Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Laboratorio de Mtodos de Anlisis

Determinacin del peso molecular de una protena

usando cromatografa por exclusin molecular.

Profesor: Marco Antonio Ramrez Quezada

Alumna:
Conchita alonso

Grupo: 4IM1 Semestre: 15/2 Seccin: 3

OBJETIVOS:
 Utilizar el gel apropiado para eluir protenas de peso molecular conocido
y determinar su volumen de elucin Ve.
Realizar una grafica que relacione los volmenes de elucin relativos
(Ve/Vo), y el logaritmo de los pesos moleculares de las protenas patrn.
Determinar el peso molecular de una protena problema por
interpolacin de su Ve relativo en la grafica anterior.
Mencionar las ventajas y limitaciones del mtodo.

FUNDAMENTO:

La cromatografa por exclusin molecular se basa en el uso de una fase

estacionaria que tiene una estructura porosa, en la que pueden penetrar
molculas pequeas, pero no las grandes. Las molculas se separan por
tamaos: las molculas grandes se mueven ms rpidamente que las
pequeas.

RESULTADOS:

Tabla 1. Determinacin del volumen de vacio (Vo)

No. De Volumen A615

fraccin de
elucin
(mL)
1 3 0
2 6 0.002
3 9 0.013
4 12 0.004
5 15 0.039
6 18 0.879
7 21 0.6
8 24 0.109
9 27 0.027
10 30 0.016
 Determinacin de volumen vaco(Vo)
1

0.8

0.6
A615 0.4

0.2

0
0 5 10 15 20 25 30 35

v(ml)

Tabla 2. Determinacin del volumen de elucin de las protenas.

Volum Absorbancia
en de tripsina Hemoglo Peroxid Proble
eluci bina asa ma
n
3 0 0 0 0
6 0 0 0 0
9 0 0 0 0
12 0 0 0 0.049
15 0 0.254 0 0.276
18 0 1.190 0.26 0.603
21 0 1.011 0.89 0.661
24 0.03 0.961 0.793 0.705
27 0.101 0.708 0.449 0.773
30 0.118 0.425 0.186 0.646
33 0.136 0.140 0.066 0.592
36 0.063 0 0.013 0.561
39 0.017 0 0 0.528
42 0.057 0 0 0.478
45 0.066 0 0 0.488
48 0.028 0.298
51 0.045 0.186
54 0 0.109
57 0 0.070
60 0 0.081
63 0.047
 66 0.019

Determinacin del volumen de elucin de las protenas

1.2

0.8
tripsina
hemoglobina
0.6
A peroxidasa
problema
0.4

0.2

0
0 3 6 9 12151821242730333639424548515457606366

v(ml)

Protenas Vo(mL) Ve(mL) Ve/Vo PM (orden logPM

creciente)
Hemoglobi 4.8095597
18 18 1 64500
na 1
Peroxidasa 1.1666666 4.6439459
18 21 44050
7 1
Tripsina 1.8333333 4.3802112
18 33 24000
3 4
Problema 18 27 1.5 ? ?
 Metodo de Andrews y Whitaker
2
1.8
f(x) = - 2.04x + 10.73
1.6
R = 0.96
1.4
Ve/Vo 1.2
1
0.8
0.6
4.35 4.4 4.45 4.5 4.55 4.6 4.65 4.7 4.75 4.8 4.85

logPM

Para determinar el peso molecular del problema:

De la grafica se tiene la ecuacin de la recta y=-2.035x + 10.72 despejamos a

x con el valor de Ve/Vo de nuestro problema

1.510.72
X= 2.035 =4.5307

Como esto es log PM=4.5307

PM=104.5307=33939.07 daltones

Preguntas extra:

a) Cul fue el peso molecular estimado por interpolacin, de la protena

problema? Qu protena por comparacin con las otras puede ser?

R: El PM estimado fue 33939.07 daltones y la protena por comparacin

puede ser peroxidasa.

b) Mencione cinco mtodos para determinar el peso molecular.

R: elecroforesis en geles d epoliacrilamida, ultracentifugacion,

c) Mencione ventajas y desventajas del mtodo usado.

R:

DISCUSIN:
Comparando ese peso molecular obtenido el problema con el de nuestras
muestras conocidas podemos decir que se trata de peroxidasa ya que es a la
protena que ms se acerca en peso molecular a nuestros resultados obtenidos.

Este mtodo nos da la ventaja de que es rpido y fcil de realizar y si se realiza

de manera correcta nos dar resultados apreciables pero la desventaja es que
no es exacto ya que se determina la protena con referencia a su volumen de
elucin relativo no real.

CONCLISION:

Determinamos el volumen de elucin de tres muestras problema:

tripsina, hemoglobina y peroxidasa.
Construimos la grafica de Andrews y Whitaker para determinar interpolar
el volumen relativo de nuestra muestra.
Nuestra muestra segn los resultados fue peroxidasa.

BIBLIOGRAFIA:

Daniel C. Harris. Anlisis qumico cuantitativo.2006 p.c. 774