Bacteriologia PRACTICA

MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA
INSTRUMENTOS MATERIAL DE VIDRIO Y APARATOS DE USO

FRECUENTE EN BACTERIOLOGA
ASA DE INOCULACI N
Posee un mango de KOLLE revestido de ebonita (caucho), que sirve como aislante del calor
para proteger al manipulador. Termina en asa (bolita) y sirve para tomar la muestra que se
usar en el medio de cultivo.
AGUJA DE INOCULACION
Es un instrumento semejante al anterior, con la diferencia de que el alambre es recto. Se lo

utiliza especialmente para cultivos de profundidades.
PIPETA GRADUADA
Instrumento graduado que sirve para aspirar cantidades especficas de lquidos y transferirlo
de un recipiente a otro. Tiene un filtro arriba que hace que el lquido pipeteado no contamine la
boca, y que la boca no contamine el lquido pipeteado.
CAJA PETRI
Es un recipiente redondo de vidrio o plstico donde se almacenan los medios de cultivo solidos
sobre los cuales se van a efectuar siembras bacterianas. Mide 9 mm.
TUBOS DE ENSAYO
Instrumento no graduado que almacenan los medios de cultivo semislidos o lquidos al igual
que agua destilada.
TUBOS DE DURHAM
Tubos de gas de fermentacin, es mas pequeo que el de ensayo. Sirven para comprobar si el
cultivo es fermentador o no de gas.
LAMINAS PORTA- OBJETO
Estas lminas de vidrio son de borde romo y sirven para depositar en ellas el material o
observarse al microscopio.
LAMINILLAS CUBRE-OBJETO.
Cubre la muestra para ser observadas en fresco, lo que permite una distribucin uniforme del
material y a la vez impide que se contamine el lente del microscopio.
VASO DE PRECIPITACION
Es un instrumento graduado de vidrio, metal o de un plstico en especial que sirve para

preparar los medios de cultivo. Protege al elemento del calor.
ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

MATRAZ
De base plana, es cnico. Tiene un tbulo redondeado hacia arriba. Sirve para el transporte de
la muestra.
FIOLA
Base plana no cnica. Al igual que el matraz tiene un tbulo redondeado hacia arriba pero ms
alargado. Sirve para el transporte de muestras.
KITAZATO
Base plana cnica con una protuberancia en su tbulo en la parte superior. Sirve como bomba
al vaco.
BALON
No posee una base plana. Tiene un tbulo en la parte superior y un cuerpo esfrico. Sirve para
el transporte de una sustancia.
PROBETA
De vidrio, graduado, volumtrico y de base pentagonal. Sirve para medir una cantidad exacta
de agua destilada necesaria para la preparacin de los medios de cultivo.
FRASCO GOTEROS
Sirve para el almacenamiento de colorantes que sern usados en los medios de tincin. En la
tapa tiene un canal por donde sale el colorante.
MECHEROS DE GAS
Utilizado para la esterilizacin de elementos que se vayan a usar. Tiene una llama mas firme y
potente.
MECHEROS DE ALCOHOL
Al igual que el de gas es usado para esterilizar elementos a usar pero este no posee una llama
tan firme.
VASOS DE COPLIN
De vidrio con base redonda. Sirve para almacenar sustancias como el Xilol el cual es utilizado
para limpiar las placas que contienen aceite de inmersin.
ACEITE DE INMERSION
Sirve para observar las bacterias en lente de 100x. Esta hecho de cedro.
HORNOS E INCUBADORAS
Las incubadoras Sirven para obtener una temperatura de 37c, temperatura adecuada para
toda vida bacteriana.
Los hornos brindan una temperatura de 100 a 140c por lo cual se los llama Hornos Pasteur.

AUTOCLAVE
Esterilizacin de instrumentos que han sido contaminados. Se lo realiza a temperatura de

121c por 15 minutos.
PERLAS DE VIDRIO
Son redondas y sirven para la desfibrinacin de la sangre.
TOMA, TRANSPORTE, ALMACENAMIENTO Y TRATAMIENTO

DE LAS MUESTRAS
GENERALIDADES
Cualquier muestra debe estar libre de contaminantes.

Los contaminantes crecen mejor que las bacterias patgenas.
Los contaminantes opacan el crecimiento de las bacterias que se desea investigar e
impiden crecimiento.
REGLAS GENERALES PARA EL TOMO ADECUADO DE MUESTRA
Debe tomarse la muestra en el sitio anatmico apropiado y en lo posible antes de

iniciar el tratamiento con antibiticos.
Debe tenerse en cuenta la etapa de la enfermedad, pues de ella depende la
localizacin de la bacteria en cierta rea o espcimen.
La muestra deber ser obtenida en cantidad suficiente.
Los recipientes en donde se depositan las muestras deben ser qumica y
biolgicamente estriles.
TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS
Las muestras por lo general deben ser analizadas en el laboratorio lo ms pronto

posible luego de haber sido obtenidas. (1 hora)
Los recipientes deben ser protegidos contra roturas y fugas.
El tiempo que dure el transporte es sumamente importante debido a que los patgenos
que podran estar en la muestra pueden tomarse no viables si este es problongado y
tambin porque las bacterias no patgenas pueden ganar en crecimiento o las
patgenas. (Medio de Stuart).
MANEJO DE DIVERSOS TIPOS DE MUESTRAS
SANGRE
La piel debe ser limpiada cuidadosamente con tintura de yodo al 3.5%, con una
solucin de etanol al 70%. Alcohol isopropilico al 70-95%.
Uso de guantes, aplicacin de un torniquete y localizacin de una vena fija para la
palpacin.

Se deja secar bien el alcohol para no introducir nada de l a la aguja y por lo tanto en la
muestra.
Una vez desinfectada la piel no debe palparse la vena a puncionar.
El volumen de la muestra vara acorde a la edad.
Neonatos: 0.5 a 1ml- Jvenes 10ml, - Adultos 20 ml
La mitad de la muestra se coloca en un tubo para cultivo aerbico y la otro mitad en un
tubo para cultivo anaerbico.
Debemos recordar que ciertas sustancias coagulantes de la sangre tienen accin
bactericida o bacteriosttica cuando se utiliza sangre completa.
Por lo tanto se recomienda utilizar 3 ml de una solucin de citrato sdico al 2% a 1 mg
de heparina por 10 ml de sangre.
La sangre debe transportarse rpidamente al laboratorio y sembrarlo, debido a que la
sangre completa se desintegra rpidamente y se torna muy eficaz como agente
antibacteriano.
ORINA
Debe obtenerse la primera orina de la maana por ser ms concentradas.

El primer chorro debe descartarse, y el chorro intermedio introducir directamente en
un frasco esterilizado y hermticamente tapado.
En la mujer lo ideal es que se obtengan muestras cateterizadas, y de no ser posible
debe practicarse previamente a la toma de la muestra, un lavado de los genitales
externos; y al momento de recolectar la orina intermedia deben separarse los labios
mayores de la vulva.
TIPOS DE MUESTRA
Mtodos Invasores Mtodos no Invasores
Orina de 2do chorro Orina por

Puncin Supra pblica Cateterizacin
recolectar
vesical

DETERMINACION VOLUMEN COMENTARIOS
BACTERIAS 0.5-1 Primera orina de la maana

HONGOS >20 Primera orina de la maana
MYCOBACTERIAS >20 Primera orina de la maana tres das consecutivos
ANAEROBIOS 1 Aspirado supra pblico enviar en un sistema de
trasporte para anaerobios.
VIRUS 10-15 Primera orina de la maana, enviar con hielo y
transporte al laboratorio inmediatamente.
PARSITOS Orina de 24 horas
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
Depositar la muestra en un recipiente bien tapado y mantener el lquido caliente

durante el transporte. Se puede usar el calor del cuerpo de una mano o colocando el
tubo en un vaso de agua tibia. (evitar temperaturas inferiores a los 35C)
Una vez obtenida la muestra debe centrifugarse a 1.500 rpm durante 10 minutos.
Luego se siembra rpidamente si sedimento en un medio adecuado.
MUESTRA DE HERIDAS EXPUESTAS
La muestra debe recolectarse con un hisopo estril o con aspirado mediante aguja y
jeringuilla desde el rea mas hmeda.
Las bacterias del centro absoluto pueden no ser viables, por lo que se prefiere obtener
cultivos de la periferia, donde los microorganismos son ms viables y activos, (pliegues
interno y externo).
Eliminar cuidadosamente el aire de la jeringuilla despus de la recoleccin.
MUESTRA DE REA GENITAL
En los hombres puede obtenerse muestras de la uretra inflamada.

En las mujeres existen diversas reas que puedan ser afectadas.
Todos los hisopados deben ser sembrados inmediatamente en agar chocolate o en
medio de Thayer Martin.
Cuando no es posible hacerlo inmediatamente se sumerge el hisopo en el medio de
Stuart en donde incluso hasta el gonococo sobrevive 48 horas.

ESPUTO
El mejor momento para la recoleccin del esputo es por la maana muy temprano.
El paciente debe proporcionar la muestra para la cual debe traer directamente sobre un
recipiente estril, informndole que lo importante es el esputo propiamente dicho antes
que la saliva.
Cuando hay tos no productiva, el empleo de vapor nebulizando puede ayudar a obtener
la muestra.
Si el esputo es muy viscoso puede agregrsele unos pocos milmetros de solucin
salina estril, luego se agita ligeramente sin formas aerosoles.
Esta ligera agitacin ser suficiente para desprender suficientes bacterias, bastando
con efectuar la siembra de una gota de la suspensin con el asa de inoculacin en el
medio de cultivo respectivo.
Pacientes ancianos: nebulizacin previa.
Pacientes inconscientes: Broncoscopia
HECES FECALES
Se recomienda no recoger las heces desde la taza del retrete; lo mas aconsejable
es que el paciente tome su propia muestra defecando directamente en un
recipiente estril de cartn encerado.
Cuando no puede obtenerse excrementos, debe practicarse hisopados rectales, no
anales, y el hispo se coloca luego en un tubo estril topando con algodn y
conteniendo medio de transporte.
MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un conjunto de sustancias que brindan a la bacteria condiciones
necesarias para su desarrollo y formacin de colonias
Colonias.- conjunto de bacterias que forman manchas o puntos visibles en un medio de cultivo
y la cual constituye la descendencia de una sola bacteria, tienen caractersticas que van de
acuerdo a:
- Consistencia: viscosa o mucoide

- Trasparencia: translucidos u opacos
- Capacidad de hacer o no pigmentos
Respecto de sta ltima, las colonias pueden producir los mas variados colores, entre los que
tenemos
1. Amarillo dorado (Estafilococos aureus);

2. Amarillo verdoso (Micrococcusluteus);
3. Rojo (Serratia marcescens);
4. Blanco (Estafilococcus Epidermidis).

CONDICIONES QUE DEBE REUNIR UN MEDIO DE CULTIVO.
1. Tener un contenido nutritivo adecuado para que la bacteria se desarrolle.

2. PH alcalino ente 7 y 7,8.
3. Recolectado en recipientes adecuados y estriles.
PRINCIPALES OBJETIVOS DE UN MEDIO DE CULTIVO.
1. Obtener cultivos puros, para estudiar las bacterias y mantenerlas vivas

indefinidamente.
2. Observar el aspecto de las colonias a simple vista o con pequeo aumento, con fines
diagnsticos.
3. Obtener cantidades apreciables de bacterias para fines industriales: como la
elaboracin de vacunas y antgenos para reacciones de aglutinacin.
4. Facilitar el hallazgo de las bacterias en un producto patolgico.
5. Estudiar la fisiologa de las bacterias.
6. Estudiar la toxignesis y las cualidades de las toxinas.
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Sencillo
a) Medios naturales.- Son aquellos que no han sido creados artificialmente por el
hombre: liquido asctico, papa, leche, etc.
b) Medios artificiales.- Son aquellos elaborados por el hombre agar sangre, agar
chocolate.
Consistencia: consistencia los medios de cultivos pueden clasificarse en:
a) Solidos
b) Semislidos
c) Lquidos.
- Cuando no se tiene agar hay medios de cultivo lquidos como el agua de peptona.
- Con el agar al 1% se obtienen medios de cultivo semislidos.
- Con el agar al 1,5% se obtienen medios de cultivo slidos.
- El agar tiene un gel transparente similar a la gelatina.
- La incubacin de las bacterias es a 35c y el de la gelatina es 25c, por eso no se la
usa porque se hace liquida.
Otros.
Bsicos:
Formados por extractos de carne, peptona, sal y agua. Brinda vitaminas a las bacterias, sal y
pequeas cantidades de oligoelementos.
o La sal ms usada es el NaCl.

o Se usa agua destilada y no de la llave porque puede contener cobre
impidiendo as el desarrollo de algunas bacterias.
o Ejemplo: Agar nutritivo profundo.

Enriquecidos:
Son los mismos medios de cultivos bsicos a los cuales han sido agregados lquidos
corporales y vitaminas.
o Ejemplo: Agar sangre
Selectivos: Mismos medios de cultivos bsicos o enriquecidos que se le ha agregado

sustancias que impiden el crecimiento de sales biliares. Puede favorecer al crecimiento de
otras bacterias.
o Ejemplo: Agar McConckey que permite el crecimiento de bacterias Gram

negativas e inhibe el crecimiento de las bacterias Gram positivas.
Diferencial: Se les ha agregado un indicador de Ph como el azul de bromotinol los cuales

ejercen un cambio de color al medio de cultivo segn su ph.
o Ejemplo: Agar citrato, Agar urea.
Enriquecimiento: Medios de cuktivo enriquecidos. Continen sustancias inhibidoras con el que

se ve un medio favorable para determinadas bacterias.
Especiales: M.C que no han sido catalogados como los anteriores por ejemplo Medio de ENJH
para el crecimiento de leptospira.
EN TUBOS DE ENSAYO
Solidos
Agar nutritivo inclinado

Agar nutritivo profundo
- Para bacterias no exigentes de su requerimiento nutritivo
Medio de Lowenstein Jensen

- Es de color verde. Crecimiento de bacilo de Koch
Agar TSI
- Aislamiento de bacterias y para saber si las bacterias son fermetadoras o no se
glucosa y sacarosa, para observar si la bacteria es capaz de producir acido sulfrico y
gas de fermentacin.
Agar citrato
- Para bacterias cuya fuente de enrgia es el carbono.
Agar urea
- Para bacterias que usan el nitrgeno como fuente de enrgia.
Agar pie o huevo

- Se utiliza para el crecimiento de bacilo diftrico.

Semislidos
Agar motilidad
- Sirve para ver si la bacteria tiene o no movimiento.
Lquidos
Caldo nutritivo
- Para bacterias que no son exigentes de requerimiento nuritivo.
Agua de peptona
- Sirve para demostrar si la bacteria es capaz de producir indol.
Caldo de tetrationato
- Crecimiento de bacterias intestinales inhibiendo el crecimiento de aquellas que no son
habitantes en el intestino.
En caja de Petri
Agar sangre
- Se lo utiliza para saber si la bacteria produce o no hemolisis
Agar chocolate
- Crecimiento de gonococo y meningococo
Agar SS (salmonella-shigella)
- Para cultivo de Salmonella y Shigella
Agar McConckey
- Crecimiento de Gram e impide el crecimiento de Gram +
Agar Muller Hinton

- Para las pruebas de antibiograma. Susceptibilidad o resistencia de las bacterias ante
antibiticos.
Agar Bismuto sulfito

- Se usa para el crecimiento de Salmonella typhi y otros.

OBSERVACIN EN FRESCO Y TINCIN SIMPLE

Pigmento bacteriano
- Profundidad: Pigmento pioceanico

- Superficie: Amarillo dorado- Estafilococos aureus
Blanco- Estafilococos epidermidis
Rojo- Serratia marcescens
Amarillo limn- Micrococo lutius
El medio en fresco se realiza sin colorantes.
Ventaja.- Permite ver a la bacteria en movimiento en el campo del microscopio. No se debe

confundir el movimiento de las bacterias con los movimientos bromianos.
No vemos deformaciones cuando el frotis de la bacteria se fija a la llama.
Desventajas.- Se seca de manera rpida.
No se puede ver estructuras especiales como por ejemple flagelos y esporas.
Tcnica
Se realiza entre lmina y laminilla. Se coloca de 4 a 5 gotas de suspensin bacteriana en el

centro del portaobjeto con lente de 10x y 40x.
- Bacilos suptilis.- poco motil

- Proteus.- se mueve ms
- Estafilococo.- no tiene movimiento
Mtodos de tincin
Simple: un solo colorante
- Violeta de genciana: se cubre por un minuto, se lava con agua y se seca con papel
filtro
- Azul de metileno: se cubre por un minuto, se lava con agua y se seca con papel filtro.
Compuesta: se usa ms de un colorante a la vez.

TINCIONES COMPUESTAS
Tincin compuesta de Preston Morrel para bacterias Gram positivas y

Gram negativas.
1. Aplicar oxalato de amonio de cristal violeta por 30 segundos.

2. Aplicar yodo lugol el cual sirve para que se fije el oxalato de amonio, y dejar actuar por
30 segundos.
3. Lavar completamente con Iodo acetona y dejar actuar por 30 segundos.
4. Lavar con agua.
5. Aplicar carbol fucsina diluida durante 30segundos.
6. Lavar con agua.
7. Secar con papel filtro y observar con lente de 100x.
Resultados:
Gram positivos: Morado

Gram negativos: Rosado
Tincin compuesta de Ziehl Neelsen para bacterias BAAR y NO BAAR.
1. Inundar el frotis con carbol fucsina fuerte y calentar hasta la emisin de vapores por 5
minutos.
2. Lavar con agua.
3. Decolorar con cido hidroclrico al 3% hasta eliminar el exceso de carbol fucsina.
4. Lavar con agua.
5. Contrastar con azul de metileno durante un minuto.
6. Lavar con agua, secar con papel filtro y observar en lente de 100x.
Resultados:
1. BAAR: Rojo
2. NO BAAR: Azul

P L A C A S
ESTAFILOCOCO
- forma de racimo de uva. Mide de 0,5 a 1,5 um de dimetro.

- Se tie por el mtodo de Preston Morrell
- Se diagnostica mediante la prueba de la coagulasa.
Prueba de la coagulasa.- principal prueba para el diagnstico de los estafilococos aureus.
TECNICAS DE LA PRUEBA DE LA COAGULASA
Coagulasa en placa
- Consiste en colocar en una placa, una gota de suspensin + 0.5 ml de plasma de

conejo, con movimientos circulares.
- Si es coagulasa positivo aparecen grumos blancos.
- Si los grumos aparecen antes de aadir el plasma quiere decir que estaba
contaminado.
- Si no se forman grumos se hace la segunda prueba.
Coagulasa en tubo
- Al plasma de conejo se le aade un cultivo solido de 18-24 horas o 0.1 ml de un cultivo

lquido.
- Se incuba en bao mara en 37c y se examina cada 30 minutos durante 4 horas para
ver la formacin de cogulos.
- Si no se forman lo cogulos en 4 horas se lo realiza en 6 horas.
- Si en 24 horas no aparece el coagulo es Coagulasa negativa.
BACILOS SUPTILIS
- Es Gram +
- Se tie de morado por el mtodo de Preston Morrell
MICROCOCCUS LUTEUS
- Gram +
- Diplococo en parejas o ttradas
- Se puede ver un haz de luz de 1 a 2 micras
- Es viscoso negativo
- Se lo puede relacionar como contaminante de cultivo y produce endocarditis
- Se tie de morado por Preston Morrell

GONOCOCO
- Gram
- Se tie d rosado por Preston Morrell
- Se lo ve individual o en pares
- Mide de 0,6 a 1 micra de dimetro
- Ejemplo: Neisseria Gonorrhoeae
STREPTOCOCO
- Gram +
- Mide de 0.6 a 1 micra de dimetro
- Forma de cadena
VIBRIO
- Es un bacilo (Clera)
- Gram
- Se tie de rosado palido por Preston Morrell
- Mide de 1,5 a 3 micras de longitud
- Es un bastoncillo curvo con forma de coma
ENTEROCOCO
- Es un coco Gram +
- Mide de 0,5 a 1 micra de dimetro
- Se lo encuentra en forma de diplococo
- Ejemplo: Shigella
TINCION DE PARED CELULAR (BASILOS SUPTILIS)
- 1) Se prepara un frotis relativamente concentrado

- 2) No se fija a la llama
- 3) Antes de que la suspensin bacteriana se seque, se lo cubre con cido
Fosfomolibdico (hidroliza el citoplasma sin afectar la pared) y se deja reaccionar por 4
minutos.
- 4) Inclinar la placa para deja drenar el acido
- 5) Agregar verde de metilo sobre el frotis hmedo durante 5 minutos.
- 6) Lavar con agua evitando desprende mucho colorante y se lo seca al aire sin papel
filtro.
COLORANTE USADO: VERDE DE METILO

TINCION DE CAPSULA POR EL MTODO DE TINTA CHINA
- 1) Se hace un frotis delgado del material

- 2) Se lo seca al aire y se lo fija suavemente en la llama
- 3) Colocar una gota de tinta china y extenderla con la laminilla cubre objeto
- 4) Se lo deja secar al aire
- 5) Teir con Safranina durante un minuto
- 6) se lava con agua, se seca y se observa con aceite de inmersin.
COLARANTE USADO: SAFRANINA
RESULTADOS:
Espacios incoloros: Capsula
Cuerpo bacteriano: Rojo
Fondo negro
BACILOS GRAM
- Bacilos que se tien de rosado por Preston Morrell

- Ejemplos: Proteus, Klebsiella, Rickettsia
TINCION DE ESPORAS POR EL MTODO DE WIRTZ CONKLIN
- Frotis delgado, fijar a la llama

- Cubrir con suspensin acuosa de verde de malaquita al 5%
- Se calienta durante 5 minutos
- Se lava con agua y se tie con safranina durante un minuto
- Se lava, se seca y se observa el frotis con aceite de inmersin
COLORANTES USADOS: SAFRANINA Y VERDE DE MALAQUITA AL 5%
RESULTADOS:
Esporas: verdes
Cuerpo bacteriano: rosado
TINCION DE ESPORAS POR EL MTODO DE ZIEHL NEELSEN
COLORANTES USADOS: CARBOL FUCSINA FUERTE Y AZUL DE METILENO
RESULTADOS:
Esporas: rojas
Cuerpo bacteriano: azul

BACILO DE KOCH POR ZIEHL NEELSEN
- Es una bacteria alcohol acido resistente (BAAR)

- Se lo observa de color rojo
COLORANTES USADOS: CARBOL FUCSINA FUERTE Y AZUL DE METILENO
TINCION DE ESPORAS POR EL MTODO DE FLEMING MODIFICADO

- Se coloca carbol fucsina fuerte y se calienta por 5 minutos
- Se lava con agua
- Se decolora con cido hidroclrico
- Se lava nuevamente
- Se extiende una gota de tinta china con el cubre objetos y se deja secar
COLORANTES USADOS: CARBOL FUCSINA FUERTE
RESULTADOS:
Esporas: rojas
Cuerpo bacteriano: incoloro
Fondo negro
LEPTOSPIRA POR EL MTODO DE ROJO CONGO
- Fondo azul
- Tiene un centro brillante en espiral
- Se ve en forma de ondas y grietas
BACILO DIFTRICO POR MTODO DE PRESTON MORRELL
COLORANTES USADOS: OXALATO DE AMONIO DE CRISTAL DE VIOLETA Y CARBOL

FUCSINA DILUIDO.
RESULTADO: Se lo observa como acmulos
U R O C U L T I V O
Diagnostico bacteriolgico de las infecciones urinarias.
- La orina es asptica aunque es un caldo nutritivo excelente para contaminarse con

bacterias saprofitas de la prstata, prepucio y heces fecales en caso de nios.
- Para tomar una muestra de orina en bebes se debe sondear.
Bacteriuria: Presencia o multiplicacin de bacterias en la orina.

Contaminacin: Bacterias que han penetrado accidentalmente a la orina generalmente al

momento de recolectar la muestra.
Contagio bacteriano: Es la determinacin de la cantidad de bacterias que existen por

centmetro cubico de orina.
Por encima de 100.000 bacterias por cc de orina, demuestra una infeccin.

Debajo de 10.000 es orina normal.
Entre 10.000 y 100.000 es contaminacin.
Forma de recoleccin:
El paciente no debe tomar antimicrobianos 24 horas antes de la toma de muestra. Hay que
recolectar la primera orina de la maana y de esa dividir el primer chorro en tres. De esa
divisin se toma el chorro de en medio. En un frasco estril y hermticamente cerrado.
Si no se toma inmediatamente la muestra hay que refrigerar.
METODO
- Se coloca 5 tubos de ensayo y se hace dilucin.

1/10 1/100 1/1.000 1/10.000 1/100.000
- 1/10: primer tubo con la muestra de orina y 9cc de solucin salina.

- 1/100: segundo tubo con 1cc del primer tubo y 9cc de solucin salina.
- 1/1.000: tercer tubo con 1cc del segundo tubo y 9cc de solucin salina.
- 1/10.000: cuarto tubo con 1cc del tercer tubo y 9cc de solucin salina.
- 1/100.000: quinto tubo con 1cc del cuarto tubo y 9 cc de solucin salina.
Se toma 5 cajas de Petri y se coloca 1cc de cada tubo.
Se usa tripticasa fundida, esta se deja enfriar hasta 45c y se coloca de 10-15 cm3 en cada
caja y se deja enfriar de 15-20 minutos.
Si no hay tripticasa fundida se puede usar Muller Hinton tibio.
Una vez entibiado coge una consistencia dura.
Se lo deja a una temperatura de 34c entre 24 a 48 horas para que crezca la bacteria.
Una vez pasada las 48 horas se procede a la lectura de acuerdo a la cantidad de colonias que
encontremos.
Se recomienda contar las colonias en 1/1000 y 1/10.000

Si se encuentran 50 colonias en 1/1000 se le aumentan los ceros, es decir tendramos
50.000 bacterias por cm3.
Si se llega a 1/100.000 y las bacterias siguen concentradas y no se pueden ver se
denomina INCONTABLE NUMERO DE BACTERIAS POR CM3

BACTERIAS EN INFECCION
- E. Coli
- Proteus
- Pseudomona aeruginosa
- Enterococo
- E. Aureus
- Estreptococo betahemolitico
BACTERIAS EN CONTAMINACION
- E. Epidermidis
- Difteroides
- Estreptococo alfahemolitico
- Levaduras
COPROCULTIVO
Es la siembra apropiada de una muestra apropiada de heces en un medio de cultivo en donde
crecen bacterias intestinales patgenas.
Muestra apropiada:
Cuando se encuentra en suficiente cantidad

Cuando es tomada en la fase aguda de la enfermedad
Antes de que se administren antibiticos
Para tomar muestras se usan porcin de heces frescas o hisopado rectal el cual consiste en
introducir el hisopo 4 o 5 cm en el recto.
MEDIO DE CULTIVOS UTILIZADOS: Caldo de Tetrationato
MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO
Se le aade 0,2 cc de solucin de yodo yodurada. Esta sustancia se combina con el Tiosulfato
de sodio que contiene el medio transformado a su vez en Tetrationato de sodio, que inhibe el
crecimiento de la mayor parte de bacterias intestinales.
Caldo de tetrationato: Salmonella
Agar SS: Salmonella, Shigella
- LAS COLONIAS APARECEN INCOLORAS PORQUE NO FERMENTAN LACTOSA.
- CUALQUIER OTRO TIPO DE BACTERIA QUE FERMENTE LACTOSA LA COLONIA

APARECE ROJIZA.
Agar Bismuto sulfito: en este medio, las colonias de Salmonella Typhi aparecen negras
rodeado de un halo metlico brillante. Otras aparecen de un tono verde oscuro o negro pero sin
el halo metlico.

METODO DE SIEMBRA
En el caldo de Tetrationato se siembra una porcin de heces con el asa de inoculacin, luego
con otra porcin de heces hacemos suspensin de solucin salina y a partir de esta suspensin
sembramos en agar bismuto sulfito y en SS por agotamiento, en el cual colocamos en el asa
una gota de suspensin que contienen las heces.
Se debe incubar en medio de cultivo:
- Bismuto sulfito: 48 horas a 37c

- SS: 24 horas a 37c
Si no existe crecimiento de bismuto sulfito y SS se recomienda efectuar otras siembras pero a

partir del caldo de tetrationato el cual se incuba por 24 horas a 37c.
En caso de haber crecimiento se forman 3 colonias de las mas aisladas de cada uno de los
medios de cultivo. Estas se las trasladan al agar TSI y se hace lo que se conoce como siembra
mixta.
Primero se clava en el fondo del agar TSI con la aguja de inoculacin y luego sucesivamente
se clava en la superficie inclinada.
En la lectura del TSI se considera: superficie, profundidad, presencia o no de SH2 y gas

de fermentacin.
Superficie: Acida (amarilla), Alcalina (roja o fucsia)

Profundidad: Acida (amarilla), Alcalina (roja o fucsia)
SH2: Se observa negro si es positivo
Gas de fermentacin: presencia de grietas si es positivo
Salmonella Typhi en SS: TRANSPARENTE
E. Coli: FUCSIA EN MCCONCKEY
ANTIBIOGRAMA
METODO DE KIRBY-BAUER MODIFICADO
Procedimiento:
Se utilizan enterobacterias o cualquier bacteria patgena de fcil crecimiento.

Se procede a leer segn las tres categoras:
1. Sensible: no hay crecimiento de colonias alrededor del
antibitico, es decir que no hay colonias dentro del halo debido
a que el metabolismo de la bacteria no se ve afectado.
2. Intermedio: no habr crecimiento por dentro pero si en el lmite
del halo del antibitico.
3. Resistente: presencia de colonias en el halo del antibitico.

REACCIONES BIOQUIMICAS
Son reacciones que ayudan a identificar bacterias que no pueden ser identificadas por
microscopio y que depende de ciertos patrones de caractersticas pertenecientes a cada tipo
de bacteria.
- Si en el primero observamos lleno de lquido el tubito ms chiquito jaja NO hay gas, si

ese mismo esta vaco SI hay gas.
- Si se observa de color rojo o fucsia es POSITIVO
- Si es incoloro es NEGATIVO
- En el tubo INDOL se evala si es positivo o no, y si hay presencia de SH2. Si hay
presencia de SH2, el papel que se encuentra en la parte superior se ve quemado.
- En el agar Citrato, cuando es azul es positivo y cuando es verde es negativo.
- En el agar Urea, cuando es fucsia o rasado es positivo y cuando es meln es negativo.
- En el agar rojo de metilo, cuando posee su tercio superior rojo es positivo y cuando
solo es amarillo es negativo.
- En el agar Motilidad observamos presencia de movimiento cuando es de color negro o
simplemente hay una especie de torbellino en el centro.

Bacteriologia PRACTICA

Caricato da

Informazioni sul documento

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

Bacteriologia PRACTICA

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

MELANIE SALAS MOREIRA *_* BACTERIOLOGA PRCTICA

INSTRUMENTOS MATERIAL DE VIDRIO Y APARATOS DE USO

Es un instrumento semejante al anterior, con la diferencia de que el alambre es recto. Se lo

LAMINAS PORTA- OBJETO

Es un instrumento graduado de vidrio, metal o de un plstico en especial que sirve para

ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

Esterilizacin de instrumentos que han sido contaminados. Se lo realiza a temperatura de

Son redondas y sirven para la desfibrinacin de la sangre.

TOMA, TRANSPORTE, ALMACENAMIENTO Y TRATAMIENTO

Cualquier muestra debe estar libre de contaminantes.

REGLAS GENERALES PARA EL TOMO ADECUADO DE MUESTRA

Debe tomarse la muestra en el sitio anatmico apropiado y en lo posible antes de

TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS

Las muestras por lo general deben ser analizadas en el laboratorio lo ms pronto

MANEJO DE DIVERSOS TIPOS DE MUESTRAS

ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

Debe obtenerse la primera orina de la maana por ser ms concentradas.

Mtodos Invasores Mtodos no Invasores

Orina de 2do chorro Orina por

ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

DETERMINACION VOLUMEN COMENTARIOS

BACTERIAS 0.5-1 Primera orina de la maana

Depositar la muestra en un recipiente bien tapado y mantener el lquido caliente

MUESTRA DE HERIDAS EXPUESTAS

MUESTRA DE REA GENITAL

En los hombres puede obtenerse muestras de la uretra inflamada.

ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

- Consistencia: viscosa o mucoide

1. Amarillo dorado (Estafilococos aureus);

ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

CONDICIONES QUE DEBE REUNIR UN MEDIO DE CULTIVO.

1. Tener un contenido nutritivo adecuado para que la bacteria se desarrolle.

PRINCIPALES OBJETIVOS DE UN MEDIO DE CULTIVO.

1. Obtener cultivos puros, para estudiar las bacterias y mantenerlas vivas

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Consistencia: consistencia los medios de cultivos pueden clasificarse en:

o La sal ms usada es el NaCl.

ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

o Ejemplo: Agar sangre

Selectivos: Mismos medios de cultivos bsicos o enriquecidos que se le ha agregado

o Ejemplo: Agar McConckey que permite el crecimiento de bacterias Gram

Diferencial: Se les ha agregado un indicador de Ph como el azul de bromotinol los cuales

o Ejemplo: Agar citrato, Agar urea.

Enriquecimiento: Medios de cuktivo enriquecidos. Continen sustancias inhibidoras con el que

Agar nutritivo inclinado

Medio de Lowenstein Jensen

Agar pie o huevo

ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

Agar Muller Hinton

Agar Bismuto sulfito

ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

OBSERVACIN EN FRESCO Y TINCIN SIMPLE

- Profundidad: Pigmento pioceanico

El medio en fresco se realiza sin colorantes.

Ventaja.- Permite ver a la bacteria en movimiento en el campo del microscopio. No se debe

No vemos deformaciones cuando el frotis de la bacteria se fija a la llama.

Desventajas.- Se seca de manera rpida.

No se puede ver estructuras especiales como por ejemple flagelos y esporas.

Se realiza entre lmina y laminilla. Se coloca de 4 a 5 gotas de suspensin bacteriana en el

- Bacilos suptilis.- poco motil

Simple: un solo colorante

Compuesta: se usa ms de un colorante a la vez.

ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN ESTUDIEN

MELANIE SALAS MOREIRA _ BACTERIOLOGA PRCTICA