Instituto Superior de Medicina Militar "Dr.

Luis Daz Soto"

Radicales libres en la biomedicina y estrs oxidativo

1er. Tte. Jos Miguel Rodrguez Pern,1 Tte. Cor. Jos Rogelio Menndez Lpez2 y 1er. Tte. Yoel
Trujillo Lpez 2

Resumen

La participacin de los radicales libres en un nmero creciente de afecciones de gran inters

mdico-social, hace que el tema merezca un tratamiento diferenciado. Se presentan los
aspectos conceptuales vinculados con los mecanismos de generacin de las formas de los
radicales libres y su consecuencia a nivel molecular por su accin en lpidos, protenas y cidos
nucleicos. Se trata la expresin de estos desde el punto de vista patognico, vinculado con la
generacin de biomolculas mediadoras de su accin y repercusin celular; as como el sistema
de defensa antioxidante de que dispone el organismo para su proteccin. Se define el estrs
oxidativo y los mtodos para medir el dao oxidativo que se disponen en la actualidad, y
paralelamente se da a conocer de manera elemental algunos de los antioxidantes, su
mecanismo de accin y funcin preventiva en diversas enfermedades.

DeCS: RADICALES LIBRES/toxicidad; ESTRES OXIDATIVO; ANTIOXIDANTES; MITOCONDRIA.

En los anales de la historia de la medicina, pocos eventos han tenido el impacto tan profundo y
matizado con respuestas polifacticas como el ocurrido a consecuencia del conocimiento de los
radicales libres (RL) per se y de su influencia variable en los seres vivos.

En un principio las reacciones en que participan los RL estuvieron fuera del mbito de la
medicina y la biologa, pero fueron bien conocidas por los profesionales interesados en el
campo de la destruccin por radiaciones, preservacin de alimentos, combustin y la industria
del hule y la pintura.

En este vasto terreno que hasta ayer fuera patrimonio de los qumicos, bilogos y fsicos, la
medicina se ha introducido con pasos firmes, con un permanente aumento de profesionales de
la salud interesados por los fenmenos de oxidacin celular.1 Desde la dcada de los 70 se ha
producido una verdadera eclosin en las reas de investigacin y la clnica relativas a los RL y
los antioxidantes.

El presente trabajo abarca de forma sinttica una informacin bsica disponible con respecto a
la funcin de los RL y sistema de defensa antioxidante en el organismo y su vinculacin con
numerosas enfermedades en las cuales ejercen un rol protagnico; as como la definicin de
estrs oxidativo y los mtodos para medir el dao oxidativo que se dispone en la actualidad.
Tambin de manera elemental dar a conocer algunos de los antioxidantes, su mecanismo de
accin y papel preventivo en diversas enfermedades.

Se consideran RL aquellas molculas que en su estructura atmica presentan un electrn

desapareado o impar en el orbital externo, dndole una configuracin espacial que genera una
alta inestabilidad. Es una entidad qumica que contrario a la normal tendencia espontnea de
los electrones localizados en los tomos y molculas a la formacin de parejas es desapareado.
Esto lo hace muy inestable, extraordinariamente reactivo y de vida efmera, con una enorme
capacidad para combinarse inespecficamente en la mayora de los casos, as como con la
diversidad de molculas integrantes de estructura celular: carbohidratos, lpidos, protenas,
cidos nucleicos y derivados de cada uno de ellos.2

Los RL son elaborados continuamente como un producto del metabolismo normal de cada
clula e inactivados por un conjunto de mecanismos (unos enzimticos y otros de
atrapamiento). Son componentes normales de clulas y tejidos, existiendo una poza de RL
particular en cada estirpe celular y en algunos tipos celulares permiten la mejor adaptacin a
su habitat. Al elevarse o disminuir las concentraciones fisiolgicas de las especies reactivas de
oxgeno (EROS) puede acarrear importantes alteraciones funcionales. La aterosclerosis, el
envejecimiento y el cncer por citar algunos ejemplos, son un tercio de la enorme lista de
problemas fisiolgicos y padecimientos que de alguna manera se asocia con una elevada poza
hstica de RL.3,4

El oxgeno molecular (O2) es fundamentalmente birradical ya que tiene 2 electrones no

apareados en su orbital externo, ambos con el mismo giro paralelo, impidiendo que capte 2
electrones simultneamente en las reacciones que interviene. El oxgeno solo puede intervenir
en reacciones univalente y aceptar los electrones de uno en uno.

La mayor parte del oxgeno utilizado por el organismo humano es reducido a agua por accin
del complejo citocromo-oxidasa (citocromo A+a3) de la cadena respiratoria mitocondrial,
segn la reaccin global siguiente:

O2 + 4H + 4E 2H2O

Por razones anteriores, la reaccin se hace en 4 pasos univalentes:

e- e+ + 2H+ e+ + H+ e- + H+

O2 O2- H2O2 OH- + H2O H2O

e- = electrn

H+ = hidrogeniones

O2- = radical anin superxido

H2O2 = perxido de hidrgeno

OH = radical hidroxilo

H2O = agua

Estos intermediarios sealados quedan unidos al sitio activo de la citocro-mo-oxidasa y no

difunden al resto de la clula en condiciones normales. En la molcula de O2 se generan por su
reduccin parcial las especies reactivas siguientes:5,6

O2- = anin superxido

OH = radical hidroxilo

H2O2 = perxido de hidrgeno

* O2 = oxgeno singlete
El perxido de hidrgeno (H2O2) no es estrictamente un RL pero por su capacidad de generar el
OH- en presencia de metales como el hierro, se le incorpora como tal.

La sangre, fluido biolgico compuesto por eritrocitos, leucocitos y plaquetas como elementos
celulares, cumple entre otras funciones la de transportar el oxgeno desde los pulmones hasta
los tejidos, y es aqu donde este acta como sustrato en diversas reacciones bioqumicas
intracelulares y como resultado se desencadena una gran produccin de H 2O2 y superxido,
entre otras EROS.

Fuentes biolgicas de RL

La mitocondria constituye la fuente principal de RL. Este fenmeno se efecta a nivel de la

cadena de transporte de electrones, que es la ltima etapa de produccin de protones de alta
energa, y cuyo pasaje a travs de la membrana interna mitocondrial genera un gradiente
elctrico que aporta la energa necesaria para formar el ATP o adenosina trifosfato.

En este proceso de fosforilacin oxidativa el oxgeno acta como aceptor final de electrones,
adquiriendo en ms del 95 % de estas reacciones un total de 4 electrones de molculas con
produccin de 2 molculas de agua. Una consecuencia directa de este proceso es que entre los
nutrientes iniciales y la generacin de energa al final del proceso, se forman varias molculas
con diferente grado de oxidacin. Algunas de ellas puede entregar 1 2 electrones al oxgeno
y producir intermediarios parcialmente reducidos que son los RL.7

Otras fuentes son las peroxisomas, organelas del citosol muy ricas en oxidasas y que
generan H2O2, el cual es depurado por enzimas especficas (catalasas) y transformado en agua.

Los leucocitos polimorfonucleares constituyen una fuente importante, cuando se activan por
diversas protenas que actan especficamente sobre ellos (complemento, interleukinas, etc).
Los leucocitos poseen en sus membranas la enzima NADPH oxidasa generadora de O2 que en
presencia de hierro se transforma en el altamente txico OH-. Esta situacin se da
particularmente en los procesos inflamatorios.8

La enzima xantina deshidrogenasa predomina en los endotelios, normalmente depura las

xantinas (isquemia, estimulacin del Ca+Times" SIZE="2">, etc), genera O2-.

Se puede apreciar, por lo tanto, que los RL se forman en condiciones fisiolgicas en

proporciones controlables por los mecanismos defensivos celulares. En situacin patolgica
esta produccin se incrementa sustancialmente, ingresndose al estado de estrs oxidativo.

Los factores que llevan a esta situacin son:

- Qumicos: aumento de metales pesados, xenobiticos, componentes del tabaco.

- Drogas: adriamicina.

- Fsicos: radiaciones ultravioleta, hiperoxia.

- Orgnicos y metablicos: dieta hipercalrica, dieta insuficiente en an-tioxidantes, diabetes,

procesos inflamatorios y traumatismos, fenmenos de isquemia - reperfusin y ejercicios
extenuantes.

Toxicidad de los RL

En 1954 una investigadora argentina, Rebeca Gerschman, sugiri por primera vez que los RL
eran agentes txicos y generadores de enfermedades.9

Por la alta inestabilidad atmica de los RL colisionan con una biomolcula y le sustraen un
electrn, oxidndola, perdiendo de esta manera su funcin especfica en la clula. Si se trata
de los lpidos (cidos grasos polinsaturados), se daan las estructuras ricas en ellas como las
membranas celulares y las lipoprotenas. En las primeras se altera la permeabilidad
conduciendo al edema y la muerte celular y en la segunda, la oxidacin de la LDL, gnesis de
la placa ateromatosa.

Las caractersticas de la oxidacin lipdica por los RL, tratan de una reaccin en cadena en la
que el cido graso al oxidarse, se convierte en radical de cido graso con capacidad de oxidar a
otra molcula vecina.

Este proceso es conocido como perioxidacin lipdica, genera numerosos subproductos, muchos
de ellos como el malondialdehdo (MDA), cuya determinacin en tejidos, plasma u orina es uno
de los mtodos de evaluar el estrs oxidativo.

En caso de las protenas se oxidan preferentemente los aminocidos (fenilalani-na, tirosina,

triptofano, histidina y metionina) y como consecuencia se forman entrecruzamientos de
cadenas peptdicas, fragmentacin de la protena y formacin de grupos carbonilos e impiden
el normal desarrollo de sus funciones (transportadores inicos de membranas, receptores y
mensajeros celulares, enzimas que regulan el metabolismo celular, etc).10

Otra molcula que es daada por los RL es el ADN; el dao a los cidos nucleicos produce
bases modificadas, lo que tiene serias consecuencias en el desarrollo de mutaciones y
carcinognesis por una parte, o la prdida de expresin por dao al gen especfico.

El dao a biomolculas que determinan los RL se haya implicado en la gnesis o exacerbacin

de numerosos procesos:

Aparato cardiovascular: aterosclerosis, infarto del miocardio, ciruga cardaca,

diabetes, cardiopata alcohlica.

Sistema neurolgico: enfermedad de Parkinson, Alzheimer, neuropata

alcohlica, hiperoxia, isquemia o infarto cerebral, traumatismos craneales.

Aparato ocular: cataratas, dao degenerativo de la retina, fibroplasia

retrolental.

Aparato respiratorio: distrs respiratorio (sndrome de dificultad respiratoria

del adulto), tabaquismo, cncer de pulmn, enfisema.

SOMA: artritis reumatoidea.

Rin: sndrome autoinmune, nefrotoxicidad por metales.

Sistemas de defensa biolgica contra los RL

La vida en presencia del oxgeno molecular exige contar con una batera mltiple de defensa
contra los diversos RL de oxgeno, que por un lado tiendan a impedir su formacin y por otro,
los neutralicen una vez formados. Estas defensas se efectan en 5 niveles:

Primer nivel: consiste en editar la reduccin univalente del oxgeno mediante sistemas
enzimticos capaces de efectuar la reduccin tetravalente consecutiva sin liberar los
intermediarios parcialmente reducidos. Esto lo logra con gran eficiencia el sistema citocromo-
oxidasa de la cadena respiratoria mitocondrial responsable de ms del 90 % de la reduccin
del oxgeno en el organismo humano.
Segundo nivel: lo constituyen enzimas especializadas en captar el radical anin superxido
(O2-Tercer nivel: dado por un grupo de enzimas especializadas en neutralizar el perxido de
hidrgeno. Entre ellas est la catalasa, que se encuentra en los peroxisomas y que catalizan la
reaccin de dismutacin siguiente:14-17

H2O2 + H2O 2H2O + O2

Tambin en los mamferos, la glutatin-peroxidasa (enzima citoplasmtica que contiene

selenio), es la ms importante y cataliza la reaccin siguiente:18

(Glutatin-peroxidasa)

2GSH + H2O2 GSSG + 2H2O

GSH=glutatin reducido

GSSG = glutatin oxidado

Cuarto nivel: aqu el radical hidroxilo producido en el ciclo de Haber-Weiss puede ser
neutralizado por la vitamina E o alfa-tocoferol, que es un antioxidante efectivo y que por su
hidrofobicidad se encuentra en las membranas biolgicas donde su proteccin es
particularmente importante. Tambin la vitamina C o cido ascrbico es un agente reductor o
donador de electrones y reacciona rpidamente con el radical OH-Quinto nivel: una vez
producido el dao molecular, existe un quinto nivel de defensa que consiste en la reparacin.
Est demostrado que los RL son capaces de provocar rupturas de la cadena de DNA y aun de
inducir mutagnesis, pero existen mecanismos enzimticos de reparacin que permiten
restablecer la informacin gentica.19-22

Sistemas de defensas antioxidantes

Halliwelldefine como antioxidante a toda sustancia que hallndose presente a bajas

concentraciones con respecto a las de un sustrato oxidable (biomolcula), retarda o previene la
oxidacin de dicho sustrato.

El antioxidante al colisionar con el RL le cede un electrn oxidndose a su vez y

transformndose en un RL dbil no txico y que en algunos casos como la vitamina E, puede
regenerarse a su forma primitiva por la accin de otros antioxidantes. No todos los
antioxidantes actan de esta manera, los llamados enzimticos catalizan o aceleran reacciones
qumicas que utilizan sustratos que a su vez reaccionan con los RL.

De las numerosas clasificaciones de los antioxidantes, se recomienda adoptar la que los divide
en: exgenos o antioxidantes que ingresan a travs de la cadena alimentaria y endgenos que
son sintetizados por la clula (fig).
 Fig. Clasificacin de los antioxidantes.

Cada antioxidante posee una afinidad hacia un determinado RL o hacia varios. La vitamina E,
el betacaroteno y el licopeno actan en el medio liposoluble de la clula y su absorcin y
transporte se hallan muy vinculados con el de los lpidos. La vitamina E es considerada el ms
importante protector de las molculas lipdicas.

Vitamina C:23 neutraliza el oxgeno singlete, captura radicales hidroxilos, captura anin
hiperxidos y regenera la forma oxidada de vitamina E.

Vitamina E: neutraliza el oxgeno singlete, captura radicales libres hidroxilos, neutraliza

perxidos y captura anin superxido.

Betacaroteno: neutraliza el oxgeno singlete.

Es necesaria la incorporacin al organismo de ciertos oligoelementos como el cobre, hierro,

cinc, selenio y manganeso, pues forman parte del ncleo activo de las enzimas antioxidantes.

La deficiencia de antioxidantes en el organismo puede obedecer entre otras razones a:

- Dieta deficiente en antioxidantes.

- Enfermedades que reducen la absorcin de antioxidantes de la dieta (ej. enfermedad de

Cronh).

- Nutricin estrictamente parenteral.

- Dilisis renal.

Antioxidantes en la prevencin de enfermedades

Antioxidantes y enfermedad cardio-vascular: la enfermedad cardio-vascular secundaria al

proceso conocido como aterosclerosis constituye la primera causa de mortalidad e invalidez en
la cuarta dcada de la vida. La modificacin oxidativa de las lipoprotenas, particularmente las
lipoprotenas de baja densidad (LDL) por los RL, sera uno de los mecanismos bsicos de la
aterognesis. El colesterol y los fosfolpidos de las LDL se encuentran protegidos de la
oxidacin por varios agentes antioxidantes lipoflicos: vitaminas E, BC y ubiquinol. El
antioxidante ms importante en la proteccin de las lipoprotenas es la vitamina E,
calculndose que cada molcula de esta es capaz de proteger 500 molculas de fosfolpidos.24-
26
Antioxidantes y cncer: ms de 150 estudios epidemiolgicos evidencian una correlacin
inversa entre la ingesta de antioxidantes y el riesgo de adquirir diversos tipos de tumores y
tienden a sealar al betacaroteno como el agente protector en enfermedades tumorales. Como
posible mecanismo se reconoce que el ADN puede daarse y por ende, sufrir mutaciones por
lesin directa de los RL sobre las bases, o en forma directa afectando la actividad de las
protenas especficas que lo repara (proto-oncogen), o lo frena (supresores). Tambin el
tabaquismo produce un alto grado de estrs oxidativo por diversos mecanismos y al mismo
tiempo poseen bajos niveles de antioxidantes, la vitamina C.27-30

Antioxidantes y enfermedades oculares: la directa exposicin del ojo a las radiaciones

ionizantes, el humo del tabaco y otros agentes generadores de RL, determina que algunas
estructuras se afecten por el estrs oxidativo. Jacques y otros, observaron que los individuos
con altas concentraciones plasmticas de por lo menos 2 de los 3 antioxidantes dorsados
(vitaminas E, C, BC), presentaban un riesgo menor de adquirir cataratas que los individuos con
valores bajos.31

Estrs oxidativo. Mtodos de evaluacin

El desbalance entre la produccin de EROS y la defensa antioxidante provoca un dao orgnico

conocido como estrs oxidativo, que lleva a una variedad de cambios fisiolgicos y bioqumicos
los cuales ocasionan el deterioro y muerte celular.32,33 Se puede medir este dao mediante
mtodos directos e indirectos.34-36 Entre los primeros tenemos la medicin de agentes
antioxidantes, lo cual es muy difcil por su corta vida media y lo caro de los equipos; lo que
obliga a medirlos indirectamente mediante:

Determinacin de productos terminales de la accin oxidante sobre biomolculas: los

mtodos para medir perxidos lipdicos son el patrn de oro cuando se trata de probar el papel
de los oxidantes en algn tipo de dao celular. Ej. malondial-dehdo (MDA).

Medicin de la concentracin de antioxidante: que se realiza con la tcnica de HPLC

(cromatografa lquida de alta resolucin), sobre material biolgico que puede ser plasma,
orina o tejido. A fines prcticos solo se determinan niveles plas-mticos de los antioxidantes
siguientes: vitaminas E, BC, coenzima Q (ubiquinol), glutatin y vitamina C.

Medicin del estado oxidativo: refleja el balance entre el sistema oxidante y pro-oxidante y
es beneficioso en muchas enfermedades.

En la medicin del estrs oxidativo existen los mtodos siguientes:

BIOMOLCULAS MTODOS

Lpidos Quimioluminiscencia
MDA(malondialdehdo)
Dienos conjugados
Perxidos
Pentano, etano

Protenas Compuestos carbonilos

Grupos sulfhidrilos
Fragmentacin de protenas
Actividad de enzimas
Grupo aminos libres
ADN Base modificada

De todos estos mtodos el ms empleado por su sencillez y bajo costo es la determinacin

plasmtica de MDA, uno de los subproductos de la peroxidacin lipdica. La determinacin del
dao oxidativo constituye an un terreno poco desarrollado y se realizan esfuerzos a nivel
mundial para el desarrollo de nuevos y sencillos mtodos de evaluacin.

El estrs oxidativo es responsable de los eventos fisiopatolgicos de las enfermedades

inflamatorias intestinales, hepatopatas, desrdenes neurolgicos y envejecimiento entre otras
afecciones. Por otra parte, es vital el conocimiento de que se dispone en la prctica mdica de
antioxidantes con eficacia demostrada en la prevencin y atenuacin de los efectos negativos
conocidos por el estrs oxidativo, permitiendo con pasos agigantados que estos agentes
formen parte del arsenal teraputico de muchas enfermedades (ej.: el uso de la vitamina E
como neuroprotector en los trastornos neurodegenerativos operados en la enfermedad de
Alzhemier).