CARACTERIZACIN MOLECULAR CON MARCADORES MICROSATLITES

DE LAS COLECCIN DE PALMA DE ACEITE (Elaeis guineensis Jacq.)

PROCEDENTES DE ZAIERE Y CAMERN UNIPALMA

CARLOS FELIPE GONZALEZ CHAVARRO

MARLON EDUARDO LEON LOZANO

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES

ESCUELA DE INGENIERA EN CIENCIAS AGRCOLAS

PROGRAMA DE INGENIERA AGRONMICA

2014
CARACTERIZACIN MOLECULAR CON MARCADORES MICROSATLITES
DE LAS COLECCIN DE PALMA DE ACEITE (Elaeis guineensis Jacq.)
PROCEDENTES DE ZAIERE Y CAMERN UNIPALMA

CARLOS FELIPE GONZALEZ CHAVARRO

MARLON EDUARDO LEON LOZANO

Trabajo de grado presentado como requisito parcial para optar por el ttulo de

Ingeniero Agrnomo

Directora:

YACENIA MORILLO CORONADO

I.A., PhD. Fitomejoramiento

Co-director

Ivn Erick Ochoa

Bilogo, PhD. Fitomejoramiento

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES

ESCUELA DE INGENIERA EN CIENCIAS AGRCOLAS

PROGRAMA DE INGENIERA AGRONMICA

2014

2
La facultad y los jurados de Tesis no sern responsables de las

ideas emitidas por el los autores de la misma.

(Artculo 24, Resolucin 04 de 1974 del Consejo Directivo).

3
 DEDICATORIA

A Dios por ser mi fuerza, luz y gua en cada paso que he dado, que con su
sabidura me ha permitido sobresalir en la vida humana, enfrentando batallas en el
que hacer de mis labores personales y acadmicas, inspirndome hoy a culminar
uno de mis objetivos, la obtencin de mi ttulo profesional de Ingeniero Agrnomo.

A mi padre Carlos Gonzlez y mi madre Maribel Chavarro, por darme la vida, por
guiar mis pasos, formndome como persona en principios ticos y morales, por
permitirme haber crecido en una familia, por poseer el ejemplo de trabajo,
disciplina, honestidad y responsabilidad que se me ha inculcado, haberme
brindado su confianza e apoyo incondicional en los obstculos que se presentan
en el caminar de la vida, y por haber hecho el esfuerzo de darme la herramienta
ms valiosa de mi vida aquel conocimiento que es nuestra mayor herencia "El
estudio", la cual sobrepasa los lmites tangibles.

A Laura Gonzlez mi hermanita, por su amor, apoyo incondicional y darme la

posibilidad de ser to.

A Dios.

A mi madre, por brindarme su apoyo incondicional al momento de mi formacin

profesional, ensearme valores y principios, y hacer de m una excelente persona.

A mis hermanos por brindarme su amor, en cada etapa de mi vida.

A la doctora Yacenia Morillo Coronado por darme la oportunidad de realizar esta

investigacin, por su orientacin, gua, y paciencia.

Al doctor Ivn Erick Ochoa por permitirnos desarrollar este proyecto.

A los universidad de los llanos, y los jurados de la tesis.

A las personas del laboratorio por brindar su respaldo.

A mis amigos por brindarme su leal y sincera amistad.

4
 AGRADECIMIENTOS

A Dios por darme la fortaleza y la constancia en los momentos difciles para salir
siempre adelante con ganas de seguir mis metas sin perder la esperanza, a mis
padres por haberme dado la oportunidad de estudiar lo que escog, por todo su
apoyo, cario, estmulos y preocupaciones constantes conmigo, as como la
permanente inculcacin de mi padre con la orientacin y rumbo que me marco un
0estilo de esfuerzo y disciplina en el desarrollo de mis actividades.

Tambin a mis tos, en especial a Carlos Chavarro, por tener la posibilidad de

contar con su apoyo intelectual, a mis primos (as), amigos (as), compaeros (as)
y todos aquellos con quienes he vivido o compartido alguna etapa de mi vida,
quienes estuvieron en el momento y la hora indicada para escucharme, animarme,
apoyarme e inspirarme a seguir con mi nico objetivo de dar un paso adelante.

A Ana Morillo y Yacenia Morillo por haberme dado su apoyo, confianza y amistad,
por brindarme sus conocimientos cientficos, la entrada al laboratorio de
Biotecnologa Vegetal y su constante colaboracin en las dificultades presentadas.

Agradezco al laboratorio de Biologa Molecular de Medicina Veterinaria y

Zootecnia (MVZ) de la Unillanos, quienes me permitieron trabajar en sus
instalaciones, hacer uso de sus equipos, recibir el apoyo terico-prctico y
cientfico los cuales me sirvieron en cada paso.

Al Dr. Ivn Erick Ochoa y Fernando Castro, de UNIPALMA S.A. por haber hecho
posible este convenio, por permitir la entrada a las plantaciones para realizacin
de las colectas y haber brindado herramientas necesarias para la conclusin de
este proyecto en pro de nuestro desarrollo regional.

Gracias a la Universidad de los Llanos, al decano de la Facultad Jos Myray

Saveedra, a la directora del programa de Agronoma Nidia Carmen Carrillo y al Dr.
Salvador Rojas Gonzlez, los jurados del proyecto, quienes con sus
conocimientos, experiencia y sugerencias, guiaron el camino de los contenidos
tericos e investigativos, aportando as a un nuevo perfil para nuestro programa.

5
 TABLA DE CONTENIDO

DEDICATORIA 4

AGRADECIMIENTOS 5

1. RESUMEN 11

2. ABSTRACT 12

3. INTRODUCCIN 13

4. OBJETIVOS 16

4.1. GENERAL 16

4.2. ESPECIFICOS 16

5. REVISIN DE LITERATURA 17

5.1. Origen 17

5.2. Hbitat 19

5.3. Antecedentes 20

5.4. Clasificacin taxonmica 21

5.5. Descripcin Botnica 24

5.6. El clima y los suelos de las regiones de Palma de aceite 37

5.7. Importancia de la palma de aceite 38

5.8. Recursos Genticos 41

5.8.1. Germoplasma de Palma de aceite en el Mundo 41

5.8.1.1. Origen del germoplasma Calabar 41

5.8.1.2. Origen del germoplasma Aba 42

5.8.1.3. Origen del germoplasma Ufuma 42

5.8.1.4. Origen del germoplasma Angola en el NIFOR 43

5.8.1.5. Origen del germoplasma Deli NIFOR 43

6
5.8.2. Origen gentico de los materiales de mejoramiento en Colombia 44

5.8.2.1. Origen Africano 44

5.8.2.2. Origen Asitico 44

5.8.2.3. Introducciones de germoplasma al C.I. El Mira 45

5.8.2.3.1. Germoplasma de origen Africano 45

5.8.2.3.2. Germoplasma de Origen Asitico 45

5.8.2.4. Colecciones genticas ex situ de Palma de Aceite (CENIPALMA) 46

6. MARCADORES GENTICOS 47

6.1. Utilizacin de marcadores moleculares para el estudio de diversidad

gentica 48

6.2. Marcadores microsatlites 48

6.3. Diversidad gentica en poblaciones de plantas 49

7. MATERIALES Y MTODOS 52

7.1. Localizacin 52

7.2. Material Vegetal 52

7.3. Extraccin de ADN 53

7.4. Cuantificacin de ADN 54

7.5. Seleccin de los primers iniciadores SSRs 54

7.6. Amplificacin de los loci microsatlites o SSRs 55

7.7. Optimizacin de las condiciones de la PCR 56

7.8. Visualizacin del producto PCR 58

7.9. Anlisis estadstico 59

8. RESULTADOS Y DISCUSIONES 62

8.1. Caracterizacin de los loci microsatlites 62

7
8.2. Diversidad gentica 64

8.3. Contenido de informacin polimrfica (PIC) 66

8.4. Diferenciacin de las poblaciones 68

8.4.1. FST 69

8.4.2. FIS 70

8.4.3. FIT 71

8.5. Distancia e identidad gentica 72

8.6. Anlisis Descriptivo 73

8.6.1. Dendograma 73

8.7. Anlisis de correspondencia mltiple (ACM) 76

8.8. Anlisis de varianza molecular - AMOVA 77

9. CONCLUSIONES 80

10. BIBLIOGRAFA 81

8
 LISTADO DE FIGURAS

Figura 1. Dibujo de la palma de aceite. ................................................................... 23

Figura 2. Semilla y crecimiento inicial del germen. A. Corte longitudinal. B.
Semilla germinada. C. Corte longitudinal del embrin. D, E, F, G. etapas de
crecimiento del embrin. H. Produccin de races adventicias. I. Planta de 4
semanas. J. Corte de la semilla. ....................................................................... 25
Figura 3. Diagrama de filotaxis (Izquierda). Representacin diagramtica del tallo
(Centro); la proporcin superior en corte muestra el pice (A), rodeado por
las hojas, la fecha (F) hacia arriba y las hojas maduras con inflorescencia
(INF) lateralmente. Las bases de las hojas estn numeradas en orden
cronolgico de la formacin desde la base. .................................................... 27
Figura 4. Espinas en la palma de aceite. ................................................................ 29
Figura 5. Distribucin de races secundarias a partir de una primaria en una
palma de 3 aos. ................................................................................................ 30
Figura 6. Representacin diagramtica de la flor femenina con las flores
masculinas rudimentarias que la acompaan. ................................................ 33
Figura 7. Tipos de fruto. Dura, Tnera y Pisfera (Izquierda a Derecha)............... 35
Figura 8. Visualizacin de algunas muestras de ADN extrado. ........................... 54
Figura 9. Productos amplificados despus de las modificaciones nombradas
anteriormente. Ntese la aparicin de bandas inespecficas en el marcador
mEgCIR0465. ...................................................................................................... 56
Figura 10. Productos amplificados por PCR del locus sEg00067 de la coleccin
Camern. ............................................................................................................ 57
Figura 11. Patrones de bandas obtenidos con el microsatlite sEg00140. Ntese
la clara diferencia de individuos homocigotos (Izquierda) de heterocigotos
(Derecha). ........................................................................................................... 58
Figura 12. Patrones de bandas obtenidos con el microsatlite sEg00127. Ntese
los diferentes patrones de bandas (alelos) obtenidos.................................... 58
Figura 14. Formula no sesgada de Nei (1973). ....................................................... 60
Figura 13. Coeficiente de Dice Nei-Li (1978). .......................................................... 59
Figura 15. Diagrama resumido de la metodologa utilizada. ................................. 61
Figura 16. rbol de distancia gentica para las dos colecciones evaluadas y
construidas mediante el mtodo UPGMA con un bootstrapp de 1000
repeticiones........................................................................................................ 72
Figura 17. Dendograma realizado con el coeficiente de Dice Nei-Li (1978) y
mediante el mtodo de clasificacin UPGMA utilizando los datos de veinte
marcadores microsatlites en 96 materiales de Elaeis guineensis. .............. 75
Figura 18. Anlisis de correspondencia mltiple (ACM) para las muestras
evaluadas y construido utilizando los datos obtenidos mediante veinte
marcadores moleculares microsatlite. ........................................................... 77
Figura 19. Porcentaje de Anlisis de Varianza Molecular (AMOVA). .................... 78

9
 LISTADO DE TABLAS

Tabla 1. Productividad promedio de los principales cultivos de plantas

oleaginosas en trminos de kg. de aceite/ha. ............................................ 39
Tabla 2. Demanda de aceites vegetales a nivel mundial segn uso. 2000 -
2020 (Millones de toneladas). ...................................................................... 39
Tabla 3. Proyecciones de la demanda de aceites vegetales para consumo
humano a nivel mundial (Millones de toneladas). ..................................... 40
Tabla 4. Produccin de palma 2000 - 2020 (Millones de toneladas). .............. 40
Tabla 5. Informacin de la estructura de la colecta. ........................................ 52
Tabla 6. Concentracin de ADN de algunas muestras de palma cuantificadas
con NanoDrop. .............................................................................................. 54
Tabla 7. Lista de los microsatlites utilizados en la caracterizacin molecular
de las colecciones de palma de Zaire y Camern. .................................... 55
Tabla 8. Protocolo de PCR estandarizado por Singh et al., 2008. ................... 56
Tabla 9. Condiciones de amplificacin para los primers utilizados. .............. 57
Tabla 10. Matriz digital de 5 primer en 10 muestras de cada coleccin, para el
programa NTSYS. ......................................................................................... 59
Tabla 11. Numero de alelos (A) y Frecuencias allicas (Fr) para las
colecciones Camern y Zaire. ..................................................................... 62
Tabla 12. Numero de alelos (A), Frecuencias allicas (Fr) y porcentaje de loci
polimrfico para las colecciones Camern y Zaire. .................................. 63
Tabla 13. Heterocigocidad observada (Ho), heterocigocidad esperada (He)
para las colecciones y Heterocigocidad total (Ht). .................................... 65
Tabla 14. Contenido de informacin polimrfica (PIC) estimado para los
veinte marcadores microsatlite evaluados. .............................................. 67
Tabla 15. Valores de FIS, FST y FIT obtenidos para cada uno de los veinte
marcadores microsatlites y el valor de probabilidad obtenido en la
prueba de equilibro Hardy-Weinberg (P-value). ........................................ 68
Tabla 16. Distancias genticas obtenidas mediante el ndice de Nei (1978)
para las colecciones evaluadas. ................................................................. 72
Tabla 17. Grupos conformados en el dendograma a una similitud de 89,5%.73
Tabla 18. Genotipos duplicados de las colecciones Camern y Zaire. .......... 76
Tabla 19. Anlisis de varianza molecular (AMOVA) para las colecciones y
utilizando los datos obtenidos de veinte marcadores microsatlites...... 77

10
1. RESUMEN

La palma de aceite (Elaeis guineensis Jacq) es una planta que posee alta
diversidad gentica y tiene como principal producto comercial el aceite, que es
directamente extrado del endocarpio de su semilla. Debido a la importancia que
ha ganado la cadena productiva de la palma en el pas, se hace necesaria una
modernizacin, considerndose indispensable la adopcin de variedades
mejoradas con estabilidad gentica, alta calidad y potencial productivo. Por esto,
los diferentes materiales genticos existentes deben ser debidamente
caracterizados para su utilizacin en programa de mejoramiento. El objetivo del
presente trabajo fue determinar la variabilidad gentica de 96 accesiones de
palma de aceite (E. guineensis Jacq.) procedentes de Camern y Zaire con 20
marcadores moleculares microsatlites. Los microsatlites generaron un total de
59 alelos, que variaron de 2 a 5 con un promedio de 2.95 alelos/locus. Se encontr
una alta diversidad gentica, con una heterocigocidad total de 0.46, y un alto
porcentaje de loci polimrficos del 90%. El valor de FST encontrado de 0.14, el
cual sugiere que en las poblaciones de Camern y Zaire, existe una moderada
estructura poblacional.

La heterocigocidad observada (Ho=0.67) fue mayor que la heterocigocidad

esperada (He=0.42), evidenciando una baja presencia de homocigotos. El
contenido de informacin polimrfica (PIC), determino 3 loci (mEgCIR0067,
sEg00140 y mEgCIR3282) muy informativos, 14 loci (mEgCIR0008, mEgCIR0018,
mEgCIR0046, mEgCIR0219, mEgCIR0230, mEgCIR0465, sEg00066, sEg00067,
sEg00126, sEg00127, mEgCIR0802, mEgCIR1730, mEgCIR3363 y mEgCIR3546)
moderadamente informativos y 3 loci (mEgCIR0008, mEgCIR0254 y sEg00125)
poco informativos.

Los parmetros de diferenciacin poblacional como el FIS y el FIT confirmaron un

alto nmero de heterocigotos con respecto a lo esperado bajo las condiciones de
equilibrio Hardy-Weinberg. La tcnica microsatlites permiti discriminar los
genotipos segn el lugar de procedencia, e identific genotipos duplicados.

Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que las colecciones de Camern y

Zaire pueden ser consideradas una sola poblacin, con moderada estructuracin
poblacional a pesar del constante flujo gentico existente. Estos resultados podrn
ser utilizados en futuros programas de conservacin, seleccin y mejoramiento
gentico de la especie.

Palabras clave: Elaeis guineensis, flujo gentico, diversidad gentica, marcadores

moleculares, conservacin.

11
2. ABSTRACT

Oil palm (Elaeis guineensis Jacq) is a plant that has high genetic diversity and its
main commercial product oil, which is extracted directly from the endocarp of
seeds. Because of the importance that has won the productive chain of the palm in
the country, modernization is necessary, considering the adoption of improved
varieties with genetic stability, high quality and productive potential. Therefore, the
different existing genetic materials must be properly characterized for use in
breeding program. The aim of this study was to determine the genetic variability of
96 accessions of oil palm (E. guineensis Jacq.) from Cameroon and Zaire with 20
microsatellite molecular markers. Microsatellites generated a total of 59 alleles,
ranging from 2 to 5 with an average of 2.95 alleles / locus. High genetic diversity,
with a total heterozygosity of 0.46, and a high percentage of polymorphic loci of
90% was found. The FST value of 0.14 found, suggests that the populations of
Cameroon and Zaire, there is a moderate population structure.

The observed heterozygosity (Ho=0.67) was higher than the expected

heterozygosity (He=0.42), showing a low presence of homozygotes. The
polymorphic information content (PIC), determined three loci (mEgCIR0067,
sEg00140 and mEgCIR3282) very informative, 14 loci (mEgCIR0008,
mEgCIR0018, mEgCIR0046, mEgCIR0219, mEgCIR0230, mEgCIR0465,
sEg00066, sEg00067, sEg00126, sEg00127, mEgCIR0802, mEgCIR1730,
mEgCIR3363 and mEgCIR3546) and 3 moderately informative loci (mEgCIR0008,
mEgCIR0254 and sEg00125) uninformative.

The parameters of population differentiation as the FIS and FIT confirmed a high
number of heterozygotes with respect to expected under conditions of Hardy-
Weinberg equilibrium. The technique allowed discrimination microsatellite
genotypes by place of origin, and identified duplicate genotypes.

The results obtained show that collections of Cameroon and Zaire can be
considered a single population, with moderate population structure despite the
constant gene flow existing. These results may be used in future conservation
programs, selection and genetic improvement of the specie.

Keywords: Elaeis guineensis, gene flow, genetic diversity, molecular markers

conservation.

12
3. INTRODUCCIN

La palma de aceite (Elaeis guineensis Jacq.) es una monocotilednea

perteneciente al gnero Elaeis, compuesto por dos especies: Elaeis guineensis
Jacq. y Elaeis olefera. Es una especie perenne, monoica, algama (CORLEY, R.
Y TINKER, P., 2003), su genoma es diploide y comprende 16 pares de
cromosomas, el contenido de ADN nuclear ha sido estimado en 2C=3,76 pg por
citometra de flujo (RIVAL, et al., 1997) con un tamao de genoma haploide de
1700 Mpb (SINGH, et al., 2008).

Es una planta nativa del golfo de Guinea en el frica occidental y central,

distribuida entre los 11 N y 15S, desde ah se expandi en forma natural y con
intervencin humana. Es conocida como palma africana, palma aceitera (En los
pases de lengua espaol) y palmier a huile (En los pases de lengua francesa),
pertenece al orden Palmales y a la familia Arecacea, de gran importancia
econmica, en el ao 2010, con 14,99 millones de hectreas de rea cultivada, la
produccin mundial fue de 45,09 millones de toneladas de aceite de palma,
superior a los 102,38 millones de hectreas de soya que produjo 39,76 millones de
toneladas de aceite, por tanto, la palma ocupa el primer lugar en el mercado
internacional de aceites y grasas vegetales (WORLD FOOD AND AGRICULTURE,
2012).

Esta especie es cultivada principalmente en Asia, en frica y en las Amricas

Central y del Sur (GOMES, et al., 2009). La produccin mundial de aceite de
palma, 86% es aportada por Malasia e Indonesia y 5% por pases de Amrica del
Sur (Colombia, Ecuador y Brasil). Segn Fedepalma en Colombia el rea
plantada en el ao 2012 fue de 452.435 hectreas, de las cuales 299.953
hectreas estn en produccin, la zona de los llanos teniendo un mayor
crecimiento en rea sembrada pasando de 120.783 has en el 2008 a 170.662 has
en el 2012 e igualmente en los tems de rea de desarrollo y produccin. Para
esta fecha Colombia produca 973.703 toneladas de aceite crudo, de las cuales
791.425 toneladas se destinan al consumo interno, siendo el restante para
exportacin; adems de tener una produccin de 213.338 toneladas de almendra
de palma (MINIANUARIO ESTADISTICO, 2013).

En la dcada del 80, la multinacional "Unilever", sembr una rplica del programa
de mejoramiento gentico de palma de aceite que tena en el Congo, Papa
Nueva Guinea, Indonesia y Tailandia. Con el fin de establecer un programa de
investigacin y desarrollo de semillas, coordinado por el Dr. R.H.V. Corley en el
ao 2000.

En esta nueva etapa se inician trabajos de seleccin de las palma parentales

Duras sobre la besa de una alta produccin de aceite por racimo. Se identificaron

13
varios orgenes de palmas, como Ekona, Djongo, Congo, Yangambi, Brabanta,
Nifor, Deli, Deli Gunung Melayu, Avros, Pobe y Mayumbe. Esta amplitud de
colecciones en el programa de mejoramiento de Unipalma posibilita la creacin de
nuevas poblaciones de palma, donde se pueden hacer combinaciones de palmas
de alto ndice de racimos, con palmas de poco incremento de altura.
Adicionalmente Unilever desarrollo en el Congo (Zaire) y Camern, una colecta de
materiales, la cual se trajo a Colombia (Unipalma) a partir de 1982, gracias al
programa de mejoramiento de Unilever que inclua un acuerdo entre esta
multinacional y la Dami Oil Palm Research Station, llamado Programa de
mejoramiento combinado (CBP) (CASTRO, F. y CORLEY, R.H.V., 2007).

En el programa de investigacin, se realiz la seleccin de produccin de semillas

haciendo nfasis en la produccin de aceite por palma/ao. Se identificaron todas
las palmas en los ensayos de mejoramiento de Unipalma y se ubic la genealoga
de las palmas (CORLEY, 2000).

En colecciones de germoplasma, principalmente de plantas algamas con fuerte

actuacin de polinizadores, como es el caso del gnero Elaeis, se espera elevada
variabilidad dentro de las semillas colectadas en el racimo de una planta. Los
marcadores moleculares constituyen una importante herramienta para cuantificar
la variabilidad y para su distribucin entre y dentro de poblaciones (ROBINSON,
1998). Esto porque no son influenciados por el ambiente, posibilitando obtener
polimorfismos genticos en cualquier etapa de desarrollo de la planta, clula o
tejidos y generando mayor informacin por loci en marcadores codominantes
(FALEIRO, 2007)

La caracterizacin de recursos genticos se constituye un paso importante para su

efectiva utilizacin (SIMMONDS, 1993), ella proporciona informaciones para
seleccin de progenitores y la identificacin de poblaciones divergentes para fines
de conservacin y pre-mejoramiento. Poblaciones mejoradas pueden ser
formadas por el cruzamiento de plantas de elevado desempeo de por si
divergentes (MORETZSOHN, et al., 2002).

El desarrollo de marcadores microsatlites puede ser til para estudios genticos

de palma de aceite. Debido a que son marcadores de herencia codominante,
naturaleza multiallica, abundantes, gran cobertura del genoma y pueden ser
detectados usando PCR. Los microsatlites parecen ser el sistema de marcadores
moleculares ms promisorios para el entendimiento de la estructura gentica y el
flujo de genes en las poblaciones (SINGH, et al., 2008).

(BILLOTE, et al., 2001) desarrollaron marcadores microsatlites para palma de

aceite y mostraron su aplicacin en la caracterizacin de germoplasma. Debido a
su uso fcil, los SSRs el sistema marcador preferido para estudios de diversidad

14
gentica en coco (PERERA, et al., 2001), palma datilera (ZEHDI, et al., 2005) y
tambin en otros tipos silvestres (ADIN, et al., 2004). (SINGH, et al., 2008)
desarrollaron marcadores microsatlites a partir de una pequea coleccin de
ESTs y mostraron que estos fueron tiles para el anlisis gentico del
germoplasma de E. guineensis.

La tecnologa de marcadores moleculares se est utilizando exitosamente en los

programas de biotecnologa de palma de aceite. Por ejemplo, en estudios de
diversidad, (BARCELLOS, et al., 2002), encontraron que la divergencia gentica
entre E. guineensis y E. olefera era muy baja y de la misma magnitud que la
encontrada entre miembros de E. olefera. Estos resultados sugirieron que, en
trminos evolutivos, estas dos especies poseen un origen comn y un genoma
conservado para el gnero Elaeis (BARCELLOS, et al., 2002) (BARCELOS, 1998).
Dicha conclusin resalta la importancia de llevar a cabo acciones para explorar la
diversidad de E. olefera (REY, et al., 2003) y evidencia las posibilidades reales
para incorporarla en el acervo gentico de E. guineensis.

Estas metodologas permitirn, en un futuro cercano, evaluar la similitud de las

diferentes palmas analizadas y construir dendogramas que facilitan la
reconstruccin de la filogenia de las variedades comerciales, la caracterizacin
molecular y el seguimiento de caractersticas de inters en palma de aceite.

Dentro este contexto, el objetivo principal de este trabajo fue evaluar la diversidad
gentica en 96 entradas presente en las dos colecciones de palma de aceite Zaire
y Camern (Elaeis guineensis Jacq.) colectados en la plantacin de Unipalma S.A.
usando 20 marcadores de Secuencias Simples Repetidas (SSR) o tipo
Microsatlite. La informacin ser utilizada en el programa de mejoramiento
gentico de UNIPALMA S.A., el cual ser fortalecido por el conocimiento generado
en el presente estudio, permitiendo acelerar el proceso de seleccin de materiales
genticamente distantes para planear cruces adecuados que permitan lograr
materiales comerciales altamente productivos y que a su vez, favorezcan la
diversidad fenotpica del cultivo.

15
4. OBJETIVOS

4.1. GENERAL

Determinar la variabilidad gentica de 96 accesiones de palma de aceite (E.

guineensis Jacq.) procedentes de Camern y Zaire utilizando marcadores
moleculares microsatlites.

4.2. ESPECIFICOS

Evaluar y describir la diversidad gentica presente en estas dos colecciones de

palma de aceite (E. guineensis Jacq.) procedentes de Camern y Zaire.

Determinar la estructura gentica de las dos colecciones de palma de aceite

(E. guineensis Jacq.).

Estimar los ndices de similitud y analizar la variabilidad intra e inter especifica.

16
5. REVISIN DE LITERATURA

5.1. Origen

Hay indicios fsiles, histricos y lingsticos del origen africano de la palma de

aceite. Se ha supuesto adems, basndose en la evidencia de un anlisis hecho
por Friedel, que la grasa encontrada en un jarrn de una tumba en Abydos
(alrededor de 3000 aos A.C.), pudo haber sido de aceite de palma (RAYMOND,
1961).

Los indicios fsiles han salido solo recientemente a la luz. (SEWARD, 1924) no
encontr restos de palma de aceite en las capas del Cretcico superior de Nigeria
oriental, pero (ZEVEN, 1964a), ha informado que el polen fsil del Mioceno y
capas ms jvenes del Delta del Nger es similar al polen de la palma que crece
en nuestros das. Que dicho polen se encuentre en todas estas capas es firme
evidencia de que la palma ha mantenido su existencia en frica occidental desde
tiempos muy remotos. (COOK, 1942) Sugiri un origen brasileo de la palma; dos
de sus fundamentos para esta afirmacin fueron que la palma creca
espontneamente en las reas costeras de ese pas y que todos los gneros
afines tienen origen americano. (ZEVEN, 1964b) Ha sugerido que tanto Elaeis
guineensis, como otra palma cocoidea, Jubaeopsis caffra, se originaron en el lado
africano de los puentes de tierra del Terciario, que se cree se extendan entre
frica y Amrica y que el ocano separo estas palmas de otros miembros de la
tribu. Sin embargo, (CORNER, 1966) considera que hay fundamentos botnicos y
de distribucin para desechar esta teora y ha sugerido la probabilidad de un
transporte precolombino de Elaeis al frica.

El registro histrico de la palma de aceite es escaso y en muchos aspectos, vago;

solo recientemente se han hecho esfuerzos para relacionar los registros que
existen, con los principales hitos de la exploracin (MAUNY, 1953); (REES, 1965);
(ZEVEN, 1965) Colon descubri Amrica del sur en 1498 y el Brasil fue
descubierto tanto por los portugueses como por los espaoles en 1500, pero no
hubo inters real por el pas hasta mediados del siglo XVI. Si se pudieran
establecer registros bien fundamentados de la palma de aceite de frica
occidental antes de esta poca o alrededor de ella, entonces el origen brasileo
seria menos probable, aunque no puede descartarse la posibilidad de un
transporte precolombino.

La exploracin portuguesa de la costa de la Guinea empez en 1434, la holandesa

e inglesa unos 150 aos ms tarde. No hay mencin de la palma de aceite entre
los exploradores rabes primitivos, ni por parte de Marco Polo. palmeras en
abundancia se mencin en el relato del viaje de Diego Gomes, de 1456 o1457,
pero en los relatos de los viajes de Ca da Mosto 1435-1460 (CHEVALIER, 1934)

17
se menciona por primeras vez una palma que hace pensar que se trata de la de
aceite, a saber:

En este pas se encuentra una especie de rbol que produce nueces rojas con
ojos negros, en grandes cantidades, pero de tamao pequeo.

De un aceite que se usaba en la comida se registr que:

Tiene tres propiedades: el perfume de las violetas, el gusto de nuestro aceite de

oliva y un color que tie la comida como azafrn, pero es ms atractivo.

En la descripcin dada por Duarte Pacheco Pereira, de su viaje de 1506

(Esmeraldo de Situ Orbis) se mencionan huertos de palma al norte de la costa de
Liberia y en una isla fuera de ella, y del comercio del aceite (azeite de palma),
cerca del rio forcados, en Nigeria. Relatos posteriores de viajes de portugueses,
holandeses e ingleses se refieren tanto al vino de palma como al aceite. A fines
del siglo XVI Ten Broecke describi dos tipos de vino de palma, uno de los cuales
se presume que es la de la palma de aceite, el otro de una planta cuyo nombre ha
sobrevivido en Nigeria suroriental hasta hoy y que es el vino de la palma de
Raphia.

Ninguna de estas descripciones puede considerarse en alguna forma completa,

pero los primeros relatos sobre huertos de palmas y comercio de aceite, nos
aseguran que la palma no pudo haber sido llevada de Amrica por los
portugueses como lo enunciaba Cook. Adems, las descripciones de los herbarios
primitivos, aunque escritas despus del descubrimiento de Amrica, son lo
bastante antiguas como para considerar verosmil el que la planta descrita fuese
nativa de frica occidental y es claro que los autores pensaron que estaban
describiendo una planta indgena de la costa de Guinea. En ciertos casos se hace
referencia especfica a la importacin o a prcticas que implican importacin. Por
ejemplo, (CLUSIUS, 1605) expuso que la palma se encontraba en la costa de
Guinea y que el fruto, despus de aadirle la harina de cierta raz, era usada por
los portugueses de San Thom para alimentar a sus esclavos durante todo el viaje
a Amrica.

Los indicios lingsticos (ZEVEN, 1965) tambin apoya fuertemente el origen

africano occidental de la palma de aceite. Los nombres de las plantas introducidas
son generalmente una corrupcin de un nombre extranjero, o tienen dos partes,
una que se refiere a una planta del lugar, que de algn modo se parece a la
introduccin; la otra, que representa su posible origen geogrfico o el nombre de la
persona o personas que la introdujeron. As, el coco, en muchos idiomas de frica
occidental es la nuez del blanco o la palma aceitera, la nuez o la almendra
portuguesa o puede ser una corrupcin de coco. Sin embargo, todos los nombres
vernculos de la palma de aceite son cortos y pueden traducirse directamente slo
18
para significar palma de aceite. An ms, los nombres negros de esta palma en
Surinam son aparentemente corrupciones de los nombres Yoruba, Fanti-twi y
Kikongo del frica y el nombre Brasileo dende puede derivarse de la palabra
Kimbundi dende, de Angola.

5.2. Hbitat

Mucho antes de que se dispusiera de los indicios anteriores, (CHEVALIER, 1934)

era ya un fuerte defensor del origen africano de la palma y supona que su hbitat
natural eran las galries forestires o bordes de los bosques, sea cerca de Raphia.
La dificultad para determinar el hbitat natural de la palma de aceite estriba en el
hecho de que aunque no crece en el bosque primario, empieza a prosperar en
cualquier parte en que el hombre haya desmontado parte de la selva; requiere un
rea relativamente abierta para crecer y reproducirse, y crece mejor cuando se
mantiene bien la humedad del suelo. Por esto es natural que la palma encontrara
un lugar en el borde de la selva, cerca de los ros. Aparentemente se han
observado asociaciones silvestres de la palma de aceite y de Raphia bordeando
los ros en Zaire y Ubangui (BRIEY, 1922). (CHEVALIER, 1934) Afirmaba que los
hbitats fluviales de esta clase podan encontrarse a travs del frica de Senegal
a Angola y hasta Mozambique. Se ha supuesto que hay hbitats en el Lejano
Oriente, tanto en Sumatra como en Sabah y en la isla de Borneo.

Se ha sugerido que el pantano de agua dulce es el hbitat natural de la palma de

aceite (WATERSON, 1953) Se han visto palmas que crecen en esos pantanos
contiguos a los ros, en varias partes de Nigeria meridional; a menudo las palmas
se encuentran bajo el nivel del agua, aunque no agua estancada, por muchos
meses del ao. Sin embargo, estas reas estn siempre cerca de lugares
habitados por el hombre y en ningn caso es posible diferenciar claramente entre
el habitad de pantano y el de orilla del ro ya mencionado. Probablemente las
diferencias son solo de profundidad de penetracin de la orilla, lo que depende en
gran parte de la extensin que abarca la inundacin del ro en la estacin lluviosa.
Como productor, la palma de aceite no tolera mantos freticos permanentemente
altos en suelos impermeables, pero parece ser tolerante, en su hogar natural, a
mantos freticos fluctuantes y al agua en movimiento en suelos arenosos o
limosos, cerca de los cauces fluviales. En pocas palabras, parece lo ms probable
que las palmas de aceite crezcan cerca de los ros, en donde estarn sujetas a
menor competencia de la flora selvtica, por lo tanto, penetrara ms luz, y donde
habiendo mucha humedad, esta no es excesiva para la planta.

19
5.3. Antecedentes

Hasta donde es posible saberlo, la especie Elaeis guineensis pas al continente

americano a raz de la trata de esclavos, en el siglo XVI. Las Antillas, las
Guayanas y el Brasil, figuran como probables centros de aclimatacin (PATIO,
1948).

Est confirmado que en la isla Martinica, Jacquin encontr ejemplares que le

sirvieron para clasificar la especie entre 1763 y 1780, que en Hait fue un cultivo
de subsistencia y que en el estado de Baha, Brasil, se encontr domesticada,
indicando que a este pas se introdujo primero (PATIO, 1948) (HARTLEY, 1988).

Como cultivo comercial ingreso oficialmente a Centroamrica gracias a la iniciativa

de la multinacional bananera United Fruit Company, que fijo como objetivo la
introduccin y evaluacin de nuevos cultivos tropicales en su Estacin
Experimental de Lancetilla, ubicada en Tela, Honduras (RICHARDSOND, 1995).

La United fruit Co. Abandon plantaciones debido a una rpida diseminacin de la

enfermedad marchitez causada por Fusarium. Parte de esta rea fue utilizada
para otros cultivos entre ellos palma de aceite. Fue as como desde 1926 hasta
1940 la coleccin de palma de aceite se manej en Lancetilla, desde donde se
dispers a otro pases de Amrica (RICHARDSOND, 1995).

En 1926, La United Fruit Divisin Panam import las primeras semillas de origen
Malayo, con 130 semillas Dura Deli importadas del Jardn Botnico de
Buitenzonrg, Bogor, Java y 80 semillas de Serdag, Sumatra, en campos de la
United Fruit en Almirante, Panam. Este proyecto se abandon debido a una
pudricin severa del cogollo que acabo con el 27% de las palmas; Luego la
Estacin experimental de Lancetilla, Tela, Honduras, recibi semillas colectadas
del Lejano Oriente, que se adicionaron al germoplasma. En 1928 fueron
transferidas 135 plantas de vivero desde Almirante, Panam a la Estacin
Experimental de Siquires, Costa Rica. Este mismo ao una carta fechada el 4 de
mayo de 1928 puede ser el primer documento que prueba la introduccin oficial
de la palma de aceite a Centroamrica, en donde hablan de las primeras semillas
de polinizacin abierta que fueron sembradas como ornamentales en las
instalaciones de Unit Fruit en el distrito de Bobos, Guatemala. Freetown, Sierra
Leona. En 1929 semillas de polinizacin abierta de tres palmas de Nigeria, tres de
Sierra Leona y una de Angola, fueron sembradas en Lancetilla; luego se
importaron cuatro Dura y dos Tenera desde el Jardn Botnico de Eala, Zaire.
Otras introducciones del Zaire fueron obtenidas del Departamento de Agricultura
de los Estados Unidos. En Lancetilla se plantaron 1000 semillas del mismo
material introducido desde Sierra Leona a Guatemala. Se establecen en Almirante
Panam, 6100 palmas de tipo Deli, colectadas de las diez mejores palmas de la

20
Estacin Experimental de Serdang, Sumatra en 1931; Luego 20 aos despus los
materiales colectados en Camern se establecen en Lancetilla. Este ao Lancetilla
contaba con materiales procedentes de Sierra Leona, Malasia, Java, Sumatra,
Zaire, Nigeria, Angola, Camern y otros materiales identificados como del Lejano
Oriente y de frica Occidental.

La distribucin hacia pases de Amrica desde la Estacin Experimental de

Lancetilla, se hizo a partir de palmas Dura Deli de polinizacin abierta, origen Java
y Sumantra, debido a que en las pruebas de campo haban indicado que se
comportaban mejor que las africanas. En 1936 se establece una pequea
plantacin en la hacienda Birichichi, Honduras, un ao despus la Estacin
Experimental de Cuba recibe semillas y se realiza la primera venta a una
compaa de Guatemala. Durante 1943 y 1948, En Quepos, Costa Rica, y San
Alejo, Honduras, La United Fruit sembr plantaciones comerciales. A la Estacin
Experimental de Tingo Mara, Per se envan semillas; Luego se venden semillas
para siembras en La Esperanza, Nicaragua, y en Guatemala se establece la
plantacin La bananera, Costa Atlntica y la Tiquisate, Costa Pacfica con un total
de 360 ha.

En 1949, la Hacienda Patuca, Sevilla. Departamento del Magdalena, Colombia, se

establecen 172 ha con palmas tipo Dura Deli de polinizacin abierta y una
pequea planta extractora. Patuca, se convirti en uno de los centro de dispersin
de la palma de aceite en Colombia. En Ecuador en Santo Domingo de los
Colorados se establece la plantacin Scott y en 1950 se inicia una plantacin de
Tapachula, Chiapas, Mxico.

5.4. Clasificacin taxonmica

La familia de palma (palmae) siempre ha formado un grupo distinto de plantas

entre las monocotiledneas. Aunque el Genera Plantarum de Bentham y Hooker
colocaba a las palmas con las Flagellariaceae y las Juncaceae en la serie
Calycinae, el sistema de Engler y Prantl, les dejaba un lugar por s mismas en el
orden Pincipes. En la clasificacin relativamente reciente de Hutchinson, las
palmae quedan solas, aunque en el orden de palmales. En este sistema, la planta
de aceite, Elaeis guineensis Jacq. Est agrupada con cocos y otros gneros en la
tribu Cocoineae. Los estudios anatmicos justifican esta agrupacin
(TOMLINSON, 1961).

El gnero Elaeis se bas en palmas introducidas en la Martinica y la palma de

aceite recibi su nombre botnico de Jacquin en un informe sobre plantas
americanas (JACQUIN, 1973) (BAILEY, 1933). Elaeis se deriva de la palabra
griega elaion, aceite, mientras el nombre especifico guineensis muestra que
21
Jacquin atribua su origen a la costa de Guinea. De vez en cuando se han
atribuido otros nombres especficos a supuestas especies de Elaeis, pero ninguno
ha mostrado ningn signo de permanencia, fuera de E. melancocca, que ahora se
llama E. olefera y E. madagascariensis, cuya legitimidad es dudosa. El Index
Kewensis tiene una lista de catorce nombres, la mayora de los cuales han
desaparecido de la literatura. Muchos de ellos se refieren a las palmas bastantes
diferentes o son sinnimos de E. guineensis. De paso podemos citar a la palma
americana E. odora, Traill, llamada tambin Barcella odora Barcella odora y
clasificada por algunos botnicos con Elaeis en una subtribu Elaeideae.

Por tanto quedan tres especies: Elaeis guineensis, E. odora y E. olefera.

Las primeras descripciones de la palma de aceite han sido revisadas por

(OPSOMER, 1956) quien afirma que fue Mathias de Lobel (Lobelius, 1538-1616)
quien hizo la descripcin botnica y la ilustracin ms antigua del fruto, que l
llam Nucula Indica. Lobelius informo que la palma se encontraba en Guinea. Las
breves descripciones se publicaron en su Plantarium seu Stirpium Historia, en
1570 (Londres) y 1576 (Amberes), y en su Kruydtboeck de 1581.

Las menciones de la palma de aceite estn dispersas en todas las obras de De

IEcluse (Clusius, 1526-1609), las descripciones en la edicin revisada del herbario
(Cruydt-boeck, Leiden) de 1608, de Dodoens (Dodonaeus, 1516-859 y en la
Histoire des Plantes de Bauhin, de 1650, tambin se atribuyen. Hay cierta
confusin sobre la descripcin y la nomenclatura en las obras ms antiguas, pero
en las otras ms recientes la palma se llama Nucula Indica Secunda y palma
Guineensis. Las descripciones tomadas en conjunto son extraordinariamente
completas y se registra que aparecen nueces de cscara delgada entre las ms
numerosas que la tienen gruesa. En la ltima obra Clusius y en el Cruydt-boeck de
Dodonaeus apareci una ilustracin de una espiguilla seca y esto probablemente
explica la errnea creencia de Clusius que el aceite de la palma se extraa de la
almendra, volvindose rojo en el viaje desde frica.

Opsomer afirma que no se escribe nada importante de la palma de aceite por ms

de 150 aos entre el tiempo de Clusius y la primera -y duradera- descripcin
botnica moderna de (JACQUIN, 1973). Sin embargo, el Catalogus Plantarum de
Sloane adems de mencionar por primera vez los pecolos espinosos, registra la
importacin de la palma desde la costa de Guinea a Jamaica. Era a partir de
material de otra isla de las Antillas, la Martinica que Jacquin iba a escribir su
descripcin y a denominar a la planta. La descripcin de Jacquin es detallada pero
l describe las flores sea como femeninas, sea como hermaphroditi steriles y no
pareci darse cuenta que las flores de los dos sexos estaban inflorescencias
separadas. Las produccin de racimos masculinos y femeninos fue registrada por
primera vez, por Miller en su Gardeners dictionary. Antes del fin del siglo,
22
Gaertner en su De Fructibus et seminibus Plantarum dio una descripcin ms
detallada de las partes de la flor masculinas y las femeninas estn en
inflorescencias separadas (Figura 1).

Figura 1. Dibujo de la palma de aceite.

Muchos investigadores han tratado de distinguir las variedades de la palma de
aceite. Estos intentos en la mayora de los casos no han sido satisfactorios puesto
que en estado silvestre cada palma es un hibrido con respecto a algunos de sus
caracteres. La mayor parte de los primeros intentos de clasificacin no son dignos
de mencin puesto que se basaban en el poco conocimiento de la palma y sin
saber nada de los caracteres descritos. Sin embargo, es de inters la primera
descripcin hecha por Preuss en 1902, de la palma Lisombe nombre usado en el
Congo, los Cameruns y Nigeria, para la forma del fruto tenera de cuesco de
cscara delgada y empleado para denotar la procedencia de estirpe, hasta hace
poco tiempo. Tanto (CHEVALIER, 1910) como (JUMELLE, 1911) (JUMELLE,
1918) dividieron la especie en subespecies de acuerdo con la apariencia exterior
del fruto, mientras que Beccari ampli la clasificacin de Chevalier. Estas
clasificaciones fueron inaceptables debido a su fracaso en atribuir todas las
posibles variaciones del fruto a cada subespecie, y fueron (JANSSENS, 1927) y
(SMITH, 1935) quienes proporcionaron las primeras clasificaciones simples que en
lo esencial han resistido la prueba del tiempo. Aunque nada se saba de la

23
herencia de los caracteres descritos, Janssens en tres formas dura, tenera y
Pisfera (esta ltima llamada gracilinux segn Chevalier- cuando era virescens).
Tambin se reconoci el fruto blanco albescens pero slo se haba encontrado un
dura albescens. Asimismo, aunque doble envoltura, no se descubrieron
ejemplares del mismo en frutos verdes. Sin embargo, Smith reconoci lo
existencia de frutos con doble envoltura y sin envoltura, tanto nigrescens como
virescens, los llamo tipos y dividi todas las cuatro clases en formas de cuesco
con cscara gruesa y de cuesco de cscara delgada. Este simple procedimiento,
descrito por (VANDERWEYEN & ROELS, 1949) como la ms completa y lgica de
las clasificaciones de tipo y forma de fruto, en las publicaciones empricas,
estableci el uso de la clasificacin de tipo y forma de fruto, las publicaciones en
ingls, eliminando as la necesidad del trmino variedad, para material que podra
ser heterocigoto en muchos de sus caracteres. (BEIRNAERT & VANDERWEYEN,
1941) Reconoci que el trmino variedad fue usado impropiamente para la tenera
en el Lejano Oriente Schomole us el trmino forma del fruto ya en 1929.

5.5. Descripcin Botnica

5.5.1. La semilla

La semilla de palma (NOTES ON THE BOTANY OF THE OIL PALM, 1955)

(HUSSEY, 1958) es la nuez que queda despus de que se ha extrado el
mesocarpio aceitoso suave. Consta de un cuesco o endocarpio y una, dos o tres
almendras. Sin embargo, en la gran mayora de los casos, la semilla contiene slo
una almendra puesto que dos de los tres vulos en el ovario tricarpelar
generalmente abortan. A veces se prestan ovarios anormales y de ellos pueden
seguir, aunque rara vez, nueces con cuatro o cinco semillas. El tamao de la nuez
vara mucho y depende de tanto el grosor de la cscara como del tamao de la
almendra. Las nueces tpicas dura africanas pueden ser de 2 a 3 centmetros de
largo y en promedio tienen un peso de 4 g. (100 en un libra). Las nueces Deli dura
y las africanas grandes, son mayores y pesan hasta 13g. Las nueces tenera
africanas generalmente son de 2 cm o menos de largo y pesa en promedio 2
gramos (200 en una libra). No es raro encontrar nueces muy pequeas que pesen
1 g.

El cuesco tiene tres poros germinales que corresponden a tres partes del ovario
tricarpelar, aunque por supuesto, el nmero de poros funcionales corresponder al
nmero de almendras desarrolladas. En cada poro germinal se forma un tapn
fibroso y esas fibras estn cementadas juntas en la base para formar una
estructura laminar continua con la superficie interna de cuesco.

24
Dentro del cuesco est la almendra. Esta contiene capas de endospermo aceitoso
duro, de color blanco grisceo, rodeado por la testa parda oscura, cubierta por una
red de fibras. Encajado en el endospermo y frente a uno de los poros germinales,
se encuentra el embrin.

Cuando se realiza la germinacin, el endospermo se rompe en esta regin y disco

compuesto por el endospermo, la testa y la lmina del poro germinal, es empujado
hacia fuera de este poro junto con el tapn de fibra.

En la Figura 2, se ilustra el proceso de la germinacin. El embrin que emerge

forma un botn (llamado comnmente el hipoctilo, pero que (HENRY, 1951) y
otros botnicos consideran que representa el peciolo del cotiledn) , que
rpidamente adquiere una protuberancia plumular, mientras que desde el extremo
del mismo embrin emerge la radcula persistente.

Figura 2. Semilla y crecimiento inicial del germen.

A. Corte longitudinal. B. Semilla germinada. C.
Corte longitudinal del embrin. D, E, F, G. etapas
de crecimiento del embrin. H. Produccin de
races adventicias. I. Planta de 4 semanas. J.
Corte de la semilla.

25
Tanto la plmula como la radcula emergen a travs de una lgula cilndrica,
persistente, cercana a la semilla. Dentro de la semilla el haustorio se desarrolla
constantemente. Este rgano tiene un pigmento amarillo y se enrosca a lo largo
del eje longitudinal de la nuez, proporcionando as una superficie especfica mayor
para absorcin. Despus de alrededor de 3 meses el haustorio esponjoso ha
absorbido el endospermo y llena completamente la cavidad de la nuez.

5.5.2. La plntula

La plmula no emerge de la protuberancia plumular hasta que la radcula ha

alcanzado 1 cm de largo. Las primeras races advertencias se producen en un
anillo apenas por encima de la unin de la radcula con el hipoctilo y dan origen a
races secundarias antes de que haya salido la primera hoja del follaje. La radcula
contina creciendo por ms o menos 6 meses, tiempo en el cual ha alcanzado
casi 15 cm de largo. De all en adelante se desarrollan en su lugar numerosas
races primarias.

Antes de que emerja una hoja verde se producen dos vainas plumulares sin limbo.
Dicha hoja se reconoce por la presencia de una lmina y emerge alrededor de un
mes despus de la germinacin. De ah en adelante se produce una hoja por mes
hasta que la plantita tiene seis meses. La etapa de cuatro hojas, generalmente
considerada como apropiada para el trasplante de una plantita de pre-vivero al
vivero, se logra cuatro meses despus de la germinacin.

Despus de 3 a 4 meses, la base de tallo se vuelve un bulbo hinchado y las

primeras verdaderas races primarias emergen de l. Estas son ms gruesas que
la radcula y crecen a un ngulo de 45 con respecto a la vertical. Las races
secundarias nacen de all en todas las direcciones. Durante este segundo periodo
en la vida de la plantita las hojas se hacen sucesivamente ms grandes y cambian
de forma. Las hojas de la palma adulta son pinnadas, pero esta forma slo se
logra en etapas. Las primeras pocas hojas son lanceoladas con un nervio medial
que va hasta mitad de su longitud, este tipo de hoja es seguido rpidamente por
hojas en las que hendeduras dividen las lminas entre las venas para formar
foliolos o pinnas.

5.5.3. El desarrollo del tallo y de su yema terminal

En comn con otras palmas, el crecimiento inicial de la palma de aceite despus

de la etapa de germinacin involucra la formacin de una base ancha del tallo sin
alargamiento entre los nudos. Se forma una base amplia en la que la columna del
tallo puede descansar firmemente

26
Durante los primeros aos, mientras se forma la ancha base del tallo, este toma la
forma de un cono invertido. Es de este cono de donde se estn formando
continuamente las races primarias adventicias, tanto bajo la superficie del suelo
como poco arriba de ella. Tan pronto como los entrenudos empiezan a alargarse,
se forma un tallo columnar con las bases de las hojas adheridas. Aunque cada
segmento de tallos puede describirse como un entrenudo ms una hoja, debe
mencionarse que en las palmas viejas el nudo est indicado slo externamente
por la cicatriz de la hoja; en el interior no hay lmite entre los entrenudos
adyacentes. Las bases de las hojas se adhieren al tallo por lo menos durante 12
aos y a veces ms tiempo. Ellas se marchitan gradualmente y empiezan a caer
desde la base, la copa o la mitad del tallo. Cuando se han perdido todas las bases
de las hojas excepto unas pocas cerca de la copa, se dice que la palma es de
tallo alisado, en vez de tallo spero. En un palmar nativo, una palma rara vez
se vuelve de tallo alisado hasta que ha crecido, por lo menos parcialmente, por
encima de la vegetacin circundante y est en produccin. En las palmas de tallo
alisado las cicatrices de las bases de las hojas y las de sus vainas (que circundan
el tallo), se ven claramente.

Figura 3. Diagrama de filotaxis (Izquierda).

Representacin diagramtica del tallo (Centro); la
proporcin superior en corte muestra el pice (A),
rodeado por las hojas, la fecha (F) hacia arriba y las
hojas maduras con inflorescencia (INF) lateralmente.
Las bases de las hojas estn numeradas en orden
cronolgico de la formacin desde la base.

27
La forma que se disponen las hojas con relacin al eje de la palma se conoce
como su filotaxis. Las hojas se producen en el pice en una disposicin ordenada
que vista desde arriba es aproximadamente triangular. Sin embargo, una cuarta
hoja en orden de produccin, no cae exactamente sobre la primera puesto que el
ngulo que hacen dos hojas sucesivas con el eje (el ngulo de divergencia) varia
alrededor de un promedio de 137.5. Por esto la disposicin da lugar a conjuntos
de espirales. Esto se ilustra en la Figura 3 (HENRY, 1955) (NOTES ON THE
BOTANY OF THE OIL PALM., 1961).

En plantas bien desarrolladas se pueden ver dos conjuntos de espirales, ocho que
van en sentido y trece en el otro (NOTES ON THE BOTANY OF THE OIL PALM.,
1961). Tal descripcin se describe como (8+13). Si las bases de las hojas se
numeran en orden de la formacin de las mismas (la espiral gentica) esto se
aclara, puesto que, en un sentido se ve que cada octava hoja est en la misma
espiral, mientras que en otro, cada decimotercera hoja aparece en la misma
espiral (ms vertical) (vase Figura 3).

El tallo funciona como un rgano de sostn vascular de almacenamiento. Un

amplio cilindro central est separado de una corteza muy delgada a travs de la
cual pasan los vasos de las hojas. El cilindro tiene una zona perifrica de haces
vasculares apiados con vainas fibrosas de floema y las clulas parenquimticas
intercaladas son esclerticas; as esta zona proporciona el principal soporte
mecnico del tallo.

5.5.4. La hoja

El crecimiento de la hoja en la plantita y la disposicin de las hojas alrededor del

tallo se han descrito anteriormente. En la copa de una palma adulta, una sucesin
continua de yemas o primrdios foliares estn separndose lateralmente desde el
cono apical y se ha estudiado la velocidad de desarrollo de estas hojas (HENRY,
1955) (BROEKMANS, 1957). El desarrollo inicial es muy lento. En la copa se
pueden encontrar de cuarenta y cinco a cincuenta hojas; cada una queda
encerrada por uno o dos aos y luego se desarrolla rpidamente para formar una
flecha central y finalmente se abre. La base de la hoja rodea completamente el
pice del tallo y en la hoja adulta la base es persistente como una fuerte lmina
fibrosa.

La hoja madura es pinnada simple, produciendo folios lineales o pinnas a cada

lado del pecolo (NOTES ON THE BOTANY OF THE OIL PALM., 1962). Este
puede dividirse en dos zonas, el raquis, que lleva los foliolos y el pecolo que es

28
mucho ms corto que el raquis y produce slo espinas laterales. En la unin del
pecolo con el raquis se encuentran pequeos fololos con vestigios de lminas
(limbos de las hojas). La longitud de los pecolos vara enormemente y en la palma
Deli puede llegar a 1.2 m. Algunos pecolos permanecen verdes por un periodo
considerable.

Se ha demostrado que las espinas son de dos clases que se llaman espinas
fibrosas y espinas del nervio central (Figura 4). Las primeras son aquellas que se
encuentran en el pecolo; son muy regulares y estn formadas de la base de las
fibras de la vaina de la hoja. El punto en que estas fibras se abren es muy regular,
de modo que las espinas tienen casi todas el mismo largo. En donde empiezan a
aparecer los fololos completamente desarrollados. Las lminas de estos fololos
poco desarrollados con frecuencia llegan a desgarrarse, dejando una espina que
era el nervio central del fololo. Estas espinas tienen la misma irregularidad en la
disposicin que los fololos bien desarrollados en la hoja (REES, 1963).

Figura 4. Espinas en la palma de

aceite.
Los fololos se producen por la divisin de una hoja entera durante el alargamiento
de la hoja. Dentro de la flecha, los fololos se encuentran todava unidos entre s,
pero estn plegados hacia arriba y muestran claramente en donde se va a
producir la divisin. En una planta en crecimiento activo las flechas se producen
una cada vez y se dirigen verticalmente hacia arriba. Cuando se abre la flecha,
otra se alarga rpidamente para tomar su lugar. Despus que se ha abierto la
hoja, se desplaza progresivamente de modo centrfugo conforme emergen las
hojas ms jvenes. Las hojas de edad mediana se extienden paralelas al suelo y
su pice se inclina ligeramente hacia abajo.

Tpicamente, los fololos individuales son de forma lineal y cada hoja tiene un par
terminal. Hay entre 250 y 300 fololos por hoja madura y llegan a medir 1.3m de
largo y 6 cm de ancho. El nervio central del fololo es con frecuencia muy rgido y a
veces la lmina se desgarra hacia atrs desde el pice. Esto aumenta la
apariencia desordenada de la hoja.

29
El nmero de hojas producidas anualmente por una palma de plantacin aumenta
entre 30 y 40 a los 5 a 6 aos de edad. De ah en adelante la produccin
disminuye a un nivel de 20 a 25 por ao. En la axila de cada hoja hay una yema
que puede desarrollarse para dar una inflorescencia masculina, femenina u
ocasionalmente hermafrodita.

5.5.5. El sistema radical

La radcula de la plntula pronto es reemplazada por races adventicias primarias

que salen de la unin radcula-hipoctilo y luego de los estornudos inferiores del
tallo, que se forman en un cono basal macizo o tronco. Este ltimo retiene la
capacidad de producir races hasta bastante encima del nivel del suelo. Las races
se desarrollan a veces en el tallo hasta 1 m del suelo, pero stas normalmente se
secan antes de llegar al mismo.

En la palma madura miles de races primarias se extienden con rapidez desde el

tronco y continuamente nuevas races primarias reemplazan a las que se mueren.
Se han realizado algunos estudios del sistema radical (YAMPOLSKY, 1922)
(YAMPOLSKY, 1924) (LAMBOURNE, 1935) (PURVIS, 1956) y se ha demostrado
que su extensin vertical depende en gran parte de la presencia o ausencia del
manto fretico.

Las races primarias se extienden sea hacia debajo de la base de la palma, sea
radicalmente en una direccin ms o menos horizontal (Figura 5). Las races
primarias descendientes, que proceden directamente de la base de la palma son
menores en nmero que las radiales y tienen muchas races secundarias menos.
(RUER, 1969) Ha demostrado que estas races descendentes son para sujetarse y
desempean poco o ningn papel en la absorcin del agua.

Figura 5. Distribucin de races secundarias a partir de una primaria en una palma

de 3 aos.

30
Las restantes races primarias aparecen desde la base del tallo en todos los
ngulos con respecto a la superficie del suelo, pero tienden a inclinarse hacia la
horizontal y pocas se encuentran a ms de 1 m. De estas races primarias, de 5 a
10 mm de dimetro y a su vez dan origen a races terciarias que crecen
horizontalmente, de 0.5 a 1.5 mm de dimetro y hasta 15 cm de largo. De stas se
desarrolla la masa de races cuaternarias de hasta 3 cm de largo y slo 0.2 a 0.5
mm de dimetro.

Las races secundarias ascendentes generalmente llegan a la superficie del suelo,

mientras que las descendentes pueden alcanzar profundidades considerables. La
densidad de todas las clases de races en los 40 cm superiores del suelo,
generalmente disminuye con la distancia a partir de la palma, pero en las palmas
adultas, la cantidad de races absorbentes en crculos sucesivos cada vez
mayores alrededor de la palma, aumenta por lo menos hasta un radio de 3.50 a
4.50 m. (RUER, 1967). La mayor cantidad races esta en los 15 a 30 cm
superiores del suelo y se ha demostrado que la mayor parte de la absorcin de los
nutrientes se hace a travs de las races cuaternarias y los pices absorbentes de
las primarias, secundarias y terciares a la misma profundidad (THOMAS, et al.,
1970).

Las races de todas las clases muestran un tropismo positivo hacia las mejores
condiciones de abastecimiento de agua y de nutrientes y, si existe vegetacin
cada o montones de hojas de la palma en descomposicin, o bajo una buena
cubierta de Pueraria, esto puede conducir a una gran densidad de races
cuaternarias en la mitad entre dos hileras de palmas (BACHY, 1964).

5.5.6. Las flores y el fruto

Puesto que los productos comerciales de la palma de aceite se obtienen del fruto,
los hbitos de floracin y fructificacin son de inters e importancia primordiales.
Se dice que la palma de aceite es monoica, es decir que las flores masculinas y
femeninas se producen separadamente y en este caso las inflorescencias
distintas, masculina y femenina- en la misma planta. Sin embargo, la investigacin
detallada de las flores ha demostrado que cada primordio floral es un productor
potencial de rganos tanto masculinos como femeninos, aunque uno u otro casi
siempre permanece rudimentario (BEIRNAERT, 1935). En casos muy raros tanto
el androceo como el gineceo se desarrollan completamente para dar una flor
hermafrodita. En segundo lugar, a veces, ocurre la formacin de inflorescencias
hermafroditas, especialmente en los primeros aos de la vida de una palma. En
tercer lugar cada flor femenina tiene a cada lado dos flores masculinas que la

31
acompaan, que normalmente no se desarrollan, pero que en casos aislados
alcanzan un grado de desarrollo en que se puede producir polen. Estas
aberraciones pueden ser de importancia para el fitomejorador y debera tenerse
presente que estrictamente, no hay inflorescencia femenina: el trmino se aplica
en realidad al gran nmero de inflorescencias normales que cuando alcanzan la
madurez sexual en la antesis, se ve que estn compuestas slo de flores
femeninas.

En la axila de cada hoja se inicia una inflorescencia, pero algunas abortan antes
de la emergencia. Se ha conocido de inflorescencias gemelas en la axila de la
hoja. Cada inflorescencia es estn una espiga o espdice compuesto que contina
sobre un pednculo fuerte de 30 a 45 cm de largo. Las espiguillas estn
dispuestas en espiral alrededor de un raquis central en forma que vara tanto con
la edad como con la posicin en el raquis; sin embargo, medidas equivalentes del
ndice filotxico han mostrado poca diferencia entre flor masculina y femenina
(TAILLEZ, 1971). Una espata inferior y otra exterior encierran apretadamente la
inflorescencia hasta unas seis semanas antes de la antesis, cuando la espata
inferior empieza a abrirse. Despus de 2 o 3 semanas ms, sta se parte; ms
tarde las dos espatas se desgastan y desintegran y la inflorescencia se abre
camino a travs de ellas.

5.5.7. La inflorescencia y la flor femenina

La inflorescencia femenina alcanza una longitud de 30 cm o ms antes de abrirse.

Las espiguillas femeninas son gruesas y carnosas y se desarrollan en la axila de
una brctea espinosa. Las flores se disponen en espiral alrededor del raquis de la
espiguilla; cada una se aloja en una cavidad no profunda y debajo de ella la rodea
una brctea que se yergue y forma una espina. El nmero de flores en una
inflorescencia vara de una palma a otra, pero en todos los casos hay un nmero
mayor (doce a treinta). Las inflorescencias contienen entonces varios miles de
flores.
Cada cavidad, o alvolo, contiene la yema de la flor femenina y las dos pequeas
flores masculinas que la acompaan y normalmente abortan. Las tres estn
rodeadas por la brctea floral (Figura 6).

Ocasionalmente pueden desarrollarse dos flores femeninas dentro de un par nico

de bractolas y entre las dos flores masculinas abortivas acompaantes. Las
anormalidades de la inflorescencia no son de ninguna manera raras en las
palmas de aceite y los fitomejoradores deben tener en cuenta la tendencia a la
anormalidad.

32
 Figura 6. Representacin diagramtica de la flor
femenina con las flores masculinas rudimentarias que
la acompaan.

5.5.8. La inflorescencia y la flor masculina

La inflorescencia masculina se produce en un pednculo ms largo que el de la

femenina, contiene largas espiguillas digitiformes cilndricas y no es espinosa. La
espiguilla tiene brcteas y protuberancias terminales, pero stas son de tamao
muy reducido. Las espiguillas miden entre 10 y 20 cm de largo.

Una espiguilla o dedo de tamao promedio tendr entre 700 y 1200 flores
masculinas que son mucho ms cortas que las femeninas. Antes de abrirse, la flor
ssil est completamente encerrada en una brctea triangular; consta de un
perianto de seis segmentos diminutos, un androceo tubular con seis o rara vez
siete anteras y un gineceo rudimentario con tres protuberancias que corresponden
al estigma trilobulado. Las flores empiezan a abrirse desde la base de la espiguilla,
se abren generalmente en dos das aunque durante la estacin lluviosa la apertura
puede durar cuatro das; la mayor parte de polen se esparce durante los 2 a 3 das
siguientes al comienzo de la antesis y la produccin cesa en 5 das. La viabilidad
del polen tardo es baja (HARDON & TURNER, 1967). Las inflorescencias
producen de 25 a 50 g de polen.

5.5.9. Inflorescencias hermafroditas o mixtas

Se forma una gran variedad de inflorescencias hermafroditas o mixtas.

Generalmente aparecen espiguillas masculinas, femeninas y mixtas en el mismo
racimo pero en proporciones y posiciones muy diferentes. Algunas palmas estn
ms dispuestas que otras para la produccin de estas inflorescencias.

33
Las espiguillas mixtas tienen, en proporciones variables, flores femeninas en la
base y flores masculinas en la cima. Entre las dos se encuentran flores
masculinas geminifloras, que corresponden a las flores masculinas
acompaantes y que estn muy juntas, sin flor femenina entre ellas. Continuando
hacia arriba en la espiguilla, ellas dan lugar a las flores masculinas normales,
solas. Las espiguillas pueden contener todos los tres tipos del grupo de flores, o
bien flores masculinas y geminifloras solas, o pueden tener la apariencia
superficial de una espiguilla femenina pero contienen flores geminifloras.

Las palmas jvenes producen ocasionalmente un tipo peculiar de inflorescencia

que se ha llamado andromorfa. Este tiene toda la apariencia y estructura de una
inflorescencia masculina antes de abrirse. Sin embargo, al examinarla muestra
que las flores masculinas han sido reemplazadas por pequeas: flores femeninas
solitarias dispuestas a la manera de las flores en una inflorescencia masculina.
Pequeos frutos se desarrollan de las flores, pero los carpelos no se unen
firmemente y el fruto resultante tiene tres lbulos que corresponden a los tres
carpelos algo separados. Tambin se pueden encontrar flores masculinas en
inflorescencias andromrficas, aunque algunas estn deformadas.

5.5.10. El fruto y el racimo

El fruto es de una drupa ssil cuya forma vara desde casi esfrica a ovoide o
alargada y un poco ms grueso en el pice. En longitud vara desde 2 a ms de 5
cm y en peso de 3 g a ms de 30 g. El pericarpio del fruto consta del exocarpio
exterior o piel, el mesocarpio o pulpa (a menudo llamado incorrectamente
pericarpio y de ah el aceite de pericarpio), y el endocarpio o cuesco. Cuando se
mide la pulpa, el exocarpio se incluye junto con el mesocarpio.

En la apariencia externa el fruto vara considerablemente, en especial al madurar.

An ms, el exocarpio del fruto interno. El tipo ms pigmentado que el del fruto
interno. El tipo ms comn de fruto es de color violeta oscuro a negro en el pice e
incoloro en la base antes de la maduracin. Este fruto se ha descrito como
ordinario o nigrescens. Un tipo relativamente raro es verde antes de la
maduracin, y este se llama verde o virescens. Este ltimo cambia en la madurez
a un anaranjado-rojizo claro aunque el pice del fruto externo sigue verdoso. Se
ha visto que la frecuencia del tipo de virescens era de 50 en 10000 racimos en un
rea de palmares en Nigeria y 72 en 10000 en Angola. El color del fruto ordinario
vara en grado apreciable al madurar y hay evidencias de que esto est
relacionado con el contenido de caroteno. Esta diferencia de color al madurar fue
reconocida hace tiempo por (CHEVALIER, 1910) quien dio los nombres communis

34
al fruto completamente rojo cuando maduro con una pequea aureola negra o
parda en el pice y sempernigra al fruto que cuando maduro es negro en la
mitad superior pero rojo en la base.

La descripcin anterior se refiere a la apariencia de color del fruto que se

encuentran comn u ocasionalmente en los palmares y en las plantaciones. Sin
embargo, hay una variacin de color mucho ms fundamental debida a la
presencia o ausencia de carotenoides. El fruto albescens, caracterizado por la
ausencia de caroteno en el mesocarpio es muy raro; en realidad este fruto
contiene una cantidad muy pequea de caroteno. Se conocen a estos frutos como
albo-nigrescens o albo- virescens. La diferencia se encuentra slo en el pice del
fruto, siendo el del primero en apariencia pardo oscuro a negro y del ltimo, verde.
El resto del fruto es de color marfil y al madurar, amarillo plido. Los frutos
nigrescens y virescens contienen cantidades variables de carotenoides en el
mesocarpio. El fruto externo puede tener hasta el doble del contenido de caroteno
del fruto interno.

En cuanto la estructura interna, las diferencias ms importantes se van a encontrar

en el espesor de la cscara (Figura 7). Puesto que se pueden encontrar todos los
espesores desde menos de 1 mm hasta 8 mm, se podra pensar que una divisin
de frutos en cuesco delgado y cuesco grueso es algo arbitraria. Sin embargo, hace
tiempo se observ en el frica una rara forma de cuesco, y se llam Pisfera
debido a las almendras sin cuesco y en forma de arvejas (guisantes) que se
encontraron en los frutos frtiles. Las palmas Pisfera siempre producen grandes
cantidades de racimos femeninos. En muchos casos la mayora de los racimos se
descomponen; estos se conocen como Pisfera infrtiles, aunque por supuesto el
desarrollo de algunos frutos es necesario para poder identificarlos, pues se
encuentran otras formas abortivas. Las Pisfera frtiles son ms raras.

Figura 7. Tipos de fruto. Dura, Tnera y Pisfera

(Izquierda a Derecha).
35
Fuera del descubrimiento de la forma Pisfera, tambin se observ que en la
mayora de los frutos de cuesco ms delgado haba un claro anillo de fibras
incrustado en el mesocarpio, pero cerca del cuesco y rodendolo. Esto puede
verse muy claro cuando se corta el fruto transversalmente

Por esto, la forma interna del fruto puede describirse como:

A) Dura: cuesco de 2 a 8 mm de espesor, aunque ocasionalmente menos,

contenido bajo a medio de mesocarpio (35 a 55 % pero a veces, en la Deli
dura, hasta 65%); no hay anillo de fibras.

B) Tenera: cueco de 0.5 a 4 mm de espesor contenido de alto de mesocarpio (60

a 96%, pero ocasionalmente baja hasta 55%); anillo de fibras.

C) Pisfera: sin cuesco.

El mesocarpio de todos los frutos contiene fibras que atraviesan longitudinalmente

el tejido que contiene el aceite. Este material fibroso casi siempre constituye cerca
del 16% del mesocarpio, pero puede variar de 11 a 21%.

El racimo de frutos, es ovoide y puede alcanzar 50 cm de largo y 35 cm de ancho.

El racimo est constituido por frutos externos e internos, siendo estos ltimos algo
aplanados y menos pigmentados; por unos pocos de los frutos llamados
partenocrpicos que se han desarrollado aunque no se haya realizado la
fecundacin (o posiblemente luego de aborto parcial); algunos pequeos frutos
infrtiles no desarrollados y que no contienen aceite y los vstagos de las
espiguillas y espinas del racimo. En el fruto partenocrpico faltan el endospermo y
el embrin y el centro es generalmente slido. El peso del racimo vara desde
unos pocos kilogramos hasta cerca de 100 kg de acuerdo con la edad y la
situacin, pero en las plantaciones adultas los pesos medios van de 10 a 30 kg.

Los racimos bien desarrollados llevan de 500 a 4000 frutos, siendo lo comn una
medida de 1500, con una proporcin de fruto a racimo de 60 a 70%. La
maduracin se realiza desde la base hacia arriba, y los frutos se desprenden
gradualmente.

El fruto se desarrolla constantemente en tamao y peso ms o menos desde el

decimoquinto al nonagsimo da despus de la antesis. La formacin de aceite en
la almendra y el mesocarpio se realiza hacia el fin de un periodo de maduracin
durante el cual el cuesco se endurece y el embrin se vuelve viable.

36
5.6. El clima y los suelos de las regiones de Palma de aceite

Las caractersticas climticas de las reas de la mayor produccin pueden

resumirse como sigue:

1. Precipitaciones de 2000 mm o ms, distribuida uniformemente durante el

ao, es decir, sin estaciones secas muy notables.

2. Temperatura mxima media de 29- 33C (85-90F) y una mnima medida

de 22-24C (72-75F).

3. Luz solar constante que llegue por lo menos a 5 horas por da en todos los
meses del ao y alcance a 7 horas por da en algunos meses.

De forma generalizada la productividad de las palmas es fuertemente influenciada

por la heterogeneidad del ambiente y las especies pueden presentar diferentes
respuestas en funcin de las alteraciones del medio ambiente (CLARK, et al.,
1995).

En coco, sobre condiciones ambientales desfavorables, la fisiologa y la morfologa

pueden ser afectadas, pudiendo hasta causar una reduccin del nmero de hojas
(FREMOND, et al., 1975) o hasta alterar el dimetro del tallo (FERRI, 1973). En
chontaduro, aunque adaptada a las diferentes condiciones ecolgicas en los
trpicos, un periodo de estrs hdrico causa la reduccin en el crecimiento de las
plantas y seca precozmente las hojas, con una baja en la produccin de palmito
(BOVI, et al., 1998). Variaciones en las propiedades fsicas del suelo tambin
pueden afectar el crecimiento y perfilamiento de las plantas (ALVES DOS
SANTOS, 2010).

La palma muestra variacin tanto inherente al germoplasma en cuanto a los

factores ambientales. El clima es uno de esos factores ambientales que ms
influencian los procesos productivos de esta palmcea. Las variaciones asociadas
al clima son ms complejas, generalmente ocasionan eventos en cadena,
manifestados por medio de los procesos fisiolgicos de la planta, que provocan
respuestas variadas, sea en la produccin del fruto o en la produccin de aceite
(DURAN & ORTIZ, 1995) (ALVARADO, 1998).

El rgimen hdrico es el principal factor incluido en las oscilaciones de

productividad verificadas en las diferentes regiones donde se cultiva la palma de
aceite (GONALVES, 2001). Las variaciones pluviomtricas anuales se expresan
en la sexualidad de las inflorescencia y en la produccin de los cachos, en el
intervalo de hasta 28 meses (BASTOS, 2000).

Adems de esto, pueden afectar la emisin foliar, el nmero y el peso promedio

de los cachos y provocar doblamiento de las hojas viejas (UMANA &
37
CHINCHILLA, 1991). Las propiedades del suelo tambin pueden interferir en la
productividad de palma de aceite. A pesar de ser cultivado en una variada gama
de suelos de las regiones tropicales, la palma de aceite est adaptada a los suelos
profundos, bien drenados y planos, evitando se los muy arcillosos y arenosos
(MACEDO & RODRIGUES, 2000).

Estudios hechos en plantaciones localizados en Amrica Central, evaluando

textura, humedad, drenaje, porosidad y caractersticas qumicas del suelo,
muestran que las propiedades pueden interferir en la produccin de plantas
(DURAN & ORTIZ, 1995).

Con relacin a las caractersticas qumicas de los suelos, estudios hechos con
palmeras entre 2 a 8 aos de edad constataron que los macronutrientes extrados
en mayor cantidad por la palma de aceite, en el 8vo. ao, siguieron este orden: K
> N > Ca > MG > P > S (VIEGAS, 1993). Con relacin a los micronutrientes, los
mas extrados por la palma de aceite, fueron de acuerdo a la secuencia
decreciente de extraccin: Cl > Fe > Mn > Zn > B > Cu.

La realizacin de las prcticas culturales de forma correcta y en la poca

adecuada es tambin de fundamental importancia para el buen desarrollo y
produccin. Dentro de las principales actividades de manejo y manutencin de la
plantacin de palma, estn: plateo, limpieza de las calles, eliminacin de plantas
invasoras, fitosanidad, poda, polinizacin asistida y colecta (BERTHAUD, et al.,
2000).

5.7. Importancia de la palma de aceite

El cultivo de la palma puede ser considerado como una actividad regenerativa,

debido a que puede ser plantada en reas alteradas, posibilitando un perfecto
recubrimiento en su etapa adulta y puede ser asociado a leguminosas de
cobertura de suelo, ayudando a mejorar las caractersticas del suelo utilizado.

Es un cultivo de perenne con produccin continua a lo largo del ao, teniendo una
vida til desde el punto de vista econmico de 25 aos y dentro de las oleaginosas
cultivadas, ocupa el primer puesto, siendo las ms productiva, con rendimientos
superiores a 18 - 26 toneladas de racimos de fruta fresca/ao, con un rendimiento
entre 3 - 5 toneladas de aceite/ha correspondiendo a 6,5 veces la productividad
de aceite de colza, a 7 veces la de girasol y a ms de 9 veces la del aceite de
soya, observar Tabla 1.

Innumerables son los usos y las aplicaciones de los aceites de palma, tanto para
la alimentacin humana y animal como para otros usos no comestibles. Para
alimentacin humana, es utilizado como margarina, grasa para panificacin, polvo
38
para helados, aceite para cocina y sustitutos de manteca de cacao; en la
alimentacin animal, en el preparo de las raciones balanceadas obtenidas a travs
de una mezcla con la torta de palmiste (subproducto resultante del proceso de
extraccin de aceite) y del aceite de palma (integral o su fraccin liquida, olena)
(KALINKA, 2002).

Tabla 1. Productividad promedio de los principales cultivos de plantas oleaginosas

en trminos de kg. de aceite/ha.

Produccin Factor de
Produccin de
Cultivo semillas conversin a
aceite (Kg/ha/ao)
(kg/Ha/ao) aceite (%)
Soya 2207,8 18 - 19 408,4
Man 909,3 45 - 50 431,9
Girasol 1210,6 40 - 50 544,8
Colza 1249,1 40 - 45 607,4
Palma de aceite 20 3200
Copra 532,1 65 - 68 356,5
Fuente: (Malaysian Palm Oil Board, 2000).

De acuerdo con informacin de Lans and Mill Corporation (LMC), las expectativas
del comportamiento de la demanda de aceites vegetales para el periodo 2000 -
2020 a nivel mundial, indican que esta crecer a una tasa de 5% anual. En este
escenario, es muy importante considerar el uso que se dar a los aceites
vegetales en el mundo, ya sea consumo humano, biocombustibles o aceites como
materia prima para la industria oleoqumica.

El rengln de uso que genera la mayor expectativa en trminos de demanda, es el

de materia prima para la produccin de biocombustibles. En efecto, se espera que
la tendencia de crecimiento de las cantidades de aceites vegetales, dedicadas a la
generacin de energas renovables, sea del orden de 13,5% anual para el periodo
2009. De esta manera, si en 2008 se utilizaron 11, 2 millones de toneladas para
este fin, en 2020 se llegar a 37,5 millones de toneladas.

Tabla 2. Demanda de aceites vegetales a nivel mundial segn uso. 2000 - 2020
(Millones de toneladas).

2000 2005 2008 2009 2010 2012 2015 2020

Alimentacin 75,4 92,1 105,7 109,6 112,8 124 140,7 172,3
humana
Biocombustibles 0,0 4,7 11,2 12,7 14,1 16,7 21,8 37,5
Oleoqumica 6,2 8,3 9,7 9,3 9,6 10,4 11,5 13,1
Total 81,6 105,1 126,6 131,6 136,5 151,1 174,0 222,9
Fuente: (LMC, 2008).

39
De acuerdo a aceites para consumo humano, la tasa de crecimiento anual, se
concibe que ser del orden de 4,2 %, muy similar al uso de aceites vegetales en la
industria oleoqumica; y a nivel mundial esta crecer el 63% en el periodo
comprendido entre 2008 - 2020, pasando de 105,7 a 172,2 millones de toneladas
(LMC, 2008).

Los principales pases que muestran niveles de consumo de aceites vegetales son
China, India, Estados Unidos y la Unin Europea, los cuales consumen el 48% de
los aceite a nivel mundial; para el periodo 2000 - 2020, se espera que China e
india, incrementen sus niveles de consumo a tasas anuales del 5,9% y del 5,6%
respectivamente.

Tabla 3. Proyecciones de la demanda de aceites vegetales para consumo humano

a nivel mundial (Millones de toneladas).

2000 2005 2008 2009 2010 2012 2015 2020

China 9,14 14,96 18,11 18,95 19,67 21,85 25,09 30,37
India 9,44 10,77 11,87 12,64 13,32 15,58 19,37 27,67
Estados 8,29 9,12 10,68 10,94 11,08 11,78 12,7 14,31
Unidos
Unin 9,25 10,42 10,8 10,99 11,11 11,73 12,55 14,1
Europea
Fuente: (LMC, 2008).

Los principales exportadores de aceite de palma en el mundo son Malasia e

Indonesia, los cuales han participado con el 89% del total de ventas; sin embargo,
el aceite de palma de Indonesia durante el periodo 2001 - 2007, tuvo un
crecimiento anual de 16% pasando de 4,9 millones a 12,6 millones en 2007,
llevando a que aumentara su exportacin al 43%, y que Malasia bajara su
participacin del 61% al 47%.

Tabla 4. Produccin de palma 2000 - 2020 (Millones de toneladas).

2000 2005 2008 2009 2010 2015 2020

Indonesia 7,0 13,1 18,4 18,6 19,7 34,7 56,4
Malasia 10,8 15,0 17,3 17,2 17,8 24,2 30,1
Tailandia 0,7 0,8 1,1 1,4 1,3 1,9 2,9
Colombia 0,5 0,7 0,8 0,9 1,0 1,5 2,2
Nigeria 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,9 1,0
Papa 0,3 0,4 0,4 0,5 0,5 0,7 0,9
Nueva
Guinea
Resto del 1,4 1,7 1,8 1,8 1,9 2,2 2,7
Mundo
Mundo 21,5 32,3 40,6 41,2 42,9 66,1 95,9
Fuente: (LMC, 2008).
40
En 2008, la participacin de Indonesia en el total de la produccin mundial fue de
45%, mientras que Malasia se ubic en el segundo lugar con el 43%; a pesar de
que los dems pases productores ocuparon lugares secundarios, Colombia es el
principal productor del continente americano.

Se destaca que Tailandia y Colombia, experimentarn crecimientos anuales del

orden del 8% en la produccin de aceite de palma, lo que llevar a que Colombia
termine en el ao 2020 con una produccin cercana a los 2,2 millones de
toneladas (Tabla 4).

5.8. Recursos Genticos

5.8.1. Germoplasma de Palma de aceite en el Mundo

5.8.1.1. Origen del germoplasma Calabar

Durante los aos de 1911 a 1915, E. Smith, del Departamento de Agricultura de

Nigeria, sembr aproximadamente 800 palmas, que provenan de semillas de
polinizacin abierta recolectadas en poblaciones silvestres en la provincia de
Calabar, en el suroeste de Nigeria. El rendimiento y la composicin del racimo de
estas plantas fueron registrados entre 1922 y 1928, lo cual permiti seleccionar
nueve palmas duras y 10 Tneras. Doce de las palmas fueron autofecundadas
para formar la generacin Calabar F1, la cual fue sembrada en cuatro de las
estaciones del Departamento de Agricultura (Ogba, Umudike, Ibadan y Nkwelle)
entre 1930 y 1935. Posteriormente, estas estaciones suministraron semilla
("extension work seed", EWS) para plantaciones y para experimentacin.
Otras autofecundaciones de las palmas originales de la poblacin Calabar fueron
sembradas en la estacin de Benin en 1942. La palma 551.256D (Ca 256) es la
ms conocida de dicha generacin original debido a su excelente produccin de
fruta. La caracterstica "virescens" en el color de la fruta, proviene de las palmas
551.341 y 551.375.
La estacin de Ogba, produjo cruces DxD, TxT y DxP para ser sembrados en la
estacin principal de Benin entre 1945 y 1947. Estos cruces constituyeron la
generacin Calabar F2. A partir de aqu, las poblaciones dura y Tnera se
mantuvieron separadas, no as los distintos orgenes.
De las poblaciones Calabar F1 sembradas en Nkwelle y Umudike, fueron
seleccionadas 14 y 16 palmas respectivamente, usando los criterios de
rendimiento de fruta y composicin del racimo. Las palmas seleccionadas como
madres fueron fecundadas con una mezcla de polen proveniente de las otras
palmas seleccionadas; las progenies as obtenidas fueron sembradas en una rea
denominada "rea de concentracin de materiales Calabar" en Benin, en 1958.

41
En resumen, hasta 1958, la estacin principal haba plantado el siguiente
germoplasma Calabar:

1942: progenies F1 de la parcela Calabar original

1945-47: progenies F2 de la estacin de Ogba

1940's: semillas Calabar DxP del programa de extensin de las subestaciones

1958: progenies F2 provenientes de la mezcla de polen de las selecciones

Calabar realizadas en Umudike y Nkwelle.

5.8.1.2. Origen del germoplasma Aba

En la dcada de 1920, se plant un experimento en 11 ha cerca de Aba para

mejorar las poblaciones locales. El rendimiento de fruta y la composicin del
racimo de cerca de 200 palmas fueron registrados durante 12 aos. A finales de la
dcada de 1930 fueron seleccionadas cinco palmas dura Aba y seis Tneras.
Luego estas palmas fueron autofecundadas e intercruzadas y sus progenies
plantadas en Benin durante los aos de 1939 a 1942. Debido a las malas tcnicas
de polinizacin, la mayora de las progenies procedan de entrecruzamientos, tras
lo cual, la atencin se centr en los descendencias TxT de cuatro de las Tneras.

Anlisis de racimos realizados posteriormente, permitieron ampliar la seleccin de

palmas en esta poblacin Aba. Sin embargo, solo 42 duras y tres Tneras fueron
seleccionadas; con ellas se inici un programa de cruces en 1952. El polen
utilizado para las polinizaciones fue una mezcla de las palmas seleccionadas,
siempre manteniendo la poblacin dura separada de las Tneras. Ms de
cuarenta y nueve progenies Aba fueron sembradas en Benin en 1956.

5.8.1.3. Origen del germoplasma Ufuma

En 1939 se inici la evaluacin del rendimiento en un lote de palmas silvestres (en

su mayora Tneras) de 48 ha cerca de Ufuma. Veinticinco duras y 35 Tneras
fueron seleccionadas para su uso posterior en los programas de mejoramiento. A
diferencia de lo ocurrido con las poblaciones Calabar y Aba, en este caso hubo
una mayor presin de seleccin sobre las caractersticas del racimo, debido a la
presencia de racimos de mayor calidad. (HARTLEY, 1977), present los datos de
produccin y caractersticas del racimo de 25 Tneras Ufuma, las cuales
mostraron en promedio valores de fruto en el racimo (F/B) de 56.4%, cscara en el
fruto (S/F) de 14.5% y de almendra en el fruto (K/F) de 11.7%.
42
Una nueva generacin fue desarrollada a partir de la mezcla de polen proveniente
de las mejores palmas. As, la F2 consisti de 72 cruces originados de 19 duras;
adems de 81 progenies provenientes de 25 Tneras. Todos los cruces fueron
sembrados en diferentes ensayos en la estacin principal, en 1956. Okwuagwu
(1986) se refirieron a las progenies Aba y Ufuma sembradas en esta estacin
como las "40 ha del rea de concentracin". En apariencia esta es la misma rea
de prueba de progenies mencionada por (WEST, 1976).

5.8.1.4. Origen del germoplasma Angola en el NIFOR

A pesar de que el germoplasma Angola no tuvo su origen en Nigeria, el programa

del WAIFOR/NIFOR introdujo, evalu y distribuy una pequea poblacin de este
origen. Dicho material procede de seis palmas Angola sembradas en Njala, Sierra
Leona, en 1926. La autofecundacin de la palma 907.263T (ANG 263) fue
sembrada en Benin en 1941; otras progenies derivadas de las seis palmas se
sembraron en el periodo entre 1960 y 1963.

Algunas de estas selecciones Angola, que con frecuencia aparecen en el pedigr

de las generaciones avanzadas de este origen son 1.2209D, 1.2215P, 1.2224T,
1.2227D y 1.2229T.

5.8.1.5. Origen del germoplasma Deli NIFOR

En 1926, dos lotes de semillas de origen Deli fueron recibidos en Nigeria,

procedentes de la plantacin SOCFIN Tandjong-Gentung y de la palma 8 AVROS
Deli; esta ltima tuvo en promedio un rendimiento de 270 kg FFB/ao. El lote Deli
fue sembrado en la plantacin Moor en Ibadan, en Ogba y en Umudike, entre 1926
y 1929. El registro del rendimiento se inici en 1933 y las cinco palmas superiores
fueron seleccionadas y autofecundadas; las progenies obtenidas se plantaron en
Ibadan en 1939.

En 1939 fue recibido en Nigeria otro lote de Deli duras, esta vez de la Estacin
Experimental de Serdang. Diez cruces de las Deli de "Serdang Avenue" fueron
sembradas en Benin en 1941 junto con la segunda generacin de Ibadan y cuatro
progenies africanas como testigo. Las progenies Serdang 19 x 65 mostraron buen
rendimiento, a diferencia del resto de las progenies, cuya produccin fue
desuniforme.

En 1961 se obtuvo nuevo germoplasma Deli proveniente del IRHO, Pamol-Nigeria

(Cowan), United Plantations y Jamaica. Este ltimo es probablemente de origen
Sumatra y Java, obtenido a partir del Jardn Botnico de Lancetilla (Honduras).
43
5.8.2. Origen gentico de los materiales de mejoramiento en Colombia

5.8.2.1. Origen Africano

En 1923 el Bilogo Florent Claes, Director del Jardn Botnico de Bruselas,

Blgica, sugiere al gobierno colombiano introducir el cultivo de la palma de aceite
al pas. Luego diez aos despus son introducidas por Claes las primeras semillas
de la especie Elaeis guineensis desde el Jardn Botnico de Eala, Zaire. Y son
entregadas a Monseor Monconill, quien las entrega a los misioneros de Florencia
(Caquet), Mocoa y Puerto Ass (Putumayo), 206 palmas de estas se plantaron
como ornamentales en la Estacin de Palmira en 1933, las cuales sirvieron como
madres para siembras posteriores en el litoral pacfico y en 1936 cuarenta palmas
de la segunda introduccin de semillas Tenera de polinizacin abierta, tambin
originarias de Eala, Zaire, fueron sembradas por el I.A. M. J. Rivero en Palmira.

Se considera que el material Tenera sembrado en Palmira es descendiente de la

palma SP-540T, porque la remesa de semillas se registr como variedad Djongo
que significa en el dialecto Congo Belga (Zaire) la mejor. Indicando que descenda
de la famosa palma Tenera Djongo de Eala que dio origen a la lnea Sungei
Pantjur 540T, en Indonesia y a una gran proporcin de las lneas Tenera y Pisfera
localizadas en Asia frica y Amrica (HARTLEY, 1974) (HARTLEY, 1988).

Las semillas de Eala, Zaire, introducidas a Colombia produjeron, en forma

incuestionable, descendencias del tipo Tenera Yangambi en Calima,
Buenaventura, departamento del Valle (HARTLEY, 1988).

En 1945 V. M. Patio en Palmira selecciono palmas sobresalientes, usando como

criterios de seleccin un espesor de pulpa superior a 7 mm y frutos con ms de 13
gramos de peso. El material recolectado por V. M. Patio en 1947, se establece en
una pequea plantacin en la Estacin Agroforestal del Calima, Buenaventura,
Departamento del Valle, con semillas obtenidas mediante cruzamientos
controlados entre las almas Tenera seleccionadas en Palmira. (VALLEJO, 1978)
(ARIAS & FIGUEREDO, 1987). Estos materiales sembrados constituyeron la
poblacin parental de origen africano, una de las bases del programa de
mejoramiento gentico de la palma de aceite a nivel nacional, fuente de padres
Pisfera.

5.8.2.2. Origen Asitico

La introduccin en 1949 realizada por la United Fruit que import de la Estacin

Experimental de Lancetilla, Honduras, semillas Dura Deli de libre polinizacin, con
origen previo en Sumatra. Se sembraron 172 ha en la Hacienda Patuca, localizada

44
en Cinaga, Sevilla, Departamento del Magdalena (HARTLEY, 1974) (ARIAS &
FIGUEREDO, 1987) (HARTLEY, 1988).

Con material Dura Deli de libre polinizacin introducido de Surinam, con origen de
Sumatra, se establece en 1953 una plantacin en la Estacin Experimental La
Pepilla, Aracataca, Departamento del Magdalena (ARIAS & FIGUEREDO, 1987).

Los materiales sembrados en Patuca y Pepilla conforman la poblacin parental de

origen asitico, fuente de materiales Dura, base del mejoramiento gentico en la
Palma de aceite del pas.

5.8.2.3. Introducciones de germoplasma al C.I. El Mira

5.8.2.3.1. Germoplasma de origen Africano

En 1977, se siembra doce cruzamientos Tenera x Tenera, Tenera x Pisfera y

autofecundaciones Tenera, de las series La M, Costa de Marfil y Pob, Benin
producidas por IRHO, Francia. Estos materiales ya se incluyeron en el primer ciclo
de Seleccin Recurrente. El ao siguiente IRHO (Francia, Costa de Marfil),
produce una mezcla de progenies Tenera que son sembrados; luego se siembra
progenies Dura y Tenera sin registro genealgico, procedente de Zaire en 1986.
Este mismo ao se siembra progenies Dura tambin sin registro genealgico,
procedentes de Camern. Vale aclarar que estos materiales no se incluyen en el
segundo ciclo de seleccin.

5.8.2.3.2. Germoplasma de Origen Asitico

En 1981, se siembran trece progenies Tenera producidos por FELDA, Malasia. Y

tambin cinco descendencias Dura Deli de la serie B, de Surinam. En 1983 se
siembran diez cruzamientos de Dura x Dura y tres autofecundaciones Dura,
procedentes de La Pepilla, Aracataca, Colombia. Estos materiales se incluyeron
en el primer ciclo de Seleccin Recurrente; en 1985 se siembra una mezcla de
progenies Tenera Papua, de genealoga desconocida, procedentes de Nueva
Guinea.

Con la introduccin de materiales africanos del Bajo Caima, Valle del Cauca y de
materiales asiticos a Patuca y Pepilla, Magdalena, se inicia el proceso de
mejoramiento de la especie Elaeis guineensis en Colombia al conformar las dos
poblaciones parentales, involucradas en el Sistema de Seleccin Recurrente
adoptado por Corpoica (BASTIDAS, et al., 1993).

45
Al inicio del programa de mejoramiento, se normalizo el uso de la poblacin
asitica para la seleccin de madres tipo Dura Deli, origen previo Sumatra y la
poblacin africana para la seleccin de padres tipo Pisfera, origen previo
Yangambi, La M y Pob, con el objetivo de producir el hibrido inter origen Tenera,
que haba demostrado superioridad cruzamientos intrapoblacionales (HARTLEY,
1988).

Trabajos realizados por Corpoica en cada una de las poblaciones parentales

(Calima, Patuca y Pepilla) y en las nuevas introducciones (La M, Costa de Marfil
y Pob, Benn) permitieron formar las lneas El Mira (EM), con las cuales se
produce semilla de palma de aceite del hibrido Tenera con cruces como:

- Dura Deli (sumatra) x Pisfera (Yangambi, Zaire).

- Dura Deli (sumatra) x Pisfera (La M, Costa de Marfil).

- Dura Deli (sumatra) x Pisfera (Pob, Benin).

5.8.2.4. Colecciones genticas ex situ de Palma de Aceite (CENIPALMA)

Los bancos de germoplasma en el mundo son un recurso creado para ampliar la

base gentica de los cultivos y conservar buena parte de la variabilidad gentica
existente, caracterizando agronmica y morfolgicamente materiales con uso
potencial en Fitomejoramiento, debido a que las lneas paternas de las
plantaciones comerciales, no poseen algunos caracteres genticos de inters
agronmico y tienen una limitada variabilidad (REY, et al., 2004).

Cenipalma en el ao 2002 inicio la conformacin de una coleccin de

germoplasma de palma de aceite en el centro experimental La Vizcana ubicado
en zonas rurales de Barrancabermeja. La coleccin gentica de Cenipalma cuenta
con dos especies de inters econmico: palma africana (Elaeis guineensis Jacq.) y
palma americana o noli (Elaeis olefera H.B.K.).

La palma americana est representada en la coleccin por entradas (una entrada

est definida como una palma que conforma la coleccin de germoplasma)
colectadas en el trapecio amaznico entre Leticia y San Juan de Atacuar
constituyendo 13 poblaciones, 92 familias y 137 entradas, y por 10 poblaciones y
250 entradas provenientes de la Costa Norte, del Valle del Rio Sin, la Amazona
y el Magdalena medio (REY, et al., 2003) (REY, et al., 2004). La palma es
considerada en la coleccin de germoplasma como una fuente valiosa de
variabilidad gentica en los programas de Fitomejoramiento para solucionar
algunos de los problemas fitosanitarios y de calidad de aceite que presenta la
palma de aceite comercial, y que se estn solucionando con el uso de hbridos
46
interespecficos OxG (MEUNIER, 1975) 1991 citado por (REY, et al., 2004)). Rey y
colaboradores en 2004 publicaron la caracterizacin realizada para componentes
de produccin y calidad de aceite, vitamina E y otros metabolitos, de una muestra
representativa de la colecta donde se evidencio una variabilidad interesante.

La palma de aceite E. guineensis es de origen africano y es en frica donde se

encuentra la mayor variabilidad gentica de esta especie, motivo por el cual
Cenipalma, siempre buscado la recoleccin de material de zonas contrastantes y
representativas en las cuales la palma de aceite se encuentra en forma natura.
Esto, con el fin de obtener buena parte de la variabilidad gentica existente en
este pas para mejorar las bases genticas de las poblaciones actuales, y de esta
manera obtener nuevos materiales comerciales con bases genticas amplias que
le confieran mayor estabilidad ante los factores ambientales adversos.

La coleccin gentica palma cuenta con material gentico mejorado Dura, Pisfera,
Hbridos interespecficos comerciales y materiales genticos utilizados como
parentales en los diferentes cruces. Para caracterizar el material gentico
existente en la coleccin gentica de palma de aceite, Cenipalma ha
implementado a travs de diferentes lneas de investigacin estudios genticos,
bioqumicos, moleculares, fisiolgicos y de reaccin de plagas y enfermedades.

6. MARCADORES GENTICOS

Marcador molecular puede ser definido como cualquier fenotipo molecular

derivado de la expresin de un gen o de un determinado segmento especifico de
ADN que corresponde a una regin del genoma que puede ser expresada o no
pudiendo tener tambin su secuencia conocida o no. Por ser heredados
genticamente y posibilitar la diferenciacin gentica de individuos; los
marcadores moleculares tienen una amplia aplicacin en gentica de poblaciones
y mejoramiento gentico (FERREIRA & GRATTAPAGLIA, 1998).

Diversas tcnicas de biologa molecular estn hoy disponibles para la deteccin de

variabilidad gentica al nivel de secuencia de ADN para la deteccin de
polimorfismo gentico. Estas tcnicas permiten la obtencin de un nmero
virtualmente ilimitado de marcadores moleculares cubriendo todo el genoma del
organismo. Tales marcadores pueden ser utilizados para las ms diversas
aplicaciones, tanto en el estudio de gentica como en la prctica de mejoramiento
de plantas (FERREIRA & GRATTAPAGLIA, 1998).

Los distintos tipos de marcadores moleculares hoy disponibles se diferencian por

la tecnologa utilizada para revelar variabilidad en nivel de ADN, y as varan en

47
cuanto a la habilidad de detectar diferencias entre individuos, costo, facilidad de
uso, consistencia y repetitividad (FERREIRA & GRATTAPAGLIA, 1998).

Los principales tipos de marcadores moleculares pueden ser clasificados en dos

grupos, conforme la metodologa utilizada para identificarlos: hibridacin o
amplificacin de ADN. Entre los identificados por hibridacin estn los marcadores
RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) (BOTSTEIN, et al., 1980) y
minisatlites o loci VNTR (Variable Number of Tamdem Repeats); (JEFFREYS,
1985). Ya aquellos revelados por amplificacin incluyen marcadores de tipo:
RAPD (Random Amplified Polymorphic AND) (WILLIAMS, et al., 1990); SCAR
(Sequence Characterized Amplified Regions); STS (Sequence Tagged Sites)
(PARAN, 1993); Microsatlites (LITT & LUTY, 1989); y AFLP (Amplified Fragment
Length Polymorphism) (VOS, et al., 1995).

6.1. Utilizacin de marcadores moleculares para el estudio de diversidad

gentica

El empleo de tcnicas moleculares en la caracterizacin de los accesos, adems

de orientar un programa de mejoramiento en la direccin de los cruzamientos
adecuados, podr proporcionar un gran avance en la instalacin de nuevas
colecciones, permitiendo entre otros, la constitucin de colecciones nucleares,
donde cerca del 80% de la variacin gentica puede ser representada por 10% de
los accesos (BROWN, 1989). De acuerdo a una especie como la palma, la
utilizacin de esta herramienta contribuir mucho en la reduccin de costos de
manutencin de las colecciones vivas en campo. Grandes colecciones
internacionales, como el Banco de Germoplasma Internacional de Cacao, en
Trinidad, que estn siendo caracterizados con caracteres morfolgicos,
agronmicos, isoenzimticos y moleculares, con el objetivo de identificar
duplicaciones, errores de identificacin, y seleccionar materiales promisorios para
el programa de mejoramiento (FIGUEIRA & CASCARDO, 2001).

Para la determinacin ms precisa y segura de la variabilidad gentica es

necesario utilizar caractersticas no influenciables por el ambiente. En este
sentido, las tcnicas en biologa molecular permiten la observacin de
polimorfismo directamente en la secuencia gnica de los organismos (ZUCCHI, et
al., 2002).

6.2. Marcadores microsatlites

Dentro de las tcnicas disponibles actualmente, los microsatlites SSR (Simple

Sequence Repeats - Repeticiones de secuencias simples), han sido muy utilizadas
48
en estudio de gentica de poblaciones de especies silvestres debido a su
robustez, confiabilidad y practicidad operacional y por ser los marcadores ms
informativos genticamente (FERREIRA & GRATTAPAGLIA, 1996).

Microsatlites consisten en secuencias repetitivas en serie en nmero variable,

encontradas en los genomas de plantas, adyacentes a secuencias de copias
nicas, presentando un alto nivel de polimorfismo, teniendo alelos en nmero
variable de repeticiones bsicas (THOMAS & SCOTT, 1993).

Teniendo en cuenta la expresin codominante y el multialelismo, los marcadores

SRR son los que poseen el ms elevado contenido de informacin en terminologa
de marcadores moleculares. Por causa de esto, toda y cualquier poblacin
segregante puede ser utilizada como poblacin referencia para estudios de
ligacin y mapeamiento gentico (FERREIRA & GRATTAPAGLIA, 1996).

6.3. Diversidad gentica en poblaciones de plantas

La diversidad gentica es una porcin hereditaria de una variacin posible o

medida (HAMRICK, 1983). Segn estos autores, cuantifica el nmero de
genotipos posibles de ser detectados en una poblacin o en cualquier jerarqua.

El grado de variabilidad gentica y el estndar de distribucin entre y dentro de las

poblaciones son influenciados por el ambiente y por la localizacin geogrfica.
Cuando mayor es la variabilidad gentica en una poblacin, mayor posibilidad de
sobrevivir a los cambios inesperados en su ambiente vital (KAGEYAMA, 1987).

Una poblacin es definida genticamente por la suma de las frecuencias de sus

genes (o sus alelos), una medida que da el grado de variabilidad o heterocigosis
de la poblacin. Esto puede variar en una misma especie si ella forma poblaciones
en diferentes hbitats (HAMRICK, 1983).

Estudios sobre diversidad gentica son importantes en programas de

mejoramiento, por desarrollar parmetros para la identificacin de genitores que,
cuando cruzados, posibilitan mayor efecto heterocigtico en la progenie e aumento
en la probabilidad de recuperar genotipos superiores en las generaciones
segregantes, adems de permitir el conocimiento de la base gentica de la
poblacin (PANDEY & DOBHAL, 1997) (FERRO, et al., 2002) (CARVALHO, et
al., 2003).

Las especie tpicamente algamas presentan alta variacin gentica

intrapoblacional en detrimento a la variacin gentica interpoblacional que es
menor, siendo que la divergencia dentro de poblaciones es inversamente

49
proporcional a la cantidad de flujo gentico (Cuando mayor es el flujo menor la
divergencia intrapoblacional) (HAMRICK & LOVELESS, 1986).

La frecuencia de heterocigotos es considerada como un importante indicador de la

diversidad gentica, una vez que cada heterocigoto carga alelos diferentes y, por
tanto, representa mejor la variacin existente (WEIR, 1996). (NEI, 1973) Propone
que la heterocigocidad espera, o diversidad gnica, sea una medida apropiada por
representar la variacin tanto en poblaciones de especies autgamas como en
algamas. Adems, el ndice de fijacin viene siendo utilizado como una medida
de desvi del equilibrio de Hardy-Weinberg dentro de cada poblacin.

Otro punto importante se refiere a la manera por la cual la variabilidad gentica es

partida entre y dentro de poblaciones, por lo cual, el nivel de heterognea (no
aleatoria) de los alelos y genotipos en el espacio y en el tiempo resultante de
fuerzas evolutivas, tales como mutacin, migracin, seleccin y herencia gentica
que acta dentro del contexto de cada especie y poblacin (HAMRICK, 1983).

La endogamia generada por autofecundacin o el cruzamiento entre parientes

tambin tendera a alterar la frecuencia de ciertos alelos en relacin al total de la
poblacin. As, tanto por endogamia, herencia gentica o seleccin podr ocurrir
formacin de grupos divergentes dentro de las poblaciones. En tanto, esta
diferenciacin puede ser contrapuesta por el flujo gentico, conforme lo discutido
por (WRIGHT, 1931), siendo que esta especie con intenso movimiento de polen y
semillas tienen menor diferenciacin que las especies con flujo gentico restricto
(HAMRICK, 1989).

De esta forma, factores como tamao de la poblacin, modo de reproduccin

(asexual o sexual), sistema de reproduccin (autofecundacin, cruzamiento y
mixto), flujo gentico y tipos de ambientes en que la especie es influenciada en la
distribucin de la variacin gentica entre y dentro de poblaciones. Se espera que
especies con grandes poblaciones, sistema mixto de reproduccin mecanismos
eficientes de dispersin de semillas y polen, presentan alta variacin genticas
intrapoblacional y baja interpoblacional. Para especies con pequeas poblaciones,
de autofecundacin y reproduccin vegetativa, con limitada dispersin de polen y
semillas, se espera una baja variabilidad dentro y alta entre las poblaciones
(HAMRICK & LOVELESS, 1986).

La diversidad gentica intrapoblacional ha sido cuantificada en trminos de

numero de alelos por loci (A), porcentaje de loci polimrfico (P), heterocigocidad
observada (Ho) y esperada (He) sobre equilibrio de Hardy - Weinberg, y ndice de
fijacin (f) (HAMRICK, 1983) (ROBINSON, 1998).

En general la diversidad gentica de E. guineensis Jacq. Ha sido estudiada con

marcadores moleculares en poblaciones naturales de frica (BARCELLOS, et al.,
50
2002), de Indonesia (PURBA, et al., 2000), Amrica del Sur (BILLOTE, et al.,
2001) (BARCELLOS, et al., 2002) y en plantaciones comerciales (VILLEGAS, et
al., 2000). Igualmente la diversidad de E. olefera, palma originaria de Amrica ha
sido estudiada con RAPD por (MORETZSOHN, et al., 2002). Estos trabajos han
arrojado datos que brindan una idea sobre la variabilidad intra e inter especfica de
las poblaciones, posibles rutas de dispersin y una idea de los materiales
adecuados para el mejoramiento, teniendo en cuenta caractersticas morfolgicas
y distancias genticas.

51
7. MATERIALES Y MTODOS

7.1. Localizacin

El anlisis de las muestras se realiz en el laboratorio de Biotecnologa Vegetal de

Ingeniera Agronmica y el laboratorio de Reproduccin y Gentica Animal de
Medicina Veterinaria y Zootecnia (MVZ), de la Universidad de los Llanos sede
Barcelona, Villavicencio, departamento del Meta.

7.2. Material Vegetal

Se evaluaron 96 accesiones (una accesin est definida como una palma que
conforma la coleccin de germoplasma), del banco de germoplasma perteneciente
al programa de mejoramiento de UNIPALMA S. A., localizado en la vereda
Veracruz, municipio de Cumaral - Meta, situado en la longitud W 73-14-50 y
latitud norte 4-13-33, con una altitud de 452 metros sobre el nivel del mar y una
temperatura media anual 25,2 C.

Este recurso gentico identificado como colecciones de palma silvestre Camern,

identificado con el cdigo del lote CPT-3 cuenta con un rea de 10 has y Zaire,
identificado con el cdigo del lote CPT-4 cuenta con un rea de 2,5 has,
colectadas por R.H.V. Corley en el ao 1986, con el fin de obtener mayor
variabilidad gentica para mejorar la base gentica de las poblaciones comerciales
actuales; las accesiones fueron seleccionadas por el Dr. Ivn Ochoa (Director de
Programa de Mejoramiento UNIPALMA S.A.). En base a los registros histricos de
produccin en razn del contenido de pulpa en el fruto, peso de racimo, forma de
racimo, presencia de espinas, color de frutos, altura de la palma y calidad de
aceite.

Tabla 5. Informacin de la estructura de la colecta.

Lote CPT - 3 Camern Lote CPT - 4 Zaire

ID Laboratorio Cdigo ID Laboratorio Cdigo
1 73 49 3004
2 77 50 3001
3 74 51 5504
4 82 52 5505
5 75 53 3211
6 16 54 5404
7 3 55 806
8 4 56 5506
9 94 57 3209
10 78 58 5508
11 9 59 3207
52
 12 71 60 5509
13 76 61 1702
14 21 62 3506
15 24 63 3201
16 59 64 1701
17 29 65 2501
18 84 66 2101
19 14 67 4107
20 15 68 1503
21 47 69 1506
22 5 70 4302
23 91 71 1610
24 93 72 3316
25 79 73 3317
26 8 74 3305
27 37 75 4203
28 32 76 2502
29 72 77 2506
30 38 78 3406
31 31 79 3205
32 10 80 2702
33 45 81 701
34 1 82 1811
35 20 83 1809
36 23 84 1405
37 30 85 1205
38 56 86 4203
39 58 87 1103
40 34 88 4403
41 22 89 2101
42 62 90 405
43 57 91 807
44 43 92 3311
45 63 93 5609
46 68 94 1107
47 39 95 4007
48 90 96 102
Fuente: Laboratorio Biotecnologa Vegetal y UNIPALMA S.A.

7.3. Extraccin de ADN

El ADN genmico fue extrado de 20 grs de tejido foliar de la hoja #1, colectado
del tercio medio y foliolos que presentaron condiciones fitosanitarias ptimas, en
cada accesin evaluada; el protocolo utilizado fue Dellaporta modificado por
(PALACIO, 2002.), cada muestra tuvo entre 2 - 5 repeticiones y fueron
almacenadas a una temperatura de - 22 C.
53
7.4. Cuantificacin de ADN

Para evaluar la cantidad y concentracin de ADN extrado, las muestras fueron

analizadas en espectrofotmetro NanoDrop ND-1000 (Tabla 6); adems las
muestras fueron sometidas a electroforesis (100V/30 min) en gel de agarosa al
0,8%, teidos con bromuro de etdio, para asegurar la presencia de ADN )

Para evaluar la calidad y cantidad de ADN extrado, las muestras fueron

analizadas en espectrofotmetro NanoDrop ND-1000 (Tabla 6); adems fueron
sometidas a electroforesis (100V/30 min) en gel de agarosa 0,8%, teidos con
Bromuro de etdio, para asegurar la presencia de ADN (Figura 8). Posteriormente,
las muestras fueron diluidas a concentracin final de 10 (ng/ul) para ser utilizados
en la PCR.

Tabla 6. Concentracin de ADN de algunas muestras de palma cuantificadas con NanoDrop.

ID Laboratorio Cdigo Concentracin (ng/ul)

1 73 50,1
2 77 224,6
5 75 303,8
11 9 272,6
14 21 2195,9
16 59 2159,9
55 806 418,9
57 3209 724,5
60 5509 964,2
68 1503 433,7
77 2506 339,3
83 1809 113,3

Figura 8. Visualizacin
de algunas muestras de
ADN extrado.
7.5. Seleccin de los primers iniciadores SSRs

Fueron seleccionados veinte marcadores microsatlites los cuales han sido

evaluados en estudios realizados por (BILLOTE, et al., 2001) (BILLOTE, et al.,
2005) y por (SINGH, et al., 2008) y han sido tiles en la determinacin de la
diversidad gentica en palma. (Tabla 7).

54
Tabla 7. Lista de los microsatlites utilizados en la caracterizacin molecular de
las colecciones de palma de Zaire y Camern.
Locus SSR Motivo 5'-3' Forward primer 5'-3' Reverse primer

mEgCIR0008* (GA)18 CGGAAAGAGGGAAGATG ACCTTGATGATTGATGTGA

mEgCIR0009* (GA)20 CAGTCTTTAAGTACGGCTATGAT GAATTTTTAGTTCAACCAGGTAGA

mEgCIR0018* (GA)18 CCTTATTTTCTTTGCTTACC TTCTATTTTATTTTCTTCCT

mEgCIR0046* (GA)19 AGCCTTAGTATTTTGTTGAT CCTCTGATTTGTCCTTTTGG

mEgCIR0067* (GA)17 TACACAACCCATGCACAT AAAAACATCCAGAAATAAAA

mEgCIR0219* (GA)17 TTTGCTCGGCGGATACAT CTCACTGGCCTCTTTCTT

mEgCIR0230* (TA)6GAG(GA)19 CCCTGGCCCCGTTTTTC AGCGCTATATGTGATTCTAA

mEgCIR0254* (GA)18 CCTTTTGTGCTTTCTTC GCTGTGCACTAGGTTTC

mEgCIR0465* (CCG)6 TCCCCCACGACCCATTC GGCAGGAGAGGCAGCATTC

sEg00066*** (AT)8 TTGCTCCAACTGACTGATGC ACATTCCAGATCCCAGCAAG

sEg00067*** (TGTA)6 GTCAGCCCGTAGAAGATTGC CTTTCGGATAGCCAAAACGA

sEg00125*** (GCG)6 TACCCTTTTCCCTCCCTCCATA CATCATCTCCGTTGCCAGTATT

sEg00126*** (CGC)7 CCGTCTCAAAAGCCCTAAAC TTGTTGTCCCACTCCCTCTT

sEg00127*** (TTC)9 CTAAAATTCCCTCATCGTCTC CTCGAAGCTCATCGTCTCTC

sEg00140*** (GA)10 AAGTGAGACGGTGGATTTGG GTTCCAGTTGTCCTCGCATT

mEgCIR0802** (GA)12 CTCCTTTGGCGTATCCTTTA TACGTGCAGTGGGTTCTTTC

mEgCIR1730** (CT)17(GT)5 AATTTCAAATACAGCATAGC CATAGTAAGTTTTGGATGATTATTA

mEgCIR3282** (GA)20 GTAACAGCATCCACACTAAC GCAGGACAGGAGTAATGAGT

mEgCIR3363** (GA)17 CTTGACAATACCCTGAGTAGTAG GCTGTGCCTATCGGACTT

mEgCIR3546** (GA)15 GCCTATCCCCTGAACTATCT TGCACATACCAGCAACAGAG

*
Billotte et al. (2001). ** Billotte et al. (2005). ***Singh et al. (2008).

7.6. Amplificacin de los loci microsatlites o SSRs

Para la amplificacin se siguieron los protocolos ya estandarizados utilizados por

(SINGH, et al., 2008) (Tabla 8), las reacciones de PCR se llevaron a cabo en un
termociclador PxE 0,5 Thermal Cycler de Thermo Electron Corporation.

Las condiciones de amplificacin fueron las siguientes: 2 minutos a 94 C

seguidos por 30 ciclos a un minuto a 94 C (Desnaturalizacin), 45 - 55 C por un

55
minuto (Anillamiento: dependiendo del primer) y 2 minutos a 72 C, con extensin
final por 5 minutos a 72 C.

Tabla 8. Protocolo de PCR estandarizado por Singh et al., 2008.

Reactivo Cantidad (ul)

Buffer 2,5

dNTPs 4

Primer Reverse y 1
Forward

MgCl2 2,5

BSA 1

H2O 11,85

ADN 2

Taq 0,15

Total 25

7.7. Optimizacin de las condiciones de la PCR

Las condiciones de amplificacin descritas por (SINGH, et al., 2008), fueron

modificadas debido a la ausencia y baja amplificacin pobre en la mayora de los
marcadores utilizados (Figura 9).

Figura 9. Productos amplificados despus de las modificaciones nombradas

anteriormente. Ntese la aparicin de bandas inespecficas en el marcador
mEgCIR0465.
La baja amplificacin puede ser explicados por la calidad de ADN utilizado, por lo
cual se aumento la cantidad de 2 a 3 ul, segn (SAMBROOK, et al., 1989.), la
56
adicin de albumina de suero bovino (BSA) ayuda a mejorar la calidad de
productos amplificados, dado que acta como coadyuvante incrementando la
eficiencia de la PCR, adems de captar iones que pueden ser inhibidores de la
Taq polimerasa, este tambin tuvo un aumento de 1 a 1,5 ul; los primer "Reverse"
y "Forward", hacen parte esencial de una buena amplificacin al igual que la Taq
polimerasa, por lo tanto, tuvieron un aumento de 1 a 2,5 ul y de 0,15 a 0,2 ul
respectivamente, debido su poca intensidad (Muy tenue), se procedi a
estandarizar la cantidad de cloruro de magnesio (MgCl2) de acuerdo al primer (2 a
3,5 ul), con los cambios realizados se obtuvieron bandas claras y nicas.

Figura 10. Productos amplificados por PCR del locus sEg00067 de la coleccin
Camern.
Sin embargo, en algunos se obtuvieron bandas inespecficas (Figura 10), que
obligaron al aumento de la temperatura de hibridacin o anillamiento para cada
uno de los marcadores evaluados, hasta obtener una banda nica. Las
condiciones de amplificacin para los primers se presentan en la tabla 9.

Tabla 9. Condiciones de amplificacin para los primers utilizados.

57
7.8. Visualizacin del producto PCR

La deteccin y visualizacin de los productos amplificados se hizo mediante

electroforesis de tipo horizontal en gel de agarosa Metaphor al 4%, con un espesor
de 0,4 mm, un volumen de 150 ml TAE 1x y teidos con bromuro de etdio a razn
de 4 ul, en cmara Thermo scientific OWL D3-14 y una fuente de poder Thermo
electron Corporation EC 105. El marcador de peso utilizado fue de 100 pares de
bases (pb) (Gene ruler), el cual determina fragmentos entre 100 pb y 1500 pb,
rango en el cual se encuentran todos los fragmentos amplificados.
La corrida electrofortica fue realizada con una solucin tampn de corrida (1,3 lts.
de TAE 1x), se utiliz 2 ul de azul de carga y 3 ul de producto amplificado por cada
pozo, se llev a cabo una fase precorrido de 5 minutos, para las primeras 48
muestras, posteriormente la corrida se realiz durante 45 minutos a 100 voltios. Se
gener el registro fotogrfico para cada gel sobre luz UV en el equipo Benchtop
Variable Transilluminator M-20V, la lectura de los alelos fue realizada visualmente
(Imagen 11 y 12) y registrada en matrices digitales (Tabla 10).

Figura 12. Patrones de bandas obtenidos con el microsatlite sEg00127. Ntese

los diferentes patrones de bandas (alelos) obtenidos.

Figura 11. Patrones de bandas obtenidos con el microsatlite sEg00140. Ntese

la clara diferencia de individuos homocigotos (Izquierda) de heterocigotos
(Derecha).

58
Tabla 10. Matriz digital de 5 primer en 10 muestras de cada coleccin, para el
programa NTSYS.

Nombre mEgCIR0008 mEgCIR0009 mEgCIR0018 mEgCIR0046 mEgCIR0067

1 2 3 1 2 1 2 3 4 1 2 1 2 3 4 5
73CAMERUN 0 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1
77CAMERUN 0 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1
74CAMERUN 0 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1
82CAMERUN 0 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1
75CAMERUN 0 1 1 1 1 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1
16CAMERUN 0 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1
3CAMERUN 0 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1
4CAMERUN 0 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1
94CAMERUN 0 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1
78CAMERUN 0 1 1 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 0 1 1

7.9. Anlisis estadstico

La informacin de los patrones de bandas obtenidos se registr en una matriz

numrica en donde se asign un consecutivo para cada uno de los alelos
encontrados por locus y a cada individuo se le asign un mximo de dos valores
por locus, dependiendo de su genotipo (homocigoto heterocigoto). Para la
seleccin de bandas polimrficas se consider como locus polimrfico aquel en el
cual la frecuencia del alelo ms comn fue menor al 95%. A partir de esta matriz y
usando los programas NTSYS- PC (Numerical Taxonomy System for Personal
Computer), TFPGA (Tools for Population Genetic Analisys) y Arlequn versin 3.11
se realizaron los anlisis estadsticos.

La similitud gentica se calcul mediante el coeficiente de (DICE, 1945) y Nei- Li

(NEI, 1978), donde a = bandas compartidas por ambos individuos, b = bandas
presentes en el individuo (1) pero no en (2), y c = bandas presentes en el individuo
(2) pero no en (1).

Figura 13. Coeficiente

de Dice Nei-Li (1978).

59
El anlisis de agrupamiento se realiz con el programa SAHN de NTSYSPC
(versin 2.02g, 1998) utilizando el mtodo UPGMA, mtodo grfico de
agrupamiento por parejas, que usa el promedio aritmtico no ponderado. El
dendograma se construy con el programa TREE de NTSYSPC (versin 2.02g).
Se realiz un anlisis de correspondencia mltiple (ACM) para asociar columnas y
filas de la matriz binaria determinando el nivel de asociacin o determinar
proximidad (JOSEPH, 1992).

Para estimar la diversidad gentica se utilizaron los parmetros de

heterocigocidad promedio esperada (He) y el porcentaje de loci polimrficos (P),
los cuales se estimarn sobre todos los loci y el promedio de los mismos de
acuerdo con la frmula no sesgada de Nei (NEI, 1973)(Figura 14) as:

H 1 f (i) 2

Figura 14. Formula no sesgada de Nei (1973).

Donde:

H: Probabilidad de que dos individuos tomados al azar tengan diferente alelo. H es

el valor con que se representa la diversidad de la poblacin.
f(i): Frecuencia del alelo i en la poblacin.
f(i)2: Probabilidad de que dos individuos tomados al azar tengan el alelo i.

Fue calculado el contenido de informacin del polimorfismo (PIC) para los 20 loci
analizados. Segn (BOTSTEIN, et al., 1980), los valores de PIC son clasificados
en 3 niveles: (a) altamente informativo (PIC>0,5), moderadamente informativo
(0,5>PIC>0,25) y poco informativo (PIC<0,25).

Se determin el coeficiente de diferenciacin gentica (FST) y el ndice de fijacin

(FIS) (WRIGHT, 1951). El coeficiente de diferenciacin gentica (FST) se
determin as: FST = (Ho He) /Ht y el ndice de fijacin (FIS) as: FIS = (He-
Ho)/He. Donde Ho: Heterocigocidad observada en subpoblaciones, He:
Heterocigocidad esperada en subpoblaciones, Ht: Heterocigocidad esperada en la
poblacin total.

Se calcul el coeficiente de correlacin cofentica, que una medida entre los

valores de similitud del dendograma y los de la matriz original de similaridad,
mediante el programa COPH y MXCOMP del paquete "Numerical Taxonomy
System for Personal Computer" (NTSYS-PC versin 1.8).

60
Para probar si los valores de Fis difieren significativamente de 0 y se alejan del
equilibrio Hardy-Weinberg (H-W), se realiz una prueba de chi-cuadrado con la
frmula de (LI & HORVITZ, 1953) con X2 = (FIS)N(n-1) con n(n-1)/2 grados de
libertad donde n es el nmero de alelos y N el nmero de muestras examinadas
con una P<0,05. En todos los anlisis estadsticos, los alelos que amplifiquen en
determinado locus se codificarn como datos perdidos.

Se realiz un anlisis de varianza molecular (AMOVA), utilizando el programa

GenAlex versin 6.2 (PEAKALL & SMOUSE, 2006) para evaluar la relacin entre
los sitios geogrficos de procedencia de las accesiones. Para ello se asumi que
las accesiones colectadas en cada sitio corresponden a una poblacin diferente.

Seleccin Extraccin Visualizaci Amplificacin Visualizacin y Resultados y

del Material de ADN: n: de ADN : lectura de Analisis de
Genetico: Dellaporta En Estandarizaci Amplificados: la
Camern. modificado electrofores n de la En informacin:
Zaire. por Palacio is con gel Reaccin en electroforesis Elaboracion
(2002). de agarosa cadena de la con gel de de la matriz
0,8 %, polimerasa agarosa binaria en
teido con (PCR), para Metaphor 4 Execell.
bromuro de los 20 %. Uso de los
etidio. primers Lectura con programas:
Determinaci evaluados. transiluminad NTSYS .
n de or . TFPGA.
concentraci
ARLEQUIN
n con
.
espectofoto
metro UPGMA .
NanoDrop GenAlex.
ND-1000.

Figura 15. Diagrama resumido de la metodologa utilizada.

61
8. RESULTADOS Y DISCUSIONES

8.1. Caracterizacin de los loci microsatlites

El nmero de alelos vari de 2 a 5 por locus, teniendo un total de 59 alelos, con un

promedio de 2,95 alelos/locus (Tabla 11). Resultados similares fueron obtenidos
por (SINGH, et al., 2008) con microsatlites en el gnero Elaeis (promedio 2,56),
(ZAKI, et al., 2010) con 14 marcadores genmicos microsatlites en 4
poblaciones de E. olefera de diferentes pases (2,66), (ARAYA, et al., 2009) con 8
marcadores microsatlites tambin en E. olefera de diferentes pases (promedio
de 2,75 y un total de 22 alelos), (ORTEGA, 2013) encontr entre 2 y 5 alelos, con
un promedio de 2,89 alelos, teniendo un total de 26 aleles, (ZAKI, et al., 2010)
entre 2 a 11 alelos con un promedio de 5,1, en E. Olefera, promedio fue similar a
lo obtenido por (BILLOTE, et al., 2001) con marcadores microsatlites en E.
guineensis.

Tabla 11. Numero de alelos (A) y Frecuencias allicas (Fr) para las colecciones
Camern y Zaire.

Locus SSR A Fr (A1) Fr (A2) Fr (A3) Fr (A4) Fr (A5)

mEgCIR0008* 3 0,010 0,490 0,5000 - -

mEgCIR0009* 2 0,984 0,016 - - -
mEgCIR0018* 3 0,005 0,010 0,9844 - -
mEgCIR0046* 2 0,500 0,500 - - -
mEgCIR0067* 5 0,016 0,156 0,3438 0,2500 0,2343
mEgCIR0219* 4 0,500 0,443 0,0313 0,0260 -
mEgCIR0230* 2 0,599 0,401 - - -
mEgCIR0254* 2 0,125 0,875 - - -
mEgCIR0465* 3 0,005 0,500 0,4948 - -
sEg00066*** 2 0,531 0,469 - - -
sEg00067*** 2 0,500 0,500 - - -
sEg00125*** 2 0,974 0,026 - - -
sEg00126*** 4 0,047 0,037 0,4166 0,5000 -
sEg00127*** 5 0,130 0,052 0,1458 0,0104 0,6615
sEg00140*** 3 0,156 0,516 0,3281 - -
mEgCIR0802** 2 0,656 0,344 - - -
mEgCIR1730** 2 0,537 0,464 - - -
mEgCIR3282** 4 0,010 0,432 0,1042 0,4531 -
mEgCIR3363** 3 0,016 0,776 0,2084 - -
mEgCIR3546** 4 0,089 0,104 0,6927 0,1146 -
Total 59 6,3908 7,1092 4,2501 1,3541 0,8958
Promedio 2,95 0,32 0,36 0,21 0,07 0,04

62
Con relacin a las frecuencias allicas, en un total de 59 alelos referentes a los 20
marcadores microsatlites (Tabla 11), se observan valores de 0,05 (mEgCIR0018
y mEgCIR0465) a 0,98 (mEgCIR009 y mEgCIR0018). Para el alelo ms frecuente
Fr (A2) de cada marcador fue observada una variacin de 0,010 (mEgCIR0018) a
0,875 (mEgCIR0254) y menos frecuente Fr (A5) de cada marcador tuvo una
variacin de 0,2343 (mEgCIR0067) a 0,6615 (sEg00127).

Tabla 12. Numero de alelos (A), Frecuencias allicas (Fr) y porcentaje de loci
polimrfico para las colecciones Camern y Zaire.

Camern Zaire
Locus SSR Fr Fr Fr Fr Fr Fr Fr Fr Fr Fr
A A
(A1) (A2) (A3) (A4) (A5) (A1) (A2) (A3) (A4) (A5)
mEgCIR0008* 2 - 0,50 0,50 - - 3 0,02 0,50 0,50 - -
mEgCIR0009* 2 0,99 0,01 - - - 2 0,98 0,02 - - -
mEgCIR0018* 2 0,01 - 0,99 - - 3 - 0,02 0,50 0,48 -
mEgCIR0046* 2 0,50 0,50 - - - 2 0,50 0,50 - - -
mEgCIR0067* 3 0,03 - - 0,50 0,47 2 - 0,31 0,69 - -
mEgCIR0219* 4 0,50 0,39 0,06 0,05 - 2 0,50 0,50 - - -
mEgCIR0230* 2 0,45 0,55 - - - 2 0,75 0,25 - - -
mEgCIR0254* 2 0,03 0,97 - - - 2 0,22 0,78 - - -
mEgCIR0465* 3 0,01 0,50 0,49 - - 2 - 0,50 0,50 - -
sEg00066*** 2 0,50 0,50 - - - 2 0,56 0,44 - - -
sEg00067*** 2 0,50 0,50 - - - 2 0,50 0,50 - - -
sEg00125*** 2 0,98 0,02 - - - 2 0,97 0,03 - - -
sEg00126*** 4 0,08 0,01 0,41 0,50 - 4 0,01 0,06 0,43 0,50 -
sEg00127*** 4 0,21 - 0,27 0,02 0,50 4 0,05 0,10 0,02 - 0,82
sEg00140*** 3 0,16 0,34 0,50 - - 3 0,16 0,69 0,16 - -
mEgCIR0802** 2 0,73 0,27 - - - 2 0,58 0,42 - - -
mEgCIR1730** 2 0,63 0,38 - - - 2 0,45 0,55 - - -
mEgCIR3282** 4 0,01 0,39 0,21 0,40 - 3 0,01 0,48 - 0,51 -
mEgCIR3363** 3 0,03 0,55 0,42 - - 1 - 1,00 - - -
mEgCIR3546** 4 0,05 0,10 0,61 0,23 - 3 0,13 0,10 0,77 - -
Total 54 6,40 6,48 4,46 1,70 0,97 48 6,39 7,76 3,56 1,49 0,82
Promedio 2,70 0,32 0,32 0,22 0,08 0,05 2,40 0,32 0,39 0,18 0,07 0,04
% Loci
Polimrfico 100% 95%
(99% Criterio)

Las frecuencias allicas variaron en cada locus de una poblacin a otra y algunos
alelos estaban presentes o no (Tabla 12). En unos pocos casos, los alelos (A4 y
A5) eran compartidos por las colecciones. Para el locus (mEgCIR0046 y
sEg00067), compartan la misma cantidad de alelos y frecuencia allica en las dos
63
poblaciones evaluadas, lo cual crea un grado de similitud entre materiales. Segn
(FRANKEL, et al., 1996) considera que cuando un alelo alcanza la frecuencia 1 se
dice que se fija a la poblacin y cuando alcanza la frecuencia 0 se ha perdido. Las
frecuencias allicas no varan ms all de los lmites de 0 y 1, tarde o temprano,
todas las familias debern llegar a esos lmites. Dado que la frecuencia allica
llega a 0 o 1 no puede cambiar su linaje, a no ser de sufrir mutacin o migracin.

Las frecuencias allicas por locus para cada poblacin se presentan en (Bakoum,
2006). Desde el primer sistema de clasificacin (4 clases), la clase de alelos de
poca frecuencia (<25%), se obtuvo en un 36% (Camern) y un 29% (Zaire) para
las frecuencias (A3 - A5) y para alelos de moderada frecuencia (25%-50%), se
present un 71%(Zaire) y 64% (Camern), para las frecuencias (A1 y A2).

Un loci se considera polimrfico cuando presenta ms de un alelo, para el locus

(mEgCIR3363), se present solo un alelo (monomrfico) en la coleccin de Zaire,
por lo cual se excluy del anlisis estadstico; esto bajo el porcentaje de loci
polimrfico de la coleccin de Zaire quedando en 95% frente a un 100% de loci
polimrficos en la coleccin de Camern.

En el estudio de polimorfismo enzimtico en la palma de aceite (GHESQUIERE,

1985), se report la variacin en las frecuencias allicas. En una planta de cruce
natural como la palma de aceite donde se espera un apareamiento aleatorio, la
deriva gentica y el aislamiento reproductivo son los factores ms comunes que
afectan las frecuencias alelicas. En las dos poblaciones era fijo un alelo en cada
locus, que indica probablemente la presencia de una deriva gentica y una alta
tasa de endogamia en las poblaciones.

8.2. Diversidad gentica

La heterocigocidad observada (Ho) de las poblaciones examinadas present

valores entre 0,0 (mEgCIR0009) a 1 (mEgCIR0008, mEgCIR0018, mEgCIR0046,
mEgCIR0219, mEgCIR0465, sEg00067 y sEg000126) tanto para Zaire como para
Camern, con un promedio de 0,67 (Tabla 13). La heterocigocidad esperada (He),
que es la probabilidad de un individuo ser heterocigoto en un loci cualquiera, fue
menor que la observada. Por tanto, se evidencio la baja presencia de
homocigotos. En general, los valores de Ho fueron mayores que los de He en la
los loci evaluados donde los marcadores mEgCIR0008, mEgCIR0018,
mEgCIR0046, mEgCIR0219, mEgCIR0465, sEg00067 y sEg000126, fueron los
que presentaron alta cantidad de heterocigotos.

En las colecciones evaluadas de palma la He= 0,42, siendo mayor que las
diversidades reportadas en E. guineensis por (HAYATI, et al., 2004) con un valor

64
medio de He=0,18 en las 26 poblaciones en frica y un rango de He entre 0,17 y
0,20 para los materiales de Angola (tres poblaciones, 90 individuos).

Como la palma es una planta algama y las progenies son genticamente

emparentadas, es de esperarse que los efectos de la endogamia interfieran en los
ndices de heterocigocidad, lo que contribuye para la homogeneidad dentro de las
progenies.

La heterocigocidad puede ser considerada como un indicativo de la existencia de

variabilidad gentica para especies algamas, como la palma. Los altos
porcentajes de loci polimrficos, con una media de 90%, pueden ser atribuidos a la
baja homocigocidad encontrada en diferentes genotipos.

Tabla 13. Heterocigocidad observada (Ho), heterocigocidad esperada (He) para

las colecciones y Heterocigocidad total (Ht).

Camern Zaire Tot.

Locus SSR
Ho He Ho He Het
mEgCIR0008* 1,000 0,505 1,000 0,525 0,513
mEgCIR0009* 0,000 0,021 0,000 0,041 0,031
mEgCIR0018* 1,000 0,021 1,000 0,525 0,390
mEgCIR0046* 1,000 0,505 1,000 0,505 0,503
mEgCIR0067* 0,625 0,535 0,625 0,434 0,744
mEgCIR0219* 1,000 0,601 1,000 0,505 0,555
mEgCIR0230* 0,500 0,500 0,500 0,379 0,483
mEgCIR0254* 0,438 0,061 0,438 0,345 0,220
mEgCIR0465* 1,000 0,516 1,000 0,505 0,508
sEg00066*** 0,875 0,505 0,875 0,497 0,501
sEg00067*** 1,000 0,505 1,000 0,505 0,503
sEg00125*** 0,063 0,041 0,063 0,061 0,051
sEg00126*** 1,000 0,584 1,000 0,570 0,576
sEg00127*** 0,313 0,639 0,313 0,312 0,524
sEg00140*** 0,313 0,614 0,313 0,484 0,605
mEgCIR0802** 0,792 0,399 0,792 0,491 0,454
mEgCIR1730** 0,854 0,474 0,854 0,500 0,500
mEgCIR3282** 0,792 0,658 0,854 0,500 0,600
mEgCIR3363** 0,688 0,526 0,000 0,000 0,356
mEgCIR3546** 0,458 0,562 0,458 0,383 0,491
Promedio 0,685 0,439 0,654 0,403 0,455
Desviacin
0,330 0,215 0,365 0,172 0,176
Estndar

65
A pesar que el nmero de alelos obtenidos en los 20 microsatlites fue bajo, fue
eficiente detectar la variabilidad gentica en la coleccin de palma, el valor de He
fue de 0,455 con una desviacin estndar de 0,17, lo cual revela un gran
diversidad gentica, ya que se encontr un alto porcentaje de loci polimrficos del
90%. Lo anterior tambin se confirma con el valor de FST encontrado de 0,14345,
el cual sugiere que en las dos poblaciones de Camern y Zaire, existe una
moderada estructura poblacional. Los resultados encontrados en otros trabajos
concuerdan por los reportados por (BARCELLOS, et al., 2002), con la tcnica
RFLP (37 sondas, 170 fragmentos polimrficos, 38 individuos), report una He=
0,135 en E. guineensis procedentes de frica. (MAIZURA, et al., 2001) Con RFLP
report una He= 0,278 (cuatro sondas, 383 individuos, 58 loci identificados, 111
alelos observados). (PURBA, et al., 2000) Report una He con un rango entre 0,1
y 0,49 entre cuatro poblaciones de E. guineensis en frica con enzimas (cuatro
enzimas, 49 individuos). (BILLOTE, et al., 2001)Con SSR report una He de 0,68
para E. guineensis y una He de 0,63 para E. olefera. Los resultados obtenidos en
el presente estudios (He= 0,46) son ms altos que los reportados para E. olefera
(He= 0,225), con la tcnica de RFLP (BARCELLOS, et al., 2002).

Lo anterior significa que las poblaciones colectadas (Camern y Zaire) poseen una
diversidad gentica alta similar a la reportada con otras metodologas como AFLP,
RFLP y RAPD (BILLOTE, et al., 2001).

La diversidad gentica total (Ht) alcanz una media de 0,46, lo que indica una alta
diversidad gentica del material evaluado similar a lo observado por (ALLOU, et
al., 2008), con 4 loci microsatlites y (MORILLO & MORILLO, 2004), apunta que la
heterocigocidad de la poblacin total es relativamente mayor que la estimada para
cada una de las colecciones, esto puede indicar que hay un grado de
diferenciacin gentica significativo entre ellas. Resultados contrastantes fueron
observados por (COLE, et al., 2007), con 3 loci microsatlites, y por (COUVREUR,
et al., 2006), con 8 loci, al evaluar poblaciones de Chontaduro. Esos trabajos
muestran el comportamiento general de las poblaciones de especies algamas.

8.3. Contenido de informacin polimrfica (PIC)

El contenido de informacin polimrfica (PIC) se refiere a la medida de la

informatividad de un marcador gentico, que depende del nmero de alelos para
ese locus y de sus frecuencias relativas. Para un marcador gentico se define
como la probabilidad de que un descendiente de una pareja sea informativo, es
decir, que se pueda deducir el origen parental de cada uno de los alelos de ese
locus (BOTSTEIN, et al., 1980).

66
El PIC ha sido ampliamente usado como un descriptor del grado de informacin
que ofrece un determinado sitio del genoma (TORRES, 2008). Segn (OTT,
1992), un marcador es polimrfico cuando Ho 0,1 y altamente polimrfico cuando
Ho 0,7.

Se observa, en la tabla 13, que de los 20 marcadores 2 (mEgCIR0009 y

sEg00125) no son considerados polimrficos, 17 son considerados polimrficos y
1 (mEgCIR0067) es altamente polimrfico, resaltando que este marcador present
cinco alelos en total.

El contenido de informacin polimrfica (PIC) referente a los 20 marcadores (Tabla

14) vari de 0,03 (mEgCIR0009) a 0,69 (mEgCIR0067). El valor de PIC
proporciona una estimativa del poder discriminatorio del marcador, por considerar
no solamente el nmero de alelos por loci, sino tambin la frecuencia relativa de
esos alelos (CRUZ, et al., 2011).

Tabla 14. Contenido de informacin polimrfica (PIC) estimado para los veinte
marcadores microsatlite evaluados.

Locus SSR PIC

mEgCIR0008* 0,39
mEgCIR0009* 0,03
mEgCIR0018* 0,32
mEgCIR0046* 0,38
mEgCIR0067* 0,69
mEgCIR0219* 0,45
mEgCIR0230* 0,37
mEgCIR0254* 0,19
mEgCIR0465* 0,38
sEg00066*** 0,37
sEg00067*** 0,38
sEg00125*** 0,05
sEg00126*** 0,48
sEg00127*** 0,48
sEg00140*** 0,53
mEgCIR0802** 0,35
mEgCIR1730** 0,37
mEgCIR3282** 0,51
mEgCIR3363** 0,3
mEgCIR3546** 0,46
Promedio 0,37

67
Segn la clasificacin de (BOTSTEIN, et al., 1980), marcadores con valores de
PIC superiores a 0,5 son considerados muy informativos, con valores entre 0,25 y
0,5 medianamente informativos y con valores inferiores a 0,25 poco informativos.
As, los marcadores mEgCIR0067, sEg00140 y mEgCIR3282 fueron muy
informativos, en cuanto los marcadores mEgCIR0008, mEgCIR0018,
mEgCIR0046, mEgCIR0219, mEgCIR0230, mEgCIR0465, sEg00066, sEg00067,
sEg00126, sEg00127, mEgCIR0802, mEgCIR1730, mEgCIR3363 y mEgCIR3546
medianamente informativos y los mEgCIR0008, mEgCIR0254 y sEg00125, poco
informativos. (ORTEGA, 2013), utilizando 9 marcadores microsatlites en 40
plantas de 16 accesos de E. olefera colectados en la amazonia ecuatoriana, tuvo
resultados similares con valores de PIC entre 0,08 y 0,65 (FERREIRA, 2009).

(SINGH, et al., 2008), utilizando 10 marcadores microsatlites en palma de aceite,

obtuvo valores de PIC entre 0,19 y 0,84. En otra palmas perennes (Cocos nucifera
L.), el PIC vari de 0,07 a 0,88 (KUMAR, et al., 2011).

(BOTSTEIN, et al., 1980), considera que existe una relacin directa entre el
nmero de alelos y el PIC, o sea, hay una tendencia de que cuanto mayor nmero
de alelos mayor ser el valor de PIC.

(WEIR, 1996), considera que el contenido de informaciones polimrficas

representa la diversidad gentica. As, el nmero de fragmentos con polimorfismo
es directamente proporcional al nmero de loci en heterocigocidad.

Elevados nmeros de polimorfismos fueron detectados en germoplasma de otras

palmeras con el empleo de microsatlites. En el caso de poblaciones de coco de
diferentes variedad y orgenes geogrficas (MEEROW, et al., 2003), (PERERA, et
al., 2001) observaron alta diversidad alelica en estudios con 8 loci.

8.4. Diferenciacin de las poblaciones

Los estadsticos de (WRIGHT, 1931) miden la estructura gentica a diferentes

niveles espaciales, por ejemplo en un conjunto de poblaciones de una misma
especie o una poblacin dividida en varias sub-poblaciones.

Tabla 15. Valores de FIS, FST y FIT obtenidos para cada uno de los veinte
marcadores microsatlites y el valor de probabilidad obtenido en la prueba de
equilibro Hardy-Weinberg (P-value).

Locus SSR FIS P-value FST FIT

mEgCIR0008* -0,96003 1 0,00043 -0,95918
mEgCIR0009* 0,66667 0,00782 -0,01408 0,66197
mEgCIR0018* -0,88616 1 0,46436 -0,01031

68
 mEgCIR0046* -1 1 0 -1
mEgCIR0067* -0,68901 1 0,51895 0,1875
mEgCIR0219* -0,8234 1 0,01591 -0,79439
mEgCIR0230* -0,59848 1 0,17 -0,32673
mEgCIR0254* -0,12882 0,94624 0,14096 0,0303
mEgCIR0465* -0,97938 1 0 -0,97938
sEg00066*** -0,88755 1 0,00665 -0,875
sEg00067*** -1 1 0 -1
sEg00125*** -0,01732 1 -0,00818 -0,02564
sEg00126*** -0,74748 1 0,00474 -0,7392
sEg00127*** -0,34035 1 0,17128 -0,11077
sEg00140*** -0,19854 0,99804 0,17182 0,00739
mEgCIR0802** -0,50551 1 0,04111 -0,44361
mEgCIR1730** -0,65933 1 0,05778 -0,56345
mEgCIR3282** -0,51757 1 0,04848 -0,44399
mEgCIR3363** -0,31307 0,99316 0,41465 0,23256
mEgCIR3546** 0,0307 0,36168 0,07083 0,09936
Promedio -0,53 0,92 0,11 -0,35
Desviacin Estndar 0,44 0,26 0,17 0,5
8.4.1. FST

El FST cuantifica la consanguinidad de las sub-poblaciones en relacin a la

poblacin total de la cual forman parte, se interpreta como la proporcin de la
variacin total atribuible a la diferenciacin entre poblaciones (CAUJAPE, 2006). El
valor de FST encontrado en este estudio fue de 0,11 (DV 0,17; 1000 replicaciones)
(Tabla 15) lo que indica que existe una moderada diferenciacin gentica de las
colecciones (Tabla 16) (WRIGHT, 1978). El grado de diferenciacin indica que el
11% de la variacin se debe a diferencias entre poblaciones, tendencia que
describe poblaciones panmticas e intermedias.

(MONTOYA, et al., 2005), report un FST de 0,0836 entre materiales procedente

de Angola. (HAYATI, et al., 2004) Report un FST de 0,301 entre las poblaciones
que abarcan la costa oeste y centro de frica. Para la zona que abarcaba los
pases de Repblica Democrtica del Congo, Tanzania y Angola report un FST=
0,073 (diferenciacin gentica moderada). (MAIZURA, et al., 2001) Report un
FST= 0,175 en amplio rango de poblaciones africanas. Vale la pena anotar que el
valor de FST no est afectado por el tipo de marcador molecular utilizado
(MOHAMMADI & PRASANNA, 2003).

Segn (ROCHA, et al., 2007) en 72 genotipos de la coleccin de E. guineensis de

Cenipalma, determino un FST de 0,0484 para los 16 loci, lo cual indica que el
4,84% de la variacin total estara justificada por la poca diferencia gentica entre
69
la poca diferencia gentica entre poblaciones (MONTOYA, et al., 2005) (WRIGHT,
1978).

Las poblaciones naturales de organismos muestran casi siempre diferencias de

frecuencias gnicas y genotpicas en el espacio geogrfico. Si esas diferencias
llegan al extremo de ser significativas y las sub-poblaciones no intercambian
genes (en forma de migrantes, o granos de polen que fecunden a individuos de
otras sub-poblaciones), entonces cada una de ellas puede evolucionar
independientemente y con el tiempo dar lugar a nuevas especies. Verificar la
existencia de estructura gentica poblacional es importante porque en ese caso
las poblaciones pueden diversificar y diferenciarse genticamente (POSSO, 2011).

En el caso de las colecciones en la zona geogrfica de procedencia, se encontr

una moderada diferenciacin gentica, lo que indica que muy posiblemente existe
un grado de flujo gentico entre las colecciones y por lo tanto, no existen barreras
ni marcada diferencia entre las colecciones. Lo anterior posiblemente se deba al
transporte de materiales asociados con actividades humanas, polinizacin cruzada
natural, o por eventos de migracin de cepas o semillas por corrientes de agua,
aves y otros animales (MUOZ, 2011b). A pesar de que los resultados fueron
significativos y se determin una moderada diferenciacin gentica, los resultados
bajos de correlacin entre distancias genticas y distancias geogrficas indican
poca asociacin entre las distancias. Debido a que el conjunto de resultados no
son evidencia suficiente para proponer una estructuracin poblacional asociada a
ubicaciones geogrficas (POSSO, 2011).

8.4.2. FIS

El ndice de fijacin (FIS) cuantifica la consanguinidad de los individuos en relacin

a las sub-poblaciones a las que pertenecen. Este parmetro tambin se conoce
como coeficiente de consanguinidad, porque ofrece una medida de la reduccin
de heterocigocidad de un individuo debida al apareamiento consanguneo no
aleatorio dentro de una poblacin. Aunque FIS se calcula para cada locus
analizado, su valor operativo es la media a travs de los loci (CAUJAPE, 2006).

En forma resumida (PIERO, et al., 2008), define el FIS como la endogamia en

individuos en relacin con la de la sub-poblacin a la que pertenecen. Es el nico
parmetro de estructuracin poblacional que interviene en el clculo de la tasa de
reproduccin cruzada.

El valor promedio FIS obtenido con los 20 marcadores microsatlites fue de -0,53;
comprendido en un rango de -0,01732 (sEg00125) a -1,0 (mEgCIR0046 y
sEg00067), donde 18 marcadores de los 20 evaluados fueron negativos (Tabla
15). Este valor negativo confirm un alto nmero de heterocigotos con respecto a
lo esperado bajo las condiciones de equilibrio Hardy Weinberg. Como se puede
70
observar en la tabla 15, los 20 marcadores microsatlites se encontraron en
equilibrio HW, a excepcin del microsatlite mEgCIR0009, esto significa que la
composicin gentica de una poblacin natural permanece en equilibrio mientras
no acten la seleccin natural, ni ningn otro factor como la mutacin o la deriva
gentica.

El exceso de heterocigotos encontrado en las dos colecciones puede ser

explicado por una inmigracin importante conducente a la heterogamia, seleccin
a favor de individuos heterocigotos (seleccin sobredominante), la naturaleza
algama de la palma de aceite, el estado silvestre de los genotipos analizados,
entre otros factores. Lo anterior se ve reflejado en el alto de valor de
heterocigocidad encontrado en la poblacin total (0.5), as como tambin de loci
polimrficos (90%), lo cual es de suma importancia para explotar el potencial
gentico de la especie, mejorar la base gentica del cultivo, disear germoplasma
y la identificacin de genotipos lites, los cuales podrn ser utilizados como
parentales en el mejoramiento gentico de la palma.

Los valores negativos obtenidos en las colecciones indican valores intermedios

pero con tendencia hacia la heterocigocidad (FIS vara entre -1, exceso de
heterocigotos, hasta +1, exceso de homocigotos). Esta apreciacin es similar a la
presentada por (MONTOYA, et al., 2005), pues el valor reportado all (FIS= -
0,0604) sugera tendencia a la heterocigocidad. De manera diferente (ROCHA, et
al., 2007), presento de 0,0309 a 0,2170, con una media de 0,156, indicando
valores con tendencia a la homocigocidad.

(ORTEGA, 2013) Que evalu 9 marcadores en Palma de aceite del Ecuador,

donde 7 marcadores presentaron valores negativos entre -0,05 a -0,68 y fueron
observadores valores positivos (0,21 a 1,0) de endogamia. Esos resultados,
asociados a los valores similares de heterocigocidad media esperada e
observada, indican que los accesos fueron obtenidos de plantas sobre bajo
cruzamiento aleatorio (FRANKHAM, et al., 2008).

8.4.3. FIT

El FIT cuantifica la proporcin a la diferenciacin inter-individual y mide la

reduccin de heterocigocidad de un individuo en relacin al total de poblaciones
(CAUJAPE, 2006). Este parmetro cuantifica la consanguinidad de los individuos
en relacin a la poblacin total de la que forman parte. Puede considerarse la
medida ms global de consanguinidad, puesto que tienen en cuenta los efectos
del apareamiento no-aleatorio dentro de las sub-poblaciones y el efecto de la
subdivisin poblacional.

71
El valor de FIT encontrado en este trabajo fue de -0,35, lo cual confirma el valor de
FIS encontrado, por lo tanto, se observa un marcado aumento del nmero de
heterocigotos respecto a lo esperado en el equilibrio Hardy-Weinberg y propone
una mxima alogamia de la especie.

8.5. Distancia e identidad gentica

Los valores de distancia gentica calculada por el ndice de (NEI, 1978), para las
dos colecciones de palma fue alto con un valor de 0,1232 e igualmente el valor de
identidad fue alto (0,8840) (Tabla 16), lo anterior se debe a pesar de la distancia
geogrfica alta existente entre los dos pases de los cuales proceden los genotipos
de palma evaluados se mantiene entre ellos un constante flujo gentico.

Tabla 16. Distancias genticas obtenidas mediante el ndice de Nei (1978) para
las colecciones evaluadas.

Coleccin Camern Zaire

Camern **** 0,1232 (DG)

Zaire 0,8840 (IG) ****

Los resultados encontrados en el presente estudio concuerdan por los reportados

por (ARIAS, et al., 2010), quienes al evaluar 311 muestras de palma de aceite
provenientes de Camern con 9 marcadores microsatlites encontraron que las
poblaciones evaluadas, a pesar del distanciamiento geogrfico no estn aisladas
genticamente, sino por el contrario se evidencio un constante intercambio de flujo
gnico que favorece la diversidad de las mismas. (MAIZURA, et al., 2006),
quienes exploraron la diversidad en 11 pases africanos con marcadores de tipo
RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism, Polimorfismo en la longitud de
los fragmentos de restriccin) y Camern presento uno de los valores ms altos de
porcentaje de polimorfismos, as como el valor medio de heterocigocidad
observada.

Figura 16. rbol de distancia gentica para las dos colecciones evaluadas y
construidas mediante el mtodo UPGMA con un bootstrapp de 1000
repeticiones. 72
En la Figura 16, se confirma lo anteriormente mencionado ya que en el rbol de
distancia gentica se muestra una sola agrupacin con un nodo que soporta el
100% de los 20 loci evaluados.

8.6. Anlisis Descriptivo

8.6.1. Dendograma

El anlisis del dendograma realizado con el coeficiente de (DICE, 1945) y Nei-Li

(1978) y mediante el mtodo de clasificacin UPGMA, a un nivel de similaridad del
80%, diferencio las dos colecciones de Camern y Zaire, cada una con sus
respectivos genotipos. Se encontr una correlacin cogentica muy alta (r = 1.00),
lo cual indica que el dendograma representa fielmente los valores de la matriz de
similitud (CRISCI & LPEZ, 1983).

Se evidencio que los 20 loci evaluados permitieron la conformacin de dos grupos

con base en su procedencia geogrfica (Figura 17).

A nivel de similaridad de 89,5%, se diferencio la poblacin en 8 sub-grupos, donde

el mayor sub-grupo lo formaron los genotipos identificados con los cdigos 3205,
3406, 5508, 3209, 806,5505, 5504, 3211, 3001, 4203, 2702, 1610, 2506, 2502,
701, 1811, 4107, 2101, 2501, 4302, 1701, 3305, 3317, 3316, 1506, 1503, 3201 y
3004 de Camern, otro subgrupos.(Tabla 17).

Tabla 17. Grupos conformados en el dendograma a una similitud de 89,5%.

Grupo Cdigo de Genotipo

A 73, 77, 74, 75, 4, 94, 78, 82, 16 y 3.

9, 24, 14, 47, 5, 91, 15, 76, 71, 21, 59, 72, 93, 84, 32,
B
79, 8, 37, 31, 1, 45, 10 Y 29.

C 38, 34, 22, 57, 43, 68, 39, 90, 63, 23, 30, 56, 62 Y 58.
D 20.
3205, 3406, 5508, 3209, 806,5505, 5504, 3211, 3001,
4203, 2702, 1610, 2506, 2502, 701, 1811, 4107, 2101,
E
2501, 4302, 1701, 3305, 3317, 3316, 1506, 1503,
3201 y 3004

1809, 1405, 1205, 2101, 4203, 1107, 102, 4007, 1103,

F
807, 3311, 405, 5609 y 4403.

G 3207, 5509, 3506 y 1702.

H 5404.

73
Se aprecia que a un ndice de similitud entre 92 - 98 %, existe una alta
concentracin de los genotipos evaluados, sugiriendo una alta similitud entre ellos,
esto posiblemente se deba al constante flujo gentico entre las colecciones en
estudio, el intercambio de material y a la naturaleza algama de la especie.

El genotipo 5404 Camern, es el que presenta el menor valor de similaridad

(86,5%) con respecto a los dems genotipos evaluados, posiblemente por
caractersticas propias de esta especie tales como: posicin de los foliolos,
tamao de hojas y racimo, tipo de maduracin, cantidad de frutos, forma, color y
tipo de fruto y entre otras caractersticas morfolgicas.

Un resultado interesante de este trabajo de investigacin es que los 20

marcadores microsatlites, pudieron identificar materiales duplicados tanto en la
coleccin de Camern y Zaire (Tabla 18), esto posiblemente se deba a que estos
materiales hbridos procedan de los mismos parentales o se diferencien por sus
caractersticas morfolgicas pero a nivel molecular sean el mismo genotipo.

Los marcadores moleculares pueden usarse con varios propsitos como estimar la
variabilidad gentica entre y dentro de poblaciones; para detectar la duplicacin de
los materiales en las colecciones; para evaluar la delimitacin de los centros de
origen; para el estudio de las relaciones filogenticas entre especies y taxones
superiores y para la determinacin de mejores estrategias de conservacin de
recursos genticos y la formacin de colecciones nucleares (POSSO, 2010).

Segn un anlisis con RFLP, los materiales mejorados se agrupan con 80% de
similaridad gentica (MAYES, et al., 2000) y representan 17% de loci polimrficos,
versus el 65% presente en poblaciones silvestres de Camern (MAIZURA, et al.,
2001). (Cochard, et al., 2009) en un estudio de diversidad gentica con 17
marcadores SSR, que abarca diversos orgenes de materiales mejorados y
silvestres, observo una clara separacin del grupo con origen Deli de aquellos
procedentes de Costa de Marfil, como lo es el material La M y el de materiales
provenientes de frica central.

(ARIAS, et al., 2010), evaluando 4 poblaciones de la amazonia (1 Ecuador y 3

Brasil) con 29 loci SS, obtuvo la conformacin de dos grupos evidenciados,
asociados a su sitio de origen geogrfico, presentando alelos especficos por
sitios, son congruentes con los resultados obtenidos por (Barcelos, et al., 1999) al
poder discriminar grupos entre E. olefera provenientes de La Guyana Francesa,
Surinam y Per por alelos especficos. (BILLOTE, et al., 2001), mediante un
anlisis de correspondencia factorial realizado con 20 marcadores en 19
accesiones de E. olefera, observaron que a lo largo del primer se distinguen
cuatro grupos de cuatro diferentes areas geogrficas: Brasil, Centroamrica,
Per, Guyana Francesa y Surinam.

74
Figura 17. Dendograma realizado con el coeficiente de Dice Nei-Li (1978) y
mediante el mtodo de clasificacin UPGMA utilizando los datos de veinte
marcadores microsatlites en 96 materiales de Elaeis guineensis.

75
Tabla 18. Genotipos duplicados de las colecciones Camern y Zaire.

Coleccin Grupo Cd. de Genotipo

A 74, 77 y 73
B 91, 5, 47 y 14
B 37, 8 y 79
Camern
B 1 y 31
C 90, 39, 68 y 43
C 30 y 23
E 3316, 1506 y 1503
E 2101 y 2501
E 1811 y 4107
E 5505 y 5504
Zaire
E 3209 y 5506
F 1405 y 1809
F 4007, 102 y 1107
F 405, 3311, 807 y 1103

8.7. Anlisis de correspondencia mltiple (ACM)

El ACM es una representacin tridimensional de la agrupacin de los materiales

colectados y se presenta en la Figura 18. Los resultados confirman que existe una
alta relacin entra las zonas geogrficas de procedencia de los materiales,
adems, muestra una alta variacin de los materiales en las colecciones
evaluadas y con identidad gentica por lo cual forman grupo homogneos. Se
observa una clara distribucin de las plantas entre las colecciones, agrupndose
de acuerdo a su procedencia.

(ARIAS, et al., 2010), evaluando diversidad gentica en materiales comerciales

como Malasia, Francia, Costa Rica y Colombia con 17 marcadores microsatlites,
obtuvieron resultados similares formando agrupaciones de acuerdo a sus
procedencias. La metodologa de mejoramiento vegetal empleada en palma de
aceite, en este caso la seleccin recurrente y la seleccin recurrente reciproca,
busca la homogenizacin del cultivo en aras de uniformidad agronmica y
estabilidad genotpica, lo cual conlleva de manera lgica a los resultados
observados (CORLEY, R. Y TINKER, P., 2003). El alto grado similaridad gentica
que se aprecio con los 17 marcadores microsatlites, es congruente con los
resultados reportados por diferentes estudios de diversidad gentica de E.
guineensis de origen silvestre, en los cuales se encuentran, materiales de tipo Deli
Dura como referencia y concluyen que las poblaciones mejoradas tienen menos
diversidad gentica.
76
 Camern

Zaire

Figura 18. Anlisis de correspondencia mltiple (ACM) para las muestras

evaluadas y construidas utilizando los datos obtenidos mediante veinte
marcadores moleculares microsatlite.

8.8. Anlisis de varianza molecular - AMOVA

En la tabla 19. Se puede observar que del total del 100% de la variacin el 52%
corresponde a la variacin dentro de poblaciones en tanto que el 48% es atribuible
a la variacin entre poblaciones, la alta variacin dentro de la poblacin significa
que dentro de cada poblacin existe mayores niveles de subdivisin gentica, por
lo tanto, al realizar muestreos mucho ms refinados incluyendo mayor nmero de
localidades que alberguen mayor diversidad gentica de la especie (Figura 19).

Tabla 19. Anlisis de varianza molecular (AMOVA) para las colecciones y

utilizando los datos obtenidos de veinte marcadores microsatlites.

Comp. Des.
Fuente de Variacin Gl SC %
Varianza Est.
Entre colecciones 1 137,667 137,667 2,805 48%
Dentro de colecciones 94 286,479 3,048 3,048 52%
Total 95 424,146 5,852 100%

77
 Figura 19. Porcentaje de Anlisis de Varianza Molecular (AMOVA).
Estos resultados contrastan por lo reportado por (FERREIRA, 2009), en la
evaluacin de diversidad gentica en progenies tipo dura de palma de aceite, con
cuatro loci SSR, detectando 62,99% del total de la variacin entre poblaciones y
37,01% dentro de las progenies.

(RODRIGUES, 2006), utilizando 8 loci microsatlites para evaluar la diversidad y

la estructura gentica de progenies seleccionadas de tres poblaciones de
chontaduro de la raza Pampa Hermosa donde reportaron que 83,7% del total de la
variacin gentica fue encontrada dentro de las progenies, 15% entre las
progenies dentro de las poblaciones, y solamente 1,2% entre las poblaciones.

Niveles de diferenciacin gentica donde la mayor parte de la variacin estaba

dentro de las progenies, fueron obtenidos con el uso de SSR y de otros
marcadores codominantes en germoplasma de palma de aceite (HAYATI, et al.,
2004), en poblaciones naturales de palmito (Euterpe edulis Mart.) sometidas a la
accin antrpica (CONTE, et al., 2008) y en procedencias de asai (Euterpe
olecea Mart) mantenidas en coleccin de germoplasma.

Utilizando 10 loci aloenzimticos y 8 marcadores microsatlites en 4 poblaciones

de palmito, (CONTE, et al., 2008), atribuye la alta diferenciacin al hecho de que la
especie no presenta cruzamientos aleatorios entre individuos emparentados (5%)
y biparentados (10%), a pesar de reproducirse por alogamia.

(MORETZSOHN, et al., 2002), En un estudio de diversidad con E. olefera de la

floresta amaznica de Brasil, obtuvo una mayor variacin dentro de las
poblaciones que entro ellas, tal como es lo esperado en las especies algamas
perennes y de vida larga. Resultados similares obtuvo (ORTEGA, 2013),
evaluando diversidad gentica entre y dentro de los accesos colectados en la
amazonia ecuatoriana, utilizando 9 SSR, en 40 planta de E. olefera, con una
variacin de 72% entre plantas de los accesos colectados.

78
Esos resultados sealan que se debe explorar la diversidad dentro de los accesos
de E. olefera priorizando la variabilidad entre plantas, o sea, considerando cada
planta como un diferente acceso. Aun, cabe resaltar que tales resultados indican
que, para una colecta de accesos con mayor variabilidad, se debe preferir coger
mayor numero de semillas de un mismo racimo, o planta, de que el mismo nmero
de semillas de plantas diferentes en su ambiente natural. Eso porque los
polinizadores traen polen de plantas distintas en la polinizacin de inflorescencias
femeninas.

79
 9. CONCLUSIONES

El presente estudio pone de manifiesto la existencia de alta variabilidad

gentica en materiales de palma silvestres, la cual puede ser utilizada en los
procesos de seleccin de parentales y recombinacin, que conduzca a la
obtencin de genotipos lites, con buenas caractersticas agronmicas, de
buena adaptacin a las zonas agroecolgicas, de buena produccin de aceite
y alto rendimiento, que sean resistentes a enfermedades y plagas limitantes
del cultivo.

Los 20 marcadores microsatlites utilizados en el estudio brind gran cantidad

de informacin que result de gran importancia para el anlisis de diversidad
gentica y estructura poblacional de E. guineensis. Se identificaron loci
altamente polimrficos, los cuales podrn ser tiles para lograr una mayor
diferenciacin entre genotipos de palma y especies relacionadas.

Los resultados de los anlisis de estructuracin poblacional mostraron que

existe una moderada diferenciacin gentica, esto posiblemente se deba a
que existe un constante flujo gentico entre las colecciones de Zaire y
Camern y por lo tanto, no existen barreras de cruzabilidad, ni marcada
diferencia entre ellas.

Los marcadores moleculares microsatlites utilizados permitieron discriminar

los genotipos de acuerdo al sitio de origen, as como tambin duplicados en
las dos colecciones de Zaire y Camern.

Se hace relevante la inclusin de genotipos en estado silvestre procedente del

frica en los Programas de Mejoramiento de Palma, ya que estos materiales
son fuente de genes de inters, y su explotacin racional permitira planear
estrategias para ampliar la base gentica del cultivo, y as iniciar el diseo de
cruzamientos, la seleccin de progenitores con buena habilidad combinatoria
general y especfica, la obtencin de progenies hbridas con caractersticas
deseables, de mejor adaptacin y con los ms altos rendimientos.

80
 10. BIBLIOGRAFA

ADIN, A. y otros, 2004. Genetic differentiation and trade among populations of

peach palm (Bactris gasipaes Kunth) in the Peruvian Amazon. Implications for
genetic resource management. ed. s.l.:Theor. Appl. Genet..

ALVARADO, A., 1998. Factores que afectan la sntesis de aceite y la tasa de

extraccin en palma aceitera. Programa de investigacin en Palma Aceitera
(PIPA) ed. s.l.:ASD de Costa Rica.

ALVES DOS SANTOS, E., 2010. Caracterizacin de palmas de aceite

subespontaneas con base en la produccin de frutos y cachos. Ilhus: UESC.

ALLOU, D., ADON, B. & SANGARE, A., 2008. Molecular Variability from two
selection of BRR10 population in an inbreeding program of oil palm (Elaeis
guineensis Jacq) in Cote dIvoire.. s.l.:African Journal of Biotechnology.

ARAYA, E., ALVARADO, A. & ESCOBAR, R., 2009. Use of DNA markers for
fingerprinting compact clones and determining the genetic relationship between
Elais olefera germplasm origins. San Jose: Agricultural Services & Development.

ARIAS, D., MONTOYA, C. & ROMERO, H., 2010. Resultados preliminares sobre
la caracterizacin molecular de palma de aceite mediante marcadores
microsatlites. Palmas, 31(3).

ARIAS, F. J. & FIGUEREDO, V. P. d. i., 1987. Mejoramiento gentico de la palma

de aceite Elaeis guineensis Jacq.. Seccin Oleaginosas Perennes ed. s.l.:Instituto
Colombiano Agropecuario (ICA).

BACHY, A., 1964. Tropisme racinaire du palmier huile.. s.l.:Olagineux.

BAILEY, L. H., 1933. Certain palms of Panama. En: s.l.:Gentes Herb.

Bakoum, C. 2., 2006. Genetic diversity of natural oil palm (Elaeis guineensis
Jacq.) populations using microsatellite markers.. s.l.:University Kebangsaan.

BARCELOS, E., 1998. Etude de la diversit gntique du genre Elaeis (E. oleifera
(Kunth) Corts et E. guineensis Jacq.) par markeurs molculaires (RFLP et
AFLP).. Francia: Universit Montpellier II.

Barcelos, E. y otros, 1999. Evolution, variation and classification of palms. New

York Botanical Garden, Issue 83, pp. 191-201.

BARCELLOS, E., AMBLARD, P., BERTHAUD, J. & SEGUIN, M., 2002. Genetic
diversity and relationship in American and African oil palm as revealed by RFLP
and AFLP molecular markers.. Brasilia: Pesq. Agropec. Bras. Brasilia .

81
BASTIDAS, P., FIGUEREDO, V. P. & REYES, C. R., 1993. Obtencin de
materiales de palma de aceite (Elaeis guineensis) adaptados al trpico
latinoamericano.. Revista Palma (No. Especial), pp. 49-56..

BASTOS, T. X., 2000. Aspectos agroclimticos do dendezeiro na Amaznia

Oriental. Embrapa Amaznia Oriental/Manaus, Issue (Ed.) A cultura do dendezeiro
na Amaznia Brasileira., pp. 47-59.

BEIRNAERT, A., 1935. Introduction la biologie florale du palmier Elaeis..

Organisation de Iinflorescence chez le palmier huile. ed. s.l.:Revue int. Bot.
appl. Agric. Trop..

BEIRNAERT, A. & VANDERWEYEN, R. 1. N. 2., 1941. Contribution ltude

gntique et biomtrique des varits dElaeis guineensis Jacq.. Srie Sci. ed.
Brussels: Publs. I.N.E.A.C..

BERTHAUD, A., NUNES, C. D. M., BARCELOS, E. & CUNHA, R. N. V. d., 2000.

Implantao e explorao da cultura do dendezeiro.. A cultura do dendezeiro na
Amaznia Brasileira, pp. 193-227.

BILLOTE, N. y otros, 2005. Microsatellite-based high density linkage map in oil

palm (E. guineensis Jacq).. s.l.:Theoretical and Applied Genetics.

BILLOTE, N. y otros, 2001. Development, characterization and acrosstaxa utility of

oil palm (Elaeis guineensis Jacq) microsatellite markers. s.l.:Genome .

BOTSTEIN, D., WHITE, R. L., SKOLNICK, M. & DAVIS, R. W., 1980. Construction
of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms..
s.l.:Am J Hum Genet.

BOTSTEIN, D., WHITE, R. & SKOLNICH, M. y. D. R., 1980. Construction of a

genetic linkage map in man using restrition fragmente length polymorphisms..
s.l.:Am. J. Hum. Genetics..

BOVI, M. L. A., BASSOO, L. C. & TUCCI, M. L. S., 1998. Avaliao da atividade in

vitro da fosfatase acida e do crescimento de prognies de pupunheira cultivada em
duas doses de nitrognio e fsforo.. Revista Brasileira de Cienica do Solo,
Volumen 22, pp. 427-434.

BRIEY, J. 1., 1922. Le palmier huile au Mayumbe.. s.l.:Mem. Rapp. Matir

grass..

BROEKMANS, A. F. M., 1957. Growth, flowering and yield of the oil palm in
Nigeria. 187. ed. s.l.:J. W. Afr. Inst. Oil Palm Res..

82
BROWN, A. H. D., 1989. Core collections: A practical approach to genetic
resources management.. s.l.:Genome.

CARVALHO, L. D. y otros, 2003. Anlise da divergncia gentica entre acessos de

banco ativo de germoplasma de algodo.. Pesquisa Agropecuria Brasileira,
Volumen 38, pp. 1149-1155.

CASTRO, F. y CORLEY, R.H.V., 2007. Avances en el programa de investigacin y

desarrollo de semillas Unipalma DxP. s.l.:PALMAS.

CAUJAPE, J., 2006. Brjula para botnicos desorientados en la gentica de

poblaciones.. EXEGEN, Issue Las Palmas de Gran Canaria. , p. 132.

CLARK, D., CLARK, D., SANDOVAL, M. & CASTRO, C., 1995. Edaphic and
human effects on landscape-scale distributions of tropical rain forest palms..
s.l.:Ecology.

CLUSIUS, A., 1605. Exoticorum libri decem: quibus animalium, plantarum,

aromatum, aliorumque peregrin. fructuum historiae describuntur / item Pt. Bellonii
Observationes, eodem C.C. interprete. s.l.:Ex officina Plantiniana.

Cochard, B. y otros, 2009. Geographic and genetic structure of African oil palm
diversity suggest new approaches to breeding. Tree genetics and genomes,
Volumen 5, pp. 493-504.

COLE, D., WHITE, T. & NAIR, P., 2007. Maintaining genetic resources of peach
palm (Bactris gasipaes Kunth): The role of seed migration and swidden-fallow
management in notheastern Peru. s.l.:Genetic Resources and Crop Evolution.

CONTE, R., SEDREZ, M. D. M. A. & VENCOVSKY., 2008. Genetic Structure and

Mating System of Euterpe edulis Mart. Populations: A Comparative Analysis Using
Microsatellite and Allozyme Markers.. Heredity, 5(99), pp. 476-482.

COOK, O. F., 1942. A Brazilian origin for the commercial oil palm. s.l.:Sci. Montbly.

CORLEY, R. Y TINKER, P., 2003. La palma de aceite.. Oxford: Blackwell

Publishing Ltd..

CORLEY, R., 2000. Production of Oil Palm Seed. Notes on a visit by R.H.V.
Corley. Plantations Rsearch Consultant ed. s.l.:Unipalma de los Llanos.

CORNER, E. J. H. 1., 1966. The natural history of palms.. London: Weidenfeld and
Nicolson.

83
COUVREUR, T. y otros, 2006. Close genetic proximity between cultivated and wild
Bactris gasepaes revealed by microsatellite markers in Ecuador. 7 ed. s.l.:Genetic
Research and Crop Evolution.

CRISCI, J. & LPEZ, M., 1983. Introduccin a la teora y prctica de la taxonoma

numrica.. Washington, D.C.: Secretara General de la Organizacin de los
Estados Americanos OEA..

CRUZ, C., FERREIRA, F. & PESSONI, L., 2011. Biometria aplicada ao estudo da
diversidade gentica.. s.l.:Visconde do Rio Branco, MG: Suprema.

CHEVALIER, A., 1910. Les vgteus utile de IAfrique tropicale francaise.. Paris:
Documents sur le palmier buile.

CHEVALIER, A., 1934. La patrie des divers Elaeis, les espces et les varits.
s.l.:Revue Bot. appl. Agric. trop..

DICE, L., 1945. Measures of the amount of ecological association between

species.. Ecology., Volumen 26, pp. 297-302..

DURAN, N. & ORTIZ, R. A., 1995. Efecto de algumas propriedades fsicas do solo
e da precipitao sobre a produo de dend.. s.l.:Agronomia Mesoamrica.

FALEIRO, F., 2007. Marcadores moleculares aplicados a programas de

conservao e uso de recursos genticos. Planaltina - DF: Embrapa Cerrados.

FERRO, M., VIEIRA, C., CRUZ, C. & CARDOSO, A., 2002. Divergncia gentica
em feijoeiro em condies de inverno tropical.. Pesquisa Agropecuria Brasileira,
Volumen 37, pp. 1089-1098.

FERREIRA, C. B., 2009. Diversidade Gentica em progenies Tipo Dura de

Dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.). s.l.:Universidade Federal do Amazonas.

FERREIRA, M. & GRATTAPAGLIA, D., 1996. Introduo ao uso de marcadores

moleculares em anlise gentica.. Embrapa-Cenargen, Braslia., Issue 2.

FERREIRA, M. & GRATTAPAGLIA, D., 1998. Introduo ao uso de marcadores

RAPD e RFLP em anlise gentica.. Braslia: EMBRAPA-CENARGEM. , Volumen
3, p. 220.

FERRI, M. G., 1973. Botnica: morfologia externa das plantas (organografia)..

Melhoramentos ed. So Paulo: s.n.

FIGUEIRA, A. & CASCARDO, J., 2001. Marcadores moleculares no

melhoramento.. Melhoramento gentico do cacueiro. ed. s.l.:Viosa: FUNAPE,
UFG..

84
FRANKEL, O., BROWN, A. & BURDON, J., 1996. The conservation of plant
biodiversity.. s.l.:Cambridge: Cambridge University.

FRANKHAM, R., BALLOU, J. & BRISCOE, D., 2008. Fundamentos de gentica da

conservacao. Sociedade Brasileira de Gentica, p. 280.

FREMOND, Y., ZILLER, R. & NUC DE LAMOTHE, M., 1975. El cocotero:

Tcnicas agrcolas y producciones tropicales. Barcelona: Blume.

GHESQUIERE, M., 1985. Enzyme polymorphism in oil palm (Elaeis guineensis

Jacq.). II. Variability and genetic of seven origins of oil palm. ed. s.l.:Oleagineux.

GOMES, M., BIONDI, A., BRIANEZI, T. & GLASS, V., 2009. O Brasil dos
agrocombustveis: Impacto das lavouras sobre a terra, o meio e a sociedade -
Gordura animal, dend, algodo, pinho-manso, girasol e canola.~. s.l.:Centro de
Monitoramento dos Agrocombustveis.

GONALVES, A. C. R. I. C. P., 2001. Dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.)..

Cosmpolis: Stoller do Brasil, Issue Ecofisiologia de culturas extrativas: cana-
deacar, seringueira, coqueiro, dendezeiro e oliveira., pp. 95-112.

HAMRICK, J., 1983. The distribuition of genetics variation within anda among
natural plant populations.. Menlo Park: The Bejamim/Cummings Publishing
Company, Issue Genetics and conservation. .

HAMRICK, J., 1989. Isozymes and analysis of genetic structure in plants

populations.. London: Chapman and Hall, pp. 335-348..

HAMRICK, J. & LOVELESS, M., 1986. Isozyme variation in tropical trees

procedures and preliminary results.. Biotropica, Volumen 18, pp. 201-207.

HARDON, J. J. & TURNER, P. D., 1967. Observations on natural pollination in

commercial plantings of the oil palm (Elaeis guineensis).. s.l.:Expt. Agric..

HARTLEY, C., 1974. Oil palm research and development in Colombia.. Informe I
ed. s.l.:s.n.

HARTLEY, C. W., 1977. The Oil Palm. s.l.:Longman.

HARTLEY, C. W. S., 1988. The oil palm. s.l.:London: Longman.

HAYATI, A., WICKNESWARI, R., MAIZURA, I. & RAJANAIDU, N., 2004. Genetic
diversity of oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) germplasm collections from: Africa:
Implications for improvement and conservation of genetic resources. s.l.:Theo.
Appl. Genet..

85
HENRY, P., 1951. La germination des graines dElaeis.. s.l.:Revue int. Bot. appl.
Agric. trop..

HENRY, P., 1955. Morphologie de la feuille dElaeis au cours de sa croissance.

s.l.:Revue gn. Bot..

HUSSEY, G., 1958. An analysis of the factors controlling the germination of the
seed of the palm, Elaeis guineensis (Jacq.).. s.l.:Ann. Bot., N.S..

JACQUIN, N. J., 1973. Selectarum stirpium Americanarum historia.. s.l.:s.n.

JANSSENS, P., 1927. Le palmier huile au Congo Portugais et dans Ienclave de

Cabinda. Descriptions des principales varits de palmier (Elaeis guineesis).
s.l.:Bull. agric. Congo belge.

JEFFREYS, A. W. V. &. T. S., 1985. Hypervariable minisatellite regions in human

DNA.. s.l.:Nature.

JOSEPH, H. A. R. T. R. B. W., 1992. Multivariate data. 3 ed. s.l.:Analysys with

Readings.

JUMELLE, H., 1918. Les varits de palmiers huile. s.l.:Matires grasses.

JUMELLE, H. A. P. D. L. B. H., 1911. Le Palmier huile Madagascar..

s.l.:Matires grasses.

KAGEYAMA, P., 1987. Conservao in situ de recursos genticos de plantas..

IPEF, Volumen 35, pp. 7-37.

KALINKA, K., 2002. www.amazonia.org.br.. [En lnea].

KUMAR, S., MANIMEKALAI, R. & KUMARI, B., 2011. Microsatellite marker based
characterization of Sotuh Pacific Coconut (Cocos nucifera L.) accessions..
International Journal of Plant Breeding and Genetics, 5(1), pp. 34-43.

LAMBOURNE, J., 1935. Note on the root habit of oil palms.. s.l.:Malay. agric. J..

LI, C. & HORVITZ, D., 1953. Some methods of estimating the inbreeding
coefficient.. 5 ed. s.l.:Ame.J.Hum.Genet..

LITT, M. & LUTY, J., 1989. A hypervariable microsatellite revealed by in vitro

amplification of a dinucleotide reapeat whithin the cardiac muscle actin gene..
s.l.:Am. J. hum. Genetics..

LMC, 2008. Oilseeds and oilseeds products.. s.l.:Outlook for profibility to 2020.

86
MACEDO, J. L. V. & RODRIGUES, M. R. L., 2000. Solos da Amaznia e o cultivo
do dendezeiro. Belm: Embrapa Amaznia Oriental/ Manaus: Embrapa Amaznia
Ocidental, Issue A cultura do dendezeiro na Amaznia Brasileira., pp. 73-87.

MAIZURA, I., CHEAH, S. & RAJANAIDU, N., 2001. Genetic diversity of oil palm
germplasm collections using RFLPs. s.l.:Proceedings of 2001 PIPOC International
Palm Oil Congress-Cutting-edge technologies for sustained competitiveness
(Agriculture).

MAIZURA, I., RAJANAIDU, N., ZAKRI, A. & CHEAH, S., 2006. Assessment of
genetic diversity in oil palm (Elaeis guineensis Jacq.) using Restriction Fragment
Length Polymorphism (RFLP). Genetic Resources and Crop Evolution, Volumen
53, pp. 187-195.

Malaysian Palm Oil Board, 2000. Adevances in Oil Palm Research. s.l.:s.n.

MAUNY, R., 1953. Notes historiques autour des principales plantes cultives
dAfrique occidentale.. Dakar: Bull. Inst. fr. Afr. noire, 15, 684, and (1961) Tableau
gographique de lOuest African au moyen ge. Mem. Inst. fr. Afr. noire .

MAYES, S., JACK, P. & CORLEY, H., 2000. The use of molecular markers to
investigate the genetic structure of an oil palm breeding programme.. The
Genetical Society of Great Britain, 85(Heredity), pp. 288-293.

MEEROW, A. y otros, 2003. Analysis of gnenetic diversity and population struture

within Florida coconut (cocos nucifera L.) germoplasm using microsatellite DNA,
with special emphasis on the Fiji Dwarf cultivar.. Theoretical and Applied Genetics,
Berlin, 106(4), pp. 715-726.

MEUNIER, J., 1975. Le "palmier huile`americain Elaeis melanococca..

Olagineux, Volumen 30, pp. 51-62.

MINIANUARIO ESTADISTICO, 2013. Principales cifras de la agroindustria de la

palma de aceite en Colombia. s.l.:s.n.

MOHAMMADI, S. & PRASANNA, B., 2003. Analysis of genetic diversity in crop

plants-Salient statistical tools and consederations. 43 ed. s.l.:Crop Sci..

MONTOYA, C., ARIAS, D., REY, L. & ROCHA, P., 2005. Diversidad gentica de
materiales Elaeis guineesis Jacq procedentes de Angola. 5 ed. s.l.:Fitotecnica
Colombiana.

MORETZSOHN, M. C. y otros, 2002. Genetic diversity of Brazilian oil palm (Elaeis

oleifera H.B.K.) germplasm collected in the Amazon Forest. Wageningen:
Euphytica.

87
MORETZSOHN, M. y otros, 2002. Genetic diversity of Brazilian oil palm (Elaeis
oleifera H.B.K.) germplasm collected in the Amazon Forest.. Euphytica , Volumen
124, pp. 35-45.

MORILLO, A. C. & MORILLO, Y., 2004. Caracterizacin Molecular con

Microsatlites Aleatorios RAMs de la coleccin de Mora Rubus spp. de la
Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira. s.l.:Universidad Nacional de
Colombia Sede Palmira.

MUOZ, J. E., 2011b. Diversidad gentica, estructura poblacional y seleccin de

clones superiores de Guadua angustifolia Kunth en la eco-regin cafetera de
Colombia.. s.l.:Universidad Nacional de Colombia sede Palmira.

NEI, M., 1973. Analysis of gene diversity in subdivided populations..

s.l.:Proceedings of the National Academy od Sciences of the USA.

NEI, M., 1973. Analysis of genetic diversity in subdivided populations. Proc Na.
s.l.:Proc Nat Acad Sci.

NEI, M., 1978. Estimation of average heterozygosity and genetic distance from a
small number of individuals. s.l.:Genetics.

NOTES ON THE BOTANY OF THE OIL PALM., 1961. The stem and the stem
apex.. s.l.:J. W. Afr. Inst. Oil Palm. Res..

NOTES ON THE BOTANY OF THE OIL PALM., 1962. The leaf.. s.l.:J. W. Afr. Inst.
Oil Palm. Res..

NOTES ON THE BOTANY OF THE OIL PALM, 1955. The seed and its
germination.. s.l.:J. E. Afr. Inst. Oil Palm. Res..

OPSOMER, J. E., 1956. Les premires descriptions du palmier huile (Elaeis

guineesis Jaqc.).. s.l.:Bull. des Seans. Acad. r. Sci. Colon. (outre Mer).

ORTEGA, D. S., 2013. Diversidad Gentica y Seleccin em Palma de Aceite en el

Ecuador. s.l.:Universidad Federal de Vicosa.

OTT, J., 1992. Strategies for chacaracterizing highly polymorphic markers in

human gene mapping. s.l.:Am. J. Hum. Genet..

PALACIO, J. D., 2002.. Caracterizacin de la diversidad gentica en Robles

Colombianos.. Memorias del V Seminario de Biotecnologa ed. s.l.:Universidad
Nacional de Colombia sede Palmira..

88
PANDEY, G. & DOBHAL, V., 1997. Multivariate analysis in taro (Colocasia
esculenta L.). Indian Journal of Genetics & Plant breeding, Volumen 57, pp. 262-
265.

PARAN, I. &. M. R., 1993. Development of reliable PCR-based markers linked to

downy mildew resistance genes in lettuce.. s.l.:Theor. Appl. Genet..

PATIO, V. M., 1948. Informacin preliminar sobre la palma de aceite africana

(Elaeis guineensis) en Colombia.. Buenaventura: Serie Botnica aplicada.

PEAKALL, R. & SMOUSE, P. E., 2006. GENALEX 6: genetic analysis in Excel..

Molecular Ecology Notes 6 ed. s.l.:Population genetic software for teaching and
research..

PERERA, L., RUSSELL, J., PROVAN, J. & POWELL, W., 2001. Level and
distribution of genetic diversity of coconut (Cocos nucifera L.,var. Typica form
typica) from Sri Lanka assessed by microsatellite markers. s.l.:Euphytica.

PIERO, D. y otros, 2008. La varibilidad gentica de las especies: aspectos

conceptuales y sus aplicaciones y perspectivas en Mxico. Capital natural de
Mxico, I: Conocimiento actual de la biodiversidad(CONABIO), pp. 415-435.

POSSO, A. M., 2010. Diversidad Gentica de accesiones de Nacedero

Trichanthera gigantea (Humb. & Bonpl.) Nees Mediante RAMs (Random Amplified
Microsatellites). s.l.:Universidad del Valle.

POSSO, A. M., 2011. DIVERSIDAD GENTICA Y ESTRUCTURA POBLACIONAL

DE Guadua angustifolia Kunth EN EL EJE CAFETERO COLOMBIANO.
s.l.:Universidad Nacional de Colombia sede Palmira.

PURBA, A. R. y otros, 2000. A new aspect of genetic diversity of Indonesian oil

palm (Elaeis guineensis Jacq.) revealed by isoenzyme and AFLP markers and its
consequences for breeding.. s.l.:Theor. Appl. Genet..

PURVIS, C., 1956. The root system of the oil palm: Its distribution, morphology and
anatomy.. s.l.:J. W. Afr. Inst. Oil Palm Res..

RAYMOND, W. D., 1961. The oil palm industry. s.l.:Trop. Sci. .

REES, A. R., 1963. A note on the spines of the oil palm.. Principes ed. s.l.:s.n.

REES, A. R., 1965. Evidence for the African origin of the oil palm. Principes.
s.l.:s.n.

89
REY, L., OCHOA, I., DELGADO, W. & ROCHA, P., 2003. Colecta de material
gentico de palma nol Elaeis oleifera [H.B.K.] Corts en el Trapecio Amaznico..
1-4 ed. Colombia: Ceniavances .

REY, L., P. L. GMEZ, I. & AYALA, W. D. Y. P. R., 2004. Cenipalma:

Caractersticas de importancia en el sector palmicultor.. Palma, 25(2), pp. 39-48..

RICHARDSOND, D., 1995. La historia del mejoramiento gentico de la palma

aceitera en la compaa Unit Fruit en Amrica. s.l.:ASD Oil Palm Papers .

RIVAL, A., BEULE, T., BARRE, S. & HAMON, Y. D. Y. M. N., 1997. Comparative
flow cytometric estimation of nuclear DNA content in oil palm (Elaeis guineensis
Jacq.). s.l.:Plant Cells Reports.

ROBINSON, I., 1998. Aloenzimas na gentica de populaes de plantas.

Eletroforese de Isoenzimas e Protenas Afins: Fundamentos e Aplicaes em
Plantas e Microorganismos ed. Viosa: UFV.

ROBINSON, I., 1998. Aloenzimas na gentica de populaes de plantas..

Eletroforese de Isoenzimas e Protenas, Issue Fundamentos e Aplicaes em
Plantas e Microorganismos., pp. 329-380.

ROCHA, P., MELNDEZ, E. R. & REY, L., 2007. Ampliacin del anlisis de
diversidad gentica de palma de aceite proveniente de Angola. s.l.:Respuestas.

RODRIGUES, D., 2006. Diversidade gentica e sistema de reproduo em

prognies elites de pupunheira inerme (Bactris gasipaes Kunth) com marcadores
microssatlites: implicaes para o melhoramento do palmito.. Manaus: UFAM.

RUER, P., 1967. Morphologie et anatomie du systme radiculaire du palmier

huile.. s.l.:Oleagineux.

RUER, P., 1969. Systeme racinaire du palmier huile et alimentation hydrique.

s.l.:Olagineux.

SAMBROOK, J., FRITSCH, E. F. & MANIATIS, T., 1989.. Molecular Cloning.. A

Laboratory Manual ed. s.l.:Cold Spring Harbor Laboratory Press..

SEWARD, A. C., 1924. A colletion of fossil plants from South-eastern Nigeria..

s.l.:Bull. Geol. Surv. .

Simmonds, N. W., 1993. Introgression and incorporation. Strategies for the use of
crop genetic resources.. Biol. Rev. Camb. Phil. Soc., Volumen 68, pp. 539-562.

SIMMONDS, N. W., 1993. Introgression and incorporation. Strategies for the use
of crop genetic resources.. Biol. Rev. Camb. Phil. Soc., Volumen 68, pp. 539-562.

90
SINGH, R. y otros, 2008. Exploting an oil palm EST database fot the development
of genederives SSR markers and their explotation for assessmen of genetic
diversity.. s.l.:Biology.

SMITH, E. H., 1935. A note on recent research on empire products. S. Provinces,

Nigeria, Jan.-June 1935). Botanical section Rep., January - June, 33(3), p. 371.

TAILLEZ, B. 1., 1971. La systme racinaire du palmier huile sur la plantation de

San Alberto (Colombie).. s.l.:Olagineux.

THOMAS, M. & SCOTT, N., 1993. Microsatellite repeats in grapevine reveal DNA
polymorphisms. s.l.:s.n.

THOMAS, R. L., CHAN, K. W. & EASU, P. T., 1970. Phyllotaxis in the oil palm:
arrangement of the male/female spikelets on the inflorescense stalk.. s.l.:Ann. Bot.
N.S..

TOMLINSON, P. B., 1961. Anatomy of the monocotyledons II. Oxford.: Palmae..

TORRES, L., 2008. Evaluacin del polimorfismo de marcadores microsatlites en

Guadua angustifolia (Poaceae: Bambusoideae) para la caracterizacin molecular
de las accesiones del banco de germoplasma de bambusoideae del jardn
botnico Juan Mara Cspedes. Tulua(Valle del Cauca): Universidad del Valle.

UMANA, C. & CHINCHILLA, C., 1991. Symptomatology with water deficit in oil
palm.. s.l.:ASD Tech. Bull..

VALLEJO, R. G., 1978. Mejoramiento gentico de la palma africana. La palma de

aceite., s.l.: s.n.

VANDERWEYEN, R. & ROELS, O., 1949. Les varites dElaeis guineensis

Jacquin du type Albescens. Srie Sci. ed. s.l.:I.N.E.A.C..

VIEGAS, I., 1993. Crescimento do dendezeiro (Elaeis guineensis Jacq.)

concentrao, contedo e exportao de nutrientes nas diferentes partes de
plantas com 2 a 8 anos de idade, cultivadas em Latossolo Amarelo distrfico,
Tailndia, Par.. Par: Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz.

VILLEGAS, V., DURAN, C. & BEEBE, S., 2000. Caracterizacin de materiales

Dura.. Palmas, Volumen 21, pp. 35-40.

VOS, P. y otros, 1995. AFLP: a new technique for DNA fingerprinting.. s.l.:Nucleic
Acids Research.

91
WATERSON, J. M. 1., 1953. Observations on the influence of some ecological
factors on the incidence of the oil palm diseases in Nigeria.. s.l.:J. W. Afr. Inst. Oil
Palm Res., .

WEIR, B., 1996. Genetic Data Analysis II: methods for discrete population genetic
data.. s.l.:Sunderland: Sinauer Associates.

WEST, M., 1976. The analysis of yield data of the NIFOR oil palm main breeding
programme and the choice of new parental material.. s.l.:Spplementary report to
the Min. Of Overseas Development, Mimeograph..

WILLIAMS, J., KUBELIK, A., LIVAK, K. & RAFALSKI, L. &. S., 1990. DNA
polymorphism amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers..
s.l.:Nucleic Acids Res..

WORLD FOOD AND AGRICULTURE, 2012. FAO Statistical Yearbook. Roma:

FAO.

WRIGHT, S., 1931. Evolution in Mendelian population.. Genetics, Volumen 16, pp.
97-159.

WRIGHT, S., 1951. The genetical structure of populations.. s.l.:Annals of

Eugenetics.

WRIGHT, S., 1978. Evolution and the genetics of populations, variability within and
among natural populations. 4 ed. s.l.:University of Chicago Press. Chicago..

YAMPOLSKY, C., 1922. A contribution to the study of the oil palm (Elaeis
guineensis, Jacq.). s.l.:Bull. Jard. bot. Buitens..

YAMPOLSKY, C., 1924. The pneumathodes on the roots of the oil palm (Elaeis
guineensis, Jacq.). s.l.:Am. J. Bot..

ZAKI, N. M. y otros, 2010. Development and characterization of Elaeis oleifera

Microsatellite Markers.. 6 ed. s.l.:Sains Malaysian.

ZEHDI, S. y otros, 2005. Genetic diversity of Tunisian date palms (Phoenix

dactylifera L.) revealed by nuclear microsatellite polymorphism.. s.l.:Hereditas.

ZEVEN, A. C., 1964a. On the origin of the oil palm. s.l.:Grana palynol.

ZEVEN, A. C., 1964b. The idolatrica palm.. s.l.:Baileya.

ZEVEN, A. C., 1965. The origin of the oil palm (Elaeis guineensis Jacq.). s.l.:J. W.
Afr. Inst. Oil Palm Res. .

92
ZUCCHI, M. y otros, 2002. Transferability od microsatellite markers from
Eucalyptus spp. To Eugenia dysenterica (Mystaceae family). Molecular Ecology
Notes, Diciembre.3(4).

93