DETERMINACIN DE AMINOCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE.
MTODO DE SANGER.
Gonzlez B. Jos E., Netzahuatl L. Abraham Z. 2FM1 Seccin 1
OBJETIVO
Identificar el aminocido alfa-amino terminal de las
cadenas de la molcula de hemoglobina mediante
el mtodo de Sanger
INTRODUCCIN
Las protenas son sustancias orgnicas
nitrogenadas complejas que se hallan en las
clulas animales y vegetales. Son polmeros
lineales en los que las unidades monomricas son
los aminocidos, que se pliegan en una notable
diversidad de formas tridimensionales, que les
proporcionan una correspondiente variedad de
funciones.
Para la identificacin y la cuantificacin de las
protenas existen mtodos variados, pero la gran
mayora de estos mtodos tienen como principio
alguna reaccin qumica caracterstica de los
grupos R de los diferentes aminocidos existentes.
Las protenas reflejan las propiedades qumicas de
todos aquellos residuos de aminocidos que
contienen en su estructura, esto hace que la
mayora de las reacciones coloridas de
identificacin dependen de la existencia de un
aminocido especfico en ellas.
RESULTADOS
Se anexa esquema del cromatograma a escala 1:2
Condiciones del cromatograma.
Solvente: cido ctrico citrato de sodio. Tiempo
que se dej el cromatograma en la cmara de
cromatografa: 10 horas (5 para saturacin del
papel, 5 para desarrollo del cromatograma)
Muestra Rf
Alanina (Ala) 0.55
Fenilalanina (Phe) 0.56
Valina (Val) 0.68
DNFB 0.48
Muestra problema 0.66
Tabla 1. Valores de Rf obtenidos
1
DISCUSIN
Las protenas pueden ser marcadas mediante
diferentes mtodos, el que fue empleado en esta
prctica fue el mtodo de Sanger. Para este
mtodo se utiliz como marcador (identificador) del
residuo N-terminal de las cadenas de hemoglobina
el compuesto 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (DNFB)
en pH bsico para desprotonar la protena y se
forme el derivado dinitrofenilado, despus se
cambia el pH a acido para que el DNFB no
reaccione con otros residuos de aminocidos.
Posteriormente se hicieron extracciones con ter
(un solvente no polar) para eliminar el DNFB que
no reaccion, conservando la fase acuosa. Se
disminuy el pH de la solucin y se hidroliz en
condiciones extremas (pH acido, presin de 15
lb/inch2 y 125C). Despus de la hidrlisis se
extrajo con eter el aminocido (debido a que es no
polar) marcado y se realizo una cromatografa en
papel
Como se muestra en la tabla de resultados el Rf
del derivado dinitrofenilado ms cercano al Rf de la
muestra problema es la valina, dato que concuerda
con el residuo amino-terminal de la secuencia de
aminocidos de la hemoglobina ya registrada en la
literatura, porque este aminocido es especifico en
este sitio de la protena.
CONCLUSIN
En la identificacin de los aminocidos presentes
en una determinada protena se llevan a cabo
mtodos de anlisis especficos para cada
sustancia, y mediante reacciones coloridas y otra
clase de pruebas, por ejemplo la cromatografa en
papel, determina el tipo de aminocido presente en
esa protena propiamente identificada gracias a los
grupos R inherentes de cada aminocido.
BIBLIOGRAFA
- Nelson, M., & Cox, D. (2009). Lehninger
principios de bioqumica. Barcelona: Ediciones
Omega
http://www.rcsb.org/pdb/explore/remediatedSequen
ce.do?structureId=1GZX secuencia de la
hemoglobina humana