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Resumen
El anlisis de contenido de acetaminofn en tabletas de Atamel Lote 226132262,
Fecha de expiracin agosto-2015, se realiz a travs de la tcnica analtica HPLC,
siguiendo las especificaciones o mtodos dados por la monografa (Farmacopea
Americana) USP, obtenindose como resultados la presencia de 473,35 mg de
acetaminofn presente en las tabletas de Atamel, lo que equivale a un contenido de
94,67% frente a lo que declara el medicamento. Estos resultados cumplen con los
criterios de aceptacin dados por la monografa ya que se encuentra entre los 90-
110% de lo permitido por USP.

Introduccin

Los anlisis farmacuticos nos suministran informacin sobre la identidad, la pureza, el


contenido y la estabilidad de las sustancias bsicas, los excipientes y los principios
activos farmacuticos. Se realizan, a travs de las especificaciones y los mtodos de
prueba para los ingredientes activos y excipientes descritos en las farmacopeas.

Las farmacopeas son compendios oficiales y detallan los requerimientos legales


relacionados con la identidad, el contenido, la calidad, la pureza, el embalaje, el
almacenamiento y la de asignacin de frmacos y de otros productos de uso
teraputico. Algunos de estos compendios son la Farmacopea de los Estados Unidos
(USP), la Farmacopea Europea (Ph.Eur) nacida de la armonizacin de las
especificaciones de varios pases europeos o la Farmacopea Japonesa (JP). Estas
especificaciones y/o mtodos, se han vuelto imprescindibles para quienes desean
producir, probar, controlar o comercializar productos medicinales.

Los mtodos deben ser validados, para garantizar que los resultados dados son
confiables. Esta validacin se realiza a travs de tcnicas analticas como la
cromatografa liquida de alta eficacia (HPLC), que permite determinar
cuantitativamente los principios activos de frmacos, evaluar la presencia de
impurezas y productos de degradacin.

Cromatografa Lquida de Alta Eficacia

Es una tcnica de separacin que tiene aplicacin en todas las ramas de las ciencias.
Permite cuantificar los analitos en muestras, consecuencia que se produce por la
migracin diferencial en un sistema dinmico constituido por una fase mvil y una fase
estacionaria.
Es el tipo de cromatografa de elucin ms verstil y ampliamente utilizado. Se
emplean para separar y determinar especies en diversos materiales orgnicos,
inorgnicos y biolgicos. Requiere que la muestra sea retenida por la fase
estacionaria, para que pueda ser analizada, y la presencia de una fase mvil que
permita que el analito viaje por la columna cromatografca sin quedar completamente
retenido.

El HPLC est constituido por (1) Bombas, que impulsan la fase mvil hacia el inyector
y la columna, generando altas presiones. (2) Un inyector, permite inyectar la muestra
en solucin sin interrumpir el flujo del solvente a travs del sistema. (3) Columna
Cromatografca, donde se da la separacin del analito, depende de las interacciones
qumicas o fsicas con la fase estacionaria y fase mvil. Y (4) un Detector que recibe la
seal de analito.

Los detectores ms usados en cromatografa lquida se basan en la absorcin de


radiacin ultravioleta o visible. En equipos modernos, se usan detectores de diodos
que debido a su alta especificidad permiten detectar e identificar un compuesto. Estos
detectores miden la cantidad de luz que incide en los fotodiodos para determinar la
absorbancia de la muestra a travs de la cubeta de flujo, realizando un barrido de
longitudes de onda con el fin de obtener un espectro. Nos permite obtener informacin
ms detallada de una muestra como su pureza, cromatograma y espectro.

Acetaminofn

El acetaminofn o paracetamol es un frmaco con propiedades analgsicas y


antipirticas. Inhibe la sntesis de prostaglandinas, las cuales son mediadores
celulares responsables de la aparicin del dolor.

El paracetamol est estructuralmente emparentado con la anilina y con el fenol,


compartiendo caractersticas qumicas de ambos, de peso molecular 151,17 g/mol.
Desde el punto de vista cido-base es un cido muy dbil con un pKa de 9,4. Es
escasamente soluble en agua fra pero mayormente soluble en agua caliente, soluble
en metanol, etanol, dimetilformamida, diclorometano, acetona y acetato de etilo, pero
es prcticamente insoluble en ter de petrleo, pentano y benceno.
Es un medicamento que proviene en forma farmacuticas de tabletas, tabletas
masticables, cpsula, suspensin o solucin (lquido), comprimidos de liberacin
prolongada, entre otros. De alto consumo para el dolor, fiebre y/o malestar general. Su
nombre proviene de la nomenclatura tradicional de la qumica orgnica N-acetil-para-
aminofenol y para-acetil-aminofenol.

Figura 1. Estructura Qumica Acetaminofn.

En este informe se realiz la determinacin de contenido de una muestra de


acetaminofn 500 mg vencida de nombre comercial Atamel de la industria
farmacutica Phizer, con el fin de determinar el contenido, calidad y pureza de
producto.

Objetivos

General

Determinacin de contenido de Acetaminofn 500 mg en muestra vencida a travs de


Cromatografa de Alta Resolucin HPLC.

Especficos

Determinacin de Pureza de patrn


Determinacin de Platos tericos
Comparacin de muestra de acetaminofn con respecto a una misma muestra
sometida a estrs.
Determinacin de % disuelto de acetaminofn en Atamel 500 mg.

Materiales y mtodos

Procedimiento de valoracin

Fase Mvil

Composicin: Metanol y Agua (1:3)


La fase mvil fue mezclada segn el orden especificado en la composicin, filtrada al
vaco, a travs de un papel de filtro de 0,22 m, y llevada a un proceso de
desgasificacin, para eliminar la presencia de gases disuelto: (1) 10 min de aplicacin
de vaco y (2) 10 min de Ultrasonido.

Solucin Patrn de Acetaminofn

Patrn de acetaminofn: SIGMA CHEMICAL CO, Lote 32H0583.

Para la solucin madre, se pesaron 25 0,1 mg de patrn, llevados a un matraz


volumtrico de 50 mL y fue enrazado con fase mvil. De la solucin madre se tom 1
mL de solucin y fueron llevados a un matraz volumtrico de 50 mL. Se enrazo con
Fase mvil.

Muestra Acetaminofn Tableta

Medicamento: Atamel. Laboratorios Phizer. Lote 226132262, Fecha de expiracin


agosto-2015. Principio Activo: Acetaminofn 500 mg.

Se pesaron y se redujeron a polvo fino 3 tabletas de acetaminofn. Se determin el


peso promedio (Pp) y se pesaron dos muestras de 1/25 de Peso promedio. Las
muestras fueron transferidas a un matraz volumtrico de 50 mL, se llevaron a 10 min
de agitacin mecnica y 5 min de ultrasonido, se enrasaron con Fase mvil.
Finalmente, se tomaron 1 mL de solucin de muestra y llevado a un matraz
volumtrico de 50 mL. Obtenindose dos soluciones de muestras de 0,01 mg/mL.

Muestra sometida a Estrs con HCl 1N

Se pesaron 20,8 0,1 mg de una muestra de Atamel y se trat con aproximadamente


5 mL de HCl 1 N, se dej en reposo por aprox. De 15 min y se prosigui a tratar con
10 min de agitacin mecnica y ultrasonido, se enrazo con fase mvil en un matraz
volumtrico de 50 mL. Se tom 1 mL de la solucin y se llev a un segundo matraz
volumtrico de 50 mL.

Sistema Cromatogrfico

Modo: HPLC

Bomba de gradiente: Waters 600E de cuatro reservorios. Usada de manera isocrtica.

Sistema de inyeccin: Waters 717 plus Autosampler.

Detector: UV con Arreglo de Diodos, Waters 996. A 234 nm.


Columna: Relleno L1

Velocidad de Flujo: 1 mL/min.

Volumen de inyeccin: 0,70 mL/min.

Resultados

Solucin Patrn

Inyeccin de Patrn Tiempo de retencin rea rea Promedio


1 601933
3,7 601288
2 600643
Tabla 1. Tiempo de Retencin y rea Promedio obtenida para lo solucin patrn de
Acetaminofn.

Muestras de Acetaminofn Tabletas

Tiempo de Masa de
Muestra rea
retencin Acetaminofn (mg)
466441 484,947813
1
460894 479,1807267
3,7
450567 468,443986
2
443248 460,8345926
Tabla 2. Masa de acetaminofn presentes en las muestras de Atamel 500 mg.

Muestra Masa de Masa de Desviaci


Acetaminofn Acetaminofn en n %CV
Promedio (mg) Atamel estndar
1 482,0642699 12,32132 2,602994
473,3517796
2 464,6392893 19 74
Tabla 3. Resultados obtenidos para el anlisis de contenido de Atamel por HPLC.

% Acetaminofn en Atamel 94,67


Tabla 4. Porcentaje de Acetaminofn presente en Atamel, frente a la cantidad que
declara el medicamento.

Nmero de Platos 2844,44


Factor de Cola/Simetra 1,1
CV% 2,6
Tabla 5. Aptitud del Sistema Cromatogrfico

Discusin
Las farmacopeas, compendios oficiales que detallan los requerimientos legales para
productos de uso teraputico, describen los procedimientos de valoracin que
permiten saber si un frmaco cumple con los criterios de aceptacin legales que
garantizan su calidad. En la farmacopea americana (USP) podemos conseguir en el
procedimiento de valoracin para el frmaco Acetaminofn, en sus distintas formas
farmacuticas. Para el desarrollo de este trabajo se tom como base el procedimiento
de valoracin para acetaminofn en tabletas, el cual define que las tabletas de
acetaminofn contienen no menos de 90,0% y no ms de 110,0% de la cantidad
declarada de acetaminofn.

En el estudio de contenido de la muestras se llev a cabo, a travs de la tcnica


analtica cromatografa de alta eficacia, como lo exige la monografa oficial. Algunos
parmetros del sistema cromatogrfico fueron modificados, con la finalidad de adquirir
las mejores condiciones cromatogrficas y evitar daos en el equipo. Se llev a cabo
la adecuacin del sistema para el HPLC, inyectndose solucin patrn a volumen de
inyeccin de 1 mL/min, segn condiciones de la USP, para observar las condiciones
de trabajo. Debido a que la presin del sistema era muy alta alrededor de 2400 psi con
una salida del pico de acetaminofn en un tiempo de 3 min, se cambi la velocidad de
flujo a 0,70 mL/min con el fin de evitar daos en la columna cromatografca;
obtenindose una presin de 1800 psi y un tiempo de retencin del pico de la solucin
patrn de acetaminofn de 3,7 min.

Imagen 2. Cromatograma Solucin Patrn de Acetaminofn.

Debido a las modificaciones del sistema cromatogrfico se realiz un estudio de la


adecuacin del sistema. Se realizaron cinco inyecciones del patrn obtenindose un
coeficiente de variacin menor al 2 %, para los valores de rea y tiempo de retencin,
lo cual nos indica que el sistema cromatogrfico es adecuado para el anlisis de
acetaminofn.

Inyeccin Patrn rea Tiempo de Retencin


Acetaminofn
1 603361 3,683
2 607412 3,699
3 600659 3,698
4 610308 3,715
5 610361 3,709
Promedio 608420,1 3,701
Desviacin Estndar 3120,761 0,012
% CV 0,513 0,34
Tabla 6. Resultados obtenidos para la adecuacin del sistema.

Imagen 3. Cromatograma de las Inyecciones de solucin patrn.

El uso de un detector UV-Visible con arreglo de diodos, nos permiti de una manera
sencilla detectar e identificar el principio activo de las muestras, realizando una
comparacin del Cromatograma de la solucin patrn y el de la muestras,
obtenindose los mismos Cromatogramas.
Imagen 4. Cromatograma de mltiples inyecciones de la muestra (Atamel).

Para garantizar que los Cromatograma obtenidos para el medicamento son


confiables, se realiz un estudio de pureza de la solucin patrn de acetaminofn,
estudiando la curva de similitud (PA) y la curva del umbral de ruido (TH), obtenindose
un valor de PA < TH, lo cual indica que el pico obtenido en el Cromatograma es puro,
es decir, que el compuesto orgnico analizado es acetaminofn.

Imagen 5. Pureza de Pico de solucin patrn.

Observando los resultados de pureza (Imagen 5) y los cromatogramas del patrn y la


muestra (Imgenes 3 y 4) podemos confirmar la especificidad del mtodo, ya que el
pico de acetaminofn mantiene su tiempo de retencin saliendo siempre en el mismo
lugar, indicando que el mtodo es especfico para el Acetaminofn.
Una Muestra sometida a estrs nos permite de otra manera demostrar la especificidad
de un mtodo, demostrando que los resultados no estn indebidamente afectados por
productos de degradacin. Cuando sometemos una muestra a condiciones especiales
que aceleren su degradacin podemos determinar la estabilidad del principio activo.
Este tipo de muestras se le conoce como "stressed sample".

Imagen 6. Muestra de Atamel sometida a Estrs con HCl 1N.

Observando la imagen 6, y comparando con la imagen 4, podemos notar que para la


muestra no existe variacin del tiempo de retencin, y no aparecen otros picos en el
cromatograma que indique que la muestra haya sido afectada, lo cual indica que la
muestra es estable frente al HCl 1N. Para asegurarnos que el pico dado por el
cromatograma fuese el correcto, se realiz el estudio de pureza de la muestra bajo
estrs de HCl 1N, obtenindose que los valores de PA TH lo cual nos indica que el
pico obtenido en el cromatograma es de acetaminofn.

Imagen 7. Pureza de muestra de Atamel sometida a estrs con HCl 1N.


Anlisis Cuantitativo

La monografa oficial USP indica que el coeficiente de varianza (%cv) para la tcnica
analtica HPLC, es no ms del 2%. Comparando los valores obtenidos en la Tabla 3 de
la cantidad de acetaminofn presente en Atamel, el %cv es de 2,60 mayor al 2%.
Valores de %cv menores a 2, indican que el mtodo es confiable. En el caso de esta
prctica podemos observar una diferencia poco significativa entre los %cv, lo cual se
puede atribuir a la fecha de vencimiento de la muestra, causando que la cantidad del
frmaco presente disminuya. Si observamos la Tabla 2, podemos notar que la masa de
acetaminofn presente en Atamel es de 473,35 mg, a pesar de la cantidad que este
declara la cual es de 500 mg, es decir que, el medicamento Atamel de lote 226132262
con fecha de expiracin agosto-2015, posee un porcentaje de acetaminofn de
94,67%. A pesar de ser un medicamento con aproximadamente 6 meses de
expiracin, el porcentaje de acetaminofn que presenta, se encuentra entre los lmites
dados por la monografa oficial USP. La cual declara que las tabletas de acetaminofn
contienen no menos del 90,0% y no ms del 110,0% de la cantidad que declara,
cumpliendo con los criterios de aceptacin segn la monografa oficial.

La USP indica los requisitos que se deben obtener para la aptitud adecuada del
sistema, los cuales definen que: (1) para la Eficiencia de la Columna se debe obtener
no menos de 1000 platos tericos, (2) Factor de Simetra no ms de 2 y (3) un valor de
Desviacin Estndar relativa no mayor del 2%.

Al dirigirnos a la Tabla 5 de resultados, podemos observar que los valores de numero


de platos y de simetra, cumplen con el requisito indicado a la monografa oficial,
siendo N= 2844,44 (Numero de platos tericos) mayor al valor establecido por la USP
y T=1,1 (Factor de simetra) menor. El valor de la desviacin estndar relativa posee
una diferencia de 0,6% con respeto al valor requerido por la monografa, es una
diferencia pequea que puede ser causa de la fecha de expiracin de la muestra, por
lo cual podemos considerar que este requisito tambin se cumple. Obtenindose por
los tres parmetros al aptitud adecuada del sistema.

Conclusiones

Las condiciones cromatogrficas del sistema cumplen con la adecuacin de la


metodologa de anlisis para el acetaminofn.
Los cromatogramas del patrn y muestra son puros del principio activo
Acetaminofn.
El medicamento Atamel Lote 226132262, fecha de expiracin agosto-2015.
Cumple a la fecha, con los criterios de aceptacin de la USP con un porcentaje
de acetaminofn de 94,67%.
La muestra de Atamel Lote 226132262, fecha de expiracin agosto-2015.
Presenta una cantidad de 473,35 mg de acetaminofn, inferior al valor que
declara el medicamento.
Las aptitudes del sistema fueron las adecuadas para el anlisis de
Acetaminofn en la muestra del medicamento de nombre comercial Atamel
Lote 226132262, fecha de expiracin agosto-2015.

Clculos

Contenido de Acetaminofn

|Muestra| Masa patrn


Contenido= x x Peso Promedio
|Patrn| Masa Muestra

Porcentaje de Acetaminofn

Contenido Acetaminofn
%Acetaminofn= x 100
Contenido que declara

Bibliografa

Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica, USP 35 NF 30, Apartado


<631> Procedimiento de Disolucin: Desarrollo y Validacin, vol. 1.
CENGAGE Learning, Skoog. West. Fundamentos de Qumica Analtica.
Octava edicin. Captulo 30 y 32.
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica, USP 35 NF 30, Monografias
USP, Acetaminofeno Tabletas.