ACTIVIDAD PROTEOLITICA DE LA PAPAINA

Y EL EFECTO DE ALGUNOS INHIBIDORES

Neyder Jhuranny Doria Vidal 74165

Esneider Alexander Perilla Vergara 73839

OBJETIVOS

Determinar el grado de actividad proteoltica de la papana por medio de anlisis

cualitativos en el mtodo de coagulacin.
Establecer el mejor mtodo de concentracin de la papana para un mayor
desarrollo de actividad proteoltica.

RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS

PAPAINA

1. NATURALEZA DELA ACTIVIDAD

PROTEOLTICA DE LA PAPANA.

Formacin cogulos, formacin de fase.

Esta imagen se trata de un inhibidor no
competitivo pues se precipita sobre la
enzima unindose a l en un lugar
diferente al centro activo y modificando su
estructura lo que dificulta que el enzima se
Figura 1. pueda unir con el sustrato.

2. NATURALEZA DELA ACTIVIDAD

PROTEOLTICA DE LA PAPANA

La actividad de papana utilizada con EDTA

en combinacin tiene un efecto protector
sobre la actividad proteoltica, el uso del
EDTA menos del 50% peso a peso
disminuye la actividad final de la papana,
en este caso hubo una realizacin de poco
Figura 2. cogulos.
 3. NATURALEZA DELA
ACTIVIDAD PROTEOLTICA
DE LA PAPANA.

Formacin de cogulos la formacin

del precipitado por causa enzimtica
suceden por hidrolisis de los enlaces
peptdicos de la papana por accin de
las enzimas proteolticas.

Figura 3.

4. NATURALEZA DELA
ACTIVIDAD PROTEOLTICA
DE LA PAPANA.

La accin de la enzima papana tiene por

objetivo la demolicin de protenas
especificas presentes en el intermedio del
ensayo (generador de fases).el
coadyuvante especifico garantiza la
estabilizacin clarificante del ensayo que
surge durante la adecuada transformacin.

Figura 4.
ABLANDADOR DE CARNE

1. NATURALEZA DELA ACTIVIDAD

PROTEOLTICA DEL
ABLANDADOR DE CARNE.

Tiende a modificar el grado de ionizacin

de todos o algunos grupos ionizables de la
molcula de la actividad de la enzima -
Los pH extremos cambian el grado de
ionizacin de numerosos grupos de la
enzima, alterando su estructura
tridimensional. Si estos estn en el sitio
FIGURA 5. activo, la actividad cambia notablemente.
Como lo vemos en la siguiente fotografa
formacin de cogulos.

2. NATURALEZA DELA ACTIVIDAD

PROTEOLTICA DEL
ABLANDADOR DE CARNE:

Formacin de pocos cogulos, la

utilizacin de EDTA sobre este ensayo
disminuye la actividad final debido al
cambio de PH, esta solucin posee un
efecto anticoagulante por esta razn
conduce a una actividad proteoltica menor.

Figura 6.

3. NATURALEZA DELA ACTIVIDAD

PROTEOLTICA DEL
ABLANDADOR DE CARNE.

En la Figura 3 se representa el perfil de

actividad en funcin del pH. El pH ptimo
del extracto es alrededor de 7, si se utiliza
sustrato y la reaccin ocurre durante 20
minutos. El preparado enzimtico fue
menos activo a valores de pH ligeramente
cidos; no se observaron diferencias
significativas al conducir la reaccin a pH
se observa el comportamiento de la
Figura 7. estabilidad de la enzima en funcin del pH.
El extracto enzimtico es ms estable en el
rango de pH de 3 a 9.
 4. NATURALEZA DELA ACTIVIDAD
PROTEOLTICA DEL ABLANDADOR
DE CARNE.

La actividad enzimtica sobre la protena

del ablandador de carne resulta ser mayor
entre los PH 8-9 al utilizar una
concentracin baja de la protena, pero
cuando este aumenta la actividad
enzimtica se recupera alcanzando
Figura 8. valores similares a lo obtenido.

PRUEBA ENZIMTICA DEL

ABLANDADOR DE CARNE.

La actividad proteoltica de los diferentes

ensayos de ablandadores para carnes
tiene un comportamiento muy similar, con
respecto al tiempo, se observa que posee
un efecto anticoagulante por esta razn
conduce a una actividad proteoltica
menor.

Figura 9.

1. PRUEBA ENZIMTICA PAPANA

Las proteasas se refieren a un grupo de

enzimas que tienen como funcin cataltica
hidrolizar enlaces peptdicos de protenas.
En este caso la papana, es una protena
que pertenece al grupo de las cistena
-proteasas Para que la enzima sea activa
es necesario hidrolizar su precursor en un
sitio determinado.

Figura 10.
 Su actividad depende dela presencia de
uno o ms grupos sulfidrilo en una
hidrolasas, hidrolizan los enlaces
peptdicos delas protenas y pptidos en
este caso la leche, el grupo sulfidril del sitio
activo de una proteasa cisteinica participa
como nuclefilo en el mecanismo
cataltico.
Figura 11.

CONCLUSIONES

En los anlisis de actividad enzimtica con el mtodo de coagulacin de leche se

obtuvo una gama de tiempo de coagulacin a las diferentes concentraciones de
enzima de papana adicionada a la leche observando que a medida que aumenta
la concentracin de papana diluida y agregada a la leche el tiempo de
coagulacin disminuye.

COMPLEMENTOS

1. Especificidad de enzimas proteolticas: (Tripsina, Quimotripsina, Renina y

Pepsina).

TRIPSINA

La tripsina es una enzima peptidasa, que rompe los enlaces de las protenas mediante
hidrlisis para formar pptidos de menor tamao y aminocidos. La tripsina es producida
en el pncreas y secretada en el duodeno (parte del intestino), donde es esencial para la
digestin. El pH ptimo es 8 y la temperatura ptima es 37 C. Es una enzima especfica
ya que liga al pptido en las posiciones del carboxilo de residuos Arginina (Arg) o Lisina
(Lys) en la cadena, ambos aminocidos con grupos R cargados positivamente,
fragmentando al pptido inicial.

La tripsina es producida por el pncreas en forma de tripsinogeno (enzima inactiva), y

luego es activado en el duodeno por la enteroquinasa intestinal a tripsina (enzima activa)
mediante corte proteoltico. EN EL INTESTINO DELGADO donde acta hidrolizando
pptidos en sus componentes estructurales bsicos conocidos como aminocidos (stos
pptidos a su vez son el resultado de la actividad de la enzima pepsina, que degrada
protenas en el estmago). Esto es necesario para el proceso de absorcin de las
protenas presentes en la comida, ya que a pesar de que los pptidos son mucho ms
pequeos con respecto a las protenas, son an demasiado grandes para ser absorbidos
en el leo. La tripsina realiza la hidrlisis de los enlaces peptdicos. El mecanismo
enzimtico es igual al de las otras Sern proteasas: una trada cataltica convierte a la
serina del sitio activo en nucleoflica. Esto se logra modificando el ambiente electrosttico
de la serina. La reaccin enzimtica catalizada por las tripsinas es termodinmicamente
favorable pero tiene una alta energa de activacin (es cinticamente desfavorable). Las
tripsinas tienen un pH ptimo de operacin de 8 y una temperatura ptima de operacin
de 37 C.

El residuo de aspartato (Asp 189) localizado en la regin cataltica (S1) de las tripsinas
tiene la funcin de atraer y estabilizar lisinas y argininas (ambas cargadas positivamente)
y por ello es responsable de la especificidad de la enzima. Esto significa que las tripsinas
predominantemente cortan protenas en el extremo carboxlico ( extremo C-terminal) de
sus residuos de lisinas y argininas, excepto cuando el residuo siguiente es una prolina.
Las tripsinas son endopeptidasas, esto es, el corte se lleva a cabo en medio de la cadena
peptdica y no en los residuos terminales de la misma.

La actividad de las tripsinas no es afectada por el inhibidor fenilalanilclorometilcetona

(TPCK), quien desactiva la quimiotripsina. Esto es importante porque, en algunas
aplicaciones, como en la espectrometra de masas, la especificidad del corte es
importante.

QUIMOTRIPSINA

La quimotripsina se sintetiza por biosntesis proteica como un precursor denominado

quimotripsingeno enzimticamente inactivo. Se rompe por accin de la tripsina en dos
partes que permanecen unidas por un enlace S-S, y estas molculas de
quimotripsingeno pueden activar a otras eliminando dos pequeos pptidos en una
trans-proteolisis. La molcula resultante es una quimotripsina activa, una molcula
tripeptdica interconectada por enlaces disulfuro.

La quimotripsina es una enzima proteoltica que actan en los sistemas digestivos de los
mamferos y otros organismos. Facilita la rotura de enlaces peptdicos por reacciones
hidrolticas, un proceso que a pesar de ser termodinmicamente favorable ocurre de
forma extraordinariamente lenta en ausencia de catalizadores. El principal sustrato de la
quimotripsina incluye el triptfano, tirosina, fenilalanina y metionina, que son hidrolizados
en el carboxilo terminal. Al igual que muchas proteasas, la quimotripsina tambin hidroliza
enlaces ster in vitro, caracterstica que permite la utilizacin de sustratos anlogos como
el ster N-acetil-L-fenilalanina-p-nitrofenil para anlisis enzimticos.

La quimotripsina rompe los enlaces peptdicos actuando sobre el grupo carbonilo no

reactiv con un potente nuclefilo, el residuo 195 de serina que se ubica en el centro
activo de la enzima, que se une covalentemente al sustrato formando un intermediario
enzima-sustrato.
Estos descubrimientos se basan en ensayos de inhibicin y de cinticas de los sustratos
mencionados, aprovechando que en intermediario enzima-sustrato p-nitrofenolato tiene
color amarillo, lo que permite medir su concentracin mediante tcnicas de absorbancia a
400 nm.

Se ha descubierto que la reaccin de la quimotripsina con su sustrato ocurre en dos

etapas, un primera fase de "ignicin" al principio de la reaccin y un estado estacionario
posterior, siguiendo la cintica de Michaelis-Menten. La forma de actuar de la
quimotripsina se explica como una hidrlisis que ocurre en dos pasos: primero se acila el
sustrato para formar un intermediario enzima acilada que posteriormente pierde el grupo
acil para devolver la enzima a su estado original.

Clulas alfa y glucagn. Los grnulos secretores que contienen glucagn de las clulas
alfa poseen un contenido electronicodenso que llena las vesculas secretoras aun
despus de fijado. Tienen una gran zona central esfrica muy electronicodensa rodeada
por un reborde angosto menos electronicodenso. Su dimetro es de 250 a 300 nm. El
glucagn aumenta el nivel de glucosa sangunea al estimular la formacin de este
carbohidrato a partir del glucgeno almacenado en hepatocitos. Tambin ejerce efecto y el
metabolismo de protenas y grasas. La liberacin del glucagon es inhibida por la
hiperglucemia.

Clulas beta e insulina. Los grnulos insulingenos secretores de las clulas beta poseen
un centro cristalino electronicodenso de forma irregular. Su contenido se separa de la
membrana limitante despus de la fijacin. Su dimetro es similar al de los granulo de
clulas alfa. La insulina es sintetizada en el retculo endoplsmico rugoso en forma de un
polipptido llamado preproinsulina que se transforma en proinsulina, que posee la misma
actividad hormonal aunque no de la misma magnitud que la insulina. La proinsulina se
modifica en el aparato de Golgi y las vesculas secretoras que salen del complejo
mencionado contienen la hormona insulina. La insulina es secretada en reaccin a la
hiperglucemia y tambin por algunas hormonas pptidas como glucagon, colecistocinina-
pancreocimina y secretina. Sus acciones principales son estimular la captacin de glucosa
en varios tipos de clulas, y disminuir el nivel de glucosa sangunea, al estimular la
conversin de glucosa en glucgeno en los hepatocitos y miocitos, siempre que aumente
dicho nivel.

Clulas delta, somatostatina. Las clulas delta poseen grnulos secretores ms grandes y
menos electronicodensos que las clulas alfa y beta, y sus organelos secretores son
menos notables. La somatostatina es una neurohormona pptida y neurotransmisora que
inhibe la liberacin de la hormona del crecimiento, de la insulina, el glucagon e incluso de
la propia somatostatina pancretica. La regulacin mutua de la actividad secretora entre
las clulas alfa, beta y delta sugiere fuertemente alguna disposicin especial que facilita la
regulacin directa de una clula con otra, mecanismo conocido como regulacin
paracrina.

http://emecolombia.foroactivo.com/t429-tripsina-y-quimiotripsina
RENINA

La renina es la enzima que limita la sntesis de angiotensina II y la activacin del sistema

renina-angiotensina (SRA), por lo que desde hace ms de 50 aos se ha intentado
desarrollar frmacos activos por va oral capaces de inhibir directamente la renina.
Recientemente se ha demostrado que prorrenina y renina son molculas activas que
interactan con un receptor especfico, (P)RR, y que su estimulacin activa diversas vas
de sealizacin independientes de las activadas por la angiotensina II. Aliskiren, el primer
inhibidor directo de la renina (IDR) no peptdico, activo por va oral, ha mostrado eficacia y
seguridad en el tratamiento de la hipertensin arterial. Este artculo revisa el desarrollo de
los IDR, el papel fisiopatolgico de la prorrenina y la renina, la estructura y las vas de
sealizacin acopladas a la activacin del (P)RR, el mecanismo de accin y las posibles
diferencias, ventajas y/o desventajas de los IDR con respecto a otros frmacos que
inhiben el SRA, como los inhibidores de la enzima de conversin y los antagonistas de los
receptores AT1.

La renina es una aspartil proteasa (EC 3.4.23.15) de 340 aminocidos (35-45 kDa) que se
sintetiza como una proenzima, la prorrenina, fundamentalmente en las clulas
mioepiteliales del aparato yuxtaglomerular renal, aunque algunos tejidos (retina, testculo,
adrenal, ovario, placenta, glndulas salivales, mastocitos y cerebro) tambin pueden
sintetizar prorrenina. A diferencia de otros miembros de la familia de las aspartil
proteinasas (p. ej. catepsina G, pepsina, toninas), la renina presenta una marcada
especificidad por su nico sustrato, el angiotensingeno, lo que convierte a la renina en
una diana ideal para el desarrollo de frmacos antihipertensivos, los IDR. Sin embargo, la
secuencia peptdica de la renina presenta importantes variaciones segn la especie
animal, razn por la que el estudio preclnico de los IDR debe realizarse en primates o en
ratas transgnicas que expresan la renina y el angiotensingeno humanos.

La molcula de renina consta de dos lbulos homlogos, separados por una hendidura,
en la que se localiza el centro activo de la enzima, que contiene dos residuos de cido
asprtico (Asp y Asp) localizados en cada uno de los lbulos. El punto activo de la renina
puede acoger siete de los aminocidos del angiotensingeno y rompe el enlace peptdico
Leu-Val de ste, y genera A-I. El centro cataltico de la renina presenta varios
bolsillos(pockets), de los que el S3sp, es especfico de esta enzima y nico dentro de la
familia de las aspartil proteasas.

http://www.revespcardiol.org/es/fisiopatologia-prorrenina-renina-cincuenta-
anos/articulo/13135284/

PEPSINA

La pepsina es segregada por las clulas de la mucosa gstrica en forma de zimgeno o

proenzima denominado pepsingeno. Esta secrecin en forma de un precursor inactivo es
bastante comn en el caso de las enzimas proteolticas digestivas, y se asegura as que
solo desarrollen su actividad degradativa una vez que son activadas en la luz de los
rganos digestivos. La activacin del pepsingeno se lleva a cabo por el HCl presente en
la secrecin gstrica, o autocatalticamente por la propia pepsina.

El pH ptimo de la pepsina est entre 1,5 y 2,5 lo cual se corresponde con el pH cido
tpico del contenido gstrico debido a la secrecin simultnea de HCl.

La pepsina hidroliza con preferencia los enlaces peptdicos cuyo grupo amino pertenece a
aminocidos aromticos, pero otros enlaces son tambin atacados en forma ms lenta de
modo que en las protenas comunes de la dieta la pepsina provoca la hidrlisis de 10 a 15
% de sus enlaces peptdicos.

http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d-00000-00---off-0prelicin--00-0----0-10-0---0---
0direct-10---4-------0-1l--11-zh-50---20-preferences---10-0-1-00-0-0-11-1-0gbk-
00&a=d&cl=CL1&d=HASHf1ddc478da370019f97bea.13.3

2. Caractersticas de la quimotripsina.

La Quimotripsina es una enzima que puede realizar protelisis. La quimotripsina (EC

3.4.21.1) consiste en una cadena polipeptdica de 245 residuos, con cinco enlaces
disulfuro (-S-S-). Es una enzima digestiva encargada de degradar las protenas de los
alimentos en el intestino. Es un tipo de proteasa que est en una familia conocida como
serina proteasas, tambin conocido como serina endopeptidasas. Tienen ese nombre
porque el aminocido serina se encuentra en su centro activo.

Activacin de la quimotripsina.

Las serina-proteasas se sintetizan en una forma inactiva, ms grande, que permite que
sean transportadas a su lugar de accin sin causar ningn dao a los tejidos por los que
debe pasar. La quimotripsina se sintetiza por biosntesis proteicacomo
un precursor denominado quimotripsingeno enzimticamente inactivo. Se rompe por
accin de la tripsina en dos partes que permanecen unidas por un enlace S-S, y estas
molculas de quimotripsingeno pueden activar a otras eliminando dos pequeos
pptidos en una trans-proteolisis. La molcula resultante es una quimotripsina activa, una
molcula tripeptdica interconectada por enlaces disulfuro.