PROTOCOLO PARA COLETA DE SISTEMA NERVOSO

CENTRAL PARA DIAGNSTICO DE RAIVA HUMANA

OBJETIVO

Coletar amostras de Sistema Nervoso Central (SNC) de humanos suspeitos de

raiva para diagnstico laboratorial post mortem, atravs das tcnicas de
imunofluorescncia direta; imuno-histoqumica; isolamento viral em cultivo celular e/ou
camundongos, bem como para as tcnicas moleculares.

MATERIAIS E SOLUES NECESSRIOS

1- Equipamentos de proteo individual recomendados para realizao de necropsia:

avental impermevel de manga longa com punho, luvas, culos de proteo ou protetor
facial, mscara e botas de cano longo;
2- Coletores universais;
3- Etiquetas de identificao;
4- Embalagens prprias para armazenamento;
5- Gelox/gelo seco;
6- Soluo para 1 litro de formol 10% tamponado:
Formol puro (formol 40% P.A.).............................100 ml
gua Destilada......................................................900 ml
Fosfato de sdio monobsico................................ 4,0 g
Fosfato de sdio dibsico...................................... 6,5 g
OBS. 1: Diluir o fosfato de sdio monobsico e o fosfato de sdio dibsico em gua
destilada e, posteriormente acrescentar o formol.
OBS. 2: Caso seja invivel o preparo do formol 10% tamponado, IMPRESCINDVEL
que o formol puro seja ao menos diludo a 10% em gua destilada. Exemplo: para o
preparo de 1 litro de formol, colocar 100 mL de formol puro em 900 mL de gua
destilada.

PROCEDIMENTOS PARA COLETA DA AMOSTRA

A coleta dever ser realizada em duplicata sendo uma para REFRIGERAO e a

outra para fixao em FORMOL 10% TAMPONADO.

1- Identificar os coletores de acordo com as regies do SNC (crtex cerebral,

hipocampo, cerebelo, tronco enceflico e medula) e modo de conservao
(refrigerado ou fixado em formol 10% tamponado);
2- Retirar o encfalo na NTEGRA e dividi-lo em dois hemisfrios para posteriormente
fragmentar as regies necessrias para o envio (Figura 1 A);

3- Identificar as regies do SNC (Figura 1 C) e fracionar cada fragmento em duplicata

no tamanho de aproximadamente 5cm. Acondicionar as amostras nos respectivos
frascos devidamente identificados;

Hemisfrio direito
A B

Hemisfrio esquerdo

C Crtex

Cerebelo Hipocampo
Medula
Tronco enceflico

Figura 1: Demonstrao dos hemisfrios cerebrais e das regies do Sistema Nervoso Central que devem
ser contempladas na coleta de amostras para diagnstico de raiva post-mortem. (A) Hemisfrios cerebrais;
(B) Demonstrao da parte inferior do encfalo ressaltando o cerebelo e tronco; (C) Regies do SNC que
devem ser comtempladas para coleta. Fonte: http://anatpat.unicamp.br/bineucerebrorntermo.html

4- Acondicionar os frascos em caixas prprias para envio, contendo GELO

RECICLVEL (tipo gelox) ou GELO SECO, em quantidade suficiente para
conservar a amostra durante o trnsito;

5- Identificar a caixa de envio, a qual deve estar devidamente vedada para que no
ocorram vazamentos.