INTRODUO

A colorao de Gram usada para classificar as bactrias em relao forma,

tamanho, morfologia celular e propriedade tintorial. A colorao de Gram foi originalmente
descrita por Christian Gram em 1884 e modificada por Hucker em 1921, comumente usada na
prtica bacteriolgica devido proporcionar uma melhor estabilidade dos reagentes e melhor
diferenciao dos microrganismos. O mtodo de Gram se baseia no fato de que quando certas
bactrias so coradas pelo o cristal violeta (corante azul) e depois tratadas pela soluo de
iodo iodetada (lugol), forma-se um composto de colorao escura entre o iodo e o corante,
que fortemente retido por um grupo de bactrias e no pode ser removido pelo
descoramento subsequente com o lcool gram positiva. Outras bactrias, denominadas gram
negativas, deixam-se descorar facilmente pelo lcool. Ento, as bactrias gram negativas
aparecero coradas em vermelho, ao passo que as gram positivas aparecero coradas em roxo.
O mecanismo da colorao de Gram est baseado na diferena de permeabilidade da parede
celular. As bactrias gram negativas apresentam uma elevada concentrao de lipdeos e uma
delgada parede celular quando comparadas com as bactrias gram positivas. Sugere-se que
quando h o tratamento com lcool, os lipdeos das bactrias gram negativas so retirados da
parede celular, aumentando a permeabilidade da mesma e fazendo com que estas bactrias
percam o primeiro corante (cristal violeta). As bactrias gram positivas, por possurem uma
menor concentrao de lipdeos, se tornam desidratadas com o tratamento pelo lcool,
diminuindo a permeabilidade da parede celular e retendo o primeiro corante.

OBJETIVO

Desenvolver habilidades para executar as tcnicas de preparao de esfregaos e para o mtodo

de colorao de Gram, sabendo diferenciar e classificar as bactrias de acordo com a colorao
obtida. Desenvolver a habilidade, tambm, para utilizar o microscpio ptico, observando as
bactrias aps a colorao de Gram.
 MATERIAL

Lmina
Bico de Bunsen
Microscpico
Cristal Violeta
Lugol
Safranina e lcool
Placa de petri contendo o meio de cultura

PROCEDIMENTO

1. Antes de tudo, foi-se coletada uma amostra do ar oriundo de um tanque de decantao do

esgoto do bloco C da Universidade Estadual da Paraba;
2. Esperou-se quatro dias at o desenvolvimento da colnia de bactrias; e 24 para a colnia de
fungos, porm nesta prtica analisaremos somente as bactrias.
3. Lavar a lmina com gua e sabo e/ou lcool e ter. Secar a lmina e verificar se toda a
gordura foi removida;
4. Colocaram-se duas gotas do lquido contendo a suspenso na lmina. Espalhou-se sobre
uma rea de cerca de 1,5 cm de dimetro.
5. Passou-se o esfregao 3 vezes sobre a chama do bico de Bunsen para fixao do mesmo.
6. Deixou-se o esfregao secar na estufa.
7. Adicionou-se o Cristal violeta, aguardar 1 minuto.
8. Aplicar soluo de Lugol esperar 60 segundos. Lavar com gua.
9. Descorar com lcool absoluto at que todo o corante seja removido.
10. Corou-se com safranina e foi esperado 30 segundos.
11. Lavou-se e secou-se.
12. Examinou-se no microscpico com a objetiva de imerso.

CONCLUSO

Depois de aplicarmos o teste de colorao de Gram, observamos que as colnias bacterianas

em primeiro lugar apresentavam uma colorao avermelhada, o que de acordo com o que
aprendemos em aula consiste em classific-la como sendo Gram ( - ), j que as bactrias Gram
(+) apresentam uma colorao azulada/rosa, o que no era o caso.
Ainda observando essa lmina em microscpio, depois de determinar se era gram (+) ou
(-), partimos para observao da forma apresentada pela colnia, e podemos observar que ela se
dispunha espalhada pelo campo visual em forma de bastes alongados. Conclumos pela
estrutura apresentada que se tratava de um Bacilo.

REFERNCIA BIBLIOGRFICA

Apostila de Microbiologia Experimental. 2011

Colorao de Gram: disponvel em: http://pt.scribd.com/doc/23341096/Aula-
Pratica-de-coloracao-de-Gram