29/04/2015

Conceptos generales
Biologa Molecular
Universidad del Tolima
Alelos (Silvestres)
Mutaciones (Cambios de novo)
Mutacin hacia adelante (Mutantes) y reversin de
mutacin (Silvestre)
Retromutacin
Mutaciones supresoras: Suprimen el efecto de una
mutacin hacia adelante mimetizando el fenotipo
silvestre
Mutantes morfolgicos* y qumicos:
Prottrofos: surgen en en medios mnimos
Auxtrofos: viven en medios enriquecidos y no en
mnimos

Deteccin de mutantes auxtrofos hongo s Deteccin de mutantes auxtrofos

(Beadle 1946) (Davis Lederberg y Zinder 1948)
UV

Aislamiento de Auxtrofas con tcnica de enriquecimiento por

Deteccin de Auttrofos por filtrado penicilina

Las mutaciones son azarosas o tienen

Casos de mutaciones un patrn? (TEST de fluctuacin)
Mutantes de resistencia a patgenos en plantas cultivadas Incubacin de E-coli con Fago T1 Si la mutacin se genera
consecuencia del
contacto, esperamos
La resistencia biolgica es la mejor lucha contra patrones.
patgenos y la forma de obtener plantas cultivadas Si la mutacin es a azar
resistentes a enfermedades. Introduccin de genes de esperamos mucha
resistencia a cultivares de alta productividad. variacin.

Los resultados apoyan

Las mutaciones pueden afectar la viabilidad o fertilidad la hiptesis que la
mutacin ocurre al azar,
del organismo_ Mutantes letales, en haploides las bacterias tomadas
desaparece una vez se presenta, en diploides se de distintos cultivos se
mantienen en organismos portadores. Letalidad comportan de manera
distinta pese a tener el
condicional dependiendo del ambiente mismo contacto con el
fago

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Las mutaciones son inducidas o preexistentes

El cambio gentico puede ser causado por varios procesos:

Tetraciclina o T1
Mutacin gnica

Recombinacin

Medio con tetraciclina

Elementos genticos transponibles

Si las bacterias resistentes estaban presentes ya en la placa inicial de la que se tomaron las Reorganizacin cromosmica
bacterias con el terciopelo y se hicieron replicas antes de que las bacterias se pusieran en
contacto con el antibitico. Si fuera la tetraciclina la inductora de mutaciones los patrones
serian diferentes.

SECUENCIACIN DEL ADN

1970

Molcula sumamente estable

Se replica con una precisin asombrosa

Se denomina Mutacin a todo cambio permanente ocurrido en

la secuencias de bases de ADN de un organismo.

Transmisibles por herencia

Microsatelites

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Tienen efectos perjudiciales y son la fuente de muchas enfermedades y

trastornos humanos.

Alteracin Mutacin Cromosoma

Sndrome de Angelman retraso en el desarrollo 15
Materia prima de la Daltonismo
dificultad para distinguir los
X
Son fuente de variacin gentica EVOLUCIN colores
Sndrome de Down discapacidad cognitiva 21
Sndrome de Edwards malformacin general 18
efecto o abertura en una o
Espina bfida 1
ms vrtebras
incapacidad de metabolizar
Fenilcetonuria el aminocido tirosina a
partir de fenilalanina
enfermedad pulmonar
Fibrosis qustica 7
crnica
la buena coagulacin de la
Hemofilia X
sangre
defecto en la sntesis de
Sndrome de Ehlers-Danlos 152
colgeno
Anlisis genticos son posibles gracias a Sndrome de Klinefelter hipogonadismo X
mutaciones que proporcionan alternativas ausencia de cromosomas X
sexuales la ausencia del
allicas a los fenmenos que se requiere segundo cromosoma X
Sndrome de Turner
investigar determina la falta de desarrollo
de los caracteres sexuales
primarios y secundarios.C

Ocurren a organismos en condiciones

ambientales normales o en
microorganismos en condiciones
normales de cultivo. Principalmente
por errores en la replicacin,
Lesiones espontaneas y
elementos genticos En clulas somticas, las cuales solo Ocurre en las clulas
transponibles. transmiten la mutacin a las clulas germinales. La mutacin se
hijas durante la mitosis con cambios hereda.
que no son heredables.

Ocurren bajo condiciones especificas,

en las que interviene un agente
mutagnico determinado, el cual
acelera la tasa espontnea de
mutacin.
Aunque no son hereditarias, son Responsable de las enfermedades
importantes porque pueden dar hereditarias, nuevas lneas germinales
origen a tumores o productivas

Es importante tener en cuenta que cierta cantidad de mutaciones se

generan al azar y que cualquier regin del genoma tiene el mismo
riesgo de sufrirlas.

Sin embargo, aquellas que se ubican en la regin codificante del ADN

son las que producen consecuencias negativas o positivas sobre la
funcin de las protena que se expres.

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Microlesiones

Macrolesiones
Son las mutaciones que alteran la secuencia de nucletidos del ADN

Afectan un solo gen

Existen varias formas de clasificar las mutaciones gnicas.

Normal

Algunos esquemas de clasificacin se basan sobre la

naturaleza del efecto morfolgico.
Sustitucin Cambio de una base
por otra
Otros sobre el agente causante de la mutacin.

Otras se centran en la naturaleza funcional. Insercin Seala la adicin de

uno o ms nucletidos

Delecin
Seala la perdida de uno
o ms nucletidos

Puntuales: afecta una nica base, es decir un par de bases

Mutaciones deacuerdo a la localizacin: complementarias.

Normal

Es el tipo de mutacin gnica mas simple

Consiste en un error en la estructura qumica de una base, lo que determina

que al replicarse el ADN, en vez de incorporarse la base complementaria
correcta, se incorpore una diferente.

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Las mutaciones puntuales son sustituciones de bases y a su vez se

clasifican en:

Transiciones: se reemplaza una purina por otra diferente o,

alternativamente, una pirimidina por otra pirimidina. Suceden cuando
un agente reactivo altera los tomos de hidrgeno de las bases
cambiando su especificidad para formar puentes de hidrgeno
Menor
presin de
G/C A/T
oxigeno

Transversiones: una purina es reemplazada por una pirimidina o una

pirimidina es reemplazada por una purina Hemoglobina:
Transporta el oxigeno
A/T C/G

Enfermedad autosmica recesiva

Caso clnico particular De extensin variable o segmentaria: cuando pueden afectar ms
de una base, pueden ser deleciones, inserciones o extensiones de
repeticiones de tripletes.

Las extensiones de repeticiones de tripletes son la causa de enfermedades

hereditarias, en especial de herencia dominante:

En regiones donde el paludismo

o malaria era o es un problema, los
individuos que heredan un solo alelo de
la hemoglobina S -y que por tanto son
portadores del rasgo de la clula
falciforme- tienen una ventaja para
sobrevivir; a diferencia de los individuos
con genes de hemoglobina normales
La mutacin que origina el sndrome afecta a una regin del cromosoma X en la que se
sita el gen FMR-1. La expansin del trinucletido tiene lugar en la regin reguladora del gen
siendo este trinucletido CGG (Citosina-Guanina-Guanina). Cuando el nmero de repeticiones
supera el valor umbral de 230 repeticiones se produce la metilacin del gen y, por tanto,
ste pierde su funcin, produciendo as el sndrome del X frgil.

Tripletes que codifican para el mismo aminocido:

Mutacin silenciosa
Mutacin cambio de sentido
Mutacin sin sentido
Adicin o delecin de un nico par de nucletidos o de
Mutacin cambio de fase o
pauta de lectura
AAG(arg)CGG(arg)
Aparece un nuevo triplete que codifica para un
aminocido de distinto tipo. La protena pierde su
funcin.
Aparece un triplete de terminacin o FIN:
CAG(gln)UAG(FIN)
varios pares de nucletidos, siempre que no sean
mltiplo de tres.

RNA In DNA:
UAG ("amber") TAG ("amber")
UAA ("ochre") TAA ("ochre")
UGA ("opal") TGA ("opal" or "umber")

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Se dice que la sntesis de ADN es extraordinariamente fiel si se considera que en el desarrollo

total de un ser humano se producen unas 105 divisiones celulares, y en cada divisin se debe
replicar el genoma humano de 3x109 bases y si se cometiera un solo error en un milln de
bases, habra 3000 errores por divisin celular y 1018 errores en el desarrollo humano, lo cual
es absolutamente inviable.

La realidad muestra que el nivel de error por divisin es de 0,33 (1 en 1010 bases), o sea una
sola base errnea cada tres divisiones celulares.

Colocacin de bases incorrectas durante la sntesis

Apareamientos errneos (cambios tautomricos y ionizacin de bases)

La tasa de mutacin espontanea del bacterifago T4 es 10-7/base por replicacin

La tasa de mutacin espontanea en Drosophila melanogaster es 10-10/base por replicacin

BASES NITROGENADAS
Poseen un acusado carcter aromtico, siendo su conformacin espacial planar o casi
planar.
Tautmeros: se denomina as, a dos ismeros que se diferencian slo
en la posicin de un grupo funcional y en los enlaces que se forman
entre ellos.

Los cambios tautmericos mas conocidos son el de la forma ceto a

GUANINA la forma enol
ADENINA PM: 151.13
PM: 135.13

Timina Uracilo
Citocina 126.12 112.09
111.10

NUCLETIDOS ILEGTIMOS
Forma Ceto a Enol
El de la forma amino a la forma imino

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Acople preciso entre bases

Erwin Chargaff (1905-2002)

Mutaciones de cambio de fase o pauta de lectura:

El estado tautomrico es solo por cortos perodos de tiempo.
Modelo de Streisinger
Los cambios tautmericos provocan la sustitucin de un nucletido
por otro. Nueva
Molde

Cuando se cambia una purina por otra purina se puede dar:

Transicin:

T --- A (normal) T* --- G (transicin)

C --- G normal C* --- A transicin

Ocurren en regiones repetidas

Transversin:
En las regiones con secuencias repetidas, por ejemplo, TTTTTTTTTT..., o por ejemplo, GCGCGCGCGCGCG....,
T --- A (normal) T* --- C (transvercin)
durante la replicacin se puede producir el deslizamiento de una de las dos hlices (la hlice molde o la de nueva
C --- G C* --- T sntesis) dando lugar a lo que se llama "apareamiento errneo deslizado".

El deslizamiento de la hlice de nueva sntesis da lugar a una adicin, mientras que el deslizamiento de la hlice molde
origina una delecin.

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Mutaciones de cambio de fase (Ejemplo)

Delecin en el gen lac
Puntos calientes mutacionales del gen LacI de E-coli En el gen lac I (gen estructural de la protena represora) de E. coli se han encontrado
puntos calientes (regiones en las que la mutacin es muy frecuente) que coinciden con
Jeffrey Miller hot points mutations secuencias repetidas: un ejemplo es el punto caliente CTGG CTGG CTGG.

---GTCTGG CTGG CTGG CTGG C

FS5, FS25, FS45, FS65

Silvestre 5----GTCTGG CTGG CTGG C3

FS2, FS84
GTCTGG CTGGC C

El modelo de Streisinger predice que la frecuencia de un cambio de fase particular

depende del nmero de pares de bases que se puedan formar durante un
emparejamiento errneo

Mutaciones puntuales 140 sucesos

Nmero de aa.

Deleciones
Deleciones grandes, de mas de unos pocos pares de bases,
representan una fraccin considerable de las mutaciones
espontaneas.

Deleciones de hasta varios miles de pares de bases.

Recuadros rojos= reversiones de mutacin rpida

La mayora de estas mutaciones ocurre en secuencias repetidas. Amarillo son deleciones
Circulos(Rojos) duplicacin de 88 pb=S28
Mut. S114 y S58 son resultados de insersiones de EGT

Es la ms comn de las lesiones espontneas. Implica la

Lesiones espontaneas con interrupcin del enlace glicosdico entre la base y la desoxirribosa, y la
ALTERACION DE UNA SOLA BASE prdida posterior de un residuo de G A del ADN.

Depurinacin
Desaminacin de A a Hx
Azcar despurinado
Desaminacin de C a U (A)

Alquilacin de las bases Una clula de un

mamfero pierde de forma
Insercin o supresin de espontnea alrededor de
nucletidos 10000 purinas en su ADN
durante un tiempo de
Incorporacin de anlogos de generacin de 20 horas a
bases 37C

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La desaminacin de ciertos residuos de Citocina eran la causa un tipo de punto

caliente mutacional.

Microlesiones La nica base metilada del

DNA de los eucariotas es la
PUNTO CALIENTE 5-metilcitocina

MUTACIONAL Se observa en los residuos de C

contiguos al extremo 5 de residuos de
G. 5-CpG-3 (Animales)
Macrolesiones En plantas CpNpGp donde N
(Cualquier)

La clula garantiza que tanto la cadena

madre como la hija estn metiladas

La desaminacin afectan la reparacin del DNA

Identifica el error de U
al ser RNA

El metabolismo aerobio genera, como subproducto ciertas especies de

activas del oxigeno, como radicales superxido, perxido de hidrogeno
y radicales OH.
Glucosilasa de
Uracilo Empareja con frecuencia errneamente con
Bloquea la replicacin del DNA si A, produciendo transversiones G T
no se repara

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Deleciones y duplicaciones asociadas con enfermedades Expansin del triplete CGG del gen FMR-1 sindrome X frgil

Sindrome de Kearns Sayre

parlisis de los msculos oculares que
disminuye los movimientos del ojo causando

Delecin de entre 1000-10000 pares de bases

en el ADN mitocondrial
Disfuncin en la fosforilacin oxidativa (uma
disfuncin de las mitocondrias )
Los pacientes muestran metilacin inducida
por la mutacin en una agrupacin CpG que
da lugar a una reduccin en la expresin de
FMR-1

expansin del triplete CGG del gen FMR-1 sindrome X

frgil

Mecanismo:
Emparejamientos errneos
durante la sntesis de DNA

La maquinaria de replicacin
no puede ser fiel, variaciones
constantes.

trastorno hereditario que ocasiona retraso mental

Mutaciones debidas a repeticiones dispersas

Reordenamientos cromosmicos

sobrecruzamiento desigual en seq repetidas

Esquema de la translocacin entre los cromosomas X e Y por un

sobrecruzamiento desigual entre secuencias muy homlogas
Modificaciones en la estructura de los cromosomas, afectan el (aunque no idnticas) en ambos cromosomas.

orden o al nmero de los genes dentro de un cromosoma

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Duplicacin
Delecin

Prdida de un segmento de cromosoma

Un segmento de cromosoma se repite

D
C

Inversin Translocacin

Un segmento de cromosoma se rompe y gira 180 : entre cromosomas homlogos

: entre dos cromosomas no homlogos, consisten en el cambio de lugar

de un segmento de cromosoma

Adiciones o deleciones de grandes Alteracin transmitida a

trozos de DNA, se generan por: las nuevas generaciones
Apareamientos errneos en la

Mutaciones genmicas
meiosis:
Desplazamiento de bloques de
secuencia.
Sobrecruzamiento:
Cromosoma con bloque de ms
Cromosoma con bloque de
menos

Son las mutaciones que afectan al nmero de cromosomas o Son las mutaciones que afectan a un nmero de determinado cromosoma o
todo el complemento cromosmico (todo el genoma). ms, pero sin llegar a afectar al juego completo.

Las aneuploidas pueden ser:

Monosomas
Poliploida: Es la mutacin que consiste en el aumento del nmero normal Trisomas
de juegos de cromosomas Tetrasomas

Haploida: Son las mutaciones que provocan una disminucin en el nmero
de juegos de cromosomas.
Trisoma 21 o Sndrome de Down que tienen 47 cromosomas.
Trisoma 18 o Sndrome de Edwards. Tambin tienen 47 cromosomas.
Monosoma X o Sndrome de Turner.
Trisoma sexual XXX o Sndrome del triple X.
Trisoma sexual XXY o Sndrome de Klinefelter.
Trisoma sexual XYY o Sndrome del doble Y.
Cromosoma extra Sndrome de Down.

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ESPEFICIDAD DE LOS MUTAGENOS en 36 sitios del gen lacI

para tres mutagenos EMS, UV y aflatoxina
Mutaciones que dan
lugar a la terminacin
de la traduccin
UAG

MUTACIONES
INDUCIDAS metanosulfonato de etilo EMS

Cada mutageno favorece una categoria de sustitucin especfica.

UV y EMS = GC---AT (Transiciones)
Aflatoxina= GCTA (Transversiones)

Hay grandes diferencia en la tasa de mutacin aun dentro de la

misma categoria. Puntos calientes

Mutgenos qumicos

Agentes alquilantes
Anlogos de base
Agentes intercalantes

Radiaciones:

Ionizantes y no ionizantes

Charlotte Auerbach (1942) demostr que el gas mostaza, utilizado como arma qumica
durante la segunda Guerra Mundial, es mutagnico. Aade grupos metilo (CH3) o etilo(CH2-
CH3) en las bases nitrogenadas del DNA

Los mutgenos pueden inducir mutaciones por diferentes

mecanismos:

Reemplazo de una base por otra en el ADN.

El primer mutgeno qumico que se descubri
fue el gas mostaza. Alterar una base de modo que se empareje errneamente de
forma especfica con otra base.

Los mutgenos qumicos son capaces de modificar los nucletidos: Daar una base

Cambios tautomericos
Desaminaciones
Aadiendo radicales como metilo, etilo, etc.

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5-bromurouracilo

Son compuestos qumicos suficientemente parecidos a las bases Es un anlogo de la timina, cuando se encuentra en su forma cetnica se
comporta como tal y se enlaza con una adenina
nitrogenadas normales del DNA

Cuando se encuentra en su forma enlica provoca una mutacin por que se

enlaza con una guanina
Ocasionalmente, se incorporan al ADN en lugar de las bases normales.

Una vez en su sitio tienen propiedades de emparejamiento distintas de

aquellas a las que han sustituido, de este modo, causan mutaciones

El anlogo de base original slo estn en una cadena sencilla pero

puede provocar el cambio de un par de nucletidos que se replica en
todas las copias de ADN descendientes de la cadena original. FORMA IONIZADA
En lugar Ch3 de T

2-aminopurina (Anlogo de la A)

Normalmente la 2-aminopurina forma un par de bases con la timina

Pero a veces forma un par de bases con la citosina

Induccin de cambio de AT-GC

Agentes alquilantes
EMS (etil-metano-sulfonato)
Junto con la luz ultravioleta son Aaden grupos alquilo
los sistemas mutagnicos ms
potentes para aplicaciones
prcticas: NG (nitrosoguanidina)

Algunos mutgenos no se incorporan al DNA,

sino que en su lugar alteran una base,
provocando un emparejamiento errneo
especfico
Transiciones

Etil metano sulfonato (EMS)

Metil metano sulfonato (MMS)

Dietil sulfato (DES)

Diepoxi butano (DEB)

N-metil-N-nitro-N-nitrosoguanidina (NTG)

N-metil-N-nitroso urea
Gas mostaza.

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Mutgenos qumicos:
Existen una serie de agentes qumicos que reaccionan
directamente sobre el DNA que no se est replicando ocasionando
cambios qumicos en las bases lo que provoca un apareamiento
incorrecto.

Acido nitroso (HNO2): Potente agente mutagnico que

produce cambios directos del grupo amino por ceto.
Desamina la adenina a hipoxantina

N-4-hidroxicitosina ADENINA

HNO3

Transiciones G-C A-T Hipoxantina (Hx)

Otro tipo de mutgenos qumicos son los AGENTES INTERCALANTES

Son llamados as por su capacidad de introducirse entre las bases

nitrogenadas de una doble cadena de ADN.

Los 3 anillos planos se Producen

colocan entre las bases dobleces en le Inserciones
desplazndolas hebra Deleciones
ligeramente.

Los agentes intercalantes ms conocidos y usados son el naranja de acridina y el

bromuro de etidio.

Bromuro de etidio
Naranja de acridina

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Daos estructurales en las bases

Un gran numero de mgatenos daan una o mas bases
Estas molculas tienen tres anillos de dimensiones muy imposibilitando el emparejamiento especfico entre las bases.
similares a un par de bases completo. Genera bloqueo en la replicacin del DNA.

La forma y tamao de estas molculas facilita su ubicacin

entre dos pares de bases, desplazndolas ligeramente.

Estos compuestos producen dobleces en la hebra y por lo

tanto adiciones y deleciones cuando estas se replican. SISTEMA ESPECIAL DE REPARACIN SOS

Induce una respuesta de emergencia para impedir la muerte celular

Complejo de enzimas que interacta con la pol III provocando la

relajacin de su normalmente estricta especificidad y permitiendo la
replicacin mas all de las lesiones.

Reparacin por el sistema SOS

(Interacta con el complejo de replicacin de la Pol III relajndola)

recA (Tambien implicado en la recombinacin) Las radiaciones son formas de energa que se emiten bsicamente de
Actores umuC
dos maneras:
umuD

Particuladas
FOTODMERO
Electromagnticas
Requerida por la accin de
Carcingenos (UV, Aflatoina A su vez, pueden dividirse en:
B1 Benzo(a) pireno)

Ionizantes

No ionizantes

Radiacin ionizante (Ruptura de cadenas) Tipo de radiacin ionizante

Las radiaciones ionizantes son aquellas capaces de arrancar un electrn de su Las radiaciones naturales: proceden de radioisotopos que se encuentran
rbita dejando el tomo ionizado positivamente. Las radiaciones pueden ser presentes en el aire (como por ejemplo el 222Rn radon el 14C), el cuerpo humano
electromagnticas (rayos X y rayos gamma) o de partculas. (p. ej. el 14C o el 235Uranio), los alimentos (p. ej. el 24Na o el 238Uranio), la corteza
terrestre (y por tanto las rocas y los materiales de construccin obtenidos de
As, cuando la radiacin stas, como el 40K), o del espacio espectro electromagntico.
colisiona al azar con tomos y
molculas al atravesar clulas
Las radiaciones artificiales: aparatos utilizados en radiologa, reactores
vivas, da lugar a iones y
nucleares o aceleradores
radicales
libres que rompen los enlaces
qumicos y provoca otros
cambios
moleculares que daan las
clulas afectadas.

FASE ACUOSA, RADICALES

PERXIDO

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Electromagntica: este tipo de radiacin esta formada por fotones con

energa suficiente como para ionizar la materia (es decir, superior a unas
decenas de electrovoltios. Segn su origen y su energa se clasifican en rayos X y
Rayos Gamma.

Corpuscular: incluye a las partculas alfa(ncleos de Helio), beta (electrones y

positrones de alta energa),protones, neutrones y otras partculas que slo se
producen por los rayos csmicos o en aceleradores de muy alta energa, como
los piones o los muones.

Los rayos gamma poseen el mayor nivel de energa conocido, en el espectro

electromagntico.

El primer mutgeno conocido fue los rayos X comprobando que la exposicin

de rayos X aumentaba las mutaciones en Drosophila.
Luego se comprob que todas las radiaciones ionizantes eran agentes
Los efectos biolgicos a largo plazo ms frecuentes son la induccin de
mutagnicos. leucemias u otro tipo de cncer, formacin de cataratas y acortamiento
de la vida.
La accin de las radiaciones consiste en el desplazamiento de electrones,
quedando los tomos ionizados, estos son capaces de producir radicales libres
que producen transformaciones qumicas en las molculas.
Los efectos hereditarios de la radiacin, provienen de las mutaciones
inducidas en las clulas germinales.
Causa rotura del enlace N-glucosdico, induciendo a la formacin de sitios
apurnicos y rotura de las cadenas de DNA.
La mayora de los daos genticos pueden resultar de la irradiacin
Produce especies fetal, principalmente en las etapas tempranas del embarazo.
de oxigeno
reactivo (OH, O-2
y H2O2) Una gran variedad de efectos en las extremidades presentados en el
nacimiento, se asocian con radiaciones ionizantes.

Es importante resaltar que las alteraciones genticas no necesariamente

se manifiestan en la primera generacin

Las capacidades de penetracin de las partculas o rayos son

proporcionales a sus energas.

Las partculas alfa tienen baja capacidad de penetracin y no pueden daar

o penetrar la piel. Sin embargo pueden daar los tejidos internos sensibles
El metabolismo aerobio genera, como subproducto ciertas especies de
en caso de que sean inhaladas. activas del oxigeno, como radicales superxido, perxido de hidrogeno
y radicales OH.
Los rayos gamma de alta energa tienen gran poder de penetracin y Empareja con frecuencia errneamente con
Bloquea la replicacin del DNA si
daan gravemente tanto la piel como los rganos internos. A, produciendo transversiones G T
no se repara

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Radiacin ionizante genera sitios apurnicos (FUERTE CANCERIGNO) BENZO(a) PIRENO (FUERTE CANCERIGNO)
Producido por motores de combustin interna

INDUCE TRANSVERSIONES GC---TA

REQUIERE CORRECCIN SOS QUE GENERA

A FRENTE AL SITIO APURNICO

Las radiaciones no ionizantes son las que, al incidir sobre la materia

biolgica, no poseen suficiente energa para provocar una ionizacin.

Sin embargo pueden causar otros efectos, bsicamente trmicos y

fotoqumicos. Pueden encontrarse diferentes tipos: Ultravioleta, luz
visible, infrarroja, microondas y radiofrecuencias y lser. Actuan
produciendo, como mucho, excitaciones electrnicas.

La radiacin de microondas

La infrarroja

La luz visible

La ultravioleta

Es un tipo de radiacin no ionizante que produce mutaciones.

Los nucletidos absorben esta radiacin a una longitud de onda de

260nm, y el ADN puede ser modificado.

Su efecto consiste en la formacin de dmeros de pirimidina

(principalmente timinas).

Los dmeros producen un doblez en la hebra e impide la replicacin

a partir de ese punto.

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Los mgatenos que daan sitios

de emparejamiento especfico de
bases dependen del sistema SOS

Mutagnesis dirigida:
Tecnologa DNA recombinante mutagnesis dirigida
sobre el gen concreto que el investigador est interesado en
estudiar.
Gen + plasmido plasmido recombinante EcoR I
Traduccin de ruptura:
La DNA POL I con la actividad exonucleasa
(Corrige) alarga la rotura en 5 3 y
polimeriza la otra hebra.
No se aporta dTTP N4-Hidroxi-CTP (C-OH)
No se aporta dGTP Se para la reaccin
clonacin molecular Ligasa
REPLICACIN C-OH ledos como C INCORPORA G
En la siguiente generacin se incorpora C y se efecta una
transicin AT GC.
Usos en gentica microbiana y en biologa molecular y en estudios
sobre estructura y funcin de enzimas y otras protenas.

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Especificidad de los carcingenos

Cmo comprobar a nivel de laboratorio que
Generalmente asociados a
sustituciones C-T en gen p53 sustancia es carcingena o no?

Generalmente asociados a
trasnversiones G-T en gen p53

Test de Ames (Prueba de carcinogenicidad)

Salmonella typhimurium Bac no pueden producir histidina

Medio que
no contiene
histidina

Bruce Ames
16 December 1928 (age 85)
La bacterias que crecen pueden
producir histidina por que
revertieron la mutacin

A causa de dichas mutaciones, estas bacterias requieren de un suministro externo de histidina

Utiliza dos mutaciones de auxotrofia para histidina que ser revierten por diferentes
mecanismos
Llevan una mutacin que inactiva el sistema de reparacin por escisin
Mutacin que elimina la cubierta protectora de lipopolisacarido del silvestre que
permite la entrada de compuestos a la clula.
Utiliza varias cepas de la bacteria Salmonella typhimurium alteradas genticamente
para presentar mutaciones en los genes implicados en la sntesis de histidina
para su crecimiento.
Se aaden enzimas del hgado (provenientes de extracto de hgado de rata) para simular el
efecto del metabilismo, ya que algunos compuestos como el benzopireno no son
mutagnicos, pero s lo son sus productos metablico.
Cuando la histidina se agota, slo las bacterias que hayan mutado para obtener la capacidad de
producir su propia histidina van a sobrevivir y multiplicarse.

Mutaciones

Error en la replicacin
Tautomeros
Espontaneas inducidas
Elementos genticos
Forma ceto
transponibles
Ionizacin

Lesiones espontaneas: Imino y enol

Mut cambio de fase
Daos en forma natural

Seq repetidas
Despurinacin Transiciones Transversiones
Desaminacin

Reparacin por Estabilizacin

Eliminacin de enlaces Poco comunes
Puntos calientes pol III modelo streinsinger
glucosidicos: en clulas de Cambio de C a U
A B mamfero pueden presentarse
10000 despurinaciones por Deleciones:
tiempo de generacin (20 H a Duplicaciones:
37C) Puede ocurrir en
recombinacin

Encefalopatas mitocondriales: disminucin en la fosforilacin

mitocondrial por fosforilacin por deleciones

X frgil: expansin de una repeticin CGG en gen FMR-1

Distrofia muscular espinal: repeticiones CAG mut del gen receptor

A) Caja de petri sin histidina con pocas bacterias con capacidad
de andrgenos. Normal (21)/ enfermos (52)
de producir histidina por ser revertientes espontaneas
B) Caja de Petri con bacterias revertientes alrededor de un
Distrofia miotnica: aumento en el triplete CTG. Normal (5 copias)/
disco impregnado con un mutageno
medio (40)/ graves(1000)

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Mutaciones

inducidas
Espontaneas

Puntos calientes mutacionales

ESPECUFICIDAD
MUTAGNICA
Reemplazo de una base

Alteracin de base =
1. Cada mutgeno favorece una categora de sustitucin
MECANISMOS emparejamiento errneo
especfica
2. Dentro de la misma categora hay diferencias en las
Dao de la estructura del tasas de mutacin.
DNA

Bases daadas oxidativamente

Radiacin (Perxido de H y Radicales
Ionizante hidroxilo)

No cancergena en la mayora de
Radiacin NO
casos con excepcin de UV
Ionizante

Evaluacin de capacidad mutadora

Prevencin de errores

Reversin directa del dao

Correccin durante la Reparacin general por escisin

replicacin
Vas especificas de escisin

Glucosidasas Sistema GO
REPARACIN
Nucleasas AP

RESMEN
Replicacin por emparejamiento errneo
REMA,

Reparacin por escisin de bases REBA

Post-Replicacin
Reparacin por escisin de nucletidos REN

EMERGENCIA SOS Reparacin por dao de doble cadena o por

recombinacin

Prevencin de errores Lectura de prueba de la ADN polimerasa

Gen mutT
El producto impide la incorporacin Mecanismo bien estudiado en procariotas (E.
errnea al DNA coli).

ADN pol:

Seleccin de un dNTP
Escisin a monofosfato
Colocacin en la cadena naciente
Hidrolisis

Si el dNTP recin unido no establece un apareamiento

correcto con la base enfrentada y distorsiona la simetra
Bloqueo de la replicacin
o el tamao de la doble hlice, la adicin de un
GO
nucletido siguiente queda postergada.
Empareja errneamente con A, causa transversiones

La ADN pol puede ejercer actividad exonucleasa 3- 5

sobre el nucletido recin incorporado.

Forma monofosfto del (-Oxo-

HGuanosina

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VIH
(human immunodeficiency virus)
Daos en el ADN

Errores en la replicacin del DNA

Lesiones espontneos

Agentes qumicos

Agentes fsicos

Lesin del DNA Causa

Reparacin directa
Prdida de una base Eliminacin de purinas por cidos y calor (en el genoma
humano, hidrlisis espontnea de 10.000 enlaces
glucosdicos/da)
Base alterada Radiaciones ionizantes, agentes alquilantes, especies reactivas BER (base)
de oxgeno (R-OS: O2-., HO., H2O2) Reparacin por escisin
Base incorrecta Desaminacin, errores en la replicacin no corregidos por NER (nucletido)
exo 3-5

Delecin/Insercin Agentes intercalantes (naranja de acridina)

Reparacin de mal apareamiento de bases
Dmeros de Radiacin UV
pirimidina
Rotura de las Radiacin ionizante, agentes qumicos
Recombinacin
cadenas

No reemplaza los nucletidos alterados sino que devuelve sus estructuras originales Fotorreactivacin de los dmeros de pirimidina
(correctas). inducidos por luz UV

La luz UV une de forma covalente dos

residuos de timina adyacentes en una
hebra cadena de DNA, formando
ciclobutano.
FOTOLIASA (E.. coli y algunas clulas eucariotas)
Los dmeros de timina producen una
distorsin local del DNA Utiliza energa tomada de la luz para romper las uniones
covalentes que conectan las pirimidinas en un dmero.
Con menos frecuencia se pueden formar
otros dmeros de pirimidinas
T-T > T-C, C-T > C-C
128

Fig 5-48 .- Biologa Molecular de la Clula 4 ed., Alberts y col.

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TRASNFERASAS DE GRUPOS ALQUILO

La reparacin directa tambin corrige la O6metilguanina, un producto de alquilacin

de la guanina que aparea con adenina y produce transversiones G-C T-A

O6metilguanina-DNA metiltransferasa elimina el grupo metilo de la O6-

metilguanina y restaura la base de guanina.

Aceptor de alquilos

Estas enzimas transfieren el grupo metilo desde la O-6metilguanina a un residuo de

cistena de la protena de modo que este sistema es susceptible a saturacin.

VIAS DE REPARACIN POR Endonucleasa uvrABC, ADN pol y ADN ligasa

ESCISIN Este sistema de reparacin acta sobre una gran variedad de lesiones:

Dmeros de pirimidina
Bases alquiladas
Bases daadas oxidativamente
Modificaciones qumicas con carcingenos: benzopireno, aflatoxina.
Bases desapareadas y pequeos lazos del DNA

Reparacin general por escisin (Rotura de enlaces

fosfodiester)
Pasos:

1. Un dao en el ADN voluminosos (indicado

por la estrella) es reconocido por el
complejo de exploracin de (UvrA) 2UvrB.
En procariotas este sistema de reparacin
1. Identificacin de los daos causados por
UvrB conduce a la disociacin de (UvrA) 2 general por escisin elimina 12-13 nucletidos;
y el reclutamiento de UvrC. mientras que en los eucariotas, se eliminan 27-
2. UvrC escinde ADN en el extremo 5 'y el 3' 29 nucletidos.
a los lados de los daos.

3. la accin de UvrD helicasa conduce a la

eliminacin de UvrB + protenas UvrC En humanos incluye al menos 17 protenas
junto con el fragmento escindido que
contiene el dao.

4. La sntesis de ADN por la ADN polimerasa

seguido de la ligadura (etapa V) restaura la
integridad del ADN.

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ACTORES DE TRANSCRIPCIN
Centro de iniciacin
del mRNA

-110 -40 -25

CAAT CG Compartimento TATA 3

5
1

Factores de transcripcin (TFII)

3
TFII B

TFIIA
TFIID
TFII E
2 Helicasas

Proteina Funcin
XPA Se liga al DNA daado
XPB Helicasa 3-5(integra FTIIH)
Helicasas
XPC
XPD
Reparacin general del ADN
Helicasa 53 (integra FTIIH)
Vas de escisin especficas
XPE Se liga al DNA daado
XPF Endonucleasa de corte en 5
XPG Endonucleasa de corte en 3 Ciertas lesiones son tan sutiles que no pueden ser reconocidas por el sistema
general de reparacin por escisin con los genes UvrABC por lo que existen
vas de adicionales

1. Reparacin mediante Glucosidasas

2. Reparacin por nucleasas AP
3. Sistema Go

La uracilglucosilasa, reconoce y
Reparacin glucosidasas (Rompen enlaces glucosdicos) quita el uracilo producido por la
desimanacin de la citosina.

1. Se escinde la base modificada

2. Se reemplaza el nucletido completo

La escisin de bases modificadas est catalizada por un grupo de enzimas

denominadas DNA glucosilasas

Reconocen y extraen un tipo especifico de base modificada mediante la

ruptura del enlace que une esa base con el tomo de carbono 1de la
desoxirribosa.

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Reparacin por nucleasas AP

Adicional: Glucosilasas de hipoxantinas producto de la desaminacin de la A

Glucosilasas para bases alquiladas

Reparacin con el Sistema GO

Puede ser la fase final de otros

procesos

DNA pol I

Dos Glucosidasas
(mutM y mutY)

mutT impide la incorporacin

de GO cuando aparece la A

La protena MutM elimina el 8-oxo-G dejando un sitio AP que es reparado por

las endonucleasas y sntesis de DNA. Las polimerasas aaden A la lesin pero la
protena MutY elimina la A y repara el sitio apurinico.

Lectura de prueba de la ADN polimerasa

Mecanismo bien estudiado en procariotas (E.

coli).

ADN pol:

Seleccin de un dNTP
Escisin a monofosfato
Colocacin en la cadena naciente

Si el dNTP recin unido no establece un apareamiento

correcto con la base enfrentada y distorsiona la simetra
o el tamao de la doble hlice, la adicin de un
nucletido siguiente queda postergada.

La ADN pol puede ejercer actividad exonucleasa 3- 5

sobre el nucletido recin incorporado.

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La reparacin del ADN es el conjunto de procesos involucrados en la

correccin del dao en el ADN. Es muy importante ya que una
acumulacin de mutaciones puede conducir a la clula a un estado de
senescencia, a la sntesis de protenas aberrantes o a la apoptosis.

Fallos en los sistemas de reparacin causan graves patologas.

Lectura de prueba de la ADN polimerasa

Si una mutacin afecta uno de los componentes de los

sistemas de reparacin

Existen diferentes sistemas:

a) Sistema de reparacin de mal apareamiento de bases (REMA) Aparicin de enfermedades graves

b) Reparacin por escisin de bases (REBA)

c) Reparacin por escisin nucleotdica ( REN=NER (ingls))
d) Reparacin por recombinacin Sndrome de Bloom
Anemia de Fanconi

Xeroderma
Estos sistemas reparan el ADN afectado por cambios inducidos por agentes Esta enfermedad est asociada a mutaciones
en alguno de los 13 genes FANC actualmente
ambientales, como luz ultravioleta (UV), agentes desaminantes, agentes descritos. Estos genes codifican una serie de
alquilantes (que introducen un grupo alquilo en la base). protenas encargadas de la reparacin del
ADN. Como resultado, un 20% de los
pacientes desarrollan cncer, principalmente
El sndrome de Bloom est asociado
a mutaciones en el gen BLM, que codifica
una proteina de la familia de las
helicasasdel ADN, imprescindibles enzimas
implicadas en la tarea de desenrollar el
ADN en procesos importantes tales como
la replicacin, la transcripcin y la
reparacin de ADN. Las mutaciones
pueden producir la inactividad de la
protena o la inhibicin de su sntesis.

Reparacin de emparejamientos errneos SISTEMA GO

Reconocimiento de la cadena nueva mal sintetizada

Funciones de la enzimas
1. Reconocer pares de bases mal
Procedimiento
apareadas
1. mutS se une a los nucletidos mal
2. Determinar cual de las dos
apareados
bases del emparejamiento Dam
errneo es la incorrecta 2. mutH y mutL forman el complejo
metilasa 3. mutH corta la cadena reciente
3. Eliminar la base incorrecta y
sintetizada no Metilada
realizar la reparacin
4. Una helicasa (UvrD) desenrolla al
DNA en direccin al dao
5. La exonucleasa atraviesa el sitio de
Adenina metil transferasa emparejamiento dejando un tramo
pequeo de cadena sencilla
6. Las SBS protegen la cadena sencilla
Etiquetado de la cadena 7. La polimerasa y la ligasa rellenan el
faltante

Cmo podra determinar el sistema si la

base correcta es la G o la T?

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a) Sistema de reparacin de mal apareamiento de bases en humanos

(REMA)
Sistemas posreplicativo temprano que repara el mal apareamiento de uno o unos
pocos pares de bases.
Inestabilidad de microstelites tumores

Reconocimiento

Errores producidos por la

ADN poll

Unin y escisin
(nucleasas) Desplazamiento de la
cadena molde con
respecto a la hebra nueva.
GTBP Eliminacin + ADN pol

Variaciones de una secuencia de ADN microsatlite se pueden encontrar en las

clulas del cncer de colon hereditario (CCHNP) y de otros tumores

b) Reparacin por escisin de bases (REBA)

c) Reparacin por escisin nucleotdica (REN)

Sistema posteplicativo tardo y en general reemplaza a un nico Corrige los errores voluminosos que la escisin de base no reconoce
nucletido daado, en especial en sitios depurinados en el ADN. Es probablemente el ms extenso sistema de reparacin del ADN
Opera a travs de varios pasos:
Acta en cualquier momento del ciclo celular, incluso en clulas en
1. Reconocimiento de bases anormales reposo divisional
2. Intervencin por glucosilasa: rompe el enlace glicosdico
3. Reconocimiento por una endonucleasa del sitio sin base purica Reemplaza lesiones que abarcan de dos a muchas bases del ADN, en
4. ADN pol repara la cadena cortada especial lesiones que distorsionan la doble hlice, como las lesiones por
5. Ligasa restaura enlace fosfodiester
luz ultravioleta (UV).
Bases desaminadas Bases alquiladas

d) Reparacin de rupturas de doble cadena

Este tipo de reparacin se asocia con mecanismos de recombinacin

meitica.

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Es el ltimo recurso si el ADN an no se ha reparado por otros

Ante una cantidad masiva de daos en el DNA, se disparan la
reparacin SOS como respuesta.
Mecanismos de emergencia que se caracterizan por tener niveles
superiores de protenas implicadas en reparacin y recombinacin.
Las enzimas implicadas en esta reparacin no se encuentran
habitualmente en al clula sino que se sintetizan cuando son
necesarias.
mecanismos.
Sntesis de enzimas de las rutas de reparacin por escisin y de
reparacin por recombinacin.
Las ADN pol bypass reemplazan a la ADN pol III, rellenan el espacio
daado insertando nucletidos hasta que sobrepasa el rea daada.
Posteriormente la ADN pol continua con la replicacin.
La reparacin SOS es un proceso proclive al error y por lo tanto
mutagnico.

RESPUESTA SOS

Induccin de:

Reparacin por escisin (uvr)

Recombinacion (rec A)

Polimerasas de reparacin (polB)

Bloqueo de divisin celular (sulA)

Polimerasas bypass (umu, din)

Hasta 31 genes

SNTESIS DE DNA DE TRANSLESIN

Cuando se encuentra una lesin en la plantilla durante la duplicacin, la DNA

pol III, con su abrazadera deslizante, se disocia del DNA y es reemplazada por
la DNA pol de Translesin.

Esta variante de polimerasa, extiende la sinteis de DNA a traves de dmeros de

timina en la cadena.

La pol III finalmente reemplaza la polimerasa especializada de Traslesin.

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La mayora de mutaciones en E. coli se originan a partir de las

acciones del sistema de reparacin SOS.

Se sugiere que bajo condiciones de estrs medioambiental, el sistema

SOS funciona aumentado la tasa de mutacin de modo que
incrementa la velocidad a la que E. coli se adapta a nuevas
condiciones.

Regulacin de la reparacin por el sistema SOS

Reparacin por recombinacin Procedimiento: Frente a la presencia de
un error ADN polimerasa puede pasar
por alto la lesin.

1.reiniciar la replicacin en un nuevo sitio

aguas abajo del dmero, dejando un hueco.

2. este vaco es llenado por recombinacin

con la hebra parental en buen estado.
(Proteina dependiente de RecA)

3. El vaco en la cadena parental puede ser

Activada por la cadena llenado por la accin de la polimerasa y
monocatenaria ligasa, utilizando la cadena hija intacto
como una plantilla.
El dao del DNA conduce a la destruccin proteoltica de un represor de la
transcripcin (Lex A), que controla la expresin de los genes que participan en la Dos molculas de ADN intactas estn
respuesta SOS, la Escisin del LexA y Umud se estimula por la accin de RecA, formados de este modo, y el dmero de
activado por la cadena mono catenaria causada por la lesin. timina restante eventualmente se pueden
eliminar mediante reparacin por escisin.
RecA tambin acta en la recombinacin del DNA.

MUTADORES
En E-coli, los loci muth, mutL, mutU y mutS, afectan el sistema de reparacin
por emparejamientos erroneos pos replicativos . VIH

Estirpe Dam- no reconocimiento y

sobre metilacin

La transcriptasa reversa a diferencia de la ADN pol no posee la capacidad de

lectura de prueba, de manera que se producen muchos ms errores.

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Modo general de Ejemplo Tipo de lesin Mecanismo

funcionamiento reparada
Prevencin de errores
Detoxificacin Peroxido Impide la formacin de Conversin de perxido en
Reversin directa del dao dismutasa lesin oxidativa superxido y luego por
catalasas en Agua
Correccin durante la Reparacin general por escisin
replicacin
Vas especificas de escisin Eliminacin directa Transferasas de O-6.alquil guanina Transferencia del alquilo
grupos alquilo desde la o-6-guanina en un
Glucosidasas residuo de cistena de la
Sistema GO transferasa
REPARACIN
Nucleasas AP

Fotoliasas Fotoproducto 6-4 Rompe el enlace 6-4 y

RESMEN
Replicacin por emparejamiento errneo restaura las bases
REMA,
Fotoliasa Fotodimeros de UV Rompe los dmeros en
Reparacin por escisin de bases REBA presencia de luz blanca
Post-Replicacin
Escisin general Sistema Lesiones en la doble Cortes endonucleotidicos a
Reparacin por escisin de nucletidos REN
uvrABC hlice, productos de UV cada lado de la lesin el
Reparacin por dao de doble cadena o por y adiciones qumicas hueco reparado por la pol y
EMERGENCIA SOS voluminosas la ligasasa
recombinacin

Modo general de Ejemplo Tipo de lesion Mecanismo Modo general de Ejemplo Tipo de lesion Mecanismo
funcionamiento reparada funcionamiento reparada
Escisin especfica Endonucleasas AP Sitio AP Cortes Posterior a la Reparacin por Errores en la Reconoce la cadena recien
endonucleotidicos a cada replicacin emparejamientos replicacin que sintetizada mediante la
lado de la lesin el erroneos originan deterccin de residuos de
hueco reparado por la emparejamientos adenina no metilados en las
pol y la ligasasa erroneos secuencias 5GATC 3y
escinde bases de la cadena
Glucosilasas de DNA Bases desaminadas Elimina la base daada recien sintetizada cuando
(Uracilo e originando un sitio AP, detecta un error
hipoxantina) y reparado por la Reparacin por Lesiones que Intercambio por
daadas endonucleasa AP recombinacin bloquean la recombinacin
oxidativamente replicacin y dan
lugar a huecos que
bloquean la cadena
Sistema GO 8-oxoDG Una glucosilasa elimina el sencilla
GO, otra glucosilasa
elimina la A de los Sistema SOS Lesiones que Permite la replicacin frente
emparejamiento bloquan la al sitio de la lesin
errneos replicacin bloqueadora y da lugar a
mutaciones frecuentes en
esta posicin

Biologa Molecular
Universidad del Tolima

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