Diluciones en Microbiología 2015

UNIVERSIDAD DE COSTA RICA
FACULTAD DE MICROBIOLOGIA
TCNICO DE LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA EN LA
INDUSTRIA DE DISPOSITIVOS
MDICOS
CMO CALCULAR
DILUCIONES EN
MICROBIOLOGA?
Dra. Mara del Mar Gamboa Coronado

2014
BACTERIOLOGA GENERAL
FACULTAD DE MICROBIOLOGA
CMO CALCULAR DILUCIONES EN MICROBIOLOGA?

QU ES UNA DILUCIN?
ES UN PROCESO MEDIANTE EL CUAL SE LOGRA LA DISMINUCIN DE LA CONCENTRACIN DE UNA

SUSTANCIA CON RESPECTO AL ORIGINAL.
i tomamos un ml de sustancia X y le agregamos 9 ml de un

S diluyente (e.g. agua) obtendremos en los 10 ml de diluido la
cantidad total de sustancia X originalmente contenida en solo un ml. Sin
embargo, obsrvese que la cantidad X ahora contenida en cada unidad
(ml) del diluido (o sea la concentracin de X) es slo la dcima parte con
respecto a su concentracin original.
Grficamente podemos expresar la situacin as:
CONCENTRADO DILUIDO
1 UNIDAD 1 UNIDAD
DILUCIN
Disminucin de la concentracin,
por unidad de medida, con respecto
al original.
CONCENTRACIN INICIAL
Cantidad de soluto o suspendido por
unidad de solucin o suspensin inicial
9 UNIDADES
CONCENTRACIN FINAL
Cantidad de soluto o de suspendido por
unidad de la solucin o suspensin final.
TOTAL: 10 UNIDADES
La unidad empleada en este caso es el ml y
1
la dilucin fue de 1 = 1 / 10 = 0.1 = 1 X 10 .
10
Concentracin inicial (Ci) = 1 unidad

Concentracin final (Cf) = 1 / 10 u = 1: 10 u = 0.1 u = 1 X 10 1.
1 1
Dilucin: Cf / Ci = 1 X 10 u = 1 X 10 ( No tiene unidades
1 pues es una razn)
Resumiendo: D = Cf / Ci Cf = D X Ci Ci = Cf / D
EJEMPLOS:
original diluyente vf
ml ml ml
1 -1
1 + 9 = 10 1 / 10 = 0.1 = 1 X 10
2 -2
1 + 99 = 100 1 / 100 = 0.01 = 1 X 10
3 -3
1 + 999 = 1000 1 / 1000 = 0.001 = 1 X 10
4 -1
1 + 4 = 5 1 / 5 = 0.2 = 2 X 10
5 -2
1 + 49 = 50 1 / 50 = 0.02 = 2 X 10
6 -1
1 + 1 = 2 1 / 2 = 0.5 = 5 X 10
7 1 + 6 =
8 1 + 499 =
9 5 + 45 =
10 10 + 90 =
11 50 + 450 =
12 100 + 9900 =
13 25 + 25 =
14 25 + 75 =
Hasta el momento nos hemos referido solamente a sistemas de dilucin

directa o en un paso. Sin embargo, al hacer diluciones grandes resultara
incmodo y poco prctico efectuarlas en forma directa puesto que ello
involucrara enormes volmenes de diluyente.
-5
(e.g. D = 1 X 10 = 1 ml + 99 999 ml de diluyente)
Para lograr grandes diluciones sin el empleo de grandes volmenes de

diluyente utilizamos el sistema de DILUCIONES SECUENCIALES o sea una
serie de diluciones directas.
Si las diluciones son TODAS IGUALES, se dice que la dilucin es SERIADA.
Las diluciones se expresan en diversos modos:

En bacteriologa las expresamos en forma EXPONENCIAL NEGATIVA,
mientras que en el anlisis qumico-clnico se prefiere la forma de quebrados.
La forma exponencial nos permite expresar en un solo nmero, el exponente,

una gran cantidad de decimales; en los cultivos de microorganismo, en los
que las poblaciones son tan altas que con frecuencia tendramos que utilizar
nueve ceros para representarlas, la notacin exponencial resulta
muy conveniente.
Por otra parte, en los anlisis qumico-clnicos es raro el caso en el que se

efecten diluciones superiores al orden de 1/100, estando la mayora de ellas
en el rango de 1/5 a 1/50.
Las unidades en las que se expresa la concentracin tambin son diferentes

en los distintos campos: en bacteriologa se usa por ml, en anlisis qumico-
clnico por 100 ml y en serologa, el ttulo o dilucin lmite de determinada
actividad (o su inversa).
Lo que s es comn a todos los sistemas es el que las operaciones se llevan a

cabo sobre la base de UNA MISMA UNIDAD de principio a fin.
Ejemplos:
Ejemplo A:
Si en el frasco ORIGINAL hubiese 8 millones de clulas por ml, cuntas

habra en el ltimo tubo?
-4
Ci: 8X106 bact/ml ; D: 1X10 DATOS
SUMINISTRADOS
Cuntas bacterias habra en el plato de Petri?
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
9 ml 9 ml 9 ml 9 ml
ORIGINAL 1 1 1 1 PLACA
10 10 10 10
Dilucin
Individual 1: 10 1 : 10 1 : 10 1 : 10
1 1 1 1
1 x 10 1 x 10 1 x 10 1 x 10
Dilucin DILUCIN
Acumulada 1 2 3 4 4
1 x 10 1 x 10 1 x 10 1 x 10 1 x 10
RESPUESTA:
-4 6 2
Cf / Ci = D Por tanto Cf = D X Ci = (1 X 10 ) X ( 8 X 10 )= 8 X 10 bact/ml
En el ltimo tubo habra 8 X 10 2 bact/ml.
2
En el plato de Petri habra 8 X 10 bact/ml ya que se sembr 1 ml. Se obtiene de:
2
(1ml) X ( 8 X 10 )
-4
Nota: La dilucin en el plato Petri es 1 X 10
Ejemplo B:
ml 1 ml 1 ml
99 ml 99 ml 99 ml
ORIGINAL 1 1 1
100 100 100
Dilucin
Individual 1: 100 1 : 100 1 : 100
2 2 2
1 x 10 1 x 10 1 x 10
Dilucin
Acumulada 2 4 6
1 x 10 1 x 10 1 x 10
Si en este caso averiguamos que en el ltimo tubo hay 10 bact /
ml,
Cuntas habra en el frasco por ml?
Datos suministrados:
En el tubo #3 (ltimo) hay 10 bact/ ml. Esto es lo mismo que
1 X 101 bact/ml. ........ Por lo que Cf= 1 X 101 bact / ml
-6
La dilucin en ese tubo es de 1 X 10 = D
De acuerdo con la frmula: Cf/ Ci = D, encontramos que
7
Ci = Cf / D = 1 X 10 1 bact / ml / ( 1 X 10 - 6 ) = 1 X 10 bact/ ml
Ejemplo C:
0.1 ml 2 ml
1 ml
9 ml 9,9 ml 8 ml
ORIGINAL 1 0.1 2
10 10 10
Dilucin
Individual 0.1 0.01 0.2
1: 10 1 : 100 2 : 10
1 2 1
1 x 10 1 x 10 2 x 10
Dilucin
Acumulada 1 3 4
1 x 10 1 x 10 2 x 10
Si en el segundo (2do) tubo hubiese 4000 bacterias/ ml,

Cuntas habra en el 3er tubo?
Cuntas en el frasco?
Datos suministrados: Cf/Ci = D
-1
C tubo 2 = 4000 bact / ml ; D tubo 3 = 2 X 10
Cf tubo 3 = (C tubo 2) X (D tubo 3)
-1
C f tubo 3 = (4000 bact / ml) X (2 X 10 ) = 800 bact /ml
Cf tubo 3 = 8 X 10 2
En el tercer tubo habran 8 x 10 2 bact/ml.
Observe como se expresa la concentracin de bacterias.
Al obtener la dilucin acumulada en el segundo tubo, nos sirve para

calcular la concentracin en el frasco.
Cf/ Ci = D
-3
Por lo tanto Ci = Cf / D = (4000 bact / ml ) / ( 1 X 10 )
6
Ci = 4 X 10 bact/ml
6
En el frasco habran 4 X 10 bact / ml
C
on frecuencia se cometen errores al convertir la dilucin
expresada en forma de quebrado a la forma decimal. No siempre asociamos
la equivalencia de 1:5 con 2 X 10- 1 o de 1/8 con 1.25 X 10- 1, etc. Para
expresar 1:8 (1/8 ) en forma exponencial hacemos efectiva la divisin 1:8 =
0.125, la que segn la convencin establecida expresamos con su equivalente:
1.25 X 10- 1.
Para llevar a cabo la operacin inversa de convertir una expresin

exponencial en fraccionada basta efectuar la operacin contraria. Si la
operacin original fue 1/8 = 0.125, conocamos tanto el numerador como el
denominador del quebrado. Ahora, en la operacin contraria, conociendo el
resultado de la razn (0.125), comenzamos por suponer que el numerador sea
1 y procedemos a averiguar cul fue el denominador?, as:
Si 1/ x = 0.125 entonces X = 1/ 0.125 = 8
De donde concluimos que la razn o dilucin que dio origen a 0.125 fue 1:8
(1/8) Si en lugar de tratarse de una dilucin 1/8 lo fuese de 1/80, la nica
diferencia que habra en la expresin exponencial anterior sera el
incremento del exponente de 10 1 a 10 2
Cuando por suponer que el numerador de la razn es 1, nos resulta un

quebrado de caractersticas inconvenientes; basta multiplicar el
numerador y el denominador por un mismo factor de correccin para
obtener la expresin deseada (e. g (1 /3, 5) X ( 2 / 2 ) = 2 / 7).
En algunos casos el quebrado representa una divisin cuya solucin est

ms all del segundo o tercer decimal. Cuando esto sucede se redondea a
esos lmites, ya que para el uso que se le da no se requiere una mayor
precisin.
TRABAJE LOS SIGUIENTES EJEMPLOS:
1. Convierta 1/X a su expresin exponencial

2. Convierta la expresin exponencial a su expresin quebrada.

EXPRESIN EXPRESIN
EXPONENCIAL QUEBRADA
-1
A 2.5 x 10
-3
B 3.33 X 10
C 3.0 X 10 - 1
D 4.0 X 10 - 2
E 5.0 X 10 - 2
EXPRESIN EXPRESIN
QUEBRADA EXPONENCIAL
A 1/3
B 1/20
C 4/5
D 7/9
E 20/33
EJEMPLOS :
I. Tenemos una suspensin de 800 000 bact/ ml y deseamos hacer un cultivo

por vaciado en plato de Petri de manera tal que en el plato aparezcan 200
colonias.
PROCEDIMIENTO:
DATOS:
Ci = 8 X 105bact / ml
Cf = 2 X 10 2 bacterias/plato
D = Cf / Ci = 2 X 102/8 X 10 5 = 0.25 X 10- 3
D = 2.5 X 10 - 4
Posibles esquemas de trabajo:
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
1 ml
3 ml 9 ml 9 ml
9ml
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Placa

ORIGINAL 1 1 1 1
4 10 10 10
1:4 1 : 10 1 : 10 1 : 10
Dilucin
Individual 0.25 0.1 0.1 0.1

1 1 1 1
2.5 x 10 1 x 10 1 x 10 1 x 10
Dilucin
Acumulada 1 2 3 4 4
2.5 x 10 2.5 x 10 2.5 x 10 2.5 x 10 2.5 x 10
Alternativa
1 ml 1 ml 1 ml
0.1 ml
3
3 ml
.9 ml
3 ml 9 9
ml
1/4 1/100 1 / 10
0.25 0.1/10 2.5 X 10 4
Original -1
ORIGINAL 0.25
2.5 X 10
0.25 0.01 0.1 DILUCIN TOTAL
2.5 x 10 -1 1 x 10 -2 1.0 x10-1
Diluciones parciales
Alternativa
0.1 ml 1.0 ml 1.0 ml
0.1 ml
3.9 ml 9.9 ml
2 .5 X 10 4
ORIGINAL 1 / 40 1 / 100
ORIGINAL 0.025 0.01 DILUCIN TOTAL
2.5 x 10 -2 1.0 x 10 -2
DILUCIONES PARCIALES
Alternativa
ALTERNATIVA
1.0 ml 0.1 ml 0.1 ml = 1 X 10 - 1
3.0 ml 9.9
ml
2 .5 X 10 4
1/4 1 / 100
DILUCIN TOTAL
0.25 0.01
2.5 x 10 -1 1.0 x 10 -2
DILUCIONES PARCIALES
En la ltima alternativa obsrvese que al tomar 0.1 ml de la ltima dilucin,

estamos haciendo el equivalente de una nueva dilucin 1: 10, por cuanto
estamos tomando la dcima parte de la unidad - que en este problema es el
mililitro - .
En ninguno de los casos tiene importancia saber cul es el volumen del agar
que se ponga en el plato, ya que siempre contaremos el TOTAL de bacterias
contenidas en el mismo (o depositadas en el plato). Solamente en el caso de
que fusemos a tomar agar con bacterias para hacer otra dilucin, s tendra
importancia el volumen del mismo como factor de dilucin.
Ensaye otras alternativas mediante las cuales podra resolver el problema

anterior.
CMO MEZCLAR DOS SOLUCIONES DE

DIFERENTES CONCENTRACIONES PARA
OBTENER UNA TERCERA CONCENTRACIN
Problema:
Cunto alcohol de 95%? y Cunta agua debemos mezclar para
obtener 200 ml de alcohol de 70%?
Mtodo # 1:
200 ml de alcohol de 70 % contienen

l e alcohol de 70% contienen
( 200) X ( 0.70) = 140 ml de alcohol de
ml de alohol de 100%.
100%.
de de 95% contienen
Cuntos ml de alcohol de 95% contienen
alcohol absoluto?
esos 140 ml de alcohol absoluto?
X = 147.37 ml
Datos : ( X ml ) ( 0.95) = ( 140) ( 1.0)
X = 147.37 ml alcohol de 95 % con

s de
.
Al diluir 147.37 ml de alcohol de 95 % con
52.63 ml de agua obtendremos los 200 ml de
alcohol de 70 % deseados.
MTODO #2 ( Recurrir al siguiente esquema)
Ci ml
Cf
Ci ml
DATOS:
Ci = Concentracin 1 era sustancia a mezclarse

Ci = Concentracin 2da sustancia a mezclarse
Cf = Concentracin final deseada.
ml= ml de solucin Ci a mezclar con Ci
ml = ml de solucin Ci a mezclar con Ci
V = volumen final de la mezcla
95 ml 70ml
70
0 ml 25ml
_______
95
_______ ml
_____
Para este problema:
DATOS
Ci = 95 % Ci = 0% Cf = 70%
95 - 70 = 25 ml de agua
70 - 0 = 70 ml de alcohol de 95%
70 + 25 = 95 ml de alcohol de 70%
Por Regla de Tres:
ml de alcohol de 95%?
70 ml de alcohol de 95% ------------ 95 ml de alcohol de 70%

X ml de alcohol de 95%------------- 200 ml de alcohol de 70%
(70 * 200) / 95 = 147.37 ml
X ml de alcohol de 95% = 147.37 ml
ml de agua?
25 ml de agua ------------ 95 ml de alcohol de 70%

X ml de agua -----------200 ml de alcohol de 7 0 %
( 25 * 200 ) / 95 = 52. 63 ml de agua.
X ml de agua = 52.63 ml
Tambin:
200 ml alcohol 70% - 147.37 ml alcohol 95%=
X ml de agua = 52.63 ml
Nota: A 147.37 ml de alcohol de 95% adicionamos suficiente

agua para obtener un volumen de 200 ml de alcohol de
70%.
PROBLEMAS
1. Con alcohol de 10 % y de 90 % deseamos obtener 250 ml de una

mezcla al 55%. Qu cantidad de cada alcohol debemos usar?
R/ 140.63 de 90% y 109.37 de 10%
2. Tomamos 0.1 ml de un cultivo de Escherichia coli y lo depositamos en

99.9 ml de agua estril; de esta dilucin tomamos otros 0.1 ml y lo
diluimos en 99.9 ml de agua; de esta ltima tomamos 0.1 ml y lo
depositamos en un plato de Petri al que luego le agregamos 10 ml de
agar licuado y mezclamos bien. Al da siguiente contamos 90 colonias
en el plato. Cuntas bacterias/ml haba en el cultivo original?
R / 9 X 108 bact/ml
3. A partir de un cultivo de bacterias se toma 1 ml y se diluye con 9 ml de

agua estril. Luego, se toma 0,2 ml de la primera dilucin y se mezcla
con 9,8 de agua. A partir de esta ltima se diluye 0.1 ml en 9.9 y de
aqu tomamos tres porciones para depositar en otros tantos platos de
Petri (A) y una porcin de 1 ml para diluir con 9 ml de agua. De esta
dilucin tomamos 3 porciones de 1 ml para depositar en platos de Petri
(B) otras tres porciones de 0.1 ml para otros platos (C). A cada uno de
los 9 platos agregamos 15 ml de agar licuado y mezclamos. Despus
de la incubacin, encontramos los siguientes nmeros de colonias.
PLACA A PLACA B PLACA C
800 75 2
950 85 5
900 80 8
Cuntas bacterias/ml haba en el cultivo original? Recuerde

que los lmites de conteo estn entre 25 y 250.
R/ 4 X 107 bact/ml
4. Deseamos inocular 10000 bacterias a un frasco de medio de cultivo.

Nuestro cultivo contiene 8 X 107 bacterias/ ml y debemos agregar el
inculo en un volumen de 0.1 ml. Cunto debemos diluir nuestro
cultivo? HAGA UN ESQUEMA.
R/ 1.25 X 10-3
5. Cul sera la dilucin necesaria en el problema anterior si deseramos

obtener un total de 1000 bacterias en un volumen de 10 ml de medio ?
R / 1.25 X 10-6
6. A partir de un cultivo de 9 X 108 bact/ml se hacen diluciones decimales

hasta obtener 4.5 bact/50 ml. Cul sera la dilucin necesaria?
RECUERDE HACER UN ESQUEMA.
R / 1 X 10- 10
7. Un cultivo con 9 X 10 8 bact/ml debemos diluirlo lo suficiente para que

obtengamos, en promedio 150 colonias en los Platos. Qu dilucin
total debemos hacer?
R / 1.67 X 10-7
8. Para efectuar las diluciones Ud. cuenta con salina estril envasada en
botellas con 99 ml y con tubos estriles con capacidad til hasta de 10
ml, a los que Ud. puede trasvasar el volumen deseado de salina.
a. Haga un esquema de dilucin para el problema anterior empleando

el menor nmero de pasos de dilucin.
b. Haga un esquema de dilucin para el problema anterior empleando

el menor volumen de diluente.
9. Si un cultivo tuviere 2 X 107 bact / ml y necesitamos diluirlo para que,

cuando depositamos 0,5 ml en c/u de 200 tubos, slo en la mitad de
ellos se produzca enturbiamiento del Caldo, despus de incubar a la
temperatura adecuada. Cunto debemos diluirlo?
R / 5 X 10- 8
10. Ud. pes 10 g de carne molida, la tritur en mortero estril y

aspticamente, tom 1 g de la carne y la introdujo en botella con 99 ml
de salina y perlas de vidrio. Despus de agitar de forma adecuada la

muestra, la diluy adicionalmente 1: 100000 y obtuvo un promedio de
180 colonias por plato. Cuntas bacterias haba por gramo de carne?
R / 1.8 X 109 bact/ml
11. Ud. tiene un cultivo mixto de bacterias que presenta 5 colonias blancas
por cada colonia roja y que al diluirlo un milln de veces obtuvimos 100
colonias rojas.
A. Cunto debe diluirse el cultivo para obtener 100 colonias

blancas? R / 2 X 10- 7
B. Cuntas bacterias blancas y cuntas rojas haba por

mililitro de cultivo sin diluir?
R/ 5 X 10 8 blancas y 1 X 108 rojas
12. Haga un esquema indicando cmo debe diluirse una muestra de orina
para obtener recuentos confiables que permitan detectar poblaciones
desde 1000 hasta 100000 bact / ml de orina.
13. Se estableci que en un cuerpo de agua haba 2.5 X 10 3 clulas de

alga por ml. Si la relacin de bacterias a algas es de 5000 / l, Cuntas
bacterias hay por cada:
a. mm 3
b. ml
c. dm 3
d. l
e. m 3
14. Se pasan 150 ml de agua a travs de una membrana de filtracin y

sta se coloca sobre un medio de cultivo slido. Despus de la
incubacin se encontr 50 colonias sobre la membrana. Cuntas
bacterias haba por litro y por metro cbico de agua?
R/ 3.3 X 105 bacterias/m3
15. Si un estanque contiene 5000 m 3 de agua y sta contiene 3000 bact /

ml, Cuntas bacterias hay en el estanque? Si suponemos un peso
promedio de 1 g / bacteria, Cul sera el peso de esa masa
unicelular expresado en gramos, en Kilogramos, en toneladas
mtricas?
R/ 1.5 x 107g; 1.5 x 104 Kg; 7.5 Ton

16. Si tenemos 2000 bact, en un mm 3, Cuntas tendramos en 50 ml del

mismo cultivo?
R/ 10 8 / 50 ml
17. Complete el siguiente cuadro de diluciones:
MATERIAL
A + DILUCIN TOTAL
DILUIR DILUENTE
A 1.5 ml + 4.5 ml
B 4.5 ml + 1.5 ml
C 0.2 ml de A + 49.8 ml
D 0.5 ml de C + 0.5 ml
18. Si llevamos a cabo una dilucin seriada doble, cul sera la dilucin a
nivel del sexto tubo? Expresada dicha dilucin en notacin
exponencial, Cul sera su valor?
EJEMPLO
1 -1
1 + 9 = 10 1 / 10 = 0.1 = 1 X 10
2 -2
1 + 99 = 100 1 / 100 = 0.01 = 1 X 10
3 -3
1 + 999 = 1000 1 / 1000 = 0.001 = 1 X 10
4 -1
1 + 4 = 5 1 / 5 = 0.2 = 2 X 10
5 -2
1 + 49 = 50 1 / 50 = 0.02 = 2 X 10
6 -1
1 + 1 = 2 1 / 2 = 0.5 = 5 X 10
7 1 + 6 = 7 -1
1/ 7 = 0.14= 1.4 X 10
8 1 + 499 = 500 -3
1/ 500 = 0.002= 2 X 10
9 5 + 45 = 50 -1
1/ 50 = 0.1= 1 X 10
10 10 + 90 = 100 -1
10 / 100 = 0.1= 1 X 10
11 50 + 450 = 500 -1
50 / 500 = 0.1= 1 X 10
12 100 + 9900 = 10000 100 / 10000 = 0.01= 1. X 10 - 2
13 25 + 25 = 50 -1
25/ 50= 0.5= 5 X 10
14 25 + 75 = 100 -1
25 /100=0.25= 2.5 X 10
TRABAJE LOS SIGUIENTES EJEMPLOS
CONVIERTA 1/ X A SU EXPRESIN EXPONENCIAL
EXPRESIN EXPRESIN
QUEBRADA EXPONENCIAL
A 1/3 -1
3.3 X 10
B 1 / 20 -2
5.0X 10
C 4/5 1
8.0X 10
D 7/9 -1
7.8X 10
E 20 / 33 -1
6.1X 10
2.Convierta la expresin exponencial a su
expresin quebrada.
EXPRESIN EXPRESIN
EXPONENCIAL QUEBRADA
-1
A 2.5 x 10
1/ 4
-3
B 3.33 X 10
1 / 300
C 3.0 X 10 - 1
3 / 10
-2
D 4.0 X 10
1 / 25
E 5.0 X 10 - 2
1 / 20
RESOLUCIN DE PROBLEMA
Problema # 1
Ci = alcohol de 10 %
Ci = alcohol de 90 %
ml = 35 ml de alcohol de 10%
ml = 45 ml de alcohol de 90%
Ci ml 10ml 35 ml
Cf 55
Ci ml 90 ml 45 ml
80 ml
90-55= 35 ml alcohol 10%
55-10=45 ml de alcohol 90%
35+45=80 ml de alcohol de 55%
Entonces por regla de tres:

ml de alcohol de 90 % ?
45 ml de alcohol de 90% = 80 ml de alcohol de 55 %

X ml de alcohol de 90% = 250 ml de alcohol de 55 %
(45) X (250)/ 80 = 140.63 ml de alcohol de 90 %
ml de alcohol de 10 % ?
35 ml de alcohol de 10 % = 80 ml de alcohol de 55 %
X ml de alcohol de 10% = 250 ml de alcohol de 55%
(35) X (250) / 80 = 109.37 ml de alcohol de 10%
Tambin: 250 ml de alcohol de 55% - 140. 63 ml de alcohol 90%
109.37 ml de alcohol de 10%.
Problema # 2
0.1 ml = 1 X 10 -1
0.1 ml 0.1 ml
10 ml
AGAR
9 9.9 ml 9 9.9 ml
Cf = 90 bact / ml
ORIGINA
L
0.1 / 100 0.1 / 100
DILUCIN Individual.
1 X 10 3 1 X 10 3
DILUCIN Acumulada
1 X 10 3 1 X 10 6
La dilucin en la placa de Petri es (1 X 10-6) X (1 X 101) = 1 X 10 -7

Ci = Cf / D = (90) / (1 X 10 - 7 bact / ml) = 90 X 10 7 =
9.0 X 10 8 UFC/ml
Problema # 3.
2x10-5
1 ml
0.1 ml A
1.0 ml 0.2 ml
1 ml 1 ml
4
9 ml 10-1
9 ml
9.8 ml 9.9 ml agua
1 ml
-1 -2 -3
ORIGINA 1
10 2
2x10 3
10
L 0.1 ml
C B
2x10-7 22x10
X 10-6 -6
Tomamos en este caso el plato B como referencia para calcular

el nmero de bacterias del cultivo original ya que es donde hay entre 25 y
250 colonias.
D = Cf / C i= 80 /( 2 X 10 6 ) = 4 X 10 7 bact / ml.
Tubo 1 Tubo 2 Tubo3 Tubo 4

D. Ind. 1 X 10 -1 2 X 10 -2 1 X 10 -2 1 X 10 - 1
D. Acum. 1 X 10 -1 2 X 10 --3 2 X 10 --5 2 X 10 --6
Problema #4
0.1 ml
7
8.0 X 10 bact / ml 4
1.0 X 10 bacterias
Cf = (10000 bact ) / (0.1 ml) = (10 4 bact ) / ( 0.1 ml) = 10 5 bact/ ml
D= ? D = C f / Ci = (10 5 ) /( 8 X 10 7 ) = 1 / (8 X 10 2 ) =
D = 1/8 X (1 X 10 - 2) = D = 0.125 X 10 - 2 = (1.2 X 10 - 1 ) X ( 10 - 2 ) =
D = 1.25 X 10 - 3
Problema #5.
Si queremos (10 3 bacterias) / (10 ml ) entonces:
****Tomar como referencia el problema anterior
C f = (10 3 bact) / ( 10 ml ) = (10 2 bact / ml)
10, 0 ml
7
8.0 X 10 bact / ml 3
1.0 X 10 bacterias
2 7 5 -5
D = 10 /(8.0 X10 ) =(1) /(8X10 )= 0.125 X 10 =
5
D = (1.25 X 10 1 ) X (1 X 10 )= 1.25 X 10 - 6 .
Problema # 6
8
Ci = 9 X 10 bact / ml Cf = 4.5 bact / 50 ml = 0.09 bact / ml
-2
Cf = 9.0 X 10 bact / ml
2 8) - 10
D = Cf / Ci =( 9 X 10 ) / (9 X 10 = 1 X 10
9 X108 bact/ml 4.5 bact /50 ml
Problema # 7.
C i = 9 X 10 8 C f = 150 D=?
8 -8
D = (150 bact/ml) / (9.0 X 10 bact / ml) = 16.7 X 10 =
D = 1.67 X 10-7
1 ml
8
9,0 X 10 150colonias
Problema # 8.
1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 0.1 ml

0.1 ml
150 colonias
8 5. 9 ml 9.0 ml 9.0 ml 9.0 ml 9.0 ml

9 X 10 bact / ml
A.
Por menor nmero de pasos: 1 / X = 1.67 X = 1/ 1.67 = 0.6
eso es igual a 1 / 0.6 = 1.67 entonces
-7 = 1 -7 -6
0.6 X 10 (1 /(6 X 10 ) X ( 1 X 10 ) = (1/6) X 10
Problema # 9
0.5 ml
............................Hasta 200 tubos
2 X 107 bact / ml
0.5--------- 100
X -------- 200
X= 1
7 7 -7
Ci = 2 X 10 bact / ml D = (1 bact / ml) / (2 X 10 )= 0.5 X 10 ;
-8
D = 5 X 10
Problema # 10
10-5
1g
7
10
10 g carne
-2
10 180 colon. / plato
99 ml
5 -2 -7
D = (10 ) X (10 ) = 10
Cf =180 col / plato= 180 bact/plato
D = Cf /Ci Ci = C f / D
-7 2 7 9
C i= (180)/(1X10 ) = 1.8 X 10 X 10 = 1.8 X 10 bact /ml
PROBLEMA 11.
-6
D =1 X 10
5 colon blancas / colon roja 100 colonias rojas
Cultivo
Mixto
5 colonias blancas ------------ 1 colonias roja
A.
2
C f = blancas = 10 D=?
-6 -6 2 2
D = 10 = 1 X 10 ------ 10 rojas ----- 5 X 10 blancas
(5 blancas / 1 roja) = (X blancas / 100 rojas) = 5 x (100/1) = X = 500)
D = Cf/Ci
-6
D = Si para obtener 50 blancas ----------- D = 10
100 blancas ------- X
-6 ) -6 = -7
X = (100 x 10 / 500 = 0.2 X 10 2 X 10
B.
C i= rojas = ? C i blancas = ?
D blancas = Cf / Ci = 1 X 10 - 6 = 5 X 10 2 blancas/ Ci
8
Ci = 5 X 10 2 / 10 - 6 = Ci = 5.0 X 10 blancas
D rojas = ( 10 2 / 10 6 ) = ( 10 2 x 10 6 ) = 10 8 = 10 8 rojas
D = 1 X 10 8 rojas
Problema # 12.
1ml
1ml
1ml 1ml
1ml
9ml 9ml
9ml
-3
10
-1 -2
1 10 1ml
10
1ml
Ci = 10 3 Ci = 10 4
Ci = 10 5
2
Cf = 10 C f = 10 2 C f = 10 2
2 3 1; 2 4 -2 2 5 -3
D = 10 / 10 = 10 - D = 10 / 10 = 10 ; D = 10 / 10 = 10
Problema 13
3
2 .5 X 10 algas / ml 5000 bact ---------- 1 alga
Cuntas bacterias hay .? en
(1 cm) 3 = (10 mm) 3 : 1 cm 3 = 10 3 mm 3
a. 3
mm = ?
1 ml= 1 cm 3 10 mm3=1 cm3
(2.5 X 10 3 algas/cm 3 ) X (1 cm3/10 3 mm) = 2.5 algas /mm 3
(2.5) X ( 5 X 103 bact)= 1.25 X 104bact/mm3
b. ml = ?
3
2.5 X 10 algas/ml
3 3
(2.5 X10 algas/ml) X (5 X 10 bact/alga) =
6 7
5 X 2.5 X10 bact/ ml) = 1.25 X 10 bact/ml
C. dm3 = ?
(10 cm) 3 =(dm) 3 .... 10 3 cm 3 = dm 3
(2.5 X 10 3 algas / cm3) X (10 3cm3/dm3 ) X (5X 103 bact/algas)= 1.25 X 10 10

bacterias/ dm3
d. 1 l = ?
1 l = 103 ml = 103 cm 3 = 1 dm 3
1l = 1 dm 3 La respuesta es igual al anterior
e. m 3= ?
1m = 10 2 cm 1 m3 = 106cm3
(2.5 X 10 3 algas/cm3) X (106cm3/m3 ) X (5X 103 bact/algas)= 1.25 X 10 13

bact/m3
Problema # 14.
150 ml ------ 50 colonias
1000 ml ------- X colonias
X = (10 3) X ( 50 / 150 ) = 333.33 = 3.3 X 10 2 bact/l
1m3=?
1m = 10 2 cm 1m = 10 dm 1 dm3 = 1 l
1 m3 = 106 cm 3 1 m3 = 103 dm 3
2 3 3 3 3
(3.3 X 10 bact /dm ) X (1 X 10 dm /m )=
= 3.3 X 105bact /m 3
Problema # 15
5 X 10 3 m 3 agua ; 3 X 10 3 bact/ ml ; bact total = ?
(3 X103 bact /cm3) X (1 X 106 cm3/m 3) X (5 X 103 m3)=1.5 X 1013 bact
1.5 X 10 13 bact X (1 ug / bact )= 1.5 X 10 13 ug X (1 g/106 ug) =
1.5 X 10 7 g
1.5 X 10 7g X (1 Kg/ 103g )= 1.5 X 104 Kg
1.5 X 10 4 Kg X( 1 ton/1.0 X 103 Kg )= 15 Ton
Problema # 16.
Datos:
(2 X 10 3 bact /mm 3); (10 mm )3= 1 cm 3 = 10 3 mm 3 = 1 cm 3
3 3 3 3 3 6 3
(2 X 10 bact /mm ) X (10 mm /cm ) X 50= 2 X 10 bact/cm
6 3 6 8
50 X (2 X 10 bact en 50 cm )= 100 X 10 bact/ 50 ml = 10 bact/50 ml
Problema # 17
MATERIAL DILUENTE DILUCIN
A DILUIR ( ml) TOTAL
(ml)
A 1.5 + 4.5 -1
2.5 X 10
B 4.5 + 1.5 -1
7.5 X 10
C 0.2 + 49.8 -3
1.0 X 10
D 0.5 + 0.5 -4
5.0 X 10
Problema # 18 .
1/2 1/4 1 /8 1/16 1/32 1/64
R/ 1/64 = 0.016 =1.6 X 10-2

Diluciones en Microbiología 2015

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Diluciones en Microbiología 2015

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UNIVERSIDAD DE COSTA RICA

Dra. Mara del Mar Gamboa Coronado

CMO CALCULAR DILUCIONES EN MICROBIOLOGA?

ES UN PROCESO MEDIANTE EL CUAL SE LOGRA LA DISMINUCIN DE LA CONCENTRACIN DE UNA

i tomamos un ml de sustancia X y le agregamos 9 ml de un

Grficamente podemos expresar la situacin as:

Concentracin inicial (Ci) = 1 unidad

Hasta el momento nos hemos referido solamente a sistemas de dilucin

Para lograr grandes diluciones sin el empleo de grandes volmenes de

Si las diluciones son TODAS IGUALES, se dice que la dilucin es SERIADA.

Las diluciones se expresan en diversos modos:

La forma exponencial nos permite expresar en un solo nmero, el exponente,

Por otra parte, en los anlisis qumico-clnicos es raro el caso en el que se

Las unidades en las que se expresa la concentracin tambin son diferentes

Lo que s es comn a todos los sistemas es el que las operaciones se llevan a

Si en el frasco ORIGINAL hubiese 8 millones de clulas por ml, cuntas

Cuntas bacterias habra en el plato de Petri?

Si en el segundo (2do) tubo hubiese 4000 bacterias/ ml,

En el tercer tubo habran 8 x 10 2 bact/ml.

Observe como se expresa la concentracin de bacterias.

Al obtener la dilucin acumulada en el segundo tubo, nos sirve para

Para llevar a cabo la operacin inversa de convertir una expresin

Si 1/ x = 0.125 entonces X = 1/ 0.125 = 8

Cuando por suponer que el numerador de la razn es 1, nos resulta un

En algunos casos el quebrado representa una divisin cuya solucin est

TRABAJE LOS SIGUIENTES EJEMPLOS:

1. Convierta 1/X a su expresin exponencial

2. Convierta la expresin exponencial a su expresin quebrada.

I. Tenemos una suspensin de 800 000 bact/ ml y deseamos hacer un cultivo

Posibles esquemas de trabajo:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Placa

1.0 ml 0.1 ml 0.1 ml = 1 X 10 - 1

En la ltima alternativa obsrvese que al tomar 0.1 ml de la ltima dilucin,

Ensaye otras alternativas mediante las cuales podra resolver el problema

CMO MEZCLAR DOS SOLUCIONES DE

200 ml de alcohol de 70 % contienen

X = 147.37 ml alcohol de 95 % con

MTODO #2 ( Recurrir al siguiente esquema)

Ci = Concentracin 1 era sustancia a mezclarse

Para este problema:

Por Regla de Tres:

70 ml de alcohol de 95% ------------ 95 ml de alcohol de 70%

(70 * 200) / 95 = 147.37 ml

X ml de alcohol de 95% = 147.37 ml

25 ml de agua ------------ 95 ml de alcohol de 70%

( 25 * 200 ) / 95 = 52. 63 ml de agua.

Nota: A 147.37 ml de alcohol de 95% adicionamos suficiente

1. Con alcohol de 10 % y de 90 % deseamos obtener 250 ml de una

R/ 140.63 de 90% y 109.37 de 10%

2. Tomamos 0.1 ml de un cultivo de Escherichia coli y lo depositamos en

3. A partir de un cultivo de bacterias se toma 1 ml y se diluye con 9 ml de

PLACA A PLACA B PLACA C

Cuntas bacterias/ml haba en el cultivo original? Recuerde

4. Deseamos inocular 10000 bacterias a un frasco de medio de cultivo.

5. Cul sera la dilucin necesaria en el problema anterior si deseramos

6. A partir de un cultivo de 9 X 108 bact/ml se hacen diluciones decimales

7. Un cultivo con 9 X 10 8 bact/ml debemos diluirlo lo suficiente para que

a. Haga un esquema de dilucin para el problema anterior empleando

b. Haga un esquema de dilucin para el problema anterior empleando

9. Si un cultivo tuviere 2 X 107 bact / ml y necesitamos diluirlo para que,

10. Ud. pes 10 g de carne molida, la tritur en mortero estril y

de salina y perlas de vidrio. Despus de agitar de forma adecuada la

R / 1.8 X 109 bact/ml

A. Cunto debe diluirse el cultivo para obtener 100 colonias