UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHO - UFMA

CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLOGIA - CCET

DEPARTAMENTO DE QUMICA
LABORATRIO DE PESQUISA EM QUMICA INORGNICA E ANALTICA - LPQIA

PREPARAO, CARACTERIZAO E PROPRIEDADES DE FILMES DE

COLGENOS E NANOCOMPSITOS DE COLGENO PSCEO (Cynoscion acoupa)

So Lus - MA
2014
 LEIDIANE SILVA PEREIRA

PREPARAO, CARACTERIZAO E PROPRIEDADES DE FILMES DE

COLGENOS E NANOCOMPSITOS DE COLGENO PSCEO (Cynoscion acoupa)
Relatrio Final referente s atividades
desenvolvidas no perodo 10/2013 a
03/2014 como bolsista do PIBIC.
Prof. Dr Ccero Wellington Brito Bezerra

__________________________________
Leidiane Silva Pereira
Bolsista

__________________________________
Prof. Dr. Ccero Wellington Brito Bezerra
Orientador

So Lus MA
2014
 RESUMO

A bexiga natatria da espcie Cynoscion acoupa (pescada amarela) comercializada

informalmente em todo o litoral maranhense por um preo bastante elevado e exportada
principalmente para o Japo e a China. O colgeno a principal protena estrutural do tecido
conjuntivo e a mais abundante de origem animal, cujas fontes essenciais para o comrcio, so:
peles e tendes de bovinos, sunos, aves, peixes e bexigas natatrias. O colgeno psceo tm
caractersticas peculiares, tais como: facilidade de extrao, baixa temperatura de
desnaturao e custo reduzido para a explorao, com a vantagem adicional da ausncia de
doenas conhecidas nos peixes que comprometam a qualidade do colgeno. Sendo o
Maranho um Estado com intensa atividade pesqueira, este trabalho props a verificao do
efeito da temperatura (4o e 25 oC) na qualidade estrutural do colgeno extrado a partir da pele
e da bexiga natatria de peixes aqui comercializados, iniciando os estudos com a Pescada
Amarela (Cynoscion acoupa), para posterior confeco e caracterizao de filmes finos,
especialmente com relao s suas propriedades eltricas e piezoeltricas. Os resultados
parciais nos permitem as seguintes observaes: o rendimento da extrao maior para
bexigas natatrias que para peles, bem como para a menor temperatura trabalhada e, de
acordo com a espectroscopia vibracional na regio do infravermelho, tanto o colgeno
extrado a 4 oC, quanto a 25 oC, apresentam a mesma integridade estrutural.
 SUMRIO

1. INTRODUO ..................................................................................................... 06
2. OBJETIVOS ......................................................................................................... 09
2.1. Objetivo geral ................................................................................................. 09
2.2. Objetivos especficos ....................................................................................... 09
3. METODOLOGIA ................................................................................................. 10
3.1. Materiais e reagentes ...................................................................................... 10
3.2. Extrao de colgeno a partir de peles e bexigas natatrias ......................... 11
3.3. Caracterizao do p de colgeno .................................................................. 12
3.3.1. Espectroscopia vibracional na regio do infravermelho ......................... 12
4. RESULTADOS E DISCUSSES ......................................................................... 13
4.1. Extrao e obteno do p de colgeno ......................................................... 13
4.2. Espectroscopia vibracional na regio do infravermelho ............................... 15
5. CONSIDERAES FINAIS ................................................................................ 19
6. ATIVIDADES EM ANDAMENTO...................................................................... 20
REFERNCIAS
1. INTRODUO

O colgeno a principal protena na constituio extracelular do tecido

conjuntivo. Possui uma estrutura prpria, a tripla hlice. Esta formada por trs cadeias
polipeptdicas que se enrolam umas sobre as outras, tendo uma sequncia tipca de
aminocidos Gly-X-Y, com 35% de glicina, 12% de prolina e 10% de
hidroxiprolina/hidroxilisina (nicos), dando origem a sua estrutura. Ele, diferentemente
dos polmeros sintticos, apresenta tamanho, estrutura e sequncias prprias. As
diferenas entre essas cadeias do origem aos diferentes tipos de colgeno, mais de 25
tipos j descritos. Porm o mais estudado o tipo I (Figura 1), visto que ele o mais
abundante e o responsvel pela unio e fortalecimento dos tecidos. [1, 2, 4, 5, 6, 7]

Figura 1: Estrutura do colgeno tipo I (Fonte: SENA, L.A. Produo e carcterizao de

compsitos hidroxiapatita-colgeno para aplicaes biomdicas. 2004. 11-13p. Tese
Doutorado em Cincias, em Engenharia Metalrgica e de Materiais. Programa de Ps-
Graduao de Engenharia, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro,
2004).
O colgeno pode ser encontrado em peles e tendes de bovinos, sunos, aves e
bexigas natatrias de peixes. Tem larga aplicao comercial e industrial, sendo
empregado principalmente nas indstrias cosmticas, farmacuticas, eletrnicas,
qumicas e de alimentos. O colgeno uma protena cuja principal caracterstica a
formao de fibras insolveis com alta resistncia elstica sendo responsvel pela
modulao de foras externas e internas exercidas dentro do organismo, alm de seu
papel estrutural nos tecidos, esse material possui tambm outras caractersticas tais
como, a funo de orientar tecidos em desenvolvimento; encontrado no tecido
conjuntivo de organismos multicelulares, tais como tendes, cartilagens, peles,
msculos, ligamentos, placenta.
As principais fontes de produo de colgeno para as indstrias so, sobretudo,
as peles de mamferos bovinos e sunos, contudo, h um crescente interesse por parte
dos pases europeus e do Japo, principalmente, em novas fontes para a produo desse
material, por esse motivo os colgenos de animais aquticos tm sido bastante utilizados
como matria-prima industrial.
A 4-hidroxiprolina (4-Hyp) representa cerca de 12 % da massa total do
colgeno, e a determinao deste aminocido freqentemente usada para quantificar a
massa colagenosa presente em tecidos biolgicos. A 4-Hyp presente na molcula do
colgeno, um aminocido raramente encontrado em outras protenas; este aminocido
importante na estabilizao da estrutura molecular do colgeno.
O Estado do Maranho possui uma grande plataforma continental, esturios
fluviais, mars e correntes marinhas que favorecem a uma intensa atividade pesqueira.
A maioria dos peixes presente no litoral maranhense apresentam bexigas natatrias, as
quais so objetos de comrcio para o exterior por um preo bastante elevado. Isto se
explica pelo fato desta vescula conter um alto teor de colgeno, comprovado
cientificamente. Outra caracterstica notvel, que os colgenos psceos so de fcil
extrao. Alm disso, apresentam baixo custo para explorao comercial e ausncia de
problemas com relao a certas doenas que inviabilizariam a explorao de colgeno
psceo. Uma possvel desvantagem seria a baixa temperatura de desnaturao, a qual, a
depender da aplicao que se dar ao produto, pode limitar as condies de trabalho.
Os recursos pesqueiros de maior importncia econmica no estado do Maranho
so a Pescada Amarela (Cynoscion acoupa), Pescada Branca (Cynoscion leiarchus) e a
Gurijuba (Hexanematichthys parkeri), esses peixes tm valores comerciais
diferenciados nas vrias regies, sendo que no estado do Maranho so as espcies mais
valiosas, pelo fato de suas carnes serem consideradas de excelente qualidade; destes
recursos a pescada amarela a espcie de maior importncia em volume de produo.
A Pescada Amarela (Cynoscion acoupa) um peixe muito comum no litoral
maranhense. Ela costuma frequentar guas rasas, prximas a costas, enseadas e poos
fundos no interior das baas e nadam em cardumes. Chegam a ter 80 cm a 1,50 m de
comprimento e a pesar at 20 quilos. uma espcie capaz de produzir sons por
msculos associados bexiga natatria e sua carne muito saborosa, acarretando um
alto valor comercial para si.
A bexiga natatria dessas espcies vulgarmente conhecida como bucho ou grude
vem sendo comercializada informalmente por um preo bastante elevado em todo litoral
maranhense e em toda extenso norte, esse material segue para Belm onde exportado
principalmente para o Japo, sem nenhuma forma de processamento.
A bexiga natatria da pescada amarela (Cynoscion acoupa) um tecido com
altos teores de colgeno, a partir do qual foram preparadas e caracterizadas membranas
e determinadas suas propriedades eltricas.
2. OBJETIVOS

2.1. Objetivo Geral

Obter p de colgeno a partir de peles de peixes comercializados em So Lus

(MA) e, a partir deste colgeno, preparar gis e filmes de compsitos de colgeno com
nanopartculas de carbono (Vulcan e Black pearls).

2.2. Objetivos Especficos

Extrao de colgeno a partir de peles e bexigas natatrias;

Verificar o efeito da temperatura na integridade estrutural do material obtido;
Obteno do colgeno em p e em gel;
Preparao dos filmes de colgenos;
Obteno de compsitos em diversas condies de pH e proporo
colgeno:carbono;
Estabelecimento de uma rota para preparao de filmes finos.
Encaminhamento dos filmes para estudo das propriedades eltricas e
piezoeltricas.
3. METODOLOGIA

3.1. Materiais e Reagentes

A pele e a bexiga natatria foram obtidas da Pescada Amarela, vendidos por

comerciantes no Mercado Central de So Lus. Os reagentes utilizados foram de
natureza analtica e utilizados como fornecidos ou tratados quando necessrios.

Figura 2: Figura 3:

Figura 4:
 3.2. Extrao de Colgeno a Partir de Peles e Bexigas Natatrias

O colgeno foi extrado em duas temperaturas distintas, 25C e 4C,

empregando-se solues de cido actico 0,5 M, deixadas em contato por 24 e 48 horas,
conforme o fluxograma abaixo da
Figura 5.
Figura 5: Fluxograma do mtodo de extrao de colgeno de peles e bexigas natatrias da Pescada
Amarela. A lavagem foi feita com gua destilada at a completa remoo de ons cloreto (Teste com
AgNO3). Fonte: Prprio autor.
As peles e bexigas natatrias foram lavadas com bastante gua corrente, cortadas
em pedaos pequenos e submersas em solues de cido actico 0,5M. Numa proporo
5g:250ml e 10g:500ml de ambas amostras.
As amostras colocadas em temperatura ambiente ficaram em contato por 24
horas e as colocadas em temperatura a 4C ficaram em contato por 48 a 72 horas. Em
seguida foi adicionado soluao de NaCl 2M e deixou-se descansar at sua completa
precipitao.
As amostras foram centrifugadas, durante 30 minutos, e o precipitado recolhido
e lavado por vrias vezes consecutivas at a ausncia de ons cloreto, constatada a partir
de testes com adio de AgNO3. O material obtido foi seco em dessecador, durante 2
dias, e macerado para a obteno do p.

3.3. Caracterizao do P de Colgeno

3.3.1. Espectroscopia Vibracional na Regio do Infravermelho

Os espectros vibracionais na regio do infravermelho foram obtidos utilizando-

se o espectrofotmetro Shimadzu, com transformada de Fourier, modelo IRPrestige-21,
acoplado a um computador Intel Celeron, para registro dos dados, na regio entre 4000
400 cm-1. Foram empregadas pastilhas de KBr para a aquisio dos espectros.
4. RESULTADOS E DISCUSSES

4.1. Extrao e Obteno do P de Colgeno

As amostras foram primeiramente lavadas e cortadas em pedaos pequenos a fim

de aumentar a superfcie de contato com o solvente. Ambas foram mantidas em contato
durante tempos distintos em funo da solubilidade do material. Os experimentos a
maior temperatura, 25 oC, necessitaram de um menor tempo para a extrao.
As imagens a seguir, Figs. 6-9 ilustram as etapas observadas durante a
solubilizao dos materiais (pele e bexiga natatria).

a) b)
Figura 6: Inicio da extrao. Amostras submersas em soluo de cido actico 0,5 M: a) bexiga natatria;
b) pele. Fonte: Prprio autor

Durante o tempo de contato, as amostras foram intumescendo, mostrando a

absoro do solvente para inicio do processo de solubilizao.

a) b)
Figura 7: Intumescimento das amostras durante a extrao: a) bexiga natatria; b) pele. Fonte: Prprio
autor

Aps solubilizao do material, a adio de cloreto de sdio permite a

precipitao do material colagenoso. A partir deste momento, o material centrifugado
e lavado por diversas vezes, com o objetivo de retirar o cloreto adsorvido no colgeno.
Notou- se que a 25C o processo ocorreu num curto espao de tempo. E isto
justificado pela maior mobilidade do material; a 4C, o aumento da viscosidade e a
menor energia trmica do meio dificultam o contato do solvente com a superfcie a ser
extrada.

a) b)
Figura 8: Precipitao do colgeno aps adio de NaCl a partir da: a) bexiga natatria; b) pele. Fonte:
Prprio autor

As amostras foram colocadas para secar em condio de ausncia de ar

(dessecador). A Fig. 9 ilustra o aspecto visual dos materiais obtidos. Como se pode
observar, h um aspecto de filme de colorao amarelada e de textura fibrosa.
Observou-se que quanto mais tempo a amostra ficar sob vcuo, mais difcil ser a sua
transformao em p, pela macerao.
a) b)
Figura 9: Aspecto do material obtido aps extrao e secagem: a) bexiga natatria; b) pele. Fonte: Prprio
autor

Depois de maceradas, os colgenos ficaram na forma de p, de colorao

esbranquiada e baixa porosidade. Aps esta etapa, as amostras foram colocadas em
recipientes adequados e armazenadas sob vcuo, para evitar a contaminao por fungos.
O histrico das massas empregadas nos experimentos de extrao para clculo
de rendimentos, nas diferentes temperaturas, encontra-se resumido na Erro! Fonte de
referncia no encontrada..

Bexiga natatria Pele

Temperatura
5g 10 g 10g
4C 0,04 1,2 0,53
25C 0,03 0,77 0,20

Tabela 1 Histrico das massas (g) empregadas e obtidas nos estudos de extrao.

Analisando a tabela, observamos que as extraes foram de baixo rendimento.

Ou os colgenos extrados foram perdidos durante a lavagem do material, ou a
quantidade de NaCl no foi suficiente para garantir a precipitao de todo o material.
Observa-se tambm que a bexiga natatria apresentou maior rendimento, o que pode
significar uma fonte mais rica em colgeno que a pele. A extrao a 4C mais
eficiente, visto que a quantidade produzida do material maior. Com relao
temperatura, observamos um compromisso entre o processo de extrao, mais rpido a
25 oC, e precipitao, melhores resultados a 4 oC. Observa-se tambm que a quantidade
produzida de p de colgeno relativa a massa inicial do substrato, ou seja, quanto
maior a quantidade de pele ou bexiga maior ser a produo de colgeno.

4.2. Espectroscopia Vibracional na Regio do Infravermelho

O estudo dos espectros vibracionais na regio do infravermelho nos fornece uma

informao valiosa, pois por meio destes que identificamos a integridade da estrutura
proteica do colgeno.
 As Figs. 10-13 ilustram os espectros vibracionais para os colgenos obtidos a
partir da bexiga natatria e da pele e para as temperaturas de 4 e 25 oC, respectivamente.

Figura 10: Espectro vibracional do colgeno obtido a partir da bexiga natatria a 4C.Fonte: Prprio
autor.

Figura 11: Espectro vibracional do colgeno obtido a partir da bexiga natatria a 25C. Fonte: Prprio
autor.
 Figura 12: Espectro vibracional do colgeno obtido a partir da pele a 4C. Fonte: Prprio autor.

Figura 13: Espectro vibracional do colgeno obtido a partir da pele a 25C. Fonte: Prprio autor.

A presena das bandas em 1654 cm-1, 1543 cm-1 , 1454 cm-1 e 1238 cm-1, so
caractersticas da Amida(I), Amida(II), Anis pirrolidnicos e Amida(III),
respectivamente. [1,14,15,17,18 e 20] So estas bandas que nos do evidencias da
preservao da estrutura tridimensional do colgeno obtido. Contudo, a integridade da
tripla hlice s pode ser comprovada pela relao entre as transmitncias da Amida(III)
e Anis pirrolidnicos que esto associadas as deformaes e estiramentos das ligaes.
Para valores acima de 0,5 a integridade mantida, caso contrrio estrutura encontra-se
desnaturada. [14,16,18,19,21 e 22].
As razes entre as transmitncias dos espectros da pele e bexiga natatria deram
valores prximos de um (0,99 1), confirmando que no houve alteraao nas suas
estruturas secundrias proteicas e, portanto, viabilizando o modo de extrao a
temperatura maior, o que representa reduo de custos operacionais.
5. CONSIDERAES FINAIS

A bexiga natatria da pescada amarela do Estado do Maranho demonstro ser

uma importante fonte de colgeno; as membranas de colgenos podem ser obtidas a
partir da extrao cida e posterior precipitao salina, desde que sejam
convenientemente lavadas, centrifugadas e armazenadas e a riqueza em colgenos e a
sua fcil solubilizao justificam a ampla explorao comercial da bexiga natatria de
peixes do litoral maranhense.
A temperatura tem um efeito significativo nas etapas de extrao e
precipitao/lavagem do material colagenoso. A 25 oC, a extrao favorecida,
entretanto, apresentou menores rendimentos de extrao. Todavia, as extraes em
ambas as temperaturas no modificam a tripla hlice ou a integridade estrutural do
colgeno obtido.
6. ATIVIDADES EM ANDAMENTO

Quantificao do aminocido Hidroxiprolina para determinao do teor de

colgeno;
Anlise da composio centesimal (umidade, protena, gordura e cinzas);
Preparao de filmes de colgenos;
Obteno de compsitos em diversas condies de pH e proporo
colgeno:carbono;
Estabelecimento de uma rota para preparao de filmes finos;
Encaminhamento dos filmes para estudos de propriedades eltricas e
piezoeltricas.
REFERNCIAS

[1] SENA, L.A. Produo e caracterizao de compsitos hidroxiapatita-colgeno

para aplicaes biomdicas. 2004. 11-13p. Tese (Doutorado em Cincias, em
Engenharia Metalrgica e de Materiais). Programa de Ps-Graduao de Engenharia,
Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2004.

[2] Thiemann, O.H. Apostila 04a Parte: Tecidos conjuntivos conectivos. Laboratrio
de Biologia, Instituto de Fsica de So Carlos UFSC, 2010.

[3] Lin YK, Liu DC. Comparison of physical-chemical properties of type I collagen
from different species. Food Chemistry, V.99, p.244-251, 2006.

[4] ABEROUMAND, A. Comparative Study between Different Methods of

Collagen Extraction from fish and its Properties. World Applied Sciences Journal,
V.16, No 3, p.16-319, 2012.

[5] BORDIGNON, A.C. Caracterizao da pele e da gelatina extrada de peles

congeladas e salgadas de Tilpia do Nilo (Oreochromis niloticus). 2010. 26-29p.
Dissertao (Mestre em Zootecnia). Programa de Ps-Graduao em Zootecnia,
Universidade Estadual de Maring, Paran, 2010.

[6] SOUZA, GR., BEZERRA, RS. Extrao de colgeno a partir de resduos do

processamento do peixe Bijupir (Rachycentron Canadum). In: XVIII Conic e II
Coniti, 11., 2010, Pernambuco. Anais do XVIII Conic Congresso de Iniciao
Cientfica da UFPE CTG 24 a 26 de Novembro, 2010. Pernambuco: UFPE, 2010.

[7] FERNANDES R.M.T. et al. Collagen films from swim bladders: Preparation
method and properties. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, V. 62, p. 17-21, 2008.
[8] SOUSA, M.A. Colgenos de Cynoscion acoupa (Pescada Amarela):
Identificao, Produo de Membranas e Estudo da Atividade Biolgica. 2008.
TCC (Graduao) Curso de Biologia, Universidade Estadual do Maranho, Maranho,
2008.
[9] FEITOSA, A.C. Relevo do Estado do Maranho: Uma nova proposta de
classificao topomorfolgica. In VI Simpsio Nacional de Geomorfologia, 2006,
Goinia. Anais da Geomorfologia Tropical e Subtropical: processos, mtodos e tcnicas
CTG 6 a 10 de Setembro, 2006. Goinia: UFG, 2006.

[10] SANTOS RB, CARVALHO NETA RNF, ALMEIDA ZF. Caractersticas da

Pesca Artesanal em trs comunidades da Ilha de So Lus, Maranho. Boletim do
Laboratrio de Hidrologia, Universidade Federal do Maranho UFMA, V. 16, p. 55-
65, 2003.

[11] MOURO, K.R.M. et al. Sistema de Produo Pesqueira Pescada Amarela

Par-Brasil. B. Inst. Pesca, So Paulo. No 35, V.9, p. 497-511, 2009.

[12] CLAUZET M, RAMIRES M. Pesca artesanal e conhecimento local de duas

populaes caiaras (enseadas do Mar Virado e Barra do Una) no litoral de So
Paulo, Brasil. W. Multicincia: A linguagem da Cincia, 4 de Maio, 2005

[13] SANTOS, A.P.B. ndices qumicos, sensoriais e microbiolgicos para

avaliao do frescor da Pescada Amarela (Cynoscion acoupa) armazenada em gelo.
2011. Dissertao (Mestre em Cincias, em Cincias da Engenharia de Alimentos)
Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de So Paulo,
Pirassununga, 2011

[14] PEDROSO, M.G.V., Estudo comparativo de colgeno hidrolisado e comercial

com adio de PVA. 2009. 37-39p. Dissertao (Mestre em Qumica Analtica)
Instituto de Qumica de So Carlos, Universidade So Paulo, So Paulo, 2009.

[15] VIEIRA, E.F.S. Caracterizao de escamas do Peixe Piau (Leporinus

elongatus) e sua aplicao na remoo de Cu (II) de Meio Aquoso. Qum. Nova,
Vol.32, No 1,134-138, 2009.
[16] CHAUDRY, Z.F. et al. Preparao e Caracterizao de Colgeno Aninico por
Hidrlise Seletiva de Grupos Carboxamida Internos. Polmeros: Cincia e
Tecnologia. Abril/Junho 97

[17] CASTRO, K.C. et al. Obteno e caracterizao de cimentos base de

quitosana e colgeno para regenerao ssea. Parte 1: Extrao e caracterizao
do colgeno. Universidade de Alfenas, Poos de Caldas MG.

[18] HEITMANN AP, OLIVEIRA PATRCIO PS, PEREIRA FV. Bionanocompsitos

COL/NCC: influncia dos nanocristais de celulose nas propriedades fsico-qumicas e
mecnicas do colgeno. In: Congresso Latino Americano de Orgos Artifciais e
Biomateriais. CTG 22 a 25 de Agosto, 2012. Natal RN.

[19] SILVA, E.E. et al. Nanostructered 3-D Collagen/ Nanotube Biocomposites for
Future Bone Regenerattion Saffolds. Nano Res, V. 2, p.262-473, 2009.

[20] BENJAKUL, S. et al. Extraction and characterisation of pepsin-solubilised

collagens from the skin of bigeye snapper (Priacanthus tayenus and Priacanthus
macracanthus). J Sci Agric, V.90, p.132:138, 2012.

[21] PATI F, ADHIKARI B, DHARA S. Isolation and characterisation of fish scale

collagen of higher thermal stability. Bioresource Technology, V.101, p.3737-3742,
2010.

[22] SINGH, P. et al. Isolation and characterisation of collagen extractered from the
skin of striped catfish (Pangasianodon hypophthalmus). Food Chemistry, V.124, p.
97-105, 2011.