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Universidad Nacional Autnoma de

Mxico.
Facultad de Estudios Superiores

Qumica Farmacutica Biolgica.

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA GENERAL I.

Grupo: 2652.

Equipo: 9.

INTEGRANTE FIRMA
Bentez Garca Gabriela Sugey. Gabriela Sugey
Benitez Garca

Informe de la prctica:

PATOGENICIDAD Y VIRULENCIA

Fecha de entrega: lunes 13 de marzo de 2017.


PATOGENICIDAD Y VIRULANCIA.
Objetivos:

Comprender y observar los mecanismos de patogenicidad y virulencia


de un grupo de microorganismos.

Diagramas de flujo:

Catalasa
Sobre un portaobjetos
Inicio (limpio) se colocar (en Sobre la muestra
condiciones estriles) adicionar una gota de
una muestra de la cepa perxido de hidrogeno.
problema.

Cepas: Observar si existe


S. aureus Se coloca una reaccin.
S. pyogenes muestra de cada
K. una de las cepas.
pneumoniae
E. coli
P. aeruginasa Reactivos :
M. Perxido de hidrogeno.
lisodeikticus Material:
P. vulgaris
Portaobjetos.
B. subtilis
Asa bacteriolgica.
C. equi
S. typhi

Coagulasa
Previo a la prctica, se realiz extraccin
sangunea a una persona (voluntario). Y
se separo el plasma.

Catalasa libre y ligada: En condiciones aspticas,


Inicio agregar 0.5 mL de plasma en con el asa bacteriolgica
un tubo de ensaye. tomar una muestra de la
cepa S. aureus y
suspender en el plasma.
Catalasa ligada: colocar una gota
Cepa: de plasma en un portaobjetos y en
S. aureus condiciones aspticas agregar una
azada de S. aureus y se mezclar.

Mezclar un poco e
Observar si existe
Material: incubar a 37C por 2
suspensin o no en la
Tubo de ensaye. horas.
prueba.
Cubreobjetos.
Asa bacteriolgica.
Hemolisinas

Previo a la prctica
se preparo y se
incub una placa de
agar sangre.

En su respectivo
Una placa de agar
cuadrante, sembrar
Inicio sangre, dividir por la
por estra las cepas S.
mitad (lnea
pyogenes y S. aureus.
imaginaria).

Cepas:
Leer el tipo de Incubar a 37 C por
S. pyogenes
hemolisis. 24 horas.
S. aureus

Material:
Placa de agar
sangre.
Asa bacteriolgica.

Resultados:

Se realizaron pruebas que revelaron algunas cualidades que tienen


ciertos microorganismos para producir patogenicidad y virulencia.

Tabla 1. Resultados de las pruebas realizadas a cada cepa .


Nombre de Coagula Hemolisi
microorganismo / Prueba Catalasa sa s Capsula
------------- -------------
Escherichia coli Positiva ------------* * *
- -------------
Streptococcus pyogenes Negativa ------------* hemolisis *
No- -------------
Staphylococcus aureus Positiva positiva hemolisis *
------------- -------------
Pseudomonas aeruginosa Positiva ------------* * *
------------- -------------
Micrococcus lysodeikticus Positiva ------------* * *
-------------
Klebsiella pneumoniae Positiva ------------* * Positiva
------------- -------------
Proteus vulgaris Positiva ------------* * *
------------- -------------
Bacillus subtilis Positiva ------------* * *
------------- -------------
Corynebacterium equi Positiva ------------* * *
------------- -------------
Salmonella typhi Positiva ------------* * *
------------- -------------
Mycobacterium phlen Positiva ------------* * *
Los datos reportados con asterisco (---*) indican que la prueba no se realiz a la cepa
correspondiente de dicha fila.

Cuadro 1. Resultados en imgenes: prueba de catalasa.


Imagen 1. Prueba de catalasa: Imagen 2. Prueba de catalasa: S.
Escherichia coli. pyogenes

Presento burbuje por lo que se le Reaccin negativa de Streptococcus


atribuye a una reaccin positiva de E. coli pyogenes con perxido de hidrogeno.
con perxido de hidrogeno. No se observa efervescencia.

Imagen 3. Prueba de catalasa: S. Imagen 4. Prueba de catalasa: P.


aureus aeruginosa.

Presento burbuje por lo que se le Presento burbuje por lo que se le atribuye


atribuye a una reaccin positiva de a una reaccin positiva de Pseudomonas
Staphylococcus aureus con perxido de aeruginosa con perxido de hidrogeno.
hidrogeno.

Imagen 5. Prueba de catalasa: M. Imagen 6. Prueba de catalasa: K.


lysodeikticus. pneumoniae.

Presento burbuje por lo que se le Presento burbuje por lo que se le atribuye


atribuye a una reaccin positiva de a una reaccin positiva de Klebsiella
Micrococcus lysodeikticus con perxido de pneumoniae con perxido de hidrogeno.
hidrogeno.

Imagen 7. Prueba de catalasa: P. Imagen 8. Prueba de catalasa: B.


vulgaris. subtilis.

Presento burbuje por lo que se le


atribuye a una reaccin positiva de Presento burbuje por lo que se le atribuye
Proteus vulgaris con perxido de a una reaccin positiva de Bacillus subtilis
hidrogeno. con perxido de hidrogeno.

Imagen 9. Prueba de catalasa: C. Imagen 10. Prueba de catalasa: S.


equi. typhi.

Presento burbuje por lo que se le


atribuye a una reaccin positiva de Presento burbuje por lo que se le atribuye
Corynebacterium equi con perxido de a una reaccin positiva de Salmonella typhi
hidrogeno. con perxido de hidrogeno.

Imagen 11. Prueba de catalasa: M. phlei. Presento burbuje por lo que se le


atribuye a una reaccin positiva de Mycobacterium phlei con perxido de hidrogeno.

Cuadro 2. Imgenes: prueba de hemolisis.


Cepas problema.
Imagen 12. Streptococcus pyogenes : Imagen 13. Staphylococcus aureus:
Cultivo de S. pyogenes en Agar sangre. Cultivo de S. aureus en Agar sangre.

Produccin de hemlisis dentro de las 24 horas


de incubacin en medio de Agar sangre. No se observo hemolisis dentro de las 24 horas de
incubacin en medio de Agar sangre.

Cuadro 3. Imgenes: prueba de cuagulasa.


Cuagulasa ligada (prueba en Cuagulasa libre y ligada (prueba en
placa). tubo).
Imagen 14. Staphylococcus aureus: Imagen 15. Staphylococcus aureus:
contenido en placa de S. aureus con contenido en tubo de S. aureus con
plasma. plasma.

Prueba positiva, debido a la precipitacin de


Prueba positiva, debido a la precipitacin de cuagulasa libre y cuagulasa ligada.
la cuagulasa ligada.
Cuadro 4. Tincin de capsula.
Imagen 16. Klebsiella pneumoniae:
tincion de capsula por tecnica de
rojo congo.

En una tincin de Rojo Cong el gnero


Klebsiella se observa de la siguiente
manera: Bacilos cortos sin agrupacin
definida, con cpsula de color rojo.

Anlisis de resultados:

Las estructuras celulares as como la variedad de sustancias que


producen los microorganismos, les permite evadir algunos
mecanismos de defensa del husped. Es por ello que en la presente
practica se realizaron pruebas para la identificacin de sustancias que
confieren los mecanismos de patogenicidad y virulencia.

Catalasa.

La prueba de catalasa se realizo para cada una de las cepas que se


encuentran descritas en la tabla 1. Se reporto que la prueba es
positiva o negativa con base en la reaccin que se genero al agregar
perxido de hidrogeno a la muestra de cepa contenida en el
portaobjetos, es decir, si al agregar perxido de hidrogeno se observo
burbujeo o efervescencia se estableci como prueba positiva. Y si por
el contrario esta no presento dicha caracterstica se reporto como
prueba negativa (las reacciones de cada cepa, se pueden observar en el
cuadro 1).

Como se describe en la tabla 1 la cepa de Streptococcus pyogenes


dio resultado negativo a la prueba de catalasa, este dictamen puede
atribuirse a la nula produccin de la enzima catalasa como
mecanismo de defensa de dicha bacteria. Esto no hace referencia a
que la bacteria se encuentre desprotegida o no genere mecanismos
de defensa que le den un grado de patogenicidad y virulencia, si no
que produce otras enzimas que le confieran dichas caractersticas, tal
como la hialuronidasa.

En el caso de las bacterias que dieron como resultado catalasa


positiva, el burbujeo que presento al realizase la prueba, indica que
utiliza dicha enzima para desechar el perxido de hidrogeno que es
toxico para la bacteria, descomponindolo en agua y oxigeno.

Cuagulasa.

Se realizo prueba de cuagulasa (libre y ligada) con Staphylococcus


aureus. Se llevo a cabo de dos maneras diferentes; en tubo (para
determinar ambas cuagulasas) y en placa ( para determinar
cuagulasa ligada).

La determinacin de cuagulasa libre y ligada se evidencio mediante la


aparicin de un cogulo en el substrato empleado para la
identificacin (Se puede observar en el cuadro 3. Imagen 15.) que
consisti en plasma humano.

En cuanto a la determinacin en placa de la cuagulasa ligada,


constituyo una forma rpida de identificacin del S. aureus, puesto
que se observo aglutinacin en el sustrato( se puede observar en el
cuadro 3. Imagen 14.). A pesar de ser ms rpida, presenta
inconvenientes como: dar un resultado falso negativo o aparecer
resultados falsos positivos por no leerse rpidamente.

Hemolisis.

La prueba de hemolisis, se realizo con la finalidad de identificar en


Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus la produccin de
hemolisina, enzima que lisa a los eritrocitos. Por esta razn se utilizo
una placa de Agar sangre.

Para ambos microorganismos se esperaba una -hemolisis, esto


debido a que ambas bacterias se caracterizan por la produccin de
hemolisina. Mas sin embargo solo se observo -hemolisis en
Streptococcus pyogenes. El resultado obtenido no rechaza que S.
aureus produzca hemolisina, puesto que como se observa en el
cuadro 2. imagen 13, no se logro aislar de manera correcta dicho
microorganismo. Otra de las variables que posiblemente afecto la
prueba puede deberse a que no se punciono correctamente en una
parte del sembrado, por lo que no se observo hemolisis de ningn
tipo.

Capsula.

Dicho mtodo no se realizo el da que se llevo a cabo esta prctica,


puesto que se realizo con anterioridad. Se reporta en el presente
trabajo, debido a que la presencia de capsula en las bacterias, como
es en el caso de Klebsiella pneumoniae les confiere proteccin para
no ser fagocitadas, aportndoles de esta manera mecanismos de
patogenicidad y virulencia.

En la imagen 16 se puede observar una tincin por el mtodo de Rojo


Congo de Klebsiella pneumoniae (que se realizo en la prctica de
tinciones), en la cual se distinguen Capsulas de dicha bacteria.
aunque la definicin no es muy buena, la tonalidad roja es lo que
confiere de la capsula.

Conclusiones:

Las principales propiedades que tienen los microorganismos para


sobrevivir y multiplicarse es la produccin de enzimas que actan
extracelularmente, permitindoles de esta manera que se
establezcan dentro del husped con relativa facilidad.

La presencia de estructuras capsulares permite a los


microorganismos evitar la fagocitosis, facilitando de esta manera la
diseminacin de los microorganismos patgenos en el tejido.

Referencias:
Murray. Microbiologa medica. HARCOURT BRACE. Barcelona. 1997.
Levinson. Microbiologa e inmunologa medicas. Editorial El manual moderno, S.A. de
C.V. Mxico D.F. 1992.
Koneman, E. W. Diagnostico Microbiologico. 5 ed. Mxico. Editorial
Panamericana. 1999.