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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

INSTRUMENTOS MATERIAL DE VIDRIO Y APARATOS DE USO


FRECUENTE EN BACTERIOLOGA
ASA DE INOCULACI N

Posee un mango de KOLLE revestido de ebonita (caucho), que sirve como aislante del calor
para proteger al manipulador. Termina en asa (bolita) y sirve para tomar la muestra que se
usar en el medio de cultivo.

AGUJA DE INOCULACION

Es un instrumento semejante al anterior, con la diferencia de que el alambre es recto. Se lo


utiliza especialmente para cultivos de profundidades.

PIPETA GRADUADA

Instrumento graduado que sirve para aspirar cantidades especficas de lquidos y transferirlo
de un recipiente a otro. Tiene un filtro arriba que hace que el lquido pipeteado no contamine la
boca, y que la boca no contamine el lquido pipeteado.

CAJA PETRI

Es un recipiente redondo de vidrio o plstico donde se almacenan los medios de cultivo solidos
sobre los cuales se van a efectuar siembras bacterianas. Mide 9 mm.

TUBOS DE ENSAYO

Instrumento no graduado que almacenan los medios de cultivo semislidos o lquidos al igual
que agua destilada.

TUBOS DE DURHAM

Tubos de gas de fermentacin, es mas pequeo que el de ensayo. Sirven para comprobar si el
cultivo es fermentador o no de gas.

LAMINAS PORTA- OBJETO

Estas lminas de vidrio son de borde romo y sirven para depositar en ellas el material o
observarse al microscopio.

LAMINILLAS CUBRE-OBJETO.

Cubre la muestra para ser observadas en fresco, lo que permite una distribucin uniforme del
material y a la vez impide que se contamine el lente del microscopio.

VASO DE PRECIPITACION

Es un instrumento graduado de vidrio, metal o de un plstico en especial que sirve para


preparar los medios de cultivo. Protege al elemento del calor.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

MATRAZ

De base plana, es cnico. Tiene un tbulo redondeado hacia arriba. Sirve para el transporte de
la muestra.

FIOLA

Base plana no cnica. Al igual que el matraz tiene un tbulo redondeado hacia arriba pero ms
alargado. Sirve para el transporte de muestras.

KITAZATO

Base plana cnica con una protuberancia en su tbulo en la parte superior. Sirve como bomba
al vaco.

BALON

No posee una base plana. Tiene un tbulo en la parte superior y un cuerpo esfrico. Sirve para
el transporte de una sustancia.
PROBETA

De vidrio, graduado, volumtrico y de base pentagonal. Sirve para medir una cantidad exacta
de agua destilada necesaria para la preparacin de los medios de cultivo.

FRASCO GOTEROS

Sirve para el almacenamiento de colorantes que sern usados en los medios de tincin. En la
tapa tiene un canal por donde sale el colorante.

MECHEROS DE GAS

Utilizado para la esterilizacin de elementos que se vayan a usar. Tiene una llama mas firme y
potente.

MECHEROS DE ALCOHOL

Al igual que el de gas es usado para esterilizar elementos a usar pero este no posee una llama
tan firme.

VASOS DE COPLIN

De vidrio con base redonda. Sirve para almacenar sustancias como el Xilol el cual es utilizado
para limpiar las placas que contienen aceite de inmersin.

ACEITE DE INMERSION

Sirve para observar las bacterias en lente de 100x. Esta hecho de cedro.

HORNOS E INCUBADORAS

Las incubadoras Sirven para obtener una temperatura de 37c, temperatura adecuada para
toda vida bacteriana.

Los hornos brindan una temperatura de 100 a 140c por lo cual se los llama Hornos Pasteur.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

AUTOCLAVE

Esterilizacin de instrumentos que han sido contaminados. Se lo realiza a temperatura de


121c por 15 minutos.

PERLAS DE VIDRIO

Son redondas y sirven para la desfibrinacin de la sangre.

TOMA, TRANSPORTE, ALMACENAMIENTO Y TRATAMIENTO


DE LAS MUESTRAS
GENERALIDADES

Cualquier muestra debe estar libre de contaminantes.


Los contaminantes crecen mejor que las bacterias patgenas.
Los contaminantes opacan el crecimiento de las bacterias que se desea investigar e
impiden crecimiento.

REGLAS GENERALES PARA EL TOMO ADECUADO DE MUESTRA

Debe tomarse la muestra en el sitio anatmico apropiado y en lo posible antes de


iniciar el tratamiento con antibiticos.
Debe tenerse en cuenta la etapa de la enfermedad, pues de ella depende la
localizacin de la bacteria en cierta rea o espcimen.
La muestra deber ser obtenida en cantidad suficiente.
Los recipientes en donde se depositan las muestras deben ser qumica y
biolgicamente estriles.

TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS

Las muestras por lo general deben ser analizadas en el laboratorio lo ms pronto


posible luego de haber sido obtenidas. (1 hora)
Los recipientes deben ser protegidos contra roturas y fugas.
El tiempo que dure el transporte es sumamente importante debido a que los patgenos
que podran estar en la muestra pueden tomarse no viables si este es problongado y
tambin porque las bacterias no patgenas pueden ganar en crecimiento o las
patgenas. (Medio de Stuart).

MANEJO DE DIVERSOS TIPOS DE MUESTRAS

SANGRE

La piel debe ser limpiada cuidadosamente con tintura de yodo al 3.5%, con una
solucin de etanol al 70%. Alcohol isopropilico al 70-95%.
Uso de guantes, aplicacin de un torniquete y localizacin de una vena fija para la
palpacin.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

Se deja secar bien el alcohol para no introducir nada de l a la aguja y por lo tanto en la
muestra.
Una vez desinfectada la piel no debe palparse la vena a puncionar.
El volumen de la muestra vara acorde a la edad.
Neonatos: 0.5 a 1ml- Jvenes 10ml, - Adultos 20 ml
La mitad de la muestra se coloca en un tubo para cultivo aerbico y la otro mitad en un
tubo para cultivo anaerbico.
Debemos recordar que ciertas sustancias coagulantes de la sangre tienen accin
bactericida o bacteriosttica cuando se utiliza sangre completa.
Por lo tanto se recomienda utilizar 3 ml de una solucin de citrato sdico al 2% a 1 mg
de heparina por 10 ml de sangre.
La sangre debe transportarse rpidamente al laboratorio y sembrarlo, debido a que la
sangre completa se desintegra rpidamente y se torna muy eficaz como agente
antibacteriano.

ORINA

Debe obtenerse la primera orina de la maana por ser ms concentradas.


El primer chorro debe descartarse, y el chorro intermedio introducir directamente en
un frasco esterilizado y hermticamente tapado.
En la mujer lo ideal es que se obtengan muestras cateterizadas, y de no ser posible
debe practicarse previamente a la toma de la muestra, un lavado de los genitales
externos; y al momento de recolectar la orina intermedia deben separarse los labios
mayores de la vulva.

TIPOS DE MUESTRA

Mtodos Invasores Mtodos no Invasores

Orina de 2do chorro Orina por


Puncin Supra pblica Cateterizacin
recolectar
vesical

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

DETERMINACION VOLUMEN COMENTARIOS

BACTERIAS 0.5-1 Primera orina de la maana


HONGOS >20 Primera orina de la maana
MYCOBACTERIAS >20 Primera orina de la maana tres das consecutivos
ANAEROBIOS 1 Aspirado supra pblico enviar en un sistema de
trasporte para anaerobios.
VIRUS 10-15 Primera orina de la maana, enviar con hielo y
transporte al laboratorio inmediatamente.
PARSITOS Orina de 24 horas

LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO

Depositar la muestra en un recipiente bien tapado y mantener el lquido caliente


durante el transporte. Se puede usar el calor del cuerpo de una mano o colocando el
tubo en un vaso de agua tibia. (evitar temperaturas inferiores a los 35C)

Una vez obtenida la muestra debe centrifugarse a 1.500 rpm durante 10 minutos.
Luego se siembra rpidamente si sedimento en un medio adecuado.

MUESTRA DE HERIDAS EXPUESTAS

La muestra debe recolectarse con un hisopo estril o con aspirado mediante aguja y
jeringuilla desde el rea mas hmeda.
Las bacterias del centro absoluto pueden no ser viables, por lo que se prefiere obtener
cultivos de la periferia, donde los microorganismos son ms viables y activos, (pliegues
interno y externo).
Eliminar cuidadosamente el aire de la jeringuilla despus de la recoleccin.

MUESTRA DE REA GENITAL

En los hombres puede obtenerse muestras de la uretra inflamada.


En las mujeres existen diversas reas que puedan ser afectadas.
Todos los hisopados deben ser sembrados inmediatamente en agar chocolate o en
medio de Thayer Martin.
Cuando no es posible hacerlo inmediatamente se sumerge el hisopo en el medio de
Stuart en donde incluso hasta el gonococo sobrevive 48 horas.

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ESPUTO

El mejor momento para la recoleccin del esputo es por la maana muy temprano.
El paciente debe proporcionar la muestra para la cual debe traer directamente sobre un
recipiente estril, informndole que lo importante es el esputo propiamente dicho antes
que la saliva.
Cuando hay tos no productiva, el empleo de vapor nebulizando puede ayudar a obtener
la muestra.
Si el esputo es muy viscoso puede agregrsele unos pocos milmetros de solucin
salina estril, luego se agita ligeramente sin formas aerosoles.
Esta ligera agitacin ser suficiente para desprender suficientes bacterias, bastando
con efectuar la siembra de una gota de la suspensin con el asa de inoculacin en el
medio de cultivo respectivo.
Pacientes ancianos: nebulizacin previa.
Pacientes inconscientes: Broncoscopia

HECES FECALES

Se recomienda no recoger las heces desde la taza del retrete; lo mas aconsejable
es que el paciente tome su propia muestra defecando directamente en un
recipiente estril de cartn encerado.
Cuando no puede obtenerse excrementos, debe practicarse hisopados rectales, no
anales, y el hispo se coloca luego en un tubo estril topando con algodn y
conteniendo medio de transporte.

MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un conjunto de sustancias que brindan a la bacteria condiciones
necesarias para su desarrollo y formacin de colonias

Colonias.- conjunto de bacterias que forman manchas o puntos visibles en un medio de cultivo
y la cual constituye la descendencia de una sola bacteria, tienen caractersticas que van de
acuerdo a:

- Consistencia: viscosa o mucoide


- Trasparencia: translucidos u opacos
- Capacidad de hacer o no pigmentos

Respecto de sta ltima, las colonias pueden producir los mas variados colores, entre los que
tenemos

1. Amarillo dorado (Estafilococos aureus);


2. Amarillo verdoso (Micrococcusluteus);
3. Rojo (Serratia marcescens);
4. Blanco (Estafilococcus Epidermidis).

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

CONDICIONES QUE DEBE REUNIR UN MEDIO DE CULTIVO.

1. Tener un contenido nutritivo adecuado para que la bacteria se desarrolle.


2. PH alcalino ente 7 y 7,8.
3. Recolectado en recipientes adecuados y estriles.

PRINCIPALES OBJETIVOS DE UN MEDIO DE CULTIVO.

1. Obtener cultivos puros, para estudiar las bacterias y mantenerlas vivas


indefinidamente.
2. Observar el aspecto de las colonias a simple vista o con pequeo aumento, con fines
diagnsticos.
3. Obtener cantidades apreciables de bacterias para fines industriales: como la
elaboracin de vacunas y antgenos para reacciones de aglutinacin.
4. Facilitar el hallazgo de las bacterias en un producto patolgico.
5. Estudiar la fisiologa de las bacterias.
6. Estudiar la toxignesis y las cualidades de las toxinas.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Sencillo

a) Medios naturales.- Son aquellos que no han sido creados artificialmente por el
hombre: liquido asctico, papa, leche, etc.
b) Medios artificiales.- Son aquellos elaborados por el hombre agar sangre, agar
chocolate.

Consistencia: consistencia los medios de cultivos pueden clasificarse en:

a) Solidos
b) Semislidos
c) Lquidos.

- Cuando no se tiene agar hay medios de cultivo lquidos como el agua de peptona.
- Con el agar al 1% se obtienen medios de cultivo semislidos.
- Con el agar al 1,5% se obtienen medios de cultivo slidos.
- El agar tiene un gel transparente similar a la gelatina.
- La incubacin de las bacterias es a 35c y el de la gelatina es 25c, por eso no se la
usa porque se hace liquida.

Otros.

Bsicos:

Formados por extractos de carne, peptona, sal y agua. Brinda vitaminas a las bacterias, sal y
pequeas cantidades de oligoelementos.

o La sal ms usada es el NaCl.


o Se usa agua destilada y no de la llave porque puede contener cobre
impidiendo as el desarrollo de algunas bacterias.
o Ejemplo: Agar nutritivo profundo.

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Enriquecidos:

Son los mismos medios de cultivos bsicos a los cuales han sido agregados lquidos
corporales y vitaminas.

o Ejemplo: Agar sangre

Selectivos: Mismos medios de cultivos bsicos o enriquecidos que se le ha agregado


sustancias que impiden el crecimiento de sales biliares. Puede favorecer al crecimiento de
otras bacterias.

o Ejemplo: Agar McConckey que permite el crecimiento de bacterias Gram


negativas e inhibe el crecimiento de las bacterias Gram positivas.

Diferencial: Se les ha agregado un indicador de Ph como el azul de bromotinol los cuales


ejercen un cambio de color al medio de cultivo segn su ph.

o Ejemplo: Agar citrato, Agar urea.

Enriquecimiento: Medios de cuktivo enriquecidos. Continen sustancias inhibidoras con el que


se ve un medio favorable para determinadas bacterias.

Especiales: M.C que no han sido catalogados como los anteriores por ejemplo Medio de ENJH
para el crecimiento de leptospira.

EN TUBOS DE ENSAYO

Solidos

Agar nutritivo inclinado


Agar nutritivo profundo
- Para bacterias no exigentes de su requerimiento nutritivo

Medio de Lowenstein Jensen


- Es de color verde. Crecimiento de bacilo de Koch

Agar TSI
- Aislamiento de bacterias y para saber si las bacterias son fermetadoras o no se
glucosa y sacarosa, para observar si la bacteria es capaz de producir acido sulfrico y
gas de fermentacin.

Agar citrato
- Para bacterias cuya fuente de enrgia es el carbono.

Agar urea
- Para bacterias que usan el nitrgeno como fuente de enrgia.

Agar pie o huevo


- Se utiliza para el crecimiento de bacilo diftrico.

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Semislidos

Agar motilidad
- Sirve para ver si la bacteria tiene o no movimiento.

Lquidos

Caldo nutritivo
- Para bacterias que no son exigentes de requerimiento nuritivo.

Agua de peptona
- Sirve para demostrar si la bacteria es capaz de producir indol.

Caldo de tetrationato
- Crecimiento de bacterias intestinales inhibiendo el crecimiento de aquellas que no son
habitantes en el intestino.

En caja de Petri

Agar sangre
- Se lo utiliza para saber si la bacteria produce o no hemolisis

Agar chocolate
- Crecimiento de gonococo y meningococo

Agar SS (salmonella-shigella)
- Para cultivo de Salmonella y Shigella

Agar McConckey
- Crecimiento de Gram e impide el crecimiento de Gram +

Agar Muller Hinton


- Para las pruebas de antibiograma. Susceptibilidad o resistencia de las bacterias ante
antibiticos.

Agar Bismuto sulfito


- Se usa para el crecimiento de Salmonella typhi y otros.

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OBSERVACIN EN FRESCO Y TINCIN SIMPLE


Pigmento bacteriano

- Profundidad: Pigmento pioceanico


- Superficie: Amarillo dorado- Estafilococos aureus
Blanco- Estafilococos epidermidis
Rojo- Serratia marcescens
Amarillo limn- Micrococo lutius

El medio en fresco se realiza sin colorantes.

Ventaja.- Permite ver a la bacteria en movimiento en el campo del microscopio. No se debe


confundir el movimiento de las bacterias con los movimientos bromianos.

No vemos deformaciones cuando el frotis de la bacteria se fija a la llama.

Desventajas.- Se seca de manera rpida.

No se puede ver estructuras especiales como por ejemple flagelos y esporas.

Tcnica

Se realiza entre lmina y laminilla. Se coloca de 4 a 5 gotas de suspensin bacteriana en el


centro del portaobjeto con lente de 10x y 40x.

- Bacilos suptilis.- poco motil


- Proteus.- se mueve ms
- Estafilococo.- no tiene movimiento

Mtodos de tincin

Simple: un solo colorante

- Violeta de genciana: se cubre por un minuto, se lava con agua y se seca con papel
filtro
- Azul de metileno: se cubre por un minuto, se lava con agua y se seca con papel filtro.

Compuesta: se usa ms de un colorante a la vez.

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TINCIONES COMPUESTAS

Tincin compuesta de Preston Morrel para bacterias Gram positivas y


Gram negativas.

1. Aplicar oxalato de amonio de cristal violeta por 30 segundos.


2. Aplicar yodo lugol el cual sirve para que se fije el oxalato de amonio, y dejar actuar por
30 segundos.
3. Lavar completamente con Iodo acetona y dejar actuar por 30 segundos.
4. Lavar con agua.
5. Aplicar carbol fucsina diluida durante 30segundos.
6. Lavar con agua.
7. Secar con papel filtro y observar con lente de 100x.

Resultados:

Gram positivos: Morado


Gram negativos: Rosado

Tincin compuesta de Ziehl Neelsen para bacterias BAAR y NO BAAR.

1. Inundar el frotis con carbol fucsina fuerte y calentar hasta la emisin de vapores por 5
minutos.
2. Lavar con agua.
3. Decolorar con cido hidroclrico al 3% hasta eliminar el exceso de carbol fucsina.
4. Lavar con agua.
5. Contrastar con azul de metileno durante un minuto.
6. Lavar con agua, secar con papel filtro y observar en lente de 100x.

Resultados:

1. BAAR: Rojo
2. NO BAAR: Azul

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

P L A C A S
ESTAFILOCOCO

- forma de racimo de uva. Mide de 0,5 a 1,5 um de dimetro.


- Se tie por el mtodo de Preston Morrell
- Se diagnostica mediante la prueba de la coagulasa.

Prueba de la coagulasa.- principal prueba para el diagnstico de los estafilococos aureus.

TECNICAS DE LA PRUEBA DE LA COAGULASA

Coagulasa en placa

- Consiste en colocar en una placa, una gota de suspensin + 0.5 ml de plasma de


conejo, con movimientos circulares.
- Si es coagulasa positivo aparecen grumos blancos.
- Si los grumos aparecen antes de aadir el plasma quiere decir que estaba
contaminado.
- Si no se forman grumos se hace la segunda prueba.

Coagulasa en tubo

- Al plasma de conejo se le aade un cultivo solido de 18-24 horas o 0.1 ml de un cultivo


lquido.
- Se incuba en bao mara en 37c y se examina cada 30 minutos durante 4 horas para
ver la formacin de cogulos.
- Si no se forman lo cogulos en 4 horas se lo realiza en 6 horas.
- Si en 24 horas no aparece el coagulo es Coagulasa negativa.

BACILOS SUPTILIS

- Es Gram +
- Se tie de morado por el mtodo de Preston Morrell

MICROCOCCUS LUTEUS

- Gram +
- Diplococo en parejas o ttradas
- Se puede ver un haz de luz de 1 a 2 micras
- Es viscoso negativo
- Se lo puede relacionar como contaminante de cultivo y produce endocarditis
- Se tie de morado por Preston Morrell

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GONOCOCO

- Gram
- Se tie d rosado por Preston Morrell
- Se lo ve individual o en pares
- Mide de 0,6 a 1 micra de dimetro
- Ejemplo: Neisseria Gonorrhoeae

STREPTOCOCO

- Gram +
- Se tie de morado por Preston Morrell
- Mide de 0.6 a 1 micra de dimetro
- Forma de cadena

VIBRIO

- Es un bacilo (Clera)
- Gram
- Se tie de rosado palido por Preston Morrell
- Mide de 1,5 a 3 micras de longitud
- Es un bastoncillo curvo con forma de coma

ENTEROCOCO

- Es un coco Gram +
- Mide de 0,5 a 1 micra de dimetro
- Se lo encuentra en forma de diplococo
- Se tie de morado por Preston Morrell
- Ejemplo: Shigella

TINCION DE PARED CELULAR (BASILOS SUPTILIS)

- 1) Se prepara un frotis relativamente concentrado


- 2) No se fija a la llama
- 3) Antes de que la suspensin bacteriana se seque, se lo cubre con cido
Fosfomolibdico (hidroliza el citoplasma sin afectar la pared) y se deja reaccionar por 4
minutos.
- 4) Inclinar la placa para deja drenar el acido
- 5) Agregar verde de metilo sobre el frotis hmedo durante 5 minutos.
- 6) Lavar con agua evitando desprende mucho colorante y se lo seca al aire sin papel
filtro.

COLORANTE USADO: VERDE DE METILO

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TINCION DE CAPSULA POR EL MTODO DE TINTA CHINA

- 1) Se hace un frotis delgado del material


- 2) Se lo seca al aire y se lo fija suavemente en la llama
- 3) Colocar una gota de tinta china y extenderla con la laminilla cubre objeto
- 4) Se lo deja secar al aire
- 5) Teir con Safranina durante un minuto
- 6) se lava con agua, se seca y se observa con aceite de inmersin.

COLARANTE USADO: SAFRANINA

RESULTADOS:
Espacios incoloros: Capsula
Cuerpo bacteriano: Rojo
Fondo negro

BACILOS GRAM

- Bacilos que se tien de rosado por Preston Morrell


- Ejemplos: Proteus, Klebsiella, Rickettsia

TINCION DE ESPORAS POR EL MTODO DE WIRTZ CONKLIN

- Frotis delgado, fijar a la llama


- Cubrir con suspensin acuosa de verde de malaquita al 5%
- Se calienta durante 5 minutos
- Se lava con agua y se tie con safranina durante un minuto
- Se lava, se seca y se observa el frotis con aceite de inmersin

COLORANTES USADOS: SAFRANINA Y VERDE DE MALAQUITA AL 5%

RESULTADOS:
Esporas: verdes
Cuerpo bacteriano: rosado

TINCION DE ESPORAS POR EL MTODO DE ZIEHL NEELSEN

COLORANTES USADOS: CARBOL FUCSINA FUERTE Y AZUL DE METILENO

RESULTADOS:
Esporas: rojas
Cuerpo bacteriano: azul

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BACILO DE KOCH POR ZIEHL NEELSEN

- Es una bacteria alcohol acido resistente (BAAR)


- Se lo observa de color rojo

COLORANTES USADOS: CARBOL FUCSINA FUERTE Y AZUL DE METILENO

TINCION DE ESPORAS POR EL MTODO DE FLEMING MODIFICADO


- Se coloca carbol fucsina fuerte y se calienta por 5 minutos
- Se lava con agua
- Se decolora con cido hidroclrico
- Se lava nuevamente
- Se extiende una gota de tinta china con el cubre objetos y se deja secar

COLORANTES USADOS: CARBOL FUCSINA FUERTE

RESULTADOS:
Esporas: rojas
Cuerpo bacteriano: incoloro
Fondo negro

LEPTOSPIRA POR EL MTODO DE ROJO CONGO

- Fondo azul
- Tiene un centro brillante en espiral
- Se ve en forma de ondas y grietas

BACILO DIFTRICO POR MTODO DE PRESTON MORRELL

COLORANTES USADOS: OXALATO DE AMONIO DE CRISTAL DE VIOLETA Y CARBOL


FUCSINA DILUIDO.

RESULTADO: Se lo observa como acmulos

U R O C U L T I V O
Diagnostico bacteriolgico de las infecciones urinarias.

- La orina es asptica aunque es un caldo nutritivo excelente para contaminarse con


bacterias saprofitas de la prstata, prepucio y heces fecales en caso de nios.
- Para tomar una muestra de orina en bebes se debe sondear.

Bacteriuria: Presencia o multiplicacin de bacterias en la orina.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

Contaminacin: Bacterias que han penetrado accidentalmente a la orina generalmente al


momento de recolectar la muestra.

Contagio bacteriano: Es la determinacin de la cantidad de bacterias que existen por


centmetro cubico de orina.

Por encima de 100.000 bacterias por cc de orina, demuestra una infeccin.


Debajo de 10.000 es orina normal.
Entre 10.000 y 100.000 es contaminacin.

Forma de recoleccin:

El paciente no debe tomar antimicrobianos 24 horas antes de la toma de muestra. Hay que
recolectar la primera orina de la maana y de esa dividir el primer chorro en tres. De esa
divisin se toma el chorro de en medio. En un frasco estril y hermticamente cerrado.

Si no se toma inmediatamente la muestra hay que refrigerar.

METODO

- Se coloca 5 tubos de ensayo y se hace dilucin.


1/10 1/100 1/1.000 1/10.000 1/100.000

- 1/10: primer tubo con la muestra de orina y 9cc de solucin salina.


- 1/100: segundo tubo con 1cc del primer tubo y 9cc de solucin salina.
- 1/1.000: tercer tubo con 1cc del segundo tubo y 9cc de solucin salina.
- 1/10.000: cuarto tubo con 1cc del tercer tubo y 9cc de solucin salina.
- 1/100.000: quinto tubo con 1cc del cuarto tubo y 9 cc de solucin salina.

Se toma 5 cajas de Petri y se coloca 1cc de cada tubo.

Se usa tripticasa fundida, esta se deja enfriar hasta 45c y se coloca de 10-15 cm3 en cada
caja y se deja enfriar de 15-20 minutos.

Si no hay tripticasa fundida se puede usar Muller Hinton tibio.

Una vez entibiado coge una consistencia dura.

Se lo deja a una temperatura de 34c entre 24 a 48 horas para que crezca la bacteria.

Una vez pasada las 48 horas se procede a la lectura de acuerdo a la cantidad de colonias que
encontremos.

Se recomienda contar las colonias en 1/1000 y 1/10.000


Si se encuentran 50 colonias en 1/1000 se le aumentan los ceros, es decir tendramos
50.000 bacterias por cm3.
Si se llega a 1/100.000 y las bacterias siguen concentradas y no se pueden ver se
denomina INCONTABLE NUMERO DE BACTERIAS POR CM3

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

BACTERIAS EN INFECCION

- E. Coli
- Proteus
- Pseudomona aeruginosa
- Enterococo
- E. Aureus
- Estreptococo betahemolitico

BACTERIAS EN CONTAMINACION

- E. Epidermidis
- Difteroides
- Estreptococo alfahemolitico
- Levaduras

COPROCULTIVO
Es la siembra apropiada de una muestra apropiada de heces en un medio de cultivo en donde
crecen bacterias intestinales patgenas.

Muestra apropiada:

Cuando se encuentra en suficiente cantidad


Cuando es tomada en la fase aguda de la enfermedad
Antes de que se administren antibiticos

Para tomar muestras se usan porcin de heces frescas o hisopado rectal el cual consiste en
introducir el hisopo 4 o 5 cm en el recto.

MEDIO DE CULTIVOS UTILIZADOS: Caldo de Tetrationato

MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO

Se le aade 0,2 cc de solucin de yodo yodurada. Esta sustancia se combina con el Tiosulfato
de sodio que contiene el medio transformado a su vez en Tetrationato de sodio, que inhibe el
crecimiento de la mayor parte de bacterias intestinales.

Caldo de tetrationato: Salmonella

Agar SS: Salmonella, Shigella

- LAS COLONIAS APARECEN INCOLORAS PORQUE NO FERMENTAN LACTOSA.

- CUALQUIER OTRO TIPO DE BACTERIA QUE FERMENTE LACTOSA LA COLONIA


APARECE ROJIZA.

Agar Bismuto sulfito: en este medio, las colonias de Salmonella Typhi aparecen negras
rodeado de un halo metlico brillante. Otras aparecen de un tono verde oscuro o negro pero sin
el halo metlico.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

METODO DE SIEMBRA

En el caldo de Tetrationato se siembra una porcin de heces con el asa de inoculacin, luego
con otra porcin de heces hacemos suspensin de solucin salina y a partir de esta suspensin
sembramos en agar bismuto sulfito y en SS por agotamiento, en el cual colocamos en el asa
una gota de suspensin que contienen las heces.

Se debe incubar en medio de cultivo:

- Bismuto sulfito: 48 horas a 37c


- SS: 24 horas a 37c

Si no existe crecimiento de bismuto sulfito y SS se recomienda efectuar otras siembras pero a


partir del caldo de tetrationato el cual se incuba por 24 horas a 37c.

En caso de haber crecimiento se forman 3 colonias de las mas aisladas de cada uno de los
medios de cultivo. Estas se las trasladan al agar TSI y se hace lo que se conoce como siembra
mixta.

Primero se clava en el fondo del agar TSI con la aguja de inoculacin y luego sucesivamente
se clava en la superficie inclinada.

En la lectura del TSI se considera: superficie, profundidad, presencia o no de SH2 y gas


de fermentacin.

Superficie: Acida (amarilla), Alcalina (roja o fucsia)


Profundidad: Acida (amarilla), Alcalina (roja o fucsia)
SH2: Se observa negro si es positivo
Gas de fermentacin: presencia de grietas si es positivo

Salmonella Typhi en SS: TRANSPARENTE

E. Coli: FUCSIA EN MCCONCKEY

ANTIBIOGRAMA
METODO DE KIRBY-BAUER MODIFICADO

Procedimiento:

Se utilizan enterobacterias o cualquier bacteria patgena de fcil crecimiento.


Se procede a leer segn las tres categoras:
1. Sensible: no hay crecimiento de colonias alrededor del
antibitico, es decir que no hay colonias dentro del halo debido
a que el metabolismo de la bacteria no se ve afectado.
2. Intermedio: no habr crecimiento por dentro pero si en el lmite
del halo del antibitico.
3. Resistente: presencia de colonias en el halo del antibitico.

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MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

REACCIONES BIOQUIMICAS
Son reacciones que ayudan a identificar bacterias que no pueden ser identificadas por
microscopio y que depende de ciertos patrones de caractersticas pertenecientes a cada tipo
de bacteria.

- Si en el primero observamos lleno de lquido el tubito ms chiquito jaja NO hay gas, si


ese mismo esta vaco SI hay gas.
- Si se observa de color rojo o fucsia es POSITIVO
- Si es incoloro es NEGATIVO
- En el tubo INDOL se evala si es positivo o no, y si hay presencia de SH2. Si hay
presencia de SH2, el papel que se encuentra en la parte superior se ve quemado.
- En el agar Citrato, cuando es azul es positivo y cuando es verde es negativo.
- En el agar Urea, cuando es fucsia o rasado es positivo y cuando es meln es negativo.
- En el agar rojo de metilo, cuando posee su tercio superior rojo es positivo y cuando
solo es amarillo es negativo.
- En el agar Motilidad observamos presencia de movimiento cuando es de color negro o
simplemente hay una especie de torbellino en el centro.

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