Diseo Metodolgico

Tipo De Estudio
Esta investigacin fue de tipo descriptivo, de coleccin prospectiva y de corte transversal , con la
finalidad de determinar Microorganismo Aislados en Agua de pozo Tubular en el sector del PLAY (El
abanico) y el barrio Nueva Luz en el Municipio de Tenares, Provincia Hermanas Mirabal , Noviembre
-Diciembre 2016

mbito de Estudio
la presente investigacin se llev a cabo en los sectores el play (el abanico) y el barrio Nueva Luz en el
Municipio de Tenares Provincia Hermanas Mirabal, Repblica Dominicana.

Limitado de la siguiente manera

El pley (El Abanico) se encuentra limitado: a la norte Avenida Duarte, al este Julin Javier, al oeste
ciudad modelo al sur calle Julin Javier Primera, el barrio la Nueva Luz AL Norte la Snchez Abajo, al
este la Duarte, Al oeste la Snchez Abajo, y al Sur el Barrio Cristo Rey.

Tiempo de Realizacin
La investigacin se realiz
En el periodo Noviembre -Diciembre 2016.

Universo y Muestra
El universo estuvo conformado por 98 viviendas en la que viven 312 habitantes en el sector el pley (el
abanico) y el Barrio Nueva Luz formadas por 30 viviendas con 102 habitantes.

Poblacin:
Estuvo conformado por 46 de las viviendas que se utilizaba agua de pozo tubular en el sector el pley (el
abanico) el barrio Nueva Luz conformado por 10 viviendas.

Muestra
Estuvo formado por 12 viviendas seleccionada en puntos estratgico en el sector el Pley (El Abanico ) y
1 0 vivienda del Barrio la Nueva Luz en la que utilizaban agua de pozos tubular en las cuales
entrevistamos a los dueos de dichos hogares.
De esa vivienda realizamos un muestreo en 3 semanas y tomamos muestra de agua de pozos tubular y
tres muestras del agua de acueducto del Sector el Pley (El Abanico) y el barrio La Nueva Luz en el
Municipio de Tenares Provincia Hermanas Mirabal.

Criterios de inclusin
Se incluyeron 22 viviendas 12 del Sector El Pley (El Abanico) y diez del Barrio la Nueva Luz donde
utilizaban el agua de `pozos tubular donde evaluamos la calidad higinico- sanitario de muestra de pozos
tubular y tres muestra del agua del acueducto durante dos semana en los sectores el Pley (El Abanico ) y
la Nueva LUZ

Criterios de exclusin
Todas las viviendas que quedaron fuera de las 22 casas que seleccionamos en ambos barrios y aquellas
que no se utilizaban agua de pozos tubular en el Sector El Pley (El Abanico) y el barrio la Nueva Luz.

Fuente de informacin
La informacin fue recolectada por el levantamiento de los datos a partir de la entrevista y el anlisis
de la muestra, adems, de revisin bibliogrfica, fuentes de entrevista cientfica e internet.

Mtodo, Tcnica y procedimiento de recoleccin de informacin

Se envi una carta de permiso a las autoridades correspondientes, donde obtuvimos el permiso para
realizar la investigacin luego elaboramos un consentimiento informado para los representantes de ambos
barrios donde voluntariamente accedieron a que realizramos la investigacin, la tcnica para la
recoleccin de los datos fue la entrevista y como instrumento analtico en ese mismo orden la toma de
muestra del agua del pozo y del acueducto, el transporte de las mismas bajo refrigeracin de 2 8 C y el
anlisis en el Laboratorio Dr. Herrera Khowry, este proceso tuvo una duracin de tres semanas de 8:00
AM-12:00 PM.

El procedimiento para el transporte fue una nevera playera con bolsas de hielo recubierta con papel
peridico, procedimiento para la siembra bacteriolgica en la determinacin de mesfilos aerobios,
pseudomona aeruginosa y coliformes totales uso el mtodo de identificacin de microorganismos.
A) Instrumentacin
1- Incubadora ajustada de 35+-37 C
2- Termmetro con subdivisiones de 0.2 o menos
3- Mechero
B) Medio de cultivos y reactivos
 1. Caldo de lauryl triptosa broth (LTB)
2. Eosina de metileno azul agar (EMB)
3. Agar macconkey
4. Agar sangre
5. Agar bilis verde brillante
6. Placa de petri

Materiales Y Cristalera
- pipetas de 10.0 y 1.0 ML
EC Medium (ECB)
Eosina Metileno azul lagar (EMB)
Cetrimida
Placa cout Agar
Tubos de cultivo de 18 x 150 mm.con tapa
Tubos de fermentacin o tubos Durham
tubos de 18x150mm
Gradillas
Frascos estriles de 100 Ml para la toma de muestra
Canastos
Tarjetas de control sanitario
Banditas de goma
Papel aluminio, sketch, encerado.
Lapicero
Fsforo o chispero

Procedimiento y toma de muestra:

La recoleccin de muestra necesita especial cuidado, adems, pueden surgir problema
independientemente de la tcnica de muestreo utilizada .para un mejor entendimiento es importante
destacar la relacin entre el tipo de muestras y las determinaciones al realizar porque a menos que se
recolecta muestras vlidas, el trabajo cuidadoso que se lleva a cabo en el anlisis posterior podra resulta
un desperdicio de tiempo.

Agua potable
La muestras de agua fue recolectada en envase de polietileno, .para el anlisis bacteriolgico se necesito
un envase estril que puede ser de plstico o de cristal .
 Muestreo de grifo o salida de una bomba .los pasos que se deben seguir al tomar una muestra de una llave
o de una salida de una bomba se describe en una secuencia que viene a continuacin:
a) abrir el grifo o llave al mximo y dejar correr el agua por 1 o 2 minutos, luego cerrar.
b) esterilizar la llave durante un minuto con la una mota de algodn remojada en alcohol isoproplico al
70 %, como alternativa pueden usarse mechero de gas o un encendedor y si la llaves es plstica
desinfectarla con cloro al 10%.
c) abrir la llave y cuidadosamente y permitir que la llave fluya durante 1 o 2 minutos con un flujo medio.
d) llenar el frasco mientras se mantenga la cubierta protectora hacia abajo (para evitar la entrada de un
agente contaminante portado de microorganismo).
e) dejar un pequeo espacio para facilitar la agitacin antes del anlisis (si es en frasco).
f) colocar la tapa al frasco, enroscado si quitar la cubierta de la misma (papel aluminio), identifica y
guardar en la nevera porttil con hielo.
determinacin de coliformes
1) limpiar y desinfectar la meseta con detergente y agua clorada. encender el mechero.
2) colocar las muestras (previamente recolectada) y colocarla en la meseta con su tarjeta de identificacin
.espera que est a temperatura ambiente para proceder a sembrar.
3) colocar los tubos con el medio de cultivo en la gradilla , en serie de cinco tubos
4) agitar la muestra 25 veces para homogeneizar
5) destapar la muestra, sacar con pipeta correspondiente, 10 ml. de la muestra y depositar en cada uno de los
cincos tubos con l, medio de CALDO DE LAURIL TRIPTOSA.
6) Tapar de inmediato y agitar cuidadosamente los tubos para mezclar
7) en la tarjeta de identificacin anotar fecha y hora de siembra. Colocar esta junto a la muestra.
8) incubar a 35.0+- 0.5 Cpor 48+- 3 horas, recordando que las gradillas tienen que estar separadas de las
paredes de la incubadora. a las 24+- 2 horas, agitar cada muestra suavemente y observar los tubos para
verificar si hay crecimiento bacteriano (produccin de gas en tubos invertido). cualquier cantidad de gas
en dicho tubo significa una prueba presuntiva positiva. si no hay produccin de gas se dejan hasta las
48+- 3 horas ,transcurrido este tiempo ,si no hay crecimiento bacteriano (produccin de gas), se descartan
estas muestras y se reporta el resultado de acuerdo a la tabla (<1.1 NMP/100ml)

9) Los tubos con resultados positivos en el CALDO LAURIL TRIPTOSA, Se inoculan con un asa
bacteriolgica de 3.0 mm . previamente esterilizada en mechero (al rojo vivo), introduciendola pulgada
aproximadamente en el tubo que contiene la muestra contaminada, con la finalidad de tomar una porcin
de muestra transferidas al medio debilis verde brillantepara prueba confirmativa de coliformes totales y al
Medio E.C. para confirmacin de coliformes fecales.
10) incubar la muestra que contiene el BVBB a 35+- 0.5 C por 48+- 3 horas. chequear a las 124 horas, si
esta positiva reportar. en caso contrario, re- incubar hasta completar el periodo de las 48 horas.
11) la muestra que contiene el E.C incubar a 44.5+- 0.2 C por 24 +- 2 horas en bao mara. transcurrido el
tiempo leer y descartar.
nota: EL material descartado con resultados positivo se esteriliza en el autoclave luego se pasa el rea de
lavado y luego se descarta.

Procedimiento para la determinacin de coliformes totales (NMP/100ml)

El mtodo del nmero ms probable fue descrito por Mc Crady en 1915 y actualmente sigue siendo
ampliamente utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para estimar el nmero de
microorganismo en muestras de alimento y aguas.
Formas de siembra
-agua de pozo tubular y del acueducto
-se siembran 15 tubos con 10 ml de CALDO LAURYL TRIPTOSA estril e identificar los tubos como
sigue:
5 tubos P1-1, con 10.0 ml de muestra
5 tubos P1.2, con 1.0 ml de muestra
5 tubos P1-3, con 0.1 ml de muestra
Para reportar calcular en tabla y multiplicar por 1; valor normal : <3.0
-agua tratada: clorada, filtrada, ablandada, coagulada, y embotellada.
-se siembran 5 tubos con 10 ml de CALDO LAURIL estril e identificar los tubos con una tarjeta con
todos los datos de la misma
0/5 tubos positivos =<1.1
1/5 tubos positivos =1.1
2/5 tubos positivos=2.6
3/5 tubos positivos=4.6
4/5 tubos positivos=8.0
5/5 tubos positivos=<8.0
Valor Normal:<1.1
Etapas
-PP o pruebas o prueba presuntiva: Sembrar en caldo lauril sulfato triptosa e incubar por 24 o 48 horas .
-PC o pruebas confirmatorias: tomar los tubos positivos de la PP y sembrar en bilis verde brillante para
coliformes totales y EC medium para coliformes fecales e incubar por 24 a 48 horas a 35 C los totales y
24 horas a 44.5 C los fecales.
recuentos de microorganismos aerobios y mesfilos
equipos y materiales
1 caja de petris de vidrio ( 100x15mm) esteriles.
2pipetas bacteriologicas de 2.2 ml esteriles.
3 bao de agua a 45-50 C.
4 estufa incubadora a 35 ms o menos 2 C.
5 contador de colonias.
6 agar peptona de casena- glucosa extracto de levadura ( conteo de placa de agar).(SPC) solucin
diluyente ( agua peptonada al 0.1%).
Tcnicas
1 preparar la muestra y las diluciones de los homogenizados tal como se ha recomendado.
2 transferir por duplicado alcuotas de 1 y 0.1 ml. de cada una de las diluciones en caja de petri estriles
previamente marcadas.
3 inmediatamente verter en las cajas de 12 -15 ml de reencuentro de laxter agar fundido y mantenido a
46 C
4 inmediatamente mezclar el inculo con el medio fundido.
La manera ms indicada de realizar esta operacin:
a) moviendo la caja de arriba hacia abajo cincos veces.
b)Rotando la caja cinco veces en el sentido de las agujas del reloj .
c) Moviendo la caja cinco veces encontras de las agujas.

Lectura y clculo de los resultados

Seleccionar las dos caja correspondientes a la misma dilucin que presente entre 30 y 300 colonias.
Contar todas las colonias de cada caja. Hallar la media aritmtica de los dos valores y multiplicarla por
factor de dilucin.
Si las cajas de dos diluciones consecutivas presentan recuentos menores de 30 colonias y mayores de 300
colonias, contar las 4 cajas, calcular el reencuentro para casa de una de las diluciones y sacar el
promedio de las dos.
Ejemplo:

350+ 330 6.800

10= =3.400
10-1 a) 330 2 2

b) 350
 26 +28 100 5.400
-2 = =2.700
10 a) 26 2 2

3,400=2,700
=3,050
b) 28 Promedio 2

Recuento total = 3050/g 0 mL segn el producto

Recuento total= 3.0 x 103 UFC/mL

Si no hay colonias en las cajas correspondientes a la dilucin de mayor concentracin, informar el

recuento como menor de uno multiplicando por el factor de dilucin mas concentrado ejemplo:

Ejemplo:

Dilucin 10-1 = Ausencia de colonias

Reportar el recuento como <1.0 x 10 UFC
Si se ha sembrado 0.1 mL <1.0 x 102 UFC

el uso de vitek 2 compact fue para la identificacin cualitativa de los microorganismos el resto fue para el
conteo microbiolgico tradicional por mtodos microbiolgicos convencionales.
1) limpiar y desinfectar la meseta con detergente y agua clorada encender el mechero.
2) colocar la muestra (previamente recolectada ) y colocarla en la meseta. espere que est en temperatura
ambiente para proceder a sembrar.
3) toma la muestra
4) toma la muestra y se incuba por 24 horas a una temperatura de 37 C..luego se procede a la siembra
usando medio de cultivo macConkey para bacterias gram negativas Agar Sangre que crecen en gran
negativo(streptococcus) y billy que crece en clulas levaduriforme .

Luego se incuba la placa de petri a una temperatura de 37 C a un tiempo de 24 horas Y luego podemos
observa el crecimiento preparacin de la suspensin primero se toma una colonia y disovela en 3 ML de
solucin Salina en un tubo- homogeneizar ajustar la densidad ptica con densichek (equipo que mide el
equipo de mcfarland (la turbidez) la escala
GN(gram Negativo) 0.5-0.63McF
GP(gram positivo) 0.5-0.63McF
 YST(Candida) 1.80-2.20 McF

Se toma una tarjeta de identificacin ya sea gram negativas o gram positivo o YST y se coloca un cassette
y se llevar al equipo VITEK 2 COMPACT para la identificacin.

Nota : El material descartado con resultado positivo se esterilizan en el autoclave y luego se descarta .

FORMA DE SIEMBRA
Agua de pozo y Agua del Acueducto.
se siembra en placa de petri por estra.

Determinacin de pseudomonas
se siembra en una placa de petri se incuba a 35,5 C y se leen a las 24 y 48 horas el crecimiento en la placa
se observa con exo pigmentos de color verde se reportan como presentes
Tcnica para determinar el pH y el Cloro
pH
1) enjuagar y llene con agua de la llave el frasco de prueba de pH
2) retire el exceso de agua hasta de llegar a la lnea de llenado.
3) sostenga la botella de rojo de fenol sin tapa verticalmente sobre frasco y agregue 5 gota
4) apriete la tapa del frasco de prueba enviartela Varias veces
5) compare la muestra con el, patrn del color de Ph para la lectura.
6) ajuste el pH que sea necesario
Cloro
1) enjuague con agua de la llave el frasco para prueba de cloro
2) retires el exceso de agua hasta llegar a la lnea de llenado
3) sostenga la botella sin tapa verticalmente sobre frasco de prueba y agregue 5 gota
4) apriete la tapa del frasco de prueba enviartela varias veces
La lectura ideal es 1.0 a 1.5parte por milln ( ppm )
total de alcalinidad (dureza)
1. Llene el frasco grande de la prueba hasta la lnea quebrada.
2.aadir 1 gota de solucin No.4 (2 gotas si la prueba de cloro fue superior a 1,5 ppm) y mezcle bien por
remolino.
3. Aadir 1 gota de la solucin No. 5.
4. Agregue la solucin No. 3 una gota a la vez (girando entre gotas) y contando el nmero de gotas
necesarias para cambiar el color a claro o amarillo claro.
5. multiplicar las gotas de solucin No.3 utilizadas por 10.
rango normal 0-200 ppm
Validez y confiabilidad de los instrumentos

El instrumento de recoleccin de datos ser evaluado por profesionales del rea de ciencias de la salud,
las cuales emitieron opiniones de gran valor y cuyas sugerencias y recomendaciones, sirvieron para
mejorar el mismo.

Procesamiento y anlisis de la informacin

Los datos obtenidos sern analizados y tabulados utilizando los programas microsoft excel 2013 y epi
info 7 y se presentar en cuadros y grficos creados mediante el programa de microsoft word, para mayor
comprensin de la informacin.

Principios ticos se le explicara a todos los participantes que estarn formando parte de un estudio, lo que
fue de manera voluntaria, en el cual solo sern utilizados la informacin que proporcionen y no sus
nombres ni su informacin personal. Los datos recolectados sern utilizados protegiendo la identidad de
los participantes en el estudio se respetaran los principios de beneficencia y no maleficencia autonoma y
consentimiento informado.