG2 (Ruan, Varghese, Powis & Mooread, 2001; Ruan et al., 2006). As,
incluso en presencia de colesterol pueden enlazar molculas SCAP gratis exceso
SREBP2. Este enlace molecular conduce a la translocacin de SREBP2 en el Golgi
donde es dividido. Posteriormente, la parte N-terminal del SREBP2 viaja al ncleo,
donde induce la expresin gnica, a mayor intensidad del ciclo de mevalonato
(Brown y Goldstein, 2000; Nohturfft, Brown y Goldtsein, 1998; Yang, Goldstein y
Brown, 2000). Estos resultados sugieren que los miembros de la superfamilia de
citoquinas son capaces de aumentar la intensidad del ciclo mevalonato a travs de
sus efectos transcripcionales, deteriorando as la regulacin del equilibrio de
colesterol intracelular. Nuestros recientes resultados exitosa inhibicin de la
produccin de colesterol endgeno por fluvastatina y 25-hidroxicolesterol despus
de leptina tratamiento sugieren que el ciclo de mevalonato est implicado en
cambios metablicos inducidos por la leptina en monocitos. Basados en estos
experimentos se plante la cuestin si la leptina, una molcula que posee del
cytokine-carcter, tiene algn efecto en mevalonato recorrer sistema SCAP-SREBP.
El mecanismo del efecto del 25-hidroxicolesterol fue publicado por el grupo de
estudio de Goldstein (Adams et al., 2004). Llegaron a la conclusin de que 25-
hidroxicolesterol ejerce su efecto mediante la inhibicin de la SCAP; sin embargo, no
aplicando directamente SCAP, en cambio va una protena supuesta del 25-HC-
sensor, que induce la Unin a protenas SCAP-Insig. Es concebible que en nuestros
pacientes seleccionados, la regulacin del ciclo de mevalonato se deteriora, por lo
tanto se altera la regulacin de expresin gnica a travs de la cascada reguladora
de protenas SCAP-SREBP-SRE Insig (Brown y Goldstein, 2000; Nohturfft et al.,
1998). Sin embargo, no podemos proporcionar explicacin experimentalmente
comprobada para el aumento en la produccin de colesterol en la reclinacin de
monocitos HC, podemos slo Presumimos que en ciertos grupos de pacientes con
HC el aumento de la actividad del ciclo del mevalonato est codificado
genticamente.

Basado en nuestros estudios recientes, llegamos a la conclusin que leptina-

estimulacin es seguida por la sntesis del colesterol endgeno aumento en
monocitos humanos. La leptina sealizacin de va en los monocitos de los
pacientes HC se caracteriza por alteracin origen de la seal de Ca2 y un aumento
de la actividad de PKC unida a la membrana. El 50 52% de inhibicin de la
sntesis de colesterol en la HC las clulas con el uso de medio de V y H-7, por otra
parte, la ausencia de inhibicin efecto de estos frmacos en el caso de los
monocitos del control sugieren que verapamilo-sensible a Ca2 canales de apertura y
membrana-limite convencional PKC actividad incremento tras la estimulacin de la
leptina estn implicados en la sntesis de colesterol mayor en clulas HC. Sin
embargo, permanece abierta la cuestin de qu cambio primario conduce a
sealizacin alterada en monocitos HC. Es muy probable que las vas de seal
original son ineficaces en las clulas de la HC, ya sea como consecuencia de la
composicin de la membrana alterado / fluidez o son influenciados por generacin
de radicales libres mayor. En leucocitos de angiotensina II-estimulado HC tambin
se encontr una disfuncin muy caracterstica del Gi protena-PLC-Ins (1,4,5) P3-
Ca2 va de seal, que de manera similar a nuestros resultados aqu fue sustituido
por Ca2 -flujo y mayor actividad de la PKC H-7-sensible (Foris et al., 1998; Paragh
et al., 2002). El principal punto de inHCcells de cambio patolgico que altera la va
de seal dio lugar a la sntesis de colesterol endgeno aumento de monocitos y all
se asocia con disturbado regulacin de la homeostasis del colesterol intracelular.
Resumiendo los resultados de nuestros estudios recientes puede ser manifest que:
(1) en monocitos humanos leptina es capaz de afectar la sntesis de colesterol
endgeno (2) en monocitos HC se altera la regulacin de la homeostasis del
colesterol dando por resultado la sntesis de colesterol basal elevada, (3) el aumento
de sntesis de colesterol inducida por la leptina fue significativamente ms alto en
HC que en las clulas del control, y (4) los caminos de la seal de la sntesis de
colesterol inducida por la leptina fueron encontrados para ser diferentes en el control
y monocitos HC.