Isotretinona aumenta los niveles de

lipocalina asociada a gelatinasa de neutrfilos (NGAL)

en la superficie cutnea de pacientes tratados por acn severo

Antecedentes Existe una necesidad marcada por alternativas seguras y efectivas al uso de
isotretinona para tratar acn severo. La falta de especificidad en cuanto a su mecanismo de accin ha
obstaculizado el progreso en esta rea. Recientemente, la protena lipocalina asociada a gelatinasa de
neutrfilos (NGAL) ha sido identificada como un mediador del efecto apopttico de la isotretinoina
en sebocitos.
Mtodos Mtodos fueron desarrollados para aislar y cuantificar los niveles de NGAL en la superficie
cutnea de sujetos normales y de pacientes con acn en tratamiento con isotretinona.
Resultados Se encontr que los pacientes con acn tenan niveles cutneos de NGAL ms altos en
comparacin con sujetos normales. Estudios en sebocitos SEB-1 indican que la expresin de NGAL

est incrementada en respuesta a Propionibacterium acnes y la interleucina (IL)-1. En pacientes, la
isotretinona aumenta los niveles de NGAL entre 2 hasta 4 veces en la superficie de la piel, y este
aumento precede la disminucin de la cantidad de sebo y de P. acnes.
Conclusiones Esta informacin apoya la hiptesis de que NGAL es un importante mediador en los
efectos tempranos de la isotretinoina en las glndulas sebceas y aporta informacin sobre el
mecanismo que regula la expresin de NGAL en la piel.
__________________________________________________________________________________

El dramtico efecto de la isotretinona (cido 13-cis-retinoico, 13-cis RA) en acn fue un

descubrimiento fortuito hecho durante una investigacin sobre su uso en el tratamiento de la ictiosis.
El uso de 13-cis RA est asociado con serios efectos secundarios, como la teratogenicidad, lo que
impuls la regulacin de su uso por la Administracin de Alimentos y Medicamentos (FDA). Hay
pocos datos preclnicos disponibles acerca del mecanismo de accin del 13-cis RA. Estudios que
apuntan a dilucidar estos mecanismos son importantes debido a que ellos podran identificar nuevos
blancos para el desarrollo de drogas con un mayor margen de seguridad.

Estudios recientes demostraron que el 13-cis RA induce la apoptosis en sebocitos humanos tanto in
vitro como in vivo como parte del mecanismo por el cual reduce el sebo. Este efecto apopttico est
mediado en parte por la protena lipocalina asociada a gelatinasa de neutrfilos (NGAL). NGAL
tambin funciona en la respuesta inmune innata a bacterias gram-negativas. El gen que codifica para
NGAL, llamado lipocalina 2 (LCN 2), est altamente hiperactivo en la piel de pacientes a la semana
de la terapia con isotretinoina. pero no a las 8 semanas. Esta informacin sugiere que NGAL es
importante en la respuesta temprana del acn a la isotretinona. En este estudio, nosotros
desarrollamos mtodos para aislar NGAL de la superficie cutnea, y determinamos que NGAL est
aumentada de 2 a 4 veces en la piel de los pacientes dentro de 1 semana del comienzo del tratamiento
con isotretinona. El aumento de NGAL precede la disminucin de tanto el sebo como de
Propionibacterium acnes (P. acnes) observado con isotretinona. Adems, NGAL est aumentado en
la superficie cutnea de pacientes con acn comparado con sujetos normales y su expresin en
sebocitos est regulada por P. acnes y la interleucina (IL)-1. Esta informacin apoya la hiptesis que
NGAL es un mediador importante de la respuesta temprana a 13-cis RA, proveyendo un fundamento
para la investigacin de agentes que activen la expresin de NGAL en la piel como una potencial
alternativa teraputica a 13-cis RA para el tratamiento del acn. Tambin se provee de conocimientos
adicionales en cuanto a la regulacin de NGAL.

Materiales y mtodos

Estudios en humanos

Todos los protocolos fueron aprobados por el Comit de Revisin del Colegio Mdico Institucional de
la Universidad Estatal de Pennsylvania y fueron conducidos de acuerdo a la principios descritos en la
Declaracin de Helsinki. Todos los pacientes firmaron un consentimiento informado escrito antes de
ingresar al estudio.

Se reclutaron dos cohortes de pacientes. El objetivo del primer estudio de cohorte fue evaluar los
niveles de NGAL en la superficie de la frente. La cohorte de pacientes estaba compuesta de sujetos
(de 14 a 40 aos de edad) con o sin acn dispuestos a someterse a un procedimiento de extraccin de
bandas para medir los niveles de NGAL en la superficie de la frente. Los sujetos normales sin acn
fueron reclutados con avisos publicitarios. Los sujetos con acn fueron identificados por sus
correspondientes dermatlogos, y fueron referidos a personal del estudio para firmar el
consentimiento. Los sujetos se sometieron a un procedimiento con extraccin de bandas para la
recoleccin de protenas usando cintas standard D-squame (CuDerm, Dallas, TX, U.S.A.) como se
relata a continuacin: A tres reas de la piel de la frente (derecha, centro e izquierda) se les aplic
cuatro cintas por rea (12 en total). Protenas fueron extradas de las cintas combinadas de acuerdo al
protocolo publicado. Las cintas fueron incubadas por corto tiempo en un buffer alto en sales (10 mmol
L-1 Tris, pH 7,5, 140 mmol L-1 NaCl, 1,5 mol L-1 KCl, 5 mmol L-1 ethylenediamine tetraacetic acid,
0,5% Tween 20) para extr,r protenas y el concentrado en un buffer bajo en sales (10 mmol L-1 Tris,
pH 7,5). Las protenas fueron cuantificadas y analizadas en cuanto a sus niveles de NGAL usando el
ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas (ELISA).

El objetivo del segundo estudio de cohorte fue examinar la relacin temporal entre los cambios en los
niveles de NGAL, P. acnes y sebo en la superficie cutnea durante el tratamiento con isotretinona.
Los sujetos tenan entre 14 a 40 aos de edad, con acn severo o recalcitrante agendados para recibir
el tratamiento con isotretinona. Criterios de exclusin para la segunda cohorte fueron el uso de
antibiticos tpicos o perxido de benzolo en las dos semanas anteriores o antibiticos orales en el
ltimo mes. Los sujetos fueron identificados por sus dermatlogos, y fueron referidos a personal del
estudio para firmar el consentimiento. Los sujetos fueron examinados en el da 0 (referencia), a la
semana 1, 4 y 8 del inicio del tratamiento con isotretinona. En cada visita, los sujetos se sometieron a
recoleccin de protenas para obtener los niveles de NGAL, el conteo superficial de P. acnes y el
anlisis de los niveles de sebo en la superficie cutnea. Tres cintas fueron obtenidas de cada una de las
3 reas distintas de la frente (nueve tiras en total). Propionibacterium acnes fue aislada de la frente
usando una tcnica de fregamiento. Los niveles de sebo de la superficie cutnea de la frente fueron
evaluados usando un Sebumeter SM 810 (Courage & Khazaka, Colonia, Alemania). Los lpidos
superficiales fueron removidos brevemente con 0,1% Triton X-100 y una lectura fue tomada 1 hora
despus.
Inmunohistoqumica

Inmunohistoqumica fue hecha en secciones de piel humana fijada en formalina e incrustada en

parafina usando el mtodo del complejo avidinabiotina y el desarrollo de aminoetilcarbazol (,C)
(ABC kit and ,C substrate kit for Peroxidase; Vector Laboratories, Burlingame, CA, U.S.A.). Bloques
de parafina estuvieron disponibles debido a un estudio previo que compar lesiones de acn con piel
normal sacada de las espaldas de sujetos con acn. Las secciones de piel fueron sujetas a
desparafinacin, rehidratacin y recoleccin de antgenos con el buffer TRILOGY (Cell Marque,
Rocklin, CA, U.S.A.). Las secciones rehidratadas fueron incubadas por una noche con el anticuerpo
monoclonal de ratn a NGAL humano (Abcam Inc., Cambridge, MA, U.S.A.). Los controles
negativos fueron preparados con anticuerpos IgG1 normales de ratn (Santa Cruz Biotechnology, Inc.,
Santa Cruz, CA, U.S.A.). Secciones fueron contrateidas con hematoxilina usando procedimientos
estndar. Para la cuantificacin de NGAL, se us el Image Pro Plus Imaging Software version 3.0
(Media Cybernetics, Bethesda, MD, U.S.A.) para medir el rea de rojo (positiva para NGAL)
comparado con el rea total de glndula sebcea por cada paciente (n = 3). El rea de teido de
NGAL/El rea total de la glndula sebcea, excretmero y folculo adyacente fue calculada tanto en
los folculos comprometidos como no comprometidos de los pacientes con acn. Los folculos con
acn tambin fueron teidos con hematoxilina-eosina usando procedimientos estndar para confirmar
el diagnstico.

Cultivos celulares y tratamientos

La lnea del sebocito humano SEB-1 fue generada para transfeccin de sebocitos secundarios usando
el antgeno SV40 Large T y las clulas SEB-1 fueron cultivadas y mantenidas segn el protocolo
publicado. Las clulas SEB-1 fueron pasadas entre 20 y 26 veces cuando se encontraban entre un 50%
y 75% de confluencia en todos los experimentos.

Para determinar el efecto de P. acnes en la produccin de NGAL y IL-8, sebocitos SEB-1 fueron
tratados por 24 horas con un bao de P. acnes en un buffer fosfato en concentraciones de 3, 10, 30, 50,
100 lg mL-1, o con un vehculo de buffer fosfato como un control negativo. Las clulas SEB-1
tambin fueron tratadas con 50 ng mL-1 de IL-1B por 24 horas para modelar la potencial contribucin
de los monocitos a cambios en la expresin de NGAL. El total de lisados celulares de sebocitos
SEB-1 adherentes y del medio libre de clulas se recolectaron, se ultracongelaron en nitrgeno lquido
y fueron guardados a -80C hasta ser necesitados de nuevo. La concentracin proteica de cada muestra
fue determinada por el Ensayo de Protenas BCA (Pierce, Rockford, IL, U.S.A.). Los lisados celulares
y el medio fueron usados para los ELISAs de NGAL y IL-8 como se describe abajo. Los
experimentos se repitieron un mnimo de 3 veces. La informacin fue analizada mediante la prueba t
de Student y considerndolo significativa si P < 0,05.

Para los estudios de inhibicin de los receptores tipo Toll (TLR), los sebocitos SEB-1 fueron
pretratados con TLR2- o anticuerpos neutralizadores TLR4-, IgG2B de ratn (isotipo TLR2 de
control) o IgG de cabra (isotipo TLR4 de control) (R&D Systems, Minneapolis, MN, U.S.A.) o el
medio solo por 1 hora antes del tratamiento con 30 g mL-1 de bao de P. acnes. Los sebocitos
SEB-1, al ser controles, fueron tratados con anticuerpos neutralizantes de TLR individuales solos. Las
clulas SEB-1 fueron tratadas con concentraciones crecientes de lipopolisacrido (LPS) (1050 g
mL-1) como un control positivo para demostrar que la sealizacin de TLR4 queda intacta. Los
lisados celulares y el medio se recogieron y se analizaron sus contenidos de protenas, y ELISAs de
NGAL e IL-8. Los experimentos se repitieron un mnimo de tres veces. Los datos fueron analizados
con la prueba t de Student y se consideraron significativos si P < 0,05.

Comparacin de la expresin y secrecin de lipocalina asociada a gelatinasa de neutrfilos con

Propionibacterium acnes, interleucina-1B y el tratamiento con cido 13-cis-retinoico

Para probar la hiptesis de que 13-cis RA aumenta la expresin de NGAL en mayor cantidad
comparado con P. acnes y IL-1B, sebocitos SEB-1 fueron tratados por 48 horas con solo uno de los
siguientes: P. acnes (100 g mL-1), IL-1B (50 ng mL-1), una combinacin de P. acnes y IL-1B o
13-cis RA (1 mol L-1). Los lisados celulares y el medio fueron recolectados y analizados en cuanto a
su contenido de protenas y ELISA de NGAL. Los experimentos se repitieron un mnimo de tres
veces. Los datos fueron analizados con la prueba t de Student y se consideraron significativos si P <
0,05.

Ensayo inmunoenzimtico ligado a enzima para el anlisis de lipocalina asociada a gelatinasa de

neutrfilos e interleucina-8

ELISAs colorimtricos comerciales fueron usados para evaluar la concentracin de NGAL (R&D
Systems) en muestras de cintas humanas, lisados de clulas SEB-1 y el medio de cultivo; y la
concentracin de IL-8 (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) en lisados de SEB-1 y el medio. Por
cada ensayo, cantidades iguales de protena fueron usadas y las muestras fueron analizadas en
duplicado.

Resultados

Existe una relacin temporal entre la lipocalina asociada a gelatinasa de neutrfilos, la reduccin
de la produccin de sebo y la disminucin en la cantidad de Propionibacterium acnes en pacientes
tratados con cido 13-cis-retinoico

Para probar la hiptesis que el aumento de NGAL contribuye a la disminucin de sebo y P. acnes en
respuesta a isotretinoina, los niveles de NGAL, sebo y P. acnes fueron evaluados en distintas en varios
puntos de tiempo durante el tratamiento. Un total de 15 sujetos fueron inscritos en el segundo estudio
de cohortes. La secrecin de NGAL alcanz su punto mximo a la primera semana y despus se
estabiliz en las semanas 4 y 8 (Fig. 1a). Los niveles de sebo disminuyeron de manera considerable a
4 y 8 semanas del comienzo del tratamiento (Fig. 1b). Los cultivos de Propionibacterium acnes fueron
tomados de 9 de los 15 pacientes, ya que otros haban usado antimicrobianos. Aunque los niveles de
P. acnes eran altamente variables entre sujetos, una reduccin significativa fue observada a las 8
semanas del tratamiento con isotretinoina (P < 0,05) (Fig. 1c).

Pacientes con acn tienen mayores niveles de lipocalina asociada a gelatinasa de neutrfilos en la
superficie de la piel comparado con sujetos normales

Para probar la hiptesis de que la cantidad de NGAL est aumentada en la piel de sujetos con acn
comparado con sujetos normales, nosotros comparamos los niveles de NGAL en la superficie de la
piel de los 2 grupos. Los niveles de NGAL en la superficie de la piel eran considerablemente ms
altos en los sujetos con acn (n=15) comparado con los sujetos normales (n=15) (74 pg NGAL g-1
de protena total vs. 36 pg NGAL g-1 de protena total, respectivamente) (P = 0,028) (Fig. 2).

Utilizando bloques de tejido de un estudio previo, se compararon 10 lesiones de acn y de piel no

comprometida de individuos con acn con inmunoreactividad de NGAL en un esfuerzo para localizar
las reas donde la expresin de NGAL estaba aumentada. Se localiz y cuantific la
inmunoreactividad de NGAL con tincin positiva, registrndose como el porcentaje de glndulas
sebceas, conducto sebceo y porciones del folculo adyacente a los conductos sebceos que tenan
tincin positiva (Fig. 3). Aproximadamente 5,4% de los aparatos sebceos de las lesiones de acn
fueron teidos positivamente comparado con 0,4% en secciones comparables de piel no
comprometida de los mismos sujetos (Fig. 3). La tincin se localiza predominantemente en el folculo
adyacente al ducto sebceo donde P. acnes se localiza comnmente. Tomados en conjunto, estos
descubrimientos sugieren que NGAL est aumentado en la piel con acn, tanto en la superficie de la
frente como dentro del rea de la ducto sebceo.

Propionibacterium acnes y la interleucina (IL)-1B inducen la expresin y secrecin de la lipocalina

asociada a gelatinasa de neutrfilos y IL-8 en sebocitos SEB-1

El infiltrado inflamatorio en acn consiste de neutrfilos, monocitos y linfocitos. Los neutrfilos

secretan NGAL. Los monocitos secretan IL-1B lo cual puede regular la expresin de NGAL.
Propionibacterium acnes promueve la liberacin de citoquinas y de otros mediadores inflamatorios
desde monocitos y sebocitos y as gatillar respuestas innatas mediante la sealizacin TLR2. Nosotros
examinamos los efectos de P. acnes y IL-1B en la expresin de NGAL en sebocitos SEB-1 para
identificar factores que pudieran contribuir al aumento en los niveles de NGAL en la piel de sujetos
con acn. A las 24 horas, la estimulacin de sebocitos SEB-1 con P. acnes (100 g mL-1) increment
considerablemente los niveles tanto intra como extracelulares de NGAL comparado con el vehculo
con cambios de 2,7 (P = 0,004) y 5,8 (P = 0,019) veces la cantidad, respectivamente (Fig. 4a). En
presencia de IL-1B (50 ng mL-1), los niveles intra y extracelulares de NGAL aumentaron 8,7 veces
(P=0,023) y 4,2 veces (P=0,0004) comparado con el vehculo, respectivamente (Fig. 5a).

Los niveles extracelulares de IL-8 fueron usados como un control positivo para demostrar la
capacidad de respuesta de los SEB-1 tanto a P. acnes como a IL-1B. Aumentos significativos en la
cantidad de IL-8 fueron observados en los SEB-1 tratados con P. acnes y IL-1B (Figs 4b y 5b). Esta
informacin indica que los sebocitos SEB-1 expresan y secretan NGAL e IL-8 en respuesta a P. acnes
y IL-1B.

La induccin de lipocalina asociada a gelatinasa de neutrfilos e interleucina-8 por

Propionibacterium acnes est mediada por el receptor tipo Toll 2 en sebocitos SEB-1

La induccin de la expresin de NGAL e IL-8 en clulas SEB-1 tratadas con P. acnes fue bloqueada
neutralizando anticuerpos a TLR2 pero no a TLR4 (Fig. 6a, b). En presencia del anticuerpo
neutralizador de TLR2, la induccin de niveles extracelulares de NGAL por P. acnes disminuy desde
2,4 a 1,15 veces la cantidad (P=0,004) y los niveles intracelulares de NGAL disminuyeron desde 8,14
a 1,83 veces la cantidad (P=0,012). El pretratamiento con anticuerpos neutralizadores de TLR4 no
cambi significativamente los niveles intra o extracelulares de NGAL en respuesta a P. acnes (Fig.
6b). Esta informacin indica que la expresin de NGAL en respuesta a P. acnes est mediada por
sealizacin TLR2. Como control, los niveles de IL-8 inducidos por P. acnes tambin disminuyeron
en la presencia del anticuerpo inhibidor de TLR2, pero no en la presencia del anticuerpo TLR4. El
tratamiento de SEB-1 con LPS aument significativamente la cantidad de IL-8, verificando que la
sealizacin TLR4 est intacta en esta lnea celular.

Comparacin entre los niveles de lipocalina asociada a gelatinasa de neutrfilos en clulas SEB-1
tratadas con Propionibacterium acnes, interleucina-1B y cido 13-cis-retinoico

La informacin anterior indica que NGAL est aumentado en pacientes durante el tratamiento con
13-cis RA como tambin en los sebocitos SEB-1 tras estimulacin inmune con P. acnes y IL-1B (Figs
1, 4 and 5). Nosotros comparamos la magnitud de la induccin de NGAL en SEB-1 tras tratamiento
con 13-cis RA, P. acnes y IL-1B. La expresin intracelular de NGAL en SEB-1 aument
significativamente comparado con el control de todos los tratamientos (Fig. 7a). Entre los
tratamientos, la induccin de NGAL mediante 13-cis RA, IL-1B y con IL-1B + P. acnes fue
considerablemente mayor que la induccin con solo P. acnes (P=0,043, 0,026 y 0,022,
respectivamente). Al comparar niveles de NGAL secretados al medio, la combinacin de P. acnes y
IL-1B aument significativamente la secrecin de NGAL desde los sebocitos SEB-1 comparado con
otros tratamientos. La secrecin de NGAL fue 5,6 veces mayor con la combinacin, comparado con
13-cis RA (P = 0,0003); 2,9 veces mayor que con IL-1B solo (P = 0,0005); y 6,3 veces mayor que con
P. acnes solo (P = 0,0004) (Fig. 7b). La secrecin de NGAL con IL-1B fue 1,9 veces mayor que la
secrecin inducida por 13-cis RA (P = 0,0015). No hubo diferencia significativa en la secrecin de
NGAL en clulas tratadas con P. acnes o 13-cis RA (P = 0,9).

Discusin

La isotretinona reduce la produccin de sebo tan pronto como dos semanas despus de comenzado el
tratamiento. Esta observacin implica que el medicamento ejerce un efecto rpido y poderoso,
inhibiendo la produccin de sebo. Estudios recientes que tienen como objetivo determinar el
mecanismo por el cual esto ocurre indican que la apoptosis ocurre dentro de las glndulas sebceas de
pacientes tratados con isotretinona tan temprano como 1 semana desde el comienzo del tratamiento.
El anlisis de expresin de genes en serie de la piel de pacientes indic que LCN2 (el cual codifica
para NGAL) est entre los genes ms hiperactivos en la primera semana pero no a las 8 semanas del
tratamiento con isotretinona. Adems, el tratamiento de sebocitos SEB-1 con NGAL induce la
apoptosis y la inmunoreactividad de NGAL se co-localiza dentro de reas de apoptosis en las
glndulas sebceas de los pacientes. Tomados en conjunto, esta informacin apoya la hiptesis de que
NGAL en parte media el efecto temprano de isotretinona en las glndulas sebceas.

En este trabajo, nosotros proveemos informacin adicional apoyando la relevancia clnica de NGAL
como un mediador de los efectos temprano de isotretinoina. Este es el primer estudio que reporta que
la protena NGAL est aumentada en la piel de los sujetos durante el tratamiento con isotretinoina y
que este aumento de NGAL precede la disminucin tanto en la cantidad de sebo como de P. acnes en
pacientes tratados con isotretinoina. Esta informacion sugiere una relacin temporal donde un
aumento en NGAL gatilla la apoptosis de sebocitos, provocando una reduccin en la produccin de
sebo y de los niveles de P. acnes.
El mecanismo especfico por el cual NGAL induce la apoptosis en sebocitos an no se ha
determinado. NGAL induce apoptosis en otras lneas celular al unir siderforos y cambiando los
niveles intracelulares de hierro. Recientemente, siderforos de mamferos (catecoles y derivados del
cido benzico) han sido identificados y se planteado que podran unirse a NGAL e inducir apoptosis
a travs de cambios en hierro intracelular.

NGAL funciona como una defensa del sistema inmune innato contra bacterias gram negativas
productoras de siderforos. Nuestros estudios son los primeros en reportar que NGAL est aumentado
en la piel de sujetos con acn comparado con sujetos normales y que este aumento est
especficamente localizado en los excretmeros sebceos de las lesiones de acn, reas adyacentes a la
localizacin de P. acnes en el folculo. Nuestros estudios in vitro son los primeros en reportar que P.
acnes induce la expresin de NGAL a travs de la sealizacin TLR2. Propionibacterium acnes es
capaz de inducir otras protenas antimicrobianas tal como catelicidinas, beta-defensina 2 y protenas
S100 incluyendo S100A7. Interesantemente, estas protenas, tal como NGAL, estn aumentadas en
psoriasis, una condicin que no est frecuentemente asociada con infecciones a la piel. Catelicidinas
muestran actividad antimicrobiana contra P. acnes. Estudios en nuestro laboratorio no pudieron
demostrar el efecto antibacterial de NGAL contra P. acnes (informacin no mostrada). Esta
informacin apoya la hiptesis que la disminucin de P. acnes durante el tratamiento con 13-cis RA
es secundaria a la disminucin en sebo, una fuente de nutrientes para este organismo.

La isotretinona es un tratamiento efectivo para la foliculitis gram-negativa. No se conoce el

mecanismo de accin de la isotretinoina en la foliculitis gram-negativa. Durante y despus del
tratamiento con isotretinona, los niveles de bacterias gram-negativas disminuyeron en la superficie de
la piel y en los orificios nasales anteriores. Aunque no fue abordado en este estudio, nuestra
informacin apoya la hiptesis que la isotretinoina lleva a la reduccin en bacterias gram-negativas al
aumentar los niveles de NGAL de la piel.

Poco se sabe de la regulacin de la expresin de NGAL en la piel. NGAL es inducido por retinoides,
citoquinas incluyendo IL-1 y IL-9, como tambin TLR2 y 4 sealizando en distintos tipos de clula.
Para entender la contribucin de diferentes caminos de sealizacin, nosotros comparamos la
induccin de NGAL por P. acnes (sealizacin TLR2), 13-cis RA y IL-1b (para modelar la potencial
contribucin de los monocitos) en sebocitos humanos. Nuestra hiptesis fue que la expresin de
NGAL sera mayor con el tratamiento con 13-cis RA comparado con el tratamiento con P. acnes
basado en los descubrimientos clnicos que los niveles de NGAL en la superficie cutnea eran mucho
ms altos en pacientes con acn durante su tratamiento con 13-cis RA comparado con su cantidad de
referencia. Nuestros datos in vitro de sebocitos apoyan esta hiptesis y sugieren que la produccin de
citoquinas como IL-1b de otros tipos celulares podran aumentar la produccin de NGAL en la piel de
pacientes con acn. Desde un punto de vista clnico, sin embargo, la administracin de 13-cis RA
aumenta extraordinariamente NGAL, a un nivel donde la apoptosis es inducida en las glndulas
sebceas y donde las bacterias gram-negativas son inhibidas en la superficie de la piel. No obstante,
estudios actuales no eliminan la posibilidad de que otros mediadores puedan actuar simultneamente
con NGAL para gatillar estos efectos teraputicos.

En resumen, la informacin clnica presentada apoya la hiptesis de que NGAL es un importante

mediador de los efectos tempranos de la isotretinoina sobre el acn y sugieren que estrategias para
activar NGAL en la piel pueden representar alternativas teraputicas al uso de isotretinoina en acn.
Nosotros demostramos que la isotretinoina aumenta los niveles de NGAL en la superficie cutnea y
que existe una relacin temporal entre la secrecin aumentada de NGAL, la secrecin disminuida de
sebo y la cantidad reducida de P. acnes durante la terapia con isotretinoina. NGAL est aumentada en
la superficie de la piel de los pacientes con acn y P. acnes induce expresin de NGAL por
sealizacin TLR2. La induccin de NGAL por isotretinoina, combinado con la conocida eficacia de
esta droga en foliculitis gram-negativa puede proporcionar un fundamento para estudios adicionales
acerca del rol de NGAL en la defensa inmune innata de la piel.