explicam da maneira mais simples possvel questes bsicas desse importante tema para o produtor.
A contagem de clulas somticas (CCS) um dos parmetros
mais usados para avaliao da sade do bere e da qualidade do leite. O principal fator que influencia a CCS dos rebanhos e dos animais, individualmente, a presena de infeces na glndula mamria. Entretanto, mesmo na glndula no infectada h um nmero de clulas que pode alcanar at 50.000 por mililitro (ml) de leite, sendo que alguns especialistas consideram normal contagens de at 100.000 ou 200.000. O aumento da CCS na glndula mamria resulta principalmente da atrao de clulas de defesa do sangue, em conseqncia de uma infeco local. Alm da infeco intramamria, o nico fator que parece ter uma influncia importante sobre a CCS a variao diria que ocorre em cada glndula mamria e peculiar a cada animal. Portanto, improvvel que outras causas que no afetem a sade do bere tenham um efeito direto sobre a CCS. Nas indstrias leiteiras mais avanadas, o uso de equipamentos que permitem avaliar grande nmero de amostras de leite permitiu o desenvolvimento de programas de monitoramento da sade de rebanhos com base na CCS. A tendncia o uso cada vez maior desses equipamentos, uma vez que eles apresentam uma srie de vantagens (rapidez, segurana, confiabilidade) e os programas associados metodologia so considerados grandes impulsionadores da melhoria da sade dos rebanhos e da qualidade do leite. A obteno de grande nmero de dados exige uma anlise criteriosa para que se possa aproveitar o mximo da informao gerada. O exame de amostras de leite dos rebanhos permite a obteno de dados que podem ser teis para o gerenciamento da sade e do manejo desses rebanhos. Mas, da mesma forma que para a maioria dos exames laboratoriais, importante considerar os limites e o alcance das informaes obtidas. Este artigo foi organizado na forma de perguntas e respostas, com o objetivo de divulgar conceitos aceitos internacionalmente a respeito da CCS.
O que so clulas somticas do leite?
So clulas encontradas no leite que se originam do corpo
da vaca. A maioria delas (as clulas brancas do sangue ou leuccitos) atrada do sangue para a glndula mamria.
O que atrai essas clulas para o bere?
Qualquer agresso (fsica, qumica ou infecciosa) que a glndula mamria sofra e que resulte em um processo inflamatrio. A causa mais comum de agresso so infeces principalmente as de origem bacteriana.
Qual a funo das clulas somticas?
Elas tm a funo de defender o animal de agresses
externas por microorganismos, traumatismos, cortes, substncias qumicas, etc. Quando a agresso muito intensa, a defesa tambm exacerbada, o que resulta em aumento exagerado de clulas e de outras substncias que so tambm transferidas do sangue para o leite.
As clulas somticas so todas do mesmo tipo?
Elas so principalmente leuccitos (macrfagos,
neutrfilos e linfcitos). Um nmero pequeno representado por clulas epiteliais (1 a 2% do total). Alguns estudos, entretanto, apontam de 10 a 20% de clulas epiteliais no leite normal.
Qual o nmero de clulas somticas aceitvel como
normal?
O leite de vacas sadias tem geralmente menos de 50.000
clulas/ml. Aceita-se como normal (o que significa que o quarto mamrio no est infectado) contagens de at 100.000 clulas/ml, embora alguns autores considerem como limite aceitvel at 200.000 clulas/ml.
Qual o fator mais importante para o aumento de clulas
somticas no leite?
a presena de infeco na glndula mamria. No entanto,
um grande nmero de clulas somticas no sempre sinal garantido de infeco no quarto mamrio. uma indicao que o bere est respondendo a uma irritao (agresso) de qualquer natureza. Como na maioria dos casos, a irritao causada por microrganismos, h uma correlao alta entre CCS e a presena de infeco. Tem-se mostrado que a contagem a partir de 250.000/ml permite assegurar com 80% de certeza a presena de infeco no quarto mamrio.
O aumento do nmero de clulas somticas influenciado da
mesma maneira pelos diferentes microorganismos?
No. Em um estudo publicado em 1979, nos Estados Unidos,
observou-se que um grupo de microorganismos classificado como patgenos principais (Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, outros estreptococos e coliformes) causaram, em mdia, aumentos da CCS alm de 1.000.000/ml, enquanto o grupo dos patgenos secundrios (Corynebacterium bovis e estafilococos coagulase negativos) causaram, em mdia, aumentos de 374.000/ml. Deve-se considerar, entretanto, que outros fatores podem influenciar esse quadro (a extenso e a durao da infeco, a prvia exposio da vaca aos microorganismos, a individualidade da resposta imunolgica de cada animal, etc). Observa-se, ainda, variao entre os microorganismos do mesmo grupo. Os estafilococos coagulase negativos, por exemplo, induzem uma resposta celular mais alta que os demais patgenos secundrios.
A contagem de clulas somticas aumenta logo aps o parto?
A CCS alta imediatamente aps o parto, mas em vacas
sadias o nmero de clulas vai sendo reduzido medida que decresce a quantidade de colostro no leite, chegando a menos de 200.000 por ml dentro de 4-5 dias aps o parto. Na segunda semana, a CCS reduzida para menos de 100.000 por ml.
A produo de leite e o estdio de lactao influenciam a
CCS?
Em vacas de alta produo, a CCS aumenta ligeiramente
quando a produo de leite cai para menos de 4 kg/dia. Considera-se que a CCS do leite de vacas no infectadas maior logo aps o parto, baixa durante a lactao e volta a aumentar prximo secagem. O mecanismo fisiolgico dessa variao explicado pela variao de produo ou pelo fator diluio (nmero de clulas por maior ou menor volume de leite produzido). Entretanto, o aumento observado em quartos mamrios no infectados no significativo a ponto de alterar a interpretao diagnstica (por exemplo, a reao observada no California Mastitis Test [CMT]). J se observou um aumento de 80.000 clulas entre 35 dias e 265 dias de lactao. Esse aumento no significativo em termos de diagnstico porque se encontra na variao normal da contagem de clulas. Aps o parto, a CCS de uma vaca com mastite subclnica diminui mais lentamente que a de uma vaca sadia e h um aumento significativo medida que a vaca chega ao final da lactao. Na vaca sadia, ao contrrio, essas diferenas no so marcantes. O leite de vacas mais velhas apresenta contagens de clulas somticas mais altas?
A idade no afeta a CCS se a glndula mamria livre de
infeco. Entretanto, a reao celular contra agentes infecciosos em vacas que tenham tido mastite aumenta com a idade. Muitas vezes, a mastite subclnica e passa despercebida. Dessa forma, comum que as vacas mais velhas apresentem CCS mais alta mesmo quando o bere aparentemente sadio. Aps uma infeco, a CCS desses animais demora mais tempo a voltar ao normal.
O nmero de clulas somticas permanece uniforme no mesmo
quarto mamrio?
A CCS mais alta imediatamente aps a ordenha e se mantm
assim por trs a quatro horas. Quando a produo de leite aumenta no bere, a CCS diminui e atinge o mnimo imediatamente antes da ordenha. Essas variaes so menores nos animais sadios que em animais infectados.
Existem variaes dirias na CCS?
Existem variaes dirias na CCS de vacas individuais, mas
essa variao maior em animais infectados. Tal variao pode ser causada pelas diferenas dos intervalos de ordenha e por problemas de diluio do leite. Quando se adota a amostra composta da produo diria (do animal), por exemplo, a variao diria desaparece. Isso justifica a necessidade de se realizar vrios exames do mesmo animal e do mesmo rebanho. Recomenda-se por isso, no mnimo, trs exames consecutivos dos rebanhos (a intervalos semanais, quinzenais ou mensais) para se fazer um diagnstico ou para se formular programas (por exemplo, de pagamento por qualidade, de controle da mastite, etc.) que incluam a CCS como parmetro.
A raa da vaca influencia a CCS?
Alguns estudos demonstram que a raa influencia a CCS.
Vacas da raa Ayrshire tm CCS mais baixas que vacas da raa Holandesa. Essas diferenas so evidentes quando se comparam vacas sadias e tambm vacas com infeco subclnica. Considera-se que aproximadamente 10% das diferenas entre a CCS de vacas devida gentica. Entretanto, essas diferenas de CCS no so suficientes para influenciar significativamente o diagnstico. Em um estudo realizado com cerca de 290.000 vacas das raas Ayrshire e Holandesa, em que se comparou a relao de CCS entre essas raas e a produo anual de leite, as diferenas entre raas variaram de menos de 50.000 a menos de 100.000 clulas por ml.
O estresse pode aumentar a CCS?
Alguns estudos mostram que quando a vaca est estressada,
por exemplo, quando transferida para um novo rebanho, a sua CCS aumenta, mas esse aumento no notado quando o bere livre de infeco. Outros exemplos de estresse (mudana das condies atmosfricas, agitao, estresse trmico) no afetam a CCS de vacas no infectadas. Contudo, vacas com mastite subclnica respondem ao estresse com aumentos significativos de CCS.
Como se pode aferir a CCS de um rebanho?
Pode-se avaliar CCS a partir de (a) amostras colhidas de
quartos mamrios individuais, (b) amostras coletadas da produo total diria do animal e (c) amostras do leite total do rebanho. Em alguns pases essa amostra do leite total separada, considerando-se as vacas de primeira cria em um grupo e as demais em outro grupo. Isso porque as primeiras tm CCS mais baixa.
Quais os testes usados?
Vrios testes podem ser usados para avaliar a CCS. H
testes que avaliam indiretamente, como o caso do CMT que no conta clulas, mas fornece uma estimativa do nmero. Outros contam efetivamente as clulas. O mtodo padro o microscpico, em que esfregaos de leite preparados em lminas so corados e examinados ao microscpio. Este mtodo laborioso e no apropriado para examinar grande nmero de amostras. Outro mtodo muito usado emprega um equipamento eletrnico (Coulter counter) que pode ser calibrado para reconhecer e contar clulas. Nos ltimos anos ganhou grande aceitao o sistema que usa o princpio da fluorescncia tica (equipamento Fossomatic, fabricado na Dinamarca). Mais recentemente, sistemas que usam como princpio para contagem a citometria de fluxo foram testados. Eles so: Somascope (fabricado na Holanda), Somacount (Estados Unidos) e ANADIS (Frana). Esses sistemas foram analisados e considerados apropriados pelo IDF (FIL, Federao Internacional de Laticnios) (Reichmuth, J. Mastitis Newsletter 21, 1996).
Quais as vantagens e desvantagens dos diferentes testes de
CCS no leite?
As vantagens e as limitaes, assim como o fundamento de
cada teste so apresentados na Tabela 3. Uma das caractersticas da maioria dos equipamentos usados em laboratrio a dificuldade de diferenciar contagens abaixo de 50.000 clulas. A maioria deles funciona bem para contagens entre 50.000 e 1.000.000 ou mais. Um estudo recente em que se compararam quatro equipamentos, o Somacount e o ANADIS diferenciaram melhor as contagens abaixo de 50.000.
Qual a relao entre CMT e CCS?
A CCS dos quartos mamrios nos rebanhos geralmente
avaliada por meio do CMT. Neste teste, um pequeno volume de leite (cerca de 2 ml) misturado com uma soluo de detergente (lauril sulfato de sdio a 3%). Isso suficiente para coagular o DNA das clulas presentes no leite. O teste pode ser feito ao lado do animal, no prprio local da ordenha, usando-se uma raquete com quatro compartimentos. No Brasil a interpretao mais comum do CMT considera cinco escores: negativo (normal), reao suspeita ou traos (T), reao positiva fraca (+), reao positiva (++) e reao fortemente positiva (+++). Em alguns pases adota-se o critrio numrico, que varia de 1 (negativo) a 5 (fortemente positivo). As reaes 3, 4 e 5 ou +, ++ e +++ indicam infeco. Apesar de o CMT ser um teste subjetivo (no conta as clulas, apenas faz uma estimativa), existe uma correlao entre os escores (1 a 5) e a CCS (Tabela 1).
Qual a diferena em termos de utilidade da contagem de
clulas de quartos mamrios ou de vacas e do leite total do rebanho?
Os dados individuais do animal so usados para determinar
se a vaca ou o quarto mamrio tm mastite ou com a probabilidade de estarem infectados. Tem-se demonstrado que em 80% dos casos, a CCS acima de 250.000/ml relacionada com a presena de infeco. A CCS do leite total do rebanho tem trs usos principais: (a) pode ser usado para monitorar a prevalncia de mastite no rebanho (veja a tabela 2); (b) como um indicador da qualidade do leite cru e (c) como um indicador das condies higinicas da produo de leite na fazenda. Alm desses, a CCS pode ser (e ) usada em esquemas de pagamento de leite por qualidade e como um padro internacional de monitoramento da produo higinica e de segurana do leite.
Que tipo de monitoramento da qualidade do leite feito
nos pases desenvolvidos, com base na CCS?
Na Unio Europia h um limite de 400.000 clulas/ml para
o leite total do rebanho. A partir de 1998, mesmo o leite destinado produo industrial ter de obedecer a este limite. Nos Estados Unidos, o limite de 750.000 clulas, mas alguns estados estabelecem limites mais rgidos. Em pases como Austrlia, frica do Sul, Japo e Nova Zelndia, as exigncias variam entre 250.000 e 500.000 clulas.
Qual a razo da preocupao com a CCS dos rebanhos?
A principal razo econmica. Diversos estudos mostram
que h crescente perda de produo de leite medida que aumenta a CCS do leite total do rebanho. Um exemplo disso pode ser observado na Tabela 2. Outras razes so: a interferncia de altas CCS com a qualidade do leite e a relao entre altas CCS e os nveis de infeco dos quartos mamrios.
Qual a relao entre CCS e a qualidade do leite?
A reduo dos parmetros de qualidade do leite detectada
quando a contagem de clulas do leite total do rebanho de 400.000/ml. H um aumento indesejvel de alguns componentes do leite (sdio, cloretos, protenas do soro, soroalbumina, lactoferrina, imunoglobulinas) e um decrscimo (indesejvel) de outros componentes (gordura, lactose, casena, clcio, potssio, etc.). Como resultado, a produo de vrios derivados do leite, incluindo queijos, leite em p e produtos fermentados, prejudicada. Alm disso, a estocagem do leite pasteurizado com alta CCS prejudicada porque seu tempo de prateleira menor. A poltica de melhoria da qualidade do leite pela reduo da CCS afeta a todos, desde o produtor de leite (aumento de produo e ao melhor preo do leite, quando h programas de incentivo pela qualidade) at a indstria processadora (melhor rendimento, melhor qualidade e estabilidade dos derivados e maior tempo de prateleira), com reflexos positivos no mercado, pela maior aceitao dos produtos pelo consumidor.
Para que servem os dados de CCS?
Os dados de CCS podem ser usados para:
- Monitorar a sade do rebanho, ou, mais apropriadamente, a sade do bere dos animais, tanto quanto a efetividade das medidas de preveno e tratamento das infeces;
- Estabelecer polticas de controle da qualidade do leite,
em bases objetivas;
- Ampliar o conhecimento da epidemiologia (medidas de
prevalncia, incidncia, e anlise dos padres da mastite no rebanho no decorrer do tempo) que contribuir para a implementao e acompanhamento de programas de controle das infeces causadas pelos patgenos contagiosos, principais responsveis pelas mastites subclnicas;
- Monitorar a eficcia dos esquemas de tratamento da
mastite, especialmente a terapia secagem;
- Identificar deficincias de manejo e possibilitar a
recomendao de procedimentos especficos e efetivos;
- Demonstrar a importncia da mastite subclnica e
funcionar como um motivador dos programas de controle da mastite e da melhoria da qualidade do leite.
Para que no servem os dados de CCS?
Os dados de CCS no servem:
- Como critrio para selecionar animais para tratamento
(antibitico) da mastite subclnica durante a lactao. Tem sido demonstrado que o tratamento realizado com base na CCS no traz benefcio econmico ao produtor e as taxas de cura das infeces so muito baixas.
- A CCS tambm no serve para ser usada como diagnstico
da mastite, se usada isoladamente. um mtodo excelente de triagem, que deve ser associado ao exame microbiolgico.
- Os dados tambm no so muito teis para o monitoramento
das mastites causadas por patgenos do ambiente. A prevalncia da infeco por esses microrganismos tende a ser baixa, e mesmo rebanhos com predominncia de problemas de mastite ambiental podem ter CCS abaixo de 300.000 clulas/ml. As excees que ocorrem se devem ao aumento da incidncia de mastite clnica, em determinados perodos. Como devem ser usados os dados de CCS?
Os dados de CCS so teis se usados e analisados em srie
(dados mensais e reunidos a intervalos trimestrais ou semestrais, por exemplo). necessrio o resultado de vrios exames, em seqncia, para identificar os nveis de infeco do rebanho e determinar as tendncias de ocorrncia de novas infeces. Isso permitir avaliar a necessidade de implementao de medidas corretivas ou simplesmente acompanhar as medidas recomendadas. Deve-se considerar, tambm, a necessidade de se trabalhar com as mdias das contagens (a mais recomendada sendo a mdia geomtrica).
Qual a metodologia adequada para a contagem de clulas
somticas no leite?
importante observar os cuidados na coleta das amostras
(para que sejam representativas dos animais ou do leite total do rebanho), o acondicionamento e o transporte para o laboratrio (sob refrigerao, dentro do prazo, em recipientes e com conservantes apropriados, etc.). No laboratrio importante que sejam usadas metodologias padronizadas e que os equipamentos sejam calibrados e revisados regularmente, com superviso externa. importante lembrar que mesmo mtodos e equipamentos altamente sofisticados no podem corrigir os erros cometidos por ocasio da coleta e manuseio das amostras.
Que medidas podem ser adotadas para reduzir a CCS dos
animais e dos rebanhos?
O fundamental a preveno de novas infeces da glndula
mamria, principalmente por meio de medidas higinico- sanitrias. Estas incluem:
- Medidas gerais: reduo da prevalncia de mastite;
ateno ao manejo e instalaes (condies de estabulao, umidade, ventilao, cuidados durante o parto, etc.)
- Intervalo entre as ordenhas: qualidade da cama e do
ambiente de circulao dos animais (limpos e secos), ateno aos animais no perodo da secagem (aplicao de antibiticos especficos);
- Durante a ordenha: condies de tetas (limpas e secas
antes da ordenha); desinfeco de tetas (depois, sempre, e antes, em casos especficos); procedimentos adequados antes e durante a ordenha (preveno de estresse, conforto do animal, ordenha rpida e completa); higienizao e manuteno adequada dos equipamentos de ordenha; fornecimento de rao aos animais aps a ordenha (para evitar que se deitem).
Tabela 1. Contagem de clulas somticas (CCS) de 3.012
amostras de leite, distribudas entre diferentes classes de escores do California Mastitis Test (CMT). Escore doInterpretao do CMT escore N de amostras CCS (x 1.000/ml) 1 (-) negativo 2.029 80 2 (T) reao suspeita 313 334 3 (+) fracamente positivo 311 670 4 (++) positivo 237 1.354 5 (+++) fortemente positivo 122 4.456 Fonte: Brito et al. Pesq. Vet. Bras. 17(2): 49-53, 1997.
Tabela 2. Relao entre Contagem de Clulas Somticas (CCS) e
percentual de perda de produo de leite. CCS do leite Quartos mamrios Decrscimo da total do infectados (%) produo rebanho (%) 200.000 6 0* 500.000 16 6 1.000.000 32 18 1.500.000 48 29 *Perda calculada como um percentual da produo esperada a 200.000 clulas/ml. Fonte: NMC. Current concepts of bovine mastitis. 1996. Tabela 3. Fundamentos, vantagens e limitaes dos testes de contagem de clulas somticas no leite. Teste Fundamento Vantagens e limitaes Contagem As clulas so o teste padro, microscpica direta contadas em uma reconhecido pelo IDF (FIL). lmina, ao laborioso, cansativo microscpio. (induz a erros de contagens); no apropriado para grande nmero de amostras. Contador tipo Usa um contador Mtodo amplamente usado. Coulter eletrnico que pode Apresenta limitaes para o ser calibrado para teste de grande nmero de reconhecer e contar amostras e por no ser clulas. informatizado. tico-fluorescente Conta clulas que tm Mtodo automtico, barato, (equipamento intensidade mnima de de fcil processamento e Fossomatic) fluorescncia, devido muito usado na maioria dos colorao do DNA pases desenvolvidos. Os nuclico. vrios modelos se adaptam a diferentes exigncias dos laboratrios. Limitaes: preo do equipamento e manuteno (dependendo da regio). Citometria de fluxo Usa um sistema tico Praticamente as mesmas do (equipamentos: (laser) para detectar equipamento Fossomatic. Somascope, Somacount e contar clulas, e ANADIS) cujos ncleos so corados com uma substncia qumica (colorao do DNA). Wisconsin Mastitis O leite misturado um mtodo indireto. Test (WMT); com um detergente e o Inapropriado para grande Viscosmetro DNA das clulas se nmero de amostras. No torna viscoso. Quanto permite automao. No mais clulas, mais diferencia contagens baixas DNA e mais de clulas. viscosidade. A velocidade de passagem da mistura leite+detergente pelo orifcio de um tubo a medida do nmero e clulas. California Mastitis uma adaptao do prtico, barato e pode ser Test (CMT) WMT em que o aplicado ao lado do animal, detergente com resultado imediato. misturado com o leite Subjetivo (a interpretao em uma raquete e o pode variar entre pessoas) e grau de formao do permite apenas uma gel (viscosidade) estimativa do nmero de estimado clulas. visualmente). Fonte: compilao de diversos autores.
Jos Renaldi Feitosa Brito e Maria
Aparecida V. P. Brito, pesquisadores da Embrapa-Gado de Leite. e-mail: kbrito@artnet.com.br